專利名稱：靶向凋亡誘導因子的抗流感病毒反義寡核苷酸的結構及其用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及生物工程藥物領域，具體地說是一種通過靶向凋亡誘導因子(AIF，apoptosisinducing factor，)mRNA序列，并抑制其表達，從而達到抗流感病毒(IV，influenza virus)的反義寡核苷酸(ASODN，antisense oligodexynucleotide)的序列、結構及其用途。
背景技術：
IV可引起的急性呼吸道傳染病。該病潛伏期短，傳染性強，傳播迅速。甲型流感威脅最大，且易發(fā)生變異，易引起暴發(fā)流行。1918年至1920年，著名的″西班牙流感″在全球范圍內造成了2000萬-4000萬人死亡。此后，1957甲型IV(H2N2)所致的″亞洲流感″、1968由甲型IV(H3N2)所致的″香港流感″、1977年由甲型IV(H1N1)所致的″俄羅斯流感″、1997年以來出現(xiàn)的高致病性禽流感病毒(AIV，avian influenza virus)，都威脅了人們的健康和正常生活。H5N1型AIV已經(jīng)穿越種間屏障，是可引起人、禽類等動物共患的急性傳染病。香港、泰國、越南、柬埔寨等世界各地相繼出現(xiàn)過由H5N1型AIV引起的人禽流感患者，并致使數(shù)百人死亡。患者急性起病，早期表現(xiàn)類似普通流感患者，普遍體溫升高，重度患者有下呼吸道感染的臨床表現(xiàn)，外周血淋巴細胞均明顯降低，病情發(fā)展快，短期(2～5d)急劇惡化，因多器官功能衰竭死亡，死亡率高。我國湖南、湖北、安徽、廣東、廣西、上海、新疆等地也先后發(fā)現(xiàn)H5N1引起的禽流感，并已發(fā)現(xiàn)數(shù)起感染人的病例。流感作為急性呼吸道傳染病嚴重威脅著人們的健康，對于兒童、老年人、其它慢性病患者等高危人群尤其嚴重，而且也已成為社會勞動力損失、醫(yī)療負擔加重乃至社會不安定的主要原因之一。
由于IV變異，常規(guī)疫苗不能有效預防流感的發(fā)生和流行。過去用于治療流感的兩種較低廉的抗病毒藥物三環(huán)癸胺(amantadine)和金剛乙胺(remantadine)對人體內IV幾乎不起作用，且耐藥較為普遍。新近上市的神經(jīng)氨酸酶抑制劑(例如達菲和帕納米韋)雖效果較好，但隨著臨床廣泛應用，耐藥毒株分離的報道也相繼出現(xiàn)。目前仍缺乏可靠的方法對流感的發(fā)生和流行進行有效的控制，有效的預防和控制IV方法的已成當務之急。因此研究特異性高、毒副作用小的新型抗IV藥物對治療與預防具有重要現(xiàn)實意義。
病毒是一種嚴格的細胞內寄生物。病毒感染致病涉及病毒與機體兩個復雜生物系統(tǒng)及其二者間的相互作用。一方面，宿主表現(xiàn)出對病毒感染的主動限制；另一方面，病毒會主動地通過對宿主細胞的生物大分子進行修飾，以使宿主細胞為它的復制、轉錄等提供必需的細胞機器。在短時間內不影響細胞存活且能為宿主細胞所能容忍的前提下，增強抗病毒信號或者阻斷病毒復制所需的宿主細胞因子可以有效的抗病毒以及降低耐藥毒株產(chǎn)生的頻率。
AIF是近年來發(fā)現(xiàn)的一種凋亡效應分子。正常情況下，AIF是一種定位于細胞線粒體膜間隙中的黃素蛋白；當有凋亡信號刺激時，AIF分子從線粒體釋放到細胞漿，再通過其核定位信號轉位到細胞核中，直接引起染色體凝集和DNA呈大片段(～50kb)斷裂，導致細胞凋亡。AIF似乎參與了個體發(fā)生和種系發(fā)生早期階段的程序性細胞死亡過程，在神經(jīng)細胞和非神經(jīng)細胞的凋亡中都發(fā)揮著重要作用。因此，AIF介導的細胞凋亡代表了獨立于caspase信號通路之外的另一條更原始、更保守、更普遍的凋亡途徑。已有大量的報道證實乙肝病毒、艾滋病毒等病毒誘導細胞凋亡的過程中均有AIF的參與。因此小的AIF抑制分子可能將成為新一類細胞保護劑。
ASODN是一類經(jīng)過人工合成的寡核苷酸片段，長度多為15～30個核苷酸。通過堿基互補的原理，干擾相關基因的轉錄和翻譯，或者整個基因組的復制，其優(yōu)點在于其理論上的高度靶特異性，是一種理想的具有精確選擇性的基因靶向治療藥物。由于ASODN作用的高度特異性，因此被認為是極具潛力的抗腫瘤和抗病毒新藥。國外已有一些著名制藥企業(yè)已將反義藥物作為其新藥研究開發(fā)的重點方向之一。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是根據(jù)IV病毒復制、致病需要宿主細胞AIF的表達，并依此設計并制備一種寡核苷酸，通過抑制AIF的表達以阻止病毒的復制增殖，抑制病毒的致細胞病變，以此作為預防和治療IV感染的藥物。
具體的說，本發(fā)明根據(jù)已公開的AIF基因mRNA序列(NM 004208)，設計針對AIF的ASODN，通過抑制AIF的表達，以阻止IV的復制和致病，為治療IV感染提供新的特效的藥物。本發(fā)明提供了一種靶向人AIF的寡核苷酸，其特征為包含SEQ1～11所示的任一核苷酸序列。
上述寡核苷酸可以通過修飾來增加其穩(wěn)定性，組成寡核苷酸的磷酸二酯鍵部分的單鍵氧位置可以是氧、甲基或硫。
優(yōu)選的，上述寡核昔酸包含SEQ1所示的任一核苷酸序列。
在本發(fā)明的一個實施例中，提供了一種最佳的方案，其中寡核苷酸選自SEQ1。
根據(jù)本發(fā)明，針對人AIF的ASODN能特異性抑制IV的復制和導致的細胞病變，其長度、細胞通透性與靶序列結合親和性及作用特異性等因素相關。本發(fā)明的寡核苷酸及其修飾物可單獨或以組合物形式包括聯(lián)合其它反義寡核苷酸及其衍生物用于制備治療及預防IV感染的新型生物工程藥物。
另一發(fā)明，本發(fā)明提供了一種用于防治IV感染的藥物組合物，其中至少含有一種本發(fā)明的寡核苷酸或其修飾物，如果適當?shù)脑挘€可以含有治療上可以接受的載體材料，如脂質體、融合肽或病毒載體等。該藥物組合物可依不同情況，包括特定藥物的藥物動力學、藥代動力學、給藥模式、給藥途徑、受者的年齡、體重、肝腎功能狀態(tài)、疾病的性質、程度及治療時限等，以適宜的劑量給藥。
本發(fā)明通過以下方法得以完成以人AIF基因的mRNA為靶標，對其進行RNA二級結構的計算機模擬，共設計了11條反義寡核苷酸。從所設計的11條ASODNs中進行初步篩選，優(yōu)選出效果較好的ASODNs。結果顯示除AIF-2、3、5、6外，其余7種寡核苷酸均顯示出較好的活性；其中AIF-1抑制病毒致細胞CPE作用最佳，AIF-10和-11次之。同時設計了AIF-1的正義、錯配和置亂序列。
反義寡核苷酸的分子設計

在A549細胞系中以AIF-1為代表進一步評價了抑制IV復制和致細胞病變的特性。結果表明AIF-1針對H1N1、H3N2、H5N1型流感病毒的IC50分別為0.93、1.86和1.54μmol/L，并且AIF-1對病毒致細胞病變的抑制率呈劑量依賴關系；而對照藥物病毒唑(RBV，Ribavirin)各項對應值分別為1.47、8.47、5.72μmol/L，達菲(Tamiflu)各項對應值分別為1.088、1.084、2.27μmol/L。可見AIF-1的作用優(yōu)于RBV，與Tamiflu相當。同時通過RT-PCR驗證通過抑制AIF基因的表達可以抑制病毒基因的復制。
總之，根據(jù)本發(fā)明，人AIF基因的mRNA為靶標互補結合的寡核苷酸均能有效的抑制病毒和保護流感病毒致細胞病變，是一種特異性高、毒副作用小的新型抗流感病毒的潛在藥物。本發(fā)明的實施對嚴重危害人類健康的IV感染的治療具有重要的社會效益和經(jīng)濟效益。


圖1 AIF1～11(4μmol/L)抑制病毒致細胞病變的作用。
圖2 AIF-1抑制H1N1型流感病毒致細胞病變作用。
圖3 AIF-1抑制H3N2型流感病毒致細胞病變作用圖4 AIF-1A/Tiger/Harbin/01/2002(H5N1)流感病毒致細胞病變圖5 AIF-1A/Tiger/Shanxi/02/2002(H5N1)流感病毒致細胞病變圖6 AIF-1A/Tiger/Shanghai/04/2003(H5N1)流感病毒致細胞病變圖7 A～E為AIF-1對A/Tiger/Harbin/01/2002(H5N1)病毒致細胞病變的抑制作用，其中A.病毒感染陽性對照細胞；B.流感病毒+0.25μmol/LAIF-1；C.流感病毒+1μmol/LAIF-1；D.流感病毒+4μmol/LAIF-1；E.未感染病毒的正常細胞對照；圖8 病毒感染24h后不同濃度AIF-1對其NP基因表達的抑制圖9 4μmol/LAIF-1在病毒感染12、24、48h后對病毒NP基因表達的抑制圖10 AIF-1、Sense、Mismatch對基因mRNA的抑制圖11 2μmol/LAIF-1在不同時相對基因mRNA的抑制具體實施方式
實施例一本實施例主要說明靶向人AIF基因抗流感病毒反義寡核苷酸的設計、合成和篩選。
1.反義寡核苷酸AIF-1的設計和合成參考人AIF基因的mRNA序列，設計11條反義寡核苷酸。通過與GeneBank聯(lián)機blast序列比對，所選擇的靶序列均具有很好的特異性，不會干擾人類其它正?；虻谋磉_。所有寡核苷酸均采用ABI8909型自動DNA合成儀合成并在合成時進行硫代修飾，過程如下將硫代試劑(Beaucage regent，Transgenomic)溶于無水乙腈中使其終濃度為1g/100ml，置于DNA合成儀的AUX位置處，采用合成儀上提供的DNA硫化程序進行自動合成硫代寡核苷酸。合成完畢濃氨水55℃切割并脫保護15小時后，經(jīng)Micro Pure II反相純化柱(Oligo PrepOP120，SAVANT)純化，紫外定量后真空干燥，-20℃保存?zhèn)溆谩?br> 2.A549細胞、病毒和對照藥物病毒在10日齡SPF雞胚傳代，收集尿囊液，測定其血凝(Hemagglutination，HA)效價，取HA價＞1∶26者，混勻、分裝、保存于-70℃?zhèn)溆?。使用的病毒毒株有A/京防/86-1(H1N1)、A/魯防/93-9(H3N2)、A/Tiger/Harbin/01/2002(H5N1)、A/Tiger/Shanxi/02/2002(H5N1)、A/Tiger/Shanghai/04/2003(H5N1)。A549細胞培養(yǎng)液為含10％小牛血清(GIBCO.BRL)的1640培養(yǎng)液，病毒感染和細胞病變測定時使用含2％小牛血清和5g/ml胰蛋白酶的維持液。陽性對照藥物為病毒唑(山東魯抗集團)和達菲(軍事醫(yī)學科學院六所合成)。
3.反義寡核苷酸的篩選A549細胞在含10％小牛血清(Gibco)的1640培養(yǎng)基中，于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。觀察細胞生長狀態(tài)良好，培養(yǎng)至對數(shù)生長期后，以10000～12000個細胞/孔將細胞接種至96孔細胞培養(yǎng)板中，次日60～80％長滿。用含2％小牛血清的1640稀釋AIF-1～-11至4μmol/L。以PBS(pH7.5)沖洗一次，每孔加入100TCID50的A/京防/86-1(H1N1)病毒稀釋液50μl，37℃感作60min，后用PBS(pH7.5)沖洗一次，將AIF-1～-11以100μl/孔的量加入各孔。同時設立病毒感染陽性對照和A549細胞陰性對照。37℃(培養(yǎng)2d。利用CellTiter96 Aqueous One Solution試劑盒(Promega產(chǎn)品)測定細胞病變程度(以OD490表示)，并以如下公式計算藥物的病毒抑制率[(OD試驗-OD病毒)/(OD細胞-OD病毒)]×100。篩選出最佳的反義寡核苷酸以進一步評價。
結果從所設計的11條ASODNs中進行初步篩選，以選出效果最佳的ASODNs，以便于進一步的評價。結果顯示在濃度為4μmol/L時以AIF-1抑制病毒致細胞CPE作用最佳，抑制率為79.81％，AIF-10和-11次之，抑制率為65.00％和63.98％(見圖1)。
實施例二本實施例主要說明體外A549細胞水平AIF-1抗H1N1、H3N2、H5N1型流感病毒活性的研究。
1.AIF-1抑制流感病毒致細胞病變作用參照實施例一將A549細胞鋪板96空細胞培養(yǎng)板，次日60～80％長滿。用含2％FBS的1640稀釋AIF-1至0.25、0.5、1、2、4μmol/L。以PBS(pH7.5)沖洗一次，加入100TCID50的病毒稀釋液50μl，37℃感作60min。再以PBS(pH7.5)沖洗一次，加入不同濃度的AIF-1。同時設立陽性藥物對照組、病毒感染陽性對照和A549細胞陰性對照。37℃培養(yǎng)2d。利用CellTiter96Aqueous One Solution試劑盒(Promega產(chǎn)品)測定細胞病變程度(以OD490表示)。計算藥物的細胞病變抑制率和IC50。
2.AIF-1抑制病毒非結構蛋白(NP)基因的表達A549細胞在含10％小牛血清(Gibco)的1640培養(yǎng)基中，于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。觀察細胞生長狀態(tài)良好。培養(yǎng)至對數(shù)生長期后，將細胞接種至6孔細胞培養(yǎng)板中，次日60～80％長滿。接種100TCID50的A/京防/86-1(H1N1)病毒稀釋液，37℃感作60min。以PBS(pH7.5)沖洗一次，加入不同濃度的AIF-1，24h后提取總RNA。另進行同一濃度AIF-1(4μmol/L)給藥后，12、24、48h不同時相提取總RNA。
按照Trizol試劑盒(Invitrogen)說明書提取細胞總RNA，紫外分光光度計定量，OD260/280在1.8-2.0之間，RNA甲醛變性電泳顯示無降解。然后進行逆轉錄，具體方法如下各取總RNA 1μg，PCR下游引物0.5μg，RNA酶抑制劑(40U)0.1μl，共10.3μ，混勻，70℃溫育10min，立即冰上冷卻。加入第一鏈反應緩沖液5μl，DTT 2.5μl，RNA酶抑制劑0.7μl，dNTP(A、G、C、T10mM)1.0μl，混勻，42℃反應2min，加入逆轉錄酶superscript II0.5μl，42℃溫育1h，最后70℃變性15min。反轉錄產(chǎn)物取1μl作為PCR擴增的模板。以看家基因β-Actin為內標。NP基因上游引物為5’CAG(A/G)TA CTG GGC(A/T/C)AT AAG(A/G)AC3’，下游引物為5’GCATTG TCT CCG AAG AAA TAA G3’，擴增片斷為330bp。β-Actin的上游引物為5’TTCAGGTTT ACT CAC GTC ATC C3’，下游引物為5’CCA AAT GCG GCA TCT TCA AAC C3’，擴增片斷317bp。PCR反應體系總體積20μl，上下游引物終濃度為1μM，Mg2+濃度1.5mM，加入反轉錄產(chǎn)物0.5μl，Taq 1U。PCR循環(huán)參數(shù)為94℃預變性2min，94℃ 30s，55℃ 45s，72℃ 1min，循環(huán)30次，最后72℃延伸10min。2％瓊脂糖膠(Sigma)電泳檢查。
結果1.AIF-1抑制H1N1型流感病毒致細胞病變作用不同濃度AIF-1、RBV、Tamiflu抑制H1N1型流感病毒致細胞病變抑制率見圖2。
該反義序列能較好地抑制H1N1型流感病毒致細胞病變，在細胞水平抗H1N1病毒的效果與Tamiflu相當，并優(yōu)于RBV。AIF-1反義核酸三次實驗IC50的平均值為0.93μmol/L，RBV為1.47μmol/L，Tamiflu為1.088μmol/L。
2.AIF-1抑制H3N2型流感病毒致細胞病變作用不同濃度AIF-1、RBV、Tamiflu抑制H3N2型流感病毒致細胞病變抑制率見圖3。
該反義序列能較好地抑制H3N2型流感病毒致細胞病變，在細胞水平抗H3N2病毒的效果稍遜于Tamiflu，并優(yōu)于RBV。AIF-1反義核酸三次實驗IC50的平均值為1.86umol/L，RBV為8.47umol/L，Tamiflu為1.084μmol/L。
3.AIF-1抑制H5N1型流感病毒不同毒株致細胞病變作用不同濃度AIF-1、RBV、Tamiflu抑制A/Tiger/Harbin/01/2002(H5N1)流感病毒致細胞病變抑制率見圖4。不同濃度AIF-1、RBV、Tamiflu抑制A/Tiger/Shanxi/02/2002(H5N1)流感病毒致細胞病變抑制率見圖5。不同濃度AIF-1、RBV、Tamiflu抑制A/Tiger/Shanghai/04/2003(H5N1)流感病毒致細胞病變抑制率見圖6。
該反義序列能較好地抑制H5N1型流感病毒致細胞病變，在細胞水平抗H5N1病毒的效果好于Tamiflu，并遠較RBV更好。對于A/Tiger/Harbin/01/2002(H5N1)毒株，AIF-1反義核酸三次實驗IC50的平均值為1.54μmol/L，RBV為5.72μmol/L，Tamiflu為2.27μmol/L。對于A/Tiger/Shanxi/02/2002(H5N1)毒株，AIF-1反義核酸的IC50為1.64μmol/L，RBV為7.01μmol/L，Tamiflu為2.20μmol/L。對于A/Tiger/Shanghai/04/2003(H5N1)毒株，AIF-1反義核酸的IC50為1.95μmol/L，RBV為7.88μmol/L，Tamiflu為2.89μmol/L。
圖7為A/Tiger/Harbin/01/2002(H5N1)流感病毒接種48h后不同濃度AIF-1抑制病毒致細胞病變的光鏡照片，明顯可見隨著AIF-1濃度的增加，細胞病變逐漸減輕，生長趨于正常。
4.AIF-1抑制病毒非結構蛋白(NP)基因的表達圖8為病毒感染24h后，不同濃度AIF-1對其NP基因表達的抑制情況，可見AIF-1在2μmol/L顯著抑制了病毒NP基因的表達，且呈現(xiàn)抑制作用與劑量的依賴關系。
圖9為4μmol/LAIF-1在病毒感染12、24、48h后對病毒NP基因表達的抑制情況，可見在不同時相AIF-1均有效的抑制了病毒NP基因的表達。
說明AIF基因表達的抑制間接的使病毒的復制、增殖在基因水平受到了阻滯。
實施例三本實施例主要說明體外AIF-1抑制AIF基因表達的特異性。
AIF-1抑制基因mRNA表達的特異性參照實施例三，將A549細胞鋪板(6孔細胞培養(yǎng)板)，分別進行AIF-1抑制AIF mRNA表達的劑量依賴檢測和不同時相抑制情況的檢測。劑量依賴檢測分別設對照、AIF-1(0.5、1、2μmol/L)、Sense(2μmol/L)和Mismatch(2μmol/L)。不同時間點檢測以2μmol/L AIF-1給予正常細胞后12、24、36、48h提取總RNA。
參照實施例二進行。提取總RNA，進行逆轉錄，以OligodT(15)0.5μg作為引物。以看家基因β-Actin為內標。靶基因AIF上游引物為5’ACA AGC ACG CTC TAA BCA TBC TG G3’，下游引物為5’GTG GGC AAA CTA CTG CCT ACA A3’，擴增片斷為231bp。PCR反應體系總體積20μl，上下游引物終濃度為lμM，Mg2+濃度1.5mM，加入反轉錄產(chǎn)物0.5μl，Taq 1U。PCR循環(huán)參數(shù)為94℃預變性2min，94℃ 30s，55℃ 45s，72℃ 1min，循環(huán)30次，最后72℃延伸10min。2％瓊脂糖膠(Sigma)電泳檢查。
結果圖10為不同濃度AIF-1，以及Sense、Mismatch對基因mRNA的抑制情況，可見AIF-1特異有效的抑制基因mRNA的表達，且呈現(xiàn)劑量與效應的依賴關系。Sense、Mismatch未見明顯的抑制作用。
圖112μmol/LAIF-1在不同時相對基因mRNA的抑制情況，可見其抑制作用在24h和36h是最為明顯。
說明AIF-1作用的特異性，其抗流感病毒和保護細胞的作用是通過AIF基因的抑制而特異有效的。
核苷酸序列表<110>中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所<120>靶向凋亡誘導因子的抗流感病毒反義寡核苷酸的結構及其用途<160>11<210>1<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>1CAGATTTGGGGTTGTCTTGT 20<210>2<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>2GCACCAGCTTCTGCTTCAAA 20<210>3<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>3ACCAGCTTCTGCTTCAAAGC 20<210>4
<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>4ACCAAGGGCACCAGCTTCTG 20<210>5<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>5GCACCAAGGGCACCAGCTTC 20<210>6<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>6CACCAAGGGCACCAGCTTCT 20<210>7<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>7CCAATTCCACTGTGGGGCTT 20
<210>8<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>8GCCAATTCCACTGTGGGGCT20<210>9<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>9TGCCAATTCCACTGTGGGGC20<210>10<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>10GTGGGGCTTCAGTCTTCATG 20<210>11<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>11TGGGGCTTCAGTCTTCATGA 20
權利要求
1.一類靶向凋亡誘導因子(AIF)mRNA的的寡核苷酸，其特征為包含如下所示的任一核苷酸序列1)CAG ATT TGG GGT TGT CTT GT2)GCA CCA GCT TCT GCT TCA AA3)ACC AGC TTC TGC TTC AAA GC4)ACC AAG GGC ACC AGC TTC TG5)GCA CCA AGG GCA CCA GCT TC6)CAC CAA GGG CAC CAG CTT CT7)CCA ATT CCA CTG TGG GGC TT8)GCC AAT TCC ACT GTG GGG CT9)TGC CAA TTC CAC TGT GGG GC10)GTG GGG CTT CAG TCT TCA TG11)TGG GGC TTC AGT CTT CAT GA
2.根據(jù)權利要求1所述寡核苷酸，其特征為組成寡核苷酸的磷酸二酯鍵部分的單鍵氧位置選自氧、甲基或硫。
3.根據(jù)權利要求2所述的寡核苷酸，其特征為包含如下所示的任一核苷酸序列1)CAG ATT TGG GGT TGT CTT GT2)GTG GGG CTT CAG TCT TCA TG3)TGG GGC TTC AGT CTT CAT GA
4.根據(jù)權利要求2所述的寡核苷酸，其特征為包含如下所示的核苷酸序列CAG ATT TGG GGT TGT CTT GT
5.根據(jù)權利要求2所述的寡核苷酸，其特征為具有如下所示的核苷酸序列CAG ATT TGG GGT TGT CTT GT
6.一種治療流感病毒的藥物組合物，其特征為活性成分選自權利要求1-5所述任一寡核苷酸或其組合。
7.權利要求1-5所述任一寡核苷酸或其組合在制備治療流感病毒的藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種反義寡核苷酸藥物的結構和用途。具體說是靶向凋亡誘導因子(AIF)抗流感病毒(IV)反義寡核苷酸的結構和用途。設計合成了靶向AIF的反義寡核苷酸，采用A549細胞(人肺癌上皮細胞)，對11條反義寡核苷酸序列進行了篩選，并就效果最佳的一條反義進行了評價。該寡核苷酸AIF－1在培養(yǎng)的A549細胞中能有效地抑制H1N1、H3N2、H5N1型流感病毒所致的細胞病變。因此，本發(fā)明涉及到靶向AIFmRNA抗IV感染的反義寡核苷酸的序列與結構及其成為治療流感病毒感染的一種新型生物工程藥物。
文檔編號C07H21/00GK101092620SQ20061008694
公開日2007年12月26日 申請日期2006年6月20日 優(yōu)先權日2006年6月20日
發(fā)明者王升啟, 段銘, 林汝仙, 楊靜 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所