專利名稱：抗腫瘤的四氫嘧啶的制作方法
專利說明抗腫瘤的四氫嘧啶 發(fā)明領(lǐng)域 本發(fā)明涉及新穎的抗腫瘤化合物、含有這些化合物的藥物組合物及其作為抗腫瘤劑的用途。

背景技術(shù)：
Kourany-Lefoll等人(J.Org.Chem.1992，57，3832-3835)公開了Phloeodictine A(1)和Phloeodictine B(2)的生物活性，其為第一類天然存在的雙環(huán)1，2，3，4-四氫-6H-吡咯并[1，2-α]嘧啶鎓環(huán)體系成員，其得自深水海綿Phloeodictyon sp的未描述過的物種。

文中描述了化合物1和2對數(shù)種細菌顯示顯著活性，其各自MICs(μg/mL)如下糞鏈球菌(Streptococcus fecalis)(5，＞15)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(1，3)、埃希桿菌(Escherichia coli)(1，30)及銅綠色假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)(10，＞30)。
另外，這些生物堿對KB人鼻咽癌細胞顯示體內(nèi)細胞毒性，1和2的IC50分別為1.5和11.2μg/mL。
另外，Kourany-Lefoll等人(Tetrahedron 1994，50，3415-3426)后來描述了在進一步生物活性劑研究中由相同的海綿分離的命名為Phloeodictines A1-A7(3-9)及C1-C2(10和11)的吡咯并[1，2-α]嘧啶類。所有的化合物均顯示體外抗菌活性且對KB細胞顯示中度細胞毒性。

Phloeodictines A，B，A1-A7及C1-C2的混合物具有廣譜活性，其各自MICs(μg/mL)如下金黃色葡萄球菌(3，30，1，3)、埃希桿菌(3，30，3，＞30)、銅綠色假單胞菌(30，＞30，30，＞30)、產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌(Clostridium perfringens)(30，＞30，1，＞100)、脆弱類桿菌(Bacteroidesfragilis)(1，＞30，3，＞100)及不解糖消化球菌(Peptococcusassaccharolyicus)(10，＞30，3，＞100)。另外，這些物質(zhì)還對KB人鼻咽癌細胞顯示體外細胞毒性，Phloeodictine A、B、A1-A7和C1-C2的IC50分別為2.2、3.5、0.6和1.8μg/mL。
美國專利第4,292,429號公開了1-[2-[2-(2-氯苯基)-2-咪唑啉-1-基]-乙基]-3-(對甲苯基)-脲、1-[2-[2-(4-吡啶基)-2-咪唑啉-1-基]-乙基]-3-(-4-羧基-苯基)-脲和1-[2-[2-(氯苯氨基甲基)-2-咪唑啉-1-基]-乙基]-3-(對甲苯基)-脲對敘利亞金倉鼠(Syrian golden hamster)的肺、氣管和喉中由二乙基亞硝胺(DAENA)誘導的表皮癌的活性，或?qū)π∈驟rhlich腹水癌的活性。
另一方面，某些其它的1，2-二取代的環(huán)酰胺在現(xiàn)有技術(shù)的不相關(guān)領(lǐng)域中已被公開。尤其是美國專利第2,743,255號公開了制備作為化學反應(yīng)物很有價值的樹脂的方法。在所述樹脂的制備中下列化合物R被公開作為適當?shù)姆磻?yīng)物
癌是動物和人的最主要致死原因。已經(jīng)進行了且正在進行某些努力以得到可給予癌癥患者的活潑的且安全的抗腫瘤劑。本發(fā)明要解決的問題是提供更多的用于治療癌癥的化合物。
發(fā)明概述 一方面，本發(fā)明涉及通式I化合物或其藥物可接受鹽、衍生物、互變異構(gòu)體、前藥或立體異構(gòu)體
其中R1、R2、R3和R5各自獨立選自H、OH、NO2、NH2、SH、CN、鹵素、C(＝O)H、CO2H、COO-烷基、取代的或未取代的C1-C12烷基、取代的或未取代的C2-C12烯基、取代的或未取代的C2-C12炔基、取代的或未取代的C4-C18芳基、取代的或未取代的C4-C18雜環(huán)基、取代的或未取代的C1-C12烷氧基以及取代的或未取代的C2-C12?；? Y選自取代的或未取代的C1-C12亞烷基、取代的或未取代的C2-C12亞烯基以及取代的或未取代的C2-C12亞炔基； X選自O(shè)、S和NRa； Ra選自H、OH、NO2、NH2、SH、CN、鹵素、C(＝O)H、CO2H、COO烷基、取代的或未取代的C1-C12烷基、取代的或未取代的C2-C12烯基、取代的或未取代的C2-C12炔基、取代的或未取代的C4-C18芳基、取代的或未取代的C4-C18雜環(huán)基、取代的或未取代的C1-C12烷氧基以及取代的或未取代的C2-C12?；?； R4選自取代的或未取代的C1-C30烷基、取代的或未取代的C2-C30烯基、取代的或未取代的C2-C30炔基以及取代的或未取代的C4-C30烯炔基；并且 虛線代表任選的另外的鍵，其位于Na-Cb時R1不存在，位于Cb-X時R5不存在或位于Cb-Nc時R2不存在； 但是下式的化合物R除外
本發(fā)明還涉及式I化合物由Meandrinidae科，Meandrina屬，meandrites種的迷宮(maze coral)珊瑚中的分離以及由這些化合物形成衍生物。
另一方面，本發(fā)明還涉及包括化合物R在內(nèi)的式I化合物，或其藥物可接受的鹽、互變異構(gòu)體、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體在治療癌癥或在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用。
另一方面，本發(fā)明還涉及包含包括化合物R在內(nèi)的式I化合物，或其藥物可接受的鹽、互變異構(gòu)體、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體與藥物可接受的載體或稀釋劑的藥物組合物。
優(yōu)選實施方案的詳細描述 本發(fā)明涉及如上文所定義的通式I化合物。
在這些化合物中，可按照下列指導來選擇取代基 烷基、亞烷基和烷氧基基團優(yōu)選地具有1至30個碳原子。一類更優(yōu)選的烷基、亞烷基和烷氧基基團具有1至12個碳原子，尤其優(yōu)選的烷基、亞烷基和烷氧基基團具有1至約6個碳原子，且最優(yōu)選的烷基、亞烷基和烷氧基基團具有1至約4個碳原子。甲基、乙基、包括異丙基在內(nèi)的丙基和丁基為本發(fā)明化合物尤其優(yōu)選的烷基基團。甲氧基、乙氧基、包括異丙氧基在內(nèi)的丙氧基和包括叔丁氧基在內(nèi)的丁氧基為本發(fā)明化合物尤其優(yōu)選的烷氧基基團。另一類更優(yōu)選的烷基和亞烷基基團具有4至約12個碳原子，并更優(yōu)選5至約8個碳原子。戊基、己 基、庚基或辛基為本發(fā)明化合物尤其優(yōu)選的烷基基團。另一類優(yōu)選的烷基基團具有1至約20個碳原子，并更優(yōu)選6至約18個碳原子。如本文所使用的，術(shù)語烷基，除非另外更改，是指成環(huán)的和不成環(huán)的基團，盡管成環(huán)基團包含至少3個碳環(huán)成員。
我們定義烯炔基基團為含有一個或多個雙鍵和一個或多個三鍵的烴基基團，且優(yōu)選的烯炔基基團為那些具有4至約30個碳原子的基團。一類更優(yōu)選的烯炔基基團具有6至約18個碳原子。
本發(fā)明化合物中優(yōu)選的烯基、炔基、亞烯基和亞炔基基團具有一個或多個不飽和鍵和2至約30個碳原子。一類更優(yōu)選的烯基、炔基、亞烯基和亞炔基基團具有4至約20個碳原子，更優(yōu)選6至18個碳原子。本文所用的術(shù)語烯基、炔基、亞烯基和亞炔基是指成環(huán)的和不成環(huán)的基團，盡管成環(huán)的基團包含至少3個碳環(huán)成員。本發(fā)明化合物另一類優(yōu)選的烯基、炔基、亞烯基和亞炔基基團具有2至12個碳原子，并更優(yōu)選2至6個碳原子。
烷基、烯基、炔基、烯炔基、亞烷基、亞烯基和亞炔基基團可任選地被OH、NO2、SH、CN、鹵素、C(＝O)H、任選取代的C1-C12烷氧基、任選取代的C1-C12烷酰氧基、任選取代的C4-C19芳酰氧基、任選取代的C4-C16芳烷酰氧基、鹵素、任選取代的C4-C18芳基、氨基、單-(C1-C12烷基)氨基和二-(C1-C12烷基)氨基、任選取代的胍、任選取代的C1-C12烷氧基羰基、任選取代的C4-C11芳氧基羰基、任選取代的C4-C11芳烷氧基羰基、氨基甲?；?、N-(C1-C20烷基)氨基甲?；蚇，N-二-(C1-C20烷基)氨基甲?；〈?br> 本發(fā)明化合物中合適的芳基基團包括單環(huán)和多環(huán)基團，包括含有單獨的或稠合的芳基或雜芳基環(huán)的多環(huán)基團。通常的芳基基團含有1至3個環(huán)和4至約18個碳環(huán)原子。尤其優(yōu)選的芳基基團包括取代的或未取代的苯基、萘基、聯(lián)苯基、菲基和蒽基。
合適的雜環(huán)基團包括雜芳基和雜脂環(huán)基團。本發(fā)明化合物中合適的雜芳基基團含有一個、兩個或三個選自N、O和S原子的雜原子，且包括，如包括8-香豆素在內(nèi)的香豆素、包括8-喹啉基在內(nèi)的喹啉基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、咪唑基、吲哚基、苯并呋喃基和苯并噻唑基基團。本發(fā)明化合物中合適的雜脂環(huán)基團含有一個、兩個或三個選自N、O和S原子的雜原子，且包括，如四氫呋喃基、四氫吡喃基、哌啶基、嗎啉基和吡咯烷基基團。
合適的?；鶊F具有2至約12個碳原子，更優(yōu)選2至約8個碳原子，還更優(yōu)選2至6個碳原子，且甚至更優(yōu)選2個碳原子。
芳基、雜環(huán)基和酰基可在一個或多個可利用的位置被一個或多個適當?shù)幕鶊F取代，所述的適當?shù)幕鶊F如OH、OR’、＝O、SH、SR’、SOR’、SO2R’、NO2、NH2、NHR’、N(R’)2、＝NR’、NHCOR’、N(COR’)2、NHSO2R’、NH(C＝NH)NH2、NH(C＝NH)NHR’、NH(C＝NH)NR’2、CN、鹵素、C(＝O)H、C(＝O)R’、CO2H、CO2R’、OC(＝O)R’，其中每一R’基團獨立選自O(shè)H、NO2、NH2、SH、CN、鹵素、＝O、C(＝O)H、C(＝O)CH3、CO2H、取代的或未取代的C1-C12烷基、取代的或未取代的C2-C12烯基、取代的或未取代的C2-C12炔基和取代的或未取代的芳基。當這些基團本身被取代時，取代基可選自上述名單。
本發(fā)明化合物中合適的鹵素取代基包括F、Cl、Br和I。
術(shù)語“藥物可接受的鹽、衍生物、前藥”是指任何藥物可接受的鹽、酯、溶劑化物、水合物或任何當給予受者時能夠(直接或間接)提供本文所述化合物的其它化合物。然而，可以理解，非藥物可接受的鹽也落入本發(fā)明的范圍，因為其可用于制備藥物可接受的鹽。鹽、前藥和衍生物的制備可通過本領(lǐng)域已知的方法進行。
例如，本文所提供的化合物的藥物可接受的鹽通過常規(guī)化學方法由含有堿性和酸性基團的母體化合物合成。通常，這樣的鹽通過例如將這些化合物的游離酸或堿形式與化學計算量的合適的堿或酸在水或有機溶劑或二者混合物中反應(yīng)而制備。通常，優(yōu)選非水介質(zhì)如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。酸加成鹽的實例包括礦物酸加成鹽例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽，以及有機酸加成鹽例如乙酸鹽、三氟乙酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、檸檬酸鹽、草酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、蘋果酸鹽、扁桃酸鹽、甲烷磺酸鹽和對甲苯磺酸鹽。堿加成鹽的實例包括無機鹽例如鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽和銨鹽，以及有機堿鹽例如乙二胺、乙醇胺、N，N-二亞烷基乙醇胺、三乙醇胺和堿性氨基酸鹽。
術(shù)語互變異構(gòu)體是指所定義化合物的兩個或多個結(jié)構(gòu)異構(gòu)體中的一個，其以平衡形式存在，并容易從一種異構(gòu)體轉(zhuǎn)變成另一種異構(gòu)體，如酰胺-二酰亞胺、內(nèi)酰胺-內(nèi)酰亞胺等。
本發(fā)明化合物可為游離化合物或溶劑化物(如水合物、)的結(jié)晶形式，并且旨在將兩種形式均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。溶劑化方法是本領(lǐng)域中公知的。
作為式I化合物前藥的任何化合物均在本發(fā)明的范圍和精神之內(nèi)。術(shù)語“前藥”以其最廣泛的意義而使用，且包含那些在體內(nèi)轉(zhuǎn)變成本發(fā)明化合物的衍生物。本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易想到這樣的衍生物，其包括，例如游離羥基被轉(zhuǎn)變成酯衍生物的化合物。
由上述式I代表的本發(fā)明化合物可包括某些類型的對映異構(gòu)體。關(guān)于雙鍵的異構(gòu)現(xiàn)象也是可能的，因此在某些情況下分子能夠以(E)-或(Z)-異構(gòu)體的形式存在。單一異構(gòu)體和異構(gòu)體的混合物落入本發(fā)明的范圍。
本發(fā)明的優(yōu)選化合物為Y是取代的或未取代的C1-C6亞烷基、更優(yōu)選為取代的或未取代的C1-C4亞烷基的那些化合物。尤其優(yōu)選亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞異丙基和亞丁基。最優(yōu)選未取代的C4亞烷基鏈。
尤其優(yōu)選的R1、R2、R3和R5各自獨立選自H、OH、NO2、NH2、SH、CN、鹵素、C(＝O)H、CO2H、COO烷基、取代的或未取代的C1-C6烷基和取代的或未取代的C2-C6?；?。在實施方案中它們均為H。
在優(yōu)選實施方案中，X為NRa，其中Ra優(yōu)選地選自H、OH、NO2、NH2、SH、CN、鹵素、C(＝O)H、CO2H、COO烷基、取代的或未取代的C1-C6烷基和取代的或未取代的C2-C6?；?，尤其優(yōu)選H和COO烷基。
本發(fā)明尤其優(yōu)選的化合物為R4為下式的那些化合物
其中n為1至12的整數(shù)，更優(yōu)選為1至8； m為1至10的整數(shù)且尤其優(yōu)選為1至5； R6選自H、OH、NO2、SH、CN、鹵素、C(＝O)H、任選取代的C1-C12烷氧基、任選取代的C1-C12烷酰氧基、任選取代的C4-C18芳酰氧基、任選取代的C4-C16芳烷酰氧基、任選取代的C4-C18芳基、氨基、單-(C1-C12烷基)氨基、二-(C1-C12烷基)氨基、任選取代的胍、任選取代的C1-C12烷氧基羰基、任選取代的C4-C11芳氧基羰基、任選取代的C4-C11芳烷氧基羰基、氨基甲酰基、N-(C1-C20烷基)氨基甲酰基和N，N-二-(C1-C20烷基)氨基甲?；徊⑶? 虛線代表另外的單鍵或雙鍵。尤其優(yōu)選位于C1-C2之間的雙鍵和位于C3-C4之間的三鍵。
尤其優(yōu)選的是另外的鍵位于Na-Cb，R1不存在；位于Cb-X，R5不存在或位于Cb-Nc，R2不存在；更優(yōu)選為位于Cb-X之間，R5不存在。
更具體地，本發(fā)明提供式II化合物或其藥物可接受的鹽、互變異構(gòu)體、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體
其中R1、R2和R3各自獨立選自H、OH、NO2、NH2、SH、CN、鹵素、C(＝O)H、CO2H、COO烷基、取代的或未取代的C1-C12烷基、取代的或未取代的C2-C12烯基、取代的或未取代的C2-C12炔基、取代的或未取代的C4-C18芳基、取代的或未取代的C4-C18雜環(huán)基團、取代的或未取代的C1-C12烷氧基和取代的或未取代的C2-C12?；? Y選自取代的或未取代的C1-C12亞烷基、取代的或未取代的C2-C12亞烯基和取代的或未取代的C2-C12亞炔基； X選自O(shè)、S和NH；并且 R4選自取代的或未取代的C1-C30烷基、取代的或未取代的C2-C30烯基、取代的或未取代的C2-C30炔基和取代的或未取代的C4-C30烯炔基。
優(yōu)選的式II化合物是Y為取代的或未取代的C1-C6亞烷基、更優(yōu)選為取代的或未取代的C1-C4亞烷基的那些化合物。尤其優(yōu)選亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞異丙基和亞丁基。最優(yōu)選未取代的C4亞烷基鏈。
尤其優(yōu)選的R1、R2和R3各自獨立選自H、OH、NO2、NH2、SH、CN、鹵素、C(＝O)H、CO2H、COO烷基、取代的或未取代的C1-C6烷基和取代的或未取代的C2-C6?；?。在實施方案中它們均為H。
在優(yōu)選實施方案中X為NH。
尤其優(yōu)選的本發(fā)明化合物為R4為下式的那些化合物
其中n為1至12的整數(shù)，更優(yōu)選為1至8； m為1至10的整數(shù)且尤其優(yōu)選為1至5； R6選自H、OH、NO2、SH、CN、鹵素、C(＝O)H、任選取代的C1-C12烷氧基、任選取代的C1-C12烷酰氧基、任選取代的C4-C18芳酰氧基、任選取代的C4-C16芳烷酰氧基、任選取代的C4-C18芳基、氨基、單-(C1-C12烷基)氨基、二-(C1-C12烷基)氨基、任選取代的胍、任選取代的C1-C12烷氧基羰基、任選取代的C4-C11芳氧基羰基、任選取代的C4-C11芳烷氧基羰基、氨基甲?；?、N-(C1-C20烷基)氨基甲?；蚇，N-二-(C1-C20烷基)氨基甲?；?；并且 虛線代表另外的單鍵或雙鍵。尤其優(yōu)選位于C1-C2之間的雙鍵和位于C3-C4之間的三鍵。
尤其優(yōu)選的本發(fā)明化合物如下

化合物A 化合物B 化合物A為由少量Meandrinidae科，Meandrina屬，meandrites種31712的迷宮珊瑚樣品分離得到的海洋天然產(chǎn)物。該珊瑚通過在Motagua附近的加勒比海用水中呼吸器潛水至40m的深度而收集[UTM/NAD1927(北美資料1927，15和16區(qū)域)X坐標362642；Y坐標1751928]，并且其描述如下群體為具有meandroid或flabelloid形式且在石灰質(zhì)骨架中具有珊瑚蟲的大塊結(jié)構(gòu)。其尺寸能夠達到直徑30cm，為淡黃色或棕色。
另外，按照下述方案1的合成方法合成化合物A。

方案1 該方法包含下列連續(xù)關(guān)鍵步驟 a)油酸甲酯進行碳-碳雙鍵的氧化斷裂以得到相應(yīng)的醛12； b)按照標準的文獻操作將醛12轉(zhuǎn)變成乙烯基碘化物13； c)乙烯基碘化物13和1-辛炔之間進行Sonogashira偶聯(lián)反應(yīng)，然后將烯炔14的酯基團在堿性介質(zhì)中水解得到酸15； d)酸15和二保護的亞精胺衍生物16之間在標準的文獻操作下進行偶聯(lián)反應(yīng)得到相應(yīng)的酰胺17； e)17在TiCl4的存在下進行環(huán)化反應(yīng)得到1，4，5，6-四氫嘧啶衍生物18；以及 f)18與N，N′-雙(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫代假脲進行偶聯(lián)反應(yīng)，然后脫除19的Boc基團保護得到化合物A。
由該化合物通過合成有機化學中以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)操作能夠合成具有不同官能團或取代基的類似物。例如，通過水解、臭氧分解、Sharpless環(huán)氧化或Diels-Alder反應(yīng)。另外，使用方案1中公開的操作用適當?shù)闹虚g體也能夠合成類似物。
上述式I和II化合物的重要特征是其生物活性，尤其是其細胞毒性活性。本發(fā)明提供了式I和II化合物的新穎的具有細胞毒性活性的藥物組合物，及其作為抗腫瘤劑的用途。因此本發(fā)明還提供了包含本發(fā)明化合物、其藥物可接受的鹽、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體與藥物可接受載體的藥物組合物。
藥物組合物的實例包括任何用于口腔、局部或腸胃外給藥的固體(片劑、丸劑、膠囊、顆粒等)或液體(溶液、混懸液或乳液)組合物。
可通過任何適當?shù)姆椒ńo予本發(fā)明的化合物或組合物，例如靜脈輸注、口腔制劑以及腹膜內(nèi)和靜脈內(nèi)給藥。優(yōu)選最高24小時，更優(yōu)選2-1 2小時，最優(yōu)選2-6小時的輸注時間。尤其期望短的輸注時間，這允許不必在醫(yī)院中過夜進行治療。然而，如果需要，輸注可為12至24小時或更長。可以適當?shù)拈g隔如1至4周進行輸注。例如可通過在持續(xù)釋放制劑中的脂質(zhì)體或納米球包囊或通過其它標準輸送方式給予含有本發(fā)明化合物的藥物組合物。
所述化合物的正確劑量根據(jù)特定的制劑、應(yīng)用方式、特定的位置、宿主和待治療的腫瘤而不同。其它因素，如年齡、體重、性別、飲食、給藥時間、排泄速率、宿主的狀態(tài)、藥物聯(lián)合、反應(yīng)靈敏度和疾病的嚴重性均應(yīng)該考慮在內(nèi)。能夠在最高耐受劑量范圍內(nèi)連續(xù)或周期性給藥。
本發(fā)明的化合物和組合物可與其它藥物一起使用以提供聯(lián)合療法。其它藥物可形成同一組合物的一部分或作為單獨的組合物提供，用于同時或不同時給藥。
這些化合物的抗腫瘤活性包括白血病、肺癌、結(jié)腸癌、腎癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、子宮頸癌、肉瘤和黑素瘤。
實施例 實施例1珊瑚與采集面的描述 Meandrinidae科，Meandrina屬，meandrites種31712的迷宮珊瑚樣品通過在Motagua附近的加勒比海用水中呼吸器潛水至40m的深度而收集[UTM/NAD1927(北美資料1927，15和16區(qū)域)X坐標362642；Y坐標1751928]。
實施例2化合物A的分離 將實施例1的冷凍樣品(1646g)研碎并用異丙醇徹底萃取兩次。將合并的萃取液濃縮得到8.67g粗產(chǎn)品。將該材料再次懸浮在水(500mL)中，并用己烷(3×500mL，得1.18g)、乙酸乙酯(3×500 L，得87mg)及正丁醇(2×250mL，得394mg)萃取。
通過重復半制備HPLC(SymmetryPrep C-187μm，7.8×150mm色譜柱，H2O(0.05％TFA)CH3CN(0.05％TFA)梯度，UV檢測)由活性正丁醇部分分離化合物A(1.2mg)。
化合物A淡黃色油狀物。HRFABMS m/z 430.3917[M+H]+(C26H48N5計算值為430.3910)。1H(500 MHz)和13C NMR(125MHz)見表1。
表1.化合物A的1H和13C NMR數(shù)據(jù)(CDCl3) *歸屬可互換
化合物A 實施例3化合物B的合成
于-78℃將O3氣流鼓泡通過化合物A(8.0mg，0.015mmol)的CH2Cl2∶MeOH(1.0mL∶0.1mL)溶液，至混合物變藍。于-78℃將氬氣流通過反應(yīng)鼓泡10min后加入二甲硫醚(14μL，0.19mmol)。將反應(yīng)在23℃攪拌30min，然后真空蒸發(fā)溶劑，以得到殘余物，將殘余物用HPLC純化(SymmetryPrep C-187μm，7.8×150mm色譜柱，H2O(0.1％TFA)CH3CN(0.1％TFA)梯度，UV檢測)得到化合物B(2.8mg，46％)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ3.51(m，4H)，3.38(t，J＝6.0Hz，2H)，2.55(t，J＝7.8Hz，2H)，2.04(m，2H)，1.75(m，2H)，1.63(m，6H)，1.38(m，14H)。
13C NMR(125MHz，CD3OD)δ165.1，162.9，52.4，47.1，42.0，39.9，32.4，30.8，30.5，30.2，30.0，29.9，27.9，26.8，25.9，19.9。
HRMS(MALDI)324.2757[M+H]+(C17H34N5O1計算值為324.2763)。
實施例4化合物A的合成 將油酸甲酯(10.0g，33.7mmol)的無水CH2Cl2(100mL)溶液冷卻至-78℃并將O3氣流鼓泡通過反應(yīng)混合物至溶液變成微藍色(10min)。將氬氣鼓泡通過混合物，并緩慢加入PPh3(19.7g，75.1mmol)的CH2Cl2(100mL)溶液。反應(yīng)混合物升溫至23℃并攪拌18小時。將溶劑蒸發(fā)至干，并將固體用冷的己烷(80mL)研碎。蒸發(fā)濾液得到黃色油狀物。油狀物用硅膠層析純化(CH2Cl2∶Hex，1∶1，然后CH2Cl2∶Et2O，1∶1)得到兩種預期的醛，壬醛(4.80g，100％)和8-甲酰辛酸甲酯12(6.28g，100％)，二者均為無色油狀物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.76(s，1H)，3.66(s，3H)，2.41(t，J＝7.3Hz，2H)，2.30(t，J＝7.3Hz，2H)，1.61(m，4H)，1.31(m，6H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ202.4，173.8，51.1，43.5，33.7，28.7，28.6，28.5，24.5，21.7。
MS(APCl)187(M+1)+。Rf＝0.2(CH2Cl2)。
向(碘甲基)三苯基碘化鏻(39.89g，75.3mmol)的無水THF(300mL)溶液滴加NaHMDS(75.3mL，1.0M THF溶液，75.3mmol)并在23℃攪拌10min。將反應(yīng)混合物冷卻至-60℃并滴加1，3-二甲基-3，4，5，6-四氫-2(1H)-嘧啶酮(15.3mL，126.4mmol)并立即冷卻至-78℃。將8-甲酰辛酸甲酯12(5.6g，30.1mmol)的THF(290mL)溶液于30min內(nèi)緩慢加入到內(nèi)鎓鹽溶液中，于-78℃攪拌5min并升溫至23℃。2小時后，將混合物用己烷(300mL)稀釋并用NaCl飽和水溶液(300mL)洗滌。水層用己烷(3×300mL)萃取，合并的有機層用Na2SO4干燥，過濾，并蒸發(fā)。硅膠快速分離色譜(CH2Cl2∶Hexane，1∶1)提供(Z)-10-碘癸-9-烯酸甲酯13(7.21g，77％)，其為無色油狀物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.16-6.12(m，2H)，3.66(s，3H)，2.30(t，J＝7.3Hz，2H)，2.13(m，2H)，1.60(m，2H)，1.40-1.20(m，8H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ174.3，141.3，82.2，51.4，34.6，34.0，29.7，29.0，28.8，27.8，24.9。
MS(APCI)184(M-128)+。Rf＝0.25(CH2Cl2∶己烷，1∶1)。
于-20℃在4小時內(nèi)向(Z)-10-碘癸-9-烯酸甲酯13(7.21g，22.9mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(1.56g，2.29mmol)和CuI(1.31g，6.88mmol)的無水乙腈∶Et3N(170mL∶34mL)懸浮液中加入1-辛炔(4.06mL，27.51mmol)的乙腈∶Et3N(50mL∶10mL)溶液。將反應(yīng)混合物升溫至23℃。18小時后加入1N HCl(200mL)，并用CH2Cl2(3×250mL)萃取混合物。合并的有機層用Na2SO4干燥，過濾并蒸發(fā)。硅膠快速分離色譜(CH2Cl2∶Hexane，從10∶1至1∶1)提供(Z)-十八碳-9-烯-11-炔酸甲酯14(5.41g，81％)，其為無色油狀物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.80(dt，J＝10.3及7.3Hz，1H)，5.43(d，J＝10.3Hz，1H)，3.66(s，3H)，2.35-2.23(m，6H)，1.61-1.40(m，6H)，1.40-1.25(m，12H)，0.89(brt，3H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ174.3，142.4，109.4，94.5，77.3，51.4，34.1，31.3，29.9，29.1，29.0，28.9，28.8，28.7，28.5，24.9，22.5，19.5，14.0。
MS(APCI)293(M+1)+。Rf＝0.30(CH2Cl2∶Hexane，1∶1)。
于23℃向(Z)-十八碳-9-烯-11-炔酸甲酯14(2.26g，8.12mmol)的甲醇(8.5mL)溶液中加入10M NaOH(1.62mL，16.2mmol)溶液。將溶液攪拌3小時，然后加入另外的10M NaOH(1.62mL，16.2mmol)，并在2小時后再加入另外的10M NaOH(1.62mL，16.2mmol)。最后一次加入后2小時反應(yīng)完全，真空蒸發(fā)溶劑。將殘余物用水稀釋并用1N HCl酸化至pH＝2。用CH2Cl2(2×200mL)萃取水層，合并的有機相用無水Na2SO4干燥，過濾并蒸發(fā)至干，得到(Z)-十八碳-9-烯-11-炔酸15(2.0g，89％)，其為無色油狀物，不經(jīng)進一步純化而用使用。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.79(dt，J＝10.6及7.3Hz，1H)，5.42(br d，J＝10.6Hz，1H)，2.37-2.24(m，6H)，1.65-1.40(m，6H)，1.40-1.23(m，12H)，0.88(t，J＝7.0Hz，3H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ179.9，142.4，109.4，94.5，77.3，34.0，31.3，29.9，29.0，28.9(2)，28.8，28.7，28.5，24.6，22.6，19.5，14.0。
MS(APCI)279(M+1)+。Rf＝0.40(CH2Cl2∶MeOH，10∶1)。
于0℃向亞精胺(3.0g，20.6mmol)的THF(100mL)溶液緩慢加入2-(Boc-氧亞氨基)-2-苯乙腈(10.14g，20.6mmol)的THF(20mL)溶液。反應(yīng)混合物在0℃攪拌1小時，然后真空蒸發(fā)溶劑。將殘余物用硅膠過濾并用CH2Cl2∶EtOAc 7∶3，然后用CH2Cl2∶MeOH 1∶1洗脫得到4-(3-(氨基甲酸叔丁酯)丙基)丁基氨基甲酸叔丁酯16(5.3g，＞100％)，其為無色油狀物。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ3.15(t，J＝6.8Hz，2H)，3.08(t，J＝6.8Hz，2H)，3.00(t，J＝6.8Hz，4H)，1.83(m，2H)，1.69(m，2H)，1.55(m，2H)，1.44(bs，18H)。
MS(APCI)346(M+1)+。Rf＝0.18(CH2Cl2∶MeOH，8∶2)。
于23℃向15(1.01g，3.65mmol)和16(1.89g，5.47mmol)的CH2Cl2(50mL)溶液中加入Et3N(2.58mL，18.6mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧)三(二甲氨基)鏻(2.42g，5.47mmol)。反應(yīng)混合物在23℃攪拌3小時，然后用CH2Cl2稀釋，并用1M HCl和飽和NaCl水溶液洗滌。合并的有機層用Na2SO4干燥，過濾并蒸發(fā)。得到的殘余物用硅膠快速分離色譜純化(CH2Cl2∶EtOAc，從6∶1至3∶1)得到化合物17(2.14g，96％)，其為無色油狀物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ5.79(dt，J＝10.5及7.5Hz，1H)，5.40(bd，J＝9.5Hz，1H)，3.34(m，4H)，3.07-3.01(m，4H)，3.35-2.25(m，4H)，1.76-1.31(m，16H)，1.43(s，28H)，0.90(t，J＝6.8Hz，3H)。
13C NMR(125MHz，CD3OD)δ 175.5，175.2，158，142.9，110.7，95.0，78.4，32.4，30.9，30.5，30.4，30.3，30.1，29.9，29.9，29.5，28.8，23.6，20.1，14.4。
MS(APCI)628(M+23)+。
于23℃向17(542mg，0.89mmol)的無水二甲苯(16mL)懸浮液中緩慢加入TiCl4(98μL，0.89mmol)。將混合物165℃在加熱1小時。將反應(yīng)混合物冷卻至23℃后，加入NaOH(270mg，6.75mmol)的MeOH(15mL)溶液，通過Celite過濾并用MeOH(20mL)洗滌。濾液濃縮至干，加入飽和NaCl水溶液(50mL)，混合物用CH2Cl2(3×50mL)萃取。合并的有機層用無水Na2SO4干燥，過濾并濃縮。將殘余物用氨基硅膠色譜純化(CH2Cl2∶MeOH，從16∶1至1∶1)得到(Z)-4-(2-(十五碳-6-烯-8-炔基)-5，6-二氫嘧啶-1(4H)-基)丁-1-胺18(131mg，38％)，其為黃色油狀物。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ5.80(dt，J＝10.5及7.6，1H)，5.41(d，J＝10.3Hz，1H)，3.49(m，4H)，3.37(m，2H)，2.71(t，J＝7.0Hz，2H)，2.54(t，J＝7.8Hz，2H)，2.32(m，4H)，2.02(m，2H)1.69-1.30(m，22H)，0.92(t，J＝6.8Hz，3H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ163.1，142.0，109.2，94.3，76.9，5 1.2，45.7，40.9，38.5，31.1，29.7，29.4，28.8，28.7，28.5，28.3，27.3，27.2，25.2，22.3，19.3，19.0，13.8.(兩個13C信號沒有觀察到)。
MS(APCI)388(M+1)+。Rf＝0.32(Si-NH2，CH2Cl2∶MeOH，8∶1)。
于23℃向18(18mg，0.046mmol)的無水THF(0.6mL)溶液中加入1，3-二(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫代假脲(20mg，0.069mmol)。反應(yīng)混合物在65℃加熱5小時，然后冷卻至23℃。真空蒸發(fā)得到殘余物，用硅膠色譜純化(CH2Cl2∶MeO，從99∶1至9∶1)得到19(7.8mg，28％)，其為無色油狀物。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ5.79(dt，J＝11.0及7.5，1H)，5.41(m，1H)，3.52(m，4H)，3.41(t，J＝6.5Hz，2H)，3.37(t，J＝6.0Hz，2H)，2.55(t，J＝7.5Hz，2H)，2.31(td，J＝7.0及2.0，2H)，2.27(t，J＝7.0Hz，2H)，2.02(m，2H)，1.72(m，2H)，1.61(m，4H)，1.52(s，9H)，1.46(s，9H)，1.49-1.28(m，8H)，0.91(t，J＝7.0Hz，3H)。
13C NMR(75MHz，CD3OD)δ165.0，164.5，157.7，154.2，142.8，110.8，95.1，84.5，80.4，78.4，52.5，47.1，40.9，39.9，32.5，32.4，30.9，30.1，30.0，29.59，28.6，28.55，27.9，27.1，25.8，23.7，20.1，20.0，14.4。
MS(APCI)630(M+1)+。Rf＝0.10(CH2Cl2∶MeOH，94∶6)。
將19(22mg，3.65mmol)的乙二醇(2.2mL)溶液在200℃加熱2min。將反應(yīng)混合物冷卻至23℃并分配至CH2Cl2和含有數(shù)滴3M NaOH(pH14)的飽和NaCl水溶液。用CH2Cl2萃取含水有機層，合并的有機層用Na2SO4干燥，過濾，在真空下蒸發(fā)得到31mg化合物A的粗產(chǎn)物，用HPLC純化(SymmetryPrep C-187μm，7.8×150mm色譜柱，H2O(0.1％TFA)∶CH3CN(0.1％TFA)梯度，UV檢測)得到化合物A(6.1mg，32％)，其所有的參數(shù)與實施例2中得到的相同。
實施例5用于抗腫瘤篩選的生物測定 這些測定的結(jié)局是通過使細胞持續(xù)接觸待測樣品而中斷“體外”腫瘤細胞培養(yǎng)物的生長。
細胞系 通過比色測定細胞生長的抑制 使用磺基若丹明B(SRB)反應(yīng)的比色法測定已被采用于定量測量細胞生長和存活率[按照Philip Skehan et al.(1990)，New colorimetriccytotoxicity assay for anticancer drug screening(用于抗癌藥物篩選的新比色法細胞毒性測定)，J.Natl.Cancer Inst.821107-1112所述的技術(shù)]。
這種測定形式使用9mm直徑的96孔細胞培養(yǎng)微量板(Mosmann，1983；Faircloth，1988)。大部分細胞系得自美國標準菌庫(ATCC)，其源自不同的人類癌癥類型。
將細胞保持在RPMI1640 10％FBS中，補入0.1g/L硫酸青霉素和0.1g/L硫酸鏈霉素，然后在37℃、5％CO2和98％濕度下孵育。對于所述實驗，使用胰蛋白酶由亞融合的培養(yǎng)物收集細胞并在平板培養(yǎng)之前再次懸浮在新鮮的培養(yǎng)基中。
將細胞以5×103細胞每孔接種在96孔微量滴定板中的195μL等份的培養(yǎng)基中，并允許其通過在不含藥物的培養(yǎng)基中生長18小時而結(jié)合在板表面上。然后加入溶于DMSO∶EtOH∶PBS(0.5∶0.5∶99)的范圍為10至10-8μg/mL的5μL等份的樣品。暴露48小時后，通過SRB方法學測量抗腫瘤效果通過加入50μL冷的50％(wt/vol)三氯乙酸(TCA)將細胞固定并在4℃孵育60min。用去離子水洗滌板并干燥。向每一微量滴定孔中加入100μL的SRB溶液(0.4％wt/vol，1％乙酸溶液)并在室溫下孵育10min。通過用1％乙酸洗滌而除去未結(jié)合的SRB。將板在空氣中干燥，并用Tris緩沖液溶解結(jié)合的染料。在自動分光光度板記錄儀上在490nm單波長下讀取光密度。
計算三個孔中數(shù)據(jù)的平均+/-SD值。能夠計算細胞響應(yīng)的某些參數(shù)GI＝生長抑制，TGI＝總生長抑制(細胞抑制效果)以及LC＝細胞殺滅(細胞毒性效果)。
表2示出了化合物A、B和19的生物活性數(shù)據(jù)。
表2.活性數(shù)據(jù)(摩爾的)
權(quán)利要求
1.通式I化合物或其藥物可接受鹽、互變異構(gòu)體、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體
其中R1、R2、R3和R5各自獨立選自H、OH、NO2、NH2、SH、CN、鹵素、C(＝O)H、CO2H、COO-烷基、取代的或未取代的C1-C12烷基、取代的或未取代的C2-C12烯基、取代的或未取代的C2-C12炔基、取代的或未取代的C4-C18芳基、取代的或未取代的C4-C18雜環(huán)基、取代的或未取代的C1-C12烷氧基以及取代的或未取代的C2-C12酰基；
Y選自取代的或未取代的C1-C12亞烷基、取代的或未取代的C2-C12亞烯基以及取代的或未取代的C2-C12亞炔基；
X選自O(shè)、S和NRa；
Ra選自H、OH、NO2、NH2、SH、CN、鹵素、C(＝O)H、CO2H、COO烷基、取代的或未取代的C1-C12烷基、取代的或未取代的C2-C12烯基、取代的或未取代的C2-C12炔基、取代的或未取代的C4-C18芳基、取代的或未取代的C4-C18雜環(huán)基、取代的或未取代的C1-C12烷氧基以及取代的或未取代的C2-C12?；?br> R4選自取代的或未取代的C1-C30烷基、取代的或未取代的C2-C30烯基、取代的或未取代的C2-C30炔基以及取代的或未取代的C4-C30烯炔基；并且
虛線代表任選的另外的鍵，其位于Na-Cb時R1不存在，位于Cb-X時R5不存在或位于Cb-Nc時R2不存在；
下式的化合物R除外
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其具有下式II
其中R1、R2、R3、R4和Y均如權(quán)利要求1所定義，并且X選自O(shè)、S和NH。
3.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中Y為取代的或未取代的C1-C6亞烷基，并且X為NH。
4.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1、R2、R3和R5各自獨立選自H、OH、NO2、NH2、SH、CN、鹵素、C(＝O)H、CO2H、COO烷基、取代的或未取代的C1-C6烷基和取代的或未取代的C2-C6酰基。
5.如權(quán)利要求2所述的化合物，其中R1、R2和R3各自獨立選自H、OH、NO2、NH2、SH、CN、鹵素、C(＝O)H、CO2H、取代的或未取代的C1-C6烷基和取代的或未取代的C2-C6酰基。
6.如權(quán)利要求1至5中任一權(quán)利要求所述的化合物，其中R4為
其中n為1至12的整數(shù)；
m為1至10的整數(shù)；
R6選自H、OH、NO2、SH、CN、鹵素、C(＝O)H、任選取代的C1-C12烷氧基、任選取代的C1-C12烷酰氧基、任選取代的C4-C18芳酰氧基、任選取代的C4-C16芳烷酰氧基、任選取代的C4-C18芳基、氨基、單-(C1-C12烷基)氨基、二-(C1-C12烷基)氨基、任選取代的胍、任選取代的C1-C12烷氧基羰基、任選取代的C4-C11芳氧基羰基、任選取代的C4-C11芳烷氧基羰基、氨基甲酰基、N-(C1-C20烷基)氨基甲?；蚇，N-二-(C1-C20烷基)氨基甲?；?br> 并且虛線代表另外的單鍵或雙鍵。
7.如權(quán)利要求6所述的化合物，其中n為1至8的整數(shù)，m為1至5的整數(shù)，并且存在位于C1-C2之間的雙鍵和位于C3-C4之間的三鍵。
8.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，或其藥物可接受鹽、互變異構(gòu)體、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體，所述化合物具有下式
9.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，或其藥物可接受鹽、互變異構(gòu)體、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體，所述化合物具有下式
10.如權(quán)利要求1所述的化合物，或其藥物可接受鹽、互變異構(gòu)體、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體，所述化合物具有下式
11.如前述任一權(quán)利要求所述的化合物，其中所述化合物是其三氟乙酸鹽的形式。
12.獲得前述任一權(quán)利要求所定義的化合物的方法，其包括由Meandrina meandrites珊瑚中萃取和分離。
13.藥物組合物，其包含包括化合物R在內(nèi)的權(quán)利要求1至11中任一權(quán)利要求所述的化合物，或其藥物可接受鹽、互變異構(gòu)體、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體以及藥物可接受的稀釋劑或載體。
14.包括化合物R在內(nèi)的權(quán)利要求1至11中任一權(quán)利要求所述的化合物，或其藥物可接受鹽、互變異構(gòu)體、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體在藥物制備中的用途。
15.如權(quán)利要求14所述的用途，其中所述藥物制備是為了治療癌癥。
全文摘要
式(I)抗腫瘤化合物或其衍生物用作抗腫瘤劑，其中x為O、S或NRa，所述化合物得自Meandrinidae科，Meandrina屬，meandrites種的迷宮珊瑚。
文檔編號C07D239/06GK101171236SQ200680014961
公開日2008年4月30日 申請日期2006年5月3日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月3日
發(fā)明者約瑟·費爾南多·雷耶斯貝尼特斯, 瑪麗亞·德爾·卡門·奎瓦斯馬昌特, 戴維·蒙塔爾沃洛沃, 瑪·赫蘇斯·馬丁洛佩斯, 瑪麗亞·克里斯蒂娜·馬特奧烏爾瓦諾, 安德烈斯·弗蘭切斯基索洛索 申請人:馬爾藥品公司