專利名稱：一種用于血細胞分析儀的無氰溶血素及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于醫(yī)療檢測用試劑技術領域，具體涉及一種用于血細胞分析儀的無氰溶血素及其制備方法。
背景技術：
白細胞計數和血紅蛋白濃度的測定目前成為醫(yī)學診斷過程中分析病人血樣的重要指標，許多疾病通常都會引起白細胞數量或者血紅蛋白濃度的異常改變，如能及時發(fā)現白細胞或血紅蛋白的異常改變，將有助于患者的及時診斷和治療。
正常人血液循環(huán)中的白細胞由五種類型組成，包括淋巴細胞、單核細胞、中性粒白細胞、嗜堿粒細胞和嗜酸粒細胞，后三者統(tǒng)稱為粒細胞，因此，人們將白細胞分為淋巴細胞、單核細胞和粒細胞三個亞群。
隨著科學技術的發(fā)展，目前，在測定血紅蛋白的濃度和白細胞分類計數時均采用血細胞分析儀器進行，通過血細胞分儀器能夠同時進行血紅蛋白的測定和白細胞的分類計數，但是利用血細胞分儀器進行血紅蛋白的測定和白細胞的分類計數時，均需要稀釋血樣，并且需要使用特異的溶血素溶解紅細胞，使其釋放出含有的血紅蛋白，然后再給釋放的血紅蛋白結合上適合的配位基形成穩(wěn)定的色原，使得這種復合物在某一特定的波長下可測定其吸光度有最大的吸收峰值，從而測出血樣中血紅蛋白的含量。進行白細胞計數時也需要將紅細胞進行溶解，因為血樣中的紅細胞數量遠遠多余白細胞數量，嚴重的干擾白細胞的檢測；同時為了保證白細胞三個亞群的檢測，白細胞的體積也需要有一定程度的改變，此時白細胞的細胞膜需要有一定程度的溶解以便釋放出胞漿，同時保留細胞質和細胞核以便進行體積的分群檢測。
以前采用氰化物來測定血紅蛋白，因氰化物的毒性大而已很少使用，目前多采用不含氰化物的溶血素進行血紅蛋白測定和白細胞的分類計數，但是這些不含氰化物的溶血素配方較復雜，成本較高。
專利號為ZL00106117.8的文獻公開了一種無氰溶血素，該溶血素組分包括十六烷基三甲基溴化銨25g/L；聚乙二醇辛基苯基醚20-40ml；醫(yī)用級乙醇200-400ml/L，其他的是水。
專利申請?zhí)枮镃N03140211.9的文獻公開了一種無氰化物溶血素及其使用方法，該溶血素組分包括至少一種陰離子表面活性劑，選自烷基苯磺酸鹽以及烷基硫酸鹽；至少一種陽離子表面活性劑，選自季銨鹽、吡啶鎓鹽、氧化胺型季銨鹽；至少一種非離子表面活性劑；其中優(yōu)選十二烷基硫酸鈉1.5g/L、十二烷基三甲基溴化銨25g/L、非離表面活性劑乳化劑OP 0.58g/L。

發(fā)明內容
針對現有技術中存在的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種環(huán)保、無毒性的無氰溶血素，并且該溶血素價格低廉，容易得到，該溶血素能夠使紅細胞很容易溶解并釋放出血紅蛋白，使血紅蛋白的濃度準確并且容易測定，同時該溶血素有助于白細胞進行分類計數，準確性高。
為達到以上目的，本發(fā)明采用的技術方案是一種用于血細胞分析儀的無氰溶血素，包括以下組分(1)季銨鹽，含量范圍是0.5％-5％質量百分比，用于溶解紅細胞釋放血紅蛋白，同時有助于白細胞計數分類；季銨鹽的結構如下 其中，式中的R1是碳原子數是8-18的烷基、烯基或炔基；R2、R3、R4是碳原子數是1-5的烷基、烯基或炔基；X-是鹵素陰離子。
進一步，所述的R1選自于碳原子數在12-16之間的烷基，R2、R3、R4均為甲基。
更進一步，所述的季銨鹽是十二烷基三甲基氯化銨DTAC(DodecylTrimethyl Ammonium Chloride)；十四烷基三甲基氯化銨TTAC(TetradecylTrimethyl Ammonium Chloride)；十六烷基三甲基氯化銨HTAC(HexadecylTrimethyl Ammonium Chloride)；十二烷基三甲基溴化銨DTAB(DodecylTrimethyl Ammonium Bromide)；十四烷基三甲基溴化銨TTAB(TetradecylTrimethyl Ammonium Bromide)；十六烷基三甲基溴化銨HTAB(HexadecylTrimethyl Ammonium Bromide)；其中最優(yōu)選十二烷基三甲基氯化銨DTAC，其中優(yōu)選的含量范圍是0.8％-3％。
(2)咪唑或者咪唑衍生物中的一種物質，含量為0.1％-2％質量百分比，所述的物質用于與紅細胞釋放出的血紅蛋白結合形成穩(wěn)定的色原，以測定血紅蛋白的濃度；進一步，所述的咪唑或者咪唑衍生物，優(yōu)選范圍為0.5％-1.5％質量百分比。
再進一步，所述的咪唑衍生物是4(5)-甲基咪唑、4-苯基咪唑；所述的咪唑是1，2，4-三唑。
(3)堿金屬氯化鹽，其含量范圍是5-20g/L，所述的物質用于調節(jié)本溶血素的離子強度；進一步，上述物質使用時，優(yōu)選的物質是氯化鈉、氯化鉀。
(4)余量為水，最好是三蒸水。
本發(fā)明所述的一種用于血細胞分析儀的無氰溶血素的制備方法如下(1)原料稱量將所需的各種原料按本發(fā)明所述的配方分別稱量；(2)配制將各種稱量好的原料混合，待自然溶解后，搖勻；(3)過濾在過濾器中放入在三蒸水中浸泡過的0.22微米的醋酸纖維濾膜，將上述溶液過濾三次，即為本發(fā)明所述的無氰溶血素。
使用本發(fā)明所述的溶血素時，需要先用血細胞稀釋液將血液稀釋，然后再將本溶血素與稀釋后的血樣混合，利用血細胞分析儀進行血紅蛋白的測定和白細胞的計數。
本發(fā)明的效果在于采用本發(fā)明所述的無氰溶血素，可以完全溶解紅細胞，使其釋放出血紅蛋白，并且溶血素中的配位基立即跟釋放出的血紅蛋白進行結合，形成穩(wěn)定的色原，很容易測定血紅蛋白的濃度；本溶血素在溶解紅細胞的同時，還有助于白細胞分類計數的實現；同時此溶血素的配方簡單，使用成本也很低。


圖1是血紅蛋白衍生物即色原的吸光度示意圖；圖2是紅細胞計數測試結果比較示意圖；圖3是白細胞計數測試結果比較示意圖；
圖4是紅細胞壓積測試結果比較示意圖；圖5是粒細胞計數測試結果比較示意圖；圖6是淋巴細胞計數測試結果比較示意圖；圖7是單核細胞計數測試結果比較示意圖；圖8是血紅蛋白含量測試結果比較示意圖。
具體實施例方式
下面結合附圖及具體實施例對本發(fā)明作進一步的描述實施例1按照下列比例配制本發(fā)明所述的無氰溶血素(1)十六烷基三甲基氯化銨 5g(質量百分比為0.5％)(2)4-苯基咪唑 1g(質量百分比為0.1％)(3)氯化鈉 5g(質量濃度為5g/L)(4)三蒸水 1L原材料十六烷基三甲基氯化銨，Fluka，250g，52366；4-苯基咪唑，Fluka，100g，78726；氯化鈉，北京化學試劑公司，500g，批號050411。
制備方法將十六烷基三甲基氯化銨，4-苯基咪唑，氯化鈉按上述比例混合，加水至1L，室溫下搖晃振蕩至搖勻，然后在過濾器中放入在三蒸水中浸泡過的0.22微米的醋酸纖維濾膜，將上述溶液過濾三次。
實施例2按照下列比例配制本發(fā)明所述的無氰溶血素(1)十二烷基三甲基氯化銨 30g(質量百分比為3％)(2)1，2，4-三唑 10g(質量百分比為1％)(3)氯化鈉10g(質量濃度為10g/L)(4)三蒸水1L原材料十二烷基三甲基氯化銨，Fluka，250g，17104；1，2，4-三唑，Fluka，50g，90630；氯化鈉，北京化學試劑公司，500g，批號050411。
制備方法將十二烷基三甲基氯化銨，1，2，4-三唑，氯化鈉按上述比例混合，加水至1L，室溫下搖晃振蕩至搖勻，然后在過濾器中放入在三蒸水中浸泡過的0.22微米的醋酸纖維濾膜，將上述溶液過濾三次。
實施例3按照下列比例配制本發(fā)明所述的無氰溶血素(1)十二烷基三甲基溴化銨50g(質量百分比為5％)
(2)4-苯基咪唑 15g(質量百分比為1.5％)(3)氯化鈉 20g(質量濃度為20g/L)(4)三蒸水 1L原材料十二烷基三甲基溴化銨，Fluka，250g，44240；4-苯基咪唑，Fluka，100g，78726；氯化鈉，北京化學試劑公司，500g，批號050411。
制備方法十二烷基三甲基溴化銨，4-苯基咪唑，氯化鈉按上述比例混合，加水至1L，室溫下搖晃振蕩至搖勻，然后在過濾器中放入在三蒸水中浸泡過的0.22微米的醋酸纖維濾膜，將上述溶液過濾三次。
實施例4按照下列比例配制本發(fā)明所述的無氰溶血素(1)十六烷基三甲基氯化銨 18g(質量百分比為1.8％)(2)4(5)-甲基咪唑 5g(質量百分比為0.5％)(3)氯化鈉 10g(質量濃度為10g/L)(4)三蒸水 1L原材料十六烷基三甲基氯化銨，Fluka，250g，52366；4(5)-甲基咪唑，Fluka，100g，67580；氯化鈉，北京化學試劑公司，500g，批號050411。
制備方法將十六烷基三甲基氯化銨，4(5)-甲基咪唑，氯化鈉按上述比例混合，加水至1L，室溫下搖晃振蕩至搖勻，然后在過濾器中放入在三蒸水中浸泡過的0.22微米的醋酸纖維濾膜，將上述溶液過濾三次。
實施例5按照下列比例配制本發(fā)明所述的無氰溶血素(1)十六烷基三甲基氯化銨 15g(質量百分比為1.5％)(2)4-苯基咪唑 10g(質量百分比為1％)(3)氯化鈉 10g(質量濃度為10g/L)(4)三蒸水 1L原材料十六烷基三甲基氯化銨，Fluka，250g，52366；4-苯基咪唑，Fluka，100g，78726；氯化鈉，北京化學試劑公司，500g，批號050411。
制備方法將十六烷基三甲基氯化銨，4-苯基咪唑，氯化鈉按上述比例混合，加水至1L，室溫下搖晃振蕩至搖勻，然后在過濾器中放入在三蒸水中浸泡過的0.22微米的醋酸纖維濾膜，將上述溶液過濾三次。
本發(fā)明所述的溶血素適用于血紅胞分析儀進行白細胞分類計數和血紅蛋白濃度的測定，可用于日本東亞公司的Sysmex poch100i、邁瑞公司生產的BC-3000plus及北京索通醫(yī)療技術有限公司生產的各系列的血紅胞分析儀。
為說明本發(fā)明所述的溶血素測定結果的準確性，將本發(fā)明所述的溶血素利用光度計進行了血紅蛋白衍生物測定的試驗，試驗結果具體如下血紅蛋白衍生物最大吸光度實驗(1)儀器7200可見分光光度計(2)溶血素本發(fā)明所述的溶血素(3)實驗方法與結果取10μL的血樣加入1990μL稀釋液中混勻，再取500μL此混合液跟500μL本發(fā)明所述的無氰溶血素混勻，在7200可見光分光光度計上檢測其吸光度，累積檢測60個血樣，主要檢測所形成的衍生物在490nm到590nm之間的吸光度，特別是540nm附近的波長，找出最大吸光度所處的波長，對檢測結果作圖，全部進行圖形處理，結果如圖1所示，表明該溶血素經60次重復實驗發(fā)現其最大吸光度基本都在538nm處，根據國際540nm的標準，本發(fā)明所述的溶血素是完全符合測量血紅蛋白濃度的要求的，并且穩(wěn)定性和重復性好，因此，對血紅蛋白的測量結果準確性更高。
使用本發(fā)明所述的溶血素時，需要先用血細胞稀釋液將血液稀釋，然后再將本溶血素與稀釋后的血樣混合，利用血細胞分析儀進行血紅蛋白濃度的測定和白細胞的計數，為說明本發(fā)明所述的溶血素測試的穩(wěn)定性和準確性，將本發(fā)明所述的溶血素與日本東亞公司生產的溶血素進行了對比試驗，對比測量了血紅蛋白、白細胞和紅細胞等參數的試驗數據，試驗結果如下溶血素穩(wěn)定性實驗(1)儀器日本東亞公司的Sysmex poch100i；(2)溶血素1)本發(fā)明所述的溶血素，具體采用本發(fā)明實施例1中所述的配方；2)日本東亞公司生產的溶血素；稀釋液1)配合本發(fā)明所述的溶血素所使用的稀釋液是北京索通醫(yī)療技術有限公司生產的稀釋液，其組分為EDTA-2Na(乙二胺四乙酸二鈉) 0.5gNa2SO44.2gNaCl2.7g磷酸鹽緩沖液 1/25M(用于調節(jié)溶液pH值在6.8-7.2的范圍內)
十二烷基硫酸鈉SDS 2.5gTriton X-100(曲拉通X100)3ml1-羥基吡啶-2-硫酮 0.2g三蒸水 1L；2)配合日本東亞公司的溶血素使用的稀釋液是日本東亞公司生產的稀釋液；(3)實驗方法與結果對同一血樣用北京索通醫(yī)療技術有限公司生產的稀釋液將血樣稀釋后，然后再加入本發(fā)明所述的溶血素，而后用日本東亞公司的Sysmex poch100i血細胞分析儀進行測定；同時對上述同一血樣用日本東亞公司生產的稀釋液和溶血素按照上述步驟進行測量，共計測量6次，記錄6次測量結果，并對結果進行比較，結果如圖2～圖8所示。由圖2～圖8所示可見，本發(fā)明所述的溶血素測試結果形成的曲線比較平滑，每次測試結果的差別比較??；而日本東亞公司生產的溶血素的測試結果形成的曲線波動比較大，每次測試結果的差別較大，顯然日本東亞公司生產的溶血素測量結果的偏差大于本發(fā)明溶血素測量結果的偏差，所以其穩(wěn)定性和重現性不如本發(fā)明所述的溶血素。通過本次對比實驗表明，利用本溶血素，配合北京索通醫(yī)療技術有限公司生產的多功能稀釋液，通過血細胞分析儀測試出來的結果具有更好得穩(wěn)定性和重現性。
本發(fā)明所使用的北京索通醫(yī)療技術有限公司生產的稀釋液配方，并不用以限定該稀釋液的組分和含量，對本發(fā)明也不構成任何限制。
權利要求
1.一種用于血細胞分析儀的無氰溶血素，包括以下組分(1)季銨鹽，含量范圍是0.5％-5％質量百分比，季銨鹽的結構如下 其中，式中的R1是碳原子數是8-18的烷基、烯基或炔基；R2、R3、R4是碳原子數是1-5的烷基、烯基或炔基；X-是鹵素陰離子；(2)咪唑或者咪唑衍生物中的一種物質，含量范圍是0.1％-2％質量百分比；(3)堿金屬氯化鹽，含量范圍是5-20g/L；(4)余量為水。
2.如權利要求1所述的一種用于血細胞分析儀的無氰溶血素，其特征是所述的R1是碳原子數在12-16之間的烷基，R2、R3、R4均為甲基。
3.如權利要求2所述的一種用于血細胞分析儀的無氰溶血素，其特征是所述的季銨鹽是十二烷基三甲基氯化銨；十四烷基三甲基氯化銨；十六烷基三甲基氯化銨；十二烷基三甲基溴化銨；十四烷基三甲基溴化銨；十六烷基三甲基溴化銨。
4.如權利要求3所述的一種用于血細胞分析儀的無氰溶血素，其特征是所述的季銨鹽是十二烷基三甲基氯化銨。
5.如權利要求4所述的一種用于血細胞分析儀的無氰溶血素，其特征是十二烷基三甲基氯化銨優(yōu)選的含量范圍是0.8％-3％質量百分比。
6.如權利要求1、2、3、4或5所述的一種用于血細胞分析儀的無氰溶血素，其特征是所述的咪唑或者咪唑衍生物的用量為0.5％-1.5％質量百分比。
7.如權利要求6所述的一種用于血細胞分析儀的無氰溶血素，其特征是所述的咪唑衍生物是4(5)-甲基咪唑、4-苯基咪唑；所述的咪唑是1，2，4-三唑。
8.如權利要求7所述的一種用于血細胞分析儀的無氰溶血素，其特征是所述的堿金屬氯化鹽是氯化鈉、氯化鉀。
9.如權利要求1、2、3、4或5所述的一種用于血細胞分析儀的無氰溶血素，其特征是所述的水為三蒸水。
10.一種用于血細胞分析儀的無氰溶血素的制備方法，包括如下步驟(1)原料稱量將所需的各種組分分別稱量，組分及含量如下1)季銨鹽，含量范圍是0.5％-5％質量百分比，所述的季銨鹽的結構如下 其中，式中的R1是碳原子數是8-18的烷基、烯基或炔基；R2、R3、R4是碳原子數是1-5的烷基、烯基或炔基；X-鹵素陰離子；2)咪唑或者咪唑衍生物中的一種物質，含量范圍是0.1％-2％質量百分比；3)堿金屬氯化鹽，含量范圍是5-20g/L；4)余量為水；(2)配制將步驟(1)中所述的已稱量好的原料混合，待自然溶解后，搖勻；(3)過濾在過濾器中放入在三蒸水中浸泡過的0.22微米的醋酸纖維濾膜，將步驟(2)中得到的溶液過濾三次，即為本發(fā)明所述的無氰溶血素。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于血細胞分析儀的無氰溶血素及其制備方法，屬于醫(yī)療檢測用試劑技術領域。現有的不含氰的溶血素在進行血紅蛋白濃度的測定和白細胞分類計數時，為達到溶解紅細胞、白細胞計數分類的測量的目的，一般配方復雜，成本也較高。本發(fā)明所述的無氰溶血素，包括如下組分季銨鹽、咪唑或者咪唑衍生物中的一種物質、堿金屬氯化鹽及水。采用本發(fā)明所述的無氰溶血素，可以準確測定血紅蛋白的濃度，同時有助于實現白細胞的分類計數，準確性高，無毒性，同時，該溶血素配方簡單，成本低，穩(wěn)定性好。
文檔編號C07C211/63GK1834611SQ20061007864
公開日2006年9月20日 申請日期2006年4月29日 優(yōu)先權日2006年4月29日
發(fā)明者蔡佩娟, 衛(wèi)五保 申請人:北京索通醫(yī)療技術有限公司