專利名稱：絡(luò)石藤的木脂素苷元總提取物及其提取工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從天然植物中提取糖類衍生物，特別是從絡(luò)石藤中提取的木脂素苷元總提取物及其提取工藝方法。
背景技術(shù)：
絡(luò)石藤為夾竹桃科植物絡(luò)石的帶葉藤莖，具有祛風(fēng)通絡(luò)，涼血消腫的作用，是一種主治風(fēng)濕痹痛、筋脈拘攣、諸瘡腫毒的中藥。絡(luò)石藤所含成份十分復(fù)雜，包括有木脂素類、黃酮類、三萜皂苷、紫羅蘭衍生物，還有酚、醇類和生物堿等化合物。其中含量較多的一種為二苯基丁酸內(nèi)脂類木脂素，它主要由絡(luò)石苷及絡(luò)石苷元，去甲絡(luò)石苷及去甲絡(luò)石苷元，牛蒡子苷及牛蒡子苷元和羅漢松脂苷及羅漢松脂素等組成。其苷和苷元的分子結(jié)構(gòu)通式如下 R1＝glc，R2＝CH3，R3＝OH絡(luò)石苷R1＝H，R2＝CH3，R3＝OH 絡(luò)石苷元R1＝glc，R2＝H，R3＝OH 甲絡(luò)石苷R1＝R2＝H，R3＝OH 去甲絡(luò)石苷元R1＝glc，R2＝CH3，R3＝H 牛蒡子苷R1＝R3＝H，R2＝CH3牛蒡子苷元R1＝glc，R2＝R3＝H 羅漢松脂苷R1＝R2＝R3＝H 羅漢松脂素經(jīng)研究證明，木脂素苷元具有抗菌消炎和抗艾滋病毒等多種藥理活性(日本學(xué)者西部三省等.“絡(luò)石藤中的木脂素類成分及其生物活性”，《中國民族民間醫(yī)藥》雜志2001年)。但目前，尚未見有從絡(luò)石藤中提取木脂素苷元的產(chǎn)品及其提取方法的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的，旨在提供一種從絡(luò)石藤中提取的木脂素苷元總提取物產(chǎn)品以及從絡(luò)石藤中提取木脂素苷元總提取物的適于工業(yè)化生產(chǎn)的工藝方法。
實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案為
本發(fā)明從絡(luò)石藤中提取的木脂素苷元總提取物包括絡(luò)石苷元、去甲絡(luò)石苷元、牛蒡子苷元和羅漢松脂素，上述四種苷元在總提取物中的含量為80％以上。
本發(fā)明從絡(luò)石藤中提取木脂素苷元總提取物的工藝方法，包括以下工藝步驟①，發(fā)酵，將絡(luò)石藤粉碎成細(xì)粉，加入水或稀酸或加入絡(luò)石藤細(xì)粉重量2～15％的糖苷酶和一定的水浸潤絡(luò)石藤細(xì)粉，于20～40℃溫度下，發(fā)酵3～7天；②，提取浸膏，在發(fā)酵物中加入8～10倍量的濃度為30～95％的乙醇或甲醇溶液浸泡24～48小時(shí)，然后進(jìn)行加熱回流脫除乙醇或甲醇，靜置過濾去渣，將過濾液減壓濃縮成浸膏；③，用酸解法或酶解法將浸膏中所含木脂素苷轉(zhuǎn)化為苷元，制取木脂素苷元粗品A，酸解法，在浸膏中加入稀酸1～3.5當(dāng)量，于100±5℃溫度下攪拌水解3～8小時(shí)，冷卻、離心分離，取得沉淀物；B，酶解法，在浸膏中加入無菌水或無菌生理鹽水或無菌含鹽磷酸緩沖液，煮沸溶解，冷卻至室溫，用酸和堿調(diào)節(jié)PH值至3～8，加入浸膏量1/2.5～1/10的水解酶，置恒溫振蕩器中于37℃溫度下培養(yǎng)36～48小時(shí)，爾后加入6～10倍酶解液體積量的甲醇或乙醇或甲醇、乙醇的丙酮混合溶劑，以終止酶解反應(yīng)，然后加熱回流脫除并回收溶劑，減壓過濾，取得沉淀物；④，提純i)，在上述步驟③得到的沉淀物中加入稀酸調(diào)節(jié)PH值為3～6，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，然后過濾或離心分離，棄去分離液，留下沉淀物；ii)，在留下沉淀物中加入稀堿液，調(diào)節(jié)PH值為8～10，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，過濾分離去沉淀物，取過濾液；iii)，向過濾液中加入稀酸，調(diào)節(jié)PH值為3～6，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，分離得沉淀物，經(jīng)減壓干燥，即為絡(luò)石藤木脂素苷元總提取物產(chǎn)品。
上述工藝方法中用于溶提發(fā)酵物成份的乙醇或甲醇的優(yōu)選濃度為50～80％。
用于浸膏酸解的酸可以是硫酸或鹽酸、硝酸、醋酸等，也可以多酸組合。
用于浸膏酶解的水解酶優(yōu)選蝸牛酶。
用于提純工藝步驟中的酸可以是硫酸或鹽酸、硝酸、醋酸等，也可以多酸組合。
用于提純工藝步驟中的堿可以是氫氧化鈉或碳酸鈉、碳酸氫鈉、氨水等之任一種或多種組合。
上述工藝方法的原理是，先將絡(luò)石藤粉碎、發(fā)酵，破壞其中蛋白質(zhì)、多糖等大分子結(jié)構(gòu)，使其分解為小分子結(jié)構(gòu)的化合物；然后用有機(jī)溶劑浸提出包括木脂素苷、苷元、黃酮類、三萜皂苷、紫羅蘭衍生物、其它酚、醇類、生物堿等化合物的混合物成浸膏；對浸膏進(jìn)行酸解或酶解，使其中苷類化合物脫糖而轉(zhuǎn)化為苷元化合物；爾后設(shè)法分離出苷元化合物，分離過程首先是在酸解或酶解后的沉淀物中加酸，使其中水溶性較強(qiáng)的化合物和堿性化合物溶解而分離去，留下的沉淀物主要為酸性的木脂素苷元和脂溶性較強(qiáng)的化合物；在留下的沉淀物中加堿液，使酸性的木脂素苷元類化合物溶解，而分離去不溶解的脂溶性化合物；再在上述分離液中加酸液，即還原沉淀出純度較高的木脂素苷元總提取物。
本發(fā)明的有益效果是從天然植物絡(luò)石藤中提取了純度較高的木脂素苷元產(chǎn)品，為直接高效發(fā)揮木脂素苷元的藥理作用，或配制有關(guān)藥物提供了優(yōu)質(zhì)原料產(chǎn)品。同時(shí)為從絡(luò)石藤中提取木脂素苷元總提取物提供了一種適于工業(yè)化生產(chǎn)的工藝方法，它工藝簡單，操作方便，生產(chǎn)成本較低，特別是采用了酸解、酶解法使原料中的苷轉(zhuǎn)化為苷元一并提取，從而大大提高了產(chǎn)品收得率和產(chǎn)品中有效成份的總含量。
具體實(shí)施例方式
下面以實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1①，發(fā)酵，取絡(luò)石藤中藥材1000g，粉碎過20目篩，加入水浸潤絡(luò)石藤粉，于20-40℃溫度下發(fā)酵7天，得發(fā)酵物；②，提取浸膏，在發(fā)酵物中加入10倍量、濃度為50％的乙醇溶液，于室溫下浸泡48小時(shí)，然后進(jìn)行加熱回流脫除并回收乙醇，余液靜置過濾去渣，將過濾液減壓濃縮，得相對密度為1.04的浸膏235g；③，酸解，在浸膏中加入濃度為1mol/L的稀硫酸2當(dāng)量，于100±5℃溫度下攪拌水解5小時(shí)，冷卻、離心分離，取得沉淀物；④，提純i)，在上述步驟③得到的沉淀物中加入稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值為3～6，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，然后過濾或離心分離，棄去分離液，留下沉淀物；ii)，在留下沉淀物中加入氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)PH值為8～10，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，過濾分離去沉淀物，取過濾液；iii)，向過濾液中加入稀鹽酸，調(diào)節(jié)PH值為3～6，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，分離得沉淀物，經(jīng)減壓干燥，即得絡(luò)石藤木脂素苷元總提取物12.14g。經(jīng)分析檢測，總提取物中的絡(luò)石苷元、去甲絡(luò)石苷元、牛蒡子苷元和羅漢松脂素總含量為9.65g，純度為79.5％。
實(shí)施例2①，發(fā)酵，取絡(luò)石藤中藥材1000g，粉碎為20目粗粉，加入濃度為1mol/L的稀硫酸水浸潤絡(luò)石藤粉，于20-40℃溫度下發(fā)酵6天，得發(fā)酵物；②，提取浸膏，在發(fā)酵物中加入8倍量、濃度為70％的乙醇溶液，于室溫下浸泡36小時(shí)，然后進(jìn)行加熱回流脫除并回收乙醇，余液靜置過濾去渣，將過濾液減壓濃縮，得相對密度為1.03的浸膏265g；③，酸解，在浸膏中加入濃度為1mol/L的稀鹽酸3.5當(dāng)量，于100±5℃溫度下攪拌水解3小時(shí)，冷卻、離心分離，取得沉淀物；④，提純i)，在上述步驟③得到的沉淀物中加入稀硫酸調(diào)節(jié)PH值為3～6，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，然后過濾或離心分離，棄去分離液，留下沉淀物；ii)，在留下沉淀物中加入碳酸鈉溶液，調(diào)節(jié)PH值為8～10，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，過濾分離去沉淀物，取過濾液；iii)，向過濾液中加入稀硫酸，調(diào)節(jié)PH值為3～6，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，分離得沉淀物，經(jīng)減壓干燥，即得絡(luò)石藤木脂素苷元總提取物14.15g。經(jīng)分析檢測，總提取物中的絡(luò)石苷元、去甲絡(luò)石苷元、牛蒡子苷元和羅漢松脂素總含量為11.50g，純度為81.3％。
實(shí)施例3①，發(fā)酵，取絡(luò)石藤中藥材1000g，粉碎為20目粗粉，加入粗粉重量7％的糖苷酶和一定的水浸潤絡(luò)石藤粉，于20-40℃溫度下發(fā)酵5天，得發(fā)酵物；②，提取浸膏，在發(fā)酵物中加入9倍量、濃度為80％的甲醇溶液，于室溫下浸泡24小時(shí)，然后進(jìn)行加熱回流脫除并回收乙醇，余液靜置過濾去渣，將過濾液減壓濃縮，得相對密度為1.04的浸膏287g；③，酸解，在浸膏中加入濃度為1mol/L的稀硝酸1當(dāng)量，于100±5℃溫度下攪拌水解8小時(shí)，冷卻、離心分離，取得沉淀物；④，提純i)，在上述步驟③得到的沉淀物中加入稀硝酸調(diào)節(jié)PH值為3～6，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，然后過濾或離心分離，棄去分離液，留下沉淀物；ii)，在留下沉淀物中加入氨水溶液，調(diào)節(jié)PH值為8～10，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，過濾分離去沉淀物，取過濾液；iii)，向過濾液中加入稀硝酸，調(diào)節(jié)PH值為3～6，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，分離得沉淀物，經(jīng)減壓干燥，即得絡(luò)石藤木脂素苷元總提取物12.17g。經(jīng)分析檢測，總提取物中的絡(luò)石苷元、去甲絡(luò)石苷元、牛蒡子苷元和羅漢松脂素總含量為9.75g，純度為80.1％。
實(shí)施例4①，發(fā)酵，取絡(luò)石藤中藥材1000g，粉碎成20目粗粉，加入粗粉重量2％的糖苷酶和一定的水浸潤絡(luò)石藤粉，于20-40℃溫度下發(fā)酵6天，得發(fā)酵物；②，提取浸膏，在發(fā)酵物中加入8倍量、濃度為30％的甲醇溶液，于室溫下浸泡40小時(shí)，然后進(jìn)行加熱回流脫除并回收乙醇，余液靜置過濾去渣，將過濾液減壓濃縮，得相對密度為1.05的浸膏305g；③，酶解，在浸膏中加入無菌水500ML，煮沸溶解浸膏，冷卻至室溫，用酸和堿調(diào)節(jié)PH值為4～5時(shí)，加入浸膏重量0.2倍的蝸牛酶，置恒溫振蕩器中于37℃溫度下培養(yǎng)40小時(shí)，爾后加入6倍酶解液體積量、濃度為70％的甲醇液終止酶解反應(yīng)，過濾分離，取得沉淀物；④，提純i)，在上述步驟③得到的沉淀物中加入稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值為3～6，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，然后過濾或離心分離，棄去分離液，留下沉淀物；ii)，在留下沉淀物中加入氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)PH值為8～10，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，過濾分離去沉淀物，取過濾液；iii)，向過濾液中加入稀鹽酸，調(diào)節(jié)PH值為3～6，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，分離得沉淀物，經(jīng)減壓干燥，即得絡(luò)石藤木脂素苷元總提取物11.47g。經(jīng)分析檢測，總提取物中的絡(luò)石苷元、去甲絡(luò)石苷元、牛蒡子苷元和羅漢松脂素總含量為9.60g，純度達(dá)83.7％。
實(shí)施例5①，發(fā)酵，取絡(luò)石藤中藥材1000g，粉碎成粗粉，加入粗粉重量15％的糖苷酶和一定的水浸潤絡(luò)石藤粉，于20-40℃溫度下發(fā)酵3天，得發(fā)酵物；②，提取浸膏，在發(fā)酵物中加入8倍量、濃度為95％的甲醇溶液，于室溫下浸泡30小時(shí)，然后進(jìn)行加熱回流脫除并回收乙醇，余液靜置過濾去渣，將過濾液減壓濃縮，得相對密度為1.03的浸膏282g；③，酶解，在浸膏中加入無菌含鹽磷酸緩沖液500ML，煮沸溶解浸膏，冷卻至室溫，用酸和堿調(diào)節(jié)PH值為4～5時(shí)，加入浸膏重量0.4倍的蝸牛酶，置恒溫振蕩器中于37℃溫度下培養(yǎng)36小時(shí)，爾后加入10倍酶解液體積量、濃度為70％的乙醇液終止酶解反應(yīng)，過濾分離，取得沉淀物；④，提純i)，在上述步驟③得到的沉淀物中加入稀醋酸調(diào)節(jié)PH值為3～6，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，然后過濾或離心分離，棄去分離液，留下沉淀物；ii)，在留下沉淀物中加入碳酸氫鈉溶液，調(diào)節(jié)PH值為8～10，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，過濾分離去沉淀物，取過濾液；iii)，向過濾液中加入稀醋酸，調(diào)節(jié)PH值為3～6，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，分離得沉淀物，經(jīng)減壓干燥，即得絡(luò)石藤木脂素苷元總提取物12.1g。經(jīng)分析檢測，總提取物中的絡(luò)石苷元、去甲絡(luò)石苷元、牛蒡子苷元和羅漢松脂素總含量為10.3g，純度達(dá)85.1％。
權(quán)利要求
1.一種絡(luò)石藤的木脂素苷元總提取物，其特征在于它包括絡(luò)石苷元、去甲絡(luò)石苷元、牛蒡子苷元和羅漢松脂素，上述四種苷元在總提取物中的含量為80％以上。
2.一種如權(quán)利要求1所述的絡(luò)石藤的木脂素苷元總提取物的提取工藝方法，其特征在于它包括下列工藝步驟①，發(fā)酵，將絡(luò)石藤粉碎成細(xì)粉，加入水或稀酸或加入絡(luò)石藤細(xì)粉重量2～15％的糖苷酶和一定的水浸潤絡(luò)石藤細(xì)粉，于20～40℃溫度下，發(fā)酵3～7天；②，提取浸膏，在發(fā)酵物中加入8～10倍量的濃度為30～95％的乙醇或甲醇溶液浸泡24～48小時(shí)，然后進(jìn)行加熱回流脫除乙醇或甲醇，靜置過濾去渣，將過濾液減壓濃縮成浸膏；③，用酸解法或酶解法將浸膏中所含木脂素苷轉(zhuǎn)化為苷元，制取木脂素苷元粗品A，酸解法，在浸膏中加入稀酸1～3.5當(dāng)量，于100±5℃溫度下攪拌水解3～8小時(shí)，冷卻、離心分離，取得沉淀物；B，酶解法，在浸膏中加入無菌水或無菌生理鹽水或無菌含鹽磷酸緩沖液，煮沸溶解，冷卻至室溫，用酸和堿調(diào)節(jié)PH值至3～8，加入浸膏量1/2.5～1/10的水解酶，置恒溫振蕩器中于37℃溫度下培養(yǎng)36～48小時(shí)，爾后加入6～10倍酶解液體積量的甲醇或乙醇或甲醇、乙醇的丙酮混合溶劑，以終止酶解反應(yīng)，然后加熱回流脫除并回收溶劑，減壓過濾，取得沉淀物；④，提純i)，在上述步驟③得到的沉淀物中加入稀酸調(diào)節(jié)PH值為3～6，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，然后過濾或離心分離，棄去分離液，留下沉淀物；ii)，在留下沉淀物中加入稀堿液，調(diào)節(jié)PH值為8～10，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，過濾分離去沉淀物，取過濾液；iii)，向過濾液中加入稀酸，調(diào)節(jié)PH值為3～6，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，分離得沉淀物，經(jīng)減壓干燥，即為絡(luò)石藤木脂素苷元總提取物產(chǎn)品。
3.按權(quán)利要求2所述的絡(luò)石藤的木脂素苷元總提取物的提取工藝方法，其特征在于用于溶提發(fā)酵物成份的乙醇或甲醇的優(yōu)選濃度為50～80％。
4.按權(quán)利要求2所述的絡(luò)石藤的木脂素苷元總提取物的提取工藝方法，其特征在于用于浸膏酸解的酸可以是硫酸或鹽酸、硝酸、醋酸，也可以多酸組合。
5.按權(quán)利要求2所述的絡(luò)石藤的木脂素苷元總提取物的提取工藝方法，其特征在于用于浸膏酶解的水解酶為蝸牛酶。
6.按權(quán)利要求2所述的絡(luò)石藤的木脂素苷元總提取物的提取工藝方法，其特征在于用于提純工藝步驟中的酸可以是硫酸或鹽酸、硝酸、醋酸，也可以多酸組合。
7.按權(quán)利要求2所述的絡(luò)石藤的木脂素苷元總提取物的提取工藝方法，其特征在于用于提純工藝中的堿可以是氫氧化鈉或碳酸鈉、碳酸氫鈉、氨水中任一種或多種組合。
全文摘要
絡(luò)石藤的木脂素苷元總提取物及其提取工藝，其總提取物包括絡(luò)石苷元、去甲絡(luò)石苷元、牛蒡子苷元和羅漢松脂素，上述四種苷元在總提取物中的含量≥80％。從絡(luò)石藤中提取木脂素苷元總提取物的工藝方法包括發(fā)酵、提取浸膏、用酸解或酶解法將浸膏中所含木脂素苷轉(zhuǎn)化為苷元、制取木脂素苷元粗品和進(jìn)行提純等步驟。本發(fā)明工藝較簡單，操作方便，生產(chǎn)成本較低，特別是采用了酸解、酶解法使原料中的苷轉(zhuǎn)化為苷元一并提取，大大提高了產(chǎn)品收得率和產(chǎn)品中有效成份的總含量，從而為從天然植物絡(luò)石藤中提取木脂素苷元總提取物提供了一種適于工業(yè)化生產(chǎn)的工藝方法。
文檔編號(hào)C07D307/33GK1850979SQ20061004973
公開日2006年10月25日 申請日期2006年3月7日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月7日
發(fā)明者譚興起, 雷云超 申請人:譚興起, 雷云超