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      一種連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的方法

      文檔序號(hào):3477012閱讀:265來(lái)源:國(guó)知局
      專(zhuān)利名稱(chēng):一種連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      本發(fā)明屬于生物制品加工領(lǐng)域,涉及一種連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的方法。
      背景技術(shù)
      關(guān)于核苷酸類(lèi)物質(zhì)的分離方法,半個(gè)世紀(jì)以前,人們就開(kāi)始了探索過(guò)程,一種苯乙烯型強(qiáng)堿性陰離子交換樹(shù)脂首次用于核苷酸的分離,并達(dá)到了較好的分離效果。接著人們又開(kāi)發(fā)出了DEAE-葡聚糖凝膠、PEI-纖維素,甚至陽(yáng)離子交換樹(shù)脂用于核苷酸混合物的分離。詹谷宇等(胞嘧啶核苷三磷酸生物合成研究,西北醫(yī)藥雜志[J],1997,12(2),81-82)報(bào)道其利用離心,乙醇沉淀法首先得到CTP粗品,經(jīng)732氫型陽(yáng)離子交換柱和711氯型陰離子交換柱兩部純化后,收率沒(méi)有提及,但是根據(jù)該文獻(xiàn)可以看出相對(duì)較低,通過(guò)多步有機(jī)溶劑結(jié)晶,得到的CTP晶體的含量為93.4%。英國(guó)專(zhuān)利(No.14043/681968)中報(bào)道,在對(duì)UTP轉(zhuǎn)化液進(jìn)行預(yù)處理后,首先通過(guò)氯型強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂Dowex 2,后通過(guò)氯型弱酸性陽(yáng)離子樹(shù)脂Duolite A7,進(jìn)行兩步純化。后得到UTP鈉鹽洗脫液的純度為97.5%,收率為72.2%。邱蔚然等(CN99113707.8)利用用卡拉膠魔芋多糖固定化酵母轉(zhuǎn)化得到核苷三磷酸,反應(yīng)結(jié)束后產(chǎn)物離心過(guò)濾,濾液用717陰離子交換樹(shù)脂進(jìn)行處理,吸附其中的核苷三磷酸,后用0.7mol/L的(pH=2)NaCl洗脫,收集洗脫液,加入乙醇,使核苷三磷酸沉淀,經(jīng)過(guò)濾和真空干燥后可得到目標(biāo)產(chǎn)物-核苷三磷酸,專(zhuān)利中沒(méi)有體積產(chǎn)品的純度和收率。上述報(bào)道的分離效果都不太理想,純度不高,收率較低。這些分離方法普遍比較復(fù)雜,無(wú)法滿(mǎn)足其大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化的要求。
      現(xiàn)行NTP的生產(chǎn)工藝中,固定床離子交換技術(shù)得到廣泛的應(yīng)用。而現(xiàn)有的固定床離子交換技術(shù)存在多種弊端,它是一種分批式作業(yè),吸附、洗脫、再生等步驟在同一床內(nèi)進(jìn)行,單批作業(yè)周期長(zhǎng),不連續(xù),離子交換樹(shù)脂容量不能充分利用,從而化學(xué)實(shí)際消耗量大,不經(jīng)濟(jì),廢水排放量大等是這種交換方式的明顯缺點(diǎn)。

      發(fā)明內(nèi)容
      本發(fā)明的目的是在于克服目前5’-核苷三磷酸分離過(guò)程中的成本高、操作繁瑣、不易規(guī)?;娜毕?,提供一種連續(xù)離子交換技術(shù)取代通用固定床交換技術(shù),并結(jié)合納濾技術(shù)分離酶轉(zhuǎn)化5’-核苷三磷酸的方法。
      本發(fā)明是建立在一步分離和連續(xù)分離的思想之上的,其特點(diǎn)在于利用溶液中目標(biāo)產(chǎn)物與共存雜質(zhì)之間在物理、化學(xué)以及生物學(xué)性質(zhì)的差異,使其在分離操作中具有不同的傳質(zhì)速率和(或)平衡狀態(tài),以及連續(xù)式離子交換技術(shù)這一新型分離理念從而實(shí)現(xiàn)5’-核苷三磷酸分離的目的。
      本發(fā)明的目的可以通過(guò)下列技術(shù)措施來(lái)實(shí)現(xiàn)一種連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的方法,該方法采用連續(xù)離子交換系統(tǒng)和納濾的組合技術(shù)分離酶轉(zhuǎn)化5’-核苷三磷酸,具體方法是將酶轉(zhuǎn)化的5’-核苷三磷酸清液泵入裝有陰離子離子交換樹(shù)脂的連續(xù)離子交換系統(tǒng)中進(jìn)行吸附,采用pH2~14,濃度在0.001M~2M之間的無(wú)機(jī)鹽溶液以適當(dāng)?shù)牧魉俦萌脒B續(xù)離子交換系統(tǒng)進(jìn)行洗雜、洗脫;用截留分子量為150~300道爾頓的納濾膜將離子交換洗脫液同步濃縮和脫鹽,結(jié)晶干燥。
      所述的方法,其中連續(xù)離子交換系統(tǒng)是指由多根離子交換柱串聯(lián)的連續(xù)操作的離子交換系統(tǒng),即通過(guò)組合式閥門(mén)將離子交換過(guò)程中的吸附、洗雜、洗脫和再生不同工段之間的按順序切換,將吸附段離子交換柱在樹(shù)脂吸附飽和后立刻移出吸附段送入洗雜段進(jìn)行洗雜,洗雜結(jié)束后立刻移出洗雜段送入洗脫段進(jìn)行洗脫,洗脫完成后立刻移出洗脫段送入再生段進(jìn)行再生,再生清洗完成后立刻移出再生段送入吸附段再進(jìn)行吸附,如此循環(huán)的操作過(guò)程,且每個(gè)工段的第1根離子交換柱的狀態(tài)切換同步進(jìn)行,并保證至少有一根離子交換柱處于吸附階段。
      所述的方法,其中由多根離子交換柱串聯(lián)的連續(xù)操作的離子交換系統(tǒng)是指由6~60根固定床離子交換柱組成,優(yōu)選12~36根組成的連續(xù)操作的離子交換系統(tǒng)。
      所述的方法,其中5’-核苷三磷酸的酶轉(zhuǎn)化清液上樣濃度為1~30g/L,優(yōu)選5~25g/L。
      所述的方法,其中無(wú)機(jī)鹽溶液是氯化鈉、氯化銨或硫酸銨溶液。
      所述的方法,其中用于洗脫的無(wú)機(jī)鹽溶液濃度為0.1M~2M。
      所述的方法,其中以濃度為0.2~2M的酸和堿按先酸后堿的順序泵入需再生的離子交換柱進(jìn)行再生,再生完成后用去離子水淋洗。
      所述的方法,其中再生過(guò)程中所用的酸是鹽酸或硫酸,堿是氫氧化鈉或氨水。
      所述的方法,其中陰離子離子交換樹(shù)脂的型號(hào)為301型、302型、303型、311型、312型或313型。所述的方法,其中洗雜溶液pH值2~8,洗脫溶液pH值2~6。
      以下結(jié)合說(shuō)明書(shū)附圖對(duì)連續(xù)離子交換系統(tǒng)作進(jìn)一步的說(shuō)明料液從固定床上部進(jìn)入在每個(gè)工序結(jié)束后就通過(guò)閥門(mén)的切換把完成工序的樹(shù)脂柱“移動(dòng)”到下一個(gè)工序,且每道工序通過(guò)操作流量的調(diào)節(jié)或是樹(shù)脂裝填量的調(diào)節(jié)來(lái)實(shí)現(xiàn)同步運(yùn)行。對(duì)于16根離子交換柱構(gòu)成連續(xù)離交系統(tǒng),根據(jù)物料的特點(diǎn)和工藝條件的需要采用吸附段為5根,洗雜段為3根,洗脫段為3根,再生段為5根的工藝形式,圖1~17為連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的離子交換裝置在循環(huán)周期中分別處于不同狀態(tài)的示意圖。在吸附段的5根離交柱中第5根離交柱的作用是保護(hù)整個(gè)離交柱的吸附段不會(huì)被上柱液穿透而造成損失,當(dāng)?shù)?根離交柱吸附飽和后就會(huì)被移出吸附段,進(jìn)入洗雜段,成為洗雜工段的第3根柱,而洗雜段的第1根離交柱此時(shí)在洗雜流速的控制下剛好洗雜完成,進(jìn)入洗脫段,成為洗脫工段的最后一根柱,此時(shí)可以通過(guò)控制洗脫流速使得洗脫段的原第一根也同時(shí)洗脫結(jié)束,移入再生段的最后一根進(jìn)行再生,再生段的第一根也再生完畢,開(kāi)始吸附了。這樣通過(guò)控制各個(gè)工段的流速,可以使得離交過(guò)程的四個(gè)工段保持同樣的節(jié)奏進(jìn)行工作。
      酶轉(zhuǎn)化NTP指將原料經(jīng)酵母轉(zhuǎn)化而得到的NTP,該方法是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的技術(shù)。
      流速受各工段條件的影響,原則是保證各工段同步運(yùn)行,本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可根據(jù)樹(shù)脂的狀態(tài)調(diào)整流動(dòng)相的流速。
      本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)具有如下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明運(yùn)用連續(xù)離子交換技術(shù)由于提高了樹(shù)脂的利用率,減少了樹(shù)脂用量,運(yùn)用一種陰離子交換樹(shù)脂進(jìn)行分離純化,工藝步驟簡(jiǎn)單洗脫液濃度變高,洗雜效果好,減少了洗脫劑和洗雜劑的用量;同時(shí)酸、堿等再生劑由于提高了利用率而用量減小,同時(shí)也減少了酸、堿的排放。
      表1 固定床和連續(xù)離交系統(tǒng)性能參數(shù)得比較(相同產(chǎn)能)

      本發(fā)明突破國(guó)內(nèi)外同行對(duì)5’-核苷三磷酸分離純化方式的模式化,將離子交換與納濾膜分離相結(jié)合,節(jié)約了脫鹽和濃縮的步驟可以直接進(jìn)行結(jié)晶純化。使得本發(fā)明的分離純化技術(shù)簡(jiǎn)便易行,效果佳,不僅其設(shè)備投資、運(yùn)行成本低廉,而且可以根據(jù)分離量的多少,實(shí)現(xiàn)從公斤級(jí)到噸級(jí)的分離。通過(guò)本發(fā)明所得產(chǎn)品在產(chǎn)品收率和產(chǎn)品質(zhì)量方面都獲得了極好的結(jié)果,保證了產(chǎn)品品質(zhì)。


      圖1是本發(fā)明連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的離子交換裝置處于狀態(tài)1的示意圖。
      圖2是本發(fā)明連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的離子交換裝置處于狀態(tài)2的示意圖。
      圖3是本發(fā)明連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的離子交換裝置處于狀態(tài)3的示意圖。
      圖4是本發(fā)明連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的離子交換裝置處于狀態(tài)4的示意圖。
      圖5是本發(fā)明連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的離子交換裝置處于狀態(tài)5的示意圖。
      圖6是本發(fā)明連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的離子交換裝置處于狀態(tài)6的示意圖。
      圖7是本發(fā)明連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的離子交換裝置處于狀態(tài)7的示意圖。
      圖8是本發(fā)明連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的離子交換裝置處于狀態(tài)8的示意圖。
      圖9是本發(fā)明連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的離子交換裝置處于狀態(tài)9的示意圖。
      圖10是本發(fā)明連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的離子交換裝置處于狀態(tài)10的示意圖。
      圖11是本發(fā)明連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的離子交換裝置處于狀態(tài)11的示意圖。
      圖12是本發(fā)明連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的離子交換裝置處于狀態(tài)12的示意圖。
      圖13是本發(fā)明連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的離子交換裝置處于狀態(tài)13的示意圖。
      圖14是本發(fā)明連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的離子交換裝置處于狀態(tài)14的示意圖。
      圖15是本發(fā)明連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的離子交換裝置處于狀態(tài)15的示意圖。
      圖16是本發(fā)明連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的離子交換裝置處于狀態(tài)16的示意圖。
      圖17是本發(fā)明連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的離子交換裝置處于狀態(tài)17的示意圖。
      具體實(shí)施例方式
      通過(guò)下列實(shí)施實(shí)例進(jìn)一步定義本發(fā)明,實(shí)施實(shí)例是為說(shuō)明而非限制本發(fā)明。本領(lǐng)域中任何普通技術(shù)人員能夠理解這些實(shí)施實(shí)例不以任何方式限制本發(fā)明,可做適當(dāng)?shù)男薷亩贿`背本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和偏離本發(fā)明的范圍。
      以下實(shí)施例中所采用的連續(xù)離子交換系統(tǒng)是指有多根離子交換柱串聯(lián)的連續(xù)操作的離子交換系統(tǒng),即通過(guò)組合式閥門(mén)將離子交換過(guò)程中的吸附、洗雜、洗脫和再生不同工段之間的按順序切換,將吸附段離子交換柱在樹(shù)脂吸附飽和后立刻移出吸附段送入洗雜段進(jìn)行洗雜,洗雜結(jié)束后立刻移出洗雜段送入洗脫段進(jìn)行洗脫,洗脫完成后立刻移出洗脫段送入再生段進(jìn)行再生,再生清洗完成后立刻移出再生段送入吸附段再進(jìn)行吸附,如此循環(huán)的操作過(guò)程,且每個(gè)工段的第1根離子交換柱的狀態(tài)切換同步進(jìn)行,并至少保證有一根離子交換柱處于吸附階段。
      實(shí)施例1采用16根離子交換柱構(gòu)成連續(xù)離交系統(tǒng),吸附段為5根,洗雜段為3根,洗脫段為3根,再生段為5根。每根離交柱裝填30g樹(shù)脂(311型),離交柱的直徑為1.5厘米,高度為25厘米。處理料液為酶轉(zhuǎn)化的5’-核苷三磷酸清液用去離子水稀釋到10g/L后,用鹽酸調(diào)節(jié)料液pH值2.3,吸附流速為2.5ml/min,吸附容量為0.22g/g濕樹(shù)脂;洗雜溶液為pH 5.0的0.075mol/L NaCl溶液,洗雜流速為5ml/min,洗雜至無(wú)雜質(zhì)為止(用HPLC檢測(cè)確定洗雜段第一根離子交換柱無(wú)雜質(zhì)流出為單根離子交換柱洗雜液用量標(biāo)準(zhǔn));洗脫液為pH7.0的1.0mol/L NaCl,洗脫流速為2ml/min,洗脫完全(用HPLC檢測(cè)確定洗脫段第一根離子交換柱洗脫完全為單根離子交換柱冼脫液用量標(biāo)準(zhǔn)),洗脫液用截留分子量為150~300道爾頓的納濾膜同步納濾濃縮脫鹽后結(jié)晶、干燥,得到純度為97.5%的5’-核苷三磷酸,收率在91.0%。以濃度為1M的鹽酸和1M的氫氧化鈉按先酸后堿的順序泵入需再生的離子交換柱進(jìn)行再生,再生完成后用去離子水淋洗。
      實(shí)施例2待處理料液為酶轉(zhuǎn)化的5’-核苷三磷酸清液用去離子水稀釋到8g/L后,吸附樹(shù)脂型號(hào)為301,采用16根離子交換柱構(gòu)成連續(xù)離交系統(tǒng),吸附段為4根,洗雜段為4根,洗脫段為3根,再生段為5根。每根離交柱裝填1000g樹(shù)脂,離交柱的徑高比為1∶5。用鹽酸調(diào)節(jié)料液pH值2.2,吸附流速為20ml/min,吸附容量為0.24g/g濕樹(shù)脂;洗雜溶液為pH 2.0的0.05mol/L NaCl溶液,洗雜流速為40ml/min,洗雜至無(wú)雜質(zhì)為止(用HPLC檢測(cè)確定洗雜段第一根離子交換柱無(wú)雜質(zhì)流出為單根離子交換柱洗雜液用量標(biāo)準(zhǔn));洗脫液為pH7.0的1.0mol/L NaCl,洗脫流速為10ml/min,洗脫完全(用HPLC檢測(cè)確定洗脫段第一根離子交換柱洗脫完全為單根離子交換柱冼脫液用量標(biāo)準(zhǔn)),洗脫液用截留分子量為150~300道爾頓的納濾膜同步納濾濃縮脫鹽后結(jié)晶、干燥,得到純度為98.2%的5’-核苷三磷酸,收率在91.5%。以濃度為1.0M的鹽酸和1.0M的氫氧化鈉按先酸后堿的順序泵入需再生的離子交換柱進(jìn)行再生,再生完成后用去離子水淋洗。
      實(shí)施例3待處理料液為酶轉(zhuǎn)化的5’-核苷三磷酸清液用去離子水稀釋到11g/L后,吸附樹(shù)脂型號(hào)為311,采用16根離子交換柱構(gòu)成連續(xù)離交系統(tǒng),吸附段為4根,洗雜段為4根,洗脫段為3根,再生段為5根。每根離交柱裝填1Kg樹(shù)脂,離交柱的徑高比為1∶5。用鹽酸調(diào)節(jié)料液pH值2.4,吸附流速為25ml/min,吸附容量為0.25g/g濕樹(shù)脂;洗雜溶液為pH 2.0的0.075mol/LNaCl溶液,洗雜流速為50ml/min,洗雜至無(wú)雜質(zhì)為止(用HPLC檢測(cè)確定洗雜段第一根離子交換柱無(wú)雜質(zhì)流出為單根離子交換柱洗雜液用量標(biāo)準(zhǔn));洗脫液為pH7.0的1.0mol/LNaCl,洗脫流速為15ml/min,洗脫完全(用HPLC檢測(cè)確定洗脫段第一根離子交換柱洗脫完全為單根離子交換柱冼脫液用量標(biāo)準(zhǔn)),洗脫液用截留分子量為150~300道爾頓的納濾膜同步納濾濃縮脫鹽后結(jié)晶、干燥,得到純度為98.3%的5’-核苷三磷酸,收率在92.0%。以濃度為1.2M的鹽酸和1.2M的氫氧化鈉按先酸后堿的順序泵入需再生的離子交換柱進(jìn)行再生,再生完成后用去離子水淋洗。
      實(shí)施例4待處理料液為酶轉(zhuǎn)化的5’-核苷三磷酸清液用去離子水稀釋到12g/L后,吸附樹(shù)脂型號(hào)為301,采用16根離子交換柱構(gòu)成連續(xù)離交系統(tǒng),吸附段為5根,洗雜段為3根,洗脫段為3根,再生段為5根。每根離交柱裝填500g樹(shù)脂,離交柱的徑高比為1∶5。用鹽酸調(diào)節(jié)料液pH值2.5,吸附流速為10ml/min,吸附容量為0.24g/g濕樹(shù)脂;洗雜溶液為pH 2.0的0.05mol/L NaCl溶液,洗雜流速為20ml/min,洗雜至無(wú)雜質(zhì)為止(用HPLC檢測(cè)確定洗雜段第一根離子交換柱無(wú)雜質(zhì)流出為單根離子交換柱洗雜液用量標(biāo)準(zhǔn));洗脫液為pH7.0的1.0mol/L NaCl,洗脫流速為5ml/min,洗脫完全(用HPLC檢測(cè)確定洗脫段第一根離子交換柱洗脫完全為單根離子交換柱冼脫液用量標(biāo)準(zhǔn)),洗脫液用截留分子量為150~300道爾頓的納濾膜同步納濾濃縮脫鹽后結(jié)晶、干燥,得到純度為98.3%的5’-核苷三磷酸,收率在91.4%。以濃度為1.5M的鹽酸和1.5M的氫氧化鈉按先酸后堿的順序泵入需再生的離子交換柱進(jìn)行再生,再生完成后用去離子水淋洗。
      實(shí)施例5待處理料液為酶轉(zhuǎn)化的5’-核苷三磷酸清液用去離子水稀釋到12g/L后,吸附樹(shù)脂型號(hào)為311,采用16根離子交換柱構(gòu)成連續(xù)離交系統(tǒng),吸附段為4根,洗雜段為4根,洗脫段為3根,再生段為5根。每根離交柱裝填1Kg樹(shù)脂,離交柱的徑高比為1∶5。用鹽酸調(diào)節(jié)料液pH值2.2,吸附流速為25ml/min,吸附容量為0.25g/g濕樹(shù)脂;洗雜溶液為pH 2.0的0.075mol/L NaCl溶液,洗雜流速為50ml/min,洗雜至無(wú)雜質(zhì)為止(用HPLC檢測(cè)確定洗雜段第一根離子交換柱無(wú)雜質(zhì)流出為單根離子交換柱洗雜液用量標(biāo)準(zhǔn));洗脫液為pH7.0的1.0mol/LNaCl,洗脫流速為15ml/min,洗脫完全(用HPLC檢測(cè)確定洗脫段第一根離子交換柱洗脫完全為單根離子交換柱冼脫液用量標(biāo)準(zhǔn)),洗脫液用截留分子量為150~300道爾頓的納濾膜同步納濾濃縮脫鹽后結(jié)晶、干燥,得到純度為98.1%的5’-核苷三磷酸,收率在92.6%。以濃度為1.2M的鹽酸和1.2M的氫氧化鈉按先酸后堿的順序泵入需再生的離子交換柱進(jìn)行再生,再生完成后用去離子水淋洗。
      權(quán)利要求
      1.一種連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的方法,其特征在于該方法采用連續(xù)離子交換系統(tǒng)和納濾的組合技術(shù)分離酶轉(zhuǎn)化5’-核苷三磷酸,具體方法是將酶轉(zhuǎn)化的5’-核苷三磷酸清液泵入裝有陰離子離子交換樹(shù)脂的連續(xù)離子交換系統(tǒng)中進(jìn)行吸附,采用pH2~14,濃度在0.001M~2M之間的無(wú)機(jī)鹽溶液以適當(dāng)?shù)牧魉俦萌脒B續(xù)離子交換系統(tǒng)進(jìn)行洗雜、洗脫;用截留分子量為150~300道爾頓的納濾膜將離子交換洗脫液同步濃縮和脫鹽,結(jié)晶干燥。
      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于連續(xù)離子交換系統(tǒng)是指由多根離子交換柱串聯(lián)的連續(xù)操作的離子交換系統(tǒng),即通過(guò)組合式閥門(mén)將離子交換過(guò)程中的吸附、洗雜、洗脫和再生不同工段之間的按順序切換,將吸附段離子交換柱在樹(shù)脂吸附飽和后立刻移出吸附段送入洗雜段進(jìn)行洗雜,洗雜結(jié)束后立刻移出洗雜段送入洗脫段進(jìn)行洗脫,洗脫完成后立刻移出洗脫段送入再生段進(jìn)行再生,再生清洗完成后立刻移出再生段送入吸附段再進(jìn)行吸附,如此循環(huán)的操作過(guò)程,且每個(gè)工段的第1根離子交換柱的狀態(tài)切換同步進(jìn)行,并保證至少有一根離子交換柱處于吸附階段。
      3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于由多根離子交換柱串聯(lián)的連續(xù)操作的離子交換系統(tǒng)是指由6~60根固定床離子交換柱組成。
      4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于5’-核苷三磷酸的酶轉(zhuǎn)化清液上樣濃度為1~30g/L。
      5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于無(wú)機(jī)鹽溶液是氯化鈉、氯化銨或硫酸銨溶液。
      6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于用于洗脫的無(wú)機(jī)鹽溶液濃度為0.1M~2M。
      7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于以濃度為0.2~2M的酸和堿按先酸后堿的順序泵入需再生的離子交換柱進(jìn)行再生,再生完成后用去離子水淋洗。
      8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法,其特征在于酸是鹽酸或硫酸,堿是氫氧化鈉或氨水。
      9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于陰離子離子交換樹(shù)脂的型號(hào)為301型、302型、303型、311型、312型或313型。
      10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于洗雜溶液pH值2~8,洗脫溶液pH值2~6。
      全文摘要
      本發(fā)明公開(kāi)了一種連續(xù)分離5’-核苷三磷酸的方法。該方法采用連續(xù)離子交換系統(tǒng)和納濾的組合技術(shù)分離酶轉(zhuǎn)化5’-核苷三磷酸,具體方法是將酶轉(zhuǎn)化的5’-核苷三磷酸清液泵入裝有陰離子離子交換樹(shù)脂的連續(xù)離子交換系統(tǒng)中進(jìn)行吸附,采用pH2~14,濃度在0.001M~2M之間的無(wú)機(jī)鹽溶液以適當(dāng)?shù)牧魉俦萌脒B續(xù)離子交換系統(tǒng)進(jìn)行洗雜、洗脫;用截留分子量為150~300道爾頓的納濾膜將離子交換洗脫液同步濃縮和脫鹽,結(jié)晶干燥。本發(fā)明具有分離介質(zhì)擔(dān)載量大、設(shè)備投資少,易于規(guī)?;a(chǎn),生產(chǎn)成本低的優(yōu)點(diǎn)。
      文檔編號(hào)C07H1/00GK1872867SQ20061008538
      公開(kāi)日2006年12月6日 申請(qǐng)日期2006年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月12日
      發(fā)明者應(yīng)漢杰, 呂浩, 趙谷林 申請(qǐng)人:南京工業(yè)大學(xué)
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