專利名稱：從甘肅棘豆中分離提取苦馬豆素的工藝方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種天然產(chǎn)物提取、分離方法，特別涉及一種從甘肅棘豆中分 離提取苦馬豆素的工藝方法。
背景技術：
甘肅棘豆(Oxy "op fam^e"^)為豆科棘豆屬多年生草本植物，主要分布于 我國青海、甘肅、寧夏、四川、云南等地，其根系發(fā)達,枝多葉茂,抗逆性強,生物 產(chǎn)量巨大,每年在其密集生長的牧區(qū)都有大批的家畜中毒死亡，對當?shù)啬撩裨斐傻?損失相當嚴重,是我國西北和西南牧區(qū)危害最嚴重的毒草之-。對甘肅棘豆有毒 成分的研究認為苦馬豆素(swainsonine)是其主要有毒成分?？囫R豆素是一種大 極性的吲哚単-西啶類生物堿，對a-甘露糖苷酶具有特殊的抑制作用。近年來苦馬 豆素作為一種嶄新的抗癌藥物得到了國內(nèi)外研究人員的關注，其特點在于既具有 直接殺傷腫瘤細胞的作用，又具有免疫調(diào)節(jié)的雙向作用。
當前分離提取苦馬豆素的主要來源有兩種， 一是從植物中提??；另一種是從 豆類絲核菌(朋/zocmw/a /egww!'m'co/a)中提純。人工合成其成本很高。國外分 離提純苦馬豆素的主要技術工藝是先將植物樣品或者菌絲體在有機溶劑中浸提， 將浸提物濃縮后進過陽離子交換樹脂柱和瓊脂糖凝膠柱分離，最后重結品得到苦 馬豆素，其不足是提取工藝復雜，成本高，不能工業(yè)化大量生產(chǎn)。國內(nèi)苦馬豆素 主要來源于從植物中提取，同樣存在上述問題。本發(fā)明的優(yōu)點在于提取路線工藝 簡單，成本低廉，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述現(xiàn)有技術中存在的缺陷和不足，本發(fā)明的目的在于提供一種從甘 肅棘豆中分離提純苦馬豆素的工藝方法。
本發(fā)明以我國西北草原上豐富的植物資源一甘肅棘豆為原料，根據(jù)苦馬豆素 的基本理化性質(zhì)，采用逆流萃取的方法在酸性條件下用氯仿脫脂除雜，然后在堿 性條件下用正丁醇逆流萃取得到總生物堿粗品。將所得總生物堿粗品經(jīng)硅膠柱層 析分離得到苦馬豆素粗品，然后重結晶獲得苦馬豆素純品。
本發(fā)明采用有機溶劑浸提，逆流萃取、硅膠柱色譜分離、重結晶等技術'最 后得到苦馬豆素。
本發(fā)明的提純工藝分四步完成，提取成本低，工藝簡單，產(chǎn)品純度高，整個 提取工藝適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
一種從甘肅棘豆中分離提取苦馬豆素的工藝方法，其特征在于該方法依次 包括如下步驟
A、 將甘肅棘豆粉碎，用工業(yè)乙醇熱提2-5次，過濾后棄去料渣，將提取液 減壓濃縮得甘肅棘豆總浸膏；
B、 將得到的總浸膏，加入1 3倍量的水溶解，用酸溶液調(diào)pH值至3-5， 在酸性條件下用氯仿逆流萃取除去其中的脂溶性雜質(zhì)，然后用氫氧化鈉溶液調(diào) pH值至8-10，用正丁醇逆流萃取，收集正丁醇萃取液，減壓回收正丁醇得總生 物堿粗品
C、 將總生物堿粗品用硅膠柱色譜分離，干法上樣，氯仿一甲醇一氨水梯度 洗脫，薄層色譜檢測，合并苦馬豆素部分，自然揮發(fā)溶劑得到白色粉末狀苦馬豆 素；
D、 將得到的白色粉末狀苦馬豆素，采用甲醇溶解，再向其中加入氯仿重結晶 獲得白色針狀結晶的苦馬豆素純品。
在A步驟中，工業(yè)乙醇與甘肅棘豆的質(zhì)量比為1-3: 1。
本發(fā)明苦馬豆素的提取率為20 30pg/g，與已有技術相比減少了苦馬豆素提 取的中間環(huán)節(jié)，降低了生產(chǎn)成本，適合工業(yè)生產(chǎn)應用，進一步促進苦馬豆素作為 抗腫瘤藥物及免疫增強劑等產(chǎn)品開發(fā)的產(chǎn)業(yè)化。
具體實施例方式
實施例1:
取甘肅棘豆千草lkg，用10升75%工業(yè)乙醇熱提三次，每次兩小時，過濾 后棄去料渣，將提取液減壓濃縮得甘肅棘豆總浸膏180g,出膏率18%。在浸膏 中加入200mL水反復攪拌溶解，用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH至4，用氯仿逆流萃取除去浸 膏中的葉綠素等脂溶性雜質(zhì)。棄去氯仿，水相用NaOH溶液調(diào)整pH至9，用正 丁醇逆流萃取提取其中的總生物堿。減壓回收正丁醇得到11.5g總生物堿粗品， 出堿率1.15%。將生物堿粗品用甲醇溶解，100 200目的硅膠拌樣，用200 300
目的硅膠千法上柱，氯仿一甲醇一氨水梯度洗脫，薄層色譜檢測，合并苦馬豆素 部分，自然揮發(fā)溶劑得到白色粉末狀苦馬豆素0.15g。將其溶于lmL甲醇中，待 甲醇揮發(fā)至0.5ml后向其中加入5mL氯仿重結晶，得到白色針狀結晶23.1mg， 即為苦馬豆素，提取率0.0023%。
權利要求
1、一種從甘肅棘豆中分離提取苦馬豆素的工藝方法，其特征在于該方法依次包括如下步驟A、將甘肅棘豆粉碎，用工業(yè)乙醇熱提2-5次，過濾后棄去料渣，將提取液減壓濃縮得甘肅棘豆總浸膏；B、將得到的總浸膏，加入1～3倍量的水溶解，用酸溶液調(diào)pH值至3-5，在酸性條件下用氯仿逆流萃取除去其中的脂溶性雜質(zhì)，然后用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至8-10，用正丁醇逆流萃取，收集正丁醇萃取液，減壓回收正丁醇得總生物堿粗品；C、將總生物堿粗品用硅膠柱色譜分離，干法上樣，氯仿-甲醇-氨水梯度洗脫，薄層色譜檢測，合并苦馬豆素部分，自然揮發(fā)溶劑得到白色粉末狀苦馬豆素；D、將得到的白色粉末狀苦馬豆素，采用甲醇溶解，再向其中加入氯仿重結晶獲得白色針狀結晶的苦馬豆素純品。
2. 根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于在A步驟中，工業(yè)乙醇與甘肅 棘豆的質(zhì)量比為l-3: 1。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從甘肅棘豆中分離提取苦馬豆素的工藝方法。本發(fā)明采用逆流萃取的方法在酸性條件下用氯仿脫脂除雜，然后在堿性條件下用正丁醇逆流萃取得到總生物堿粗品。將所得總生物堿粗品經(jīng)硅膠柱層析分離得到苦馬豆素粗品，然后重結晶獲得苦馬豆素純品。本發(fā)明的提純工藝分四步完成，提取成本低，工藝簡單，產(chǎn)品純度高，整個提取工藝適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07D463/00GK101177426SQ200610104918
公開日2008年5月14日 申請日期2006年11月11日 優(yōu)先權日2006年11月11日
發(fā)明者邸多隆, 黃新異 申請人:中國科學院蘭州化學物理研究所