專利名稱：丙型肝炎病毒抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明主要涉及抗病毒化合物，更具體地講，涉及抑制丙型肝炎病毒(HCV)編碼的NS3蛋白酶的功能的化合物、包含這類化合物的組合物以及抑制NS3蛋白酶功能的方法。
背景技術(shù)：
HCV為一種主要的人病原體，全世界約1.7億人口感染了這種病毒，為感染了1型人免疫缺陷病毒人數(shù)的5倍。這些HCV感染個(gè)體的大部分發(fā)展成嚴(yán)重的慢性肝疾病，包括肝硬化和肝細(xì)胞癌(Lauer，G.M.；Walker，B.D.N.Engl.J.Med.(2001)，345，41-52)。
近年來(lái)最有效的HCV療法采用α-干擾素和利巴韋林的聯(lián)合藥物進(jìn)行治療，在40％的患者中產(chǎn)生持續(xù)的療效(Poynard，T.等，Lancet(1998)，352，1426-1432)。最近的臨床結(jié)果表明作為單-一治療藥物而言，聚乙二醇化(pegylated)的α-干擾素優(yōu)于未改性的α-干擾素(Zeuzem，S.等，N.Engl.J.Med.(2000)，343，1666-1672)。但是，即使是采用包含聚乙二醇化的α-干擾素和利巴韋林的聯(lián)合藥物的實(shí)驗(yàn)性治療方案，大部分的患者還是沒(méi)能獲得病毒數(shù)量的持續(xù)減少。因此，這明確表明長(zhǎng)期需要發(fā)展治療HCV感染的有效治療藥物。
HCV是一種正鏈RNA病毒。根據(jù)對(duì)推斷出的氨基酸序列和在5′非翻譯區(qū)的廣泛相似性的比較，將HCV歸類為黃病毒科的一個(gè)獨(dú)立的屬。黃病毒科的所有成員均具有包膜的病毒體，所述病毒體包含正鏈RNA基因組，通過(guò)翻譯單一、連續(xù)、可讀框來(lái)編碼所有已知的病毒特異性蛋白質(zhì)。
在核苷酸和整個(gè)HCV基因組的編碼氨基酸序列中發(fā)現(xiàn)大量的異種。至少已經(jīng)表征出六種主要的基因型，也已經(jīng)描述了50種以上的亞型。分布在全世界的各種主要的HCV基因型各不相同，HCV的遺傳異質(zhì)性的臨床顯著性仍是難以理解，盡管在基因型對(duì)病理及治療的可能影響方面已進(jìn)行了大量的研究工作。
單鏈HCV RNA基因組的鏈長(zhǎng)約9500個(gè)核苷酸并具有編碼約3000個(gè)氨基酸的單大多蛋白單可讀框(ORF)。在受感染的細(xì)胞中，這種多蛋白被細(xì)胞蛋白酶和病毒蛋白酶在多個(gè)部位裂解，產(chǎn)生結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)(NS)蛋白。在HCV的情況中，成熟非結(jié)構(gòu)蛋白代(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)受到兩種病毒蛋白酶作用。第一種沒(méi)能很好地表征，其在NS2-NS3接合處裂解；第二種為包含在NS3的N末端區(qū)域處的絲氨酸蛋白酶(因此稱為NS3蛋白酶)，其介導(dǎo)NS3下游所有的裂解，包括在NS3-NS4A裂解部位的順式裂解以及在剩余的NS4A-NS4B、NS4B-NS5A和NS5A-NS5B部位的反式裂解。NS4A蛋白似乎具有多種功能，作為NS3蛋白酶的輔因子并可能輔助NS3的膜定位，以及作為其它病毒復(fù)制酶組分。NS3蛋白與NS4A形成的絡(luò)合物似乎對(duì)于各種加工事件是必須的，增強(qiáng)在所有這些部位的蛋白水解效果。NS3蛋白還顯示出三磷酸核苷激酶和RNA解旋酶活性。NS5B為一種RNA-依賴性的RNA聚合酶，參與HCV的復(fù)制。
在顯示出抑制HCV復(fù)制效能的化合物中，作為選擇性HCV絲氨酸蛋白酶抑制劑的有美國(guó)專利第6,323,180號(hào)中公開(kāi)的肽化合物。
發(fā)明概述本發(fā)明提供一種式I的化合物，包括其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或前藥，
其中(a)R1為C1-8烷基、C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基；(b)m為1或2；(c)n為1或2；(d)R2為H、C1-6烷基、C2-6烯基或C3-7環(huán)烷基，各任選被鹵素取代；(e)R3為C1-8烷基，任選被以下基團(tuán)取代鹵基、氰基、氨基、C1-6二烷基氨基、C6-10芳基、C7-14烷基芳基、C1-6烷氧基、羧基、羥基、芳氧基、C7-14烷基芳氧基、C2-6烷基酯、C8-15烷基芳基酯；C3-12烯基、C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，其中所述環(huán)烷基或烷基環(huán)烷基任選被以下基團(tuán)取代羥基、C1-6烷基、C2-6烯基或C1-6烷氧基；或R3與其連接的碳原子一起形成C3-7環(huán)烷基，任選被C2-6烯基取代；(f)Y為H、被硝基取代的苯基、被硝基取代的吡啶基或任選被以下基團(tuán)取代的C1-6烷基氰基、OH或C3-7環(huán)烷基；條件是若R4或R5為H，則Y為H；(g)B為H、C1-6烷基、R4-(C＝O)-、R4O(C＝O)-、R4-N(R5)-C(＝O)-、R4-N(R5)-C(＝S)-、R4SO2-或R4-N(R5)-SO2-；(h)R4為(i)C1-10烷基，任選被以下基團(tuán)取代苯基、羧基、C1-6烷?；?、1-3個(gè)鹵素、羥基、-OC(O)C1-6烷基、C1-6烷氧基、任選被C1-6烷基取代的氨基、酰氨基或(低級(jí)烷基)酰氨基；(ii)C3-7環(huán)烷基、C3-7環(huán)烷氧基或C4-10烷基環(huán)烷基，各任選被以下基團(tuán)取代羥基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、任選被C1-6烷基取代的氨基、酰氨基或(低級(jí)烷基)酰氨基；(iii)C6-10芳基或C7-16芳基烷基，各任選被以下基團(tuán)取代C1-6烷基、鹵素、硝基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基或任選被C1-6烷基取代的氨基；(iv)Het；(v)雙環(huán)(1.1.1)戊烷；或(vi)-C(O)OC1-6烷基，C2-6烯基或C2-6炔基；(i)R5為H；C1-6烷基，任選被1-3個(gè)鹵素取代；或C1-6烷氧基，條件是R4為C1-10烷基；(j)X為O、S、SO、SO2、OCH2、CH2O或NH；(k)R′為Het；或C6-10芳基或C7-14烷基芳基，任選被Ra取代；和(l)Ra為C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、C1-6烷氧基、C3-7環(huán)烷氧基、鹵基-C1-6烷基、CF3、單-或二-鹵基-C1-6烷氧基、氰基、鹵基、烷硫基(thioalkyl)、羥基、烷?；?、NO2、SH、氨基、C1-6烷基氨基、二(C1-6)烷基氨基、二(C1-6)烷基酰胺、羧基、(C1-6)羧基酯、C1-6烷基砜、C1-6烷基磺酰胺、二(C1-6)烷基(烷氧基)胺、C6-10芳基、C7-14烷基芳基或5-7元單環(huán)雜環(huán)；條件是X-R′不為 或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或前藥。
本發(fā)明還提供包含所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或前藥，以及藥學(xué)上可接受的載體的組合物。具體地講，本發(fā)明提供可用于抑制HCV NS3的藥用組合物，所述組合物包括治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或前藥，以及藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明還提供治療感染了HCV的患者的方法，所述方法包括給予所述患者治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或前藥。另外，本發(fā)明提供抑制HCV NS3蛋白酶的方法，所述方法包括給予患者有效量的本發(fā)明化合物。
通過(guò)本發(fā)明，現(xiàn)可提供包含本發(fā)明化合物的改進(jìn)的藥物，這種藥物可有效治療HCV感染的患者。具體地講，本發(fā)明提供可抑制NS3蛋白酶功能(如與NS4A蛋白酶結(jié)合)的肽化合物。
發(fā)明詳細(xì)描述本文中使用的立體化學(xué)構(gòu)型定義及規(guī)則主要按照McGraw-Hill的Dictionary of Chemical Terms，S.P.Parker編輯，McGraw-Hill BookCompany，New York(1984)和Stereochemistry of Organic Compounds，Eliel，E.and Wilen，S.，John Wiley&Sons，Inc.，New York(1994)。許多有機(jī)化合物以光學(xué)活性形式存在，即它們具有旋轉(zhuǎn)平面偏振光的平面的能力。在描述光學(xué)活性化合物時(shí)，使用前綴D和L或R和S來(lái)表示分子中的手性中心的絕對(duì)構(gòu)型。使用前綴d和l或(+)和(-)來(lái)標(biāo)記平面偏振光被化合物引起的旋轉(zhuǎn)方向，其中(-)或l表示化合物為左旋，而(+)或d表示化合物為右旋。對(duì)于給定的化學(xué)結(jié)構(gòu)，這些稱為立體異構(gòu)體的化合物除了彼此間在結(jié)構(gòu)上呈鏡像外，其余均相同。鏡像對(duì)的一種特定的立體異構(gòu)體也稱為對(duì)映異構(gòu)體，這種異構(gòu)體的混合物通常被稱為對(duì)映異構(gòu)體混合物。
用于描述有機(jī)基團(tuán)，如烴和取代烴的命名法通常遵照本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)命名法，但另有聲明除外?；鶊F(tuán)的組合(如烷基烷氧基胺)包括所有可能的穩(wěn)定構(gòu)型，但另有聲明除外。以下將定義某些基團(tuán)及組合以作為示例。
術(shù)語(yǔ)“外消旋混合物”和“外消旋物”是指兩種對(duì)映異構(gòu)體的等摩爾混合物，不具有光學(xué)活性。
術(shù)語(yǔ)“手性”是指具有與其鏡像分子無(wú)法重疊的性能的分子，而術(shù)語(yǔ)“非手性”是指可與其鏡像分子重疊的分子。
術(shù)語(yǔ)“立體異構(gòu)體”是指具有相同化學(xué)組成，但原子或基團(tuán)在空間上的排列不同的化合物。
術(shù)語(yǔ)“非對(duì)映異構(gòu)體”是指不為對(duì)映異構(gòu)體的立體異構(gòu)體，如具有兩個(gè)或多個(gè)手性中心的立體異構(gòu)體以及那些彼此不為鏡像的分子。非對(duì)映異構(gòu)體具有不同的物理性能，如熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、光譜性能和活性。非對(duì)映異構(gòu)體的混合物可通過(guò)高分辨率的分析方法如電泳和色譜法分離。
術(shù)語(yǔ)“對(duì)映異構(gòu)體”是指化合物的兩種立體異構(gòu)體，它們?yōu)楸舜瞬幌嘀丿B的鏡像。
術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”將包括通過(guò)常規(guī)化學(xué)方法，由包含堿性或酸性部分的化合物合成得到的非毒性鹽。通常這些鹽可通過(guò)使這些化合物的游離酸或堿與化學(xué)計(jì)算量的適當(dāng)?shù)膲A或酸在水或有機(jī)溶劑或兩者的混合物中反應(yīng)制備；通常，優(yōu)選非水性介質(zhì)，如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。合適的鹽參見(jiàn)Remington′sPharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing Company，Easton，PA，1990，1445頁(yè)。本發(fā)明化合物可以以游離堿或酸形式或以其藥學(xué)上可接受的鹽形式使用。所有的形式均在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
術(shù)語(yǔ)“治療有效量”是指各活性組分的總量，該量足以顯示出有意義的患者益處，如能夠持續(xù)降低病毒載量。當(dāng)應(yīng)用于單獨(dú)給藥的單獨(dú)活性成分時(shí)，則該術(shù)語(yǔ)單指該成分。當(dāng)應(yīng)用于組合時(shí)，則該術(shù)語(yǔ)指各活性成分，無(wú)論是組合、先后或同時(shí)給藥，均能達(dá)到治療效果的總量。
術(shù)語(yǔ)“本發(fā)明化合物”及其等價(jià)表達(dá)均指式I所包含的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物如水合物。類似地，當(dāng)敘及中間體時(shí)，在適當(dāng)?shù)牡胤揭矊ㄆ潲}和溶劑合物。敘及本發(fā)明化合物之處也包括優(yōu)選的式II和III化合物。
術(shù)語(yǔ)“衍生物”是指化學(xué)改性的化合物，其中改性為普通化學(xué)技術(shù)人員所了解的方法途徑如將酸改性成其酯或酰胺；保護(hù)基團(tuán)，如將醇或硫醇用芐基進(jìn)行保護(hù)，以及胺用叔丁氧基羰基進(jìn)行保護(hù)。
術(shù)語(yǔ)“溶劑合物”是指本發(fā)明化合物與一個(gè)或多個(gè)溶劑分子(有機(jī)或無(wú)機(jī))的物理締合。物理締合包括氫鍵合。在某些情況下，所述溶劑合物可被分離，如當(dāng)晶體的晶格中摻有一個(gè)或多個(gè)溶劑分子時(shí)可進(jìn)行分離?！叭軇┖衔铩卑ㄈ芤合嗪涂煞蛛x的溶劑合物。示例性的溶劑合物包括水合物、乙醇合物、甲醇合物等。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“前藥”是指本發(fā)明化合物的衍生物，其具有化學(xué)上或者代謝上可以裂解的基團(tuán)，并且通過(guò)溶劑分解或者在生理?xiàng)l件下變成體內(nèi)具有藥學(xué)活性的本發(fā)明的化合物。以常規(guī)方式，用化合物的官能團(tuán)例如用氨基、羥基或者羧基(若存在)可以形成化合物的前藥。前藥衍生物形式經(jīng)常提供溶解性、組織相容性或者在哺乳動(dòng)物器官中延遲釋放的優(yōu)點(diǎn)(參見(jiàn)，Bundgard，H.，Design of Prodrugs，第7-9，21-24頁(yè)，Elsevier，Amsterdam 1985)。前藥包括本領(lǐng)域的實(shí)踐者熟知的酸衍生物，例如通過(guò)使母體酸性化合物與合適的醇反應(yīng)制備的酯，或者通過(guò)使母體酸化合物與合適的胺反應(yīng)制備的酰胺。
術(shù)語(yǔ)“患者”包括人及其它哺乳動(dòng)物。
術(shù)語(yǔ)“藥用組合物”是指包含本發(fā)明化合物以及至少一種其它藥物載體(即輔助劑、賦形劑或溶媒)的組合物，其中所述藥物載體如稀釋劑、防腐劑、填充劑、流動(dòng)調(diào)節(jié)劑、泡騰劑、潤(rùn)濕劑、乳化劑、懸浮劑、甜味劑、矯味劑、香料、抗菌劑、抗真菌劑、潤(rùn)滑劑以及分散劑，各種試劑的選擇取決于給藥方式和劑型的性質(zhì)。可使用例如在Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack PublishingCompany，Easton，PA.(1999)中所列的各種成分。
本文中使用的術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的”是指那些(就合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍而言)適用于與患者的組織接觸而沒(méi)有引起額外的毒性、刺激、過(guò)敏反應(yīng)或其它的問(wèn)題或并發(fā)癥(即具有合理的危險(xiǎn)/益處比)的化合物、材料、組合物和/或劑型。
術(shù)語(yǔ)“治療”是指(i)預(yù)防易患而又未診斷出患有疾病、障礙和/或病癥的患者發(fā)生疾病、障礙或病癥；(ii)抑制所述疾病、障礙或病癥，即抑制這些疾病、障礙或病癥的發(fā)展；以及(iii)減輕所述疾病、障礙或病癥，即使所述疾病、障礙或病癥消退。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“取代的”包括在取代基所鍵合的母核(如有機(jī)基團(tuán))上的可成鍵部位的一至最大數(shù)目的取代，如單、二-、三-或四-取代，但另有聲明除外。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“鹵代”或“鹵基”是指選自溴、氯、氟或碘的鹵素取代基。術(shù)語(yǔ)“鹵代烷基”是指被一個(gè)或多個(gè)鹵基取代基取代的烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“烷基”是指非環(huán)狀的、直鏈或支鏈烷基取代基，并包括例如甲基、乙基、丙基、丁基、叔丁基、己基、1-甲基乙基、1-甲基丙基、2-甲基丙基、1，1-二甲基乙基。因此，C1-6烷基是指具有1至6個(gè)碳原子的烷基。術(shù)語(yǔ)“低級(jí)烷基”是指具有1至6個(gè)碳原子、優(yōu)選1至4個(gè)碳原子的烷基。術(shù)語(yǔ)“烷基酯”是指還含有酯基的烷基。通常，一個(gè)標(biāo)明的碳原子范圍(如C2-6烷基酯)包括該基團(tuán)中碳原子的總數(shù)目。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“烯基”是指含至少一個(gè)雙鍵的烷基，如乙烯基和烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“烷氧基”是指與氧原子相連的具有所表明數(shù)目碳原子的烷基。烷氧基包括如甲氧基、乙氧基、丙氧基、1-甲基乙氧基、丁氧基和1，1-二甲基乙氧基。后一基團(tuán)在本領(lǐng)域中也稱為叔丁氧基。術(shù)語(yǔ)“烷氧基羰基”是指還含有羰基的烷氧基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”是指含有表明數(shù)目碳原子的環(huán)烷基取代基，包括如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基和螺環(huán)基團(tuán)，如螺環(huán)丙基、螺環(huán)丁基。本文使用的術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷氧基”是指與氧原子相連的環(huán)烷基，如環(huán)丁氧基或環(huán)丙氧基。術(shù)語(yǔ)“烷基環(huán)烷基”是指與烷基相連的環(huán)烷基。除非另有聲明，否則標(biāo)明的碳原子范圍包括該基團(tuán)中碳原子的總數(shù)目。C4-10烷基環(huán)烷基可在烷基上含有1-7個(gè)碳原子和環(huán)上含有3-9個(gè)碳原子，如環(huán)丙基甲基或環(huán)己基乙基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“芳基”是指含有標(biāo)明碳原子數(shù)目的芳香部分，如但不限于苯基、二氫化茚基或萘基。例如，C6-10芳基是指具有6-10個(gè)碳原子的芳香部分，該部分可為單環(huán)或雙環(huán)結(jié)構(gòu)。本文使用的術(shù)語(yǔ)“鹵代芳基”是指被一個(gè)或多個(gè)鹵原子單、二或三取代的芳基。術(shù)語(yǔ)“烷基芳基”、“芳基烷基”和“芳烷基”是指被一個(gè)或多個(gè)烷基取代的芳基。因此，C7-14烷基芳基對(duì)于單環(huán)芳基來(lái)說(shuō)在烷基上可具有1-8個(gè)碳原子，對(duì)于稠合芳基來(lái)說(shuō)烷基上可具有1-4個(gè)碳原子。芳基包括那些被本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的典型取代基所取代的芳基，其中所述取代基如鹵素、羥基、羧基、羰基、硝基、磺基、氨基、氰基、二烷基氨基、鹵代烷基、CF3、鹵代烷氧基、烷硫基、烷?；?、SH、烷基氨基、烷基酰胺、二烷基酰胺、羧基酯、烷基砜、烷基磺酰胺和烷基(烷氧基)胺。烷基芳基的實(shí)例包括芐基、丁基苯基和1-萘基甲基。
術(shù)語(yǔ)“烷基芳氧基”和“烷基芳基酯”分別指含氧原子和酯基的烷基芳基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“羧基烷基”是指通過(guò)如上定義的烷基連接的羧基(COOH)，包括如丁酸。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“烷?；笔侵钢辨溁蛑ф湹暮瑯?biāo)明碳原子數(shù)目的1-氧代烷基，包括如甲?；⒁阴；?-氧代丙基(丙?；?、2-甲基-1-氧代丙基、1-氧代己基等。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“氨基芳烷基”是指被芳烷基取代的氨基，如下述氨基芳烷基 本文使用的術(shù)語(yǔ)“烷基酰胺”是指被烷基單取代的酰胺，如
本文使用的術(shù)語(yǔ)“羧基烷基”是指通過(guò)如上定義的烷基連接的羧基(COOH)，包括如丁酸。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)”(也表示為“Het”)是指7-12元雙環(huán)雜環(huán)和5-7元單環(huán)雜環(huán)。
優(yōu)選的雙環(huán)雜環(huán)為含1-4個(gè)選自氮、氧和硫的雜原子的7-12元稠合雙環(huán)體系(兩環(huán)共享相鄰的原子對(duì))，其中所述雜環(huán)的兩環(huán)完全不飽和。氮原子和硫原子可任選被氧化。所述雙環(huán)雜環(huán)的一個(gè)或兩個(gè)環(huán)上均可含雜原子。雙環(huán)雜環(huán)還可在任一個(gè)環(huán)碳原子上含有取代基，如1-3個(gè)取代基。合適取代基的實(shí)例包括C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、C1-6烷氧基、C3-7環(huán)烷氧基、鹵基-C1-6烷基、CF3、單-或二-鹵基-C1-6烷氧基、氰基、鹵基、烷硫基(thioalkyl)、羥基、烷?；O2、SH、氨基、C1-6烷基氨基、二(C1-6)烷基氨基、二(C1-6)烷基酰胺、羧基、(C1-6)羧基酯、C1-6烷基砜、C1-6烷基磺酰胺、C1-6烷基亞砜、二(C1-6)烷基(烷氧基)胺、C6-10芳基、C7-14烷基芳基和5-7元單環(huán)雜環(huán)。當(dāng)兩個(gè)取代基與雙環(huán)雜環(huán)上相鄰碳原子連接時(shí)，它們可結(jié)合在一起形成環(huán)，如最多含兩個(gè)選自氧和氮的雜原子的5、6或7元環(huán)體系。所述雙環(huán)雜環(huán)可通過(guò)其側(cè)基(如式I的X)與環(huán)上的任何原子(優(yōu)選碳)連接。
雙環(huán)雜環(huán)的實(shí)例包括但不限于以下環(huán)體系 優(yōu)選的單環(huán)雜環(huán)為在環(huán)上含1-4個(gè)選自氮、氧和硫的雜原子的5-7元飽和、部分飽和或完全不飽和的環(huán)體系(后一子集在本文中稱為不飽和雜芳環(huán))，其中所述硫和氮雜原子可任選被氧化。單環(huán)雜環(huán)還可在任一個(gè)環(huán)碳原子上含有取代基，如1-3個(gè)取代基。合適取代基的實(shí)例包括C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、C1-6烷氧基、C3-7環(huán)烷氧基、鹵基-C1-6烷基、CF3、單-或二-鹵基-C1-6烷氧基、氰基、鹵基、烷硫基、羥基、烷?；?、NO2、SH、氨基、C1-6烷基氨基、二(C1-6)烷基氨基、二(C1-6)烷基酰胺、羧基、(C1-6)羧基酯、C1-6烷基砜、C1-6烷基亞砜、C1-6烷基磺酰胺、二(C1-6)烷基(烷氧基)胺、C6-10芳基、C7-14烷基芳基和5-7元單環(huán)雜環(huán)。單環(huán)雜環(huán)可通過(guò)其側(cè)基(如式I的X)與環(huán)上的任何原子連接。
單環(huán)雜環(huán)的實(shí)例包括但不限于以下環(huán)體系 那些本領(lǐng)域的技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到用于本發(fā)明化合物的雜環(huán)應(yīng)是穩(wěn)定的。通常穩(wěn)定的化合物是那些可使用本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的技術(shù)合成、分離和配制，而不會(huì)降解的化合物。
當(dāng)用于命名本發(fā)明化合物時(shí)，在此使用的表示法“P1’、P1、P2、P3和P4”描繪了結(jié)合的蛋白酶抑制劑的氨基酸殘基相對(duì)于天然肽裂解底物的結(jié)合點(diǎn)的相對(duì)位置。裂解發(fā)生在P1與P1’之間的天然底物中，其中非主要位置表示氨基酸自肽天然裂解位置的C-末端開(kāi)始朝著C-末端延伸；而主要位置自裂解部位示意的N-末端發(fā)出并朝著C-末端延伸。例如，P1’指遠(yuǎn)離裂解部位的C-末端的右手未端的第一位置(即N-末端第一位置)；而P1自C-末端裂解部位的左手側(cè)鏈開(kāi)始編號(hào)，P2自C-末端的第二個(gè)位置等)(參見(jiàn)Berger A.&Schechter I.，Transactions of the Royal Society London系列(1970)，B257，249-264]。
因此，以下指明在式I化合物中，該分子的“P1’-P4”部分
在此使用的術(shù)語(yǔ)“1-氨基環(huán)丙基-甲酸”(Acca)指下式的化合物 在此使用的術(shù)語(yǔ)“叔丁基甘氨酸”指下式的化合物 有關(guān)氨基酸或者氨基酸衍生物的術(shù)語(yǔ)“殘基”是指衍生自通過(guò)消除羧基的羥基和α-氨基酸基團(tuán)的一個(gè)氫的所相對(duì)應(yīng)的α-氨基酸的基團(tuán)。例如，術(shù)語(yǔ)Gln、Ala、Gly、Ile、Arg、Asp、Phe、Ser、Leu、Cys、Asn、Sar和Tyr分別代表L-谷氨酰胺、L-丙氨酸、甘氨酸、L-異亮氨酸、L-精氨酸、L-天冬氨酸、L-苯丙氨酸、L-絲氨酸、L-亮氨酸、L-半胱氨酸、L-天冬酰胺、肌氨酸和L-酪氨酸的“殘基”。
有關(guān)氨基酸或者氨基酸殘基的術(shù)語(yǔ)“側(cè)鏈”是指連接α-氨基酸的α-碳原子的基團(tuán)。例如，甘氨酸的R-基團(tuán)側(cè)鏈為氫，對(duì)于丙氨酸，該側(cè)鏈為甲基，對(duì)纈氨酸它為異丙基。對(duì)于α-氨基酸的具體R-基團(tuán)或者側(cè)鏈，可參照Biochemistry(參見(jiàn)第4章)中A.L.Lehninger的文章內(nèi)容。
本發(fā)明化合物具有式I的結(jié)構(gòu)或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或前藥 其中(a)R1為C1-8烷基、C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基；(b)m為1或2；(c)n為1或2；(d)R2為H、C1-6烷基、C2-6烯基或C3-7環(huán)烷基，各任選被鹵素取代；(e)R3為C1-8烷基，任選被以下基團(tuán)取代鹵基、氰基、氨基、C1-6二烷基氨基、C6-10芳基、C7-14烷基芳基、C1-6烷氧基、羧基、羥基、芳氧基、C7-14烷基芳氧基、C2-6烷基酯、C8-15烷基芳基酯；C3-12烯基、C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基，其中所述環(huán)烷基或烷基環(huán)烷基任選被以下基團(tuán)取代羥基、C1-6烷基、C2-6烯基或C1-6烷氧基；或R3與其連接的碳原子一起形成C3-7環(huán)烷基，任選被C2-6烯基取代；(f)Y為H、被硝基取代的苯基、被硝基取代的吡啶基或C1-6烷基，任選被以下基團(tuán)取代氰基、OH或C3-7環(huán)烷基；條件是若R4或R5為H，則Y為H；(g)B為H、C1-6烷基、R4-(C＝O)-、R4O(C＝O)-、R4-N(R5)-C(＝O)-、R4-N(R5)-C(＝S)-、R4SO2-或R4-N(R5)-SO2-；(h)R4為(i)C1-10烷基，任選被以下基團(tuán)取代苯基、羧基、C1-6烷?；?、1-3個(gè)鹵素、羥基、-OC(O)C1-6烷基、C1-6烷氧基、任選被C1-6烷基取代氨基、酰氨基或(低級(jí)烷基)酰氨基；(ii)C3-7環(huán)烷基、C3-7環(huán)烷氧基或C4-10烷基環(huán)烷基，各任選被以下基團(tuán)取代羥基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、任選被C1-6烷基取代的氨基、酰氨基或(低級(jí)烷基)酰氨基；(iii)C6-10芳基或C7-16芳基烷基，各任選被以下基團(tuán)取代C1-6烷基、鹵素、硝基、羥基、酰氨基、(低級(jí)烷基)酰氨基或任選被C1-6烷基取代的氨基；(iv)Het；(v)雙環(huán)(1.1.1)戊烷；或(vi)-C(O)OC1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基；(i)R5為H；C1-6烷基，任選被1-3個(gè)鹵素取代；或C1-6烷氧基，條件是R4為C1-10烷基；(j)X為O、S、SO、SO2、OCH2、CH2O或NH；(k)R′為Het；或C6-10芳基或C7-14烷基芳基，任選被Ra取代；和(l)Ra為C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、C1-6烷氧基、C3-7環(huán)烷氧基、鹵基-C1-6烷基、CF3、單-或二-鹵基-C1-6烷氧基、氰基、鹵基、烷硫基(thioalkyl)、羥基、烷?；?、NO2、SH、氨基、C1-6烷基氨基、二(C1-6)烷基氨基、二(C1-6)烷基酰胺、羧基、(C1-6)羧基酯、C1-6烷基砜、C1-6烷基磺酰胺、二(C1-6)烷基(烷氧基)胺、C6-10芳基、C7-14烷基芳基或5-7元單環(huán)雜環(huán)；條件是X-R′不為 或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或前藥。
優(yōu)選R2為C2-6烯基；R3為任選被C1-6烷氧基取代的C1-8烷基或C3-7環(huán)烷基；Y為H；B為R4-(C＝O)-、R4O(C＝O)-或R4-N(R5)-C(＝O)-；R4為C1-10烷基，任選被1-3個(gè)鹵素或C1-6烷氧基取代；或C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基；R5為H；X為O或NH；和R′為Het。
各集合的取代基可單獨(dú)選擇并可任意組合，均可得到本發(fā)明的穩(wěn)定化合物。另外，各集合中多于一個(gè)的取代基可在中心基團(tuán)(coregroup)上取代，條件是其上具有足夠的可結(jié)合部位。例如，以下各Ra取代基、C1-6烷氧基、C6芳基和5-7元單環(huán)雜環(huán)可在雙環(huán)雜環(huán)R′上取代。
在一個(gè)優(yōu)選的方面，本發(fā)明化合物具有式II的結(jié)構(gòu)或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或前藥 其中(a)R1為C3-7環(huán)烷基；(b)R2為C1-6烷基、C2-6烯基或C3-7環(huán)烷基；(c)R3為C1-8烷基，任選被以下基團(tuán)取代C6芳基、C1-6烷氧基、羧基、羥基、芳氧基、C7-14烷基芳氧基、C2-6烷基酯、C8-15烷基芳基酯；C3-12烯基、C3-7環(huán)烷基或C4-10烷基環(huán)烷基；(d)Y為H；(e)B為H、C1-6烷基、R4-(C＝O)-、R4O(C＝O)-、R4-N(R5)-C(＝O)-、R4-N(R5)-C(＝S)-、R4SO2-或R4-N(R5)-SO2-；(f)R4為(i)C1-10烷基，任選被以下基團(tuán)取代苯基、羧基、C1-6烷?；?、1-3個(gè)鹵素、羥基、C1-6烷氧基；(ii)C3-7環(huán)烷基、C3-7環(huán)烷氧基或C4-10烷基環(huán)烷基；或(iii)C6-10芳基或C7-16芳基烷基；各任選被以下基團(tuán)取代C1-6烷基或鹵素；(g)R5為H或C1-6烷基，任選被1-3個(gè)鹵素取代；(h)X為O或NH；
(i)R′為Het；或C6-10芳基，任選被Ra取代；和(j)Ra為C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、C1-6烷氧基、鹵基-C1-6烷基、鹵基、氨基、C6芳基或5-7元單環(huán)雜環(huán)；條件是Xa-R′不為 或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或前藥。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選方面，R′為雙環(huán)雜環(huán)。優(yōu)選所述雙環(huán)雜環(huán)在環(huán)上含有1或2個(gè)氮原子并任選含有硫原子或氧原子。優(yōu)選所述雜環(huán)被至少一個(gè)以下基團(tuán)取代C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵基、C6芳基和5-7元單環(huán)雜環(huán)。更優(yōu)選R′為雙環(huán)雜環(huán)，所述雙環(huán)雜環(huán)含1個(gè)氮原子并被甲氧基和至少一個(gè)C6芳基和5-7元單環(huán)雜環(huán)取代。
在本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選的方面，R′為單環(huán)雜環(huán)。優(yōu)選所述雜環(huán)在環(huán)上含有1或2個(gè)氮原子并任選含有硫原子或氧原子。優(yōu)選所述雜環(huán)被至少一個(gè)以下基團(tuán)取代C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵基、C6-10芳基、C7-14烷基芳基或5-7元單環(huán)雜環(huán)。更優(yōu)選R′為單環(huán)雜環(huán)，所述單環(huán)雜環(huán)含1或2個(gè)氮原子并被甲氧基和至少一個(gè)C6芳基和5-7元單環(huán)雜環(huán)取代。
在本發(fā)明一個(gè)更優(yōu)選的方面，所述化合物具有式III的結(jié)構(gòu)，或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或前藥
其中(a)R1為C3-7環(huán)烷基；(b)R2為C2-6烯基；(c)R3為C1-8烷基；(d)Y為H；(e)B為R4O(C＝O)-或R4-N(R5)-C(＝O)-；(f)R4為C1-10烷基；(g)R5為H；(h)R′為雙環(huán)雜環(huán)，任選被Ra取代；和(i)Ra為C1-6烷基，C1-6烷氧基，鹵基、C6芳基或5-7元單環(huán)雜環(huán)；條件是O-R′不為 或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或前藥。
優(yōu)選R1為環(huán)丙基或環(huán)丁基，R2為乙烯基，R3為叔丁基，R4為叔丁基和R′為喹啉或異喹啉，任選被Ra取代。優(yōu)選Ra包括至少一個(gè)C1-6烷氧基、C6芳基和5-7元單環(huán)雜環(huán)。在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的方面，R1為環(huán)丙基，R2為乙烯基，R3為叔丁基，R4為叔丁基和R′為被C1-6烷氧基和至少一個(gè)C6芳基或5-7元單環(huán)雜環(huán)取代的異喹啉。
本發(fā)明的化合物，根據(jù)它們的堿性部分，通過(guò)加入藥學(xué)上可接受的酸可以形成鹽。酸加成鹽可由式I的化合物和藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)酸，包括(但不限于)鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、磷酸或者有機(jī)酸例如對(duì)甲苯磺酸、甲磺酸、乙酸、苯甲酸、枸櫞酸、丙二酸、富馬酸、馬來(lái)酸、草酸、琥珀酸、氨基磺酸或者酒石酸形成。因此，這樣的藥學(xué)上可接受的鹽的實(shí)例包括氯化物、溴化物、碘化物、硫酸鹽、磷酸鹽、甲磺酸鹽、枸櫞酸鹽、乙酸鹽、丙二酸鹽、富馬酸鹽、氨基磺酸鹽和酒石酸鹽。
胺基團(tuán)的鹽也可以包括季銨鹽，其中氨基的氮帶有合適的有機(jī)基團(tuán)，例如烷基、烯基、炔基或者芳烷基部分。
由酸性基團(tuán)取代的本發(fā)明的化合物可以作為通過(guò)堿加成形成的鹽存在。這樣的堿加成鹽包括衍生于無(wú)機(jī)堿的那些鹽，它們包括例如堿金屬(例如鈉和鉀)鹽、堿土金屬(例如鈣和鎂)鹽、鋁鹽和銨鹽。另外，合適的堿加成鹽包括生理上可接受的有機(jī)堿的鹽，所述有機(jī)堿例如三甲胺、三乙胺、嗎啉、吡啶、哌啶、甲基吡啶、二環(huán)己基胺、N，N’-二芐基乙二胺、2-羥基乙胺、雙-(2-羥基乙基)胺、三-(2-羥基乙基)胺、普魯卡因、二芐基哌啶、N-芐基-β-苯乙胺、脫氫樅胺、N，N’-二氫樅胺、葡糖胺、N-甲基葡糖胺、可力丁、奎寧、喹啉、乙二胺、鳥氨酸、膽堿、N，N’-芐基苯乙胺、氯普魯卡因、二乙醇胺、二乙胺、哌嗪、三(羥基甲基)氨基甲烷和氫氧化四甲銨和堿性氨基酸例如賴氨酸、精氨酸和N-甲基谷氨酰胺。通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法可以制備這些鹽。
本發(fā)明的某些化合物及其鹽可以以與水的溶劑合物的形式存在，例如水合物，或者與有機(jī)溶劑的溶劑合物形式存在，例如甲醇、乙醇或者乙腈分別形成甲醇合物、乙醇合物或者乙腈合物。本發(fā)明包括其每一種溶劑合物及其混合物。
另外，本發(fā)明的化合物或其鹽或溶劑合物可以存在多晶形。本發(fā)明也包括任何這樣的多晶形形式。
本發(fā)明的化合物也含兩個(gè)或者更多個(gè)手性中心。例如，所述化合物可以包括下式的P1環(huán)丙基部分 其中C1和C2各自代表在環(huán)丙基環(huán)的1和2位上的不對(duì)稱碳原子。在化合物的其它片段上沒(méi)有其它可能的不對(duì)稱中心時(shí)，這兩個(gè)不對(duì)稱中心的存在意味著化合物可以作為非對(duì)映體的外消旋混合物存在，例如如下所示的非對(duì)映體，其中R2對(duì)酰胺為順式或者對(duì)羰基為順式構(gòu)型。
(1R，2S) (1S，2R)R2對(duì)羰基為順式構(gòu)型 R2對(duì)羰基為順式構(gòu)型 (1R，2R) (1S，2S)R2對(duì)酰胺為順式構(gòu)型 R2對(duì)酰胺為順式構(gòu)型本發(fā)明包括對(duì)映體和對(duì)映體的混合物，例如外消旋混合物。
通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，例如通過(guò)形成非對(duì)映體鹽，后者通過(guò)結(jié)晶、氣-液或者液相色譜法、對(duì)映體與對(duì)映體特異性試劑選擇性反應(yīng)來(lái)分開(kāi)，可以拆分對(duì)映體。應(yīng)清楚的是當(dāng)通過(guò)分離技術(shù)將所要求的對(duì)映體轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪粋€(gè)化學(xué)單體時(shí)，就需要另一個(gè)步驟形成所要求的對(duì)映體形式?；蛘撸捎霉鈱W(xué)活性試劑、底物、催化劑或者溶劑，通過(guò)不對(duì)稱合成，或者通過(guò)不對(duì)稱轉(zhuǎn)化將一種對(duì)映體轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌膶?duì)映體，可以合成具體的對(duì)映體。
本發(fā)明化合物也可為前藥形式。衍生自本發(fā)明化合物側(cè)鏈酸性基團(tuán)(當(dāng)存在時(shí))的簡(jiǎn)單的脂族或者芳族酯為優(yōu)選的前藥。在某些情況下，最好制備雙酯型前藥，例如(酰氧基)烷基酯或者(烷氧基羰基)氧基)烷基酯。
本發(fā)明的某些化合物也可以以不同的、可分離的、穩(wěn)定的構(gòu)象形式存在。由于圍繞不對(duì)稱單鍵的限制性旋轉(zhuǎn)而產(chǎn)生的扭轉(zhuǎn)性不對(duì)稱性，例如由于位阻或者環(huán)張力，可以允許分離不同的構(gòu)象異構(gòu)體。本發(fā)明包括這些化合物及其混合物的每個(gè)構(gòu)象異構(gòu)體。
本發(fā)明的某些化合物可以以兩性離子形式存在，本發(fā)明包括這些化合物及其混合物的每個(gè)兩性離子形式。
可用于合成本發(fā)明化合物的原料為本領(lǐng)域技術(shù)人員所已知，并可容易地制備或購(gòu)自市售的商品。
本發(fā)明化合物可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備，參見(jiàn)例如美國(guó)專利6,323,180和美國(guó)專利申請(qǐng)20020111313A1中的描述。以下闡述的方法用于舉例說(shuō)明的目的，并無(wú)意限定本發(fā)明所要求保護(hù)的范圍。應(yīng)認(rèn)識(shí)到在制備這種化合物過(guò)程中，采用常規(guī)保護(hù)基保護(hù)官能團(tuán)，然后除去保護(hù)基而得到本發(fā)明的化合物是優(yōu)選或者必須的。在本發(fā)明中所使用的保護(hù)基團(tuán)的細(xì)節(jié)為本領(lǐng)域技術(shù)人員所已知。
例如，可按照流程I中闡明的通法，可以合成本發(fā)明的化合物(其中CPG為羧基保護(hù)基，APG為氨基保護(hù)基)
流程I 簡(jiǎn)言之，通過(guò)熟知的肽偶合技術(shù)，可以連接P1、P2和P3。只要最終的化合物對(duì)應(yīng)于本發(fā)明的肽，可以以任何順序，將P1、P2和P3基團(tuán)連接在一起。例如，P3可以連接于P2-P1；或者P1連接于P3-P2。
通常，采用所描述的方法，通過(guò)使N-末端殘基的α-氨基脫保護(hù)，然后使下一個(gè)適合的N-保護(hù)的氨基酸的未保護(hù)羧基通過(guò)肽連接偶合，延長(zhǎng)肽鏈。重復(fù)這種脫保護(hù)和偶合過(guò)程，直到得到所需的序列。如流程I中所示，以分步驟方式，用成分氨基酸進(jìn)行這種偶合。
兩個(gè)氨基酸、一個(gè)氨基與一個(gè)肽或者兩個(gè)肽片段之間的偶合可以采用標(biāo)準(zhǔn)偶合方法進(jìn)行，例如疊氮法、混合羰基-甲酸酐(氯代甲酸異丁基酯)法、碳化二亞胺(二環(huán)己基碳化二亞胺、二異丙基碳化二亞胺或者水溶性碳化二亞胺)法、活性酯(對(duì)硝基苯基酯、N-羥基琥珀酰亞胺酯)法、Woodward試劑K-方法、羰基二咪唑法、磷試劑或者氧化-還原方法。通過(guò)加入1-羥基苯并三唑或者4-DMAP，可以增強(qiáng)這些方法中的一些方法(尤其是碳化二亞胺方法)。這些偶合反應(yīng)在溶液(液相)或者固相中進(jìn)行。
更確切地講，該偶合步驟包括在偶合試劑的存在下，使一個(gè)反應(yīng)物的游離羧基與另一個(gè)反應(yīng)物的游離氨基脫水偶合，形成一個(gè)連接酰胺鍵。在關(guān)于肽化學(xué)的普通教材例如M.Bodanszky“PeptideChemistry”，第2次再版，Springer-Verlag，Berlin，Germany，(1993)中，可以發(fā)現(xiàn)這些偶合試劑的描述。適合的偶合試劑的實(shí)例為N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺、在N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺存在下的1-羥基苯并三唑或者N-乙基-N’-[(3-二甲基氨基)丙基]碳化二亞胺。一種實(shí)用和有用的偶合試劑為市場(chǎng)上可以得到的(苯并三唑-1-基氧基)三-(二甲基氨基)膦_六氟磷酸鹽，或者以其本身單獨(dú)使用或者在1-羥基苯并三唑或DMAP存在下使用。另一種實(shí)用和有用的偶合試劑為市場(chǎng)上可以得到的2-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲_四氟硼酸鹽。再一種實(shí)用和有用的偶合試劑為市場(chǎng)上可以得到的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲_六氟磷酸鹽。所述偶合反應(yīng)在惰性溶劑例如二氯甲烷、乙腈或者二甲基甲酰胺中進(jìn)行。加入過(guò)量的叔胺例如二異丙基乙胺、N-甲基嗎啉、N-甲基吡咯烷或者4-DMAP以維持反應(yīng)混合物pH為大約8。反應(yīng)溫度一般介于0-50℃之間，反應(yīng)時(shí)間一般介于15分鐘-24小時(shí)之間。
偶合反應(yīng)期間，一般必須保護(hù)成分氨基酸的官能團(tuán)，以避免不合乎需要的鍵的形成?？梢允褂玫谋Ｗo(hù)基團(tuán)列于如Greene，“有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基團(tuán)(Protective Groups in Organic Chemistry)”，John Wiley&Sons，New York(1981)和“肽分析合成生物學(xué)(The PeptidesAnalysis，Synthesis，Biology)”，第3卷，Academic Press，New York(1981)中，其公開(kāi)內(nèi)容結(jié)合到本文中作為參考。
必須保護(hù)被偶合成延長(zhǎng)的肽鏈的各氨基酸的α-氨基(APG)。可以采用本領(lǐng)域已知的任何保護(hù)基團(tuán)。這些基團(tuán)的實(shí)例包括1)?；缂柞；?、三氟乙?；?、鄰苯二甲酰基和對(duì)甲苯磺?；?；2)芳族氨基甲酸酯，例如芐氧基羰基(Cbz或Z)和取代的芐氧基羰基以及9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)；3)脂族氨基甲酸酯，例如叔丁氧基羰基(Boc)、乙氧基羰基、二異丙基甲氧基羰基和烯丙氧基羰基；4)環(huán)烷基氨基甲酸酯，例如環(huán)戊基氧基羰基和金剛烷基氧基羰基；5)烷基，例如三苯基甲基和芐基；6)三烷基甲硅烷基，例如三甲基甲硅烷基；和7)含巰基的基團(tuán)，例如苯基硫代羰基和二硫雜琥珀?；?。優(yōu)選的α-氨基的保護(hù)基團(tuán)為Boc或者Fmoc。適于肽合成保護(hù)的許多氨基酸衍生物為市場(chǎng)上可以得到的。在下一個(gè)氨基酸偶合之前，裂解新加入的氨基酸殘基的α-氨基保護(hù)基團(tuán)。當(dāng)采用Boc基團(tuán)時(shí)，選擇的方法為純的或者在二氯甲烷中的三氟乙酸，或者在二_烷中或在乙酸乙酯中的HCl。然后，在偶合前或者就地將得到的銨鹽用堿性溶液例如含水緩沖液，或者在二氯甲烷或乙腈或二甲基甲酰胺中的叔胺進(jìn)行中和。當(dāng)采用Fmoc基團(tuán)時(shí)，選擇的試劑為哌啶或者在二甲基甲酰胺中的取代的哌啶，但可以采用任何仲胺。在介于0℃-室溫(rt或者RT)之間的溫度下，一般為20-22℃，進(jìn)行脫保護(hù)反應(yīng)。
采用任何上述的基團(tuán)制備肽的期間，必須保護(hù)具有側(cè)鏈官能團(tuán)的任何氨基酸。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)清楚的是這些側(cè)鏈官能團(tuán)的適合的保護(hù)基團(tuán)的選擇和使用依據(jù)該氨基酸和所述肽中的其它的保護(hù)基團(tuán)的存在而定。選擇這些保護(hù)基是重要的，因?yàn)樵讦?氨基脫保護(hù)和偶合期間，所述基團(tuán)是絕對(duì)不能除去的。
例如，當(dāng)Boc用作α-氨基保護(hù)基團(tuán)時(shí)，以下側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)是合適的對(duì)甲苯磺?；?tosyl)部分可以用于保護(hù)氨基酸(例如Lys和Arg)的氨基側(cè)鏈；乙酰氨基甲基、芐基(Bn)或者叔丁基磺?；糠挚梢杂糜诒Ｗo(hù)含有半胱氨酸的側(cè)鏈的硫化物；芐基(bencyl)(Bn)醚可以用于保護(hù)含有絲氨酸、蘇氨酸或者羥基脯氨酸的側(cè)鏈的羥基；而芐基酯可以用于保護(hù)含有天冬氨酸和谷氨酸的側(cè)鏈的羧基。
當(dāng)Fmoc被選擇用于α-胺保護(hù)時(shí)，一般的以叔丁基為基礎(chǔ)的保護(hù)基團(tuán)是可行的。例如，Boc可以用于賴氨酸和精氨酸，叔丁基醚用于絲氨酸、蘇氨酸和羥基脯氨酸，而叔丁酯可以用于天冬氨酸和谷氨酸。三苯基甲基(Trityl)部分可以用于保護(hù)含有半胱氨酸的側(cè)鏈的硫化物。
肽的延伸一經(jīng)完成，即除去所有的保護(hù)基團(tuán)。當(dāng)采用液相合成時(shí)，可以通過(guò)選擇保護(hù)基團(tuán)所指明的任一方式除去保護(hù)基團(tuán)。這些方法對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是熟知的。
另外，在本發(fā)明化合物的制備中，可遵循以下指導(dǎo)。例如，為形成一種化合物，其中將R4-C(O)-、R4-S(O)2，一種保護(hù)的P3或者整個(gè)肽或者肽片段分別偶合成合適的酰氯或者磺酰氯時(shí)，該化合物或者是市場(chǎng)上可以得到的或者其合成法是本領(lǐng)域熟知的。在制備一種化合物時(shí)，將R4O-C(O)-，保護(hù)的P3或者整個(gè)肽或者一個(gè)肽片段與合適的氯甲酸酯偶合，所述氯甲酸酯是市場(chǎng)上可以得到的或者其合成法是本領(lǐng)域熟知的。對(duì)于Boc-衍生物，可采用(Boc)2O。
例如 用光氣處理環(huán)戊醇，以得到相應(yīng)的氯甲酸酯。
在堿例如三乙胺存在下，用所需的NH2-三肽處理氯甲酸酯，得到氨基甲酸環(huán)戊酯。
在制備一種化合物中，可將其中的R4-N(R5)-C(O)-或者R4-NH-C(S)-、保護(hù)的P3或者整個(gè)肽或者一個(gè)肽片段用光氣處理隨后用胺處理，如在SynLett.Feb 1995，(2)，142-144中所述，或者與市場(chǎng)上可以得到的異氰酸酯和合適的堿例如三乙胺反應(yīng)。
如在專利Ger.Offen.(1998)，第84頁(yè)，DE 19802350或者WO98/32748中所述，在制備一種化合物中，可將其中的R4-N(R5)-S(O2)、一種保護(hù)的P3或者整個(gè)肽或者一個(gè)肽片段用新鮮制備的或者市場(chǎng)上可以得到的磺酰氯處理，隨后用胺處理進(jìn)行。
所述C-末端殘基的α-羧基通常可被保護(hù)成酯(CPG)，后者可以被裂解得到羧酸?？刹捎玫谋Ｗo(hù)基團(tuán)包括1)烷基酯，例如甲基、三甲基甲硅烷基乙基和叔丁基，2)芳烷基酯，例如芐基和取代的芐基，或者3)可通過(guò)溫和的堿處理或者溫和的還原方法裂解的酯，例如三氯乙基酯和苯乙酮酯。
在堿例如4-二甲基氨基吡啶(4-DMAP)和/或1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一-7-烯(DBU)存在下，在肽偶合試劑例如CDI或者EDAC存在下，將生成的α-甲酸(從通過(guò)溫和的酸、溫和的堿處理或者溫和的還原方法裂解得到)與R1SO2NH2[通過(guò)在氨飽和的四氫呋喃溶液中處理R1SO2Cl來(lái)制備]偶合，引入P1’部分，有效地裝配所述三肽P1’-P1-P2-P3-APG。在該方法中，一般使用1-5當(dāng)量的P1’偶合劑。
另外，如果通過(guò)以上描述的方法除去P3保護(hù)基團(tuán)APG并用B部分置換，可在堿例如4-二甲基氨基吡啶(4-DMAP)和/或1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一-7-烯(DBU)存在下，在肽偶合試劑例如CDI或者EDAC存在下，將來(lái)源于裂解(通過(guò)溫和的酸、溫和的堿處理或者溫和的還原方法裂解得到)生成的α-甲酸與R1SO2NH2[通過(guò)在氨飽和的四氫呋喃溶液中處理R1SO2Cl或本文描述的其他方法來(lái)制備]偶合，引入P1’部分，制備三肽P1’-P1-P2-P3-B。在這種方法中通常使用1-5當(dāng)量的P1’偶合劑。
本發(fā)明的化合物可通過(guò)多種方法制備，包括在以下實(shí)施例中描述的那些方法，以及美國(guó)專利6,323,180及在2001年11月20日遞交的美國(guó)專利申請(qǐng)10/001,850中描述的方法。美國(guó)專利6,323,180及美國(guó)專利申請(qǐng)10/001,850的內(nèi)容通過(guò)引用整體結(jié)合到本文中作為參考。
流程II進(jìn)一步顯示通過(guò)三肽羧酸中間體(1)與P1′磺酰胺的偶合構(gòu)建式I化合物的方法(應(yīng)注意以下所示基團(tuán)R6、R7、R8、R9、R10、R11代表雜環(huán)體系的取代基)。所述偶合反應(yīng)要求在溶劑如THF(可加熱至回流)中用用偶合劑如羰基二咪唑處理羧酸(1)，接著在溶劑如THF或二氯甲烷中，在堿如DBU的存在下，使所形成的(1)的衍生物與P1′磺酰胺加成。
流程II 流程III顯示了一種作為選擇的構(gòu)建式I的化合物的方法。其中使用流程1所用的方法，使P1′磺酰胺組件與P1組件偶合。隨后可將所得的P1-P1′部分的氨基末端脫保護(hù)。在該通例中，使用的是Boc保護(hù)基，但本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到在該方法中可使用多種合適的氨基保護(hù)基?？稍谌軇┤缍纫彝橹?，使用酸如三氟乙酸除去所述Boc保護(hù)基，得到脫保護(hù)的胺的TFA鹽。所述TFA胺鹽可在隨后的偶合反應(yīng)中直接使用或可先被轉(zhuǎn)化為HCl胺鹽，接著如流程III所示用于所述偶合反應(yīng)。所述HCl胺鹽(3)與羧基封端的P4-P3-P2中間體的偶合可在溶劑如二氯甲烷中，使用偶合劑如HATU來(lái)完成，得到式I化合物(4)。
流程III 流程IV顯示了一種作為選擇的構(gòu)建式I的化合物的方法。其中在堿如二異丙基胺和溶劑如二氯甲烷的存在下，使用偶合劑如PyBOP，使P1-P1′封端的胺(1)的鹽酸鹽與P2組件的游離羧基偶合。所得的P2-P1-P1′，中間體可通過(guò)兩步驟轉(zhuǎn)化為式I化合物，其中第一步驟為在溶劑如二氯甲烷中，使用酸如TFA將P2胺末端脫保護(hù)。可在堿如二異丙基胺的存在下，使用溶劑如二氯甲烷，使用標(biāo)準(zhǔn)偶合劑如PyBop，使所得的三氟乙酸鹽與P4-P3組件的羧基末端偶合，得到式I化合物(4)。
流程IV 用于上述流程的P4-P3-P2中間體可如上所述進(jìn)行構(gòu)造，流程V進(jìn)一步描述了該方法。其中可將P4-P3中間體(1)的游離羧基末端與P2組件的氨基末端偶合，得到P4-P3-P2二肽(2)。P4-P3-P2中間體的羧基末端可通過(guò)酯基的皂化反應(yīng)脫保護(hù)，得到P4-P3-P2的游離羧酸(3)。使用本文中描述的方法，可將如(3)的中間體轉(zhuǎn)化為式I化合物。
流程V 如本文中描述的方法，也可將式I化合物轉(zhuǎn)化為其它式I化合物。這些方法的一個(gè)實(shí)例如流程VI所示，其中在P4位帶有Boc基的式I化合物(1)被轉(zhuǎn)化為在P4位帶有脲基的式I化合物(3)。(1)變?yōu)?3)的轉(zhuǎn)化可分兩步進(jìn)行，首先在溶劑如二氯甲烷中，使用酸如TFA處理(1)而將其轉(zhuǎn)化為胺(2)。所得的胺TFA鹽可在一當(dāng)量的堿存在下用異氰酸酯處理，得到P3部分被脲封端的式I化合物(3)。如上所述，本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到中間體(2)可用作制備其中P3基團(tuán)被酰胺、磺酰胺(sulfonamide)、硫脲或磺酰胺(sulfamide)封端的式I化合物的原料?？墒褂糜砂沸纬伤鯬4官能團(tuán)的標(biāo)準(zhǔn)條件來(lái)構(gòu)造所述式I化合物。
流程VI 在構(gòu)造式I化合物中，使用上述一種通法(在以下將更詳細(xì)描述)將P1′末端引入分子中。在一些實(shí)施例中，P1′組件為環(huán)烷基-或烷基磺酰胺，它們可通過(guò)商業(yè)渠道獲得或可用氨處理相應(yīng)的烷基-或環(huán)烷基-磺酰氯制得?；蛘撸@得這些磺酰胺可使用流程VII顯示的通法合成。其中如采用叔丁胺處理，將商品3-氯-丙基磺酰氯(1)轉(zhuǎn)化為適當(dāng)保護(hù)的磺酰胺。接著在低溫、溶劑如THF存在下，用兩當(dāng)量的堿如丁基鋰處理，將所得的磺酰胺(2)轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的環(huán)烷基磺酰胺?？捎盟崽幚韺⑺玫沫h(huán)烷基磺酰胺脫保護(hù)，得到所需的無(wú)保護(hù)的環(huán)烷基磺酰胺。
流程VII 在制備式I化合物中所用的P1組件可通過(guò)商業(yè)渠道獲得，但也可使用本文描述的方法合成，并隨后采用本文描述的方法引入到式I化合物中。取代的P1環(huán)丙基氨基酸可按照流程VIII所示的通法合成。
在堿產(chǎn)物存在下，用1，4-二鹵丁烯(2)處理商品或容易合成的亞胺(1)得到亞胺(3)。隨后將3進(jìn)行酸水解，得到4，該化合物的主要產(chǎn)物為烯丙基與羧基呈順式構(gòu)型。4的胺部分可用Boc基保護(hù)，得到完全保護(hù)的氨基酸5。該中間體為外消旋混合物，可通過(guò)酶方法拆分所述混合物，通過(guò)蛋白酶將5的酯部分裂解，得到相應(yīng)的羧酸。不受任何特定理論的限制，相信該反應(yīng)為選擇性反應(yīng)，其中一種對(duì)映異構(gòu)體的反應(yīng)速率快于其鏡像分子，產(chǎn)生所述中間體外消旋混合物的動(dòng)態(tài)拆分反應(yīng)。在本文中所引用的實(shí)例中，更優(yōu)選構(gòu)造成式I化合物的立體異構(gòu)體為包含(1R，2S)立體化學(xué)構(gòu)型的5a。在酶存在下，該對(duì)映異構(gòu)體并不經(jīng)歷酯裂解，由此該對(duì)映異構(gòu)體5a可從反應(yīng)混合物中回收得到。但是較不優(yōu)選的對(duì)映異構(gòu)體5b包含(1S，2R)立體化學(xué)構(gòu)型，其將經(jīng)歷酯裂解(即水解)，得到游離酸6。反應(yīng)完成后，可通過(guò)常規(guī)方法如萃取或?qū)游龅?，將所述?a從酸產(chǎn)物6中分離出。
流程VIII 在以下流程中顯示制備P2中間體和式I化合物的方法。應(yīng)注意在許多情況下僅僅以中間體的一個(gè)位置來(lái)示例反應(yīng)。但應(yīng)理解這樣的反應(yīng)可用于表示該中間體其它位置上的反應(yīng)。此外，在具體實(shí)施例中給出的各種中間體、反應(yīng)條件和方法同樣適應(yīng)于具有其它取代方式的化合物。以下顯示的通用流程在本文中也給出了實(shí)施例。所述通用流程和具體實(shí)施例均是非限制性的，例如，在流程IX中，使用異喹啉核作為通用流程的部分，但該途徑也代表構(gòu)造可替代雜環(huán)取代基的其它可行方法，如用喹啉或吡啶代替其中的異喹啉組件。
流程IX 流程IX顯示N-保護(hù)的C4-羥基脯氨酸部分與雜環(huán)偶合形成中間體(4)，隨后通過(guò)本文中所述的肽延長(zhǎng)方法，將所述中間體(4)改性成式I的化合物。應(yīng)注意在第一步將C4-羥基脯氨酸基團(tuán)與雜芳基組件偶合的步驟中，使用了堿。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到該偶合可在溶劑如DMF、DMSO或THF中，使用堿如叔丁醇鉀或氫化鈉來(lái)完成。與異喹啉環(huán)體系的偶合在Cl上進(jìn)行(異喹啉環(huán)體系的編號(hào)如流程IX的中間體2所示)，該反應(yīng)通過(guò)氯基的置換進(jìn)行。應(yīng)注意在該位置上可使用其它可替代的離去基團(tuán)，如流程中所示的氟基。所述氟中間體(3)可使用本文描述的文獻(xiàn)方法，由相應(yīng)的氯化合物得到。應(yīng)注意在給定環(huán)體系中的離去基團(tuán)(氯或氟)的位置可如流程X所示作變化，在流程X中離去基團(tuán)(在該實(shí)例中為氟)位于中間體(2)的異喹啉環(huán)體系的C6位置。
流程X
還應(yīng)注意，按照本文描述的術(shù)語(yǔ)雜環(huán)的定義，如在流程IX和流程X的中間體(2)的環(huán)雜原子的位置也是可變的。在流程X中，中間體(2)可與C4羥基脯氨酸衍生物偶合，得到P2組件(3)。使用本文描述的方法，可將該C6-取代的異喹啉衍生物轉(zhuǎn)化為式I化合物。
上述使C4-羥基脯氨酸與芳族和雜芳族化合物進(jìn)行偶合反應(yīng)的一種可替代方法為流程XI步驟1所描述的Mitsunobu反應(yīng)流程XI 在該通用反應(yīng)流程中，C4-羥基脯氨酸衍生物與喹唑啉環(huán)體系偶合。該反應(yīng)在非質(zhì)子溶劑如THF或二_烷中，使用反應(yīng)劑如三苯基膦和DEAD(偶氮二甲酸二乙酯)進(jìn)行，并可用于形成芳基和雜芳基醚。注意在該偶合反應(yīng)中，C4-羥基脯氨酸衍生物的C4手性中心的立體化學(xué)構(gòu)型發(fā)生反轉(zhuǎn)，因此必須使用C4位為(S)立體化學(xué)構(gòu)型的C4-羥基脯氨酸衍生物作為原料(如流程XI所示)。應(yīng)注意在文獻(xiàn)中已經(jīng)描述了大量的Mitsunobu反應(yīng)的修改和改進(jìn)，這些教導(dǎo)均通過(guò)引用結(jié)合到本文中。
在本文的實(shí)例的一個(gè)子集中，異喹啉將引入到最終的化合物中，具體引入到所述化合物的P2部分中。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到存在大量的合成異喹啉的方法。此外，由這些方法制得的異喹啉可使用本文描述的方法引入到式I的最終化合物中。一種合成異喹啉的通法在流程XII中顯示，其中分四步將通式如結(jié)構(gòu)(2)所示的肉桂酸衍生物轉(zhuǎn)化為1-氯異喹啉
流程XII 參考N.Briet等，Tetrahedron，2002，5761。
所述氯異喹啉隨后可用于如本文所述的與C4-羥基脯氨酸衍生物的偶合反應(yīng)。肉桂酸轉(zhuǎn)化為氯喹啉的反應(yīng)首先是在堿存在下，用氯甲酸烷基酯處理肉桂酸。接著將所得的脫水物疊氮化鈉處理，形成如流程所示的?；B氮化物(3)。也可采用其它替代的由羧酸形成?；B氮化物的方法，例如可在非質(zhì)子溶劑如二氯甲烷中，在堿存在下，所述羧酸用二苯基磷?；B氮化物(DPPA)處理形成?；B氮化物。隨后將?；B氮化物(3)轉(zhuǎn)化為流程中所示的相應(yīng)的異喹諾酮(4)。接著將所述?；B氮化物在高沸點(diǎn)溶劑如二苯基甲烷中加熱至約190℃。該反應(yīng)為常規(guī)反應(yīng)，可以以中至高的產(chǎn)率由相應(yīng)的肉桂酸衍生物制備取代的異喹諾酮。應(yīng)注意所述肉桂酸衍生物可通過(guò)商業(yè)渠道獲得或可由相應(yīng)的苯甲醛(1)衍生物直接與丙二酸或其衍生物縮合制得并也可經(jīng)Wittig反應(yīng)制得。通過(guò)用磷酰氯處理，可將所述流程XII的中間體異喹諾酮(4)轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的1-氯異喹啉。該反應(yīng)為常規(guī)反應(yīng)，可用于任何異喹諾酮、喹諾酮或本文所示的其它雜環(huán)，當(dāng)羥基取代基與所述雜環(huán)環(huán)體系的氮原子共軛時(shí)，可將所述羥基轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的氯化合物。
一種合成異喹啉環(huán)體系的替代方法為Pomeranz-Fritsh方法。該通法如流程XIII所示。該方法首先將苯甲醛衍生物(1)轉(zhuǎn)化為官能化亞胺(2)。接著在高溫下用酸將所述亞胺轉(zhuǎn)化為異喹啉環(huán)體系。
流程XIII 流程XIII的合成異喹啉的方法為常規(guī)方法，應(yīng)注意該方法特別可用于得到在C8位取代的異喹啉中間體(注意流程XIII的中間體(3)的異喹啉環(huán)的C8位被取代基R11取代)。如流程所示，可分兩步將中間體異喹啉(3)轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的1-氯喹啉(5)。第一步為在非質(zhì)子溶劑如二氯甲烷中，用間氯過(guò)苯甲酸處理異喹啉(3)，形成異喹啉N-氧化物(4)。通過(guò)在回流的氯仿中，用磷酰氯處理，可將中間體(4)轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的1-氯喹啉。注意該兩步法為常規(guī)方法并可用于分別由異喹啉和喹啉制備氯異喹啉和氯喹啉。
另一種合成異喹啉環(huán)體系的方法如流程XIV所示。在該方法中，在溶劑如THF中，在低溫下，用強(qiáng)堿如叔丁基鋰處理鄰-烷基苯甲酰胺衍生物(1)。
流程XIV 接著向該反應(yīng)混合物中加入腈衍生物，該腈衍生物與(1)的脫質(zhì)子化衍生得到的陰離子進(jìn)行加成反應(yīng)，形成(2)。該反應(yīng)為常規(guī)方法，可用于形成取代的異喹啉。通過(guò)本文描述的方法可將流程XIV的中間體(2)轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的1-氯喹啉。
其它合成異喹啉的方法如流程XV所示。
使用叔丁基鋰將中間體(I)脫質(zhì)子化的方法如上所述。但是，如下所示，在本發(fā)明方法中，所述中間體陰離子被酯所捕獲，形成中間體(2)。在接下來(lái)的反應(yīng)中，酮(2)與乙酸銨在高溫下縮合，形成喹諾酮(3)。該反應(yīng)為常規(guī)反應(yīng)，可用于構(gòu)造取代的異喹諾酮，如本文所述，異喹諾酮隨后轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的1-氯異喹啉。
流程XV 而另一種構(gòu)造異喹啉的方法參見(jiàn)流程XVI。該方法首先將鄰-烷基芳基亞胺衍生物如(1)進(jìn)行脫質(zhì)子化(采用仲丁基鋰、THF)，并通過(guò)加入活性羧酸衍生物如Weinreb酰胺將所得的陰離子猝滅。
流程XVI 通過(guò)在高溫下使所得的酮基亞胺(2)與乙酸銨縮合，可將其轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的異喹啉。該方法為常規(guī)方法，可用于合成取代的異喹啉。通過(guò)本文描述的方法，可將所述異喹啉轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的1-氯喹啉。
本文所述的雜環(huán)以及引入到式I化合物中的那些雜環(huán)可進(jìn)一步被官能化。對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然所述雜環(huán)的其它官能化可在將這些官能團(tuán)引入式I的化合物之前或之后進(jìn)行。以下流程舉例說(shuō)明這一點(diǎn)。例如流程XVII顯示在室溫下，在醇溶劑(得到醇鹽)中，用醇鈉或醇鉀類物質(zhì)處理方程1中的1-氯-6-氟-異喹啉(1)，將其轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的1-氯-6-烷氧基-異喹啉類物質(zhì)。
流程XVII 在一些情況下，可能需要加熱反應(yīng)物以使反應(yīng)完全。可使用本文中描述的方法將所述氯喹啉引入到式I的化合物。P2雜環(huán)組件的改性也可在其被引入到式I化合物之后進(jìn)行，如流程VXII的方程2所示。如方程2的(1)的特定化合物，其酞嗪核上所含的離去基團(tuán)可被親核試劑如醇鹽在溶劑(如相應(yīng)的醇，所述醇鹽衍生自所述醇)中置換。這些反應(yīng)可在室溫下進(jìn)行，但在一些情況下需要加熱反應(yīng)物以完成反應(yīng)。
流程XVIII提供一種采用鈀介導(dǎo)的偶合反應(yīng)改性本文定義的雜環(huán)的通例。所述偶合反應(yīng)可用于對(duì)雜環(huán)環(huán)體系的各個(gè)位置進(jìn)行官能化，條件是所述環(huán)適合被活化或官能化，如采用流程中所示的氯化物進(jìn)行官能化。該程序以1-氯異喹啉(1)為原料，用間氯過(guò)苯甲酸處理該化合物可轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的N-氧化物(2)。在回流的氯仿中用磷酰氯處理，可將所述中間體(2)轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的1，3-二氯異喹啉(3)。中間體(3)可與N-Boc-4-羥基脯氨酸通過(guò)本文描述的方法偶合，得到流程中所示的中間體(5)。中間體(5)可在鈀反應(yīng)劑和堿存在下，在溶劑如THF、甲苯或DMF中與芳基硼酸進(jìn)行Suzuki偶合，得到C3-芳基異喹啉中間體(6)。
在該P(yáng)d介導(dǎo)的偶合方法中也可使用雜芳基硼酸，得到C3-雜芳基異喹啉。通過(guò)本文描述的方法，可將中間體(6)轉(zhuǎn)化為最終的式I化合物。
流程XVIII 鈀催化的雜芳基體系與芳基或雜芳基組件的偶合反應(yīng)也可在后面的合成階段中用于構(gòu)造如流程IXX所示的式I的化合物。其中使用前述雜芳基鹵基部分的醇鹽置換方法，將三肽?；酋０分虚g體(1)與1-氯-3-溴異喹啉(2)偶合，得到中間體(3)。如本文所述，(1)和(2)的偶合在催化劑如氯化鑭存在下更為有效。通過(guò)使用Suzuki偶合(方法1在溶劑如DMF中，在鈀催化劑如四(三苯基膦)合鈀和堿如碳酸銫存在下，使(3)與雜芳基或芳基硼酸偶合)或Stille偶合(方法2在溶劑如甲苯中，在鈀催化劑如四(三苯基膦)合鈀存在下，使(3)與雜芳基或芳基錫衍生物偶合)，可將中間體(3)的異喹啉環(huán)體系進(jìn)一步官能化。
流程IXX 鈀反應(yīng)也可用于C4-氨基脯氨酸組件與官能化雜環(huán)的偶合。流程XX顯示在溶劑如甲苯中，在鈀催化劑和堿存在下，中間體(1)與官能化異喹啉的偶合。使用本文描述的方法，可將中間體如(3)轉(zhuǎn)化為式I化合物。
流程XX 官能化異喹啉環(huán)體系的構(gòu)造也可采用[4+2]環(huán)加成反應(yīng)來(lái)實(shí)現(xiàn)。例如(流程XXI)使異氰酸乙烯基酯(1)與苯炔前體(2)進(jìn)行環(huán)加成反應(yīng)，得到官能化的異喹諾酮(3)。使用本文描述的方法，可將所述異喹啉引入式I化合物中。
流程XXI 本發(fā)明還提供包含本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或前藥及藥學(xué)上可接受的載體的組合物。本發(fā)明的藥用組合物包含治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或前藥及藥學(xué)上可接受的載體，以及藥學(xué)上可接受的載體，如賦形劑或溶媒稀釋劑。
這些組合物中活性成分(即化合物)一般占所述組合物重量的0.1％-99.9％并通常占大約5-95％。
本發(fā)明的藥用組合物可經(jīng)口、胃腸外或經(jīng)植入貯藏庫(kù)給藥。優(yōu)選口服給藥或注射給藥。在一些情況下，可用藥學(xué)上可接受的酸、堿或緩沖劑調(diào)節(jié)制劑的pH值，以增強(qiáng)所配制的配混物或其釋放形式的穩(wěn)定性。本文使用的術(shù)語(yǔ)“胃腸外”包括皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)腔內(nèi)、滑膜腔內(nèi)、胸骨內(nèi)、鞘內(nèi)和病灶內(nèi)注射或輸注技術(shù)。
藥用組合物可為無(wú)菌注射制劑形式，例如無(wú)菌注射水性或油性混懸劑。該混懸劑可按照本領(lǐng)域已知的技術(shù)，使用合適的分散劑或潤(rùn)濕劑以及懸浮劑配制。關(guān)于配制這些配混物的詳細(xì)內(nèi)容為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知。
當(dāng)口服給藥時(shí)，本發(fā)明的藥用組合物可以任何口服可接受劑型給予，這些劑型包括但不限于膠囊劑、片劑和含水混懸劑和溶液劑。在口服片劑的情況下，通常使用的載體包括乳糖和玉米淀粉。通常還加入潤(rùn)滑劑，如硬脂酸鎂。對(duì)于口服膠囊劑，可用的稀釋劑包括乳糖和干燥的玉米淀粉。當(dāng)含水混懸劑經(jīng)口服給藥時(shí)，將活性組分與乳化劑和懸浮劑混合。如果需要，也可加入某些甜味劑和/或矯味劑和/或著色劑。
其它適合上述組合物的載體可參見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)教材，如“Remington′s Pharmaceutical Sciences”，第19版，Mack PublishingCompany，Easton，Penn.，1995。關(guān)于本發(fā)明藥用組合物的合適釋放劑型的設(shè)計(jì)和制備的詳細(xì)情況為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知。
在預(yù)防和治療HCV介導(dǎo)的疾病的單一療法中，一般的本發(fā)明化合物的劑量為約0.01-約1000毫克/千克體重(mg/kg體重)/天、優(yōu)選約0.5-約250mg/kg體重/天。本發(fā)明的藥用組合物一般分約1-5次/天給藥，或以連續(xù)輸注的方式給藥。這種給藥方式可用于慢性或急性治療?？膳c載體材料混合構(gòu)成單一劑型的活性組分的量將根據(jù)接受治療的宿主以及具體的給藥方式而異。
如熟練的技術(shù)人員會(huì)理解，可能會(huì)需要低于或高于以上所述的劑量。用于任何具體患者的具體劑量和治療方案將依多種因素而異，包括所用具體化合物的活性、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥時(shí)間、排泄速率、聯(lián)合藥物、感染的嚴(yán)重情況和病程、患者對(duì)感染的處理以及主治醫(yī)生的診斷。通常，開(kāi)始時(shí)采用遠(yuǎn)少于所述肽的最佳劑量的劑量進(jìn)行治療。隨后，逐漸小量地增大劑量，直至達(dá)到最佳效果。通常，給予所述化合物的濃度最好是能夠主要起抗病毒效果，而又不會(huì)引起任何有害或不利的副作用。
當(dāng)本發(fā)明組合物包含本發(fā)明化合物和一種或多種其它治療或預(yù)防藥物的組合時(shí)，所述化合物以及其它藥物的劑量占通常以單一治療方案給藥的劑量的約10-100％、優(yōu)選約10-80％。
當(dāng)這些化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或前藥與藥學(xué)上可接受的載體一起配制時(shí)，所得的組合物可經(jīng)內(nèi)服給予哺乳動(dòng)物(如人)，以抑制HCV NS3蛋白酶或治療或預(yù)防HCV病毒感染。這些治療還可使用本發(fā)明化合物與以下藥物聯(lián)合給藥來(lái)實(shí)現(xiàn)，其中所述藥物包括但不限于免疫調(diào)節(jié)劑，例如干擾素；其它的抗病毒藥，如利巴韋林、金剛烷胺；其它的HCV NS3蛋白酶抑制劑；HCV生活周期中其它靶如解旋酶、聚合酶、金屬蛋白酶或內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)的抑制劑；或者它們的組合?？蓪⑵渌乃幬锱c本發(fā)明的化合物組合成單一劑型?；蛘邔⑦@些其它的藥物作為多劑型的部分單獨(dú)給予哺乳動(dòng)物。
因此，本發(fā)明另一方面提供抑制患者體內(nèi)HVC NS3蛋白酶活性的方法，所述方法通過(guò)給予本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物來(lái)實(shí)現(xiàn)，其中所述取代基如上定義。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，這些方法用于減少患者體內(nèi)HCV NS3蛋白酶活性。如果所述藥用組合物僅包含作為活性成分的本發(fā)明化合物，這種方法可另外包含給予所述患者選自以下的藥物的步驟免疫調(diào)節(jié)劑、抗病毒藥、HCV蛋白酶抑制劑或者HCV生命循環(huán)中其它靶標(biāo)例如解旋酶、聚合酶或金屬蛋白酶的抑制劑。這些另外的藥物可以在給予本發(fā)明化合物之前、同時(shí)或者之后給予患者。
在另一個(gè)優(yōu)選的方面，這些方法用于抑制患者的病毒復(fù)制。這些方法可用于治療或預(yù)防HCV疾病。
本發(fā)明化合物還可用作實(shí)驗(yàn)室試劑。各種化合物可提供用于設(shè)計(jì)病毒復(fù)制測(cè)試、動(dòng)物測(cè)試系統(tǒng)的證實(shí)和結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究的研究工具，以進(jìn)一步增加HCV疾病機(jī)理的知識(shí)。
本發(fā)明化合物還可用于治療或預(yù)防如血液、組織、外科器械和衣物、實(shí)驗(yàn)室儀器和衣服，以及血液收集或輸液裝置和材料等物質(zhì)的病毒污染，由此減少與這些物質(zhì)接觸的實(shí)驗(yàn)室人員、醫(yī)務(wù)人員或患者受病毒感染的危險(xiǎn)。
實(shí)施例以下的具體實(shí)例闡明本發(fā)明化合物的合成法，但不對(duì)本發(fā)明的宗旨或者范圍構(gòu)成限制。為制備本發(fā)明所包含的化合物，可將這些方法進(jìn)行改變，但這些改變沒(méi)有具體公開(kāi)。另外，以某些不同方式生成相同化合物的不同方法對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)講也是顯而易見(jiàn)的。
除非另外指明，否則溶液百分比表示重量對(duì)體積的關(guān)系，溶液比率表示體積對(duì)體積的關(guān)系。在Bruker 300、400或者500MHz波譜儀上記錄核磁共振(NMR)光譜；化學(xué)位移(δ)以每百萬(wàn)分之一報(bào)道。按照Still的快速層析技術(shù)(W.C.Still等，J.Org.Chem.，(1978)，43，2923)，于硅膠(SiO2)上進(jìn)行快速層析法。
采用SPD-10AV UV-Vis檢測(cè)器，在Shimadzu LC-10AS液相色譜儀上記錄所有的液相層析(LC)數(shù)據(jù)，在電噴霧模式(ES+)下，用Micromass Platform測(cè)定質(zhì)譜(MS)數(shù)據(jù)。
除非另外指明，否則采用具有以下條件的7個(gè)方法學(xué)中的一種，通過(guò)LC/MS，分析每個(gè)化合物。
柱(方法A)-YMC ODS S7 C18 3.0×50mm(方法B)-YMC ODS-A S7 C18 3.0×50mm(方法C)-YMC S7 C18 3.0×50mm(方法D)-YMC Xterra ODS S7 3.0×50mm(方法E)-YMC Xterra ODS S7 3.0×50mm(方法F)-YMC ODS-A S7 C18 3.0×50mm(方法G)-YMC C 18 S5 4.6×50mm]梯度100％溶劑A/0％溶劑B至0％溶劑A/100％溶劑B梯度時(shí)間2分鐘(A、B、D、F、G)；8分鐘(C、E)。
保留時(shí)間1分鐘(A、B、D、F、G)；2分鐘(C、E)。
流速5mL/min檢測(cè)器波長(zhǎng)220nm溶劑A10％MeOH/90％H2O/0.1％TFA溶劑B10％H2O/90％MeOH/0.1％TFA。
在本申請(qǐng)中使用的縮寫，具體包括在以下示例性實(shí)施例中的縮寫為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。其中一些所用的縮寫如下所示
rt室溫Boc 叔丁氧基羰基DMSO 二甲基亞砜EtOAc 乙酸乙酯t-BuOK叔丁醇鉀Et2O 乙醚TBME 叔丁基甲基醚THF 四氫呋喃CDI 羰基二咪唑DBU 1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯TFA 三氟乙酸NMM N-甲基嗎啉HATU O-7-氮雜苯并三唑-1-基HBTU 六氟磷酸O-{1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲_HOBT N-羥基苯并三唑PyBrop六氟磷酸溴-雙吡咯烷-_DMF 二甲基甲酰胺MeOH 甲醇EDTA 乙二胺四乙酸HRMS 高分辨率質(zhì)譜DMAP 4-二甲基氨基吡啶DIPEA 二異丙基乙胺DCM 二氯甲烷DCE 二氯乙烷以下實(shí)施例描述的本發(fā)明化合物和化學(xué)中間體按照以下方法制備。應(yīng)注意以下示例性部分分成各部分存在。各部分標(biāo)記為部分A至K。在本申請(qǐng)的整個(gè)實(shí)施例部分，實(shí)施例編號(hào)和化合物編號(hào)并不連續(xù)，因此，各部分在編號(hào)上是“中斷”的。在各部分中的編號(hào)通常是連續(xù)的。部分L描述化合物的生物活性。部分M描述可使用本發(fā)明方法制備的其它化合物的子集。
部分A各中間體的制備各P1中間體的制備在該部分描述的P1中間體可在本文描述的方法中用于制備式I化合物。
I P1組件1.外消旋(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酸乙酯的制備 方法A步驟1 將甘氨酸乙酯鹽酸鹽(303.8g，2.16mole)懸浮在叔丁基甲基醚(1.6L)中。加入苯甲醛(231g，2.16mole)和無(wú)水硫酸鈉(154.6g，1.09mole)并使用冰水浴將混合物冷卻至0℃。在30分鐘內(nèi)滴加三乙胺(455mL，3.26mole)并將混合物在室溫下攪拌48。隨后加入冰冷卻的水(1L)猝滅反應(yīng)物并分離出有機(jī)層。水相用叔丁基甲基醚(0.5L)萃取并將合并的有機(jī)相用飽和碳酸氫鈉水溶液(1L)和鹽水(1L)的混合物洗滌。溶液經(jīng)硫酸鎂干燥，真空濃縮，得到392.4g N-芐基亞胺產(chǎn)物，為粘稠黃色油狀物，該產(chǎn)物直接用于下一步驟中。
1HNMR(CDCl3，300MHz)δ1.32(t，J＝7.1Hz，3H)，4.24(q，J＝7.1Hz，2H)，4.41(d，J＝1.1Hz，2H)，7.39-7.47(m，3H)，7.78-7.81(m，2H)，8.31(s，1H).
步驟2 在60分鐘內(nèi)，向叔丁醇鋰(84.06g，1.05mol)的無(wú)水甲苯(1.2L)懸浮液中滴加(N-芐基亞胺)甘氨酸乙酯(100.4g，0.526mol)和反式-1，4-二溴-2-丁烯(107.0g，0.500mol)在無(wú)水甲苯(0.6L)中的混合物。完成加入后，加入水(1L)和叔丁基甲基醚(TBME，1L)猝滅深紅色混合物。分離出水相并用TBME(1L)進(jìn)行第二次萃取。合并有機(jī)相，加入1NHCl(1L)并將混合物在室溫下攪拌2h。分離出有機(jī)相并用水(0.8L)萃取。隨后合并水相，用鹽(700g)飽和，加入TBME(1L)并將混合物冷卻至0℃。滴加10N NaOH將攪拌著的混合物堿化至pH為14，分離有機(jī)層，水相用TBME(2×500mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取液干燥(硫酸鎂)并濃縮至1L的體積。向該游離胺溶液中加入BOC2O或二碳酸二叔丁酯(131.0g，0.6mol)，將混合物在室溫下攪拌4天。向反應(yīng)物中加入另外的二碳酸二叔丁酯(50g，0.23mol)，將混合物回流3h，隨后冷卻至室溫過(guò)夜。反應(yīng)混合物經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮，得到80g粗物質(zhì)。該剩余物經(jīng)快速層析純化(2.5Kg SiO2，洗脫液1-2％甲醇/二氯甲烷)，得到57g(53％)外消旋的N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酸乙酯，為黃色油狀物，該油狀物在冰箱中靜置時(shí)固化1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.26(t，J＝7.1Hz，3H)，1.46(s，9H)，1.43-1.49(m，1H)，1.76-1.82(br m，1H)，2.14(q，J＝8.6Hz，1H)，4.18(q，J＝7.2Hz，2H)，5.12(dd J＝10.3，1.7Hz，1H)，5.25(br s，1H)，5.29(dd，J＝17.6，1.7Hz，1H)，5.77(ddd，J＝17.6，10.3，8.9Hz，1H)；MS m/z 254.16(M-1)步驟3外消旋(1R，2S)/(1S，2R)1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酸乙酯鹽酸鹽的制備 將N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酸乙酯(9.39g，36.8mmol)溶于4N HCl/二_烷(90ml，360mmol)中并在室溫下攪拌2h。將反應(yīng)混合物濃縮，得到(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酸乙酯鹽酸鹽，定量收率(7g，100％)。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.32(t，J＝7.1，3H)，1.72(dd，J＝10.2，6.6Hz，1H)，1.81(dd，J＝8.3，6.6Hz，1H)，2.38(q，J＝8.3Hz，1H)，4.26-4.34(m，2H)，5.24(dd，10.3，1.3Hz，1H)5.40(d，J＝17.2，1H)，5.69-5.81(m，1H).
外消旋N-Boc-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酸乙酯鹽酸鹽的另一種制備方法 在-78℃下，向叔丁醇鉀(11.55g，102.9mmol)的THF(450mL)溶液中加入商品N，N-二芐基亞胺的甘氨酸乙酯(25.0g，93.53mmol)的THF(112mL)溶液。使反應(yīng)混合物升溫至0℃，攪拌40min，隨后再次冷卻至-78℃。向該溶液中加入反式-1，4-二溴-2-丁烯(20.0g，93.50mmol)，將混合物在0℃下攪拌1h，并再次冷卻至-78℃。加入叔丁醇鉀(11.55g，102.9mmol)，立即將混合物升溫至0℃，并再攪拌1小后，接著真空濃縮。將粗產(chǎn)物溶于乙醚(530mL)，加入1N鹽酸(106mL，106mmol)并在室溫下將所得的兩相混合物攪拌3.5h。分離各層，水層用乙醚(2×)洗滌并用飽和碳酸氫鈉水溶液堿化。所需的胺用乙醚萃取(3×)并將合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮，得到游離胺。該物質(zhì)用4N HCl的二_烷(100mL，400mmol)溶液處理并濃縮，得到(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酸乙酯鹽酸鹽，為棕色半固體物(5.3g，收率34％)，與按照方法A得到的物質(zhì)相同，不同之處在于存在少量未確定的芳族雜質(zhì)(8％)。
N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酸乙酯的拆分 拆分A向磷酸鈉緩沖水溶液(0.1M，4.25L，pH 8，裝于12L夾套式反應(yīng)器中，保溫39℃，以300rpm的速率攪拌)中加入511g Acalase 2.4L(約425mL)(Novozymes NoRth America Inc.)。當(dāng)混合物的溫度達(dá)到39℃時(shí)，加入50％NaOH水溶液將pH調(diào)節(jié)至8.0。隨后在40分鐘內(nèi)加入所述外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酸乙酯(85g)在850mL DMSO中的溶液。接著保持反應(yīng)溫度在40℃下24.5h，在此期間，在第1.5h和19.5h的時(shí)間點(diǎn)，使用50％NaOH水溶液將混合物的pH調(diào)節(jié)至8.0。24.5h后，測(cè)得所述酯的對(duì)映體過(guò)量為97.2％，將反應(yīng)物冷卻至室溫(26℃)，攪拌過(guò)夜(16h)，此后，測(cè)定所述酯的對(duì)映體過(guò)量為100％。接著用50％NaOH將反應(yīng)混合物的pH調(diào)節(jié)至8.5，并將所得的混合物用MTBE萃取(2×2L)。隨后將合并的MTBE萃取液用5％碳酸氫鈉(3×100mL)、水(3×100mL)洗滌，并真空蒸發(fā)，得到對(duì)映異構(gòu)體純的N-Boc-(1R，2S)/-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酸乙酯，為淺黃色固體物(42.55g；純度97％，210nm下測(cè)定，不含酸；100％對(duì)映異構(gòu)體過(guò)量(″e(cuò)e″))。
隨后用50％硫酸將來(lái)自萃取方法的水層酸化至pH為2，并用MTBE萃取(2×2L)。MTBE萃取液用水洗滌(3×100mL)并蒸發(fā)，得到所述酸，為淺黃色固體物(42.74g；純度99％，210nm下測(cè)定，不含酯)。
1R，2S-酯1S，2R-酸
拆分B向在24孔板(容量10毫升/孔)的一個(gè)孔中的0.5mL 100mMHeps·Na緩沖液(pH 8.5)內(nèi)加入0.1mL Savinase 16.0L(蛋白酶，來(lái)自Bacillus clausii)(Novozymes NoRth America Inc.)和所述外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酸乙酯(10mg)在0.1mLDMSO中的溶液。將所述板密封并在250rpm、40℃下保溫。18h后，測(cè)定所述酯的對(duì)映體過(guò)量為44.3％，接著取出0.1mL反應(yīng)混合物并與1mL乙醇充分混合；離心后，用手性HPLC分析10μL上層清液。向剩余的反應(yīng)混合物中加入0.1mL DMSO，并將所述板在250rpm、40℃下再保溫3天，隨后向孔中加入4mL乙醇。離心后，用手性HPLC分析10μL上層清液，測(cè)定所述酯的對(duì)映體過(guò)量為100％。
拆分C向在24孔板(容量10毫升/孔)的一個(gè)孔中的0.5mL 100mMHeps·Na緩沖液(pH 8.5)內(nèi)加入0.1mL Esperase 8.0L(蛋白酶，來(lái)自Bacillus halodurans)(Novozymes NoRth America Inc.)和所述外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酸乙酯(10mg)在0.1mL DMSO中的溶液。將所述板密封并在250rpm、40℃下保溫。18h后，測(cè)定所述酯的對(duì)映體過(guò)量為39.6％，接著取出0.1mL反應(yīng)混合物并與1mL乙醇充分混合；離心后，用手性HPLC分析10μL上層清液。向剩余的反應(yīng)混合物中加入0.1mL DMSO，并將所述板在250rpm、40℃下再保溫3天，隨后向孔中加入4mL乙醇。離心后，用手性HPLC分析10μL上層清液，測(cè)定所述酯的對(duì)映體過(guò)量為100％。
按照以下方式分析樣品1)樣品制備將約0.5m1反應(yīng)混合物與10體積EtOH充分混合。離心后，將10μL上層清液注射入HPLC柱中。
2)轉(zhuǎn)化率測(cè)定柱YMC ODS A，4.6×50mm，S-5μm溶劑A，1mM鹽酸；B，MeCN梯度30％B，1min；30-45％B，0.5min內(nèi)；45％B，1.5min；45-30％B，0.5min內(nèi)。
流速2ml/minUV檢測(cè)210nm保留時(shí)間酸，1.2min；酯，2.8min。
3)測(cè)定所述酯的對(duì)映體過(guò)量柱CHIRACEL OD-RH，4.6×150mm，S-5μm流動(dòng)相MeCN/50mM高氯酸水溶液(67/33)。
流速0.75ml/min。
UV檢測(cè)210nm。
保留時(shí)間(1S，2R)異構(gòu)體，酸形式5.2min；外消旋混合物18.5min和20.0min；(1R，2S)異構(gòu)體，酯形式18.5min。
2.N-Boc-(1R，2S)-1-氨基-2-環(huán)丙基環(huán)丙烷甲酸乙酯的制備 用乙酸鈀(5mg，0.022mmol)處理N-Boc-(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酸(255mg，1.0mmol)的乙醚溶液(10mL)。將所得橙/紅色溶液置于氮?dú)鈿夥罩?。?小時(shí)內(nèi)，滴加重氮甲烷的乙醚溶液。將所得的溶液在室溫下攪拌18h。使用氮?dú)饬鲗⑦^(guò)量的重氮甲烷除去。將所得的溶液通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得到粗產(chǎn)物?？焖賹游?10％EtOAc/己烷)純化，得到210mg(78％)N-Boc-(1R，2S)-1-氨基-2-環(huán)丙基環(huán)丙烷甲酸乙酯，為無(wú)色油狀物。LC-MS(保留時(shí)間2.13，類似于方法A，不同之處在于梯度時(shí)間為3min，Xterra MS C18 S7 3.0×50mm柱)，MS m/e 270(M++1)。
3.1-叔丁氧基羰基氨基-環(huán)丙烷-甲酸為通過(guò)商業(yè)渠道獲得的商品 4.1-氨基環(huán)丁烷甲酸甲酯-鹽酸鹽的制備 將1-氨基環(huán)丁烷甲酸(100mg，0.869mmol)(Tocris)溶于10mL甲醇中，鼓泡通入HCl氣體2h。將反應(yīng)混合物攪拌18h，隨后真空濃縮，得到144mg黃色油狀物。在10mL乙醚中研磨，得到100mg題述產(chǎn)物，為白色固體物。
1H NMR(CDCl3)δ2.10-2.25(m，1H)，2.28-2.42(m，1H)，2.64-2.82(m，4H)，3.87(s，3H)，9.21(br s，3H).
5.下述外消旋(1R，2R)/(1S，2S)1-氨基-2-乙基環(huán)丙烷甲酸叔丁酯的制備 乙基與羧基呈順式構(gòu)型步驟1下述2-乙基環(huán)丙烷-1，1-二甲酸二-叔丁酯的制備 向芐基三乙基氯化銨(21.0g，92.2mmol)在50％氫氧化鈉水溶液(92.4g，185mL H2O)中的懸浮液內(nèi)加入1，2-二溴丁烷(30.0g，138.9mmol)和丙二酸二叔丁酯(20.0g，92.5mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌18h，隨后加入冰水混合物。粗產(chǎn)物用二氯甲烷萃取(3×)，依次用水(3×)和鹽水洗滌，合并各有機(jī)萃取液。干燥有機(jī)層(硫酸鎂)、過(guò)濾并真空濃縮。所得的剩余物經(jīng)快速層析純化(100g SiO2，3％乙醚/己烷)，得到題述產(chǎn)物(18.3g，67.8mmol，收率73％)，該產(chǎn)物直接用于下一步反應(yīng)中。
步驟2下述外消旋2-乙基環(huán)丙烷-1，1-二甲酸叔丁酯的制備 0℃下，將步驟1的產(chǎn)物(18.3g，67.8mmol)加入叔丁醇鉀(33.55g，299.0mmol)的無(wú)水乙醚(500mL)懸浮液中，接著加入H2O(1.35mL，75.0mmol)，并在室溫下劇烈攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物倒入冰水混合物中并用乙醚洗滌(3×)。在0℃下用10％檸檬酸水溶液酸化水層，并用EtOAc萃取(3×)。合并的有機(jī)層用水(2×)和鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮，得到題述產(chǎn)物，為淺黃色油狀物(10g，46.8mmol，69％收率)。
步驟3下述(1R，2R)/(1S，2S)2-乙基-1-(2-三甲基田硅烷基乙氧基羰基氨基)環(huán)丙烷-甲酸叔丁酯的制備 向步驟2的產(chǎn)物(10g，46.8mmol)和3g新鮮制備的活化4_分子篩的無(wú)水苯(160mL)懸浮液中加入三乙胺(7.50mL，53.8mmol)和DPPA(11mL，10.21mmol)。反應(yīng)混合物回流3.5h，隨后加入2-三甲基甲硅烷基-乙醇(13.5mL，94.2mmol)，將反應(yīng)混合物回流過(guò)夜。將反應(yīng)混合物過(guò)濾，用乙醚稀釋，依次用10％檸檬酸水溶液、水、飽和碳酸氫鈉水溶液、水(2×)、鹽水(2×)洗滌，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮。剩余物懸浮于10g Aldrich聚異氰酸酯凈化樹脂在120mL二氯甲烷中的溶液中，室溫下攪拌過(guò)夜，過(guò)濾，得到題述產(chǎn)物(8g，24.3mmol；52％)，為淺黃色油狀物1H NMR(CDCl3)δ0.03(s，9H)，0.97(m，5H)，1.20(bm，1H)，1.45(s，9H)，1.40-1.70(m，4H)，4.16(m，2H)，5.30(bs，1H).
步驟4下述外消旋(1R，2R)/(1S，2S)1-氨基-2-乙基環(huán)丙烷甲酸叔丁酯的制備。
乙基與羧基呈順式構(gòu)型向步驟3的產(chǎn)物(3g，9mmol)中加入1.0M TBAF的THF溶液(9.3mL，9.3mmol)，將混合物加熱回流1.5h，冷卻至室溫，隨后用500mlEtOAc萃取。溶液依次用水(2×100mL)和鹽水(2×100mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)，真空濃縮得到題述中間體。
II P1′組件使用本文中描述的方法，以下制備的P1′組件可用于制備式I化合物。
1.環(huán)丙基磺酰胺的制備
步驟1N-叔丁基-(3-氯)丙基磺酰胺的制備 將叔丁基胺(3.0mol，315.3mL)溶于THF(2.5L)中。將溶液冷卻至-20℃。緩慢加入3-氯丙烷磺酰氯(1.5mol，182.4mL)。將反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌24h。將混合物過(guò)濾，濾液真空濃縮。將剩余物溶于二氯甲烷(2.0L)中，所得的溶液用1N HCl(1.0L)、水(1.0L)、鹽水(1.0L)洗滌并經(jīng)硫酸鈉干燥。過(guò)濾并真空濃縮，得到淺黃色固體物，在己烷中結(jié)晶，得到產(chǎn)物，為白色固體物(316.0g，99％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.38(s，9H)，2.30-2.27(m，2H)，3.22(t，J＝7.35Hz，2H)，3.68(t，J＝6.2Hz，2H)，4.35(b，1H).
步驟2環(huán)丙烷磺酸叔丁基酰胺的制備 在-78℃下，向N-叔丁基-(3-氯)丙基磺酰胺(2.14g，10.0mmol)的THF(100mL)溶液中加入n-BuLi(2.5M己烷溶液，8.0mL，20.0mmol)。在1h內(nèi)，將反應(yīng)混合物升溫至室溫。真空除去揮發(fā)份。使剩余物在乙酸乙酯和水(200mL，200mL)間分配。分離出的有機(jī)相用鹽水洗滌、經(jīng)硫酸鈉干燥、過(guò)濾并真空濃縮。剩余物在己烷中重結(jié)晶，得到所需的產(chǎn)物，為白色固體物(1.0g，56％)。
1H NMR(CDCl3)δ0.98-1.00(m，2H)，1.18-1.19(m，2H)，1.39(s，9H)，2.48-2.51(m，1H)，4.19(b，1H)。
步驟3環(huán)丙基磺酰胺的制備 將環(huán)丙烷磺酸叔丁基酰胺(110.0g，0.62mol)的TFA(500mL)溶液在室溫下攪拌16h。真空除去揮發(fā)份。剩余物在EtOAC/己烷(60mL/240mL)中重結(jié)晶，得到所需的產(chǎn)物，為白色固體物(68.5g，91％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.84-0.88(m，2H)，0.95-0.98(m，2H)，2.41-2.58(m，1H)，6.56(b，2H).
2.環(huán)丙基磺酰胺作為選擇的制備方法 向100ml冷卻至0℃的THF溶液中鼓入氨氣，直至飽和。向該溶液中加入5g(28.45mmol)環(huán)丙基磺酰氯(購(gòu)自Array Biopharma)在50mL THF中的溶液中，將溶液在室溫下加熱過(guò)夜并再攪拌一天。將混合物濃縮，直至剩余1-2mL溶劑，裝入30g硅膠柱層析(洗脫液30％-60％EtOAc/己烷)中，得到3.45g(100％)環(huán)丙基磺酰胺，為白色固體物。
1H NMR(甲醇-d4)δ0.94-1.07(m，4H)，2.52-2.60(m，1H)；13C NMR(甲醇-d4)δ5.92，33.01。
3.環(huán)丁基磺酰胺的制備 向冷卻至-78℃的5.0g(37.0mmol)環(huán)丁基溴在30ml無(wú)水乙醚中的溶液內(nèi)加入44mL(74.8mmol)1.7M叔丁基鋰的戊烷溶液，在1.5h內(nèi)，將溶液緩慢升溫至-35℃。將該混合物經(jīng)插套管緩慢加入5.0g(37.0mmol)冷卻至-40℃的新鮮蒸餾的磺酰氯在100ml己烷中的溶液內(nèi)，在1h內(nèi)升溫至0℃并小心真空濃縮。將該混合物再次溶于乙醚中，用一些冰冷卻水洗滌一次，干燥(硫酸鎂)并小心濃縮。將該混合物再次溶于20ml THF中，滴加入500ml飽和氨的THF溶液中，攪拌過(guò)夜。將混合物真空濃縮至得到粗品黃色固體物，在盡可能少量的二氯甲烷的己烷溶液(含1-2滴甲醇)中重結(jié)晶，得到1.90g(38％)環(huán)丁基磺酰胺，為白色固體物。
1H NMR(CDCl3)δ1.95-2.06(m，2H)，2.30-2.54(m，4H)，3.86(p，J＝8Hz，1H)，4.75(brs，2H)；13C NMR(CDCl3)δ16.43，23.93，56.29.HRMS m/z(M-H)-C4H8NSO2的計(jì)算值134.0276，實(shí)測(cè)值134.0282。
4環(huán)戊基磺酰胺的制備 將18.5mL(37.0mmol)2M氯化環(huán)戊基-鎂的乙醚溶液滴加入3.0mL(37.0mmol)新鮮蒸餾的磺酰氯(得自Aldrich)在100ml己烷中的溶液(冷卻至-78℃)內(nèi)。在1小時(shí)內(nèi)將混合物升溫至0℃并小心真空濃縮。將該混合物再次溶于乙醚(200mL)中，用一些冰冷卻的水(200mL)洗滌一次，干燥(硫酸鎂)并小心濃縮，將該混合物再次溶于35ml THF中，滴加入500ml飽和氨的THF溶液并攪拌過(guò)夜。將混合物真空濃縮至得到粗品黃色固體物，剩余物經(jīng)50g硅膠過(guò)濾，使用70％EtOAc-己烷為洗脫液，隨后將溶液濃縮。剩余物在盡可能少量的二氯甲烷的己烷溶液(含1-2滴甲醇)中重結(jié)晶，得到2.49g(41％)環(huán)戊基磺酰胺，為白色固體物。
1H NMR(CDCl3)δ1.58-1.72(m，2H)，1.74-1.88(m，2H)，1.94-2.14(m，4H)，3.48-3.59(m，1H)，4.80(bs，2H)；13C NMR(CDCl3)δ25.90，28.33，63.54；MS m/e 148(M-H)-.
5.環(huán)己基磺酰胺的制備 將18.5mL(37.0mmol)2M氯化環(huán)己基鎂(TCI Americas)的乙酸溶液滴加入3.0mL(37.0mmol)新鮮蒸餾的磺酰氯在100ml己烷中的溶液(冷卻至-78℃)內(nèi)。在1小時(shí)內(nèi)將混和物升溫至0℃并小心真空濃縮。該混合物再次溶于乙醚(200mL)，用一些冰冷卻的水(200mL)洗滌一次，干燥(硫酸鎂)并小心濃縮。將該混合物再次溶于35ml THF中，滴加入500ml氨飽和的THF溶液并攪拌過(guò)夜。將混合物真空濃縮至得到粗品黃色固體物，剩余物經(jīng)50g硅膠過(guò)濾，使用70％EtOAc-己烷為洗脫液，濃縮。剩余物在盡可能少量的二氯甲烷的己烷溶液(含1-2滴甲醇)中重結(jié)晶，得到1.66g(30％)環(huán)己基-磺酰胺，為白色固體物。
1H NMR(CDCl3)δ1.11-1.37(m，3H)，1.43-1.56(m，2H)，1.67-1.76(m，1H)，1.86-1.96(m，2H)，2.18-2.28(m，2H)，2.91(tt，J＝12，3.5Hz，1H)，4.70(bs，2H)；13CH NMR(CDCl3)δ25.04，25.04，26.56，62.74；MS m/e 162(M-1)-.
6.新戊基磺酰胺的制備 按照制備環(huán)己基磺酰胺的方法，將49mL(37mmol)0.75M氯化新戊基鎂(Alfa)的乙醚溶液轉(zhuǎn)化為1.52g(27％)新戊基磺酰胺，為白色固體物。
1H NMR(CDCl3)δ1.17(s，9H)，3.12(s，2H)，4.74(brs，2H)；13C NMR(CDCl3)δ29.46，31.51，67.38；MS m/e 150(M-1)-.
7.環(huán)丁基甲基(carbinyl)-磺酰胺的制備 將12.3g(83mmol)環(huán)丁基甲基溴(Aldrich)和13.7g(91mmol)碘化鈉在150ml丙酮中的溶液回流過(guò)夜，隨后冷卻至室溫。過(guò)濾出無(wú)機(jī)固體物，分別在常壓及150托、80℃下蒸餾出丙酮和環(huán)丙基甲基碘(8.41g，46％)。
將冷卻至-78℃的4.0g(21.98mmol)環(huán)丁基甲基碘在30ml無(wú)水乙醚(乙醚)中的溶液經(jīng)插管裝入17mL(21.98mmol)1.3M仲丁基鋰的環(huán)己烷溶液中，將所得溶液攪拌5min。向該混合物中經(jīng)插管加入3.0g(21.98mmol)新鮮蒸餾的磺酰氯在110ml己烷中的溶液(冷卻至-78℃)，在1小時(shí)內(nèi)將混合物升溫至室溫，隨后小心真空濃縮。該混合物再次溶于乙醚，用一些冰冷卻的水洗滌一次，干燥(硫酸鎂)并小心濃縮，將該混合物再次溶于30ml THF中，滴加入500ml氨飽和的THF溶液并攪拌過(guò)夜。將混合物真空濃縮至得到粗品黃色固體物，在盡可能少量的二氯甲烷的己烷溶液(含1-2滴甲醇)中重結(jié)晶，得到1.39g(42％)環(huán)丁基甲磺酰胺，為白色固體物。
1H NMR(CDCl3)δ1.81-2.03(m，4H)，2.14-2.28(m，2H)，2.81-2.92(m，1H)，3.22(d，J＝7Hz，2H)，4.74(brs，2H)；13C NMR(CDCl3)δ19.10，28.21，30.64，60.93；MS m/e 148(M-1)-.
時(shí)間1.73，甲醇B)，818(M++H)8環(huán)丙基甲磺酰胺的制備 使用用于制備環(huán)丁基甲磺酰胺的方法，由環(huán)丙基甲基溴(Aldrich)制備環(huán)丙基甲磺酰胺(還可參見(jiàn)JACS 1981，第442-445頁(yè))。
1H NMR(CDCl3)δ0.39-0.44(m，2H)，0.67-0.76(m，2H)，1.13-1.27(m，1H)，3.03(d，J＝7.3Hz，2H)，4.74(brs，2H)；13CNMR(CDCl3)δ4.33，5.61，59.93；MS m/e 134(M-1).
III用作構(gòu)造構(gòu)成式I化合物的P2組件的原料的雜環(huán)1.異喹啉 使用上述的兩種方法，可將異喹啉(1)及其取代的類似物引入P2組件中，這些方法將在本文詳細(xì)描述。隨后使用用于異喹啉類似物的類似方法，可將所述P2組件(3)轉(zhuǎn)化為式I化合物。
2.異_唑吡啶和_唑吡啶(1)。
可使用已知化學(xué)方法制備異_唑和_唑雜環(huán)(1)及其類似物，并隨后使用與部分B所示的，用于類似的異_唑吡啶中間體的化學(xué)方法引入到式I化合物中。
部分B在部分B中，使用以下條件進(jìn)行LC/MS分析。
柱方法AYMC ODS-A C18 S7(4.6×33mm)。
方法BYMC Xterra ODS S7(3.0×50mm)。
方法CXterra ms C18(4.6×33mm)。
方法DYMC ODS-A C18 S3(4.6×33mm)。
梯度100％溶劑A/0％溶劑B至0％溶劑A/100％溶劑B梯度時(shí)間3min。
保留時(shí)間1min。
流速5mL/min。
檢測(cè)器波長(zhǎng)220nm。
溶劑溶劑A10％甲醇/90％水/0.1％TFA。溶劑B90％甲醇/10％水/0.1％TFA。
以下條件用于制備型HPLC分離。
柱Phenomenex-Luna 30×100mm，S5梯度60％溶劑A/40％溶劑B至0％溶劑A/100％溶劑B梯度時(shí)間15min。
保留時(shí)間20min。
流速30mL/min。
檢測(cè)器波長(zhǎng)220nm。
溶劑溶劑A10％甲醇/90％水/0.1％TFA。溶劑B90％甲醇/10％水/0.1％TFA。
實(shí)施例1化合物1的制備 化合物1方案1 步驟1將3，5-二甲基-4-硝基-異_唑(1.42g，10.0mmol)、苯乙醛(1.32g，11.0mmol)在哌啶(1mL)和乙醇(10mL)中的混合物加熱回流16h。冷卻至環(huán)境溫度后，過(guò)濾收集沉淀出的產(chǎn)物。濾餅用冷乙醇充分洗滌，得到1.20g(53％)所需的產(chǎn)物，為白色固體物。
1H NMR(CDCl3)δ2.87(s，3H)，7.46-7.50(m，3H)，7.56(d，J＝8.5Hz，1H)，7.7-7.80(m，2H)；LC-MS(保留時(shí)間1.19min，方法B)，MS m/z 227(M++H)。
步驟2將3-甲基-5-苯基-異_唑并[4，5-b]吡啶-4-氧化物(1.00g，4.40mmol)和磷酰氯(2.71g，17.7mmol)在氯仿(10mL)中的溶液加熱回流1h。冷卻至環(huán)境溫度后，最終的溶液用氯仿(50mL)稀釋，用碳酸氫鈉水溶液(兩次，每次50mL)和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾，蒸發(fā)。剩余物經(jīng)快速層析純化(4∶1己烷-EtOAc)，得到790mg(73％)所需的產(chǎn)物，為白色固體物。
1H NMR(CDCl3)δ2.72(s，3H)，7.46-7.54(m，3H)，7.91(s，1H)，8.00-8.03(m，2H)；LC-MS(保留時(shí)間1.76min，方法B)，MS m/z 245，247(M++H)。
方案2
步驟3在0℃下，向4-羥基-吡咯烷-2-甲酸甲酯(H-Hyp-OMe HCl)(1.81g，10.0mmol)、HATU(5.70g，15.0mmol)和N-BOC-叔丁基-L-甘氨酸(2.42g，10.5mmol)在二氯甲烷(100mL)中的混合物內(nèi)加入DIPEA(3.47g，31.0mmol)。在環(huán)境溫度下攪拌12h后，將前述溶液用二氯甲烷(100mL)稀釋，用冰凍的5％檸檬酸水溶液洗滌。有機(jī)層依次用5％檸檬酸、1M NaOH、鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并過(guò)濾。將濾液真空蒸發(fā)，得到3.55g(99％)所需的產(chǎn)物，為類白色泡沫狀物。該產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化，直接用于下一步反應(yīng)中。
1H NMR(CD3OD)δ1.04(s，9H)，1.43(s，9H)，1.99-2.03(m，1H)，2.20-2.30(m，1H)，3.69(s，3H)，3.70-3.79(m，2H)，4.28(b，1H)，4.46(b，1H)，4.74-4.80(m，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.28min，方法B)，MS m/z 359(M++H)。
步驟4將步驟3的產(chǎn)物(3.55g，9.9mmol)在THF(50mL)、甲醇(50mL)和一水合氫氧化鋰(0.83g，19.9mmol，50mL H2O)中的混合物在環(huán)境溫度下攪拌過(guò)夜。真空除去揮發(fā)份后，將剩余物溶于0.1M NaOH(100mL)中。該水溶液用乙醚(50mL)洗滌，用1M HCl酸化至pH為4。用EtOAc(100mL)萃取。有機(jī)層用5％檸檬酸和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，蒸發(fā)至干，得到3.20g(95％)所需的產(chǎn)物，為白色泡沫狀物。該產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化，直接使用。
1H NMR(CD3OD)δ1.02(s，9H)，1.43(s，9H)，2.01-2.09(m，1H)，2.25-2.32(m，1H)，3.70-3.85(m，2H)，4.26-4.30(m，1H)，4.46-4.51(m，2H)，6.37-6.41(m，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.14min，方法B)，MS m/z 345(M++H)。
步驟5向步驟4的產(chǎn)物(1.01g，2.93mmol)的DMSO(30mL)溶液中加入叔丁醇鉀(1.02g，9.08mmol)。將所形成的溶液在環(huán)境溫度下攪拌1h，隨后加入7-氯-3-甲基-5-苯基-異_唑并[4，5-b]吡啶(0.75g，3.08mmol)。將最終的溶液攪拌12h。隨后用冰凍的水猝滅，用1M HCl酸化至pH為4，用EtOAc(兩次，每次200mL)萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾，蒸發(fā)。剩余物經(jīng)制備型HPLC純化(60％B-100％B，15min梯度)，得到305mg(19％)所需的產(chǎn)物，為淺黃色固體物。
1H NMR(CD3OD)δ1.02(s，9H)，1.17(s，9H)，2.37-2.47(m，1H)，2.64(s，3H)，2.85-2.93(m，1H)，4.00-4.08(m，1H)，4.14(b，1H)，4.49-4.55(m，1H)，4.62-4.71(m，1H)，5.70(m，1H)，7.45-7.53(m，3H)，7.56(s，1H)，8.03-8.06(m，2H)；LC-MS(保留時(shí)間1.89min，方法B)，MS m/z 553(M++H)。
方案3
步驟6a如部分A所述。
步驟6b向1(R)-叔丁氧基羰基氨基-2(S)-乙烯基-環(huán)丙烷甲酸乙酯、步驟6a的產(chǎn)物(3.28g，13.2mmol)在THF(7mL)和甲醇(7mL)中的溶液內(nèi)加入LiOH(1.27g，53.0mmol)的水(14mL)懸浮液。將混合物在室溫下攪拌過(guò)夜并用1N NaOH(15mL)和水(20mL)猝滅。所得的混合物用EtOAc(20mL)洗滌，有機(jī)相用20mL 0.5N NaOH萃取。合并的水相用1N HCl酸化，直至pH為4，用EtOAc(3×40mL)萃取。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)，得到題述化合物，為白色固體物(2.62g，87％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.22-1.26(m，1H)，1.37(s，9H)，1.50-1.52(m，1H)，2.05(q，J＝9Hz，1H)，5.04(d，J＝10Hz，1H)，5.22(d，J＝17Hz，1H)，5.64-5.71(m，1H)，7.18，7.53(s，NH(外消旋體)，12.4(br s，1H))；LC-MS(保留時(shí)間1.67min，方法B)，MS m/z 228(M++H)。
步驟7在氮?dú)鈿夥罩?，將步驟6的產(chǎn)物(2.62g，11.5mmol)和CDI(2.43g，15.0mmol)的THF(40mL)溶液加熱回流50min。將溶液冷卻至室溫并經(jīng)插管轉(zhuǎn)移至環(huán)丙基磺酰胺(1.82g，15.0mmol)的THF(10mL)溶液中。向所得的溶液中加入DBU(2.40mL，16.1mmol)，繼續(xù)攪拌20h。混合物用1N HCl猝滅至pH為1，真空蒸發(fā)出THF。懸浮液用EtOAc萃取(2×50mL)，將合并的有機(jī)萃取液干燥(硫酸鈉)。在己烷-EtOAc(1∶1)中重結(jié)晶純化，得到題述化合物(2.4g)，為白色固體物。母液經(jīng)Biotage40S柱純化(用9％丙酮/DCM洗脫)，得到第二部分的題述化合物(1.1g)。將兩部分合并(總收率92％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.96-1.10(m，4H)，1.22(dd，J＝5.5，9.5Hz，1H)，1.39(s，9H)，1.70(t，J＝5.5Hz，1H)，2.19-2.24(m，1H)，2.90(m，1H)，5.08(d，J＝10Hz，1H)，5.23(d，J＝17Hz，1H)，5.45(m，1H)，6.85，7.22(s，NH(外消旋體)；
LC-MS(保留時(shí)間1.70min，方法B)，MS m/z 331(M++H)。
步驟8將步驟7的產(chǎn)物(3.5g，10.6mmol)在DCM(35mL)和TFA(32mL)中的溶液在室溫下攪拌1.5h。真空除去揮發(fā)份，將剩余物懸浮于1NHCl的乙醚溶液(20mL)中并真空濃縮。重復(fù)一次該過(guò)程。所得的混合物在戊烷中研磨并過(guò)濾，得到題述化合物，為易潮的、灰白色固體物(2.60g，92％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.01-1.15(m，4H)，1.69-1.73(m，1H)，1.99-2.02(m，1H)，2.38(q，J＝9Hz，1H)，2.92-2.97(m，1H)，5.20(d，J＝11Hz，1H)，5.33(d，J＝17Hz，1H)，5.52-5.59(m，1H)，9.17(br s，3H)；LC-MS(保留時(shí)間0.24min，方法B)，MS m/z 231(M++H)。
步驟9向冰凍的步驟5的產(chǎn)物(70mg，0.13mmol)、步驟8的產(chǎn)物(1R，2S)-N-(1-氨基-2-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)-環(huán)丙烷磺酰胺鹽酸鹽(37mg，0.14mmol)和HATU(72mg，0.19mmol)在DCM(2mL)中的混合物內(nèi)加入二異丙基乙胺(50mg，0.39mmol)。將所形成的溶液升溫至環(huán)境溫度下反應(yīng)12h并真空蒸發(fā)。剩余物經(jīng)制備型HPLC純化(60％B-100％B，15min梯度)，得到52mg(54％)化合物1，為淺灰色固體物。
1H NMR(CD3OD)δ0.96-1.09(m，12H)，1.16-1.25(m，10H)，1.44-1.48(m，1H)，1.87-1.91(m，1H)，2.20-2.40(m，2H)，2.63-2.65(m，4H)，2.89-2.98(m，1H)，4.08-4.20(m，2H)，4.44-4.65(m，2H)，5.13(d，J＝11.7Hz，1H)，5.32(d，J＝15Hz，1H)，5.72-5.85(b，2H)，6.62(d，J＝15.0Hz，1H)，7.46-7.53(m，3H)，7.58(s，1H)，8.04-8.07(m，2H)；LC-MS(保留時(shí)間1.92min，方法B)，MS m/z 765(M++H)。
實(shí)施例2化合物2的制備 化合物2方案1 步驟1將2-氨基-6-甲基吡啶(1.08g，10.0mmol)、苯甲酰基乙酸乙酯(2.30g，12.0mmol)和聚磷酸(6.00g，61.2mmol)的混合物加熱至110℃下反應(yīng)5h。冷卻至環(huán)境溫度下，將混合物倒入冰凍的水(20mL)中，并用10M NaOH中和至pH為7。用氯仿萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾，蒸發(fā)。剩余物經(jīng)快速層析純化(1∶1己烷-EtOAc)，得到510mg(22％)所需的產(chǎn)物，為淺黃色固體物。
1H NMR(CDCl3)δ3.08(s，3H)，6.64(d，J＝7.0Hz，1H)，6.71(s，1H)，7.42-7.52(m，5H)，8.04-8.06(m，2H)；
LC-MS(保留時(shí)間1.21min，方法B)，MS m/z 237(M++H)。
步驟2將6-甲基-2-苯基-吡啶并[1，2a]嘧啶-4-酮(489mg，2.07mmol)在熔融的二苯基醚(5mL)的溶液加熱至溫和回流5h。冷卻至環(huán)境溫度下，將所形成的懸浮液用乙醚(10mL)稀釋，過(guò)濾。濾餅用乙醚充分洗滌，得到450mg(92％)所需的產(chǎn)物，為褐色固體物。
LC-MS(保留時(shí)間1.25min，方法B)，MS m/z 237(M++H)。
步驟3將7-甲基-2-苯基-1H-[1，8]萘啶-4-酮(450mg，1.91mmol)的磷酰氯(10mL)懸浮液加熱至溫和回流3h。真空蒸發(fā)。將剩余物倒入冰凍的水(20mL)中，用10M NaOH中和至pH為10。用氯仿萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾，蒸發(fā)。剩余物經(jīng)快速層析純化(2∶1己烷-EtOAc)，得到450mg(92％)所需的產(chǎn)物，為粉紅色固體物。
1H NMR(CD3OD)δ2.80(s，3H)，7.54-7.56(m，3H)，7.61(d，J＝8.4Hz，1H)，8.25-8.30(m，3H)，8.58(d，J＝8.4Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.39min，方法B)，MS m/z 255，257(M++H)。
方案2 步驟4按照實(shí)施例1、步驟5的相同方法制備該步驟的產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例2、步驟3的4-氯-7-甲基-2-苯基-[1，8]萘啶。
LC-MS(保留時(shí)間1.55min，方法B)，MS m/z 563(M++H)。
步驟5按照實(shí)施例1、步驟9的相同方法制備化合物2，不同之處在于使用實(shí)施例2、步驟4的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ1.01-1.10(m，12H)，1.21-1.26(m，10H)，1.40-1.45(m，1H)，1.86-1.91(m，1H)，2.20-2.29(m，1H)，2.39-2.49(m，1H)，2.72-2.81(m，1H)，2.92-2.95(m，4H)，4.10-4.16(m，2H)，4.55-4.65(m，2H)，5.14(d，J＝12.0Hz，1H)，5.30(d，J＝15.0Hz，1H)，5.67-5.82(m，2H)，7.60-7.80(m，3H)，7.78(d，J＝8.6Hz，1H)，7.87(s，1H)，8.26-8.29(m，2H)，8.95(d，J＝8.4Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.62min，方法B)，MS m/z 775(M++H)。
實(shí)施例3化合物3的制備 化合物3方案1 步驟1在0℃下，向4-甲氧基苯乙醇(1.52g，10.0mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中一次性加入Dess-MaRtin試劑(4.45g，10.5mmol)。將所形成的混合物升溫至環(huán)境溫度下反應(yīng)1h。依次用飽和硫代硫酸鈉水溶液、1M NaOH和鹽水洗滌。經(jīng)硫酸鎂干燥，真空蒸發(fā)，得到1.50g(100％)所需的醛，為粘稠的油狀物。該產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。
步驟2將3，5-二甲基-4-硝基-異_唑(142mg，1.0mmol)、實(shí)施例3步驟1的4-甲氧基-苯乙醛(180mg，1.1mmol)在哌啶(0.1mL)和乙醇(2mL)中的溶液加熱回流12h。冷卻至環(huán)境溫度后，過(guò)濾收集沉淀出的產(chǎn)物。濾餅用冷乙醇充分洗滌，得到130mg(51％)所需的產(chǎn)物，為淺灰色固體物。
1H NMR(CDCl3)δ2.88(s，3H)，3.87(s，3H)，7.02(d，J＝8.5Hz，2H)，7.50(d，J＝9.0Hz，1H)，7.57(d，J＝9.0Hz，1H)，7.81(d，J＝8.5Hz，2H)；LC-MS(保留時(shí)間1.24min，方法B)，MS m/z 257(M++H)。
步驟3 按照實(shí)施例1、步驟2的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例3、步驟2的產(chǎn)物。
1H NMR(CDCl3)δ2.70(s，3H)，3.87(s，3H)，7.00-7.03(m，2H)，7.84(s，1H)，7.96-7.98(m，2H)；LC-MS(保留時(shí)間1.96min，方法B)，MS m/z 275，277(M++H)。
步驟4 按照實(shí)施例1、步驟5的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例3、步驟3的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ1.02(s，9H)，1.18(s，9H)，2.39-2.43(m，1H)，2.63(s，3H)，2.75-2.80(m，1H)，3.87(s，3H)，4.00-4.08(m，1H)，4.17(b，1H)，4.49-4.55(m，1H)，4.62-4.71(m，1H)，5.68(b，1H)，7.05(d，J＝8.5Hz，2H)，7.49(s，1H)，8.00(d，J＝8.5Hz，2H)；
LC-MS(保留時(shí)間1.89min，方法B)，MS m/z 583(M++H)。
步驟5按照實(shí)施例1、步驟9的相同方法制備化合物3，不同之處在于使用實(shí)施例3、步驟4的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ1.01-1.09(m，12H)，1.17-1.26(m，10H)，1.44-1.47(m，1H)，1.87-1.91(m，1H)，2.20-2.40(m，2H)，2.63-2.65(m，4H)，2.89-2.98(m，1H)，3.87(s，3H)，4.08-4.20(m，2H)，4.44-4.65(m，2H)，5.13(d，J＝11.7Hz，1H)，5.32(d，J＝15.0Hz，1H)，5.72-5.85(m，2H)，7.05(d，J＝8.5Hz，2H)，7.06(s，1H)，8.01(d，J＝8.5Hz，2H)；LC-MS(保留時(shí)間1.96min，方法B)，MS m/z 795(M++H)。
實(shí)施例4化合物4的制備 化合物4步驟1 按照實(shí)施例3、步驟1和2的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用4-氟苯乙醇。
LC-MS(保留時(shí)間1.18min，方法B)，MS m/z 245(M++H)。
步驟2 按照實(shí)施例1、步驟2的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例4、步驟1的產(chǎn)物。
1H NMR(CDCl3)δ2.71(s，3H)，7.17-7.20(m，2H)，7.86(s，1H)，8.00-8.02(m，2H)；LC-MS(保留時(shí)間1.71min，方法B)，MS m/z 263，265(M++H)。
步驟3 按照實(shí)施例1、步驟5的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例4、步驟2的產(chǎn)物。
LC-MS(保留時(shí)間1.91min，方法B)，MS m/z 571(M++H)。
步驟4按照實(shí)施例1、步驟9的相同方法制備化合物4，不同之處在于使用實(shí)施例4、步驟3的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ1.01-1.09(m，12H)，1.17-1.26(m，10H)，1.44-1.47(m，1H)，1.87-1.91(m，1H)，2.20-2.40(m，2H)，2.63-2.65(m，4H)，2.89-2.98(m，1H)，4.08-4.20(m，2H)，4.44-4.65(m，2H)，5.13(d，J＝11.7Hz，1H)，5.32(d，J＝15.0Hz，1H)，5.72-5.85(m，2H)，7.20-7.26(m，2H)，7.60(s，1H)，8.09-8.14(m，2H)，9.26(b，1H)，LC-MS(保留時(shí)間1.91min，方法B)，MS m/z 783(M++H)。
實(shí)施例5化合物5的制備 化合物5步驟1 按照實(shí)施例3、步驟1和2的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用3-甲氧基-苯乙醇。
LC-MS(保留時(shí)間1.03min，方法B)，MS m/z 257(M++H)。
步驟2 按照實(shí)施例1、步驟2的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例5、步驟1的產(chǎn)物。
1H NMR(CDCl3)δ2.72(s，3H)，3.90(s，3H)，7.00-7.02(m，1H)，7.41(t，J＝8.0Hz，1H)，7.55(d，J＝7.5Hz，1H)，7.59(d，J＝2.0Hz，1H)，7.89(s，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.89min，方法B)，MS m/z 275，277(M++H)。
步驟3 按照實(shí)施例1、步驟5的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例5、步驟2的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ1.02(s，9H)，1.18(s，9H)，2.37-2.47(m，1H)，2.64(s，3H)，2.85-2.93(m，1H)，3.88(s，3H)，4.00-4.08(m，1H)，4.14(b，1H)，4.49-4.55(m，1H)，4.62-4.71(m，1H)，5.71(b，1H)，7.02-7.04(m，1H)，7.40(t，J＝8.0Hz，1H)，7.58-7.62(m，3H)；LC-MS(保留時(shí)間1.90min，方法B)，MS m/z 583(M++H)。
步驟4按照實(shí)施例1、步驟9的相同方法制備化合物5，不同之處在于使用實(shí)施例5、步驟3的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ1.01-1.09(m，12H)，1.17-1.29(m，10H)，1.44-1.47(m，1H)，1.87-1.91(m，1H)，2.20-2.40(m，2H)，2.63-2.65(m，4H)，2.89-2.98(m，1H)，3.89(s，3H)，4.08-4.20(m，2H)，4.44-4.65(m，2H)，5.13(d，J＝11.7Hz，1H)，5.32(d，J＝15.0Hz，1H)，5.72-5.85(m，2H)，7.02-7.05(m，1H)，7.41(t，J＝8.0Hz，1H)，7.55-7.61(m，3H)；
LC-MS(保留時(shí)間1.96min，方法B)，MS m/z 795(M++H)。
實(shí)施例6化合物6的制備 化合物6步驟1 按照實(shí)施例3、步驟1和2的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用2-甲氧基-苯乙醇。
LC-MS(保留時(shí)間1.10min，方法B)，MS m/z 257(M++H)。
步驟2 按照實(shí)施例1、步驟2的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例6、步驟1的產(chǎn)物。
1H NMR(CDCl3)δ2.721(s，3H)，3.88(s，3H)，7.03(d，J＝8.0Hz，1H)，7.11(t，J＝7.5Hz，1H)，7.41-7.44(m，1H)，7.79-7.81(m，1H)，8.04(s，1H)；
LC-MS(保留時(shí)間1.92min，方法B)，MS m/z 275，277(M++H)。
步驟3 按照實(shí)施例1、步驟5的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例6、步驟2的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ1.02(s，9H)，1.20(s，9H)，2.37-2.47(m，1H)，2.63(s，3H)，2.85-2.93(m，1H)，3.89(s，3H)，4.00-4.08(m，1H)，4.14(b，1H)，4.49-4.55(m，1H)，4.62-4.71(m，1H)，5.56(b，1H)，7.09(t，J＝7.5Hz，1H)，7.15(d，J＝8.5Hz，1H)，7.41-7.44(m，1H)，7.52(s，1H)，7.67(d，J＝8.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.76min，方法B)，MS m/z 583(M++H)。
步驟4按照實(shí)施例1、步驟9的相同方法制備化合物6，不同之處在于使用實(shí)施例6、步驟3的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ1.01-1.08(m，12H)，1.17-1.26(m，10H)，1.44-1.47(m，1H)，1.87-1.91(m，1H)，2.20-2.40(m，2H)，2.63-2.65(m，4H)，2.89-2.98(m，1H)，3.88(s，3H)，4.08-4.12(m，1H)，4.19(b，1H)，4.44-4.65(m，2H)，5.13(d，J＝11.7Hz，1H)，5.32(d，J＝15.0Hz，1H)，5.59(b，1H)，5.72-5.80(m，1H)，7.09(t，J＝7.5Hz，1H)，7.15(d，J＝8.5Hz，1H)，7.41-7.45(m，1H)，7.66(s，1H)，7.66-7.67(m，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.93min，方法B)，MS m/z 795(M++H)。
實(shí)施例7化合物7的制備 化合物7步驟1 按照實(shí)施例1、步驟5的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用2-氯-喹啉。
LC-MS(保留時(shí)間1.73min，方法B)，MS m/z 472(M++H)。
步驟2按照實(shí)施例1、步驟9的相同方法制備化合物7，不同之處在于使用實(shí)施例7、步驟1的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ1.01-1.08(m，12H)，1.17-1.26(m，10H)，1.44-1.47(m，1H)，1.87-1.91(m，1H)，2.23-2.30(m，2H)，2.52-2.57(m，1H)，2.89-2.98(m，1H)，4.10-4.14(m，1H)，4.09-4.15(m，2H)，4.47-4.51(m，1H)，5.13(d，J＝10.0Hz，1H)，5.32(d，J＝17.0Hz，1H)，5.73-5.78(m，1H)，5.92(b，1H)，6.90-6.92(m，1H)，7.42(t，J＝7.5Hz，1H)，7.64(t，J＝7.5Hz，1H)，7.78-7.82(m，2H)，8.13(d，J＝7.5Hz，1H)，9.18(d，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.75min，方法B)，MS m/z 684(M++H)。
實(shí)施例8化合物8的制備 化合物8方案1 步驟1按照實(shí)施例1、步驟6b至8的相同方法制備該產(chǎn)物，沒(méi)有使用步驟6a，本步驟為酶促拆分步驟。
LC-MS(保留時(shí)間0.24min，方法B)，MS m/z 231(M++H)。
方案2 步驟2向冰凍的N-BOC-4-反式-羥基-L-脯氨酸(1.58g，6.83mmol)、環(huán)丙烷磺酸(1-氨基-2-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)-酰胺鹽酸鹽(實(shí)施例8，步驟1)(2.00g，7.52mmol)和HATU(3.89g，10.2mmol)在二氯甲烷(100mL)中的混合物內(nèi)加入二異丙基乙胺(4.41g，34.2mmol)。將所形成的溶液升溫至環(huán)境溫度下反應(yīng)12h。用EtOAc(200mL)稀釋，用5％磷酸和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾，蒸發(fā)。剩余物經(jīng)快速層析純化(梯度，2∶1-1∶1己烷-丙酮)，得到1.25g(41％)所需的產(chǎn)物。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.00-1.08(m，4H)，1.34-1.40(m，1∶2，10H)，1.62-1.70(m，1H)，1.76-1.87(m，1H)，2.02-2.21(m，2H)，2.81-2.95(m，1H)，3.20-3.45(m，2H)，4.04-4.09(m，1H)，4.26(b，1H)，5.08-5.12(m，1H)，5.26(d，J＝17.1Hz，1H)，5.59-5.69(m，1H)，8.59，8.87(外消旋物，1∶2，1H)，10.48-11.15(外消旋物，2∶1，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.25min，方法B)，MS m/e 444(M++H)。
步驟3按照實(shí)施例1、步驟8的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例8、步驟2的產(chǎn)物。
LC-MS(保留時(shí)間1.02min，方法B)，MS m/e 344(M++H)。
步驟4向冰凍的N-BOC-4-反式-羥基-L-脯氨酸(1.58g，6.83mmol)、環(huán)丙烷磺酸(1-氨基-2-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)-酰胺鹽酸鹽(實(shí)施例8，步驟3)(2.00g，7.52mmol)和HATU(3.89g，10.2mmol)在二氯甲烷(100mL)中的混合物內(nèi)加入二異丙基乙胺(4.41g，34.2mmol)。將所形成的溶液升溫至環(huán)境溫度下反應(yīng)12h。用EtOAc(200mL)稀釋，用5％磷酸和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾，蒸發(fā)。剩余物經(jīng)快速層析純化(梯度，2∶1-1∶1己烷-丙酮)，得到1.25g(41％)所需的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ0.99-1.07(m，11H)，1.35-1.44(m，13H)，1.75-1.87(m，1H)，2.09-2.22(m，2H)，2.88-2.94(m，1H)，3.74-3.82(m，2H)，4.28-4.30(m，1H)，4.33-4.38(m，1H)，4.48(b，1H)，5.11-5.13(m，1H)，5.30(d，J＝15.0Hz，1H)，5.70-5.78(m，1H)，6.51-6.61(m，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.26min，方法B)，MS m/e 557(M++H)。
方案3 化合物8步驟5向?qū)嵤├?、步驟4的產(chǎn)物(56mg，0.1mmol)的DMSO(2mL)溶液中加入叔丁醇鉀(49mg，0.44mmol)。將所形成的溶液在環(huán)境溫度下攪拌1h，隨后加入4-氯-7-甲基-2-三氟甲基-[1，8]萘啶(P.Ferrarini等，J Heterocyclic Chem，1983，1053頁(yè))(30mg，0.12mmol)。將最終的溶液攪拌12h。用冰凍的水猝滅，用1M HCl酸化至pH為4，用EtOAc(20mL，×2)萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾，蒸發(fā)。剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到16mg(21％)化合物8，為粉紅色固體物。
1H NMR(CD3OD)δ0.92-0.99(m，11H)，1.01-1.04(m，11H)，1.22-1.45(m，2H)，1.76-1.85(m，1H)，2.18-2.40(m，2H)，2.76(s，3H)，2.86-2.97(m，1H)，4.00-4.11(m，2H)，4.48-4.58(m，2H)，5.09-5.12(m，1H)，5.28-5.31(m，1H)，5.59(b，1H)，5.69-5.78(m，1H)，6.39-6.48(m，1H)，7.58-7.64(m，2H)，8.08(s，1H)，8.64-8.68(m，1H)，8.85-8.91(m，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.89min，方法B)，MS m/e 767(M++H)。
實(shí)施例9化合物9的制備 化合物9按照實(shí)施例8、步驟5的相同方法制備化合物9，不同之處在于使用7-氯-5-乙基-3-甲基-異_唑并[4，5-b]吡啶(R.Nesi等，Synth Comm.1992，22(16)，2349)。
1H NMR(CD3OD)δ1.01-1.09(m，11H)，1.21-1.25(m，11H)，1.36(t，J＝7.8Hz，3H)，1.38-1.47(m，2H)，1.80-1.90(m，1H)，2.20-2.31(m，2H)，2.59(s，3H)，2.90-3.00(m，3H)，4.01-4.18(m，2H)，4.41-4.51(m，2H)，5.11-5.15(m，1H)，5.27-5.32(m，1H)，5.58(b，1H)，5.70-5.80(m，1H)，7.11(s，1H)，7.72，7.98(1∶1，1H)，9.00，9.22(1∶1，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.75min，方法B)，MS m/e 717(M++H)。
實(shí)施例10化合物10的制備 化合物10按照實(shí)施例8、步驟5的相同方法制備化合物10，不同之處在于使用7-氯-5-苯基-3-甲基-異_唑并[4，5-b]吡啶(實(shí)施例1，步驟2)。
1H NMR(CD3OD)δ1.00-1.09(m，12H)，1.16-1.25(m，10H)，1.44-1.48(m，1H)，1.79-1.89(m，1H)，2.20-2.40(m，2H)，2.64-2.66(m，4H)，2.89-2.98(m，1H)，4.08-4.20(m，2H)，4.44-4.55(m，2H)，5.11-5.16(m，1H)，5.27-5.31(m，1H)，5.72-5.74(m，2H)，7.20-7.35(m，1H)，7.46-7.51(m，2H)，7.55-7.68(m，1H)，8.05-8.06(m，2H)；LC-MS(保留時(shí)間1.97min，方法B)，MS m/z 765(M++H)。
實(shí)施例11化合物11的制備 化合物11
方案1 步驟1在0℃下，向3-甲氧基肉桂酸(11.04g，62mmol)和三乙胺(12.52g，124mmol)在丙酮(80mL)中的溶液內(nèi)滴加入氯甲酸乙酯(約1.5當(dāng)量)。在該溫度下攪拌1h，滴加入疊氮化鈉水溶液(6.40g，100mmol，35mLH2O)并將反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌16h。向混合物中加入水(100mL)，真空除去揮發(fā)份。所得的漿狀物用甲苯(3×50mL)萃取，并將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥。將該無(wú)水溶液在190℃滴加入二苯基甲烷(50mL)和三丁基胺(30mL)的熱溶液中。在加入過(guò)程中蒸餾出甲苯。加入完畢，將反應(yīng)溫度升高至210℃下反應(yīng)2h。冷卻后，過(guò)濾收集沉淀出的產(chǎn)物，用己烷(2×50mL)洗滌，并干燥，得到所需的產(chǎn)物，為白色固體物(5.53g，51％)(Nicolas Briet等，Tetrahedron，2002，5761-5766)。
LC-MS(保留時(shí)間0.82min，方法B)，MS m/z 176(M++H)。
步驟26-甲氧基-2H-異喹啉-1-酮(5.0g，28.4mmol)在磷酰氯(10mL)中的溶液加熱至溫和回流3h，真空蒸發(fā)(Nicolas Briet等，Tetrahedron，2002，5761-5766)。將剩余物倒入冰凍的水(20mL)中，用10M NaOH中和至pH為10。用氯仿萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾，蒸發(fā)。剩余物經(jīng)快速層析純化(1∶1己烷-EtOAc)，得到4.41g(80％)所需的產(chǎn)物，為白色固體物。
1H NMR(CD3OD)δ3.98(s，3H)，7.34-7.38(m，2H)，7.69(d，J＝5.5Hz，1H)，8.10(d，J＝6.0Hz，1H)，8.23(d，J＝9.5Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.42min，方法B)，MS m/z 194(M++H)。
方案2 化合物11步驟3在環(huán)境溫度下，向N-BOC-3-(R)-羥基-L-脯氨酸(892mg，3.89mmol)的DMSO(40mL)溶液中一次性加入叔丁醇鉀(1.34g，12.0mmol)。將所形成的懸浮液在該溫度下攪拌30min，隨后冷卻至10℃。一次性加入1-氯-6-甲氧基-異喹啉固體物(實(shí)施例11，步驟2)(785mg，4.05mmol)，將最終的混合物在環(huán)境溫度下攪拌12h。用冰凍的5％檸檬酸水溶液猝滅，用EtOAC(100mL)萃取。水相再次用EtOAC萃取。合并的有機(jī)層依次用5％檸檬酸水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾。將濾液真空蒸發(fā)至干，得到1.49g(99％)所需的產(chǎn)物，為灰白色泡沫狀物。該物質(zhì)未經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一步反應(yīng)中。
1H NMR(CD3OD)δ1.42，1.44(外消旋物，9H)，2.38-2.43(m，1H)，2.66-2.72(m，1H)，3.80-3.87(m，2H)，3.92(s，3H)，4.44-4.52(m，1H)，5.73(b，1H)，7.16-7.18(m，2H)，7.24-7.25(m，1H)，7.87-7.88(m，1H)，8.07(d，J＝8.5Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.62min，方法B)，MS m/z 389(M++H)。
步驟4在0℃下，向?qū)嵤├?1、步驟3的產(chǎn)物(1.49g，3.84mmol)、HATU(2.19g，5.76mmol)和環(huán)丙烷磺酸(1-(R)-氨基-2-(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)-酰胺鹽酸鹽(實(shí)施例1，步驟8)(1.12g，4.22mmol)在二氯甲烷(50mL)中的混合物內(nèi)加入DIPEA(1.29g，11.5mmol)。在環(huán)境溫度下攪拌12h后，將形成的溶液用二氯甲烷(50mL)稀釋，用冰凍的5％檸檬酸水溶液洗滌。有機(jī)層依次用5％檸檬酸水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并過(guò)濾。將濾液真空蒸發(fā)至干。剩余物在甲醇中重結(jié)晶，得到1.60g(70％)所需的產(chǎn)物，為白色固體物。
1H NMR(CD3OD)δ1.05-1.08(m，2H)，1.16-1.20(m，1H)，1.24-1.27(m，1H)，1.42-1.45(m，10H)，1.88(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)，2.24-2.30(m，2H)，2.53-2.57(m，1H)，2.94-2.98(m，1H)，3.80(d，J＝12.5Hz，1H)，3.86-3.89(m，1H)，3.93(s，3H)，4.40-4.42(m，1H)，5.13(d，J＝10.5Hz，1H)，5.32(d，J＝18.0Hz，1H)，5.72-5.81(m，2H)，7.17-7.20(m，2H)，7.26(d，J＝6.0Hz，1H)，7.88(d，J＝6.0Hz，1H)，8.07(d，J＝9.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.74min，方法B)，MS m/z 601(M++H)。
步驟5向冰凍的實(shí)施例11、步驟4的產(chǎn)物(1.50g，2.50mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入TFA(10mL)。將所形成的溶液升溫至環(huán)境溫度下反應(yīng)2h。真空除去溶劑。將剩余物在1M HCl的乙醚溶液中研磨。過(guò)濾，用乙醚洗滌，得到1.43g(99.8％)所需的產(chǎn)物，為易潮的白色固體物。
1H NMR(CD3OD)δ1.03-1.208(m，4H)，1.26-1.31(m，1H)，1.37-1.40(m，1H)，1.95-1.97(m，1H)，2.32-2.37(m，1H)，2.42-2.48(m，1H)，2.95-2.99(m，1H)，3.88(d，J＝12.5Hz，2H)，3.98(s，3H)，4.40-4.42(m，1H)，5.16(d，J＝10.5Hz，1H)，5.33(d，J＝18.0Hz，1H)，5.62-5.69(m，1H)，5.97(b，1H)，7.30-7.34(m，2H)，7.47(d，J＝6.0Hz，1H)，7.90(d，J＝6.5Hz，1H)，8.34(d，J＝9.0Hz，1H)，9.14(b，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.12min，方法B)，MS m/z 501(M++H)。
步驟6在0℃下，向?qū)嵤├?1，步驟5的產(chǎn)物(1.49g，3.84mmol)、HATU(2.19g，5.76mmol)和N-BOC-叔丁基-L-甘氨酸(1.12g，4.22mmol)在二氯甲烷(50mL)中的混合物內(nèi)加入DIPEA(1.29g，11.5mmol)。在環(huán)境溫度下攪拌12h后，將所形成的溶液用二氯甲烷(50mL)稀釋，用冰凍的5％檸檬酸水溶液洗滌。有機(jī)層依次用5％檸檬酸水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并過(guò)濾。將濾液真空蒸發(fā)至干。剩余物經(jīng)制備型HPLC純化(40％B至100％B，梯度時(shí)間15min)，得到1.60g(70％)化合物11，為白色固體物。
1H NMR(CD3OD)δ1.00-1.08(m，12H)，1.23-1.25(m，1H)，1.27(s，9H)，1.40-1.45(m，1H)，1.85-1.88(m，1H)，2.20-2.30(m，2H)，2.55-2.61(m，1H)，2.91-2.97(m，1H)，3.92(s，3H)，4.02-4.06(m，1H)，4.21-4.24(m，1H)，4.40-4.42(m，1H)，4.49-4.51(m，1H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.28(d，J＝18.0Hz，1H)，5.69-5.74(m，1H)，5.81(b，1H)，6.60(d，J＝10.0Hz，1H)，7.08-7.10(m，1H)，7.18(s，1H)，7.25(d，J＝6.0Hz，1H)，7.88(d，J＝6.0Hz，1H)，8.09(d，J＝9.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.75min，方法B)，MS m/z 714(M++H)；C35H47N5O9S·0.5H2O的計(jì)算值C，58.16；H，6.69；N，9.69，實(shí)測(cè)值C，58.01；H，6.46；N，9.55。
步驟7 在-78℃下，向化合物11(71mg，0.1mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入1M HCl的乙醚溶液(0.2mL，0.2mmol)。在該溫度下攪拌10min，真空除去揮發(fā)份，不使用加熱浴。將剩余物在乙醚中研磨，過(guò)濾，用乙醚洗滌并干燥，得到61mg(85％)所需的化合物11的鹽酸鹽，為非常細(xì)的固體物。
1H NMR(CD3OD)δ1.00-1.08(m，12H)，1.19(s，9H)，1.23-1.25(m，1H)，1.40-1.45(m，1H)，1.85-1.91(m，1H)，2.20-2.26(m，1H)，2.31-2.42(m，1H)，2.65-2.78(m，1H)，2.92-2.97(m，1H)，4.00(s，3H)，4.10-4.16(m，2H)，4.51-4.64(m，2H)，5.13(d，J＝10.5Hz，1H)，5.30(d，J＝18Hz，1H)，5.69-5.79(m，1H)，5.84(b，1H)，7.28(d，J＝9.3Hz，1H)，7.40(s，1H)，7.55(d，J＝6.3Hz，1H)，7.89-7.92(m，1H)，8.29(d，J＝9.0Hz，1H)，9.21(b，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.75min，方法B)，MS m/z 714(M++H)。
C35H47N5O9S·1.0HCl的計(jì)算值C，56.02；H，6.44；N，9.33；Cl，4.72；S，4.27，實(shí)測(cè)值C，55.80；H，6.42；N，9.15；Cl，4.56；S，4.09。
步驟825ml的2頸燒瓶中裝入攪拌棒、隔膜和氮?dú)饨庸?。稱量化合物11(99.7mg，0.140mmol)并加入反應(yīng)燒瓶中。用氮?dú)獯祾叻磻?yīng)燒瓶并置于氮?dú)鈿夥毡Ｗo(hù)下。向燒瓶中加入850μl丙酮，得到澄清溶液。室溫下，向該溶液中加入780μl 0.179M KOH水溶液(將固體KOH(502.8mg，8.97mmol)溶于50ml H2O中制得)。加入KOH時(shí)，溶液稍微升溫，但仍保持澄清。將所述澄清溶液在室溫下攪拌2h。產(chǎn)物從溶液中結(jié)晶析出，過(guò)濾分離。濾餅用冷丙酮洗滌，得到42mg(40％收率)所需的產(chǎn)物，為細(xì)白色針狀物1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ0.52-0.65(m，2H)，0.66-0.82(m，2H)，0.96(s，9H)，1.21-1.24(m，10H)，1.44-1.63(m，1H)，1.72-1.92(m，1H)，2.30-2.42(m，1H)，2.46(d，J＝7.93Hz，1H)，2.60-2.85(m，1H)，3.89(s，3H)，3.93-4.05(m，1H)，4.07-4.24(m，1H)，4.41(t，J＝8.39Hz，1H)，4.79-4.95(m，1H)，4.97-5.17(m，1H)，5.71(b，1H)，5.80-6.10(m，1H)，6.64(d，J＝8.54Hz，1H)，7.10(d，J＝8.85Hz，1H)，7.24-7.37(m，2H)，7.90-7.96(m，1H)，7.99-8.04(b，1H)，8.06(d，J＝9.15Hz，1H).
對(duì)C35H46KN5O9S·H2O進(jìn)行元素分析；計(jì)算值C，54.60；H，6.28；K，5.08；N，9.10；實(shí)測(cè)值C，54.88；H，6.23；K，5.05；N，9.01；MS m/e714(MH+)；實(shí)施例12化合物12的制備 化合物12按照實(shí)施例11、步驟6的相同方法制備化合物12，不同之處在于使用N-BOC-L-纈氨酸。
1H NMR(CD3OD)δ0.94-0.98(m，6H)，1.07-1.09(m，3H)，1.21-1.25(m，10H)，1.40-1.43(m，1H)，1.88-1.89(m，1H)，2.05-2.09(m，1H)，2.22-2.35(m，2H)，2.57-2.61(m，1H)，2.94-2.97(m，1H)，3.92(s，3H)，4.03-4.06(m，2H)，4.47-4.55(m，2H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.32(d，J＝18.1Hz，1H)，5.74-5.81(m，1H)，5.86(b，1H)，7.10(d，J＝9.0Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.25(d，J＝6.0Hz，1H)，7.88(d，J＝6.0Hz，1H)，8.10(d，J＝9.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.71min，方法B)，MS m/z 700(M++H)。
實(shí)施例13化合物13的制備 化合物13按照實(shí)施例11、步驟6的相同方法制備化合物13，不同之處在于使用N-BOC-L-別異亮氨酸。
1H NMR(CD3OD)δ0.89-0.96(m，6H)，1.07-1.18(m，5H)，1.28(s，9H)，1.42-1.45(m，1H)，1.50-1.54(m，1H)，1.87-1.89(m，2H)，2.23-2.34(m，2H)，2.57-2.61(m，1H)，2.92-2.95(m，1H)，3.92(s，3H)，4.05-4.07(m，1H)，4.22-4.24(m，1H)，4.37-4.40(m，1H)，4.54-4.56(m，1H)，5.13(d，J＝10.5Hz，1H)，5.32(d，J＝18.0Hz，1H)，5.75-5.82(m，1H)，5.86(b，1H)，7.12(d，J＝9.0Hz，1H)，7.19(s，1H)，7.24(d，J＝6.0Hz，1H)，7.88(d，J＝6.0Hz，1H)，8.10(d，J＝9.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.77min，方法B)，MS m/z 714(M++H)。
實(shí)施例14化合物14的制備 化合物14
方案1 步驟1將化合物11(150mg，0.21mmol)和Pearlmann催化劑(Pd(OH)2，15mg)在EtOAc(10mL)中的混合物置于10psi H2的Parr搖蕩器中20min。經(jīng)celite硅藻土過(guò)濾。將濾液真空蒸發(fā)。剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到67mg(45％)化合物14，為白色固體物。
1H NMR(CD3OD)δ0.96-0.99(m，4H)，1.04(s，9H)，1.07-1.09(m，2H)，1.21-1.24(m，2H)，1.27(s，9H)，1.51-1.65(m，4H)，2.25-2.27(m，1H)，2.55-2.61(m，1H)，2.94-2.98(m，1H)，3.92(s，3H)，4.02-4.06(m，1H)，4.21-4.24(m，1H)，4.40-4.42(m，1H)，4.49-4.51(m，1H)，5.81(b，1H)，6.59(d，J＝10.0Hz，1H)，7.08-7.10(m，1H)，7.18(d，J＝1.5Hz，1H)，7.24(d，J＝6.0Hz，1H)，7.88(d，J＝6.0Hz，1H)，8.08(d，J＝9.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.76min，方法B)，MS m/z 716(M++H)。
實(shí)施例15化合物15的制備 化合物15
化合物15從制備化合物14的同一反應(yīng)物中，作為副產(chǎn)物分離得到，保留時(shí)間稍長(zhǎng)，收率15％。
1H NMR(CD3OD)δ0.92-1.10(m，17H)，1.26-1.36(m，13H)，1.64-1.72(m，1H)，1.90-1.96(m，1H)，2.30-2.40(m，1H)，2.63-2.67(m，1H)，2.96-3.00(m，1H)，3.92(s，3H)，4.03-4.07(m，1H)，4.24(b，1H)，4.40-4.42(m，1H)，4.49-4.51(m，1H)，5.83(b，1H)，7.08-7.11(m，1H)，7.19(d，J＝2.0Hz，1H)，7.25(d，J＝6.0Hz，1H)，7.89(d，J＝6.0Hz，1H)，8.10(d，J＝9.0Hz，1H)，8.51(b，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.83min，方法B)，MS m/z 718(M++H)。
實(shí)施例16化合物16的制備 化合物16
方案1 化合物16步驟1在0℃下，向化合物11(420mg，0.59mmol)的DCM(5mL)溶液中加入TFA(5mL)。在該溫度下攪拌2h，真空除去揮發(fā)份。將剩余物在1MHCl的乙醚(5mL)溶液中研磨，過(guò)濾，用乙醚洗滌并干燥，得到360mg(89％)所需的HCl鹽，為非常細(xì)的固體物。
LC-MS(保留時(shí)間1.28min，方法B)，MS m/z 614(M++H)。
步驟2在0℃下，向?qū)嵤├?6、步驟1的產(chǎn)物(39mg，0.06mmol)和DIPEA(20mg，0.18mmol)在DCM(1mL)中的懸浮液內(nèi)加入氯甲酸甲酯(6.8mg，0.072mmol)。在該溫度下攪拌2h，真空除去揮發(fā)份。剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到21mg(58％)化合物16，為白色晶體。
1H NMR(CD3OD)δ1.05-1.09(m，11H)，1.22-1.25(m，2H)，1.41-1.44(m，1H)，1.86-1.89(m，1H)，2.22-2.32(m，2H)，2.59-2.63(m，1H)，2.89-2.93(m，1H)，3.48(s，3H)，3.92(s，3H)，4.06-4.10(m，1H)，4.31-4.33(m，1H)，4.38-4.40(m，1H)，4.50-4.52(m，1H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.30(d，J＝18.0Hz，1H)，5.71-5.80(m，1H)，5.85(b，1H)，6.95(d，J＝10.0Hz，1H)，7.13-7.16(m，1H)，7.19(s，1H)，7.25(d，J＝6.0Hz，1H)，7.88(d，J＝6.0Hz，1H)，8.09(d，J＝9.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.54min，方法B)，MS m/z 672(M++H)。
實(shí)施例17化合物17的制備 化合物17按照實(shí)施例16、步驟2的相同方法制備化合物17，不同之處在于使用氯甲酸異丙酯。
1H NMR(CD3OD)δ1.00-1.09(m，15H)，1.13-1.16(m，2H)，1.24-1.26(m，2H)，1.40-1.45(m，1H)，1.86-1.89(m，1H)，2.21-2.31(m，2H)，2.55-2.61(m，1H)，2.91-2.97(m，1H)，3.92(s，3H)，4.04-4.08(m，1H)，4.30(b，1H)，4.40(d，J＝10Hz，1H)，4.49-4.54(m，2H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.29(d，J＝18.0Hz，1H)，5.71-5.77(m，1H)，5.84(b，1H)，6.80(d，J＝10.0Hz，1H)，7.11(d，J＝9.0Hz，1H)，7.19(s，1H)，7.25(d，J＝6.0Hz，1H)，7.88(d，J＝6.0Hz，1H)，8.08(d，J＝9.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.74min，方法B)，MS m/z 700(M++H)。
實(shí)施例18化合物18的制備 化合物18按照實(shí)施例16、步驟2的相同方法制備化合物18，不同之處在于使用氯甲酸新戊酯。
1H NMR(CD3OD)δ0.61(b，1H)，0.84(s，8H)，1.05-1.09(m，11H)，1.23-1.25(m，2H)，1.39-1.44(m，1H)，1.85-1.88(m，1H)，2.20-2.30(m，2H)，2.56-2.62(m，1H)，2.91-2.97(m，1H)，3.38(d，J＝9.0Hz，1H)，3.55(d，J＝9.0Hz，1H)，3.92(s，3H)，4.02-4.06(m，1H)，4.32(d，J＝9.5Hz，1H)，4.41(d，J＝9.0Hz，1H)，4.49-4.51(m，1H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.28(d，J＝18.0Hz，1H)，5.69-5.74(m，1H)，5.81(b，1H)，6.90(d，J＝10.0Hz，1H)，7.08-7.10(m，1H)，7.19(s，1H)，7.26(d，J＝6.0Hz，1H)，7.88(d，J＝6.0Hz，1H)，8.07(d，J＝9.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.84min，方法B)，MS m/z 728(M++H)。
實(shí)施例19化合物19的制備 化合物19按照實(shí)施例16、步驟2的相同方法制備化合物19，不同之處在于使用(S)-氯甲酸(3-呋喃)酯(呋喃ochlorolate)(J.Campbell，A.Good，WO 20020808)。
1H NMR(CD3OD)δ1.03-1.08(m，11H)，1.23-1.26(m，2H)，1.38-1.46(m，1H)，1.64-1.71(m，1H)，1.85-1.90(m，2H)，2.20-2.30(m，2H)，2.55-2.61(m，1H)，2.91-2.97(m，1H)，3.66-3.72(m，4H)，3.93(s，3H)，4.05-4.09(m，1H)，4.27-4.29(m，1H)，4.40-4.42(m，1H)，4.55-4.59(m，1H)，4.75-4.77(m，1H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.28(d，J＝18Hz，1H)，5.73-5.80(m，1H)，5.85(b，1H)，7.06(d，J＝10.0Hz，1H)，7.13(d，J＝9.0Hz，1H)，7.20(s，1H)，7.25(d，J＝6.0Hz，1H)，7.89(d，J＝6.0Hz，1H)，8.07(d，J＝9.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.52min，方法B)，MS m/z 728(M++H)。
實(shí)施例20化合物20的制備 化合物20步驟1 按照實(shí)施例11、步驟2的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用6-氯-2H-異喹啉-1-酮(Nicolas Briet等，Tetrahedron，2002，5761-5766)。
LC-MS(保留時(shí)間1.07min，方法B)，MS m/z 180(M++H)。
步驟2 按照實(shí)施例1、步驟5的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例20、步驟1的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ1.04(s，9H)，1.20(s，9H)，2.36-2.41(m，1H)，2.74-2.78(m，1H)，4.01-4.04(m，1H)，4.19-4.21(m，1H)，4.47-4.49(m，1H)，4.67-4.70(m，1H)，5.84(b，1H)，7.28(d，J＝6.0Hz，1H)，7.47(d，J＝6.0Hz，1H)，7.84(s，1H)，8.00(d，J＝6.0Hz，1H)，8.20(d，J＝9.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.88min，方法B)，MS m/z 506(M++H)。
步驟3按照實(shí)施例1、步驟9的相同方法制備化合物20，不同之處在于使用實(shí)施例20、步驟2的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ0.99-1.11(m，12H)，1.20-1.26(m，10H)，1.43-1.46(m，1H)，1.87-1.90(m，1H)，2.22-2.31(m，2H)，2.60-2.64(m，1H)，2.92-2.97(m，1H)，4.06-4.08(m，1H)，4.21-4.23(m，1H)，4.45-4.47(m，1H)，4.53-4.56(m，1H)，5.13(d，J＝10.5Hz，1H)，5.29(d，J＝18.0Hz，1H)，5.72-5.80(m，1H)，5.88(b，1H)，6.58(d，J＝10.0Hz，1H)，7.29(d，J＝6.0Hz，1H)，7.47(d，J＝9.0Hz，1H)，7.86(s，1H)，8.01(d，J＝6.0Hz，1H)，8.18(d，J＝9.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.94min，方法B)，MS m/z 718(M++H)。
實(shí)施例21化合物21的制備 化合物21方案1 步驟1在0℃下，向?qū)嵤├?、步驟4的產(chǎn)物(3.00g，8.72mmol)、HATU(4.97g，13.1mmol)和實(shí)施例1、步驟8的產(chǎn)物(2.55g，9.59mmol)在二氯甲烷(100mL)中的混合物內(nèi)加入DIPEA(3.02g，27.0mmol)。在環(huán)境溫度下攪拌后12h，將所形成的溶液用二氯甲烷(100mL)稀釋，用冰凍的5％檸檬酸水溶液洗滌。有機(jī)層依次用5％檸檬酸水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并過(guò)濾。將濾液真空蒸發(fā)至干。剩余物經(jīng)快速柱層析純化(1∶1己烷∶丙酮)，得到3.64g(75％)所需的產(chǎn)物，為泡沫狀物。
LC-MS(保留時(shí)間1.41min，方法B)，MS m/z 557(M++H)。
方案2 化合物21步驟2向冰凍的6-溴異喹啉(4.16g，20mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中一次性加入mCPBA固體物(9.38g，純度77％，42mmol)。在環(huán)境溫度下攪拌12h后，用二氯甲烷(100mL)稀釋并用1M NaOH(100mL，×2)和鹽水洗滌。有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾，蒸發(fā)至干，得到3.83g(86％)所需的產(chǎn)物，為白色固體物。該物質(zhì)未經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。
LC-MS(保留時(shí)間0.77min，方法B)，MS m/z 224，226(M++H)。
步驟3將6-溴-異喹啉2-氧化物(88mg，0.2mmol)、吡唑(68mg，1.0mmol)、CuBr(57mg，0.4mmol)和碳酸銫(130mg，0.4mmol)在DMF(2mL)中的混合物在140℃的密封管中加熱4h。過(guò)濾后，濾液經(jīng)制備型HPLC純化，得到41mg(98％)所需的產(chǎn)物，為灰白色固體物。
1H MR(CDC13)δ6.58-6.59(m，1H)，7.82(d，J＝1.0Hz，1H)，7.89(d，J＝7.0Hz，1H)，8.02(d，J＝9.0Hz，1H)，8.11(d，J＝2.5Hz，1H)，8.18-8.22(m，2H)，8.29(d，J＝7.0Hz，1H)，9.07(b，1H)；LC-MS(保留時(shí)間0.77min，方法B)，MS m/z 212(M++H)。
步驟4按照實(shí)施例11、步驟2的相同方法制備該產(chǎn)物，為類白色固體物，不同之處在于使用6-吡唑-異喹啉2-氧化物。
1H NMR(CD3OD)δ7.82-7.83(m，2H)，8.23-8.32(m，4H)，8.44-8.49(m，2H)；LC-MS(保留時(shí)間1.35min，方法B)，MS m/z 230，(M++H)。
步驟5向?qū)嵤├?1、步驟1的產(chǎn)物(45mg，0.08mmol)的DMSO(2mL)溶液中加入叔丁醇鉀(41mg，0.37mmol)。將形成的溶液在環(huán)境溫度下攪拌30min，隨后加入1-氯-6-吡唑-1-基-異喹啉(17mg，0.07mmol)。將最終的溶液攪拌12h。用冰凍的水猝滅，用1M HCl酸化至pH為4，用EtOAc(20mL，×2)萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾，蒸發(fā)。剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到10mg(16％)化合物21，為粉紅色固體物。
1H NMR(CD3OD)δ1.04-1.10(m，12H)，1.23-1.27(m，10H)，1.43-1.47(m，1H)，1.87-1.91(m，1H)，2.22-2.29(m，2H)，2.61-2.68(m，1H)，2.92-2.98(m，1H)，4.07-4.11(m，1H)，4.24(b，1H)，4.46-4.60(m，2H)，5.13(d，J＝10.5Hz，1H)，5.29(d，J＝18Hz，1H)，5.70-5.83(m，1H)，5.89(b，1H)，6.59-6.61(m，1H)，7.40(d，J＝10.0Hz，1H)，7.80(d，J＝2.5Hz，1H)，8.01(d，J＝10.0Hz，2H)，8.15(s，1H)，8.31(d，J＝15.0Hz，1H)，8.42(d，J＝4.5Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.77min，方法B)，MS m/z 750(M++H)。
實(shí)施例22化合物22的制備 化合物22步驟1 按照實(shí)施例11、步驟2的相同方法制備該產(chǎn)物，為灰白色固體物，不同之處在于使用6-溴-異喹啉2-氧化物。
1H NMR(CD3OD)δ7.73(d，J＝5.5Hz，1H)，7.85-7.91(m，1H)，8.22-8.31(m，3H)；LC-MS(保留時(shí)間1.53min，方法B)，MS m/z 241，243，245(M++H)。
步驟2按照實(shí)施例21、步驟5的相同方法制備化合物22，為白色固體物，不同之處在于使用1-氯-6-溴-異喹啉。
1H NMR(CD3OD)δ0.99-1.09(m，12H)，1.22-1.27(m，10H)，1.40-1.47(m，1H)，1.86-1.91(m，1H)，2.20-2.34(m，2H)，2.57-2.66(m，1H)，2.90-2.97(m，1H)，4.05-4.09(m，1H)，4.21(b 1H)，4.44-4.57(m，2H)，5.13(d，J＝10.5Hz，1H)，5.29(d，J＝18.0Hz，1H)，5.70-5.82(m，1H)，5.88(b，1H)，7.29(d，J＝9.5Hz，1H)，7.60-7.63(m，1H)，8.00-8.12(m，3H)；LC-MS(保留時(shí)間1.90min，方法B)，MS m/z 762，764(M++H)。
實(shí)施例23化合物23的制備步驟1 按照實(shí)施例11、步驟3的相同方法制備該產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用1-氯-異喹啉。
1H NMR(CD3OD)δ1.42，1.44(外消旋物，9H)，2.39-2.44(m，1H)，2.68-2.72(m，1H)，3.80-3.87(m，2H)，4.44-4.52(m，1H)，5.78(b，1H)，7.32-7.33(m，1H)，7.58(t，J＝7.8Hz，1H)，)，7.71(t，J＝7.5Hz，1H)，7.81(d，J＝8.0Hz，1H)，7.95(d，J＝6.0Hz，1H)，8.19(d，J＝8.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.61min，方法B)，MS m/z 359(M++H)。
步驟2 按照實(shí)施例11、步驟4的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例23、步驟1的產(chǎn)物。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.00-1.09(m，4H)，1.35-1.38(m，10H)，1.69-1.84(m，1H)，2.11-2.66(m，3H)，2.89-2.93(m，1H)，3.62-3.89(m，2H)，4.31(t，J＝8.1Hz，1H)，5.12(d，J＝10.8Hz，1H)，5.27(d，J＝16.8Hz，1H)，5.58-5.70(m，1H)，5.76(b，1H)，7.43(d，J＝5.7Hz，1H)，7.66(t，J＝7.4Hz，1H)，7.79(t，J＝7.5Hz，1H)，7.92(d，J＝8.1Hz，1H)，8.02(d，J＝10.0Hz，1H)，8.13(d，J＝8.1Hz，1H)，9.02(b，1H)；
LC-MS(保留時(shí)間1.72min，方法B)，MS m/z 571(M++H)。
步驟3 按照實(shí)施例11、步驟5的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例23、步驟2的產(chǎn)物。
LC-MS(保留時(shí)間1.16min，方法B)，MS m/z 471(M++H)。
步驟4按照實(shí)施例11、步驟6的相同方法制備化合物23，為白色固體物，不同之處在于使用實(shí)施例23、步驟3的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ1.00-1.09(m，12H)，1.25-1.27(m，10H)，1.42-1.46(m，1H)，1.86-1.90(m，1H)，2.22-2.34(m，2H)，2.60-2.67(m，1H)，2.92-2.99(m，1H)，4.06-4.11(m，1H)，4.26(b，1H)，4.45-4.57(m，2H)，5.12(d，J＝10.2Hz，1H)，5.27(d，J＝16.8Hz，1H)，5.70-5.82(m，1H)，5.88(b，1H)，7.32(d，J＝6.0Hz，1H)，7.52(t，J＝7.4Hz，1H)，7.70(t，J＝7.5Hz，1H)，7.80(d，J＝8.1Hz，1H)，7.97(d，J＝6Hz，1H)，8.20(d，J＝8.4Hz，1H)，9.18(b，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.80min，方法B)，MS m/z 684(M++H)。
實(shí)施例24化合物24的制備 化合物24方案1 步驟1在0℃下，向N-BOC-3-(R)-羥基-L-脯氨酸(6.22g，26.9mmol)的DMF(250mL)溶液中分批加入NaH(60％，3.23g，80.8mmol)。將所形成的懸浮液在該溫度下攪拌30min。一次性加入1，3-二氯異喹啉固體物(5.33g，26.9mmol)并將最終的混合物在環(huán)境溫度下攪拌12h。用冰凍的5％檸檬酸水溶液猝滅，用EtOAC(300mL)萃取。水相再次用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層依次用5％檸檬酸水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾。將濾液真空蒸發(fā)至干，得到10.53g(99.8％)4-(6-甲氧基-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯，為灰白色泡沫狀物。該物質(zhì)未經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一步反應(yīng)中。
1H NMR(CD3OD)δ1.43，1.44(外消旋物，9H)，2.39-2.44(m，1H)，2.68-2.72(m，1H)，3.80-3.90(m，2H)，4.44-4.52(m，1H)，5.77(b，1H)，7.39(s，1H)，7.58(t，J＝7.3Hz，1H)，7.71-7.78(m，2H)，8.16(d，J＝7.5Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.80min，方法B)，MS m/z 392(M++H)。
步驟2 按照實(shí)施例11、步驟4的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例24、步驟1的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ1.02-1.08(m，2H)，1.18-1.26(m，2H)，1.44-1.48(m，10H)，1.84-1.91(m，1H)，2.22-2.36(m，2H)，2.57-2.60(m，1H)，2.95-2.99(m，1H)，3.81-3.93(m，2H)，4.38-4.41(m，1H)，5.13(d，J＝10.8Hz，1H)，5.31(d，J＝16.8Hz，1H)，5.75-5.82(m，2H)，7.41(s，1H)，7.59(t，J＝7.4Hz，1H)，7.74-7.79(m，2H)，8.16(d，J＝8.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.82min，方法B)，MS m/z 605(M++H)。
步驟3 按照實(shí)施例11、步驟5的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例24、步驟2的產(chǎn)物。
LC-MS(保留時(shí)間1.30min，方法B)，MS m/z 505(M++H)。
步驟4按照實(shí)施例11、步驟6的相同方法制備化合物24，為白色固體物，不同之處在于使用實(shí)施例24、步驟3的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ0.99-1.09(m，12H)，1.22-1.29(m，10H)，1.42-1.46(m，1H)，1.86-1.90(m，1H)，2.21-2.34(m，2H)，2.62-2.66(m，1H)，2.92-2.99(m，1H)，4.06-4.11(m，1H)，4.26(b，1H)，4.46-4.56(m，2H)，5.13(d，J＝10.5Hz，1H)，5.29(d，J＝17.2Hz，1H)，5.72-5.79(m，1H)，5.89(b，1H)，7.40(d，J＝6.0Hz，1H)，7.52(t，J＝7.4Hz，1H)，7.72-7.76(m，2H)，8.18(d，J＝8.5Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.95min，方法B)，MS m/z 718(M++H)。
實(shí)施例25，化合物25 化合物25
方案1 化合物25步驟1將實(shí)施例24、步驟1(39mg，0.10mmol)、苯基硼酸(14.6mg，0.12mmol)、叔丁醇鈉(38mg，0.40mmol)和((t-Bu)2POH)2PdCl2(POPd)(5mg，0.01mmol)在THF(2mL)中的混合物加熱回流4h。冷卻后，所形成的混合物用5％檸檬酸水溶液猝滅并用EtOAc(20mL)萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾，蒸發(fā)。剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到36mg(83％)所需的產(chǎn)物，為灰白色泡沫狀物。
1H NMR(CD3OD)δ1.43，1.45(外消旋物，9H)，2.51-2.56(m，1H)，2.74-2.82(m，1H)，3.88-3.92(m，1H)，3.98-4.01(m，1H)，4.50-4.57(m，1H)，5.95(b，1H)，7.36-7.39(m，1H)，7.45-7.48(m，2H)，7.55(t，J＝7.3Hz，1H)，7.70(t，J＝7.5Hz，1H)，7.84-7.89(m，2H)，8.14-8.17(m，3H)，9.05(b，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.97min，方法B)，MS m/z 435(M++H)。
步驟2按照實(shí)施例11、步驟4的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例25、步驟1的產(chǎn)物。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.98-1.10(m，4H)，1.38-1.41(m，10H)，1.74-1.81(m，1H)，2.18-2.34(m，2H)，2.47-2.49(m，1H)，2.95-2.99(m，1H)，3.74-3.96(m，2H)，4.34-4.37(m，1H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.26(d，J＝17.8Hz，1H)，5.75-5.82(m，1H)，5.95(b，1H)，7.41-7.45(m，1H)，7.51-7.54(m，2H)，7.61-7.64(m，1H)，7.78-7.82(m，1H)，7.98(d，J＝9.0Hz，1H)，8.06(s，1H)，8.13-8.14(m，1H)，8.18-8.20(m，2H)，9.05(b，1H)，10.34(b，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.99min，方法B)，MS m/z 647(M++H)。
步驟3按照實(shí)施例11、步驟5的相同方法制備該產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用實(shí)施例25、步驟2的產(chǎn)物。
LC-MS(保留時(shí)間1.55min，方法B)，MS m/z 547(M++H)。
步驟4按照實(shí)施例11、步驟6的相同方法制備化合物25，為白色固體物，不同之處在于使用實(shí)施例25、步驟3的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ0.92-1.09(m，12H)，1.26-1.30(m，10H)，1.43-1.46(m，1H)，1.87-1.90(m，1H)，2.21-2.26(m，1H)，2.36-2.41(m，1H)，2.70-2.75(m，1H)，2.93-2.97(m，1H)，4.18-4.30m，2H)，4.46-4.48(m，1H)，4.55-4.58(m，1H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.29(d，J＝18.0Hz，1H)，5.72-5.79(m，1H)，6.10(b，1H)，7.37-7.40(m，1H)，7.46-7.49(m，3H)，7.70(t，J＝7.5Hz，1H)，7.85-7.89(m，2H)，8.16-8.20(m，3H)；LC-MS(保留時(shí)間2.08min，方法B)，MS m/z 760(M++H)。
實(shí)施例26化合物26的制備 化合物26步驟1 按照實(shí)施例25、步驟1的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用4-甲氧基苯基硼酸。
1H NMR(CD3OD)δ1.40，1.45(外消旋物，9H)，2.50-2.55(m，1H)，2.73-2.81(m，1H)，3.81-3.89(m，4H)，3.98-4.01(m，1H)，4.50-4.57(m，1H)，5.93(b，1H)，7.02(d，J＝9.0Hz，2H)，7.50(t，J＝7.3Hz，1H)，7.67(t，J＝7.5Hz，1H)，7.73(s，1H)，7.83(d，J＝8.5Hz，1H)，8.09(d，J＝8.5Hz，2H)，8.15(d，J＝8.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間2.00min。方法B)，MS m/z 465(M++H)。
步驟2 按照實(shí)施例11、步驟4的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例26、步驟1的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ1.06-1.09(m，2H)，1.17-1.27(m，2H)，1.42-1.47(m，10H)，1.88-1.90(m，1H)，2.21-2.26(m，1H)，2.33-2.39(m，1H)，2.61-2.65(m，1H)，2.95-2.99(m，1H)，3.85(s，3H)，3.86-3.90(m，1H)，3.99-4.00(m，1H)，4.43-4.45(m，1H)，5.13(d，J＝10.8Hz，1H)，5.31(d，J＝18.0Hz，1H)，5.77-5.80(m，1H)，5.99(b，1H)，7.02(d，J＝9.0Hz，2H)，7.51(t，J＝7.3Hz，1H)，7.68(t，J＝7.5Hz，1H)，7.76(s，1H)，7.84(d，J＝8.5Hz，1H)，8.09(d，J＝8.5Hz，2H)，8.15(d，J＝8.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間2.02min，方法B)，MS m/z 677(M++H)。
步驟3 按照實(shí)施例11、步驟5的相同方法制備該產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用實(shí)施例26、步驟2的產(chǎn)物。
LC-MS(保留時(shí)間1.53min，方法B)，MS m/z 577(M++H)。
步驟4按照實(shí)施例11、步驟6的相同方法制備化合物26，不同之處在于使用實(shí)施例26、步驟3的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ0.93-1.09(m，12H)，1.26-1.30(m，10H)，1.44-1.46(m，1H)，1.87-1.90(m，1H)，2.21-2.26(m，1H)，2.36-2.41(m，1H)，2.70-2.75(m，1H)，2.93-2.97(m，1H)，3.86(s，3H)，4.18-4.25(m，1H)，4.30(b，1H)，4.46-4.48(m，1H)，4.55-4.58(m，1H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.29(d，J＝18.0Hz，1H)，5.72-5.79(m，1H)，6.08(b，1H)，7.02(d，J＝9.0Hz，2H)，7.44(t，J＝7.3Hz，1H)，7.66(t，J＝7.5Hz，1H)，7.75(s，1H)，7.83(d，J＝8.5Hz，1H)，8.09(d，J＝8.5Hz，2H)，8.15(d，J＝8.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間2.03min，方法B)，MS m/z 790(M++H)。
實(shí)施例27化合物27的制備 化合物27步驟1
按照實(shí)施例25、步驟1的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用4-吡啶基硼酸。
1H NMR(CD3OD)δ1.43，1.46(外消旋物，9H)，2.53-2.56(m，1H)，2.80-2.89(m，1H)，3.90-3.93(m，1H)，4.00-4.05(m，1H)，4.50-4.57(m，1H)，6.00，6.05(外消旋物，1H)，7.80(t，J＝7.3Hz，1H)，7.87(t，J＝7.5Hz，1H)，8.08(d，J＝8.5Hz，1H)，8.32(d，J＝8.0Hz，1H)，8.49(s，1H)，8.84(d，J＝6.0Hz，2H)，8.84(d，J＝6.5Hz，2H)；LC-MS(保留時(shí)間1.39min，方法B)，MS m/z 436(M++H)。
步驟2 按照實(shí)施例11、步驟4的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例27、步驟1的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ1.06-1.09(m，2H)，1.17-1.27(m，2H)，1.42-1.46(m，10H)，1.88-1.90(m，1H)，2.21-2.26(m，1H)，2.33-2.39(m，1H)，2.61-2.65(m，1H)，2.95-2.99(m，1H)，3.88-3.90(m，1H)，4.01-4.08(m，1H)，4.43-4.45(m，1H)，5.15(d，J＝10.8Hz，1H)，5.32(d，J＝18.0Hz，1H)，5.77-5.80(m，1H)，6.10(b，1H)，7.79(t，J＝7.3Hz，1H)，7.88(t，J＝7.5Hz，1H)，8.08(d，J＝8.5Hz，1H)，8.31(d，J＝8.0Hz，1H)，8.47(s，1H)，8.79(d，J＝7.0Hz，2H)，8.86(d，J＝6.5Hz，2H)；LC-MS(保留時(shí)間1.49min，方法B)，MS m/z 648(M++H)。
步驟3 按照實(shí)施例11、步驟5的相同方法制備該產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用實(shí)施例27、步驟2的產(chǎn)物。
LC-MS(保留時(shí)間0.96min，方法B)，MS m/z 548(M++H)。
步驟4按照實(shí)施例11、步驟6的相同方法制備化合物27，不同之處在于使用實(shí)施例27、步驟3的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ0.94-1.09(m，12H)，1.22-1.26(m，10H)，1.44-1.49(m，1H)，1.88-1.92(m，1H)，2.22-2.25(m，1H)，2.41-2.44(m，1H)，2.70-2.75(m，1H)，2.93-2.98(m，1H)，4.18-4.21(m，1H)，4.25(b，1H)，4.53-4.62(m，2H)，5.12(d，J＝10.0Hz，1H)，5.29(d，J＝20.0Hz，1H)，5.72-5.77(m，1H)，6.12(b，1H)，7.67(t，J＝7.3Hz，1H)，7.82(t，J＝7.5Hz，1H)，8.02(d，J＝8.5Hz，1H)，8.29(d，J＝8.0Hz，1H)，8.31(s，1H)，8.55(d，J＝7.0Hz，2H)，8.76(d，J＝6.5Hz，2H)；LC-MS(保留時(shí)間1.49min，方法B)，MS m/z 761(M++H)。
實(shí)施例28化合物28的制備 化合物28步驟1 按照實(shí)施例25、步驟1的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用4-N，N-二甲基氨基-苯基硼酸。
LC-MS(保留時(shí)間1.64min，方法B)，MS m/z 478(M++H)。
步驟2 按照實(shí)施例11、步驟4的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例28、步驟1的產(chǎn)物。
LC-MS(保留時(shí)間1.70min，方法B)，MS m/z 690(M++H)。
步驟3 按照實(shí)施例11、步驟5的相同方法制備該產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用實(shí)施例28、步驟2的產(chǎn)物。
LC-MS(保留時(shí)間1.20min，方法B)，MS m/z 590(M++H)。
步驟4按照實(shí)施例11、步驟6的相同方法制備化合物28，不同之處在于使用實(shí)施例28、步驟3的產(chǎn)物。
1H NMR(d6-DMSO)δ0.92-1.10(m，13H)，1.30(s，9H)，1.35-1.38(m，1H)，1.68-1.71(m，1H)，2.12-3.00(m，2H)，2.59-2.62(m，1H)，2.91-2.95(m，1H)，2.99(s，6H)，3.93-4.10(m，2H)，4.32-4.40(m，2H)，5.09(d，J＝11.5Hz，1H)，5.23(d，J＝19.0Hz，1H)，5.54-5.64(m，1H)，5.92(b，1H)，6.83(d，J＝9.0Hz，2H)，7.42(t，J＝7.3Hz，1H)，7.70(t，J＝7.5Hz，1H)，7.81(s，1H)，7.87(d，J＝8.5Hz，1H)，8.04(d，J＝9.0Hz，2H)，8.15(d，J＝8.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.72min，方法B)，MS m/z 803(M++H)。
實(shí)施例29化合物29的制備 化合物29步驟1 按照實(shí)施例25、步驟1的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用4-氰基-苯基硼酸。
LC-MS(保留時(shí)間1.87min，方法B)，MS m/z 460(M++H)。
步驟2 按照實(shí)施例11、步驟4的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例29、步驟1的產(chǎn)物。
LC-MS(保留時(shí)間1.88min，方法B)，MS m/z 672(M++H)。
步驟3 按照實(shí)施例11、步驟5的相同方法制備該產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用實(shí)施例29、步驟2的產(chǎn)物。
LC-MS(保留時(shí)間1.41min，方法B)，MS m/z 572(M++H)。
步驟4按照實(shí)施例11、步驟6的相同方法制備化合物29，為白色固體物，不同之處在于使用實(shí)施例29、步驟3的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ0.92-1.09(m，12H)，1.25-1.26(m，10H)，1.42-1.46(m，1H)，1.86-1.89(m，1H)，2.20-2.22(m，1H)，2.33-2.34(m，1H)，2.68-2.71(m，1H)，2.93-2.95(m，1H)，4.13-4.28(m，2H)，4.49-4.60(m，2H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.28(d，J＝18.0Hz，1H)，5.71-5.80(m，1H)，6.09(b，1H)，7.56(t，J＝7.3Hz，1H)，7.74(t，J＝7.5Hz，1H)，7.83(d，J＝10.5Hz，2H)，7.93(d，J＝7.5Hz，1H)，8.01(s，1H)，8.22(d，J＝7.5Hz，1H)，8.37(d，J＝10.5Hz，2H)；LC-MS(保留時(shí)間1.87min，方法B)，MS m/z 785(M++H)。
實(shí)施例30化合物30的制備 化合物30步驟1 按照實(shí)施例25、步驟1的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用3-呋喃硼酸。
LC-MS(保留時(shí)間1.85min，方法B)，MS m/z 425(M++H)。
步驟2 按照實(shí)施例11、步驟4的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例30、步驟1的產(chǎn)物。
LC-MS(保留時(shí)間1.88min，方法B)，MS m/z 637(M++H)。
步驟3 按照實(shí)施例11、步驟5的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例30、步驟2的產(chǎn)物。
LC-MS(保留時(shí)間1.38min，方法B)，MS m/z 537(M++H)。
步驟4按照實(shí)施例11、步驟6的相同方法制備化合物30，為白色固體物，不同之處在于使用實(shí)施例30、步驟3的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ0.95-1.09(m，12H)，1.23-1.30(m，10H)，1.43-1.46(m，1H)，1.87-1.90(m，1H)，2.21-2.23(m，1H)，2.30-2.34(m，1H)，2.64-2.70(m，1H)，2.93-2.96(m，1H)，4.11-4.29(m，2H)，4.41-4.44(m，1H)，4.54-4.56(m，1H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.29(d，J＝17.5Hz，1H)，5.71-5.80(m，1H)，6.02(b，1H)，7.00(s，1H)，7.44(t，J＝7.2Hz，1H)，7.52(s，1H)，7.57(s，1H)，7.66(t，J＝7.0Hz，1H)，7.79(d，J＝8.0Hz，1H)，8.14-8.17(m，2H)；LC-MS(保留時(shí)間1.93min，方法B)，MS m/z 750(M++H)。
實(shí)施例31化合物31的制備 化合物31方案1
步驟1按照實(shí)施例21、步驟2的相同方法制備該產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用3-溴-異喹啉(Atkins等，JOC，1973，400)。
1H NMR(CDCl3)δ7.60-7.62(m，2H)，7.71-7.73(m，2H)，8.12(s，1H)，8.99(s，1H)；LC-MS(保留時(shí)間0.78min，方法B)，MS m/z 224，226(M++H)。
步驟2按照實(shí)施例11、步驟2的相同方法制備該產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用3-溴-異喹啉2-氧化物。
1H NMR(CDCl3)δ7.66-7.71(m，1H)，7.74-7.76(m，2H)，7.83(s，1H)，8.29(d，J＝8.5Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.55min，方法B)，MS m/z 242，244(M++H)。
步驟3按照實(shí)施例11、步驟3的相同方法制備該產(chǎn)物，為泡沫狀物，不同之處在于使用3-溴-1-氯-異喹啉。
1H NMR(CD3OD)δ1.43，1.44(外消旋物，9H)，2.41-2.47(m，1H)，2.69-2.72(m，1H)，3.80-3.84(m，1H)，3.88-3.90(m，1H)，4.46-4.52(m，1H)，5.76(b，1H)，7.57-7.61(m，2H)，7.73-7.75(m，2H)，8.15(d，J＝8.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.79min，方法B)，MS m/z 437，439(M++H)。
步驟4將2-三丁基錫烷基-吡嗪(44mg，0.12mmol)、四(三苯基膦)合鈀(O)(12mg，0.01mmol)和實(shí)施例31、步驟3的產(chǎn)物(44mg，0.1mmol)在甲苯(1mL)中的混合物加熱回流3h。真空除去揮發(fā)份后，剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到35mg(80％)所需的產(chǎn)物，為黃色固體物。
LC-MS(保留時(shí)間1.77min，方法B)，MS m/z 437(M++H)。
步驟5 按照實(shí)施例11、步驟4的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例31、步驟4的產(chǎn)物。
LC-MS(保留時(shí)間1.78min，方法B)，MS m/z 649(M++H)。
步驟6 按照實(shí)施例11、步驟5的相同方法制備該產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用實(shí)施例31、步驟5的產(chǎn)物。
LC-MS(保留時(shí)間1.26min，方法B)，MS m/z 549(M++H)。
步驟7按照實(shí)施例11、步驟6的相同方法制備化合物31，不同之處在于使用實(shí)施例31、步驟6的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ0.95-1.10(m，12H)，1.24-1.27(m，10H)，1.44-1.47(m，1H)，1.87-1.90(m，1H)，2.19-2.22(m，1H)，2.38-2.44(m，1H)，2.71-2.76(m，1H)，2.93-2.96(m，1H)，4.18-4.28(m，2H)，4.50-4.61(m，2H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.29(d，J＝17.5Hz，1H)，5.71-5.80(m，1H)，6.12(b，1H)，7.60(t，J＝7.2Hz，1H)，7.77(t，J＝7.0Hz，1H)，7.97(d，J＝8.5Hz，1H)，8.26(d，J＝8.5Hz，1H)，8.44(s，1H)，8.59(s，1H)，8.70(s，1H)，9.61(s，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.84min，方法B)，MS m/z 762(M++H)。
實(shí)施例32化合物32的制備 化合物32步驟1 按照實(shí)施例21、步驟2的相同方法制備2-氧基-異喹啉-3-甲腈產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用3-氰基-異喹啉。
1H NMR(DMSO-d6)δ7.74(t，J＝8.0Hz，1H)，7.84(t，J＝8.2Hz，1H)，7.97(d，J＝8.5Hz，1H)，8.03(d，J＝8.5Hz，1H)，8.85(s，1H)，9.17(s，1H)；LC-MS(保留時(shí)間0.48min，方法B)，MS m/z 171(M++H)。
步驟2 按照實(shí)施例11、步驟2的相同方法制備1-氯-異喹啉-3-甲腈產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用3-氰基-異喹啉2-氧化物。
1H NMR(CDCl3)δ7.87-7.91(m，2H)，7.92-7.94(m，1H)，8.09(s，1H)，8.42-8.44(m，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.22min，方法B)，MS m/z 189(M++H)。
步驟3 按照實(shí)施例1、步驟5的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用1-氯-異喹啉-3-甲腈。
1HNMR(CD3OD)δ1.05(s，9H)，1.17(s，9H)，2.34-2.40(m，1H)，2.71-2.78(m，1H)，4.09-4.11(m，1H)，4.21(b，1H)，4.48-4.52(m，1H)，4.68-4.72(m，1H)，5.89(b，1H)，7.74(t，J＝7.5Hz，1H)，7.86(t，J＝7.5Hz，1H)，7.94-7.97(m，2H)，8.31(d，J＝8.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.66min，方法B)，MS m/z 497(M++H)。
步驟4按照實(shí)施例1、步驟9的相同方法制備化合物32，為白色固體物，不同之處在于使用實(shí)施例32、步驟3的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ1.04-1.09(m，12H)，1.20-1.27(m，10H)，1.39-1.45(m，1H)，1.85-1.88(m，1H)，2.20-2.30(m，2H)，2.63-2.71(m，1H)，2.91-2.97(m，1H)，4.09-4.13(m，1H)，4.23(d，J＝9.3Hz，1H)，4.49-4.58(m，2H)，5.13(d，J＝10.5Hz，1H)，5.28(d，J＝18.0Hz，1H)，5.69-5.81(m，1H)，5.92(b，1H)，6.60(d，J＝10.0Hz，1H)，7.72(t，J＝7.5Hz，1H)，7.86(t，J＝7.5Hz，1H)，7.96-7.99(m，2H)，8.29(d，J＝8.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.75min，方法B)，MS m/z 714(M++H)。
實(shí)施例33化合物33的制備 化合物33步驟1 按照實(shí)施例21、步驟2的相同方法制備3-甲基-異喹啉2-氧化物產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用3-甲基-異喹啉。
1H NMR(CD3OD)δ2.64(s，3H)，7.64-7.72(m，2H)，7.88-7.95(m，2H)，9.05(s，1H)；LC-MS(保留時(shí)間0.61min，方法B)，MS m/z 160(M++H)。
步驟2 按照實(shí)施例11、步驟2的相同方法制備1-氯-3-甲基-異喹啉產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用3-甲基-異喹啉2-氧化物。
1H NMR(CDCl3)δ2.65(s，3H)，7.25(s，1H)，7.61(t，J＝7.5Hz，1H)，7.69(t，J＝7.5Hz，1H)，7.74(d，J＝8.0Hz，1H)，8.27(d，J＝8.5Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.47min，方法B)，MS m/z 178(M++H)。
步驟3 按照實(shí)施例1、步驟5的相同方法制備該產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用1-氯-3-甲基-異喹啉。
1HNMR(CD3OD)δ1.05(s，9H)，1.23(s，9H)，2.51(s，3H)，2.34-2.40(m，1H)，2.72-2.78(m，1H)，4.05-4.12(m，1H)，4.26(b，1H)，4.41(d，J＝10Hz，1H)，4.62-4.67(m，1H)，5.90(b，1H)，7.14(s，1H)，7.38(t，J＝7.5Hz，1H)，7.62(t，J＝7.5Hz，1H)，7.68(d，J＝8.0Hz，1H)，8.14(d，J＝8.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.84min，方法B)，MS m/z 486(M++H)。
步驟4按照實(shí)施例1、步驟9的相同方法制備化合物33，為白色固體物，不同之處在于使用實(shí)施例33、步驟3的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ0.99-1.09(m，12H)，1.23-1.25(m，10H)，1.41-1.45(m，1H)，1.86-1.90(m，1H)，2.21-2.31(m，2H)，2.52(s，3H)，2.58-2.61(m，1H)，2.91-2.97(m，1H)，4.08-4.12(m，1H)，4.28(b，1H)，4.40(d，J＝10.0Hz，1H)，4.50-4.55(m，1H)，5.12(d，J＝10.0Hz，1H)，5.30(d，J＝18.0Hz，1H)，5.71-5.81(m，1H)，5.93(b，1H)，7.13(s，1H)，7.38(t，J＝7.5Hz，1H)，7.62(t，J＝7.5Hz，1H)，7.68(d，J＝8.0Hz，1H)，8.12(d，J＝8.0Hz，1H)，9.12(b，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.85min，方法B)，MS m/z 698(M++H)。
實(shí)施例34化合物34的制備 化合物34步驟1 按照實(shí)施例21、步驟2的相同方法制備3-環(huán)丙基-異喹啉2-氧化物產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用3-環(huán)丙基-異喹啉(L.Flippin，J.Muchowski，J.O.C，1993，2631-2632)。
LC-MS(保留時(shí)間0.95min，方法B)，MS m/z 186(M++H)。
步驟2 按照實(shí)施例11、步驟2的相同方法制備1-氯-3-環(huán)丙基-異喹啉產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用3-環(huán)丙基-異喹啉2-氧化物。
1H NMR(CD3OD)δ1.00-1.04(m，4H)，2.11-2.18(m，1H)，7.55(s，1H)，7.61(t，J＝8.0Hz，1H)，7.72(t，J＝8.0Hz，1H)，7.83(d，J＝13.5Hz，1H)，8.27(d，J＝14.5Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.70min，方法B)，MS m/z 204(M++H)。
步驟3 按照實(shí)施例1、步驟5的相同方法制備該產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用1-氯-3-環(huán)丙基-異喹啉。
1HNMR(CD3OD)δ0.93-1.05(m，13H)，1.29(s，9H)，2.06-2.10(m，1H)，2.39-2.44(m，1H)，2.70-2.76(m，1H)，4.05-4.12(m，1H)，4.27(b，1H)，4.35(d，J＝10.0Hz，1H)，4.62-4.67(m，1H)，5.78(b，1H)，7.18(s，1H)，7.38(t，J＝7.5Hz，1H)，7.61(t，J＝7.5Hz，1H)，7.66(d，J＝8.0Hz，1H)，8.09(d，J＝8.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.96min，方法B)，MS m/z 512(M++H)。
步驟4按照實(shí)施例1、步驟9的相同方法制備化合物34，為白色固體物，不同之處在于使用實(shí)施例34、步驟3的產(chǎn)物。
1HNMR(CD3OD)δ0.93-1.09(m，16H)，1.24-1.30(m，10H)，1.42-1.46(m，1H)，1.87-1.90(m，1H)，2.06-2.11(m，1H)，2.21-2.32(m，2H)，2.56-2.61(m，1H)，2.92-2.97(m，1H)，4.08-4.12(m，1H)，4.28(b，1H)，4.32(d，J＝10.0Hz，1H)，4.48-4.53(m，1H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.30(d，J＝17.5Hz，1H)，5.72-5.77(m，1H)，5.82(b，1H)，7.18(s，1H)，7.36(t，J＝7.5Hz，1H)，7.60(t，J＝7.5Hz，1H)，7.67(d，J＝8.0Hz，1H)，8.07(d，J＝8.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間2.00min，方法B)，MS m/z 724(M++H)。
實(shí)施例35化合物35的制備 化合物35方案1 步驟1將3-羥基-異喹啉(725mg，5.0mmol)、碳酸銫(4.89g，15.0mmol)、MeI(781mg，5.5mmol)在DMF(50mL)中的混合物在環(huán)境溫度下攪拌12h?；旌衔镉肊tOAc(200mL)稀釋，過(guò)濾，依次用水(200mL，×2)、1M NaOH水溶液和鹽水洗滌。有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾，蒸發(fā)。剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到120mg(15％)所需的產(chǎn)物，為白色固體物。
1H NMR(CDCl3)δ4.03(s，3H)，6.99(s，1H)，7.36(t，J＝8.0Hz，1H)，7.56(t，J＝8.2Hz，1H)，7.68(d，J＝8.5Hz，1H)，7.87(J＝8.5Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間0.54min，方法B)，MS m/z 160(M++H)。
步驟2 按照實(shí)施例21、步驟2的相同方法制備3-甲氧基-異喹啉2-氧化物產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用3-甲氧基-異喹啉。
LC-MS(保留時(shí)間0.83min。方法B)，MS m/z 176(M++H)。
步驟3 按照實(shí)施例11、步驟2的相同方法制備1-氯-3-甲氧基-異喹啉產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用3-甲氧基-異喹啉2-氧化物。
LC-MS(保留時(shí)間1.62min，方法B)，MS m/z 194(M++H)。
步驟4 按照實(shí)施例1、步驟5的相同方法制備該產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用1-氯-3-甲氧基-異喹啉。
1HNMR(CD3OD)δ1.05(s，9H)，1.23(s，9H)，2.35-2.43(m，1H)，2.72-2.79(m，1H)，3.96(s，3H)，4.01-4.11(m，1H)，4.26(b，1H)，4.48(d，J＝10.0Hz，1H)，4.62-4.67(m，1H)，5.83(b，1H)，6.61(s，1H)，7.25(t，J＝7.5Hz，1H)，7.54(t，J＝7.5Hz，1H)，7.63(d，J＝8.1Hz，1H)，8.08(d，J＝8.4Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.82min，方法B)，MS m/z 502(M++H)。
步驟5按照實(shí)施例1、步驟9的相同方法制備化合物35，為白色固體物，不同之處在于使用實(shí)施例35、步驟4的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ1.04-1.08(m，12H)，1.24-1.27(m，10H)，1.43-1.45(m，1H)，1.86-1.89(m，1H)，2.21-2.26(m，1H)，2.30-2.34(m，1H)，2.62-2.66(m，1H)，2.91-2.97(m，1H)，3.99(s，3H)，4.09-4.12(m，1H)，4.27-4.28(m，1H)，4.46(d，J＝10.0Hz，1H)，4.51-4.58(m，1H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.30(d，J＝18.0Hz，1H)，5.72-5.76(m，1H)，5.88(b，1H)，6.62(s，1H)，7.26(t，J＝7.5Hz，1H)，7.55(t，J＝7.5Hz，1H)，7.65(d，J＝8.0Hz，1H)，8.06(d，J＝8.5Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.85min，方法B)，MS m/z 714(M++H)。
實(shí)施例36化合物36的制備 化合物36
方案1 步驟1將4-甲氧基-2-甲基-苯甲酸(5.00g，30.1mmol)和亞硫酰氯(20.0g，0.17mol)的混合物加熱回流30min。真空除去揮發(fā)份。抽真空過(guò)夜后，所得的粘稠油狀酰氯未經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一步反應(yīng)。
在0℃下，向4-甲氧基-2-甲基-苯甲酰氯的二氯甲烷(60mL)溶液中滴加入二乙胺。將所形成的混合物在攪拌下升溫至環(huán)境溫度反應(yīng)2h。真空除去揮發(fā)份。將剩余物在EtOAc(100mL)中研磨并過(guò)濾。將濾液用1M HCl、1M NaOH和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥。蒸發(fā)溶劑，得到6.51g(98％)所需的產(chǎn)物，為粘稠油狀物。
LC-MS(保留時(shí)間1.20min，方法B)，MS m/z 222(M++H)。
步驟2在-78℃下，向N，N-二乙基-4-甲氧基-2-甲基-苯甲酰胺(221mg，1.0mmol)的THF(2mL)溶液內(nèi)滴加入n-BuLi(0.84ml 2.5M的己烷溶液，2.10mmol)。所形成的橙色溶液再于該溫度下保溫30min，隨后滴加入芐腈(103mg，1.0mmol)。將最終的溶液在攪拌下升溫至環(huán)境溫度過(guò)夜。用冰凍的5％檸檬酸猝滅。過(guò)濾，用水洗滌并干燥。在2∶1己烷-EtOAc(5mL)中研磨，得到205mg(82％)所需的產(chǎn)物，為白色固體物。
1H NMR(d6-DMSO)δ3.89(s，3H)，6.84(s，1H)，7.05-7.07(m，1H)，7.18(d，J＝2.5Hz，1H)，7.44-7.51(m，3H)，7.78(d，J＝7.0Hz，1H)，8.11(d，J＝9.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.20min，方法B)，MS m/z 252(M++H)。
步驟3按照實(shí)施例11、步驟2的相同方法制備1-氯-6-甲氧基-3-苯基-異喹啉產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用6-甲氧基-3-苯基-2H-異喹啉-1-酮。
1H NMR(CDCl3)δ3.97(s，3H)，7.12(d，J＝2.5Hz，1H)，7.23-7.26(m，1H)，7.40-7.42(m，1H)，7.46-7.50(m，2H)，7.89(s，1H)，8.08(d，J＝7.0Hz，2H)，8.21(d，J＝9.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.90min，方法B)，MS m/z 270，271(M++H)。
步驟4向?qū)嵤├?1、步驟1的產(chǎn)物(320mg，0.57mmol)的DMSO(5mL)溶液中加入叔丁醇鉀(321mg，2.87mmol)。將所形成的溶液在環(huán)境溫度下攪拌30min，隨后加入1-氯-6-甲氧基-3-苯基-異喹啉(實(shí)施例36，步驟3)(155mg，0.57mmol)。將最終的溶液攪拌12h。用冰凍的水猝滅，用1M HCl酸化至pH為4，用EtOAc萃取(20mL，×2)。有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾，蒸發(fā)。剩余物經(jīng)制備型HPLC純化(40％B至100％B，15min梯度)，得到289mg(64％)化合物36，為白色固體物。
1H NMR(CD3OD)δ0.95-1.05(m，12H)，1.24-1.32(m，10H)，1.44-1.46(m，1H)，1.87-1.90(m，1H)，2.20-2.26(m，1H)，2.30-2.36(m.1H)，2.65-2.71(m，1H)，2.93-2.97(m，1H)，3.94(s，3H)，4.12-4.28(m，2H)，4.38-4.52(m，2H)，5.12(d，J＝10.0Hz，1H)，5.28(d，J＝17.0Hz，1H)，5.69-5.74(m，1H)，6.05(b，1H)，7.06-7.07(m，1H)，7.26(s，1H)，7.37-7.39(m，1H)，7.44-7.48(m，2H)，7.77(s，1H)，8.07(d，J＝9.0Hz，1H)，8.15(d，J＝8.5Hz，2H)；LC-MS(保留時(shí)間2.02min，方法B)，MS m/z 790(M++H)。
實(shí)施例37化合物37的制備 化合物37方案1 步驟1在-78℃下，向N，N-二乙基-4-甲氧基-2-甲基-苯甲酰胺(633mg，2.9mmol)的THF(15mL)溶液中滴加入n-BuLi(2.3ml，2.5M己烷溶液，5.74mmol)。所形成的紅色溶液再于該溫度下保溫30min，隨后在-78℃下，經(jīng)插管轉(zhuǎn)移到噻唑-2-甲酸乙酯(A.Medici等，Tetrahedron Lett.1983，2901頁(yè))(450mg，2.9mmol)的THF(5mL)溶液中。最終的深綠色溶液在攪拌下保持在該溫度下反應(yīng)2h。用飽和氯化銨水溶液猝滅并用EtOAc(50mL)萃取。有機(jī)層用飽和氯化銨水溶液和鹽水洗滌，干燥，經(jīng)快速柱層析純化，用2∶1EtOAc∶己烷洗脫，得到405mg(45％)
所需的產(chǎn)物，為灰白色粘稠油狀物。
1H NMR(CDCl3)δ1.08(t，J＝7.0Hz，6H)，3.22(b，2H)，3.44(b，2H)，3.79(s，3H)，4.59(s，2H)，6.79-6.81(m，1H)，6.86(d，J＝2.5Hz，1H)，7.16(d，J＝8.5Hz，1H)，7.66(d，J＝3.0Hz，1H)，8.00(d，J＝3.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.30min，方法B)，MS m/z 333(M++H)。
步驟2將N，N-二乙基-4-甲氧基-2-(2-氧代-2-噻唑-2-基-乙基)-苯甲酰胺(405mg，1.22mmol)和乙酸銨(3.0g，38.9mmol)的混合物在140℃的密封管中加熱1h。將熔融的溶液倒入冰凍的水中，過(guò)濾，用水充分洗滌濾餅。經(jīng)干燥的褐色固體物(240mg，76％)未經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一反應(yīng)中。
LC-MS(保留時(shí)間1.24min，方法B)，MS m/z 259(M++H)。
步驟3按照實(shí)施例11、步驟2的相同方法制備1-氯-6-甲氧基-3-噻唑-2-基-異喹啉產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用6-甲氧基-3-噻唑-2-基-2H-異喹啉-1-酮。
1H NMR(CDCl3)δ3.97(s，3H)，7.16(d，J＝4.0Hz，1H)，7.27-7.31(m，1H)，7.46(d，J＝5.0Hz，1H)，7.93(d，J＝5.5Hz，1H)，8.22(d，J＝15.5Hz，1H)，8.39(s，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.66min，方法B)，MS m/z 277(M++H)。
步驟4按照實(shí)施例36、步驟4的相同方法制備化合物37，不同之處在于使用1-氯-6-甲氧基-3-噻唑-2-基-異喹啉。
1H NMR(CD3OD)δ0.97-1.09(m，12H)，1.24-1.29(m，10H)，1.44-1.46(m，1H)，1.87-1.90(m，1H)，2.20-2.26(m，1H)，2.30-2.36(m.1H)，2.65-2.71(m，1H)，2.93-2.96(m，1H)，3.96(s，3H)，4.12-4.27(m，2H)，4.38-4.52(m，2H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.29(d，J＝17.5Hz，1H)，5.69-5.74(m，1H)，5.99(b，1H)，7.14(d，J＝9.0Hz，1H)，7.33(s，1H)，7.66(d，J＝3.5Hz，1H)，7.93(d，J＝3.0Hz，1H)，8.05(s，1H)，8.11(d，J＝9.0Hz，1H)，9.14(b，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.89min，方法B)，MS m/z 797(M++H)。
實(shí)施例38化合物38的制備 化合物38方案1 步驟1將3-羥基-異_唑-5-甲酸甲酯(5.72g，0.04mol)、甲基碘(6.82g，0.044mol)和碳酸銫(39.1g，0.12mol)在DMF(200mL)中的混合物在環(huán)境溫度下攪拌過(guò)夜。用EtOAc(1L)稀釋，過(guò)濾。將濾液依次用水(IL，×2)、1M NaOH和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，真空蒸發(fā)，得到4.80g(76％)所需的產(chǎn)物，為白色固體物。所得的產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。
1H NMR(CDCl3)δ3.92(s，3H)，4.00(s，3H)，6.51(s，1H)；LC-MS(保留時(shí)間0.69min，方法B)，MS m/z 158(M++H)。
步驟2 按照實(shí)施例37、步驟1的相同方法制備N，N-二乙基-4-甲氧基-2-[2-(3-甲氧基-異_唑-5-基)-2-氧代-乙基]-苯甲酰胺產(chǎn)物，不同之處在于使用3-甲氧基-異_唑-5-甲酸甲酯。
LC-MS(保留時(shí)間1.28min，方法B)，MS m/z 347(M++H)。
步驟3 按照實(shí)施例37、步驟2的相同方法制備6-甲氧基-3-(3-甲氧基-異_唑-5-基)-2H-異喹啉-1-酮產(chǎn)物，不同之處在于使用N，N-二乙基-4-甲氧基-2-[2-(3-甲氧基-異_唑-5-基)-2-氧代-乙基]-苯甲酰胺。
1H NMR(DMSO-d6)δ3.89(s，3H)，3.97(s，3H)，7.01(s，1H)，7.14-7.16(m，2H)，7.43(s，1H)，8.13(d，J＝8.5Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.31min，方法B)，MS m/z 273(M++H)。
步驟4 按照實(shí)施例11、步驟2的相同方法制備1-氯-6-甲氧基-3-(3-甲氧基-異_唑-5-基)-異喹啉產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用6-甲氧基-3-(3-甲氧基-異_唑-5-基)-2H-異喹啉-1-酮。
1H NMR(CDCl3)δ3.97(s，3H)，4.04(s，3H)，6.60(s，1H)，7.17(d，J＝2.5Hz，1H)，7.31-7.33(m，1H)，8.02(s，1H)，8.23(d，J＝9.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.73min，方法B)，MS m/z 291，293(M++H)。
步驟5按照實(shí)施例36、步驟4的相同方法制備化合物38，不同之處在于使用1-氯-6-甲氧基-3-(3-甲氧基-異_唑-5-基)-異喹啉。
1H NMR(CD3OD)δ0.99-1.09(m，12H)，1.23-1.28(m，10H)，1.44-1.46(m，1H)，1.87-1.90(m，1H)，2.20-2.26(m，1H)，2.30-2.36(m，1H)，2.65-2.71(m，1H)，2.93-2.96(m，1H)，3.95(s，3H)，4.02(s，3H)，4.13-4.14(m，1H)，4.24-4.26(m，1H)，4.41-4.42(m，1H)，4.52-4.55(m，1H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.29(d，J＝17.0Hz，1H)，5.72-5.79(m，1H)，5.96(b，1H)，6.60(s，1H)，7.15-7.17(m，1H)，7.32(s，1H)，7.80(s，1H)，8.10(d，J＝9.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.95min，方法B)，MS m/z 811(M++H)。
實(shí)施例39化合物39的制備 化合物39步驟1 按照實(shí)施例37、步驟1的相同方法制備N，N-二乙基-4-甲氧基-2-[2-(5-甲氧基-_唑-2-基)-2-氧代-乙基]-苯甲酰胺產(chǎn)物，不同之處在于使用5-甲氧基-_唑-2-甲酸乙酯。
LC-MS(保留時(shí)間1.24min，方法B)，MS m/z 347(M++H)。
步驟2 按照實(shí)施例37、步驟2的相同方法制備6-甲氧基-3-(5-甲氧基-_唑-2-基)-2H-異喹啉-1-酮產(chǎn)物，不同之處在于使用N，N-二乙基-4-甲氧基-2-[2-(5-甲氧基-_唑-2-基)-2-氧代-乙基]-苯甲酰胺。
1H NMR(DMSO-d6)δ3.94(s，3H)，4.01(s，3H)，6.34(s，1H)，6.99(d，J＝2.0Hz，1H)，7.12-7.14(m，1H)，7.25(s，1H)，8.32(d，J＝9.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.22min，方法B)，MS m/z 274(M++H)。
步驟3 按照實(shí)施例11、步驟2的相同方法制備1-氯-6-甲氧基-3-(5-甲氧基-_唑-2-基)-異喹啉產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用6-甲氧基-3-(5-甲氧基-_唑-2-基)-2H-異喹啉-1-酮。
1H NMR(CDCl3)δ3.96(s，3H)，4.00(s，3H)，6.34(s，1H)，7.12(d，J＝2.5Hz，1H)，7.28-7.31(m，1H)，8.13(s，1H)，8.23(d，J＝9.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.58min，方法B)，MS m/z 291，293(M++H)。
步驟4按照實(shí)施例36、步驟4的相同方法制備化合物39，不同之處在于使用1-氯-6-甲氧基-3-(3-甲氧基-異_唑-5-基)-異喹啉。
1H NMR(CD3OD)δ0.99-1.09(m，12H)，1.23-1.28(m，10H)，1.44-1.46(m，1H)，1.87-1.90(m，1H)，2.20-2.26(m，1H)，2.30-2.36(m，1H)，2.65-2.71(m，1H)，2.93-2.96(m，1H)，3.95(s，3H)，4.02(s，3H)，4.13-4.14(m，1H)，4.25(b，1H)，4.41-4.42(m，1H)，4.52-4.55(m，1H)，5.12(d，J＝10.0Hz，1H)，5.29(d，J＝17.0Hz，1H)，5.72-5.79(m，1H)，6.07(b，1H)，6.45(s，1H)，7.15-7.16(m，1H)，7.29(s，1H)，7.85(s，1H)，8.10(d，J＝9.0Hz，1H)，9.11(b，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.75min，方法B)，MS m/z 811(M++H)。
實(shí)施例40化合物40的制備 化合物40方案1 步驟1按照實(shí)施例21、步驟2的相同方法制備1-氯-6-甲氧基-異喹啉2-氧化物產(chǎn)物，不同之處在于使用1-氯-6-甲氧基-異喹啉(實(shí)施例11、步驟2的產(chǎn)物)。
1H NMR(CDCl3)δ4.00(s，3H)，7.14(d，J＝2.5Hz，1H)，7.41-7.43(m，1H)，7.62(d，J＝7.0Hz，1H)，8.15(d，J＝9.5Hz，1H)，8.36(d，J＝7.0Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間0.85min，方法B)，MS m/z 210(M++H)。
步驟2按照實(shí)施例11、步驟2的相同方法制備1，3-二氯-6-甲氧基-異喹啉產(chǎn)物，不同之處在于使用1-氯-6-甲氧基-異喹啉2-氧化物。
1H NMR(CDCl3)δ3.94(s，3H)，6.98(s，1H)，7.25-7.26(m，1H)，7.52 9s，1H)，8.16(d，J＝9.5Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.54min，方法B)，MS m/z 228，230(M++H)。
步驟3按照實(shí)施例24、步驟1的相同方法制備該產(chǎn)物，為泡沫狀物，不同之處在于使用1，3-二氯-6-甲氧基-異喹啉。
1H NMR(CD3OD)δ1.43，1.44(外消旋物，9H)，2.39-2.44(m，1H)，2.68-2.72(m，1H)，3.80-3.90(m，2H)，3.91(s，3H)，4.79-4.82(m，1H)，5.71(b，1H)，7.10-7.14(m，2H)，7.26(s，1H)，7.99-8.01(m，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.79min，方法B)，MS m/z 422(M++H)。
步驟4 按照實(shí)施例11、步驟4的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例40、步驟3的產(chǎn)物。
LC-MS(保留時(shí)間1.83min，方法B)，MS m/z 635(M++H)。
步驟5 按照實(shí)施例11、步驟5的相同方法制備該產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用實(shí)施例40、步驟4的產(chǎn)物。
LC-MS(保留時(shí)間1.36min，方法B)，MS m/z 535(M++H)。
步驟6按照實(shí)施例11、步驟6的相同方法制備化合物40，為白色固體物，不同之處在于使用實(shí)施例40、步驟5的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ1.07-1.11(m，12H)，1.26-1.30(m，10H)，1.46-1.48(m，1H)，1.87-1.91(m，1H)，2.21-2.34(m，2H)，2.62-2.66(m，1H)，2.94-2.99(m，1H)，3.95(s，3H)，4.06-4.11(m，1H)，4.26-4.28(m，1H)，4.46-4.56(m，2H)，5.15(d，J＝10.0Hz，1H)，5.29(d，J＝17.0Hz，1H)，5.72-5.79(m，1H)，5.89(b，1H)，6.63(d，J＝9.0Hz，1H)，7.08-7.09(m，1H)，7.18(s，1H)，7.34(s，1H)，8.08(d，J＝9.5Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.99min，方法B)，MS m/z 748(M++H)。
實(shí)施例41化合物41的制備 化合物41
步驟1 按照實(shí)施例30、步驟1的相同方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例40、步驟3的產(chǎn)物。
LC-MS(保留時(shí)間1.85min，方法B)，MS m/z 455(M++H)。
步驟2 按照實(shí)施例11、步驟4的相同方法制備該產(chǎn)物，為泡沫狀物，不同之處在于使用實(shí)施例41、步驟1的產(chǎn)物。
LC-MS(保留時(shí)間1.88min，方法B)，MS m/z 667(M++H)。
步驟3 按照實(shí)施例11、步驟5的相同方法制備該產(chǎn)物，為白色固體物，不同之處在于使用實(shí)施例41、步驟2的產(chǎn)物。
LC-MS(保留時(shí)間1.38min，方法B)，MS m/z 567(M++H)。
步驟4按照實(shí)施例11、步驟6的相同方法制備化合物41，為白色固體物，不同之處在于使用實(shí)施例41、步驟3的產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD)δ0.99-1.04(m，12H)，1.22-1.31(m，10H)，1.43-1.45(m，1H)，1.87-1.89(m，1H)，2.22-2.24(m，1H)，2.30-2.34(m，1H)，2.65-2.68(m，1H)，2.93-2.96(m，1H)，3.92(s，3H)，4.11-4.14(m，1H)，4.28-4.30(m，1H)，4.38-4.42(m，1H)，4.53-4.55(m，1H)，5.12(d，J＝10.0Hz，1H)，5.29(d，J＝18.0Hz，1H)，5.72-5.77(m，1H)，5.99(b，1H)，6.61(d，J＝5.0Hz，1H)，6.98(s，1H)，6.99-7.02(m，1H)，7.17(s，1H)，7.44(s，1H)，7.57(d，J＝5.0Hz，1H)，8.03(d，J＝10.0Hz，1H)，8.14(s，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.92min，方法B)，MS m/z 780(M++H)。
實(shí)施例42化合物42的制備按照制備實(shí)施例11的化合物11的方法制備題述產(chǎn)物，不同之處在于使用6-乙氧基肉桂酸代替6-甲氧基肉桂酸作為用于P2組件的原料。
化合物421H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 0.98-1.09(m，15H)，1.24-1.31(m，10H)，1.42-1.46(m，1H)，1.85-1.90(m，1H)，2.19-2.32(m，2H)，2.57-2.63(m，1H)，2.91-2.97(m，1H)，4.03-4.09(m，1H)，4.17(q，J＝7.0Hz，2H)，4.42(d，J＝11.3Hz，1H)，4.49-4.54(m，1H)，5.12(d，J＝17.4Hz，1H)，5.72-5.78(m，1H)，5.83(s，1H)，7.07-7.10(M，1H)，7.15(s，1H)，7.22(d，J＝5.8Hz，1H)，7.87(d，J＝5.8Hz，1H)，8.08(d，J＝8.8Hz，1H)；MS(M+H)+728.
部分C實(shí)施例45化合物45的制備 P1為(1R，2S)和(1S，2R)1∶1的混合物化合物45
方案1 步驟1向裝于中壓燒瓶(Chemglass)中的2-溴-5-甲氧基苯甲酸(1.68g，7.27mmol)的DMF(50mL)溶液內(nèi)加入芐脒(1.25g，8.00mmol)、碳酸鉀(6.0g，43.6mmol)和銅粉(336mg，1.45mmol)。將反應(yīng)混合物在180℃下加熱1h。真空抽濾除去銅和過(guò)量的碳酸鉀，并用甲醇洗滌。濃縮濾液并將所得的粗產(chǎn)物經(jīng)快速柱層析純化(SiO2，5％甲醇/DCM)，得到淺綠色固體物(1.55g，收率84％)1H NMR(DMSO-d6)δ3.84(s，3H)，7.26(d，J＝7.8Hz，1H)，7.46(br s，5H)，7.57(s，1H)，8.38(br s，1H)；MS m/z(MH+)253.
步驟2向0℃的Boc-順-羥基脯氨酸-OMe(2.0g，8.15mmol)和實(shí)施例45、步驟1的產(chǎn)物(2.26g，8.97mmol)在THF(82mL)中的漿狀物內(nèi)加入三苯基膦和偶氮二甲酸二異丙酯(1.98g，8.97mmol)。在室溫下攪拌17h后，將反應(yīng)混合物用EtOAc(100mL)稀釋并用H2O(50mL)洗滌。分離出水層并用EtOAc(2×50mL)反萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮，得到粘稠油狀物。將所述油狀物再次溶于盡可能少量的乙酸乙酯中，加入己烷以沉淀出大部分的Ph3PO副產(chǎn)物。抽濾除去Ph3PO并濃縮濾液。將所得的粘稠的油狀物經(jīng)快速柱層析純化(SiO2，4∶1己烷∶乙酸乙酯)，得到白色固體產(chǎn)物(1.76g，收率45％)1H NMR(60/40外消旋物，CDCl3)δ1.47(s，9H)，2.49-2.55(m，1H)，2.73-2.83(m，1H)，3.80(s，1.8H)，3.81(s，1.2H)，3.96(s，3H)，4.03-4.09(m，1H)，4.54(t，J＝8.0Hz，0.6H)，4.66(t，J＝7.8Hz)，4.96-5.06(m，1H)，5.97(br s，0.6H)，6.04(br s，0.4H)，7.33(dd，J＝6.1，2.7Hz，1H)，7.46-7.51(m，4H)，7.91(d，J＝9.2Hz，1H)，8.49(t，J＝8.5Hz，2H)；13C NMR(外消旋物，CDCl3)δ21.7，22.0，28.3，28.4，35.8，36.8，52.3，52.4，52.6，55.8，55.9，57.9，58.3，74.5，74.9，80.6，101.2，101.3，115.7，125.8，126.0，128.1，128.5，129.7，130.2，137.9，147.8，153.8，157.7，158.0，158.0，164.8，173.1，173.3；MS m/z(MH+)480.
方案2 步驟3將實(shí)施例45、步驟2的產(chǎn)物(760.0mg，1.59mmol)溶于50％TFA的DCM溶液中并在室溫下攪拌2h。濃縮溶劑，將所得的棕色粘稠油狀物真空干燥過(guò)夜。產(chǎn)物直接用于下一步反應(yīng)。
步驟4向?qū)嵤├?5、步驟3的棕色粘稠油狀產(chǎn)物(963mg，1.59mmol)和DIPEA(1.23g，9.54mmol)的DCM(11mL)溶液中加入N-BOCL-tBuGly(440mg，1.90mmol)、HBTU(902mg，2.38mmol)和HOBt(364mg，2.38mmol)。在室溫下攪拌14h后，濃縮溶劑和過(guò)量的DIPEA，將所得的棕色粘稠油狀物經(jīng)快速柱層析純化(SiO2，4∶1己烷∶乙酸乙酯)，得到白色固體物(0.922mg，兩步收率98％)1HNMR(CDCl3/MeOD)δ0.94(s，9H)，1.15(s，9H)，2.38-2.42(m，1H)，2.60-2.73(m，1H)，3.61(s，3H)，3.83(s，3H)，4.08-4.17(m，2H)，4.25(d，J＝11.5Hz，1H)，4.69(t，J＝8.0Hz，1H)，5.99(br s，1H)，7.13(s，1H)，7.38(s，5H)，7.80(d，J＝9.0Hz，1H)，8.32(d，J＝5.5Hz，1h)；13C NMR(CDCl3/MeOD)δ29.6，31.4，31.6，33.04，38.2，39.0，55.8，56.9，59.2，61.5，62.1，78.3，83.1，105.0，119.0，129.4，131.5，131.9，132.6，133.8，141.2，151.0，161.4，161.6，168.2，175.2，175.7；MS m/z(MH+)593.
步驟5向?qū)嵤├?5、步驟4的產(chǎn)物(409mg，0.69mmol)的THF(10mL)溶液中加入1N NaOH(2mL)。在室溫下攪拌19h后，用濃鹽酸將反應(yīng)物酸化至約pH約為5，用DCM萃取(3×50mL)。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮，得到黃色固體產(chǎn)物(370mg，收率92％)，真空干燥后，該產(chǎn)物直接用于下一步反應(yīng)中1H NMR(CDCl3)δ1.05(s，9H)，1.25(s，9H)，2.76-2.83(m，2H)，3.94(s，3H)，4.23-4.27(m，2H)，4.41(d，J＝11.6Hz，1H)，4.92(t，J＝7.6Hz，1H)，5.20(d，J＝8.9Hz，1H)，6.08(br s，1H)，7.31(s，1H)，7.46-7.50(m，5H)，7.93(d，J＝9.15Hz，1H)，8.51(d，J＝7.3Hz，2H)；MS m/z(MH+)579.
方案3 步驟6向N-Boc-乙烯基環(huán)丙烷甲酸(1R，2S/1S，2R 1∶1混合物)(1.01g，4.46mmol)在THF(20mL)和DMSO(2mL)中的溶液內(nèi)加入CDI(1.08g，6.69mmol)和DMAP(817mg，6.69mmol)。在70℃下攪拌1h后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并用異丙基磺酰胺(1.1g，8.92mmol)和DBU(1.36g，8.92mmol)處理。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16h，濃縮并經(jīng)快速柱層析純化(SiO2，5％甲醇/DCM)，得到棕色粘稠油狀物(1.4g，98％收率)1H NMR(甲醇-d4)δ1.25(m，1H)，1.33(d，J＝6.7Hz，3H)，1.36(d，J＝6.7Hz，3H)，1.45(s，9H)，1.84(dd，J＝7.6，5.2Hz，1H)，2.16(d，J＝7.6Hz，1H)，3.58(br s，1H)，5.08(d，J＝11.6Hz，1H)，5.27(d，J＝15.6Hz，1H)，5.58-5.66(m，1H)；MS m/z(MH+)332.
步驟7將實(shí)施例45、步驟6的產(chǎn)物(113mg，0.34mmol)用50％三氟乙酸的DCM(10mL)溶液處理，并在室溫下攪拌1.4h。真空除去溶劑和過(guò)量的三氟乙酸。將所得的棕色粘稠油狀物真空干燥(1.3g，收率99％)，未經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用1H NMR(DMSO-d6)δ1.24(d，J＝6.7Hz，3H)，1.26(d，J＝6.7Hz，3H)，1.54(dd，J＝9.6，6.6Hz，1H)，1.99(t，J＝6.9Hz，1H)，2.24(d，J＝8.5Hz，1H)，3.58-3.63(m，1H)，5.18(d，J＝10.4Hz，1H)，5.33(d，J＝17.1Hz，1H)，5.61-5.69(m，1H)，8.83(br s，3H)；13C NMR(DMSO-d6)δ15.2，15.9，16.5，29.9，41.6，52.1，116.0，118.9，132.0，158.2，167.3；MS m/z(MH+)233.
步驟8向?qū)嵤├?5、步驟5的產(chǎn)物(117mg，0.338mmol)和DIPEA(174mg，1.35mmol)在DCM(5mL)中的混合物內(nèi)加入HBTU(128mg，0.338mmol)、HOBt(52mg，0.338mmol)和實(shí)施例45步驟7的產(chǎn)物(130mg，0.225mmol)。在室溫下攪拌16h后，將該混合物濃縮并將所得的棕色粘稠油狀物經(jīng)快速柱層析純化(SiO2，1∶3己烷∶乙酸乙酯，接著用95∶5 DCM∶甲醇)，得到類白色固體產(chǎn)物(150mg，收率84％)。終產(chǎn)物化合物45為各種異構(gòu)體的混合物；不同之處在于分子的P1乙烯基環(huán)丙基部分(1R，2S/1S，2R 1∶1混合物)1H NMR(甲醇-d4)δ0.92(br s，2H)，1.03(s，9H)，1.17(s，9H)，1.27-1.38(m，9H)，1.42-1.46(m，1H)，1.83(dd，J＝8.1，5.3Hz，0.4H)，1.90(dd，J＝7.9，5.5Hz，0.6H)，2.24-2.31(m，1H)，2.37-2.45(m，1H)，2.67-2.75(m，1H)，3.73-3.79(m，1H)，3.90(s，3H)，4.21(dd，J＝9.3，6.0Hz，2H)，4.48(d，J＝11.3Hz，1H)，4.61(q，J＝8.9Hz，1H)，5.14(t，J＝9.0Hz，1H)，5.33(t，J＝17.9Hz，1H)，5.70-5.76(m，1H)，6.06(d，J＝11.9Hz，1H)，6.61(d，J＝8.9Hz，1H)，7.34(d，J＝2.8Hz，1H)，7.49(br s，5H)，7.87(d，J＝8.9Hz，1H)，8.46(d，J＝4.3Hz，2H)；13C NMR(甲醇-d4)δ15.7，16.1，16.5，16.8，23.9，27.1，28.6，35.8，36.0，36.2，36.3，36.4，42.6，42.8，54.7，54.8，55.5，56.4，61.1，61.2，80.5，102.9，117.0，118.8，118.9，126.8，129.4，129.6，130.2，131.5，134.4，139.2，148.8，158.0，159.3，159.8，166.3，171.1，175.1，184.3；MS m/z(MH+)793.
實(shí)施例46化合物46的制備 P1為(1R，2S)和(1S，2R)的1∶1混合物化合物46按照實(shí)施例45的步驟1至5和步驟8的方法制備化合物46，不同之處在于進(jìn)行如下修改步驟1修改使用2-溴-4，5-二甲氧基苯甲酸和環(huán)丙基胍鹽酸鹽作為原料。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H MR(DMSO-d6)δ0.97-1.01(m，2H)，1.03-1.06(m，2H)，1.90-1.94(m，1H)，3.84(s，3H)，3.87(s，3H)，6.93(s，1H)，7.37(s，3H)，12.28(s，1H)；13C NMR(DMSO-d6)δ9.03，13.17，55.47，55.73，104.81，107.27，113.26，145.16，147.48，154.44，157.21，160.89；MS m/z(MH+)247.
步驟2修改使用實(shí)施例46、步驟1的產(chǎn)物作為原料代替實(shí)施例45、步驟1的產(chǎn)物。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(CDCl3)δ1.00-1.04(m，2H)，1.07-1.11(m，2H)，1.43(s，5.4H)，1.46(s，3.6H)，2.17-2.21(m，1H)，2.37-2.43(m，1H)，2.62-2.69(m，1H)，3.75(s，1.8H)，3.78(s，1.2H)，3.92(d，J＝2.8Hz，1H)，4.00(s，3.6H)，4.01(s，2.4H)，4.48(t，J＝8.0Hz，0.6H)，4.59(t，J＝7.6Hz，0.4H)，5.7(br s，0.6H)，5.74(br s，0.4H)，7.18(s，1H)，7.20(s，1H)；13C NMR(CDCl3)δ9.6，9.7，18.1，28.3，28.4，35.8，36.7，52.2，52.4，56.3，57.8，58.2，74.0，74.5，80.5，80.6，101.0，101.1，106.3，108.6，148.8，149.1，153.8，155.4，164.4，165.9，172.9，173.2；LC-MS m/z(MH+)474.
步驟3和4使用實(shí)施例46、步驟2的產(chǎn)物作為原料代替實(shí)施例45、步驟2的產(chǎn)物。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(甲醇-d4)δ1.04(s，9H)，1.08-1.21(m，4H)，1.14(s，9H)，2.17-2.21(m，1H)，2.39-2.41(m，1H)，2.74-2.77(m，1H)，3.77(s，3H)，3.92(s，3H)，3.98(m，3H)，4.09(dd，J＝11.4，3.8Hz，1H)，4.17(d，J＝8.9Hz，1H)，4.42(d，J＝11.3Hz，1H)，4.76(t，J＝8.2Hz，1H)，5.81(br s，1H)，6.43(d，J＝8.6Hz，1H)，7.14(d，J＝6.1Hz，1H)，7.27(d，J＝5.8Hz，1H)；13C NMR(甲醇-d4)δ10.0，10.3，18.6，26.9，28.5，28.8，35.8，36.1，38.9，52.8，54.9，56.7，59.6，60.5，76.6，80.4，102.7，106.2，109.9，149.8，150.7，157.6，166.0，167.3，173.5，173.6；MS m/z(MH+)587.
步驟5使用實(shí)施例46、步驟4的產(chǎn)物作為原料代替實(shí)施例45、步驟4的產(chǎn)物。
產(chǎn)物
數(shù)據(jù)1H NMR(甲醇-d4)δ1.03(s，9H)，1.13(s，9H)，1.20-1.23(m，4H)，2.15-2.19(m，1H)，2.40-2.45(m，1H)，2.70-2.76(m，1H)，3.90(s，3H)，3.96(s，3H)，4.08(dd，J＝11.4，3.8Hz，1H)，4.17(d，J＝5.8Hz，1H)，4.37(d，J＝11.3Hz，1H)，4.71(t，J＝8.1Hz，1H)，5.77(br s，1H)，7.09(s，1H)，7.20(s，1H)；13C NMR(甲醇-d4)δ10.2，10.5，18.6，26.9，28.5，28.8，36.0，36.3，54.9，56.8，59.7，60.4，76.8，80.4，102.6，105.9，109.9，126.9，127.9，149.3，150.8，157.65，157.8，166.1，167.3，173.3，175.1；MS m/z(MH+)573.
步驟8使用實(shí)施例46、步驟5的產(chǎn)物作為原料代替實(shí)施例45、步驟5的產(chǎn)物。終產(chǎn)物化合物46為各種異構(gòu)體的混合物；不同之處在于分子的P1乙烯基環(huán)丙基部分(1R，2S/1S，2R 1∶1混合物)。
產(chǎn)物 P1為(1R，2S)和(1S，2R)的1∶1混合物化合物46
數(shù)據(jù)1H NMR(甲醇-d4)δ1.03(s，9H)，1.05-1.09(m，4H)，1.16(s，4.5H)，1.17(s，4.5H)，1.19-1.22(m，11H)，1.31(d，J＝6.7Hz，2H)，1.33-1.38(m，7H)，1.18-1.89(m，1H)，2.15-2.20(m，2H)，2.35-2.44(m，1H)，3.23(q，J＝7.4Hz，1H)，3.70-3.75(m，1H)，3.91(s，3H)，3.98(s，3H)，4.08-4.13(m，2H)，4.16(dd，J＝8.9，3.1Hz，1H)，4.38(t，J＝13.1Hz，1H)，4.58-4.62(m，1H)，4.06(m，1H)，5.29(t，J＝15.2Hz，1H)，5.83(br s，1H)，7.15(s，1H)，7.27(d，J＝4.3Hz，1H)；MS m/z(MH+)787.
實(shí)施例47化合物47的制備 化合物47按照制備實(shí)施例45的化合物45的類似步驟制備化合物47，代替原料鄰-溴苯甲酸的是N-(1R-氨基-2S-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)環(huán)丙烷磺酰胺鹽酸鹽?；衔?7MH+＝761。
實(shí)施例48化合物48的制備 化合物48
按照實(shí)施例45的步驟1至5和步驟8的方法制備化合物48，不同之處在于進(jìn)行如下修改步驟1修改使用鹽酸乙脒和2-溴-5-甲氧基苯甲酸作為原料。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(DMSO)δ2.31(s，3H)，3.85(s，3H)，7.36(d，J＝6.2Hz，1H)，7.37(s，1H)，7.51(d，J＝7.8Hz，1H)，12.15(s，1H)；13C NMR(DMSO)δ21.11，55.41，105.57，121.22，123.59，128.12，143.34，151.68，157.00，161.45；LC-MS m/e(MH+)191.
步驟2修改使用實(shí)施例48、步驟1的產(chǎn)物作為原料代替實(shí)施例45、步驟1的產(chǎn)物。
產(chǎn)物
數(shù)據(jù)1H NMR(CDCl3)δ1.43(s，5.4H)，1.45(s，3.6H)，2.38-2.45(m，1H)，2.62-2.71(m，1H)，2.66(s，1.8H)，2.68(s，1.2H)，3.77(1.8H)，3.79(s，1.2H)，3.92(s，3H)，3.93-3.98(m，2H)，4.49(t，J＝8.0Hz，0.6H)，4.61(t，J＝7.8Hz，0.4H)，5.82(t，J＝2.1Hz，0.6H)，5.89(t，J＝2.3Hz，0.4H)，7.26(dd，J＝4.7，3.2Hz，1H)，7.42(dd，J＝6.3，2.8Hz，1H)，7.75(d，J＝9.15Hz，1H)；13C NMR(CDCl3)δ26.1，28.3，28.4，35.8，36.7，52.2，52.2，52.4，52.5，55.755.8，57.9，58.2，74.1，74.7，80.6，101.0，101.2，114.9，125.6，125.9，128.6，147.3，153.8，154.5，157.6，157.6，161.2，164.6，173.0，173.3；LC-MS m/e(MH+)418.
步驟3和4修改使用實(shí)施例48、步驟2的產(chǎn)物作為原料代替實(shí)施例45、步驟2的產(chǎn)物。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(MeOD)δ1.03(s，9H)，1.07(s，9H)，2.38-2.42(m，1H)，2.68(s，3H)，2.80(q，J＝7.8Hz，1H)，3.76(s，3H)，3.89(s，3H)，4.07(dd，J＝11.9，3.4Hz，1H)，4.13(br s，1H)，4.55(d，J＝12.2Hz，1H)，4.78(t，J＝8.7Hz，1H)，5.93(s，1H)，7.37(d，J＝2.75Hz，1H)，7.48-7.51(m，2H)，7.70(d，J＝5.7Hz，1H)；13C NMR(MeOD)δ25.6，26.9，28.4，28.8，35.9，52.8，55.0，56.4，59.7，60.6，77.2，80.4，102.9，111.6，116.5，127.0，128.4，147.5，162.7，166.4，173.6；LC-MS m/e(MH+)531。
步驟5修改使用實(shí)施例48、步驟4的產(chǎn)物作為原料代替實(shí)施例45、步驟4的產(chǎn)物。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(MeOD)δ1.03(s，9H)，1.08(s，9H)，2.41-2.46(m，1H)，2.68(s，3H)，2.81(q，J＝8.1Hz，1H)，3.89(s，3H)，4.07(dd，J＝11.8，3.2Hz，1H)，4.18(d，J＝5.5Hz，1H)，4.52(d，＝11.9Hz，1H)，4.74(t，J＝8.7Hz，1H)，5.93(br s，1H)，7.37(d，J＝2，81Hz，1H)，7.49(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)，7.71(d，J＝9.2Hz，1H)；13C NMR(MeOD)δ25.7，26.9，28.5，36.1，55.0，56.4，59.7，60.5，77.1，80.4，103.0，116.5，127.0，l28.5，147.7，157.8，159.6，162.7，166.4，173.5，174.9；LC-MS m/e(MH+)517.
實(shí)施例48化合物48的制備 化合物48
步驟8向?qū)嵤├?8、步驟5的產(chǎn)物(45.8mg，0.089mmol)、N-(1R-氨基-2S-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)-環(huán)丙烷磺酰胺鹽酸鹽(21.0mg，0.089mmol)和DIEA(34.5mg，0.267mmol)的DCM(1mL)溶液中加入HATU(44.0mg，0.116mmol)。室溫下攪拌過(guò)夜后，將反應(yīng)混合物用5％碳酸氫鈉水溶液(1mL)洗滌。水層用2×2mL DCM萃取。有機(jī)層用5％檸檬酸水溶液(1mL)和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，濃縮并經(jīng)反相制備型HPLC純化。該純化步驟脫去了分子的P3叔-亮氨酸部分的N-BOC保護(hù)基1H NMR(MeOD)δ1.07-1.12(m，2H)1.14(s，2H)1.14-1.16(m，2H)1.17(s，9H)1.20-1.30(m，3H)1.45(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)1.56(s，1H)1.92(dd，J＝8.20，5.60Hz，1H)2.25-2.31(m，1H)2.39-2.45(m，1H)2.73(m，1H)2.76(s，3H)2.93-2.97(m，1H)3.94(s，1H)3.96(s，3H)4.07(s，1H)4.21(d，J＝3.97Hz，0.4H)4.23(d，J＝3.97Hz，0.6H)4.31(m，1H)4.73(dd，J＝10.38，7.02Hz，1H)5.15(dd，J＝10.38，1.52Hz，1H)5.32(dd，J＝17.1，1.52Hz，1H)，5.71-5.78(m，1H)6.11(t，J＝3.51Hz，1H)7.46(d，J＝2.75Hz，1H)7.67(d，J＝3.06Hz，0.4H)7.69(d，J＝3.05Hz，0.6H)7.82(s，0.6H)7.84(s，0.4H).
實(shí)施例49化合物49的制備 化合物49按照制備化合物48的相同方法制備化合物49，不同之處在于使用實(shí)施例46、步驟5的產(chǎn)物和N-(1R-氨基-2S-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)-環(huán)丙烷磺酰胺鹽酸鹽作為原料。制備型HPLC純化步驟脫去了分子的P3叔-亮氨酸部分的N-BOC保護(hù)基1H NMR(MeOD)δ1.09(m，2H)1.14(d，J＝3.97Hz，2H)1.17(s，9H)1.25(m，3H)1.37(m，3H)1.44(dd，J＝9.31，5.65Hz，2H)1.57(s，1H)1.92(dd，J＝8.09，5.65Hz，1H)2.28(dd，J＝17.70，8.55Hz，1H) 2.32(m，1H)2.68(dd，J＝14.19，7.78Hz，1H)2.95(m，1H)3.98(s，3H)4.06(s，3H)4.08(s，1H)4.22(d，J＝2.75Hz，1H)4.70(dd，J＝9.77，7.32Hz，1H)5.15(dd，J＝10.38，1.53Hz，1H)5.32(dd，J＝17.40，1.22Hz，1H)5.74(m，1H)6.04(m，1H)7.24(s，1H)7.37(s，1H)實(shí)施例50化合物50的制備 化合物50按照制備化合物48的相同方法制備化合物50，不同之處在于使用實(shí)施例45、步驟5的產(chǎn)物和N-(1R-氨基-2S-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)-環(huán)丙烷磺酰胺鹽酸鹽作為原料。制備型HPLC純化步驟脫去了分子的P3叔-亮氨酸部分的N-BOC保護(hù)基1H NMR(MeOD)δ1.10(m，2H)1.14(s，1H)1.15(d，J＝3.36Hz，1H)1.17(d，J＝3.05Hz，9H)1.22(m，1H)1.27(m，2H)1.46(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)1.56(s，1H)1.93(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)2.29(q，J＝8.55Hz，1H)2.48(m，1H)2.78(dd，J＝13.89，8.09Hz，1H)2.97(m，1H)3.96(s，2H)4.07(s，1H)4.32(d，J＝2.14Hz，2H)4.76(d，J＝7.02Hz，1H)4.78(m，1H)4.86(d，J＝3.05Hz，1H)5.32(dd，7＝17.09，1.22Hz，1H)5.75(m，1H)6.24(d，J＝2.44Hz，1H)7.45(d，J＝2.75Hz，1H)7.52(m，3H)7.61(dd，J＝9.16，2.75Hz，1H)7.96(d，J＝9.16Hz，1H).
實(shí)施例51化合物51的制備 P1為(1R，2S)和(1S，2R)的1∶1混合物化合物51按照實(shí)施例45的步驟1至5和步驟8的方法制備化合物51，不同之處在于進(jìn)行如下修改步驟1修改使用2-溴-4，5-二甲氧基苯甲酸和三氟脒作為原料。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(DMSO)δ3.92(s，3H)，3.94(s，3H)，7.33(s，1H)，7.50(s，1H)，13.40(br s，1H)；13C NMR(DMSO)δ55.8，56.1，104.9，108.7，150.2，155.0；LC-MS m/e(MH+)275.
步驟2修改使用實(shí)施例51、步驟1的產(chǎn)物作為原料代替實(shí)施例45、步驟1的產(chǎn)物。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(CDCl3)δ1.42(s，3.6H)，1.44(s，5.4H)，2.42-2.49(m，1H)，2.67-2.73(m，1H)，3.37(s，1.2H)，3.78(s，1.8H)，3.97(t，J＝6.5Hz，1H)，4.02(s，2.4H)，4.04(s，3.6H)，4.48(t，J＝7.9Hz，0.6H)，4.60(t，J＝7.7Hz，0.4H)，5.86(br s，0.6H)，5.90(br s，0.4H)，7.27-7.29(m，1H)，7.38-7.44(m，1H)；13C NMR(CDCl3)δ8.2，28.3，35.7，36.7，52.1，52.2，52.4，56.5，57.8，58.2，75.5，76.0，80.7，100.8，107.6，111.0，119.7，148.2，150.2，151.4，153.8，154.5，156.4，165.1，172.7，173.0；LC-MSm/e(MH+)502.
步驟3和4修改使用實(shí)施例51、步驟2的產(chǎn)物作為原料代替實(shí)施例45、步驟2的產(chǎn)物。
產(chǎn)物
數(shù)據(jù)1H NMR(MeOD)δ1.03(s，9H)，1.08(s，9H)，2.41-2.45(m，1H)，2.80-2.84(m，1H)，3.76(s，3H)，3.96(s，3H)，4.00(s，3H)，4.10-4.14(m，2H)，4.52(d，J＝11.6Hz，1H)，4.80(t，J＝8.7Hz，1H)，5.92(br s，1H)，7.35(br s，2H)；13C NMR(MeOD)□26.9，28.4，28.8，35.7，36.0，52.8，54.8，56.9，59.6，60.7，77.9，80.3，102.2，107.9，112.4，120.3，149.3，153.2，157.8，158.3，173.5；LC-MS m/e(MH+)615.
步驟5修改使用實(shí)施例51、步驟4的產(chǎn)物作為原料代替實(shí)施例45、步驟4的產(chǎn)物。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(MeOD)δ1.03(s，9H)，1.09(s，9H)，2.44-2.49(m，1H)，2.80-2.84(m，1H)，3.97(s，3H)，4.01(s，3H)，4.10-4.24(m，3H)，4.50(d，J＝11.9Hz，1H)，4.76(t，J＝7.9Hz，1H)，5.93(br s，1H)，7.36(br s，2H)；13C NMR(MeOD)δ26.9，28.4，28.8，36.0，36.1，54.8，56.9，57.0，60.6，77.9，80.3，102.3，108.0，112.5，120.3，149.3，151.3，153.2，158.2，158.3，166.7，173.5；LC-MS m/e(MH+)601.
步驟8修改使用實(shí)施例51、步驟5的產(chǎn)物作為原料代替實(shí)施例45、步驟5的產(chǎn)物。終產(chǎn)物化合物51為各種異構(gòu)體的混合物；不同之處在于分子的P1乙烯基環(huán)丙基部分(1R，2S/1S，2R 1∶1混合物)。
產(chǎn)物 P1為(1R，2S)和(1S，2R)的1∶1混合物化合物51數(shù)據(jù)1H NMR(DMSO)δ0.23(s，4.5H)，0.23(s，4.5H)，0.35(s，4.5H)，0.36(s，4.5H)，0.45-0.59(m，8H)，0.63-0.66(m，1H)，1.04(dd，J＝8.2，5.2Hz，1H)，1.10(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，1.47-1.53(m，1H)，1.58-1.61(m，1H)，1.87-1.90(m，1H)，2.95-3.01(m，1H)，3.17(s，1.5H)，3.18(s，1.5H)，3.22(s，3H)，3.37(br s，2H)，3.68(q，J＝5.9Hz，1H)，3.82(q，J＝8.6Hz，1H)，4.33-4.37(m，1H)，4.54(t，J＝16.5Hz，1H)，4.93(q，J＝8.9Hz，1H)，5.17(d，J＝15.9Hz，1H)，6.53(s，1H)，6.58(s，1H)；13CNMR(DMSO)δ12.8，13.2，13.7，13.9，19.5，20.6，21.1，24.3，25.6，32.9，33.1，33.4，33.6，36.1，39.7，39.9，51.8，51.9，52.4，54.0，54.2，57.7，57.7，58.1，58.3，75.1，75.3，77.5，84.1，99.2，105.2，107.9，109.5，116.0，116.1，118.7，123.9，127.4，131.5，146.5，148.6，150.3，155.1，155.5，163.7，164.7，168.2，168.3，170.7，172.2；LC-MS m/e(MH+)815.
實(shí)施例52化合物52的制備 化合物52按照制備化合物48的相同方法制備化合物52，不同之處在于使用實(shí)施例51、步驟5的產(chǎn)物和N-(1R-氨基-2S-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)-環(huán)丙烷磺酰胺鹽酸鹽作為原料。制備型HPLC純化步驟脫去了分子的P3叔-亮氨酸部分的N-BOC保護(hù)基1H NMR(MeOD)δ1.11(m，3H)1.17(s，9H)1.25(m，3H)1.46(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)1.92(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)2.28(q，J＝8.95Hz，1H)2.42(m，1H)2.72(dd，J＝14.19，7.17Hz，1H)2.96(m，1H)4.01(s，3H)4.04(m，5H)4.24(m，2H)4.73(dd，J＝10.22，7.17Hz，1H)5.15(dd，J＝10.53，1.37Hz，1H)5.32(d，J＝17.09Hz，1H)5.75(m，1H)6.07(s，1H)7.41(s，1H)7.47(s，1H).
實(shí)施例53化合物53的制備 化合物53
方案1 步驟1向(1R，2S/1S，2R 1∶1的混合物)N-(1-氨基-2-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)-環(huán)丙烷磺酰胺三氟乙酸鹽(626mg，1.82mmol)的DCM(17mL)溶液中加入DIEA(555mg，4.29mmol)的DCM(17mL)溶液、HATU(754mg，1.98mmol)和(2S，4R)Fmoc-4-氨基-1-boc-吡咯烷-2-甲酸(747mg，1.65mmol)。在室溫下攪拌24h后，將混合物用1N HCl(10mL)、5％碳酸氫鈉水溶液(4mL)洗滌。各水層用DCM(25mL)萃取。合并的DCM經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。所得的棕色粘稠油狀物經(jīng)快速柱層析純化(SiO2，95∶5 DCM∶甲醇)，得到黃色固體物(822mg，收率75％)1H NMR(DMSO-d6)δ1.04-1.09(m，3H)，1.15-1.27(m，4H)，1.38-1.44(m，7H)，1.47(s，9H)，1.84(dd，J＝8.2，5.2Hz，1H)，2.01-2.30(m，4H)，2.90-2.98(m，1H)，3.64-3.71(m，1H)，4.16-4.22(m，4H)，4.39(bs，2H)，5.13(dd，J＝10.7，0.9Hz，1H)，3.31(d，J＝17.1Hz，1H)，5.72-5.79(m，1H)，7.31(t，J＝7.3Hz，3H)，7.38(t，J＝7.5Hz，3H)，7.64(d，J＝7.02Hz，3H)，7.79(d，J＝7.63Hz，3H)；LC-MSm/e(Na+MH+)687.
步驟2將實(shí)施例53、步驟1的產(chǎn)物(500mg，0.752mmol)用50％TFA的DCM(10mL)溶液處理。在室溫下攪拌0.5h后，將所得的棕色反應(yīng)混合物濃縮，得到棕色固體物(489mg，收率84％)1H NMR(DMSO-d6)δ1.03-1.19(m，4H)，1.24-1.26(m，1H)，1.35(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.91-1.96(m，1H)，2.22-2.30(m，1H)，2.40(bs，1H)，2.93-2.98(m，1H)，3.60(bs，1H)，4.21(t，J＝5.6Hz，2H)，4.47(bs，3H)，5.17(d，J＝9.2Hz，1H)，5.32(d，J＝17.1Hz，1H)，5.64-5.67(m，1H)，7.31(t，J＝7.3Hz，3H)，7.39(t，J＝7.5Hz，3H)，7.63(d，J＝7.3Hz，2H)，7.80(d，J＝7.3Hz，2H)；(LC-MS m/e (MH+)565.
方案2 步驟3向?qū)嵤├?3、步驟2的產(chǎn)物(260mg，0.383mmol)的DCM(4mL)溶液中加入DIPEA(218mg，1.69mmol)、HATU(165mg，0.422mmol)和N-BOC L-tBuGly(100mg，0.422mmol)。在室溫下攪拌16h后，將反應(yīng)混合物用H2O(3mL)稀釋，用1N HCl酸化至pH＝1。水層用DCM(2×15mL)萃取。將合并的有機(jī)層用5％碳酸氫鈉(3mL)和鹽水(5mL)洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。所得的棕色粘稠油狀物經(jīng)快速柱層析純化(SiO2，95∶5 DCM∶甲醇)，得到棕色泡沫狀固體物(281mg，94％收率)1H NMR(DMSO-d6)δ0.96-1.08(m，4H)，1.05(s，9H)，1.15-1.26(m，2H)，1.35-1.38(m，5H)，1.42(s，9H)，1.85(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，2.07(bs，1H)，2.22(q，J＝8.7Hz，1H)，2.92-2.95(m，1H)，3.90(bs，1H)，4.20(d，J＝6.4Hz，3H)，4.29-4.39(m，5H)，5.13(d，J＝10.7，1H)，5.31(dd，J＝18.0，5.8Hz，1H)，5.70-5.77(m，1H)，7.30(t，J＝7.3Hz，3H)，7.39(t，J＝7.3Hz，4H)，7.63(dd，J＝6.7，2.8Hz，3H)，8.80(d，J＝7.63Hz，3H)；LC-MS m/z(MH+)678.
步驟4將實(shí)施例53、步驟3的產(chǎn)物用10％哌啶的DMF(3.3mL)溶液處理。在室溫下攪拌14h后，除去溶劑并將所得的棕色粘稠油狀物經(jīng)快速柱層析純化(SiO2，95∶5 DCM∶甲醇)來(lái)分離出高純度的Rf 1R，2S P1非對(duì)映異構(gòu)體，為淺黃色固體物(31mg)。其它的異構(gòu)體以混合物形式分離出，不使用LC-MS m/z(MH+)556。
方案3 步驟5和6向?qū)嵤├?3、步驟4的產(chǎn)物的DMF(2mL)溶液中加入聚乙烯基吡啶(13mg)和Fmoc-異硫氰酸酯。在室溫下攪拌14h后，將反應(yīng)混合物用哌啶(172mg，2.02mmol)處理。將反應(yīng)物再于室溫下攪拌6h，隨后濃縮并真空干燥過(guò)夜。再次將粗品剩余物溶于DMF(2mL)中，并用2-溴苯乙酮處理，在室溫下再攪拌14h。將反應(yīng)混合物濃縮并將所得的剩余物經(jīng)快速柱層析純化(SiO2，95∶5 DCM∶甲醇)，得到化合物53，為淺黃色固體物(21.9mg，收率50％)
1H NMR(DMSO-d6)δ0.87-0.92(m，1H)，1.05(bs，13H)，1.16-1.25(m，4H)，1.34-1.38(m，2H)，1.42(s，9H)，1.87(t，J＝6.6Hz，1H)，2.22-2.25(m，2H)，2.48(t，J＝10.7Hz，1H)，2.93(bs，1H)，3.04(q，J＝7.3Hz，1H)3.30-3.31(m，2H)，3.43-3.49(m，1H)，4.01(d，J＝10.4Hz，1H)，4.07-4.12(m，1H)，4.27(t，J＝9.5Hz，1H)，4.44(t，J＝7.0Hz，1H)，4.58(bs，1H)，5.11(d，J＝10.1Hz，1H)，5.30(dd，J＝16.8，9.6Hz，1H)，5.73-5.78(m，1H)，6.69(d，J＝8.2Hz，1H)，6.86(s，1H)，7.25(t，J＝7.3Hz，1H)，7.35(t，J＝7.63Hz，2H)，7.82(d，J＝8.2Hz，2H)；LC-MS m/z(MH+)715.
用于化合物55至155的反相制備型-HPLC條件如下Waters Xterra Prep MS C18柱，5mm(這表示粒徑為5μm)，30mm×100mm溶劑A10％甲醇，90％H2O，10mM乙酸銨溶劑B90％甲醇，10％H2O，10mM乙酸銨流速50mL/min梯度10min內(nèi)0％B至100％B，保持100％B4min。
實(shí)施例55化合物55的制備方案1
步驟1向化合物11(1.5g，2.10mmol)的DCE(25mL)溶液中加入TFA(25mL)。在室溫下攪拌15min后，將反應(yīng)混合物濃縮。所得的紅色粘稠油狀物再次溶于DCE(50mL)中并再次濃縮。隨后再將其溶于DCM(15mL)中，用1N HCl/乙醚(25mL)處理。將所得的懸浮液冷卻至0℃下，抽濾，用乙醚洗滌并在真空烘箱中干燥，得到步驟1的產(chǎn)物，為白色固體物(1.4g，收率97％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.07-11.2(m，3H)1.14(t，J＝4.12Hz，1H)1.17(s，9H)1.22(dd，J＝10.53，4.43Hz，1H)1.21-1.27(m，2H)1.42(dd，J＝9.61，5.34Hz，1H)1.91(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)2.27(q，J＝8.85Hz，1H)2.32-2.38(m，1H)2.70(dd，J＝13.43，6.71Hz，1H)，2.93-2.98(m，1H)3.96(s，3H)4.09(s，1H)4.14(dd，J＝12.21，3.66Hz，1H)4.32-4.35(m，1H)4.69(dd，J＝10.53，6.87Hz，1H) 5.14(dd，J＝10.38，1.53Hz，1H)5.31(dd，J＝17.40，1.22Hz，1H)5.70-5.77(m，1H)5.90(t，J＝3.51Hz，1H)7.24-7.27(m，1H)7.29(d，J＝4.27Hz，1H)7.39(t，J＝4.88Hz，1H)7.90(d，J＝6.10Hz，1H)8.19(m，1H)9.22(s，1H).
步驟2向?qū)嵤├?5、步驟1的產(chǎn)物(70.0mg，0.108mmol)和DIEA(41.8mg，0.323mmol)在DCM(2mL)中的溶液混合物內(nèi)加入乙酸酐(33.0mg，0.323mmol)。在室溫下攪拌14h后，除去溶劑，產(chǎn)物經(jīng)反相制備型-HPLC純化，得到化合物55(39.1mg，收率14％)
1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.00-1.03(m，1H)，1.06(s，9H)，1.07-1.10(m，1H)，1.21-1.28(m，2H)，1.43(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.55，5.49Hz，1H)，2.23(q，J＝8.85Hz，1H)，2.27-2.32(m，1H)，2.59(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)，2.92-2.97(m，1H)，3.93(s，3H)，4.12(dd，J＝11.90，3.97Hz，1H)，4.35(d，J＝11.60Hz，1H)，4.51(dd，J＝10.38，7.02Hz，1H)，4.61(dd，J＝5.80，3.05Hz，1H)，4.80(d，J＝4.27Hz，1H)，4.88(d，J＝3.96Hz，1H)，5.12(dd，J＝10.38，1.83Hz，1H)，5.29(dd，J＝17.24，1.37Hz，1H)，5.73-5.78(m，1H)，5.84(t，J＝3.66Hz，1H)，7.15(dd，J＝8.85，2.44Hz，1H)，7.19(d，J＝2.44Hz，1H)，7.25(d，J＝6.10Hz，1H)，7.88(d，J＝6.10Hz，1H)，8.06(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.49min)，MS m/z 656(MH+)。
實(shí)施例56化合物56的制備 化合物56按照化合物55的相同方法制備化合物56，但作如下修改修改使用環(huán)戊烷甲酰氯作為原料，得到化合物56(18.0mg，24％收率)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.00-1.03(m，1H)，1.05(s，9H)，1.06-1.10(m，2H)，1.24-1.27(m，2H)，1.25-1.61(m，9H)，1.80-1.83(m，1H)，1.88(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)，2.22-2.31(m，2H)，2.58-2.65(m，2H)，2.93-2.98(m，1H)，3.92(s，3H)，4.10(dd，J＝11.90，3.66Hz，1H)，4.35(d，J＝11.91Hz，1H)，4.52(dd，J＝10.38，7.02Hz，1H)，4.65(d，J＝9.46Hz，1H)，4.80(d，J＝5.49Hz，1H)，4.88(d，J＝5.19Hz，1H)，5.13(dd，J＝10.37，1.83Hz，1H)，5.30(dd，J＝16.80，1.22Hz，1H)，5.73-5.78(m，1H)，5.84(t，J＝4.27Hz，1H)，7.11(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.19(d，J＝2.44Hz，1H)，7.25(d，J＝5.80Hz，1H)，7.88(d，J＝6.10Hz，1H)，8.05(d，J＝9.16Hz，1H))；LC-MS(保留時(shí)間1.71min)，MS m/z 710(MH+)。
實(shí)施例57化合物57的制備 化合物57按照化合物55的相同方法制備化合物57，但作如下修改修改使用2-乙基丁酰氯作為原料，得到化合物57(20.7mg，27％收率)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.66(t，J＝7.32Hz，3H)，0.85(t，J＝7.32Hz，3H)，1.02-1.05(m，1H)，1.07(s，9H)，1.10-1.12(m，1H)，1.24-1.33(m，4H)，1.36-1.39(m，1H)，1.43(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)，1.48-1.51(m，1H)，1.88(dd，J＝8.24，5.19Hz，1H)，2.12-2.14(m，1H)，2.22(q，J＝8.85Hz，1H)，2.26-2.30(m，1H)，2.59(dd，J＝13.73，6.71Hz，1H)，2.94-2.97(m，1H)，3.92(s，3H)，4.11(dd，J＝11.90，3.66Hz，1H)，4.40(d，J＝11.90Hz，1H)，4.50(dd，J＝10.68，7.02Hz，1H)，4.75(d，J＝9.46Hz，1H)，4.81(d，J＝9.16Hz，1H)，4.89(d，J＝9.16Hz，1H)，5.12(dd，J＝10.38，1.53Hz，1H)，5.29(dd，J＝17.09，1.22Hz，1H)，5.72-5.79(m，1H)，5.85(t，J＝3.66Hz，1H)，7.08(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.19(d，J＝2.44Hz，1H)，7.25(d，J＝5.80Hz，1H)，7.88(d，J＝6.10Hz，1H)，7.98(d，J＝9.16Hz，1H)，8.02(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.73min)，MS m/z 712(MH+)。
實(shí)施例58化合物58的制備 實(shí)施例55，步驟1的產(chǎn)物化合物58向?qū)嵤├?5、步驟1的產(chǎn)物(70.0mg，0.108mmol)、DIEA(41.8mg，0.323mmol)和環(huán)丙烷乙酸(16.2mg，0.162mmol)在DCM(2mL)中的溶液混合物內(nèi)加入HATU(61.6mg，0.162mmol)。室溫下攪拌反應(yīng)混合物過(guò)夜后，用5％碳酸氫鈉水溶液(1mL)洗滌。水層用2×2mLDCM萃取。將合并的有機(jī)層用5％檸檬酸水溶液(2mL)和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。產(chǎn)物經(jīng)反相制備型-HPLC純化，得到化合物58(21.9mg，29％收率)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.11-0.14(m，2H)，0.43-0.47(m，2H)，0.87-0.09(m，1H)，1.01-1.04(m，1H)，1.07(s，9H)，1.09-1.12(m，1H)，1.23-1.27(m，2H)，1.45(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)，2.03(d，J＝7.32Hz，2H)，2.23(q，J＝8.75Hz，1H)，2.27-2.31(m，1H)，2.59(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)，2.92-2.96(m，1h)，3.93(m，3H)，4.13(dd，J＝11.90，3.97Hz，1H)，4.34(d，J＝11.90Hz，1H)，4.53(dd，J＝10.38，7.02Hz，1H)，4.66(d，J＝9.46Hz，1H)，4.81(d，J＝6.10Hz，1H)，4.89(d，J＝6.10Hz，1H)，5.12(dd，J＝10.37，1.52Hz，1H)，5.30(dd，J＝17.09，1.22Hz，1H)，5.75-5.81(m，1H)，5.86(s，1H)，7.12(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.19(d，J＝2.44Hz，1H)，7.81(d，J＝9.46Hz，1H)，7.89(d，J＝5.80Hz，1H)，8.06(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.63min)，MS m/z 696(MH+)。
實(shí)施例59化合物59的制備 化合物59按照化合物58的相同方法制備化合物59，但作如下修改修改使用甲氧基乙酸作為原料，得到化合物59(23.5mg，32％收率)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ10.99-1.04(m，2H)，1.06(s，9H)，1.09-1.12(m，1H)，1.22-1.27(m，2H)，1.45(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)，2.22(q，J＝8.85Hz，1H)，2.29-2.32(m，1H)，2.60(dd，J＝13.89，6.87Hz，1H)，2.92-2.97(m，1H)，3.35(s，3H)，3.70(d，J＝15.26Hz，1H)，3.84(d，J＝15.26Hz，1H)，3.93(s，3H)，4.13(dd，J＝11.90，3.97Hz，1H)，4.32(d，J＝11.60Hz，1H)，4.54(dd，J＝10.38，7.02Hz，1H)，4.65(s，1H)，4.81(d，J＝7.32Hz，1H)，4.89(d，J＝7.32Hz，1H)，5.12(d，J＝10.38Hz，1H)，5.30(d，J＝16.79Hz，1H)，5.74-5.81(m，1H)，5.86(t，J＝3.36Hz，1H)，7.14(dd，J＝9.00，2.59Hz，1H)，7.19(d，J＝2.44Hz，1H)，7.26(d，J＝6.10Hz，1H)，7.89(d，J＝6.10Hz，1H)，8.04(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.54min)，MS m/z 686(MH+)。
實(shí)施例60化合物60的制備 化合物60按照化合物58的相同方法制備化合物60，但作如下修改修改使用(+)-甲氧基乙酸作為原料，得到化合物60(23.8mg，27％收率)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.78(d，J＝7.02Hz，3H)，0.83-0.88(m，2H)，0.92(t，J＝7.17Hz，6H)，0.94-0.98(m，1H)，1.00-1.03(m，2H)，1.06(s，9H)，1.07-1.11(m，1H)，1.22-1.26(m，2H)，1.31-1.36(m，2H)，1.45(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.63-1.68(m，2H)，1.89(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)，2.01-2.04(m，1H)，2.17-2.21(m，1H)，2.24(q，J＝9.00Hz，2H)，2.28-2.33(m，1H)，2.60(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)，2.93-2.98(m，1H)，3.15-3.20(m，1H)，3.77(d，J＝15.26Hz，1H)，3.87(d，J＝15.26Hz，1H)，3.93(s，3H)，4.12(dd，J＝11.90，3.66Hz，1H)，4.32(d，J＝11.90Hz，1H)，4.56(dd，J＝10.38，7.02Hz，1H)，4.65(d，J＝9.77Hz，1H)，4.81(d，J＝5.80Hz，1H)，4.89(d，J＝5.80Hz，1H)，5.13(dd，J＝10.22，1.68Hz，1H)，5.30(dd，J＝17.09，1.53Hz，1H)，5.75-5.79(m，1H)，5.85(t，J＝3.66Hz，1H)，7.14(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.19(d，J＝2.44Hz，1H)，7.26(d，J＝5.80Hz，1H)，7.52(d，J＝9.77Hz，1H)，7.89(d，J＝5.80Hz，1H)，8.03(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間2.043min)，MS m/z 810(MH+)。
實(shí)施例61化合物61的制備 化合物61按照化合物58的相同方法制備化合物61，但作如下修改修改使用(-)-甲氧基乙酸作為原料，得到化合物61(26.4mg，30％收率)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.78(d，J＝7.02Hz，3H)，0.82-084(m，1H)，0.88(dd，J＝8.39，3.81Hz，1H)，0.91(d，J＝7.01Hz，3H)，0.92(d，J＝6.41Hz，3H)，0.94-0.99(m，2H)，1.00-1.03(m，2H)，1.06(s，9H)，1.08-1.10(m，1H)，1.23-1.26(m，2H)，1.30-1.37(m，2H)，1.44(dd，J＝9.61，5.34Hz，1H)，1.62-1.68(m，2H)，1.89(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)，1.98-2.02(m，1H)，2.13-2.16(m，1H)，2.24(q，J＝8.85Hz，1H)，2.28-2.32(m，1H)，2.60(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)，2.94-2.98(m，1H)，3.08-3.13(m，1H)，3.63(d，J＝15.56Hz，1H)，3.93(S，3H)，4.11(dd，J＝12.05，3.81Hz，1H)，4.32(d，J＝11.90Hz，1H)，4.56(dd，J＝10.38，7.02Hz，1H)，4.62(d，J＝9.46Hz，1H)，4.81(d，J＝6.41Hz，1H)，4.89(d，J＝6.72Hz，1H)，5.13(dd，J＝10.38，1.83Hz，1H)，5.30(dd，J＝17.09，1.23Hz，1H)，5.76-5.80(m，1H)，5.85(t，J＝3.51Hz，1H)，7.14(dd，J＝9.00，2.59Hz，1H)，7.20(d，J＝2.44Hz，1H)，7.26(d，J＝5.80Hz，1H)，7.52(d，J＝9.77Hz，1H)，7.89(d，J＝6.10Hz，1H)，8.04(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間2.05min)，MS m/z 810(MH+)。
實(shí)施例62化合物62的制備 化合物62按照化合物58的相同方法制備化合物62，但作如下修改修改使用雙環(huán)[1.1.1]戊烷-2-甲酸作為原料，得到化合物62(35.1，45％收率)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.03(d，J＝5.49Hz，1H)，1.06(s，9H)，1.08-1.11(m，3H)，1.23-1.29(m，3H)，1.37(dd，J＝7.02，3.36Hz，13H)，1.46(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)，1.65(dd，J＝9.77，2.14Hz，1H)，1.69(d，J＝2.14Hz，1H)，1.72(dd，J＝7.32，3.05Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)，2.12(dd，J＝9.77，5.05Hz，1H)，2.23(d，J＝8.85Hz，1H)，2.27-2.31(m，1H)，2.60(t，J＝6.87Hz，1H)，2.63(d，J＝1.83Hz，2H)，2.68(d，J＝7.63Hz，1H)，2.93-2.96(m，1H)，3.23(q，J＝7.43Hz，2H)，3.70-3.75(m，2H)，3.93(s，3H)，4.11(dd，7＝11.90，3.66Hz，1H)，4.35(d，J＝11.90Hz，1H)，4.53(dd，J＝10.53，6.87Hz，1H)，4.71(d，J＝9.46Hz，1H)，4.79(d，J＝5.80Hz，2H)，4.87(d，J＝5.49Hz，2H)，5.13(dd，J＝10.38，1.83Hz，1H)，5.30(dd，J＝17.24，1.37Hz，1H)，5.74-5.79(m，1H)，5.86(t，J＝3.20Hz，1H)，7.12(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.19(d，J＝2.44Hz，1H)，7.25(d，J＝5.80Hz，1H)，7.72(d，J＝9.46Hz，1H)，7.88(d，J＝5.80Hz，1H)，8.05(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.16min)，MS m/z 708(MH+)。
實(shí)施例63化合物63的制備 化合物63按照化合物58的相同方法制備化合物63，但作如下修改修改使用吡嗪-2-甲酸作為原料，得到化合物63(42.3，54％收率)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.00-1.04(m，3H)，1.05-1.09(m，1H)，1.10(s，9H)，1.15(s，1H)，1.18-1.22(m，2H)，1.43(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.88(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)，2.17(q，J＝8.65Hz，1H)，2.37-2.42(m，1H)，2.64(dd，J＝13.73，7.32Hz，1H)，2.91-2.95(m，1H)，3.88(s，3H)，3.93(d，J＝3.35Hz，1H)，4.13(dd，J＝11.90，3.36Hz，1H)，4.46(d，J＝11.90Hz，1H)，4.61(dd，J＝10.07，7.32Hz，1H)，4.76(s，1H)，4.80(d，J＝7.63Hz，1H)，4.88(d，J＝7.93Hz，1H)，5.09(d，J＝10.38Hz，1H)，5.27(d，J＝17.09Hz，1H)，5.77-5.83(m，1H)，5.85(s，1H)，6.85(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.08(d，J＝2.14Hz，1H)，7.23(d，J＝5.80Hz，1H)，7.87(d，J＝8.85Hz，1H)，7.90(d，J＝6.10Hz，1H)，8.57(d，J＝1.53Hz，1H)，8.73(d，J＝2.44Hz，1H)，8.81(s，1H).
實(shí)施例64化合物64的制備 實(shí)施例55，步驟1的產(chǎn)物化合物64向?qū)嵤├?5、步驟1的產(chǎn)物(70.0mg，0.108mmol)和DIEA(41.8mg，0.323mmol)在DCM(2mL)中的溶液混合物內(nèi)加入氯甲酸芐酯(55.1mg，0.323mmol)。在室溫下攪拌14h后，除去溶劑，產(chǎn)物經(jīng)反相制備型-HPLC純化，得到化合物64(26.9mg，31％收率)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.00(d，J＝2.14Hz，1H)，1.02(d，J＝5.80Hz，1H)，1.04(s，9H)，1.08-1.14(m，1H)，1.16(d，J＝6.71Hz，1H)，1.18-1.22(m，2H)，1.43(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)，1.87(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)，2.17-2.22(m，1H)，2.30-2.35(m，1H)，2.62(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)，2.90-2.95(m，1H)，3.88(s，3H)，4.08(dd，J＝11.90，3.66Hz，1H)，4.31(s，1H)，4.43(d，J＝11.60Hz，1H)，4.55(dd，J＝10.07，7.32Hz，1H)，4.74(d，J＝12.21Hz，1H)，4.81(d，J＝6.10Hz，1H)，4.89(d，J＝5.79Hz，1H)，5.10(d，J＝9.16Hz，1H)，5.16(s，1H)，5.28(d，J＝17.09Hz，1H)，5.75-5.81(m，1H)，5.83(s，1H)，7.07(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.17(d，J＝2.44Hz，1H)，7.20(d，J＝7.32Hz，2H)，7.25(t，J＝5.65Hz，3H)，7.30-7.33(m，1H)，7.34-7.37(m，2H)，7.89(d，J＝5.80Hz，1H)，8.07(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.79min)，MS m/z 748(MH+)。
實(shí)施例65化合物65的制備 化合物65按照化合物64的相同方法制備化合物65，但作如下修改修改使用(+)-氯甲酸甲酯作為原料，得到化合物65(28.8mg，36％收率)
1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.72(d，J＝6.71Hz，3H)，0.80(t，J＝5.80Hz，6H)，0.87(d，J＝7.02Hz，4H)，0.90-0.95(m，6H)，0.98-1.02(m，5H)，1.05(s，9H)，1.07-1.12(m，2H)，1.18-1.23(m，2H)，1.32-1.38(m，3H)，1.41(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)，1.46-1.48(m，1H)，1.63-1.71(m，5H)，1.85(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)，1.89-1.93(m，1H)，2.00-2.03(m，1H)，2.15(q，J＝8.70Hz，1H)，2.34-2.38(m，1H)，2.61(dd，J＝13.73，7.33Hz，1H)，2.89-2.93(m，1H)，3.73(s，2H)，3.92(s，3H)，4.10(dd，J＝11.60，3.36Hz，1H)，4.33(s，1H)，4.41(d，J＝11.29Hz，1H)，4.46-4.52(m，1H)，4.54(dd，J＝9.76，7.90Hz，1H)，4.81(d，J＝5.80Hz，1H)，4.89(m，1H)，5.08(d，J＝11.60Hz，1H)，5.26(d，J＝17.09Hz，1H)，5.77-5.81(m，1H)，5.83(d，J＝3.97Hz，1H)，7.11(dd，J＝11.29，1.83Hz，1H)，7.18(d，J＝1.83Hz，1H)，7.24(d，J＝5.80Hz，1H)，7.88(d，J＝6.10Hz，1H)，8.08(d，J＝8.85Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間2.06min)，MS m/z 796(MH+)。
實(shí)施例66化合物66的制備 化合物66按照化合物64的相同方法制備化合物66，但作如下修改修改使用(-)-氯甲酸甲酯作為原料，得到化合物66(26.9mg，31％收率)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.35(d，J＝6.41Hz，1H)，0.51(d，J＝6.71Hz，2H)，0.68(d，J＝6.71Hz，1H)，0.73(d，J＝7.02Hz，2H)，0.77-0.82(m，4H)，0.88-0.98(m，10H)，1.0-1.03(m，2H)，1.05(s，9H)，1.09-1.18(m，3H)，1.25-1.29(m，1H)，1.3-1.41(m，3H)，1.60-1.71(m，3H)，1.82-1.89(m，3H)，2.00-2.04(m，J＝2.14Hz，1H)，2.10(q，J＝8.24Hz，，1H)，2.39-2.43(m，1H)，2.61(dd，J＝14.04，7.32Hz，1H)，2.87-2.91(m，1H)，3.73(s，1H)，3.92(s，3H)，4.13(dd，J＝11.75，3.51Hz，1H)，4.22-4.27(m，2H)，4.30(s，1H)，4.39(d，J＝11.90Hz，1H)，4.484.55(m，1H)，4.79(d，J＝5.19Hz，1H)，4.87(d，J＝4.27Hz，1H)，5.05(d，J＝10.07Hz，1H)，5.22(d，J＝16.79Hz，1H)，5.78-5.85(m，2H)，7.09(dd，J＝9.16，1.83Hz，1H)，7.17(d，J＝1.83Hz，1H)，7.23(d，J＝5.80Hz，1H)，7.88(d，J＝5.80Hz，1H)8.09(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間2.05min)，MS m/z 796(MH+)。
實(shí)施例67化合物67的制備 化合物67按照化合物64的相同方法制備化合物67，但作如下修改修改使用二碳酸二叔戊酯作為原料，得到化合物67(35.3mg，41％收率)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.78(t，J＝7.17Hz，3H)，0.89-0.95(m，6H)，1.04(s，9H)，1.005-1.09(m，3H)，1.15(s，1H)，1.22(d，J＝12.51Hz，6H)，1.40(s，2H)，1.42-1.46(m，1H)，1.48(s，3H)，1.56-1.66(m，2H)，1.78(q，J＝7.63Hz，1H)，1.84(q，J＝7.53Hz，1H)，1.88(d，J＝5.80Hz，1H)，2.22(d，J＝8.55Hz，1H)，2.27-2.31(m，1H)，2.61(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)，2.91-2.96(m，1H)，3.92(s，3H)，4.08(d，J＝12.21Hz，1H)，4.26(d，J＝9.16Hz，1H)，4.42(d，J＝11.29Hz，1H)，4.52(t，J＝7.93Hz，1H)，5.12(d，J＝10.07Hz，1H)，5.29(d，J＝17.09Hz，1H)，5.73-5.80(m，1H)，5.84(s，1H)，6.57(d，J＝8.85Hz，1H)，7.09(d，J＝8.54Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.25(d，J＝5.80Hz，1H)，7.89(d，J＝5.80Hz，1H)，8.08(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.82min)，MS m/z 728(MH+)。
實(shí)施例68化合物68的制備 化合物68按照化合物64的相同方法制備化合物68，但作如下修改修改使用氯甲酸(2，2，2-三氯-1，1-二甲基)酯作為原料，得到化合物68(30.5mg，37％收率)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.99(s，9H)，1.04(s，6H)，1.08-1.09(m，3H)，1.23-1.26(m，3H)，1.44(s，2H)，1.46(d，J＝5.80Hz，1H)，1.71(s，2H)，2.23-2.33(m，2H)，2.60-2.64(m，1H)，2.93-2.96(m，1H)，3.70(m，1H)，3.71(s，3H)，3.93(s，3H)，4.04-4.06(m，2H)，4.27(d，J＝9.16Hz，1H)，4.41(d，J＝11.60Hz，1H)，4.57(d，J＝10.98，6.11Hz，1H)，5.14(d，J＝12.21Hz，1H)，5.32(d，J＝17.70Hz，1H)，5.75-5.80(m，1H)，5.84(s，1H)，7.10(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.19(d，J＝2.44Hz，1H)，7.26(d，J＝6.10Hz，1H)，7.90(d，J＝5.80Hz，1H)，8.07(d，J＝9.16Hz，1H))；LC-MS(保留時(shí)間1.95min)，MS m/z 816(MH+)。
實(shí)施例69化合物69的制備 實(shí)施例55，步驟1的產(chǎn)物化合物69向?qū)嵤├?5、步驟1的產(chǎn)物(102mg，0.149mmol)和DIEA(48.2，0.373mmol)在THF(2mL)中的溶液混合物內(nèi)加入碳酸N，N’-二琥珀酰亞胺酯(57.1mg，0.223mmol)。所得的懸浮液經(jīng)微波輻射加熱至80℃下反應(yīng)15min。隨后加入1-甲基環(huán)戊醇鈉的漿狀液，該漿狀液通過(guò)在室溫下用NaH(60％裝于油中，59.6mg，1.49mmol)處理0℃的1-甲基環(huán)戊醇(149.2mg，1.49mmol)的THF(1mL)溶液15min得到。在室溫下攪拌15min后，反應(yīng)物用飽和氯化銨水溶液(3mL)猝滅并用EtOAc(10mL)萃取。隨后將有機(jī)層通過(guò)celite hydromatrix柱，濃縮并經(jīng)反相制備型-HPLC純化，得到化合物69(49.0mg，44％)1H MR(CD3OD，500MHz)δ0.95-0.98(m，3H)，0.99-1.01(m，J＝12.51Hz，1H)，1.03(s，9H)，1.14-1.18(m，2H)，1.30(s，3H)，1.40-1.47(m，3H)，1.50-1.56(m，3H)，1.60-1.64(m，1H)，1.76-1.81(m，1H)，1.83-1.85(m，1H)，2.10-2.19(m，1H)，2.36-2.43(m，1H)，2.63(dd，J＝14.50，7.17Hz，1H)，2.86-2.90(m，1H)，3.92(s，3H)，4.09(d，J＝12.51Hz，1H)，4.25(d，J＝1.53Hz，1H)，4.43(d，J＝10.99Hz，1H)，4.514.55(m，1H)，5.06(d，J＝11.60Hz，1H)，5.23(d，J＝16.78Hz，1H)，5.80-5.85(m，J＝12.67，12.67Hz，2H)，7.09(d，J＝8.55Hz，1H)，7.17(s，1H)，7.24(d，J＝5.49Hz，1H)，8.07(d，J＝9.16Hz，1H))；LC-MS(保留時(shí)間1.87min)，MS m/z 740(MH+)。
實(shí)施例70化合物70的制備 化合物70按照化合物69的相同方法制備化合物70，但作如下修改修改使用環(huán)戊醇作為原料，得到化合物70(85.1mg，收率40％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.98(s，1H)，1.00(d，J＝4.88Hz，1H)，1.03(s，9H)，1.06-110(m，2H)，1.24-1.29(m，3H)，1.36-1.40(m，2H)，1.44(dd，J＝9.31，5.04Hz，2H)，1.57-1.62(m，5H)，1.69-1.73(m，2H)，1.88(dd，J＝8.09，5.65Hz，1H)，2.22-29(m，2H)，2.59-2.62(m，1H)，2.92-2.96(m，1H)，3.93(s，3H)，4.07(dd，J＝10.99，2.44Hz，1H)，4.29(s，1H)，4.42(dd，J＝12.51，1.53Hz，1H)，4.55(dd，J＝9.77，7.93Hz，1H)，4.68-4.71(m，1H)，4.81(d，J＝8.55Hz，1H)，4.89(d，J＝9.46Hz，1H)，5.13(d，J＝10.68Hz，1H)，5.30(d，J＝16.48Hz，1H)，5.73-5.78(m，1H)，5.84(s，1H)，7.12(dd，J＝9.15，1.83Hz，1H)，7.20(d，J＝2.14Hz，1H)，7.27(d，J＝5.80Hz，1H)，7.89(d，J＝5.80Hz，1H)，8.09(d，J＝8.85Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.81min)，MS m/z 726(MH+)。
實(shí)施例71化合物71的制備 化合物71
按照化合物69的相同方法制備化合物71，但作如下修改修改使用環(huán)丁醇作為原料，得到化合物71(16.2mg，收率39％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.97(s，3H)，1.03(s，9H)，1.06-1.08(m，2H)，1.17-1.22(m，3H)，1.37-1.44(m，1H)，1.82-1.85(m，1H)，2.02-2.08(m，1H)，2.15-2.21(m，1H)，2.30-2.36(m，1H)，2.49-2.54(m，0.4H)，2.59-2.67(m，0.6H)，2.90-2.94(m，1H)，3.93(s，3H)，4.09(dd，J＝8.09，4.73Hz，1H)，4.20(d，J＝10.68Hz，0.4H)，4.38(d，J＝10.68Hz，0.6H)，4.46(dd，J＝10.22，7.17Hz，0.4H)，4.48-4.56(m，1H)，5.07-5.11(m，1H)，5.26(d，J＝17.24Hz，0.4H)，5.28(d，J＝17.24Hz，0.6H)，5.71-5.79(m，1H)，5.84(s，1H)，7.07(dd，J＝8.39，2.90Hz，1H)，7.14(d，J＝2.14Hz，1H)，7.20(d，J＝2.44Hz，1H)，7.25(d，J＝5.80Hz，1H)，7.59(d，J＝5.80Hz，1H)，7.88(m，1H)，8.00(d，J＝9.16Hz，0.4H)，8.07(d，J＝8.85Hz，0.6H))；LC-MS(保留時(shí)間1.25min)，MS m/z 712(MH+)。
實(shí)施例72化合物72的制備 化合物72按照化合物69的相同方法制備化合物72，但作如下修改修改使用2-苯基-2-丙醇作為原料，得到化合物72(19.0mg，收率42％)
1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.97(m，1H)，1.03(s，9H)，1.06-1.09(m，3H)，1.16-1.22(m，4H)，1.41-1.44(m，1H)，1.57(s，3H)，1.86(t，J＝7.80Hz，1H)，2.14-2.18(m，1H)，2.30-2.35(m，1H)，2.57-2.61(m，1H)，2.90-2.94(m，1H)，3.92(d，J＝4.27Hz，1H)，3.94(s，3H)，4.04(dd，J＝10.99，3.66Hz，1H)，4.18(s，1H)，4.24(d，J＝10.99Hz，1H)，4.52(s，1H)，5.09(d，J＝10.07Hz，1H)，5.26(d，J＝14.95Hz，1H)，5.78-5.82(m，2H)，7.07-7.12(m，2H)，7.16-7.20(m，3H)，7.23(d，J＝5.19Hz，1H)，7.29(d，J＝7.02Hz，2H)，7.84(d，J＝5.80Hz，1H)，8.03(d，J＝9.46Hz，1H))；LC-MS(保留時(shí)間1.84min)，MS m/z 776(MH+)。
實(shí)施例73化合物73的制備 化合物73按照化合物69的相同方法制備化合物73，但作如下修改修改使用4-(三氟甲基)苯基二甲基甲醇作為原料，得到化合物73(22.1mg，收率45％)
1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.91(s，1H)，0.97-1.00(m，J＝15.56Hz，4H)，1.04(s，9H)，1.07-1.10(m，2H)，1.16-1.20(m，3H)，1.30-1.31(m，1H)，1.41(dd，J＝9.61，5.34Hz，1H)，1.55(d，J＝7.32Hz，6H)，1.83-1.87(m，1H)，2.11-2.14(m，1H)，2.34-2.39(m，1H)，2.57-2.62(m，1H)，2.89-2.92(m，J＝11.60，4.27Hz，1H)，3.92(s，2H)，3.94(s，3H)，4.02-4.05(m，1H)，4.17(s，1H)，4.26(d，J＝11.90Hz，1H)，4.53(t，J＝8.85Hz，1H)，5.07(d，J＝10.07Hz，1H)，5.24(d，J＝18.01Hz，1H)，5.78-5.83(m，2H)，7.08(d，J＝7.02Hz，1H)，7.19(s，1H)，7.22(d，J＝5.80Hz，1H)，7.45(dd，J＝13.74，7.63Hz，3H)，7.60(d，J＝6.41Hz，1H)，7.67(d，J＝7.63Hz，1H)，7.84(d，J＝5.80Hz，1H)，8.02(d，J＝8.54Hz，1H))；LC-MS(保留時(shí)間1.92min)，MS m/z 844(MH+)。
實(shí)施例74化合物74的制備 實(shí)施例55，步驟1的產(chǎn)物化合物74向?qū)嵤├?5、步驟1的產(chǎn)物(70.0mg，0.108mmol)和DIEA(41.8mg，0.323mmol)在DCM(2mL)中的溶液混合物內(nèi)加入異氰酸叔丁酯(32.0，0.323mmol)。室溫下攪拌過(guò)夜后，將反應(yīng)物濃縮并經(jīng)反相制備型HPLC純化，得到化合物74(42.3mg，收率55％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.96-1.00(m，1H)1.04(s，9H)1.08-1.10(m，3H)1.19(s，9H)1.22-1.31(m，2H)1.30(m，1H)1.41(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)1.87(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)2.20-2.29(m，2H)2.61(dd，J＝14.04，6.72Hz，1H)2.92-2.97(m，1H)3.92(s，3H)4.08(dd，J＝11.60，3.97Hz，1H)4.36(s，1H)4.47-4.52(m，2H)4.81(d，J＝3.36Hz，1H)4.88(d，J＝8.85Hz，1H)5.11(dd，J＝10.22，1.68Hz，1H)5.28(dd，J＝17.09，1.53Hz，1H)5.72-5.76(m，1H)5.85(s，1H)7.08(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)7.18(d，J＝2.14Hz，1H)7.24(d，J＝5.80Hz，1H)7.88(d，J＝6.10Hz，1H)8.12(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.70min)，MS m/z 713(MH+)。
實(shí)施例75化合物75的制備 化合物75按照化合物74的相同方法制備化合物75，但作如下修改修改使用異氰酸環(huán)戊酯作為原料，得到化合物75(38.5mg，49％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.92(d，J＝7.63Hz，1H)0.96(s，9H)0.98-1.02(m，1H)1.05(s，9H)1.07-1.10(m，2H)1.21-1.25(m，3H)1.28-1.34(m，1H)1.36-1.55(m，8H)1.58-1.65(m，13H)1.81(m，1H)1.88(m，6H)2.23(dd，J＝18.01，8.85Hz，1H)2.29(m，1H)2.59(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)2.94(m，1H)3.27(d，J＝1.83Hz，1H)3.35(d，J＝1.53Hz，1H)3.75(m，1H)3.92(s，3H)3.95(d，J＝6.41Hz，1H)3.97(s，1H)4.09(m，2H)4.40(s，1H)4.45(d，J＝11.90Hz，1H)4.52(dd，J＝10.07，7.02Hz，1H)4.81(d，J＝7.02Hz，1H)4.89(d，J＝7.02Hz，1H)5.11(m，1H)5.29(d，J＝17.40Hz，1H)5.75(m，1H)5.85(s，1H)7.11(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)7.18(d，J＝2.44Hz，1H)7.25(d，J＝5.80Hz，1H)7.88(d，J＝6.10Hz，1H)7.95(m，1H)8.12(d，J＝9.16Hz，1H))；
LC-MS(保留時(shí)間1.67min)，MS m/z 725(MH+)。
實(shí)施例76化合物76的制備 實(shí)施例55，步驟1的產(chǎn)物化合物76向?qū)嵤├?5、步驟1的產(chǎn)物(70mg，0.102mmol)和DIEA(33.0mg，0.255mmol)在THF(2mL)中的溶液混合物內(nèi)加入碳酸N，N’-二琥珀酰亞胺酯(39.2mg，0.153mmol)。所得的懸浮液經(jīng)微波輻射加熱至80℃下反應(yīng)15min。隨后將其用叔戊胺(88.9mg，1.02mmol)處理。在室溫下攪拌15min后，將反應(yīng)物濃縮并經(jīng)反相制備型HPLC純化，得到化合物76(51mg，69％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.76(t，J＝7.48Hz，4H)，0.97(s，1H)，1.04(s，9H)，1.13(s，6H)，1.22-1.25(m，2H)，1.41(dd，J＝9.61，5.34Hz，1H)，1.53(dd，J＝13.89，7.48Hz，1H)，1.58-1.62(m，1H)，1.87(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)，2.20(q，J＝8.65Hz，1H)，2.27-2.31(m，1H)，2.60(dd，J＝13.73，7.32Hz，1H)，2.92-2.96(m，1H)，3.92(s，3H)，4.08(dd，J＝11.75，3.81Hz，1H)，4.36(s，1H)，4.46(d，J＝11.90Hz，1H)，4.50(dd，J＝10.22，7.17Hz，1H)，5.10(dd，J＝10.22，1.37Hz，1H)，5.27(dd，J＝16.94，1.07Hz，1H)，5.73-5.77(m，1H)，5.84(t，J＝3.51Hz，1H)，7.09(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.18(d，J＝2.44Hz，1H)，7.24(d，J＝5.80Hz，1H)，7.88(d，J＝6.10Hz，1H)，8.11(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.753min)，MS m/z 727(MH+)。
實(shí)施例77化合物77的制備 化合物77按照化合物76的相同方法制備化合物77，但作如下修改修改使用叔丁基甲胺作為原料，得到化合物77(160.7mg，收率74％)1H MR(CD3OD，500MHz)δ0.96-1.10(m，1H)，1.06(s，9H)，1.08-1.12(m，J＝5.80Hz，3H)，1.26(s，9H)，1.46(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)，1.87(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)，2.21(q，J＝8.75Hz，1H)，2.26-2.31(m，1H)，2.57-2.62(m，1H)，2.86(s，3H)，2.91-2.95(m，1H)，3.92(s，3H)，4.09(dd，J＝11.90，3.66Hz，1H)，4.43(s，1H)，4.46(d，J＝11.90Hz，1H)，4.52(dd，J＝10.68，7.02Hz，1H)，5.11(dd，J＝10.22，1.37Hz，1H)，5.29(d，J＝17.09Hz，1H)，5.75-5.82(m，1H)，5.86(s，1H)，7.09(dd，J＝9.16，2.14Hz，1H)，7.18(d，J＝2.44Hz，1H)，7.24(d，J＝5.80Hz，1H)，7.88(d，J＝5.80Hz，1H)，8.09(d，J＝8.85Hz，1H))；LC-MS(保留時(shí)間1.76min)，MS m/z 727(MH+)。
實(shí)施例78化合物78的制備 化合物78按照化合物76的相同方法制備化合物78，但作如下修改修改使用N，O-二甲基羥胺鹽酸鹽作為原料，得到化合物78(62.1mg，收率60％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.99(t，J＝6.10Hz，1H)，1.07(s，11H)，1.22-1.26(m，J＝3.97Hz，2H)，1.47(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)，2.22(d，J＝8.54Hz，1H)，2.3-30-2.33(m，1H)，2.60(dd，J＝13.43，7.02Hz，1H)，2.92(s，3H)，2.93-2.96(m，1H)，3.66(s，3H)，3.92(s，3H)，4.12(dd，J-11.90，3.66Hz，1H)，4.34(d，J＝12.21Hz，1H)，4.44(d，J＝9.46Hz，1H)，4.54(dd，J＝10.53，6.87Hz，1H)，5.12(d，J＝10.38Hz，1H)，5.30(d，J＝17.09Hz，1H)，5.75-5.83(m，1H)，5.86(t，J＝3.97Hz，1H)，6.70(d，J＝9.77Hz，1H)，7.13(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.19(d，J＝2.44Hz，1H)，7.25(d，J＝6.10Hz，1H)，7.88(d，J＝5.80Hz，1H)，8.07(d，J＝9.16Hz，1H))；LC-MS(保留時(shí)間1.59min)，MS m/z 701(MH+)。
實(shí)施例79化合物79的制備 化合物79按照化合物76的相同方法制備化合物79，但作如下修改修改使用二乙胺作為原料，得到化合物79(56.5 mg，收率54％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.03(q，J＝15.6Hz，4H)，1.06(d，J＝1.53Hz，9H)，1.05-1.10(m，3H)，1.13-1.23(m，4H)，1.46(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)，1.86(dd，J＝7.93，5.30Hz，1H)，2.17(q，J＝8.85Hz，1H)，2.32-2.36(m，1H)，2.60(dd，J＝14.04，7.32Hz，1H)，2.89-2.93(m，1H)，3.16-3.24(m，4H)，3.92(s，3H)，4.14(dd，J＝11.90，3.66Hz，1H)，4.37(d，J＝11.60Hz，1H)，4.51-4.55(m，2H)，5.09(d，J＝10.07Hz，1H)，5.27(d，J＝17.09Hz，1H)，5.55(d，J＝9.46Hz，1H)，5.79-5.84(m，1H)，5.86(s，1H)，7.11(dd，J＝8.85，2.44Hz，1H)，7.18(d，J＝2.44Hz，1H)，7.24(d，J＝5.80Hz，1H)，7.88(d，J＝5.80Hz，1H)，8.08(d，J＝9.16Hz，1H))；LC-MS(保留時(shí)間1.68min)，MS m/z 713(MH+)。
實(shí)施例80化合物80的制備 化合物80
按照化合物76的相同方法制備化合物80，但作如下修改修改使用飽和氯化銨水溶液作為原料，得到化合物76(12.2mg，收率32％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.00-1.03(m，3H)，1.06(s，9H)，1.20-1.25(m，2H)，1.42(dd，J＝9.31，5.34Hz，1H)，2.22(d，J＝9.77Hz，1H)，2.29-2.35(m，1H)，2.59(dd，J＝13.28，6.87Hz，1H)，2.92-2.96(m，1H)，3.92(s，3H)，4.14(dd，J＝11.75，4.12Hz，1H)，4.38-4.43(m，1H)，4.51 (dd，J＝9.92，6.87Hz，1H)，5.11(d，J＝11.90Hz，1H)，5.28(d，J＝17.70Hz，1H)，5.72-5.79(m，1H)，5.84(s，1H)，7.15(d，J＝2.44Hz，1H)，7.17(d，J＝2.75Hz，1H)，7.23(d，J＝5.80Hz，1H)，7.87(d，J＝7.87Hz，1H)，8.10(d，J＝8.85Hz，1H))；LC-MS(保留時(shí)間1.43min)，MS m/z 657(MH+)。
實(shí)施例81化合物81的制備 化合物81按照化合物76的相同方法制備化合物81，但作如下修改修改使用叔辛胺作為原料，得到化合物81(16.1mg，收率48％)
1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.88(s，9H)，1.00(d，J＝9.77Hz，5H)，1.04(s，9H)，1.17(s，3H)，1.18-1.20(m，1H)，1.21(s，3H)，1.35(d，J＝2.44Hz，1H)，1.40-1.43(m，1H)，1.57(d，J＝14.95Hz，1H)，1.67(d，J＝14.65Hz，1H)，1.85(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)，2.15(d，J＝8.24Hz，1H)，2.34-2.43(m，1H)，2.60(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)，2.89-2.93(m，1H)，3.92(s，3H)，4.13(dd，J＝11.60，3.97Hz，1H)，4.38(s，1H)，4.43(d，J＝11.90Hz，1H)，4.50(dd，J＝9.77，7.32Hz，1H)，5.07(d，J＝10.38Hz，1H)，5.24(d，J＝17.09Hz，1H)，5.75-5.81(m，1H)，5.84(s，1H)，7.09(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.17(d，J＝2.44Hz，1H)，7.23(d，J＝5.80Hz，1H)，7.88(d，J＝5.80Hz，1H)，8.10(d，J＝9.16Hz，1H))；LC-MS(保留時(shí)間1.92min)，MS m/z 769(MH+)。
實(shí)施例82化合物82的制備 化合物82按照化合物76的相同方法制備化合物82，但作如下修改修改使用1-(4-氟苯基)-2-甲基-2-丙基胺作為原料，得到化合物82(14.8mg，收率42％)
1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.88(s，9H)，1.00(d，J＝9.46Hz，6H)，1.04(s，9H)，1.17(s，3H)，1.21(s，3H)，1.32-1.37(m，2H)，1.39-1.43(m，1H)，1.57(d，J＝14.65Hz，1H)，1.67(d，J＝14.96Hz，1H)，1.82-1.86(m，1H)，2.15(t，J＝9.46Hz，1H)，2.33-2.43(m，2H)，2.58-2.62(dd，J＝14.50，7.78Hz，1H)，2.89-2.93(m，1H)，3.92(s，3H)，4.12(dd，J＝11.90，3.97Hz，1H)，4.38(s，1H)，4.43(d，J＝12.82Hz，1H)，4.49-4.52(m，1H)，5.24(d，J＝16.48Hz，1H)，5.76-5.82(m，1H)，5.83-5.85(m，1H)，7.09(dd，J＝9.00，2.59Hz，1H)，7.17(d，J＝2.14Hz，1H)，7.23(d，J＝5.80Hz，1H)，7.88(d，J＝5.80Hz，1H)，8.10(d，J＝9.16Hz，1H))；LC-MS(保留時(shí)間1.40min)，MS m/z 807(MH+)。
實(shí)施例83化合物83的制備 化合物83按照化合物76的相同方法制備化合物83，但作如下修改修改使用枯基胺作為原料，得到化合物83(64.6mg，收率57％)
1HNMR(CD3OD，500MHz)δ0.87-0.91(m，1H)，0.98(d，J＝9.46Hz，2H)，1.01(s，9H)，1.02-1.05(m，1H)，1.17-1.21(m，3H)，1.29(s，2H)，1.40(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)，1.51(d，J＝3.05Hz，5H)，1.85(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)，2.17(q，J＝8.85Hz，1H)，2.30-2.33(m，1H)，2.58(dd，J＝13.58，7.48Hz，1H)，2.91-2.94(m，1H)，3.92(d，J＝2.14Hz，1H)，3.93(s，3H)，4.05(dd，J＝11.60，3.66Hz，1H)，4.32(d，J＝9.77Hz，1H)，4.51(dd，J＝9.92，7.17Hz，1H)，5.09(dd，J＝11.59，1.52Hz，1H)，5.27(dd，J＝16.71，1.22Hz，1H)，5.74-5.78(m，1H)，5.82(s，1H)，7.05-7.09(m，1H)，7.18(d，J＝2.44Hz，1H)，7.19(d，J＝7.33Hz，1H)，7.22(d，J＝5.80Hz，1H)，7.33(d，J＝7.63Hz，1H)，7.84(d，J＝5.80Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.76min)，MS m/z 775(MH+)。
實(shí)施例84化合物84的制備 實(shí)施例11，步驟5的產(chǎn)物 化合物84向?qū)嵤├?1、步驟5的產(chǎn)物(77.0mg，0.136mmol)、DIEA(70.4mg，0.544mmol)和HATU(77.5mg，0.204mmol)的溶液中加入Boc-MeIle-OH(43.4mg，0.177mmol)。在室溫下攪拌14hr后，將反應(yīng)混合物用5％碳酸氫鈉水溶液(1mL)洗滌。水層用2×2mL DCM萃取。合并的有機(jī)層用5％檸檬酸水溶液(2mL)和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，濃縮并經(jīng)快速柱層析純化(SiO2，97∶3 DCM∶甲醇)，得到化合物84(68.4mg，收率69％)
1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.89(t，J＝7.32Hz，3H)0.94(dd，J＝5.95，4.43Hz，3H)1.07(d，J＝7，63Hz，3H)1.13(s，5H)1.16-1.20(m，J＝4.88Hz，2H)1.23(s，3H)1.28(m，1H)1.34-1.38(m，1H)1.41-1.47(m，1H)1.55-1.60(m，J＝7.63Hz，1H)1.87-1.91(m，1H)2.22-2.26(m，2H)2.36-2.38(m，1H)2.56-2.62(m，1H)2.81(d，J＝11.30Hz，2H)2.94-2.99(m，1H)3.92(s，3H)4.05-4.12(m，2H)4.48-4.57(m，2H)5.12(d，J＝10.07Hz，1H)5.32(m，1H)5.75-5.82(m，1H)5.84-5.88(m，1H)7.09-7.13(m，1H)7.16-7.20(m，1H)7.23-7.27(m，1H)7.88(dd，J＝5.95，2.29Hz，1H)8.04(d，J＝9.16Hz，0.6H)8.09(d，J＝9.46Hz，0.4H)；LC-MS(保留時(shí)間1.83min)，MS m/z 728(MH+)。
實(shí)施例85化合物85的制備 按照化合物84的相同方法制備化合物85，但作如下修改修改使用Boc-MeVal-OH作為原料，得到化合物84(72.1mg，收率74％)
1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.84(t，J＝5.80Hz，3H)，0.96(d，J＝6.41Hz，3H)，1.08(d，J＝7.32Hz，2H)，1.13(s，6H)，1.16(s，4H)，1.18-1.21(m，1H)，1.23-1.29(m，1H)，1.44(dd，J＝9.61，5.34Hz，1H)，1.88-1.92(m，1H)，2.24(d，J＝10.07Hz，1H)，2.32-2.39(m，2H)，2.58(dd，J＝13.89，6.26Hz，1H)，2.80(s，3H)，2.93-2.98(m，1H)，3.93(s，3H)，4.01(dd，J＝11.90，3.36Hz，0.6H)，4.12(dd，J＝11.90，3.66Hz，0.4H)，4.16(d，J＝11.29Hz，0.6H)，4.38(d，J＝10.99Hz，0.4H)，4.45(d，J＝10.68Hz，1H)，4.47(d，J＝10.69Hz，0.6H)，4.53(dd，J＝10.38，7.02Hz，0.4H)，4.58(dd，J＝10.07，7.02Hz，1H)，5.12(d，J＝4.28，0.6H)，5.14(d，J＝4.27Hz，0.4H)，5.30(d，J＝7.32Hz，0.6H)，5.34(d，J＝7.32Hz，0.4H)，5.78-5.85(m，1H)，5.88(t，J＝3.05Hz，0.6H)，5.96(t，J＝3.97Hz，0.4H)，7.13(dd，J＝9.00，2.29Hz，0.6H)，7.16(dd，J＝9.46，2.44Hz，0.4H)，7.19(m，1H)，7.24(d，J＝6.10Hz，0.6H)，7.26(d，J＝6.10Hz，0.4H)，7.88(d，J＝5.80Hz，1H)，8.02(d，J＝9.16Hz，0.6H)8.05(d，J＝9.16Hz，0.4H).
實(shí)施例86化合物86的制備 按照化合物84的相同方法制備化合物86，但作如下修改修改使用Boc-MeLeu-OH作為原料，得到化合物85(56.5mg，收率57％)
1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.94-0.96(m，6H)，1.04-1.13(m，2H)，1.17(s，4.5H)，1.18(s，4.5H)，1.26-1.31(m，1H)，1.42(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.46-1.51(m，2H)，1.56-1.60(m，0.5H)，1.69-1.72(m，0.5H)，1.75-1.81(m，0.5H)，1.90(q，J＝7.50Hz，1H)，2.27(dd，J＝13.89，7.78Hz，1H)，2.32-2.38(m，1H)，2.58(dd，J＝14.80，7.48Hz，1H)，2.75(s，3H)，2.95-2.99(m，1H)，3.93(s，3H)，4.03(d，J＝12.21Hz，1H)，4.11-15(m，0.5H)，4.28(d，J＝12.21Hz，1H)，4.53(t，J＝8.50Hz，0.5H)，4.59(t，J＝8.55Hz，0.5H)，4.83-4.87(m，J＝6.41Hz，0.5H)，4.96(m，0.5H)，5.14(dd，J＝11.14，4.73Hz，1H)，5.32(dd，J＝17.70，6.41Hz，1H)，5.75-5.82(m，1H)，5.90(s，0.5H)，5.92(s，0.5H)，7.13-7.18m，1H)，7.20(s，1H)，7.25-7.27(m，1H)，7.87(t，J＝4.40Hz，1H)8.05(d，J＝8.85Hz，1H).
實(shí)施例87化合物87的制備 化合物87按照化合物84的相同方法制備化合物87，但作如下修改修改使用Boc-MeNle-OH作為原料，得到化合物87(82.3mg，收率83％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.90-0.96(q，J＝7.63Hz，3H)1.05-1.10(m，2H)1.18(s，4.5H)1.20(s，4.5H)1.24-1.30(m，3H)1.31-1.38(m，1H)1.42(dd，J＝9.46，5.19Hz，2H)1.72-1.81(m，2H)1.88-1.92(m，1H)2.22-2.29(m，1H)2.32-2.38(m，1H)2.58(dd，J＝13.89，7.17Hz，1H)2.72(s，3H)2.94-2.99(m，1H)3.93(s，3H)4.02(dd，J＝9.77，4.27Hz，1H)4.12(dd，J＝11.90，3.35Hz，0.5H)4.24(dd，J＝11.90，0.6Hz，0.5H)4.51-4.60(m，1H)5.14(d，J＝10.38Hz，1H)5.33(dd，J＝17.24，4.73Hz，1H)5.75-5.82(m，1H)5.91(s，1H)7.15(dd，J＝14.34，7.63Hz，1H)7.20(d，J＝2.44Hz，1H)7.25(d，J＝5.80Hz，1H)7.87(t，J＝4.37Hz，1H)8.05(d，J＝8.85Hz，1H).
實(shí)施例88化合物88的制備 化合物88按照化合物84的相同方法制備化合物88，但作如下修改修改使用Boc-N-Me-NVa-OH作為原料，得到化合物88(70.5mg，收率73％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.96(d，J＝6.41Hz，3H)1.06-1.10(m，2H)1.18(s，9H)1.27-1.30(m，4H)1.42(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)1.66-1.80(m，2H)1.88-1.92(m，1H)2.23-2.29(m，1H)2.30-2.37(m，1H)2.58(dd，J＝13.58，7.17Hz，1H)2.73(s，3H)2.94-2.98(m，1H)3.93(s，3H)4.00-4.04(m，1H)4.12(d，J＝12.82Hz，0.5H)4.25(d，J＝12.21Hz，0.5H)4.51-4.60(m，1H)5.13(d，J＝10.68Hz，1H)5.32(d，J＝17.09Hz，1H)5.75-5.81(m，1H)5.90(s，1H)7.13-7.18(m，1H)7.20(d，J＝2.14Hz，1H)7.25(d，J＝5.80Hz，1H)7.87(s，1H)8.05(d，J＝9.16Hz，1H).
實(shí)施例89化合物89的制備 實(shí)施例11，步驟5的產(chǎn)物 化合物89向?qū)嵤├?1、步驟5的產(chǎn)物(66.0mg，0.123mmol)、DIEA(63.7mg，0.492mmol)和HATU(70.0，0.184mmol)的溶液中加入2S叔丁氧基羰基氨基-3-羥基-3-甲基-丁酸(34.0mg，0.147mmol)。在室溫下攪拌14hr后，將反應(yīng)混合物用5％碳酸氫鈉水溶液(1mL)洗滌。水層用2×2mL DCM萃取。合并的有機(jī)層用5％檸檬酸水溶液(2mL)和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，濃縮并經(jīng)反相制備型-HPLC純化，得到化合物89(36.1mg，收率41％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.07(d，J＝7.93Hz，2H)，1.18(s，1H)，1.20(s，9H)，1.24-1.27(m，J＝11.60Hz，3H)，1.30(s，3H)，1.43-1.48(m，10H)，1.59(s，1H)，1.65(s，1H)，1.87(dd，J＝8.24，5.19Hz，1H)，2.24(q，J＝9.16Hz，1H)，2.33-2.36(m，1H)，2.63(dd，J＝12.97，6.56Hz，1H)，2.94-2.99(m，1H)，3.92(s，3H)，3.93(s，1H)，4.12(dd，J＝11.60，3.05Hz，1H)，4.27-4.31(m，1H)，4.54(t，J＝9.77Hz，1H)，5.12(dd，J＝10.53，1.37Hz，1H)，5.30(d，J＝17.09Hz，1H)，5.79-5.83(m，1H)，5.85(s，1H)，7.11(dd，J＝8.55，1.83Hz，1H)，7.18(d，J＝2.24Hz，1H)，7.24(d，J＝5.49Hz，1H)，7.88(m，1H)，8.10(d，J＝8.85Hz，1H))；LC-MS(保留時(shí)間1.637min)，MS m/z 716(MH+)。
實(shí)施例91化合物91的制備 化合物91按照化合物89的相同方法制備化合物91，但作如下修改修改使用Boc-L-Thr-OH作為原料，得到化合物91(80.5mg，收率66％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.93(dd，J＝8.24，2.14Hz，2H)，1.08-1.18(m，4H)，1.20(d，J＝6.10Hz，3H)，1.29(s，9H)，1.32(dd，J＝9.61，5.04Hz，1H)，1.45(d，J＝4.27Hz，1H)，1.84(dd，J＝7.63，5.19Hz，1H)，2.15(q，J＝8.85Hz，1H)，2.42-2.48(m，1H)，2.64(dd，J＝14.04，7.63Hz，1H)，2.85-2.89(m，1H)，3.92(s，3H)，4.1-4.14(m，2H)，4.30(d，J＝4.88Hz，1H，4.38(d，J＝11.60Hz，1H)，4.60(t，J＝8.55Hz，1H)，5.04(dd，J＝10.22，1.68Hz，1H)，5.80-5.84(m，2H)，7.11(d，J＝9.16Hz，1H)，7.17(d，J＝1.83Hz，1H)，7.23(d，J＝5.80Hz，1H)，7.87(d，J＝5.80Hz，1H)，8.10(d，J＝8.85Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.560min)，MS m/z 702(MH+)。
實(shí)施例92化合物92的制備 化合物92按照化合物89的相同方法制備化合物92，但作如下修改修改使用Boc-L-Thr(Me)-OH作為原料，得到化合物92(47.1mg，收率69％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.95(d，J＝4.27Hz，2H)，1.11-1.16(m，3H)，1.18(d，J＝6.10Hz，6H)，1.32(s，9H)，1.38(dd，J＝9.31，5.04Hz，1H)，1.45(s，1H)，1.85(dd，J＝7.78，5.04Hz，1H)，2.13(d，J＝9.15Hz，1H)，2.46-2.51(m，1H)，2.63(dd，J＝14.19，7.78Hz，1H)，2.81-2.91(m，1H)，3.68-3.73(m，1H)，3.92(s，4H)，4.14(d，J＝12.21Hz，1H)，4.35(d，J＝5.80Hz，1H)，4.42(d，J＝11.29Hz，1H)，4.60(t，J＝8.70Hz，1H)，5.05(d，J＝10.68Hz，1H)，5.24(dd，J＝16.79，0.92Hz，1H)，5.81-5.85(m，2H)，7.11(dd，J＝9.16，0.92Hz，1H)，7.17(s，1H)，7.24(d，J＝5.80Hz，1H)，7.88(d，J＝5.80Hz，1H)，8.11(d，J＝8.55Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.660min)，MS m/z 716(MH+)。
實(shí)施例93化合物93的制備 化合物93按照化合物89的相同方法制備化合物93，但作如下修改修改使用Boc-L-Thr(tBu)-OH作為原料，得到化合物93(52.7mg，收率53％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.09(dd，J＝8.24，2.44Hz，2H)，1.201.24(m，3H)，1.28(s，9H)，1.45(s，9H)，1.89(dd，J＝7.93，5.19Hz，1H)，2.25(q，J＝8.34Hz，1H)，2.32-2.36(m，1H) 2.59(dd，J＝12.82，6.41Hz，1H)，2.95-3.00(m，1H)，3.71(s，2H)，3.92(s，3H)，3.93-3.99(m，1H)，4.10(d，J＝7.02Hz，1H)，4.15(d，J＝11.90Hz，1H)，4.22(dd，J＝6.10，2.44Hz，2H)，4.40(d，J＝11.60Hz，1H)，4.54(dd，J＝10.01，6.71Hz，1H)，5.13(d，J＝10.38Hz，1H)，5.31(d，J＝17.09Hz，1H)，5.76-5.83(m，1H)，5.87(s，1H)，6.06(d，J＝9.46Hz，1H)，6.36(d，J＝7.02Hz，1H)，7.11(d，J＝8.85Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.24(d，J＝5.49Hz，1H)，7.88(m，1H)，8.08(d，J＝9.16Hz，1H).
實(shí)施例94化合物94的制備 化合物94按照化合物89的相同方法制備化合物94，但作如下修改修改使用Boc-(2S，3S)-2-氨基-3-甲氧基丁酸作為原料，得到化合物94(150.2mg，收率80％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.04-1.13(m，3H)，1.17(d，J＝6.10Hz，3H)，1.20-1.24(m，2H)，1.27(s，9H)，1.44-1.48(m，2H)，1.86(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)，2.24(q，J＝8.65Hz，1H)，2.34-2.37(m，1H)，2.61(dd，J＝14.19，7.17Hz，1H)，2.94-2.99(m，1H)，3.66(m，1H)，3.92(s，3H)，4.13(dd，J＝12.36，3.81Hz，1H)，4.37(dd，J＝22.58，10.99Hz，2H)，4.54(dd，J＝10.38，7.63Hz，1H)，5.12(d，J＝10.68Hz，1H)，5.31(d，J＝17.40Hz，1H)，5.77-5.82(m，1H)，5.85(s，1H)，7.12(d，J＝9.16Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.25(d，J＝6.10Hz，1H)，7.89(d，J＝5.80Hz，1H)，8.10(d，J＝8.85Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.673min)，MS m/z 716(MH+)。
實(shí)施例95化合物95的制備方案1 實(shí)施例11，步驟5的產(chǎn)物 化合物95步驟1向H-allo-THr-OH(5.0g，41.98mmol)和DIEA(10.9g，83.96mmol)在DCM(150mL)中的混合物內(nèi)加入二碳酸二叔丁酯(13.7g，62.97mmol)。在室溫下攪拌14h后，將反應(yīng)混合物用3×100mL DCM洗滌。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。LC/MS表明大部分產(chǎn)物在水層中。因此，將水層濃縮。產(chǎn)物經(jīng)快速柱層析純化(SiO2，90∶10 DCM∶甲醇)，得到Boc-allo-THr-OH；LC-MS(保留時(shí)間0.727min)，MS m/z242(MNa+)。
步驟2向?qū)嵤├?1、步驟5的產(chǎn)物(100.0mg，0.174mmol)、DIEA(67.6mg，0.522mmol)和HATU(106.0mg，0.278mmol)的溶液中加入上述步驟1的產(chǎn)物(57.3mg，0.262mmol)。在室溫下攪拌3hr后，將反應(yīng)混合物用5％碳酸氫鈉水溶液(1mL)洗滌。水層用2×2mL DCM萃取。合并的有機(jī)層用5％檸檬酸水溶液(2mL)和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，濃縮并經(jīng)反相制備型-HPLC純化，得到化合物95(39.1mg，收率32％)
1HNMR(CD3OD，500MHz)δ1.02(d，J＝8.55Hz，1H)，1.18-1.23(m ，3H)，1.25(s，9H)，1.38(dd，J＝9.15，6.30Hz 1H)，1.84(dd，J＝7.93，5.19Hz，1H)，2.19-2.24(m，1H)，2.38-2.43(m，1H)，2.65(dd，J＝14.19，6.87Hz，1H)，2.92-2.96(m，1H)，3.92(s，3H)，3.93(s，2H)，4.16-4.19(m，1H)，4.23(d，J＝8.24Hz，1H)，4.44(d，J＝12.21Hz，1H)，4.57-5.81(m，1H)，5.09(d，J＝10.68Hz，1H)，5.29(d，J＝17.09Hz，1H)，5.75-5.81(m，1H)，5.83-5.85(m，1H)，7.11(d，J＝10.38Hz，1H)，7.18(d，J＝1.83Hz，1H)，7.24(d，J＝6.41Hz，1H)，7.88(d，J＝5.80Hz，1H)，8.11(d，J＝.16Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.583min)，MS m/z 702(MH+)。
實(shí)施例96化合物96的制備方案1 實(shí)施例11，步驟5的產(chǎn)物 化合物96按照化合物95的相同方法制備化合物96，但作如下修改修改步驟1使用(2S，3S)-2-氨基-3-乙氧基丁酸鹽酸鹽作為步驟1的原料，得到Boc-(2S，3S)-2-氨基-3-乙氧基丁酸；LC-MS(保留時(shí)間1.067min)，MS m/z 270(M+Na+)。
步驟2隨后按照相同的方法，使步驟1的產(chǎn)物與實(shí)施例11、步驟5的產(chǎn)物偶合，得到化合物96(55.3mg，收率44％)1HNMR(CD3OD，500MHz)δ0.94(t，J＝6.87Hz，1H)，0.97-1.03(m，2H)，1.08-1.11(m，2H)，1.13-1.15(m，2H)，1.17(d，J＝6.10Hz，6H)，1.29(s，9H)，1.41-1.45(m，3H)，1.85(dd，J＝7.48，5.34Hz，1H)，2.12-2.19(m，1H)，2.43-2.49(m，1H)，2.60(dd，J＝13.73，6.80Hz，1H)，2.89-2.93(m，1H)，3.50-3.57(m，2H)，3.73-3.78(m，1H)，3.92(s，3H)，4.18(d，J＝8.85Hz，1H)，4.35(d，J＝12.21Hz，1H)，4.39(d，J＝8.55Hz，1H)，4.53(t，J＝7.78Hz，1H)，5.07(d，J＝9.16Hz，1H)，5.25(d，J＝18.01Hz，1H)，5.82(t，J＝9.85Hz，1H)，5.88(t，J＝9.80Hz，1H)，7.11(d，J＝5.19Hz，1H)，7.18(d，J＝2.14Hz，1H)，7.24(d，J＝5.49Hz，1H)，7.88(d，J＝6.10Hz，1H)，8.10(d，J＝8.85Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.743min)，MS m/z 730(MH+)。
實(shí)施例97化合物97的制備方案1 實(shí)施例11，步驟5的產(chǎn)物 化合物97按照化合物95的相同方法制備化合物97，但作如下修改
修改步驟1使用H-allo-Thr(t-Bu)-OH作為步驟1的原料，得到Boc-(2S，3S)-2-氨基-3-乙氧基丁酸；LC-MS(保留時(shí)間1.363min)，MS m/z298(M+Na+)。
步驟2隨后按照相同的方法，使步驟1的產(chǎn)物與實(shí)施例11、步驟5的產(chǎn)物偶合，得到化合物97(48.2mg，收率37％)LC-MS(保留時(shí)間1.820min)，MS m/z 758(MH+)。
實(shí)施例99化合物99的制備 化合物99按照實(shí)施例55、步驟1的相同方法制備化合物99，但作如下修改修改使用化合物84作為原料，得到化合物99(60.3mg，收率98％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.00(q，J＝7.12Hz，3H)1.10-113(m，5H)1.20-1.31(m，3H)1.41(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)1.61-1.68(m，1H)1.92(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)2.04-2.09(m，1H)2.28(q，J＝8.55Hz，1H)2.34-2.39(m，1H)2.57(s，3H)2.64-2.70(m，1H)2.94-2.97(m，1H)3.93(s，3H)4.07-4.14(dd，J＝12.05，3.81Hz，1H)4.13(d，J＝6.10Hz，1H)4.18(d，J＝5.80Hz，1H)4.25(d，J＝12.21Hz，1H)4.66-4.73(m，1H)5.15(d，J＝10.68Hz，1H)5.32(d，J＝17.09Hz，1H)5.70-5.79(m，1H)5.92(t，J＝3.66Hz，0.4H)5.95(t，J＝3.66Hz，0.6H)7.17(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)7.22(d，J＝2.14Hz，1H)7.28(dd，J＝5.80，3.36Hz，1H)7.91(dd，J＝5.80，4.27Hz，1H)8.03(d，J＝8.85Hz，0.6H)8.07(d，J＝9.16Hz，0.4H)；LC-MS(保留時(shí)間1.33min)，MS m/z 6.28(MH+)。
實(shí)施例100化合物100的制備 化合物94 化合物100向化合物94(0.600g，0.838mmol)的DCE(3mL)溶液中加入TFA(3mL)。在室溫下攪拌15min后，將反應(yīng)混合物濃縮，所得的粘稠油狀物再次溶于DCE(5mL)并再次濃縮。隨后再次溶于DCM(2mL)中，用1N HCl/乙醚(10mL)溶液處理。將所得的懸浮液冷卻至0℃下，抽濾，用乙醚洗滌并在真空烘箱中干燥，得到雙鹽酸鹽產(chǎn)物，為白色固體物(527.1g，收率91％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.08-1.15(m，2H)，1.21(d，J＝6.71Hz，4H)，1.28-1.33(m，1H)，1.41(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.91(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)，2.28(q，J＝8.65Hz，1H)，2.34-2.37(m，1H)，2.68(dd，J＝13.12，7.02Hz，1H)，2.81(s，3H)，2.93-2.98(m，1H)，3.45(s，3H)，3.94(s，3H)，3.96-4.00(m，1H)，4.16(dd，J＝11.90，3.66Hz，1H)，4.27(d，J＝11.60Hz，1H)，4.59(d，J＝4.58Hz，1H)，4.69(dd，J＝10.07，7.02Hz，1H)，5.14(dd，J＝10.53，1.37Hz，1H)，5.32(d，J＝17.09Hz，1H)，5.70-5.77(m，1H)，5.94(t，J＝3.66Hz，1H)，7.19(d，J＝9.16Hz，1H)，7.24(s，1H)，7.32(s，1H)，7.91(d，J＝5.80Hz，1H)，8.09(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.213min)，MS m/z 616(MH+)。
實(shí)施例101化合物101的制備 化合物100化合物101向化合物100(80mg，0.116mmol)和DIEA(31.5mg，0.244mmol)在THF(2mL)中的溶液混合物內(nèi)加入碳酸N，N’-二琥珀酰亞胺酯(44.6mg，0.174mmol)。所得的懸浮液經(jīng)微波輻射加熱至80℃下反應(yīng)15min。隨后將其用叔戊胺(84.8mg，1.16mmol)處理。在室溫下攪拌15min后，將反應(yīng)物濃縮并經(jīng)反相制備型HPLC純化，得到化合物101(65.1mg，79％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.03-1.08(m，3H)，1.16(d，J＝6.41Hz，3H)，1.19(s，9H)，1.21-1.25(m，2H)，1.27(d，J＝6.10Hz，1H)，1.45(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)，1.85(dd，J＝8.24，5.19Hz，1H)，2.23(q，J＝9.46Hz，1H)，2.34-2.41.(m，1H)，2.61(dd，J＝14.34，7.32Hz，1H)，2.94-2.97(m，1H)，3.58-3.63(m，1H)，3.92(s，3H)，4.15(dd，J＝12.05，3.81Hz，1H)，4.39(d，J＝11.60Hz，1H)，4.55(dd，J＝9.92，7.48Hz，1H)，5.11(d，J＝10.68Hz，1H)，5.29(d，J＝17.40Hz，1H)，5.77-5.83(m，1H)，5.86(s，1H)，7.12(dd，J＝9.00，2.29Hz，1H)，7.18(d，J＝2.14Hz，1H)，7.24(d，J＝5.80Hz，1H)，7.88(d，J＝5.80Hz，1H)，8.10(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.617min)，MS m/z 715(MH+)。
實(shí)施例102化合物102的制備 化合物102按照化合物101的相同方法制備化合物102，但作如下修改修改使用叔戊胺作為原料，得到化合物102(62.5mg，收率74％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.77(t，J＝7.48Hz，2H)，0.84(t，J＝7.48Hz，1H)，1.04-1.08(m，2H)，1.13(d，J＝1.22Hz，9H)，1.16(d，J＝6.41Hz，3H)，1.21(s，1H)，1.22-1.28(m，2H)，1.44(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)，1.52-1.57(m，1H)，1.58-1.62(m，1H)，1.85(dd，J＝7.93，5.19Hz，1H)，2.21-2.25(m，1H)，2.34-2.39(m，1H)，2.61(dd，J＝13.58，7.17Hz，1H)，2.93-2.98(m，1H)，3.59-3.64(m，1H)，4.15(dd，J＝11.75，3.81Hz，1H)，4.38(d，J＝12.51Hz，1H)，4.50(d，J＝7.63Hz，1H)，4.55(dd，J＝9.92，7.78Hz，1H)，5.11(d，J＝9.77Hz，1H)，5.29(d，J＝16.79Hz，1H)，5.77-5.83(m，1H)，5.86(t，J＝4.73Hz，1H)，7.12(dd，J＝8.85，2.44Hz，1H)，7.18(d，J＝2.44Hz，1H)，7.24(d，J＝6.10Hz，1H)，7.88(d，J＝5.80Hz，1H)，8.10(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.690min)，MS m/z 729(MH+)。
實(shí)施例103化合物103的制備 化合物103按照化合物101的相同方法制備化合物103，但作如下修改修改使用環(huán)戊基胺作為原料，得到化合物103(56.4mg，收率67％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.01-108(m，2H)，1.07(d，J＝6.10Hz，1H)，1.16(d，J＝6.10Hz，3H)，1.21-1.25(m，3H)，1.30-1.33(m，1H)，1.44(dd，J＝9.77，5.19Hz，1H)，1.51-1.56(m，2H)，1.60-1.65(m，2H)，1.71-1.75(m，1H)，1.80-1.84(m，1H)，1.86(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)，2.20-2.25(m，1H)，2.37-2.41(m，1H)，2.61(dd，J＝14.04，7.32Hz，1H)，2.93-2.98(m，1H)，3.60-3.65(m，1H)，3.75-3.80(m，1H)，3.92(s，3H)，4.17(dd，J＝12.05，3.81Hz，1H)，4.37(d，J＝11.90Hz，1H)，4.55-4.59(m，2H)，5.10(d，J＝11.60Hz，1H)，5.29(d，J＝16.48Hz，1H)，5.78-5.83(m，1H)，5.85(d，J＝2.44Hz，1H)，7.13(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.18(d，J＝2.44Hz，1H)，7.24(d，J＝5.80Hz，1H)，7.88(d，J＝5.80Hz，1H)，8.09(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.607min)，MS m/z 727(MH+)。
實(shí)施例104化合物104的制備 化合物100 化合物104向化合物100(80mg，0.116mmol)和DIEA(31.5mg，0.244mmol)在THF(2mL)中的溶液混合物內(nèi)加入碳酸N，N’-二琥珀酰亞胺酯(44.6mg，0.174mmol)。將所得的懸浮液經(jīng)微波輻射加熱至80℃下反應(yīng)15min。隨后加入環(huán)戊醇鈉的漿狀液，該漿狀液通過(guò)在室溫下用NaH(60％裝于油中，46.4mg，1.16mmol)處理0℃的環(huán)戊醇(110mg，1.28mmol)的THF(1mL)溶液15min得到。在室溫下攪拌15min后，該反應(yīng)物用飽和氯化銨水溶液(1mL)猝滅并用EtOAc(5mL)萃取。隨后將有機(jī)層通過(guò)celite hydromatrix柱，濃縮并經(jīng)反相制備型-HPLC純化，得到化合物104(38.2mg，45％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.03-1.09(m，3H)，1.16(d，J＝6.10Hz，3H)，1.201.25(m，1H)，1.25-1.30(m，J＝10.22，5.34Hz，1H)，1.40-1.45(m，J＝10.83，3.81Hz，1H)，1.46(dd，J＝9.61，5.34Hz，1H)，1.58-1.63(m，3H)，1.70-1.75(m，2H)，1.86(dd，J＝7.63，5.49Hz，1H)，2.22-2.26(m，1H)，2.34-2.39(m，1H)，2.59-2.64(m，1H)，2.94-2.98(m，1H)，3.67(dd，J＝7.78，6.56Hz，1H)，3.92(s，3H)，4.13(dd，J＝10.83，4.12Hz，1H)，4.37-4.42(m，1H)，4.56(dd，J＝10.07，7.32Hz，1H)，4.71-4.76(m，1H)，5.12(d，J＝10.68Hz，1H)，5.31(d，J＝16.79Hz，1H)，5.80(m，1H)，5.85(s，1H)，7.13(d，J＝10.68Hz，1H)，7.19(d，J＝1.83Hz，1H)，7.25(d，J＝6.10Hz，1H)，7.89(d，J＝5.80Hz，1H)，8.09(d，J＝9.16Hz，1H)，；LC-MS(保留時(shí)間1.697min)，MS m/z 728(MH+)。
實(shí)施例105化合物105的制備 化合物100 化合物105向化合物100(80.0mg，0.116mmol)和DIEA(31.5mg，0.244mmol)在DCM(2mL)中的溶液混合物內(nèi)加入二碳酸二叔戊酯(57.1mg，0.232mmol)。在室溫下攪拌14h后，除去溶劑，產(chǎn)物經(jīng)反相制備型-HPLC純化，得到化合物105(62.5mg，收率74％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.79(t，J＝7.48Hz，3H)，1.04-1.08(m，3H)，1.17(d，J＝6.10Hz，3H)，1.19-1.23(s，3H)，1.24(s，3H)，1.39-1.43(m，1H)，1.46(dd，J＝9.61，5.34Hz，1H)，1.60-1.65(m，2H)，1.86(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)，2.22(q，J＝8.85Hz，1H)，2.35-2.40(m，1H)，2.61(dd，J＝14.04，7.15Hz，1H)，2.94-3.00(m，1H)，3.64-4.00(m，1H)，3.92(s，4H)，4.14(dd，J＝11.90，3.05Hz，1H)，4.35(d，J＝7.93Hz，1H)，4.40(d，J＝11.90Hz，1H)，4.55(dd，J＝9.31，7.78Hz，1H)，5.11(d，J＝10.68Hz，1H)，5.30(d，J＝16.79Hz，1H)，5.79-5.83(m，1H)，5.85(s，1H)，7.12(d，J＝9.16Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.25(d，J＝5.80Hz，1H)，7.86-7.90(m，1H)，8.09(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.740min)，MS m/z 730(MH+)。
實(shí)施例106化合物106的制備 化合物106按照化合物105的相同方法制備化合物106，但作如下修改修改使用碳酸吡啶-2-基酯·2，2，2-三氟-1，1-二甲基-乙酯作為原料，得到化合物106(58.1mg，收率65％)1HNMR(CD3OD，500MHz)δ1.04-1.08(m，3H)，1.17(d，J＝6.10Hz，3H)，1.19.1.23(m，1H)，1.23-1.27(m，1H)，1.28(s，3H)，1.46(dd，J＝9.46，5.19Hz，2H)，1.49(s，2H)，1.86(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)，2.21(q，J＝8.85Hz，1H)，2.36-2.40(m，1H)，2.62(dd，J＝13.74，7.32Hz，1H)，2.93-2.98(m，1H)，3.65-3.70(m，1H)，3.92(s，3H)，4.12(dd，J＝11.90，3.66Hz，1H)，4.31(d，J＝8.24Hz，1H)，4.42(d，J＝11.90Hz，1H)，4.57(dd，J＝10.07，7.32Hz，1H)，5.11(d，J＝10.38Hz，1H)，5.30(d，J＝16.79Hz，1H)，5.78-5.83(m，1H)，5.84(s，1H)，7.12(dd，J＝9.00，2.29Hz，1H)，7.19(d，J＝2.14Hz，1H)，7.25(d，J＝5.80Hz，1H)，7.89(d，J＝6.10Hz，1H)，8.09(d，J＝8.85Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.770min)，MS m/z 770(MH+)。
實(shí)施例107化合物107的制備 實(shí)施例25，步驟3的產(chǎn)物 化合物107向?qū)嵤├?5、步驟3的產(chǎn)物(100.0mg，0.116mmol)、DIEA(62.5mg，0.483mmol)和HATU(92.0mg，0.242mmol)的溶液中加入Boc-allo-Thr-OH(43.5mg，0.177mmol)。在室溫下攪拌3hr后，將反應(yīng)混合物用5％碳酸氫鈉水溶液(1mL)洗滌。水層用2×2mL DCM萃取。合并的有機(jī)層用5％檸檬酸水溶液(1mL)和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，濃縮并經(jīng)反相制備型-HPLC純化，得到化合物107(62.5mg，收率52％)1HNMR(CD3OD，500MHz)δ.8-1.02(m，1H)，1.04-1.08(m，2H)，1.23-1.27(m，12H)，1.42(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)，1.86(t，J＝6.26Hz，1H)，2.23-2.27(m，1H)，2.46-2.50(m，1H)，2.76(dd，J＝14.04，6.71Hz，1H)，2.95-2.99(m，1H)，3.94-3.98(m，1H)，4.28(d，J＝7.32Hz，2H)，4.52(d，J＝12.51Hz，1H)，4.63(t，J＝9.00Hz，1H)，5.12(d，J＝10.07Hz，1H)，5.31(d，J＝16.79Hz，1H)，5.77-5.83(m，1H)，6.09(s，1H)，7.36-741(m，1H)，7.47(t，J＝7.17Hz，3H)，7.52(d，J＝7.63Hz，1H)，7.70(t，J＝7.17Hz，1H)，7.85(s，1H)，7.88(d，J＝8.24Hz，1H)，8.17(d，J＝7.93Hz，2H)，8.22(d，J＝7.63Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.937min)，MS m/z 748(MH+)。
實(shí)施例108化合物108的制備 化合物108按照化合物107的相同方法制備化合物108，但作如下修改修改使用Boc-(2S，3S)-氨基-3-甲氧基丁酸作為原料，得到化合物108(75.1mg，收率51％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.80-1.02(m，4H)，1.18(d，J＝6.10Hz，3H)，1.28(s，9H)，1.44(dd，J＝9.77，1.30Hz，1H)，1.45-1.50(m，1H)，1.85-1.90(m，1H)，2.14-2.18(m，1H)，2.55-2.59(m，1H)，2.72-2.76(m，1H)，2.91-2.95(m，1H)，3.34(s，3H)，3.65-3.69(m，1H)，4.32(d，J＝10.68Hz，1H)，4.40(d，J＝7.93Hz，1H)，4.46(d，J＝13.12Hz，1H)，4.60(t，J＝8.24Hz，1H)，5.07(d，J＝9.46Hz，1H)，5.26(d，J＝17.40Hz，1H)，5.82-5.86(m，1H)，6.08(s，1H)，7.38(dd，J＝7.32，6.10Hz，1H)，7.47(t，J＝7.02Hz，3H)，7.51(d，J＝5.80Hz，1H)，7.69(t，J＝6.56Hz，1H)，7.69(t，J＝6.56Hz，1H)，7.85(s，1H)，7.88(d，J＝7.63Hz，1H)，8.18(d，J＝8.24Hz，3H)，8.21(d，J＝9.16Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.973min)，MS m/z 762(MH+)。
實(shí)施例109化合物109的制備 化合物109按照化合物107的相同方法制備化合物109，但作如下修改修改使用Boc-(2S，3S)-氨基-3-乙氧基丁酸作為原料，得到化合物109(57.2mg，收率47％)1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.02-1.08(m，4H)，1.17(d，J＝6.10Hz，6H)，1.19(s，1H)，1.19-1.24(m，1H)，1.23-1.27(m，J＝3.97Hz，1H)，1.30(s，9H)，1.44(dd，J＝9.77，5.50Hz，1H)，1.46(s，1H)，1.88(dd，J＝7.78，5.95Hz，1H)，2.20-1.25(m，1H)，2.49-2.54(m，1H)，2.69-2.73(m，1H)，2.93-2.97(m，1H)，3.53-3.57(m，2H)，3.75-3.80(m，1H)，4.34(dd，J＝11.75，3.20Hz，1H)，4.42(t，J＝8.30Hz，2H)，4.57(t，J＝8.09Hz，1H)，5.11(d，J＝10.38Hz，1H)，5.29(d，J＝17.40Hz，1H)，5.78-5.83(m，1H)，6.09(s，1H)，7.38(t，J＝7.32Hz，1H)，7.47(t，J＝7.63Hz，2H)，7.52(d，J＝7.02Hz，1H)，7.70(t，J＝7.93Hz，1H)，7.86(s，1H)，7.88(d，J＝7.93Hz，1H)，8.18(d，J＝7.32Hz，2H)，8.22(d，J＝8.24Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間2.030min)，MS m/z 776(MH+)。
實(shí)施例110化合物110的制備 化合物110按照化合物89的相同方法制備化合物110，但作如下修改修改使用Boc-L-Thr(Bn)-OH作為原料，得到化合物110(49.8mg，收率48％)；LC-MS(保留時(shí)間1.857min)，MS m/z 792(MH+)。
部分D實(shí)施例120化合物120的制備 化合物120
方案1 化合物23 化合物120步驟1將化合物23(參見(jiàn)實(shí)施例23)(1.50g，2.19mmol)在DCM(50mL)和三氟乙酸(50mL)中的溶液在室溫下攪拌3h。將混合物真空濃縮至得到粘稠剩余物，隨后溶于1，2-二氯乙烷并再真空濃縮，得到所需的雙-三氟乙酸鹽產(chǎn)物，為灰白色玻璃狀固體物(定量)。該物質(zhì)未經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一步驟中。
步驟2向?qū)嵤├?20、步驟1的產(chǎn)物(118mg，0.146mmol)的1，2-二氯乙烷(3mL)溶液中加入氯甲酸對(duì)甲苯酯(32.4mg，0.190mmol)和N，N-二異丙基乙胺(94.5mg，0.731mmol)。將混合物在室溫下攪拌72h。將反應(yīng)混合物用pH＝4的緩沖溶液(3×3mL)洗滌，將洗液用1，2-二氯乙烷(3mL)反萃取。合并有機(jī)相并真空濃縮。隨后將粗產(chǎn)物溶于甲醇中并經(jīng)反相制備型HPLC純化，得到題述化合物(化合物120)，為黃色玻璃狀固體物(64.2mg，收率61.1％)1H NMR(CD3OD)δ1.06-1.10(m，3H)，1.12(s，9H)，1.24-1.28(m，2H)，1.44(dd，J＝9.31，5.34Hz，1H)，1.89(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)，2.21-2.28(m，2H)，2.31(s，3H)，2.62-2.66(m，1H)，2.93-2.99(m，1H)，4.12(dd，J＝11.90，3.66Hz，1H)，4.42(d，J＝11.60Hz，1H)，4.57(dd，J＝10.22，7.17Hz，1H)，5.13(d，J＝10.38Hz，1H)，5.30(d，J＝17.09Hz，1H)，5.76(ddd，J＝17.09，9.77，9.46Hz，1H)，5.87(s，1H)，6.79(d，J＝8.24Hz，2H)，7.07(d，J＝8.24Hz，2H)，7.30(d，J＝6.10Hz，1H)，7.40(t，J＝7.63Hz，1H)，7.68(t，J＝7.63Hz，1H)，7.79(d，J＝8.24Hz，1H)，7.93(d，J＝5.80Hz，1H)，8.17(d，J＝8.24Hz，1H)；MS m/z 718(MH+).
實(shí)施例121化合物121的制備 化合物121按照實(shí)施例120、方案1的方法制備化合物121，不同之處在于在步驟2中使用氯甲酸苯酯代替氯甲酸對(duì)甲苯酯。
步驟2修改使用30mg(0.19mmol)氯甲酸苯酯，得到89.0mg產(chǎn)物，為黃色玻璃狀固體物(收率50％)MS m/z 704(MH+)。
實(shí)施例122化合物122的制備 化合物122按照實(shí)施例120、方案1的方法制備化合物122，不同之處在于在步驟2中使用氯甲酸4-氟苯酯代替氯甲酸對(duì)甲苯酯。
步驟2修改使用33mg(0.19mmol)氯甲酸4-氟苯酯，得到83.1mg產(chǎn)物，為黃色粘稠油狀物(收率78.8％)MS m/z 722(MH+)。
實(shí)施例123化合物123的制備 化合物123按照實(shí)施例120、方案1的方法制備化合物123，不同之處在于在步驟2中使用氯甲酸4-甲氧基苯酯代替氯甲酸對(duì)甲苯酯。
步驟2修改使用35mg(0.19mmol)氯甲酸4-甲氧基苯酯，得到70.2mg產(chǎn)物，為黃色玻璃狀固體物(收率65.4％)1H NMR(CD3OD)δ1.06-1.10(m，3H)，1.11(s，9H)，1.24-1.28(m，2H)，1.44(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.89(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)，2.24(q，J＝8.85Hz，1H)，2.31(ddd，J＝13.81，10.30，3.97Hz，1H)，2.62-2.66(m，1H)，2.94-2.98(m，1H)，3.77(s，3H)，4.12(dd，J＝11.60，3.66Hz，1H)，4.42(d，J＝11.60Hz，1H)，4.57(dd，J＝10.07，7.32Hz，1H)，5.13(d，J＝10.68Hz，1H)，5.30(d，J＝16.79Hz，1H)，5.72-5.80(m，1H)，5.87(s，1H)，6.80(d，J＝2.44Hz，4H)，7.30(d，J＝5.80Hz，1H)，7.42(t，J＝7.48Hz，1H)，7.69(t，J＝7.63Hz，1H)，7.80(d，J＝7.93Hz，1H)，7.93(d，J＝5.80Hz，1H)，8.18(d，J＝8.24Hz，1H)；MS m/z 734(MH+).
實(shí)施例124化合物124的制備 化合物124按照實(shí)施例120、方案1的方法制備化合物124，不同之處在于在步驟2中使用氯甲酸2-甲氧基乙酯代替氯甲酸對(duì)甲苯酯。
步驟2修改使用26mg(0.19mmol)氯甲酸2-甲氧基乙酯，得到87.4mg產(chǎn)物，為黃色粘稠油狀物(收率87.2％)
1H NMR(CD3OD)δ0.96-1.02(m，3H)，1.05(s，9H)，1.16-1.18(m，2H)，1.40(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)，1.85(dd，J＝7.93，5.19Hz，1H)，2.15(q，J＝8.75Hz，1H)，2.40(ddd，J＝13.89，10.07，4.12Hz，1H)，2.65(dd，J＝13.58，7.17Hz，1H)，2.90(ddd，J＝12.89，8.16，4.88Hz，1H)，3.27(s，3H)，3.36-3.44(m，2H)，3.81-3.84(m，1H)，3.92-3.96(m，1H)，4.12(dd，J＝11.60，3.36Hz，1H)，4.44(d，J＝11.60Hz，1H)，4.57(dd，J＝9.46，7.93Hz，1H)，5.07(d，J＝10.38Hz，1H)，5.25(d，J＝17.09Hz，1H)，5.80(ddd，J＝17.32，9.77，9.54Hz，1H)，5.87(s，1H)，7.32(d，J＝5.80Hz，1H)，7.55(t，J＝7.32Hz，1H)，7.70(t，J＝7.48Hz，1H)，7.80(d，J＝7.93Hz，1H)，7.96(d，J＝5.80Hz，1H)，8.19(d，J＝8.24Hz，1H)；MS m/z 686(MH+).
實(shí)施例125化合物125的制備 化合物125按照實(shí)施例120、方案1的方法制備化合物125，不同之處在于在步驟2中使用氯甲酸新戊酯代替氯甲酸對(duì)甲苯酯。
步驟2修改使用29mg(0.19mmol)氯甲酸新戊酯，得到57.4mg產(chǎn)物，為黃色玻璃狀固體物(收率56.2％)1H NMR(CD3OD)δ0.83(s，9H)，1.05(d，J＝2.44Hz，9H)，1.07-1.09(m，2H)，1.23-1.27(m，2H)，1.43-1.46(m，1H)，1.87-1.90(m，1H)，2.21-2.25(m，1H)，2.29-2.33(m，1H)，2.61-2.65(m，1H)，2.92-2.96(m，1H)，3.42(d，J＝10.07Hz，1H)，3.56(d，J＝10.07Hz，1H)，4.09-4.11(m，1H)，4.33(d，J＝9.16Hz，1H)，4.43(d，J＝11.29Hz，1H)，4.54-4.57(m，1H)，5.12(d，J＝10.07Hz，1H)，5.30(d，J＝17.40Hz，1H)，5.73-5.80(m，1H)，5.88(s，1H)，7.33(d，J＝5.49Hz，1H)，7.53(m，1H)，7.71(t，J＝6.87Hz，1H)，7.81(d，J＝7.93Hz，1H)，7.97(d，J＝5.80Hz，1H)，8.19(d，J＝7.63Hz，1H)；MS m/z 698(MH+).
實(shí)施例126化合物126的制備 化合物126按照實(shí)施例120、方案1的方法制備化合物126，不同之處在于在步驟2中使用氯甲酸2-氟乙酯代替氯甲酸對(duì)甲苯酯。
步驟2修改使用24mg(0.19mmol)氯甲酸2-氟乙酯，得到58.9mg產(chǎn)物，為黃色玻璃狀固體物(收率59.8％)1H NMR(CD3OD)δ1.05(d，J＝2.14Hz，9H)，1.07-1.09(m，2H)，1.22-1.27(m，2H)，1.42-1.45(m，1H)，1.87-1.90(m，1H)，2.24(q，J＝8.75Hz，1H)，2.28-2.33(m，1H)，2.63(dd，J＝13.43，6.41Hz，1H)，2.92-2.96(m，1H)，3.92-4.10(m，3H)，4.31-4.37(m，2H)，4.42-4.46(m，2H)，4.54-4.57(m，1H)，5.12(d，J＝10.38Hz，1H)，5.29(d，J＝17.09Hz，1H)，5.71-5.79(m，1H)，5.88(s，1H)，7.33(d，J＝5.80Hz，1H)，7.55(t，J＝7.17Hz，1H)，7.71(m，1H)，7.81(d，J＝7.93Hz，1H)，7.96(d，J＝5.80Hz，1H)，8.19(d，J＝7.63Hz，1H)；MS m/z 674(MH+).
實(shí)施例127化合物127的制備 化合物127按照實(shí)施例120、方案1的方法制備化合物127，不同之處在于在步驟2中使用氯甲酸2-甲氧基苯酯代替氯甲酸對(duì)甲苯酯。
步驟2修改使用35mg(0.19mmol)氯甲酸2-甲氧基苯酯，得到97.6mg產(chǎn)物，為黃色粘稠油狀物(收率91.0％)MS m/z 734(MH+)。
實(shí)施例128化合物128的制備 化合物128按照實(shí)施例120、方案1的方法制備化合物128，不同之處在于在步驟2中使用2-(-)-(1R)-氯甲酸薄荷基酯代替氯甲酸對(duì)甲苯酯。
步驟2修改使用42mg(0.19mmol)(-)-(1R)-氯甲酸薄荷基酯，得到69.1mg產(chǎn)物，為白色玻璃狀固體物(收率61.7％)MS m/z 766(MH+)。
實(shí)施例129化合物129的制備 化合物129按照實(shí)施例120、方案1的方法制備化合物129，不同之處在于在步驟2中使用氯甲酸己酯代替氯甲酸對(duì)甲苯酯。
步驟2修改使用31mg(0.19mmol)氯甲酸己酯，得到66.7mg產(chǎn)物，為黃色玻璃狀固體物(收率64.1％)1H NMR(CD3OD)δ0.87-0.99(m，5H)，1.05(s，9H)，1.07-1.09(m，2H)，1.22-1.28(m，6H)，1.43-1.48(m，3H)，1.88(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)，2.24(q，J＝8.85Hz，1H)，2.28-2.33(m，1H)，2.63(dd，J＝14.34，7.63Hz，1H)，2.92-2.97(m，1H)，3.72(dt，J＝10.61，6.60Hz，1H)，3.81-3.86(m，1H)，4.10(dd，J＝11.60，3.36Hz，1H)，4.32(d，J＝8.85Hz，1H)，4.43(d，J＝11.90Hz，1H)，4.55(dd，J＝9.77，7.32Hz，1H)，5.13(d，J＝10.38Hz，1H)，5.30(d，J＝17.09Hz，1H)，5.76(ddd，J＝17.09，10.07，9.16Hz，1H)，5.89(s，1H)，7.33(d，J＝5.80Hz，1H)，7.54(t，J＝7.48Hz，1H)，7.69-7.72(m，1H)，7.81(d，J＝8.24Hz，1H)，7.97(d，J＝6.10Hz，1H)，8.20(d，J＝8.24Hz，1H)；MS m/z 712(MH+).
實(shí)施例130化合物130的制備 化合物130方案1 化合物23 化合物130步驟1將化合物23(參見(jiàn)實(shí)施例23)(1.50g，2.19mmol)在DCM(50mL)和三氟乙酸(50mL)中的溶液在室溫下攪拌3h。將混合物真空濃縮至得到粘稠剩余物，隨后溶于1，2-二氯乙烷并再真空濃縮，得到所需的雙-三氟乙酸鹽產(chǎn)物，為灰白色玻璃狀固體物(定量)。該物質(zhì)未經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一步驟中。
步驟2將步驟1的產(chǎn)物(118mg，0.146mmol)、叔丁基乙酸(22mg，0.19mmol)、HATU(72mg，0.19mmol)和N-甲基嗎啉(59mg，0.58mmol)在1，2-二氯乙烷中的混合物在室溫下攪拌24h。將反應(yīng)混合物用pH＝4的緩沖溶液(3×3mL)洗滌，將洗液用1，2-二氯乙烷(3mL)反萃取。合并有機(jī)相并真空濃縮。隨后將粗產(chǎn)物溶于甲醇并經(jīng)反相制備型HPLC純化，得到題述化合物(化合物130)，為淺黃色玻璃狀固體物(43.4mg，43.5％收率)1H NMR(CD3OD)δ0.82(d，J＝1.83Hz，9H)，1.06(d，J＝2.14Hz，9H)，1.07-1.10(m，2H)，1.22-1.28(m，2H)，1.43-1.46(m，1H)，1.87-1.90(m，1H)，1.99(d，J＝1.83Hz，2H)，2.20-2.26(m，1H)，2.27-2.33(m，1H)，2.59-2.64(m，1H)，2.93-2.97(m，1H)，4.12-4.14(m，1H)，4.42(d，J＝11.60Hz，1H)，4.51-4.55(m，1H)，4.67(dd，J＝9.31，1.98Hz，1H)，5.11-5.14(m，1H)，5.29(d，J＝17.40Hz，1H)，5.72-5.80(m，1H)，5.89(d，J＝1.83Hz，1H)，7.32(dd，J＝5.80，2.14Hz，1H)，7.52-7.55(m，1H)，7.69-7.72(m，1H)，7.81(d，J＝8.24Hz，1H)，7.96(dd，J＝5.80，1.83Hz，1H)，8.17(d，J＝8.24Hz，1H)；MS m/z682(MH+).
實(shí)施例131化合物131的制備 化合物131按照實(shí)施例130、方案1的方法制備化合物131，不同之處在于在步驟2中使用甲氧基乙酸代替叔丁基乙酸。
步驟2修改使用17mg(0.19mmol)甲氧基乙酸，得到49.9mg產(chǎn)物，為淺黃色玻璃狀固體物(收率52.0％)1H NMR(CD3OD)δ1.05-1.08(m，11H)，1.24-1.26(m，2H)，1.45(ddd，J＝9.31，5.34，3.66Hz，1H)，1.88(ddd，J＝8.39，5.19，3.81Hz，1H)，2.21-2.27(m，1H)，2.29-2.35(m，1H)，2.60-2.64(m，1H)，2.91-2.97(m，1H)，3.34(d，J＝3.66Hz，314)，3.69(dd，J＝15.26，3.66Hz，1H)，3.81-3.85(m，1H)，4.15(dt，J＝11.67，3.62Hz，1H)，4.35(d，J＝11.90Hz，1H)，4.55(ddd，J＝10.30，6.94，3.20Hz，1H)，4.66(dd，J＝9.61，3.51Hz，1H)，5.11-5.14(m，1H)，5.28-5.32(m，1H)，5.73-5.81(m，1H)，5.90(d，J＝3.36Hz，1H)，7.33(dd，J＝5.65，3.20Hz，1H)，7.54-7.58(m，1H)，7.69-7.73(m，1H)，7.80-7.82(m，1H)，7.95-7.97(m，1H)，8.15(dd，J＝8.39，2.59Hz，1H)；MS m/z656(MH+)。
實(shí)施例132化合物132的制備 化合物132按照實(shí)施例130、方案1的方法制備化合物132，不同之處在于在步驟2中使用甲氧基丙酸代替叔丁基乙酸。
步驟2修改使用20mg(0.19mmol)甲氧基丙酸，得到50.0mg產(chǎn)物，為黃色玻璃狀固體物(收率51.1％)1H NMR(CD3OD)δ1.06(d，J＝1.83Hz，9H)，1.07-1.09(m，2H)，1.23-1.27(m，2H)，1.44(ddd，J＝9.38，5.26，1.83Hz，1H)，1.87-1.90(m，1H)，2.21-2.27(m，1H)，2.29-2.33(m，2H)，2.40-2.46(m，1H)，2.59-2.64(m，1H)，2.92-2.97(m，1H)，3.25(d，J＝1.83Hz，3H)，3.45-3.54(m，2H)，4.12-4.16(m，1H)，4.37(d，J＝11.60Hz，1H)，4.52-4.55(m，1H)，4.65(dd，J＝9.16，1.83Hz，1H)，5.12(d，J＝10.38Hz，1H)，5.30(d，J＝17.40Hz，1H)，5.72-5.80(m，1H)，5.89(s，1H)，7.33(dd，J＝5.65，1.98Hz，1H)，7.54-7.58(m，1H)，7.69-7.73(m，1H)，7.81(d，J＝8.24Hz，1H)，7.96(dd，J＝6.10，1.83Hz，1H)，8.18(d，J＝8.24Hz，1H)；MS m/z 670(MH+).
實(shí)施例133化合物133的制備 化合物133按照實(shí)施例130、方案1的方法制備化合物133，不同之處在于在步驟2中使用(S)-1，4-苯并二_烷-2-甲酸代替叔丁基乙酸。
步驟2修改使用35mg(0.19mmol)(S)-1，4-苯并二_烷-2-甲酸，得到54.0mg產(chǎn)物，為淺黃色玻璃狀固體物(49.5％收率)1H NMR(CD3OD)δ0.83(d，J＝3.36Hz，9H)，1.05-1.08(m，2H)，1.20-1.25(m，1H)，1.26-1.31(m，1H)，1.45-1.49(m，1H)，1.86-1.90(m，1H)，2.21-2.25(m，1H)，2.28-2.34(m，1H)，2.59-2.65(m，1H)，2.90-2.94(m，1H)，4.12-4.17(m，2H)，4.32(d，J＝11.90Hz，1H)，4.35-4.39(m，1H)，4.55-4.61(m，3H)，5.11-5.14(m，1H)，5.28-5.32(m，1H)，5.75-5.83(m，1H)，5.90(d，J＝3.66Hz，1H)，6.80-6.89(m，3H)，7.03-7.07(m，1H)，7.32-7.34(m，1H)，7.55-7.58(m，1H)，7.68-7.72(m，1H)，7.80-7.82(m，1H)，7.96-7.98(m，1H)，8.15-8.18(m，1H)；MS m/z746(MH+)。
實(shí)施例134化合物134的制備 化合物134方案1 實(shí)施例11，步驟5的產(chǎn)物化合物134步驟1將實(shí)施例11步驟5的產(chǎn)物(100mg，0.172mmol)、N-α-叔丁氧基羰基-L-苯基甘氨酸(45.3mg，0.180mmol)、HATU(84.9mg，0.223mmol)和N-甲基嗎啉(87.0mg，0.859mmol)在DMF(1.0mL)中的混合物在室溫下攪拌18h?；旌衔镏苯咏?jīng)反相制備型HPLC純化，得到29.7mg(收率23.6％)化合物134，為白色粉末
1HNMR(CD3OD)δ0.97-1.07(m，2H)，1.12-1.17(m，1H)，1.22-1.32(m，2H)，1.38(s，9H)，1.90(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)，2.20-2.28(m，2H)，2.54(dd，J＝13.58，6.56Hz，1H)，2.85-2.89(m，J＝8.24Hz，1H)，3.50(d，J＝10.99Hz，1H)，3.93(s，3H)，4.11(d，J＝11.60Hz，1H)，4.63(dd，J＝9.46，7.32Hz，1H)，5.13(dd，J＝10.38，1.53Hz，1H)，5.32(d，J＝17.09Hz，1H)，5.47(s，1H)，5.74-5.84(m，2H)，7.16-7.19(m，1H)，7.25(d，J＝5.80Hz，1H)，7.32-7.43(m，6H)，7.86(d，J＝5.80Hz，1H)，8.13(d，J＝9.16Hz，1H)；MS m/z 734(MH+).
實(shí)施例135化合物135的制備 化合物135按照實(shí)施例134、方案1的方法制備化合物135，不同之處在于在步驟1中使用N-α-叔丁氧基羰基-赤型-DL-β-甲基苯丙氨酸代替N-α-叔丁氧基羰基-L-苯甘氨酸。由N-α-叔丁氧基羰基-赤型DL β-甲基苯丙氨酸的混合物制備化合物135，將所得的兩種非對(duì)映異構(gòu)體經(jīng)反相制備型HPLC分離。該化合物為先從制備型HPLC柱中洗脫出的單一異構(gòu)體。分子的β-甲基苯丙氨酸部分的確切的立體化學(xué)構(gòu)型未知。
步驟1修改使用50.4mg(0.180mmol)N-α-叔丁氧基羰基-赤型-DL-β-甲基苯丙氨酸，得到29.7mg產(chǎn)物，為白色粉末(收率22.7％)1H NMR(CD3OD)δ1.11(d，J＝7.93Hz，2H)，1.15(d，J＝6.10Hz，3H)，1.24-1.32(m，11H)，1.44(dd，J＝9.16，5.19Hz，1H)，1.90-1.94(m，1H)2.25-2.29(m，1H)，2.36(t，J＝13.28Hz，1H)，2.62(dd，J＝13.58，7.17Hz，1H)，2.98-3.02(m，1H)，3.20-3.24(m，1H)，3.91(s，3H)，4.11(dd，J＝11.60，3.05Hz，1H)，4.51(d，J＝10.68Hz，1H)，4.57(dd，J＝10.07，7.32Hz，1H)，4.63(d，J＝12.21Hz，1H)，5.14(d，J＝10.07Hz，1H)，5.32(d，J＝16.79Hz，1H)，5.76-5.84(m，1H)，5.88(s，1H)，7.08(dd，J＝8.70，1.68Hz，1H)，7.16-7.18(m，2H)，7.23-7.27(m，5H)，7.89(d，J＝5.80Hz，1H)，8.09(d，J＝9.46Hz，1H)；MS m/z 762(MH+).
實(shí)施例136化合物136的制備 化合物136按照實(shí)施例134、方案1的方法制備化合物136，不同之處在于在步驟1中使用N-α-叔丁氧基羰基-赤型-DL-β-甲基苯丙氨酸代替N-α-叔丁氧基羰基-L-苯甘氨酸。由N-叔丁氧基羰基-赤型DL[β]-甲基苯丙氨酸的混合物制備化合物136，所得的兩種非對(duì)映異構(gòu)體經(jīng)反相制備型HPLC分離。該化合物為從制備型HPLC柱中較后洗脫出的單一異構(gòu)體。分子的β-甲基苯丙氨酸部分的確切立體化學(xué)構(gòu)型未知。
步驟1修改使用50.4mg(0.180mmol)N-α-叔丁氧基羰基-赤型-DL-β-甲基苯丙氨酸，得到26.3mg產(chǎn)物，為白色粉末(收率20.1％)1HNMR(CD3OD)δ1.04(s，1H)，1.13(d，J＝6.71Hz，3H)，1.12-1.17(m，2H)，1.30(s，9H)，1.33-1.36(m，1H)，1.41(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)，1.87(dd，J＝7.78，5.34Hz，1H)，2.29(q，J＝8.85Hz，1H)，2.36(ddd，J＝13.81，9.99，4.27Hz，1H)，2.54(dd，J＝13.58，7.17Hz，1H)，3.00-3.04(m，1H)，3.05-3.08(m，1H)，3.80(d，J＝11.90Hz，1H)，3.94(s，3H)，4.10(dd，J＝12.05，3.81Hz，1H)，4.53-4.57(m，1H)，4.59(d，J＝8.24Hz，1H)，5.14(d，J＝10.38Hz，1H)，5.34(d，J＝17.09Hz，1H)，5.78-5.85(m，2H)，6.75(t，J＝7.32Hz，1H)，7.03(t，J＝7.48Hz，2H)，7.12(s，1H)，7.14(s，1H)，7.19(dd，J＝9.31，1.68Hz，1H)，7.22(s，1H)，7.28(d，J＝6.10Hz，1H)，7.89(d，J＝5.80Hz，1H)，8.03(d，J＝8.85Hz，1H)；MS m/z 762(MH+).
實(shí)施例137化合物137的制備 化合物137
方案1 實(shí)施例11，步驟5的產(chǎn)物 化合物137步驟1將實(shí)施例11、步驟5的產(chǎn)物(100mg，0.172mmol)、N-α-叔丁氧基羰基-L-天冬氨酸4-芐酯(59.5mg，0.180mmol)、HATU(84.9mg，0.223mmol)和N-甲基嗎啉(87.0mg，0.859mmol)在DCM(3.0mL)中的混合物在室溫下攪拌18h。將反應(yīng)混合物用pH＝4的緩沖溶液(3×3mL)洗滌，將洗液用DCM(3mL)反萃取。合并有機(jī)相并真空濃縮。隨后將粗產(chǎn)物溶于甲醇中并經(jīng)反相制備型HPLC純化，得到化合物137，為淺灰白色玻璃狀固體物(26.0mg，收率18.8％)
1HNMR(CD3OD)δ0.95-1.01(m，2H)，1.16(s，9H)，1.22-1.29(m，2H)，1.44(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)，1.86(dd，J＝7.93，5.19Hz，1H)，2.26(q，J＝8.85Hz，1H)，2.32-2.37(m，1H)，2.61(dd，J＝13.73，7.32Hz，1H)，2.66(dd，J＝16.48，6.10Hz，1H)，2.89(ddd，J＝12.67，8.09，4.88Hz，1H)，3.05(dd，J＝6.63，8.39Hz，1H)，3.92(s，3H)，4.04-4.07(m，1H)，4.47(d，J＝11.90Hz，1H)，4.52-4.56(m，1H)，4.75(dd，J＝8.24，6.41Hz，1H)，5.12-5.14(m，1H)，5.14(s，2H)，5.31(d，J＝17.09Hz，1H)，5.75-5.82(m，2H)，7.12(d，J＝9.16Hz，1H)，7.18(d，J＝2.14Hz，1H)，7.24(d，J＝5.80Hz，1H)，7.31-7.33(m，1H)，7.36(t，J＝7.32Hz，2H)，7.39(s，1H)，7.41(s，1H)，7.88(d，J＝6.10Hz，1H)，8.10(d，J＝9.16Hz，1H)；MS m/z 806(MH+).
實(shí)施例138化合物138的制備 化合物138按照實(shí)施例137、方案1的方法制備化合物138，不同之處在于在步驟1中使用N-叔丁氧基羰基-L-天冬氨酸4-甲基酯代替N-α-叔丁氧基羰基-L-天冬氨酸4-芐酯。
步驟1修改使用45.5mg(0.180mmol)N-叔丁氧基羰基-L-天冬氨酸4-甲酯，得到93.5mg產(chǎn)物，為灰白色玻璃狀固體物(收率74.6％)
1H NMR(CD3OD)δ1.07-1.09(m，2H)，1.17(s，9H)，1.20-1.29(m，2H)，1.41-1.44(m，1H)，1.84-1.86(m，1H)，2.26(q，J＝8.85Hz，1H)，2.33-2.38(m，1H)，2.58-2.64(m，2H)，2.92-3.02(m，2H)，3.69(s，3H)，3.92(s，3H)，4.15(dd，J＝11.44，2.29Hz，1H)，4.49-4.56(m，2H)，4.72-4.76(m，1H)，5.13(d，J＝10.38Hz，1H)，5.32(d，J＝17.09Hz，1H)，5.74-5.82(m，1H)，5.87(s，1H)，7.12(d，J＝9.16Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.24(d，J＝5.80Hz，1H)，7.88(dd，J＝5.80，0.92Hz，1H)，8.10(d，J＝8.85Hz，1H)；MS m/z 730(MH+).
實(shí)施例139化合物139的制備 化合物139按照實(shí)施例137、方案1的方法制備化合物139，不同之處在于在步驟1中使用N-叔丁氧基羰基-L-天冬氨酸4-叔丁酯代替N-α-叔丁氧基羰基-L-天冬氨酸4-芐酯。
步驟1修改使用52.2mg(0.180mmol)N-叔丁氧基羰基-L-天冬氨酸4-叔丁酯，得到125mg產(chǎn)物，為灰白色玻璃狀固體物(收率99.8％)
1HNMR(CD3OD)δ1.08-1.10(m，2H)，1.17(s，9H)，1.21-1.29(m，2H)，1.46(s，10H)，1.82(dd，J＝7.78，5.34Hz，1H)，2.26(q，J＝8.75Hz，1H)，2.32-2.38(m，1H)，2.51(dd，J＝16.33，7.17Hz，1H)，2.63(dd，J＝14.04，7.02Hz，1H)，2.89(dd，J＝16.48，7.63Hz，1H)，2.92-2.98(m，1H)，3.92(s，3H)，4.15(dd，J＝11.60，3.05Hz，1H)，4.50-4.57(m，2H)，4.70-4.75(m，1H)，5.13(dd，J＝10.38，1.53Hz，1H)，5.32(d，J＝17.40Hz，1H)，5.76-5.83(m，1H)，5.87(s，1H)，7.13(dd，J＝8.85，1.53Hz，1H)，7.18(d，J＝2.14Hz，1H)，7.25(d，J＝5.80Hz，1H)，7.88(d，J＝5.80Hz，1H)，8.10(d，J＝9.16Hz，1H)；MS m/z 772(MH+).
實(shí)施例140化合物140的制備 化合物140方案1 化合物138 化合物140
將化合物138(50.0mg，0.0685mmol)溶于THF(1mL)、甲醇(1mL)和1.0M氫氧化鈉水溶液(0.137mL，0.137mmol)的混合物中。3小時(shí)后，加入1.0M鹽酸(0.137mL，0.137mmol)中和反應(yīng)混合物。將粗品混合物真空濃縮，隨后加入pH＝4的緩沖溶液(3mL)和DCM(3mL)并將混合物搖蕩。分離各層，水層再次用DCM(2×1mL)萃取。將有機(jī)相合并，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾并真空濃縮，得到48.0mg(收率97.9％)化合物140，為類白色玻璃狀固體物1H NMR(CD3OD)δ1.04-1.07(m，2H)，1.17(s，9H)，1.22-1.25(m，2H)，1.38(dd，J＝9.31，5.34Hz，1H)，1.78(dd，J＝7.78，5.34Hz，1H)，2.30(q，J＝8.75Hz，1H)，2.37-2.42(m，1H)，2.48(dd，J＝15.87，4.58Hz，1H)，2.72(dd，J＝13.12，7.63Hz，1H)，2.88(dd，J＝15.72，10.53Hz，1H)，2.90-2.95(m，1H)，3.92(s，3H)，4.21(dd，J＝11.44，2.90Hz，1H)，4.57(t，J＝8.70Hz，1H)，4.62-4.65(m，2H)，5.10(d，J＝10.68Hz，1H)，5.34(d，J＝17.09Hz，1H)，5.69-5.76(m，1H)，5.83(s，1H)，7.10(d，J＝9.16Hz，1H)，7.17(s，1H)，7.23(d，J＝6.10Hz，1H)，7.88(d，J＝6.10Hz，1H)，8.12(d，J＝8.85Hz，1H)；MS m/z 716(MH+).
實(shí)施例141化合物141的制備 化合物141
方案1 實(shí)施例55，步驟1的產(chǎn)物 化合物141步驟1將實(shí)施例55、步驟1的產(chǎn)物(65mg，0.0947mmol)、碳酸N，N’-二琥珀酰亞胺酯(41.0mg，0.142mmol)和N，N-二異丙基乙胺(30.6mg，0.237mmol)與無(wú)水THF(1mL)混合，將所得的懸浮液在微波反應(yīng)器中加熱至80℃下反應(yīng)15min。冷卻至室溫后，將該粗品混合物直接用于下一步驟。
步驟2將步驟1的粗品反應(yīng)混合物用L-纈氨酸甲酯鹽酸鹽(159mg，0.947mmol)和N，N-二異丙基乙胺(122mg，0.947mmol)在無(wú)水THF(2mL)中的混合物處理。將所得的混合物在室溫下攪拌18h。真空除去溶劑，將剩余物溶于DCM(2mL)中，用pH＝4的緩沖溶液(3×2mL)洗滌。將緩沖液洗液合并并用DCM(2mL)反萃取。將合并的DCM相真空濃縮，將所得的剩余物溶于甲醇中并經(jīng)反相制備型HPLC純化，得到38.1mg(收率52.2％)化合物141，為白色粉末1H NMR(CD3OD)δ0.83(dd，J＝6.87，3.81Hz，6H)， 1.06(s，11H)，1.21-1.26(m，2H)，1.41(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.87(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)，1.95-2.02(m，1H)，2.21(q，J＝8.85Hz，1H)，2.29(ddd，J＝13.89，9.92，4.27Hz，1H)，2.60(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)，2.91-2.97(m，1H)，3.67(s，3H)，3.93(s，3H)，4.00(d，J＝5.49Hz，1H)，4.09(dd，J＝11.90，3.97Hz，1H)，4.40-4.43(m，2H)，4.52(dd，J＝10.07，7.02Hz，1H)，5.11(dd，J＝10.38，1.53Hz，1H)，5.28(dd，J＝17.09，1.22Hz，1H)，5.75(ddd，J＝17.17，10.15，9.00Hz，1H)，5.83(s，1H)，7.11(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.18(d，J＝2.44Hz，1H)，7.24(d，J＝5.80Hz，1H)，7.87(d，J＝6.10Hz，1H)，8.10(d，J＝8.85Hz，1H)；MS m/z 771(MH+).
實(shí)施例142化合物142的制備 化合物142按照實(shí)施例141、方案1的方法制備化合物142，不同之處在于在步驟2中使用D-纈氨酸甲酯鹽酸鹽代替L-纈氨酸甲酯鹽酸鹽。
步驟2修改使用159mg(0.947mmol)D-纈氨酸甲酯鹽酸鹽，得到23.0mg產(chǎn)物，為白色粉末(收率31.5％)1H NMR(CD3OD)δ0.88(dd，J＝13.89，6.87Hz，6H)，1.06(s，9H)，1.07-1.09(m，2H)，1.23-1.27(m，2H)，1.41(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.88(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)，2.01-2.07(m，1H)，2.23(q，J＝9.05Hz，1H)，2.31(ddd，J＝l4.11，9.99，4.27Hz，1H)，2.63(dd，J＝13.89，7.17Hz，1H)，2.93-2.98(m，1H)，3.62(s，3H)，3.96(s，3H)，4.03(d，J＝5.19Hz，1H)，4.09(dd，J＝11.75，3.81Hz，1H)，4.38(s，1H)，4.48-4.54(m，2H)，5.12(dd，J＝10.38，1.22Hz，1H)，5.29(dd，J＝17.24，1.07Hz，1H)，5.70-5.77(m，1H)，5.83(s，1H)，7.22(dd，J＝9.00，2.59Hz，1H)，7.25(d，J＝2.44Hz，1H)，7.35(d，J＝6.10Hz，1H)，7.87(d，J＝6.10Hz，1H)，8.16(d，J＝9.16Hz，1H)；MS m/z 771(MH+).
實(shí)施例143化合物143的制備 化合物143按照實(shí)施例137、方案1的方法制備化合物143，不同之處在于在步驟1中使用N-叔丁氧基羰基-L-環(huán)己基甘氨酸代替N-α-叔丁氧基羰基-L-天冬氨酸4-芐酯。
步驟1修改使用46.2mg(0.180mmol)N-叔丁氧基羰基-L-環(huán)己基甘氨酸，得到93.9mg產(chǎn)物，為白色粉末(收率73.8％)
1H NMR(CD3OD)δ1.04-1.08(dd，J＝7.78，2.29Hz，4H)，1.19-1.26(m，4H)，1.25(s，9H)，1.41(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)，1.63-1.82(m，7H)，1.88(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)，2.22(q，J＝9.05Hz，1H)，2.32-2.37(m，1H)，2.59(dd，J＝13.58，6.87Hz，1H)，2.91-2.96(m，1H)，3.92(s，3H)，4.05(dd，J＝11.75，3.20Hz，1H)，4.09(d，J＝8.85Hz，1H)，4.47(d，J＝11.90Hz，1H)，4.53(dd，J＝10.22，7.17Hz，1H)，5.11(d，J＝10.38Hz，1H)，5.29(d，J＝16.79Hz，1H)，5.79(ddd，J＝16.86，9.92，9.54Hz，1H)，5.84(s，1H)，7.10(d，J＝8.85Hz，1H)，7.17(d，J＝1.53Hz，1H)，7.24(d，J＝5.80Hz，1H)，7.88(d，J＝6.10Hz，1H)，8.09(d，J＝8.85Hz，1H)；MS m/z 740(MH+).
實(shí)施例144化合物144的制備 化合物144按照實(shí)施例141、方案1的方法制備化合物144，不同之處在于在步驟2中擴(kuò)大規(guī)模并使用甘氨酸甲酯鹽酸鹽代替L-纈氨酸甲酯鹽酸鹽。
步驟1修改使用100mg(0.146mmol)實(shí)施例55、步驟1的產(chǎn)物；62.2mg(0.219mmol)碳酸N，N’-二琥珀酰亞胺酯；47.0mg(0.364mmol)N，N-二異丙基乙胺。
步驟2修改使用183mg(1.46mmol)甘氨酸甲酯鹽酸鹽、188mg(1.46mmol)N，N-二異丙基乙胺，得到56.3mg產(chǎn)物，為白色粉末(收率52.9％)1H NMR(CD3OD)δ1.01-1.04(m，2H)，1.05(s，9H)，1.17-1.21(m，2H)，1.40(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.85(dd，J＝7.78，5.34Hz，1H)，2.18(q，J＝8.55Hz，1H)，2.33(ddd，J＝13.89，9.92，4.27Hz，1H)，2.61(dd，J＝13.73，7.32Hz，1H)，2.89-2.94(M，1H)，3.65(s，3H)，3.69-3.77(m，2H)，3.92(s，3H)，4.10(dd，J＝11.75，3.81Hz，1H)，4.40-4.42(m，2H)，4.53(dd，J＝9.92，7.17Hz，1H)，5.08(d，J＝10.38Hz，1H)，5.26(d，J＝17.09Hz，1H)，5.77(ddd，J＝17.09，10.22，9.00Hz，1H)，5.83(s，1H)，7.13(dd，J＝8.85，2.44Hz，1H)，7.17(s，1H)，7.23(d，J＝5.80Hz，1H)，7.87(d，J＝5.80Hz，1H)，8.09(d，J＝8.85Hz，1H)；MS m/z 729(MH+).
實(shí)施例145化合物145的制備 化合物145按照實(shí)施例141、方案1的方法制備化合物145，不同之處在于擴(kuò)大規(guī)模并在步驟2中使用L-丙氨酸甲酯鹽酸鹽代替L-纈氨酸甲酯鹽酸鹽。
步驟1修改使用100mg(0.146mmol)實(shí)施例55、步驟1的產(chǎn)物；62.2mg(0.219mmol)碳酸N，N’-二琥珀酰亞胺酯；47.0mg(0.364mmol)N，N-二異丙基乙胺。
步驟2修改使用203mg(1.46mmol)L-丙氨酸甲酯鹽酸鹽，188mg(1.46mmol)N，N-二異丙基乙胺，得到64.3mg產(chǎn)物，為白色粉末(收率59.3％)1H NMR(CD3OD)δ0.97-1.02(m，2H)，1.05(s，9H)，1.19(d，J＝7.02Hz，3H)，1.18-1.22(m，2H)，1.41(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)，1.86(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)，2.19(q，J＝8.85Hz，1H)，2.32(ddd，J＝13.81，9.84，4.43Hz，1H)，2.61(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)，2.93(ddd，J＝12.82，8.09，4.73Hz，1H)，3.65(s，3H)，3.93(s，3H)，3.99(q，J＝7.22Hz，1H)，4.08(dd，J＝11.75，3.81Hz，1H)，4.38(s，1H)，4.42(d，J＝11.60Hz，1H)，4.53(dd，J＝10.07，7.32Hz，1H)，5.09(dd，J＝10.38，1.53Hz，1H)，5.27(dd，J＝17.09，1.22Hz，1H)，5.77(ddd，J＝17.09，10.07，9.16Hz，1H)，5.82(s，1H)，7.13(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.18(d，J＝2.44Hz，1H)，7.24(d，J＝5.80Hz，1H)，7.87(d，J＝5.80Hz，1H)，8.10(d，J＝9.16Hz，1H)；MSm/z 743(MH+).
實(shí)施例146化合物146的制備 化合物146按照實(shí)施例141、方案1的方法制備化合物147，不同之處在于擴(kuò)大規(guī)模并在步驟2中使用L-叔-亮氨酸甲酯鹽酸鹽代替L-纈氨酸甲酯鹽酸鹽。
步驟1修改使用100mg(0.146mmol)實(shí)施例55、步驟1的產(chǎn)物；62.2mg(0.219mmol)碳酸N，N’-二琥珀酰亞胺酯；47.0mg(0.364mmol)N，N-二異丙基乙胺。
步驟2修改使用265mg(1.46mmol)L-叔-亮氨酸甲酯鹽酸鹽、188mg(1.46mmol)N，N-二異丙基乙胺，得到68.3mg產(chǎn)物，為白色粉末(收率59.6％)1H NMR(CD3OD)δ0.88(s，9H)，0.97-1.03(m，2H)，1.06(s，9H)，1.18-1.24(m，2H)，1.41(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.86(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)，2.19(q，J＝8.75Hz，1H)，2.30(ddd，J＝13.89，10.07，4.43Hz，1H)，2.60(dd，J＝13.73，7.32Hz，1H)，2.91-2.96(m，1H)，3.65(s，3H)，3.91(s，1H)，3.93(s，3H)，4.09(dd，J＝11.60，3.97Hz，1H)，4.38(s，1H)，4.43(d，J＝11.60Hz，1H)，4.51(dd，J＝10.07，7.32Hz，1H)，5.10(dd，J＝10.38，1.53Hz，1H)，5.27(dd，J＝17.24，1.37Hz，1H)，5.76(ddd，J＝17.09，10.07，9.16Hz，1H)，5.82(s，1H)，7.12(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.18(d，J＝2.14Hz，1H)，7.24(d，J＝6.10Hz，1H)，7.87(d，J＝5.80Hz，1H)，8.11(d，J＝9.16Hz，1H)；MS m/z 785(MH+).
實(shí)施例147化合物147的制備 化合物147按照實(shí)施例141、方案1的方法制備化合物147，不同之處在于擴(kuò)大規(guī)模并在步驟2中使用L-組氨酸甲酯鹽酸鹽代替L-纈氨酸甲酯鹽酸鹽，并在步驟2中使用2倍量的N，N-二異丙基乙胺。
步驟1修改使用100mg(0.146mmol)實(shí)施例55、步驟1的產(chǎn)物；62.2mg(0.219mmol)碳酸N，N’-二琥珀酰亞胺酯；47.0mg(0.364mmol)N，N-二異丙基乙胺。
步驟2修改使用352mg(1.46mmol)L-組氨酸甲酯鹽酸鹽、377mg(2.91mmol)N，N-二異丙基乙胺，得到51.0mg產(chǎn)物，為白色粉末(收率43.2％)1H NMR(CD3OD)δ1.04(s，11H)，1.20-1.22(m，2H)，1.41(ddd，J＝9.46，5.34，1.07Hz，1H)，1.86-1.88(m，1H)，2.23(q，J＝8.75Hz，1H)，2.28-2.33(m，1H)，2.60(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)，2.92(d，J＝6.41Hz，2H)，2.92-2.96(m，1H)，3.64(s，3H)，3.91(d，J＝1.53Hz，3H)，4.04(dd，J＝11.90，3.66Hz，1H)，4.35(s，1H)，4.36-4.41(m，2H)，4.53(dd，J＝9.77，7.63Hz，1H)，5.10(d，J＝10.38Hz，1H)，5.28(d，J＝17.40Hz，1H)，5.73-5.78(m，1H)，5.81(s，1H)，6.82(s，1H)，7.06-7.09(m，1H)，7.15(s，1H)，7.23(d，J＝5.80Hz，1H)，7.63(s，1H)，7.87(dd，J＝5.80，1.22Hz，1H)，8.08(d，J＝9.16Hz，1H)；MS m/z 809(MH+).
實(shí)施例148化合物148的制備 化合物148按照實(shí)施例141、方案1的方法制備化合物148，不同之處在于在步驟2中擴(kuò)大規(guī)模并使用L-纈氨酸乙酯鹽酸鹽代替L-纈氨酸甲酯鹽酸鹽。
步驟1修改使用100mg(0.146mmol)實(shí)施例55、步驟1的產(chǎn)物；62.2mg(0.219mmol)碳酸N，N’-二琥珀酰亞胺酯；47.0mg(0.364mmol)N，N-二異丙基乙胺。
步驟2修改使用265mg(1.46mmol)L-纈氨酸乙酯鹽酸鹽、188mg(1.46mmol)N，N-二異丙基乙胺，得到69.2mg產(chǎn)物，為白色粉末(收率60.4％)
1H NMR(CD3OD)δ0.83(dd，J＝6.71，5.19Hz，6H)，1.01-1.03(m，2H)，1.06(s，9H)，1.17-1.22(m，2H)，1.23(t，J＝7.17Hz，3H)，1.40(dd，J＝9.46，5.19Hz，1H)，1.86(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)，1.95-2.02(m，1H)，2.18(q，J＝9.05Hz，1H)，2.33(ddd，J＝13.89，9.92，4.27Hz，1H)，2.60(dd，J＝13.89，7.17Hz，1H)，2.92(ddd，J＝12.82，8.09，4.73Hz，1H)，3.93(s，3H)，3.98(d，J＝5.19Hz，1H)，4.08-4.17(m，3H)，4.41(s，1H)，4.41-4.43(m，1H)，4.52(dd，J＝10.07，7.32Hz，1H)，5.09(dd，J＝10.38，1.53Hz，1H)，5.26(dd，J＝17.09，1.22Hz，1H)，5.77(ddd，J＝17.09，10.07，9.16Hz，1H)，5.82(s，1H)，7.12(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.18(d，J＝2.44Hz，1H)，7.23(d，J＝6.10Hz，1H)，7.87(d，J＝6.10Hz，1H)，8.10(d，J＝9.16Hz，1H)；MS m/z 785(MH+).
實(shí)施例149化合物149的制備 化合物149按照實(shí)施例137、方案1的方法制備化合物149，不同之處在于在步驟1中使用N-叔丁氧基羰基-L-環(huán)戊基甘氨酸二環(huán)己基胺鹽代替N-α-叔丁氧基羰基-L-天冬氨酸4-芐酯。
步驟1修改使用76.2mg(0.180mmol)N-叔丁氧基羰基-L-環(huán)戊基甘氨酸二環(huán)己基胺鹽，得到111mg產(chǎn)物，為白色粉末(收率89.3％)
1H NMR(CD3OD)δ0.98(d，J＝8.24Hz，2H)，1.15-1.18(m，2H)，1.24(s，9H)，1.29-1.32(m，J＝18.01Hz，2H)，1.38-1.40(m，1H)，1.44(dd，J＝4.88，1.53Hz，1H)，1.49-1.55(m，2H)，1.62-1.67(m，2H)，1.74-1.80(m，1H)，1.85-1.88(m，1H)，2.16(q，J＝8.75Hz，1H)，2.21-2.26(m，1H)，2.42(t，J＝11.90Hz，1H)，2.60-2.64(m，1H)，2.89-2.93(m，1H)，3.92(d，J＝1.53Hz，3H)，4.06-4.11(m，2H)，4.51-4.57(m，2H)，5.07(d，J＝10.38Hz，1H)，5.25(d，J＝17.09Hz，1H)，5.78-5.85(m，2H)，7.10(d，J＝8.85Hz，1H)，7.17(s，1H)，7.23(d，J＝4.27Hz，1H)，7.88(dd，J＝5.95，1.68Hz，1H)，8.10(d，J＝9.16Hz，1H)；MS m/z 726(MH+).
實(shí)施例150化合物150的制備 化合物150按照實(shí)施例141、方案1的方法制備化合物150，不同之處在于在步驟2中擴(kuò)大規(guī)模并使用L-纈氨酸芐酯鹽酸鹽代替L-纈氨酸甲酯鹽酸鹽。
步驟1修改使用100mg(0.146mmol)實(shí)施例55、步驟1的產(chǎn)物；62.2mg(0.219mmol)碳酸N，N’-二琥珀酰亞胺酯；47.0mg(0.364mmol)N，N-二異丙基乙胺。
步驟2修改使用356mg(1.46mmol)L-纈氨酸芐酯鹽酸鹽、188mg(1.46mmol)N，N-二異丙基乙胺，得到41.0mg產(chǎn)物，為白色粉末(收率33.2％)MS m/z 848(MH+)。
實(shí)施例151化合物151的制備 化合物151按照實(shí)施例141、方案1的方法制備化合物151，不同之處在于在步驟2中擴(kuò)大規(guī)模并使用L-異亮氨酸甲酯鹽酸鹽代替L-纈氨酸甲酯鹽酸鹽。
步驟1修改使用100mg(0.146mmol)實(shí)施例55、步驟1的產(chǎn)物；62.2mg(0.219mmol)碳酸N，N’-二琥珀酰亞胺酯；47.0mg(0.364mmol)N，N-二異丙基乙胺。
步驟2修改使用265mg(1.46mmol)L-異亮氨酸甲酯鹽酸鹽、188mg(1.46mmol)N，N-二異丙基乙胺，得到75.5mg產(chǎn)物，為白色粉末(收率65.9％)
1H NMR(CD3OD)δ0.78-0.80(m，3H)，0.83-0.84(m，3H)，0.90-0.95(m，1H)，1.01-1.03(m，2H)，1.06(d，J＝3.05Hz，9H)，1.17-1.21(m，2H)，1.32-1.42(m，2H)，1.68-1.72(m，1H)，1.84-1.87(m，1H)，2.14-2.20(m，1H)，2.30-2.36(m，1H)，2.57-2.62(m，1H)，2.90-2.95(m，1H)，3.66(d，J＝2.75Hz，3H)，3.92(d，J＝2.75Hz，3H)，4.05-4.12(m，2H)，4.39-4.42(m，2H)，4.50-4.53(m，1H)，5.07-5.10(m，1H)，5.23-5.28(m，1H)，5.73-5.79(m，1H)，5.81-5.83(m，1H)，7.10-7.13(m，1H)，7.17(t，J＝2.44Hz，1H)，7.22-7.24(m，1H)，7.85-7.87(m，1H)，8.10(dd，J＝9.16，2.75Hz，1H)；MS m/z 785(MH+).
實(shí)施例152化合物152的制備 化合物152按照實(shí)施例141、方案1的方法制備化合物152，不同之處在于在步驟2中擴(kuò)大規(guī)模并使用L-纈氨酸叔丁酯鹽酸鹽代替L-纈氨酸甲酯鹽酸鹽。
步驟1修改使用100mg(0.146mmol)實(shí)施例55、步驟1的產(chǎn)物；62.2mg(0.219mmol)碳酸N，N’-二琥珀酰亞胺酯，47.0mg(0.364mmol)N，N-二異丙基乙胺。
步驟2修改使用306mg(1.46mmol)L-纈氨酸叔丁酯鹽酸鹽、188mg(1.46mmol)N，N-二異丙基乙胺，得到93.5mg產(chǎn)物，為白色粉末(收率78.8％)MS m/z 814(MH+)。
實(shí)施例153化合物153的制備 化合物153按照實(shí)施例141、方案1的方法制備化合物153，不同之處在于在步驟2中擴(kuò)大規(guī)模并使用(S)-(+)-1-甲氧基-2-丙基胺代替L-纈氨酸甲酯鹽酸鹽。
步驟1修改使用100mg(0.146mmol)實(shí)施例55、步驟1的產(chǎn)物；62.2mg(0.219mmol)碳酸N，N’-二琥珀酰亞胺酯；47.0mg(0.364mmol)N，N-二異丙基乙胺。
步驟2修改使用130mg(1.46mmol)(S)-(+)-1-甲氧基-2-丙胺、188mg(1.46mmol)N，N-二異丙基乙胺，得到50.3mg產(chǎn)物，為白色粉末(收率47.3％)
1H NMR(CD3OD)δ0.96(d，J＝7.02Hz，3H)，0.99-1.01(m，2H)，1.04(s，9H)，1.15-1.18(m，2H)，1.39(dd，J＝9.61，5.34Hz，1H)，1.84(dd，J＝7.93，5.19Hz，1H)，1.93(s，3H)，2.15(q，J＝9.05Hz，1H)，2.37(ddd，J＝13.96，9.84，4.58Hz，1H)，2.61(dd，J＝14.04，7.32Hz，1H)，2.90(ddd，J＝12.89，8.16，4.88Hz，1H)，3.19-3.28(m，2H)，3.64-3.67(m，1H)，3.92(s，3H)，4.12(dd，J＝11.60，3.97Hz，1H)，4.40(s，1H)，4.44(d，J＝11.90Hz，1H)，4.53(dd，J＝9.77，7.32Hz，1H)，5.07(dd，J＝10.22，1.68Hz，1H)，5.24(dd，J＝17.24，1.37Hz，1H)，5.76-5.81(m，1H)，5.83(s，1H)，7.10(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.17(d，J＝2.44Hz，1H)，7.23(d，J＝5.80Hz，1H)，7.87(d，J＝5.80Hz，1H)，8.10(d，J＝9.16Hz，1H)；MS m/z 729(MH+).
實(shí)施例154化合物154的制備 化合物154按照實(shí)施例141、方案1的方法制備化合物154，不同之處在于在步驟2中擴(kuò)大規(guī)模并使用N-甲基L-纈氨酸甲酯鹽酸鹽代替L-纈氨酸甲酯鹽酸鹽。
步驟1修改使用100mg(0.146mmol)實(shí)施例55、步驟1的產(chǎn)物；62.2mg(0.219mmol)碳酸N，N’-二琥珀酰亞胺酯；47.0mg(0.364mmol)N，N-二異丙基乙胺。
步驟2修改使用265mg(1.46mmol)N-甲基L-纈氨酸甲酯鹽酸鹽、188mg(1.46mmol)N，N-二異丙基乙胺，得到68.2mg產(chǎn)物，為白色粉末(收率59.5％)1H NMR(CD3OD)δ0.70(dd，J＝6.71，2.14Hz，3H)，0.89(dd，J＝6.41，2.44Hz，3H)，0.96-0.98(m，1H)，1.02-1.04(m，2H) 1.07(d，J＝2.14Hz，9H)，1.18-1.22(m，2H)，1.43-1.47(m，1H)，1.84-1.87(m，1H)，2.11-2.19(m，2H)，2.31-2.37(m，1H)，2.58-2.63(m，1H)，2.87(d，J＝2.44Hz，3H)，2.90-2.94(m，1H)，3.65(d，J＝2.14Hz，3H)，3.92(d，J＝2.14Hz，3H)，4.10-4.14(m，1H)，4.25(dd，J＝10.07，1.22Hz，1H)，4.48(d，J＝2.44Hz，1H)，4.50-4.54(m，1H)，5.08-5.10(m，1H)，5.25-5.28(dd，J＝17.09，1.53Hz，1H)，5.78-5.85(m，2H)，7.10-7.13(m，1H)，7.18-7.19(m，1H)，7.24(dd，J＝5.95，2.59Hz，1H)，7.87-7.89(m，1H)，8.10(dd，J＝9.00，2.59Hz，1H)；MS m/z 785(MH+).
實(shí)施例155化合物155的制備 化合物155
方案1 實(shí)施例55，步驟1的產(chǎn)物 化合物155步驟1向?qū)嵤├?5、步驟1的產(chǎn)物(100mg，0.146mmol)的無(wú)水THF(2mL)溶液中加入碳酸吡啶-2-基酯·2，2，2-三氟-1，1-二甲基-乙酯(44.0mg，0.175mmol)和N-甲基嗎啉(59mg，0.58mmol)。將混合物在室溫下攪拌24h。將反應(yīng)混合物洗滌、真空濃縮并將剩余物溶于DCM(2mL)中。將溶液用pH＝4的緩沖溶液(3×3mL)洗滌，將洗液用DCM(3mL)反萃取。合并有機(jī)相并真空濃縮。隨后將粗產(chǎn)物溶于甲醇并經(jīng)反相制備型HPLC純化，得到化合物155，為白色粉末(38.5mg，收率34.3％)1H NMR(CD3OD)δ1.04(s，11H)，1.19-1.22(m，2H)，1.23(s，3H)，1.43(dd，J＝9.31，5.34Hz，1H)，1.46(s，3H)，1.87(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)，2.19(q，J＝8.85Hz，1H)，2.34(m，1H)，2.62(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)，2.92(ddd，J＝12.67，8.09，4.88Hz，1H)，3.92(s，3H)，4.06(dd，J＝11.90，3.36Hz，1H)，4.23(s，1H)，4.43(d，J＝11.60Hz，1H)，4.56(dd，J＝10.38，7.32Hz，1H)，5.10(d，J＝10.38Hz，1H)，5.27(d，J＝17.09Hz，1H)，5.75-5.80(m，1H)，5.82(s，1H)，7.10(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.18(d，J＝2.44Hz，1H)，7.25(d，J＝6.10Hz，1H)，7.89(d，J＝5.80Hz，1H)，8.07(d，J＝9.16Hz，1H)；MS m/z 768(MH+).
部分E部分E的LC-MS條件″方法A″為3.0×50mm Xterra@4min梯度和流速4mL/min″方法B″為3.0×50mm Xterra@3min梯度和流速4mL/min″方法C″為4.6×50mm Xterra@4min梯度和流速4mL/min″方法D″為4.6×50mm Xterra@3min梯度和流速4mL/min實(shí)施例180化合物180的制備通用合成流程 按照上述通用合成方案制備化合物180-183。其中各反應(yīng)將在其它地方詳細(xì)描述。除了在第一步烷基化步驟中為叔丁醇鉀(以THF為溶劑，由Aldrich Chemicals提供)的DMF溶液提供了更方便的后處理方法外，一旦烷基化完成后，大部分的DMF溶劑均用水除去。
由此得到化合物180BOCNH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(2-三氟甲基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷，為白色泡沫狀物，收率61％。LC/MS Rt-min(MNa+)[方法A]3.35(774)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.05(m，13H)1.21(s，9H)1.42(dd，J＝9.17，5.26Hz，1H)1.86(dd，J＝8.07，5.38Hz，1H)2.21(m，1H)2.33(m，1H)2.64(dd，J＝13.94，6.60Hz，1H)2.93(m，1H)4.09(dd，J＝11.49，2.69Hz，1H)4.21(s，1H)4.52(m，1H)4.56(d，J＝12.23Hz，1H)5.10(dd，J＝10.39，1.59Hz，1H)5.27(d，J＝16.87Hz，1H)5.58(s，1H)5.72(m，1H)7.36(s，1H)7.61(t，J＝7.70Hz，1Hz)7.83(t，J＝7.34Hz，1H)8.07(d，J＝8.56Hz，1H) 8.26(d，J＝8.56Hz，1H).
實(shí)施例181化合物181的制備
得到BOCNH-P3(L-叔-BuG1y)-P2[(4R)-(2，8-雙(三氟甲基)喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷，為白色泡沫狀物，收率52％。LC/MS Rt-min(MNa+)[方法A]3.60(843)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.05(m，11H)1.16(s，9H)1.22(m，2H)1.42(dd，J＝9.29，5.38Hz，1H)1.86(dd，J＝8.07，5.38Hz，1H)2.21(q，J＝8.97Hz，1H)2.33(m，1H)2.65(dd，J＝13.94，6.85Hz，1H)2.93(m，1H)4.07(dd，J＝11.98，2.69Hz，1H)4.17(s，1H)4.52(dd，J＝10.52，6.85Hz，1H)4.58(d，J＝11.98Hz，1H)5.10(d，J＝10.27Hz，1H)5.27(d，J＝17.12Hz，1H)5.60(s，1H)5.72(m，1H)7.46(s，1H)7.69(t，J＝7.83Hz，1H)8.18(d，J＝7.34Hz，1H)8.50(d，J＝8.31Hz，1H).
實(shí)施例182化合物182的制備 得到BOCNH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(2-三氟甲基-8-三氟甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷，為白色泡沫狀物，收率99％。LC/MS Rt-min(MNa+)[方法A]3.62(858)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.05(m，11H)1.21(m，11H)1.42(dd，J＝9.05，5.14Hz，1H)1.86(dd，J＝8.07，5.38Hz，1H)2.21(q，J＝8.64Hz，1H)2.33(m，1H)2.64(dd，J＝13.94，6.60Hz，1H)2.93(m，1H)4.08(dd，J＝11.98，2.69Hz，1H)4.18(s，1H)4.51(dd，J＝10.52，6.85Hz，1H)4.57(d，J＝12.23Hz，1H)5.10(dd，J＝10.52，1.22Hz，1H)5.27(d，J＝17.12Hz，1H)5.59(s，1H)5.72(m，1H)7.44(s，1H)7.63(t，J＝8.07Hz，1H)7.78(d，J＝7.58Hz，1H)8.24(d，J＝8.56Hz，1H).
實(shí)施例183化合物183的制備 得到BOCNH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(2-三氟甲基，8-氯喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷，為白色泡沫狀物，收率64％。LC/MS Rt-min(MNa+)[方法A]3.52(808)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.04(m，11H)1.21(m，11H)1.41(dd，J＝9.41，5.50Hz，1H)1.86(dd，J＝8.07，5.62Hz，1H)2.20(q，J＝8.80Hz，1H)2.32(m，1H)2.63(dd，J＝13.82，6.72Hz，1H)2.92(m，1H)4.07(dd，J＝12.10，2.81Hz，1H)4.19(s，1H)4.50(dd，J＝10.52，6.85Hz.1H)4.56(d，J＝11.98Hz，1H)5.10(dd.J＝10.27，1.47Hz，1H)5.26(d，J＝17.12Hz，1H)5.57(s，1H)5.72(m，1H)7.41(s，1H)7.52(t，J＝8.07Hz，1H)7.93(d，J＝7.58Hz，1H)8.19(d，J＝8.56Hz，1H).
實(shí)施例184用三肽(化合物184)和P2*烷基化的通用方法通用方案-實(shí)施例184的化合物(化合物184)的制備三肽組分的制備，以HATU為偶合劑，通過(guò)連續(xù)的酰胺偶合得到實(shí)施例184的化合物。應(yīng)理解許多標(biāo)準(zhǔn)偶合劑可用于以下方案。
中間體實(shí)施例184a的制備室溫下，向裝于火焰干燥的燒瓶中的HATU(820mg，2.2mmol)、實(shí)施例180a的化合物(Boc-4R-羥基脯氨酸，417mg，1.8mmol)和實(shí)施例180c的化合物(環(huán)丙烷磺酸(1(R)-氨基-2(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)-酰胺鹽酸鹽，490mg，1.8mmol)的混合物內(nèi)加入無(wú)水二氯甲烷(8mL)。將混合物用干燥氮?dú)獗Ｗo(hù)，隨后將其冷卻至-78℃。在5分鐘內(nèi)緩慢加入Hunig氏堿(二異丙基乙胺，625μL，3.6mmol)，將混合物變?yōu)闇\橙色懸浮液。繼續(xù)攪拌1小時(shí)，同時(shí)使溫度升高至環(huán)境溫度。LC/MS顯示完全轉(zhuǎn)化為所需的產(chǎn)物184a。粗品反應(yīng)物經(jīng)常規(guī)后處理，用水洗滌三次(每次5mL)，有機(jī)剩余物用乙酸乙酯(3×5mL)萃取。真空除去有機(jī)溶劑得到粗產(chǎn)物。該物質(zhì)未經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一步驟。
中間體實(shí)施例184b的制備室溫下，將得自前述步驟的干燥固體物溶于9ml二氯甲烷中。向該溶液中加入3ml三氟乙酸，形成淺黃色溶液。室溫下，繼續(xù)攪拌2小時(shí)。LC/MS顯示不存在原料184a，而主要的信號(hào)對(duì)應(yīng)于所需的產(chǎn)物184b，還存在對(duì)應(yīng)于先前步驟中HATU所帶的副產(chǎn)物的信號(hào)。蒸發(fā)溶劑，固體剩余物未經(jīng)進(jìn)一步純化立即用于下一步驟。
三肽化合物184的制備 BOCNH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-羥基-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷[編號(hào)46877-128]在室溫下，將先前步驟的粗產(chǎn)物(實(shí)施例184b，1.8mmol)與HATU(700mg，1.8mmol)和BOC-L-叔-亮氨酸(實(shí)施例180f，F(xiàn)lukaChemicals，420mg，1.8mmol)在二氯甲烷(10mL)中混合。將該懸浮液用Hünig氏堿(1mL，過(guò)量)處理，形成稍稀、橙色懸浮液。LC/MS顯示有一些轉(zhuǎn)化為化合物184。室溫下繼續(xù)攪拌兩天后觀察到完全轉(zhuǎn)化為所需的產(chǎn)物184。將粗品反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干。將剩余物溶于乙酸乙酯中。用半飽和、新鮮制備的碳酸氫鈉溶液萃取，除去大部分的HATU剩余物。用去離子水洗滌除去最終痕量的HATU剩余物(1-羥基7-氮雜苯并三唑)。蒸發(fā)溶劑，得到990mg(98％)所需的產(chǎn)物，為白色泡沫狀物。該物質(zhì)可未經(jīng)進(jìn)一步純化，直接用于隨后的用親電體(如喹啉和異喹啉)進(jìn)行的烷基化。LC/MS Rt-min(MNa+)[方法A]2.65(579)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 0.95(s，2H)0.99(s，9H)1.05(m，2H)1.21(m，1H)1.39(m，9H)1.84(dd，J＝8.31，5.38Hz，1H)1.96(m，1H)2.11(m，1H)2.20(m，1H)2.91(m，1H)3.80(m，2H)4.28(d，J＝9.78Hz，1H)4.35(dd，J＝9.90，6.97Hz，1H)4.47(s，1H)5.11(m，1H)5.29(d，J＝17.12Hz，1H)5.75(m，1H).
親電體對(duì)三肽(化合物184)進(jìn)行烷基化向火焰干燥的25mL圓底燒瓶中裝入化合物184(0.5-1.0mmol)、取代的4-氯喹啉(1.0當(dāng)量)和氯化鑭(LaCl3無(wú)水珠粒，由Aldrich供應(yīng)，購(gòu)來(lái)即用，M.W.245g/mol；1.0當(dāng)量。注使用這種添加劑在某些情況下有用，采用那些低活性親電體時(shí)更是如此。當(dāng)親電體對(duì)陰離子烷基化作用具有足夠的活性時(shí)可不使用這種試劑)在2mL無(wú)水DMF中的溶液。所述無(wú)機(jī)鹽在室溫下在DMF中僅為微溶。在氮?dú)鈿夥罩?，將混合物在攪拌下冷卻至-78℃(干冰/丙酮浴)。向該冷卻的混合物中加入叔丁醇鉀的THF溶液(1.0M，由Aldrich提供，購(gòu)來(lái)即用，5.5當(dāng)量)，混合物的顏色由無(wú)色轉(zhuǎn)變成淺黃色或綠色。將混合物在-78℃下攪拌，攪拌時(shí)間取決于4-氯喹啉的活性(在-78℃下數(shù)小時(shí)至在室溫下過(guò)夜)。還發(fā)現(xiàn)最終所述無(wú)機(jī)鹽轉(zhuǎn)變成細(xì)乳液。用半飽和的氯化銨水溶液(2mL)猝滅。有機(jī)物質(zhì)用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。將有機(jī)層合并，用去離子水(10mL×2)回洗。蒸發(fā)有機(jī)部分，經(jīng)LC/MS確定，得到富含所需產(chǎn)物的粗制混合物。采用制備型HPLC，使用標(biāo)準(zhǔn)分離參數(shù)，分離所需產(chǎn)物(典型條件3.0×50mm Xterra柱，梯度4min和流速4mL/min)，得到分析純的所需產(chǎn)物。按照完全相同的方式進(jìn)行1-鹵代異喹啉系列的烷基化。
實(shí)施例185化合物185的制備 按照實(shí)施例184的通用三肽烷基化方法，得到BOCNH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(7-三氟甲基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷，為白色泡沫狀物，收率50％。LC/MS Rt-min(MH+)[方法B]2.32(752)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.02(s，9H)1.06(m，11H)1.22(m，2H)1.43(dd，J＝9.41，5.26Hz，1H)1.88(dd，J＝8.19，5.50Hz，1H)2.23(q，J＝8.80Hz，1H)2.42(m，1H)2.75(dd，J＝14.06，6.48Hz，1H)2.93(m，1H)4.10(m，2H)4.61(m，2H)5.12(dd，J＝10.39，1.59Hz，1H)5.29(d，J＝17.12Hz，1H)5.72(m，2H)7.61(d，J＝6.36Hz，1H)7.96(d，J＝8.80Hz，1H)8.38(s，1H) 8.59(d，J＝8.56Hz，1H)9.14(d，J＝6.36Hz，1H).
實(shí)施例186化合物186的制備 按照實(shí)施例184的通用三肽烷基化方法，得到所需的產(chǎn)物BOCNH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(8-三氟甲基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷，為白色泡沫狀物，收率50％。LC/MS Rt-min(MH+)[方法B]2.48(752)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.02(s，9H)1.05(m，2H)1.13(s，9H)1.23(m，2H)1.42(dd，J＝8.68，5.50Hz，1H)1.87(dd，J＝8.07，5.38Hz，1H)2.21(q，J＝8.80Hz，1H)2.36(m，1H)2.69(dd，J＝14.06，6.97Hz，1H)2.93(m，1H)4.08(dd，J＝11.98，2.93Hz，1H)4.15(s，1H)4.54(dd，J＝10.52，7.09Hz，1H)4.60(d，J＝12.47Hz，1H)5.11(dd，J＝10.52，1.71Hz，1H)5.28(d，J＝15.90Hz，1H)5.58(s，1H)5.72(m，1H)7.32(d，J＝5.87Hz，1H)7.69(t，J＝7.95Hz，1H)8.22(d，J＝7.09Hz，1H)8.55(d，J＝8.07Hz，1H)8.88(d，J＝5.62Hz，1H).
用于6-F、6-乙基、6-異丙基和6-叔丁基異喹啉P2*組件的異喹啉中間體的制備。
總而言之，如下所示，用于以下實(shí)驗(yàn)的6-氟和6-烷基異喹啉通過(guò)Pomeranz-Fritsch合成法(典型方法光學(xué)活性8，8-二取代的1，1-聯(lián)異喹啉的制備，K.Hirao，R.Tsuchiya，Y.Yano，H.Tsue，Hetero cycles42(1)1996，415-422)制備。通過(guò)本文其它地方描述的N-氧化物中間體將所述產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為1-氯衍生物。
通用合成方案
試劑和反應(yīng)條件(a)在苯中回流，共沸除去水；(b)第一步氯甲酸乙酯，亞磷酸三甲酯的THF溶液，第二步四氯化鈦的氯仿溶液；(c)MCPBA的二氯甲烷溶液；(d)磷酰氯的苯溶液
實(shí)施例187化合物187的制備
得到BOCNH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(6-氟異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷，為白色泡沫狀物，收率12％。LC/MS Rt-min(MNa+)[方法C]3.81(724)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.05(m，13H)1.22(s，9H)1.42(m，1H)1.86(m，1H)2.21(m，2H)2.61(dd，J＝13.69，6.60Hz，1H)2.93(m，1H)4.05(d，J＝13.69Hz，1H)4.21(s，1H)4.49(m，2H)5.11(d，J＝10.03Hz，1H)5.28(d，J＝17.61Hz，1H)5.72(m，1H)5.86(d，J＝4.40Hz，1H)7.31(m，2H)7.48(d，J＝8.31Hz，1H)7.97(d，J＝6.36Hz，1H)8.26(d，J＝6.11Hz，1H).
實(shí)施例188化合物188的制備 上述烷基化得到1-氯異喹啉主產(chǎn)物BOCNH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(1-氯異喹啉-6-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷，為白色泡沫狀物，收率40.2％。LC/MS Rt-min(MH+)[方法C]3.81(718)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.00(s，9H)1.06(m，2H)1.25(s，11H)1.41(m，1H)1.86(dd，J＝8.07，5.38Hz，1H)2.25(m，2H)2.54(dd，J＝12.96，6.60Hz，1H)2.92(m，1H)4.06(dd，J＝11.98，2.69Hz，1H)4.20(s，1H)4.31(d，J＝11.74Hz，1H)4.45(dd，J＝9.78，7.58Hz，1H)5.11(dd，J＝10.27，1.71Hz，1H)5.28(dd，J＝17.36，1.47Hz，1H)5.36(s，1H)5.74(m，1H)7.35(d，J＝9.29Hz，1H)7.40(s，1H)7.70(d，J＝5.87Hz，1H)8.13(d，J＝5.87Hz，1H)8.25(d，J＝9.29Hz，1H).
實(shí)施例189化合物189的制備 得到BOCNH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(6-乙基異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷，為白色泡沫狀物，得到4.6mg黃色固體物(4.2％)。LC/MS Rt-min(MH+)[方法B]2.70(712)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.01(s，9H)1.07(m，2H)1.22(m，11H)1.28(t，J＝7.91Hz，3H)1.41(m，1H)1.85(m，1H)2.25(m，2H)2.60(dd，J＝13.69，6.85Hz，1H)2.80(q，J＝7.66Hz，2H)2.93(m，1H)4.02(d，J＝31.06Hz，1H)4.23(s，1H)4.42(m，1H)4.54(m，1H)5.10(d，J＝10.27Hz，1H)5.28(d，J＝17.12Hz，1H)5.74(m，1H)5.84(s，1H)7.25(d，J＝5.87Hz，1H)7.38(d，J＝8.56Hz，1H)7.59(s，1H)7.90(d，J＝6.24Hz，1H)8.09(d，J＝8.56Hz，1H).
實(shí)施例190化合物190的制備 得到BOCNH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(6-異丙基異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷，為白色泡沫狀物，收率69％。LC/MS Rt-min(MNa+)[方法B]2.76(749)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.05(m，13H)1.20(m，9H)1.31(d，J＝6.85Hz，6H)1.42(m，1H)1.86(dd，J＝8.07，5.62Hz，1H)2.26(m，2H)2.62(dd，J＝13.69，6.85Hz，1H)2.93(m，1H)3.07(m，1H)4.06(m，1H)4.21(s，1H)4.52(m，2H)5.11(d，J＝10.27Hz，1H)5.28(d，J＝17.12Hz，1H)5.74(m，1H)5.84(s，1H)7.32(d，J＝6.11Hz，1H)7.46(d，J＝8.56Hz，1H)7.64(s，1H)7.90(d，J＝6.11Hz，1H)8.13(d，J＝8.56Hz，1H).
實(shí)施例191化合物191的制備 得到BOCNH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(6-叔丁基異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷，為白色泡沫狀物，收率81％。LC/MS Rt-min(MH+)[方法B]2.84(740)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.01(s，9H)1.06(m，2H)1.18(s，9H)1.22(m，2H)1.39(s，9H)1.43(m，1H)1.87(dd，J＝8.19，5.50Hz，1H)2.27(m，2H)2.63(dd，J＝13.57，6.97Hz，1H)2.93(m，1H)4.06(m，1H)4.20(s，1H)4.52(m，2H)5.10(d，J＝11.49Hz，1H)5.28(d，J＝17.12Hz，1H)5.73(m，1H)5.84(s，1H)7.36(d，J＝6.11Hz，1H)7.66(dd，J＝8.80，1.22Hz，1H)7.78(s，1H)7.91(d，J＝5.87Hz，1H)8.15(d，J＝8.80Hz，1H).
6-異丙氧基和6-叔丁氧基異喹啉中間體的制備一些6-烷氧基-1-氯異喹啉直接通過(guò)相應(yīng)的烷氧基金屬離子如叔丁醇鉀(53％)和異丙醇鈉(54％)對(duì)6-氟-1-氯異喹啉進(jìn)行同側(cè)(ipso)置換得到。
通用合成方案 R＝烷氧基陰離子，如叔丁基、異丙基用異丙醇鈉和叔丁醇鉀的DMF溶液對(duì)6-氟-1-氯異喹啉進(jìn)行芳族親核置換，分別得到相應(yīng)的6-異丙氧基主產(chǎn)物(54％)1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-d)δppm 1.43(d，J＝6.11Hz，6H)4.76(m，J＝6.11Hz，1H)7.08(d，J＝2.45Hz，1H)7.29(dd，J＝9.29，2.45Hz，1H)7.50(d，J＝5.62Hz，1H)8.18(d，J＝5.87Hz，1H)8.24(d，J＝9.29Hz，1H)和6-叔丁氧基-1-氯異喹啉主產(chǎn)物(55％)1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-d)δppm 1.48(s，9H)7.31(m，2H)7.47(d，J＝5.62Hz，1H)8.18(d，J＝5.62Hz，1H)8.21(d，J＝9.78Hz，1H)。
如實(shí)施例184所述，用三肽將這些6-烷氧基-1-氯異喹啉烷基化，得到如下所示的所需產(chǎn)物。
實(shí)施例192化合物192的制備 得到BOCNH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(6-異丙氧基異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷，為白色泡沫狀物，收率59％。LC/MS Rt-min(MH+)[方法C]3.87(742)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 0.99(s，11H)1.06(m，2H)1.21(s，9H)1.37(d，J＝5.87Hz，6H)1.42(m，1H)1.86(dd，J＝8.07，5.38Hz，1H)2.25(m，2H)2.61(dd，J＝13.69，6.85Hz，1H)2.92(m，1H)4.04(dd，J＝11.86，3.30Hz，1H)4.21(br.s，1H)4.49(m，2H)4.78(h，J＝5.87Hz，1H)5.10(dd，J＝10.39，1.35Hz，1H)5.28(d，J＝16.87Hz，1H)5.73(m，1H)5.79(d，J＝11.25Hz，1H)7.07(dd，J＝9.05，1.96Hz，1H)7.18(d，J＝2.20Hz，1H)7.26(d，J＝6.11Hz，1H)7.85(d，J＝6.11Hz，1H)8.10(d，J＝9.05Hz，1H).
實(shí)施例193化合物193的制備 得到BOCNH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(6-叔丁氧基異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷，為白色泡沫狀物，收率39％。LC/MS Rt-min(MH+)[方法C]3.99(756)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.03(br s，13H)1.19(s，9H)1.42(m，10H)1.86(dd，J＝7.83，5.62Hz，1H)2.24(m，2H)2.60(dd，J＝13.69，6.85Hz，1H)2.93(m，1H)4.04(dd，J＝11.49，2.93Hz，1H)4.23(s，1H)4.49(m，2H)5.10(d，J＝11.25Hz，1H)5.27(d，J＝16.87Hz，1H)5.73(m，1H)5.81(s，1H)7.13(dd，J＝8.80，1.47Hz，1H)7.25(d，J＝5.87Hz，1H)7.33(d，J＝2.20Hz，1H)7.87(d，J＝6.11Hz，1H)8.10(d，J＝9.05Hz，1H).
酞嗪P2*衍生物的制備總而言之，1-氯酞嗪和1，4-二氯酞嗪可順利地被烷基化，得到所需的產(chǎn)物。而商品1-氯酞嗪和1，4-二氯酞嗪經(jīng)常含有一些水解雜質(zhì)。用磷酰氯預(yù)處理，接著立即烷基化得到更一致的結(jié)果。
通用合成方案 反應(yīng)條件(a)磷酰氯的DCE溶液；(b)用三肽烷基化；(c)咪唑(R-CH)、三唑(R＝N)的鈉衍生物。
實(shí)施例194化合物194的制備 得到BOCNH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(酞嗪-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷，為白色泡沫狀物，收率41％。LC/MS Rt-min(MNa+)[方法B]2.07(707)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.03(m，9H)1.06(m，4H)1.14(s，9H)1.20(m，1H)1.43(m，1H)1.87(dd，J＝8.07，5.62Hz，1H)2.24(q，J＝8.80Hz，1H)2.38(m，1H)2.76(dd，J＝14.18，7.09Hz，1H)2.92(m，1H)4.11(m，2H)4.62(m，1H)5.11(dd，J＝10.27，1.71Hz，1H)5.29(dd，J＝17.12，1.22Hz，1H)5.72(m，1H)5.96(s，1H)8.26(m，2H)8.46(m，2H)9.84(s，1H).
實(shí)施例195化合物195的制備 得到BOCNH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(4-氯酞嗪-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷，為白色泡沫狀物，收率23％。LC/MS Rt-min(MNa+)[方法C]3.52(742)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.01(s，11H)1.06(m，2H)1.14(s，9H)1.22(m，1H)1.43(m，1H)1.87(m，1H)2.21(m，1H)2.35(m，J＝10.27Hz，1H)2.70(m，1H)2.93(m，1H)4.05(d，J＝3.42Hz，1H)4.58(m，2H)5.11(dd，J＝10.39，1.10Hz，1H)5.28(d，J＝17.36Hz，1H)5.73(m，1H)5.93(s，1H)7.99(m，1H)8.07(t，J＝7.70Hz，1H)8.26(dd，J＝8.19，2.32Hz，2H).
4-(咪唑-1-基)酞嗪和4-(1，2，4-三唑-1-基)酞嗪P2*衍生物的制備用典型的唑類(如咪唑和三唑)陰離子代替上述步驟的產(chǎn)物化合物195BOCNH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(4-氯酞嗪-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷，得到下述4-唑取代的酞嗪衍生物實(shí)施例196化合物196的制備在55-65℃，用咪唑鈉鹽的DMF溶液代替4-氯酞嗪(化合物195)制備題述化合物。
得到BOCNH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(4-(咪唑-1-基)酞嗪-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷，為白色泡沫狀物，收率23％。LC/MS Rt-min(MNa+)[方法B]1.94(773)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.03(s，9H)1.07(m，2H)1.20(m，9H)1.24(m，1H)1.41(m，2H)1.88(dd，J＝8.19，5.50Hz，1H)2.23(m，1H)2.41(m，1H)2.75(m，J＝14.92Hz，1H)2.93(m，1H)4.14(m，2H)4.60(dd，J＝10.15，6.97Hz，2H)5.12(dd，J＝10.27，1.47Hz，1H)5.29(dd，J＝17.24，1.35Hz，1H)5.74(m，1H)6.09(s，1H)7.85(s，1H)7.94(m，1H)8.10(m，2H)8.43(m，1H)9.17(s，1H)9.46(s，1H).
在所述置換反應(yīng)中，還分離出少量的脫BOC副產(chǎn)物(化合物197) 得到NH2-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(4-(咪唑-1-基)酞嗪-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷，為白色泡沫狀物，收率17％。LC/MS Rt-min(MH+)[方法B]1.22(651)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.16(s，9H)1.23(m，2H)1.42(dd，J＝9.41，5.50Hz，1H)1.89(m，1H)2.26(q，J＝8.97Hz，1H)2.43(m，1H)2.78(dd，J＝14.06，7.21Hz，1H)2.93(m，1H)3.74(m，1H)4.11(s，1H)4.22(dd，J＝12.23，3.91Hz，1H)4.47(m，2H)4.71(dd，J＝10.27，7.09Hz，1H)5.12(m，1H)5.29(d，J＝17.36Hz，1H)5.71(m，1H)6.13(t，J＝3.67Hz，1H)7.87(s，1H)7.97(m，1H)8.14(m，3H)8.41(m，1H)9.47(s，1H).
實(shí)施例198化合物198的制備在55-65℃，用1，2，4-三唑鈉鹽的DMF溶液代替4-氯酞嗪(化合物195)制備題述化合物。
得到BOCNH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(4-(1，2，4-三唑-1-基)酞嗪-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷，為白色泡沫狀物，收率62％。LC/MS Rt-min(MNa+)[方法C]3.35(774)。
1HNMR(500MHz，CD3OD)δppm 0.97(s，9H)1.01(m，2H)1.10(s，9H)1.16(m，1H)1.37(m，2H)1.82(m，1H)2.18(d，J＝8.55Hz，1H)2.32(m，1H)2.69(dd，J＝13.58，6.87Hz，1H)2.88(br s，1H)4.06(d，J＝11.60Hz，1H)4.13(s，1H)4.53(m，J＝9.16Hz，1H)4.61(d，J＝11.90Hz，1H)5.06(d，J＝10.07Hz，1H)5.23(d，J＝17.40Hz，1H)5.68(m，1H)5.98(s，1H)7.97(m，2H)8.30(m，J＝11.90Hz，2H)8.44(d，J＝7.63Hz，1H)9.14(s，1H).
4-羥基和4-烷氧基酞嗪P2*衍生物的制備 反應(yīng)條件(a)醇鈉，如甲醇鈉、乙醇鈉和異丙醇鈉。
實(shí)施例199化合物199的制備 室溫下將4-氯酞嗪(實(shí)施例195)化合物溶于無(wú)水異丙醇中，加入1.0eq異丙醇鈉，將所得的懸浮液回流。得到4.5mg所需的產(chǎn)物，為黃色固體物(20.0％)。LC/MS Rt-min(MH+)2.68(743)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.02(m，11H)1.20(m，11H)1.42(m，1H)1.49(d，J＝6Hz，6H)1.87(dd，J＝7.95，5.50Hz，1H)2.21(m，1H)2.23(m，1H)2.66(m，1H)2.93(m，1H)4.08(q，J＝7.09Hz，1H)4.19(s，1H)4.55(m，2H)5.11(d，J＝10.27Hz，1H)5.28(d，J＝17.61Hz，1H)5.48(m，1H)5.70(d，J＝10.03Hz，1H)5.81(m，1H)7.90(m，2H)8.16(m，2H).
實(shí)施例200化合物200的制備同樣，制備得到4-乙氧基衍生物BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(4-乙氧基酞嗪-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷。

得到4.0mg黃色固體物(16.0％)。LC/MS Rt-min(MH+)2.52(729)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.01(s，9H)1.06(m，2H)1.16(s，9H)1.24(m，2H)1.43(dd，J＝9.78，5.14Hz，1H)1.53(t，J＝6.97Hz，3H)1.87(dd，J＝8.19，5.50Hz，1H)2.22(q，J＝8.97Hz，1H)2.32(m，1H)2.67(m，1H)2.93(m，1H)4.06(d，J＝8.56Hz，1H)4.19(s，1H)4.56(m，4H)5.10(m，1H)5.30(m，1H)5.74(m，1H)5.82(s，1H)7.94(m，2H)8.16(d，J＝7.83Hz，1H)8.21(m，1H).
實(shí)施例201化合物201的制備 制得BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(4-甲氧基酞嗪-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷，收率30.2％。LC/MSRt-min(MH+)2.42(715)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 0.96(s，9H)1.07(m，2H)1.20(m，11H)1.43(dd，J＝9.29，5.38Hz，1H)1.87(dd，J＝8.07，5.62Hz，1H)2.22(q，J＝8.80Hz，1H)2.31(m，1H)2.66(d，J＝8.07Hz，1H)2.93(m，1H)4.06(dd，J＝11.98，3.18Hz，1H)4.19(d，J＝3.42Hz，4H)4.54(m，2H)5.11(m，1H)5.28(d，J＝17.36Hz，1H)5.73(m，1H)5.83(s，1H)7.95(m，2H)8.19(m，2H).
實(shí)施例202化合物202的制備嘗試用四唑鈉鹽代替BOCNH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(4-氯酞嗪-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷(實(shí)施例195)化合物，得到大部分的4-羥基水解物質(zhì)。
得到BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(4-羥基酞嗪-1-氧代)-S-脯氨酸]P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷(44.2％)，為淺乳脂狀固體。LC/MS Rt-min(MH+)2.18(701)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.01(s，9H)1.05(m，2H)1.23(m，11H)1.42(dd，J＝9.29，5.38Hz，1H)1.87(dd，J＝8.07，5.38Hz，1H)2.21(m，2H)2.63(m，1H)2.93(m，1H)4.00(s，1H)4.20(s，1H)4.50(m，2H)5.11(dd，J＝10.27，1.47Hz，1H)5.29(d，J＝16.87Hz，1H)5.59(s，1H)5.73(m，1H)7.86(dd，J＝5.75，3.30Hz，2H)8.01(dd，J＝5.87，3.42Hz，1H)8.29(dd，J＝5.87，3.42Hz，1H).
按照烷基化方案制備5，6-二取代的異喹啉P2*衍生物通用合成方案 反應(yīng)條件(a)LDA的THF溶液；(b)二烷基二硫，如(n-PrS)2；(c)醇鈉，如MeONa；(d)噻吩-2-甲醛；(e)MnO2的苯溶液實(shí)施例2031-氯-5-丙硫基-6-氟異喹啉的制備 向冷卻的(-78℃)1-氯-6-氟異喹啉(59mg，0.32mmol)在2ml THF中的溶液內(nèi)加入LDA的環(huán)己烷溶液(1.5mol，0.23mL，0.35mmol)。將該橙色溶液攪拌2小時(shí)，隨后用二正丙基二硫(60μL，純凈物，過(guò)量)處理。在30分鐘內(nèi)將反應(yīng)物升溫至室溫。用半飽和的氯化銨溶液猝滅，將有機(jī)剩余物用乙酸乙酯萃取。LC-MS分析表明約50％轉(zhuǎn)化為所需的產(chǎn)物，并還含有大量的原料。所需的產(chǎn)物經(jīng)短柱純化(4cm×2cm，硅膠H-型)，洗脫液5％乙醚/己烷，得到29mg(收率36％)所需的產(chǎn)物。LC/MS Rt-min(MH+)[方法C]3.79(256)。
1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm 0.96(t，J＝7.34Hz，3H)1.52(m，2H)2.86(m，2H)7.45(dd，J＝9.29，8.56Hz，1H)8.34(d，J＝0.73Hz，2H)8.37(m，1H).
按照實(shí)施例184的方法，采用三肽將該化合物烷基化，得到以下化合物
實(shí)施例204化合物204的制備下述的BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(1-氯-5-丙硫基-異喹啉-6-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷 按照通用方法，得到4.6mg黃色固體物(3.2％)。LC/MS Rt-min(MH+)2.73(792)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 0.93(t，J＝7.34Hz，3H)0.97(s，9H)1.08(m，2H)1.24(m，11H)1.43(m，3H)1.86(m，1H)2.24(m，2H)2.56(m，1H)2.78(q，J＝7.09Hz，2H)2.92(m，1H)4.01(d，J＝9.29Hz，1H)4.22(s，1H)4.29(s，1H)4.59(d，J＝6.85Hz，1H)5.11(d，J＝10.76Hz，1H)5.28(d，J＝17.36Hz，1H)5.49(s，1H)5.74(m，1H)7.66(d，J＝9.29Hz，1H)8.18(d，J＝6.11Hz，1H)8.41(m，2H).
實(shí)施例2055-丙硫基-6-乙氧基異喹啉P2*衍生物的制備 改變其中所用的反應(yīng)試劑，可將以下方法用于其它5-烷硫基-6-烷氧基異喹啉。在氮?dú)鈿夥铡?78℃下，向1-氯-6-氟異喹啉(88mg，0.48mmol)在2.0mL THF中的溶液內(nèi)加入LDA(1.5mol的環(huán)己烷溶液，0.42mL，0.63mmol)，形成深棕色溶液。在-78℃下攪拌30min后，加入純二正丙基二硫(85μL，過(guò)量)。在30min內(nèi)，將反應(yīng)物升溫至室溫。用半飽和的氯化銨溶液猝滅，有機(jī)剩余物用乙酸乙酯萃取。合并各有機(jī)層并在50微米(Hg)真空下干燥。將粗產(chǎn)物溶于2ml THF中，冷卻至-78℃，加入過(guò)量的乙醇鉀(60mg)。異喹啉中間體最后經(jīng)硅膠柱層析純化(H型，Merck)，洗脫液乙醚/己烷混合物，得到32.2mg(24％)純化合物。LC-MS顯示為1-氯-5-丙硫基-6-乙氧基異喹啉，Rt-min(MH+)[方法C]3.77(282)。
1H NMR(400MHz，氯仿-D)δppm 0.94(t，J＝7.34Hz，3H)1.46(M，2H)1.55(t，J＝6.97Hz，3H)2.83(t，J＝7.21Hz，2H)4.32(q，J＝6.85Hz，2H)7.36(d，J＝9.29Hz，1H)8.22(d，J＝6.11Hz，1H)8.32(d，J＝9.29Hz，1H)8.35(d，J＝6.11Hz，1H)。
按照通用的三肽烷基化方法(實(shí)施例184)，采用三肽(化合物184)化合物將1-氯-5-丙硫基-6-乙氧基異喹啉烷基化，得到40.7mg(44.8％)如下所示所需的產(chǎn)物。
實(shí)施例206化合物206的制備 BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(6-乙氧基-5-丙硫基-異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷。LC/MS Rt-min(MH+)2.93(803)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 0.93(t，J＝7.34Hz，3H)1.01(s，9H)1.07(m，2H)1.21(m，11H)1.41(m，3H)1.48(t，J＝6.85Hz，3H)1.86(dd，J＝8.07，5.62Hz，1H)2.25(m，2H)2.60(dd，J＝13.69，6.85Hz，1H)2.81(q，J＝6.97Hz，2H)2.93(m，1H)4.05(m，1H)4.21(s，1H)4.27(q，J＝7.09Hz，2H)4.43(d，J＝11.74Hz，1H)4.52(m，1H)5.10(d，J＝10.76Hz，1H)5.28(d，J＝17.12Hz，1H)5.74(m，1H)5.82(s，1H)7.30(d，J＝9.05Hz，1H)7.92(d，J＝6.36Hz，1H)7.97(m，1H)8.22(d，J＝9.05Hz，1H).
實(shí)施例207化合物207的制備采用同樣的方法制備BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(6-甲氧基-5-甲硫基-異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷。
在-78℃下，向100mg 1-氯-6-氟-異喹啉(0.55mmol)在2ml無(wú)水THF中的溶液內(nèi)加入LDA的THF(1.3eq)溶液。形成深棕色溶液，隨后加入二硫化物，溶液的顏色轉(zhuǎn)變?yōu)榫G色，接著變?yōu)闇\棕色。反應(yīng)物用2ml水和2ml NH4Cl猝滅，用乙酸乙酯萃取，經(jīng)硫酸鈉干燥。將溶劑真空蒸發(fā)，并直接使用所得的粗剩余物。LC/MS Rt-min(MH+)2.23(228)[方法B]。在-78℃下，將粗產(chǎn)物再次溶于2ml無(wú)水THF中，加入1.3eq KOMe，接著將反應(yīng)混合物升溫至室溫，攪拌過(guò)夜。反應(yīng)混合物用乙酸乙酯稀釋并用鹽水洗滌，硫酸鈉干燥。得到104mg(79％)。LC/MS Rt-min(MH+)2.04(240)[方法B]。使中間體1-氯-5-甲硫基-6-甲氧基異喹啉進(jìn)行前述三肽烷基化。按照通用方法，得到70.0mg黃色固體物(42.7％)。LC/MS Rt-min(MH+)2.65(760)[方法B]。1H NMR(400MHz，氯仿-D)δppm 0.94(m，11H)1.17(s，9H)1.26(m，2H)1.39(m，1H)1.83(dd，J＝8.07，5.62Hz，1H)2.01(m，2H)2.23(s，3H)2.45(m，1H)2.79(m，1H)3.94(s，3H)3.97(d，J＝3.91Hz，1H)4.15(s，1H)4.25(d，J＝11.74Hz，1H)4.36(dd，J＝9.66，7.21Hz，1H)4.99(d，J＝10.27Hz，1H)5.12(d，J＝16.87Hz，1H)5.69(m，1H)5.74(s，1H)7.08(d，J＝9.05Hz，1H)7.83(m，2H)8.06(d，J＝9.05Hz，1H).
實(shí)施例2081-氯-6-甲氧基-異喹啉-5-基-噻吩-2-基-甲酮的制備 按照前述1-氯-6-氟異喹啉的相同LDA脫質(zhì)子方法(實(shí)施例203化合物的制備)，但用2-噻吩甲醛猝滅初始陰離子，得到1-氯-6-氟異喹啉-5-基-噻吩-2-基-甲醇。使用MnO2的苯溶液將所述物質(zhì)氧化成1-氯-6-氟-異喹啉-5-基-噻吩-2-甲酮，經(jīng)層析純化后總收率為49.6％。LC/MS Rt-min(MH+)[方法C]2.98(292)。1H NMR(400MHz，氯仿-D)δppm 7.12(dd，J＝4.89，3.91Hz，1H)7.40(m，1H)7.53(m，1H)7.56(dd，J＝5.87，0.73Hz，1H)7.82(dd，J＝5.01，1.10Hz，1H)8.27(d，J＝5.87Hz，1H)8.54(ddd，J＝9.29，5.38，0.73Hz，1H)。在過(guò)量甲醇鉀溶液中進(jìn)行氟原子的Ipso親核芳族置換，得到主產(chǎn)物1-氯-6-甲氧基-異喹啉-5-基-噻吩-2-甲酮，以及25-33％的1，6-二甲氧基-異喹啉-5-基-噻吩-2-甲酮。所述粗產(chǎn)物(77mg)未經(jīng)進(jìn)一步純化，直接用三肽進(jìn)行烷基化步驟。
實(shí)施例209化合物209的制備 按照三肽烷基化的通用方法(實(shí)施例184)，得到35.3mgBOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-6-甲氧基-5-(噻吩-2-羰基)-異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷，為淺色固體物(26.5％)。LC/MS Rt-min(MH+)2.54(825)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.02(s，9H)1.06(m，2H)1.22(m，2H)1.26(s，9H)1.43(m，1H)1.87(dd，J＝7.95，5.50Hz，1H)2.28(m，2H)2.62(dd，J＝13.82，6.97Hz，1H)2.93(m，1H)3.90(s，3H)4.07(dd，J＝11.62，3.06Hz，1H)4.23(s，1H)4.43(m，1H)4.55(dd，J＝9.78，7.34Hz，1H)5.09(m，1H)5.29(d，J＝17.12Hz，1H)5.74(m，1H)5.86(s，1H)6.93(d，J＝6.11Hz，1H)7.11(m，1H)7.32(dd，J＝3.91，0.98Hz，1H)7.46(d，J＝9.29Hz，1H)7.86(t，J＝6.72Hz，1H)7.91(dd，J＝4.89，1.22Hz，1H)8.39(d，J＝9.29Hz，1H).
采用肉桂酸衍生物制備P2*。下述通用方法已在其它地方進(jìn)行了詳細(xì)描述。
通用合成方案 實(shí)施例210化合物210的制備將10.0g間甲苯基丙烯酸(61.7mmol)懸浮在50ml苯中，依次加入12.6ml DPPA(0.95eq)和10.3ml三乙胺(1.2eq)。所得的溶液在室溫下攪拌1hr。真空除去揮發(fā)份，將所得的間甲苯基丙烯酰疊氮化物經(jīng)快速層析純化，得到11.5g純化合物(定量)。將所得物質(zhì)溶于100mL二苯基甲烷中，隨后在1小時(shí)內(nèi)滴加入100ml預(yù)加熱至200℃的二苯基甲烷中。將所得的溶液于該溫度下再保溫4小時(shí)，隨后冷卻至室溫。形成白色沉淀物，過(guò)濾。將固體物用己烷洗滌三次并干燥。濾液用200ml己烷稀釋，將溶液靜置過(guò)夜，以分離出第二批產(chǎn)物。將兩批產(chǎn)物合并，得到4.2g 6-甲基-異喹啉-1-醇(50％)。LC/MS Rt-min(MH+)1.31(160)[方法B]。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm2.49(s，3H)6.61(d，J＝7.32Hz，1H)7.13(d，J＝7.02Hz，1H)7.36(d，J＝8.24Hz，1H)7.45(s，1H)8.18(d，J＝8.24Hz，1H)。將所述產(chǎn)物懸浮在15ml磷酰氯中并回流3h。真空除去磷酰氯后，將剩余物在EtOAc(1L)和冷氫氧化鈉水溶液(由1.0N 200mL NaOH和20mL 10.0N NaOH制得)間分配并攪拌15min。有機(jī)層用水(2×200mL)和鹽水(200mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮，得到1-氯-6-甲基-異喹啉(67.4％)。LC/MSRt-min(MH+)1.92(178)[方法B]。1H NMR(400MHz，氯仿-D)δppm2.53(s，3H)7.47(d，J＝6.11Hz，2H)7.56(s，1H)8.18(m，2H)。最后使用前述方法(實(shí)施例184)，用三肽進(jìn)行1-氯-6-甲基-異喹啉的烷基化。
得到BOCNH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(6-甲基異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2-環(huán)丙烷，為白色泡沫狀物，收率18％。LC/MS Rt-min(MNa+)[方法B]2.64(720)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.05(m，13H)1.23(m，9H)1.42(m，1H)1.86(dd，J＝7.95，5.50Hz，1H)2.25(m，2H)2.49(s，3H)2.61(dd，J＝13.82，6.48Hz，1H)2.93(m，1H)4.05(dd，J＝11.86，3.30Hz，1H)4.23(s，1H)4.43(d，J＝11.49Hz，1H)4.52(m，1H)5.10(d，J＝11.49Hz，1H)5.28(d，J＝17.12Hz，1H)5.74(m，1H)5.83(s，1H)7.24(d，J＝5.87Hz，1H)7.35(d，J＝8.07Hz，1H)7.58(s，1H)7.89(d，J＝5.87Hz，1H)8.07(d，J＝8.56Hz，1H).
實(shí)施例211化合物211的制備 按照前述通用方法，得到BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(1，3-二氧雜-7-氮雜-環(huán)戊烯并[α]萘-6-醇)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷，51.0mg，為淺色固體物(64.9％)。LC/MSRt-min(MH+)2.57(728)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 0.99(s，9H)1.07(m，2H)1.18(m，11H)1.42(m，1H)1.86(dd，J＝8.07，5.62Hz，1H)2.23(m，2H)2.59(dd，J＝13.69，6.85Hz，1H)2.93(m，1H)4.04(dd，J＝11.74，2.20Hz，1H)4.22(s，1H)4.43(d，J＝11.74Hz，1H)4.51(m，1H)5.10(d，J＝10.27Hz，1H)5.28(d，J＝17.12Hz，1H)5.73(m，1H)5.82(s，1H)6.18(s，2H)7.13(d，J＝8.56Hz，1H)7.19(d，J＝6.11Hz，1H)7.81(d，J＝8.56Hz，1H)7.85(d，J＝6.11Hz，1H).
5，6，7-三取代異喹啉P2*衍生物的制備 反應(yīng)條件(a)LDA的THF溶液；(b)對(duì)于R＝F，用N-氟苯磺酰亞胺(NFSI)，或?qū)τ赗＝SMe，用二甲二硫(MeS)2。
在強(qiáng)堿(如LDA)存在下，將如上制得的5，6-亞甲二氧基-1-氯異喹啉直接脫質(zhì)子，得到相應(yīng)的7-陰離子，沒(méi)有破壞1-氯官能團(tuán)。將7-陰離子用親電試劑(如NFSI(N-氟苯磺酰亞胺)和二甲二硫)猝滅，得到相應(yīng)的7-取代異喹啉環(huán)體系。
實(shí)施例212化合物212的制備步驟15，6-亞甲二氧基-7-氟-1-氯異喹啉的制備。
在氮?dú)鈿夥铡?78℃下，向5，6-亞甲二氧基-1-氯異喹啉(126mg，0.61mmol)在4ml THF中的溶液內(nèi)加入LDA的環(huán)己烷溶液(1.5mol，0.65mL，0.98mmol)。將所得的淺棕色溶液攪拌15min，接著用N-氟苯磺酰亞胺(NFSI，0.3g，1.5當(dāng)量)處理。TLC分析表明除未反應(yīng)的原料外，還形成了新的斑點(diǎn)。水處理，接著用乙酸乙酯萃取，得到油狀粗產(chǎn)物，該粗產(chǎn)物經(jīng)制備型HPLC純化，得到52mg(38％)。
LC/MS Rt-min(MH+)[方法C]3.09(226)。1H NMR(400MHz，氯仿-D)δppm 6.33(s，2H)7.52(d，J＝5.87Hz，1H)7.71(d，J＝10.51Hz，1H)8.16(d，J＝5.87Hz，1H)。步驟2如上所述(實(shí)施例184)，用三肽進(jìn)行5，6-亞甲二氧基-7-氟-1-氯異喹啉的烷基化，主要得到氟置換的產(chǎn)物。
下述的BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(6-氯-1，3-二氧雜-7-氮雜-環(huán)戊烯并[α]萘-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷 按照通用方法，得到24.3mg(24.3％)黃色固體物。LC/MS Rt-min(MH+)2.54(763)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.00(s，9H)1.06(m，2H)1.20(m，2H)1.29(s，9H)1.42(dd，J＝9.41，5.26Hz，1H)1.86(dd，J＝8.07，5.38Hz，1H)2.24(m，2H)2.54(dd，J＝13.57，6.48Hz，1H)2.92(m，1H)4.04(dd，J＝12.10，2.81Hz，1H)4.20(d，J＝7.34Hz，1H)4.33(d，J＝12.23Hz，1H)4.47(dd，J＝10.52，6.85Hz，1H)5.10(dd，J＝10.39，1.59Hz，1H)5.28(dd，J＝17.12，1.22Hz，1H)5.46(d，J＝5.87Hz，1H)5.74(m，1H)6.29(m，2H)7.40(s，1H)7.56(m，1H)8.01(d，J＝5.62Hz，1H).
實(shí)施例213化合物213的制備在氮?dú)鈿夥铡?78℃下，向5，6-亞甲二氧基-1-氯異喹啉(84mg，0.41mmol)在4ml THF中的溶液內(nèi)加入LDA的環(huán)己烷溶液(1.5mol，0.60mL，0.9mmol)。在-78℃下，將淺棕色溶液攪拌15min，隨后用二甲二硫(50μL純?cè)噭?.4當(dāng)量)處理。TLC分析表明除未反應(yīng)的原料外，還形成了新的斑點(diǎn)。水處理，接著用乙酸乙酯萃取，得到油狀粗產(chǎn)物，該粗產(chǎn)物經(jīng)制備型HPLC純化，得到51mg(49％)。LC/MS Rt-min(MH+)[方法C]3.39(254)。1H NMR(400MHz，氯仿-D)δppm2.64(s，3H)6.29(s，2H)7.49(d，J＝4.89Hz，1H)7.71(s，1H)8.11(d，J＝5.87Hz，1H)。如上所述(實(shí)施例184)，用三肽進(jìn)行5，6-亞甲二氧基-7-甲硫基-1-氯異喹啉的烷基化，得到如下所示所需的產(chǎn)物BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(4-甲硫基-1，3-二氧雜-7-氮雜環(huán)戊烯并[α]萘-6-氧基)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷 按照通用方法，得到59.6mg黃色固體物(42.2％)。LC/MS Rt-min(MH+)2.70(774)[方法B]。1H NMR(400MHz，氯仿-D)δppm1.02(m，11H)1.16(s，9H)1.32(s，2H)1.45(m，1H)1.94(m，1H)2.12(d，J＝8.56Hz，1H)2.56(s，3H)2.62(m，2H)2.90(d，J＝4.40Hz，1H)4.15(d，J＝7.83Hz，2H)4.48(d，J＝12.47Hz，1H)4.62(t，J＝7.83Hz，1H)5.13(d，J＝10.52Hz，1H)5.26(d，J＝17.12Hz，1H)5.74(d，J＝16.38Hz，1H)5.95(s，1H)6.28(s，2H)7.41(s，1H)7.59(s，1H)7.85(d，J＝6.11Hz，1H)。
3，4-二取代的異喹啉P2*衍生物的制備實(shí)施例215化合物215的制備 化合物215按照下述方案，制備下述BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(1R)-(2，3-二氫-1H-4-氮雜-環(huán)戊烯并[α]萘-5-氧基)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷異喹啉組分化合物214的通用合成方案 注按照以下引用的技術(shù)可成功合成新的1-氟代P2*(1)Rigby，James H.；Holswo rth，Daniel D.；James，Kelly.VinylIsocyanates In Synthesis.[4+2]Cycloaddition Reactions With BenzyneAddends.Journal Of Organic Chemistry(1989)，54(17)，4019-20(2)Uchibori，Y.；Umeno，M.；Yoshiokai，H.；Heterocycles，1992，34(8)，1507-1510實(shí)施例214化合物214，5-氯-2，3-二氫-1H-4-氮雜-環(huán)戊烯并[α]萘和實(shí)施例215的化合物215的制備 按照上述引用的Rigby的文獻(xiàn)(參考文獻(xiàn)1)的方法，制備2，3-二氫-1H-4-氮雜-環(huán)戊烯并[α]萘-5-醇。使用本文其它地方描述的磷酰氯，合成化合物214，收率59.8％(430mg)。LC/MS Rt-min(MH+)2.29(204)[方法B]。1H NMR(400MHz，氯仿-D)δppm 2.28(m，2H)3.19(q，J＝7.74Hz，4H)7.58(m，1H)7.71(m，2H)8.32(d，J＝8.56Hz，1H)。按照實(shí)施例184的方法，使所述氯化物與三肽充分反應(yīng)進(jìn)行烷基化，得到所需的產(chǎn)物化合物215。如按照上述Uchibori的方法(參考文獻(xiàn)2)，用氟化物代替氯化物，則可得到雙倍的收率。由此分離出17.0mg化合物215，為淺黃色固體物(23.6％)。LC/MS Rt-min(MH+)2.80(724)[方法B]。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 1.03(s，9H)1.09(m，2H)1.24(m，11H)1.44(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)1.88(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)2.25(m，4H)2.63(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)2.94(m，1H)3.05(m，2H)3.10(m，2H)4.08(dd，J＝11.60，2.75Hz，1H)4.24(d，J＝20.45Hz，1H)4.45(d，J＝11.90Hz，1H)4.54(dd，J＝9.46，7.63Hz，1H)5.11(m，1H)5.30(d，J＝17.09Hz，1H)5.75(m，1H)5.87(s，1H)7.44(t，J＝7.02Hz，1H)7.69(m，2H)8.18(d，J＝8.24Hz，1H).
實(shí)施例217和218的3，4-二氫呋喃基和呋喃基異喹啉P2*組分的制備，通用合成方案 實(shí)施例217化合物217，5-氯-2，3-二氫-1-氧雜-4-氮雜-環(huán)戊烯并[α]萘和化合物218，5-氯-1-氧雜-4-氮雜-環(huán)戊烯并[α]萘的制備。
該合成方法部分按照以下參考文獻(xiàn)中描述的技術(shù)(1)Hojo，Masaru；Masuda，Ryoichi；Sakaguchi，Syuhei；Takagawa，Makoto，Synthesis(1986)，(12)，1016-17(2)Rigby，James H.；Holswo rth，Daniel D.；James，Kelly.VinylIsocyanates In Synthesis.[4+2]Cycloaddition Reactions With BenzyneAddends.Journal Of Organic Chemistry(1989)，54(17)，4019-20(3)Uchibori，Y.；Umeno，M.；Yoshiokai，H.；Heterocycles，1992，34(8)，1507-1510當(dāng)按照上述引用文獻(xiàn)(參考文獻(xiàn)1和2)的方法時(shí)，同時(shí)得到2，3-二氫-1-氧雜-4-氮雜-環(huán)戊烯并[α]萘-5-醇和1-氧雜-4-氮雜-環(huán)戊烯并[α]萘-5-醇。按照通用方法，采用磷酰氯將該對(duì)化合物轉(zhuǎn)化成其氯代衍生物粗羥基產(chǎn)物(約2g，淺黃色油狀物)用15ml磷酰氯處理，并將混合物回流3h。真空除去磷酰氯后，將剩余物與EtOAc(1L)和冷氫氧化鈉水溶液(220mL，1.0N)一起攪拌15min。分離出有機(jī)層，用水(2×200mL)和鹽水(200mL)洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮，經(jīng)硅膠層析分離后，得到300mg實(shí)施例217的產(chǎn)物5-氯-2，3-二氫-1-氧雜-4-氮雜-環(huán)戊烯并[α]萘(13.2％)和100mg實(shí)施例218的產(chǎn)物5-氯-1-氧雜-4-氮雜-環(huán)戊烯并[α]萘(4.4％)，均為淺棕色固體物?；衔?17LC/MS Rt-min(MH+)2.05(206)[方法B]。1H NMR(400MHz，氯仿-D)δppm 3.46(t，J＝9.05Hz，2H)4.82(t，J＝9.17Hz，2H)7.58(m，1H)7.66(m，1H)7.85(d，J＝8.31Hz，1H)8.21(d，J＝8.56Hz，1H)?；衔?18LC/MSRt-min(MH+)2.16(204)[方法B]。1H NMR(400MHz，氯仿-D)δppm7.15(d，J＝2.20Hz，1H)7.70(m，1H)7.89(m，2H)8.27(d，J＝8.31Hz，1H)8.44(d，J＝8.80Hz，1H)。
5-氟-2，3-二氫-1-氧雜-4-氮雜-環(huán)戊烯并[α]萘和最終的P2*偶合產(chǎn)物的制備。
按照上述引用的方法(參考文獻(xiàn)3)進(jìn)行氯化物/氟化物的交換。為此，將90mg 5-氯-2，3-二氫-1-氧雜-4-氮雜-環(huán)戊烯并[α]萘(實(shí)施例217化合物)懸浮在1.5ml Bu4PHF2中，隨后在微波下輻射(Smith反應(yīng)器)至約120℃下反應(yīng)2h。經(jīng)水處理和柱層析純化后，得到22mg氟化物產(chǎn)物(26.9％)。LC/MS Rt-min(MH+)1.91(190)[方法B]。所述呋喃衍生物(實(shí)施例218化合物)5-氯-1-氧雜-4-氮雜-環(huán)戊烯并[α]萘未經(jīng)氟化物活化，直接與三肽充分反應(yīng)，進(jìn)行烷基化。
實(shí)施例219化合物219的制備
BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2，3-二氫-1-氧雜-4-氮雜-環(huán)戊烯并[α]萘-5-氧基)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷。按照通用烷基化方法，得到22.0mg黃色固體物(26.3％)。LC/MS Rt-min(MH+)2.65(726)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 0.99(s，9H)1.07(m，2H)1.20(m，11H)1.40(m，1H)1.86(dd，J＝8.07，5.62Hz，1H)2.21(dd，J＝17.48，8.93Hz，2H)2.60(dd，J＝13.45，6.85Hz，1H)2.93(m，1H)3.34(m，2H)4.04(dd，J＝11.74，3.18Hz，1H)4.24(s，1H)4.41(d，J＝11.49Hz，1H)4.51(m，1H)4.74(t，J＝9.05Hz，2H)5.11(d，J＝10.27Hz，1H)5.28(d，J＝17.36Hz，1H)5.73(m，1H)5.78(s，1H)7.43(m，1H)7.65(t，J＝7.46Hz，1H)7.74(d，J＝8.31Hz，1H)8.12(d，J＝8.56Hz，1H).
實(shí)施例220化合物220的制備 BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(1-氧雜-4-氮雜-環(huán)戊烯并[α]萘-5-氧基)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷。按照通用烷基化方法，得到13.0mg黃色固體物(20％)。LC/MS Rt-min(MH+)2.70(724)[方法B]。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 1.01(S，，9H)1.09(m，2H)1.22(s，9H)1.27(m，2H)1.46(m，1H)1.89(dd，J＝7.78，5.65Hz，1H)2.24(d，J＝8.55Hz，1H)2.33(t，J＝9.92Hz，1H)2.68(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)2.95(m，1H)4.14(m，1H)4.26(s，1H)4.50(d，J＝11.90Hz，1H)4.57(d，J＝17.09Hz，1H)5.12(d，J＝10.07Hz，1H)5.30(d，J＝17.40Hz，1H)5.75(m，1H)5.93(s，1H)6.97(d，J＝2.14Hz，1H)7.51(t，J＝7.32Hz，1H)7.81(t，J＝7.48Hz，1H)7.92(s，1H)8.13(d，J＝7.94Hz，1H)8.28(d，J＝8.24Hz，1H).
3-鹵代和3-雜芳基4-烷氧基和4-羥基異喹啉P*衍生物的制備通用合成方案 反應(yīng)條件(1)MeOK的DMPU溶液；(2)NBS的二氯乙烷；(3)MCPBA的二氯甲烷溶液；(4)磷酰氯的二氯乙烷溶液；(5)BBr3的二氯甲烷溶液；(6)SEM-氯化物和Hunig氏堿的二氯甲烷溶液按照新且方便的方法，使用普通實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和試劑，由4-溴異喹啉制備4-甲氧基異喹啉(實(shí)施例222a化合物)。采用區(qū)域選擇性NBS溴化，以良好收率得到3-溴-4-甲氧基異喹啉(實(shí)施例222b化合物)。平緩地進(jìn)行MCPBA氧化，得到相應(yīng)的N-氧化物(實(shí)施例222c化合物)，使用常規(guī)的磷酰氯方法，將該化合物經(jīng)異構(gòu)化得到1-氯-3-溴-4-甲氧基異喹啉(實(shí)施例222d)。采用三肽將4-甲氧基異喹啉烷基化，得到相應(yīng)的3-溴-4-甲氧基P2*衍生物，適用于Stille和Suzuki偶合。或者將所述4-甲氧基異喹啉用BBr3脫甲基，得到4-羥基-3-溴-1-氯異喹啉(實(shí)施例222e化合物)。再次用SEM-氯化物保護(hù)4-羥基，得到4-SEM保護(hù)的中間體實(shí)施例222化合物。按照酸誘導(dǎo)或氟誘導(dǎo)的脫保護(hù)方法進(jìn)行偶合，再次得到4-羥基化合物。
實(shí)施例222d1-氯-3-溴-4-甲氧基異喹啉的制備步驟1向4-溴異喹啉(15g，73mmol，商品)在200mL二甲基-3，4，5，6-四氫-2(1H)-嘧啶酮(DMPU，Aldrich)中的溶液內(nèi)加入固體甲醇鉀(5.6gm，80mmol)。將反應(yīng)容器浸入105℃的油浴中20min。在受熱下，混合物的顏色由初始時(shí)的非常淺顏色很快變?yōu)樯罹G棕色。將反應(yīng)容器從油浴中移出，并用水稀釋，用乙醚多次萃取，將有機(jī)剩余物分配至乙醚中。TLC分析表明存在兩個(gè)新的斑點(diǎn)(1∶1體積比，己烷和乙酸乙酯的混合物作為洗脫液)，大小大約相同。將它們經(jīng)硅膠柱層析(Merck，H型)分離。洗脫液直鏈己烷，接著在流動(dòng)相中逐漸加入乙醚。蒸發(fā)溶劑后，分離出所需的產(chǎn)物4-甲氧基異喹啉(4.1gm，35.3％)。還分離出其它產(chǎn)物，為還原反應(yīng)副產(chǎn)物異喹啉。副產(chǎn)物經(jīng)NMR確證，并與已知物質(zhì)對(duì)比確認(rèn)。實(shí)施例222aLC/MS Rt-min(MH+)[方法C]1.16(160)。1H NMR(400MHz，氯仿-D)δ4.07(s，3H)7.61(m，1H)7.69(m，1H)7.93(d，J＝8.07Hz，1H)8.08(s，1H)8.19(d，J＝8.56Hz，1H)8.89(s，1H)。[注該化合物先后由Zoltewicz，John A.；Oestreich，Terence M.；Sale，Alan A，Journal of the American ChemicalSociety(1975)，97(20)，5889-96，″Monel Bomb″和″focusedmicrowave″，Cherng，Yie-Jia，Tetrahedron(2002)，58(6)，1125-1129制得。本發(fā)明的方法既不需要特殊的高壓裝置，也不需要制備級(jí)的微波設(shè)備。
步驟2將4-甲氧基異喹啉(實(shí)施例222a的產(chǎn)物)進(jìn)行NBS溴化，為此將所述物質(zhì)(實(shí)施例222a的產(chǎn)物，2.1gm，13.2mmol)在1，2-二氯乙烷(DCE，150mL)中的溶液在70℃下用N-溴代琥珀酰亞胺(NBS，1.5gm，8.4mmol，0.6×)處理1小時(shí)，接著加入第二部分1.5gm NBS。再將所得深棕色混合物攪拌1小時(shí)，接著加入第三部分1.0gm NBS。采用LC-MS監(jiān)控該溴化反應(yīng)，直至沒(méi)有原料存在。將粗品混合物蒸發(fā)至干，經(jīng)短硅膠柱(H型，Merck，直徑3cm×高1.5cm)過(guò)濾所需的產(chǎn)物，洗脫液先為直鏈己烷，接著逐漸增加乙醚的量。分離出所需的產(chǎn)物(實(shí)施例222b化合物)，為油狀物質(zhì)(1.7gm，54％)。LC/MSRt-min(MH+)[方法C]2.65(238)。1H NMR(400MHz，氯仿-D)δppm4.04(s，3H)7.64(t，J＝7.58Hz，1H)7.76(t，J＝7.09Hz，1H)7.99(d，J＝8.31Hz，1H)8.11(d，J＝8.31Hz，1H)8.85(s，1H)。[3-溴-4-甲氧基異喹啉預(yù)先采用不同的方法制得Finkentey，Christel；Langhals，Elke；Langhals，Heinz.Chemische Berichte(1983)，116(6)，2394-7。產(chǎn)物的NMR位移值與報(bào)導(dǎo)的一致]。
步驟3室溫下，在二氯甲烷中，將NBS溴化反應(yīng)的產(chǎn)物進(jìn)行MCPBA氧化反應(yīng)。為此，將MCPBA(1.80g，純度77％，8.0mmol)加入3-溴-4-甲氧基異喹啉(實(shí)施例222b化合物，1.65gm，6.9mmol)在35ml二氯甲烷中的溶液內(nèi)。將溶液攪拌4h形成白色懸浮液。將碳酸氫鈉溶液(5％，新鮮制備，20mL)加入混合物中，有機(jī)剩余物用二氯甲烷(10×25mL)萃取。需要對(duì)有機(jī)溶劑進(jìn)行多次萃取，以回收一些N-氧化物產(chǎn)物水溶液。將蒸發(fā)溶劑得到的粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠過(guò)濾進(jìn)一步純化，得到1.36mg(5.4mmol，78％)所述N-氧化物(實(shí)施例222c化合物)，為蠟狀固體物。
LC/MS Rt-min(MH+)[方法C]1.79(254)。1H NMR(400MHz，氯仿-D)δppm 4.07(s，3H)7.63(m，2H)7.72(m，1H)8.00(m，1H)8.86(s，1H)。
步驟4使用其它地方描述的方法，通常在磷酰氯中進(jìn)行最終N-氧化物的重排反應(yīng)。實(shí)施例222d產(chǎn)物的收率基本為定量。LC/MS Rt-min(MH+)[方法D]2.69(272)。1H NMR(鹽酸鹽)(400MHz，氯仿-D)δppm 4.07(s，3H)7.81(m，1H)7.92(m，1H)8.17(d，J＝8.31Hz，1H)8.34(d，J＝8.31Hz，1H)。1H NMR(游離堿)(400MHz，氯仿-D)δppm 4.03(s，3H)7.72(m，1H)7.81(m，1H)8.12(d，J＝8.56Hz，1H)8.28(d，J＝8.56Hz，1H)。
實(shí)施例223化合物223的制備 按照其它地方描述的烷基化方法(實(shí)施例184)，采用三肽片斷將前述步驟得到的游離堿(實(shí)施例222d的產(chǎn)物)烷基化，得到79％所需的產(chǎn)物，為紙白色固體物。LC/MS Rt-min(MNa+)[方法C]3.91(814)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.02(s，9H)1.06(dd，J＝8.07，1.47Hz，2H)1.22(m，11H)1.42(dd，J＝9.78，5.14Hz，1H)1.86(dd，J＝8.07，5.38Hz，1H)2.22(dd，J＝18.10，9.29Hz，1H)2.28(m，1H)2.61(dd，J＝13.57，6.97Hz，1H)2.93(m，1H)3.92(s，3H)4.06(dd，J＝11.86，2.81Hz，1H)4.22(s，1H)4.43(d，J＝11.49Hz，1H)4.51(m，1H)5.10(d，J＝10.52Hz，1H)5.28(d，J＝17.12Hz，1H)5.74(m，1H)5.81(s，1H)7.56(t，J＝7.58Hz，1H)7.78(t，J＝7.58Hz，1H)8.00(d，J＝8.31Hz，1H)8.16(d，J＝8.56Hz，1H).
實(shí)施例224和225化合物224和化合物225的制備按照以下方法，將前述1-氯-3-溴-4-甲氧基異喹啉(實(shí)施例222d的產(chǎn)物)的4-甲氧基轉(zhuǎn)化為α-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基(SEM)部分。室溫下，采用BBr3將1-氯-3-溴-4-甲氧基異喹啉(實(shí)施例222d的產(chǎn)物)脫甲基(最終調(diào)節(jié)反應(yīng)物濃度，使得BBr3為0.2-0.3mol)12h。發(fā)現(xiàn)在這種脫甲基反應(yīng)中使用高BBr3濃度是必需且有效的。在蒸發(fā)至干前，將粗反應(yīng)混合物用50體積無(wú)水甲醇稀釋。脫甲基反應(yīng)基本定量完成。實(shí)施例222e的產(chǎn)物L(fēng)C/MS Rt-min(MH+)[方法D]2.32(258)。1H NMR(游離鹽酸鹽)(400MHz，氯仿-D)δppm 5.83(br.s，1H)7.73(t，J＝7.70Hz，1H)7.79(t，J＝7.58Hz，1H)8.22(m，2H)。用2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(SEM-Cl)再次保護(hù)所述4-羥基-3-溴-1-氯異喹啉(實(shí)施例222e的產(chǎn)物)。室溫下，將前述制備得到的粗游離堿在40微米(Hg)下干燥，接著再用SEM-氯化物保護(hù)。在0℃下，向4-羥基化合物(實(shí)施例222e的產(chǎn)物，1.33gm，5.2mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液中依次加入二異丙基乙胺(2mL，11.5mmol)和SEM-氯化物(1.8mL，10mmol)。將混合物攪拌10min，隨后用新鮮制備碳酸氫鈉溶液(5％，100mL)洗滌。有機(jī)剩余物用二氯甲烷萃取數(shù)次，合并的有機(jī)層用20mL去離子水回洗，接著將其真空濃縮。SEM保護(hù)基本定量進(jìn)行。實(shí)施例222的產(chǎn)物L(fēng)C/MS Rt-min(MH+)[方法D]3.40(410)。1H NMR(400MHz氯仿-D)δppm 0.03(s，9H)，0.99(m，2H)，3.98(m，2H)，5.33(s，2H)，7.72(m，1H)，7.80(m，1H)，8.17(d，J＝8.56Hz，1H)，8.27(d，J＝8.07Hz，1H)。用三肽將4-SEM保護(hù)的異喹啉烷基化按照相同三肽烷基化反應(yīng)得到化合物224和化合物225。4-羥基化合物(化合物224)最有可能是在制備型HPLC純化過(guò)程中存在TFA產(chǎn)生。

實(shí)施例224化合物(15.4％)LC/MS Rt-min(MNa+)[方法D]2.87(800)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.02(s，9H)1.06(d，J＝8.31Hz，2H)1.25(s，9H)1.42(s，2H)1.86(m，1H)2.23(m，2H)2.60(dd，J＝13.21，7.34Hz，1H)2.93(m，1H)4.06(d，J＝11.00Hz，1H)4.24(m，2H)4.38(d，J＝11.98Hz，1H)4.49(dd，J＝9.78，7.09Hz，1H)5.10(d，J＝10.03Hz，1H)5.28(d，J＝17.36Hz，1H)5.72(m，1H)5.76(s，1H)7.52(t，J＝7.46Hz，1H)7.71(t，J＝7.09Hz，1H)8.09(d，J＝4.40Hz，1H)8.11(d，J＝4.16Hz，1H).
實(shí)施例225化合物(8.0％)LC/MS Rt-min([M-BOC]+)[方法D]3.46(808)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 0.01(s，9H)0.96(m，2H)1.02(s，11H)1.06(d，J＝6.60Hz，2H)1.24(s，9H)1.42(m，1H)1.86(dd，J＝7.83，5.38Hz，1H)2.25(m，2H)2.62(dd，J＝13.69，7.34Hz，1H)2.93(m，1H)3.97(m，2H)4.07(dd，J＝10.88，3.55Hz，1H)4.23(s，1H)4.43(d，J＝11.25Hz，1H)4.50(m，1H)5.10(d，J＝10.76Hz，1H)5.25(m，3H)5.74(m，1H)5.82(s，1H)7.57(m，1H)7.77(t，J＝7.83Hz，1H)8.06(d，J＝8.56Hz，1H)8.16(d，J＝8.31Hz，1H).
4H-[1，3]二_烯并[5，4-c]異喹啉P2*衍生物的制備通用合成方案 反應(yīng)條件(1)MeOK/DMPU；(2)MCPBA的二氯甲烷溶液；(3)磷酰氯的DCE溶液；(4)BBr3的二氯甲烷溶液；(5)HCHO/40％H2SO4，按照1，3-_嗪并[5，6-c]異喹啉和相關(guān)化合物的合成方法，MiyokoToyama和Hirotaka Otomasu，Chem.Pharm.Bull.33(12)，5543-5546，1985；(6)按照Uchibori，Y.；Umeno，M.；Yoshiokai，H.；Heterocycles，1992，34(8)，1507-1510的氟化反應(yīng)方法。
實(shí)施例227化合物227的制備 按照Miyoko Toyama和Hirotaka Otomasu的方法，以1-氯-4-羥基異喹啉為原料，制備6-氯-1，3-_嗪并[5，6-c]異喹啉。原料1-氯-4-羥基異喹啉(實(shí)施例226c的產(chǎn)物)按上述合成方法制備。按通用方法進(jìn)行4-甲氧基異喹啉(實(shí)施例222a的產(chǎn)物)的MCPBA氧化，得到79.1％相應(yīng)的N-氧化物(實(shí)施例226a的產(chǎn)物)。隨后立即在磷酰氯中將所述物質(zhì)轉(zhuǎn)化為1-氯衍生物，基本定量得到氯化物(實(shí)施例226b的產(chǎn)物)。室溫下，將粗1-氯-4-甲氧基異喹啉用BBr3脫甲基，室溫下用無(wú)水甲醇處理所得粗BBr3混合物，接著蒸發(fā)除去過(guò)量的硼酸鹽剩余物，得到相應(yīng)的1-氯-4-羥基異喹啉(實(shí)施例226c的產(chǎn)物)。進(jìn)行MiyokoToyama和Hirotaka Otomasu反應(yīng)，得到266mg 6-氯-1，3-_嗪并[5，6-c]異喹啉(實(shí)施例226d的產(chǎn)物，62.3％)，4步反應(yīng)總共得到300mg 4-甲氧基異喹啉。LC/MS Rt-min([M-HCHO]H+)[方法D]2.45(192)。1HNMR(400MHz，氯仿-D)δppm 5.02(s，2H)5.41(s，2H)7.68(m，1H)7.77(ddd，J＝8.25，6.91，1.22Hz，1H)8.10(d，J＝8.31Hz，1H)8.26(d，J＝8.56Hz，1H)。
發(fā)現(xiàn)按照實(shí)施例184的烷基化方法，所述氯化物仍未反應(yīng)。按照前面引用文獻(xiàn)[Uchibori，Y.；Umeno，M.；Yoshiokai，H.；Heterocycles，1992，34(8)，1507-1510]的方法制備相應(yīng)的6-氟-1，3-_嗪并[5，6-c]異喹啉(實(shí)施例226的產(chǎn)物)。反應(yīng)沒(méi)有進(jìn)行完全，回收的粗反應(yīng)混合物為1∶2.4(Cl∶F)的混合物。按照實(shí)施例184的方法，所述氯/氟混合物未經(jīng)進(jìn)一步純化直接采用三肽烷基化，經(jīng)制備型HPLC純化后，得到66mg(50.0％)BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(1，3-_嗪并[5，6-c]異喹啉-6-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷。LC/MS Rt-min(MNa+)[方法D]3.03(764)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.01(s，9H)1.06(dd，J＝8.07，1.96Hz，2H)1.22(s，10H)1.34(d，J＝6.11Hz，1H)1.42(m，1H)1.86(dd，J＝8.07，5.38Hz，1H)2.23(m，2H)2.59(dd，J＝13.82，6.97Hz，1H)2.93(m，1H)4.03(dd，J＝11.86，3.06Hz，1H)4.23(s，1H)4.41(d，J＝11.98Hz，1H)4.50(dd，J＝9.66，6.97Hz，1H)4.87(m，2H)5.11(d，J＝10.52Hz，1H)5.28(d，J＝17.12Hz，1H)5.34(s，2H)5.74(m，2H)7.51(t，J＝7.46Hz，1H)7.70(t，J＝7.58Hz，1H)7.95(d，J＝8.31Hz，1H)8.12(d，J＝8.31Hz，1H).
通過(guò)Suzuki和Stille偶合反應(yīng)制備4-甲氧基-3-雜芳基和3-偶氮基異喹啉P2*衍生物以下所示的偶合技術(shù)說(shuō)明實(shí)施例223的溴代衍生物的一般應(yīng)用。應(yīng)理解可采用其它偶合劑和除硼和錫外的其它催化劑的組合實(shí)施相同的方法。
實(shí)施例229化合物229的制備通過(guò)如下所示的Suzuki偶合制備BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(3-呋喃-3-基-4-甲氧基-異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷 將22mg(0.028mmol)實(shí)施例223的產(chǎn)物溶于1ml DMF中，加入9.4mg商品硼酸(3eq)、3mg催化劑(10％mmol)和18mg碳酸銫。將混合物脫氣兩次，隨后在110℃下加熱3h。終產(chǎn)物經(jīng)制備型HPLC純化，得到13.6mg黃色固體物(64.0％)。LC/MS Rt-min(MH+)2.85(780)[方法B]。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 1.09(m，11H)1.26(m，12H)1.68(m，1H)2.27(s，1H)2.64(m，2H)2.97(m，1H)3.86(s，3H)4.15(d，J＝10.38Hz，1H)4.28(s，1H)4.43(d，J＝10.99Hz，1H)4.56(m，1H)5.11(m，2H)5.63(m，1H)5.99(s，1H)7.20(s，1H)7.51(m，1H)7.61(m，1H)7.75(t，J＝7.17Hz，1H)8.03(d，J＝8.24Hz，1H)8.16(d，J＝8.24Hz，1H)8.27(s，1H).
實(shí)施例230化合物230的制備通過(guò)如下所示的Stille偶合反應(yīng)合成BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(3-呋喃-2-基-4-甲氧基-異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷 將40mg(0.05mmol)實(shí)施例223的產(chǎn)物、4mg催化劑(5％mmol)和100μl(4eq)商品錫試劑溶于1ml甲苯中，將混合物脫氣兩次，隨后在90℃下加熱過(guò)夜。經(jīng)制備型HPLC分離后，得到19.6mg綠色固體物(50.0％)。LC/MS Rt-min(MH+)2.76(780)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 0.94(m，2H)0.98(s，9H)1.09(m，2H)1.25(s，9H)1.39(m，1H)1.60(m，1H)2.35(m，1H)2.48(m，1H)2.74(m，1H)2.95(m，1H)3.87(s，3H)4.14(m，1H)4.22(d，J＝4.16Hz，1H)4.41(s，1H)4.69(m，1H)5.26(m，1H)5.35(m，1H)5.93(s，1H)6.03(m，1H)6.61(m，1H)7.16(d，J＝3.18Hz，1H)7.50(d，J＝7.58Hz，1H)7.67(s，1H)7.73(t，J＝7.34Hz，1H)8.04(m，1H)8.17(d，J＝8.31Hz，1H).
實(shí)施例231化合物231的制備 按照類似于Stille偶合反應(yīng)方法，制備BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(3-吡嗪-2-基-4-甲氧基-異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷，收率7.1％。LC/MS Rt-min(MH+)2.51(792)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 0.98(m，9H)1.11(m，2H)1.19(s，9H)1.27(m，2H)1.42(m，1H)2.37(m，1H)2.48(m，2H)2.81(m，1H)2.97(m，1H)3.83(s，3H)4.07(s，1H)4.20(d，J＝4.16Hz，1H)4.54(d，J＝11.49Hz，1H)4.72(m，1H)5.27(m，1H)5.39(m，1H)5.96(s，1H)6.04(m，1H)7.63(s，1H)7.83(s，1H)8.17(s，1H)8.26(s，1H)8.60(d，J＝2.20Hz，1H)8.76(d，J＝2.20Hz，1H)9.33(s，1H).
實(shí)施例232化合物232的制備 按照類似于Stille偶合反應(yīng)方法，制備BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(4-甲氧基-3-噻唑-2-基-異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷，收率32.2％。LC/MS Rt-min(MH+)2.42(797)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.03(S，9H)1.07(m，2H)1.13(S，9H)1.22(m，2H)1.43(dd，J＝9.78，5.14Hz，1H)1.88(dd，J＝8.07，5.38Hz，1H)2.23(q，J＝8.97Hz，1H)2.36(m，1H)2.67(m，1H)2.94(m，1H)4.10(s，3H)4.15(m，1H)4.18(s，1H)4.53(d，J＝25.92Hz，1H)4.59(dd，J＝10.27，7.09Hz，1H)5.12(m，1H)5.29(d，J＝17.36Hz，1H)5.73(m，1H)6.09(s，1H)7.74(t，J＝7.58Hz，1H)7.91(t，J＝7.70Hz，1H)8.00(d，J＝3.42Hz，1H)8.18(d，J＝3.18Hz，1H)8.22(d，J＝8.31Hz，1H)8.29(d，J＝8.31Hz，1H).
實(shí)施例233化合物233的制備 按照通用的三肽烷基化方法，采用商品4-氯呋喃并[3，2-c]吡啶，得到5.7mg(8.2％)黃色固體物。LC/MS Rt-min(MH+)2.32(674)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.00(s，9H)1.07(m，2H)1.21(m，11H)1.41(m，1H)1.86(dd，J＝8.07，5.38Hz，1H)2.22(dd，J＝17.61，9.05Hz，2H)2.54(dd，J＝13.69，7.09Hz，1H)2.92(m，1H)4.06(m，1H)4.21(m，1H)4.32(s，1H)4.49(m，1H)5.11(dd，J＝10.27，1.47Hz，1H)5.29(dd，J＝17.36，1.22Hz，1H)5.74(m，1H)5.81(s，1H)6.83(d，J＝1.22Hz，1H)7.19(d，J＝5.87Hz，1H)7.76(d，J＝1.22Hz，1H)7.97(d，J＝5.87Hz，1H).
實(shí)施例235化合物235的制備 按照通用的三肽烷基化方法，采用商品4-氯噻吩并[3，2-c]吡啶，得到20.0mg(28.1％)黃色固體物。LC/MS Rt-min(MH+)2.50(690)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.01(s，9H)1.06(m，2H)1.21(m，11H)1.42(m，1H)1.86(dd，J＝8.19，5.50Hz，1H)2.24(m，2H)2.57(dd，J＝13.69，6.85Hz，1H)2.93(m，1H)4.05(dd，J＝11.98，3.18Hz，1H)4.22(s，1H)4.39(d，J＝11.74Hz，1H)4.50(dd，J＝9.90，7.21Hz，1H)5.10(dd，J＝10.39，1.34Hz，1H)5.28(d，J＝17.12Hz，1H)5.73(m，1H)5.81(s，1H)7.45(d，J＝5.62Hz，1H)7.53(m，2H)7.94(d，J＝5.87Hz，1H).
實(shí)施例236化合物236的制備 按照通用的三肽烷基化方法，采用商品3，5-二氯-1，2，4-噻二唑，得到8.0mg(11.9％)黃色固體物。LC/MS Rt-min(MNa+)2.37(697)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.00(s，9H)1.06(m，2H)1.22(m，2H)1.36(s，9H)1.42(m，1H)1.86(dd，J＝8.07，5.38Hz，1H)2.25(m，2H)2.60(dd，J＝14.18，6.85Hz，1H)2.92(m，1H)4.03(dd，J＝12.47，3.18Hz，1H)4.17(s，1H)4.42(m，2H)5.11(dd，J＝10.27，1.71Hz，1H)5.29(dd，J＝17.12，1.47Hz，1H)5.68(s，1H)5.74(m，1H).
實(shí)施例237化合物237的制備如下所示的BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(喹喔啉-2-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷 按照通用的三肽烷基化方法，采用商品2-氯喹喔啉，得到113.0mg(19.2％)黃色固體物。LC/MS Rt-min(MNa+)2.48(707)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.01(s，9H)1.06(m，2H)1.22(m，11H)1.42(m，1H)1.87(dd，J＝8.19，5.50Hz，1H)2.24(m，1H)2.31(m，1H)2.57(dd，J＝13.57，6.97Hz，1H)2.93(m，1H)4.09(dd，J＝11.98，3.18Hz，1H)4.17(s，1H)4.38(d，J＝11.74Hz，1H)4.50(dd，J＝10.27，7.09Hz，1H)5.11(dd，J＝10.27，1.71Hz，1H)5.29(dd，J＝17.12，1.47Hz，1H)5.74(m，1H)5.87(s，1H)7.62(t，J＝7.46Hz，1H)7.73(t，J＝7.70Hz，1H)7.87(m，1H)7.96(d，J＝8.31Hz，1H)8.42(s，1H).
實(shí)施例238化合物238的制備如下所示的BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-三氟-6-氟喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷 按照通用的三肽烷基化方法，采用商品2-三氟甲基-4-氯-6-氟喹啉，得到17.0mg(23.2％)黃色固體物。LC/MS Rt-min(MNa+)2.66(792)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.02(s，9H)1.06(m，2H)1.17(s，9H)1.23(m，2H)1.42(m，1H)1.86(dd，J＝8.07，5.38Hz，1H)2.21(q，J＝8.64Hz，1H)2.32(m，1H)2.63(dd，J＝13.94，6.85Hz，1H)2.93(m，1H)4.08(m，1H)4.18(s，1H)4.53(m，2H)5.10(m，1H)5.27(d，J＝17.12Hz，1H)5.58(s，1H)5.72(m，1H)7.39(s，1H)7.65(m，1H)7.83(dd，J＝9.29，2.69Hz，1H)8.12(dd，J＝9.29，5.14Hz，1H).
實(shí)施例239化合物239的制備如下所示的BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(6-氟喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷 按照通用的三肽烷基化方法，采用商品4-氯-6-氟喹啉，得到26.0mg(39.0％)黃色固體物。LC/MS Rt-min(MH+)1.98(702)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.04(m，11H)1.14(s，9H)1.23(m，2H)1.42(m，1H)1.87(dd，J＝8.07，5.38Hz，1H)2.23(q，J＝8.80Hz，1H)2.41(m，1H)2.75(dd，J＝14.43，6.85Hz，1H)2.93(m，1H)4.09(s，1H)4.12(d，J＝2.69Hz，1H)4.61(m，2H)5.11(dd，J＝10.39，1.59Hz，1H)5.28(dd，J＝17.24，1.34Hz，1H)5.70(m，1H)5.75(s，1H)7.62(d，J＝6.60Hz，1H)7.93(m，1H)8.06(dd，J＝8.68，2.57Hz，1H)8.20(dd，J＝9.29，4.40Hz，1H)9.06(d，J＝6.60Hz，1H).
由于F置換，在該反應(yīng)中還存在少量的副產(chǎn)物，經(jīng)制備型HPLC分離。
實(shí)施例240化合物240的分離如下所示的BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(4-氯喹啉-6-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷 得到8.0mg黃色固體物副產(chǎn)物(11.7％)。LC/MS Rt-min(MNa+)2.240(740)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.00(s，9H)1.06(m，2H)1.23(m，11H)1.42(m，1H)1.86(dd，J＝8.19，5.50Hz，1H)2.22(m，1H)2.29(m，1H)2.55(m，1H)2.92(m，1H)4.09(m，1H)4.21(s，1H)4.30(m，1H)4.46(dd，J＝10.27，6.85Hz，1H)5.11(dd，J＝10.27，1.47Hz，1H)5.28(dd，J＝17.36，1.47Hz，1H)5.43(s，1H)5.74(m，1H)7.60(dd，J＝9.29，2.45Hz，1H)7.64(d，J＝2.45Hz，1H)7.81(d，J＝4.89Hz，1H)8.06(d，J＝9.29Hz，1H)8.72(d，J＝5.14Hz，1H).
實(shí)施例241化合物241的制備如下所示的BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(8-氟喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷 按照通用的三肽烷基化方法，采用商品4-氯-8-氟喹啉，得到10.3mg(14.7％)黃色固體物。LC/MS Rt-min(MH+)1.95(702)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 0.98(s，9H)1.06(m，2H)1.14(s，9H)1.22(m，2H)1.42(m，1H)1.87(dd，J＝8.07，5.62Hz，1H)2.22(q，J＝8.72Hz，1H)2.41(m，1H)2.74(dd，J＝14.06，6.97Hz，1H)2.93(m，1H)4.11(m，2H)4.57(dd，J＝10.39，6.97Hz，1H)4.66(d，J＝12.23Hz，1H)5.11(dd，J＝10.27，1.22Hz，1H)5.28(d，J＝17.12Hz，1H)5.71(m，2H)7.59(d，J＝6.36Hz，1H)7.75(m，1H)7.86(m，1H)8.23(d，J＝8.56Hz，1H)9.02(d，J＝6.36Hz，1H).
在制備型HPLC純化過(guò)程中，也分離出副產(chǎn)物。由于氟原子置換代替了氯離去基團(tuán)，形成了4-氯喹啉-8-氧代-喹啉衍生物。
實(shí)施例242化合物242的分離如下所示的BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(4-氯喹啉-8-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷 由此得到9.0mg黃色固體物副產(chǎn)物(13.2％)。LC/MS Rt-min(MH+)2.37(718)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.00(s，9H)1.06(m，2H)1.12(s，9H)1.23(m，2H)1.43(dd，J＝9.41，5.50Hz，1H)1.87(dd，J＝8.19，5.50Hz，1H)2.25(m，1H)2.35(m，1H)2.67(dd，J＝13.94，7.09Hz，1H)2.93(m，1H)4.10(m，1H)4.13(s，1H)4.43(d，J＝11.98Hz，1H)4.65(dd，J＝10.03，7.09Hz，1H)5.12(dd，J＝10.27，1.47Hz，1H)5.30(dd，J＝17.12，1.22Hz，1H)5.51(s，1H)5.75(m，1H)7.61(d，J＝7.83Hz，1H)7.88(t，J＝8.19Hz，1H)8.04(m，2H)8.91(d，J＝5.38Hz，1H).
實(shí)施例243化合物243的制備如下所示的BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(3-羥基喹喔啉-2-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷
采用商品2，3-二氯喹喔啉實(shí)施通用的三肽烷基化方法，所得的單烷基化產(chǎn)物自發(fā)水解，得到8.0mg淺黃色固體物(11.4％)。LC/MSRt-min(MNa+)2.42(723)[方法B]。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 0.99(s，9H)1.05(m，2H)1.24(s，9H)1.40(m，3H)1.86(m，1H)2.24(m，2H)2.53(m，1H)2.92(m，1H)4.06(m，1H)4.16(s，1H)4.40(m，1H)4.55(dd，J＝10.39，6.97Hz，1H)5.11(m，1H)5.29(m，1H)5.73(m，1H)5.78(s，1H)7.15(s，1H)7.26(m，2H)7.36(t，J＝7.83Hz，1H)7.61(d，J＝8.07Hz，1H).
實(shí)施例244化合物244的制備使用Pd0偶合方案并以6-溴-1-氯異喹啉為原料進(jìn)行逐步反應(yīng)，制備BOCNH-P3(L0-t-BuGly)-P2[(4R)-(6-甲酸二甲基酰胺異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷。
LC/MS rt-min(MNa+)2.34(777)[方法B].1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm0.98(m，11H)1.23(m，11H)1.35(m，1H)1.91(m，1H)2.29(m，，2H)2.47(m，1H)2.58(m，1H)2.97(s，3H)3.11(s，3H)4.09(m，1H)4.24(s，1H)4.44(m，1H)4.61(m，1H)5.16(m，2H)5.57(m，1H)5.90(s，1H)7.38(d，J＝5.87Hz，1H)7.50(d，J＝8.07Hz，1H)7.86(s，1H)8.03(d，J＝5.87Hz，1H)8.27(d，J＝8.56Hz，1H)，實(shí)施例245化合物245的制備在一個(gè)Pd0催化的Stille偶合制備過(guò)程中(實(shí)施例230)，還分離出次產(chǎn)物，經(jīng)確證為如下所示的BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(3-氯-4-甲氧基異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷 LC/MS rt-min(MNa+)2.62(770)[方法B].1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm1.01(s，9H)1.08(m，2H)1.18(s，9H)1.27(m，2H)1.37(m，1H)1.62(m，1H)2.36(m，2H)2.73(m，1H)2.97(m，1H)3.92(s，3H)4.02(m，1H)4.18(s，1H)4.48(m，1H)4.66(m，1H)5.30(m，2H)5.78(s，1H)6.04(m，1H)7.53(t，J＝7.70Hz，1H)7.77(t，J＝7.58Hz，1H)8.00(d，J＝8.56Hz，1H)8.19(d，J＝8.07Hz，1H).
部分F實(shí)施例250化合物250的制備 化合物250
方案1 化合物250步驟1將3-苯基-丁-2-烯酸(16.2g)、二苯基磷酰疊氮(27.5g)和三乙胺(10.1g)在苯(100mL)中的溶液攪拌1h。經(jīng)硅膠柱過(guò)濾(用苯洗滌)并濃縮，將剩余物溶于二苯基甲烷(80mL)中并回流3h。冷卻至室溫后，經(jīng)柱收集固體物，用苯洗滌并干燥，得到10g(63％)所需的產(chǎn)物，為固體物。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 2.30(s，3H)，7.00(s，1H)，7.54(m，1H)，7.77(m，2H)，8.33(d，J＝7.34Hz，1H)。
步驟2將4-甲基-2H-異喹啉-1-酮(4.8g)的磷酰氯(50mL)溶液回流3h。冷卻并濃縮后，將剩余物用5N NaOH堿化并用二氯甲烷萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。濃縮后，經(jīng)Biotage快速層析純化，用5％乙酸乙酯/己烷洗脫，得到4.8g(90％)所需的產(chǎn)物，為固體物。1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm 2.59(s，3H)，7.68(t，J＝7.70Hz，1H)，7.78(m，1H)，7.94(d，J＝8.31Hz，1H)，8.11(s，1H)，8.35(d，J＝8.31Hz，1H)。
步驟3將Boc-Hyp-OH(231mg)和叔丁醇鉀(336mg)在DMSO(10mL)中的溶液攪拌0.5h。向該溶液中加入1-氯-4-甲基-異喹啉(178mg)并將所得的混合物攪拌1天。反應(yīng)物用5％檸檬酸猝滅并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。濃縮得到350mg(94％)所需的產(chǎn)物，為固體物，該產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一步驟中。1HNMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.39，1.43(2s，9H，外消旋體)，2.40(dd，J＝17.97，4.52Hz，1H)，2.48(s，3H)，2.68(m，1H)，3.84(m，2H)，4.46(m，1H)，5.71(s，1H)，7.58(t，J＝7.70Hz，1H)，7.75(m，2H)，7.91(d，J＝8.31Hz，1H)，8.19(m，1H)；MS(M+Na)+396。
步驟4將4-(4-甲基-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯)(74mg)、環(huán)丙烷磺酸(1(R)-氨基-2(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)-酰胺鹽酸鹽(59mg)、PyBOP(114mg)和i-Pr2NEt(0.2mL)在二氯甲烷(2mL)中的溶液攪拌2h。經(jīng)Biotage快速層析純化，用5％甲醇/乙酸乙酯洗脫，得到105mg(90％)所需的產(chǎn)物。
1H NMR(400MHz， 甲醇-D4)δppm 1.18(m，5H)，1.39(s，9H)，1.87(dd，J＝8.2，5.3Hz，1H)，2.28(m，2H)，2.54(m，4H)，2.95(m，1H)，3.86(m，2H)，4.40(dd，J＝9.8，6.9Hz，1H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.31(d，J＝17.6Hz，1H)，5.79(m，2H)，7.60(t，J＝7.5Hz，1H)，7.78(m，2H)，7.93(d，J＝8.3Hz，1H)，8.20(d，J＝8.1Hz，1H)；MS(M+Na)+607.
步驟5將2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲酰基)-4-(4-甲基-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(100mg)和TFA(3mL)在二氯甲烷(3mL)中的溶液攪拌1h。濃縮后，將剩余物溶于二氯甲烷(2mL)中，加入Boc-L-叔-亮氨酸(40mg)、PyBOP(104mg)和i-Pr2NEt(0.2mL)。將混合物攪拌1h。處理后，經(jīng)制備型HPLC純化，得到60mg(52％)所需的產(chǎn)物化合物250，為固體物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.04(m，12H)，1.26(m，10H)，1.44(dd，J＝9.5，5.1Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.1，5.4Hz，1H)，2.26(m，2H)，2.49(s，3H)，2.62(dd，J＝13.7，7.1Hz，1H)，2.94(m，1H)，4.06(dd，J＝12.0，3.4Hz，1H)，4.25(m，1H)，4.45(d，J＝11.3Hz，1H)，4.53(dd，J＝10.3，6.6Hz，1H)，5.12(d，J＝10.0Hz，1H)，5.29(d，J＝17.1Hz，1H)，5.77(m，2H)，6.63(d，J＝8.6Hz，1H)，7.53(t，J＝7.8Hz，1H)，7.76(t，J＝8.1Hz，1H)，7.80(s，1H)，7.91(d，J＝8.1Hz，1H)，8.22(d，J＝8.3Hz，1H)；MS(M+Na)+720.
實(shí)施例251化合物251的制備 化合物251按照實(shí)施例250、方案1的方法制備化合物251，不同之處在于在步驟1中使用3-甲氧基-3-苯基-丙烯酸代替3-苯基-丁-2-烯酸。
步驟1修改使用15g 3-甲氧基-3-苯基-丙烯酸，得到250mg產(chǎn)物(收率2％)。
產(chǎn)物 1H NMR(400MHz，CD3COCD3)δppm 3.85(s，3H)，6.96(s，1H)，7.54(m，1H)，7.71(m，1H)，7.86(d，J＝8.07Hz，1H)，8.31(d，J＝8.07Hz，1H).
步驟2修改使用200mg 4-甲氧基-2H-異喹啉-1-酮，得到150mg產(chǎn)物(收率68％)。
產(chǎn)物 1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 4.05(s，2H)，7.71(m，1H)，7.72(m，2H)，7.80(s，1H)，8.23(dd，J＝18.71，7.70Hz，2H).
步驟3修改使用122mg 1-氯-4-甲氧基-異喹啉，得到218mg產(chǎn)物(89％收率)。
產(chǎn)物 MS(M+Na)+411.
步驟4修改使用194mg 4-(4-甲氧基-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯，得到298mg產(chǎn)物(收率99％)。
產(chǎn)物 1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.17(m，5H)，1.42(s，9H)，1.87(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.27(m，2H)，2.54(dd，J＝13.3，6.2Hz，1H)，2.95(m，1H)，3.85(m，2H)，4.00(s，3H)，4.39(dd，J＝9.8，6.9Hz，1H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.31(d，J＝17.1Hz，1H)，5.76(m，2H)，7.52(s，1H)，7.62(t，J＝7.6Hz，1H)，7.74(t，J＝7.2Hz，1H)，8.12(t，J＝8.3Hz，2H).
步驟5修改使用190mg 2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-(4-甲氧基-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，得到270mg產(chǎn)物(收率51％)。
產(chǎn)物 化合物251數(shù)據(jù)1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 1.06(m，12H)，1.26(m，10H)，1.43(dd，J＝8.6，4.6Hz，1H)，1.88(dd，J＝7.9，5.5Hz，1H)，2.24(m，2H)，2.61(dd，J＝13.6，6.9Hz，1H)，2.94(m，1H)，4.00(s，3H)，4.06(dd，J＝11.3，3.1Hz，1H)，4.25(d，J＝8.9Hz，1H)，4.43(d，J＝11.3Hz，1H)，4.52(m，1H)，5.12(d，J＝10.1Hz，1H)，5.29(d，J＝17.1Hz，1H)，5.75(m，2H)，6.60(d，J＝8.6Hz，1H)，7.55(m，2H)，7.71(t，J＝7.3Hz，1H)，8.09(d，J＝8.2Hz，1H)，8.14(d，J＝8.2Hz，1H)；MS(M+Na)+736.
實(shí)施例252化合物252的制備 化合物252
按照實(shí)施例250、方案1的方法制備化合物252，不同之處在于在步驟1中使用2-甲基肉桂酸代替3-苯基-丁-2-烯酸。
步驟1修改使用20g 2-甲基肉桂酸，得到14.3g產(chǎn)物(收率72％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 2.54(s，1H)，6.69(d，J＝7.3Hz，1H)，7.23(d，J＝7.3Hz，1H)，7.39(t，J＝7.8Hz，1H)，7.50(d，J＝7.1Hz，1H)，8.30(d，J＝8.1Hz，1H)，11.62(s，1H)；MS(M+H)+160.
步驟2修改使用14.4g 5-甲基-2H-異喹啉-1-酮，得到10.6g產(chǎn)物(收率66％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 2.67(s，3H)，7.55(m，2H)，7.70(dd，J＝5.9，1.0Hz，1H)，8.19(m，1H)，8.28(d，J＝5.9Hz，1H)；MS(M+H)+178.
步驟3修改使用533mg 1-氯-5-甲基-異喹啉，得到1116mg產(chǎn)物(收率100％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)MS(M+H)+373。
步驟4修改使用372mg 4-(5-甲基-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯，得到551mg產(chǎn)物(收率94％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)MS(M+Na)<+>607。
步驟5修改使用551mg 2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-(5-甲基-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，得到274mg產(chǎn)物(收率44％)。
產(chǎn)物 化合物252數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.00(m，12H，)1.23(m，10H)，1.44(m，1H)，1.87(dd，J＝8.1，5.4Hz，1H)，2.26(m，2H)，2.62(m，4H)，2.94(m，1H)，4.07(dd，J＝11.9，3.3Hz，1H)，4.25(d，J＝9.5Hz，1H)，4.46(d，J＝11.5Hz，1H)，4.53(dd，J＝10.3，7.1Hz，1H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.29(d，J＝16.9Hz，1H)，5.75(m，1H)，5.86(s，1H)，6.62(d，J＝9.3Hz，1H)，7.39(t，J＝7.7Hz，1H)，7.44(d，J＝5.9Hz，1H)，7.53(d，J＝7.1Hz，1H)，8.00(d，J＝6.1Hz，1H)，8.06(d，J＝8.3Hz，1H)；MS(M+H)+698.
實(shí)施例253化合物253的制備 化合物253
按照實(shí)施例250、方案1的方法制備化合物253，不同之處在于在步驟1中使用2-甲氧基肉桂酸代替3-苯基-丁-2-烯酸。
步驟1修改使用10g 2-甲氧基肉桂酸，得到5.3g產(chǎn)物(收率53％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400 MHz，CD3OD)δppm 3.95(s，3H)，6.94(d，J＝7.3Hz，1H)，7.08(d，J＝8.1Hz，1H)，7.14(d，J＝7.3Hz，1H)，7.43(t，J＝8.1Hz，1H)，7.99(d，J＝8.1Hz，1H)，10.92(s，1H)；MS(M+H)+176.
步驟2修改使用5.3g 5-甲氧基-2H-異喹啉-1-酮，得到5.38g產(chǎn)物(收率92％)。
產(chǎn)物
數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 4.01(s，3H)，7.04(d，J＝7.8Hz，1H)，7.57(t，J＝8.1Hz，1H)，7.88(d，J＝8.6Hz，1H)，7.97(d，J＝5.9Hz，1H)，8.25(d，J＝5.9Hz，1H)；MS(M+H)+194.
步驟3修改使用581mg 1-氯-5-甲氧基-異喹啉，得到1163mg產(chǎn)物(收率100％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)MS(M+H)+389。
步驟4修改使用117mg 4-(5-甲氧基-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯，得到180mg產(chǎn)物(收率100％)。
產(chǎn)物
數(shù)據(jù)MS(M+H)+601。
步驟5修改使用177mg 2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-(5-甲氧基-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，得到63mg產(chǎn)物(收率44％)。
產(chǎn)物 化合物253數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.00(m，12H)，1.21(m，10H)，1.38(m，1H)，1.82(dd，J＝8.1，5.6Hz，1H)，2.20(m，2H)，2.56(dd，J＝13.6，6.7Hz，1H)，2.88(m，1H)，3.08(m，2H)，3.93(s，3H)，4.01(dd，J＝11.9，3.3Hz，1H)，4.20(d，J＝9.1Hz，1H)，4.39(d，J＝12.2Hz，1H)，4.47(dd，J＝9.7，7.0Hz，1H)，5.06(d，J＝10.0Hz，1H)，5.23(d，J＝16.9Hz，1H)，5.70(m，1H)，5.79(s，1H)，6.55(d，J＝9.5Hz，1H)，7.08(d，J＝7.6Hz，1H)，7.37(t，J＝8.0Hz，1H)，7.54(d，J＝5.9Hz，1H)，7.68(d，J＝8.3Hz，1H)，7.89(d，J＝5.9Hz，1H)；MS(M+H)+714.
實(shí)施例254化合物254的制備 化合物254按照實(shí)施例250、方案1的方法制備化合物254，不同之處在于在步驟1中使用2-氯肉桂酸代替3-苯基-丁-2-烯酸。
步驟1修改使用25g 2-氯肉桂酸，得到14.6g產(chǎn)物(收率59％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 7.22(d，J＝7.3Hz，1H)，7.42(t，J＝7.8Hz，1H)，7.73(d，J＝7.8Hz，1H)，8.34(d，J＝8.1Hz，1H)，10.61(s，1H)；MS(M+H)+180.
步驟2修改使用14.2g 5-氯-2H-異喹啉-1-酮，得到8.28g產(chǎn)物(收率53％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 7.60(dd，J＝8.6，7.6Hz，1H)，7.83(m，1H)，8.00(d，J＝5.9Hz，1H)，8.29(dt，J＝8.9，1.0Hz，1H)，8.38(d，J＝5.9Hz，1H)；MS(M+H)+198.
步驟3修改使用594mg 1，5-二氯-異喹啉，得到1174mg產(chǎn)物(收率100％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)MS(M+H)+393。
步驟4修改使用118mg 4-(5-氯-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯，得到154mg產(chǎn)物(收率85％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)MS(M+H)+605。
步驟5修改使用150mg 2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-(5-氯-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，得到91mg產(chǎn)物(收率51％)。
產(chǎn)物 化合物254
數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 0.97(m，12H)，1.17(m，10H)，1.38(dd，J＝9.4，5.3Hz，1H)，1.82(dd，J＝8.0，5.5Hz，1H)，2.21(m，2H)，2.58(dd，J＝13.8，7.0Hz，1H)，2.88(m，1H)，4.01(dd，J＝11.9，2.8Hz，1H，4.16(d，J＝9.3Hz，1H)，4.47(m，2H)，5.06(d，J＝10.3Hz，1H)，5.24(d，J＝16.9Hz，1H)，5.70(m，1H)，5.82(s，1H)，6.52(d，J＝9.3Hz，1H)，7.42(t，J＝8.0Hz，1H)，7.57(d，J＝6.1Hz，1H)，7.76(d，J＝7.6Hz，1H)，8.05(d，J＝6.1Hz，1H)，8.13(d，J＝8.3Hz，1H)；MS(M+H)+718.
實(shí)施例255化合物255的制備 化合物255按照實(shí)施例250、方案1的方法制備化合物255，不同之處在于在步驟1中使用2-氟肉桂酸代替3-苯基-丁-2-烯酸。
步驟1修改使用16.6g 2-氟肉桂酸，得到8.55g產(chǎn)物(收率51％)。
產(chǎn)物
數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3COCD3)δppm 6.62(d，J＝7.3Hz，1H)，7.32(d，J＝7.3Hz，1H)，7.47(m，2H)，8.09(m，1H).
步驟2修改使用8.4g 5-氟-2H-異喹啉-1-酮，得到7.5g產(chǎn)物(收率80％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 7.43(ddd，J＝9.7，7.8，0.9Hz，1H)，7.62(td，J＝8.2，5.4Hz，1H)，7.84(d，J＝5.6Hz，1H)，8.14(d，J＝8.6Hz，1H)，8.33(d，J＝5.9Hz，1H)；MS(M+H)+182.
步驟3修改使用203mg 1-氯-5-氟-異喹啉，得到384mg產(chǎn)物(收率90％)。
產(chǎn)物
數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3SOCD3)δppm 1.34，1.36(2s，9H，外消旋物)，2.35(m，1H)，2.61(m，1H)，3.65(d，J＝12.23Hz，1H)，3.80(m，1H)，4.35(m，1H)，5.70(s，1H)，7.48(d，J＝6.11Hz，1H)，7.63(m，2H)，7.99(m，1H)，8.10(d，J＝5.87Hz，1H)；MS(M+Na)+399.
步驟4修改使用76mg 4-(5-氟-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯，得到116mg產(chǎn)物(收率99％)。
產(chǎn)物 步驟5修改使用110mg 2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-(5-氟-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，得到39mg產(chǎn)物(收率30％)。
產(chǎn)物 化合物255數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.05(m，12H)，1.25(m，10H)，1.44(dd，J＝9.5，5.4Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.1，5.4Hz，1H)，2.28(m，2H)，2.63(dd，J＝13.8，7.0Hz，1H)，2.94(m，1H)，4.07(dd，J＝11.9，3.1Hz，1H)，4.23(d，J＝9.3Hz，1H)，4.52(m，2H)，5.12(dd，J＝10.3，1.5Hz，1H)，5.29(d，J＝17.4Hz，1H)，5.75(m，1H)，5.89(s，1H)，6.59(d，J＝9.1Hz，1H)，7.47(m，3H)，8.02(d，J＝8.1Hz，1H)，8.06(d，J＝6.1Hz，1H)；MS(M+Na)+724.
實(shí)施例256化合物256的制備 化合物256按照實(shí)施例250、方案1的方法制備化合物256，不同之處在于在步驟1中使用2-二氟甲氧基肉桂酸代替3-苯基-丁-2-烯酸。
步驟1修改使用10.7g 2-二氟甲氧基肉桂酸，得到2g產(chǎn)物(收率18％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3SOCD3)δppm 6.06(m，2H)，6.42(m，2H)，6.71(s，2H)，7.35(s，1H)；MS(M+H)+212.
步驟2修改使用300mg 5-二氟甲氧基-2H-異喹啉-1-酮，得到300mg產(chǎn)物(收率92％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 6.70(t，J＝72.87Hz，1H)，7.48(m，1H)，7.64(m，1H)，7.92(d，J＝5.87Hz，1H)，8.21(d，J＝8.56Hz，1H)，8.35(d，J＝5.62Hz，1H).
步驟3修改使用230mg 1-氯-5-二氟甲氧基-異喹啉，得到360mg產(chǎn)物(收率96％)。
產(chǎn)物 步驟4修改使用37mg 4-(5-羥基-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯，得到57mg產(chǎn)物(收率99％)。
產(chǎn)物 步驟5修改使用57mg 2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲酰基)-4-(5-羥基-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，得到10mg產(chǎn)物(收率15％)。
產(chǎn)物 化合物256數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 0.93(m，4H)，1.13(s，9H)，1.31(m，1H)，1.49(s，9H)，1.89(dd，J＝7.8，5.4Hz，1H)，2.16(q，J＝8.8Hz，1H)，2.40(m，1H)，2.81(m，1H)，2.90(m，1H)，3.76(m，2H)，4.30(m，1H)，4.59(dd，J＝10.2，7.7Hz，1H)，5.07(dd，J＝10.3，1.7Hz，1H)，5.26(dd，J＝17.2，1.3Hz，1H)，5.77(dt，J＝17.2，9.6Hz，1H)，5.93(s，1H)，7.24(d，J＝8.6Hz，1H)，7.51(m，2H)，7.63(t，J＝8.0Hz，1H)，7.98(d，J＝6.1Hz，1H)，8.24(d，J＝8.3Hz，1H)；MS(M+H)+700.
實(shí)施例257化合物257的制備 化合物257按照實(shí)施例250、方案1的方法制備化合物257，不同之處在于在步驟1中使用4-氟肉桂酸代替3-苯基-丁-2-烯酸。
步驟1修改使用16.6g 4-氟肉桂酸，得到8.2g產(chǎn)物(收率49％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3COCD3)δppm 6.57(d，J＝7.09Hz，1H)，7.21(d，J＝7.09Hz，1H)，7.50(m，1H)，7.72(dd，J＝8.68，5.26Hz，1H)，7.90(dd，J＝9.54，2.93Hz，1H).
步驟2修改使用8.15g 7-氟-2H-異喹啉-1-酮，得到7.6g產(chǎn)物(收率84％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 7.52(td，J＝8.6，2.6Hz，1H)，7.59(d，J＝5.6Hz，1H)，7.86(dd，J＝9.1，5.4Hz，1H)，7.95(dd，J＝9.5，2.5Hz，1H)，8.26(d，J＝5.6Hz，1H)；MS(M+H)+182.
步驟3修改使用191mg 1-氯-7-氟-異喹啉，得到350mg產(chǎn)物(收率93％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)MS(M+Na)+399。
步驟4修改使用75mg 4-(7-氟-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯，得到100mg產(chǎn)物(收率85％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.16(m，4H)，1.41(m，10H)，1.88(dd，J＝8.1，5.4Hz，1H)，2.28(m，2H)，2.56(m，1H，)2.94(m，1H)，3.87(m，2H)，4.41(dd，J＝9.7，7.0Hz，1H)，5.12(d，J＝10.8Hz，1H)，5.31(d，J＝17.1Hz，1HD，5.78(m，2H)，7.36(d，J＝5.9Hz，1H)，7.54(m，1H)，7.78(dd，J＝9.3，2.5Hz，1H)，7.90(dd，J＝9.1，5.1Hz，1H)，7.96(d，J＝5.9Hz，1H)；MS(M+Na)+611.
步驟5修改使用95mg 2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-(7-氟-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，得到55mg產(chǎn)物(收率44％)。
產(chǎn)物 化合物257數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.05(m，12H)，1.22(m，10H)，1.44(dd，J＝9.3，5.4Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.27(m，2H)，2.63(dd，J＝13.8，7.0Hz，1H)，2.94(m，1H)，4.07(dd，J＝11.5，3.2Hz，1H)，4.22(d，J＝9.5Hz，1H)，4.47(d，J＝11.7Hz，1H)，4.55(dd，J＝10.6，7.5Hz，1H)，5.12(d，J＝10.3Hz，1H)，5.29(d，J＝17.1Hz，1H)，5.75(m，1H)，5.87(s，1H)，6.61(d，J＝9.5Hz，1H)，7.36(d，J＝5.9Hz，1H)，7.52(td，J＝8.9，2.5Hz，1H)，7.79(dd，J＝9.4，2.6Hz，1H)，7.88(dd，J＝8.7，5.5Hz，1H)，7.96(d，J＝5.9Hz，1H)；MS(M+Na)+724.
實(shí)施例258化合物258的制備 化合物258按照實(shí)施例250、方案1的方法制備化合物258，不同之處在于在步驟1中使用4-氯肉桂酸代替3-苯基-丁-2-烯酸。
步驟1修改使用9.13g 4-氯肉桂酸，得到4g產(chǎn)物(收率44％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3SOCD3)δppm 6.58(d，J＝7.1Hz，1H)，7.20(dd，J＝7.1，5.9Hz，1H)，7.72(m，2H)，8.10(m，1H).
步驟2修改使用3.5g 7-氯-2H-異喹啉-1-酮，得到2.8g產(chǎn)物(收率72％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 7.59(d，J＝5.5Hz，1H)，7.69(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.80(d，J＝8.6Hz，1H)，8.29(d，J＝5.5Hz，1H)，8.34(s，1H)；MS(M+H)+198.
步驟3修改使用208mg 1，7-二氯-異喹啉，得到350mg產(chǎn)物(收率89％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)MS(M+Na)+415。
步驟4修改使用79mg 4-(7-氯-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯，得到119mg產(chǎn)物(收率99％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.17(m，4H)，1.43(m，10H)，1.88(dd，J＝8.31 5.4Hz，1H)，2.29(m，2H)，2.57(dd，J＝13.7，6.9Hz，1H)，2.95(m，1H)，3.87(m，2H)，4.42(dd，J＝9.9，6.9Hz，1H)，5.13(d，J＝10.3Hz，1H)，5.31(dd，J＝17.1，1.2Hz，1H)，5.78(m，2H)，7.35(d，J＝5.9Hz，1H)，7.69(dd，J＝8.7，2.1Hz，1H)，7.84(d，J＝8.8Hz，1H)，7.99(d，J＝5.9Hz，1H)，8.12(d，J＝1.7Hz，1H)；MS(M+Na)+627.
步驟5修改使用115mg 2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-(7-氯-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，得到36mg產(chǎn)物(收率25％)。
產(chǎn)物 化合物258數(shù)據(jù)MS(M+Na)+740。
實(shí)施例259化合物259的制備 化合物259按照實(shí)施例250、方案1的方法制備化合物259，不同之處在于在步驟1中使用4-甲基肉桂酸代替3-苯基-丁-2-烯酸。
步驟1修改使用25g 4-甲基肉桂酸，得到15.3g產(chǎn)物(收率62％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 2.50(s，3H)，6.54(d，J＝7.1Hz，1H)，7.13(d，J＝7.1Hz，1H)，7.49(m，2H)，8.22(s，1H)，11.49(s，1H)；MS(M+H)+160.
步驟2修改使用15.3g 7-甲基-2H-異喹啉-1-酮，得到5.15g產(chǎn)物(收率30％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 2.58(s，3H)，7.56(m，2H)，7.73(d，J＝8.3Hz，1H)，8.09(s，1H)，8.20(d，J＝5.6Hz，1H)；MS(M+H)+178.
步驟3修改使用205mg 1-氯-7-甲基-異喹啉，得到350mg產(chǎn)物(收率89％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)MS(M+H)+373。
步驟4修改使用75mg 4-(7-甲基-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯，得到107mg產(chǎn)物(收率95％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)MS(M+Na)+607。
步驟5修改使用107mg 2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-(7-甲基-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，得到53mg產(chǎn)物(收率41％)。
產(chǎn)物 化合物259數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.02(m，12H)，1.18(s，9H)，1.24(m，1H)，1.45(dd，J＝9.4，5.5Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.28(m，2H)，2.50(s，3H)，2.61(dd，J＝13.8，6.7Hz，1H)，3.34(s，1H)，4.09(dd，J＝11.7，3.2Hz，1H)，4.23(s，1H)，4.42(d，J＝12.0Hz，1H)，4.57(dd，J＝10.0，7.1Hz，1H)，5.12(dd，J＝10.3，1.5Hz，1H)，5.30(d，J＝17.1Hz，1H)，5.76(m，1H)，5.87(s，1H)，7.28(d，J＝5.9Hz，1H)，7.55(d，J＝8.3Hz，1H)，7.71(d，J＝8.3Hz，1H)，7.89(d，J＝5.9Hz，1H)，7.93(s，1H)；MS(M+H)+698.
實(shí)施例260化合物260的制備 化合物260按照實(shí)施例250、方案1的方法制備化合物260，不同之處在于在步驟1中使用4-甲氧基肉桂酸代替3-苯基-丁-2-烯酸。
步驟1修改使用33g 4-甲氧基肉桂酸，得到7g產(chǎn)物(收率33％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(500MHz，CD3COCD3)δppm 3.90(s，3H)，6.49(d，J＝7.0Hz，1H)，7.10(d，J＝7.3Hz，1H)，7.28(dd，J＝8.6，2.8Hz，1H)，7.57(d，J＝8.9Hz，1H)，7.71(d，J＝2.8Hz，1H).
步驟2修改使用4g 7-甲氧基-2H-異喹啉-1-酮，得到3g產(chǎn)物(收率68％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 3.98(s，3H)，7.38(dd，J＝8.9，2.6Hz，1H)，7.52(m，2H)，7.73(d，J＝8.8Hz，1H)，8.16(d，J＝5.4Hz，1H).
步驟3修改使用533mg 1-氯-7-甲氧基-異喹啉，得到1115mg產(chǎn)物(收率100％)。
產(chǎn)物 步驟4修改使用78mg 4-(7-甲氧基-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯，得到108mg產(chǎn)物(收率99％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.17(m，4H)，1.40(m，1H)，1.43(s，9H)，1.85(dd，J＝8.1，5.4Hz，1H)，2.21(m，2H)，2.51(dd，J＝13.7，6.6Hz，1H)，2.93(s，1H)，3.80(m，2H)，3.94(s，3H)，4.41(dd，J＝10.0，6.6Hz，1H)，4.57(s，1H)，5.11(d，J＝11.3Hz，1H)，5.29(d，J＝17.1Hz，1H)，5.77(m，2H)，7.01(d，J＝7.8Hz，1H)，7.22(d，J＝5.6Hz，1H)，7.32(d，J＝8.1Hz，1H)，7.58(t，J＝8.0Hz，1H)，7.87(d，J＝5.9Hz，1H)；MS(M+H)+601.
步驟5修改使用100mg 2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲酰基)-4-(7-甲氧基-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，得到30mg產(chǎn)物(收率25％)。
產(chǎn)物 化合物260數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3SOCD3)δppm 0.90(m，2H)，0.95(s，9H)，1.05(m，1H)，1.12(s，9H)，135(m，2H)，1.70(m，1H)，2.18(m，1H)，2.92(m，1H)，3.86(s，3H)，4.00(m，2H)，4.27(d，J＝12.0Hz，1H)，4.45(t，J＝8.6Hz，1H)，5.09(d，J＝10.8Hz，1H)，5.23(d，J＝16.9Hz，1H)，5.62(m，1H)，5.79(s，1H)，6.55(d，J＝8.1Hz，1H)，7.35(d，J＝6.6Hz，1H)，7.39(d，J＝2.5Hz，1H)，7.43(dd，J＝8.8，2.2Hz，1H)，7.84(d，J＝8.8Hz，1H)，7.88(d，J＝5.9Hz，1H)；MS(M+H)+714.
實(shí)施例261和262化合物261和262的制備 化合物261 化合物262按照實(shí)施例250、方案1的方法制備化合物261和262，不同之處在于在步驟1中使用4-氟-3-甲氧基肉桂酸代替3-苯基-丁-2-烯酸。
步驟1修改使用19.6g 4-氟-3-甲氧基肉桂酸，得到9.5g產(chǎn)物(收率48％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3COCD3)δppm 4.00(s，1H)，6.49(d，J＝7.34Hz，1H)，7.19(d，J＝7.09Hz，1H)，7.29(d，J＝8.07Hz，1H)，7.86(d，J＝11.74Hz，1H).
步驟2修改使用9g 7-氟-6-甲氧基-2H-異喹啉-1-酮，得到7g產(chǎn)物(70％收率)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 4.04(s，3H)，7.17(d，J＝8.07Hz，1H)，7.48(d，J＝5.62Hz，1H)，7.94(d，J＝11.49Hz，1H)，8.20(d，J＝5.62Hz，1H).
步驟3修改使用222mg 1-氯-7-氟-6-甲氧基-異喹啉，得到406mg產(chǎn)物。
產(chǎn)物 步驟4修改使用400mg 4-(7-氟-6-甲氧基-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯和4-(1-氯-6-甲氧基-異喹啉-7-氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯的混合物，得到700mg產(chǎn)物。
產(chǎn)物 步驟5修改使用700mg 2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-(7-氟-6-甲氧基-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯和4-(1-氯-6-甲氧基-異喹啉-7-氧基)-2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的混合物，得到79mg化合物261和80mg化合物262。
產(chǎn)物 化合物261的數(shù)據(jù)1HNMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.07(m，12H)，1.25(m，10H)，1.44(m，1H)，1.88(dd，J＝8.1，5.6Hz，1H)，2.25(m，2H)，2.60(dd，J＝13.7，6.9Hz，1H)，2.94(m，1H)，4.02(m，4H)，4.22(s，1H)，4.43(d，J＝12.2Hz,1H)，4.53(dd，J＝10.3，6.6Hz，1H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.30(d，J＝16.6Hz，1H)，5.75(m，1H)，5.84(s，1H)，7.28(d，J＝5.9Hz，1H)，7.37(d,J＝8.1Hz，1H)，7.75(d，J＝11.7Hz，1H)，7.91(d，J＝5.9Hz，1H)；MS:(M+Na)+754。
化合物262的數(shù)據(jù)1H NMR(400 MHz，CD3OD)δppm 1.07(m，12H)，1.25(m，10H)，1.44(m，J＝9.41，5.26Hz，1H)，1.87(dd，J＝8.31，5.38Hz，1H)，2.24(q，J＝8.72Hz，2H)，2.57(dd，J＝13.82，7.21Hz，1H)，2.94(m，1H)，3.97(d，J＝5.14Hz，3H)，4.09(m，J＝11.00Hz，1H)，4.24(s，1H)，4.32(m，1H)，4.50(m，J＝16.87Hz，1H)，5.12(dd，J＝10.52，1.71Hz，1H)，5.30(dd，J＝17.12，1.47Hz，1H)，5.38(s，1H)，5.76(m，1H)，7.39(s，1H)，7.63(s，1H)，7.66(d，J＝5.87Hz，1H)，8.07(d，J＝5.62Hz，1H):MS;(M+H)+732。
實(shí)施例263化合物263的制備 化合物263按照實(shí)施例250、方案1的方法制備化合物263，步驟1和步驟2除外。
步驟3修改使用176mg 1-氯-8-甲基-異喹啉，得到370mg產(chǎn)物(收率100mg％)。
產(chǎn)物 步驟4修改使用149mg 8-甲基-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯，得到230mg產(chǎn)物(收率99％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.13(m，4H)，1.42(m，10H)，1.87(dd，J＝8.2，5.3Hz，1H)，2.25(m，2H)，2.58(dd，J＝13.9，6.9Hz，1H)，2.83(s，3H)，2.96(m，1H)，3.85(m，2H)，4.38(dd，J＝10.2，6.7Hz，1H)，5.12(dd，J＝10.4，1.6Hz，1H)，5.30(dd，J＝17.1，1.2Hz，1H)，5.76(m，2H)，7.28(d，J＝5.9Hz，1H)，7.36(d，J＝6.9Hz，1H)，7.53(t，J＝7.7Hz，1H)，7.62(m，1H)，7.88(d，J＝5.6Hz，1H)；MS(M+Na)+607.
步驟5修改使用220mg 2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲酰基)-4-(8-甲基-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，得到90mg產(chǎn)物(收率35％)。
產(chǎn)物 化合物263數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.05(m，12H)，1.24(m，10H)，1.44(dd，J＝9.3，5.4Hz，1H)，1.87(dd，J＝8.1，5.4Hz，1H)，2.25(m，2H)，2.60(dd，J＝13.9，7.3Hz，1H)，2.77(s，3H)，2.94(m，1H)，4.04(dd，J＝11.9，3.1Hz，1H)，4.27(d，J＝9.5Hz，1H)，4.42(d，J＝12.0Hz，1H)，4.54(dd，J＝10.8，7.1Hz，1H)，5.12(d，J＝10.3Hz，1H)，5.28(d，J＝17.1Hz，1H)，5.75(m，1H)，5.95(s，1H)，6.63(d，J＝9.1Hz，1H)，7.28(m，2H)，7.50(t，J＝7.7Hz，1H)，7.60(d，J＝7.8Hz，1H)，7.89(d，J＝5.6Hz，1H)；MS(M+Na)+720。
實(shí)施例264化合物264的制備 化合物264按照實(shí)施例250、方案1的方法制備化合物264，步驟1和步驟2除外。
步驟3修改使用203mg 1-氯-8-甲氧基-異喹啉，得到340mg產(chǎn)物(收率85％)。
產(chǎn)物
數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3SOCD3)δppm 1.34，1.36(2s，9H，外消旋物)，2.26(m，1H)，2.49(m，1H)，3.67(m，2H)，3.86(s，3H)，4.31(m，1H)，5.67(br s，1H)，7.04(d，J＝7.8Hz，1H)，7.30(d，J＝5.9Hz，1H)，7.38(d，J＝8.1Hz，1H)，7.62(t，J＝8.0Hz，1H)，7.93(d，J＝5.6Hz，1H)，12.64(s，1H)；MS(M+Na)+411.
步驟4修改使用78mg 8-甲氧基-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯，得到115mg產(chǎn)物(收率96％)。
產(chǎn)物 步驟5修改使用110mg 2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲酰基)-4-(8-甲氧基-異喹啉-1-氧基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，得到45mg產(chǎn)物(收率34％)。
產(chǎn)物 化合物264數(shù)據(jù)MS(M+H)+714。
實(shí)施例265和266化合物265和266的制備 化合物265化合物266按照以下實(shí)施例250、方案1的方法制備化合物265和化合物266，不同之處在于在步驟1中使用3-(2，3-二氫-苯并呋喃-7-基)-丙烯酸代替3-苯基-丁-2-烯酸。
步驟1修改使用3.8g 3-(2，3-二氫-苯并呋喃-7-基)-丙烯酸，得到2g產(chǎn)物(收率53％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H MR(400MHz，CD3OD)δppm 3.37(t，J＝9.05Hz，1H)，4.73(t，J＝9.05Hz，2H)，6.67(d，J＝7.09Hz，1H)，7.10(d，J＝7.09Hz，1H)，7.37(d，J＝8.07Hz，1H)，7.81(d，J＝8.07Hz，1H)；MS(M+H)+188.
步驟2修改使用1.87g 2，3-二氫-7H-呋喃并[2，3-f]異喹啉-6-酮，得到1.84g產(chǎn)物(收率90％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CDCl3)δppm 3.43(t，J＝9.05Hz，2H)，4.82(t，J＝9.05Hz，2H)，7.52(d，J＝8.56Hz，1H)，7.66(d，J＝5.62Hz，1H)，7.84(d，J＝8.31Hz，1H)，8.19(d，J＝5.62Hz，1H)；MS(M+H)+206.
步驟3修改使用206mg 6-氯-2，3-二氫-呋喃并[2，3-f]異喹啉，得到300mg混合產(chǎn)物。
產(chǎn)物 步驟4修改使用240mg步驟3的混合產(chǎn)物，得到350mg混合產(chǎn)物。
產(chǎn)物 步驟5修改使用331mg步驟4的混合產(chǎn)物，得到240mg化合物265和24mg化合物266。
產(chǎn)物 化合物265化合物266化合物265的數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CD3OD)δppm 0.99(m，12H)，1.16(m，10H)，1.36(m，1H)，1.81(dd，J＝8.07，5.62Hz，1H)，2.18(m，2H)，2.54(dd，J＝13.69，6.85Hz，1H)，2.87(m，1H)，3.31(t，J＝9.05Hz，2H)，4.01(m，1H)，4.18(s，1H)，4.36(d，J＝11.74Hz，1H)，4.46(dd，J＝10.15，7.21Hz，1H)，4.70(m，2H)，5.05(d，J＝10.27Hz，1H)，5.23(d，J＝16.87Hz，1H)，5.70(m，2H)，7.23(d，J＝5.87Hz，1H)，7.31(d，J＝8.31Hz，1H)，7.63(d，J＝8.31Hz，1H)，7.82(d，J＝5.87Hz，1H)；MS(M+H)+726.
化合物266的數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.06(m，12H)，1.24(m，10H)，1.44(dd，J＝10.03，5.14Hz，1H)，1.88(dd，J＝7.83，5.38Hz，1H)，2.27(m，2H)，2.65(dd，J＝12.96，6.36Hz，1H)，2.94(m，1H)，4.08(dd，J＝12.35，3.30Hz，1H)，4.25(s，1H)，4.54(m，2H)，5.12(d，J＝10.27Hz，1H)，5.29(d，J＝17.12Hz，1H)，5.75(m，1H)，5.91(s，1H)，7.05(d，J＝1.96Hz，1H)，7.72(m，2H)，8.02(m，2H)，8.11(d，J＝5.87Hz，1H)，9.19(s，1H)；MS(M+H)+724.
實(shí)施例267和268化合物267和268的制備 化合物267 化合物268按照實(shí)施例250、方案1的方法制備化合物267和化合物268，不同之處在于在步驟1中使用3-(2，3-二氫-苯并呋喃-4-基)-丙烯酸代替3-苯基-丁-2-烯酸。
步驟1修改使用1.14g 3-(2，3-二氫-苯并呋喃-4-基)-丙烯酸，得到600mg產(chǎn)物(收率52％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 3.35(t，J＝8.93Hz，2H)，4.74(t，J＝8.93Hz，2H)，6.49(d，J＝7.09Hz，1H)，6.95(d，J＝8.56Hz，1H)，7.25(d，J＝7.09Hz，，1H)，8.13(d，J＝8.80Hz，1H)；MS(M+H)+188.
步驟2修改使用560mg 1，7-二氫-2H-呋喃并[3，2-f]異喹啉-6-酮，得到380mg產(chǎn)物(收率48％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CDCl3)δppm 3.47(t，J＝9.05Hz，2H)，4.84(t，J＝9.05Hz，2H)，7.24(d，J＝8.56Hz，1H)，7.33(d，J＝5.87Hz，1H)，8.20(m，2H)；MS(M+H)+206.
步驟3修改使用105mg 6-氯-1，2-二氫-呋喃并[3，2-f]異喹啉，得到390mg混合產(chǎn)物。
產(chǎn)物 步驟4修改使用216mg步驟3的混合產(chǎn)物，得到330mg混合產(chǎn)物。
產(chǎn)物 步驟5修改使用330mg步驟4的混合產(chǎn)物，得到140mg化合物267和25mg化合物268。
產(chǎn)物 化合物267 化合物268化合物267的數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CD3OD)δppm 1.07(m，12H)，1.24(m，10H)，1.43(m，1H)，1.88(dd，J＝8.07，5.38Hz，1H)，2.26(m，2H)，2.61(dd，J＝13.69，7.09Hz，1H)，2.94(m，1H)，3.42(t，J＝9.05Hz，2H)，4.05(dd，J＝11.86，3.55Hz，1H)，4.24(s，1H)，4.50(m，2H)，4.77(t，J＝8.93Hz，2H)，5.12(m，1H)，5.29(d，J＝17.12Hz，1H)，5.76(m，2H)，7.03(d，J＝8.80Hz，1H)，7.12(d，J＝6.11Hz，1H)，7.91(d，J＝5.87Hz，1H)，8.06(d，J＝8.80Hz，1H)；MS(M+H)+726.化合物268的數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CD3OD)δppm 1.06(m，12H)，1.19(s，9H)1.26(m，1H)，1.44(m，1H)，1.88(dd，J＝8.07，5.62Hz，1H)，2.24(d，J＝8.56Hz，2H)，2.64(m，1H)，2.95(m，1H)，4.07(m，J＝3.42Hz，1H)，4.24(s，1H)，4.54(m，2H)，5.12(d，J＝10.52Hz，1H)，5.30(d，J＝17.12Hz，1H)，5.76(m，1H)，5.91(s，1H)，7.39(d，J＝1.47Hz，1H)，7.68(m，2H)，7.96(d，J＝1.96Hz，1H)，8.12(m，2H)；MS(M+H)+724.
實(shí)施例269化合物269的制備 化合物269
方案2 化合物269步驟1將2-三氟甲氧基肉桂酸(11.6g)、二苯基磷酰疊氮(13.75g)和三乙胺(7.07g)在苯(50mL)中的溶液攪拌1h。經(jīng)硅膠柱過(guò)濾(用苯洗滌)并濃縮，剩余物溶于二苯基甲烷(80mL)中并回流3h。冷卻至室溫后，經(jīng)柱收集固體物，用苯洗滌并干燥，得到5.1g(44％)所需的產(chǎn)物，為固體物。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 6.79(d，J＝7.3Hz，1H)，7.29(d，J＝7.3Hz，1H)，7.57(t，J＝8.1Hz，1H)，7.70(d，J＝7.8Hz，1H)，8.30(d，J＝8.1Hz；1H)；MS(M+H)+230。
步驟2將5-三氟甲氧基-2H-異喹啉-1-酮(4.58g)的磷酰氯(50mL)溶液回流3h。冷卻并濃縮后，將剩余物用5N NaOH堿化并用二氯甲烷萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。濃縮后，經(jīng)Biotage快速層析純化，用5％乙酸乙酯/己烷洗脫得到4.347g(88％)所需的產(chǎn)物，為固體物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 7.66(m，2H)，7.87(d，J＝5.9Hz，1H)，8.31(m，1H)，8.37(d，J＝5.9Hz，1H)；MS(M+H)+248。
步驟3在-78℃下，向{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(56mg)、1-氯-5-三氟甲氧基-異喹啉(25mg)和三氯化鑭(25mg)在DMF(1mL)中的懸浮液內(nèi)加入叔丁醇鉀(0.5mL，1M的THF溶液)，升溫至室溫。攪拌30min后，反應(yīng)物用飽和氯化銨溶液猝滅并用乙酸乙酯萃取。濃縮后，經(jīng)制備型HPLC純化，得到35mg(46％)所需的化合物269，為固體物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.03(m，12H)，1.24(m，10H)，1.44(dd，J＝9.7，5.3Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.1，5.6Hz，1H，)2.28(m，2H)，2.64(dd，J＝13.7，7.1Hz，1H)，2.94(m，1H)，4.09(m，1H)，4.21(d，J＝9.3Hz，1H)，4.53(m，2H)，5.12(d，J＝11.5Hz，1H)，5.30(d，J＝17.1Hz，1H)，5.75(m，1H)，5.92(m，1H)，6.60(d，J＝9.5Hz，1H)，7.49(d，J＝6.1Hz，1H)，7.60(m，1H)，7.69(d，J＝7.3Hz，1H)，8.11(d，J＝6.1Hz，1H)，8.22(d，J＝8.3Hz，1H)；MS(M+Na)+790.
實(shí)施例270化合物270的制備 化合物270按照實(shí)施例269、方案2的方法制備化合物270，不同之處在于在步驟1中使用2-三氟甲基肉桂酸代替2-三氟甲氧基肉桂酸。
步驟1修改使用10g 2-三氟甲基肉桂酸，得到5g產(chǎn)物(50％收率)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H MR(400MHz，CD3OD)δppm 6.83(m，1H)，7.33(d，J＝7.58Hz，1H)，7.63(t，J＝7.83Hz，1H)，8.09(d，J＝7.58Hz，1H)，8.57(d，J＝8.07Hz，1H).
步驟2修改使用4.4g 5-三氟甲基-2H-異喹啉-1-酮，得到3.5g產(chǎn)物(收率73％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 7.75(t，J＝7.95Hz，1H)，7.90(m，1H)，8.12(d，J＝7.34Hz，1H)，8.41(d，J＝6.11Hz，1H)，8.60(d，J＝8.56Hz，1H).
步驟3修改使用46mg 1-氯-5-三氟甲基-異喹啉和111mg{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲酰基)-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯，得到70mg產(chǎn)物(收率47％)。
產(chǎn)物 化合物270數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.06(m，12H)，1.23(m，10H)，1.44(dd，J＝9.54，5.38Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.07，5.38Hz，1H)，2.28(m，2H)，2.65(dd，J＝13.82，6.97Hz，1H)，2.94(m，1H)，4.07(m，1H)，4.20(m，1H)，4.56(m，2H)，5.12(m，1H)，5.30(d，J＝17.12Hz，1H)，5.75(m，1H)，5.90(s，1H)，6.59(d，J＝9.05Hz，1H)，7.53(d，J＝4.40Hz，1H)，7.65(t，J＝7.83Hz，1H)，8.12(d，J＝7.09Hz，1H)，8.15(d，J＝6.36Hz，1H)，8.50(d，J＝8.31Hz，1H)；MS(M+Na)+774.
實(shí)施例271化合物271的制備 化合物271按照實(shí)施例269、方案2的方法制備化合物271，不同之處在于在步驟1中使用2-氯肉桂酸代替2-三氟甲氧基肉桂酸。
步驟1修改使用7g 2-氯肉桂酸，得到5g產(chǎn)物(71％收率)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 3.02(m，4H)，3.91(m，4H)，6.97(d，J＝7.34Hz，1H)，7.18(d，J＝7.34Hz，1H)，7.44(m，2H)，8.02(d，J＝7.83Hz，1H)；MS(M+H)+231.
步驟2修改使用2.2g 5-嗎啉-4-基-2H-異喹啉-1-酮，得到2.1g產(chǎn)物(收率87％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CCl3D)δppm 3.09(m，4H)，3.97(m，4H)，7.32(d，J＝7.58Hz，1H)，7.60(m，1H)，7.91(d，J＝5.87Hz，1H)，8.06(d，J＝8.56Hz，1H)，8.26(d，J＝5.87Hz，1H).
步驟3修改使用50mg 1-氯-5-嗎啉-4-基-異喹啉和111mg{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯，得到40mg產(chǎn)物(收率26％)。
產(chǎn)物 化合物271數(shù)據(jù)1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 1.07(m，12H)，1.26(m，10H)，1.44(d，J＝7.93Hz，1H)，1.88(dd，J＝7.93，5.19Hz，1H)，2.25(m，2H)，2.62(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)，2.94(m，1H)，3.06(d，J＝3.97Hz，4H)，3.94(m，4H)，4.07(d，J＝14.04Hz，1H)，4.25(s，1H)，4.45(d，J＝12.21Hz，1H)，4.52(m，1H)，5.12(d，J＝9.46Hz，1H)，5.29(d，J＝16.79Hz，1H)，5.75(m，1H)，5.85(s，1H)，7.34(d，J＝7.32Hz，1H)，7.45(t，J＝7.78Hz，1H)，7.59(d，J＝6.10Hz，1H)，7.91(d，J＝7.63Hz，1H)，7.97(d，J＝5.80Hz，1H).
實(shí)施例272化合物272的制備 化合物272按照實(shí)施例269、方案2的方法制備化合物272，不同之處在于在步驟1中使用2，3-二甲氧基肉桂酸代替2-三氟甲氧基肉桂酸。
步驟1修改使用10.4g 2，3-二甲氧基肉桂酸，得到4.1g產(chǎn)物(收率40％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 3.86(s，3H)，3.96(s，3H)，6.82(d，J＝7.2Hz，1H)7.10(d，J＝7.2Hz，1H)，7.28(d，J＝8.8Hz，1H)，8.07(d，J＝8.8Hz，1H)；MS(M+H)+206.
步驟2修改使用4.1g 5，6-二甲氧基-2H-異喹啉-1-酮，得到4.03g產(chǎn)物(收率90％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 3.97(s，3H)，4.05(s，3H)，7.65(d，J＝9.29Hz，1H)，7.90(dd，J＝5.87，0.98Hz，1H)，8.12(m，2H).
步驟3修改使用22mg 1-氯-5，6-二甲氧基-異喹啉和56mg{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲酰基)-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯，得到31mg產(chǎn)物(收率42％)。
產(chǎn)物 化合物272數(shù)據(jù)1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 1.06(m，12H)，1.26(m，10H)，1.44(s，1H)，1.88(d，J＝7.32Hz，1H)，2.24(s，2H)，2.60(m，1H)，2.94(m，1H)，3.92(s，3H)，3.99(s，3H)，4.06(d，J＝11.90Hz，1H)，4.23(s，1H)，4.43(d，J＝10.68Hz，1H)，4.53(m，1H)，5.12(d，J＝10.38Hz，1H)，5.30(d，J＝17.40Hz，1H)，5.77(m，2H)，7.35(d，J＝9.16Hz，1H)，7.46(d，J＝5.80Hz，1H)，7.89(d，J＝5.80Hz，1H)，7.97(d，J＝8.85Hz，1H).
實(shí)施例273化合物273的制備 化合物273按照實(shí)施例269、方案2的方法制備化合物273，不同之處在于在步驟1中使用4-氯-3-甲氧基肉桂酸代替2-三氟甲氧基肉桂酸。
步驟1修改使用2.5g 4-氯-3-甲氧基肉桂酸，得到1.2g產(chǎn)物(收率48％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1HNMR(400MHz，CD3OD)δ4.00(s，3H)，6.64(d，J＝7.09Hz，1H)，7.15(d，J＝7.34Hz，1H)，7.21(s，1H)，8.22(s，1H).
步驟2修改使用1.05g 7-氯-6-甲氧基-2H-異喹啉-1-酮，得到0.8g產(chǎn)物(收率70％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CDCl3)δppm 4.05(s，3H)，7.13(s，1H)，7.48(d，J＝5.38Hz，1H)，8.21(d，J＝5.62Hz，1H)，8.34(s，1H)；MS(M+H)+229.
步驟3修改使用44mg 1，7-二氯-6-甲氧基-異喹啉和113mg{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯，得到25mg產(chǎn)物(收率17％)。
產(chǎn)物 化合物273
數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CD3OD)δppm 1.07(m，12H)，1.24(m，10H)，1.44(dd，J＝9.54，5.38Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.07，5.38Hz，1H)，2.26(m，1H，)2.60(m，J＝13.69，6.85Hz，1H)，2.94(m，2H)，3.98(s，3H)，4.06(m，1H)，4.20(m，1H)，4.42(d，J＝12.23Hz，1H)，4.57(m，1H)，5.12(d，J＝11.74Hz，1H)，5.30(d，J＝17.36Hz，1H)，5.76(m，1H)，5.86(s，1H)，7.28(d，J＝5.62Hz，1H)，7.33(s，1H)，7.92(d，J＝5.87Hz，1H)，8.09(s，1H)；MS(M+H)+749.
實(shí)施例274化合物274的制備 化合物274按照實(shí)施例269、方案2的方法制備化合物274，不同之處在于在步驟1中使用2-氟-3-肉桂酸代替2-三氟甲氧基肉桂酸。
步驟1修改使用3.92g 2-氟-3-肉桂酸，得到2.4g產(chǎn)物(收率61％)。
產(chǎn)物
數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 4.00(s，3H)，6.72(m，1H)，7.16(d，J＝7.34Hz，1H)，7.35(t，J＝8.44Hz，1H)，8.09(d，J＝8.80Hz，1H).
步驟2修改使用1.93g 5-氟-6-甲氧基-2H-異喹啉-1-酮，得到1.688g產(chǎn)物(收率80％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(CDCl3)δppm 4.08(s，3H)，7.44(dd，J＝9.29，7.83Hz，1H)，7.75(d，J＝5.87Hz，1H)，8.12(d，J＝9.29Hz，1H)，8.22(d，J＝5.87Hz，1H)；MS(M+H)+212.
步驟3修改使用41mg 1-氯-5-氟-6-甲氧基-異喹啉和133mg{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯，得到70mg產(chǎn)物(收率48％)。
產(chǎn)物 化合物274數(shù)據(jù)1H NMR(CD3OD)δppm 1.06(m，13H)，1.21(s，9H)，1.44(dd，J＝9.78，5.38Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.19，5.50Hz，1H)，2.24(d，J＝9.29Hz，2H)，2.62(d，J＝13.94Hz，1H)，2.94(m，1H)，4.05(m，4H)，4.22(d，J＝9.29Hz，1H)，4.45(m，1H)，4.54(dd，J＝9.66，7.21Hz，1H)，5.12(d，J＝10.52Hz，1H)，5.30(d，J＝16.87Hz，1H)，5.76(m，1H)，5.86(s，1H)，7.39(m，2H)，7.95(d，J＝6.11Hz，1H)，8.00(d，J＝9.29Hz，1H).
實(shí)施例275化合物275的制備 化合物275按照實(shí)施例269、方案2的方法制備化合物2，不同之處在于在步驟1中使用2-氯-3-甲氧基肉桂酸代替2-三氟甲氧基肉桂酸。
步驟1修改使用658mg 2-氯-3-甲氧基肉桂酸，得到360mg產(chǎn)物(收率54％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 4.02(s，3H)，6.91(d，J＝7.34Hz，1H)，7.23(d，J＝7.58Hz，1H)，7.35(d，J＝9.05Hz，1H)，8.27(d，J＝9.05Hz，1H).
步驟2修改使用350mg 5-氯-6-甲氧基-2H-異喹啉-1-酮，得到300mg產(chǎn)物(收率80％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H MR(400Hz，CDCl3)δppm 4.09(s，3H)，7.43(d，J＝9.29Hz，1H)，7.93(d，J＝6.11Hz，1H)，8.30(m，2H)；MS(M+H)+229.
步驟3修改使用68mg 1，5-二氯-6-甲氧基-異喹啉和167mg{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲酰基)-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯，得到130mg產(chǎn)物(收率60％)。
產(chǎn)物 化合物275數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.06(m，12H)，1.25(m，10H)，1.46(d，J＝5.62Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.07，5.62Hz，1H)，2.27(m，2H)，2.62(m，1H)，2.94(m，1H)，4.05(m，4H)，4.22(d，J＝9.05Hz，1H)，4.46(d，J＝11.49Hz，1H)，4.54(dd，J＝9.78，6.36Hz，1H)，5.13(d，J＝10.52Hz，1H)，5.30(d，J＝15.89Hz，1H)，5.76(m，1H)，5.86(s，1H)，7.40(d，J＝9.29Hz，1H)，7.55(d，J＝6.36Hz，1H)，8.01(d，J＝6.36Hz，1H)，8.20(d，J＝9.29Hz，1H)；MS(M+H)+749.
實(shí)施例276化合物276的制備 化合物276按照實(shí)施例269、方案2的方法制備化合物276，不同之處在于在步驟1中使用3-氯-2-甲氧基肉桂酸代替2-三氟甲氧基肉桂酸。
步驟1修改使用4.24g 3-氯-2-甲氧基肉桂酸，得到2.4g產(chǎn)物(收率57％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 3.93(s，1H)，6.85(d，J＝7.34Hz，1H)，7.24(d，J＝7.34Hz，1H)，7.52(d，J＝8.80Hz，1H)，8.03(d，J＝8.80Hz，1H)；MS(M+H)+210.
步驟2修改使用2.09g 6-氯-5-甲氧基-2H-異喹啉-1-酮，得到1.9g產(chǎn)物(收率83％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CDCl3)δppm 4.03(s，2H)，7.63(d，J＝9.05Hz，1H)，7.86(d，J＝5.14Hz，1H)，8.06(d，J＝9.05Hz，1H)，8.32(d，J＝5.62Hz，1H)；MS(M+H)+229.
步驟3修改使用91mg 1，6-二氯-5-甲氧基-異喹啉和226mg{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯，得到114mg產(chǎn)物(收率38％)。
產(chǎn)物 化合物276
數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CD3OD)δppm 1.06(m，12H)，1.23(m，10H)，1.44(t，J＝6.72Hz，1H)，1.88(dd，J＝7.95，5.26Hz，1H)，2.25(m，2H)，2.62(dd，J＝13.33，6.48Hz，1H)，2.94(m，1H)，3.98(s，3H)，4.03(m，1H)，4.20(m，1H)，4.51(m，2H)，5.12(d，J＝10.52Hz，1H)，5.32(s，1H)，5.75(m，1H)，5.87(s，1H)，7.50(m，2H)，7.95(d，J＝8.80Hz，1H)，8.06(d，J＝5.87Hz，1H)；MS(MH+)749.
實(shí)施例277化合物277的制備 化合物277按照實(shí)施例269、方案2的方法制備化合物277，不同之處在于在步驟1中使用3-(4-氯-苯基)-3-甲氧基-丙烯酸代替2-三氟甲氧基肉桂酸。
步驟1修改使用4.24g 3-(4-氯-苯基)-3-甲氧基-丙烯酸，得到130mg產(chǎn)物(收率3％)。
產(chǎn)物
數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 3.96(s，3H)，7.19(dd，J＝8.80，2.45Hz，1H)，7.28(d，J＝24.5Hz，1H)，7.34(s，1H)，8.25(d，J＝9.05Hz，1H)；MS(M+H)+210.
步驟2修改使用105mg 7-氯-4-甲氧基-2H-異喹啉-1-酮，得到60mg產(chǎn)物(收率71％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CDCl3)δppm 4.05(s，3H)，7.67(dd，J＝8.80，1.96Hz，1H)，7.80(s，1H)，8.16(d，J＝9.05Hz，1H)，8.24(d，J＝1.96Hz，1H)；MS(M+H)+229.
步驟3修改使用46mg 1，7-二氯-4-甲氧基-異喹啉和113mg{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲酰基)-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯，得到50mg產(chǎn)物(收率31％)。
產(chǎn)物 化合物277數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CD3OD)δppm 1.06(m，11H)，1.16(s，9H)，1.24(m，2H)，1.44(dd，J＝9.54，5.38Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.07，5.62Hz，1H)，2.28(m，2H)，2.59(dd，J＝13.69，6.85Hz，1H)，2.94(m，1H)，4.00(s，3H)，4.05(d，J＝11.74Hz，1H)，4.19(s，1H)，4.43(d，J＝11.49Hz，1H)，4.56(dd，J＝10.03，6.85Hz，1H)，5.12(d，J＝11.49Hz，1H)，5.30(d，J＝17.12Hz，1H)，5.76(m，2H)，7.57(s，1H)，7.67(d，J＝8.56Hz，1H)，8.04(s，1H)，8.08(d，J＝8.80Hz，1H)；MS(M+H)+748.
實(shí)施例278化合物278的制備 化合物278按照實(shí)施例269、方案2的方法制備化合物278，步驟1除外。
步驟1修改將6-甲氧基-2H-異喹啉-1-酮(700mg)和NCS(532mg)在MeCN(10mL)中的混合物回流3h。過(guò)濾得到600mg(72％)所需的產(chǎn)物，為固體物。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δ ppm 3.96(s，1H)，7.19(dd.J＝8.80，2.45Hz，1H)，7.28(d，J＝2.45Hz，1H)，7.34(s，1H)，8.25(d，J＝9.05Hz，1H)；MS(M+H)+210.
步驟2修改使用500mg 4-氯-6-甲氧基-2H-異喹啉-1-酮，得到400mg產(chǎn)物。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CDCl3)δ ppm4.01(s，3 H)，7.35(d，J＝2.45Hz，1H)，7.41(d，J＝2.45 Hz，1H)，8.24(d，J＝9.29Hz，1H)，8.27(s，1H)；MS(M+H)+229.
步驟3修改使用42mg 1，4-二氯-6-甲氧基-異喹啉和117mg{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲酰基)-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯，得到70mg產(chǎn)物(收率47％)。
產(chǎn)物 化合物278數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CD3OD)δppm 1.05(m，12H)，1.25(m，10H)，1.44(m，1H)，1.88(dd，J＝8.07，5.62Hz，1H)，2.24(m，2H)，2.61(dd，J＝13.82，6.72Hz，1H)，2.94(m，1H)，3.97(s，3H)，4.04(dd，J＝11.74，2.69Hz，1H)，4.21(s，1H)，4.49(m，2H)，5.12(d，J＝10.52Hz，1H)，5.29(d，J＝17.12Hz，1H)，5.75(m，2H)，7.19(d，J＝8.80Hz，1H)，7.37(s，1H)，8.00(s，1H)，8.13(d，J＝9.05Hz，1H)；MS(M+H)+749.
實(shí)施例279化合物279的制備 化合物279按照實(shí)施例269、方案2的方法制備化合物279，不同之處在于在步驟1中使用3-甲氧基-3-(3-甲氧基-苯基)-丙烯酸代替2-三氟甲氧基肉桂酸。
步驟1修改使用4.24g 3-甲氧基-3-(3-甲氧基-苯基)-丙烯酸，得到400mg產(chǎn)物(收率10％)。
產(chǎn)物 步驟2修改使用400mg 4，6-二甲氧基-2H-異喹啉-1-酮，得到300mg產(chǎn)物(收率69％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CDCl3)δppm 3.97(s，3H)，4.05(s，3H)，7.31(dd，J＝9.17，2.57Hz，1H)，7.45(d，J＝2.69Hz，1H)，7.75(s，1H)，8.16(d，J＝9.29Hz，1H)；MS(M+H)+224.
步驟3修改使用89mg 1-氯-4，6-二甲氧基-異喹啉和223mg{1[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲酰基)-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯，得到160mg產(chǎn)物(收率54％)。
產(chǎn)物 化合物279
數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CD3OD)δppm 1.07(m，12H)，1.21(m，10H)，1.43(m，1H)，1.87(dd，J＝8.07，5.62Hz，1H)，2.24(m，2H)，2.58dd，J＝13.57，6.97Hz，1H)，2.94(m，1H)，3.92(s，3H)，3.99(s，3H)，4.04(dd，J＝11.74，2.93Hz，1H)，4.24(s，1H)，4.39(d，J＝11.98Hz，1H)，4.50(m，1H)，5.12(d，J＝10.52Hz，1H)，5.29(d，J＝16.87Hz，1H)，5.75(m，2H)，7.12(d，J＝9.05Hz，1H)，7.40(d，J＝2.20Hz，1H)，7.48(s，1H)，8.04(d，J＝9.05Hz，1H)；MS(M+H)+744.
實(shí)施例280化合物280的制備 化合物280按照實(shí)施例269、方案2的方法制備化合物280，不同之處在于在步驟1中使用3-(3-二氟甲氧基-苯基)-丙烯酸代替2-三氟甲氧基肉桂酸。
步驟1修改使用4.28g 3-(3-二氟甲氧基-苯基)-丙烯酸，得到3.1g產(chǎn)物(收率72％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)MS(M+H)+212。
步驟2修改使用2g 6-二氟甲氧基-2H-異喹啉-1-酮，得到1.5g產(chǎn)物(收率61％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CDCl3)δppm 6.69(t，J＝72.75Hz，1H)，7.49(m，2H)，8.28(d，J＝5.62Hz，1H)，8.36(d，J＝9.05Hz，1H)；MS(M+H)+230.
步驟3修改使用46mg 1-氯-6-二氟甲氧基-異喹啉和l13mg{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯，得到8mg產(chǎn)物(收率5％)。
產(chǎn)物 化合物280
數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CD3OD)δppm 1.05(m，12H)，1.23(m，10H)，1.44(m，2H)，1.88(dd，J＝8.19，5.50Hz，1H)，2.30(m，2H)，2.67(d，J＝13.94Hz，1H)，2.93(m，1H)，4.07(d，J＝10.27Hz，1H)，4.21(s，1H)，4.53(d，J＝6.85Hz，2H)，5.13(m，1H)，5.31(s，1H)，5.76(d，J＝47.93Hz，2H)，7.11(m，2H)，7.26(d，J＝6.11Hz，1H)，7.81(d，J＝6.11Hz，1H)，8.16(m，1H)；MS(M+H)+700.
實(shí)施例281化合物281的制備 化合物281按照實(shí)施例269、方案2的方法制備化合物281，不同之處在于在步驟1中使用3-氯-3-苯基-丙烯酸代替2-三氟甲氧基肉桂酸。
步驟1修改使用11g 3-氯-3-苯基-丙烯酸，得到3.1g產(chǎn)物(收率29％)。
產(chǎn)物
數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 7.34(s，1H)，7.52(t，J＝7.58Hz，1H)，7.77(t，J＝7.46Hz，1H)，7.90(d，J＝8.07Hz，1H)，8.39(d，J＝8.07Hz，1H)，11.37(s，1H)；MSMS(M+H)+180.
步驟2修改使用3.1g 4-氯-2H-異喹啉-1-酮，得到2.3g產(chǎn)物(收率66％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 7.77(ddd，J＝8.31，7.09，1.22Hz，1H)，7.88(ddd，J＝8.31，7.09，1.22Hz，1H)，8.23(d，J＝8.31Hz，1H)，8.34(s，1H)，8.36(d，J＝8.56Hz，1H)；MS(M+H)+198.
步驟3修改使用20mg 1，4-二氯-異喹啉和56mg{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯，得到33mg產(chǎn)物(收率30％)。
產(chǎn)物 化合物281數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.06(m，12H)，1.24(m，10H)，1.44(dd，J＝9.41，5.26Hz，1H)，1.88(dd，J＝7.83，5.62Hz，1H)，2.27(m，2H)，2.63(dd，J＝13.82，6.97Hz，1H)，2.94(m，1H)，4.06(dd，J＝11.49，2.45Hz，1H)，4.22(d，J＝9.29Hz，1H)，4.53(m，2H)，5.12(d，J＝10.76Hz，1H)，5.29(d，J＝17.12Hz，1H)，5.75(m，1H)，5.85(s，1H)，6.60(d，J＝8.80Hz，1H)，7.63(t，J＝7.58Hz，1H)，7.86(t，J＝7.70Hz，1H)，8.06(s，1H)，8.11(d，J＝8.56Hz，1H)，8.25(d，J＝8.31Hz，1H)；MS(M+H)+718.
實(shí)施例282化合物282的制備 化合物282按照實(shí)施例269、方案2的方法制備化合物2，不同之處在于在步驟1中使用3-氯-3-苯基-丙烯酸代替2-三氟甲氧基肉桂酸。
步驟1修改使用20g 3-氯-3-苯基-丙烯酸，得到2g產(chǎn)物(收率8％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)MS(M+H)+230。
步驟2修改使用2g 6-三氟甲氧基-2H-異喹啉-1-酮，得到0.7產(chǎn)物(收率33％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 7.51(d，J＝9.29Hz，1H)，7.59(d，J＝5.62Hz，1H)，7.64(s，1H)，8.31(d，J＝5.62Hz，1H)，8.40(d，J＝9.05Hz，1H)；MS(M+H)+248.
步驟3修改使用50mg 1-氯-6-三氟甲氧基-異喹啉和113mg{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯，得到42mg產(chǎn)物(收率27％)。
產(chǎn)物 化合物282數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.05(m，12H)，1.24(m，10H)，1.44(dd，J＝9.17，5.50Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.07，5.62Hz，1H)，2.28(m，2H)，2.63(dd，J＝13.45，7.09Hz，1H)，2.94(m，1H)，4.06(dd，J＝11.25，2.45Hz，1H)，4.21(s，1H)，4.53(m，2H)，5.13(d，J＝10.52Hz，1H)，5.30(d，J＝17.12Hz，1H)，5.75(m，1H)，5.89(s，1H)，7.39(m，2H)，7.72(s，1H)，8.05(d，J＝5.87Hz，1H)，8.31(d，J＝9.05Hz，1H)，9.18(s，1H)；MS(M+H)+768.
實(shí)施例283化合物283的制備 化合物283按照實(shí)施例269、方案2的方法制備化合物283，不同之處在于在步驟1中使用3-(4-氟-苯基)-3-甲氧基-丙烯酸代替2-三氟甲氧基肉桂酸。
步驟1修改使用3.82g 3-(4-氟-苯基)-3-甲氧基-丙烯酸，得到198mg產(chǎn)物(收率5％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)MS(M+H)+194。
步驟2修改使用193mg 7-氟-4-甲氧基-2H-異喹啉-1-酮，得到199mg產(chǎn)物(收率94％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 4.05(s，3H)，7.49(m，1H)，7.78(s，1H)，7.86(dd，J＝9.66，2.57Hz，1H)，8.23(dd，J＝9.29，5.38Hz，1H)；MS(M+H)+212.
步驟3修改使用42mg 1-氯-7-氟-4-甲氧基-異喹啉和112mg{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲酰基)-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯，得到40mg產(chǎn)物(收率14％)。
產(chǎn)物 化合物283數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.06(m，12H)，1.24(m，10H)，1.42(m，1H)，1.87(dd，J＝7.95，5.50Hz，1H)，2.23(m，2H)，2.55(dd，.J＝13.08，6.48Hz，1H)，2.93(m，1H)，4.06(s，3H)，4.09(m，1H)，4.23(s，1H)，4.30(d，J＝11.49Hz)，1H)，4.46(m，1H)，5.12(d，J＝10.27Hz，1H)，5.29(d，J＝17.36Hz，1H)，5.40(s，1H)，5.76(m，1H)，7.46(d，J＝9.05Hz，1H)，7.56(d，J＝2.20Hz，1H)，7.75(s，1H)，8.18(d，J＝9.05Hz，1H)；MS(M+H)+749.
實(shí)施例284化合物284的制備 化合物284按照實(shí)施例269、方案2的方法制備化合物284，步驟1除外。
步驟1修改將7-甲氧基-2H-異喹啉-1-酮(876mg)和NCS(665mg)在MeCN(10mL)中的混合物回流3h。過(guò)濾得到500mg(47％)所需的產(chǎn)物，為固體物。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm4.00(s，3H)，7.58(m，2H)，8.14(d，J＝10.03Hz，1H)，8.17(s，1H).
步驟2修改使用418mg 4-氯-7-甲氧基-2H-異喹啉-1-酮，得到410mg產(chǎn)物(收率90％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H MR(400Hz，CDCl3)δppm 4.00(s，3H)，7.49(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.55(d，J＝2.44Hz，1H)，8.12(d，J＝9.16Hz，1H)，8.21(s，1H)；MS(M+H)+229.
步驟3修改使用42mg 1，4-二氯-7-甲氧基-異喹啉和117mg{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯，得到50mg產(chǎn)物(收率33％)。
產(chǎn)物 化合物284數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CD3OD)δppm 1.05(m，20H)，1.24(m，2H)，1.44(m，1H)，1.89(dd，J＝8.19，5.50Hz，1H)，2.28(m，2H)，2.62(dd，J＝13.69，6.85Hz，1H)，2.94(m，1H)，3.92(s，3H)，4.07(dd，J＝11.98，3.42Hz，1H)，4.19(m，1H)，4.44(d，J＝11.74Hz，1H)，4.58(dd，J＝10.27，7.09Hz，1H)，5.12(m，1H)，5.31(d，J＝17.12Hz，1H)，5.78(m，2H)，7.49(m，2H)，7.91(s，1H)，8.02(m，1H)；MS(M+H)+749.
實(shí)施例285化合物285的制備 化合物285按照實(shí)施例269、方案2的方法制備化合物285，不同之處在于在步驟1中使用2-二氟甲氧基肉桂酸。
步驟1和步驟2參見(jiàn)化合物256步驟3修改使用46mg 1-氯-5-二氟甲氧基-異喹啉和111mg{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯，得到40mg產(chǎn)物(收率27％)。
產(chǎn)物 化合物285
數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.06(m，12H)，1.25(m，10H)，1.44(m，1H，1.89(m，1H)，2.22(m，2H)，2.62(m，1H)，2.94(m，1H)，4.08(m，1H)，4.23(d，J＝9.54Hz，1H)，4.52(m，2H)，5.12(d，J＝10.76Hz，1H)，5.29(d，J＝17.61Hz，1H)，5.75(m，J＝10.03Hz，1H)，5.88(s，1H)，6.60(s，1H)，7.02(t，J＝73.48Hz，1H)，7.52(m，3H)，8.07(m，J＝5.75，5.75Hz，2H)；MS(M+Na)+772.
實(shí)施例286化合物286的制備 化合物286按照實(shí)施例269、方案2的方法制備化合物286，不同之處在于在步驟1中使用3-(2，3-二氫-苯并[1，4]二氧雜環(huán)己烯-5-基)-丙烯酸代替2-三氟甲氧基肉桂酸。
步驟1修改使用4.12g 3-(2，3-二氫-苯并[1，4]二氧雜環(huán)己烯-5-基)-丙烯酸，得到2.2g產(chǎn)物(收率53％)。
產(chǎn)物
數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 4.37(m，4H)，6.83(d，J＝7.09Hz，1H)，7.02(d，J＝8.80Hz，1H)，7.12(d，J＝7.34Hz，1H)，7.79(d，J＝8.80Hz，1H)；MS(M+H)+204.
步驟2修改使用2.05g 2，3-二氫-7H-1，4-二氧雜-7-氮雜-菲-8-酮，得到1.5g產(chǎn)物(收率68％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CDCl3)δppm 4.42(m，4H)，7.24(d，J＝9.05Hz，1H)，7.77(d，J＝5.87Hz，1H)，7.84(d，J＝9.05Hz，1H)，8.18(d，J＝5.87Hz，1H)；MS(M+H)+222.
步驟3修改使用88mg 8-氯-2，3-二氫-1，4-二氧雜-7-氮雜-菲和223mg{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯，得到140mg產(chǎn)物(收率47％)。
產(chǎn)物 化合物286數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CD3OD)δppm 1.06(m，12H)，1.24(m，10H)，1.43(dd，J＝9.05，5.14Hz，1H)，1.87(m，1H)，2.22(d，J＝9.29Hz，2H)，2.60(dd，J＝13.45，7.09Hz，1H)，2.94(m，1H)，4.05(dd，J＝11.62，2.81Hz，1H)，4.24(s，1H)，4.44(m，6H)，5.13(d，J＝17.36Hz，1H)，5.29(d，J＝17.36Hz，1H)，5.75(m，2H)，7.04(d，J＝9.29H2，1H)，7.44(d，J＝5.87Hz，1H)，7.69(d，J＝9.05Hz，1H)，7.88(d，J＝6.11Hz，1H)；MS(M+H)+742.
實(shí)施例287化合物287的制備 化合物287按照實(shí)施例269、方案2的方法制備化合物287，不同之處在于在步驟1中使用3-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-4-基)-丙烯酸代替2-三氟甲氧基肉桂酸。
步驟1修改使用4.56g 3-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯4-基)-丙烯酸，得到2.2g產(chǎn)物(收率55％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3DOD)δppm 6.63(d，J＝7.09Hz，1H)，7.29(d，J＝7.34Hz，1H)，7.40(d，J＝8.80Hz，1H)，8.19(d，J＝8.80Hz，1H)；MS(M+H)+226.
步驟2修改使用2.2g 2，2-二氟-7H-1，3-二氧雜-7-氮雜-環(huán)戊烯并[a]萘-6-酮，得到2.1g產(chǎn)物(收率87％)。
產(chǎn)物
數(shù)據(jù)1H NMR(500Hz，CDCl3)ppm 7.51(d，J＝9.29Hz，1H)，7.65(d，J＝5.87Hz，1H)，8.22(d，J＝9.05Hz，1H)，8.32(d，J＝5.87Hz，1H)；MS(M+H)+244.
步驟3修改使用48mg 6-氯-2，2-二氟-1，3-二氧雜-7-氮雜-環(huán)戊烯并[a]萘和113mg{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯，得到40mg產(chǎn)物(收率27％)。
產(chǎn)物 化合物287數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CD3OD)δppm 1.02(s，12H)，1.24(m，10H)，1.43(m，1H)，1.88(dd，J＝8.07，5.38Hz，1H)，2.32(d，J＝3.67Hz，2H)，2.64(d，J＝13.45Hz，1H)，2.95(m，1H)，4.05(d，J＝11.49HZ，1H)，4.19(d，J＝9.29Hz，1H)，4.53(m，2H)，5.12(d，J＝9.78Hz，1H)，5.32(s，1H)，5.77(m，2H)，7.34(d，J＝5.87Hz，1H)，7.46(d，J＝9.05Hz，1H)，8.11(m，2H)；MS(M+H)+764.
實(shí)施例288化合物288的制備 化合物288按照實(shí)施例269、方案2的方法制備化合物288，不同之處在于在步驟1中使用3-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-丙烯酸代替2-三氟甲氧基肉桂酸。
步驟1修改使用1g 3-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-丙烯酸，得到0.55g產(chǎn)物。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3DOD)δppm 6.69(d，J＝7.09Hz，1H)，7.19(d，J＝7.09Hz，1H)，7.47(s，1H)7.98(s，1H)；MS(M+H)+226.
步驟2修改使用0.5g 2，2-二氟-6H-[1，3]二氧雜環(huán)戊烯并[4，5-g]異喹啉-5-酮，得到0.4g產(chǎn)物。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1HNMR(400Hz，CDCl3)δ7.41(s，1H)，7.57(d，J＝5.49Hz，1H)，7.94(s，1H)，8.27(d，J＝5.80Hz，1H)；MS(M+H)+244.
步驟3修改使用48mg 5-氯-2，2-二氟-[1，3]二氧雜環(huán)戊烯并[4，5-g]異喹啉和112mg{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯，得到30mg產(chǎn)物。
產(chǎn)物 化合物288
數(shù)據(jù)1H NMH(400Hz，CD3OD)δppm 1.06(m，12H)，1.25(m，10H)，1.42(m，1H)，1.87(dd，J＝8.07，5.62Hz，1H)，2.26(m，2H)，2.61(dd，J＝13.57，6.97Hz，1H)，2.93(m，1H)，4.07(dd，J＝11.86，2.81Hz，1H)，4.22(m，1H)，4.40(d，J＝11.98Hz，1H)，4.52(m，1H)，5.11(d，J＝10.52Hz，1H)，5.29(d，J＝17.12Hz，1H)，5.37(s，1H)，5.74(m，1H)，7.39(s，1H)，7.56(s，1H)，7.63(d，J＝5.62Hz，1H)，7.99(d，J＝5.62Hz，1H).
實(shí)施例289化合物289的制備 化合物289方案3 將化合物287(15mg)和Pt(S)/C(5％，5mg)在乙酸乙酯(5mL)中的懸浮液氫化(壓力10psi)30min。過(guò)濾后，濃縮，定量得到15mg化合物289，為固體物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.09(m，26H)，1.57(m，4H)，2.30(m，1H)，2.61(m，J＝13.82，7.21Hz，1H)，2.96(m，1H)，4.05(m，J＝13.94Hz，1H)，4.19(d，J＝9.54Hz，1H)，4.53(m，2H)，5.89(s，1H)，7.34(d，J＝5.87Hz，1H)，7.46(d，J＝9.05Hz，1H)，8.09(d，J＝5.87Hz，1H)，8.12(d，J＝8.80Hz，1H)；MS(M+H)+766.
實(shí)施例290化合物290的制備 化合物290按照實(shí)施例289、方案3的方法，使用15mg化合物286制備化合物290(15mg，100％)。數(shù)據(jù)1H NMR(400Hz，CD3OD)δppm1.02(m，14H)，1.23(m，12H)，1.58(m，4H)，2.25(m，1H)，2.58(dd，J＝13.82，7.21Hz，1H)，2.96(m，1H)，4.05(m，J＝11.25，2.93Hz，1H)，4.25(d，J＝9.54Hz，1H)，4.39(m，5H)，4.52(m，J＝10.03，7.34Hz，1H)，5.81(s，1H)，7.03(d，J＝9.05Hz，1H)，7.43(d，J＝6.11Hz，1H)，7.69(d，J＝9.05Hz，1H)，7.88(d，J＝6.11Hz，1H)；MS(M+H)+744.
實(shí)施例291化合物291的制備 化合物291按照實(shí)施例289、方案3的方法，使用28mg化合物251制備化合物291(28mg，100％)。數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm1.01(m，15H)，1.26(m，11H)，1.37(m，1H)，1.58(m，3H)，2.25(m，1H)，2.58(dd，J＝13.6，7.0Hz，1H)，2.96(m，1H)，3.99(s，3H)，4.06(m，1H)，4.25(m，1H)，4.44(m，1H)，4.53(dd，J＝10.3，7.6Hz，1H)，5.78(s，1H)，6.64(d，J＝9.8Hz，1H)，7.55(m，2H)，7.71(t，J＝7.3Hz，1H)，8.09(d，J＝8.6Hz，1H)，8.14(d，J＝8.1Hz，1H)；MS(M+Na)+738.
實(shí)施例292化合物292的制備 化合物292按照實(shí)施例289、方案3的方法，使用19mg化合物253制備化合物292(16mg，84％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 0.90(m，15H)，1.15(m，12H)，1.48(m，3H)，2.18(m，1H)，2.51(dd，J＝13.7，6.9Hz，1H)，2.88(m，1H)，3.90(s，3H)，3.98(dd，J＝11.6，3.1Hz，1H)，4.18(d，J＝9.5Hz，1H)，4.36(d，J＝11.0Hz，1H)，4.45(dd，J＝10.2，7.2Hz，1H)，5.76(s，1H)，6.56(d，J＝9.3Hz，1H)，7.05(d，J＝7.6Hz，1H)，7.34(t，J＝8.1Hz，1H)，7.51(d，J＝5.9Hz，1H)，7.65(D，J＝8.3Hz，1H)，7.86(d，J＝6.1Hz，1H)；MS(M+Na)+738.
實(shí)施例293化合物293的制備 化合物293按照實(shí)施例289、方案3的方法，使用20mg化合物252制備化合物293(7mg，35％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.04(m，l5H)，1.27(m，12H)，1.58(m，3H)，2.27(m，1H)，2.60(m，4H)，2.96(m，1H)，4.07(dd，J＝11.7，2.9Hz，1H)，4.25(s，1H)，4.46(d，J＝12.0Hz，1H)，4.54(dd，J＝10.0，7.6Hz，1H)，5.85(s，1H)，7.39(t，J＝7.7Hz，1H)，7.44(d，J＝5.9Hz，1H)，7.53(d，J＝6.9Hz，1H)，8.00(d，J＝6.1Hz，1H)，8.06(d，J＝8.6Hz，1H)；MS(M+H)+700.
實(shí)施例294化合物294的制備 化合物294按照實(shí)施例289、方案3的方法，使用18mg化合物254制備化合物294(14mg，78％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 0.94(m，15H)，1.13(m，10H)，1.20(m，2H)，1.50(m，3H)，2.21(m，1H)，2.53(dd，J＝13.8，7.0Hz，1H)，2.88(m，1H)，3.99(dd，J＝11.4，2.6Hz，1H)，4.14(d，J＝9.3Hz，1H)，4.45(m，2H)，5.79(s，1H)，6.53(d，J＝9.1Hz，1H)，7.40(t.J＝8.0Hz，1H)，7.54(d，J＝5.9Hz，1H)，7.73(d，J＝7.3Hz，1H)，8.02(d，J＝6.1Hz，1H)，8.10(d，J＝8.6Hz，1H)；MS(M+Na)+742.
實(shí)施例295化合物295的制備 化合物295按照實(shí)施例289、方案3的方法，使用30mg化合物270制備化合物295(30mg，100％)。MS(M+Na)+776。
實(shí)施例296化合物296的制備 化合物296按照實(shí)施例289、方案3的方法，使用20mg化合物259制備化合物296(6.3mg，33％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.04(m，15H)，1.24(m，12H)，1.59(m，3H)，2.29(m，1H)，2.50(s，3H)，2.60(dd，J＝13.69，6.85Hz，1H)，2.97(m，1H)，4.09(dd，J＝11.74，2.93Hz，1H)4.22(s，1H)4.43(d，J＝11.74Hz，1H)，4.59(dd，J＝10.27，6.85Hz，1H)，5.87(s，1H)，7.30(d，J＝5.87Hz，1H)，7.57(dd，J＝8.31，1.47Hz，1H)，7.72(d，J＝8.31Hz，1H)，7.89(d，J＝5.87Hz，1H)，7.94(s，1H)；MS(M+H)+700.
實(shí)施例297化合物297的制備 化合物297按照實(shí)施例289、方案3的方法，使用40mg化合物263制備化合物297(40mg，100％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 0.98(m，13H)1.07(m，2H)1.27(m，12H)1.57(m，3H)2.27(m，1H)2.58(dd，J＝14.7，7.1Hz，1H)2.77(s，3H)2.96(m，1H)4.04(m，1H)4.27(m，1H)4.42(d，J＝11.5Hz，1H)4.55(dd，J＝10.6，7.0Hz，1H)5.94(s，1H)6.65(d，J＝9.5Hz，1H)7.28(m，2H)7.50(t，J＝7.6Hz，1H)7.60(d，J＝7.6Hz，1H)7.89(d，J＝5.6Hz，1H)；MS(M+Na)+722.
實(shí)施例298化合物298的制備 化合物298按照實(shí)施例289、方案3的方法，使用29mg化合物261制備化合物298(29mg，100％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 0.99(m，15H)，1.25(m，12H)，1.60(m，3H)，2.28(m，1H)，2.58(m，1H)，2.96(m，1H)，4.02(m，4H)，4.22(dd，J＝8.8，4.4Hz，1H)，4.48(m，2H)，5.83(s，1H)，7.27(d，J＝5.6Hz，1H)，7.36(d，J＝8.8Hz，1H)，7.75(d，J＝11.3Hz，1H)，7.90(d，J＝5.9Hz，1H)；MS(M+Na)+756。
實(shí)施例299化合物299的制備 化合物299按照實(shí)施例289、方案3的方法，使用35mg化合物274制備化合物299(34mg，97％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.01(m，16H)，1.28(m，12H)，1.58(m，2H)，2.27(s，1H)，2.59(dd，J＝13.82，6.97Hz，1H)，2.96(m，1H)，4.02(s，3H)，4.07(m，1H)，4.21(m，1H)，4.44(m，J＝11.98Hz，1H)，4.55(d，J＝10.27Hz，1H)，5.85(s，1H)，7.39(m，2H)，7.95(d，J＝6.11Hz，1H)，8.00(d，J＝9.29Hz，1H)；MS(M+Na)+756.
實(shí)施例300化合物300的制備 化合物300按照實(shí)施例289、方案3的方法，使用30mg化合物262制備化合物300(30mg，100％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.27(m，30H)，2.25(s，1H)，2.54(s，1H)，2.96(m，1H)，3.97(s，3H)，4.20(m，3H)，4.51(m，J＝10.52，6.85Hz，1H)，5.37(s，1H)，7.38(s，1H)，7.62(s，1H)，7.65(d，J＝5.38Hz，1H)8.06(d，J＝5.62Hz，1H)；MS(M+Na)+773.
部分G用于部分G的LC/MS方法如下4.6×50mm Xterra，@梯度3min，流速4mL/min方案1(通用方案)
方案2(通用方案) 方案3(通用方案)
方案4(通用方案) 實(shí)施例320化合物320的制備 化合物320按照上述方案1和3的方法制備化合物320。
步驟1(方案1) -78℃下，向N，N-二乙基-4-甲氧基-2-甲基-苯甲酰胺(332mg，1.5mmol)的THF(15mL)溶液中加入t-BuLi(1.7M的戊烷溶液，1.3mL，2.25mmol)。-78℃下將所得的紅色溶液攪拌10min，隨后加入2-氰基吡啶(156mg，1.5mmol)。接著將反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌過(guò)夜。反應(yīng)物用飽和氯化銨溶液猝滅并用乙酸乙酯萃取兩次。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鎂)并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)制備型HPLC純化，得到淡黃色的TFA鹽固體(85mg，收率15％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ3.91(m，3H)，7.09(dd，J＝9.05，2.45Hz，1H)，7.17(d，J＝2.45Hz，1H)，7.37(s，1H)，7.42(m，1H)，7.92(m，1H)，8.08(d，J＝8.07Hz，1H)，8.18(d，J＝9.05Hz，1H)，8.65(d，J＝4.89Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間2.14min)，MS m/z 253(MH+)。
步驟2(方案3，步驟1) 將6-甲氧基-3-吡啶-2-基-2H-異喹啉-1-酮TFA鹽(85mg，0.232mmol)與磷酰氯(3.0mL)一起加熱回流2天。隨后蒸餾出磷酰氯并將剩余物用冰猝滅。接著用10N NaOH溶液中和，收集棕色固體物，為純產(chǎn)物(62mg，收率99％)。
LC-MS(保留時(shí)間2.063min)，MS m/z 271(MH+)。
步驟3(方案3，步驟2) 化合物320在-78℃下，向{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲酰基)-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(82mg，0.148mmol)和三氯化鑭(36mg，0.148mmol)的DMF(1.5mL)溶液中加入叔丁醇鉀(1.0M THF溶液，0.74mL，0.74mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌1hr，隨后加入1-氯-6-甲氧基-3-吡啶-2-基-異喹啉(40mg，0.148mmol)。升溫至室溫并攪拌過(guò)夜。接著將所得混合物用水猝滅并過(guò)濾。濃縮濾液并將剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到類白色固體產(chǎn)物(化合物320)(23mg，收率20％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.87-1.08(m，11H)，1.20-1.30(m，11H)，1.43(m，1H)，1.87(m，1H)，2.22(m，1H)，2.35(m，1H)，2.69(m，1H)，2.93(m，1H)，3.94(s，3H)，4.16(m，1H)，4.27(m，1H)，4.45(m，1H)，4.56(m，1H)，5.10(d，J＝11.3Hz，1H)，5.27(d，J＝15.9Hz，1H)，5.74(m，1H)，6.07(s，1H)，7.12(d，J＝7.33Hz，1H)，7.31(d，J＝1.96Hz，1H)，7.40(m，1H)，7.94(dd，J＝7.8Hz，1.5Hz，1H)，8.11(d，J＝9.29Hz，1H)，8.22(s，1H)，8.45(d，J＝8.07Hz，1H)，8.62(m，1H).
LC-MS(保留時(shí)間2.393min)，MS m/z 791(MH+)。
實(shí)施例321化合物321的制備方案5 使溴代丙酮酸乙酯與乙基硫脲在回流的二嗯烷中縮合，定量得到單烷基氨基噻唑HBr鹽。用EtI在DMF中將2-乙氨基-噻唑-4-甲酸乙酯烷基化，得到2-二乙氨基-噻唑-4-甲酸乙酯。
LC/MS m/z 229(MH)+。
化合物321按照上述方案2和3的方法，在方案2的步驟1中使用2-二乙氨基-噻唑-4-甲酸乙酯制備化合物321。
LC/MS(保留時(shí)間2.76min)m/z 868(MH+)。
實(shí)施例322化合物322的制備 化合物322按照實(shí)施例321的方法制備化合物322，不同之處在于在方案2的步驟1中使用2-二甲氨基-噻唑-4-甲酸乙酯(按照方案5制備，不同之處在于使用甲基硫脲和甲基碘代替乙基硫脲和乙基碘)代替2-二甲氨基-噻唑-4-甲酸乙酯。
LC/MS(保留時(shí)間2.56min)m/z 840(MH+)。
實(shí)施例323化合物323的制備 化合物323按照實(shí)施例324、步驟3的方法制備化合物323，不同之處在于使用3-氯-6-甲氧基-苯并[d]異_唑代替1-氯-6-甲氧基-3-吡啶-2-基-異喹啉。MS m/z 702(M-H)-。
實(shí)施例324化合物324的制備 化合物324按照實(shí)施例324、步驟3的方法制備化合物324，不同之處在于使用3-氯-苯并[d]異噻唑代替1-氯-6-甲氧基-3-吡啶-2-基-異喹啉。
LC/MS(保留時(shí)間1.83min)m/z 688(M-H)-。
實(shí)施例325化合物325的制備 化合物325按照上述方案1和3的方法制備化合物325。
步驟1(方案1) -78℃下，向N，N-二乙基-4-甲氧基-2-甲基-苯甲酰胺(332mg，1.5mmol)的THF(15mL)溶液中加入t-BuLi(1.7M戊烷溶液，1.3mL，2.25mmol)。將所得的紅色溶液在-78℃下攪拌10min，隨后加入4-氰基吡啶(164mg，1.575mmol)。接著將反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌過(guò)夜。反應(yīng)物用飽和氯化銨溶液猝滅，收集黃色沉淀物，為純產(chǎn)物(145mg，收率38％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ3.91(s，3H)，7.18(dd，J＝8.8Hz，2.8Hz，1H)，7.26(m，2H)，8.06(d，J＝6.0Hz，2H)，8.16(d，J＝8.8Hz，1H)，8.84(d，J＝6.0Hz，2H).
LC-MS(保留時(shí)間1.300min)，MS m/z 253(MH+)。
步驟2(方案3，步驟1) 將6-甲氧基-3-吡啶-4-基-2H-異喹啉-1-酮(134mg，0.531mmol)與磷酰氯(6.0mL)一起加熱回流5天。隨后蒸餾出磷酰氯并將剩余物用冰驟冷。接著用飽和碳酸氫鈉溶液中和，收集棕色固體物，為純產(chǎn)物(125mg，收率87％)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ3.99(s，3H)，7.53(dd，J＝9.04Hz，2.44Hz，1H)，7.59(d，J＝2.69Hz，1H)，8.26(d，J＝9.05Hz，1H)，8.30(d，J＝5.38Hz，2H)，8.73(s，1H)，8.85(d，J＝6.36Hz，2H).
LC-MS(保留時(shí)間2.027min)，MS m/z 271(MH+)。
步驟3(方案3，步驟2) 化合物325在-78℃下，向{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(83.5mg，0.15mmol)和三氯化鑭(36.8mg，0.15mmol)的DME(1.5mL)溶液中加入叔丁醇鉀(1.0M THF溶液，0.75mL，0.75mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌1hr，隨后加入1-氯-6-甲氧基-3-吡啶-4-基-異喹啉(40.6mg，0.15mmol)。升溫至室溫并攪拌過(guò)夜。接著將所得混合物用水猝滅并過(guò)濾。濃縮濾液并將剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到灰白色固體產(chǎn)物(化合物325)(1.6mg，收率1.3％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.90(m，2H)，1.02(s，9H)，1.17-1.31(m，11H)，1.42(m，1H)，1.87(m，1H)，2.23(m，1H)，2.35(m，1H)，2.68(m，1H)，2.93(m，1H)，3.95(s，3H)，4.15(m，1H)，4.25(m，1H)，4.45(m，1H)，4.56(m，1H)，5.10(d，J＝10.76Hz，1H)，5.27(d，J＝17.61Hz，1H)，5.74(m，1H)，6.06(s，1H)，7.14(d，J＝8.07Hz，1H)，7.34(s，1H)，8.01(s，1H)，8.12(d，J＝8.81Hz，1H)，8.19(d，J＝6.12Hz，2H)，8.61(d，J＝5.63Hz，2H).
LC-MS(保留時(shí)間2.523min)，MS m/z 791(MH+)。
實(shí)施例326化合物326的制備 化合物326按照上述方案1和4的方法制備化合物326。
步驟1(方案1) -78℃下，向N，N-二乙基-4-甲氧基-2-甲基-苯甲酰胺(332mg，1.5mmol)的THF(15mL)溶液中加入t-BuLi(1.7M戊烷溶液，1.3mL，2.25mmol)。將所得的紅色溶液在-78℃下攪拌10min，隨后加入4-二甲氨基芐腈(219mg，1.5mmol)。接著將反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌過(guò)夜。反應(yīng)物用飽和氯化銨溶液猝滅，收集黃色沉淀物并在乙醚中研磨，得到灰白色固體，為純產(chǎn)物(247mg，收率56％)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ2.97(s，6H)，3.87(s，3H)，6.72(s，1H)，6.78(d，J＝8.80Hz，2H)，6.97(dd，J＝8.80，2.45Hz，1H)，7.10(d，J＝2.45Hz，1H)，7.65(d，J＝8.80Hz，2H)，8.05(d，J8.80Hz，1H)，11.11(s，1H).
LC-MS(保留時(shí)間2.023min)，MS m/z 295(MH+)。
步驟2(方案4，步驟1) 將3-(4-二甲氨基-苯基)-6-甲氧基-2H-異喹啉-1-酮(245mg，0.83mmol)與磷酰氯(10.0mL)一起加熱回流2天。隨后蒸餾出磷酰氯并將剩余物用冰驟冷。接著用10N NaOH溶液中和，并用乙酸乙酯萃取兩次。合并各有機(jī)層并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到橙色固體產(chǎn)物(215mg，收率83％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ3.01(s，6H)，3.96(s，3H)，6.88(d，J＝9.05Hz，2H)，7.20(dd，J＝9.17，2.57Hz，1H)，7.28(d，J＝2.45Hz，1H)，7.94(s，1H)，7.96(d，J＝9.05Hz，2H)，8.13(d，J＝9.29Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間2.543min)，MS m/z 313(MH+)。
步驟3(方案4，步驟2) 將[4-(1-氯-6-甲氧基-異喹啉-3-基)-苯基]-二甲基-胺(110mg，0.35mmol)和氟化四丁基_·氫氟酸鹽(tetrabutyl phosphonium hydrogendiFluoride)(0.5g)的混合物在Smith微波反應(yīng)器中在140℃下加熱20min。隨后加入水并用乙酸乙酯萃取。分離出有機(jī)層，用水洗滌并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到棕色固體產(chǎn)物(85mg，收率82％)。
LC-MS(保留時(shí)間2.320min)，MS m/z 297(MH+)。
步驟4(方案4，步驟3) 化合物326在-78℃下，向{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基-氨基甲酰基)-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(111mg，0.2mmol)和三氯化鑭(49mg，0.2mmol)在DMF(2.0mL)的溶液內(nèi)加入叔丁醇鉀(1.0M THF溶液，1.0mL，1.0mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌1hr，隨后加入[4-(1-氟-6-甲氧基-異喹啉-3-基)-苯基]-二甲胺(59mg，0.2mmol)。升溫至室溫并攪拌過(guò)夜。接著將所得混合物用水猝滅并過(guò)濾。濃縮濾液并將剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到淡黃色固體產(chǎn)物(化合物326)(17.5mg，收率11％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.97-1.08(m，11H)，1.23(m，2H)，1.31(s，9H)，1.44(m，1H)，1.87(m，1H)，2.22(m，1H)，2.34(m，1H)，2.68(m，1H)，2.93(m，1H)，2.99(m，6H)，3.91(s，3H)，4.17(m，1H)，4.29(m，1H)，4.39(m，1H)，4.52(m，1H)，5.10(d，J＝10.76Hz，1H)，5.27(d，J＝17.11Hz，1H)，5.74(m，1H)，6.03(s，1H)，6.83(m，2H)，6.95(m，1H)，7.16(s，1H)，7.59(s，1H)，8.01(m，3H).
LC-MS(保留時(shí)間2.850min)，MS m/z 834(MH+)。
實(shí)施例327化合物327的制備 化合物327按照上述方案1和4的方法制備化合物327。
步驟1(方案1) 在-78℃下，向N，N-二乙基-4-甲氧基-2-甲基-苯甲酰胺(332mg，1.5mmol)的THF(15mL)溶液中加入t-BuLi(1.7M戊烷溶液，1.3mL，2.25mmol)。將所得的紅色溶液在-78℃下攪拌10min，隨后加入4-二乙氨基芐腈(261mg，1.5mmol)。隨后將反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌過(guò)夜。反應(yīng)物用飽和氯化銨溶液猝滅，收集黃色沉淀物，為純產(chǎn)物(215mg，收率44％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.12(m，6H)，3.39(m，4H)，3.87(s，3H)，6.69(s，1H)，6.72(d，J＝9.05Hz，2H)，6.96(dd，J＝8.80，2.45Hz，1H)，7.09(d，J＝2.45Hz，1H)，7.61(d，J＝9.05Hz，2H)，8.04(d，J＝8.80Hz，1H)，l1.06(s，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.883min)，MS m/z 323(MH+)。
步驟2(方案4，步驟1) 將3-(4-二乙氨基-苯基)-6-甲氧基-2H-異喹啉-1-酮(207mg，0.642mmol)與磷酰氯(8.0mL)一起加熱回流1天。隨后蒸餾出磷酰氯并將剩余物用冰驟冷。接著用飽和碳酸氫鈉溶液中和，并用乙酸乙酯萃取兩次。合并各有機(jī)層并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到褐色固體產(chǎn)物(180mg，收率82％)。
LC-MS(保留時(shí)間2.397min)，MS m/z 341(MH+)。
步驟3(方案4，步驟2) 將[4-(1-氯-6-甲氧基-異喹啉-3-基)-苯基]-二乙胺(90mg，0.264mmol)和氟化四丁基_·氫氟酸鹽(0.5g)的混合物在Smith微波反應(yīng)器中在140℃下加熱20min。隨后加入水并用乙酸乙酯萃取。分離出有機(jī)層，用水洗滌并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到淡黃色油狀產(chǎn)物(70mg，收率82％)。
LC-MS(保留時(shí)間2.253min)，MS m/z 325(MH+)。
步驟4(方案4，步驟3) 化合物327在-78℃下，向{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基-氨基甲酰基)-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.18mmol)和三氯化鑭(66mg，0.27mmol)的DMF(2.0mL)溶液中加入叔丁醇鉀(1.0MTHF溶液，0.9mL，0.9mmol)，將反應(yīng)混合物攪拌1hr，隨后加入[4-(1-氟-6-甲氧基-異喹啉-3-基)-苯基]-二乙胺(70mg，0.216mmol)。升溫至室溫并攪拌過(guò)夜。接著將所得混合物用水猝滅并過(guò)濾。濃縮濾液并將剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到白色固體產(chǎn)物(化合物327)(18mg，收率12％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.95-1.07(m，11H)，1.18(m，6H)，1.25-1.38(m，11H)，1.58(m，1H)，1.85(m，1H)，2.19(m，1H)，2.34(m，1H)，2.68(m，1H)，2.92(m，1H)，3.42(m，4H)，3.90(s，3H)，4.16(m，1H)，4.28(m，1H)，4.37(m，1H)，4.53(m，1H)，5.07(d，J＝11.0Hz，1H)，5.25(d，J＝17.36Hz，1H)，5.74(m，1H)，5.99(s，1H)，6.77(d，J＝8.8Hz，2H)，6.94(d，J＝9.05Hz，1H)，7.14(s，1H)，7.56(s，1H)，7.95-8.02(m，3H).
LC-MS(保留時(shí)間2.690min)，MS m/z 862(MH+)。
實(shí)施例328化合物328的制備 化合物328按照上述方案2和3的方法制備化合物328。
步驟1(方案2，步驟1) -78℃下，向N，N-二乙基-4-甲氧基-2-甲基-苯甲酰胺(332mg，1.5mmol)的THF(15mL)溶液中加入t-BuLi(1.7M戊烷溶液，2.12mL，3.6mmol)。將所得的紅色溶液在-78℃下攪拌10min，隨后加入煙酸甲酯(206mg，1.5mmol)。將反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌2h。隨后將反應(yīng)物用飽和氯化銨溶液猝滅并用乙酸乙酯萃取兩次。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鎂)并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)制備型HPLC純化，得到淡黃色粘稠油狀物，為TFA鹽(124mg，收率19％)。
LC-MS(保留時(shí)間1.740min)，MS m/z 349(M+Na+)。
步驟2(方案2，步驟2) 將N，N-二乙基-4-甲氧基-2-(2-氧代-2-吡啶-3-基-乙基)-苯甲酰胺(120mg，0.272mmol)與乙酸銨(1g)一起加熱3h。隨后將其冷卻并加入水。用乙酸乙酯萃取并分離出有機(jī)層。接著干燥(硫酸鎂)并濃縮，得到褐色固體產(chǎn)物(65mg，收率95％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.89(s，3H)，6.93(s，1H)，7.10(dd，J＝8.80，2.45Hz，1H)，7.19(d，J＝2.45Hz，1H)，7.52(dd，J＝7.46，4.77Hz，1H)，8.15(m，2H)，8.64(dd，J＝4.89，1.47Hz，1H)，8.96(d，J＝1.71Hz，1H)，11.51(s，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.377min)，MS m/z 253(MH+)。
步驟3(方案3，步驟1) 將6-甲氧基-3-吡啶-3-基-2H-異喹啉-1-酮(65mg，0.258mmol)與磷酰氯(2.5mL)一起加熱回流7天。隨后蒸餾出磷酰氯并將剩余物用冰驟冷。接著用10N NaOH溶液中和，并用乙酸乙酯萃取兩次。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鎂)并濃縮，得到黃色固體物產(chǎn)物(27mg，收率39％)。
LC-MS(保留時(shí)間2.090min)，MS m/z 271(MH+)。
步驟4(方案3，步驟2) 化合物328在-78℃下，向{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲酰基)-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(56mg，0.10mmol)和三氯化鑭(25mg，0.10mmol)的DMF(1.5mL)溶液中加入叔丁醇鉀(1.0M THF溶液，0.5mL，0.5mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌1hr，隨后加入1-氯-6-甲氧基-3-吡啶-3-基-異喹啉(27mg，0.10mmol)。升溫至室溫并攪拌過(guò)夜。接著將所得混合物用水猝滅并過(guò)濾。濃縮濾液并將剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到白色固體產(chǎn)物(化合物328)(17mg，收率21％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.95(m，2H)，1.02(s，9H)，1.20-1.30(m，11H)，1.41(m，1H)，1.86(m，1H)，2.21(m，1H)，2.35(m，1H)，2.67(m，1H)，2.93(m，1H)，3.93(s，3H)，4.14(m，1H)，4.26(m，1H)，4.47(d，J＝11.99Hz，1H)，4.55(m，1H)，5.09(d，J＝10.02Hz，1H)，5.26(d，J＝17.85Hz，1H)，5.74(m，1H)，6.07(s，1H)，7.09(m，1H)，7.29(d，J＝1.96Hz，1H)，7.53(m，1H)，7.86(s，1H)，8.09(d，J＝9.05Hz，1H)，8.50-8.58(m，2H)，9.28(s，1H).
LC-MS(保留時(shí)間2.453min)，MS m/z 791(MH+)。
實(shí)施例329化合物329的制備 化合物329按照上述方案2和4的方法制備化合物329。
步驟1(方案2，步驟1) 在-78℃下，向N，N-二乙基-4-甲氧基-2-甲基-苯甲酰胺(332mg，1.5mmol)的THF(15mL)溶液中加入t-BuLi(1.7M戊烷溶液，2.2mL，3.75mmol)。將所得的紅色溶液在-78℃下攪拌10min，隨后加入N，N-二甲基鄰氨基苯甲酸甲酯(269mg，1.5mmol)。將反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌2h。隨后將反應(yīng)物用飽和氯化銨溶液猝滅并用乙酸乙酯萃取兩次。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鎂)并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)制備型HPLC純化，得到淡黃色粘稠油狀產(chǎn)物(256mg，收率46％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.99-1.13(m，6H)，3.23-3.31(m，8H)，3.39(m，2H)，3.82(s，3H)，4.35(s，2H)，6.91(dd，J＝8.44，2.57Hz，1H)，6.99(d，J＝2.45Hz，1H)，7.22(d，J＝8.56Hz，1H)，7.69(t，J＝7.70Hz，1H)，7.84(m，1H)，7.96(d，J＝8.31Hz，1H)，8.18(d，J＝7.83Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.557min)，MS m/z 369(MH+)。
步驟2(方案2，步驟2) 將2-[2-(2-二甲氨基-苯基)-2-氧代-乙基]-N，N-二乙基-4-甲氧基-苯甲酰胺(250mg，0.678mmol)與乙酸銨(1.5g)一起加熱2h。隨后將其冷卻并加入水。用乙酸乙酯萃取并分離出有機(jī)層。接著干燥(硫酸鎂)并濃縮，得到淡黃色固體產(chǎn)物(125mg，收率63％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ2.95(s，6H)，3.92(s，3H)，6.92(s，1H)，7.12(dd，J＝8.80，2.45Hz，1H)，7.16(d，J＝2.45Hz，1H)，7.35(m，1H)，7.55(m，2H)，7.63(d，J＝7.83Hz，1H)，8.20(d，J＝9.05Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間2.097min)，MS m/z 295(MH+)。
步驟3(方案4，步驟1) 將3-(2-二甲氨基-苯基)-6-甲氧基-2H-異喹啉-1-酮(125mg，0.425mmol)與磷酰氯(4.0mL)一起加熱回流1天。隨后蒸餾出磷酰氯并將剩余物用冰驟冷。接著用10N NaOH溶液中和，并用乙酸乙酯萃取兩次。合并各有機(jī)層并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到褐色固體產(chǎn)物(82mg，收率62％)。
LC-MS(保留時(shí)間2.040min)，MS m/z 313(MH+)。
步驟4(方案4，步驟2) 將[2-(1-氯-6-甲氧基-異喹啉-3-基)-苯基]-二甲基-胺(82mg，0.262mmol)和氟化四丁基_·氫氟酸鹽(1.0g)的混合物在Smith微波反應(yīng)器中在140℃下加熱20min。隨后加入水并用乙酸乙酯萃取。分離出有機(jī)層，用水洗滌并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到粗產(chǎn)物，經(jīng)制備型HPLC純化，得到淡黃色油狀產(chǎn)物(85mg)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ3.41(s，6H)，4.00(s，3H)，7.42(dd，J＝9.05，2.45Hz，1H)，7.53(s，1H)，7.71(m，2H)，7.99(m，1H)，8.16(m，2H)，8.31(s，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.873min)，MS m/z 297(MH+)。
步驟5(方案4，步驟3) 化合物329在-78℃下，向{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基-氨基甲酰基)-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(56mg，0.1mmol)和三氯化鑭(25mg，0.1mmol)的DMF(1.0mL)溶液中加入叔丁醇鉀(1.0M THF溶液，0.5mL，0.5mmol)，將反應(yīng)混合物攪拌1hr，隨后加入[2-(1-氟-6-甲氧基-異喹啉-3-基)-苯基]-二甲基-胺(30mg，0.1mmol)。升溫至室溫并攪拌過(guò)夜。接著將所得混合物用水猝滅并過(guò)濾。濃縮濾液并將剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到白色固體產(chǎn)物(化合物329)(4.0mg，收率5％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.98-1.08(m，11H)，1.16-1.32(m，11H)，1.40(m，1H)，1.85(m，1H)，2.16-2.32(m，2H)，2.60-2.71(m，7H)，2.92(m，1H)，3.91(s，3H)，4.08(m，1H)，4.26(m，1H)，4.45(m，1H)，4.55(m，1H)，5.10(d，J＝10.27Hz，1H)，5.28(d，J＝18.09Hz，1H)，5.74(m，1H)，5.89(s，1H)，7.05(d，.J＝6.85Hz，1H)，7.10-7.20(m，2H)，7.29(m，1H)，7.63(d，J＝7.58Hz，1H)，7.78(s，1H)，8.07(d，J＝8.56Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間2.550min)，MS m/z 834(MH+)。
實(shí)施例330化合物330的制備 化合物330按照上述方案2和4的方法制備化合物330。
步驟1(方案2，步驟1) 在-78℃下，向N，N-二乙基-4-甲氧基-2-甲基-苯甲酰胺(332mg，1.5mmol)的THF(15mL)溶液中加入t-BuLi(1.7M戊烷溶液，2.2mL，3.75mmol)。將所得的紅色溶液在-78℃下攪拌10min，隨后加入(3-二甲氨基)苯甲酸甲酯(269mg，1.5mmol)。將反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌2h。隨后將反應(yīng)物用飽和氯化銨溶液猝滅并用乙酸乙酯萃取兩次。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鎂)并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)制備型HPLC純化，得到淡黃色粘稠油狀物，為TFA鹽(245mg，收率33％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.01(t，J＝6.85Hz，3H)，1.09(m，3H)，3.11(s，6H)，3.21(m，2H)，3.40(m，2H)，3.79(s，3H)，4.39(s，2H)，6.84-6.91(m，2H)，7.19(d，J＝8.32Hz，1H)，7.35(m，1H)，7.49(t，J＝8.07Hz，1H)，7.66-7.71(m，2H).
LC-MS(保留時(shí)間1.930min)，MS m/z 369(MH+)。
步驟2(方案2，步驟2) 將2-[2-(3-二甲氨基-苯基)-2-氧代-乙基]-N，N-二乙基-4-甲氧基-苯甲酰胺(240mg，0.497mmol)與乙酸銨(2.0g)一起加熱2.5小時(shí)。隨后將其冷卻并加入水。收集褐色固體，為純產(chǎn)物(95mg，收率65％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ2.98(s，6H)，3.88(s，3H)，6.74-6.87(m，2H)，7.01-7.07(m，3H)，7.18(d，J＝2.44Hz，1H)，7.28(t，.J＝7.82Hz，1H)，8.10(d，J＝8.80Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.773min)，MS m/z 295(MH+)。
步驟3(方案4，步驟1) 將3-(3-二甲氨基-苯基)-6-甲氧基-2H-異喹啉-1-酮(92mg，0.312mmol)與磷酰氯(3.0mL)一起加熱回流2天。隨后蒸餾出磷酰氯并將剩余物用冰驟冷。接著用飽和碳酸氫鈉溶液中和，并用乙酸乙酯萃取兩次。合并各有機(jī)層并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到褐色粘稠油狀產(chǎn)物(72mg，收率74％)。
LC-MS(保留時(shí)間2.297min)，MS m/z 313(MH+)。
步驟4(方案4，步驟2) 將[3-(1-氯-6-甲氧基-異喹啉-3-基)-苯基]-二甲胺(72mg，0.23mmol)和氟化四丁基_·氫氟酸鹽(0.5g)的混合物在Smith微波反應(yīng)器中在140℃下加熱20min。隨后加入水并用乙酸乙酯萃取。分離出有機(jī)層，用水洗滌并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到褐色油狀產(chǎn)物(58mg，收率85％)。
LC-MS(保留時(shí)間2.193min)，MS m/z 297(MH+)。
步驟5(方案4，步驟3) 化合物330在-78℃下，向{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基-氨基甲酰基)-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(86mg，0.155mmol)和三氯化鑭(57mg，0.233mmol)的DMF(1.5mL)溶液中加入叔丁醇鉀(1.0M THF溶液，0.5mL，0.5mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌1hr，隨后加入[3-(1-氟-6-甲氧基-異喹啉-3-基)-苯基]-二甲胺(55mg，0.185mmol)。升溫至室溫并攪拌過(guò)夜。接著將所得混合物用水猝滅并過(guò)濾。濃縮濾液并將剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到灰白色固體產(chǎn)物(化合物330)(8.0mg，收率6％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.99-1.09(m，11H)，1.23(m，2H)，1.29(s，9H)，1.42(m，1H)，1.86(m，1H)，2.21(m，1H)，2.33(m，1H)，2.70(m，1H)，2.93(m，1H)，3.00(s，6H)，3.92(s，3H)，4.14(m，1H)，4.29(m，1H)，4.44-4.57(m，2H)，5.10(d，J＝11.00Hz，1H)，5.27(d，J＝16.87Hz，1H)，5.74(m，1H)，6.01(s，1H)，6.63(d，J＝8.80Hz，1H)，7.03(d，J＝6.85Hz，1H)，7.24(s，1H)，7.28(t，J＝8.07Hz，1H)，7.45(d，J＝7.82Hz，1H)，7.59(s，1H)，7.72(s，1H)，8.05(d，J＝8.80Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間2.707min)，MS m/z 834(MH+)。
實(shí)施例331化合物331的制備 化合物331按照本文描述的方法制備化合物331。
實(shí)施例334化合物334的制備 化合物334按照以下方法制備化合物334步驟1 0℃下，向Boc-順-HYP-OMe(122.6mg，0.5mmol)的THF(15mL)溶液中加入三苯基膦(196.7mg，0.75mmol)和苯并[d]異_唑-3-醇(81mg，0.6mmol)。接著加入DEAD(0.118mL，0.75mmol)。將反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌3hr。隨后蒸發(fā)溶劑并將剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到無(wú)色粘稠油狀物(117mg，收率54％)。
1H MR(400MHz，CD3OD)δ1.41(m，9H)，2.38(m，1H)，2.75(m，1H)，3.75(m，3H)，3.81(m，1H)，3.90(m，1H)，4.47(m，1H)，5.44(m，1H)，7.31(t，J＝7.46Hz，1H)，7.47(d，J＝8.56Hz，1H)，7.59(t，J＝7.83Hz，1H)，7.66(d，J＝8.07Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間2.65min)，MS m/z 363(MH+)。
接著將一些偶合產(chǎn)物(85mg，0.235mmol)溶于4N HCl的二_烷(1.5mL)溶液中并攪拌3hr。蒸發(fā)溶劑，得到黃色油狀物，為鹽酸鹽(85mg，收率＞100％)。
LC-MS(保留時(shí)間1.327min)，MS m/z 263(MH+)。
步驟2 向4-(苯并[d]異_唑-3-氧基)-吡咯烷-2-甲酸甲酯·鹽酸鹽(85mg，0.285mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入N-boc-L-t-亮氨酸(99mg，0.427mmol)、DIEA(0.25mL，1.425mmol)和偶合劑HOBt(65mg，0.427mmol)和HBTU(162mg，0.427mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。接著經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到無(wú)色粘稠油狀產(chǎn)物(63mg，收率46％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.01(s，9H)，1.17(s，9H)，2.34(m，1H)，2.78(dd，J＝14.13，7.83Hz，1H)，3.72(s，3H)，4.00(dd，J＝12.22，3.42Hz，1H)，4.19(s，1H)，4.57(d，J＝12.23Hz，1H)，4.68(m，1H)，5.51(m，1H)，7.27(m，1H)，7.47(d，J＝8.56Hz，1H)，7.57(m，1H)，7.63(d，J＝8.07Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間2.737min)，MS m/z 498(M+Na+)。
步驟3 化合物334向4-(苯并[d]異_唑-3-氧基)-1-(2-叔丁氧基羰基氨基-3，3-二甲基-丁?；?-吡咯烷-2-甲酸甲酯(63mg，0.132mmol)在THF(3.5mL)、甲醇(2.0mL)和水(0.5mL)的混合物中的溶液內(nèi)加入一水合氫氧化鋰(83mg，1.89mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后用1N鹽酸將其酸化至pH＝3至5并濃縮。用乙酸乙酯萃取(2×30mL)，合并各有機(jī)層并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到淡黃色油狀物(61mg，收率100％)。產(chǎn)物直接使用。
向上述化合物(61mg，0.132mmol)的乙腈(8mL)溶液中加入(1R，2S)(1-環(huán)丙烷磺?；?氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)-丙基)-氨基甲酸鹽酸鹽(42mg，0.158mmol)、DIEA(0.115mL，0.66mmol)和偶合劑HOBt(30mg，0.198mmol)和HBTU(75mg，0.198mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。接著經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到黃色薄膜狀終產(chǎn)物(化合物334)(24mg，收率27％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.01(s，9H)，1.05(m，2H)，1.12-1.26(m，11H)，1.43(m，1H)，1.86(dd，J＝8.07，5.38Hz，1H)，2.17-2.33(m，2H)，2.67(dd，J＝12.96，5.87Hz，1H)，2.93(m，1H)，4.05(m，1H)，4.22(m，1H)，4.49(m，2H)，5.11(d，J＝10.21Hz，1H)，5.29(d，J＝17.12Hz，1H)，5.55(s，1H)，5.74(m，1H)，7.29(m，1H)，7.48(d，J＝8.32Hz，1H)，7.54-7.64(m，2H).
LC-MS(保留時(shí)間2.767min)，MS m/z 696(M+Na+)。
實(shí)施例335化合物335的制備 方案2
步驟1(方案1，步驟1)向(2S，4R)4-羥基-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯(0.25g，1.08mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入(1R，2S)(1-環(huán)丙烷磺酰基-氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)-丙基)-氨基甲酸鹽酸鹽(0.346g，1.30mmol)、DIEA(0.94mL，5.41mmol)和偶合劑HOBt(0.248g，1.62mmol)和HBTU(0.615mg，1.62mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮，得到黃色油狀物。將其經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到無(wú)色粘稠油狀物，隨后將其溶于4N HCl的二_烷(5mL)溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。蒸發(fā)溶劑，得到白色固體產(chǎn)物(200mg，收率49％)。產(chǎn)物直接使用。
LC-MS(保留時(shí)間0.647min)，MS m/z 344(MH+)。
步驟2(方案1，步驟2)向上述化合物(200mg，0.527mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入2-甲氧基羰基氨基-3，3-二甲基-丁酸(0.15g，0.79mmol)、DIEA(0.46mL，2.63mmol)和偶合劑HOBt(0.121g，0.79mmol)和HBTU(0.30g，0.79mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮，得到淡黃色油狀物。將其經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到白色固體終產(chǎn)物(中間體2)(145mg，收率54％)。
1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.99-1.10(m，11H)，1.24(m，2H)，1.41(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.87(dd，J＝7.9，5.5Hz，1H)，1.97(m，1H)，2.13(m，1H)，2.24(m，1H)，2.93(m，1H)，3.65(s，3H)，3.77-3.88(m，2H)，4.33-4.39(m，2H)，4.49(m，br，1H)，5.13(d，J＝10.4Hz，1H)，5.31(d，J＝17.1Hz，1H)，5.76(m，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.590min)，MS m/z 515(MH+)。
步驟3(方案2)向2，4-氯嘧啶(149mg，1mmol)的THF(5mL)溶液中加入四(三苯基膦)合鈀(23mg，2mol％)和溴化苯基鋅的THF溶液(0.5M，2.1mL，1.05mmol)。將反應(yīng)混合物在50℃下攪拌過(guò)夜。隨后加入飽和氯化銨溶液并用EtOAc萃取兩次。合并各有機(jī)層，用水洗滌并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到黃色剩余物，該剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到淡黃色油狀2-氯-4-苯基-嘧啶，該產(chǎn)物直接使用。
在0℃下，向中間體2(20mg，0.039mmol)的DMF(3mL)溶液中加入NaH(3.9mg，60％分散于礦物油中，0.0975mmol)。隨后將反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌1hr。接著加入上述制備的2-氯-4-苯基-嘧啶(18mg，粗產(chǎn)物)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。接著用水猝滅并用EtOAc萃取。分離出有機(jī)層，用鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到淡黃色油狀物，接著將該油狀物經(jīng)制備型HPLC純化，得到粘稠無(wú)色油狀終產(chǎn)物(化合物335)，為TFA鹽(5.5mg，收率18％)。
1H NMR(CD3OD，300MHz)δ0.92-1.12(m，11H).1.25(m，2H)，1.44(dd，J＝9.2，5.5Hz，1H)，1.89(dd，J＝8.1，5.5Hz，1H)，2.I7-2.37(m，2H)，2.57(m，1H)，2.95(m，1H)，3.52(s，3H)，4.14(m，1H)，4.24-4.38(m，2H)，4.51(m，1H)，5.13(d，J＝10.2Hz，1H)，5.31(d，J＝17.2Hz，1H)，5.77(m，1H)，5.86(s，1H)，7.48-7.60(m，3H)，7.66(d，J＝5.3Hz，1H)，8.18(m，2H)，8.60(d，J＝5.1Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.947min)，MS m/z 669(MH+)。
實(shí)施例336化合物336的制備 步驟1向2，4-二氯嘧啶(149mg，1mmol)的THF(5mL)溶液中加入四(三苯基膦)合鈀(58mg，5mol％)和溴化2-苯基鋅(0.5M，2.4mL，1.2mmol)的THF溶液。將反應(yīng)混合物在50℃下攪拌過(guò)夜。隨后加入飽和氯化銨溶液并用EtOAc萃取兩次。合并各有機(jī)層，用水洗滌并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到黃色剩余物，該剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到淡黃色油狀產(chǎn)物(11mg，收率3.6％)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ7.61(m，1H)，8.07(m，1H)，8.36(d，J＝5.19Hz，1H)，8.50(d，J＝7.94Hz，1H)，8.75(d，J＝3.97Hz，1H)，8.82(d，J＝5.19Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.440min)，MS m/z 192(MH+)。
步驟2在0℃下，向?qū)嵤├?35的中間體2(15mg，0.029mmol)的DMF(3mL)溶液中加入NaH(1.75mg，60％分散于礦物油，0.0728mmol)。隨后將反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌1hr。接著加入2-氯-4-吡啶-2-基-嘧啶(9.5mg，0.0311mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。接著用水猝滅并用EtOAc萃取。分離出有機(jī)層，用鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到淡黃色油狀物，接著將該油狀物經(jīng)制備型HPLC純化，得到淡黃色膜狀終產(chǎn)物(化合物336)，為TFA鹽(3.5mg，收率15％)。
1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.03(s，9H)，1.08(m，2H)，1.24(m，2H)，1.43(dd，J＝9.77，5.50Hz，1H)，1.89(m，1H)，2.24(m，1H)，2.31(m，1H)，2.57(m，1H)，2.95(m，1H)，3.50(s，3H)，4.13(m，1H)，4.29(s，1H)，4.36(d，J＝11.91Hz，1H)，4.52(m，1H)，5.13(d，J＝10.08Hz，1H)，5.31(d，J＝16.79Hz，1H)，5.76(m，1H)，5.88(m，1H)，7.64(m，1H)，8.06-8.13(m，2H)，8.54(d，J＝7.93Hz，1H)，8.73-8.76(m，2H).
LC-MS(保留時(shí)間1.787min)，MS m/z 670(MH+)。
實(shí)施例337化合物337的制備
步驟2 化合物337 中間體3步驟1向2，4-二氯嘧啶(149mg，1mmol)的DMF(5mL)溶液中加入二氯·雙(三苯基膦)合鈀(II)(35mg，5mol％)和2-(三丁基甲錫烷基)噻吩(0.38mL，1.2mmol)。將反應(yīng)混合物在70℃下加熱3h。隨后加入飽和KF的甲醇溶液(20mL)，在室溫下攪拌4hr。將反應(yīng)混合物與少量硅膠一起濃縮，將剩余物經(jīng)濾紙過(guò)濾并用EtOAc洗滌。隨后將濾液濃縮，并將剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到類白色固體產(chǎn)物(110mg，收率35％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.20(dd，J＝5.01，3.79Hz，1H)，7.74(dd，J＝5.01，1.10Hz，1H)，7.77(d，J＝5.38Hz，1H)，7.98(dd，J＝3.79，1.10Hz，1H)，8.55(d，J＝5.38Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.453min)，MS m/z 197(MH+)。
步驟2在0℃下，向?qū)嵤├?35的中間體2(20mg，0.039mmol)的DMF(3mL)溶液中加入NaH(7.8mg，60％分散于礦物油中，0.195mmol)。隨后將反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌1hr。接著加入2-氯-4-噻吩-2-基-嘧啶(16.9mg，0.0544mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。接著用水猝滅并用EtOAc萃取。分離出有機(jī)層，用鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到淡黃色油狀物，接著將該油狀物經(jīng)制備型HPLC純化，得到兩種產(chǎn)物(化合物337和中間體3)。
化合物337(淡黃色膜狀物，3.0mg，收率11％)。
1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.98-1.07(m，11H)，1.22(m，2H)，1.41(dd，J＝9.54，5.62Hz，1H)，1.86(dd，J＝8.32，5.63Hz，1H)，2.19-2.31(m，2H)，2.52(m，1H)，2.92(m，1H)，3.50(s，3H)，4.09(m，1H)，4.25-4.32(m，2H)，4.47(dd.J＝10.03，7.34Hz，1H)，5.11(dd，J＝10.27，1.71Hz，1H)，5.28(dd，J＝17.11，1.46Hz，1H)，5.69-5.79(m，2H)，7.20(dd，J＝4.89，3.66Hz，1H)，7.51(d，J＝5.38Hz，1H)，7.70(d，J＝4.89Hz，1H)，7.95(d，J＝3.67Hz，1H)，8.54(d，J＝5.14Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.787min)，MS m/z 696(M+Na+)。
中間體3(10mg，收率35％)。
LC-MS(保留時(shí)間1.477min)，MS m/z 617(MH+)。
實(shí)施例338化合物338的制備 中間體3 化合物338
向1-(2-氨基-3，3-二甲基-丁?；?-4-(4-噻吩-2-基-嘧啶-2-氧基)-吡咯烷-2-甲酸(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基)-酰胺(10mg，0.0137mmol)的乙腈(5mL)溶液中加入環(huán)丙基乙酸(2.1mg，0.0205mmol)、DIEA(0.012mL，0.742mmol)和偶合劑HOBt(3.1g，0.0205mmol)和HBTU(7.8mg，0.0205mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮，得到黃色油狀物。將其經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到淡黃色膜狀物，為TFA鹽(化合物338)(4.6mg，收率41％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ0.12(m，2H)，0.48(m，2H)，0.90(m，1H)，1.01-1.09(m，11H)，1.23(m，2H)，1.43(dd，J＝9.29，5.38Hz，1H)，1.87(dd，J＝8.31，5.62Hz，1H)，2.06(m，2H)，2.19-2.31(m，2H)，2.52(dd，J＝13.45，6.85Hz，1H)，2.93(m，1H)，4.12(dd，J＝11,98，3,91Hz，1H)，4.27(d，J＝11.74Hz，1H)，4.47(dd，J＝10.27，6.85Hz，1H)，4.63(s，1H)，5.11(dd，J＝10.27，1.47Hz，1H)，5.28(dd，J＝17.12，1.47Hz，1H)，5.71-5.80(m，2H)，7.20(dd，J＝4.89，3.67Hz，1H)，7.51(d，J＝5.38Hz，1H)，7.70(d，J＝5.20Hz，1H)，7.95(d，J＝3.67Hz，1H)，8.48(d，J＝5.13Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.833min)，MS m/z 699(MH+)。
實(shí)施例339化合物339的制備 化合物339按照實(shí)施例337和實(shí)施例338的方案制備化合物342，不同之處在于使用2-(三丁基甲錫烷基)呋喃代替在實(shí)施例337的步驟1中的2-(三丁基甲錫烷基)噻吩。
步驟1 向2，4-二氯嘧啶(149mg，1mmol)的DMF(5mL)溶液中加入二氯·雙(三苯基膦)合鈀(II)(35mg，5mol％)和2-(三丁基甲錫烷基)呋喃(0.35mL，1.1mmol)。將反應(yīng)混合物在70℃下加熱3h。隨后加入飽和KF的甲醇溶液(20mL)，在室溫下攪拌4hr。將反應(yīng)混合物與少量硅膠一起濃縮，將剩余物經(jīng)濾紙過(guò)濾并用EtOAc洗滌。隨后將濾液濃縮，并將剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到褐色固體產(chǎn)物(80mg，收率27％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ6.68(dd，J＝3.67，1.71Hz，1H)，7.42(d，J＝3.67Hz，1H)，7.67(d，J＝5.13Hz，1H)，7.30(d，J＝1.71Hz，1H)，8.62(d，J＝5.14Hz，1H).LC-MS(保留時(shí)間1.233min)，MS m/z 181(MH+)。
步驟2 在0℃下，向{1-[2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基-氨基甲?；?-4-羥基-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基}-氨基甲酸甲酯(20mg，0.039mmol)的DMF(3mL)溶液中加入NaH(7.8mg，60％分散于礦物油中，0.195mmol)。隨后將反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌1h。接著加入2-氯-4-噻吩-2-基-嘧啶(16.0mg，0.0544mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。接著用水猝滅并用EtOAc萃取。分離出有機(jī)層，用鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到淡黃色油狀物，接著將該油狀物經(jīng)制備型HPLC純化，得到脫boc的偶合產(chǎn)物(3mg，收率11％)。
LC-MS(保留時(shí)間1.420min)，MS m/z 601(MH+)。
步驟3 化合物339向1-(2-氨基-3，3-二甲基-丁酰基)-4-(4-呋喃-2-基-嘧啶-2-氧基)-吡咯烷-2-甲酸(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基)-酰胺(3mg，0.0042mmol)的乙腈(5mL)溶液中加入環(huán)丙基乙酸(0.6mg，0.0063mmol)、DIEA(0.004mL，0.021mmol)和偶合劑HOBt(1.0g，0.0063mmol)和HBTU(2.4mg，0.0063mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮，得到黃色油狀物。將其經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到淡黃色膜狀物，為TFA鹽(化合物339)(1.0mg，收率30％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ0.12(m，2H)，0.48(m，2H)，0.90(m，1H)，0.99-1.09(m，11H)，1.23(m，2H)，1.43(dd，J＝9.05，5.31Hz，1H)，1.87(m，1H)，2.05(m，2H)，2.19-2.29(m，2H)，2.50(m，1H)，2.93(m，1H)，4.10(dd，J＝12.23，3.91Hz，1H)，4.25(d，J＝11.99Hz，1H)，4.47(dd，J＝10.52，7.09Hz，1H)，4.63(s，1H)，5.11(dd，J＝10.52，1.71Hz，1H)，5.29(dd，J＝17.12，1.47Hz，1H)，5.71-5.79(m，2H)，6.65(dd，J＝3.67，1.96Hz，1H)，7.38(d，J＝3.67Hz，1H)，7.40(d，J＝5.38Hz，1H)，7.76(m，1H)，8.54(d，J＝5.38Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.790min)，MS m/z 683(MH+)。
實(shí)施例340化合物340的制備 步驟1 步驟2 化合物340步驟1向2，4-二氯嘧啶(149mg，1mmol)的DMF(5mL)溶液中加入二氯·雙(三苯基膦)合鈀(II)(35mg，5mol％)和2-(三丁基甲錫烷基)噻唑(412mg，1.1mmol)。將反應(yīng)混合物在80℃下加熱3h。隨后加入飽和KF的甲醇溶液(20mL)，在室溫下攪拌4hr。將反應(yīng)混合物與少量硅膠一起濃縮，將剩余物經(jīng)濾紙過(guò)濾并用EtOAc洗滌。隨后將濾液濃縮，并將剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到褐色固體產(chǎn)物(9mg，3％收率)。
LC-MS(保留時(shí)間1.320min)，MS m/z 198(MH-)。
步驟2在0℃下，向1-[2-(2-環(huán)丙基-乙酰氨基)-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羥基-吡咯烷-2-甲酸(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基)-酰胺(12.5mg，0.0232mmol)的DMF(3mL)溶液中加入NaH(3.7mg 60％分散于礦物油中，0.0.0928mmol)。隨后將反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌1h。接著加入2-氯-4-噻唑-2-基-嘧啶(9.0mg，0.0289mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。接著用水猝滅并用EtOAc萃取。分離出有機(jī)層，用鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到粗產(chǎn)物，該產(chǎn)物隨后經(jīng)制備型HPLC純化，得到白色固體終產(chǎn)物(化合物340)(2.8mg，收率17％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ0.12(m，2H)，0.47(m，2H)，0.89(m，1H)，1.00-1.09(m，11H)，1.22(m，2H)，1.44(dd，J＝9.54，5.38Hz，1H)，1.87(dd，J＝8.07，5.38Hz，1H)，2.06(m，2H)，2.20-2.32(m，2H)，2.52(dd，J＝13.70，6.85Hz，1H)，2.93(m，1H)，4.13(dd，J＝11.98，3.91Hz，1H)，4.30(d，J＝11.98Hz，1H)，4.48(dd，J＝10.51，7.09Hz，1H)，463(d，J＝9.54Hz，1H)，5.11(d，J＝10.51Hz，1H)，5.29(d，J＝17.12Hz，1H)，5.73-5.80(m，2H)，7.81(d，J＝5.14Hz，1H)，7.84(d，J＝3.18Hz，1H)，8.03(d，J＝2.93Hz，1H)，8.68(d，J＝5.13Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.710min)，MS m/z 700(MH+)。
實(shí)施例341化合物341的制備方案1
方案2 步驟1(方案1，步驟1)在0℃下，向Boc-HYP-OH(1.0g，4.324mmol)的DMF(20mL)溶液中加入NaH(0.38g，60％分散于礦物油中，9.513mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌1h。接著加入2，4-二氯嘧啶(0.709g，0.0289mmol)。反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌過(guò)夜。隨后用1N HCl溶液猝滅并用EtOAc萃取。分離出有機(jī)層，用鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到粗產(chǎn)物，該產(chǎn)物隨后經(jīng)制備型HPLC純化，得到無(wú)色油狀產(chǎn)物(0.4g，收率27％)。
1H NMR(CD3OD，300MHz)δ1.13(m，9H)，2.37(m，1H)，2.62(m，1H)，3.70-3.84(m，2H)，4.38(m，1H)，5.65(m，1H)，6.88(d，J＝5.86Hz，1H)，8.37(d，J＝5.86Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.370min)，MS m/z 344(MH+)。
步驟2(方案1，步驟2)向(2S，4R)4-(2-氯-嘧啶-4-氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯(0.34g，0.99mmol)的乙腈(20mL)溶液中加入(1R，2S)/(1S，2R)(1-環(huán)丙烷磺?；?氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基)-氨基甲酸(0.511g，1.48mmol)、DIEA(0.86mL，4.95mmol)和偶合劑HOBt(0.226g，1.48mmol)和HBTU(0.561g，1.48mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。接著經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到黃色固體物(中間體4)(0.33g，收率41％)。
1H NMR(CD3OD，300MHz)δ非對(duì)映異構(gòu)體混合物。
LC-MS(保留時(shí)間2.907min)，MS m/z 655(MH+)。
步驟3(方案2，步驟1)向中間體4(50mg，0.061mmol)的二氯甲烷(2.5mL)溶液中加入1，2，3，4-四氫異喹啉(0.011mL，0.0915mmol)和三乙胺(0.021mL，0.153mmol)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜和在40℃下攪拌1天。汽提出溶劑并將剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到無(wú)色油狀物，隨后將其溶于4N HCl的二_烷(1mL)溶液中，攪拌過(guò)夜。蒸發(fā)溶劑，得到無(wú)色油狀物，為鹽酸鹽(20mg，收率52％)。
LC-MS(保留時(shí)間1.160min)，MS m/z 553(MH+)。
步驟4(方案2，步驟2)向4-[2-(3，4-二氫-1H-異喹啉-2-基)-嘧啶-4-氧基]-吡咯烷-2-甲酸(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基)-酰胺鹽酸鹽(20mg，0.032mmol)的乙腈(5mL)溶液中加入2-甲氧基羰基氨基-3，3-二甲基-丁酸(9.1mg，0.048mmol)、DIEA(0.028mL，0.16mmol)和偶合劑HOBt(7.3mg，0.048mmol)和HBTU(18.2mg，0.048mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮，得到淡黃色油狀物。將其經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到無(wú)色油狀物，為TFA鹽(化合物341)(16mg，收率60％)。
1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.98-1.06(m，13H)，1.13(m，1H)，1.22-1.32(m，1H)，1.35-1.44(m，1H)，1.82(dd，J＝8.24，5.19Hz，0.5H)，1.90(dd，J＝8.24，5.49Hz，0.5H)，2.26(m，1H)，2.32-2.43(m，1H)，2.56(m，1H)，2.96(m，1H)，3.11(m，br，2H)，3.56(s，3H)，4.14(m，1H)，4.21(m，1H)，4.38(m，1H)，4.47(m，1H)，5.15(m，1H)，5.31(m，1H)，5.75(m，1H)，5.94(s，1H)，6.47(d，J＝7.02Hz，1H)，7.29(s，4H)，7.49(m，1H)，7.56(m，1H)，7.74(d，J＝8.24Hz，1H)，7.88(d，J＝8.24Hz，1H)，8.11(d，J＝.02Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.517min)，MS m/z 724(MH+)。
實(shí)施例342化合物342的制備 化合物342按照實(shí)施例341、方案2的方法制備化合物342，不同之處在于使用異吲哚啉代替在方案2的步驟1中的1，2，3，4-四氫異喹啉。
步驟1
向?qū)嵤├?41的中間體4(50mg，0.061mmol)的二氯甲烷(2.5mL)溶液中加入異吲哚啉(0.013mL，0.115mmol)和三乙胺(0.026mL，0.19mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2天。汽提出溶劑并將剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到無(wú)色油狀物。隨后將其溶于4N HCl的二_烷(1mL)溶液中并攪拌過(guò)夜。蒸發(fā)溶劑，得到粗產(chǎn)物，該產(chǎn)物再次經(jīng)制備型HPLC純化，得到淡黃色的TFA鹽固體(8.5mg，收率14％)。
LC-MS(保留時(shí)間1.860min)，MS m/z 539(MH+)。
步驟2 化合物342向4-[2-(1，3-二氫-異吲哚-2-基)-嘧啶-4-氧基]-吡咯烷-2-甲酸(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基)-酰胺鹽酸鹽(8.5mg，0.0104mmol)的乙腈(5mL)溶液中加入2-甲氧羰基氨基-3，3-二甲基-丁酸(3.0mg，0.0156mmol)、DIEA(0.009mL，0.052mmol)和偶合劑HOBt(2.4mg，0.0156mmol)和HBTU(5.9mg，0.0156mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮，得到淡黃色油狀物。將其經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到無(wú)色油狀物，為TFA鹽(化合物342)(3mg，收率35％)。
1H NMR(CD3OD，300MHz)δ非對(duì)映異構(gòu)體混合物。
LC-MS(保留時(shí)間2.547min)，MS m/z 710(MH+)。
實(shí)施例343化合物343的制備 化合物343按照實(shí)施例341、方案2的方法制備化合物342，不同之處在于使用嗎啉代替在方案2的步驟1中的1，2，3，4-四氫異喹啉。
步驟1 向?qū)嵤├?41的中間體4(50mg，0.061mmol)的二氯甲烷(2.5mL)溶液中加入嗎啉(0.008mL，0.0915mmol)和三乙胺(0.021mL，0.153mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜和在40℃下攪拌1天。汽提出溶劑并將剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到無(wú)色油狀物。隨后將其溶于4N HCl的二_烷(1mL)溶液中，攪拌過(guò)夜。蒸發(fā)溶劑，得到無(wú)色油狀物，為鹽酸鹽(12.6mg，收率36％)。
LC-MS(保留時(shí)間0.810min)，MS m/z 507(MH+)。
步驟2 化合物343向4-(2-嗎啉-4-基-嘧啶-4-氧基)-吡咯烷-2-甲酸(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基)-酰胺鹽酸鹽(12.6mg，0.0217mmol)的乙腈(5mL)溶液中加入2-甲氧羰基氨基-3，3-二甲基-丁酸(6.2mg，0.0326mmol)、DIEA(0.019mL，0.1085mmol)和偶合劑HOBt(5.0mg，0.0326mmol)和HBTU(12.4mg，0.0326mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮，得到淡黃色油狀物。將其經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到無(wú)色油狀物，為TFA鹽(化合物343)(7mg，收率41％)。
1H NMR(CD3OD，500MHz)δ非對(duì)映異構(gòu)體混合物。
LC-MS(保留時(shí)間1.280min)，MS m/z 678(MH+)。
實(shí)施例344化合物344的制備方案1 中間體5
方案2 化合物344
步驟1(方案1)向4-對(duì)甲苯硫基羰基-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(3.0g，7.91mmol)在乙醇(15mL)和THF(30mL)的混合物中的溶液內(nèi)加入硼氫化鈉(0.6g，15.8mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用1N HCl溶液洗滌并用EtOAc萃取三次。合并各有機(jī)層，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到淡黃色油狀物，該產(chǎn)物經(jīng)快速柱層析純化(硅膠，3∶1 EtOAc∶己烷)，得到無(wú)色油狀產(chǎn)物(中間體5)(1.77g，收率86％)。
1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.43(m，9H)，2.00-2.13(m，2H)，2.46(m，1H)，3.19(m，1H)，3.47-3.53(m，2H)，3.61(m，1H)，3.73(m，3H)，4.31(m，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.240min)，MS m/z 282(M+Na+)。
步驟2(方案2，步驟1)0℃下，向中間體5(80mg，0.309mmol)的THF(10mL)溶液中加入三苯基膦(121.4mg，0.463mmol)和4-羥基喹啉(67.2mg，0.463mmol)。接著加入DEAD(80.6mg，0.463mmol)。將反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌2天。隨后蒸發(fā)溶劑并將剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到無(wú)色油狀物，隨后將其溶于4N HCl的二_烷(3mL)溶液并攪拌2h。蒸發(fā)溶劑，得到粘稠無(wú)色油狀物，為雙鹽酸鹽(110mg，收率99％)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ2.52(m，1H).2.60(m，1H)，3.19(m，1H)，3.45(m，1H)，3.66(s，3H)，3.86(m，1H)，4.61-4.75(m，3H)，7.56(d，J＝6.7Hz，1H)，7.94(t，J＝7.3Hz，1H)，8.10-8.20(m，2H)，8.55(d，J＝8.2Hz，1H)，9.07(d，J＝6.7Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間0.570min)，MS m/z 287(MH+)。
步驟3(方案2，步驟2)向4-(喹啉-4-氧基甲基)-吡咯烷-2-甲酸甲酯雙鹽酸鹽(110mg，0.306mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入2-甲氧羰基氨基-3，3-二甲基-丁酸(87mg，0.46mmol)、DIEA(0.27mL，1.53mmol)和偶合劑HOBt(70mg，0.46mmol)和HBTU(174mg，0.46mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮，得到淡黃色油狀物。將其經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到無(wú)色油狀物，為TFA鹽(105mg，收率60％)。
1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.07(s，9H).2.34(m，1H)，2.45(m，1H)，3.14(m，1H)，3.27(s，3H)，3.75(s，3H)，4.05(m，1H)，4.20(m，1H)，4.31(s，1H)，4.57-4.63(m，2H)，4.73(m，1H)，7.53(d，J＝6.7Hz，1H)，7.91(t，J＝7.6Hz，1H)，8.06-8.16(m，2H)，8.43(d，J＝8.6Hz，1H)，9.02(d，J＝6.4Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.250min)，MS m/z 458(MH+)。
步驟4(方案2，步驟3)向1-(2-甲氧羰基氨基-3，3-二甲基-丁?；?-4-(喹啉-4-氧基甲基)-吡咯烷-2-甲酸甲酯(100mg，0.175mmol)在THF(6mL)、甲醇(3.25mL)和水(1.0mL)的混合物中的溶液內(nèi)中加入一水合氫氧化鋰(110mg，2.62mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后用1N鹽酸將其酸化至pH＝3-5并濃縮。用乙酸乙酯萃取(3×40mL)，合并各有機(jī)層并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到粘稠無(wú)色油狀物(25mg，32％收率)。產(chǎn)物直接使用。
向上述化合物(25mg，0.056mmol)的乙腈(5mL)溶液中加入(1R，2S)(1-環(huán)丙烷磺酰基-氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)-丙基)-氨基甲酸鹽酸鹽(22.5mg，0.085mmol)、DIEA(0.05mL，0.28mmol)和偶合劑HOBt(12.9mg，0.085mmol)和HBTU(32mg，0.085mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮，得到黃色油狀物。將其經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到無(wú)色粘稠油狀物，為TFA鹽(化合物344)(20mg，收率46％)。
1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.02-1.10(m，11H).1.24(m，2H)，1.40(dd，J＝9.2，5.5Hz，1H)，1.90(dd，J＝7.9，5.5Hz，1H)，2.19-2.38(m，3H)，2.95(m，1H)，3.19(m，1H)，3.28(s，3H)，4.10(m，1H)，4.15(m，1H)，4.34(s，1H)，4.55(m，1H)，4.62(d，J＝4.6Hz，2H)，5.15(d，J＝10.7Hz，1H)，5.30(d，J＝17.1Hz，1H)，5.72(m，1H)，7.54(d，J＝6.7Hz，1H)，7.93(m，1H)，8.07-8.18(m，2H)，8.41(d，J＝8.6Hz，1H)，9.03(d，J＝6.7Hz，1H)，9.09(s，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.617min)，MS m/z 656(MH+)。
實(shí)施例345化合物345的制備 化合物345按照實(shí)施例344、方案2的方法制備化合物345，不同之處在于使用3-溴苯酚代替在方案2的步驟1中的4-羥基喹啉。
步驟1 0℃下，向?qū)嵤├?44的中間體5(150mg，0.578mmol)的THF(15mL)溶液中加入三苯基膦(228mg，0.868mmol)和3-溴苯酚(150mg，0.868mmol)。隨后加入DEAD(0.14mL，0.868mmol)。將反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌2天。隨后蒸發(fā)溶劑并將剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到無(wú)色油狀產(chǎn)物(105mg，收率44％)。
LC-MS(保留時(shí)間2.023min)，MS m/z 436(M+Na+)。
步驟2 將4-(3-溴-苯氧基甲基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(35mg，0.085mmol)溶于4N HCl的二_烷(1.5mL)溶液中并攪拌2h。蒸發(fā)溶劑，得到粘稠無(wú)色油狀物。向該油狀物在乙腈(10mL)中的溶液內(nèi)加入2-甲氧羰基氨基-3，3-二甲基-丁酸(21.9mg，0.1155mmol)、DIEA(0.067mL，0.385mmol)和偶合劑HOBt(17.7mg，0.1155mmol)和HBTU(43.8mg，0.1155mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。接著經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到無(wú)色油狀產(chǎn)物(20mg，收率49％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.03(s，9H)，2.15(m，1H)，2.24(m，1H)，2.83(m，1H)，3.54(s，3H)，3.70(s，3H)，3.87(m，1H)，3.91-3.98(m，3H)，4.31(s，1H)，4.59(dd，J＝8.80，5.38Hz，1H)，6.89(d，J＝8.32Hz，1H)，7.03-7.10(m，2H)，7.15(t，J＝8.07Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.943min)，MS m/z 485(MH+)。
步驟3 化合物345向4-(3-溴-苯氧基甲基)-1-(2-甲氧羰基氨基-3，3-二甲基-丁酰基)-吡咯烷-2-甲酸甲酯(17mg，0.035mmol)在THF(1.5mL)、甲醇(0.8mL)和水(0.25mL)的混合物中的溶液內(nèi)加入一水合氫氧化鋰(22mg，0.525mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3天。隨后用1N鹽酸將其酸化至pH＝3-5并濃縮。用乙酸乙酯萃取(2×20mL)，合并各有機(jī)層并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到粘稠無(wú)色油狀物(15mg，91％收率)。產(chǎn)物直接使用。
向上述酸(15mg，0.0318mmol)的乙腈(5mL)溶液中加入(1R，2S)(1-環(huán)丙烷磺?；?氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)-丙基)-氨基甲酸鹽酸鹽(12.7mg，0.0477mmol)、DIEA(0.028mL，0.159mmol)和偶合劑HOBt(7.3mg，0.0477mmol)和HBTU(18.1mg，0.0477mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。接著經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到無(wú)色粘稠油狀終產(chǎn)物(化合物345)(14mg，收率64％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.00-1.06(m，11H)，1.21(m，2H)，1.37(dd，J＝9.53Hz，5.62Hz，1H)，1.86(dd，J＝8.07Hz，5.62Hz，1H)，2.06(m，1H)，2.14-2.24(m，2H)，2.81-2.94(m，2H)，3.53(s，3H)，3.91-3.97(m，4H)，4.33(s，1H)，4.38(m，1H)，5.11(dd，J＝10.27，1.47Hz，1H)，5.28(dd，J＝17.12，1.22Hz，1H)，5.70(m，1H)，6.89(m，1H)，7.05-7.11(m，2H)，7.16(t，J＝8.07Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間3.500min)，MS m/z 683(MH+)。
實(shí)施例346化合物346的制備方案1 中間體6
方案2 中間體6 化合物346步驟1(方案1，步驟1)0℃下，向4-羥基甲基-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(300mg，1.157mmol)的THF(15mL)溶液中加入三苯基膦(455mg，1.735mmol)和5-溴-吡啶-3-醇(按照F.E.Ziegler等，J.Am.Chem.Soc.，(1973)，95，7458的描述制備)(302mg，1.735mmol)。接著加入DEAD(0.273mL，1.735mmol)。將反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌2天。隨后蒸發(fā)溶劑并將剩余物經(jīng)制備型HPLC純化，得到淡黃色油狀物。接著將其溶于4N HCl的二_烷(3.0mL)溶液中并攪拌4hr。蒸發(fā)溶劑，得到粗產(chǎn)物，該產(chǎn)物進(jìn)一步經(jīng)制備型HPLC純化，得到淡黃色油狀物，為TFA鹽(70mg，收率11％)。
LC-MS(保留時(shí)間0.890min)，MS m/z 315(MH+)。
步驟2(方案1，步驟2)向4-(5-溴-吡啶-3-氧基甲基)-吡咯烷-2-甲酸甲酯(70mg，0.129mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入2-甲氧羰基氨基-3，3-二甲基-丁酸(36.5mg，0.193mmol)、DIEA(0.135mL，0.744mmol)和偶合劑HOBt(30mg，0.193mmol)和HBTU(73mg，0.193mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。接著經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到無(wú)色油狀產(chǎn)物(80mg，收率100％)。
1H NMR(CD30D，400MHz)δ1.04(s，9H)，2.17(m，1H)，2.26(m，1H)，2.87(m，1H)，3.50(s，3H)，3.70(s，3H)，3.88-3.98(m，2H)，4.04-4.12(m，2H)，4.28(s，1H)，4.60(dd，J＝9.05，5.87Hz，1H)，7.86(m，1H)8.31-8.35(m，2H).
LC-MS(保留時(shí)間1.697min)，MS m/z 486(MH+)。
步驟3(方案1，步驟3)向4-(5-溴-吡啶-3-氧基甲基)-1-(2-甲氧羰基氨基-3，3-二甲基-丁?；?-吡咯烷-2-甲酸甲酯(80mg，0.133mmol)在THF(5.6mL)、甲醇(3mL)和水(1mL)混合物中的溶液內(nèi)加入一水合氫氧化鋰(84mg，2.0mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3天。隨后用1N鹽酸將其酸化至pH＝3-5。用乙酸乙酯萃取(2×20mL)，合并各有機(jī)層并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到粘稠無(wú)色油狀產(chǎn)物(中間體6)(50mg，收率80％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.04(s，9H)，2.16-2.30(m，2H)，2.88(m，1H)，3.51(s，3H)，3.92(m，2H)，4.07(m，2H)，4.29(s，1H)，4.57(dd，J＝8.56，5.87Hz，1H)，7.79(m，1H)8.29(m，2H).
LC-MS(保留時(shí)間1.590min)，MS m/z 472(MH+)。
步驟4(方案2)向4-(5-溴-吡啶-3-氧基甲基)-1-(2-甲氧羰基氨基-3，3-二甲基-丁?；?-吡咯烷-2-甲酸(5mg，0.0106mmol)的乙腈(5mL)溶液中加入(1R，2S)(1-環(huán)丙烷磺酰基-氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)-丙基)-氨基甲酸鹽酸鹽(4.2mg，0.0159mmol)、DIEA(0.009mL，0.053mmol)和偶合劑HOBt(2.4mg，0.0159mmol)和HBTU(6.0mg，0.0159mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。接著經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到無(wú)色粘稠油狀終產(chǎn)物(化合物346)(2mg，收率24％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.00-1.07(m，11H)，1.20(m，2H)，1.37(dd，J＝9.29Hz，5.14Hz，1H)，1.86(dd，J＝8.07Hz，5.38Hz，1H)，2.08(m，1H)，2.15-2.25(m，2H)，2.87-2.94(m，2H)，3.51(s，3H)，3.92-3.97(m，2H)，4.02-4.07(m，2H)，4.31(s，1H)，4.39(m，1H)，5.10(dd，J＝10.27，1.47Hz，1H)，5.28(dd，J＝17.12，1.46Hz，1H)，5.70(m，1H)，7.68(m，1H)，8.24(m，2H).
LC-MS(保留時(shí)間1.727min)，MS m/z 684(MH+)。
實(shí)施例347化合物347的制備 化合物347步驟1向?qū)嵤├?46的中間體6(16mg，0.0339mmol)的DMF(1mL)溶液中加入3-噻吩硼酸(5.6mg，0.044mmol)、四(三苯基膦)合鈀(2.0mg，0.0017mmol)和2M碳酸鈉溶液(0.051mL，0.1017mmol)。將反應(yīng)混合物在110℃下加熱4hr。隨后過(guò)濾并用甲醇洗滌。將濾液濃縮并經(jīng)制備型HPLC純化，得到褐色油狀產(chǎn)物(6mg，收率37％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.05(s，9H)，2.21-2.30(m，2H)，2.95(m，1H)，3.42(s，3H)，3.93(m，1H)，4.01(m，1H)，4.20-4.30(m，3H)，4.60(dd，J＝8.56，5.87Hz，1H)，7.64(m，2H)，8.12(m，1H)8.37(m，1H)，8.45(m，1H)，8.75(s，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.353min)，MS m/z 476(MH+)。
步驟2向1-(2-甲氧羰基氨基-3，3-二甲基-丁?；?-4-(5-噻吩-3-基-吡啶-3-氧基甲基)-吡咯烷-2-甲酸(6mg，0.0126mmol)的乙腈(5mL)溶液中加入(1R，2S)(1-環(huán)丙烷磺?；?氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)-丙基)-氨基甲酸鹽酸鹽(5.0mg，0.0189mmol)、DIEA(0.011mL，0.063mmol)和偶合劑HOBt(2.9mg，0.0189mmol)和HBTU(7.2mg，0.0189mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。接著經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到淡黃色膜狀物，為TFA鹽(化合物347)(2.2mg，收率22％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.01-1.07(m，11H)，1.19(m，2H)，1.36(m，1H)，1.88(dd，J＝8.07Hz，5.62Hz，1H)，2.09-2.24(m，3H)，2.91(m，1H)，3.00(m，1H)，3.45(s，3H)，3.98(d，J＝5.86Hz，2H)，4.20-4.31(m，3H)，4.43(m，1H)，5.12(dd，J＝10.27，1.71Hz，1H)，5.29(dd，J＝17.12，1.22Hz，1H)，5.69(m，1H)，7.64(m，2H)，8.11(m，1H)，8.31(m，1H)，8.43(m，1H)，8.75(s，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.540min)，MS m/z 688(MH+)。
實(shí)施例348化合物348的制備 中間體5中間體7方案2 中間體8
方案3 中間體8 化合物348步驟1(方案1)向?qū)嵤├?44的中間體5(700mg，2.7mmol)在THF(90mL)、甲醇(50mL)和水(12mL)混合物中的溶液內(nèi)加入一水合氫氧化鋰(1700mg，2.0mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后用1N鹽酸將其酸化至pH＝3-5。用乙酸乙酯萃取(2×20mL)，合并各有機(jī)層并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到粘稠無(wú)色油狀產(chǎn)物(中間體7)(0.58，收率88％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.42(m，9H)，2.00 2.09(m，2H)，2.45(m，1H)，3.17(m，1H)，3.49(m，2H)，3.59(m，1H)，4.24(m，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.08min)，MS m/z 268(M+Na+)。
步驟2(方案2，步驟1)向中間體7(270mg，1.1mmol)的DMSO(10mL)溶液中加入叔丁醇鉀(309mg，2.75mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1h。接著加入2-溴-4-氯-吡啶(254mg，1.32mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。接著將所得混合物用水猝滅并用乙酸乙酯洗滌。分離出水層并用1N鹽酸溶液酸化至pH＝3。用乙酸乙酯萃取兩次，合并各有機(jī)層并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到橙色油狀物。接著在-78℃下將其溶于甲醇中并通入HCl(氣體)鼓泡2分鐘，隨后將反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌過(guò)夜。蒸發(fā)溶劑，得到橙色油狀物，為粗產(chǎn)物，該產(chǎn)物直接使用。
LC-MS(保留時(shí)間0.65min)，MS m/z 315(MH+)。
步驟3(方案2，步驟2)向4-(2-溴-吡啶-4-氧基甲基)-吡咯烷-2-甲酸甲酯粗品的乙腈(20mL)溶液中加入2-甲氧羰基氨基-3，3-二甲基-丁酸(312mg，1.65mmol)、DIEA(1.15mL，6.6mmol)和偶合劑HOBt(252mg，1.65mmol)和HBTU(626mg，1.65mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。接著經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到無(wú)色油狀產(chǎn)物(270mg，兩步總收率41％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.03(s，9H)，2.13-2.19(m，2H)，2.87(m，1H)，3.51(s，3H)，3.70(s，3H)，3.93(d，J＝6.36Hz，2H)，4.11(m，2H)，4.27(s，1H)，4.60(dd，J＝8.80，5.87Hz，1H)，7.06(d，J＝5.87，2.20Hz，1H)7.32(d，J＝2.20Hz，1H)，8.18(d，J＝6.11Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.657min)，MS m/z 486(MH+)。
步驟4(方案2，步驟3)向4-(2-溴-吡啶-4-氧基甲基)-1-(2-甲氧羰基氨基-3，3-二甲基-丁?；?-吡咯烷-2-甲酸甲酯(270mg，0.45mmol)在THF(18mL)、甲醇(10mL)和水(3.3mL)混合物中的溶液內(nèi)加入一水合氫氧化鋰(283mg，6.75mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。接著將其濃縮并用1H HCl溶液酸化至pH＝3-5。收集類白色固體產(chǎn)物(中間體8)(180mg，收率85％)。
1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.06(s，9H)，2.20-2.29(m，2H)，2.89(m，1H)，3.54(s，3H)，3.92(d，J＝6.4Hz，2H)，4.06-4.13(m，2H)，4.31(d，J＝8.85Hz，1H)，4.59(dd，J＝8.85，5.50Hz，1H)，7.00(dd，J＝6.10，2.24Hz，1H)，7.22(d，J＝1.83Hz，1H)，8.12(d，J＝5.80Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間2.113min)，MS m/z 472(MH+)。
步驟5(方案3)向中間體8(10mg，0.0212mmol)的乙腈(5mL)溶液中加入(1R，2S)(1-環(huán)丙烷磺?；?氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)-丙基)-氨基甲酸鹽酸鹽(8.5mg，0.00318mmol)、DIEA(0.018mL，0.106mmol)和偶合劑HOBt(4.9mg，0.0318mmol)和HBTU(12.1mg，0.0318mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。接著經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到無(wú)色粘稠油狀終產(chǎn)物(化合物348)(9mg，收率53％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.00-1.06(m，11H)，1.20(m，2H)，1.36(dd，J＝9.54Hz，5.38Hz，1H)，1.87(dd，J＝8.07Hz，5.38Hz，1H)，2.04-2.24(m，3H)，2.88-2.94(m，2H)，3.52(s，3H)，3.93(d，J＝5.87Hz，2H)，4.09(m，2H)，4.30(s，1H)，4.38(t，J＝7.58Hz，1H)，5.11dd，J＝10.27，1.47Hz，1H)，5.28(dd，J＝17.12，1.47Hz，1H)，5.70(m，1H)，7.00(dd，J＝5.87，2.20Hz，1H)，7.24(d，J＝2.20Hz，1H)，8.14(d，J＝5.87Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.670min)，MS m/z 684(MH+)。
實(shí)施例349化合物349的制備 化合物349
按照實(shí)施例347的方案制備化合物349，不同之處在于在步驟1中使用實(shí)施例348的中間體8代替實(shí)施例346的中間體6。
步驟1 向中間體8(20mg，0.0423mmol)的DMF(1mL)溶液中加入3-噻吩硼酸(7.0mg，0.055mmol)、四(三苯基膦)合鈀(2.4mg，0.00212mmol)和2M碳酸鈉溶液(0.063mL，0.127mmol)。將反應(yīng)混合物在110℃下加熱30h。隨后過(guò)濾并用甲醇洗滌。將濾液濃縮并經(jīng)制備型HPLC純化，得到褐色油狀產(chǎn)物(10.5mg，收率42％)(50177-165)。
LC-MS(保留時(shí)間1.690min)，MS m/z 476(MH-)。
步驟2 化合物349向1-(2-甲氧羰基氨基-3，3-二甲基-丁?；?-4-(2-噻吩-3-基-吡啶-4-氧基甲基)-吡咯烷-2-甲酸(10mg，0.017mmol)的乙腈(5mL)溶液中加入(1R，2S)(1-環(huán)丙烷磺?；?氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)-丙基)-氨基甲酸鹽酸鹽(6.8mg，0.0254mmol)、DIEA(0.015mL，0.085mmol)和偶合劑HOBt(3.9mg，0.0254mmol)和HBTU(9.6mg，0.0254mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。接著經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到褐色膜狀物，為TFA鹽(化合物349)(2.2mg，收率16％)(50177-172)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.00-1.07(m，11H)，1.20(m，2H)，1.37(dd，J＝9.04，5.38Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.07Hz，5.38Hz，1H)，2.10-2.25(m，3H)，2.90(m，1H)，3.04(m，1H)，3.47(s，3H)，3.93-4.02(m，2H)，4.29(s，1H)，4.35-4.45(m，3H)，5.12(d，J＝10.51Hz，1H)，5.28(d，J＝17.61Hz，1H)，5.69(m，1H)，7.40(dd，J＝6.84，2.44Hz，1H)，7.71-7.80(m，3H)，8.38(m，1H)，8.51(d，J＝7.09Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.443min)，MS m/z 688(MH+)。
實(shí)施例350化合物350的制備 化合物350步驟1向?qū)嵤├?48的中間體8(20mg，0.0423mmol)的DMF(2mL)溶液中加入2-噻吩硼酸(7.0mg，0.055mmol)、四(三苯基膦)合鈀(2.4mg，0.00212mmol)和氫氧化鋇(40mg，0.127mmol)。將反應(yīng)混合物在Smith微波反應(yīng)器中在150℃下加熱110min。接著過(guò)濾并用甲醇洗滌。將濾液濃縮并經(jīng)制備型HPLC純化，得到淡黃色油狀產(chǎn)物(5.0mg，收率20％)。
LC-MS(保留時(shí)間2.137min)，MS m/z 476(MH+)。
步驟2向上述羧酸(5.0mg，0.0085mmol)的乙腈(5mL)溶液中加入(1R，2S)(1-環(huán)丙烷磺?；?氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)-丙基)-氨基甲酸鹽酸鹽(3.4mg，0.0127mmol)、DIEA(0.007mL，0.0424mmol)和偶合劑HOBt(1.9mg，0.0127mmol)和HBTU(4.8mg，0.0127mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。接著經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到淡黃色油狀物，為TFA鹽(化合物350)(2.6mg，收率38％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ0.99-1.07(m，11H)，1.19(m，2H)，1.37(dd，J＝9.54，5.63Hz，1H)，1.87(dd，J＝8.07Hz，5.38Hz，1H)，2.10-2.25(m，3H)，2.91(m，1H)，3.03(m，1H)，3.48(s，3H)，3.92-4.02(m，2H)，4.30(s，1H)，4.32-4.45(m，3H)，5.11(dd，J＝10.27，1.22Hz，1H)，5.28(d，J＝17.11Hz，1H)，5.69(m，1H)，7.30-7.38(m，2H)，7.66(d，J＝2.45Hz，1H)，7.92(m，1H)，7.95(m，1H)，8.48(d，J＝6.85Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間2.067min)，MS m/z 688(MH+)。
實(shí)施例351化合物351的制備 化合物351按照實(shí)施例350的方案制備化合物351，不同之處在于在步驟1中使用3-呋喃硼酸代替2-噻吩硼酸。
步驟1 向?qū)嵤├?48的中間體8(20mg，0.0423mmol)的DMF(2mL)溶液中加入3-呋喃硼酸(6.2mg，0.055mmol)、四(三苯基膦)合鈀(2.4mg，0.00212mmol)和氫氧化鋇(40mg，0.127mmol)。將反應(yīng)混合物在Smith微波反應(yīng)器中在150℃下加熱30min。接著過(guò)濾并用甲醇洗滌。將濾液濃縮并經(jīng)制備型HPLC純化，得到淡黃色油狀產(chǎn)物(12mg，收率49％)。
LC-MS(保留時(shí)間1.937min)，MS m/z 460(MH+)。
步驟2 化合物351向上述羧酸(5.0mg，0.0209mmol)的乙腈(5mL)溶液中加入(1R，2S)(1-環(huán)丙烷磺?；?氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)-丙基)-氨基甲酸鹽酸鹽(8.4mg，0.0314mmol)、DIEA(0.018mL，0.1046mmol)和偶合劑HOBt(4.8mg，0.0314mmol)和HBTU(11.9mg，0.0314mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。接著經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到淡黃色油狀物，為TFA鹽(化合物351)(4.0mg，收率24％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.00-1.08(m，11H)，1.21(m，2H)，1.37(dd，J＝8.80，5.62Hz，1H)，1.87(dd，J＝8.32Hz，5.38Hz，1H)，2.11-2.24(m，3H)，2.91(m，1H)，3.03(m，1H)，3.49(s，3H)，3.91-4.03(m，2H)，4.29(s，1H)，4.35-4.46(m，3H)，5.12(dd，J＝10.27，1.47Hz，1H)，5.28(d，J＝17.12Hz，1H)，5.69(m，1H)，7.11(m，1H)，7.38(dd，J＝7.10，2.69Hz，1H)，7.71(d，J＝2.69Hz，1H)，7.81(m，1H)，8.48(s，1H)，8.50(d，J＝7.09Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.410min)，MS m/z 672(MH+)。
實(shí)施例352化合物352的制備 化合物352按照實(shí)施例348方案2和方案3的方法制備化合物352，不同之處在于使用2，6-二溴吡啶代替在方案2的步驟1中的2-溴-4-氯-吡啶。
步驟1(方案2，步驟1) 向?qū)嵤├?48的中間體7(270mg，1.1mmol)的DMSO(10mL)溶液中加入叔丁醇鉀(309mg，2.75mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1h。接著加入2，6-二溴吡啶(313mg，1.32mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。接著將所得混合物用水猝滅并用乙酸乙酯洗滌。分離出水層并用1N鹽酸溶液酸化至pH＝3。用乙酸乙酯萃取兩次，合并各有機(jī)層并干燥(硫酸鎂)。蒸發(fā)溶劑，得到橙色油狀物。接著在-78℃下將其溶于甲醇中并通入HCl(氣體)鼓泡2分鐘，隨后將反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌過(guò)夜。蒸發(fā)溶劑，得到橙色油狀物，為粗產(chǎn)物，該產(chǎn)物直接使用。
LC-MS(保留時(shí)間1.480min)，MS m/z 315(MH+)。
步驟2(方案2，步驟2) 向粗4-(6-溴-吡啶-2-氧基甲基)-吡咯烷-2-甲酸甲酯的乙腈(20mL)溶液中加入2-甲氧羰基氨基-3，3-二甲基-丁酸(312mg，1.65mmol)、DIEA(1.15mL，6.6mmol)和偶合劑HOBt(252mg，1.65mmol)和HBTU(626mg，1.65mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。接著經(jīng)快速柱層析純化(硅膠，1∶1己烷∶乙酸乙酯)，得到無(wú)色油狀產(chǎn)物(340mg，兩步總收率63％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.03(s，9H)，2.10-2.24(m，2H)，2.84(m，1H)，3.55(s，3H)，3.70(s，3H)，3.83(m，1H)，3.94(m，1H)，4.20-4.29(m，2H)，4.31(s，1H)，4.59(dd，J＝8.80，5.13Hz，1H)，6.76(d，J＝8.07Hz，1H)7.11(d，J＝7.58Hz，1H)，7.53(t，J＝7.83Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.820min)，MS m/z 486(MH+)。
步驟3(方案2，步驟3) 中間體9向4-(6-溴-吡啶-2-氧基甲基)-1-(2-甲氧羰基氨基-3，3-二甲基-丁?；?-吡咯烷-2-甲酸甲酯(330mg，0.679mmol)在THF(28mL)、甲醇(15mL)和水(5mL)混合物中的溶液內(nèi)加入一水合氫氧化鋰(427mg，10.18mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2天。接著將其濃縮并用1N HCl溶液酸化至pH＝3-5。收集白色固體產(chǎn)物(中間體9)(310mg，收率97％)。
1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.06(s，9H)，2.18-2.25(m，2H)，2.88(m，1H)，3.57(s，3H)，3.84(m，1H)，3.96(m，1H)，4.25(m，1H)，4.28-4.35(m，2H)，4.58(m，1H)，6.79(d，J＝7.94Hz，1H)，7.13(d，J＝7.32Hz，1H)，7.55(m，1H).
LC-MS(保留時(shí)間3.030min)，MS m/z 472(MH+)。
步驟4(方案3) 化合物352向中間體9(10mg，0.0212mmol)的乙腈(5mL)溶液中加入(1R，2S)(1-環(huán)丙烷磺?；?氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)-丙基)-氨基甲酸鹽酸鹽(8.5mg，0.00318mmol)、DIEA(0.018mL，0.106mmol)和偶合劑HOBt(4.9mg，0.0318mmol)和HBTU(12.1mg，0.0318mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。接著經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到淡黃色膜狀物，為TFA鹽(化合物352)(10.2mg，收率60％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.00-1.06(m，11H)，1.20(m，2H)，1.37(dd，J＝9.54Hz，5.63Hz，1H)，1.86(dd，J＝8.07Hz，5.38Hz，1H)，2.05(m，1H)，2.12-2.25(m，2H)，2.86-2.94(m，2H)，3.54(s，3H)，3.87(m，1H)，3.94(m，1H)，4.18-4.27(m，2H)，4.33(s，1H)，4.37(m，1H)，5.11(dd，J＝10.27，1.72Hz，1H)，5.28(dd，J＝17.12，1.47Hz，1H)，5.70(m，1H)，6.76(d，J＝8.32Hz，1H)，7.11(d，J＝7.33Hz，1H)，7.53(t，J＝7.82Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.837min)，MS m/z 684(MH+)。
實(shí)施例353化合物353的制備 化合物353按照實(shí)施例347的方案制備化合物353，不同之處在于在步驟1中使用實(shí)施例352的中間體9代替實(shí)施例346的中間體6。
步驟1 向中間體9(25mg，0.053mmol)的DMF(1mL)溶液中加入3-噻吩硼酸(8.8mg，0.0688mmol)、四(三苯基膦)合鈀(3.1mg，0.00265mmol)和2M碳酸鈉溶液(0.080mL，0.159mmol)。將反應(yīng)混合物在110℃下加熱過(guò)夜。隨后過(guò)濾并用甲醇洗滌。將濾液濃縮并經(jīng)制備型HPLC純化，得到褐色油狀產(chǎn)物(15mg，收率48％)。
1H NMR(CD3OD，500MHz)δ1.06(s，9H)，2.20-2.31(m，2H)，2.94(m，1H)，3.55(s，3H)，3.91(m，1H)，3.98(m，1H)，4.34(s，1H)，4.37-4.46(m，2H)，4.61(dd，J＝8.85，5.19Hz，1H)，6.77(d，J＝8.24Hz，1H)，7.39(d，J＝7.32Hz，1H)，7.48(dd，J＝5.19，3.05Hz，1H)，7.68(dd，J＝4.88，1.22Hz，1H)，7.77(t，J＝7.93Hz，1H)，8.04(m，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.857min)，MS m/z 476(MH+)。
步驟2 化合物353向1-(2-甲氧羰基氨基-3，3-二甲基-丁?；?-4-(6-噻吩-3-基-吡啶-2-氧基甲基)-吡咯烷-2-甲酸(15mg，0.0254mmol)的乙腈(5mL)溶液中加入(1R，2S)(1-環(huán)丙烷磺?；?氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)-丙基)-氨基甲酸鹽酸鹽(10.2mg，0.0382mmol)、DIEA(0.022mL，0.127mmol)和偶合劑HOBt(5.8mg，0.0382mmol)和HBTU(14.5mg，0.0382mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。接著經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到淡黃色膜狀物，為TFA鹽(化合物353)(6mg，收率29％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.00-1.06(m，11H)，1.20(m，2H)，1.36(dd，J＝9.29，5.38Hz，1H)，1.86(dd，J＝8.07Hz，5.38Hz，1H)，2.07(m，1H)，2.16-2.25(m，2H)，2.87-2.99(m，2H)，3.54(s，3H)，3.87-3.99(m，2H)，4.31-4.44(m，4H)，5.11(dd，J＝10.27，1.46Hz，1H)，5.28(d，J＝17.12Hz，1H)，5.70(m，1H)，6.67(d，J＝8.31Hz，1H)，7.33(d，J＝7.34Hz，1H)，7.44(dd，J＝4.89，2.93Hz，1H)，7.63-7.70(m，2H)，7.99(m，1H).
LC-MS(保留時(shí)間2.770min)，MS m/z 688(MH+)。
實(shí)施例354化合物354的制備 化合物354按照實(shí)施例347的方案制備化合物354，不同之處在于在步驟1中使用實(shí)施例352的中間體9代替實(shí)施例346的中間體6和使用苯基硼酸代替3-噻吩硼酸。
步驟1 向中間體9(20mg，0.0423mmol)的DMF(1mL)溶液中加入苯基硼酸(6.7mg，0.0688mmol)、四(三苯基膦)合鈀(2.4mg，0.00212mmol)和碳酸銫(41mg，0.127mmol)。將反應(yīng)混合物在110℃下加熱過(guò)夜。隨后過(guò)濾并用甲醇洗滌。將濾液濃縮并經(jīng)制備型HPLC純化，得到淡黃色油狀產(chǎn)物(12mg，收率49％)。
LC-MS(保留時(shí)間2.733min)，MS m/z 470(MH+)。
步驟2 化合物354向1-(2-甲氧羰基氨基-3，3-二甲基-丁酰基)-4-(6-苯基-吡啶-2-氧基甲基)-吡咯烷-2-甲酸(12mg，0.0206mmol)的乙腈(5mL)溶液中加入(1R，2S)(1-環(huán)丙烷磺?；?氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)-丙基)-氨基甲酸鹽酸鹽(8.2mg，0.0308mmol)、DIEA(0.018mL，0.1028mmol)和偶合劑HOBt(4.7mg，0.0308mmol)和HBTU(11.7mg，0.0308mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。接著經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到白色固體物，TFA鹽(化合物354)(1.5mg，收率9％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.00-1.07(m，11H)，1.20(m，2H)，1.36(m，1H)，1.85(m，1H)，2.09(m，1H)，2.17-2.25(m，2H)，2.87-3.00(m，2H)，3.52(s，3H)，3.84-4.00(m，2H)，4.33-4.44(m，4H)，5.11(dd，J＝10.27，1.71Hz，1H)，5.28(d，J＝17.12，1.22Hz，1H)，5.70(m，1H)，6.71(d，J＝8.31Hz，1H)，6.78(m，1H)，7.34-7.44(m，3H)，7.74(m，1H)，7.95(m，1H)，8.01(d，J＝8.31Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間3.553min)，MS m/z 682(MH+)。
實(shí)施例355化合物355的制備 化合物355按照實(shí)施例347的方案制備化合物354，不同之處在于在步驟1中使用實(shí)施例352的中間體9代替實(shí)施例346的中間體6和使用3-呋喃硼酸代替3-噻吩硼酸。
步驟1 向中間體9(20mg，0.0423mmol)的DMF(1mL)溶液中加入3-呋喃硼酸(6.2mg，0.055mmol)、四(三苯基膦)合鈀(2.4mg，0.002115mmol)和2M碳酸鈉溶液(0.064mL，0.127mmol)。將反應(yīng)混合物在110℃下加熱2天。接著過(guò)濾并用甲醇洗滌。將濾液濃縮并經(jīng)制備型HPLC純化，得到淡黃色油狀產(chǎn)物(7.0mg，收率29％)。
步驟2 化合物355向上述羧酸(6.0mg，0.0109mmol)的乙腈(5mL)溶液中加入(1R，2S)(1-環(huán)丙烷磺?；?氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)-丙基)-氨基甲酸鹽酸鹽(4.4mg，0.0163mmol)、DIEA(0.0095mL，0.0544mmol)和偶合劑HOBt(2.5mg，0.0163mmol)和HBTU(6.2mg，0.0163mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。接著經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到淡黃色膜狀物，為TFA鹽(化合物355)(1.5mg，收率18％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ0.98-1.07(m，11H)，1.20(m，2H)，1.35(dd，J＝9.54，5.87Hz，1H)，1.86(dd，J＝8.07Hz，5.62Hz，1H)，2.06(m，1H)，2.15-2.25(m，2H)，2.85-2.98(m，2H)，3.55(s，3H)，3.89(m，1H)，3.95(m，1H)，4.28-4.42(m，4H)，5.11(dd，J＝10.27，1.71Hz，1H)，5.28(dd，J＝17.12，1.22Hz，1H)，5.69(m，1H)，6.63(d，J＝8.07Hz，1H)，6.90(m，1H)，7.16(d，J＝7.33Hz，1H)，7.53(m，1H)，7.63(m，1H)，8.08(s，1H).
LC-MS(保留時(shí)間3.340min)，MS m/z 672(MH+)。
實(shí)施例356化合物356的制備 化合物356按照實(shí)施例350的方案制備化合物356，不同之處在于在步驟1中使用實(shí)施例352的中間體9代替實(shí)施例348的中間體8。
步驟1 向中間體9(20mg，0.0423mmol)的DMF(2mL)溶液中加入2-噻吩硼酸(7.0mg，0.055mmol)、四(三苯基膦)合鈀(2.4mg，0.00212mmol)和氫氧化鋇(40mg，0.127mmol)。將反應(yīng)混合物在Smith微波反應(yīng)器中在150℃下加熱30min。接著過(guò)濾并用甲醇洗滌。將濾液濃縮并經(jīng)制備型HPLC純化，得到褐色油狀產(chǎn)物(13.0mg，收率52％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.03(s，9H)，2.18-2.25(m，2H)，2.93(m，1H)，3.55(s，3H)，3.83(m，1H)，3.98(m，1H)，4.34(s，1H)，4.38(m，2H)，4.58(dd，J＝8.05，5.14Hz，1H)，6.63(d，J＝8.07Hz，1H)，7.07(dd，J＝4.89，3.67Hz，1H)，7.33(d，J＝7.34Hz，1H)，7.42(d，J＝5.14Hz，1H)，7.60-7.66(m，2H).
LC-MS(保留時(shí)間3.393min)，MS m/z 476(MH+)。
步驟2 化合物356向1-(2-甲氧羰基氨基-3，3-二甲基-丁酰基)-4-(6-噻吩-2-基-吡啶-2-氧基甲基)-吡咯烷-2-甲酸(11.5mg，0.0195mmol)的乙腈(5mL)溶液中加入(1R，2S)(1-環(huán)丙烷磺?；?氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)-丙基)-氨基甲酸鹽酸鹽(7.8mg，0.0293mmol)、DIEA(0.017mL，0.0975mmol)和偶合劑HOBt(4.5mg，0.0293mmol)和HBTU(11.1mg，0.0293mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。接著經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到灰白色固體，為TFA鹽(化合物356)(8.5mg，收率54％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ0.99-1.06(m，11H)，1.21(m，2H)，1.36(dd，J＝9.54，5.38Hz，1H)，1.86(dd，J＝8.07Hz，5.62Hz，1H)，2.06(m，1H)，2.15-2.25(m，2H)，2.87-2.99(m，2H)，3.54(s，3H)，3.89(m，1H)，3.96(m，1H)，4.30-4.44(m，4H)，5.11(dd，J＝10.51，1.71Hz，1H)，5.28(dd，J＝17.11，1.22Hz，1H)，5.70(m，1H)，6.62(d，J＝8.07Hz，1H)，7.07(dd，J＝4.89，3.66Hz，1H)，7.33(d，J＝7.59Hz，1H)，7.42(d，J＝4.89Hz，1H)，7.60-7.66(m，2H).
LC-MS(保留時(shí)間1.967min)，MS m/z 688(MH+)。
實(shí)施例357化合物357的制備
步驟1 向(2S，4R)Fmoc-4-氨基-1-boc-吡咯烷-2-甲酸(400mg，0.884mmol)的乙腈(15mL)溶液中加入五滴吡咯烷。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3hr。隨后將其濃縮并置于高真空中，得到粗4-氨基-1-boc-吡咯烷-2-甲酸。在室溫、氮?dú)鈿夥罩校瑢⒘硪粋€(gè)圓底燒瓶中的Pd2dba3(40mg，5％mol)和外消旋BINAP(56mg，10％mol)在脫氣甲苯(8mL)中的溶液攪拌1h。接著加入1-氯異喹啉(216mg，1.326mmol)和叔丁醇鈉(340mg，3.536mmol)并將反應(yīng)混合物攪拌30min。接著加入4-氨基-1-boc-吡咯烷-2-甲酸并將反應(yīng)混合物加熱回流1h。加入水猝滅反應(yīng)物，分離出水層，經(jīng)濾紙過(guò)濾。接著濃縮并經(jīng)制備型HPLC純化，得到偶合產(chǎn)物，為TFA鹽(165mg，收率40％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.44(m，9H)，2.51-2.74(m，2H)，3.64(m，1H)，4.01(m，1H)，4.49(m，1H)，4.64(m，1H)，7.30(d，J＝6.85Hz，1H)，7.58(d，J＝6.85Hz，1H)，7.79(m，1H)，7.91-7.99(m，2H)，8.56(d，J＝8.56Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.707min)，MS m/z 358(MH+)。
步驟2
向4-(異喹啉-1-基氨基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯(115mg，0.244mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入(1R，2S)(1-環(huán)丙烷磺?；?氨基羰基-2-乙烯基-環(huán)-丙基)-氨基甲酸鹽酸鹽(97mg，0.366mmol)、DIEA(0.255mL，1.464mmol)和偶合劑HOBt(56mg，0.366mmol)和HBTU(139mg，0.366mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮，得到黃色油狀物。所述油狀物經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到淡黃色固體，為TFA鹽(112mg，收率67％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.05(m，2H，1.20(m，2H，1.40-1.48(m，10H)，1.87(dd，J＝8.19，5.50Hz，1H)，2.23(m，1H)，2.39(m，1H)，2.50(m，1H)，2.93(m，1H)，3.65(m，1H)，4.08(m，1H)，4.33(t，J＝7.09Hz，1H)，4.69(m，1H)，5.12(d，J＝10.27Hz，1H)，5.29(d，J＝17.12Hz，1H)，5.74(m，1H)，7.31(d，J＝6.85Hz，1H)，7.60(d，J＝7.09Hz，1H)，7.80(m，1H)，7.93-8.00(m，2H)，8.56(d，J＝8.19Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間2.023min)，MS m/z 570(MH+)。
步驟3 化合物357將2-(1-環(huán)丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基環(huán)丙基-氨基甲?；?-4-(異喹啉-1-基氨基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(31mg，0.0453mmol)溶于4NHCl的二_烷(1.5mL)溶液中并在室溫下攪拌2h。蒸發(fā)溶劑，得到淡黃色油狀物，為雙鹽酸鹽。向該雙鹽酸鹽的乙腈溶液(5mL)中加入N-boc-L-t-亮氨酸(11.5mg，0.0498mmol)、DIEA(0.047mL，0.272mmol)和偶合劑HOBt(10.4mg，0.068mmol)和HBTU(25.8mg，0.068mmol)。將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。隨后將其濃縮，用水洗滌并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮，得到淡黃色油狀物。將其經(jīng)制備型HPLC柱純化，得到類白色固體終產(chǎn)物(化合物357)(9mg，收率29％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ0.98(m，2H)，1.05(s，9H)，1.20(m，2H)，1.36-1.43(m，10H)，1.84(m，1H)，2.10-2.30(m，2H)，2.52(m，1H)，2.90(m，1H)，4.07(m，1H)，4.17-4.27(m，2H)，4.47(m，1H)，4.79(m，1H)，5.07(d，J＝9.29Hz，1H)，5.24(d，J＝16.87Hz，1H)，5.72(m，1H)，6.62(m，1H)，6.98(d，J＝6.11Hz，1H)，7.47(m，1H)，7.62(m，1H)，7.69(d，J＝8.07Hz，1H)，7.84(d，J＝5.87Hz，1H)，8.20(d，J＝8.56Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間2.043min)，MS m/z 683(MH+)。
部分H用于部分H的LC-MS條件柱(方法A)-YMC ODS S7 C18 3.0×50mm(方法B)-YMC ODS-A S7 C18 3.0×50mm(方法C)-YMC S7 C18 3.0×50mm(方法D)-YMC Xterra ODS S7 3.0×50mm(方法E)-YMC Xterra ODS S7 3.0×50mm(方法F)-YMC ODS-A S7 C18 3.0×50mm(方法H)-Xterra S7 3.0×50mm(方法I)-Xterra S7 C18 3.0×50mm(方法G)-YMC C18 S5 4.6×50mm(方法J)-Xterra ODS S7 3.0×50mm(方法K)-YMC ODS-A S7 C18 3.0×50mm梯度100％溶劑A/0％溶劑B至0％溶劑A/100％溶劑B梯度時(shí)間2min.(A，B，D，F(xiàn)，G，H，I)；8min.(C，E)；4min(J)；3min(K)
保留時(shí)間1min.(A，B，D，F(xiàn)，G，H，I，J，K)；2min.(C，E)流速5mL/min(A，B，C，D，E，F(xiàn)，G)流速4mL/min(J，K)檢測(cè)器波長(zhǎng)220nm溶劑A10％甲醇/90％H2O/0.1％TFA溶劑B10％H2O/90％甲醇/0.1％TFA。
實(shí)施例370化合物370的制備 化合物370方案1 步驟1將(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酸乙酯鹽酸鹽(2.54g，12mmol)的乙腈(70mL)溶液用二異丙基乙胺(9.5mL，67mmol)、[(4R)-(2-甲氧羰基-7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸](5.9g，13.2mmol)和TBTU(3.89g，12.21mmol)在乙腈(50mL)中的溶液處理。將反應(yīng)混合物攪拌14h并濃縮。將溶于乙酸乙酯中的剩余物用碳酸氫鈉水溶液和鹽水反復(fù)洗滌，干燥(硫酸鎂)并濃縮。將剩余物經(jīng)Biotage 65M柱純化(EtOAc/己烷45-100％)，得到高Rf立體異構(gòu)體(Boc-P2[(4R)-(2-甲氧羰基-7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)甲酸乙酯2.0g(52％)，為白色固體物1H NMR(甲醇-d4)δppm 1.24(t，J＝7.02Hz，3H)，1.38(m，11H)，1.76(m，1H)，2.21(m，1H)，2.45(m，1H)，2.71(m，1H)，3.92(m，2H)，3.96(s，3H)，4.03(s，3H)，4.16(q，J＝7.22Hz，2H)，4.42(m，1H)，5.10(m，1H)，5.30(m，1H)，5.44(s，1H)，5.77(m，1H)，7.27(d，J＝9.16Hz，1H)，7.48(s，1H)，7.52(s，1H)，8.05(s，1H).
方案2 步驟20℃下，將實(shí)施例370的步驟1的高Rf產(chǎn)物{Boc-P2[(4R)-(2-甲氧羰基-7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)甲酸乙酯}(3.16g，5.40mmol)溶于甲醇/THF(1/1，13.2mL)中，用1.0N NaOH水溶液(5.5mL，5.5mmol)處理，攪拌1h，加入AcOH中和。真空除去溶劑。再次將剩余物溶于THF/二氯甲烷(1/1，150mL)中，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮得到產(chǎn)物，該產(chǎn)物直接用于下一步驟LC-MS(保留時(shí)間1.53方法D)，MS m/z 570(M++1)。
步驟30℃下，向?qū)嵤├?70的步驟2的產(chǎn)物(估計(jì)5.4mmol)的THF(35mL)溶液中加入新鮮制備的CH2N2(30mmol)的乙醚(80mL)溶液。將反應(yīng)混合物在該溫度下攪拌0.5h，接著在室溫下攪拌18.5h。向反應(yīng)混合物中通入氮?dú)夤呐?小時(shí)后，真空除去溶劑。將剩余物再次溶于EtOAc(1L)中，用飽和碳酸氫鈉水溶液(2×200mL)和鹽水(100mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)。真空除去溶劑，得到產(chǎn)物3.10g(兩步總收率97％)LC-MS(保留時(shí)間3.06，方法J)，MS m/z 594(M++1)。
步驟40℃下，向?qū)嵤├?70的步驟3的產(chǎn)物{Boc-P2[(4R)-(2-重氮乙酰基-7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)甲酸乙酯}(3.03g，5.10mmol)的THF(110mL)溶液中加入2ml 48％HBr。將混合物攪拌1h，在EtOAc(500mL)和飽和碳酸氫鈉水溶液(100mL)間分配。分離出乙酸乙酯層，干燥(硫酸鎂)。除去溶劑，得到產(chǎn)物(3.12g，95％)LC-MS(保留時(shí)間1.56方法D)。MS m/z 648(M++1)，MS m/z646(M-1)。
步驟5將實(shí)施例370的步驟4的產(chǎn)物{Boc-P2[(4R)-(2-溴乙?；?7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)甲酸乙酯}(1.0g，1.54mmol)用異丙基硫脲(0.365g，3.09mmol)的異丙醇(57mL)溶液處理2h，隨后除去溶劑。將剩余物溶于1.0N鹽酸(30mL)和EtOAC(200mL)中，加入1.0N氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH至7。水層用EtOAc萃取(2×100mL)，將合并的萃取液干燥(硫酸鎂)，濃縮。剩余物經(jīng)Biotage 40+M柱純化(EtOAc-己烷30-100％)，得到產(chǎn)物870mg(84％)，直接用于下一步驟。
步驟6將實(shí)施例370的步驟5的產(chǎn)物{Boc-P2{(4R)-[2-(2-異丙氨基噻唑-4-基)-7-甲氧基喹啉-4-氧代]-S-脯氨酸}-P1(1R，2S乙烯基Acca)甲酸乙酯}(0.250g，0.375mmol)用4N HCl/二_烷(2.5mL，10mmol)處理2.5h并真空濃縮。向剩余物中加入N-甲基嗎啉(0.206mL，1.875mmol)DMF(3mL)溶液、N-Boc-L-叔-亮氨酸(0.117g，0.506mmol)和HATU(0.192g，0.506mmol)。將混合物攪拌過(guò)夜并在乙酸乙酯和pH4.0的緩沖液間分配。乙酸乙酯層用水和碳酸氫鈉水溶液洗滌，干燥(硫酸鎂)，濃縮。將剩余物經(jīng)Biotage 40M柱純化(甲醇-二氯甲烷0-8％)，得到產(chǎn)物0.289g(99％)LC-MS(保留時(shí)間2.53，方法K)，MS m/z 779(M++1)。
步驟7向?qū)嵤├?70的步驟6的產(chǎn)物{BOCNH-P3(L-t-BuGly)-{[2-(2-異丙氨基噻唑-4-基)-7-甲氧基喹啉-4-氧代]-S-脯氨酸}-P1(1R，2S乙烯基Acca)-甲酸乙酯}(274mg，0.352mmol)在THF(10.6mL)、甲醇(2.6mL)和H2O(5.3mL)中的懸浮液內(nèi)加入LiOH(0.068g，2.86mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌24，調(diào)節(jié)至pH 6，真空除去有機(jī)溶劑。將含水剩余物酸化至pH 4，并用二氯甲烷重復(fù)萃取。將合并的有機(jī)溶劑干燥(硫酸鎂)并真空濃縮，得到所需的產(chǎn)物255mg(95％)LC-MS(保留時(shí)間2.58，方法K)，MS m/z 751(M++1)。
方案3 步驟8將CDI(0.024g，0.15mmol)和實(shí)施例370的步驟7的產(chǎn)物{BOCNH-P3(L-t-BuGly)-{[2-(2-異丙氨基噻唑-4-基)-7-甲氧基喹啉-4-氧代]-S-脯氨酸}-P1(1R，2S乙烯基Acca)-甲酸}(0.0683g，0.09mmol)的THF(2mL)溶液回流60min，隨后冷卻至室溫。依次加入環(huán)丙烷磺酰胺(0.022g.0.18mmol)和純DBU(0.027mL，0.18mmol)。將反應(yīng)物攪拌過(guò)夜，進(jìn)行如下后處理用乙酸乙酯稀釋、用pH 4.0緩沖液洗滌，干燥(硫酸鎂)并濃縮。將剩余物經(jīng)制備型HPLC反復(fù)純化(0-100％溶劑B)，并經(jīng)1000μM的Analtech制備TLC板(20×40cM)純化，得到0.0032g(4％)所需的產(chǎn)物(化合物370)，為淺黃色泡沫體LC-MS(保留時(shí)間1.71，方法I)MS m/z 854(M++1)。
實(shí)施例371化合物371的制備 化合物371
方案1 步驟1向冷卻至0℃下的N-Boc-順-L-4-羥基脯氨酸甲酯(10g，40.7mmol)和7-氯喹啉-4-醇(8.73g，49.0mmol)的THF(200mL)懸浮液中加入三苯基膦(12.82g，48.9mmol)和DIAD(8.80g，42.13mmol)。將混合物緩慢升溫至室溫下過(guò)夜，總共攪拌30h。將混合物溶于EtOAc(800mL)中，依次用1N鹽酸、5％碳酸鉀水溶液(3×100mL)、鹽水(2×100mL)洗滌并干燥(硫酸鎂)及濃縮。將剩余物經(jīng)Biotage 65M(甲醇-二氯甲烷0-10％)純化數(shù)次，累計(jì)得到10.57g(68％)所需的產(chǎn)物，為玻璃狀物1H NMR(CDCl3)δ1.40(s，9H)，2.33-2.42(m，1H)，2.61-2.72(m，1H)，3.75(s，3H)，3.91(m，2H)，4.45-4.59(m，1H)，5.13(m，1H)，6.61-6.64(m，1H)，7.41(dd，J＝9，2Hz，1H)，7.98(d，J＝2Hz，1H)，8.03(d，J＝9Hz，1H)，8.67-8.71(m，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.39，方法D)，MS m/e 407(M++1)。
步驟2向冷卻至0℃的實(shí)施例371、步驟1的產(chǎn)物{BOC-N-P2[(4R)-(7-氯喹啉-4-氧代)脯氨酸甲酯}(10.57g，26.0mmol)溶于甲醇(800mL)中的溶液內(nèi)加入1N NaOH水溶液(44.5mL，44.5mmol)。將混合物升溫至室溫并保持在該溫度下6h后，攪拌過(guò)夜并使用1.0N鹽酸將pH調(diào)節(jié)至pH 7。將溶液濃縮直至只剩下水層，使用6N鹽酸將pH調(diào)節(jié)至4，將混合物反復(fù)用EtOAc分配(3×500mL)。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鎂)并濃縮，得到10.16g(100％)，為白色固體物。
1HNMR(DMSO-d6)δ1.32，1.34(兩種s(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)9H)，2.31-2.40(m，1H)，2.58-2.69(m，1H)，3.65-3.81(m，2H)，4.33-4.40(m，1H)，5.34(m，1H)7.10-7.11(m，1H)，7.57(d，J＝9Hz，1H)，7.98(s，1H)，8.09-8.14(m，1H)，8.75(d，J＝5Hz，1H)，12.88(brs，1H).13C NMR(DMSO-d6)δ27.82，，35.84，51.52，57.75，76.03，79.33，102.95，119.54，123.86，126.34，127.24，134.49，149.32，152.88，153.25，159.08，173.74.
LC-MS(保留時(shí)間1.48，方法D)，MS m/e 393(M++1)。
步驟3向?qū)嵤├?71、步驟2的產(chǎn)物{Boc-4(R)-(7-氯喹啉-4-氧代)脯氨酸}(5.11g，13mmol)、乙烯基Acca的鹽酸鹽(3.48g，18.2mmol)(為1∶1的非對(duì)映異構(gòu)體混合物(1R，2S/1S，2R，其中環(huán)丙基羧乙基與乙烯基部分呈順式關(guān)系)和NMM(7.1mL 65mmol)在DMF(30mL)中的溶液內(nèi)加入HATU(6.92g，18.2mmol)。將混合物攪拌3天。反應(yīng)混合物用EtOAc(180mL)稀釋并用pH 4.0緩沖液(3×100mL)分配。有機(jī)層依次用飽和碳酸氫鈉水溶液(2×50mL)、水(2×50mL)和鹽水(2×50mL)洗滌。將有機(jī)溶液干燥(硫酸鎂)并濃縮。將剩余物經(jīng)Biotage 40M柱(EtOAc-己烷50％-100％)純化，得到2.88g產(chǎn)物，為非對(duì)映異構(gòu)體混合物。使用Biotage 65M柱(甲醇-EtOAc0％-9％)將該混合物部分分離，得到BOC-NH-P2[(4R)-(7-氯喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基acca P1部分)-COOEt，為初始洗脫的高Rf異構(gòu)體(1.20g，17.4％)。
1H NMR(CDCl3/甲醇-d4)δ1.16(t，J＝7Hz，3H)，1.35(s，9H)，1.37-1.43(m，1H)，1.76-1.84(m，1H)，2.06-2.11(m，1H)，2.35-2.45(m，1H)，2.63(m，1H)，3.72-3.93(m，2H)，4.02-4.15(m，1H)，4.33-4.40(m，1H)，5.06(d，J＝9Hz，1H)，5.16(m，1H)，5.24(d，J＝17Hz，1H)，5.63-5.70(m，1H)，6.74(m，1H)，7.39(dd，J＝9，2Hz，1H)，7.74-7.78(m，1H)，7.89(d，J＝2Hz，1H)，7.97(d，J＝9Hz，1H)，8.60(d，J＝5Hz，1H).1H NMR(甲醇-d4，60/40異構(gòu)體)δ1.24(t，J＝7Hz，3H)，1.39，1.43(2s，9H，比率4∶6)，1.71-1.74(m，0.4H)，178-1.81(m，0.6H)，2.18-2.23(m，1H)，2.65-2.69(m，0.4H)，2.71-2.76(m，0.6H)，3.88-3.96(m，2H)，4.11-4.18(m，2H)，4.39-4.45(m，1H)，5.09-5.13(m，1H)，5.28-5.33(m，1H)，5.37(m，1H)，5.73-5.81(m，1H)，7.05(d，J＝5Hz，1H)，7.53(d，J＝8.9Hz，1H)，7.92(s，1H)，8.12(d，J＝8.9Hz，1H)，8.70(d，＝5Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.54，方法A)MS m/z 530(M++1)。剩余物(～1.66g，24％)為各部分的混合物，富含較低Rf異構(gòu)體。
方案2 步驟4將實(shí)施例371、步驟3的產(chǎn)物{BOC-P2[(4R)-(7-氯喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca-CO2Et}(0.65g，1.22mmol)溶于4N HCl/二_烷(4.5ml，18mmol)中并在室溫下攪拌1h。將反應(yīng)混合物濃縮，粗產(chǎn)物直接用于下一步驟中LC-MS(保留時(shí)間0.94，方法A)LC-MSm/z 430(M++1)。
步驟5室溫下，向?qū)嵤├?71、步驟4的產(chǎn)物1{NH2-P2[(4R)-(7-氯喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S-乙烯基Acca)-甲酸乙酯)的雙鹽酸鹽}(0.22mmol)、N-BOC-L-叔-亮氨酸(BOC L-tBuGly)(0.34g，1.47mmol)、DIPEA(1.0ml，5.74mmol)、HOBT·H2O(0.22g，1.47mmol)在二氯甲烷(15mL)中的懸浮液內(nèi)加入HBTU(0.56g，1.47mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜，用二氯甲烷(50mL)稀釋，依次用pH 4.0緩沖液(2×20mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)和鹽水(50mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)并濃縮。將剩余物經(jīng)Biotage 40M柱(EtOAc-己烷15％-60％)純化，得到607mg(77％)產(chǎn)物，為泡沫狀物。
1H NMR(CDCl3-甲醇-d4)δ1.00(s，9H)，1.19(t，J＝7Hz，1H)，1.30(s，9H)，1.38(m，1H)，1.78-1.83(m，1H)，2.01-2.46(m，2H)，2.73-2.82(m1H)，3.96-4.03(m，1H)，4.04(d，J＝10Hz，1H)，4.11(q，J＝Hz，2H)，4.42(d，J＝12Hz，1H)，4.68-4.73(m，1H)，5.09-5.13(m，1H)，5.23-5.31(m，2H)，5.67-5.79(m，1H)，6.78(d，J＝9Hz，1H)，7.38(d，J＝9Hz，1H)，7.70(s，1H)，7.96(s，1H)，8.08(d，J＝9Hz，1H)，8.68(d，J＝5Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.64，方法A)，MS m/z 643(M++1)。
步驟6向?qū)嵤├?71、步驟5的產(chǎn)物{BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-7-氯喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CO2Et}(207mg，0.32mmol)在THF(14mL)、甲醇(2mL)和H2O(8mL)中的懸浮液內(nèi)加入LiOH(62mg，2.60mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌1天，調(diào)節(jié)至中性pH，真空濃縮直至僅剩下水層。加入1.0N鹽酸將所得的含水剩余物酸化至pH 4.0，隨后用固體NaCl飽和。用EtOAc反復(fù)萃取該含水混合物(3×60mL)，將合并的有機(jī)溶劑干燥(硫酸鎂)并真空濃縮，得到107mg(54％)產(chǎn)物{BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(7-氯喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CO2H}，為白色固體物。
1H NMR(CDCl3)δ1.06(s，9H)，1.23(2s，9H)，1.31-1.43(m 1H)，1.63-1.70(m，1H)，1.85-1.89(m，1H)，2.19(m，1H)，2.65-2.78(m，1H)，4.03-4.10(m，1H)，4.18-4.21(m，1H)，4.554.62(m，1H)，5.03-5.12(m，1H)，5.23-5.31(m，1H)，5.51(m，1H)，5.88-5.95(m，1H)，7.12(m，1H)，7.47-7.50(m，1H)，7.96(m，1H)，8.26(d，J＝9Hz，1H)，8.75(d，J＝5Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.46，方法A)，MS m/z 615(M++1)。
步驟7向?qū)嵤├?71、步驟6的三肽酸{BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(7-氯喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CO2H}(0.0453g，0.074mmol)的THF(4mL)溶液中加入CDI(17mg，0.10mmol)，將所得的溶液回流45min，冷卻至室溫，一次性加入環(huán)丙基磺酰胺(0.013g，0.10mmol)，隨后加入純DBU(0.015mL，0.10mmol)。攪拌反應(yīng)物18h，用EtOAc(200mL)稀釋并依次用pH 4.0緩沖液(3×30mL)、水(2×30mL)和鹽水(30mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)并使用一塊20×40cM 1000 Analtech PTLC板(甲醇-二氯甲烷0-2％)純化，得到所需的產(chǎn)物(化合物371)，為泡沫狀物(0.040g，76％)1H NMRδ0.95，1.23(m，4H)，1.03(s，9H)，1.19(s，9H)，1.40-1.43(m，1H)，1.85(dd，J＝8,5Hz，1H)，2.12-2.20(m，1H)，2.43(m，1H)，2.82(m，1H)，4.07-4.19(m，2H)，4.514.57(m，2H)，5.07(d，J＝10Hz，1H)，5.25(d，J＝17Hz，1H)，5.85(m，1H)，5.48(s，1H)，7.09(d，J＝5Hz，1H)，7.45(d，J＝9Hz，1H)，7.92(m，1H)，8.20(d，J＝9Hz，1H)，8.72(d，J＝5Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.52，方法B)，MS m/z 718(M++1)。HRMSm/z(M+H)+，C41H51N5SO9計(jì)算值718.2677，實(shí)測(cè)值718.2674。
實(shí)施例372化合物372的制備 化合物372方案1 步驟1向L-叔-亮氨酸(2g，15.25mmol)溶于乙腈(50mL)中的溶液內(nèi)加入TMSCN(7.06mL，56.41mmol)并攪拌15min。將反應(yīng)混合物在75℃下加熱30min。向反應(yīng)混合物中加入氯甲酸環(huán)戊酯(2.83g，19.06mmol)并將反應(yīng)混合物在80℃下加熱過(guò)夜，真空濃縮。將剩余物用甲醇(40mL)處理，攪拌10min并真空濃縮。調(diào)節(jié)剩余物的pH至8.5，并用乙醚(2×200mL)萃取。水層酸化至pH 3并用二氯甲烷(2×200mL)萃取。將合并的萃取液干燥(硫酸鎂)并真空濃縮。剩余物在盡可能少量的乙醚/己烷中重結(jié)晶，得到產(chǎn)物3.48g(94％)
1H NMR(500MHz，甲醇-d4)δppm 1.00(s，9H)，1.59(m，2H)，1.73(m，4H)，1.84(dd，J＝5.95，3.20Hz，2H)，3.98(s，1H)，5.02(m，1H)。
步驟2向?qū)嵤├?71的步驟4的產(chǎn)物{P2[(4R)-7-氯喹啉4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)甲酸乙酯的鹽酸鹽}(530.1mg，1.04mmol)、實(shí)施例372的步驟1的產(chǎn)物{(L)-2-環(huán)戊氧基羰基氨基-3，3-二甲基-丁酸}(328mg，1.35mmol)、HOBT(146mg，1.08mmol)和二異丙基乙胺(0.755mL，4.32mmol)在二氯甲烷(7mL)中的溶液內(nèi)加入HBTU(512mg，1.35mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜并在二氯甲烷和pH4.0緩沖液間分配。將二氯甲烷層依次用水和飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，干燥(硫酸鎂)并濃縮。將剩余物經(jīng)Biotage 40M柱(EtO)Ac-己烷35-100％)純化，得到產(chǎn)物640mg(92％)1H NMR(甲醇-d4)δppm 1.02(s，9H)，1.26(m，4H)，1.56(m，10H)，2.19(q，J＝8.75Hz，1H)，2.41(m，1H)，2.70(dd，J＝14.19，8.09Hz，1H)，4.01(dd，J＝11.90，3.05Hz，1H)，4.13(m，2H)，4.20(s，1H)，4.53(m，1H)，4.62(m，1H)，5.09(d，J＝10.38Hz，1H)，5.26(d，J＝17.09Hz，1H)，5.47(m，1H)，5.77(m，1H)，7.07(d，J＝5.49Hz，1H)，7.47(m，1H)，7.94(m，1H)，8.20(d，J＝8.85Hz，1H)，8.72(d，J＝5.49Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.71，方法B)，MS m/z 655(M++1)。
步驟3按照實(shí)施例370、方案2的步驟7的方法制備三肽酸，不同之處在于使用環(huán)戊氧基羰基，NH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(7-氯喹啉-4-氧代)，S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-甲酸乙酯代替實(shí)施例370、步驟6的產(chǎn)物。
修改使用實(shí)施例372、步驟2的產(chǎn)物0.636g(0.97mmol)，得到0.424g產(chǎn)物(收率69％)。
產(chǎn)物 數(shù)據(jù)1H NMR(甲醇-d4)δppm 1.02(s，9H)，1.57(m，11H)，2.14(q，J＝9.03Hz，1H)，2.46(m，1H)，2.68(m，1H)，4.02(dd，J＝11.89，3.11Hz，1H)，4.19(m，1H)，4.50(d，J＝26.35Hz，1H)，4.64(t，J＝8.42Hz，1H)，5.04(m，1H)，5.24(d，J＝17.20Hz，1H)，5.44(s，1H)，5.87(m，1H)，7.05(d，J＝5.12Hz，1H)，7.48(m，1H)，7.92(m，1H)，8.18(d，J＝8.78Hz，1H)，8.71(d，J＝5.49Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間2.32，方法A)，MS m/z 627(M++1)。
方案2 步驟4將CDI(0.021g，0.13mmol)和實(shí)施例372、步驟3的產(chǎn)物{BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-7-氯喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CO2H}(0.058g，0.09mmol)在THF(2mL)中的溶液回流40min，冷卻至室溫?？偣布尤?.016g(0.13mmol)環(huán)丙烷磺酰胺，接著加入純DBU溶液(0.019mL，0.13mmol)。將反應(yīng)物攪拌過(guò)夜，隨后用EtOAc(100mL)稀釋并用pH 4.0緩沖液(2×)洗滌，干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)1000μM制備型TLC板(Analtech，20×40cM，依次用50％-0％-2％甲醇/二氯甲烷洗脫)純化三次，得到產(chǎn)物(化合物372)27.3mg(40％)1H NMR(甲醇-d4)δppm 0.94(m，2H)，1.02(s，9H)，1.14(m，1H)，1.49(m，11H)，1.86(m，1H)，2.14(m，1H)，2.49(m，1H)，2.68(dd，J＝13.89，7.48Hz，1H)，2.78(m，1H)，4.08(m，1H)，4.22(s，1H)，4.55(m，2H)，5.05(d，J＝10.07Hz，1H)，5.22(d，J＝17.09Hz，1H)，5.46(m，1H)，5.86(m，1H)，7.07(d，J＝5.19Hz，1H)，7.46(d，J＝8.55Hz，1H)，7.91(s，1H)，8.18(d，J＝8.85Hz，1H)，8.72(d，J＝5.19Hz，1H)。LC-MS(保留時(shí)間1.52方法I)，MS m/z 730(M++1)。
實(shí)施例373化合物373的制備 化合物373
方案1 步驟10℃下將2-氨基-4-甲氧基苯乙酮(4.45g，26.94mmol)溶于二氯甲烷(100mL)中，隨后用環(huán)丙烷甲酰氯(3.1mL，33.68mmol)、二異丙基乙胺(19mL，107.8mmol)和DMAP(0.780g，6.4mmol)處理。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，接著真空濃縮。將剩余物溶于二氯甲烷溶液(500mL)中，依次用1N鹽酸、水和碳酸氫鈉水溶液洗滌，并干燥(硫酸鎂)。真空除去溶劑，將固體剩余物用EtOAc/己烷(1/1)處理，得到產(chǎn)物(5.35g，85％)1H NMR(甲醇-d4)δppm 0.94(m，4H)，1.69(m，J＝3.97Hz，1H)，2.60(s，3H)，3.84(s，3H)，6.69(d，J＝7.93Hz，1H)，7.98(d，J＝8.85Hz，1H)，8.23(s，1H)。
步驟2將實(shí)施例373、步驟1的產(chǎn)物{環(huán)丙烷甲酸(2-乙酰基-5-甲氧基-苯基)-酰胺}(5.35g，22.72mmol)和叔丁醇鉀(5.45g，48.6mmol)的叔丁醇(130g)溶液回流6h。將反應(yīng)混合物冷卻，倒入冰冷卻的緩沖液并調(diào)節(jié)至pH 7，過(guò)濾。收集固體物，在甲醇/乙醚中重結(jié)晶，得到產(chǎn)物(1g，20％)1H NMR(甲醇-d4)δppm 0.96(m，2H)，1.15(m，2H)，1.94(m，1H)，3.87(s，3H)，5.86(m，1H)，6.93(m，2H)，8.04(d，J＝8.85Hz，1H)。
步驟3在30min內(nèi)，向0℃下的N-Boc-L-3-羥基脯氨酸(1.06g，4.32mmol)和三苯基膦(2.27g，8.64mmol)溶于THF(25mL)中的溶液內(nèi)加入實(shí)施例373、步驟2的產(chǎn)物{2-環(huán)丙基-7-甲氧基-喹啉-4-醇}(0.93g，4.32mmol)和DEAD(1.50g，8.64mmol)的THF(25mL)溶液。將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜并濃縮。將剩余物經(jīng)Biotage 40+M柱(EtOAc-己烷20-65％)純化兩次，得到產(chǎn)物1.74g(90％)LC-MS(保留時(shí)間2.56，方法J)，MS m/z 443(M++1)。
步驟4向?qū)嵤├?73、步驟3的產(chǎn)物{Boc-(4R)-(2-環(huán)丙基-7-甲氧基-喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸甲酯}(1.70g，3.86mmol)在THF(91mL)、甲醇(18.2mL)和H2O(27mL)中的懸浮液內(nèi)加入LiOH(0.73g，30mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌16h，調(diào)節(jié)至pH 6，真空除去有機(jī)溶劑。將剩余物酸化至pH 4，并用EtOAc萃取(4×100mL)。將合并的有機(jī)萃取液干燥(硫酸鎂)并真空濃縮，得到漿狀產(chǎn)物1.64g(100％)1H NMR(甲醇-d4)δppm 1.32(m，13H)，2.37(m，2H)，2.71(m，1H)，3.86(m，1H)，3.95(s，3H)，4.14(m，1H)，4.43(m，1H)，5.41(s，1H)，6.65(s，1H)，7.19(m，1H)，7.30(m，1H)，8.02(dd，J＝12.63，9.33Hz，1H)。
步驟5將實(shí)施例373、步驟4的產(chǎn)物{Boc-P2{(4R)-[2-環(huán)丙基-7-甲氧基喹啉-4-氧代]-S-脯氨酸}-P1(1R，2S乙烯基Acca)甲酸乙酯}(1.61g，2.79mmol)溶于HCl/二_烷(15mL；60mmol)中并在室溫下攪拌3h。將反應(yīng)混合物濃縮并與無(wú)水THF共沸蒸餾，得到產(chǎn)物(1.58g，100％)LC-MS(保留時(shí)間2.12，方法K)，MS m/z 566(M++1)。
方案2 步驟6向?qū)嵤├?73的步驟5的產(chǎn)物{P2{(4R)-[2-環(huán)丙基-7-甲氧基喹啉-4-氧代]-S-脯氨酸}-P1(1R，2S乙烯基Acca)甲酸乙酯的雙鹽酸鹽}(1.58g，2.79mmol)、二異丙基乙胺(1.65mL，9.25mmol)、N-Boc-L-叔-亮氨酸(0.775g，3.35mmol)、HOBT·H2O(0.515g，3.36mmol)在二氯甲烷(13mL)中的懸浮液內(nèi)加入HBTU(1.28g，3.36mmol)。將混合物攪拌14h并在乙酸乙酯和pH 4.0緩沖液間分配。將EtOAc層干燥(硫酸鎂)并濃縮。剩余物經(jīng)Biotage 40+M柱(EtOAc-己烷20-100％，接著用甲醇洗脫)純化，并進(jìn)一步經(jīng)20×40cM 1000 Analtech PTLC板(甲醇-二氯甲烷2％)純化，得到產(chǎn)物1.4g(63％)1H NMR(甲醇-d4)δppm 1.04(s，9H)，1.20(m，5H)，1.28(s，9H)，1.39(m，2H)，1.69(m，1H)，2.19(m，2H)，2.36(m，1H)，2.63(dd，J＝13.54，7.68Hz，1H)，3.90(s，3H)，4.08(m，4H)，4.19(d，J＝11.34Hz，1H)，4.47(d，J＝11.71Hz，1H)，4.56(t，J＝8.60Hz，1H)，5.08(m，1H)，5.24(m，1H)，5.39(s，1H)，5.78(m，1H)，6.56(s，1H)，6.96(dd，J＝9.15，2.20Hz，1H)，7.21(d，J＝2.56Hz，1H)，7.97(d，J＝9.15Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間2.34，方法K)，MS m/z 679(M++1)。
步驟7向?qū)嵤├?73、步驟6的產(chǎn)物Boc-NH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(2-環(huán)丙基-7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-甲酸乙酯(1.28g，1.89mmol)在THF(93mL)、甲醇(23mL)和H2O(45mL)中的懸浮液內(nèi)加入LiOH(0.491g，20.4mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌18.5h，調(diào)節(jié)至pH 4，真空除去有機(jī)溶劑。剩余物用EtOAc萃取(5×100mL)。將合并的有機(jī)溶劑干燥(硫酸鎂)并真空濃縮，得到所需的產(chǎn)物1.17g(97％)1H NMR(甲醇-d4)δppm 1.04(s，9H)，1.24(s，9H)，1.27(m，3H)，1.42(m，2H)，1.68(dd，J＝8.05，5.12Hz，1H)，2.17(m，1H)，2.33(m，1H)，2.47(m，1H)，2.66(m，1H)，3.95(s，3H)，4.09(m，2H)，4.51(d，J＝11.71Hz，1H)，4.59(t，J＝8.60Hz，1H)，5.07(m，1H)，5.26(m，1H)，5.52(s，1H)，5.85(m，1H)，6.69(s，1H)，7.10(dd，J＝9.15，2.20Hz，1H)，7.27(d，J＝2.20 Hz，1H)，8.10(d，J＝9.15Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間2.21，方法K)，MS m/z 651(M++1)。
方案3 步驟8將CDI(0.058g，0.344mmol)和實(shí)施例373、步驟7的產(chǎn)物{Boc-NH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(2-環(huán)丙基-7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-COOH}(0.160g，0.246mmol)在THF(2mL)中的溶液回流60min，冷卻至室溫。依次加入環(huán)丙烷磺酰胺(0.041g，0.344mmol)和純DBU(0.051mL，0.344mmol)。攪拌反應(yīng)物24h并進(jìn)行如下后處理將反應(yīng)混合物在pH 4.0緩沖液和EtOAc間分配。將有機(jī)層干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)制備型HPLC(0-100％溶劑B)純化，得到產(chǎn)物(化合物373)0.086g(46％)1H NMR(三氟乙酸-D)δppm 1.04(s，9H)，1.21(m，16H)，1.41(m，1H)，1.87(dd，J＝8.05，5.49Hz，1H)，2.26(m，3H)，2.61(dd，J＝12.99，6.77Hz，1H)，2.93(m，1H)，3.92(s，3H)，4.09(m，1H)，4.21(m，1H)，4.49(m，2H)，5.11(d，J＝11.71Hz，1H)，5.27(d，J＝17.20Hz，1H)，5.46(s，1H)，5.76(m，1H)，6.62(m，2H)，7.01(dd，J＝8.97，2.01Hz，1H)，7.23(d，J＝2.56Hz，1H)，8.00(d，J＝8.78Hz，1H)。
實(shí)施例374化合物374的制備 化合物374
方案1 步驟1向間甲氧基苯胺(58g，471mmol)在800ml乙腈中的溶液內(nèi)加入Meldrum酸(75g，518mmol)和原甲酸三甲酯(60g，565mmol)。將多相混合物回流2h。真空除去溶劑，加入甲醇(30mL)，將所得的沉淀物過(guò)濾并用10-15ml甲醇洗滌。對(duì)濃縮母液重復(fù)加入甲醇/過(guò)濾操作。將所得的合并固體物干燥(～20托，45℃，過(guò)夜)，得到117.6g(90％)中間體5-[(3-甲氧基苯基-氨基)亞甲基]-2，2-二甲基-[1，3]二_烷-4，6-二酮。
步驟2在30分鐘內(nèi)向加熱至250℃的PH2O溶液(500g)中分次加入108.7g(392mmol)5-[(3-甲氧基苯基-氨基)亞甲基]-2，2-二甲基-[1，3]二_烷-4，6-二酮。再將混合物加熱15min，冷卻至室溫，用己烷(800mL)稀釋并將所得的漿狀物攪拌過(guò)夜。傾倒出己烷，將固體剩余物溶于600ml回流的甲醇中，冷卻至室溫，將所得的固體過(guò)濾并用少量二氯甲烷洗滌。進(jìn)行類似的重結(jié)晶操作，總共得到20.73g(30％)7-甲氧基喹啉-4-醇，為淺棕色固體物。1H NMR(甲醇-d4)δ3.87(s，3H)，6.23d，J＝7.3Hz，1H)，6.68(d，J＝2.4Hz，1H)，6.96(dd，J＝9.0，2.4Hz，1H)，8.11(d，J＝9Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間0.77，方法D)，MS m/z 176(M++1)。
步驟3在45分鐘內(nèi)，向冷卻至0℃下的N-Boc-順-L-4-羥基脯氨酸甲酯(12.24g，49.8mmol)和三苯基膦(26.14g，99.7mmol)在THF(200mL)中的溶液內(nèi)加入DEAD(17.36g，99.7mmol)和7-甲氧基喹啉-4-醇(8.73g，49.8mmol)的THF(700mL)溶液。將混合物緩慢升溫至室溫下過(guò)夜，真空濃縮。將剩余物經(jīng)Biotage 65M柱(甲醇-EtOAc0-10％)純化，得到12.78g(64％)產(chǎn)物，為無(wú)色玻璃狀物1H NMR(CDCl3)δ1.36(s，9H)，2.26-2.35(m，1H)，2.57-2.68(m，1H)，3.71(s，3H)，3.75-3.92(m，2H)，3.86、3.87(兩個(gè)s(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3H)，4.41-4.53(m，1H)，5.09(m，1H)，6.52(d，J＝5.5Hz，1H)，7.06-7.09(m，1H)，7.24-7.26(m，1H)，7.94(d，J＝9.1Hz，1H)，8.50-8.56(m，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.34，方法D)，MS m/e 403(M++1)。
步驟4向?qū)嵤├?74、步驟3的產(chǎn)物{BOC-N-P2[(4R)-(7-甲氧基喹啉-4-氧代)脯氨酸甲酯}(8.54g，21.2mmol)在600ml THF/甲醇(5∶1)中的溶液內(nèi)加入LiOH(4.0g，167mmol)的水(150ml)溶液。將混合物攪拌過(guò)夜，使用6N鹽酸將pH調(diào)節(jié)至pH 7，濃縮溶液直至僅剩下水層。使用1N鹽酸調(diào)節(jié)剩余物至pH 4，加入NaCl以飽和混合物，由于產(chǎn)物為水溶性，因此依次用乙酸乙酯和THF反復(fù)分配。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鎂)并濃縮，得到產(chǎn)物8.18g(99％)，為白色固體物。
1H NMR(CDCl3-甲醇-d4)δ1.42(s，9H)，2.40-2.49(m，1H)，2.68-2.77(m，1H)，3.88(m，2H)，3.94(s，3H)，4.41-4.53(m，1H)，5.32(m，1H)，6.86-6.92(m，1H)，7.21(dd，J＝9，2Hz，1H)，7.30(d，J＝2Hz，1H)，8.05-8.10(m，1H)，8.62(d，J＝6Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.20，方法A)，MS m/z 389(M++1)。
步驟5向?qū)嵤├?74、步驟4的產(chǎn)物{Boc-4(R)-(7-甲氧基喹啉-4-氧代)脯氨酸}(4.50g，11.60mmol)、2.66g(13.9mmol)乙烯基Acca的鹽酸鹽(為1∶1非對(duì)映異構(gòu)體的混合物(1R，2S/1S，2R，其中環(huán)丙基羧乙基與乙烯基部分呈順式構(gòu)型)、10mL(57.4mmol)DIPEA和2.13g(13.9mmol)HOBT·H2O在150ml二氯甲烷中的溶液內(nèi)加入5.27g(13.9mmol)HBTU，將所得混合物攪拌過(guò)夜。將溶液用200ml二氯甲烷稀釋并用pH 4.0緩沖液(2×50mL)分配。有機(jī)層依次用飽和碳酸氫鈉水溶液(2×50mL)、水(2×50mL)和鹽水(2×50mL)洗滌。將有機(jī)溶液干燥(硫酸鎂)，濃縮并使用Biotage 65M柱(洗脫液0-9％甲醇/EtOAc)純化，得到初始洗脫的異構(gòu)體BOC-NH-P2[(4R)-(7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基acca P1部分)-COOEt(2.21g，總共36％)，接著為1.13g(19％)純低Rf異構(gòu)體BOC-NH-P2[(4R)-(7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1S，2R乙烯基Acca P1部分)-CO2Et。還得到混合組分。BOCN-P2[(4R)-(7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S)-(乙烯基Acca)-甲酸乙酯的數(shù)據(jù)1H NMR(CDCl3)δ1.16(t，J＝7Hz，3H)，1.35(s，9H)，1.37-1.47(m，1H)，1.74-1.88(m，1H)，2.04-2.13(m，1H)，2.32-2.46(m，1H)，2.58-2.69(m，1H)，3.76(m，1H)，3.87(s，3H)，4.02-4.13(m，2H)，4.30-4.44(m，1H)，5.05-5.19(m，2H)，5.24(d，J＝17 Hz，1H)，5.63-5.71(m，1H)，6.61(m，1H)，7.07(dd，J＝9，2Hz，1H)，7.22(d，J＝2Hz，1H)，7.76-7.83(m，1H)，7.92(d，J＝9Hz，1H)，8.50(d，J＝5Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.38，方法A)，MS m/z 526(M++1)。
方案2 步驟6將實(shí)施例374、步驟5的全部產(chǎn)物{BOC-P2[(4R)-(7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-甲酸乙酯}(1.35g，2.90mmol)溶于4N HCl/二_烷(15ml，60mmol)中并在室溫下攪拌2.5h。將反應(yīng)混合物真空濃縮，得到1.3g(100％)產(chǎn)物，為黃褐色固體，該產(chǎn)物直接用于下一步驟。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.25(t，J-7Hz，1H)，1.47-1.52(m，1H)，1.78(dd，J＝8，5Hz，1H)，2.21-2.32(m，1H)，2.55-2.64(m，1H)，2.99(dd，J＝15，7Hz，1H)，3.96(s，2H)，4.06(s，3H)，4.14(q，J＝7Hz，2H)，4.69-4.75(m，1H)，5.13(d，J＝10Hz，1H)，5.33(d，J＝17Hz，1H)，5.71-5.83(m，1H)，5.89(m，1H)，7.44(m，1H)，7.49-7.52(m，1H)，8.51-8.55(m，1H)，8.94-8.96(m，1H)；13CNMR(甲醇-d4)δ14.62，23.08，30.89，34.73，36.97，41.03，52.42，57.11，60.17，62.70，81.13，100.06，103.07，117.02，118.53.122.70，126.86，134.74，143.15，146.75，166.62，167.71，169.37，171.18.
LC-MS(保留時(shí)間0.94，方法D)，MS m/z 426(M++1)。
步驟7室溫下，向?qū)嵤├?74的步驟6的產(chǎn)物{NH2-P2[(4R)-(7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S-乙烯基Acca)-甲酸乙酯，雙鹽酸鹽}(1.3g，2.61mmol)、N-BOC-L-叔-亮氨酸(BOC L-tBuGly)(0.94g，4.25mmol)、NMM(1.7ml，15.5mmol)在DMF(20mL)中的懸浮液內(nèi)加入HATU(1.55g，3.40mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜，用75％EtOAc-THF(300mL)稀釋，依次用pH 4.0緩沖液(2×50mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)和鹽水(50mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)，經(jīng)Biotage 40M柱(洗脫液15％-100％EtOAc/己烷)純化，得到產(chǎn)物0.702g(42％){BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1-CO2Et，為泡沫狀物。
1HNMR(甲醇-d4)δ1.06(s，9H)，1.22-1.32(m，3H)，1.28(s，9H)，1.42-1.46(m，1H)，1.73(dd，J＝8，5Hz，1H)，2.19-2.25(m，1H)，2.67-2.72(m，1H)，3.95(s，3H)，4.03-4.07(m，1H)，4.10-4.18(m，2H)，4.20-4.24(m，1H)，4.54(d，J＝12Hz，1H)，4.60-4.63(m，1H)，5.11(dd，J＝10，2Hz，1H)，5.28-5.30(m，1H)，5.43(m，1H)，5.76-5.83(m，1H)，6.50(d，J＝9Hz，NH)，6.93(d，J＝5Hz，1H)，7.10(dd，J＝9，2Hz，1H)，7.28(m，1H)，7.99(m，1H)，8.11(d，J＝9Hz，1H)，8.62(d，J＝5H)；LC-MS m/z 639(保留時(shí)間1.53方法D)。
步驟8向?qū)嵤├?74、步驟7的產(chǎn)物{BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-甲酸乙酯}(702mg，1.1mmol)在THF(50mL)、甲醇(7mL)和H2O(22mL)中的懸浮液內(nèi)加入LiOH(211mg，8.80mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌1天，酸化至中性pH，真空濃縮直至僅剩下水層。加入1.0N鹽酸將所得的含水剩余物酸化至pH 4.0，隨后用固體NaCl飽和。將該含水混合物用乙酸乙酯和THF反復(fù)萃取，將合并的有機(jī)溶劑用鹽水(50mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)，過(guò)濾并真空濃縮，得到631mg(92％)產(chǎn)物BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CO2H，為固體物。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.04(s，9H)，1.22(s，9H)，1.34-1.39(m，1H)，1.67(dd，J＝8，5Hz，1H)，2.03-2.13(m，1H)，2.43-2.49(m，1H)，2.67-2.73(m，1H)，3.96(s，3H)，4.00-4.05(m，1H)，4.15-4.21(m，1H)，4.56-4.62(m，2H)，5.02(d，J＝10Hz，1H)，5.20(d，J＝17Hz，1H)，5.52(m，1H)，5.87-5.99(m，1H)，6.47(d，J＝8Hz，1H)，6.91(s，1H)，7.12(d，J＝5Hz，1H)，7.19(dd，J＝9，2Hz，1H)，7.31(d，J＝2Hz，1H)，8.22(d，J＝9Hz，1H)，8.72(d，J＝5Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.44，方法D)，MS m/z 611(M++1)。
步驟9向?qū)嵤├?74、步驟8的三肽酸(0.120g，0.195mmol)的THF(2mL)溶液中加入CDI(44.3mg，0.27mmol)，將所得的溶液回流60min，冷卻至室溫。一次性加入環(huán)丁基磺酰胺(0.037g，0.273mmol)，隨后加入純DBU(0.041mL，0.273mmol)。攪拌反應(yīng)物24h，加入另一當(dāng)量的CDI和環(huán)丁基磺酰胺，再將混合物攪拌48h?；旌衔镉?0％THF/EtOAc(200mL)稀釋，用鹽水飽和的pH 4.0緩沖液(30mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮。將剩余物溶于2ml 50％THF-二氯甲烷中，加入75mg(0.39mmol)EDAC、48mg(0.39mmol)4-DMAP、58□L(0.39mmol)DBU和53mg(0.39mmol)環(huán)丁基磺酰胺，將混合物攪拌4天。使混合物經(jīng)1000 Analtech PTLC板(20×40cM，洗脫液2％甲醇/二氯甲烷)純化一次，得到所需的產(chǎn)物化合物374，BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丁烷，為泡沫狀物2mg(2％)1H NMR(甲醇-d4)δ1.07、1.08(兩個(gè)s(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，9H)，1.20、1.21(兩個(gè)s(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，9H)，1.41-1.48(m，1H)，1.64-1.70(m，1H)，1.72-1.91(m，2H)，1.95-2.11(m，2H)，2.23-2.37(m，2H)，2.40-2.58(m，2H)，2.72-2.75(m，1H)，4.06(s，3H)，4.12-4.17(m，2H)，4.35-4.38(m，1H)，4.58-4.62(m，1H)，4.65-4.70(m，1H)，5.16-5.18(m，1H)，5.24-5.37(m，1H)，5.69-5.76(m，2H)，7.40-7.46(m，3H)，8.35-8.40(m，1H)，8.92(d，J＝7Hz，1H)。
LC-MS(保留時(shí)間1.58方法B)，MS m/z 728(M++1)。
實(shí)施例375化合物375的制備 化合物375方案1 步驟1向?qū)嵤├?74、步驟5的產(chǎn)物{N-BOC-P2[(4R)-(7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CO2Et}(794mg，1.51mmol)在68ml 12％甲醇/THF中的溶液內(nèi)加入218mg(9.08mmol)氫氧化鋰在30ml水中的溶液，并將混合物攪拌16h。加入6N鹽酸將pH調(diào)節(jié)至中性，濃縮直至僅剩下水，使用1N鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH至4，隨后用50％THF-EtOAc(5×200-mL/份)萃取。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鎂)并濃縮，得到產(chǎn)物752mg(100％){N-BOC-P2[(4R)-(7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CO2H}1H NMR(甲醇-d4)δ1.37-1.43(m，1H)，1.39(s，9H)，1.69-1.78(m，1H)，2.16-2.24(m，1H)，2.44-2.54(m，1H)，2.64-2.74(m，1H)，3.89-3.94(m，2H)，3.96(s，3H)，4.40-4.43(m，1H)，5.11(d，J＝10Hz，1H)，5.31(d，J＝17Hz，1H)，5.40(m，1H)，5.79-5.87(m，1H)，6.91(s，1H)，7.04(d，J＝6Hz，1H)，7.25(dd，J＝9.1，2Hz，1H)，7.29(m，1H)，8.09(d，J＝9.1Hz，1H)，8.66(d，J＝6Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.05，方法H)。MS m/z 498(M++1)。
步驟2將實(shí)施例375、步驟1的產(chǎn)物{N-BOC-P2[(4R)-(7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CO2H}(399.5mg，0.668mmol)的THF(4mL)溶液和CDI(434mg，2.68mmol)回流60min，冷卻至室溫。一次性加入環(huán)丙基磺酰胺(406mg，3.35mmol)，隨后加入純DBU(0.50mL，3.35mmol)。攪拌反應(yīng)物16h，用50％THF-EtOAc(200mL)稀釋并用鹽水飽和的pH 4.0緩沖液(2×40mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)Biotage 25M柱(甲醇/二氯甲烷，0％-15％)純化，得到217mg(54％)所需的產(chǎn)物{N-BOC-P2[(4R)-(7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷}1H NMR(甲醇-d4)δ1.01-1.10(m，2H)，1.11-1.18(m，1H)，1.20-1.27(m，1H)，1.39-1.48(m，1H)，1.44(s，9H)，1.87(dd，J＝8，5Hz，1H)，2.01-2.38(m，2H)，2.57(dd，J＝14，7Hz，1H)，2.91-2.96(m，1H)，3.83-3.92(m，2H)，3.94(s，3H)，4.36-4.39(m，1H)，5.11(d，J＝10Hz，1H)，5.29(d，J＝17Hz，1H)，5.38(m，1H)，5.74-5.81(m，1H)，6.91(d，J＝5.5Hz，1H)，7.20(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)，7.29(m，1H)，8.07(d，J＝9.2Hz，1H)，8.60(d，J＝5.5Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.28，方法I)。MS m/z 601(M++1)。
步驟3將全部實(shí)施例375、步驟2的產(chǎn)物{BOC-P2[(4R)-(7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷}(198mg，0.33mmol)溶于4N HCl/二_烷(4ml，16mmol)中并在室溫下攪拌2h。濃縮反應(yīng)混合物，得到粗產(chǎn)物，為黃褐色固體，該產(chǎn)物立即用于下一反應(yīng)步驟中。
步驟4將實(shí)施例375、步驟3的粗產(chǎn)物{HN-P2[(4R)-(7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷，雙鹽酸鹽}懸浮在10mL二氯甲烷中。室溫下，向該混合物中加入N-BOC-L-叔-亮氨酸(BOC L-tBuGly)[120mg，0.52mmol]、HOAT(30mg，0.20mmol)、DIPEA(0.29ml，1.65mmol)和HATU(160mg，0.43mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌16h，用50％EtOAc-THF(300mL)稀釋，用鹽水飽和的pH 4.0緩沖液(3×50mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)，濃縮。剩余物經(jīng)Isco 35g柱(洗脫液0％-15％甲醇/二氯甲烷)純化，得到產(chǎn)物(130.1mg，47％)，為Hunning堿鹽(化合物375)1H NMR(甲醇-d4)δppm 1.00-1.48(m，29H)，1.47(s，9H)，1.89(m，1H)，2.26(m，1H)，2.36(m，1H)，2.69(m，1H)，2.97(m，1H)，3.25(q，J＝7.43Hz，2H)，3.74(m，2H)，3.97(s，3H)，4.10(m，1H)，4.23(dd，J＝19.68，9.92Hz，1H)，4.57(m，2H)，5.15(m，1H)，5.31(m，1H)，5.50(s，1H)，5.77(m，1H)，7.01(t，J＝5.34Hz，1H)，7.16(d，J＝9.16Hz，1H)，7.31(d，J＝1.83Hz，1H)，8.14(m，1H)，8.67(d，J＝5.49Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.49方法d)，MS m/z 714(M++1)。
實(shí)施例376化合物376的制備 化合物376方案1 步驟1將化合物375(130mg)溶于EtOAc中，用pH 4緩沖液和鹽水洗滌數(shù)次，隨后干燥(硫酸鎂)。將粗品混合物經(jīng)1000 PTLC板(Analtech，20×40cm，洗脫液3％甲醇/二氯甲烷)純化兩次，得到產(chǎn)物(化合物376)54mg(收率23％，以三肽酸計(jì)算)1HNMR(甲醇-d4)δ0.88-1.00(m，2H)，1.01-1.14(m，2H)，1.03(s，9H)，1.25(s，9H)，1.34(dd，J＝9，5Hz，1H)，1.81-1.89(m，1H)，2.06-2.13(m，1H)，2.45-2.50(m，1H)，2.65-2.75(m，1H)，3.91(s，3H)，3.98-4.11(m，1H)，4.21-4.22(m，1H)，4.46-4.50(m，1H)，4.54-4.57(m，1H)，4.97-5.02(m，1H)，5.14-5.22(m，1H)，5.33-5.41(m，1H)，5.81-5.99(m，1H)，6.87-6.95(m，1H)，7.06-7.09(m，1H)，7.25(m，1H)，8.07-8.10(m，1H)，8.59(d，J＝5.2Hz，1H).
HRMS m/z(M-H)-C35H46N5O9S的計(jì)算值712.3016，實(shí)測(cè)值712.3024；LC-MS m/e 714(保留時(shí)間1.42，方法I)。
實(shí)施例377化合物377的制備 化合物377方案1 步驟1室溫下，向?qū)嵤├?75、步驟2的全部1.0mmol產(chǎn)物{HN-P2[(4R)-(7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷，雙鹽酸鹽}在20mL二氯甲烷中的懸浮液內(nèi)加入352mg(1.30mmol)2-(S)-叔丁氧基羰基氨基-8-壬烯酸(購(gòu)自RSP AminoAcids)、HOAT(82mg，0.60mmol)、DIPEA(0.74ml，5.0mmol)和HATU(494mg，1.30mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌16h，真空除去大部分的二氯甲烷?；旌衔镉蔑柡偷膒H 4.0緩沖液(150mL)稀釋，并萃取入EtOAc(4×200mL)中。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鎂)，濃縮。將剩余物經(jīng)Biotage 40M柱(洗脫液0％-15％甲醇/二氯甲烷)純化，得到產(chǎn)物(化合物377)574mg(76％)LC-MS m/z 754(保留時(shí)間1.64，方法I)。
實(shí)施例378化合物378的制備 化合物378方案1 步驟1將實(shí)施例375、步驟2的全部0.34mmol產(chǎn)物{HN-P2[(4R)-(7-甲氧基喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷，雙鹽酸鹽}懸浮在3mL二氯甲烷中。室溫下，向該混合物中加入N-BOC-L-纈氨酸(L-Val)(120mg，0.55mmol)、HOAT(30mg，0.20mmol)、DIPEA(0.29ml，1.65mmol)和HATU(160mg，0.43mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌16h，用飽和的pH 4.0緩沖液(150mL)稀釋，并萃取入EtOAc(3×200mL)中。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)并濃縮。將剩余物經(jīng)Isco 35g柱(甲醇/二氯甲烷0％-15％)純化。該物質(zhì)進(jìn)一步經(jīng)兩δPTLC板(Analtech，20×40cm，洗脫液3％甲醇/二氯甲烷)純化，得到產(chǎn)物104.1mg(44％)，化合物378HRMSm/z(M-H)-C34H44N5O9S的計(jì)算值698.2860，實(shí)測(cè)值698.2865。LC-MSm/e 700(保留時(shí)間1.60，方法D)。
實(shí)施例379化合物379的制備 化合物379方案1 步驟1-30℃下，在5min內(nèi)向2-吡啶甲酸(3.73g，30.3mmol)和2-氨基-4-甲氧基二苯甲酮(5.0g，30.3mmol)溶于吡啶(150mL)中的懸浮液內(nèi)加入磷酰氯(3.7mL，45.4mmol)。在該溫度下將反應(yīng)混合物攪拌3hr并在室溫下攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物倒入冷水中并用EtOAc萃取(3×)。將合并的萃取液干燥，得到產(chǎn)物(7.67g，93％)1H NMR(甲醇-d4)δppm 2.65(s，3H)，3.92(s，3H)，6.78(m，1H)，7.60(m，1H)，8.00(m，1H)，8.06(m，1H)，8.21(d，J＝7.63Hz，1H)，8.59(t，J＝2.29Hz，1H)，8.76(d，J＝3.97Hz，1H)。LC-MS(保留時(shí)間1.56，方法D)，MS m/z271(M++1)。
步驟2向N-(2-乙酰基-5-甲氧基-苯基)-吡啶-2-甲酰胺(2.90g，10.7mmol)的THF(50mL)懸浮液中加入t-BuOK/THF(1M，24mL，24mmol)。將反應(yīng)混合物在70℃下加熱3h并攪拌過(guò)夜。真空除去溶劑。向剩余物中加入冷水并用1.0N鹽酸調(diào)節(jié)pH至4.6，過(guò)濾。固體剩余物經(jīng)Biotage 65M柱(甲醇/二氯甲烷0-15％)純化，得到產(chǎn)物(2.26g，84％)LC-MS(保留時(shí)間1.19，方法D)，MS m/z 253(M++1)。
步驟3將7-甲氧基-2-吡啶-2-基-喹啉-4-醇(2.2g，8.71mmol)在磷酰氯(92mL)中的混合物回流3h，隨后真空除去溶劑。向剩余物中加入冰水，用1.0N NaOH調(diào)節(jié)至pH＞10，用EtOAc萃取(2×)。將合并的萃取液用水和鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)，除去溶劑，得到產(chǎn)物，為黃色固體物(89％，2.1g)DMSO-D6)δppm 3.97(s，3H)，7.40(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.53(m，1H)，8.01(m，1H)，8.09(d，J＝9.16Hz，1H)，8.46(s，1H)，8.56(d，J＝7.93Hz，1H)，8.74(d，J＝3.97Hz，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.50，方法D)，MS m/z 271(M++1)。
步驟4向N-Boc-4-羥基脯氨酸(1.6g，6.7mmol)的DMSO(20mL)溶液中加入t-BuOK(1.9g，16.8mmol)。將得到的混合物攪拌1.5h，加入4-氯-7-甲氧基-2-吡啶-2-基-喹啉(2.0g，7.4mmol)和DMSO(10mL)。將反應(yīng)混合物攪拌38h，用冷水稀釋并用EtOAc/乙醚(1/4，2×)萃取。將水層酸化至pH 4并用EtOAc/THF(5×)萃取。將合并的萃取液干燥(硫酸鈉/硫酸鎂)，真空除去溶劑，剩余物經(jīng)制備型HPLC(0-80％溶劑B)純化，得到產(chǎn)物(1.6g，50％)LC-MS(保留時(shí)間1.23，方法I)，MS m/z 466(M++1)。
步驟5將實(shí)施例379、步驟4的產(chǎn)物{N-boc-(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酸乙酯}(0.21g，0.65mmol)在HCl/二_烷(4M，5mL，20mmol)中的溶液攪拌3h，真空除去溶劑。向剩余物中加入二氯甲烷(10mL)、二異丙基乙胺(0.4mL，3.23mmol)、HOBT(0.20g，1.35mmol)、Boc-(4R)-(2-環(huán)丙基-7-甲氧基-喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸(0.20g，0.5mmol)和HATU(0.415g，1.07mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜并用pH 4.0緩沖液稀釋，用EtOAc萃取。將萃取液干燥(硫酸鎂)并經(jīng)Biotage 40M柱(使用甲醇/二氯甲烷(0-15％)為洗脫液)純化，得到產(chǎn)物(204.7mg，70％)1H NMR(甲醇-d4)δppm 0.64(m，1H)，0.96(m，2H)，1.33(m，8H)，1.39(m，9H)，1.90(m，2H)，2.18(m，1H)，2.54(m，1H)，2.81(m，1H)，4.01(m，5H)，4.44(d，J＝28.99Hz，1H)，5.08(m，1H)，5.31(m，1H)，5.57(s，1H)，6.03(m，1H)，6.94(s，1H)，7.27(d，J＝8.24Hz，1H)，7.64(m，1H)，7.92(m，1H)，8.14(m，2H)，8.66(s，1H)，8.74(s，1H).
步驟6將P2 Boc-(4R)-(7-甲氧基-2-吡啶-2-基-喹啉-4-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2(1-環(huán)丙基甲基環(huán)丙烷-1-基)(實(shí)施例379、步驟5)(203mg，0.3mmol)的4M HCl/二_烷(3.5mL，14mmol)漿狀物攪拌2h，真空除去溶劑。向剩余物中加入二氯甲烷(2mL)、二異丙基乙胺(0.63mL，3.6mmol)、Boc-L-叔-亮氨酸(83mg，0.36mmol)、HOAt(41mg，0.3mmol)和HATU(148mg，0.39mmol)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌7h并真空除去溶劑。剩余物經(jīng)制備型HPLC(35-85％溶劑B)純化，得到25.1mg(11％)所需的產(chǎn)物(化合物379)1H NMR(甲醇-d4)δppm-0.05(m，1H)，0.30(m，1H)，0.66(m，1H)，0.91(m，2H)，1.05(s，9H)，1.28(s，9H)，1.67(m，8H)，2.15(m，1H)，2.58(m，1H)，2.77(m，1H)，3.96(s，3H)，4.19(d，J＝40.25Hz，2H)，4.51(d，J＝16.47Hz，2H)，4.95(m，1H)，5.15(m，1H)，5.53(s，1H)，5.89(dd，J＝16.65、9.33Hz，1H)，7.09(d，J＝8.42Hz，1H)，7.43(d，J＝1.83Hz，1H)，7.50(m，1H)，7.82(s，1H)，7.99(m，1H)，8.10(d，J＝9.15Hz，1H)，8.48(d，J＝7.68Hz，1H)，8.72(s，1H).
LC-MS(保留時(shí)間1.59，方法I)，MS m/z 791(M++1)。
實(shí)施例380化合物380的制備 化合物380方案1
步驟1該實(shí)施例方案1的原料通過(guò)偶合部分B、實(shí)施例11、步驟3的產(chǎn)物和P1(1R，2S乙烯基Acca)-甲酸乙酯的氨基末端制備。將所述偶合產(chǎn)物P2 Boc-(4R)-(6-甲氧基-異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-甲酸乙酯(7.88g，14.99mmol)在4M HCl/二_烷(120mL，480mmol)中的漿狀物攪拌2h，真空并在無(wú)水二_烷中共沸蒸餾除去溶劑。向剩余物中加入DMF(75mL)、N-甲基嗎啉(6.27mL，57.07mmol)、Boc-L-叔-亮氨酸(5.20g，22.49mmol)和HATU(8.53g，22.49mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜并進(jìn)行如下后處理將反應(yīng)混合物倒入冰水中并用1.0N鹽酸調(diào)節(jié)至pH為5，用EtOAc萃取。萃取液用碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)并濃縮。將剩余物經(jīng)Biotage 65M柱(EtOAc-己烷5-100％)純化，得到產(chǎn)物(8.07g，84％)保留時(shí)間1.88方法I)MS m/z 639(M++1)。
步驟2向?qū)嵤├?84、步驟1的產(chǎn)物{Boc-NH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-(6-甲氧基-異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-甲酸乙酯}(4.0g，6.26mmol)在THF(250mL)、甲醇(31mL)和H2O(125mL)中的懸浮液內(nèi)加入LiOH(2.4g，100.2mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜，隨后用1.0N鹽酸調(diào)節(jié)至pH 7。真空除去有機(jī)溶劑。將含水剩余物酸化至pH 4并用EtOAc萃取(2×)。將合并的有機(jī)溶劑干燥(硫酸鈉/硫酸鎂)并真空濃縮，得到產(chǎn)物(3.79g，99％)1H NMR(甲醇-d4)□ppm 1.05(s，9H)，1.25(m，1H)，1.29(s，9H)，1.46(m，1H)，1.72(dd，J＝8.24，5.19Hz，1H)，2.23(q，J＝8.55Hz，1H)，2.68(dd，J＝13.89，7.78Hz，1H)，3.94(s，3H)，4.05(dd，J＝11.60，3.05Hz，1H)，4.23(d，J＝8.85Hz，1H)，4.46(d，J＝11.60Hz，1H)，4.63(t，J＝8.39Hz，1H)，5.10(d，J＝10.38Hz，1H)，5.29(d，J＝17.40Hz，1H)，5.85(m，2H)，7.10(d，J＝9.16Hz，1H)，7.19(s，1H)，7.26(d，J＝5.49Hz，1H)，7.91(d，J＝5.80Hz，1H)，8.12(d，J＝9.16Hz，1H).
保留時(shí)間1.81方法I)MS m/z 611(M++1)。
步驟3將CDI(0.052g，0.32mmol)和實(shí)施例384、步驟2的產(chǎn)物{BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-6-甲氧基-異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CO2H}(0.130g，0.21mmol)在THF(2mL)中的溶液回流60min，冷卻至室溫。依次加入環(huán)丁烷磺酰胺(0.043g，0.32mmol)和純DBU溶液(0.048mL，0.32mmol)。將反應(yīng)物攪拌過(guò)夜，隨后經(jīng)注射器過(guò)濾器過(guò)濾并經(jīng)制備型HPLC純化(30％-100％溶劑B)，得到所需的產(chǎn)物0.1422mg(92％)1H NMR(甲醇-d4)δppm 1.04(s，9H)，1.26(d，J＝13.43Hz，9H)，1.39(m，1H)，1.85(dd，J＝7.63，5.19Hz，1H)，1.98(m，2H)，2.26(m，4H)，2.50(m，2H)，2.61(m，1H)，3.92(s，3H)，4.05(m，1H)，4.24(m，1H)，4.33(m，1H)，4.43(d，J＝11.60Hz，1H)，4.52(m，1H)，5.13(m，1H)，5.30(m，1H)，5.71(m，1H)，5.82(s，1H)，7.08(d，J＝8.85Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.24(d，J＝5.80Hz，1H)，7.88(m，1H)，8.08(d，J＝9.16Hz，1H).
保留時(shí)間1.89方法I)MS m/z 728(M++1)。
方案2 化合物380
步驟4將實(shí)施例380、步驟3的產(chǎn)物{(BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2-(4R)-(6-甲氧基-異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丁基}(0.196mg，0.27mmol)溶于HCl/二_烷(5mL；20mmol)中并在室溫下攪拌2h。真空除去溶劑，得到0.1887g(100％)題述產(chǎn)物，該產(chǎn)物直接用于下一步驟中。
步驟5向?qū)嵤├?80、步驟4的產(chǎn)物{NH2-P3(L-t-BuGly)-P2-(4R)-(6-甲氧基-異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丁基的鹽酸鹽}(0.037g，0.053mmol)和二異丙基乙胺(0.046mL，0.26mmol)在二氯甲烷(2mL)中的混合物內(nèi)加入氯甲酸環(huán)戊酯(0.7M，0.151mL，0.069mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜并經(jīng)制備型HPLC(30％-100％溶劑B)純化，得到所需的產(chǎn)物(化合物380)(0.0303g，77％)1H NMR(甲醇-d4)δppm 1.03(s，9H)，1.48(m，9H)，1.86(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)，1.99(m，2H)，2.27(m，4H)，2.51(m，2H)，2.60(dd，J＝13.89，6.87Hz，1H)，3.92(s，3H)，4.05(dd，J＝12.21，3.97Hz，1H)，4.32(m，2H)，4.41(d，J＝11.90Hz，1H)，4.53(m，1H)，4.69(m，1H)，5.12(d，J＝10.38Hz，1H)，5.29(d，J＝17.09Hz，1H)，5.71(m，1H)，5.83(s，1H)，7.11(d，J＝9.46Hz，1H)，7.19(s，1H)，7.25(d，J＝5.80Hz，1H)，7.88(d，J＝5.80Hz，1H)，8.08(d，J＝9.16Hz，1H).
保留時(shí)間1.85方法H)，MS m/z 740(M++1)。
實(shí)施例381化合物381的制備 化合物381
步驟1 步驟1向?qū)嵤├?80、步驟4的產(chǎn)物{NH2-P3(L-t-BuGly)-P2-(4R)-(6-甲氧基-異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丁基的鹽酸鹽}(0.037g，0.053mmol)和異丙基乙胺(0.046mL，0.26mmol)在二氯甲烷(2mL)中的混合物內(nèi)加入氯甲酸新戊酯(0.012mL，0.069mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜并直接經(jīng)制備型HPLC純化(30％-100％溶劑B)，得到所需的產(chǎn)物(化合物381)(0.0252g，64％)1H NMR(甲醇-d4)δppm 0.84(s，9H)，1.05(s，9H)，1.40(m，1H)，1.86(m，1H)，2.00(m，2H)，2.28(m，4H)，2.51(m，2H)，2.57(m，1H)，3.39(d，J＝10.07Hz，1H)，3.55(d，J＝10.38Hz，1H)，3.92(s，3H)，4.05(m，1H)，4.33(m，2H)，4.41(d，J＝11.29Hz，1H)，4.53(m，1H)，5.12(d，J＝10.07Hz，1H)，5.29(d，J＝17.09Hz，1H)，5.71(m，1H)，5.82(s，1H)，7.10(d，J＝9.16Hz，1H)，7.19(s，1H)，7.25(d，J＝5.80Hz，1H)，7.88(d，J＝5.80Hz，1H)，7.97(s，1H)，8.07(d，J＝8.85Hz，1H).
保留時(shí)間1.89方法H)，MS m/z 742(M++1)。
實(shí)施例382化合物382的制備 化合物382方案1 步驟1向?qū)嵤├?80、步驟4的產(chǎn)物{NH2-P3(L-t-BuGly)-P2-(4R)-(6-甲氧基-異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丁基的鹽酸鹽}(0.037g，0.053mmol)和二異丙基乙胺(0.046mL)，0.26mmol)在二氯甲烷(2mL)中的混合物內(nèi)加入二碳酸二-叔戊基酯(0.0169g，0.069mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜并直接經(jīng)HPLC(30％-100％溶劑B)純化，得到所需的產(chǎn)物(化合物382)(0.0175g，44％)1H NMR(甲醇-d4)δppm 0.79(t，J＝6.87Hz，3H)，1.04(s，8H)，1.21(s，3H)，1.23(s，3H)，1.41(m，2H)，1.64(m，2H)，1.83(m，1H)，2.00(m，2H)，2.26(m，4H)，2.51(m，2H)，2.60(m，1H)，3.92(s，3H)，4.07(m，1H)，4.24(m，1H)，4.33(m，1H)，4.43(d，J＝11.60Hz，1H)，4.52(m，1H)，5.13(m，1H)，5.29(m，1H)，5.71(m，1H)，5.82(s，1H)，7.09(d，J＝8.85Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.25(d，J＝5.49Hz，1H)，7.88(d，J＝5.80Hz，1H)，8.08(d，J＝8.85Hz，1H).
保留時(shí)間1.90，方法H)，MS m/z 742(M++1)。
實(shí)施例383化合物383的制備 化合物383方案1 步驟1向?qū)嵤├?80、步驟4的產(chǎn)物{NH2-P3(L-t-BuGly)-P2-(4R)-(6-甲氧基-異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丁基的鹽酸鹽}(0.037g，0.053mmol)和異丙基乙胺(0.046mL、0.26mmol)的二氯甲烷(2mL)混合物中加入叔丁基-異氰酸酯(isocianate)(0.008mL，0.069mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜并直接經(jīng)制備型HPLC(30％-100％溶劑B)純化，得到所需的產(chǎn)物(化合物383)(0.024g，62％)1H NMR(甲醇-d4)δppm 1.05(s，9H)，1.19(s，9H)，1.37(m，1H)，1.85(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)，2.00(m，2H)，2.26(m，4H)，2.50(m，2H)，2.58(m，1H)，3.92(s，3H)，4.06(m，1H)，4.32(m，2H)，4.49(m，2H)，5.11(d，J＝10.38Hz，1H)，5.27(d，J＝17.40Hz，1H)，5.69(m，1H)，5.83(s，1H)，7.08(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.17(d，J＝2.44Hz，1H)，7.24(d，J＝5.80Hz，1H)，7.87(d，J＝6.10Hz，1H)，8.12(d，J＝8.85Hz，1H).
保留時(shí)間1.77，方法H)，MS m/z 727(M++1)。
實(shí)施例384化合物384的制備 化合物384方案1 步驟1將二異丙基乙胺(0.031mL，0.018mmol)、碳酸N，N’-二琥珀酰亞胺酯(0.0274g，0.107mmol)和實(shí)施例380、步驟4的產(chǎn)物{NH2-P3(L-t-BuGly)-P2-(4R)-(6-甲氧基-異喹啉-1-氧代)-S-脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丁基的鹽酸鹽}(0.050g，0.0714mmol)在THF(2mL)中的懸浮液在80℃下超聲15min。加入KH(0.046g，1.14mmol)和1-甲基環(huán)戊醇(0.079mL，0.714mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌20min并進(jìn)行如下后處理用冷水稀釋，調(diào)節(jié)pH至4，用EtOAc萃取，將萃取液干燥(硫酸鎂)并將剩余物經(jīng)制備型HPLC(30％-100％溶劑B)純化，得到所需的產(chǎn)物(化合物384)(0.018g，33％)(甲醇-d4)δppm
δppm 1.04(s，9H)，1.29-1.79(m，10H)，1.84(m，2H)，1.99(m，3H)，2.26(m，4H)，2.49(m，2H)，2.60(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)，3.92(s，3H)，4.05(dd，J＝11.29，2.44Hz，1H)，4.26(s，1H)，4.32(m，1H)，4.44(d，J＝11.90Hz，1H)，4.52(m，1H)，5.12(d，J＝10.07Hz，1H)，5.28(d，J＝16.79Hz，1H)，5.71(m，1H)，5.82(s，1H)，7.10(d，J＝8.85Hz，1H)，7.19(s，1H)，7.26(d，J＝5.80Hz，1H)，7.88(d，J＝5.80Hz，1H)，8.08(d，J＝9.16Hz，1H).
LC-MS保留時(shí)間1.91方法H)，MS m/z 754(M++1)。
實(shí)施例385化合物385的制備 化合物385方案1 步驟1將2-氰基甲基-4-甲氧基-苯甲酸甲酯(1.9g)和TsOH·H2O(0.15g，mmol)在嗎啉(5mL)中的懸浮液回流4h，真空除去溶劑。將剩余物在EtOAc/己烷及數(shù)滴甲醇中重結(jié)晶，得到產(chǎn)物(0.43g，17％)LC-MS保留時(shí)間1.07方法H)，MS m/z 266(M++1)。
步驟2將6-甲氧基-3-嗎啉-4-基-異喹啉-1-醇(0.298g，1.15mmol)在磷酰氯(20mL)中的混合物回流2h，真空除去溶劑，加入冷水。加入1.0N NaOH調(diào)節(jié)pH＞11。水層用EtOAc萃取。將萃取液干燥(硫酸鎂)，真空除去溶劑得到產(chǎn)物(0.299g，94％)LC-MS保留時(shí)間1.68方法H)，MS m/z 279(M++1)。
步驟3將1-氯-6-甲氧基-3-嗎啉-4-基-異喹啉(0.050g，0.18mmol)和氟化四丁基_·氟化氫(0.8g，2.8mmol)[Synlett 1992，(4)，345-6]的混合物在140℃下，微波加熱10min。將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯稀釋并經(jīng)ISCO 25g預(yù)柱(頂部有一層硅膠)過(guò)濾，除去溶劑得到產(chǎn)物(0.037mg，77％)1H NMR(氯仿-D)δppm 3.48(m，4H)，3.84(m，4H)，3.89(s，3H)，6.46(d，J＝1.22Hz，1H)，6.85(s，1H)，6.90(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.82(d，J＝8.85Hz，1H)。LC-MS保留時(shí)間1.56方法H)，MSm/z 263(M++1)。
步驟4將1-氟-6-甲氧基-3-嗎啉-4-基-異喹啉(0.037g，0.14mmol)、三氯化鑭(0.020g，0.8mmol)、t-BuOK(1M/THF，0.32mL，0.32mmol)和Boc-NH-P3(L-叔-BuGly)-P2[(4R)-4-羥基-S-脯氨酸]-P1(R，2S乙烯基Acca)-CONHSO2環(huán)丙烷(0.045g，0.08mmol)在THF(3mL)中的混合物攪拌3天。反應(yīng)混合物用甲醇稀釋，經(jīng)注射器過(guò)濾器過(guò)濾并經(jīng)制備型HPLC純化得到產(chǎn)物，為淺黃色泡沫狀物(0.0158g，24％)
1H NMR(甲醇-d4)δppm 1.03(s，9H)，1.24(m，4H)，1.31(s，9H)，1.43(m，2H)，1.88(m，1H)，2.24(m，2H)，2.59(dd，J＝13.43，6.71Hz，1H)，2.94(m，1H)，3.47(m，4H)，3.83(m，4H)，3.86(s，3H)，4.08(m，1H)，4.28(s，1H)，4.48(m，1H)，5.12(d，J＝10.38Hz，1H)，5.29(d，J＝16.48Hz，1H)，5.76(m，2H)，6.74(d，J＝9.16Hz，1H)，6.94(s，1H)，7.85(d，J＝8.85Hz，1H)，9.19(s，1H).
保留時(shí)間1.86方法H)，MS m/z 799(M++1)。
實(shí)施例386化合物386的制備 化合物386使用本文中描述的方法制備化合物386。
部分I在部分I中的所有化合物均采用LC/MS方法分析測(cè)試，使用以下條件。
方法AXterra C18 S7 3.0×50mm梯度100％溶劑A/0％溶劑B至0％溶劑A/100％溶劑B梯度時(shí)間3min保持時(shí)間1min流速4mL/min檢測(cè)器波長(zhǎng)220nm溶劑A10％甲醇/90％H2O/0.1％TFA溶劑B10％H2O/90％甲醇/0.1％TFA
實(shí)施例410化合物410的制備 化合物410方案1 步驟1在氮?dú)鈿夥罩?，向Boc-L-羥基脯氨酸(0.723g，3.13mmol)的DMSO溶液中加入叔丁醇鉀(0.808g，7.2mmol)。在室溫下攪拌懸浮液1.5小時(shí)，分兩批加入4-氯-6-甲基-2-(三氟甲基)喹啉(0.916g，3.75mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時(shí)，使用1.3當(dāng)量HCl(1N)中和反應(yīng)液。加入pH 4.0的緩沖溶液并將pH調(diào)節(jié)至pH 4-5。水層用乙酸乙酯萃取(3×25mL)，將合并的有機(jī)層用鹽水(20mL)洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥，得到題述化合物，為白色固體物(粗產(chǎn)物收率未作計(jì)算)。將粗產(chǎn)物用于下一步驟中。
LC/MS Rt-min(MH+)2.48(441.5)(方法A)。
步驟2將步驟1的粗產(chǎn)物4-(6-甲基-2-三氟甲基-喹啉-4-氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯(估計(jì)3.13mmol)在THF(10mL)和甲醇(10mL)中的溶液冷卻至0℃。在氮?dú)鈿夥罩校瑢MSCN2的己烷溶液(2M，～1.3eq)緩慢加入所述攪拌著的溶液中，直至溶液中不再有氣體釋放出。隨后將完全反應(yīng)的溶液真空濃縮，經(jīng)Biotage 40M柱(用10％-30％乙酸乙酯/己烷洗脫)純化，得到純題述化合物，為白色泡沫狀物(976mg，步驟1和2的總收率69％)。
LC/MS Rt-min(MH+)2.60(477)(方法A)。
步驟3將步驟2的產(chǎn)物(0.976g，2.15mmol)在DCM(7mL)和TFA(6.62mL)中的溶液在室溫下攪拌1小時(shí)。真空除去溶劑并將剩余物懸浮在1N HCl/乙醚(8mL)中，溫和攪拌并真空濃縮。重復(fù)該步驟并將所得的產(chǎn)物用油泵抽真空過(guò)夜，定量得到白色固體物。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.50(s，3H)，2.57-2.6(m，1H)，2.66-2.71(m，1H)，3.62-3.65(br d，J＝15Hz，1H)，3.80-3.81(m，4H)，4.8(br s，1H)，5.7(s，1H)，7.46(s，1H)，7.72-7.75(d，J＝7.5Hz，1H)，7.98-7.8(d，J＝8.5Hz，1H)，8.24(s，1H)，9.54(br s，1H)；LC/MS Rt-min(MH+)1.61(355)(方法A)。
步驟4在氮?dú)鈿夥罩?，將步驟3的產(chǎn)物(估計(jì)定量收率，2.746mmol)加入BOC-叔丁基-L-甘氨酸(0.635g，2.746mmol)的DCM(20mL)溶液中。該步驟完成后，加入HOBt(0.408g，3.02mmol)、DIPEA(3.35mL，19.2mmol)和HBTU(1.56g，4.12mmol)。立即得到桃紅色溶液，將反應(yīng)物在室溫下攪拌過(guò)夜。將10mL DCM加入到所述完全反應(yīng)的反應(yīng)物中以增加體積，將反應(yīng)物用pH 4.00的緩沖溶液(25mL)猝滅。使用1N HCl將混合物酸化至pH 4.5，水相用DCM(3×20mL)萃取。將有機(jī)相用pH 4.00的緩沖溶液(20mL)、飽和NaOH(25mL)和鹽水(20mL)洗滌兩次，隨后用硫酸鎂干燥。將所得的溶液真空濃縮并經(jīng)Biotage40M柱(用10％-40％乙酸乙酯/己烷洗脫)純化，得到純題述化合物，為白色固體物(1.11g，89％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.96-1.02(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體，3:2，s，18H)，2.27-2.33(m，1H)，2.50(s，3H)，2.68-2.72(m，1H)，3.67(s，3H)，4.02-4.04(m，1H)，4.43-4.45(br d，J＝15Hz，2H)，4.58-4.61(t，1H)，5.60(br s，1H)，6.72-6.74(br d，J＝15 Hz，1H)，7.38(s，1H)，7.68-7.73(m，1H)，7.95-7.97(m，2H)；LC/MS Rt-min(MH+)2.61(590)(方法A)。
步驟5通過(guò)加熱和超聲將LiOH(0.138g，5.78mmol)溶于水(10mL)中。將該LiOH溶液和甲醇(10mL)加入步驟4的純物質(zhì)(1.09g，1.93mmol)的THF(10mL)溶液中?；旌衔锪⒓醋兂甚r藍(lán)色。將反應(yīng)物在室溫下攪拌3小時(shí)，隨后用1N HCl(5.78mL，5.78mmol)酸化。反應(yīng)物用pH4.00緩沖溶液猝滅并使用1N氫氧化鈉水溶液將pH調(diào)節(jié)至pH 4.5。水層用EtOAc萃取(3×25mL)，用鹽水(20mL)洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。過(guò)濾溶液，將濾液真空濃縮并抽真空過(guò)夜。將粗產(chǎn)物(957mg，90％收率)直接用于下一步驟中。
LC/MS Rt-min(MH+)2.51(577)(方法A)。
步驟6將步驟5的粗產(chǎn)物(60mg，0.11mmol)溶于DCM(5mL)中，加入N-(1(R)-氨基-2(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)-環(huán)丙烷磺酰胺·鹽酸鹽(實(shí)施例1，步驟8)(0.029g，0.11mmol)。接著在氮?dú)鈿夥罩幸来渭尤隓IPEA(0.094mL，0.541mmol)和HATU(0.0575，0.151mmol)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌大約8h。向溶液中加入10mL DCM以增加體積，將反應(yīng)物用pH 4.00緩沖溶液(10mL)猝滅。使用1N HCl將混合物酸化至pH為4-5，水相用DCM(3×20mL)萃取。有機(jī)相用pH 4.00緩沖溶液(10mL)和鹽水(10mL)洗滌兩次，隨后經(jīng)硫酸鎂干燥。將所得的溶液真空濃縮并經(jīng)Biotage 12M柱(用10％-40％丙酮/己烷洗脫)純化。該純化操作得到化合物410，為白色粉末(29mg，35％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.976-1.12(m，24H)，1.36-1.39(m，1H)，1.70-1.72(m，1H)，2.15-2.25(m，2H)，2.50-2.52(m，4H)，2.91-2.96(m，1H)，3.97-4.01(m，2H)，4.40-4.47(m，2H)，5.09-5.11(d，J＝10Hz，1H)，5.21-5.24(d，J＝15Hz，1H)，5.59-5.66(m，2H)，6.65-6.67(d，NH)，7.43(s，1H)，7.72-7.74(d，J＝10Hz，1H)，7.90(s，1H)，7.98-8.0(d，J＝10Hz，1H)，8.87(s，NH)，10.35(s，NH)；LC/MS Rt-min(MH+)2.65(789.61)(方法A)。
實(shí)施例411化合物411的制備 化合物411
步驟1 在氮?dú)鈿夥罩?，向Boc-L-羥基脯氨酸(2.00g，8.65mmol)的THF(25mL)溶液中加入NaH(0.795g，19.87mmol)。將懸浮液在室溫下攪拌15分鐘，加入4，6-二氯嘧啶(2.58g，17.30mmol，分兩批加入)。將混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，使用1.3當(dāng)量HCl(1N)中和反應(yīng)物。加入pH 4.0緩沖溶液將pH調(diào)節(jié)至pH 5。使用乙酸乙酯萃取水相(3×25mL)，有機(jī)層用鹽水(20mL)洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥，得到題述化合物，為白色固體物(粗產(chǎn)物收率未作計(jì)算)。該粗產(chǎn)物直接用于下一步驟中。
LC/MS Rt-min(MH+)1.91(366.2)(方法A)。
步驟2 將步驟1的粗產(chǎn)物(大約8.65mmol)在THF(40mL)和2，2-二甲砜基丙烷(methonal)(40mL)中的溶液冷卻至0℃。在氮?dú)鈿夥罩?，TMSCN2的己烷溶液(2M，～1.3eq)緩慢加至該攪拌著的溶液中，直至溶液中不再有氣體釋放出。隨后將該完全反應(yīng)的溶液真空濃縮，經(jīng)Biotage 40M柱(用20％-40％乙酸乙酯/己烷洗脫)純化，得到純題述化合物，為白色泡沫狀物(497mg，步驟2a-2b總收率16％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.34-1.38(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體，2:1，9H)，2.25-2.29(m，1H)，2.53-2.56(m，1H)，3.58-3.75(m，2H)，3.69(s，3H)，4.28-4.33(m，1H)，5.59(s，1H)，7.24(s，1H)，8.69(s，1H)；LC/MS Rt-min(MH+)2.08(380.14)(方法A)。
步驟3 在室溫下，將步驟2的純產(chǎn)物(472mg，1.83mmol)在DCM(3mL)和TFA(5.65mL)中的溶液攪拌1小時(shí)。真空除去溶劑，將剩余物懸浮在1N HCl/乙醚(7.33mL)中，溫和攪拌，真空濃縮。重復(fù)該操作，將所得的產(chǎn)物在油泵抽真空下過(guò)夜，定量得到白色固體物。
LC/MS Rt-min(MH+)0.55(258.35)(方法A)。
步驟4 在氮?dú)鈿夥罩校瑢⒉襟E3的產(chǎn)物(估計(jì)為定量收率，1.83mmol)加至BOC-叔丁基-L-甘氨酸(0.424g，1.83mmol)的DCM(11mL)溶液中。隨后加入HOBt(0.272g，2.02mmol)、DIPEA(2.23mL，12.82mmol)和HBTU(1.04g，2.75mmol)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌15h。向溶液中加入15mL DCM以增加體積，將反應(yīng)物用pH 4.00緩沖溶液(15mL)猝滅。使用1N HCl將混合物酸化至pH為4.5，水相用DCM(3×20mL)萃取。有機(jī)相依次用pH 4.00緩沖溶液(20mL)、飽和的NaOH(25mL)和鹽水(20mL)洗滌兩次，經(jīng)硫酸鎂干燥。將所得的溶液真空濃縮并經(jīng)Biotage 40S柱(用20％-50％乙酸乙酯/己烷洗脫)純化。該純化步驟得到純的題述化合物，為白色固體物(454mg，53％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.94(s，9H)，1.25(s，9H)，2.21-2.27(m，1H)，2.48-2.55(m，1H)，3.64(s，3H)，3.86-4.02(m，2H)，4.29-4.31(d，J＝10Hz，1H)，4.46-4.49(t，1H)，5.75(br s，1H)，6.72-6.74(d，NH)，7.12(s，1H)，8.71(s，1H)；LC/MS Rt-min(MH+)2.27(493.5)(方法A)。
步驟5 通過(guò)加熱和超聲將LiOH(0.0141g，0.589mmol)溶于水(7.5mL)中。向該LiOH溶液中加入步驟4的純物質(zhì)(252mg，0.535mmol)的THF(7.5mL)溶液，在室溫下攪拌。3小時(shí)后反應(yīng)完全。用pH 4.0緩沖液猝滅并用1N HCl酸化至pH為約4.5。水相用EtOAc(3×25mL)萃取，有機(jī)相用鹽水(20mL)洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。將濾液真空濃縮并保持在真空下過(guò)夜。粗產(chǎn)物(231mg，收率95％)直接用于下一步驟中。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.94(s，9H)，1.25(s，9H)，2.14-2.22(m，1H)，2.50-2.54(m，1H)，3.84-3.876(d，J＝150 Hz，1H)，3.97-3.99(d，J＝10Hz，1H)，4.27-4.30(d，J＝15Hz，1H)，4.37-4.40(t，1H)，5.63(br s，1H)，6.69-6.71(d，NH)，7.12(s，1H)，8.71(s，1H)，12.56(br s，OH)；LC/MS Rt-min(MH+)2.24(479.5)(方法A)。
步驟6 將步驟5的純物質(zhì)(80mg，0.146mmol)和苯基硼酸(0.0178g，0.146mmol)在DMF(2mL)中溶劑化。將溶液置于氮?dú)鈿夥罩胁⒓尤?M碳酸鈉水溶液(0.146mL，0.292mmol)。加入5％摩爾的四(三苯基膦)合鈀(O)(8.44mg，0.0073mmol)，并通過(guò)微波(使用PersonalChemistry Emrys Optimizer的設(shè)備)將混合物在140℃下加熱50分鐘。反應(yīng)完全后將沉積出的鈀黑除去。用1當(dāng)量的1N HCl將混合物酸化，經(jīng)注射器過(guò)濾，使用甲醇萃取產(chǎn)物。產(chǎn)物經(jīng)制備型HPLC(柱-4 Xterra S530×75mm，溶劑-70％A/30％B-30％A/70％B(其中溶劑A為10％甲醇、90％H2O、0.1％TFA，溶劑B為90％甲醇、10％H2O、0.1％TFA)，梯度時(shí)間-15min，保持時(shí)間-1min.，流速-40mL/min，純產(chǎn)物保留時(shí)間-10.45-11.37)純化。用1N NaOH中和含所需產(chǎn)物的洗脫液，并置于離心真空(speed vacuum)下約4h。合并各洗脫液，加入pH 4.0的緩沖液(15mL)。使用1N HCl將pH調(diào)節(jié)至pH 4-5，水層用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。有機(jī)層用鹽水(15mL)洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。產(chǎn)物在油泵抽真空下干燥過(guò)夜，得到粘稠油狀物(37mg，50％)。
LC/MS Rt-min(MH+)2.37(499.3)(方法A)。
步驟7將實(shí)施例411，步驟6的產(chǎn)物(36.7mg，0.061mmol)溶于DCM(4mL)中，加入N-(1(R)-氨基-2(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)-環(huán)丙烷磺酰胺·鹽酸鹽(實(shí)施例1，步驟8)(0.0164g，0.161mmol)。接著在氮?dú)鈿夥罩幸来渭尤隓IPEA(0.0534mL，0.307mmol)和HATU(0.0326，0.0858mmol)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌3h。向溶液中加入10mL DCM以增加體積，用pH 4.00緩沖溶液(10mL)猝滅反應(yīng)物。使用1N HCl將混合物酸化至pH為4-5，水相用DCM(3×15mL)萃取。有機(jī)相用pH 4.00緩沖溶液(10mL)和鹽水(10mL)洗滌兩次，隨后經(jīng)硫酸鎂干燥。將所得的溶液真空濃縮并經(jīng)Biotage 12M柱(用20％-40％丙酮/己烷洗脫)純化。該純化操作得到純化合物411，為白色粉末(7mg，15％)。
1H NMRδ1.07-1.46(m，24H)，1.87-1.90(m，1H)，2.22-2.32(m，2H)，2.51-2.55(m，1H)，2.92-2.97(m，1H)，4.04-4.07(d，J＝15Hz，1H)，4.20-4.22(d，J＝10Hz，1H)，4.36-4.38(d，J＝10Hz，1H)，4.47-4.50(t，1H)，5.12-5.14(d，J＝10Hz，1H)，5.29-5.33(d，J＝20Hz，1H)，5.73-5.82(m，2H)，6.59-6.60(d，NH)，7.29(s，1H)，7.50-7.51(m，3H)，8.03-8.05(m，2H)，8.81(s，1H)；LC/MS Rt-min(MH+)2.50(711.4)(方法A)。
實(shí)施例412化合物412的制備 化合物412
步驟1 將實(shí)施例411、步驟5的產(chǎn)物(80mg，0.146mmol)在DMF(2mL)中溶劑化，并向該溶液中加入2-噻吩硼酸(0.028g，0.219mmol)。將反應(yīng)物置于氮?dú)鈿夥罩校尤?M碳酸鈉水溶液(0.146mL，0.292mmol)和5％摩爾的四(三苯基膦)合鈀(O)(8.44mg，0.0073mmol)。使用微波(使用Personal Chemistry Emrys Optimizer設(shè)備)將反應(yīng)物在150℃下加熱30分鐘。反應(yīng)完成后將沉積出的鈀黑除去。用1當(dāng)量的1N HCl將混合物酸化，經(jīng)注射器過(guò)濾，使用甲醇萃取產(chǎn)物。產(chǎn)物經(jīng)制備型HPLC(柱-4 Xterra S5 30×75mm，溶劑-70％A/30％B-30％A/70％B(其中溶劑A為10％甲醇、90％H2O、0.1％TFA，溶劑B為90％甲醇、10％H2O、0.1％TFA)，梯度時(shí)間-15min.，保持時(shí)間-1min，流速-40mL/min，純產(chǎn)物保留時(shí)間-10.45-11.37)純化。用1N NaOH中和含所需產(chǎn)物的洗脫液，并置于離心真空(speed vacuum)下約4h。合并各洗脫液，加入pH 4.0的緩沖液(15mL)。使用1N HCl將pH調(diào)節(jié)至pH為4-5，水層用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。有機(jī)層用鹽水(15mL)洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。產(chǎn)物在油泵抽真空下干燥過(guò)夜，得到油狀液體(37mg，50％)。
LC/MS Rt-min(MH+)2.37(499.3)(方法A)。
步驟2將實(shí)施例412、步驟1的產(chǎn)物(39mg，0.0773mmol)溶于DCM(4mL)中，加入N-(1(R)-氨基-2(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)-環(huán)丙烷磺酰胺·鹽酸鹽(實(shí)施例1，步驟8)(0.0206g，0.0773mmol)。接著在氮?dú)鈿夥罩幸来渭尤隓IPEA(0.015mL，0.387mmol)和HATU(0.0411g，0.108mmol)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌15h。向溶液中加入10mL DCM以增加體積，將反應(yīng)物用pH 4.00緩沖溶液(10mL)猝滅。使用1N HCl將混合物酸化至pH4-5，水相用DCM(3×15mL)萃取。有機(jī)相用pH 4.00緩沖溶液(10mL)和鹽水(10mL)洗滌兩次，隨后經(jīng)硫酸鎂干燥。將所得的溶液真空濃縮并經(jīng)Biotage 12M柱(用20％-50％丙酮/己烷洗脫)純化。該純化操作得到純化合物412，為白色粉末(4mg，7％)。
1H NMRδ1.04-1.29(m，24H)，1.45-1.47(m，1H)，1.89-1.91(m，1H)，2.26-2.31(m，2H)，2.51-2.53(m，1H)，2.92-2.95(m，1H)，4.05-4.07(d，J＝10Hz，1H)，4.22-4.24(d，J＝10Hz，1H)，4.38-4.40(d，J＝10Hz，1H)，4.48-4.52(m，1H)，5.15-5.17(d，J＝10Hz，1H)，5.32-5.36(d，J＝20Hz，1H)，5.76-5.83(m，2H)，6.65-6.67(d，NH)，7.19-7.21(m，2H)，7.66-7.67(d，J＝5Hz，1H)，7.86-7.87(d，J＝5Hz，1H)，8.69(s，1H)；LC/MS Rt-min(MH+)2.45(739.4)(方法A)。
實(shí)施例413化合物413的制備 化合物413
步驟1 將2-溴-6-氯吡啶(3.0g，15.55mmol)和苯基硼酸(1.896g，15.55mmol)在EtOH、甲苯和水(2∶1∶1；120mL)的混合物中溶劑化。在氮?dú)鈿夥罩屑尤?M碳酸鈉水溶液(15.55mL，31.10mmol)和5％摩爾的四(三苯基膦)合鈀(O)(0.896g，0.775mmol)。反應(yīng)物在90℃下回流1小時(shí)。加入水(20mL)猝滅反應(yīng)物，水層用乙醚(4×25mL)萃取。隨后將有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。粗混合物經(jīng)Biotage40S柱(用2％-10％乙酸乙酯/己烷洗脫)純化，得到純的題述化合物(1.45g，74％)。
1H NMRδ7.24-7.26(m，1H)，7.42-7.48(m，3H)，7.63-7.70(m，2H)，7.98-8.00(m，2H)；LC/MS Rt-min(MH+)2.04(190.18)(方法A)。
步驟2 向在步驟1中得到的純固體(3.27g，17.24mmol)中加入TFA(20mL)。在氮?dú)鈿夥罩?，?0％的H2O2溶液(5.55mL，48.9mmol)緩慢滴入攪拌著的溶液中。將反應(yīng)物在100℃下加熱回流3小時(shí)，向溶液中再加入0.5當(dāng)量的H2O2(2.27mL，25mmol)。反應(yīng)物繼續(xù)在100℃下攪拌2h。將燒瓶冷卻至室溫，接著將溶液真空濃縮至原始體積的約一半。加入水(40mL)以猝滅反應(yīng)物，水層用乙酸乙酯(5×30mL)萃取。有機(jī)層用鹽水(20mL)洗滌一次，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)Biotate 40M柱(用10％-75％乙酸乙酯/己烷洗脫)純化，得到淺黃色液體(0.81g，23％)。還回收到純?cè)弦灾貜?fù)使用(1.895g，58％)。
1H NMRδ7.40-7.42(t，1H)，7.49-7.50(m，3H)，7.59-7.61(d，J＝10Hz，1H)，7.77-7.82(m，3H)；LC/MS Rt-min(MH+)1.12(206.37)(方法A)。
步驟3 將步驟2的純化產(chǎn)物(0.81g，3.94mmol)加入SOCl2(25mL)的溶液中并在60℃下攪拌2h。隨后將溫度升高至80℃使反應(yīng)完全，接著再加熱30min。將溶液真空濃縮并用冰小心猝滅。使用10N NaOH將pH調(diào)節(jié)至pH為4-5，將燒瓶保持在冰浴中。水相用乙醚(4×25mL)萃取，有機(jī)層用鹽水(20mL)洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。粗黃色液體經(jīng)Biotage 40S柱(用2％-10％乙酸乙酯/己烷洗脫)純化。得到淺黃色的粘稠液體(538mg，61％)。
1H NMRδ7.52-7.55(m，3H)，7.73(s，1H)，8.10-8.11(m，2H)，8.17(s，1H)；LC/MS Rt-min(MH+)2.62(225.33)(方法A)。
步驟4 在氮?dú)鈿夥罩校駼oc-L-羥基脯氨酸(555mg，2.40mmol)的DMSO(4mL)溶液中加入叔丁醇鉀(0.619g，5.52mmol)。在室溫下攪拌懸浮液45min，分兩批加入2，4-二氯-6-苯基-吡啶(在步驟3中純化)(538mg，2.40mmol)。在室溫下攪拌混合物2小時(shí)，使用1.3當(dāng)量HCl(1N)中和反應(yīng)物。加入pH 4.0的緩沖溶液，并將pH調(diào)節(jié)至pH4-5。使用乙酸乙酯(3×25mL)萃取水相，有機(jī)相用鹽水(20mL)洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥，得到題述化合物，為白色固體物(粗產(chǎn)物＝962mg)。粗產(chǎn)物直接用于下一步驟中。
LC/MS Rt-min(MH+)2.55(419.27)(方法A)。
步驟5 將步驟4的粗產(chǎn)物(估計(jì)2.4mmol)在THF(10mL)和2，2-二甲砜基丙烷(methonal)(10mL)中的溶液冷卻至0℃。在氮?dú)鈿夥罩?，將TMSCN2的己烷溶液(2M，～1.3eq)緩慢加至攪拌著的溶液中，直至溶液中不再有氣體釋放出。隨后將所述完全反應(yīng)的溶液真空濃縮，經(jīng)Biotage 25S柱(用10％-50％乙酸乙酯/己烷洗脫)純化，得到純題述化合物，為白色泡沫狀物(503mg，步驟4d-4e的總收率48％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.35-1.38(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體，3:2，9H)，2.21-2.26(m，1H)，2.50-2.58(m，1H)，3.67-3.70(m，5H)，4.26-4.34(m，1H)，5.35(br s，1H)，7.14-7.15(m，1H)，7.47-7.55(m，4H)，8.05-8.09(m，2H)；LC/MS Rt-min(MH+)2.69(455.52)(方法A)。
步驟6 將步驟5的純產(chǎn)物(503mg，1.16mmol)在DCM(2.5mL)和TFA(3.58mL)中的溶液在室溫下攪拌1小時(shí)。真空除去溶劑并將剩余物懸浮在1N HCl/乙醚(6mL)中，溫和攪拌并真空濃縮。重復(fù)該步驟，將所得的產(chǎn)物采用油泵抽真空，定量得到白色固體物。粗產(chǎn)物直接用于下一步驟中。
步驟7 在氮?dú)鈿夥罩?，將步驟6的產(chǎn)物(估計(jì)為定量收率，1.83mmol)加入BOC-叔丁基-L-甘氨酸(0.424g，1.83mmol)的DCM(11mL)溶液中。隨后加入HOBt(0.272g，2.02mmol)、DIPEA(2.23mL，12.82mmol)和HBTU(1.04g，2.75mmol)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌15h。向溶液中加入15mL DCM以增加體積，反應(yīng)物用pH 4.00緩沖溶液(15mL)猝滅。使用1N HCl將混合物酸化至pH 4.5，水相用DCM(3×20mL)萃取。有機(jī)相用pH 4.00緩沖溶液(20mL)、飽和的NaOH(25mL)和鹽水(20mL)洗滌兩次，經(jīng)硫酸鎂干燥。將所得的溶液真空濃縮并經(jīng)Biotage 40S柱(用20％-50％乙酸乙酯/己烷洗脫)純化。該純化步驟得到純的題述化合物，為白色固體物(454mg，53％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.96(s，9H)，1.19(s，9H)，2.17-2.29(m，1H)，2.48-2.58(m，1H)，3.65(s，3H)，3.81-3.89(m，1H)，4.05-4.08(m，1H)，4.21-4.26(m，1H)，4.44-4.50(t，1H)，5.45(br s，1H)，6.72-6.75(d，J＝15Hz，1H)，7.09(s，1H)，7.46-7.51(m，4H)，8.02-8.06(m，2H)；LC/MS Rt-min(MH+)2.27(493.5)(方法A)。
步驟8 通過(guò)加熱和超聲將LiOH(0.0233g，0.973mmol)溶于水(10mL)中。將該LiOH溶液加入步驟7的純物質(zhì)(483mg，0.885mmol)的THF(10mL)溶液中，混合物的顏色立即轉(zhuǎn)變?yōu)樘壹t色。將反應(yīng)物在室溫下攪拌1小時(shí)，用1N HCl(0.973mL，0.974mmol)酸化。反應(yīng)物用pH 4.00緩沖溶液猝滅并將pH調(diào)節(jié)至4至5之間。水層用EtOAc萃取(3×20mL)，用鹽水(15mL)洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。將濾液真空濃縮并保持在真空下過(guò)夜。粗產(chǎn)物(480mg，收率＞95％)直接用于下一步驟中。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.94(s，9H)，1.20(s，9H)，1.32-1.34(m，1H)，2.12-2.4(m，1H)，2.51-2.55(m，1H)，3.81-3.83(d，J＝10Hz，1H)，4.21-4.23(d，J＝10Hz，1H)，4.32-4.35(t，1H)，5.4(br s，1H)，6.63-6.65(d，NH)，7.09(s，1H)，7.47-7.49(m，4H)，8.03-8.06(m，2H)，12.56(s，1H).
步驟9 將步驟8的二肽(100mg，0.188mmol)和2-噻吩硼酸(0.0481g，0.376mmol)在DMF(2mL)中溶劑化。將溶液置于氮?dú)鈿夥罩?，加?M KF水溶液(0.282mL，0.376mmol)。加入5％摩爾的四(三苯基膦)合鈀(O)(0.011mg，0.0094mmol)，使用微波(使用Personal ChemistryEmrys Optimizer設(shè)備)將混和物在150℃下加熱30分鐘。反應(yīng)完成后將沉積出的鈀黑除去。用1當(dāng)量的1N HCl將混合物酸化，經(jīng)注射器過(guò)濾，使用甲醇萃取產(chǎn)物。產(chǎn)物經(jīng)制備型HPLC(柱-4 Xterra S5 5μm30×75mm，溶劑-85％A/15％B-10％A/90％B(其中溶劑A為10％甲醇、90％H2O、0.1％TFA，溶劑B為90％甲醇、10％H2O、0.1％TFA)，梯度時(shí)間-15min.，保持時(shí)間-1min.，流速-40mL/min，純產(chǎn)物保留時(shí)間--16.23)純化。用1N NaOH中和含所需產(chǎn)物的洗脫液，并置于離心真空(speed vacuum)下約2h。合并各洗脫液，加入pH 4.0的緩沖液(15mL)。使用1N HCl將pH調(diào)節(jié)至pH 4-5，水層用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。有機(jī)層用鹽水(15mL)洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。產(chǎn)物在油泵抽真空下干燥過(guò)夜，得到淺黃色油狀物(44mg，40％)。
LC/MS Rt-min(MH+)2.7(580.54)(方法A)。
步驟10將實(shí)施例413、步驟9的產(chǎn)物(43mg，0.0742mmol)溶于DCM(2mL)中，加入N-(1(R)-氨基-2(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)-環(huán)丙烷磺酰胺·鹽酸鹽(實(shí)施例1，步驟8)(0.0198g，0.0742mmol)。接著在氮?dú)鈿夥罩幸来渭尤隓IPEA(0.0646mL，0.371mmol)和HATU(0.039g，0.0104mmol)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌4.5h。向溶液中加入10ml DCM以增加體積，反應(yīng)物用pH 4.00緩沖溶液(10mL)猝滅。使用1N HCl將混合物酸化至pH為4-5，水相用DCM(3×15mL)萃取。有機(jī)相用pH4.00緩沖溶液(10mL)和鹽水(10mL)洗滌兩次，隨后經(jīng)硫酸鎂干燥。將所得的溶液真空濃縮并經(jīng)Biotage 12S柱(用10％-50％丙酮/己烷洗脫)純化。所述化合物經(jīng)制備型HPLC(柱-YMC ODS-A 20×50mm s5，溶劑-60％A/40％B-10％A/90％B(其中溶劑A為10％甲醇、90％H2O、0.1％TFA，溶劑B為90％甲醇、10％H2O、0.1％TFA)，梯度時(shí)間-8min.，保持時(shí)間-2min.，流速-25mL/min，純產(chǎn)物保留時(shí)間-8.702)分離和預(yù)純化。該純化操作得到純化合物413，為淺橙色油狀物(22.3mg，38％)。
1H NMRδ1.02-1.29(m，24H)，1.42-1.45(m，1H)，1.87-1.89(m，1H)，2.24-2.30(m，2H)，2.53-2.57(m，1H)，2.92-2.97(m，1H)，4.06-4.08(d，J＝10Hz，1H)，4.25(s，1H)，4.31-4.33(d，J＝10Hz，1H)，4.45-4.49(t，1H)，5.12-5.14(d，J＝10 Hz，1H)，5.29-5.32(d，J＝15Hz，1H)，5.46(br s，1H)，5.73-5.80(m，1H)，7.13-7.15(m，1H)，7.29-7.30(d，J＝5Hz，2H)，7.42-7.53(m，4H)，7.75-7.56(d，J＝5Hz，1H)，8.07-8.09(d，J＝10Hz，2H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.79(792.72)(方法A)。
實(shí)施例414化合物414的制備 化合物414
步驟1 將實(shí)施例413、步驟8的純物質(zhì)(100mg，0.188mmol)和4-甲氧基苯基硼酸(0.0429g，0.282mmol)在DMF(2.5mL)中溶劑化。將溶液置于氮?dú)鈿夥罩校尤?M碳酸鈉水溶液(0.188mL，0.376mmol)。加入5％摩爾的四(三苯基膦)合鈀(O)(0.011mg，0.0094mmol)，并使用微波(使用Personal Chemistry Emrys Optimizer設(shè)備)將混和物在150℃下加熱30分鐘。反應(yīng)完成后將沉積出的鈀黑除去。用1當(dāng)量的1NHCl將混合物酸化，經(jīng)注射器過(guò)濾，使用甲醇萃取產(chǎn)物。產(chǎn)物經(jīng)制備型HPLC(柱-Xterra MS C18 5μm 30×50mm，溶劑-90％A/10％B-10％A/90％B(其中溶劑A為10％甲醇、90％H2O、0.1％TFA，溶劑B為90％甲醇、10％H2O、0.1％TFA)，梯度時(shí)間-15min.，保持時(shí)間-1min.，流速-45mL/min，純產(chǎn)物保持時(shí)間-13.72)純化。用1N NaOH中和含所需產(chǎn)物的洗脫液，并置于離心真空(speed vacuum)下約2h。合并各洗脫液，加入pH 4.0的緩沖液(15mL)。使用1N HCl將pH調(diào)節(jié)至pH為4-5，水層用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。有機(jī)層用鹽水(15mL)洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。產(chǎn)物在油泵抽真空下干燥過(guò)夜，得到粘稠油狀物(44mg，50％)。
LC/MS Rt-min(MH+)2.23(604.61)(方法A)。
步驟2將實(shí)施例414、步驟1的產(chǎn)物(43mg，0.0712mmol)溶于DCM(2mL)中，加入N-(1(R)-氨基-2(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)-環(huán)丙烷磺酰胺鹽酸鹽(實(shí)施例1，步驟8)(0.01899g，0.0712mmol)。隨后在氮?dú)鈿夥罩屑尤隓IPEA(0.062mL，0.356mmol)和HATU(0.038g，0.0997mmol)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌4.5h。向溶液中加入10mL DCM以增加體積，反應(yīng)物用pH 4.00緩沖溶液(10mL)猝滅。使用1N HCl將混合物酸化至pH為4-5，水相用DCM(3×15mL)萃取。有機(jī)相用pH 4.00緩沖溶液(10mL)和鹽水(10mL)洗滌兩次，隨后經(jīng)硫酸鎂干燥。將所得的溶液真空濃縮并經(jīng)Biotage 12S柱(用20％-50％丙酮/己烷洗脫)純化。所述化合物經(jīng)制備型HPLC(柱-YMC ODS-A 20×50mm s5，溶劑-60％A/40％B-10％A/90％B(其中溶劑A為10％甲醇、90％H2O、0.1％TFA和溶劑B為90％甲醇、10％H2O、0.1％TFA)，梯度時(shí)間-10min，保持時(shí)間-2min、流速-25mL/min，純產(chǎn)物保留時(shí)間-7.43-8.24)分離和預(yù)純化。該純化操作得到純化合物414，為淡橙色油狀物(19.4mg，34％)。
1H NMRδ1.02-1.23(m，24H)，1.29-1.44(m，1H)，1.89-1.95(m，1H)，2.24-2.30(q，1H)，2.32-2.40(m，1.H)，2.59-2，62(m，1H)，3.90(s，3H)，4.10-4.12(d，J＝10Hz，1H)，4.21(s，1H)，4.42-4.56(m，2H)，5.12-5.14(d，J＝10Hz，1H)，5.28-5.31(d，J＝15Hz，1H)，5.61(br s，1H)，5.72-5.80(m，1H)，7.14-7.16(d，J＝10Hz，2H)，7.52-7.54(d，J＝10Hz，2H)，7.61-7.62(m，2H)，7.95-7.98(m，4H)；LC/MS Rt-min(MH+)2.35(816.76)(方法A)。
實(shí)施例415化合物415的制備 化合物415
步驟1 將實(shí)施例413、步驟8的二肽(174mg，0.327mmol)和苯基硼酸(0.06g，0.491mmol)在DMF(4mL)中溶劑化。將溶液置于氮?dú)鈿夥罩?，加?M碳酸鈉水溶液(0.33mL，0.654mmol)。加入5％摩爾的四(三苯基膦)合鈀(0)(0.019mg，0.0164mmol)，使用微波(使用PersonalChemistry Emrys Optimizer設(shè)備)將混和物在150℃下加熱30分鐘。反應(yīng)完成后將沉積出的鈀黑除去。用1當(dāng)量的1N HCl將混合物酸化，經(jīng)注射器過(guò)濾，使用甲醇萃取產(chǎn)物。產(chǎn)物經(jīng)制備型HPLC(柱-5 Xterrac-18 5um 30×100mm，溶劑-80％A/20％B-0％A/100％B(其中溶劑A為10％甲醇、90％H2O、0.1％TFA，溶劑B為90％甲醇、10％H2O、0.1％TFA)，梯度時(shí)間-20min.，保持時(shí)間-1min.，流速-40mL/min，純產(chǎn)物保留時(shí)間-11.28-11.72)純化。用1N NaOH中和含所需產(chǎn)物的洗脫液，并置于離心真空(speed vacuum)下約2h。合并各洗脫液，加入pH 4.0的緩沖液(15mL)。使用1N HCl將pH調(diào)節(jié)至pH 4-5，水層用乙酸乙酯(4×15mL)萃取。有機(jī)層用鹽水(15mL)洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。產(chǎn)物在油泵抽真空下干燥過(guò)夜，得到產(chǎn)物(31.5mg，17％)。
LC/MS Rt-min(MH+)2.54(574.37)(方法A)。
步驟2將實(shí)施例415、步驟1的產(chǎn)物(31.5mg，0.055mmol)溶于DCM(3mL)中，加入N-(1(R)-氨基-2(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)-環(huán)丙烷磺酰胺鹽酸鹽(實(shí)施例1，步驟8)(0.0147g，0.055mmol)。接著在氮?dú)鈿夥罩幸来渭尤隓IPEA(0.048mL，0.275mmol)和HATU(0.029g，0.077mmol)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌3.5小時(shí)，再加入0.3當(dāng)量的N-(1(R)-氨基-2(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)-環(huán)丙烷磺酰胺鹽酸鹽。再將反應(yīng)物攪拌8h。向溶液中加入10ml DCM以增加體積，反應(yīng)物用pH 4.00緩沖溶液(10mL)猝滅。使用1N HCl將混合物酸化至pH為4-5，水相用DCM(4×10mL)萃取。有機(jī)相用pH 4.00緩沖溶液(10mL)和鹽水(10mL)洗滌兩次，隨后經(jīng)硫酸鎂干燥。將所得的溶液真空濃縮并經(jīng)制備型HPLC(柱-YMC ODS-A 30×50mm，溶劑-80％A/20％B-10％A/90％B(其中溶劑A為10％甲醇、90％H2O、0.1％TFA和溶劑B為90％甲醇、10％H2O、0.1％TFA)，梯度時(shí)間-20min.，保持時(shí)間-3min.，流速-30mL/min，純產(chǎn)物保留時(shí)間-19.6)純化。該純化操作并不能得到純的化合物，因而再經(jīng)Biotage12S柱(用10％-50％丙酮/己烷洗脫)純化。該純化步驟得到純的題述化合物，為淡橙色油狀物(22.3mg，38％)。
1H NMRδ1.02-1.45(m，24H)，1.85-1.86(m，1H)，2.03-2.11(m，2H)，2.42-2.46(m，1H)，2.77-2.85(m，1H)，4.10-4.12(m，1H)，4.25(s，1H)，431-4.33(d，J＝10H2，1H)，4.49-4.54(m，1H)，5.03-5.05(d，J＝10Hz，1H)，5.20-5.24(d，J＝20Hz，1H)，5.44(br s，1H)，5.82-5.94(m，1H)，7.33(s，2H)，7.43-7.50(m，6H)，8.09-8.10(d，J＝5Hz，4H)；LC/MS Rt-min(MH+)2.37(786.37)(方法A)。
部分J在部分J中使用以下LC/MS方法柱方法AYMC ODS-A C18S7(4.6×33mm)方法BYMC Xterra ODS S7(3.0×50mm)方法CXterra ms C18(4.6×33mm)方法DYMC ODS-A C18 S3(4.6×33mm)梯度100％溶劑 A/0％溶劑 B-0％溶劑 A/100％溶劑 B
梯度時(shí)間3min保持時(shí)間1min流速5mL/min檢測(cè)器波長(zhǎng)220nm溶劑溶劑A10％甲醇/90％水/0.1％TFA溶劑B90％甲醇/10％水/0.1％TFA。
實(shí)施例420化合物420的制備 化合物420
方案1 步驟1向三苯基膦(16.8g，63.9mmol)的THF(150mL)溶液中滴加入DEAD(10.1mL，63.9mmol)并將溶液在室溫下攪拌30min。緩慢加入Boc-順-(L)-Hyp-OMe(10.5g，42.6mmol)的THF(50mL)溶液，接著分批加入5-溴-吡啶-3-醇(按照F.E.Ziegler等，J.Am.Chem.Soc.，(1973)，95，7458中描述的方法制備)(8.90g，51.1mmol)。所得的溶液在45℃下攪拌18hr。將溶液真空濃縮并將剩余物在乙醚(200mL)和1N NaOH(50mL)間分配。將有機(jī)相干燥(硫酸鎂)，將乙醚溶液過(guò)濾，隨后濃縮至其一半的體積。過(guò)濾除去形成的沉淀物。將濾液真空濃縮并經(jīng)Biotage 65M柱(洗脫液己烷-EtOAc 2∶1，3∶2，1∶1)純化，得到題述化合物(11.9g，69％)，為紅色油狀物。
1H NMR(CDCl3)δ1.42，1.45(s，9H(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體))，2.25-2.30(m，1H)，2.49-2.58(m，1H)，3.75，3.81(s，3H(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體))，3.66-3.81(m，2H(覆蓋))，4.42，4.50(t，J＝8Hz，1H(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體))，4.92(m，1H)，7.36(s，1H)，8.20(s，1H)，8.32(s，1H)。
LC/MS Rt-min(MH+)2.26(401，403)(方法B)。
步驟2將步驟1的產(chǎn)物(2.34g，5.83mmol)溶于DCM(20mL)和TFA(18mL，0.23mole)中并在室溫下攪拌2hr。真空除去揮發(fā)份，將剩余物在乙酸乙酯和水間分配。有機(jī)相用1N HCl(25mL)萃取，將合并的含水萃取液用飽和碳酸氫鈉溶液(40mL)中和。水相用EtOAc萃取(兩次)，合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)，得到題述化合物(1.02g，58％，游離堿)，為無(wú)色油狀物。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.12-2.20(m，2H)，2.94(d，J＝12Hz，1H)，3.19(dd，J＝4.5，12Hz，1H)，3.64(s，3H)，3.90(t，J＝8Hz，1H)，5.07(m，1H)，7.69(s，1H)，8.26(s，1H)，8.29(s，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)0.78(301，302)(方法B)。
步驟3向步驟2的產(chǎn)物(1.02g，3.39mmol)、N-BOC-L-叔-亮氨酸(862mg，3.73mmol)和HOBt(458mg，3.39mmol)在DCM(15mL)中的懸浮液內(nèi)依次加入DIPEA(2.36mL，13.6mmol)和HBTU(1.61g，4.24mmol)。所得的溶液在室溫下攪拌15hr并用DCM猝滅，用pH 4緩沖液和一些1N HCl調(diào)節(jié)pH至4-5。有機(jī)相用pH 4緩沖液、飽和碳酸氫鈉溶液(兩次)和鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。使用Biotage 40M柱(用己烷-EtOAc 3∶2、1∶1洗脫)純化，得到題述化合物(1.48g，85％)，為白色固體物。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.94(s，9H)，1.17(s，9H)，2.16-2.21(m，1H)，2.50(m，(覆蓋)，1H)，3.64(s，3H)，3.82(d，J＝12Hz，1H)，4.06(d，J＝9.5Hz，1H)，4.16(d，J＝12Hz，1H)，4.45(dd，J＝8，9.5Hz，1H)，5.26(m，1H)，6.71(d，J＝9Hz，NH)，7.75(s，1H)，8.28(s，1H)，8.32(s，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.35(514，516)(方法B)。
步驟4向步驟3的產(chǎn)物(98mg，0.19mmol)、四(三苯基膦)合鈀(6.6mg，0.00573mmol)、2M碳酸鈉水溶液(0.191mL，0.381mmol)在甲苯(2mL)中的混合物內(nèi)加入苯基硼酸(29mg，0.24mmol)的甲醇(0.1mL)溶液。將溶液在氮?dú)鈿夥铡?5℃下加熱6小時(shí)。冷卻至室溫后，將混合物用pH4緩沖液猝滅，用EtOAc(2×10mL)萃取，并干燥(硫酸鈉)。使用Biotage 12M柱(用己烷-EtOAc 2∶3洗脫)純化，得到題述化合物(72mg，74％)，為無(wú)色油狀物。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.05(s，9H)，1.31(s，9H)，2.29-2.35(m，1H)，2.68-2.72(m，1H)，3.77(s，3H)，4.00(d，J＝12Hz，1H)，4.24(d，J＝9.5Hz，1H)，4.41(d，J＝12Hz，1H)，4.67(dd，J＝7.5，10Hz，1H)，5.36(m，1H)，6.51(d，J＝9.5Hz，NH)，7.79-7.85(m，3H)，8.39(s，1H)，8.59(s，1H)，8.67-8.68(m，2H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.16(512)(方法B)。
步驟5向步驟4的產(chǎn)物(150mg，0.293mmol)在THF(2mL)和甲醇(2mL)中的溶液內(nèi)加入LiOH(14mg，0.59mmol)的水(2mL)溶液。將混合物在室溫下攪拌2h并用1N HCl猝滅，直至pH值呈中性。真空除去有機(jī)揮發(fā)份，向剩余物中加入pH 4緩沖液。產(chǎn)物萃取至EtOAc(3×10mL)中，用鹽水/pH 4緩沖液洗滌并干燥(硫酸鎂)，在戊烷中研磨后定量得到題述化合物，為白色固體物。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.05(s，9H)，1.32(s，9H)，2.32-2.38(m，1H)，2.69-2.74(m，1H)，3.99(dd，J＝3，12Hz，1H)，4.25(s，1H)，4.40(d，J＝12Hz，1H)，4.64(dd，J＝7.5，9.5Hz，1H)，5.36(m，1H)，7.85-7.87(m，3H)，8.40(s，1H)，8.60(s，1H)，8.69-8.70(m，2H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.03(499)(方法B)。
步驟6向步驟5的產(chǎn)物(93mg，0.19mmol)和實(shí)施例1、步驟8的產(chǎn)物(50mg，0.19mmol)在DCM(2mL)中的懸浮液內(nèi)依次加入DIPEA(0.163mL，0.935mmol)和HATU(92mg，0.243mmol)。所得的混合物在室溫下攪拌18hr并用DCM、pH 4緩沖液和一些1N HCl猝滅以調(diào)節(jié)pH為4-5。分離各層，水相用DCM(10mL)萃取并干燥(硫酸鈉)。使用Biotage 12M柱(用梯度己烷-丙酮20-60％洗脫)純化，得到題述化合物(65mg，49％)，為白色粉末。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.95(s，9H)，1.03-1.05(m，2H)，1.08-1.10(m，2H)，1.26(s，9H)，1.36-1.39(m，1H)，1.69-1.72(m，1H)，2.09-2.21(m，2H)，2.41-2.45(m，1H)，2.92-2.94(m，1H)，3.91(d，J＝11.5Hz，1H)，4.08(d，J＝7.5Hz，1H)，4.16(d，J＝11.5Hz，1H)，4.36(t，J＝8.5Hz，1H)，5.10(d，J＝10Hz，1H)，5.23(d，J＝17.5Hz，1H)，5.38(m，1H)，5.59-5.67(m，1H)，6.54(s，NH)，7.41-7.46(m，1H)，7.50-7.53(m，2H)，7.65(s，1H)，7.74-7.75(m，2H)，8.28(s，1H)，8.52(s，1H)，8.92(s，NH)。
LC/MS Rt-min(MH+)2.08(710)(方法B)。
實(shí)施例421化合物421的制備 化合物421
方案1 步驟1向冷(-5℃)的48％HBr水溶液(35mL)中加入4-氯-吡啶-2-胺(4.18g，32.5mmol；按照K.S.Gudmundsson等；Synth.Commun.(1997)，27，861的方法制備)，接著緩慢加入溴(6.7mL，0.13mole)。20分鐘后，在相同的溫度下加入亞硝酸鈉(8.63g，0.125mole)的水(40mL)溶液，繼續(xù)攪拌30min。并在冰冷卻下，用10N NaOH(約40mL)猝滅反應(yīng)物至呈堿性pH。產(chǎn)物萃取至EtOAc(2×100mL)中并干燥(硫酸鈉)。粗產(chǎn)物使用Biotage 40M柱(洗脫液10％EtOAc/己烷)純化，得到題述化合物(2.50g，40％)，為無(wú)色油狀物，在靜置時(shí)固化。
1H NMR(DMSO-d6)δ7.64(dd，J＝1.5，5.5Hz，1H)，7.94(d，J＝1.5Hz，1H)，8.40(d，J＝5.5Hz，1H)；
LC/MS Rt-min(MH+)1.65(192，194，196)(方法B)。
步驟2室溫、氮?dú)鈿夥罩?，向N-BOC-反式-L-Hyp-OH(3.22g，13.9mmol)的DMSO(30mL)溶液中分批加入叔丁醇鉀(3.90g，34.8mmol)。1.5h后，加入步驟1的產(chǎn)物的DMSO(5mL)溶液。將混合物攪拌過(guò)夜并用水(150mL)猝滅。將溶液用EtOAc(100mL)洗滌。用1N HCl將水相酸化至pH 4。將所述粗甲酸萃取至EtOAc中(三次)并干燥(硫酸鎂)。剩余物為棕色固體物，將其懸浮在THF(20mL)和甲醇(20mL)中并冷卻至0℃。滴加入三甲基甲硅烷基重氮甲烷的己烷溶液(2M，12mL)，15分鐘后，將溶液真空濃縮。使用Biotage 40M柱(洗脫液己烷-EtOAc2∶1，1∶1)純化，得到題述化合物(3.47g，62％)，為灰白色粉末。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.34，1.38(s，9H(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體))，2.24-2.29(m，1H)，2.43-2.50(m，1H)，3.57(d，J＝12.5Hz，1H)，3.64-3.68(m，1H)，3.66，3.69(s，3H(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體))，4.27-4.34(m，1H)，5.21(m，1H)，7.06(d，J＝6Hz，1H)，7.28(s，1H)，8.20(d，J＝6Hz，1H)；LC/MS Rt-min(MH+)2.59(401，403)(方法B)。
步驟3將步驟2的產(chǎn)物(2.00g，4.98mmol)懸浮在4N HCl/二_烷(10mL)和1N HCl/乙醚(40mL)中，在室溫下攪拌過(guò)夜。將所得的懸浮液真空濃縮，并將剩余物在戊烷中研磨，定量得到題述化合物，為白色粉末。
LC/MS Rt-min(MH+)0.24(301，303)(方法B)。
步驟4向步驟3的產(chǎn)物(估計(jì)4.98mmol)、N-環(huán)戊氧基羰基-L-叔-亮氨酸(1.24g，5.10mmol)和HOBt(673mg，4.98mmol)在DCM(25mL)中的懸浮液內(nèi)依次加入DIPEA(4.34mL，24.9mmol)和HBTU(2.36g，6.23mmol)。所得的溶液在室溫下攪拌15hr并用DCM、pH 4緩沖液和10mL 1N HCl猝滅以調(diào)節(jié)pH值為4。水相用D(CM萃取(兩次)。合并的有機(jī)萃取液用飽和碳酸氫鈉溶液(兩次)和鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。使用Biotage 40M柱(用己烷-EtOAc 3∶2 1∶1洗脫)純化，得到題述化合物(2.09g，80％)，為白色泡沫狀物。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.94(s，9H)，1.43-1.74(m，8H)，2.18-2.23(m，1H)，2.46-2.49(m，1H)，3.64(s，3H)，3.87(d，J＝12Hz，1H)，4.08-4.13(m，1H)，4.42(dd，J＝7.5，9.5Hz，1H)，4.78(m，1H)，5.30(m，1H)，7.03-7.05(m，1H)，7.24(s，1H)，8.120(d，J＝6Hz，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.34(526，528)(方法C)。
步驟5向步驟4的產(chǎn)物(206mg，0.391mmol)在THF(2mL)和甲醇(2mL)中的溶液內(nèi)加入LiOH(28mg，1.2mmol)/水(2mL)。室溫下將混合物攪拌2h并用1N HCl猝滅直至pH值呈中性。真空除去有機(jī)揮發(fā)份，向剩余物中加入pH 4緩沖液。將產(chǎn)物萃取至EtOAc(2×20mL)中并干燥(硫酸鎂)，得到題述化合物(196mg，100％)，為白色固體物。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.05(s，9H)，1.60-1.85(m，8H)，2.30-2.36(m，1H)，2.62-2.67(m，1H)，3.97(d，J＝12Hz，1H)，4.26(s，1H)，4.32(d，J＝12Hz，1H)，4.58(dd，J＝7.5，9.5Hz，1H)，4.89(m(覆蓋)，1H)，5.29(m，1H)，7.03-7.05(m，1H)，7.26(s，1H)，8.19(d，J＝6Hz，1H)；LC/MS Rt-min(MH+)2.17(512，514)(方法B)。
步驟6該產(chǎn)物按照實(shí)施例420、步驟4的方法制備(反應(yīng)時(shí)間20h)，以實(shí)施例421、步驟5的產(chǎn)物為原料，收率為20％。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.03(s，9H)，1.45-1.74(m，8H)，2.31-2.37(m，1H)，2.65-2.69(m，1H)，3.99(dd，J＝12，3.0Hz，1H)，4.26(d，J＝9.5Hz，1H)，4.33(d，J＝11.5Hz，1H)，4.60(dd，J＝8.0，9.5Hz，1H)，4.80(m，1H)，5.35(m，1H)，6.72(d，J＝9.0Hz，NH)，7.02(dd，J＝2.5，6.0Hz，1H)，7.39(s，1H)，7.50(m，3H(覆蓋))，7.91(d，J＝6.5Hz，1H)，8.46(d，J＝6.0Hz，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.03(510)(方法A)。
步驟7化合物421按照實(shí)施例420、步驟6的方法制備，以實(shí)施例421、步驟6的產(chǎn)物為原料，收率68％。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.03(s，9H)，1.06-1.09(m，2H)，1.23-1.26(m，2H)，1.43(dd，J＝5.5，9.5Hz，1H)，1.47-1.77(m，8H)，1.88(dd，J＝5.5，8.5Hz，1H)，2.21-2.29(m，2H)，2.50-2.54(m，1H)，2.91-2.96(m，1H)，4.06(dd，J＝3.0，11.5Hz，1H)，4.28-4.30(m，2H)，4.44(dd，J＝7.0，10.5Hz，1H)，4.82(m，1H(覆蓋))，5.12(d，J＝10Hz，1H)，5.30(d，J＝17Hz，1H)，5.37(m，1H)，5.73-5.80(m，1H)，6.92(d，J＝9.5Hz，NH)，6.98(dd，J＝5.5，2.0Hz，1H)，7.37(s，1H)，7.43-7.50(m，3H)，7.90(d，J＝7.0Hz，1H)，8.45(d，J＝5.5Hz，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.37(723)(方法A)。
實(shí)施例422化合物422的制備 化合物422
步驟1 向?qū)嵤├?20、步驟3的產(chǎn)物(102mg，0.198mmol)和四(三苯基膦)合鈀(23mg，0.0198mmol)在甲苯(2mL)中的混合物內(nèi)加入4-三丁基錫烷基-吡啶(87mg，0.24mmol)。在氮?dú)鈿夥罩校瑢⑷芤涸?05℃下加熱20h。冷卻至室溫后，將混合物用飽和碳酸氫鈉溶液猝滅，用EtOAc萃取(2×10mL)并干燥(硫酸鈉)。使用Biotage 12M柱(用梯度己烷-丙酮20-60％洗脫)純化，得到題述化合物(49mg，49％)，為白色固體物。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.05(s，9H)，1.31(s，9H)，2.29-2.35(m，1H)，2.68-2.72(m，1H)，3.77(s，3H)，4.00(d，J＝12Hz，1H)，4.24(d，J＝9.5Hz，1H)，4.41(d，J＝12Hz，1H)，4.67(dd，J＝7.5，10Hz，1H)，5.36(m，1H)，6.51(d，J＝9.5Hz，NH)，7.79-7.85(m，3H)，8.39(s，1H)，8.59(s，1H)，8.67-8.68(m，2H).
LC/MS Rt-min(MH+)1.77(514)(方法C)。
步驟2
該產(chǎn)物按照實(shí)施例420、步驟5的相同方法以定量收率制備，不同之處在于使用實(shí)施例422、步驟1的產(chǎn)物。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.05(s，9H)，1.32(s，9H)，2.32-2.38(m，1H)，2.69-2.74(m，1H)，3.99(dd，J＝3，12Hz，1H)，4.25(s，1H)，4.40(d，J＝12Hz，1H)，4.64(dd，J＝7.5，9.5Hz，1H)，5.36(m，1H)，7.85-7.87(m，3H)，8.40(s，1H)，8.60(s，1H)，8.69-8.70(m，2H).
LC/MS Rt-min(MH+)1.57(500)(方法B)。
步驟3按照實(shí)施例420、步驟6的相同方法制備化合物422，收率51％，為白色固體物，不同之處在于使用實(shí)施例422、步驟2的產(chǎn)物。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.95(s，9H)，1.03(m，1H)，1.08(m，1H)，1.23(s，9H)，1.34-1.37(m，1H)，1.68-1.70(m，1H)，2.12-2.18(m，2H)，2.41-2.45(m，1H)，2.93(m，1H)，3.90(d，J＝11Hz，1H)，4.06(d，J＝9Hz，1H)，4.17(d，J＝11Hz，1H)，4.36(dd，J＝7，10Hz，1H)，5.10(d，J＝12Hz，1H)，5.23(d，J＝16.5Hz，1H)，5.40(m，1H)，5.59-5.66(m，1H)，6.60(d，J＝9Hz，NH)，7.81-7.82(m，3H)，8.38(s，1H)，8.65(s，1H)，8.68-8.70(m，2H)，8.93(s，NH)，10.4(s，NH).
LC/MS Rt-min(MH+)2.14(711)(方法D)。
實(shí)施例423化合物423的制備 化合物423
步驟1 向?qū)嵤├?20、步驟3的產(chǎn)物(1.00g，1.94mmol)在THF(5mL)和甲醇(5mL)中的溶液內(nèi)加入LiOH(140mg，5.83mmol)的水(5mL)溶液。將混合物在室溫下攪拌2h并用1N HCl猝滅，直至pH值呈中性。真空除去有機(jī)揮發(fā)份，加入pH4緩沖液，將產(chǎn)物萃取至EtOAc(3×25mL)中并干燥(硫酸鎂)，得到題述化合物(1.0g，100％)，為白色固體物。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.95(s，9H)，1.27(s，9H)，2.14-2.19(m，1H)，2.47-2.50(m，1H)，3.80(d，J＝11.5Hz，1H)，3.99-4.07(m，2H)，4.15(d，J＝11.5Hz，1H)，4.36(dd，J＝8，10Hz，1H)，5.25(m，1H)，6.66(d，J＝9Hz，NH)，7.75(s，1H)，8.28(s，1H)，8.31(s，1H)，12.5(s，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.47(500，502)(方法A)。
步驟2按照實(shí)施例420、步驟6的方法制備化合物423，以實(shí)施例423、步驟1的產(chǎn)物和實(shí)施例8、步驟3的產(chǎn)物(外消旋混合物P1，(1R，2S)和(1S，2R))為原料，收率為52％。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.93，0.95(s，9H)，1.00-1.09(m，4H)，1.28，1.29(s，9H)，1.37-1.39(m，1H)，1.69-1.72(m，1H)，2.09-2.22(m，2H)，2.36-2.46(m，1H)，2.88-2.94(m，1H)，3.82-3.87(m，1H)，4.02-4.04(m，1H)，4.10-4.15(m，1H)，4.31-4.34(m，1H)，5.10(d，J＝10.5Hz，1H)，5.22-5.28(m，1H)，5.54-5.66(m，1H)，6.56，6.60(d，J＝9.5Hz，NH)，7.74，7.76(s，1H)，8.28-8.29(m，1H)，8.32(s，1H)，8.79，8.89(s，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.42(712，714)(方法B)。
實(shí)施例424化合物424的制備 化合物424步驟1 向?qū)嵤├?23、步驟1的產(chǎn)物(91mg，0.18mmol)、四(三苯基膦)合鈀(10.5mg，0.0091mmol)和3-呋喃基硼酸(25.4mg，0.227mmol)的DMF(2mL)溶液中加入2M碳酸鈉水溶液(0.273mL，0.546mmol)。將混合物在氮?dú)鈿夥铡?10℃下加熱2.5h。冷卻至室溫后，過(guò)濾除去固體，將濾液真空濃縮。剩余物經(jīng)制備型HPLC純化(梯度30-80％B)，得到題述化合物(64mg，72％)，為白色固體物。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.95(s，9H)，1.25(s，9H)，2.17-2.21(m，1H)，2.50(m(覆蓋)，1H)，3.84-3.86(m，1H)，4.09-4.15(m，2H)，4.37(t，J＝9Hz，1H)，5.28(m，1H)，6.67(d，J＝9Hz，NH)，7.08(s，1H)，7.62(s，1H)，7.79(s，1H)，8.17(s，1H)，8.33(s，1H)，8.51(s，1H)，12.6(s，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)1.60(488)(方法B)。
步驟2按照實(shí)施例420、步驟6的方法制備化合物424，以實(shí)施例424、步驟1的產(chǎn)物為原料，收率為55％。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.02(s，9H)，1.05-1.09(m，2H)，1.22-1.25(m，2H)，1.34(s，9H)，1.42-1.45(m，1H)，1.86-1.89(m，1H)，2.21-2.26(m，1H)，2.48-2.52(m，1H)，2.91-2.96(m，1H)，4.02(d，J＝12Hz，1H)，4.24-4.29(m，2H)，4.43-4.47(dd，J＝7.5，10.5Hz，1H)，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.28-5.32(m，1H)，5.73-5.81(m，1H)，6.63(d，J＝9Hz，NH)，6.90(s，1H)，7.60-7.62(m，2H)，8.07(s，1H)，8.12(s，1H)，8.39(s，NH).
LC/MS Rt-min(MH+)2.30(700)(方法E)。
實(shí)施例425化合物425的制備 化合物425按照實(shí)施例421、步驟7的方法制備化合物425，以實(shí)施例421、步驟5的產(chǎn)物為原料，收率為45％。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.95(s，9H)，1.03-1.04(m，1H)，1.08-1.09(m，1H)，1.33-1.36(m，1H)，1.46-1.75(m，9H)，2.08-2.12(m，1H)，2.17(q，J＝9Hz，1H)，2.35-2.38(m，1H)，2.88-2.93(m，1H)，3.91(d，J＝9.5Hz，1H)，4.05-4.10(m，2H)，4.27(dd，J＝10，7Hz，1H)，4.80(m，1H)，5.10(d，J＝12Hz，1H)，5.23(d，J＝16.5Hz，1H)，5.32(m，1H)，5.58-5.66(m，1H)，6.94(d，J＝9Hz，NH)，7.03-7.05(m，1H)，7.26(s，1H)，8.21(d，J＝6Hz，1H)，8.86(s，NH)，10.4(s，NH).
LC/MS Rt-min(MH+)2.56(724，726)(方法D)。
實(shí)施例426化合物426的制備 化合物426步驟1 按照實(shí)施例421、步驟6的方法制備該產(chǎn)物，收率65％，不同之處在于使用3-呋喃硼酸。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.03(s，9H)，1.49-1.76(m，8H)，2.30-2.35(m，1H)，2.63-2.67(m，1H)，3.98(d，J＝12Hz，1H)，4.26(t，J＝9Hz，1H)，4.31(d，J＝12Hz，1H)，4.58(t，J＝8.0Hz，1H)，5.32(m，1H)，6.71(d，J＝9.5Hz，NH)，6.92(dd，J＝2.5，6.0Hz，1H)，6.98(s，1H)，7.25(d，J＝2.5Hz，1H)，7.60(s，1H)，8.15(s，1H)，8.35(d，J＝5.5Hz，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)1.94(500)(方法D)。
步驟2按照實(shí)施例421、步驟7的方法制備化合物426，以實(shí)施例426、步驟1的產(chǎn)物為原料，收率為57％。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.95(s，9H)，1.03-1.04(m，2H)，1.08-1.09(m，2H)，1.34-1.71(m，8H)，2.09-2.20(m，2H)，2.37-2.41(m，1H)，2.93(m，1H)，3.96(d，J＝9.5Hz，1H)，4.07-4.11(m，2H)，4.29(m，1H)，4.78(m，1H)，5.10(d，J＝10.5Hz，1H)，5.23(d，J＝17Hz，1H)，5.34(m，1H)，5.59-5.66(m，1H)，6.87-6.91(m，2H)，7.08(s，1H)，7.27(s，1H)，7.75(s，1H)，8.33(s，1H)，8.39(d，J＝6Hz，1H)，8.90(s，NH)，10.4(s，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.38(712)(方法D)。
實(shí)施例427化合物427的制備 化合物427步驟1 按照實(shí)施例421、步驟6的方法制備該產(chǎn)物，收率86％，不同之處在于使用4-氟苯基硼酸。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.03(s，9H)，1.44-1.75(m，8H)，2.30-2.36(m，1H)，2.64-2.69(m，1H)，3.99(dd，J＝12，3.5Hz，1H)，4.26(d，J＝9.5Hz，1H)，4.32(d，J＝12Hz，1H)，4.59(dd，J＝8.0，9.5Hz，1H)，4.81(m，1H)，5.34(m，1H)，6.73(d，J＝9.5Hz，NH)，6.99(dd，J＝2.5，6.0Hz，1H)，7.20(t，2H(覆蓋))，7.36(s，1H(覆蓋))，7.94-7.97(m，2H)，8.44(d，J＝6.0Hz，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.22(528)(方法A)。
步驟2按照實(shí)施例421、步驟7的方法制備化合物427，以實(shí)施例427、步驟1的產(chǎn)物為原料，收率為53％。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.03(s，9H)，1.06-1.09(m，2H)，1.23-1.26(m，2H)，1.43(dd，J＝5.0，9.5Hz，1H)，1.47-1.78(m，8H)，1.88(dd，J＝5.5，8.0Hz，1H)，2.21-2.29(m，2H)，2.49-2.53(m，1H)，2.91-2.96(m，1H)，4.05(dd，J＝3.0，11.5Hz，1H)，4.27-4.29(m，2H)，4.44(dd，J＝7.0，10.5Hz，1H)，4.83(m，1H(覆蓋))，5.12(d，J＝10Hz，1H)，5.29(d，J＝17Hz，1H)，5.37(m，1H)，5.73-5.80(m，1H)，6.93(d，J＝9.5Hz，NH)，6.98(m，1H)，7.21(t，J＝9.0Hz，2H)，7.36(s，1H)，7.94-7.97(m，2H)，8.44(d，J＝6.0Hz，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.42(741)(方法A)。
實(shí)施例428化合物428的制備 化合物428
步驟1 按照實(shí)施例421、步驟6的方法制備該產(chǎn)物，收率37％，不同之處在于使用4-甲氧基苯基硼酸。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.03(s，9H)，1.45-1.74(m，8H)，2.31-2.36(m，1H)，2.64-2.68(m，1H)，3.85(s，3H)，3.98(dd，J＝12，3.5Hz，1H)，4.25(d，J＝9.0Hz，1H)，4.33(d，J＝11.5Hz，1H)，4.59(dd，J＝8.0，10Hz，1H)，4.77(m，1H)，5.36(m，1H)，6.72(d，J＝9.0Hz，NH)，7.01(m，1H)，7.04(d，J＝9.0Hz，2H)，7.37(d，J＝2.0Hz)，7.86(d，J＝9.0Hz，2H)，8.42(d，J＝6.0Hz，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.09(540)(方法A)。
步驟2按照實(shí)施例420、步驟6的方法制備化合物428，以實(shí)施例428、步驟1的產(chǎn)物為原料，收率為72％。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.03(s，9H)，1.06-1.09(m，2H)，1.23-1.25(m，2H)，1.43(dd，J＝5.5，9.5Hz，1H)，1.48-1.77(m，8H)，1.88(dd，J＝5.0，8.0Hz，1H)，2.21-2.28(m，2H)，2.50-2.54(m，1H)，2.91-2.96(m，1H)，3.85(s，3H)，4.05(d，J＝12Hz，1H)，4.27-4.29(m，2H)，4.44(dd，J＝7.0，10.5Hz，1H)，4.84(m，1H(覆蓋))，5.12(d，J＝10Hz，1H)，5.30(d，J＝17Hz，1H)，5.37(m，1H)，5.72-5.80(m，1H)，6.89(d，J＝9.5Hz，NH)，6.95(dd，J＝2.5，6.0Hz，1H)，7.03(d，J＝9.0Hz，1H)，7.33(d，J＝2.5Hz，1H)，7.86(d，J＝9.0Hz，2H)，8.41(d，J＝6.0Hz，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.40(753)(方法A)。
實(shí)施例429化合物429的制備 化合物429步驟1 按照實(shí)施例421、步驟6的方法制備該產(chǎn)物，收率22％，不同之處在于使用2-噻吩硼酸。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.03(s，9H)，1.46-1.74(m，8H)，2.29-2.35(m，1H)，2.63-2.67(m，1H)，3.97(d，J＝12Hz，1H)，4.26(d，J＝8.5Hz，1H)，4.31(d，J＝12Hz，1H)，4.60(t，J＝8.5Hz，1H)，4.81(m，1H(覆蓋))，5.31(m，1H)，6.87-6.89(m，2H)，7.13(d，J＝5.0Hz，1H)，7.52(s，1H(覆蓋))，7.70(d，J＝2.5Hz，1H)，8.32(d，J＝6.0Hz，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)1.96(516)(方法A)。
步驟2按照實(shí)施例420、步驟6的方法制備化合物429，以實(shí)施例429、步驟1的產(chǎn)物為原料，收率為57％。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.02(s，9H)，1.07(m，2H)，1.24(m，2H)，1.43(dd，J＝5.5，9.5Hz，1H)，1.53-1.78(m，8H)，1.88(dd，J＝5.5，8.0Hz，1H)，2.21-2.28(m，2H)，2.49-2.53(m，1H)，2.92-2.96(m，1H)，4.04(d，J＝10Hz，1H)，4.26-4.29(m，2H)，4.43(t，J＝9.0Hz，1H)，4.82(m，1H(覆蓋))，5.12(d，J＝10.5Hz，1H)，5.29(d，J＝17.5Hz，1H)，5.35(m，1H)，5.73-5.80(m，1H)，6.89(d，J＝4.5Hz，1H)，6.92(d，J＝4.5Hz，NH)，7.13(s，1H)，7.35(s，1H)，7.51(d，J＝4.5Hz，1H)，7.70(s，1H)，8.32(d，J＝5.5Hz，1H)。
LC/MS Rt-min(MH+)2.37(728)(方法A)。
實(shí)施例430化合物430的制備 化合物430步驟1 按照實(shí)施例421、步驟6的方法制備該產(chǎn)物，收率17％，不同之處在于使用3-噻吩硼酸。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.03(s，9H)，1.43-1.74(m，8H)，2.30-2.36(m，1H)，2.64-2.68(m，1H)，3.98(dd，J＝11.5，3.0Hz，1H)，4.25(d，J＝9.0Hz，1H)，4.32(d，J＝11.5Hz，1H)，4.60(dd，J＝8.0，9.5Hz，1H)，4.80(m，1H(覆蓋))，5.33(m，1H)，6.96(dd，J＝2.5，6.0Hz，1H)，7.36(s，1H(覆蓋))，7.51(s，1H(覆蓋))，7.67(d，J＝5.0Hz，1H)，8.03(s，1H)，8.39(d，J＝6.0Hz，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)1.94(516)(方法A)。
步驟2按照實(shí)施例420、步驟6的方法制備化合物430，以實(shí)施例430、步驟1的產(chǎn)物為原料，收率為45％。
1H NMR(甲醇-d4)δ 1.02(s，9H)，1.06(m，2H)，1.29(m，2H)，1.43(dd，J＝5.5，9.5Hz，1H)，1.43-1.75(m，8H)，1.87(dd，J＝6.0，7.5Hz，1H)，2.20-2.27(m，2H)，2.49-2.53(m，1H)，2.93-2.95(m，1H)，4.05(d，J＝9.0Hz，1H)，4.27-4.29(m，2H)，4.42-4.45(m，1H)，4.85(m，1H(覆蓋))，5.12(d，J＝10.0Hz，1H)，5.29(d，J＝17.5Hz，1H)，5.36(m，1H)，5.73-5.80(m，1H)，6.92-6.94(m，2H)，7.35(s，1H)，7.51(s，1H)，7.66(d，J＝4.5Hz，1H)，8.00(s，1H)，8.38(d，J＝5.5Hz，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.36(728)(方法A)。
實(shí)施例431化合物431的制備 化合物431
步驟1 向?qū)嵤├?21、步驟5的產(chǎn)物(100mg，0.195mmol)和四(三苯基膦)合鈀(23mg，0.0195mmol)在二_烷(3mL)中的混合物內(nèi)加入2-三丁基甲錫烷基噻唑(95mg，0.254mmol)和三乙胺(82μL，0.585mmol)。將溶液在氮?dú)鈿夥铡?5℃下加熱5h，隨后在105℃下加熱15h。冷卻至室溫后，將混合物過(guò)濾并濃縮。剩余物經(jīng)制備型HPLC(梯度30-80％B)純化。合并的洗脫液在pH4緩沖液和二氯甲烷間分配。水相用二氯甲烷萃取，合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。得到題述化合物(31mg)，為無(wú)色油狀物，包含大量的三丁基甲錫烷基剩余雜質(zhì)。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.03(s，9H)，1.4(m，8H(覆蓋))，2.32-2.36(m，1H)，2.64-2.68(m，1H)，4.00(d，J＝11.5Hz，1H)，4.25(s，1H)，4.33(d，J＝11.5Hz，1H)，4.60(t，J＝8.5Hz，1H)，4.80(m，1H(覆蓋))，5.33(m，1H)，7.03(br s，1H)，7.70(s，1H)，7.73(s，1H)，7.93(s，1H)，8.41(d，J＝5.5Hz，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.25(517)(方法A)。
步驟2按照實(shí)施例420、步驟6的方法制備化合物431，以實(shí)施例431、步驟1的產(chǎn)物為原料，收率為41％。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.02(s，9H)，1.06-1.70(m，13H)，1.86-1.89(m，1H)，2.22-2.31(m，2H)，2.51-2.55(m，1H)，2.92-2.94(m，1H)，4.06(d，J＝11.5Hz，1H)，4.23-4.32(m，2H)，4.44-4.47(m，1H)，4.82(m，1H(覆蓋))，5.12(d，J＝11Hz，1H)，5.30(d，J＝17Hz，1H)，5.36(m，1H)，5.73-5.81(m，1H)，6.90(d，J＝9.0Hz，NH)，7.04(m，1H)，7.71(m，2H)，7.93(s，1H)，8.42(d，J＝5.5Hz，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.46(729)(方法A)。
實(shí)施例432化合物432的制備 化合物432步驟1 向?qū)嵤├?23、步驟1的產(chǎn)物(102mg，0.204mmol)和四(三苯基膦)合鈀(24mg，0.0204mmol)在二_烷(3mL)中的混合物內(nèi)加入2-三丁基甲錫烷基噻唑(99mg，0.265mmol)和三乙胺(85μL，0.612mmol)。將溶液在氮?dú)鈿夥铡?5℃下加熱5h，隨后在105℃下加熱15h。冷卻至室溫后，將混合物過(guò)濾并濃縮。剩余物經(jīng)制備型HPLC(梯度30-80％B)純化。合并的洗脫液用濃氨水中和并濃縮。剩余物在pH4緩沖液和二氯甲烷間分配。水相用二氯甲烷萃取，合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。得到題述化合物(33mg)，為無(wú)色油狀物，包含大量的三丁基甲錫烷基剩余雜質(zhì)。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.03(s，9H)，1.30(s，9H)，2.28-2.32(m，1H)，2.62-2.67(m，1H)，3.98(d，J＝11.5Hz，1H)，4.21(s，1H)，4.34(d，J＝11.5Hz，1H)，4.58(t，J＝9.0Hz，1H)，5.31(m，1H)，7.71(d，J＝2.5Hz，1H)，7.94-7.96(m，2H)，8.33(s，1H)，8.73(s，1H).
LC/MS Rt-min(MH+-Boc)2.21(405)(方法A)。
步驟2按照實(shí)施例420、步驟6的方法制備化合物432，以實(shí)施例432、步驟1的產(chǎn)物為原料，收率為42％。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.02(s，9H)，1.07-1.08(m，2H)，1.24(m，2H)，1.32(s，9H)，1.44(m，1H(覆蓋))，1.86-1.89(m，1H)，2.21-2.29(m，2H)，2.51-2.55(m，1H)，2.93-2.95(m，1H)，4.04(d，J＝12Hz，1H)，4.23(d，J＝9.5Hz，1H)，4.33(d，J＝12Hz，1H)，4.47(t，J＝9.5Hz，1H)，5.12(d，J＝10.0Hz，1H)，5.30(d，J＝18Hz，1H)，5.36(m，1H)，5.72-5.81(m，1H)，6.62(d，J＝8.5Hz，NH)，7.73(s，1H)，7.96(m，1H)，8.34(s，1H)，8.74(s，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.42(717)(方法A)。
實(shí)施例433化合物433的制備 化合物433步驟1 向?qū)嵤├?20、步驟3的產(chǎn)物(1.00g，1.94mmol)和四(三苯基膦)合鈀(112mg，0.097mmol)在二_烷(15mL)中的混合物內(nèi)加入三丁基(1-乙氧基乙烯基)錫(876mg，2.43mmol)。將溶液在氮?dú)鈿夥铡?05℃下加熱6h。冷卻至室溫后，將混合物過(guò)濾并濃縮。剩余物在飽和碳酸氫鈉溶液和乙酸乙酯間分配。水相用乙酸乙酯萃取，合并的有機(jī)萃取液用5％KF水溶液和鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。使用Biotage 40M柱(洗脫梯度己烷-EtOAc 40-70％)純化，得到題述化合物(624mg，64％)，為黃色油狀物。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.95(s，9H)，1.27(s，9H)，1.35(t，J＝7.0Hz，3H)，2.16-2.21(m，1H)，2.50(m，1H(覆蓋))，3.64(s，3H)，3.85(d，J＝11Hz，1H)，3.90(q，J＝7.0Hz，2H)，4.09(d，J＝9.0Hz，1H)，4.13(d，J＝11Hz，1H)，4.40(d，J＝2.5Hz，1H)，4.45(t，J＝8.0Hz，1H)，4.91(d，J＝2.5Hz，1H)，5.27(m，1H)，6.69(d，J＝9.0Hz，NH)，7.48(s，1H)，8.25(s，1H)，8.46(s，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.14(507)(方法B)。
步驟2 向?qū)嵤├?33、步驟1的產(chǎn)物(125mg，0.247)在THF(3mL)和水(111μL，6.18mmol)中的溶液內(nèi)加入NBS(44mg，0.247mmol)。在室溫下攪拌20min后，將混合物濃縮并在乙酸乙酯和鹽水間分配。將有機(jī)相干燥(硫酸鎂)，得到中間體溴代甲基酮。將該中間體溶于DMF，用硫代乙酰胺(24mg，0.321mmol)和碳酸氫鈉(31mg，0.371mmol)處理。將混合物在室溫下攪拌2h，濃縮并懸浮于飽和碳酸氫鈉溶液中。產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取(2×)，用鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。使用Biotage 12M柱(洗脫梯度己烷-EtOAc 50-70％)純化，得到題述化合物(50mg，38％)，為淺色油狀物。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.02(s，9H)，1.31(s，9H)，2.27-2.31(m，1H)，2.63-2.67(m，1H)，2.77(s，3H)，3.74(s，3H)，3.98(d，J＝10.0Hz，1H)，4.22(d，J＝9.5Hz，1H)，4.34(d，J＝10.5Hz，1H)，4.64(t，J＝9.0Hz，1H)，5.29(m，1H)，6.38(s，NH)，7.87(s，1H)，7.91(s，1H)，8.20(s，1H)，8.71(s，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)1.96(533)(方法B)。
步驟3 按照實(shí)施例420、步驟5的方法制備該產(chǎn)物，不同之處在于使用實(shí)施例433、步驟2的產(chǎn)物。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.96(s，9H)，1.25(s，9H)，2.18-2.23(m，1H)，2.50(m，1H(覆蓋))，2.73(s，3H)，3.86(d，J＝11.5Hz，1H)，4.10(d，J＝9.0Hz，1H)，4.14(d，J＝11.5Hz，1H)，4.39(t，J＝8.5Hz，1H)，5.30(m，1H)，6.60(br s，NH)，7.84(s，1H)，8.14(s，1H)，8.24(s，1H)，8.78(s，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)1.84(519)(方法B)。
步驟4按照實(shí)施例420、步驟6的方法制備化合物433，以實(shí)施例433、步驟3的產(chǎn)物為原料，收率46％。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.05(s，9H)，1.09-1.11(m，2H)，1.26-1.29(m，2H)，1.36(s，9H)，1.45-1.48(m，1H)，1.89-1.92(m，1H)，2.25-2.30(m，2H)，2.53-2.57(m，1H)，2.80(s，3H)，2.94-3.00(m，1H)，4.06(d，J＝10.5Hz，1H)，4.27(s，1H)，4.32(d，J＝12Hz，1H)，4.48(dd，J＝10.5，7.0Hz，1H)，5.15(d，J＝10.5Hz，1H)，5.33(d，J＝17Hz，1H)，5.35(m，1H)，5.76-5.83(m，1H)，7.93(s，1H)，7.95(m，1H)，8.22(s，1H)，8.74(s，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.21(732)(方法B)。
實(shí)施例434化合物434的制備 化合物434步驟1 向?qū)嵤├?21、步驟1的產(chǎn)物(300mg，1.56mmol)和四(三苯基膦)合鈀(90mg，0.078mmol)在DMF(6mL)中的溶液內(nèi)加入1-甲基-2-(三丁基甲錫烷基)-1H-吡咯(750mg，2.03mmol)和三乙胺(0.435mL，3.12mmol)。將溶液在微波爐(Emrys，Personal Chemistry)中，在氮?dú)鈿夥铡?50℃下加熱30min。冷卻至室溫后，混合物用乙醚和5％KF水溶液稀釋并過(guò)濾。水相用乙醚(2×)萃取。合并的有機(jī)萃取液用5％KF水溶液、水和鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。使用Biotage 25S柱(洗脫梯度己烷-乙醚0-5％)純化，得到題述化合物(169mg，56％)，為無(wú)色油狀物。
1H NMR(DMSO-d6)δ3.94(s，3H)，6.10(s，1H)，6.77(d，J＝2.0Hz，1H)，6.93(s，1H)，7.27(d，J＝4.0Hz，1H)，7.77(s，1H)，8.49(d，J＝5.0Hz，1H)，LC/MS Rt-min(MH+)1.15(193，195)(方法B)。
步驟2 按照實(shí)施例421、步驟2的方法制備該產(chǎn)物，以實(shí)施例434、步驟1的產(chǎn)物為原料，收率為39％。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.42，1.43(s，9H(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體))，2.27-2.34(m，1H)，2.55-2.62(m，1H)，3.75(m，2H)，3.76、3.74(s，3H(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體))，3.84(s，3H)，4.39-4.45(m，1H)，5.19(m，1H)，6.10(m，1H)，6.49(m，1H)，6.78(s，1H)，6.80-6.82(m，1H)，7.07(s，1H)，8.35(d，J＝6.0Hz，1H)。
LC/MS Rt-min(MH+，甲酸)1.49(389)(方法B)。
步驟3 將實(shí)施例434、步驟2的產(chǎn)物(90mg，0.22mmol)溶于二氯甲烷(1.5mL)和TFA(1.0mL，9.0mmol)中。將溶液在室溫下攪拌45min并濃縮。剩余物用1N HCl/乙醚(5mL)處理并濃縮。定量收率得到題述化合物，為淺色油狀物。
LC/MS Rt-min(MH+)0.32(302)(方法B)。
步驟4 按照實(shí)施例420、步驟3的方法制備該產(chǎn)物，以實(shí)施例434、步驟3的產(chǎn)物為原料，收率為80％。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.02(s，9H)，1.31(s，9H)，2.25-2.31(m，1H)，2.61-2.64(m，1H)，3.73(s，3H)，3.84(s，3H)，3.97-3.99(m，1H)，4.22(d，J＝9.5Hz，1H)，4.32(d，J＝11.5Hz，1H)，4.61(t，J＝7.5Hz，1H)，5.27(m，1H)，6.10(m，1H)，6.42(br d，J＝9.0Hz，NH)，6.49(m，1H)，6.78(m，1H)，6.81(m，1H)，7.07(s，1H)，8.34(d，J＝5.5Hz，1H)。
LC/MS Rt-min(MH+)1.81(516)(方法B)。
步驟5 向?qū)嵤├?34、步驟4的產(chǎn)物(92mg，0.179mmol)在THF(1mL)和甲醇(1mL)中的溶液內(nèi)加入LiOH(13mg，0.536mmol)的水(1mL)溶液。將混合物在室溫下攪拌1.5h，用1N HCl猝滅，直至呈中性pH值。真空除去有機(jī)揮發(fā)份，剩余物經(jīng)制備型HPLC(梯度10-80％B)純化。合并的洗脫份用濃氨水中和并濃縮。剩余物在pH4緩沖液和乙酸乙酯間分配。水相用乙酸乙酯萃取，合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。得到題述化合物(56mg，62％)，為白色固體物。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.03(s，9H)，1.32(s，9H)，2.31-2.35(m，1H)，2.62-2.67(m，1H)，3.85(s，3H)，3.98(d，J＝11.5Hz，1H)，4.21-4.23(m，1H)，4.33(d，J＝11.5Hz，1H)，4.58(t，J＝8.0Hz，1H)，5.31(m，1H)，6.12(m，1H)，6.40(br d，J＝8.0Hz，NH)，6.52(m，1H)，6.82(m，1H)，6.87(m，1H)，7.12(s，1H)，8.36(d，J＝5.5Hz，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)1.73(502)(方法B)。
步驟6按照實(shí)施例420、步驟6的方法制備化合物434，以實(shí)施例434、步驟5的產(chǎn)物為原料，收率為68％。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.02(s，9H)，1.06-1.09(m，2H)，1.23-1.26(m，2H)，1.33(s，9H)，1.42-1.45(m，1H)，1.86-1.89(m，1H)，2.21-2.27(m，2H)，2.47-2.51(m，1H)，2.91-2.96(m，1H)，3.85(s，3H)，4.04(d，J＝12Hz，1H)，4.24(d，J＝10.0Hz，1H)，4.28(d，J＝12Hz，1H)，4.43(dd，J＝10.0，7.0Hz，1H)，5.12(d，J＝10.0Hz，1H)，5.30(d，J＝17Hz，1H)，5.32(m，1H)，5.73-5.80(m，1H)，6.10(m，1H)，6.49(m，1H)，6.64(br d，J＝9.0Hz，NH)，6.79(m，1H)，6.82(m，1H)，7.08(s，1H)，8.35(d，J＝5.5Hz，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.08(714)(方法B)。
實(shí)施例435化合物435的制備 化合物435步驟1 按照實(shí)施例421、步驟2的方法制備該產(chǎn)物，以2，6-二溴吡啶為原料，收率為74％。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.34、1.38(s，9H(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體))，2.23-2.31(m，1H)，2.43-2.47(m，1H(覆蓋))，3.53(d，J＝12Hz，1H)，3.66、3.69(s，3H(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體))，3.72-3.75(m，1H)，4.29-4.34(m，1H)，5.42(m，1H)，6.89(d，J＝7.5Hz，1H)，7.26(d，J＝7.5Hz，1H)，7.68(t，J＝7.5Hz，1H)。
LC/MS Rt-min(MH+)2.62(523，425)(方法A)。
步驟2 按照實(shí)施例420、步驟2的方法制備該產(chǎn)物，以實(shí)施例435、步驟1的產(chǎn)物為原料，定量收率。
LC/MS Rt-min(MH+)1.42(301，303)(方法B)。
步驟3 按照實(shí)施例420、步驟3的方法制備該產(chǎn)物，以實(shí)施例435、步驟2的產(chǎn)物為原料，收率為96％。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.95(s，9H)，1.28(s，9H)，2.20-2.26(m，1H)，2.45-2.48(m，1H)，3.64(s，3H)，3.94(d，J＝9.5Hz，1H)，4.01-4.08(m，2H)，4.45(t，J＝8.5Hz，1H)，5.53(m，1H)，6.66(d，J＝7.0Hz，1H)，6.82(d，J＝7.0Hz，1H)，7.25(d，J＝7.0Hz，1H)，7.64-7.69(m，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.73(514，516)(方法A)。
步驟3 按照實(shí)施例420、步驟5的方法制備該產(chǎn)物，以實(shí)施例435、步驟2的產(chǎn)物為原料，定量收率。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.95(s，9H)，1.28(s，9H)，2.19-2.25(m，1H)，2.43-2.47(m，1H)，3.94(m，1H)，4.01-4.08(m，2H)，4.36(t，J＝8.5Hz，1H)，5.52(m，1H)，6.65(d，J＝8.0Hz，1H)，6.82(d，J＝7.5Hz，1H)，7.25(d，J＝7.5Hz，1H)，7.67(t，J＝7.5Hz，1H)，12.6(s，1H).
LC/MS Rt-min(MNa+)2.51(522，524)(方法B)。
步驟4 向?qū)嵤├?35、步驟3的產(chǎn)物(125mg，0.250mmol)、四(三苯基膦)合鈀(14.4mg，0.0125mmol)和3-呋喃基硼酸(35mg，0.313mmol)在DMF(2mL)和水(0.025mL)中的溶液內(nèi)加入碳酸銫(244mg，0.750mmol)。將混合物在氮?dú)鈿夥铡?05℃下加熱3h。冷卻至室溫后過(guò)濾除去固體物，將濾液真空濃縮。剩余物經(jīng)制備型HPLC(梯度30-100％B)純化。合并的洗脫份用濃氨水中和并濃縮。剩余物在pH4緩沖液和二氯甲烷間分配。水相用二氯甲烷萃取，合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。得到題述化合物(90mg，76％)，為白色泡沫狀物。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.06(s，9H)，1.39(s，9H)，2.36-2.42(m，1H)，2.61-2.65(m，1H)，4.12(dd，J＝4.0.11Hz，1H)，4.19(d，J＝11Hz，1H)，4.28(s，1H)，4.62(t，J＝8.5Hz，1H)，5.79(m，1H)，6.64(d，J＝8.0Hz，1H)，6.96(s，1H)，7.22(d，J＝8.0Hz，1H)，7.58(m，1H)，7.66(t，J＝8.0Hz，1H)，8.13(s，1H).
LC/MS Rt-min(MNa+)2.53(511)(方法B)。
步驟5按照實(shí)施例420、步驟6的方法制備化合物435，以實(shí)施例435、步驟4的產(chǎn)物為原料，收率為57％。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.96(s，9H)，1.02-1.05(m，2H)，1.09-1.11(m，2H)，1.19(s，9H)，1.35-1.38(m，1H)，1.71(dd，J＝5.5，8.0Hz，1H)，2.15-2.22(m，2H)，2.37-2.41(m，1H)，2.93(br m，1H)，4.03-4.08(m，3H)，4.35(br t，1H)，5.10(d，J＝10.5Hz，1H)，5.24(d，J＝17Hz，1H)，5.60-5.67(m，1H)，5.73(m，1H)，6.47(br s，1H)，6.64(d，J＝7.5Hz，1H)，7.04(s，1H)，7.31(d，J＝7.5Hz，1H)，7.72(t，J＝7.5Hz，1H)，7.77(s，1H)，8.32(s，1H)，8.92(s，NH)，10.4(s，NH).
LC/MS Rt-min(MNa+)2.64(723)(方法B)。
實(shí)施例436化合物436的制備 化合物436
步驟1 按照實(shí)施例435、步驟4的方法制備該產(chǎn)物，收率73％，不同之處在于使用苯基硼酸。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.06(s，9H)，1.39(s，9H)，2.39-2.45(m，1H)，2.65-2.77(m，1H)，4.18-4.30(m，3H)，4.64(t，J＝8.0Hz，1H)，5.72(m，1H)，6.74(d，J＝8.0Hz，1H)，7.44-7.55(m，4H)，7.75(t，J＝8.0Hz，1H)，8.07(d，J＝7.5Hz，2H).
LC/MS Rt-min(MNa+)2.72(521)(方法B)。
步驟2按照實(shí)施例420、步驟6的方法制備化合物436，以實(shí)施例436、步驟1的產(chǎn)物為原料，收率為66％。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.96(s，9H)，1.04-1.05(m，2H)，1.09(m，2H)，1.30(s，9H)，1.36-1.39(m，1H)，1.71(t，J＝7.5Hz，1H)，2.16-2.24(m，2H)，2.41-2.45(m，1H)，2.93(m，1H)，4.06-4.09(m，3H)，4.38(br t，1H)，5.10(d，J＝10.5Hz，1H)，5.30(d，J＝17Hz，1H)，5.60-5.67(m，1H)，5.80(m，1H)，6.49(br s，1H)，6.75(d，J＝7.5Hz，1H)，7.43-7.51(m，3H)，7.59(d，J＝7.5Hz，1H)，7.81(t，J＝7.5Hz，1H)，8.09(d，J＝7.0Hz，2H)，8.91(s，NH)，10.4(s，NH).
LC/MS Rt-min(MH+)2.77(711)(方法B)。
實(shí)施例437化合物437的制備 化合物437步驟1 向2-溴-6-甲基-吡啶(7.65g，44.4mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中加入mCPBA(77％，12.9g，57.7mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液。將溶液在環(huán)境溫度下攪拌18h。將混合物用固體碳酸鈉中和并加入水。水相用二氯甲烷(2×)萃取。合并的有機(jī)萃取液用5％硫代硫酸鈉、5％碳酸鈉和鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。使用Biotage 40M柱(洗脫梯度己烷-乙酸乙酯40-70％)純化，得到題述化合物(5.0g，60％)為無(wú)色油狀物，該產(chǎn)物在靜置時(shí)固化。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.43(s，3H)，7.15(t，J＝8.0Hz，1H)，7.50(s，1H)，7.78(s，1H)。
LC/MS Rt-min(MH+)0.32(188，190)(方法B)。
步驟2
向?qū)嵤├?37、步驟1的產(chǎn)物(4.5g，24mmol)的DMF(20mL)溶液中分批加入POBr3(8.2g，29mmol)。發(fā)生劇烈的放熱反應(yīng)并形成沉淀。將混合物在環(huán)境溫度下靜置2h?；旌衔镉盟惋柡吞妓釟溻c溶液猝滅，直至呈中性pH值。水相用乙醚(2×)萃取。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。使用Biotage 40M柱(洗脫梯度己烷-乙醚0-10％)純化，得到題述化合物(1.78g，30％)，為無(wú)色油狀物。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.45(s，3H)，7.64(s，1H)，7.80(s，1H)。
LC/MS Rt-min(MH+)1.85(250，252，254)(方法B)。
步驟3 按照實(shí)施例421、步驟2的方法制備該產(chǎn)物，以實(shí)施例437、步驟1的產(chǎn)物為原料，收率為46％。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.34，1.38(s，9H(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體))，2.20-2.27(m，1H)，2.38(s，3H)，2.43-2.50(m，1H)，3.55(d，J＝12.5Hz，1H)，3.64-3.67(m，1H)，3.66、3.69(s，3H(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體))，4.26-4.32(m，1H)，5.17(m，1H)，6.93(s，1H)，7.08(s，1H)。
LC/MS Rt-min(MH+)2.17(415，417)(方法B)。
步驟4 按照實(shí)施例420、步驟3的方法制備該產(chǎn)物，以實(shí)施例437、步驟3的產(chǎn)物為原料，定量收率。
步驟4 按照實(shí)施例420、步驟3的方法制備該產(chǎn)物，以實(shí)施例437、步驟3的產(chǎn)物為原料，收率為75％。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.94(s，9H)，1.27(s，9H)，2.16-2.21(m，1H)，2.36(s，3H)，2.48(m，1H(覆蓋))，3.64(s，3H)，3.83(d，J＝10.5Hz，1H)，4.06(d，J＝8.5Hz，1H)，4.14(d，J＝10.5Hz，1H)，4.42(t，J＝9.0Hz，1H)，5.27(m，1H)，6.68(br s，NH)，6.88(s，1H)，7.03(s，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)2.19(528，530)(方法B)。
步驟5 按照實(shí)施例420、步驟5的方法制備該產(chǎn)物，以實(shí)施例437、步驟4的產(chǎn)物為原料，定量收率。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.95(s，9H)，1.27(s，9H)，2.15-2.19(m，1H)，2.36(s，3H)，2.44-2.48(m，1H)，3.81(d，J＝10.5Hz，1H)，4.04-4.06(m，1H)，4.13(d，J＝10.5Hz，1H)，4.33(t，J＝8.5Hz，1H)，5.26(m，1H)，6.66(br d，J＝9.0Hz，NH)，6.88(s，1H)，7.03(s，1H).
LC/MS Rt-min(MNa+)2.14(536，538)(方法B)。
步驟6 向?qū)嵤├?37、步驟5的產(chǎn)物(101mg，0.196mmol)、四(三苯基膦)合鈀(11.3mg，0.0098mmol)和苯基硼酸(34mg，0.275mmol)在DMF(2mL)中的溶液內(nèi)加入2M碳酸鈉水溶液(0.294mL，0.588mmol)。將試管密封并在微波爐(Emrys，Personal Chemistry)中，在氮?dú)鈿夥铡?50℃下加熱15min。冷卻至室溫后，混合物用1N HCl(0.5mL)酸化。過(guò)濾除去固體，將濾液真空濃縮。剩余物經(jīng)制備型HPLC(梯度20-80％B)純化。合并的洗脫份用濃氨水中和并濃縮。剩余物在pH4緩沖液和乙酸乙酯間分配。水相用乙酸乙酯萃取(2×)，合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。得到題述化合物(115mg，＞100％)，為白色固體物。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.06(s，9H)，1.30(s，9H)，2.36-2.41(m，1H)，2.69(s，3H)，2.65-2.76(m，1H)，4.01(dd，J＝3.0，12Hz，1H)，4.21(s，1H)，4.44(d，J＝12Hz，1H)，4.64(dd，J＝8.0，10Hz，1H)，5.46(m，1H)，6.91(s，1H)，7.29(s，1H)，7.39(m，3H)，7.57(d，J＝7.5Hz，2H).
LC/MS Rt-min(MH+)1.84(513)(方法B)。
步驟7按照實(shí)施例420、步驟6的方法制備化合物437，以實(shí)施例437、步驟6的產(chǎn)物為原料，收率為31％。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.93(s，9H)，0.99-1.04(m，4H)，1.25(s，9H)，1.34-1.37(m，1H)，1.69-1.71(m，1H)，2.11-2.20(m，2H)，2.39-2.43(m，1H)，2.48(s，3H)，2.93(m，1H)，3.92(d，J＝8.5Hz，1H)，4.07(d，J＝9.0Hz，1H)，4.11(d，J＝12Hz，1H)，4.32(t，J＝7.0Hz，1H)，5.10(d，J＝10.5Hz，1H)，5.23(d，J＝17.5Hz，1H)，5.39(m，1H)，5.60-5.67(m，1H)，6.58(d，J＝8.5Hz，1H)，6.83(s，1H)，7.27(s，1H)，7.40-7.48(m，3H)，8.04-8.06(m，2H)，8.92(s，NH)，10.4(s，NH)。
LC/MS Rt-min(MH+)2.10(725)(方法B)。
實(shí)施例438化合物438的制備 化合物438步驟1 按照實(shí)施例437、步驟6的方法制備該產(chǎn)物，以2-噻吩硼酸為原料，定量收率。
1H NMR(甲醇-d4)δ1.05(s，9H)，1.32(s，9H)，2.32-2.38(m，1H)，2.56(s，3H)，2.66-2.70(m，1H)，3.99(dd，J＝3.0，12Hz，1H)，4.23(s，1H)，4.36(d，J＝12Hz，1H)，4.61(t，J＝8.5Hz，1H)，5.35(m，1H)，5.86(s，1H)，7.16-7.18(m，1H)，7.21(s，1H)，7.56(m，1H)，7.72(d，J＝3.0Hz，1H).
LC/MS Rt-min(MH+)1.80(519)(方法B)。
步驟2按照實(shí)施例420、步驟6的方法制備化合物438，以實(shí)施例438、步驟1的產(chǎn)物為原料，收率為41％。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.91(s，9H)，0.99-1.04(m，4H)，1.20(s，9H)，1.35-1.37(m，1H)，1.69-1.71(m，1H)，2.09-2.20(m，2H)，2.33(m，1H)，2.42(s，3H)，2.93(m，1H)，3.92(d，J＝8.5Hz，1H)，4.07-4.11(m，2H)，4.29-4.32(m，1H)，5.10(d，J＝10.5Hz，1H)，5.23(d，J＝17.0Hz，1H)，5.36(m，1H)，5.60-5.67(m，1H)，6.58(d，J＝8.5Hz，1H)，6.75(s，1H)，7.14(t，J＝4.5Hz，1H)，7.28(s，1H)，7.59(d，J＝5.5Hz，1H)，7.80(d，J＝3.5Hz，1H)，8.92(s，NH)，10.4(s，NH).
LC/MS Rt-min(MH+)2.06(731)(方法B)。
部分K實(shí)施例450化合物450的制備 化合物450按照實(shí)施例8、步驟5的方法制備化合物450，不同之處在于使用4-氯-6-氟-2-三氟甲基喹啉。
1H NMR(CD3OD)δ0.97-1.04(m，12H)，1.17-1.24(m，10H)，1.39-1.46(m，1H)，1.82-1.87(m，1H)，2.20-2.23(m，1H)，2.35-2.39 9m，1H)，2.55-2.65(m，1H)，2.91-2.96(m，1H)，4.09-4.11(m，1H)，4.18-4.21(m，1H)，4.56(b，2H)，5.10-5.14(m，1H)，5.28-5.31(m，1H)，5.60(b，1H)，5.70-5.80(m，1H)，7.41(s，1H)，7.65-7.68(m，1H)，7.86(s，1H)，8.13-8.15(m，1H)。
實(shí)施例451化合物451的制備 化合物451方案1
步驟1按文獻(xiàn)所述方法制備甲苯磺酸鹽(Patchett，A.A.；Witkof，B.J.Am.Chem.Soc.1957，185-192)并未經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。
向NaH(76mg，1.90mmol)的DMF(20ml)漿狀物中加入1-萘硫酚(0.29mg，1.80mmol)并將混合物攪拌30分鐘。加入所述甲苯磺酸鹽溶液(0.61g，1.80mmol)，將混合物在23℃下攪拌12h。將混合物濃縮，剩余物在EtOAc/H2O間分配。將有機(jī)萃取液干燥(硫酸鎂)并濃縮。剩余物經(jīng)柱層析(用5％EtOAc/己烷至30％EtOAc/己烷洗脫)純化，得到261mg(38％)產(chǎn)物，為黃色油狀物。
1H NMR(CDCl3，3∶2旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的混合物)δ1.41(s，9H)，1.44(s，9H)，2.25-2.29(m，2H)，3.69(s，3H)，3.35-3.42(m，1H)，3.51-3.53(m，1H)，3.80-3.86(m，2H)，4.38-4.39(m，1H)，4.46-4.48(m，1H)，7.41-7.46(m，1H)，7.42-7-54(m，1H)，7.57-7.59(m，1H)，7.58(d，J＝4Hz，1H)，7.82-7.88(m，2H)，8.46(d，J＝5Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.93)，MS m/z 388(M++1)。
步驟2將4-(萘-1-硫基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(0.38g，0.98mmol)和4N HCl(1.0ml)的混合物在23℃下攪拌2h。除去溶劑并將剩余物溶于乙腈(20ml)中，用酸(0.37g，2.16mmol)、TBTU(0.23g，0.98mmol)和DIPEA(0.37g，2.16mmol)處理并攪拌12h。將混合物濃縮，并將剩余物溶于乙酸乙酯中并用1N HCl、飽和碳酸氫鈉洗滌，隨后經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。剩余物未經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。
1H NMR(CDCl3，1∶1旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的混合物)δ0.99(s，9H)，1.02(s，9H)，1.44(s，9H)，1.46(s，9H)2.2-2.25(m，2H)，3.70(s，3H)，3.82-3.86(m，1H)，3.89-3.92(m，2H)4.26(s，1H)，4.28(s，1H)，4.70-4.75(m，1H)，7.40-7.48(m，1H)，7.54-7.55(m，1H)，7.59-7.62(m，1H)，7.72-7.74(m，1H)，7.86-7.89(m，2H)，8.48-8.50(m，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.59)，MS m/z 523(M+Na)。
步驟3向1-(2-叔丁氧羰基氨基-3，3-二甲基-丁酰基)-4-(萘-1-硫基)-吡咯烷-2-甲酸甲酯(實(shí)施例451、步驟2產(chǎn)物)(0.49g，0.98mmol)在THF/H2O(2∶1)中的混合物內(nèi)加入LiOH水合物(0.20g，4.9mmol)，將混合物攪拌12h。將溶液濃縮，用EtOAc洗滌。水層用1N HCl酸化并用EtOAc萃取。在第一次EtOAc萃取液中觀測(cè)到產(chǎn)物。所述第一次有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮，得到328mg(71％)黃褐色固體。
1H NMR(DMSO-d6，2∶1旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的混合物)δ0.88(s，9H)，0.92(s，9H)，1.34(s，9H)，1.38(s，9H)，2.18-2.25(m，2H)，3.66-3.75(m，1H)，3.89-4.00(m，2H)，4.10-4.13(m，1H)，4.25-4.32(m，1H)，7.45-7.7.51(m，1H)，7.56-7.61(m，2H)，7.65-7.7.69(m，1H)，7.88-7.91(m，1H)，7.97(d，J＝4.8Hz，1H)，8.27-8.35(m，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.52)，MS m/z 486(M+1)。
步驟4向所述酸(實(shí)施例451、步驟3產(chǎn)物)(0.32g，0.87mmol)在乙腈(10mL)和DMF(2mL)中的溶液內(nèi)加入1(R)-2(S)和1-(S)-2(R)1-氨基-2-乙烯基-環(huán)丙烷甲酸乙酯鹽酸鹽的非對(duì)映異構(gòu)體混合物(240mg，0.87mmol)、TBTU(201mg，0.87mmol)和DIPEA(0.32mL，0.742mmol)，將所得混合物在23℃下攪拌12h。將混合物濃縮，剩余物在乙酸乙酯和水間分配。分離出有機(jī)層，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。以30％EtOAc/己烷為洗脫液，將剩余物經(jīng)柱層析純化，得到240mg(38％)，為淺黃色固體物。
1H NMR(DMSO-d6，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體的混合物)δ0.87(s，9H)，0.88(s，9H)，0.97-1.04(m，3H)，1.33(s，9H)，1.38(s，9H)，2.11-2.20(m，2H)，3.74-3.85(m，1H)，3.89-3.96(m，2H)，3.98-4.03(m，4H)，4.00-4.09(m，1H)，4.40-4.42(m，1H)，5.04-5.09(m，1H)，5.17-5.29(m，2H)，5.50-5.70(m，1H)，6.60-6.62(m，1H)，6.72-6.75(m，1H)，7.50-7.56(m，1H)，7.56-7.72(m，2H)，7.70-7.80(m，1H)，7.92-8.00(m，1H)，8.00-8.06(m，1H)，8.29-8.40(m，1H)，8.65(s，1H)，8.79(s，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.59)，MS m/z 623(M+1)。
步驟5按照實(shí)施例451、步驟3的方法，使用LiOH在THF/甲醇/H2O(4/2/1)中的溶液制備所述酸，不同之處在于使用實(shí)施例451、步驟4的產(chǎn)物。
1H NMR(DMSO-d6，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體的混合物)δ0.90(s，9H)，1.17-1.23(m，2H)，1.32-1.37(m，9H)，2.10-2.12(m，1H)，2.20-2.31(m，2H)，3.97-4.05(m，2H)，4.10-4.12(m，1H)，4.32-4.40(m，1H)，4.55-4.61(m，1H)，4.80-4.98(m，2H)，5.03-5.08(m，1H)，5.10-5.20(m，1H)，5.75-5.90(m，1H)，6.55-6.70(m，1H)，7.42-7.57(m，1H)，7.60-7.64(m，2H)，7.70-7.72(m，1H)，7.80-7.97(m，1H)，7.96-7.99(m，1H)，8.20-8.50(m，2H)；LC-MS(保留時(shí)間1.52)，MS m/z 595(M+1)。
步驟6將所述酸(實(shí)施例451、步驟5的產(chǎn)物)(172mg，0.29mmol)、甲烷磺酰胺(110mg，1.16mmol)、EDAC(110mg，0.58mmol)和DMAP(71mg，0.58mmol)的混合物溶于THF(10ml)并攪拌12h。加入DBU(0.087mL，0.58mmol)并將混合物攪拌48h。除去溶劑并將剩余物溶于乙酸乙酯中，用水和1N HCl洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。剩余物經(jīng)制備型薄層層析純化，得到15mg(8％)化合物451，為黃褐色固體物。
1H NMR(DMSO-d6，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體的混合物)δ0.98(s，9H)，1.27-1.42(m，2H)，1.46(s，9H)，1.76-1.79(m，1H)，1.83-1.86(m，1H)，1.92-2.10(m，1H)，2.16-2.25(m，2H)，3.01-3.10(m，1H)，3.80-3.83(m，1H)，3.86-3.89(m，1H)，3.98-3.99(m，1H)，3.99-4.05(m，1H)，4.24-4-29(m，1H)，4.44-4.53(m，1H)，4.86(s，3H)，5.08-5.15(m，1H)，5.25-5.29(m，1H)，5.65-5.85(m，1H)，6.5-6.8(m，1H)，7.48(t，J＝7.7Hz，1H)，7.54(t，J＝7.1Hz，1H)，7.59(t，J＝7.1Hz，1H)，7.75-7.77(m，1H)，7.88-7.91(m，2H)，8.46(d，J＝8.25Hz，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.52)，MS m/z 672(M+1，次峰)，m/z 693(M+Na主峰)。
實(shí)施例452化合物452的制備 化合物452步驟1 向NaH(76mg，1.90mmol)在DMF(20mL)中的漿狀物內(nèi)加入2-萘硫酚(0.29g，1.80mmol)，將混合物攪拌30分鐘。加入所述甲苯磺酸鹽(實(shí)施例451、步驟1)(0.61g，1.79mmol)的DMF(2ml)溶液，將所得混合物在23℃下攪拌12h。將混合物濃縮并隨后使其在EtOAc/H2O間分配。有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉洗滌，干燥(硫酸鎂)并濃縮。將剩余物經(jīng)層析純化，依次用5％EtOAc/己烷和30％EtOAc/己烷洗脫，得到261mg(38％)產(chǎn)物，為澄清油狀物。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.32(s，9H)，2.29-2.35(m，2H)，3.33-3.47(m，2H)，3.66(s，3H)，3.71-3.81(m，1H)，4.29-4.32(s，1H)，7.49-7.55(m，3H)，7.70-7.80(m，1H)，7.81-7.97(m，3H)；LC-MS(保留時(shí)間1.54)，MS m/z 387(M+1)。
步驟2 在4-(萘-2-硫基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯·2-甲酯(310mg，0.80mmol)和4N HCl在二_烷(1.49ml，2.69mmol)的混合物在23℃下攪拌2h，隨后濃縮。將剩余物溶于乙腈(10mL)中，隨后加入N-Boc-叔丁基甘氨酸(196mg，0.85mmol)、TBTU(0.27g，0.85mmol)和DIPEA(0.32mL，1.85mmol)，并將混合物攪拌過(guò)夜。將混合物濃縮并將剩余物溶于EtOAc中，用1N HCl、飽和碳酸氫鈉洗滌，干燥并濃縮，得到300mg(90％)產(chǎn)物，為黃色油狀物。
1H NMR(甲醇-d4)δ0.99(s，9H)，1.44(s，9H)，2.20-2.35(m，2H)，3.75(s，3H)，3.92-4.08(m，2H)，4.26(d，J＝9.4Hz，1H)，4.57(t，J＝9.5Hz，1H)6.46(d，J＝9.5Hz，1H)，7.48-7.60(m，3H)，7.83-7.90(m，3H)，8.02(s，1H)LC-MS(保留時(shí)間1.98)，MS m/z 523(M+Na)。
步驟3 將4-(萘-2-硫基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯·2-甲酯(0.48g，0.96mmol)溶于甲醇(20mL)中，并與LiOH(0.2g，4.8mmol)一起攪拌12h。將所得溶液濃縮、酸化并用EtOAc萃取。有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮，得到418mg(91％)黃色固體物。
1H NMR(DMSO-d6，1∶2的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ0.86、0.93(s，9H)(1∶2的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)，1.35、1.38(s，9H)(1∶2的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)，2.01-2.18、2.25-2.35(m，2H)，3.25-3.40(m，2H)，3.70-3.80(m，1H)，4.00-4.20(m，J＝9.4Hz，2H)，4.30-4.40(s，1H)，5.61-5.70、6.42-6.50(m，1H)(1∶2的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)，7.50-7.54(m，3H)，7.87-7.89(m，3H)，7.98(s，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.93)，MS m/z 487(M+1)。
步驟4方案1 (1R，2S/1S，2R)P1非對(duì)映異構(gòu)體混合物將1-叔丁氧羰基氨基-2-乙烯基-環(huán)丙烷甲酸乙酯(4.3g，17.8mmol)的甲醇(50mL)溶液用LiOH(0.84g，20.0mmol)和水(5mL)處理，將所得混合物攪拌12h。除去溶劑，將剩余物酸化并用EtOAc萃取。有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥、過(guò)濾并濃縮，得到2.1g(52％)所述酸，為黃色油狀物。將所述酸(2.1g，9.25mmol)溶于THF中，用CDI(7.25g，13.8mmol)處理，加熱回流3h，隨后冷卻至23℃。依次加入甲烷磺酰胺(1.76g，18.5mmol)和DBU(2.77ml，18.5mmol)并在23℃下攪拌72h。將混合物濃縮，將剩余物酸化至pH4(1N HCl)并用EtOAc萃取。有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮，得到1.99g(71％)黃色油狀物，該產(chǎn)物靜置時(shí)發(fā)生固化。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.16-1.23(m，1H)，1.43(s，9H)，1.65-1.75(m，1H)，2.15-2.25(m，2H)，3.16(s，3H)，5.08(d，J＝9.9Hz，1H)，5.22(d，J＝17.1Hz，1H)，5.40-5.52(m，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.14)，MS m/z 304(M+1)。
步驟5將實(shí)施例452、步驟4的產(chǎn)物在二_烷/4N HCl(2ml)中的溶液攪拌2h并隨后濃縮。將剩余物溶于乙腈(5mL)中，加入所述酸(實(shí)施例452、步驟3產(chǎn)物)(120mg，0.25mmol)、TBTU(58mg，0.25mmol)和DIPEA(0.06ml，0.35mmol)的混合物，將混合物攪拌12h。除去溶劑并將剩余物溶于乙酸乙酯中，用1N HCl和飽和碳酸氫鈉洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。剩余物經(jīng)制備型TLC(Analtech，20×40cM，1000SiO2)純化，得到128mg(70％)化合物452，為黃褐色固體物。
1H NMR(DMSO-d6，非對(duì)映異構(gòu)體的混合物)δ0.97，0.99(s，9H)，1.23-1.43(m，2H)，1.45(s，9H)，1.82-1.83(m，1H)，2.00-2.51(m，2H)，2.90-2.99(m，1H)，3.33(s，3H)，3.90-3.99(m，1H)，4.01-4.20(m，2H)，4.25-4.30(m，1H)，4.45-4.55(m，1H)，4.95-5.10(m，1H)，5.12-5.25(m，1H)，5.71-5.85(m，1H)，6.4-6.8(br m，1H)，7.46-7.53(m，3H)，7.80-7.86(m，3H)，7.98-7.99(m，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.95)，MS m/z 672(M+1)。
實(shí)施例453化合物453的制備 化合物453
步驟1 將實(shí)施例452、步驟3的產(chǎn)物(110mg，0.23mmol)的DCM(20ml)溶液、3-氯過(guò)苯甲酸(121.6mg，0.57mmol，85％過(guò)酸)、KHPO4(0.13g，0.94mmol)和K2HPO4(0.18g，1.05mmol)的混合物在23℃下攪拌12h。將所得溶液用DCM稀釋，用水和飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮，得到產(chǎn)物110mg。(92％)，為澄清油狀物。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.91(s，9H)，1.48(s，9H)，2.23-2.28(m，1H)，2.65-2.80(m，1H)，3.88-3.90(m，1H)，4.12(t，J＝8.0Hz，1H)，4.20(d，J＝9.5Hz，1H)，4.27(d，J＝9.9Hz，1H)，6.76(d，J＝9.3Hz，1H)，7.70-7.80(m，2H)，7.88-7.95(m，1H)，8.11(d，J＝8.1Hz，1H)，8.17(d，J＝8.6Hz，1H)，8.26(d，J＝8.1Hz，1H)，8.71(s，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.72)，MS m/z 519(M+1)。
步驟2將實(shí)施例453、步驟1的產(chǎn)物(110mg，0.212mmol)的混合物中依次加入胺(實(shí)施例452、步驟5a的產(chǎn)物)(0.65mg，0.212mmol)、TBTU(48.5mg，0.21mmol)和DIPEA(60.8ml，0.35mmol)并在23℃下攪拌12h。除去溶劑并將剩余物溶于乙酸乙酯，用1N HCl和飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。剩余物經(jīng)制備型TLC(洗脫液10％甲醇/二氯甲烷)純化，得到25mg(17％)化合物453，為白色固體物。
1H NMR(DMSO-d6，非對(duì)映異構(gòu)體的混合物)δ0.93，0.96(s，9H)，1.38-1.45(m，2H)，1.53，1.55(m，9H)，1.76-1.85(m，1H)，2.21-2.40(m，2H)，3.13-3.15(m，2H)，3.34(s，3H)，3.91-3.99(m，1H)，4.15(m，1H)，4.25(m，1H)，4.30(m，1H)，5.09-5.12(m，1H)，5.26-5.31(m，1H)，5.72-5.76(m，1H)，6.65-6.68(m，1H)，6.71-6.76(m，1H)，7.67-7.76(m，2H)，7.91-7.95(m，1H)，8.03(d，J＝7.8Hz，1H)，8.13(d，J＝8.5Hz，1H)，8.20(d，J＝7.6Hz，1H)，8.7(s，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.76)，MS m/z 705(M+1)。
實(shí)施例454化合物454的制備 化合物454步驟1 向氫化鈉(0.91g，22.7mmol)在THF(50mL)中的漿狀物內(nèi)加入N-BOC-反式-4(R)-羥基-L-脯氨酸(2.5g，10.8mmol)，將混合物在23℃下攪拌1h。加入2-氯甲基萘(1.9g，10.8mmol)并在室溫下將混合物攪拌12h。除去溶劑并將剩余物倒入水中，用己烷洗滌。將水層酸化(1N HCl)并用EtOAc萃取。分離出EtOAc層，干燥(硫酸鎂)并濃縮，得到淺黃色剩余物。將所述油狀物經(jīng)快速層析純化，用1∶1EtOAc/己烷(含1％乙酸)為洗脫液，得到1.56g(39％)所需的產(chǎn)物，為粘稠油狀物。
1H NMR(DMSO-d6，3∶1的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ1.35、1.37(s，9H，分別為主峰和次峰)，1.92-2.02、2.15-2.20(m，2H，分別為主峰和次峰)，2.35-2.50(m，2H)，3.41-3.49(m，2H)，4.12-4.16，4.20-4.21(m，2H)，4.65-4.68(m，2H)，7.46-7.52(m，3H)，7.74-7.91(m，4H)，(沒(méi)有觀察到酸羥基)；LC-MS(保留時(shí)間1.44，YMC ODS-A C18 S7 3.0×50mm，梯度10％甲醇/H2O 0.1％TFA至90％甲醇/H2O 0.1％TFA)，MSm/z 394(M++1+Na)。
步驟2 向2-(1-乙氧羰基-2-乙烯基-環(huán)丙基氨基甲?；?-4-(萘-2-甲氧基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯鹽酸鹽的1∶1的非對(duì)映異構(gòu)體混合物(1R，2S/1S，2R，其中羧基與乙烯基部分呈順式構(gòu)型)(0.54g，1.3mmol)[將N-Boc胺與HCl(4N)/二_烷攪拌1h，隨后真空除去溶劑制備]在乙腈(50mL)中的溶液內(nèi)依次加入Boc-4(R)-(2-甲基萘基)脯氨酸(0.5g，1.3mmol)、TBTU(0.45g，1.4mmol)和DIPEA(0.78mL，4.5mmol)。將混合物攪拌12h并濃縮。將剩余物溶于EtOAc/H2O中，用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和的NaCl溶液洗滌，干燥(硫酸鎂)并濃縮，得到粘稠黃色油狀產(chǎn)物(0.6g，91％)，為非對(duì)映異構(gòu)體的混合物。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.08-1.22(m，7H)，1.23-1.39(m，9H)，2.02-2.18(m，1H)，2.25-2.35(m，1H)，3.33-3.53(m，2H)，3.90-4.14(m，4H)，4.45-4.70(m，2H)，5.07-5.11(m，1H)，5.24-5.30(m，1H)，5.58-5.63(m，1H)，7.43-7.51(m，4H)，7.84-7.96(m，3H)；MS m/z 531(M++1+Na).
步驟3 將實(shí)施例454、步驟2的產(chǎn)物的溶液(600mg，1.18mmol)與HCl(4N，3mL，11.8mmol)/二_烷一起攪拌1h，隨后真空除去溶劑。將剩余物溶于乙腈(10mL)中，依次用Boc-L-t-Bu-Gly(0.42g，1.38mmol)、TBTU(0.27g，1.18mmol)和DIPEA(0.71mL，4.1mmol)處理。將混合物攪拌12h并濃縮。將剩余物溶于EtOAc/H2O中，用1N HCl、飽和碳酸氫鈉溶液和飽和NaCl溶液洗滌，干燥(硫酸鎂)并濃縮，得到粘稠黃色油狀物。產(chǎn)物經(jīng)快速層析純化，使用梯度洗脫液5％EtOAc/己烷、10％EtOAc/己烷，最后使用30％EtOAc/己烷，得到粘稠油狀產(chǎn)物(0.243g，33％)，為非對(duì)映異構(gòu)體和旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的混合物。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.83-1.00(m，10H)，1.34(s，9H)，1.58-1.59，1.65-1.67(m，2H)，1，95-1.99，2.04-2.06，2.10-2.19，2.24-2.56(m，2H)，3.97-4.04(m，3H)，4.08-4.17(m，3H)，4.29-4.31(m，2H)，4.59-4.72(m，3H)，5.06-5.10(m，1H)，5.18-5.30(m，1H)，5.60-5.63(m，1H)，6.59-6.65，6.70-6.74(m，1H)，7.43-7.51(m，4H)，7.84-7.96(m，3H)，8.66，8.76(s，1H)；MS m/z 531(M++1+Na)。
步驟4 向?qū)嵤├?54、步驟3的產(chǎn)物(240mg，0.39mmol)在THF(15mL)和H2O(2mL)中的懸浮液內(nèi)加入LiOH(82mg，1.95mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌12h，隨后真空濃縮直至僅剩下水層。加入1.0N鹽酸將所得的含水剩余物酸化至pH3.0，并用EtOAc萃取(2×80mL)。將合并的有機(jī)萃取液干燥(硫酸鎂)，過(guò)濾并真空濃縮，得到產(chǎn)物，為黃褐色固體物(200mg，0.33mmol，85％)1H NMR(DMSO-d6)δ0.86、0.94(s，9H分別為次峰和主峰)，1.23-1.42(m，2H)，1.34(s，9H)，1.8-2.1(m，2H)，2.18-2.30(m，1H)，3.59-3.73(m，3H)，4.0-4.09(m，1H)，4.18-4.34(m，3H)，4.56-4.62(m，1H)，4.66-4.67(m，1H)，4.82-4.92(m，1H)，5.0-5.20(m，1H)，5.91-6.08(m，1H)，6.5-6.7(m，1H)，7.45-7.59(m，3H)，7.82-7.97(m，4H)，8.2-8.3，8.3-8.4(s，1H)；LC-MS(保留時(shí)間1.50)，MS m/z 593(M++1)。
步驟5向?qū)嵤├?54、步驟4的產(chǎn)物(190mg，0.32mmol)、EDAC(122mg，0.64mmol)和4-DMAP(78mg，0.64mmol)在THF(20mL)中的溶液內(nèi)加入商品甲烷磺酰胺(122mg，1.28mmol)。將所得的溶液攪拌2天，隨后加入DBU(95μL，0.64mmol)。將反應(yīng)物攪拌24h并接著濃縮。剩余物在EtOAc(80mL)和水間分配，用1N HCl和碳酸氫鈉水溶液(2×30mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)并經(jīng)制備型HPLC純化(65-90％甲醇/水/0.1％TFA)，得到56mg產(chǎn)物和其中已除去BOC基團(tuán)的物質(zhì)的混合物。該物質(zhì)經(jīng)制備型TLC(洗脫液10％甲醇/二氯甲烷，使用20×40cM板，來(lái)自Analtech)進(jìn)一步純化，得到化合物454，為黃褐色固體物(12mg，6％)。
1H NMR(MeOD-d450/50 P1的非對(duì)映異構(gòu)體混合物)δ0.88-0.99(m，2H)，1.01、1.02(s，9H分別為非對(duì)映異構(gòu)體的次峰和主峰)，1.23-1.42(m，2H)，1.38(s，9H)，1.72-1.79(m，1H)，1.86-1.88(m，1H)，2.00-2.10(m，2H)，2.10-2.23(m，1H)，2.3-2.5(m，1H)，3.12、3.17(s，3H)，3.72-3.79(m，1H)，4.26-4.41(m，3H)，4.72(d，J＝8.2Hz，1H)，4.76(d，J＝8.2Hz，1H)，5.09-5.12(t，J＝9.3Hz，1H)，5.28(dd，J＝3.5，17.6Hz，1H)5.7-5.8(m，1H)，6.55-6.80(m，1H)，7.45-7.47(m，3H)，7.79-7.83(m，4H)；LC-MS(保留時(shí)間1.48)，MS m/z 670(M++1)。
實(shí)施例470化合物470的制備 化合物470
方案1 A、較高Rf，1(R)-2(S) B、較低Rf，1(S)-2(R)步驟1在10分鐘內(nèi)，向商品N-Boc-(4S)-(順式)-羥基脯氨酸-OMe(200mg，0.82mmol)、三苯基膦(320mg，1.22mmol)和1-萘酚(176mg，1.22mmol)在2.5mL四氫呋喃中的溶液內(nèi)滴加偶氮二甲酸二乙酯(190μL，1.22mmol)在1.0mL THF中的溶液。攪拌5.5天后，將反應(yīng)物真空濃縮。將粗品黃色油狀物經(jīng)20×40cM制備型TLC板(AnaltechSiO2)層析純化，用6-1己烷-乙酸乙酯洗脫，得到所需的產(chǎn)物，為淺黃色油狀物(150mg，33％)。
1H NMR(CDCl3，500MHz)δ1.44(s，9H)2.33(1H，m)，2.72(1H，m)，3.77和3.38(2s，3H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.88(dd，1H，J＝4.3，12.4Hz)，3.97(bd，1H)，4.53和4.62(2t，1H，J＝7.8Hz，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.10(bd，1H)，6.76(t，1H，J＝9.5Hz)，7.37(m，1H)，7.46(m，3H)，7.80(d，1H，J＝7.7Hz)，8.18(m，1H)；LC-MS A(保留時(shí)間1.86；MS m/z 394(M+Na)+
步驟2向攪拌下的Boc-(4R)-萘-1-氧代)-Pro-OEt(150mg，0.40mmol)在1.5mL THF和0.5mL水中的紅色溶液內(nèi)加入氫氧化鋰(10mg)。將溶液在室溫下攪拌21小時(shí)，隨后用0.5N碳酸氫鈉稀釋。將該堿性溶液用乙酸乙酯萃取，隨后滴加濃鹽酸將水層酸化至pH2。接著將酸化層再次用乙酸乙酯萃取。將這二次的乙酸乙酯層用硫酸鎂干燥，過(guò)濾，隨后真空濃縮，得到Boc-(4R)-萘-1-氧代)-Pro-OH，為淺桃紅色結(jié)晶(147mg，100％)。
1H NMR(CDCl3，500MHz)δ1.47和1.48(2s，9H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.40和2.52(2m，1H)，2.68和2.78(2m，1H)，3.78-4.07(m，2H)，4.57和4.69(2t，1H，J＝7.6和8.0Hz，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.12(bd，1H)，6.77(dd，1H，J＝7.6，21.2Hz)，7.37(m，1H)，7.46(m，3H)，7.81(t，1H，J＝5.8Hz)，8.19(m，1H)；LC-MS A(保留時(shí)間1.79；MS m/z 358(M+H)+步驟3向Boc-((4R)-萘-1-氧代)-Pro-OH(147mg，0.41mmol)和外消旋(1R/2S)/(1S/2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷甲酸乙酯·鹽酸鹽(79mg，0.41mmol)在2.8mL二氯甲烷中的溶液內(nèi)加入DIPEA(250μL，1.44mmol)和TBTU(158mg，0.49mmol)。將所得的溶液在氮?dú)鈿夥罩袛嚢?0小時(shí)，隨后用40mL二氯甲烷稀釋。有機(jī)層依次用水、1N碳酸氫鈉溶液、1N HCl、水和鹽水洗滌。隨后將溶液用硫酸鈉干燥并真空濃縮。經(jīng)制備型TLC純化，得到兩種分離的非對(duì)映異構(gòu)體，較高Rf非對(duì)映異構(gòu)體A(P2[Boc(4R)-(萘-1-氧代)脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-OEt，78mg，38％)和較低Rf非對(duì)映異構(gòu)體B(P2[Boc(4R)-(萘-1-氧代)脯氨酸]-P1(1S，2R乙烯基Acca)-OEt，91mg，45％)，為灰白色固體物非對(duì)映異構(gòu)體AP2[Boc(4R)-(萘-1-氧代)脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-OEt1H NMR(CDCl3，500MHz)δ1.24(t，3H)，1.43(s，9H)，1.52(m，1H)，1.84(m，1H)，2.02(m，1H)，2.14(m，1H)，2.81(m，1H)，3.88(m，2H)，4.11(q，1H，J＝7.15)，4.19(m，1H)，4.54(m，1H)，5.15(m，1H)，5.31(dd，1H，J＝17，0.8Hz)，5.77(m，1H)，6.83(m，1H)，7.36(t，1H，J＝7.8Hz)，7.46(m，3H)，7.78(d，1H，J＝7.6Hz)，8.14(d，1H，J＝8.15Hz)；LC-MS B(保留時(shí)間1.85；MS m/z 495(M+H)+非對(duì)映異構(gòu)體B，實(shí)施例10BP2[Boc(4R)-(萘-1-氧代)脯氨酸]-P1(1S，2R乙烯基Acca)-Oet1H NMR(d1-CHCl3，500MHz)δ1.24(t，3H)，1.42(s，9H)，1.85(m，1H)，2.15(q，1H，J＝8.9Hz)，2.40(m，1H)，2.78(m，1H)，3.78(m，1H)，4.12(m，2H)，4.52(m，1H)，5.15(m，1H)，5.31(m，1H)，5.79(m，1H)，6.80(m，1H)，7.35(t，1H，J＝7.6Hz)，7.46(m，3H)，7.78(d，1H，J＝7.6Hz)，8.14(d，1H，J＝8.10Hz).
LC-MS B(保留時(shí)間1.85；MS m/z 495(M+H)+方案2
步驟4向P2[Boc(4R)-(萘-1-氧代)脯氨酸]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-OEt(A，較高Rf)(78mg，0.16mmol)中加入4N HCl/二_烷(2.0mL)，將溶液攪拌30分鐘。真空濃縮，得到P2[(4R)-(萘-4-氧代)脯氨酸)]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-OEt的鹽酸鹽，為黃色油狀物，該產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一步反應(yīng)中。
向BOC L-tBuGly(73mg，0.32mmol)和所述P2[(4R)-(萘-4-氧代)脯氨酸)]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-OEt鹽酸鹽(0.16mmol)在11mL乙腈中的溶液內(nèi)加入DIPEA(140μL，0.79mmol)和HATU(132mg，0.35mmol)。將所得的溶液在氮?dú)鈿夥罩袛嚢?7小時(shí)，隨后用100mL乙酸乙酯稀釋。有機(jī)層依次用水、1N碳酸氫鈉溶液、1N HCl、水和鹽水洗滌。接著將溶液用硫酸鈉干燥并真空濃縮，得到題述化合物，為淺黃色油狀薄膜狀物(92mg，96％)。
1H NMR(CDCl3，500MHz)δ1.06(s，9H)，1.22(t，3H，J＝7.1)，1.38(s，9H)，1.41(m，1H)，1.82(m，1H)，2.13(m，1H)，2.42(m，1H)，2.79(m，1H)，3.92-4.2(m，1H)，4.12(q，2H，J＝6.6Hz)，4.38(bt，1H)，5.12(d，1H，J＝10.3Hz)5.2-5.39(m，3H)，5.75(m，1H)，6.82(d，1H，J＝7.5Hz)，7.34-7.46(m，4H)，7.59(bs，1H，NH)，7.76(d，1H，J＝7.9Hz)，8.13(d，1H，J＝8.3Hz)；LC-MS C(保留時(shí)間2.82；MS m/z 608(M+H)+步驟5向?qū)嵤├?70、步驟4的產(chǎn)物(92mg，0.15mmol)在750mL四氫呋喃和250mL水中的溶液內(nèi)加入氫氧化鋰(4mg)。將所得的溶液攪拌28.5小時(shí)，進(jìn)行常規(guī)后處理，隨后在相同的條件下處理，不同之處再于加入兩倍量的氫氧化鋰(8mg)。24小時(shí)后，將反應(yīng)物用乙酸乙酯稀釋并用水洗滌。將有機(jī)層用硫酸鈉干燥并真空濃縮。所得的半固體經(jīng)快速層析純化，用3-1己烷-乙酸乙酯洗脫，得到BocNH-P3(t-BuGly)-P2[(Boc(4R)-(萘-1-氧代)脯氨酸)]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-OH，為透明半固體物(30mg，34％)。
1H NMR(d4-MeOH，500MHz)δ1.04(s，9H)，1.24(t，1H，J＝3.9Hz)，1.32(s，9H)，1.66(m，1H)，2.07(m，1H)，2.40(m，1H)，2.71(m，1H)，4.04-4.07(m，1H)，4.28(m，1H)，4.42(m，1H)，4.55(m，1H)，5.02(m，1H)，5.18-5.29(m，2H)，5.90(m，1H)，6.54(m，1H)，6.92(m，1H)，4.26(m，4H)，7.77(m，1H)，8.15(m，1H)；LC-MS C(保留時(shí)間2.65；MS m/z 580(M+H)+步驟6向BocNH-P3(t-BuGly)-P2[(Boc(4R)-(萘-1-氧代)脯氨酸)]-P1(1R，2S乙烯基Acca)-OH(實(shí)施例470、步驟5產(chǎn)物)(65mg，0.11mmol)在3.7mL四氫呋喃中的溶液內(nèi)加入1，1′-羰基二咪唑(22mg，0.135mmol)。將所得的混合物回流30分鐘，隨后冷卻至室溫。此時(shí)，加入甲烷磺酰胺(27mg，0.28mmol)和DBU(34L，0.224mmol)。攪拌反應(yīng)物2天，隨后再加入DBU(10L)和甲烷磺酰胺(9mg)。24小時(shí)后，反應(yīng)物用50mL乙酸乙酯稀釋并用50mL 0.25N HCl和50mL鹽水洗滌。將溶液用硫酸鈉干燥并真空濃縮。將粗產(chǎn)物經(jīng)制備型TLC(3-2乙酸乙酯-己烷)純化，得到化合物470(21mg，28％)，為白色膜狀固體物。
1H NMR(d4-MeOH，500MHz)δ1.04(s，9H)，1.36(s，9H)，1.88(t，1H)，2.18(m，1H)，2.31(m，1H)，2.63(m，1H)，3.11(bs，3H)，4.076(m，1H)，4.30(bd，1H)，4.41(bd，1H)，4.52(表觀t，1H)，5.07(m，1H)，5.24-5.30(m，2H)，5.80(m，1H)，6.92(d，1H，J＝7.45Hz)，7.35-7.46(m，4H)，7.76(d，1H，J＝8.1Hz)，8.13(d，1H，J＝8.3Hz)；LC-MS C(保留時(shí)間2.57；MS m/z 657(M+H)+實(shí)施例471化合物471的制備 化合物471
方案2 步驟1向P2[Boc(4R)-(萘-1-氧代)脯氨酸]-P1(1S，2R乙烯基Acca)-OEt(實(shí)施例470、步驟3產(chǎn)物，低Rf)(91mg，0.18mmol)中加入4N HCl/二_烷(2.0mL)并將溶液攪拌30分鐘。真空濃縮，得到P2[(4R)-(萘-1-氧代)脯氨酸)]-P1(1S，2R乙烯基Acca)-OEt鹽酸鹽，為黃色油狀物，該產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一步反應(yīng)中。
向N-Boc-L-叔-亮氨酸-OH或BOC L-tBuGly(85mg，0.37mmol)和P2[(4R)-(萘-1-氧代)脯氨酸)]-P1(1S，2R乙烯基Acca)-OEt鹽酸鹽(得自上述反應(yīng)的產(chǎn)物)(0.18mmol)在13mL乙腈中的溶液內(nèi)加入DIPEA(160μL，0.92mmol)和HATU(154mg，0.41mmol)。將所得的溶液在氮?dú)鈿夥罩袛嚢?7小時(shí)，隨后用100mL乙酸乙酯稀釋。有機(jī)層依次用水、1N碳酸氫鈉溶液、1N HCl、水和鹽水洗滌。隨后將溶液用硫酸鈉干燥并真空濃縮，得到題述化合物，為透明膜狀物(53mg，47％)。
1H NMR(d1-CHCl3，500MHz)δ1.02(s，9H)，1.22(t，3H，J＝7.0Hz)，1.39(s，9H)，1.47(m，1H)，1.88(dd，1H，J＝8.0，5.5Hz)，2.07(m，1H)，2.42(m，1H)，2.80(dt，J＝13.8，6.0Hz，1H)，3.96(m，1H)，4.14(m，2H)，4.34(m，2H)，4.77(t，1H，J＝7.2Hz)，5.09-5.33(m，3H)，5.72(m，1H)，6.82(d，1H，J＝7.6Hz)，7.34-7.50(m，4H)，7.77(d，1H，J＝8.0Hz)，8.15(d，1H，J＝8.25Hz)；LC-MS C(保留時(shí)間2.81；MS m/z 608(M+H)+步驟2按照實(shí)施例470、步驟5中描述的方法制備該產(chǎn)物(5mg，10％)，不同之處在于使用實(shí)施例471、步驟1的產(chǎn)物。
1H NMR(d4-MeOH，500MHz)δ0.99(s，9H)，1.28(m，1H)，1.37(s，9H)，1.60(m，1H)，2.06(m，1H)，2.28(m，1H)，2.66(m，1H)，3.91(m，1H)，4.33(m，2H)，4.61(bt，1H)，4.97(d，1H，J＝11.0Hz)，5.19(m 2H)，6.09(m，1H)，6.88(d，1H，J＝7.1Hz)，7.35-7.46(m，4H)，7.78(d，1H，J＝8.2Hz)，8.12(d，1H，J＝8.3Hz)；LC-MS C(保留時(shí)間2.60；MS m/z 580(M+H)+步驟3向BocN-P3(L-tBuGly)-P2[(Boc(4R)-(萘-1-氧代)脯氨酸)]-P1(1S，2R乙烯基Acca)-COOH(38mg，0.066mmol)(實(shí)施例471、步驟2產(chǎn)物)在2.2mL四氫呋喃中的溶液內(nèi)加入1，1′-羰基二咪唑(13mg，0.079mmol)。將所得的混合物回流30分鐘，隨后冷卻至室溫。此時(shí)，加入甲烷磺酰胺(16mg，0.16mmol)和DBU(20μL，0.13mmol)。攪拌反應(yīng)物2天，隨后再加入DBU(10μL)和甲烷磺酰胺(9mg)。24小時(shí)后，將反應(yīng)物用50mL乙酸乙酯稀釋并用50mL 0.25N HCl和50mL鹽水洗滌。將溶液用硫酸鈉干燥，真空濃縮。粗產(chǎn)物使用一塊20×40cM制備型TLC板(Analtech，3-2乙酸乙酯-己烷洗脫)純化，得到化合物471(25mg，58％)，為白色膜狀固體物。
1H NMR(d4-MeOH，500MHz)δ1.03(s，9H)，1.34(s，9H)，1.80(m，1H)，2.18(m，1H)，2.31(m，1H)，2.68(m，1H)，3.09(bs，3H)，4.04(m，1H)，4.20-4.44(m，2H)，4.51(表觀t，1H)，5.08(m，1H)，5.25-5.31(m，2H)，5.77(m，1H)，6.93(d，1H，J＝7.6Hz)，7.36-7.45(m，4H)，7.77(d，1H，J＝8.0Hz)，8.15m，1H)；LC-MS C(保留時(shí)間2.57；MS m/z 657(M+H)+部分L實(shí)施例472生物學(xué)研究重組HCV NS3/4A蛋白酶復(fù)合物FRET肽試驗(yàn)該體外試驗(yàn)的目的是測(cè)定本發(fā)明的化合物對(duì)來(lái)源于BMS、H77C或者J416S菌株的HCV NS3蛋白酶復(fù)合物(如以下描述)的抑制作用。該試驗(yàn)提供本發(fā)明的化合物如何有效地抑制HCV蛋白水解活性的指征。
自舊金山醫(yī)院(San Francisco Hospital)的T.Wright博士處得到來(lái)源于HCV感染的患者的血清。采用從血清RNA(核糖核酸)的逆轉(zhuǎn)錄-PCR(RT-PCR)得到的DNA片段，并使用以其它的基因型1a菌株之間的同源物為基礎(chǔ)而選擇的引物，構(gòu)建HCV基因組(BMS菌株)的工程化全長(zhǎng)cDNA(互補(bǔ)脫氧核糖核酸)模板。按照Simmonds等(參見(jiàn)PSimmonds，KA Rose，S Graham，SW Chan，F(xiàn) McOmish，BC Dow，EAFollett，PL Yap和H Marsden，J.Clin.Microbiol.，31(6)，1493-1503(1993))的分類，自全部基因組序列測(cè)定中，將基因型1a指定為HCV分離物。非結(jié)構(gòu)區(qū)域NS2-5B的氨基酸序列顯示與HCV基因型1a(H77C)有＞97％的相同和與基因型1b(J4L6S)有87％的相同。感染克隆物H77C(1a基因型)和J4L6S(1b基因型)來(lái)源于R.Purcell(NIH)，其序列在Genbank中公開(kāi)(AAB67036，參見(jiàn)Yanagi，M.，Purcell，R.H.，Emerson，S.U.和Bukh，J.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.94(16)，8738-8743(1997)；AF054247，參見(jiàn)Yanagi，M.，St Claire，M.，Shapiro，M.Emerson，S.U.，Purcell，R.H.和Bukh，J，Virology 244(1)，161-172(1998))。
BMS、H77C和J4L6S菌株用于制備重組NS3/4A蛋白酶復(fù)合物。根據(jù)P.Gallinari等(參見(jiàn)Gallinari P，Paolini C，Brennan D，Nardi C，Steinkuhler C，De Francesco R.，Biochemistry.38(17)5620-32(1999))所述，處理編碼這些菌株的的重組HCV NS3/4A蛋白酶復(fù)合物(氨基酸1027-1711)的DNA。簡(jiǎn)言之，將三個(gè)賴氨酸的增溶尾部加入到NS4A編碼區(qū)的3’-末端。將NS4A-NS4B裂解部位(氨基酸1711)的P1位點(diǎn)上的半胱氨酸轉(zhuǎn)化為甘氨酸，以避免賴氨酸標(biāo)記物的蛋白水解裂解。此外，通過(guò)PCR，在氨基酸位點(diǎn)1454，引發(fā)半胱氨酸至絲氨酸的突變，以阻止NS3解旋酶功能區(qū)的自溶裂解。在pET21b細(xì)菌表達(dá)載體(Novagen)上，克隆變體DNA片段，然后按照P.Gallinari等(參見(jiàn)Gallinari P，Brennan D，Nardi C，Brunetti M，Tomei L，Steinkuhler C，DeFrancesco R.，J Virol.72(8)6758-69(1998))描述的改進(jìn)方法，在大腸桿菌菌株(Escherichia.Coli strain)BL21(DE3)(Invitrogen)上表達(dá)NS3/4A復(fù)合物。簡(jiǎn)言之，于20℃下，用0.5mM異丙基β-D-1-硫代吡喃型半乳牛糖苷IPTG誘發(fā)NS3/4A表達(dá)22小時(shí)。一般的發(fā)酵液(10L)得到約80g的濕細(xì)胞沉淀。將該細(xì)胞重懸浮于溶解緩沖液(10mL/g)中，后者由25mM N-(2-羥乙基)哌嗪-N′-(2-乙烷磺酸)(HEPES)，pH7.5、20％甘油、500mM氯化鈉(NaCl)、0.5％Triton-X100、1ug/ml溶菌酶、5mM氯化鎂(MgCl2)、1ug/ml DnaseI、5mM β-巰基乙醇(βME)和不含乙二胺四乙酸(EDTA)的蛋白酶抑制劑(Roche)構(gòu)成，將該懸浮液勻漿化，并于4℃溫育20分鐘。將勻漿超聲處理，并通過(guò)在235000g速度下，于4℃超聲離心1小時(shí)澄清。將咪唑加入到上清液中，使其最終濃度為15mM，然后將pH調(diào)至8.0。將粗的蛋白提取物裝載到預(yù)先用緩沖液B(25mM HEPES，pH8.0，20％甘油，500mMNaCl，0.5％Triton-X100，15mM咪唑，5mM βME)平衡的鎳-次氮基三乙酸(Ni-NTA)柱上。在1mL/min的流速下，裝載樣品。用15倍柱體積的緩沖液C(除0.2％Triton-X100以外，與緩沖液B相同)沖洗該柱。用5倍柱體積的緩沖液D(除采用200mM咪唑外，其余與緩沖液C相同)洗脫蛋白。
收集含NS3/4A蛋白酶復(fù)合物的流分，然后裝載到預(yù)先用緩沖液D(25mM HEPES，pH7.5，20％甘油，300mM NaCl，0.2％Triton-X100，10mM βME)平衡的脫鹽柱Superdex-S200上。在1mL/min的流速下，裝載樣品。收集含NS3/4A蛋白酶復(fù)合物的流分，然后濃縮至約0.5mg/ml。經(jīng)SDS-PAGE和質(zhì)譜分析判斷，來(lái)源于BMS、H77C和J4L6S菌株的NS3/4A蛋白酶復(fù)合物的純度在90％以上。
將所述酶在-80℃下貯存，于冰上融化并在使用前在試驗(yàn)緩沖液中稀釋。用于NS3/4A蛋白酶試驗(yàn)的底物為RET S1(Resonance EnergyTransfer Depsipeptide Substrate；AnaSpec，Inc.cat# 22991)(FRETpeptide)，由Taliani等在Anal.Biochem.240(2)60-67(1996)中描述。所述肽序列松散地基于NS4A/NS4B天然裂解部位，但在裂解部位為酯鍵而非酰胺鍵。在本發(fā)明化合物的不存在或者存在下，將所述肽底物與三種重組NS3/4A復(fù)合物中之一共同溫育，并采用CytofluorSeries 4000在有效時(shí)間內(nèi)跟蹤熒光反應(yīng)產(chǎn)物的形成。
使用的試劑如下自GIBCO-BRL處得到HEPES和甘油(Ultrapure)。自Sigma處得到二甲亞砜(DMSO)。自Bio Rad處得到β-巰基乙醇。
試驗(yàn)緩沖液50mM HEPES，pH7.5；0.15M NaCl；0.1％Triton；15％甘油；10mM βME。底物2μM最終濃度(得自于-20℃下DMSO中貯存的2mM儲(chǔ)備液)。HCV NS3/4A型1a(1b)、2-3nM最終濃度(得自在25mM HEPES，pH7.5、20％甘油、300mM NaCl、0.2％Triton-X100、10mM βME中的5μM儲(chǔ)備液)。
該試驗(yàn)在來(lái)源于Falcon的96孔聚苯乙烯黑板上進(jìn)行。每孔含25μl在試驗(yàn)緩沖液中的NS3/4A蛋白酶復(fù)合物、50μl在10％DMSO/試驗(yàn)緩沖液中的本發(fā)明化合物和25μl在試驗(yàn)緩沖液中的底物。在相同的試驗(yàn)板上也制備對(duì)照組(沒(méi)有化合物)。在啟動(dòng)通過(guò)加入底物的酶促反應(yīng)前，將所述酶復(fù)合物與化合物或者對(duì)照溶液混合1分鐘。采用Cytofluor Series 4000(Perspective Biosystems)迅速讀取試驗(yàn)板。于25℃下，設(shè)置儀器以讀取340nm的發(fā)射波長(zhǎng)和490nm的激發(fā)波長(zhǎng)下的讀取值。反應(yīng)通常進(jìn)行約15分鐘。
用以下方程計(jì)算抑制百分率100-[(δFinh/δFcon)×100]其中δF為曲線的線性范圍內(nèi)的熒光變化。非線性曲線擬合應(yīng)用于抑制率-濃度數(shù)據(jù)，通過(guò)使用Excel X1-擬合軟件，按照方程y＝A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))計(jì)算50％有效濃度(IC50)。
發(fā)現(xiàn)所有的受試化合物具有10μM或更小的IC50值。另外，對(duì)本發(fā)明化合物進(jìn)行了抗一種以上類型的NS3/4A復(fù)合物的試驗(yàn)，雖然一致證實(shí)所述化合物對(duì)菌株1b比對(duì)菌株1a具有更大的效力，但發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物具有類似的抑制性質(zhì)。
特異性試驗(yàn)進(jìn)行特異性試驗(yàn)以證實(shí)與其它的絲氨酸或者半胱氨酸蛋白酶相比較，本發(fā)明化合物在抑制HCV NS3/4A蛋白酶上的選擇性。
本發(fā)明化合物對(duì)以下多種絲氨酸蛋白酶的特異性被證實(shí)人白細(xì)胞彈性蛋白酶(HLE)、豬胰彈性蛋白酶(PPE)、人-胰凝乳蛋白酶和一種半胱氨酸蛋白酶人肝組織蛋白酶B。在所有這些試驗(yàn)情況下，按先前描述的(專利WO 00/09543)、其中對(duì)絲氨酸蛋白酶試驗(yàn)進(jìn)行某些改進(jìn)的方法，采用對(duì)每種酶具有特異性的比色劑對(duì)硝基苯胺(pNA)底物，以96孔滴定格式板方法進(jìn)行。
每種試驗(yàn)包括在RT下將酶抑制劑預(yù)溫育2小時(shí)隨后加入底物，然后水解至～30％的轉(zhuǎn)變，該轉(zhuǎn)變通過(guò)在Spectramax Pro微量滴定板讀數(shù)器上測(cè)定。依其效力而定，化合物濃度范圍為100～0.4μM。
每一個(gè)實(shí)驗(yàn)的最終條件如下50mM三(羥甲基)氨基甲烷鹽酸鹽(Tris-HCl)pH8，0.5M硫酸鈉(Na2SO4)，50mM NaCl，0.1mM EDTA，3％DMSO，0.01％Tween-20133μM succ-AAA-pNA和20nM HNE或8nM PPE；133μMsucc-AAV-pNA和15nM HLE；100μM succ-AAPF-pNA和250pM胰凝乳蛋白酶100mM NaHPO4(磷酸氫鈉)pH6，0.1mM EDTA，3％DMSO，1mM TCEP(三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽)，0.01％吐溫-20，30μM Z-FR-pNA和5nM組織蛋白酶B(酶原液，使用前在含20mM TCEP的緩沖液中激活)。
用以下方程計(jì)算抑制百分率[1-((UVinh-UVblank)/(UVctl-UVblank))]×100將非線性曲線擬合應(yīng)用于抑制率-濃度數(shù)據(jù)，通過(guò)采用Excel X1-擬合軟件，計(jì)算50％有效濃度(IC50)。
基于HCV復(fù)制子細(xì)胞的試驗(yàn)按Lohmann V，Korner F，Koch J，Herian U，Theilmann L，Bartenschlager R.，Science 285(5424)110-3(1999)中所述，建立HCV復(fù)制子全細(xì)胞系統(tǒng)。這個(gè)系統(tǒng)能夠使我們?cè)u(píng)價(jià)我們的HCV蛋白酶化合物對(duì)HCV RNA復(fù)制的作用。簡(jiǎn)言之，采用在Lohmann論文(Assession號(hào)AJ238799)中描述的HCV菌株1B序列，生成編碼5’內(nèi)核糖體入口位點(diǎn)(IRES)、新霉素抗性基因、EMCV(腦心肌炎病毒)-IRES和HCV非結(jié)構(gòu)蛋白NS3-NS5B和3’非轉(zhuǎn)錄區(qū)(NTR)的HCV cDNA。體外轉(zhuǎn)錄的cDNA被轉(zhuǎn)染到人肝癌細(xì)胞系HuhT中。然后在選擇性標(biāo)記物新霉素(G418)存在下，實(shí)現(xiàn)組成性表達(dá)HCV復(fù)制子細(xì)胞的選擇。得到的細(xì)胞系特征在于正鏈和負(fù)鏈RNA產(chǎn)生并在規(guī)定時(shí)間內(nèi)有蛋白產(chǎn)生。
使Huh7細(xì)胞，即組成型表達(dá)HCV的復(fù)制子，在含10％胎牛血清(FCS)和1mg/ml G418(Gibco-BRL)的Dulbecco修改的Eagle培養(yǎng)基(DMEM)中生長(zhǎng)。過(guò)夜前將細(xì)胞(1.5×104細(xì)胞/孔)接種到96孔組織培養(yǎng)滅菌板上。在置于稀釋板中的含4％FCS、1∶100青霉素/鏈霉素、1∶100L-谷氨酰胺和5％DMSO(在試驗(yàn)時(shí)的最終濃度為0.5％DMSO)的DMEM中，制備化合物和不含化合物的對(duì)照物。將化合物/DMSO混合物加入到細(xì)胞中，并且于37℃溫育4天。4天后，將所述板用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)充分洗滌(3次，150μl)。用25μl含所述FRET肽(RET S1，如體外酶試驗(yàn)中的描述)的溶胞試驗(yàn)試劑將所述細(xì)胞溶胞。所述溶胞試驗(yàn)試劑如下制備將5×細(xì)胞蟲螢光素酶細(xì)胞培養(yǎng)溶胞試劑(Promega#E153A)用蒸餾水稀釋至1×，加入NaCl使最終濃度達(dá)150mM，將在100％DMSO中的2mM FRET肽原液稀釋至最終濃度為10μM。隨后將所述板置于Cytofluor 4000儀器中，該儀器的設(shè)置如下激發(fā)340nm/發(fā)射490，21次循環(huán)自動(dòng)模式，在動(dòng)態(tài)模式下讀數(shù)。EC50的測(cè)定同IC50測(cè)定。
作為第二種試驗(yàn)，復(fù)制子FRET試驗(yàn)中的EC50測(cè)定得到定量RNA試驗(yàn)的確證。采用Rneasy試劑盒(Qiagen)，將細(xì)胞溶胞。采用RiboGreen(Jones LJ，Yue ST，Cheung CY，Singer VL，Anal.Chem.，265(2)368-74(1998))將純化的總RNA歸一化，并且采用Taqman方法(KolykhalovAA，Mihalik K，F(xiàn)einstone SM，Rice CM，Journal of Virology 74，2046-2051(2000))和Platinum Quantitative RT-PCR Thermoscript One-Step試劑盒(Invitrogen cat# 11731-015)測(cè)定HCV RNA表達(dá)的相對(duì)量。簡(jiǎn)言之，將制備成5μl(≤1ng)體積的RNA加入到20μl含有以下組分的Ready-Mix中1.25X Thermoscript反應(yīng)混合物(含硫酸鎂和2-脫氧核苷5′-三磷酸酯(dNTPs))，3mM dNTPs，200nM正向引物(序列5′-gggagagccatagtggtctgc-3′)，600nM反向引物(5′-cccaaatctccaggcattga-3′)，100nM探針(5′-6-FAM-cggaattgccaggacgaccgg-BHQ-1-3′)(FAM-熒光素-氨己基脒(amidite)；BHQBlack Hole Quencher)，1μM Rox參比染料(Invitrogencat#12223-012)和Thermoscript Plus Platinum Taq聚合酶混合物。所有引物均用ABI Prism7700軟件設(shè)計(jì)，得自Biosearch Technologies，Novato，CA。含已知濃度的HCV RNA轉(zhuǎn)錄物的樣品被用作標(biāo)準(zhǔn)物。采用以下循環(huán)方法(50℃，30分鐘；95℃，5分鐘；在95℃下40個(gè)周期，15秒，60℃，1分鐘)，按Perkin Elmer年報(bào)中描述的方法，使用ABI Prism 7700序列檢測(cè)器將HCV RNA表達(dá)定量。
生物實(shí)施例在HCV復(fù)制子細(xì)胞試驗(yàn)中和/或在幾個(gè)所述特異性試驗(yàn)中，評(píng)價(jià)本發(fā)明的代表性化合物。例如，發(fā)現(xiàn)化合物34對(duì)酶試驗(yàn)中的NS3/4ABMS菌株具有23nM的IC50。用已公開(kāi)的H77C(3nM的IC50)和J4L6S(2.9nM的IC50)菌株得到相似的效力值。在復(fù)制子試驗(yàn)中的EC50值為166nM。
在特異性試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)相同的化合物具有以下活性HLE＞100μM；PPE＞200μM；胰凝乳蛋白酶＞200μM；組織蛋白酶B＞200μM。這些結(jié)果表明本族化合物對(duì)NS3蛋白酶具有高特異性，并且這些成員中有許多可抑制HCV復(fù)制子的復(fù)制。
測(cè)試本發(fā)明的化合物并發(fā)現(xiàn)受試化合物具有如下范圍內(nèi)的活性IC50活性范圍(NS3/4ABMS菌株)A為10-100μM；B為1-10μM；C為0.1-1μM；D＜0.1μMEC50活性范圍(用于受試化合物)A為10-100μM；B為1-10μM；C為0.1-1μM；D＜0.1μM；注意按照表中所示的本發(fā)明實(shí)施例編號(hào)及本發(fā)明化合物編號(hào)可查找各化合物的結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明化合物的生物活性(EC50)優(yōu)選為10μM或以下，更優(yōu)選1μM或以下，最優(yōu)選100nM或以下。
表1生物活性
部分M表2以下化合物可按照本文中描述的方法，尤其是在示例部分A至K，更尤其是在B、E、F和G部分所描述的方法制備。此外，應(yīng)理解以下所示的各基團(tuán)B、R3、R2和R1可被部分A至K及本文中其它地方所示例的任何基團(tuán)或在式I中所標(biāo)出的任何基團(tuán)所代替。例如，在表2中所示的R3基團(tuán)為叔丁基，但本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到在以下所有編號(hào)化合物中該基團(tuán)可被異丙基或烷氧基取代的C1-6烷基所替代?；蛟谝韵滤芯幪?hào)化合物中的B基團(tuán)可被叔丁基脲部分所替代。




權(quán)利要求
1.一種化合物，其選自 化合物7；化合物11-HCl鹽； 化合物12； 化合物13； 化合物15； 化合物16； 化合物17； 化合物18； 化合物19； 化合物20； 化合物21； 化合物22； 化合物23； 化合物24； 化合物25； 化合物26； 化合物27； 化合物28； 化合物29； 和 化合物30。
2.一種化合物，其選自 化合物31； 化合物32； 化合物33； 化合物34； 化合物35； 化合物36； 化合物37； 化合物38； 化合物39； 化合物40； 化合物41； 化合物42； 化合物55； 化合物56； 化合物57； 化合物60； 化合物61；和 化合物62。
3.一種化合物，其選自 化合物63； 化合物64； 化合物65； 化合物66； 化合物67； 化合物68； 化合物69； 化合物70； 化合物71； 化合物72； 化合物73； 化合物74； 化合物78； 化合物79； 化合物80； 化合物81； 和 化合物82；
4.一種化合物，其選自 化合物83； 化合物84； 化合物85； 化合物86；
5.一種化合物，其選自 化合物105；化合物106； 化合物110；化合物120； 化合物121；化合物122； 化合物123；化合物124； 化合物125；化合物126； 化合物127；化合物128； 化合物129； 化合物130；化合物131； 化合物132； 和化合物133。
6.一種化合物，其選自 化合物134； 化合物135；化合物136； 化合物137； 化合物138；化合物139； 化合物140； 化合物141； 化合物142； 化合物143； 化合物144； 化合物145； 化合物146； 化合物147； 化合物148； 化合物149； 化合物150； 化合物151； 化合物152； 和化合物153。
7.一種化合物，其選自 化合物154； 化合物155； 化合物187； 化合物189； 化合物190； 化合物191； 化合物192； 化合物193； 化合物206； 化合物207； 化合物209； 化合物210； 化合物211； 化合物213； 化合物215； 化合物219； 化合物220； 化合物223； 化合物224；和 化合物225。
8.一種化合物，其選自 化合物255； 化合物256； 化合物257； 化合物259； 化合物260；和 化合物263
9.一種化合物，其選自 化合物264； 化合物265； 化合物266； 化合物267； 化合物268； 化合物269； 化合物270； 化合物271； 化合物272； 化合物274； 化合物279； 化合物280； 化合物282； 化合物284； 化合物285； 化合物286； 化合物287； 化合物288； 化合物289； 和化合物290。
10.一種化合物，其選自 化合物293； 化合物295； 化合物296； 化合物297； 化合物299； 化合物320； 化合物357 化合物380； 化合物381； 化合物382； 化合物383； 化合物384； 和 化合物385。
11.一種化合物，其為 化合物11-K+鹽。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了式(I)的丙型肝炎病毒抑制劑，其中R
文檔編號(hào)C07K5/06GK1974596SQ20061016851
公開(kāi)日2007年6月6日 申請(qǐng)日期2003年5月20日 優(yōu)先權(quán)日2002年5月20日
發(fā)明者X·A·王, L·-Q·孫, S·-Y·薛, N·冼, P·M·斯科拉, P·赫瓦瓦薩姆, A·C·古德, Y·陳, J·A·坎貝爾 申請(qǐng)人:布里斯托爾-邁爾斯斯奎布公司