專利名稱：六元雜環(huán)化合物,其制備方法及其醫(yī)藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通式I六元雜環(huán)類化合物，其制備方法，含上述化合 物的藥物組合物，以及該類化合物用于制備治療和/或預(yù)防肥胖癥、非 胰島素依賴型糖尿病及并發(fā)癥、冠心病、高血壓、高血脂等肥胖并發(fā) 癥以及胂瘤及其并發(fā)癥的藥物的用途。
背景技術(shù)：
肥胖癥是受生物行為和環(huán)境等因素共同影響的一種多因素的慢性 疾病。當(dāng)人體進食的熱量多于消耗的熱量時，多余的熱量以脂肪形式
儲存于體內(nèi)，因體脂增加使體重指數(shù)(BMI)增大。BMI的定義為BMI-體重(kg) /身高2 (m2) ， BMI大于24者為肥胖癥患者。隨著經(jīng)濟的發(fā)展， 人們生活水平的提高，近年來全世界肥胖癥患者正以每五年增長一倍 的趨勢日益增多，目前全球至少有肥胖癥患者2. 5億，約占人口總數(shù) 的7% (Claude B. ， The New England Journal Of Medicine, 2000， 343: 1888-1889)。肥胖癥不僅影響美觀，還可以引發(fā)冠心病、高血壓、 高血脂、非胰島素依賴型糖尿病和某些惡性腫瘤(Must A.， etal.， J. Am. Med. Assos， 1999， 282:1523 )。因此對肥胖癥的預(yù)防和治療具 有十分重要的臨床意義。
目前治療肥胖癥的藥物按其作用機制主要分為三大類。第一類是 食欲抑制劑，代表藥物是西布曲明(Sibutramine)，它是中樞性食物抑 制劑，抑制去甲腎上腺素和5-羥色胺的再攝取，使人產(chǎn)生飽脹感，降 低食欲，減少進食。其常見的副作用有口干、惡心、厭食、腹痛、便 秘、失眠等，且有輕度的增加血壓和心率作用。第二類是消化吸收阻 滯劑，代表藥物是奧利司他(01istat)，它通過抑制胰脂肪酶，阻斷脂 肪被分解為小分子的甘油三脂。其常見的副作用包括引起病人胃脎功能紊亂、降低病人對脂溶性維生素的吸收。第三類是代謝刺激劑，如
甲狀腺素、β 3受體激動劑等(周予昭，黃仲義，中國藥房，2000， 11 (4), 168-169 )。
最近的研究表明，以脂肪酸合成酶(Fatty Acid Synthase, FAS) 為靶標(biāo)，通過抑制脂肪酸的合成和抑制食欲可以達(dá)到減肥的目的，同 時還可以改善非胰導(dǎo)素依賴的糖尿病，降低高血壓，冠狀栓塞及其它 肥胖并發(fā)癥的發(fā)病率(Loftus TM， Jaworsky DE， Frehywot GL， Towns end CA， Romiett GV， Lane MD， Kuhajda FP， Reduced food intake and body weight in mice treated with fatty acid synthase inhibitors, Science, 2000， 288: 2379-81)。對脂肪酸合成酶特異 性抑制劑的作用機理研究表明，脂肪酸合成酶抑制劑可減少脂肪酸的 合成，由于脂肪酸合成受阻，導(dǎo)致其底物丙二酰輔酶A(malonyl-CoA) 濃度升高，丙二酰輔酶A可以直接作用于下丘腦的進食中樞，抑制促 進攝食的神經(jīng)肽Y(NPY)的分泌，從而導(dǎo)致進食抑制。另一方面，在外 周組織如肝臟和脂肪組織中，脂肪酸合成酶抑制劑可以提高肉毒堿軟 脂酰轉(zhuǎn)移酶-l (0-carnitine palmitoyltransferase-l， CPT-l)的活 性，從而增強脂肪酸的氧化和能量的消耗。藥理學(xué)實驗顯示，脂肪酸 合成酶特異性抑制刑的毒副作用較小，并且對食欲的抑制可產(chǎn)生自身 的反饋調(diào)節(jié)(Thupari JN， Landree LE， Ronnett GV， Kuhajda FP， C75 increases peripheral energy utilization and fatty acid oxidation in diet-induced obesity, Proc Natl Acad Sci， USA, 2002， 99: 9498-502)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是尋找并開發(fā)作用于脂肪酸合成酶(FAS)的小分子 抑制劑，通過其抑制脂肪酸合成酶， 一方面減少脂肪酸的合成和富集； 一方面可增加底物丙二酖輔酶A的濃度，直接作用于下丘腦的進食中 樞，抑制進食，通過代償性消耗體內(nèi)過多的脂肪從而達(dá)到減肥的目的。 同時還可改善非胰島素依賴的糖尿病，降低高血壓、冠狀栓塞及其它肥胖并發(fā)癥的發(fā)病率.由于FAS酶在某些腫瘤組織，如結(jié)腸癌、前列 腺癌、卵巢癌、乳腺癌等高表達(dá)，因此，本發(fā)明還可進一步作為抗癌 藥物。另外本發(fā)明化合物應(yīng)用于家畜、家禽的飼養(yǎng)，可以減少其肉類 中的脂肪含量。
本發(fā)明已經(jīng)發(fā)現(xiàn)通式I的化合物可以用于治療或預(yù)防肥胖及其并 發(fā)癥以及腫瘤。
因此， 一方面，本發(fā)明提供通式I化合物，或其藥學(xué)上可接受的 鹽，溶劑化物或其幾何異構(gòu)體，<formula>see original document page 10</formula> I其中
R1為C3 ~ C18直鏈或支鏈烷基，C3 ~ ds直鏈或支鏈烯基，其鏈 上選擇性被鹵素、硝基、羥基、羥甲基、-CN、三氟甲基、三氟甲氧基、 苯氧基、芐氧基、0或S，
R2為H、 d ~ C6的直鏈或支鏈的烷基、爺基、三氟甲基，
R3為H、甲基，
X為氧或疏原子；
A為5 ~ 6元的芳香碳環(huán)或雜環(huán)取代基，其中，芳香破環(huán)含6-14 個碳原子，如苯基，節(jié)基或萘基，雜環(huán)中包括l ~ 4個選自下面的雜 原子0， S， N，如吡咯，吡啶，哌啶，吡咯烷，或嗎啉；芳香碳環(huán)或 雜環(huán)上可以無取代，也可以被l ~ 5個選自下面的取代基取代面素， 硝基，羥基，羥甲基，三氟甲基，三氟曱氣基，苯氣基，芐氣基，CN, 羧基或氨基；
另一方面，本發(fā)明提供包含本發(fā)明化合物的藥用組合物，其包括 至少一種通式I化合物，其藥學(xué)上可接受的鹽，溶劑化物或其幾何異 構(gòu)體，以及藥用栽體或賦形劑。
其中:
另一方面，本發(fā)明還涉及制備通式I和/或通式II化合物或者其 藥用鹽或其溶劑化物的合成方法.
另一方面，本發(fā)明還涉及式I化合物，其藥學(xué)上可接受的鹽，溶
各種疾病的藥物的用途。
在又一方面，本發(fā)明涉及的式I化合物對有高度的脂肪酸合成酶 表達(dá)的某些腫瘤細(xì)胞有一定的抑制或細(xì)胞毒作用，因此，式I化合物 以及其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑化物可用于如結(jié)腸癌、前列腺癌、卵 巢癌、乳腺癌等腫瘤或其癥狀的緩解和治療。
本發(fā)明所公開的化合物可作用的脂肪酸合成酶不局限于人體，還 包括動物體內(nèi)的脂肪酸合成酶，它可導(dǎo)致雞、鴨等家禽和豬等家畜的 脂肪水平降低，因而本發(fā)明公開的化合物及含有該化合物的組合物可 以用于飼養(yǎng)低脂高瘦肉型的家禽和家畜。
更具體地，本發(fā)明優(yōu)選的化合物為通式II所代表的結(jié)構(gòu)，其消旋 體或旋光異構(gòu)體，其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或其幾何異構(gòu)體，<formula>see original document page 11</formula>其中
R1為C3 ～C18直鏈或支鏈烷基，C3 ～C18直鏈或支鏈烯基，
R3為H、甲基，
A為苯基，1、 3-二甲基吡咯基， X選自0， S原子。
根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語"C3-C18直鏈或支鏈烷基"優(yōu)選C6-Cu直鏈或支 鏈烷基，如己基，辛基，壬基，癸基，十一烷基等；術(shù)語"C6~C11“直鏈 或支鏈烯基"優(yōu)選C1～C6直鏈或支鏈烯基，如己烯基，辛烯基，壬烯基， 癸烯基，十一垸烯基等。術(shù)語"幾何異構(gòu)體"指順式或反式異構(gòu)體，
本發(fā)明特別優(yōu)選的化合物包括
反式-6-正己基-1， 3, 7-三甲基-4-氧代-1， 4， 6， 7-四氫吡喃[4, 3-b ]吡咯-7-羧酸；
反式-6-正庚基-l， 3, 7-三甲基-4-氧代-l， 4， 6， 7-四氫吡喃[4， 3-b ]吡咯-7-羧酸；
反式-6-正辛基-1， 3， 7-三甲基-4-氧代-l， 4， 6， 7-四氫吡喃[4， 3-b ]吡咯-7-羧酸；
反式-6-正壬基-1, 3， 7-J 3-b ]吡咯-7-羧酸；
反式-6-正癸基-1， 3， 7-J 3-b ]吡咯-7-羧酸；
反式-6-正十一烷基-1, 3 喃[4， 3-b]吡咯-7-羧酸；
順式-6-正己基-1， 3， 7-j 3-b ]吡咯-7-羧酸；
順式-6-正庚基-1， 3， 7-J 3-b ]吡咯-7-羧酸；
順式-6-正辛基-1， 3, 7-三甲基-4-氧代-l， 4， 6, 7-四氫吡喃[4， 3-b ]吡咯-7-羧酸；
順式-6-正壬基-l， 3， 7-三甲基-4-氧代-l， 4, 6， 7-四氫吡響[4， 3-b ]吡咯-7-羧酸；
順式-6-正癸基-l， 3， 7-三甲基-4-氧代-l， 4， 6， 7-四氬吡喃[4， 3-b ]吡咯-7-羧酸；
順式-6-正十一烷基-l， 3， 7-三甲基-4-氧代-l， 4， 6， 7-四氬吡 喃[4， 3-b]吡咯-7-羧酸；
反式-3-正己基-1-氣代_異苯并四氫吡喃-4-羧酸；
反式-3-正庚基-l-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸；
反式-3-正辛基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸；
反式-3-正壬基-l-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸；
三甲基-4-氧代-1， 4， 6， 7-四氫吡喃[4， ￡甲基-4-氧代-1， 4， 6， 7-四氫吡喃[4， ，7-三甲基-4-氧代-1， 4， 6， 7-四氬吡 L甲基-4-氧代-1， 4， 6， 7-四氫吡喃[4, 1甲基-4-氧代-1, 4， 6， 7-四氫吡喃[4，
反式-3-正癸基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 反式-3-正十一烷基-l-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3_正己基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正庚基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正辛基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正壬基-l-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正癸基-l-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正十一烷基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 反式-3-正己基-4-曱基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 反式-3-正庚基_4-甲基-l-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 反式-3-正辛基-4-甲基-l-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 反式-3-正壬基_4-甲基-l-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 反式-3-正癸基-4-甲基-l-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 反式-3-正十一烷基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸; 順式-3-正己基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正庚基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正辛基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正壬基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正癸基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正十一烷基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氬吡喃-4-羧酸; 反式-3-正己基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫噻喃-4-羧酸； 反式-3-正庚基-4-甲基-l-氧代-異苯并四氫噻喃-4-羧酸； 反式-3-正辛基-4-甲基-l-氧代-異苯并四氫噻喃-4-羧酸； 反式-3-正壬基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫噻喃-4-羧酸； 反式-3-正癸基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫噻喃-4-羧酸； 反式-3-正十一烷基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氬噻喃-4-羧酸; 順式-3-正己基-4-甲基-l-氧代-異苯并四氫噻喃-4-羧酸； 順式-3-正庚基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫噻喃-4-羧酸； 順式-3-正辛基-4-甲基-l-氧代-異苯并四氬噻喃-4-羧酸；
順式-3-正壬基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫噻喃-4-羧酸； 順式-3-正癸基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫噻喃-4-羧酸； 順式-3-正十一烷基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫噻喃-4-羧酸； 以及其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。
另一方面，本發(fā)明還涉及通式I和/或通式II化合物的新的合成 方法，按照下述的合成方案，由已知的起始原料可方便地制備出本發(fā) 明的化合物
1)式III化合物與甲醇在濃硫酸催化下反應(yīng)，
m
得到式IV化合物，
,COOCH3
,COOCH， IV
其中A的定義同權(quán)利要求1， 2)將式IV化合物在堿(如氫化納(NaH)、二異丙基氨基鋰(LDA)) 存在下與碘甲烷(CIU)反應(yīng)，得式V化合物。
其中A的定義同權(quán)利要求1,
3)將式IV化合物與NaH、 R1CH0反應(yīng)得到式VI化合物:
,COOCH，
A
COOCH，
VI
其中，A為苯基、Rl的定義同權(quán)利要求l， 4)將式V化合物與LDA、 R1CH0反應(yīng)得到式VII化合物(順式與 反式)，<formula>see original document page 15</formula>VII
其中，A、 Rl的定義同權(quán)利要求l; R3為甲基，X為氧原子， 5 )將式IV化合物與二異丙基氨基鋰(LDA)、三異丙氧基氯化鈦 ((i-Pr0) 3TiCl ) 、 R1CH0反應(yīng)，得到式VII化合物(順式與反式)，
<formula>see original document page 15</formula>VII
其中，A為苯基、X為氧原子，R3為H, Rl的定義同權(quán)利要求l, 6)將式VI化合物與硫代乙酸、鹽酸及三氟醋酸反應(yīng)得到式VII 化合物(順式與反式)，
<formula>see original document page 15</formula>VII
其中，A為苯基、X為硫原子，R3為H， Rl的定義同權(quán)利要求l， 7 )將式VII化合物與氫氧化鋰水溶液反應(yīng)得到通式II的化合物，
<formula>see original document page 15</formula>II
其中，A、 X、 Rl、 R3的定義同權(quán)利要求l， 8)將通式II化合物與烷基或烯基醇R20H進行酯化反應(yīng)，分離純 化得到通式I的化合物，<formula>see original document page 16</formula>
其中，A、 X、 Rl、 R3的定義同權(quán)利要求l，
通式I和通式II化合物的合成反應(yīng)方案詳見下列反應(yīng)路線
反應(yīng)步驟一<formula>see original document page 16</formula>
將原料二酸III (0. lniol)溶于200ml曱醇，加入催化量的濃疏 酸，回流過夜。濃縮，蒸去大部分甲醇，在殘留物中加入約200ml乙 酸乙酯，分別用水、飽和NaHC0r溶液、飽和食鹽水洗滌至中性，用無 水Na2S04干燥，濃縮得為油裝化合物IV，產(chǎn)率為80 - 90%。
其中A的定義同權(quán)利要求1。
反應(yīng)步驟二
<formula>see original document page 16</formula>
N2存在下，將化合物IV (46咖ol)溶于200ml無水四氫呋喃中， 冷卻至-78TC，緩慢滴入48ml的LDA溶液(2M、 96m邁o1)，保持-78t:反 應(yīng)2小時。將捵甲烷(6. 82g、 48nuno1 )溶于20ml無水THF和20ml 的無水DMF，將此溶液滴入上述反應(yīng)液，保持-78"C反應(yīng)1小時，緩慢 升溫至-601C繼續(xù)反應(yīng)1小時，溶液變澄清，停止反應(yīng)。將反應(yīng)液傾入 H2S(h液(6N， 40ml)中，用乙酸乙酯(300ml/3次)萃取，合并有機層 并用飽和食鹽水洗滌3次，用無水MgS04千燥，濃縮得棕色液體。柱 層析(石油醚乙酸乙酯冰醋酸=10: 3: 0.07)。即得到化合物V (油狀物產(chǎn)率為85 - 95%)。
其中A的定義同權(quán)利要求1。反應(yīng)步驟三<formula>see original document page 17</formula>
N2存在下，將化合物IV ( 0. 02mol)溶于30ml干燥的THF溶液， 于OX:下緩慢滴入NaH (60°%， 1. Og， 0. 025咖1 )于200ml無水THF的 混懸液，保持OX:反應(yīng)2hr，反應(yīng)液變?yōu)槿闈嵋骸⑷㏑lCH0(20mo1 ) 溶于20ml無水THF，滴入上述反應(yīng)液，保持OX:繼續(xù)反應(yīng)5小時。反 應(yīng)結(jié)束后，用6M的鹽酸20邁1終止反應(yīng)。用乙酸乙酯100ml/3次萃取， 合并有機層并用飽和食鹽水洗滌3次，用無水MgS04干燥，濃縮得油 狀物VI，產(chǎn)率約90%。
其中，A為苯基、Rl的定義同權(quán)利要求l。
反應(yīng)步驟四
<formula>see original document page 17</formula>
N2存在下，將化合物V(10mmol)溶于200ml無水四氫吹喃中，冷 卻至-78"C，緩慢滴入5.5 ml LDA溶液(2M， 11mol)，保持-78匸反 應(yīng)2小時后，將搭R1CH0 (llmmol)溶于20ml無水THF，滴入上述反 應(yīng)液，溶液變?yōu)闇\黃色，保持-78X:反應(yīng)2小時后緩慢升溫至室溫反應(yīng) 4小時。用6N的H2SO4液(20nil)中止反應(yīng)。用乙酸乙酯(100ml/3 )次 萃取，合并有機層并用飽和食鹽水洗滌3次，用無水MgS04干燥，濃 縮得棕色液體。柱層析(石油醚乙酸乙酯-10: 2)，分別得到化合 物VII的順式及反式產(chǎn)物，皆為油狀物。
其中，A、 Rl的定義同權(quán)利要求l; R3為甲基，X為氣原子。
反應(yīng)步驟五<formula>see original document page 17</formula>
N2存在下，將化合物IV(10咖ol)溶于200ml無水四氫呋喃中，冷 卻至-78"C，緩慢滴入5 ml LDA溶液(2M， 10咖ol)，保持-78TC反應(yīng) 1小時后，再滴入12 ml的(i-PrO) 3TiCl溶液(1M， 12咖ol)，繼 續(xù)反應(yīng)1小時。將醛R1CH0 ( lO咖ol)溶于15ml無水THF，滴入上述 反應(yīng)液，保持-78TC反應(yīng)2小時后緩慢升溫至OTC反應(yīng)過夜。用6N的 H2SO4液(20ml)中止反應(yīng)。用乙酸乙酯(lOOml/3)次萃取，合并有機 層并用飽和食鹽水洗滌3次，用無水MgS04干燥，濃縮，柱層析(石 油醚乙酸乙酯-10: 2)，分別得到化合物VII的順式及反式異構(gòu)體， 皆為油狀物。
其中，A為苯基、X為氧原子，R3為H， Rl的定義同權(quán)利要求l。
反應(yīng)步驟六:
將化合物VI ( lOmmol )與硫代乙酸10ml (大過量)及無水吡啶5滴共于 85-90X:反應(yīng)3天，加入100ml乙酸乙酯稀釋，用飽和的NaHC03水溶 液中洗滌至無臭味，乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥，濃縮得黑色油狀 物。在N2存在下，加入6M的HC1約40ml回流6-8小時，冷卻，用乙 酸乙酯提取水層，合并有機層并用飽和食鹽水洗至中性，用無水硫酸 鎂干燥，濃縮后得黑色油狀液，加TFA 10ml回流2小時，蒸干TFA， 并加氯仿20ml/3次，帶去殘留的水及溶劑，得到的黑色油狀液體，柱 層析(石油瞇乙酸乙酯-10: l)得化合物VII的順式及反式異構(gòu)體。
其中，A為苯基、X為石危原子，R3為H， Rl的定義同權(quán)利要求l。
反應(yīng)步驟七<formula>see original document page 19</formula>分別將化合物VII的順式及反式異構(gòu)體溶于適量甲醇中，加等摩 爾量的IN的LiOH水溶液，室溫攪拌過夜。反應(yīng)結(jié)束后用6N的HC1 水溶液酸化，用乙酸乙酯萃取(80m^3次)，有機層用飽和食鹽水洗 滌，濃縮，柱層析(石油醚乙酸乙酯水醋酸=10: 1: 0. 05)。分 別得到相應(yīng)的通式II化合物的順式及反式異構(gòu)體。
其中，A、 X、 Rl、 R3的定義同權(quán)利要求l。
反應(yīng)步驟八<formula>see original document page 19</formula>
將通式II的化合物在二氯亞砜、DCC、EDC等催化劑的作用下， 與烷基或烯基醇R20H進行酯化反應(yīng)，即得到相應(yīng)的通式I的化合物。
其中，A、 X、 Rl、 R3的定義同權(quán)利要求l。
本發(fā)明化合物也可以以其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物的形式使 用。式I或式II化合物的生理學(xué)上可接受的鹽包括由藥學(xué)上可接受的 無機堿或有機堿形成的常規(guī)的鹽以及季銨的酸加成鹽。合適的堿鹽的 更具體的例子包括鈉、鋰、鉀、鎂、鋁、鈣、鋅、N，N， -二芐基乙二 胺、氯代普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺和普魯 卡因鹽。此后涉及到本發(fā)明的化合物時，包括式I或式II化合物及其 藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑化物。
本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物的前藥，該前藥是指一經(jīng)給藥，即通 過代謝過程進行化學(xué)轉(zhuǎn)化，之后變成具有活性的藥物。通常，這類前 藥是本發(fā)明化合物的功能性衍生物，其在體內(nèi).容易轉(zhuǎn)化成所需的式 (I)的化合物，例如，在"Design Of Prodrugs" ， H Bund Saard， Elsevier編輯，1985中描述了選擇和制備適宜前藥衍生物的常規(guī)方法。
本發(fā)明也包括本發(fā)明化合物的活性代謝物，其是指本發(fā)明所定義 的化合物在體內(nèi)代謝后仍具有本發(fā)明所述活性的化合物。
本發(fā)明的另一個方面涉及藥物組合物，其含有本發(fā)明化合物的至 少一種藥學(xué)上可接受的栽體，其可用于體內(nèi)治療并具有生物相容性。 所述藥物組合物可以根據(jù)不同給藥途徑而制備成各種形式，
本發(fā)明的藥物組合物包括有效刑量的本發(fā)明式I化合物或其可藥 用鹽或水合物或其幾何異構(gòu)體和一種或多種適宜的可藥用栽體。這里
的藥用栽體包括但不限于離子交換劑，氧化鋁，硬脂酸鋁，卵磷脂， 血清蛋白如人血白蛋白，緩沖物質(zhì)如磷酸鹽，甘油，山梨酸，山梨酸 鉀，飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，鹽或電解質(zhì)，如硫酸 魚精蛋白，磷酸氬二鈉，磷酸氫鉀，氯化鈉，鋅鹽，膠態(tài)氣化硅，三 硅酸鎂，聚乙烯吡咯烷酮，纖維素物質(zhì)，聚乙二醇，羧甲基纖維素鈉， 聚丙烯酸酯，蜂蠟，羊毛脂。
本發(fā)明化合物是一類脂肪酸合成酶抑制劑，與美國專利 US5981575中提及的化合物C75相比，本發(fā)明化合物不僅具有比較好 的脂肪酸合成酶的抑制活性且有很好的穩(wěn)定性，特別適合工業(yè)化生產(chǎn) 和長期儲存。本發(fā)明的化合物可以用作但不局限于治療肥胖癥、II型 糖尿病及其并發(fā)癥、冠心病、高血壓以及高血脂等肥胖并發(fā)癥。
本發(fā)明也可以擴展應(yīng)用于制備抗腫瘤及其并發(fā)癥藥物的用途，由 于某些腫瘤細(xì)胞有高度的FAS表達(dá)，本發(fā)明涉及的化合物對某些腫瘤 細(xì)胞有一定的抑制或細(xì)胞毒作用，以此，式I和/或式II化合物或其 藥用鹽或其溶劑化物可用于如結(jié)腸癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌等 腫瘤或其癥狀的緩解或治療。另外含有本發(fā)明公開的化合物及含有該 化合物的組合物可以用于降低雞、鴨等家禽和豬等家畜的脂肪水平， 祠養(yǎng)低脂高瘦肉型的家禽和家畜。含有本發(fā)明的化合物的用藥方案可 以根據(jù)所涉及的用途進行變化。
本發(fā)明化合物的藥物組合物可以以下面的任意方式施用口服， 噴霧吸入，直腸用藥，鼻腔用藥，頰部用藥，局部用藥，非腸道用藥， 如皮下、靜脈、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、胸骨內(nèi)和煩內(nèi)注射或輸入，或借助一種外植儲器用藥。其中優(yōu)選口服、腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)給 藥方式。
當(dāng)口服用藥時，本發(fā)明化合物可制成任意口服可接受的制劑形式， 包括但不限于片劑、膠囊、水溶液或水懸浮液。其中，片劑使用的栽 體一般包括乳糖和玉米淀粉，另外也可加入潤滑劑如硬脂酸鎂。膠囊 制劑使用的稀釋劑 一般包括乳糖和干燥玉米淀粉。水懸浮液制劑則通 常是將活性成分與適宜的乳化劑和懸浮劑混合使用。如果需要，以上 口服制劑形式中還可加入一些甜味劑、芳香劑或著色劑。
當(dāng)局部用藥時，特別是治療局部外敷容易達(dá)到的患面或器官，如 眼睛、皮膚或下腸道神經(jīng)性疾病時，可根據(jù)不同的患面或器官將本發(fā)明化合物制成不同的局部用藥制劑形式，具體說明如下
當(dāng)眼部局部施用時，本發(fā)明化合物可配制成一種微粉化懸浮液或 溶液的制劑形式，所使用栽體為等滲的一定pH的無菌鹽水，其中可加 入也可不加防腐劑如氯化節(jié)基烷醇鹽。對于眼用，也可將化合物制成 骨劑形式如凡士林骨。
當(dāng)皮膚局部施用時，本發(fā)明化合物可制成適當(dāng)?shù)能浌恰⑾磩┗蛩?劑制劑形式，其中將活性成分懸浮或溶解于一種或多種栽體中。軟奮 制劑可使用的載體包括但不限于礦物油，液體凡士林，白凡士林， 丙二醇，聚氧化乙烯，聚氧化丙烯，乳化蠟和水；洗劑或霜劑可使用 的載體包括但不限于礦物油，脫水山梨糖醇單硬脂酸酯，吐溫60， 十六烷酯蠟，十六碳烯芳醇，2-辛基十二烷醇，節(jié)醇和水。
本發(fā)明化合物還可以無菌注射制劑形式用藥，包括無菌注射水或 油懸浮液或無菌注射溶液。其中，可使用的栽體和溶劑包括水、林格 氏溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，滅菌的非揮發(fā)油也可用作溶劑或懸 浮介質(zhì)，如單甘油酯或二甘油酯。
另外需要指出，本發(fā)明化合物的使用劑量和使用方法取決于諸多 因素，包括患者的年齡、體重、性別、自然健康狀況、營養(yǎng)狀況、化 合物的活性強度、服用時間、代謝速率、病癥的嚴(yán)重程度以及診治醫(yī) 師的主觀判斷。優(yōu)選的使用劑量介于0. 01 100mg/kg體重/天，其中最優(yōu)劑量在5mg/kg-10mg/kg體重/天。
具體實施例方式
本發(fā)明用下述的中間體和實施例進一步說明，這些中間體和實施 例不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。
化合物熔點由YRT-3型熔點儀測定，溫度未經(jīng)校正。NMR光謙 由Bruker ARX 400型核磁儀測定。FAB質(zhì)譜由Zabspect高分辨磁質(zhì) 謙儀測定。
實施例
實施例1: 3-己基-1-氧-異苯并四氬吡喃-4-羧酸(化合物PH6) 的合成
制備l: 2-曱氧羰基亞甲基-苯甲酸甲酯的合成
<formula>see original document page 22</formula>
將原料2-羧基亞甲基-苯甲酸18g ( 0. lmol)溶于200ml甲醇，加 入催化量的濃硫酸，回流過夜。濃縮，蒸去大部分甲醇，在殘留物中 加入約200ml乙酸乙酯，分別用水、飽和NaHC03溶液、飽和食鹽水洗 滌至中性，用無水Na2S04干燥，濃縮得標(biāo)題化合物為油裝物18. 5g。 產(chǎn)率為89%。
制備2: 3-己基-l-氣-異苯并四氫吡喃-4-羧酸(化合物PH6)的
合成
<formula>see original document page 22</formula>
N2存在下，將2. 08g 2-甲氧基羰基亞甲基-苯甲酸甲酯(10咖o1) 溶于200ml無水四氫呋喃中，冷卻至-78X:，緩慢滴入5 ml LDA溶液 (2M， 10咖ol)，保持-78TC反應(yīng)1小時后，再滴入12 ml的(i-PrO) 3TiCl溶液(1M， 12 m邁ol )，繼續(xù)反應(yīng)1小時。將正庚醛(1.14g、 lOmmol) 溶于15ml無水THF，滴入上述反應(yīng)液，溶液變?yōu)闇\黃色，保持-78X:
反應(yīng)2小時后緩慢升溫至0℃反應(yīng)過夜。用6N的H2S04液(20ml)中止 反應(yīng)。用乙酸乙酯(100ml/3)次萃取，合并有機層并用飽和食鹽水洗 滌3次，用無水MgS04千燥，濃縮得棕色液體約4. Og。柱層析(石油 醚乙酸乙酯-10: 2)，得順式化合物6a ( 650mg)及反式化合物 6b(638mg)，皆為油狀物。分別將化合物6a/6b溶于適量甲醇中，加等 摩爾量的1N的LiOH水溶液，室溫攪拌1小時，反應(yīng)結(jié)束。用6N的 HC1水溶液酸化，用乙酸乙酯萃取(80mh3次)，有機層用飽和食鹽 水洗滌，濃縮，柱層析(石油醚乙酸乙酯水醋酸-10: 1: 0.05)。 分別得到順式化合物化合物(PH6A)和反式化合物(PH6B)。
PH6A: 285mg產(chǎn)率為<formula>see original document page 23</formula>
實施例2: 3_庚基-1-氧-異苯并四氫吡喃-4-羧酸(化合物PH7 ) 的合成
采用實施例l的制備方法，只是其中的正庚醛換為正辛醛，得到 標(biāo)題化合物PH7A (順式)及PH7B (反式)。
<formula>see original document page 23</formula>
1H， J-3.08Hz); 1.97(m， 1H); 1.82(m， 1H); 1.62(m， 1H); 1.48(m， 1H); 1.2-1. 4 (m, 8H); 0. 88(t, 3H， J-6. 88Hz)。
PH7B: 604ing產(chǎn)率為20.8% mp 79-82.5"C FABMS[M+l] + : m/z-291. 3
^ NMR(400MHz， CD3C1) 5-8.15(d， 1H， J-7. 88Hz); 7.62(m， 1H); 7. 50(m， 1H); 7. 32(d， 1H， J=7. 56); 4. 92 (m， 1H); 3. 90(d， 1H， J=5. 32Hz); 1. 78 (m， 1H); 1. 61(m, 1H); 1. l-l. 5(m， 10H); 0. 87(t， 3H， M. 86Hz)。
實施例3: 3-辛基-1-氧-異苯并四氫吡喃-4-羧酸(化合物PH8 ) 的合成
采用實施例l的制備方法，只是其中的正庚醛換為正壬醛，得到 標(biāo)題化合物PH8A (順式)及PH8B (反式)。
PH8A: 540mg產(chǎn)率為17.7%mp 75-77 X:FAB MS[M+l] + : m/z=305.1
^ NMR (400MHz, CD3C1) 5-8.16(d， 1H， J-6. 72Hz); 7.59(m， 1H); 7. 50(m， 1H); 7. 34(d， 1H， J-7. 28Hz); 4. 61 (m， 1H); 3. 84(d， 1H， J=3. 08Hz); 1.98(m， 1H); 1.83(m， 1H); 1.63(m， 1H); 1.49(m， 1H); 1.2-1.4(m， 10H); 0. 88(t， 3H， J=6. 74Hz)。
Anal.Calcd for C18H2404 (304. 39): C, 71.03; H, 7.95
Found: C， 71. 39; H， 8. 21
PH8B: 616mg產(chǎn)率為20.3%叩79-82. 5*C FABMS[M+l+: m/z=305. 3
'H NMR (400MHz ， CD3C1) 5=8.15(d， 1H， J-7. 70Hz); 7.62(m， IH); 7.50(m， 1H); 7. 33(d， 1H， J-7. 88); 4. 92 (m， 1H); 3. 91 (d, 1H， J=5. 32Hz); 1. 78 (m， 1H); 1. 61 (m， 1H); 1. 5 (m， 12H); 0. 87 (t， 3H， J=6. 86Hz)。
Anal.Calcd for C18H2404 (304. 39): C, 71.03; H， 7.95
Found: C， 71. 37; H， 8. 18
實施例4: 3-壬基-l-氧-異苯并四氫吡喃-4-羧酸(化合物PH9 )的合成
采用實施例l的制備方法，只是其中的正庚醛換為正癸醛，得到
標(biāo)題化合物PH9A (順式)及PH9B (反式)。
PH9A: 640mg產(chǎn)率為20.1%mp 75-77"CFAB MSM+l] + : m/z=319.1
'H NMR (400MHz ， CD3C1) 5-8.15(d， 1H， J=7. 56Hz); 7.58(m， IH); 7. 50(m， 1H); 7. 32(d， IH, J=7.56Hz); 4.61(m， 1H); 3. 84(d， 1H， J-3. 08Hz); 1.97(m， IH); 1.83(m， IH); 1.60(m， 1H); 1.45(m， IH); 1.0-1.4(m, 12H); 0. 87(t， 3H， J=6. 74Hz)。
PH9B: 600mg產(chǎn)率為18.8%mp 79-82. 5"CFAB MS[M+1]+: m/z=319. 3
NMR (400MHz, CD3C1) 5=8.15(d， 1H， J-6. 72Hz); 7.62(m， IH); 7. 50(m， 1H); 7. 32(d， 1H， J=7. 92); 4. 92(m， IH); 3. 91 (d， 1H， J=5. 32Hz); 1.80(m， 1H); 1.62(m， 1H); 1.1-1.5(m， 14H); 0. 87(t， 3H, J=6. 86Hz)。
實施例5: 3-癸基-l-氧-異苯并四氫吡喃-4-羧酸(化合物PH10) 的合成
采用實施例l的制備方法，只是其中正庚醛換為正十一醛，得到 標(biāo)題化合物PHIOA (順式)及PHIOB (反式)。
PH10A: 616mg產(chǎn)率為18.5%mp 75-77 X:FABMS[M+l] + : m/z=333.1
NMR (400MHz, CD3C1) 5=8.15(d， IH, J-7. 00Hz); 7.58(m， IH); 7. 50(m， IH); 7. 32(d， 1H， J=7. 56Hz); 4. 61 (m， 1H); 3. 84(d， 1H， J=3. 08Hz); 1.98(m， 1H); 1.83(m， 1H); L60(m, IH); 1.49(m， IH); 1.0-1.4(m， 14H); 0.87(t， 3H， J=6. 86Hz)。
PH10B: 610mg產(chǎn)率為18.6°/。
mp 79-82. 5匸 FABMS[M+l]+: m/z=333. 1
NMR(400MHz， CD3C1) 5=8.11(d， 1H， J-7. 88Hz); 7.59(m， IH); 7.46(m， 1H); 7. 31 (d， 1H， J=6. 44); 4. 90(b， 1H); 3. 85(b，1H， J=5. 32Hz); 1. 75 (m， 1H); 1. 56 (m， 1H); 1. l-l. 5 (m， 16H); 0. 87 (t， 3H， J=6. 72Hz)。
實施例6: 3-十一烷基-l-氧-異苯并四氫吡喃-4-羧酸(化合物 PH11)的合成
采用實施例l的制備方法，只是其中正庚醛換為正十二醛，得到 標(biāo)題化合物PH11A (順式)及PH11B (反式)。
PH11A: 600mg產(chǎn)率為17.3%mp 75-77 X:FABMS[M+l] + : m/z=347.1
H NMR(400MHz， CD3C1) 5=8.16(d, 1H， J=6. 72Hz); 7.59(m， 1H); 7. 50(m， 1H); 7. 34(d， 1H， J=7. 56Hz); 4. 61(m， 1H); 3. 85(d， 1H， J=5.60Hz); 1.99(m， 1H); 1. 83(m， 1H); 1.62(m， 1H); 1.49(m, 1H); 1.0-1.4(m， 16H); 0. 88(t， 3H， J-6. 76Hz)。
PH11B: 596mg產(chǎn)率為17.2%即79-82. 51C FABMS[M+l〗+: m/z=347.1
H NMR (400MHz ， CD3C1) 5=8.15(d, 1H， J=6. 72Hz); 7.62(m， 1H); 7. 50(m， 1H); 7. 32(d， 1H， J=7. 84); 4. 91(b， 1H); 3. 91(b， 1H， J=5. 32Hz); 1. 79 (m, 1H); 1. 62 (m， 1H); 1. 1-1. 5 (m， 18H); 0. 87 (t， 3H， J=6. 72Hz)。
實施例7: 3-己基-4-甲基-l-氧-異苯并四氫吡喃-4-羧酸(MPH6) 的合成
制備l: 2-(l-甲氣羰基-乙基)-苯甲酸甲酯的合成<formula>see original document page 26</formula>
N2存在下，將9. 6g 2-甲氧羰基亞甲基-苯甲酸甲酯(46咖ol)溶于 200ml無水四氫呋喃中，冷卻至-78X:，緩慢滴入48ml的LDA溶液(2M、 96mmol)，保持-78X:反應(yīng)2小時。將碘甲烷(6.82g、 48mmo1)溶于 20ml無水THF和20ml的無水DMF，將此溶液滴入上述反應(yīng)液，溶液變 為淺黃色的懸濁液，保持-78C反應(yīng)1小時，緩慢升溫至-60lC繼續(xù)反應(yīng)l小時，溶液變澄清，停止反應(yīng)。將反應(yīng)液傾入H2S04液(6N， 40ml) 中，用乙酸乙酯(300ml/3次)萃取，合并有機層并用飽和食鹽水洗 滌3次，用無水MgS04干燥，濃縮得棕色液體。柱層析(石油瞇乙 酸乙酯冰醋酸-10: 3: 0.07)。即得到標(biāo)題化合物10. 6g(油狀物產(chǎn) 率為90. 4%)。
制備2: 3-己基-4-甲基-l-氧-異苯并四氫吡喃-4-羧酸(MPH6) 的合成<formula>see original document page 27</formula>
N2存在下，將2. 22g 2-(1_甲氧羰基-乙基)-苯甲酸甲酯(10,ol)溶于 200ml無水四氬呋喃中，冷卻至-781C,緩慢滴入5. 5 ml LDA溶液(2M, 11咖ol)，保持-78X:反應(yīng)2小時后，將正庚醛(1.25g、 ll咖ol)溶 于20ml無水THF,滴入上述反應(yīng)液，溶液變?yōu)闇\黃色，保持-78匸反 應(yīng)2小時后緩慢升溫至室溫反應(yīng)4小時。用6N的H2SO4液(20ml)中止 反應(yīng)。用乙酸乙酯(100ml/3)次萃取，合并有機層并用飽和食鹽水洗 滌3次，用無水MgS04干燥，濃縮得棕色液體。柱層析(石油醚乙 酸乙酯-10: 2)，得化合物6a ( 400mg)及6b(478mg)，皆為油狀物。 分別將化合物6a/6b溶于適量甲醇中，加等摩爾量的1N的LiOH水溶 液，室溫攪拌過夜。反應(yīng)結(jié)束后用6N的HC1水溶液酸化，用乙酸乙酯 萃取(80m"3次)，有機層用飽和食鹽水洗滌，濃縮，柱層析(石油 醚乙酸乙酯冰醋酸=10: 1: 0.05)。分別得到順式化合物MPH6A 和反式化合物MPH6B。
MPH6A: 230mg產(chǎn)率為7.93% mp 76. 5-77. 5匸 FAB MS[M+l]+: m/z=291.1
'H NMR (400MHz ， CD3C1) 5=8.14(d， 1H， J=6. 72Hz); 7'62(m， 1H); 7. 47(m， 1H); 7. 27(d， 1H, J=6. 72Hz); 4. 88(m， 1H); 1.74(m， 2H); 1.1-1.6 (m， 8H); 1.50(s， 3H); 0. 88(t， 3H， J=6. 86Hz)。
Anal.Calcd for C17H2204 (290. 36): C， 70.32; H， 7.64
Found: C， 70. 01; H， 7. 91
MPH6B: 307mg產(chǎn)率為10.59%mp 78—80℃FAB MS[M+l]+: m/z=291.1
1H NMR(400MHz， CD3C1) 5=8.17(d， 1H， J=6. 16Hz); 7. 61 (m， 1H); 7. 35—7. 50 (m， 2H); 4.30(m， 1H); 1.82(m， 2H); 1. 1—1.5 (m， 8H); 1.64(s， 3H); 0. 88(t， 3H， J-6. 72Hz)。
Anal.Calcd for C17H 22 04 (290. 36): C， 70.32; H， 7.64
Found: C， 70. 07; H， 7. 92
實施例8: 3-庚基-4-甲基-l-氧-異苯并四氫吡喃-4-羧酸(MPH7) 的合成
采用實施例7的制備方法，只是其中的正庚醛換為正辛醛，得到 標(biāo)題化合物MPH7A (順式)及MPH7B (反式)。
MPH7A: 270mg產(chǎn)率為8.88%mp 75-77 1CFAB MS[M+l] + : m/z-305.1
1H NMR(400MHz， CD3C1) 5=8. 15(d， 1H， J=7. 7Hz); 7.62(m， 1H); 7.47(m， 1H); 7.28(d， 1H, J-7. 84Hz); 4.88(m， 1H); 1.74(m， 2H); 1.1一1.6(m， 10H); 1.50(s, 3H); 0. 88(t， 3H， J-6. 86Hz)。
MPH7B: 300mg產(chǎn)率為9.87%mp 79—82. FABMS[M+l]+: m/z-305.1
1H NMR(400MHz， CD3C1) 5=8.14(d， 1H， J-7. 88Hz); 7.60(m， 1H); 7.42-7. 47 (m， 2H); 4.29(m， 1H); 1. 80(m， 2H); l.l-l. 5(m， 10H); 1.63(s， 3H); 0. 88(t， 3H, J-6.86Hz)。
實施例9: 3-辛基-4-甲基-1-氧-異苯并四氫吡喃-4-羧酸(MPH8) 的合成
采用實施例7的制備方法，只是其中的正庚醛換為正壬醛，得到 標(biāo)題化合物MPH8A (順式)及MPH8B (反式)。
MPH8A: 207mg產(chǎn)率為6.51%mp 75-77"CFABMS[M+l〗+ : m/z=319.1
1H NMR (400MHz ， CD3C1) 5=8.15(d， 1H， J=7. 84Hz); 7. 61 (m， 1H); 7. 47(m， 1H); 7. 26(d， 1H， J=7. 28Hz); 4. 88(m， 1H); 1.75(m，
2H); l.l-1.6(m， 12H); 1.50(s， 3H); 0.88(t， 3H， J=6.86Hz)。
MPH8B: 310mg產(chǎn)率為9.75% mp 79-82. FABMS[M+l]+: m/z-319.1
NMR(400MHz， CD3C1) 5=8.17(d， 1H， J=7. 84Hz); 7.61(m， 1H); 7. 44-7.49 (m， 2H); 4. 31 (m， 1H); 1.83(m， 2H); 1. 1-1,5 (m， 12H); 1.65(s， 3H); 0. 88(t， 3H， J=6. 72Hz)。
實施例10: 3-壬基-4-甲基-l-氧-異苯并四氫吡喃-4-羧酸(MPH9) 的合成
采用實施例7的制備方法，只是其中的正庚醛換為正癸醛，得到 標(biāo)題化合物MPH9A (順式)及MPH9B (反式)。
MPH9A: 200mg產(chǎn)率為6.01%mp 75—77 X:FABMS[M+l] + : m/z=333.1
NMR (400MHz ， CD3C1) 5-8.15(d， 1H， J=7. 84Hz); 7. 61 (m， 1H); 7. 47(m， 1H); 7. 26(d， 1H， J=7. OOHz); 4.88(m， 1H); 1.76(m， 2H); 1. 1-1.6 (m， 14H); 1.50(s, 3H); 0. 88(t， 3H， J=6. 86Hz),
MPH9B: 273mg產(chǎn)率為8.20%mp 79-82. 5"C FABMS[M+l]+: m/z=333.1
NMR(400MHz， CD3C1) 5-8. 17(d， 1H， J=7. 84Hz); 7. 61(m， 1H); 7. 44—7. 49 (m， 2H); 4. 32 (m， 1H); 1.83(m， 2H); 1.1-1.5(m， 14H); 1，64(s， 3H); 0. 88(t， 3H， J=6. 82Hz)。
實施例11: 3-癸基-4-甲基-1-氧-異苯并四氫吡喃-4-羧酸 (MPH10)的合成
采用實施例7的制備方法，只是其中的正庚醛換為正十一搭，得 到標(biāo)題化合物MPH10A (順式)及MPH10B (反式)。
MPH10A: 240mg產(chǎn)率為6.94%mp 75-77TFABMS[M+l] + : m/z=347.1
)H NMR (400MHz ， CD3C1) 5=8.15(d， 1H， J=7. 84Hz); 7.61(m， IH); 7. 47(m， IH); 7. 26(d， 1H， J=7. 84Hz); 4. 88(m， IH); 1.76(m， 2H); 1.1一1.6(m， 16H); l'50(s， 3H); 0.88(t， 3H， J=6.86Hz),Anal.Calcd for C21H3。04 (346. 47): C， 72.80; H， 8.73 Found: C, 72. 51; H， 8. 98
MPH10B: 310mg 產(chǎn)率為8. 96% mp 79-82. 5X: FAB MS[M+l]+: m/z-347.1
HNMR(400MHz， CD3C1) 5-8.17(d， 1H， J=7.84Hz); 7.61(m， 1H); 7.44-7. 49 (m， 2H); 4. 31 (m， 1H); 1.82(m, 2H); 1. 1-1. 5 (m， 16H); 1.65(s, 3H); 0.88(t， 3H， J=6. 86Hz)。
Anal.Calcd for C21H3。04 (346. 47): C， 72.80; H， 8.73
Found: C， 72. 51; H， 8. 98
實施例12:3-十一烷基-4-甲基-1-氧-異苯并四氬吡喃-4-羧酸 (MPH11 )的合成
采用實施例7的制備方法，只是其中的正庚醛換為正十二醛，得 到標(biāo)題化合物MPH11A (順式)及MPH11B (反式)。
MPH11A: 230mg產(chǎn)率為6.39%mp 75-77"CFABMS[M+1] + : m/z-361.1
NMR (400MHz, CD3C1) 5=8.15(d， 1H， J=7. 84Hz); 7. 61 (m， 1H); 7. 47(m， 1H); 7.26(d， 1H, J=6. 20Hz); 4. 88 (m， 1H); 1.76(m， 2H); 1.1-1.6(m, 18H); 1.50(s, 3H); 0. 88(t， 3H， J=6.88Hz)。
MPH11B: 270mg產(chǎn)率為7.50% 即79-82. 5匸 FAB MS[M+1]+: m/z=361:l
!H醒R(400MHz, CD3C1) 5=8.17(d， 1H， J-7. 84Hz); 7. 61 (m， 1H); 7. 44-7. 49 (m， 2H); 4. 31 (m， 1H); 1.83(m， 2H); 1.1-l,5(m， 18H); 1.65(s， 3H); 0. 88(t， 3H， J=6. 86Hz)。
實施例13: 6-己基-l， 3， 7-三甲基-4-氧-l， 4， 6， 7-四氬吡喃 [4， 3-b]-吡咯-7-羧酸(PMN6)的合成
制備l: 2-(l-甲氧羰基-乙基)-l， 4-二甲基-lH-吡咯-3-羧酸 曱酯的合成<formula>see original document page 30</formula>
合成方法與2-(l-甲氧羰基-乙基)-苯甲酸甲酯的合成方法相同， 不同之處是原料由2-曱氧羰基亞甲基-苯曱酸甲酯變?yōu)?-甲氧羰基甲 基-1， 4-二甲基-lH-吡咯-3-羧酸甲酯，產(chǎn)率為87. 6%。
FABMS[M+l]+: m/z=240. 1 'H NMR(400MHz， CD3C1) 5=6.28(s， 1H); 4. 67(t， 1H， J = 7. 32Hz); 3. 77(s， 3H); 3. 67(s， 3H); 3. 47(s， 3H); 2. 19(s， 3H); 1.46(d， 3H， J=7. 28Hz)。
制備2: 6-己基-l， 3， 7-三甲基-4-氧-l， 4， 6， 7-四氫吡喻[4， 3-b]-吡咯-7-羧酸(P匪6)的合成
<formula>see original document page 31</formula>
此類化合物的合成方法與實施例7的合成方法相同，只是將原料 2-(l-甲氧羰基-乙基)-苯甲酸甲酯變?yōu)?-(l-甲氧羰基-乙基)-l， 4-二甲基-lH-吡咯-3-羧酸甲酯。選用正庚醛，得到標(biāo)題化合物PMN6A(順 式)及PMN6B (反式)。
PMN6A: 230mg產(chǎn)率為7. 93°/0 mp 76. 5-77. 5t: FAB MS[M+l]+: m/z=308. 1
'H NMR(400MHz， CD3C1) 5=6. 32(d， 1H， J=1.12Hz); 4. 72(dd， 1H， J=10. 36， 1.4Hz); 3. 47(s， 3H); 2. 26 (d， 3H， J=0. 84Hz); 1.80(m， 2H); 1.2-1.5(m， 8H); 1.41(s， 3H); 0.88(t， 3H， J-6. 72Hz)。
PMN6B: 307mg產(chǎn)率為10.59%mp 78—80"C FABMS[M+l]+: m/z=308.1
'H NMR (400MHz ， CD3C1) 5=6.34(d， 1H， J=0. 84Hz); 4.27(dd， 1H， J=9.24, 2.52Hz); 3. 60(s， 3H); 2.26(d， 3H， J=1.12Hz); 1.76(m， 2H); L65(s， 3H); 1. 2-1. 5 (m， 8H); 0. 88(t， 3H， J-7. 00Hz)。
實施例14: 6-庚基-1， 3， 7-三甲基-4-氧-1， 4， 6， 7-四氫吡喃 [4, 3-b]-吡咯-7-羧酸(PMN7)的合成
按實施例13方法制備，只是其中的正庚搭換為正辛醛，得到標(biāo)題 化合物PMN7A (順式)及PMN7B (反式)。PMN7A: 270mg產(chǎn)率為8.88%mp 75-77℃FAB MS[M+l]+: m/z=322.1
1HNMR(400MHz， CD3C1) 5=6. 32(s, 1H); 4. 72(d, 1H， J=10. 64Hz); 3.47(s， 3H); 2.26(s， 3H); 1.80(m， 2H); 1.2-1.5(m， 10H); 1.40(s， 3H); 0. 88(t， 3H， J=6. 72Hz)。
PMN7B: 300mg產(chǎn)率為9.87% mp 79-82.5℃ FABMS[M+l]+: m/z=322.1
1HNMR(400MHz， CD3C1) 5=6. 34(s， 1H); 4. 27(dd， 1H， J=9. 24， 2.8Hz); 3.60(s， 3H); 2.27(s， 3H); 1.76(m， 2H); 1.65(s， 3H); 1.2-1.5(m， 10H); 0. 88(t， 3H， J=6. 72Hz)。
實施例15: 6-辛基-l， 3， 7-三甲基-4-氧-1, 4， 6， 7-四氬吡響 [4， 3-b]-吡咯-7-羧酸(PMN8)的合成按實施例13方法制備，只是其中的正庚醛換為正壬搭，得到標(biāo)題 化合物PMN8A (順式)及PMN8B (反式)。
PMN8A: 207mg產(chǎn)率為6.51%即75-77℃FAB MS[M+l] + : m/z=336.1
NMR (400MHz ， CD3C1) 5=6.31(d， 1H， J=0. 84Hz); 4.72(d， 1H， J=10. 64Hz); 3. 47(s， 3H); 2. 25 (d， 3H， J=0. 84Hz); 1.80(m, 2H); 1.2-1.5(m, 12H); 1.40(s， 3H); 0. 88(t， 3H， J=7. 00Hz)。
Anal.CalcdforC19H29N04(335.45): C， 68.03; H， 8.71; N， 4.18
Found: C， 68.41; H， 8. 98; N， 4. 01
PMN8B: 310mg產(chǎn)率為9.75% mp 79-82. 5X: FAB MS[M+1]+: m/z=336.1
NMR (400MHz, CD3C1) 5=6. 33(s， 1H); 4. 25(d， 1H， J=9. 56Hz); 3. 60(s， 3H); 2. 25(s， 3H); 1.76(m， 2H); 1.2-1.5(m， 12H); 1.64(s， 3H); 0, 88(t， 3H， J-6. 88Hz)。
Anal.CalcdforC19H29N04(335.45): C， 68.03; H， 8.71; N， 4.18
Found: C， 68.47; H， 8.98; N， 3.98
實施例16: 6-壬基-1， 3， 7-三甲基-4-氧-1, 4, 6， 7-四氣吡鳴[4， 3-b]-吡咯-7-羧酸(PMN9)的合成
按實施例13方法制備，只是其中的正庚醛換為正癸醛，得到標(biāo)題 化合物PMN9A (順式)及PMN9B (反式)。
PMN9A: 200mg產(chǎn)率為6.01%mp 75-77"CFAB MS[M+l] + : in/z=350. 1
'H NMR (400MHz ， CD3C1) 5=6.32(d， 1H， J=0. 84Hz); 4.72(d， 1H， J=10.36Hz); 3. 47(s， 3H); 2.26(d， 3H， J=0. 84Hz); 1.80(m， 2H); 1.2-1.5(m， 14H); l'40(s， 3H); 0.88(t, 3H， J=6. 86Hz)。
PMN9B: 273mg產(chǎn)率為8.20% mp 79-82. 5匸 FABMS[M+l〗+: m/z=350. 1
NMR (400MHz, CD3C1) 5=6. 34(d， 1H， J-0. 84Hz); 4. 27(dd， 1H， J=8. 96， 2.80Hz); 3. 60(s， 3H); 2. 26(d， 3H， J-0. 84Hz); 1.76(m， 2H); 1.65(s， 3H); 1. 2-1. 5 (m， 14H); 0. 88(t， 3H， J=6. 88Hz)。
實施例17: 6-癸基-l， 3， 7-三甲基-4-氧-1， 4， 6， 7-四氫吡響 [4， 3-b]-吡咯-7-羧酸(醒IO)的合成
按實施例13方法制備，只是其中的正庚醛換為正十一醛，得到標(biāo) 題化合物PMM0A (順式)及PMN10B (反式)。
PMN10A: 240mg產(chǎn)率為6.94%mp 75-77匸 FABMS[M+l]+: m/z=364.1
'H NMR (400MHz， CD3C1) 5=6. 31(d， 1H， J=0. 84Hz); 4.72(dd， 1H， J=9. 24， 1.4Hz); 3. 47(s， 3H); 2. 25(d， 3H，風(fēng)84Hz); 1.80(m， 2H); 1.2-1.5(m， 16H); 1.40(s， 3H); 0. 88(t， 3H， J=6. 86Hz)。
PMNIOB: 310mg產(chǎn)率為8. 96% mp 79-82. 5t: FABMS[M+1〗+: m/z=364.1
'H NMR (400MHz, CD3C1) 5=6.33(d， 1H， J=0. 84Hz); 4.27(dd， 1H， J-9. 24， 2.56Hz); 3. 59(s， 3H); 2. 26(d, 3H， J=1.12Hz); 1.76(m， 2H); 1.64(s， 3H); 1.2-1.5(m， 16H); 0. 88(t， 3H， J=6. 86Hz)。
實施例18: 6-十一烷基-l， 3， 7-三甲基-4-氧-1， 4， 6， 7-四氬 吡喃[4, 3-b]-吡咯-7-羧酸(PMN11)的合成
按實施例13方法制備，只是其中的正庚醛換為正十二搭，得到標(biāo) 題化合物PMN11A (順式)及PMN11B (反式)。
PMN11A: 230mg產(chǎn)率為6.39%mp 75-77X:FABMS[M+l] + : m/z=378.1
'H NMR(400MHz， CD3C1) &=6.32(d， 1H， J-1.12Hz); 4.72(dd， 1H, J=8. 96， 1.4Hz); 3. 46(s， 3H); 2.26(d， 3H，卜O. 84Hz); 1.80(m， 2H); 1.2-1. 5 (m, 18H); 1.40(s， 3H); 0. 88(t， 3H， J=6. 66Hz)。
Anal.CalcdforC22H35N(U377.53): C, 69. 99; H， 9.34; N， 3.71
Found: C， 69.47; H， 9.78; N， 3.98
PMN11B: 270mg產(chǎn)率為7.50% mp 79-82. 5t: FAB MS[M+l]+: m/z=378.1
NMR (400MHz ， CD3C1) 5-6.34(d， 1H， J=0. 84Hz); 4.27(d， 1H， J=8.96Hz); 3. 60(s, 3H); 2.26(d， 3H， J=0. 84Hz); 1.76(m， 2H); 1.65(s， 3H); 1.2-1.5(m， 18H); 0. 88(t， 3H， J=6. 86Hz)。
Anal.CalcdforC22H35N04(377.53): C， 69. 99; H， 9.34; N， 3.71
Found: C， 69.55; H， 9.69; N， 3.99
實施例19: 3-己基-l-氧-異苯并四氫噻喃-4-羧酸(PHS6)的合
成
制備1: 2-(1-甲氧羰基-八烷-l-烯)-苯甲酸甲酯的合成
<formula>see original document page 34</formula>
N2存在下，將2-甲氧羰基亞甲基-苯甲酸甲酯(4.16g， 0. 02mol) 溶于30ml干燥的THF溶液，于0X:下緩慢滴入NaH (60%， 1. 0g， 0. 025mol )于200ml無水THF的混懸液，保持0*€反應(yīng)2hr，反應(yīng)液變 為乳濁液。將庚醛(2. 28g, 20mmol)溶于20ml無水THF，滴入上述 反應(yīng)液，溶液變?yōu)闇\黃色澄清液，保持0'C繼續(xù)反應(yīng)5小時。反應(yīng)結(jié) 束后，用6M的鹽酸20ml終止反應(yīng)。用乙酸乙酯100ml/3次萃取，合 并有機層并用飽和食鹽水洗滌3次，用無水MgS04干燥，濃縮得油狀 物6. 14g，產(chǎn)率90%。
制備2: 3-己基-1-氧-異苯并四氫噻喃-4-羧酸(PHS6)的合成
將2-(1-甲氧羰基-十烷-l-烯)-苯甲酸曱酯3. 04g (lO咖ol)與 硫代乙酸10ml (大過量)及無水吡咬5滴共于85-90X:反應(yīng)3天，加入 100ml乙酸乙酯稀釋，用飽和的NaHC03水溶液中洗滌至無臭味，乙酸 乙酯層用無水硫酸鈉干燥，濃縮得黑色油狀物。在N2存在下，加入6M 的HC1約40ml回流6-8小時，冷卻，用乙酸乙酯提取水層，合并有機 層并用飽和食鹽水洗至中性，用無水硫酸鎂干燥，濃縮后得黑色油狀 液，加TFA 10ml回流2小時，蒸千TFA，并加氯仿20ml/3次，帶去 殘留的水及溶劑，得到的黑色油狀液體，柱層析(石油醚乙酸乙酯 =10: 1)得順反異構(gòu)體化合物6A/6B。分別將化合物6a/6b溶于適量 甲醇中，加等摩爾量的1N的LiOH水溶液，室溫攪拌過夜。反應(yīng)結(jié)束 后用6N的HC1水溶液酸化，用乙酸乙酯萃取(80ml*3次)，有機層 用飽和食鹽水洗滌，濃縮，柱層析(石油醚乙酸乙酯冰醋酸=10: 1: 0. 05 )。分別得到標(biāo)題化合物PHS6A (順式)和PHS6B (反式)。
PHS6A: 420mg產(chǎn)率為14.38%mp 75—77匸 FABMS[M+l]+: m/z=293. 1
'H NMR (400MHz, CD3C1) 5 =7. 98 (dd, 1H， J=7. 84， 1. 40Hz); 7. 53 (m， 1H); 7.47(m, 1H); 7. 27 (d, 1H， J=9. 52Hz); 4. 10(d， 1H， J-3. 08Hz); 3. 93(m， 1H); 1.99(m， 1H); 1.84(m， 1H); 1.1-1.6(m， 8H); 0.88(t， 3H， J=6. 72Hz)。
Anal.CalcdforC16H2003S(292.40): C， 65.72; H, 6.89; S， 10.97 Found: C， 65.47; H， 7. 11; S, 11. 27PHS6B: 332mg產(chǎn)率為11.37%mp 75-77℃FAB MS[M+l]+: m/z=293.1
NMR (400MHz ， CD3C1) 5-7.98(d， 1H， J-6. 72Hz); 7.57(m, 1H); 7. 49(m， 1H); 7.25(d， 1H， J-6. 16Hz); 4. 06(d， 1H， J-3. 36Hz); 3. 83(m， 1H); 1.63(m， 2H); 1.1-1.6(m， 8H); 0. 88(t， 3H， J=6. 72Hz)。
實施例20: 3-庚基-1-氧-異苯并四氫噻喃-4-羧酸(PHS7)的合
成
按實施例19方法制備，只是其中的正庚醛換為辛醛，得到標(biāo)題化 合物PHS7A (順式)和PHS7B (反式)。
PHS7A: 395mg產(chǎn)率為12.91%mp 75—77 t)FAB MS[M+l〗+ : m/z=307. 1
!H NMR (400MHz， CD3C1) 5 =7. 98 (dd， 1H， J=7. 84， 1. 68Hz); 7. 53 (m， 1H); 7. 47(m， 1H); 7. 28(d， 1H， J-1.12Hz); 4.10(d， 1H， J=3. 08Hz); 3. 93(m， 1H); 1.99(m， 1H); 1.83(m， 1H); 1. 1-1.6 (m， 10H); 0. 87(t， 3H， J=6. 88Hz)。
PHS7B: 342mg產(chǎn)率為11.18%nip 75-77" FABMS[M+l]+: m/z=307. 1
NMR(400MHz， CD3C1) 5-7.98(d， 1H， J=7. 84Hz); 7. 57(m， 1H); 7.48(m， 1H); 7.25(d， 1H， J=6. 16Hz); 4. 07 (d， 1H， J-3. 36Hz); 3.83(m， 1H); 1.63(m， 2H); 1.1-1.6(m， 10H); 0. 85(t， 3H， J=6. 88Hz)'
實施例21: 3-辛基-l-氧-異苯并四氫噻喃-4-羧酸(PHS8)的合
成
按實施例19方法制備，只是其中的正庚醛換為壬醛，得到標(biāo)題化 合物PHS8A (順式)和PHS8B (反式)。
PHS8A: 259mg產(chǎn)率為8.09%mp 75-77 X:FAB MS[M+l] + : m/z=321. 1
'H NMR(400MHz， CD3C1) 5=7.98(d， 1H， J-6. 76Hz); 7.53(m， 1H); 7.47(m， 1H); 7. 28(d， 1H， J=7. 84Hz); 4. 10(d， 1H， J-3. 08Hz); 3. 92(m， 1H); 1.99(m， 1H); 1.83(m， 1H); 1. 1-1.6 (m， 12H); 0.87(t，3H， J-6. 88Hz)。
PHS8B: 246mg產(chǎn)率為7.69%mp 75-77"CFAB MS[M+l〗+ : m/z=321,1
H NMR(400MHz， CD3C1) 5 =7. 98 (dd, 1H， J-7. 88， 1. 12Hz); 7. 56 (m， 1H); 7. 48(m， 1H); 7. 24(d， 1H， J-8. 72Hz); 4.07(d， 1H， J=3. 36Hz); 3. 83(ffl, 1H); 1.63(m， 2H); 1,l-1.6(m， 12H); 0. 85(t， 3H， J-6. 86Hz)。
實施例22: 3-壬基-l-氧-異苯并四氫噻喃-4-羧酸(PHS9)的合
成
按實施例19方法制備，只是其中的正庚醛換為癸搭，得到標(biāo)題化 合物PHS9A (順式)和PHS9B (反式)。
PHS9A: 306mg產(chǎn)率為9.16%mp 75-77*CFABMS[M+l] + : m/z=335. 1
H NMR ,MHz， CD3C1) 5 =7. 98 (dd， 1H， J-6. 56， 1. 12Hz); 7. 53 (m， 1H); 7.47(in， 1H); 7.28(d， 1H, J-7. 84Hz); 4.10(d， 1H， J=3. 08Hz); 3. 92(m， 1H); 1.99(m， 1H); 1.83(m， 1H); 1.1-1.6(m， 14H); 0. 87(t， 3H， J=6.86Hz)。
PHS9B: 321mg產(chǎn)率為9.61%mp 75-77"CFABMS[M+l] + : m/z=335. 1
H NMR (400MHz， CD3C1) 5 =7. 98 (dd， 1H， J-7. 88， 1. 40Hz); 7. 57 (m, 1H); 7.49(m， 1H); 7. 26(d， 1H， J-6.16Hz); 4. 07(d， 1H， J-3. 36Hz); 3. 83(m， 1H); 1. 63(m， 2H); 1. 6(m， 14H); 0. 86(t， 3H， J=7. OOHz)。
實施例23: 3-癸基-l-氧-異苯并四氫噻喃-4-羧酸(PHS10)的合
成
按實施例19方法制備，只是其中的正庚醛換為十一醛，得到標(biāo)題 化合物PHS10A (順式)和PHS10B (反式)。
PHS10A: 380mg產(chǎn)率為10.92% mp 75-77匸 FABMS[M+l]+: m/z=349. 1
H NMR (400MHz, CD3C1) 5 =7. 99 (dd， 1H， J-7. 56， 1. 40Hz); 7. 53 (m， 1H); 7.47(m， 1H); 7.28(d， 1H, J=7. 84Hz); 4. ll(d， 1H， J-3. 36Hz);3. 93(m， IH); 2. 01 (m， IH); 1.83(m， 1H); 1.1-1.6(m， 16H); 0. 87(t， 3H， J-6. 88Hz)。
Anal.CalcdforC20H2803S(348. 51): C， 68.93; H， 8.10; S， 9.20 Found: C， 68. 67; H， 8. 48; S， 8. 97
PHS10B: 330mg產(chǎn)率為9.48%mp 75-77"C FABMS[M+1]+: m/z=349.1
'H NMR (400MHz, CD3C1) 5-7.98(d， 1H， J-7. 84Hz); 7.57(m， IH); 7. 48(m， IH); 7. 24(d， 1H， J=5.88Hz); 4. 07(d， 1H， J=3. 36Hz); 3. 83(m， IH); 1. 64 (m， 2H); 1. l-l. 6 (m, 16H); 0. 86(t， 3H， J=6. 86Hz)。
Anal.CalcdforC20H2803S(348.51): C， 68. 93; H, 8.10; S， 9.20
Found: C， 68. 72; H, 8. 39; S， 9. 00
實施例24: 3-十一烷基-l-氧-異苯并四氫噻喃-4-羧酸(PHS11) 的合成
按實施例19方法制備，只是其中的正庚醛換為十二醛，得到標(biāo)題 化合物PHS11A (順式)和PHS11B (反式)。
PHS11A: 354mg產(chǎn)率為9.78%mp 75-77"C FABMS[M+1]+: m/z=363. 1
'H NMR (400MHz, CD3C1) 5 -7. 99 (dd， 1H， J=7. 56， 1. 40Hz); 7. 54 (m, IH); 7.47(m, 1H); 7. 27(d， 1H， J-7. 56Hz); 4. ll(d， 1H， J-3. 36Hz); 3.93(m， IH); 1. 99 (m， IH); 1.84(m， 1H); 1. 1-1.6 (m， 18H); 0. 87(t， 3H， J-6. 86Hz)。
PHS11B: 250mg產(chǎn)率為6.91% mp 75-77X: FABMS[M+1]+: m/z=363.1
'H NMR (權(quán)MHz， CD3C1) 5 -7. 98 (dd， 1H， J=7. 56， 1. 12Hz); 7. 57 (邁， IH); 7.48(m， 1H); 7. 24(d， 1H， J-6. 16Hz); 4.07(d， 1H， J-3. 36Hz); 3. 83 (m， IH); 1. 63 (m， 2H); 1. 1-1. 6 (m， 18H); 0. 87 (t， 3H， J-7. 00Hz)'
實施例25:化合物對脂肪酸合成酶活性的抑制試驗
1)脂肪酸合成酶的制備
雄性SD大鼠，體重220-250克，禁食兩天，然后給予高糖低脂飼
料，喂養(yǎng)三天，將飲食誘導(dǎo)的脂肪酸高表達(dá)大鼠模型迅速處死，取其
肝臟，并用冰冷的磷酸鹽緩沖液(O. 1M; PH值7. 5)灌洗肝臟。(注以 上步驟均在41C進行)。稱重后以5邁l/mg體積0. 1M、 PH值7. 2的褲酸 鹽緩沖液對其進行勻漿。充分勻漿后，加入25%PEG)的聚乙二醇 (Mr6000 )至濃度為5%，攪拌10分鐘，9000rpm，離心30分鐘。將 上清液經(jīng)大濾器過濾，并測量其體積，在其中加入25%的PEG至終濃 度為11%,攪拌10分鐘后再離心15分鐘，轉(zhuǎn)速為9000rpm。離心后將 上清液棄去，用冰冷的蒸餾水輕輕地清洗沉淀表面，盡可能將其表面 的PEG清洗干凈。用0. 1M磷酸鹽緩沖鹽(PH值7. 2，包含lmMDTT、 2%兔血清、2見g/ml牛血清白蛋白)對沉淀勾漿，體積是上次離心前體 積的1/4，勻漿后，邊攪拌邊加入硫酸銨(25g/100nil)，攪拌30分 鐘，9000 rpm離心30分鐘。用0. 05M磷酸鹽緩沖鹽(PH值7. 2，包 含lmMDTT、 2mg/ml牛血清白蛋白)對沉淀勻漿，終體積與上步相同。 然后，在勻漿液中加入25%的PEG至終濃度為10%,攪拌10分鐘， M00rpm離心15分鐘，將上清收集并保存，沉淀重復(fù)上步處理，將兩 次上清收集在一起，在其中加入35%的PEG，至終濃度為15%,攪拌10 分鐘，9000rpm離心30分鐘，收集沉淀。沉淀溶解在0. 05M磷酸鹽緩 沖鹽(PH值7.5，包含2mMDTT)中，離心5分鐘，轉(zhuǎn)速3000rpm， 收集上清。用離子層析交換柱，將上清液進行分離，緩沖液為0. 05M 磷酸鹽緩沖鹽。將收集的液體用超濾濃縮管進行離心濃縮，轉(zhuǎn)速為 3000g，至終體積為2ml左右，將濃縮產(chǎn)品加入凝膠層析交換柱，進行 進一步分離純化。緩沖液為0. 1M磷酸鹽緩沖鹽(PH值7. 5，包含5mM DTT)，收集活性峰。將收集的液體濃縮，方法同上，并保存，可凍存 或4℃保存。以上步驟均在4℃進行。
2)化合物對脂肪酸合成酶活性的抑制試驗
選取藥物濃度為60p邁o1與NADPH( 200nM);乙酰輔酶A(66nM); 磷酸鹽緩沖液(580ffll， 0. 1M， PH值7. 0);經(jīng)純化的脂肪酸合成酶24ul。 37℃下共同孵育30min，加入丙酰輔酶A( 200nM)起始反應(yīng)。使用S500P 分光光度計，測量在340nm處MDPH被氧化的量，通過藥物對酶的抑
制作用對83個化合物進行初篩。對抑制作用接近或優(yōu)于陽性化合物 C75的藥物做量效曲線，并求出IC50值。丙酰輔酶A和乙酰輔酶A為 SIGMA公司產(chǎn)品，NADPH為ROCHE公司產(chǎn)品。
3)實驗結(jié)果
1化合物抑酶活性初篩結(jié)果(6(Himo1)_
4，
腿7. 25 ±1. 02鵬6A3.62 ±4.53畫A31. 51 ± 3.14PHS6A18. 03 ±3.76
PH6B15. 94 ±1. 26鵬6B3.62 ±2.51薩B6.16±1.19PHS6B43.44 ±4.26
腿9.42 ±2. 51畫A9.42 ±4. 53麗A24.66 ± 1.19PHS7A11. 59 ±4.53
PH7B13. 77 ± 3. 32鵬7B10.87 ±4. 35蘭7B19.18 ± 3.14HS7B50 ±2.84
賺33. 77 ± 0. 25鵬8A47. 25 ± 1. 34蘭8A42, 32 ± 1. 25P瞧40.16±1.42
PH8B21. 01 ± 3. 32畫B11. 59 ±1. 26蘭8B8.7±5PHS8B13.93 ±6.51
賺14.49 ±3. 32MPH9A18.84 ± 3. 32廳A21.92 ±5.44腦A93.48 ±6
PH9B30. 43 ±2. 48MPH9B19. 57 ±2.17蘭9B5.47 ±2. 05PHS9B97.54 ±2.46
■A28. 99 ±4. 53隨0A90. 58 ± 3. 32腿10A38. 36 ±4.11PHS10A99,18±1.42
PH10B34. 06 ± 1. 26MP隨89.13 ±2.17醒0B30. 82 ±6. 61PHS10B卯.98±3.76
PH11A50. 72 ±5. 47鵬11A89. 86 ± 3. 32麗11A71. 92 ± 3.14PHS11A95.65 ± 3
PH11B86. 23 ± 5. 47MPH11B97. 83 ±2.17匿11B96.58 ± 1.19P腿B96. 72 ± 1.42
C75 42. 75 ±2. 51
奉4. 2優(yōu)多化合竺IC50溯'J^結(jié)^
化合物IC50(uM)95%置信區(qū)間化合物IC50(uM)95%置信區(qū)間
編號編號
PHS9A36. 7324. 96-54.06MPH10A34. 1523. 88-48. 82
PHS9B26. 8619. 88-36. 31MPH10B34. 5022. 82-52. 17
PHS10A12. 328. 69-17. 49MPH11B6. 474. 18-10. 02
PHS10B8. 293. 88-17. 72PMN11A27. 2019. 43-38. 07
PHS11A4. 112. 08-8. 10PMN11B11. 236. 31-20. 00
PHS11B3. 622. 44—5. 37C7515. 536. 83-35. 32
結(jié)果表明本發(fā)明化合物在60一o1濃度下對酶的抑制活性強于陽 性對照C75或與其相當(dāng)，且其中一些化合物的IC50值小于陽性對照 C75。
實施例26:優(yōu)選化合物細(xì)胞毒性實驗
2. 1 MTT法實驗原理
噻唑蘭(簡稱MTT)可通過細(xì)胞膜進入胞內(nèi)，活細(xì)胞線粒體中的 琥珀酰脫氬酶能使外源性MTT還原為難溶于水的藍(lán)紫色的Formazan 結(jié)晶，并沉積在細(xì)胞中，結(jié)晶物能被二甲基亞砜(DMSO)溶解，用酶 聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反應(yīng)細(xì)胞數(shù)量。
2.2實驗方法
將正常傳代的人胚肺成纖維細(xì)胞(HLF)重懸于10%FCS的1640 培養(yǎng)基中，調(diào)整濃度為3-5xl07ml，接種于96孔平底板中，10(^1/ 孔；在各孔中加入梯度稀釋的各待測小分子化合物，同時 設(shè)溶劑對照和陽性藥物C75對照。于5%(:02， 37TC細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 48小時，每孔加入MTT(5mg/ml)10nl，震蕩3-5min后，置于5%(:02， 37X:細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4-6小時，每孔加入DMSO lOOjil，震蕩 3-5min后，于酶聯(lián)儀上測定490nm波長的光密度值。根據(jù)光密度值換 算為化合物的TC50值。
2.3實驗結(jié)果
</column></row><row><column>表4. 3優(yōu)選化合物的細(xì)胞毒性實驗結(jié)果
</column></row><row><column>化合物FAS抑制HLF細(xì)胞毒性 治療指數(shù)
IC50(μm) TC50(μm) (TC50/IC50)
</column></row><row><column>C75 15. 53 (6. 83-35. 32)87. 093.6(1. 98-10. 24)
</column></row><row><column>MPH11B6. 47 (4.18-10. 02)54. 218.4(5.4-13)
</column></row><row><column>PHS11A 4. 11(2. 08-8. 10)32. 647.9(4.0-15. 7)
</column></row><row><column>PHS10A12. 32 (8. 69-17. 49)64.185.2(3.7-7. 4)
</column></row><row><column>PHS10B8. 29 (3. 88-17. 72)33. 94.0(1,9-8. 7)
</column></row><row><column>PMN11A27.20(19. 43-38. 07)146. 35.4(3.8-7. 5)
</column></row><row><column>PMN11B11. 23 (6. 31-20. 00)72.116.4(3.6-11. 4)
結(jié)果表明，本發(fā)明代表性化合物(PHS10A 、 PHS10B、 PMN 11A 、 PMN11B) 的TC50值大于或接近陽性對照，計算他們的治療指數(shù)(TC50/IC50) 都大于或接近陽性對照。
權(quán)利要求
1.通式I六元雜環(huán)類化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽，溶劑化物或其幾何異構(gòu)體，id="icf0001" file="A2006101376680002C1.gif" wi="27" he="42" top= "43" left = "96" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>其中R1為C3～C18直鏈或支鏈烷基，C3～C18直鏈或支鏈烯基，其鏈上選擇性被鹵素、硝基、羥基、羥甲基、-CN、三氟甲基、三氟甲氧基、苯氧基、芐氧基、O或S，R2為H、C1～C6的直鏈或支鏈的烷基、芐基、三氟甲基，R3為H、甲基，X為氧或硫原子；A為5～6元的芳香碳環(huán)或雜環(huán)取代基，其中，芳香碳環(huán)含6-14個碳原子，如苯基，芐基或萘基，雜環(huán)中包括1～4個選自下面的雜原子O，S，N，如吡咯，吡啶，哌啶，吡咯烷，或嗎啉；芳香碳環(huán)或雜環(huán)上可以無取代，也可以被1～5個選自下面的取代基取代鹵素，硝基，羥基，羥甲基，三氟甲基，三氟甲氧基，苯氧基，芐氧基，CN，羧基或氨基。
2.權(quán)利要求l的化合物，其為通式I化合物為通式II所代表六 元雜環(huán)化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽，溶劑化物或其幾何異構(gòu)體，<formula>see original document page 2</formula>其中Rl為C3 ~ C18直鏈或支鏈烷基，C3 ~ C18直鏈或支鏈烯基， R3為H、甲基，A為苯基，1、 3-二甲基吡咯基， X選自0， S原子。
3.權(quán)利要求1或2的化合物，其選自反式-6-正己基-1， 3， 7-三甲基-4-氧代-l， 4, 6， 7-四氫吡喃[4， 3-b ]吡咯-7-羧酸；反式-6-正庚基-1， 3， 7-三甲基-4-氧代-l， 4， 6， 7-四氫吡喃[4， 3-b ]吡咯-7-羧酸；反式-6-正辛基-1， 3， 7-三甲基-4-氧代-l， 4， 6， 7-四氫吡喃[4， 3-b ]吡咯-7-羧酸；反式-6-正壬基-1， 3, 7-三甲基-4-氧代-1， 4， 6， 7-四氫吡喃[4， 3-b ]吡咯-7-羧酸；反式-6-正癸基-l， 3， 7_三甲基-4-氧代-1， 4， 6, 7-四氫吡喃[4， 3-b ]吡咯-7-羧酸；反式_6_正十一烷基-1， 3， 7-三甲基-4-氧代-1， 4， 6, 7-四氫吡喃[4， 3-b]吡咯-7-羧酸；順式-6-正己基-l， 3， 7-三甲基-4-氧代-1， 4， 6, 7-四氫吡喃[4， 3-b ]吡咯-7-羧酸；順式-6-正庚基-l， 3， 7-三甲基-4-氧代-l， 4， 6， 7-四氫吡喃[4， 3-b ]吡咯-7-羧酸；順式-6-正辛基-l， 3， 7-三甲基-4-氧代-l， 4， 6， 7-四氫吡喃〖4， 3-b ]吡咯-7-羧酸；順式-6-正壬基-l， 3, 7-三甲基-4-氧代-1， 4， 6， 7-四氫吡喃[4， 3-b ]吡咯-7-羧酸；順式-6-正癸基-l， 3， 7-三甲基-4-氧代-l， 4， 6， 7-四氫吡喃[4， 3-b ]吡咯-7-羧酸；順式-6-正十一烷基-1， 3， 7-三甲基-4-氧代-1， 4， 6， 7-四氫吡喃[4，3-b]吡咯-7-羧酸；反式-3-正己基-l-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 反式-3-正庚基-l-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 反式-3-正辛基-l-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 反式-3-正壬基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 反式-3-正癸基-l-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 反式-3-正十一烷基-l-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正己基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正庚基-l-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正辛基-l-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正壬基-l-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正癸基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正十一烷基-1-氧代_異苯并四氫吡喃-4-羧酸；反式-3-正己基-4-曱基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 反式-3-正庚基-4-曱基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 反式-3-正辛基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 反式-3-正壬基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 反式-3-正癸基-4-曱基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 反式-3-正十 一烷基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正己基-4-甲基-l-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正庚基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正辛基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正壬基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正癸基-4-曱基-1-氧代-異苯并四氫吡喃-4-羧酸； 順式-3-正十一烷基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氬吡喃-4-羧酸；反式-3-正己基-4-甲基-l-氧代-異苯并四氫噻喃-4-羧酸； 反式-3-正庚基-4-甲基-l-氧代-異苯并四氫瘞喃-4-羧酸； 反式-3-正辛基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫噻喃-4-羧酸； 反式-3-正壬基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫噻喃-4-羧酸； 反式-3-正癸基-4-甲基-l-氧代-異苯并四氫噻喃-4-羧酸； 反式-3-正十一烷基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫噻喃-4-羧酸； 順式-3-正己基-4-曱基-1-氧代-異苯并四氫噻喃-4-羧酸； 順式-3-正庚基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫噻喃-4-羧酸； 順式-3-正辛基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫噻喃-4-羧酸； 順式-3-正壬基-4-甲基-l-氧代-異苯并四氫噻喃-4-羧酸； 順式-3-正癸基-4-甲基-1-氧代-異苯并四氫噻喃-4-羧酸； 順式-3-正十 一烷基-4-甲基-l-氧代-異苯并四氫噻喃-4-羧酸； 以及其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。
4. 藥物組合物，其含有權(quán)利要求l ~ 3任一項所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物和至少一種藥學(xué)上可接受的栽體、 稀釋劑或賦形劑。
5. 制備權(quán)利要求l ~ 3任一項所述化合物的方法，其包括i)式in化合物與甲醇在濃硫酸催化下反應(yīng)，其中A的定義同權(quán)利要求1， 2)將式IV化合物在堿(如氫化納(NaH)、二異丙基氨基鋰(LDA)) 存在下與碘甲烷(CH3I)反應(yīng)，得式V化合物。得到式V化合物，<formula>see original document page 6</formula>其中A的定義同權(quán)利要求1,3)將式IV化合物與NaH、 R1CH0反應(yīng)得到式VI化合物<formula>see original document page 6</formula>其中，A為苯基、Rl的定義同權(quán)利要求l， 4)將式V化合物與LDA、 R1CH0反應(yīng)得到式VII化合物(順式與反式)，<formula>see original document page 6</formula>其中，A、 Rl的定義同權(quán)利要求l; R3為甲基，X為氧原子， 5 )將式IV化合物與二異丙基氨基鋰(LDA )、三異丙氧基氯化鈦((i-Pr0) 3TiCl) 、 R1CH0反應(yīng)，得到式VII化合物(順式與反式)，<formula>see original document page 6</formula>其中，A為苯基、X為氧原子，R3為H， Rl的定義同權(quán)利要求l， 6)將式VI化合物與硫代乙酸、鹽酸及三氟醋酸反應(yīng)得到式VII 化合物(順式與反式)，<formula>see original document page 7</formula> VII其中，A為苯基、X為硫原子，R3為H，Rl的定義同權(quán)利要求l，7 )將式VII化合物與氫氧化鋰水溶液反應(yīng)得到通式II的化合物:<formula>see original document page 7</formula>II其中，A、 X、 Rl、 R3的定義同權(quán)利要求l， 8)將通式II化合物與烷基或烯基醇R20H進行酯化反應(yīng)，分離純化得到通式I的化合物，<formula>see original document page 7</formula>I其中，A、 X、 Rl、R3的定義同權(quán)利要求l.
6. 權(quán)利要求l ~ 3任一項所述的化合物用于制備減肥藥物的用途。
7. 權(quán)利要求l ~ 3任一項所述的化合物用于制備抗腫瘤藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式I六元雜環(huán)化合物，其藥學(xué)上可接受的鹽，溶劑化物或其幾何異構(gòu)體，含有所述化合物的藥物組合物，式I中各取代基團的定義如說明書所述。本發(fā)明還涉及通式I化合物的制備方法以及這些化合物用于制備減肥及抗腫瘤藥的用途。
文檔編號C07D491/052GK101172978SQ200610137668
公開日2008年5月7日 申請日期2006年11月2日 優(yōu)先權(quán)日2006年11月2日
發(fā)明者劉洪英, 松 李, 王曉奎, 王莉莉, 肖軍海, 趙國明, 鄭志兵, 奇 金, 武 鐘 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所