專利名稱：：羥基紅花黃色素a及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及從中藥紅花中提取的羥基紅花黃色素A，及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：紅花為菊科植物紅花屬紅花(Cartha咖stinctoriusL.)的干燥花，性味辛溫，入心、肝經(jīng)，具祛瘀止痛功效，是多種活血化瘀方劑的君藥。對(duì)紅花中有效成分的提取越來越引起有關(guān)人士的關(guān)注，以往研究表明紅花活血的有效成分主要集中在水溶性的紅花黃色素。紅花黃色素為查耳酮類化合物，具有擴(kuò)張冠脈、抗氧化、保護(hù)心肌、降血壓、免疫抑制和腦保護(hù)等多種藥理學(xué)功效。近年來研究證實(shí)紅花的有效成分主要集中在水溶性的黃色素部分，初步分析表明，紅花黃色素是三種水溶性成份的混合物羥基紅花黃色素A(Hydroxysaffloryellow-A)、紅花黃色素B、紅花黃色素C。研究表明水溶性的紅花黃色素中羥基紅花黃色素A(hydroxysaffloryellow-A)的含量最高，且是紅花藥理功效的最有效水溶性部位，它的結(jié)構(gòu)式為<formula>complexformulaseeoriginaldocumentpage4</formula>文獻(xiàn)臧寶霞、金鳴、司南等，羥基紅花黃色素A對(duì)血小板活化因子的拮抗作用[J]。藥學(xué)學(xué)報(bào)，2002，37(9):696顯示，羥基紅花黃色素A通過拮抗血小板活化因子的作用抑制血小板的聚集。中國專利[申請(qǐng)公開CN1422616，發(fā)明名稱羥基紅花黃色素A在制備治療、預(yù)防心腦血管疾病方面的藥物用途和申請(qǐng)公開CN1640392，發(fā)明名稱大劑量的羥基紅花黃色素A或其可藥用鹽在缺血引起的急性腦中風(fēng)的藥物中的應(yīng)用]明確了羥基紅花黃色素A對(duì)缺血性腦中風(fēng)具有預(yù)防和治療作用。目前己有關(guān)于羥基紅花黃色素A的制備方法，CN1422616和CN1640392均公開了采用水提醇沉的提取方法，與大孔吸附樹脂柱層析法和聚酰胺吸附法組合，獲得羥基紅花黃色素A。由于紅花經(jīng)過水提取后，提取液中雖然黃色素含量較大，同時(shí)水溶性的多糖、蛋白質(zhì)等干擾物質(zhì)也大量出現(xiàn)，由于紅花黃色素的水溶性較好，若采用醇沉的方式，即易將黃色素和雜質(zhì)一起沉淀出來，黃色素?fù)p失較大。而且，由于采用聚酰胺吸附法，雖然效果較好，但是在實(shí)際應(yīng)用中受到聚酰胺質(zhì)量不穩(wěn)定的影響較大，預(yù)處理周期長且復(fù)雜，應(yīng)用難度較大，不易應(yīng)用于大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)中。CN1475272采用"提取-分離-醇沉_純化-再純化-除菌冷凍干燥"工藝制備，將水提取液柱層析分離后再醇沉然后再柱層析純化，保證了羥基紅花黃色素A的純度，其含量高達(dá)90%以上，但其收率很低，僅僅高于1%，不到2%。如此小的收率不利于工業(yè)大規(guī)?；a(chǎn)，無實(shí)際應(yīng)用價(jià)值?？梢姡壳吧袩o基于收率較高的羥基紅花黃色素A的制備方法，而同時(shí)又能保證所制備的羥基紅花黃色素A的純度較高。本發(fā)明人在對(duì)紅花提取液進(jìn)行分離純化的過程中驚奇地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)紅花提取液不經(jīng)醇沉，直接將水提取液進(jìn)行兩步柱層析，并按照不同的柱床徑高比將層析柱裝成不同的高度時(shí)，對(duì)羥基紅花黃色素A的收率影響很大。本發(fā)明人通過多次試驗(yàn)，選定了能保證羥基紅花黃色素A收率高的柱床徑高比范圍，此外本發(fā)明人應(yīng)用Molisch反應(yīng)和茚三酮反應(yīng)來監(jiān)測(cè)層析分離過程以保證羥基紅花黃色素A的純度，從而完成了本發(fā)明。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種純度高的羥基紅花黃色素A，該羥基紅花黃色素A用下述方法制備1)提取取紅花藥材，加12倍量水8(TC下提取3次，每次1.5小時(shí)，合并提取液，濃縮至6(TC下相對(duì)密度為1.10-1.14，靜置24小時(shí)后離心分取上清液；2)分離取上清液柱層析，上清液體積與柱床體積之比為1:8-12,柱床徑高比為1:7-13，用水以18-22ml/min的流速洗脫至洗脫液Molisch反應(yīng)及茚三酮反應(yīng)呈陰性,再用5個(gè)柱床體積的5%乙醇溶液以18-22ml/min的流速洗脫，收集5%乙醇洗脫溶液，濃縮至5(TC下相對(duì)密度為1.2，得濃縮液A;3)純化取濃縮液A柱層析，濃縮液體積與柱床體積之比為1:18-22的量，柱床徑高比為1:9-15，用水以8-12ml/min的流速洗脫，收集黃色素色帶，濃縮至5(TC下相對(duì)密度為1.2，得濃縮液B;4)再純化取濃縮液B按步驟3)所述工藝，以水為洗脫液反復(fù)純化3次，得濃縮液C;5)除菌、噴霧干燥將濃縮液C用垂融玻璃G5初濾后，再采用0.2ym微孔濾膜濾過除菌，然后立即噴霧干燥，出口溫度8(TC，得羥基紅花黃色素A干粉。本發(fā)明的另一目的在于提供一種純度高收率高且工藝簡(jiǎn)化的羥基紅花黃色素A的制備方法，該方法包括如下步驟1)提取取紅花藥材，加12倍量水8CTC下提取3次，每次1.5小時(shí)，合并提取液，濃縮至60。C下相對(duì)密度為1.10-1.14，靜置24小時(shí)后離心分取上清液；2)分離取上清液柱層析，上清液體積與柱床體積之比為1:8-12，柱床徑高比為1:7-13,用水以18-22ml/min的流速洗脫至洗脫液Molisch反應(yīng)及茚三酮反應(yīng)呈陰性，再用5個(gè)柱床體積的5%乙醇溶液以18-22ml/min的流速洗脫，收集5%乙醇洗脫溶液，濃縮至50'C下相對(duì)密度為1.2，得濃縮液A;3)純化取濃縮液A柱層析，濃縮液體積與柱床體積之比為1:18-22的量，柱床徑高比為1:9-15，用水以8-12ml/min的流速洗脫，收集黃色素色帶，濃縮至5(TC下相對(duì)密度為1.2，得濃縮液B;4)再純化取濃縮液B按步驟3)所述工藝，以水為洗脫液反復(fù)純化3次，得濃縮液C;5)除菌、噴霧干燥將濃縮液C用垂融玻璃G5初濾后，再采用0.2ym微孔濾膜濾過除菌，然后立即噴霧干燥，出口溫度80。C，得羥基紅花黃色素A干粉。在本發(fā)明的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，歩驟2)中所述的柱層析是在洗脫過程中，上樣體積與柱床體積之比為1:10，柱床徑高比為1:10。合理選擇層析柱的長度和直徑是保證分離效果的重要環(huán)節(jié)。本發(fā)明在相同的樣品濃度下，上相同的樣品體積，以相同的洗脫流速考察了不同徑高比的凝膠柱對(duì)分離的影響，結(jié)果表明高徑高比的柱床有利于提高分離度和保證終產(chǎn)品中有效成分的含量。此外，上樣體積也是影響分離效果的重要因素，上樣體積或上樣量小，分辨效果好。本發(fā)明在上樣體積與柱床體積之比為1:10，柱床徑高比為1:10的條件下進(jìn)行柱層析，不僅提高了分離度，而且保證了終產(chǎn)品中有效成分的本發(fā)明中的柱層析，為選用大孔樹脂柱和/或葡聚糖凝膠柱進(jìn)行柱層析。柱層析的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，是分離中所述的柱層析為使用大孔樹脂柱進(jìn)行柱層析，純化中所述的柱層析為使用葡聚糖凝膠柱進(jìn)行柱層析。因?yàn)榧t花經(jīng)過水提取后，提取液中雖然黃色素含量較大，同時(shí)水溶性的多糖、蛋白質(zhì)等干擾物質(zhì)也大量出現(xiàn)，由于紅花黃色素的水溶性較好，若采用醇沉的方式，極易將黃色素和雜質(zhì)一起沉淀出來，造成損失。大孔吸附樹脂在中藥水溶性成份的粗分中己經(jīng)得到廣泛應(yīng)用，選用大孔樹脂進(jìn)行粗分，可以使黃色素與其它水溶性雜質(zhì)初步分離。由于大孔吸附樹脂只適合粗分，為了更好更多地富集黃色素，還需要進(jìn)一步的精制處理。曾釆用聚酰胺層析法，雖然效果較好，但是在實(shí)際應(yīng)用中受到聚酰胺質(zhì)量不穩(wěn)定的影響較大，預(yù)處理過程周期長且復(fù)雜，應(yīng)用難度較大，不適宜應(yīng)用在工業(yè)生產(chǎn)中。本發(fā)明結(jié)合兩步柱層析對(duì)紅花水提取液進(jìn)行分離、純化，先應(yīng)用大孔吸附樹脂粗制，再應(yīng)用葡聚糖凝膠精制，不僅簡(jiǎn)化了工藝過程，縮短了生產(chǎn)周期，從而提高了生產(chǎn)效率，節(jié)約了生產(chǎn)成本，而且黃色素的損失極少，從而收率較高。本發(fā)明采用的葡聚糖凝膠質(zhì)量穩(wěn)定，可以反復(fù)使用，且所用洗脫劑只需用水即可。本發(fā)明中的大孔樹脂柱為現(xiàn)有的大孔樹脂柱，優(yōu)選為非極性大孔樹脂，作為非極性大孔樹脂柱，優(yōu)選為D101非極性大孔樹脂柱。紅花水提取液中含有大量的干擾物質(zhì)多糖和蛋白質(zhì)。與多糖及蛋白質(zhì)相比，黃色素的親脂性要稍強(qiáng)，因此，選用非極性大孔吸附樹脂進(jìn)行粗分。適宜的大孔吸附樹脂不僅要有一定的選擇性，同時(shí)還應(yīng)該要有較高的吸附容量和解吸率，D101型樹脂的選擇性、吸附容量和解吸率均較好，且應(yīng)用更為普遍，還可以盡可能的避免吸附損失。本發(fā)明步驟2)中柱層析水洗脫后采用Molisch反應(yīng)和茚三酮反應(yīng)來監(jiān)測(cè)粗分中是否含有多糖和蛋白質(zhì)從而監(jiān)測(cè)除雜質(zhì)是否徹底，從而保證了羥基紅花黃色素A的純度。紅花中含有多糖和蛋白質(zhì)，若未完全除去，會(huì)直接影響羥基紅花黃色素A的純度。本發(fā)明中采用Molisch反應(yīng)和茚三酮反應(yīng)提示本發(fā)明的方法制備所得的羥基紅花黃色素A均無蛋白質(zhì)和糖類反應(yīng)，表明其羥基紅花黃色素A的純度較高。本發(fā)明中的葡聚糖凝膠柱選用SeophadexG-25、LH-20型，優(yōu)選SeophadexG-25。羥基紅花黃色素A的分子量為612，符合G-25、LH-20的分離范圍。本發(fā)明優(yōu)選G-25，因?yàn)镚-25相對(duì)價(jià)廉，而且流速易于控制。作為Se叩hadexG-25，優(yōu)選柱床徑高比為1:7-17的SeophadexG-25,柱床徑高比為1:12最優(yōu)，因?yàn)閺礁弑葹?:12的柱床有利于提高分離度，并保證終產(chǎn)品中有效成分的含量。本發(fā)明中采用噴霧干燥法得到的羥基紅花黃色素A粉末，產(chǎn)品質(zhì)量好，顆粒細(xì)而松脆?，F(xiàn)有技術(shù)采用冷凍干燥法，但冷凍干燥需要高度真空與低溫，耗能大，成本高，不利于工業(yè)生產(chǎn)。本發(fā)明采用噴霧干燥，不僅產(chǎn)品的質(zhì)量好，溶解性能好，含菌量低，而且干燥時(shí)間很短，一般只需零點(diǎn)幾秒至十幾秒，從而大大提高了生產(chǎn)效率，節(jié)約了成本。本發(fā)明的又一目的是提供羥基紅花黃色素A在制備預(yù)防和治療心腦血管疾病腦梗塞、高血壓腦出血等的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的預(yù)防和治療腦血管疾病腦梗塞、高血壓腦出血等的藥物可為凍干粉針劑、片劑、膠囊劑、注射劑等多種劑型。本發(fā)明采取水提取結(jié)合柱層析進(jìn)行提取、分離和純化制備羥基紅花黃色素A，有效的富集了紅花的有效部位。這種方法不僅可有效地除去蛋白質(zhì)及糖類雜質(zhì)，明顯提高羥基紅花黃色素A的純度，而且通過嚴(yán)格控制柱層析工藝中的柱子徑高比、上樣量、洗脫流速，從而大大提高了收率。本發(fā)明的方法制備所得的羥基紅花黃色素A均無蛋白質(zhì)及糖類反應(yīng)，本發(fā)明的方法制備所得的羥基紅花黃色素A可用高效液相色譜法測(cè)定羥基紅花黃色素A含量，該方法重現(xiàn)性、穩(wěn)定性好。本發(fā)明的方法制備所得的羥基紅花黃色素A的含量高達(dá)99y。。由于本發(fā)明的羥基紅花黃色素A制備方法采取水提取結(jié)合兩步柱層析，并嚴(yán)格控制柱層析工藝中的柱床徑高比和上樣量，明顯地提高了收率，高達(dá)50%多，且工藝簡(jiǎn)化，縮短生產(chǎn)周期，從而提高生產(chǎn)效率，節(jié)約生產(chǎn)成本。且此法操作簡(jiǎn)便，易于掌握，可應(yīng)用在大規(guī)模、高效率、工業(yè)化生產(chǎn)中。本發(fā)明的預(yù)防和治療腦血管疾病腦梗塞、高血壓腦出血等的藥物中主要活性成分羥基紅花黃色素A的純度稍高于現(xiàn)有技術(shù)，其療效也稍優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)。圖1為本發(fā)明方法按實(shí)施例1制得的羥基紅花黃色素A的含量測(cè)試結(jié)果圖；圖2為本發(fā)明方法按實(shí)施例1制得的羥基紅花黃色素A的指紋圖譜；圖3為對(duì)照用羥基紅花黃色素A的指紋圖譜。具體實(shí)施例方式以下通過實(shí)施例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明藥物的制備方法。[實(shí)施例l]制備羥基紅花黃色素A1)提取取紅花藥材100g，加1200g水8(TC下提取3次，每次1.5小時(shí)，合并提取液，濃縮至60'C下相對(duì)密度為1.12，靜置24小時(shí)后離心分取上清液；2)分離取上清液，按上清液體積與柱床體積之比為1:10的量加至已處理過的柱床徑高比為1:10的D101大孔吸附樹脂柱上，用水以20ml/min的流速洗脫至洗脫液Molisch反應(yīng)及茚三酮反應(yīng)呈陰性，再用5個(gè)柱床體積的5%乙醇溶液以20ml/min的流速洗脫，收集5%乙醇洗脫溶液，濃縮至50。C下相對(duì)密度為1.2,得濃縮液A;3)純化取濃縮液A按上清液體積與柱床體積之比為l:20的量加至柱床徑高比為1:12的葡聚糖凝膠SeophadexG-25柱上，用水以10ml/min的流速洗脫，收集黃色素部分，濃縮至5(TC下相對(duì)密度為1.2，得濃縮液B;4)再純化取濃縮液B按步驟3)所述工藝，以水為洗脫液反復(fù)純化3次，得濃縮液C;5)除菌、噴霧干燥將濃縮液C用垂融玻璃G5初濾后，再采用0.2ym微孔濾膜濾過除菌，然后立即噴霧干燥，出口溫度8(TC，得羥基紅花黃色素A干粉60g。計(jì)算得羥基紅花黃色素A收率為52.5%，用高效液相色譜法測(cè)定羥基紅花黃色素A含量為99.5%，見圖1。通過高效液相色譜法測(cè)定按照上述所述的歩驟制備的羥基紅花黃色素A和按CN1475272實(shí)施例10所述的步驟制備的羥基紅花黃色素A的含量，并測(cè)定羥基紅花黃色素A的收率，結(jié)果顯示于表l。<table>complextableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>從表1可以看出，與CN1475272相比較，可見采用本發(fā)明申請(qǐng)的制備方法制備羥基紅花黃色素A的收率明顯大大提高了，其純度也比CN1475272稍高。而且本發(fā)明申請(qǐng)的工藝較CN1475272歩驟少，易于工業(yè)化生產(chǎn)。實(shí)施例2、3、4、5為D101大孔吸附樹脂柱層析分離、葡聚糖凝膠Se叩hadexG-25純化法制備羥基紅花黃色素A，具體步驟同實(shí)施例1，不同之處在于按照不同的柱床徑高比將D101大孔吸附樹脂柱裝成不同的高度。實(shí)施例6、7、8、9為D101大孔吸附樹脂柱層析分離、葡聚糖凝膠Se叩hadexG-25純化法制備羥基紅花黃色素A，具體歩驟同實(shí)施例1，不同之處在于按照不同的柱床徑高比將葡聚糖凝膠SeophadexG-25柱裝成不同的高度。實(shí)施例10、11為D101大孔吸附樹脂柱層析分離、葡聚糖凝膠Se鄰hadexG-25純化法制備羥基紅花黃色素A，具體步驟同實(shí)施例l,不同之處在于分離過程中按照不同的上樣體積與柱床體積之比進(jìn)行上樣。實(shí)施例12、13為D101大孔吸附樹脂柱層析分離、葡聚糖凝膠Se叩hadexG-25純化法制備羥基紅花黃色素A,具體歩驟同實(shí)施例1，不同之處在于純化過程中按照不同的上樣體積與柱床體積之比進(jìn)行上樣。投入紅花藥材量均為100g，加入水量均為1200g。各實(shí)施例各歩驟工藝條件見表2。表2<table>Complextableseetheoriginaldocumentpage10</column></row><table>按本發(fā)明實(shí)施例1方法制得羥基紅花黃色素A，按以下制劑實(shí)施例方法制得可使用的凍干粉針劑、膠囊劑、片劑及注射液。羥基紅花黃色素A凍干粉針劑羥基紅花黃色素A25g甘露醇25g加注射用水至400ml分別稱取羥基紅花黃色素A干燥粉末、甘露醇，加注射用水使溶解并添加注射用水至全量，攪勻，無菌過濾，濾液分裝于西林瓶中，每瓶0.4ml,真空冷凍干燥，壓塞，封鋁蓋。制得羥基紅花黃色素A凍干粉針劑。羥基紅花黃色素A凍干粉針劑羥基紅花黃色素A25g甘露醇50g加注射用水至800ml分別稱取羥基紅花黃色素A干燥粉末、甘露醇，加注射用水使溶解并添加注射用水至全量，攪勻，無菌過濾，濾液分裝于西林瓶中，每瓶0.8ml，真空冷凍干燥，壓塞，封鋁蓋。制得羥基紅花黃色素A凍干粉針劑。羥基紅花黃色素A凍干粉針劑羥基紅花黃色素A25g甘露醇75g加注射用水至1200ml分別稱取羥基紅花黃色素A干燥粉末、甘露醇，加注射用水使溶解并添加注射用水至全量，攪勻，無菌過濾，濾液分裝于西林瓶中，每瓶1.2ml，真空冷凍干燥，壓塞，封鋁蓋。制得羥基紅花黃色素A凍干粉針劑。羥基紅花黃色素A膠囊劑羥基紅花黃色素A50g干淀粉150g分別稱取羥基紅花黃色素A干燥粉末和干淀粉，混合均勻后，分裝入1000個(gè)硬膠囊中，得輕基紅花黃色素A口服膠囊劑。羥基紅花黃色素A片劑羥基紅花黃色素A50g硬脂酸鎂10g淀粉100g分別稱取羥基紅花黃色素A干燥粉末、硬脂酸鎂及淀粉，混合均勻后，按常規(guī)制藥方法經(jīng)壓片、包衣、分裝、包裝等工藝，得IOOO片羥基紅花黃色素A片劑。羥基紅花黃色素A注射液羥基紅花黃色素A70mg加0.9%氯化鈉注射液至250ml分別稱取羥基紅花黃色素A干燥粉末，加0.9%氯化鈉注射液使溶解并添加0.9%氯化鈉注射液至全量，按常規(guī)方法經(jīng)灌裝、封口、滅菌等步驟制得羥基紅花黃色素A注射液。羥基紅花黃色素A注射液羥基紅花黃色素A140mg加0.9%氯化鈉注射液至500ml分別稱取羥基紅花黃色素A干燥粉末，加0.9%氯化鈉注射液使溶解并添加0.9%氯化鈉注射液至全量，按常規(guī)方法經(jīng)灌裝、封口、滅菌等步驟制得羥基紅花黃色素A注射液。羥基紅花黃色素A注射液羥基紅花黃色素A280mg加0.9%氯化鈉注射液至1000ml分別稱取羥基紅花黃色素A干燥粉末，加0.9%氯化鈉注射液使溶解并添加0.9%氯化鈉注射液至全量，按常規(guī)方法經(jīng)灌裝、封口、滅菌等步驟制得羥基紅花黃色素A注射液。以下通過臨床療效觀察試驗(yàn)來進(jìn)一歩闡述本發(fā)明藥物的有益效果。羥基紅花黃色素A凍干粉針劑治療急性腦梗塞的療效觀察1、一般資料收治50例急性腦梗塞患者，隨機(jī)分成治療組和對(duì)照組各25例。治療組男15例，女10例，年齡50-76歲，單灶性腦梗塞20例，多灶性腦梗塞3例，腔隙性腦梗塞2例；頸內(nèi)動(dòng)脈系統(tǒng)梗塞20例，椎基底動(dòng)脈系統(tǒng)梗塞5例。對(duì)照組男18例，女7例，年齡56-80歲，單灶性腦梗塞18例，多灶性腦梗塞5例，腔隙性腦梗塞2例；頸內(nèi)動(dòng)脈系統(tǒng)梗塞18例，椎基底動(dòng)脈系統(tǒng)梗塞7例。2、診斷標(biāo)準(zhǔn)(1)第二屆全國腦血管病專題會(huì)議制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)(2)計(jì)算機(jī)斷層掃描(CT)檢査診斷3、治療方法兩組病人平均于發(fā)病后6天-11天在一般藥物治療基礎(chǔ)上加用對(duì)照藥物。治療組制劑實(shí)施例1的羥基紅花黃色素A凍干粉針劑(含羥基紅花黃色素A25mg)靜脈滴注，每人每日2次，每次1瓶。對(duì)照組CN1475272的羥基紅花黃色素A凍干粉針劑(含羥基紅花黃色素A25mg)靜脈滴注，每人每閂2次。兩組病人均為4周一療程，間隔4天進(jìn)行第二療程。兩療程結(jié)束時(shí)評(píng)定臨床療效，其它對(duì)癥治療兩組病人相似。4、治療結(jié)果見表3。表3:兩組病人療效比較顯著好轉(zhuǎn)(例數(shù))顯著好轉(zhuǎn)率(%)顯效(例數(shù))顯效率(%)無效(例數(shù))無效率(%)總有效率(%)治療組265223461298對(duì)照組255023462496結(jié)果表明，制劑實(shí)施例1的羥基紅花黃色素A凍干粉針劑對(duì)急性腦梗塞患者有明顯的治療作用，與CN1475272的羥基紅花黃色素A凍干粉針劑相比，本發(fā)明產(chǎn)品的羥基紅花黃色素A凍干粉針劑的效果較優(yōu)。將本發(fā)明的其它實(shí)施例所制備的羥基紅花黃色素A的藥物應(yīng)用于本試驗(yàn)例可獲得相同的效果。權(quán)利要求1、一種羥基紅花黃色素A，其特征在于該羥基紅花黃色素A用下述方法制備1)提取取紅花藥材，加12倍量水80℃下提取3次，每次1.5小時(shí)，合并提取液，濃縮至60℃下相對(duì)密度為1.10-1.14，靜置24小時(shí)離心分取上清液；2)分離取上清液柱層析，上清液體積與柱床體積之比為1∶8-12，柱床徑高比為1∶7-13，用水以18-22ml/min的流速洗脫至洗脫液Molisch反應(yīng)及茚三酮反應(yīng)呈陰性，再用5個(gè)柱床體積的5％乙醇溶液以18-22ml/min的流速洗脫，收集5％乙醇洗脫溶液，濃縮至50℃下相對(duì)密度為1.2，得濃縮液A；3)純化取濃縮液A柱層析，濃縮液體積與柱床體積之比為1∶18-22，柱床徑高比為1∶9-15，用水以8-12ml/min的流速洗脫，收集黃色素色帶，濃縮至50℃下相對(duì)密度為1.2，得濃縮液B；4)再純化取濃縮液B按步驟3)所述工藝，以水為洗脫液反復(fù)純化3次，得濃縮液C；5)除菌、噴霧干燥將濃縮液C用垂融玻璃G5初濾后，再采用0.2μm微孔濾膜濾過除菌，然后立即噴霧干燥，出口溫度80℃，得羥基紅花黃色素A干粉。2、一種羥基紅花黃色素A的制備方法，其特征在于該方法包括下述順序的歩驟1)提取取紅花藥材，加12倍量水8(TC下提取3次，每次1.5小時(shí)，合并提取液，濃縮至60'C下相對(duì)密度為1.10-1.14，靜置24小時(shí)后離心分取上清液；2)分離取上清液柱層析，上清液體積與柱床體積之比為1:8-12，柱床徑高比為1:7-13，用水以18-22ml/min的流速洗脫至洗脫液Molisch反應(yīng)及茚三酮反應(yīng)呈陰性，再用5個(gè)柱床體積的5%乙醇溶液以18-22ml/min的流速洗脫，收集5%乙醇洗脫溶液，濃縮至5(TC下相對(duì)密度為1.2，得濃縮液A;3)純化取濃縮液A柱層析，濃縮液體積與柱床體積之比為1:18-22，柱床徑高比為1:9-15，用水以8-12ml/min的流速洗脫，收集黃色素色帶，濃縮至5(TC下相對(duì)密度為1.2，得濃縮液B;4)再純化取濃縮液B按步驟3)所述工藝，以水為洗脫液反復(fù)純化3次，得濃縮液C;5)除菌、噴霧干燥將濃縮液C用垂融玻璃G5初濾后，再采用0.2iim微孔濾膜濾過除菌，然后立即噴霧干燥，出口溫度8(TC，得羥基紅花黃色素A干粉。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的羥基紅花黃色素A的制備方法，其特征在于步驟2)中所述的上清液體積與柱床體積之比為1:10，所述的柱床徑高比為1:9-11;步驟3)中所述的濃縮液體積與柱床體積之比為1:20，所述的柱床徑高比為1:11-13。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的羥基紅花黃色素A的制備方法，其特征在于歩驟2)中所述的柱床徑高比為1:10，步驟3)中所述的柱床徑高比為1:12。5、根據(jù)權(quán)利要求2所述的羥基紅花黃色素A的制備方法，其特征在于所述的柱層析為應(yīng)用大孔樹脂柱和/或葡聚糖凝膠柱進(jìn)行柱層析。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的羥基紅花黃色素A的制備方法，其特征在于歩驟2)中所述的柱層析為使用大孔樹脂柱進(jìn)行柱層析，步驟3)中所述的柱層析為使用葡聚糖凝膠柱進(jìn)行柱層析。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的羥基紅花黃色素A的制備方法，其特征在于所述的大孔樹脂柱為非極性大孔樹脂柱。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的羥基紅花黃色素的制備方法，其特征在于所述的非極性大孔樹脂柱為D101非極性大孔樹脂柱。9、權(quán)利要求1所述的羥基紅花黃色素A在制備預(yù)防及治療涉及腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的羥基紅花黃色素A，其特征在于藥物可制成凍干粉針劑、膠囊劑、片劑或注射液。全文摘要本發(fā)明涉及從中藥材紅花中提取的羥基紅花黃色素A，及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明提供的提取羥基紅花黃色素A的方法按照不同的徑高比裝填層析柱，并根據(jù)不同的上樣體積與柱床體積之比來上樣進(jìn)行柱層析，從而對(duì)紅花提取液進(jìn)行分離純化。此工藝簡(jiǎn)單，步驟少，成本低，收率高，無環(huán)境污染，適用于工業(yè)化、大規(guī)?；a(chǎn)，提取羥基紅花黃色素A收率達(dá)50％多，應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定的羥基紅花黃色素A的含量高達(dá)99.5％。應(yīng)用羥基紅花黃色素A制成的藥物對(duì)預(yù)防和治療腦血管疾病腦梗塞、高血壓腦出血等有顯著療效。文檔編號(hào)C07H15/20GK101195647SQ200610160959公開日2008年6月11日申請(qǐng)日期2006年12月6日優(yōu)先權(quán)日2006年12月6日發(fā)明者煒楊申請(qǐng)人:煒楊