專利名稱：：無(wú)水極性非質(zhì)子性肽制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及肽化合物的穩(wěn)定的無(wú)水極性非質(zhì)子性制劑，更特別是高濃度的肽化合物制劑。
背景技術(shù)：
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合物穩(wěn)定。標(biāo)準(zhǔn)的肽和蛋白質(zhì)制劑是由稀的水溶液組成。一般通過(guò)改變以下的一種或幾種條件pH、緩沖液類型、離子強(qiáng)度、賦形劑(EDTA,抗壞血酸等)而使藥物穩(wěn)定。對(duì)于這些制劑，不能完全穩(wěn)定需要水的降解途徑(水解、去酰胺化作用、外消旋化)。相反，在本發(fā)明中，欣制成于無(wú)水溶液，如二甲基亞風(fēng)(DMSO)和二甲基甲跣胺(DMF)溶液中的肽，其化學(xué)和物理穩(wěn)定性都比水溶液制劑高。DMSO和DMF均是極性非質(zhì)子性溶劑。因其缺乏給降解反應(yīng)提供質(zhì)子的能力，所以期望非質(zhì)子性溶劑能降低降解速率。相反地，極性比水強(qiáng)(如，水的偶極矩為1.85,DMF為3.82，DMSO為3.96)的溶劑由于能輔助穩(wěn)定限速步驟和增加降解速率，因而期望能增加降解速率。然而，我們發(fā)現(xiàn)，極性非質(zhì)子性溶劑的總體效果一般地是穩(wěn)定肽溶液。本發(fā)明包含用無(wú)水非質(zhì)子性溶劑如DMSO或DMF對(duì)抗物理和化學(xué)降解以穩(wěn)定敗制劑。此發(fā)現(xiàn)包含利用DMSO或DMF提高在廣泛的制劑條件下(包括高濃度和高溫)肽的穩(wěn)定性，使否則沒(méi)有其它可行辦法的在長(zhǎng)期可植入裝置中的肽的遞送成為可能。A.定義如此處所用下列術(shù)語(yǔ)的意思如下"化學(xué)穩(wěn)定性"一詞是指通過(guò)如氧化或水解的化學(xué)途徑生產(chǎn)，形成可接受的百分比例的降解產(chǎn)物。特別的，一種制劑如果在37€經(jīng)過(guò)兩個(gè)月后形成不超過(guò)約20%的降解產(chǎn)物，可視為化學(xué)穩(wěn)定。"物理穩(wěn)定性"一詞指形成可接受百分比的聚集體(如二聚體、三聚體和更大的聚集體)。特別的，一種制劑如果在37C經(jīng)過(guò)兩個(gè)月后形成不超過(guò)約15%的聚集體可視為物理穩(wěn)定。"穩(wěn)定的制劑"一詞指在37t:(或相同條件在高溫條件下)兩個(gè)月后至少保留有約65%化學(xué)和物理穩(wěn)定的肽化合物。特別優(yōu)選的制劑指在這些條件下至少保留有約80%化學(xué)和物理穩(wěn)定的肽.特別優(yōu)選的穩(wěn)定制劑指經(jīng)過(guò)輻射滅菌(如，Y射線、P射線或電子束)后沒(méi)有顯示降解的制劑。"肽"和/或"肽化合物"一詞指多至約五十個(gè)氨基酸殘基通過(guò)跣胺鍵(CONH)連接在一起的聚合物。該詞也包括它們的類似物、衍生物、激動(dòng)劑、拮抗劑和上述任一種的藥學(xué)可接受的鹽，該詞還包括在D或L構(gòu)型和/或作為其結(jié)構(gòu)一部分的擬胨(peptomimetic)單位中含有D型氨基酸、修飾過(guò)的、衍生的或非天然氨基酸。"LHRH相關(guān)化合物"一詞指促黃體生成激素釋放激素(LHRH)和其類似物及其藥學(xué)可接受的鹽。八肽、九肽和十肽LHRH激動(dòng)劑和拮抗劑和天然LHRH—樣均包括在LHRH相關(guān)化合物一詞中。特別優(yōu)選的LHRH相關(guān)化合物包括LHRH、亮丙瑞林、戈舍瑞林、納發(fā)瑞林及其它已知的活性激動(dòng)劑和拮抗劑。1-21"高濃度"一詞指至少約10。/。(w/w)和多至特定肽的最大溶解度。"賦形劑"一詞指制劑中一種相對(duì)不活潑的物質(zhì)，其作為一種稀釋劑或栽體或者使制劑成型或具有一定密度而加入。賦形劑不同于制劑中用于溶解藥物的溶劑如乙醇和用于增加藥物溶解度的非離子型表面活性劑如吐溫-20以及用來(lái)阻止和抑制微生物生長(zhǎng)的防腐劑如苯甲醇或?qū)αu笨甲酸甲酯或?qū)αu苯甲酸丙醋。"極性非質(zhì)子性溶劑"一詞指一種不含酸性氫以及不能作為氬鍵供體的極性溶劑。極性非質(zhì)子性溶劑的例子為二甲亞鞏(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)，六甲基磷酰三胺(HMPT)和N-甲基吡咯烷酮。"無(wú)水質(zhì)子性溶劑"一詞指一種含有連接在氧或氮上的氬以使形成氫鍵或提供一個(gè)質(zhì)子的非極性溶劑。非極性質(zhì)子性溶劑的例子有聚乙二醇類(PEG),丙二醇(PG)，聚乙烯吡咯烷嗣(PVP)，甲氧基丙二醇(MPEG),甘油和糖糠搭(glycofurol).B.制劑的制備本發(fā)明是關(guān)于極性非質(zhì)子性溶劑中的肽化合物的無(wú)水制劑，它能在較高的溫度下穩(wěn)定更長(zhǎng)的期限。標(biāo)準(zhǔn)的稀的肽和蛋白質(zhì)的水溶液制劑需調(diào)整緩沖液類型、離子強(qiáng)度、pH和賦形劑(如EDTA和抗壞血酸)以實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定。相反，本發(fā)明所要求的制劑是通過(guò)無(wú)水極性非質(zhì)子性溶劑的使用實(shí)現(xiàn)肽化合物的穩(wěn)定。特別的，本發(fā)明的制劑提供了高濃度(至少約10%,w/w)化合物的穩(wěn)定性。可用本發(fā)明配制的肽和肽化合物的實(shí)例包括有生物活性的肽或可用于治療某種疾病或其它病理狀況的肽。它們包括但不局限于以下這些肽促腎上腺皮質(zhì)激素、血管緊張肽i和n、心房肽、鈴蟾肽、緩激肽、降鈣素、小腦肽、強(qiáng)啡肽A、a和P內(nèi)啡肽、內(nèi)皮素、腦啡肽、表皮生長(zhǎng)罔子、Fertirelin、卵泡促性腺激素釋放肽、galanin、胰高血糖素、戈那瑞林、促性腺激素、戈舍瑞林、生長(zhǎng)激素釋放肽、組氨瑞林、胰島素、亮丙瑞林、LHRH、促胃動(dòng)素、納發(fā)瑞林、神經(jīng)降壓素、催產(chǎn)素、促生長(zhǎng)抑制素、P物質(zhì)、胂瘤壞死因子、色氨瑞林和血管升壓素。以上物質(zhì)的類似物、衍生物、拮抗劑、激動(dòng)劑和上述的藥學(xué)可接受的鹽類也可用于此。本發(fā)明的制劑和方法中使用的肽和肽化合物可采用鹽的形式，優(yōu)選的是一種藥學(xué)可接受的鹽。可用的鹽類包括與無(wú)機(jī)酸、有機(jī)酸、無(wú)機(jī)喊或有機(jī)堿所形成的鹽，其為本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所周知.優(yōu)選的是醋酸鹽。在本發(fā)明中優(yōu)選的采用易溶解在無(wú)水極性非質(zhì)子性溶劑中的肽及肽化合物。根據(jù)化合物的溶解度，即化合物溶在特定無(wú)水極性非質(zhì)子性溶劑中至少能達(dá)到一種可接受的量，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可方便地決定采用何種化合物.優(yōu)選的溶解度至少約10%(w/w)。特別優(yōu)選的肽化合物是LHRH相關(guān)化合物，包括亮丙瑞林和醋酸亮丙瑞林。肽的比例可依據(jù)所用化合物、所治療的狀況、化合物的溶解度、預(yù)期的劑量及用藥持續(xù)時(shí)間而變化。(參見如臨床藥理學(xué)基礎(chǔ)(ThePharmacologicalBazisofTherapeutics)Gilman等，第七版(1985)和藥物^(PharmaceuticalSciences)Remington，第十八版(1990),此處引入這些公開作為參考)。高濃度欣制劑的濃度范圍從至少約10Vo(w/w)到該化合物的最大溶解度.優(yōu)逸的范圍是從約20o/o到約60。/o(w/w)。目前優(yōu)選的范圍從約30%到約50%(w/w)，最優(yōu)選的范圍是從約35%到約45%(w/w)。出人意料地發(fā)現(xiàn)，增加溶解于無(wú)水極性質(zhì)子性溶劑中的肽濃度能增加肽制劑的穩(wěn)定性。比如，如圖7中可見，當(dāng)5%、10%、20%和40%的亮丙瑞林的DMSO溶液在80X:貯存8周，定期取樣，分析測(cè)定亮丙瑞林的殘余百分比例，發(fā)現(xiàn)含較高濃度亮丙瑞林的制劑比較低濃度亮丙瑞林制劑更穩(wěn)定。一般說(shuō)來(lái)，本發(fā)明的穩(wěn)定的制劑優(yōu)選的通過(guò)簡(jiǎn)單溶解所需要的治疔有效劑量的肽化合物于所選擇的無(wú)水極性非質(zhì)子性溶劑中而制備。優(yōu)逸的極性非質(zhì)子性溶劑包括DMSO和DMF。如圖8所示，增加本發(fā)明涉及的狀制劑中的水含量增加了肽的降解.降解的增加似乎主要是增加了化學(xué)降解產(chǎn)物，而聚集物的量相對(duì)保持穩(wěn)定(圖9)。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)諸如PEG、PG和PVP等無(wú)水的非質(zhì)子性溶劑也可以任選地加入到所要求的制劑中C.方法學(xué)我們發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定的無(wú)水肽化合物制劑可通過(guò)將肽化合物溶于無(wú)水極性非質(zhì)子性溶劑而制成。通過(guò)將其經(jīng)過(guò)高溫下加速老化處理及測(cè)定制劑的化學(xué)和物理穩(wěn)定性我們考察了這些肢化合物制劑，特別是LHRH相關(guān)化合物亮丙瑞林的穩(wěn)定性。這些研究結(jié)果證明(參見如表n和圖1、2、4及6)這些制劑在37C接近或一年以上的貯存期內(nèi)是穩(wěn)定的。我們也考察了如上所述制備的狀化合物制劑經(jīng)過(guò)2.5兆拉德Y-射線照射后的穩(wěn)定性。結(jié)果如表m所示，表明這些制劑經(jīng)這樣的照射后仍然保持化學(xué)和物理穩(wěn)定。如表I所示，我們考察了多種狀制劑，特別是亮丙瑞林、戈舍瑞林、LHRH、血管緊張肽I、緩激肽、降鈣素、腦啡狀、胰島素、神經(jīng)降壓肽、P物質(zhì)、胰蛋白酶原和血管升壓素的穩(wěn)定性，這是通過(guò)將它們?nèi)芙?或試圖溶解)在無(wú)水極性非質(zhì)子性溶劑DMSO中，然后進(jìn)行高溫加速老化處理進(jìn)行的。測(cè)定制劑的穩(wěn)定性。結(jié)果列于表1，37t;的半衰期，假定Ea=22.2kcal/mol。大部分被考察的肽可溶于DMSO中，在考察的條件下保持穩(wěn)定。特定的狀在特定的無(wú)水極性非質(zhì)子性溶劑中的溶解度和所得溶液的穩(wěn)定性用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的常規(guī)方法很容易測(cè)定。表I:配制在DMSO溶中的肽的穩(wěn)定性<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>40%肽的DMSO制劑在37"C、50K、65"和80"C貯存六個(gè)月，通過(guò)測(cè)定其狀從溶液中總損失情況呈現(xiàn)非線性阿侖尼烏斯動(dòng)力學(xué)關(guān)系，顯示了這些制劑在高溫下的穩(wěn)定性。分析在37t:收集的數(shù)據(jù)得到t卯為14.4個(gè)月，說(shuō)明在37t:穩(wěn)定性仍然非常好。溫度似乎影響本發(fā)明涉及的制劑的降解速率和降解產(chǎn)物的比例。研究亮丙瑞林DMSO制劑表明在65x:和80x:下氧化似乎是主要的化學(xué)降解途徑。而在37x:和sox:時(shí)水解和異構(gòu)化似乎是這些制劑的主要降解途徑。我們也無(wú)意中發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的特定肽制劑是抑菌的(即抑制細(xì)菌生長(zhǎng))、殺菌的(即引起細(xì)菌死亡)和殺芽孢的(即殺死芽孢)。特別是，50-400mg/ml亮丙瑞林制劑呈現(xiàn)抑菌、殺菌和殺芽孢活性。樣品的穩(wěn)定性不受細(xì)菌侵蝕的影響，說(shuō)明從死亡的和被裂解的細(xì)菌中釋放的酶對(duì)產(chǎn)品的穩(wěn)定性不造成負(fù)面影響。這證明這些制劑不助長(zhǎng)酶的活性。已知某些肽如降釣素和亮丙瑞林當(dāng)配制在水溶液中是物理不穩(wěn)定的，易聚集、膠凝化和纖維化。改善物理穩(wěn)定性可增加生物利用度，減少致敏作用和免疫反應(yīng)，能便于進(jìn)行非腸道給藥，包括通過(guò)可植入藥物遞送裝置給藥。我們意外地發(fā)現(xiàn)特定的肽如亮丙瑞林、戈舍瑞林和降釣素制成本發(fā)明的無(wú)水極性非質(zhì)子性溶液制劑不發(fā)生膠凝。甚至在37t:經(jīng)過(guò)12個(gè)月也不發(fā)生膠凝。這顯然是因?yàn)闊o(wú)水極性非質(zhì)子性溶劑使肽形成無(wú)規(guī)則巻曲/a-螺旋構(gòu)象而不折疊成P-折疊結(jié)構(gòu)，因此不膠凝.所以，這些溶劑具有抗膠凝劑的效果。本發(fā)明的一個(gè)主要方面是極性非質(zhì)子性溶劑中含肽化合物的無(wú)水極性溶液在高溫下長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)都是化學(xué)和物理穩(wěn)定的，這種制劑甚至在采用高濃度時(shí)也穩(wěn)定。因此，這些制劑有助于在室溫或高于室溫條件下長(zhǎng)期運(yùn)輸和貯存。它們也適合于用于可植入遞送裝置。本發(fā)明實(shí)施例的公開下面的方法用于完成下列實(shí)施例中的研究。1.醋酸亮丙瑞林溶液的制備醋酸亮丙瑞林(如從Mallinckrodt，St.Louis，Missouri獲得)稱重，然后以適當(dāng)?shù)臐舛扔脭嚢杌螂x心的方法將其溶于栽體(DMSO,DMF,DMSO/PEG，DMSO/PG,或DMSO/PVP)中。干燥DMSO—詞指DMSO制劑在低濕度環(huán)境下制備(即，干的氮?dú)猸h(huán)境)。除非另外說(shuō)明，亮丙瑞林游離堿含量是根據(jù)37K游離堿的潛在值的分析標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算的。除非另外指出，這是指的40%的醋酸亮丙瑞林。2.儲(chǔ)藥室的制備可植入藥物遞送裝置(見如美國(guó)專利，申請(qǐng)?zhí)?8/595,761的公開，此處引入作為參考。)的儲(chǔ)藥室用適當(dāng)?shù)拇姿崃帘鹆秩芤撼錆M。將亮丙瑞林制劑注入用聚合物塞子堵住每一頭的鈦或聚合物儲(chǔ)液室中。然后將儲(chǔ)液室密封在多層鋁箔袋中放入穩(wěn)定性測(cè)試烘箱中。應(yīng)該說(shuō)明的是在這些設(shè)備的儲(chǔ)藥室中的制劑是完全與外界環(huán)境隔絕的。3.反相HPLC(RP-HPLC)全部穩(wěn)定性樣品均使用帶有冷藏自動(dòng)取樣器的梯度洗脫反相HPLC分析亮丙瑞林的濃度和峰面積百分?jǐn)?shù)。分析在4K條件下進(jìn)行以減少樣品的降解。所用色諳條件如下表反相HPLC色譜條件<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>4到6個(gè)不同濃度水平的亮丙瑞林標(biāo)準(zhǔn)(水中)，通常為0.1-1.2mg/ml之間，隨穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)樣品一同進(jìn)樣。樣品分析過(guò)程中進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)校正，兩次校正之間分析樣品不超過(guò)40個(gè)。對(duì)空柱體積至泳動(dòng)45分鐘之間所有的峰的峰面積積分。作出標(biāo)準(zhǔn)亮丙瑞林溶液的積分峰面積與濃度的函數(shù)圖。根據(jù)該線性回歸曲線計(jì)算亮丙瑞林的濃度以測(cè)定樣品穩(wěn)定性。記錄亮丙瑞林峰的峰面積百分?jǐn)?shù)和在亮丙瑞林之前洗脫下來(lái)的所有峰(標(biāo)為"其它")的峰面積百分?jǐn)?shù)之和以及在亮丙瑞林之后洗脫下來(lái)的所有峰(標(biāo)為"聚集物")的峰面積百分?jǐn)?shù)之和，然后作出相對(duì)于各個(gè)樣品時(shí)間點(diǎn)的函數(shù)圖。4.體積排阻色譜(SEC)用無(wú)梯度溶液SEC分析所選穩(wěn)定性樣品的峰面積百分?jǐn)?shù)和分子量，使用帶冷藏自動(dòng)取樣器(4t:)。所用色譜條件列表如下SEC色譜條件<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>測(cè)定分子量需用到體積排阻柱的空柱體積和總體積。用BioRad的高分子量標(biāo)準(zhǔn)和0.1%的丙嗣分別測(cè)定空柱體積和總體積。記錄BioRad分子量標(biāo)準(zhǔn)的第一個(gè)峰和丙酮峰的保留時(shí)間，用下面的公式換算成體積單位。因?yàn)檫@些量對(duì)于特定的SEC柱和HPLC裝置恒定，所以更換SEC柱或改變HPLC裝置要重新測(cè)定空柱體積和總體積。分子量標(biāo)準(zhǔn)的分析進(jìn)行之后進(jìn)行穩(wěn)定性樣品分析。標(biāo)準(zhǔn)混合物約含有大約0.2mg/ml的下列肽法氏嚢肽(MW-449),WLFR肽(MW=619),血管緊張肽(MW-1181),GRF(MW-5108)和細(xì)胞色素C(MW-12394)。選擇這些標(biāo)準(zhǔn)是因?yàn)樗鼈兏采w了亮丙瑞林的分子量且都具有與亮丙瑞林相近的堿性等電點(diǎn)pl(9.8-11.0)。記錄所有峰的面積百分?jǐn)?shù)。用下面公式計(jì)算各分離物質(zhì)的分子量。Vs-流速(ml/min)X樣品峰保留時(shí)間(分鐘)V。-流速(ml/min)X空柱體積峰的保留時(shí)間(分鐘)V產(chǎn)流速(ml/min)X總體積峰的保留時(shí)間(分鐘)Kd=——Vt-V0其中V產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)或樣品體積V。-空柱體積V產(chǎn)總體積計(jì)算每個(gè)肽標(biāo)準(zhǔn)峰的Vs。然后用先前測(cè)出的Vt和V。值計(jì)算各肽的Kd。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)樣品各峰的分子量用以LogMW對(duì)所作的線性回歸直線確定。另外，記錄穩(wěn)定性樣品的峰面積百分?jǐn)?shù)。5.儀器和材料用于RP-HPLC和SEC的儀器和材料如下WatersMillenniumHPLC裝置包括717自動(dòng)取樣器，626泵，6000S控制器，900二極管陣列檢測(cè)器和414折光指數(shù)檢測(cè)器(WatersChromatography,Milford，MA)'HPLC小瓶，48孔和96孔(WatersChromatography,Miford，MA).HaiSilC18，120A，5pm4.6x250mmHPLC柱(HigginsAnalytial，MountainView,CA)PharmaciaPeptide,HR10/30SEC柱(PharmaciaBiotech,Piscataway，NJ)下面的實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但并不意味著以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1醋酸亮丙瑞林制劑的加速穩(wěn)定性研究如上述制備4t)o/o(w/w)溶于載體中的醋酸亮丙瑞林制劑(相當(dāng)亍約37%亮丙瑞林游離堿)并如上述將其注入可植入藥物遞送裝置的儲(chǔ)藥室全部的儲(chǔ)藥室均用鈥制成。通過(guò)將已注滿的儲(chǔ)藥室放入溫箱(PrecisionScientific或Thelco)中，在高溫(80K)下放置七天進(jìn)行加速老化。這相當(dāng)于在37r放置約1.5年或室溫(25t:)下放置約4年。樣品如上述用RP-HPLC和SEC分析，測(cè)定已老化的制劑的化學(xué)和物理穩(wěn)定性。結(jié)果列于表n，說(shuō)明這些制劑能保持LHRH相關(guān)化合物亮丙瑞林的穩(wěn)定性。在每個(gè)制劑中，至少保留了65%亮丙瑞林。表n在80n經(jīng)過(guò)七天鈥儲(chǔ)藥室中醋酸亮丙瑞林極性非質(zhì)子性制劑的穩(wěn)定性制劑第七天亮丙瑞林的百分含量40%溶于DMSO9240%溶于DMSO/PEG(50/50)9040%溶于DMSO/PG(50/50)8640%溶于DMSO/PVP(50/50)9340%溶于DMF9140。/o溶于干燥DMSO89實(shí)施例2經(jīng)輻照的醋酸亮丙瑞林制劑的穩(wěn)定性研究如上述制備的40V。(w/w)醋酸亮丙瑞林DMSO制劑，并如上述將其注入藥物遞送裝置的儲(chǔ)藥室.全部?jī)?chǔ)藥室均用鈥制成。已充滿的儲(chǔ)藥室送到Sterigenics(Tusin，California),在那兒的Sterigenics'TusinMainCell，用鈷60,三級(jí)"搬運(yùn)箱"照射，使它們受到2.5兆拉德y射線的照射。在表m中，標(biāo)有"冷"的樣品是保存在干冰上進(jìn)行運(yùn)輸和照射的。然后將這些樣品按實(shí)施例1的方法加速老化。分別在第零天和第七天取樣，用如上述的RP-HPLC和SEC分析，測(cè)定經(jīng)輻照的制劑的化學(xué)和物理穩(wěn)定性。結(jié)果列于表m，說(shuō)明這些醋酸亮丙瑞林制劑照射后穩(wěn)定。在每個(gè)制劑中至少保留有65%亮丙瑞林，且形成聚集的水平低。表m40。/。(w/w)醋酸亮丙瑞林極性非質(zhì)子性制劑在鈥儲(chǔ)藥室中經(jīng)過(guò)2.5兆拉德Y-射線照射后的穩(wěn)定性制劑照射第7天亮丙瑞林的百分含量(RH-HPIX)SEC第0天第7天%單體%二聚體/三聚體%單體%二聚體/40%溶于DMSO是10098.10.597.71.940%溶于顧SO否卯100098.51.140%溶于DMSO冷9999.10.298.31.440%溶于DMSO是9599.10.895，3240%溶于DMSO否N.D.1000106.1040%溶于DMSO是9099.40.699.42.240%溶于DMSO否1001000104140%溶于DMSO是8899.50.597.71.840%溶于DMSO是8399.50.591.71.5實(shí)施例3醋酸亮丙瑞林制劑的加速長(zhǎng)期穩(wěn)定性研究制備40。/。(w/w)醋酸亮丙瑞林DMSO溶液，注入儲(chǔ)藥室，在80i:下貯存兩個(gè)月，按上文所述方法分析。結(jié)果見圖l(RP-HPLC)和圖2(SEC),表明可回收到81.1%亮丙瑞林，只有14.6%的化學(xué)降解和5.1°/。的物理聚集。制備醋酸亮丙瑞林溶液，灌裝，在80t:貯存六個(gè)月，按上文的方法分析。圖4是亮丙瑞林及其物理和化學(xué)降解產(chǎn)物經(jīng)六個(gè)月期間后的回收?qǐng)D，表明我們可解釋起始的全部肽物質(zhì)和這些肽制劑在80t:表現(xiàn)出很好的穩(wěn)定性。這三個(gè)部分的總和仍保持質(zhì)量平衡。圖5是這些數(shù)據(jù)的自然對(duì)數(shù)，表明這些制劑在整個(gè)測(cè)試溫度范圍內(nèi)呈線性動(dòng)力學(xué)關(guān)系。如上述制備和分析的40%醋酸亮丙瑞林溶液的化學(xué)穩(wěn)定性示于圖6。在37t:九個(gè)月后，出現(xiàn)卯％以上(93.5%)的亮丙瑞林，形成了少于5%(2.9%)的化學(xué)降解產(chǎn)物(圖中標(biāo)為"較早")和少于5%(2.3%)物理降解產(chǎn)物(圖中標(biāo)為"晚期"，且基于反相HPLC色諳曲線，與SEC色譜行為符合)。制備40。A醋酸亮丙瑞林(w/w)DMSO溶液，灌裝入儲(chǔ)藥室中，分別在37"、50"C、65t:或80X;下貯存，如上迷用RP-HPLC分析。結(jié)果按物理藥學(xué)藥物學(xué)中的物理化學(xué)原理，第三版，Martin等，第14章(1983)中所迷方法計(jì)算，表明亮丙瑞林從DMSO制劑中的損失是非線性的。數(shù)據(jù)如下所示，阿侖尼烏斯曲線見圖3。因?yàn)镈MSO制劑貯存于80"C的阿侖尼烏斯曲線顯示亮丙瑞林的損失是非線性的，在37"C收集的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)用于計(jì)算在37"這些制劑的t90為14.4個(gè)月。<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>Ea-非線性實(shí)施例4在DMSO/水中的醋酸亮丙瑞林制劑的穩(wěn)定性研究如上述制備在DMSO、DMSO/水(95:5，90:10，70:30,50:50和30:70)和水溶液中的40。/。醋酸亮丙瑞林(w/w)制劑，在80t:蜉育7天'在第零天和第七天進(jìn)行傅立葉變換紅外光譜(FTIR)分析。結(jié)果顯示，所有考察的制劑經(jīng)加速老化后亮丙瑞林的結(jié)構(gòu)形態(tài)變化非常小。一般來(lái)說(shuō)，在DMSO制劑中肽的結(jié)構(gòu)主要是無(wú)規(guī)則巻曲或a-螺旋，而在水溶液制劑中肽的結(jié)構(gòu)主要是P-折疊。對(duì)于遵照本發(fā)明的精神的本領(lǐng)域普通技術(shù)人員，可對(duì)本發(fā)明的多種實(shí)施方案的上述模式進(jìn)行修飾是顯而易見的。上述這些實(shí)施例只是為了本發(fā)明的舉例，而不是限制本發(fā)明，本發(fā)明的范閨由下述權(quán)利要求限定。權(quán)利要求1.一種肽化合物的穩(wěn)定的無(wú)水制劑，其包括a)至少一種肽化合物；和b)至少一種極性非質(zhì)子性溶劑，其中該肽選自促腎上腺皮質(zhì)激素、血管緊張肽I和II、心房肽、鈴蟾肽、緩激肽、降鈣素、小腦肽、強(qiáng)啡肽A、α和β內(nèi)啡肽、內(nèi)皮素、腦啡肽、表皮生長(zhǎng)因子、Fertirelin、卵泡促性腺激素釋放肽、galanin、胰高血糖素、戈那瑞林、促性腺激素、戈舍瑞林、生長(zhǎng)激素釋放肽、組氨瑞林、胰島素、亮丙瑞林、LHRH、促胃動(dòng)素、納發(fā)瑞林、神經(jīng)降壓素、催產(chǎn)素、促生長(zhǎng)抑制素、P物質(zhì)、腫瘤壞死因子、色氨瑞林和血管升壓素。以上物質(zhì)的類似物、衍生物、拮抗劑、激動(dòng)劑和上述的藥學(xué)可接受的鹽類。2.權(quán)利要求l的制劑，其包含至少10。/。(w/w)的肽化合物。3.權(quán)利要求l的制劑，其包含至少30。/。(w/w)的肽化合物。4.權(quán)利要求l的制劑，其在80'C穩(wěn)定至少兩個(gè)月。5.權(quán)利要求l的制劑，其在37'C穩(wěn)定至少三個(gè)月。6.權(quán)利要求l的制劑，其在37'C穩(wěn)定至少一年.7.權(quán)利要求l的制劑，其中該極性非質(zhì)子性溶劑選自DMSO和DMF。8.權(quán)利要求1的制劑，其中該極性非質(zhì)子性溶劑具有抗膠凝刑作用。全文摘要本發(fā)明涉及肽化合物的穩(wěn)定的無(wú)水極性非質(zhì)子性制劑。這些穩(wěn)定的制劑包含無(wú)水極性非質(zhì)子性溶劑中的肽化合物。它們能在高溫下長(zhǎng)期貯存，特別適用于長(zhǎng)時(shí)期遞送藥物的可植入遞送裝置。文檔編號(hào)C07K7/23GK101116742SQ200610149399公開日2008年2月6日申請(qǐng)日期1997年7月1日優(yōu)先權(quán)日1996年7月3日發(fā)明者C·L·斯蒂威森,S·J·普里斯特雷斯基申請(qǐng)人:阿爾薩公司