專利名稱：N - [ 1 - ( 2 -乙氧基乙基 ) - 5 - ( N -乙基 - N -甲基氨基 ) - 7 - ( 4 -甲基 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的晶型。更具體地，本發(fā)明涉及(1)N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的無水結(jié)晶形式； (2)含有至少一種上述晶型的藥物組合物；(3)使用至少一種上述晶型用于治療磷酸二脂酶-5介導疾病的方法；和(4)用于制備上述晶型的方法。
背景技術(shù)：
化合物N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺具有如下結(jié)構(gòu)(1)
已公布的PCT申請WO2005/049616(“化合物申請”)的實施例115描述了N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的合成方法。該化合物申請還公開了N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺是一種可用于治療如高血壓的磷酸二酯酶-5(PDE-5)介導病癥的PDE抑制劑。
不同固態(tài)晶型的藥物化合物可以具有在本質(zhì)上相差很大的物理性質(zhì)。這種物理性質(zhì)方面的差異可以對例如藥物化合物如何制備、如何加工、如何配制或如何給藥造成影響。因此，希望確定一種新型的固態(tài)晶型的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺，該固態(tài)晶型相對于其它固態(tài)晶型在制備、加工、配制或給藥方面更優(yōu)。如下述，已經(jīng)確定了三種新型的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺無水結(jié)晶形式。
發(fā)明內(nèi)容
在一個實施方式中，本發(fā)明涉及N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的無水結(jié)晶形式。
在另一實施方式中，本發(fā)明涉及N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的晶型A無水結(jié)晶形式(“晶型A”)。
在另一實施方式中，本發(fā)明涉及N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的晶型B無水結(jié)晶形式(“晶型B”)。
在另一實施方式中，本發(fā)明涉及N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的晶型C無水結(jié)晶形式(“晶型C”)。
在另一實施方式中，本發(fā)明涉及一種含有至少兩種N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶型的組合物，所述晶型選自晶型A、晶型B和晶型C。
在另-實施方式中，本發(fā)明涉及一種含有至少一種N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶型和藥學上可接受載體的藥物組合物，所述晶型選自晶型A、晶型B和晶型C。
在另一實施方式中，本發(fā)明涉及一種用于治療PDE-5介導病癥的方法，所述方法包括給患者服用治療有效量的至少一種N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶型，所述晶型選自晶型A、晶型B和晶型C。
在另一實施方式中，本發(fā)明涉及用于制備晶型A、晶型B和晶型C的方法。
本發(fā)明的其它實施方式通過本申請的說明書進行討論。
圖1表示示意性的晶型A的X-射線粉末衍射譜圖。
圖2表示計算出的晶型A的X-射線粉末衍射譜圖。
圖3表示示意性的晶型B的X-射線粉末衍射譜圖。
圖4表示示意性的晶型C的X-射線粉末衍射譜圖。
圖5表示示意性的晶型A的DSC差示熱分析圖。
圖6表示示意性的晶型B的DSC差示熱分析圖。
圖7表示示意性的晶型C的DSC差示熱分析圖。
圖8表示示意性的晶型A的FT-IR譜圖。
圖9表示示意性的晶型B的FT-IR譜圖。
圖10表示示意性的晶型C的FT-IR譜圖。
圖11表示示意性的晶型A的拉曼譜圖。
圖12表示示意性的晶型B的拉曼譜圖。
圖13表示示意性的晶型C的拉曼譜圖。
圖14表示實施例1中制備的物質(zhì)的X-射線粉末衍射譜圖。
圖15表示用于制備N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的示意性合成示意圖。
具體實施例方式 化合物的固態(tài)晶型可以在本質(zhì)上影響化合物的物理性質(zhì)，物理性質(zhì)包括(1)填充性能，例如摩爾體積、密度和收濕性；(2)熱力學性質(zhì)，例如，熔融溫度、蒸氣壓和溶解性；(3)動力學性質(zhì)，例如，分解速率和穩(wěn)定性(包括在環(huán)境條件下，尤其在潮濕和在儲存條件下的穩(wěn)定性)；(4)表面性質(zhì)，例如，表面積、潤濕性、界面張力和外形；(5)機械性質(zhì)，例如，硬度、拉伸強度、可壓性、可操作性、流動性和混合性；或(6)過濾性質(zhì)。固態(tài)晶型的選擇和控制對于作為藥學制劑的化合物特別重要。對固態(tài)晶型進行仔細選擇并進行控制可以減少與該化合物相關(guān)的合成、加工、配制或給藥難題。
確定了化合物N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的三種新型無水結(jié)晶形式(晶型A、晶型B和晶型C)。以下進一步詳細解釋，各個晶型A、晶型B和晶型C相對于彼此都具有截然不同的物理性質(zhì)。
本申請中，術(shù)語“N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺”(及對應的“結(jié)構(gòu)1”)包括N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的所有互變異構(gòu)體。例如，N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的兩種互變異構(gòu)體表示為如下互變異構(gòu)體(1)和互變異構(gòu)體(2)(通過如下共振結(jié)構(gòu)來舉例說明)。
未限定于任何特定理論，假設(shè)晶型A以上述互變異構(gòu)體(1)的形式進行結(jié)晶，晶型B和晶型C以上述互變異構(gòu)體(2)的形式進行結(jié)晶。
A.縮寫和定義 在1H NMR中，符號“δ”指1H NMR的化學位移。
在1H NMR中，縮寫“br”指1H NMR寬峰信號。
在1H NMR中，縮寫“d”指1H NMR雙峰。
縮寫“m/z”指質(zhì)譜峰。
在1H NMR中，縮寫“m”指1H NMR多重峰。
在1H NMR中，縮寫“q”指1H NMR四重峰。
在1H NMR中，縮寫“s”指1H NMR單峰。
在1H NMR中，縮寫“t”指1H NMR三重峰。
術(shù)語“DSC”指差示掃描量熱儀。
術(shù)語“HPLC”指高壓液相色譜。
術(shù)語“PXRD”指X-射線粉末衍射。
術(shù)語“PDE-5介導病癥”和“磷酸二酯酶-5介導病癥”指PDE-5作為媒介的任何病癥，包括通過PDE-5進行直接調(diào)節(jié)的疾病，也包括通過作為信號組分的PDE-5進行間接調(diào)節(jié)的病癥。
術(shù)語“組合物”指通過將一種以上的成分進行混合或組合而制造的產(chǎn)品。
用在“N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺”中的術(shù)語“晶型”指固態(tài)晶型，其中，N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺分子排列形成可識別的晶格，上述晶格(i)包括可識別的晶胞，并且(ii)當進行X-射線輻射時生成衍射峰。
本申請中，術(shù)語“結(jié)晶”指結(jié)晶和/或重結(jié)晶，結(jié)晶和/或重結(jié)晶依賴于與N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺原料的制備方法相關(guān)的具體應用環(huán)境。
術(shù)語“純度”指根據(jù)通常的HPLC試驗測定的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的化學純度。
術(shù)語“相純度”指對于具有特定固態(tài)晶型的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺，通過本文所描述的分析方法測定的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的固態(tài)純度。
術(shù)語“藥學上可接受載體”指與組合物中的其它成分兼容且對患者無害的載體。這種載體可以是藥學上可接受物、組合物或媒介物，例如與運載或輸送化學試劑相關(guān)的液體或固體填料、稀釋劑、賦性劑、溶劑或封裝材料。優(yōu)選的組合物依賴于給藥的方法。
術(shù)語“預防”指防止患者體內(nèi)潛伏期顯性疾病發(fā)作，或者防止患者體內(nèi)疾病的潛伏期顯性階段發(fā)作。預防包括，但不限于，對有患病風險的患者進行預防性治療。
術(shù)語“相對強度”指在同一衍生譜圖中，單個衍射峰(或光譜線)的強度與最強衍射峰強度的比。換句話說，最強峰的強度被設(shè)定為100，所有其它的強度相應地依比例決定。
術(shù)語“治療有效量”指研究者或臨床醫(yī)生試圖尋找的，引起組織、體系或動物發(fā)生生物或藥物反應的藥物或藥學制劑的量。
術(shù)語“治療”指對患者進行緩解性、恢復性和預防性治療。術(shù)語“緩解性治療”指為減輕或減少患者體內(nèi)病癥的作用或強度而進行的治療，但沒有治愈病癥。術(shù)語“預防性治療”指為預防患者體內(nèi)病癥的發(fā)生而進行的治療。術(shù)語“恢復性治療”指中斷患者體內(nèi)病癥的進程、減輕患者體內(nèi)病癥的病理變化或完全消除患者體內(nèi)的病癥而進行的治療。
B.晶型的表征 化合物的結(jié)晶形態(tài)可以通過數(shù)個晶體參數(shù)進行描述，包括單晶結(jié)構(gòu)、X-射線粉末衍射譜圖、熔融溫度、紅外吸收譜圖和拉曼譜圖。
1.單晶X-射線分析 晶型A的晶體結(jié)構(gòu)通過單晶X-射線衍射分析來測定。分析中所用的單晶X-射線衍射數(shù)據(jù)利用Bruker SMART APEX Single Crystal X-Ray衍射儀和Mo Kα輻射在室溫下收集。強度對數(shù)次連續(xù)曝光進行積分(SMART版本5.622(對照)和SAINT版本6.02(積分)軟件，Bruker AXS Inc.，Madison，WI 1994)，其中，每次曝光覆蓋0.3°(以ω計)，曝光時間為30秒，總數(shù)據(jù)集大于半個球體。利用多次掃描方法(SADABS，用于縮放和校正區(qū)域探測儀數(shù)據(jù)的程序，G.M.Sheldrick，University of Gttingen，1997(基于R.H.Blessing方法，Acta Cryst.1995，A51，33-38))針對吸收來校正數(shù)據(jù)。然后，晶體結(jié)構(gòu)利用SHELXS-97(用于晶體結(jié)構(gòu)修正的程序，G.M.Sheldrick，University of Gttingen，Germany，1997，版本97-2)通過直接方法在空間群P21/c中進行解釋，并利用SHELXL-97通過最小平方方法進行修正。所選擇的晶體結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)總結(jié)在表1A中。
晶型C的晶體結(jié)構(gòu)也通過單晶X-射線衍射分析以與上述晶型A相同的方式進行測定，不同之處在于，曝光時間為120秒。晶體結(jié)構(gòu)利用SHELXS-97通過直接方法在空間群P-1中進行解釋，并利用SHELXL-97通過最小平方方法進行修正。所選擇的晶型C的晶體結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)總結(jié)在表1B中。
表1A晶型A晶體結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù) 表1B晶型C晶體結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù) 正如先前所提到的，假設(shè)晶型A以互變異構(gòu)體(1)的形式進行結(jié)晶，晶型C以互變異構(gòu)體(2)的形式進行結(jié)晶。單晶X-射線分析支持上述假設(shè)。
2.X-射線粉末衍射 晶型A、晶型B和晶型C的晶體結(jié)構(gòu)利用X-射線粉末衍射(“PXRD”)進行分析。X-射線衍射數(shù)據(jù)利用Bruker AXS D4粉末X-射線衍射儀(Cu Kα輻射)在室溫下收集，該衍射儀裝有自動進樣器、θ-θ測角儀、自動光束分裂夾縫、二級單色儀和閃爍計數(shù)器。用于分析的樣品通過如下方法制備將粉末裝入直徑為12mm，深0.25mm已被放到硅片樣品臺上的模槽中。旋轉(zhuǎn)樣品，同時采用銅κα1 X射線(波長＝1.5406)輻射，其中，X-射線管在40kV/40mA下進行操作。分析采用在連續(xù)模式下運行的測角儀進行，該連續(xù)模式被設(shè)定為在2°到55°兩個θ的范圍內(nèi)對每步長0.02°計數(shù)5秒。晶型A各峰與由單晶結(jié)構(gòu)得到的計算譜圖對準。晶型B和晶型C的所得各峰與硅參照標準各峰對準。
晶型A的2-θ角度、d間距和相對強度由單晶結(jié)構(gòu)利用AccelrysMaterials StudioTM的“Reflex Powder Diffraction”模塊(版本2.2)進行計算。各種情況下相關(guān)模擬參數(shù)為波長＝1.540562(Cu K-αl)，極化因子＝0.5，Pseudo-Voigt Profile(U＝0.01，V＝-0.001，W＝0.002)。
正如晶體學技術(shù)人員所認識到的，由于例如晶體在X射線束中定向或被分析的材料的純度或樣品的結(jié)晶度因素等的影響，下表和下圖中所報道的各個峰的相對強度可以變化。隨著樣品高度變化，峰位也可以發(fā)生位移，但峰位基本上保持在表2A、2C和2D分別對晶型A、晶型B和晶型C所限定的位置上。晶體學技術(shù)人員也會認識到，根據(jù)布拉格方程-nλ＝2dsinθ，利用不同波長進行測量也會導致位移不同。這種使用其它波長所產(chǎn)生的PXRD譜圖被認為是本發(fā)明結(jié)晶材料的其它代表性PXRD譜圖，同樣地，這也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
圖1、3和4分別表示晶型A、晶型B和晶型C的示意性PXRD譜圖。表2A、2C和2D分別列出了根據(jù)2θ數(shù)值和強度所得到的相應的晶型A、晶型B和晶型C的主要衍射峰。表2A列出了相對強度大于25％的晶型A各峰。表2C列出了相對強度大于2％的晶型B各峰。表2D列出了相對強度大于10％的晶型C各峰。
另外，圖2表示計算出的晶型A PXRD譜圖。表2B列出了根據(jù)晶型A的2θ數(shù)值和強度所得到的相應的計算出的主要衍射峰。表2B列出了相對強度大于10％的計算出的晶型A各峰。
表2A晶型A的PXRD數(shù)據(jù) 表2B計算出的晶型A的PXRD數(shù)據(jù) 表2C晶型B的PXRD數(shù)據(jù) 表2D晶型C的PXRD數(shù)據(jù) 晶型A的PXRD 晶型A的PXRD譜圖包括至少一個選自8.5±0.1、9.0±0.1、16.9±0.1、20.0±0.1和22.5±0.1°2θ的衍射峰。在一個實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1°2θ處的衍射峰。在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1°2θ處的衍射峰，還包括至少一個選自9.0±0.1、16.9±0.1、20.0±0.1和22.5±0.1°2θ的其它衍射峰。在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1、9.0±0.1和16.9±0.1處的衍射峰。在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1、9.0±0.1、16.9±0.1、20.0±0.1和22.5±0.1°2θ處的衍射峰。在上述實施方式中，在8.5±0.1、9.0±0.1、16.9±0.1、20.0±0.1和22.5±0.1°2θ處的衍生峰通常具有至少約10％的相對強度。
在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖(a)包括至少一個選自8.5±0.1、9.0±0.1、16.9±0.1、20.0±0.1和22.5±0.1°2θ的衍射峰，且(b)不包括至少一個選自3.6±0.1和7.2±0.1°2θ的衍射峰。
晶型B的PXRD 晶型B的PXRD譜圖包括至少一個選自3.6±0.1、7.2±0.1、10.1±0.1、14.4±0.1和23.8±0.1°2θ的衍射峰。在一個實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1°2θ處的衍射峰。在另一實施方式中。晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1°2θ處的衍射峰，還包括至少一個選自7.2±0.1、10.1±0.1、14.4±0.1和23.8±0.1°2θ的其它衍射峰。在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1和7.2±0.1°2θ處的衍射峰。在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1、7.2±0.1和23.8±0.1°2θ處的衍射峰。在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1、7.2±0.1、10.1±0.1、14.4±0.1和23.8±0.1°2θ處的衍射峰。在上述實施方式中，在3.6±0.1和7.2±0.1°2θ處的衍生峰通常具有至少約10％的相對強度。
在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖(a)包括至少一個選自3.6±0.1、7.2±0.1、10.1±0.1、14.4±0.1和23.8±0.1°2θ的衍射峰，且(b)不包括至少一個選自8.5±0.1、6.7±0.1和22.5±0.1°2θ的衍射峰。
晶型C的PXRD 晶型C的PXRD譜圖包括至少一個選自6.7±0.1、10.6±0.1、14.0±0.1、17.7±0.1和20.2±0.1°2θ的衍射峰。在一個實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1°2θ處的衍射峰。在一個實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在10.6±0.1°2θ處的衍射峰。在一個實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在14.0±0.1°2θ處的衍射峰。在一個實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在17.7±0.1°2θ處的衍射峰。在一個實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在20.2±0.1°2θ處的衍射峰。在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1°2θ處的衍射峰，還包括至少一個選自10.6±0.1、14.0±0.1、17.7±0.1和20.21±0.1°2θ的其它衍射峰。在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1和20.2±0.1°2θ處的衍射峰。在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1、17.7±0.1和20.2±0.1°2θ處的衍射峰。在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1、17.7±0.1、10.6±0.1和20.2±0.1°2θ處的衍射峰。在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1、10.6±0.1、14.0±0.1、17.7±0.1和20.2±0.1°2θ處的衍射峰。在上述實施方式中，在6.7±0.1、10.6±0.1、14.0±0.1、17.7±0.1和20.2±0.1°2θ處的衍射峰優(yōu)選具有至少約10％的相對強度。
在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖(a)包括至少一個選自6.7±0.1、10.6±0.1、14.0±0.1、17.7±0.1和20.2±0.1°2θ的衍射峰，且(b)不包括至少一個選自3.6±0.1和9.0±0.1的衍射峰。
3.差示掃描量熱 利用差示掃描量熱儀(DSC)對每個晶型A、晶型B和晶型C進行分析。使用TA Instruments Q1000差示掃描量熱儀對每個晶型進行分析。采用氮氣凈化氣體，在上面帶蓋的鋁盤中，將每個樣品以20℃每分鐘的速率由25℃加熱到300℃。熔融吸熱峰的溫度被報道為熔點。DSC分析的數(shù)據(jù)依賴于許多因素，包括加熱速率、樣品的純度、晶體尺寸和樣品尺寸。因此，如下熔點為下述制備的樣品熔點的典型代表。
晶型A的DSC 將3.171mg晶型A樣品通過上述DSC進行分析。圖5為由晶型A樣品得到的DSC差示熱分析圖。晶型A在174℃±3℃出現(xiàn)第一吸熱峰，接著在179℃±3℃放熱重結(jié)晶，在219℃±3℃出現(xiàn)第二吸熱峰。在174℃±3℃處的峰相當于晶型A的熔點。在179℃±3℃的放熱重結(jié)晶相當于熔融化合物以晶型B的形式重結(jié)晶。在219℃±3℃處的峰相當于晶型B的熔點。
晶型B的DSC 將1.603mg晶型B樣品通過上述DSC進行分析。圖6為由晶型B樣品得到的DSC差示熱分析圖。晶型B在218℃±3℃處的吸熱峰相當于晶型B的熔點。
晶型C的DSC 將4.405mg晶型C樣品通過上述DSC進行分析。圖7為由晶型C樣品得到的DSC差示熱分析圖。晶型C在188℃±3℃處出現(xiàn)第一吸熱峰，接著在199℃±3℃放熱重結(jié)晶，在219℃±3℃處出現(xiàn)第二吸熱峰。在188℃±3℃處的峰相當于晶型C的熔點。在199℃±3℃的放熱重結(jié)晶相當于熔融化合物重以晶型B形式重結(jié)晶。在219℃±3℃處的峰相當于晶型B的熔點。
4.傅立葉變換紅外光譜 晶型A、晶型B和晶型C的晶體結(jié)構(gòu)利用傅立葉變換紅外(“FT-IR”)光譜進行分析。使用具有Smart Golden Gate單反射ATR附件(鉆石頂板和硒化鋅透鏡)的ThermoNicolet Avatar 360光譜儀得到晶型A、晶型B和晶型C樣品的FT-IR譜圖。所選擇的測量條件為2cm-1分辨率、128次掃描和Happ Genzel變跡(apodization)。因為使用單反射ATR記錄FT-IR光譜，所以不需制備樣品。然而，使用ATR FT-IR會使紅外譜帶的相對強度與通常在KBr壓片F(xiàn)T-IR譜圖中所看到的紅外譜帶的相對強度不同。由于ATR FT-IR的性質(zhì)，當由較高波長區(qū)域向較低波長區(qū)域掃描時，譜帶的強度通常增加。除非另有聲明，實驗誤差為±2cm-1。
圖8、9和10分別表示晶型A、晶型B和晶型C的示意性FR-IR譜圖。表4A、4B和4C分別列出了晶型A、晶型B和晶型C相應的特有的可指認的吸收譜帶。
表4A晶型A的FT-IR譜圖數(shù)據(jù) 1w弱；m中等；ms中強；s強 2實驗誤差為±3cm-1 表4B晶型B的FT-IR光譜數(shù)據(jù) 1w弱；m中等；ms中強；s強 表4C晶型C的FT-IR光譜數(shù)據(jù) 1w弱；m中等；ms中強；s強 晶型A的FT-IR 晶型A的FT-IR譜圖包括至少一個選自696±2、1085±2、1188±2、1540±2和3247±3cm-1的吸收譜帶。在一個實施方式中，晶型A的FT-IR譜圖包括在3247±3cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型A的FT-IR譜圖包括在3247±3cm-1處的吸收譜帶，還包括至少一個選自696±2、1085±2、1188±2和1540±2cm-1的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型A的FT-IR譜圖包括在3247±3和696±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型A的FT-IR譜圖包括在696±2、1188±2和3247±3cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型A的FT-IR譜圖包括在696±2、1188±2、1540±2和3247±3cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型A的FT-IR譜圖包括在696±2、1085±2、1188±2、1540±2和3247±3cm-1處的吸收譜帶。
在另一實施方式中，晶型A的FT-IR譜圖(a)包括至少一個選自696±2、1085±2、1188±2、1540±2和3247±3cm-1的吸收譜帶，且(b)不包括在1645±2cm-1處的吸收譜帶。
晶型B的FT-IR 晶型B的FT-IR譜圖包括至少一個選自722±2、920±2、1211±2、1395±2和1452±2cm-1的吸收譜帶。在一個實施方式中，晶型B的FT-IR譜圖包括在1452±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型B的FT-IR譜圖包括在1452±2cm-1處的吸收譜帶，還包括至少一個選自722±2、920±2、1211±2和1395±2cm-1的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型B的FT-IR譜圖包括在1452±2和1395±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型B的FT-IR譜圖包括在1211±2、1395±2和1452±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型B的FT-IR譜圖包括在722±2、1211±2、1395±2和1452±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型B的FT-IR譜圖包括在722±2、920±2、1211±2、1395±2和1452±2cm-1處的吸收譜帶。
在另一實施方式中，晶型B的FT-IR譜圖(a)包括至少一個選自722±2、920±2、1211±2、1395±2和1452±2cm-1的吸收譜帶，且(b)不包括在962±2cm-1處的吸收譜帶。
晶型C的FT-IR 晶型C的FT-IR譜圖包括至少一個選自661±2、703±2、797±2、881±2、909±2和1269±2cm-1的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型C的FT-IR譜圖包括在881±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型C的FT-IR譜圖包括在881±2cm-1處的吸收譜帶，還包括至少一個選自661±2、703±2、797±2、909±2和1269±2cm-1的其它吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型C的FT-IR譜圖包括在881±2和661±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型C的FT-IR譜圖包括在661±2、797±2和881±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型C的FT-IR譜圖包括在661±2、703±2、797±2和881±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型C的FT-IR譜圖包括在661±2、703±2、797±2、881±2和909±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型C的FT-IR譜圖包括在661±2、703±2、797±2、881±2、909±2和1269±2cm-1處的吸收譜帶。
在另一實施方式中，晶型C的FT-IR譜圖(a)包括至少一個選自661±2、703±2、881±2、909±2和1269±2cm-1的吸收譜帶，且(b)不包括在688±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型C的FT-IR譜圖(a)包括至少一個選自661±2、703±2、797±2、881±2、909 ±2和1269±2cm-1的吸收譜帶，且(b)不包括在696±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型C的FT-IR譜圖(a)包括至少一個選自661±2、703±2、797±2、881±2、909±2和1269±2cm-1的吸收譜帶，且(b)不包括至少一個選自688±2或696±2cm-1的吸收譜帶。
正如先前所提到的，假設(shè)晶型A以互變異構(gòu)體(1)的形式進行結(jié)晶，晶型C以互變異構(gòu)體(2)的形式進行結(jié)晶。FT-IR分析支持上述假設(shè)。具體地，晶型C的FT-IR譜圖在1644±2cm-1處具有中強吸收譜帶，晶型B的FT-IR譜圖在1646±2cm-1處具有強吸收譜帶。我們相信，這些譜帶對應于非環(huán)C＝N的伸縮頻率，這與互變異構(gòu)體(2)是一致的。相反的是，晶型A的FT-IR譜圖在相應的頻率處沒有吸收譜帶。我們相信，由于晶型A以互變異構(gòu)體(1)的形式結(jié)晶，因此晶型A沒有非環(huán)C＝N仲縮頻率。
5.傅立葉變換拉曼光譜 晶型A、晶型B和晶型C利用傅立葉變換拉曼(“拉曼”)光譜進行分析。使用ThermoNicolet 960拉曼光譜得到晶型A、晶型B和晶型C的拉曼譜圖。將每種樣品(約5mg)放置在玻璃小瓶中，并暴露于1064.5nm Nd-YAG激光能量下進行激發(fā)。所收集到數(shù)據(jù)的分辨率為2cm-1，其中拉曼強度是拉曼位移的函數(shù)。將數(shù)據(jù)利用Happ-Genzel變跡進行傅立葉變換。除非另有聲明，實驗誤差為±2cm-1。
圖11、12和13分別表示晶型A(測試條件2000次掃描，激光功率750mW，樣品上的激光功率400mW)、晶型B(測試條件4000次掃描，激光功率600mW，樣品上的激光功率340mW)和晶型C(測試條件960次掃描，激光功率600mW，樣品上的激光功率340mW)的示意性拉曼譜圖。X軸是拉曼位移(cm-1)，Y軸是強度。強度是相對于譜圖中主要吸收譜帶進行分配的強度，不是相對于基線測量的絕對值。表5A、5B和5C分別列出了相應的晶型A、晶型B和晶型C的特征拉曼譜帶。
表5A晶型A的拉曼譜圖數(shù)據(jù) 1w弱；m中等；s強 2實驗誤差為±3cm-1 表5B晶型B的拉曼譜圖數(shù)據(jù) 1w弱；m中等；s強 表5C晶型C的拉曼譜圖數(shù)據(jù) 1w弱；m中等；s強 晶型A的拉曼譜圖 晶型A的拉曼譜圖包括至少一個選自993±2、1383±2、1473±2、1569±2和3255±3cm-1的譜帶。在另一實施方式中，晶型A的拉曼譜圖包括在3255±3cm-1處的譜帶。在另一實施方式中，晶型A的拉曼譜圖包括在3255±3cm-1處的譜帶，還包括至少一個選自993±2、1383±2、1473±2和1569±2cm-1的其它譜帶。在另一實施方式中，晶型A的拉曼譜圖包括在1569±2和3255±3cm-1處的譜帶。在另一實施方式中，晶型A的拉曼譜圖包括在1473±2、1569±2和3255±3cm-1處的譜帶。在另一實施方式中，晶型A的拉曼譜帶包括在1383±2、1473±2、1569±2和3255±3cm-1處的譜帶。在另一實施方式中，晶型A的拉曼譜帶包括在993±2、1383±2、1473±2、1569±2和3255±3cm-1處的譜帶。
在另一實施方式中，晶型A的拉曼譜圖(a)包括至少一個選自993±2、1383±2、1473±2、1569±2和3255±3cm-1的譜帶，且(b)不包括在1652±2cm-1處的譜帶。
晶型B的拉曼譜圖 晶型B的拉曼譜圖包括至少一個選自689±2、1299±2、1456±2和1535±2cm-1的譜帶。在另一實施方式中，晶型B的拉曼譜圖包括在1299±2cm-1處的譜帶。在另一實施方式中，晶型B的拉曼譜圖包括在1299±2cm-1處的譜帶，還包括至少一個選自689±2、1456±2和1535±2cm-1的其它譜帶。在另一實施方式中，晶型B的拉曼譜圖包括在689±2和1299±2cm-1處的譜帶。在另一實施方式中，晶型B的拉曼譜圖包括在689±2、1299±2和1535±2cm-1處的譜帶。在另一實施方式中，晶型B的拉曼譜圖包括在689±2、1299±2、1456±2和1535±2cm-1處的譜帶。
在另一實施方式中，晶型B的拉曼譜圖(a)包括至少一個選自689±2、1299±2、1456±2和1535±2cm-1的譜帶，且(b)不包括在1316±2cm-1處的譜帶。
晶型C的拉曼譜圖 晶型C的拉曼譜圖包括至少一個選自707±2、1447±2和2988±2cm-1的譜帶。在另一實施方式中，晶型C的拉曼譜圖包括在2988±2cm-1處的譜帶。在另一實施方式中，晶型C的拉曼譜圖在2988±2cm-1處的顯著譜帶，還包括至少一個選自707±2和1447±2cm-1的其它譜帶。在另一實施方式中，晶型C的拉曼譜圖包括在707±2和2988±2cm-1處的譜帶。在另一實施方式中，晶型C的拉曼譜圖包括在707±2、1447±2和2988±2cm-1處的譜帶。
在另一實施方式中，晶型C的拉曼譜圖(a)包括至少一個選自707±2、1447±2和2988±2cm-1的譜帶，且(b)不包括在1417±2cm-1處的譜帶。
正如先前所提到的，假設(shè)晶型A以互變異構(gòu)體(1)的形式進行結(jié)晶，晶型B和晶型C各自以互變異構(gòu)體(2)的形式進行結(jié)晶。FT-拉曼分析支持上述假設(shè)。具體地，晶型C的FT-拉曼譜圖在1651±2cm-1處具有弱拉曼譜帶，晶型B的FT-拉曼譜圖在1652±2cm-1處具有中等拉曼譜帶。我們相信，這些譜帶對應于非環(huán)C＝N的伸縮頻率，這與互變異構(gòu)體(2)是一致的。相反的是，晶型A的FT-拉曼譜圖在相應的頻率處沒有拉曼譜帶。我們相信，由于晶型A以互變異構(gòu)體(1)的形式結(jié)晶，因此晶型A沒有非環(huán)C＝N伸縮頻率。
C.晶型A、晶型B和晶型C的性質(zhì) 1.熱力學穩(wěn)定性 晶型A、晶型B和晶型C具有不同的熱力學穩(wěn)定性。晶型B在環(huán)境溫度以及高溫下較晶型A在熱力學上更穩(wěn)定(參見以下實施例13)。然而，晶型B和晶型C為互變異構(gòu)體的關(guān)系。在約40℃到約60℃的溫度下，晶型B和晶型C的熱力學穩(wěn)定性出現(xiàn)交叉(參見以下實施例14)。在另一實施方式中，在約40℃到50℃的溫度下，晶型B和晶型C的熱力學穩(wěn)定性出現(xiàn)交叉。當溫度高于交叉點時，晶型B在熱力學上比晶型C更穩(wěn)定。當穩(wěn)定低于交叉點時(包括在環(huán)境溫度下)，晶型C在熱力學上比晶型B更穩(wěn)定。
這種熱力學穩(wěn)定性的差異在實際應用中很重要。晶型的熱力學穩(wěn)定性影響含有該晶體晶型的配制藥物產(chǎn)品的潛在保存期限。通常，熱力學穩(wěn)定性越強，配制藥物產(chǎn)品的保存期限越長。另外，在如下情況下這種熱力學穩(wěn)定性的差異會導致一些問題加工導致溫度升高(例如，由于碾磨化合物)，或加工在一定的溫度范圍內(nèi)進行。在加工過程中，這種溫度的變化可能導致一種晶體晶型轉(zhuǎn)化成另一種晶體晶型。如果所得到的晶體晶型不是希望的晶型，那么需要更仔細地控制加工溫度。
2.形態(tài) 晶型A和晶型B還具有不同的晶體形態(tài)。盡管例如溫度、溶劑、雜質(zhì)和流體力學(振動)的各種因素可以影響晶體的形態(tài)，但晶型A和晶型B還是具有截然不同的晶體形態(tài)。晶型A通常具有平板狀形態(tài)。晶型B通常具有針狀形態(tài)。晶型C包括條板形、平板形和碎片形的混合物，它們的尺寸(最大尺寸)范圍為約5微米到約350微米，通常為50到60微米。
這種形態(tài)的差異會影響將化合物進行加工以制備配制藥學產(chǎn)品的難易度。例如，針狀形態(tài)使過濾和加工更難。另外，平板狀形態(tài)相對于針狀形態(tài)在尺寸上更均一，這導致化合物的流動形和加工性改善了，從而使過濾、加工和壓片步驟更容易。
3.顏色 晶型A、晶型B和晶型C還具有不同的外觀。晶型A通常為微黃色到象牙色。晶型B通常為黃色。晶型C通常為淺黃色。配制藥學產(chǎn)品的產(chǎn)品說明書中通常不僅詳細說明活性成分的化學純度，還詳細說明了活性成分的相純度。活性成分的晶體晶型的批次與批次之間發(fā)生變化通常是令人不滿的。在N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的情況下，批次的顏色可以起到質(zhì)量控制的目的，從而提供一種定性評估產(chǎn)品的手段，用于評估該批次的相純度是否達到理想的相純度標準。另外，產(chǎn)品的美觀也很重要，希望最終藥學產(chǎn)品外觀的顏色均一。在晶體晶型的顏色性質(zhì)影響配制產(chǎn)品外觀的情況下，需要進行實踐對產(chǎn)品中存在的晶體晶型進行適當控制，從而保持產(chǎn)品顏色的一致性。
D.其它實施方式 以下是晶型A、晶型B和晶型C的其它實施方式。
晶型A的其它實施方式 在一個實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在3247±3cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在3247±3和696±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1和9.0±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在3247±3cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1和9.0±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在696±2cm-1和3247±3cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1、9.0±0.1和16.9±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在696±2、1188±2和3247±3cm-1處的吸收譜帶。
在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1°2θ處的衍射峰，拉曼譜圖包括在3255±3cm-1處的譜帶。在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1°2θ處的衍射峰，拉曼譜圖包括在1569±2和3255±3cm-1處的譜帶。在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1和9.0±0.1°2θ處的衍射峰，拉曼譜圖包括在3255±3cm-1處的譜帶。在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1和9.0±0.1°2θ處的衍射峰，拉曼譜圖包括在1569±2和3255±3cm-1處的譜帶。在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1、9.0±0.1和16.9±0.1°2θ處的衍射峰，拉曼譜圖包括在1569±2和3255±3cm-1處的譜帶。在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1、9.0±0.1和16.9±0.1°2θ處的衍射峰，拉曼譜圖包括在1473±2、1569±2、3255±3cm-1處的譜帶。
在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1°2θ處的衍射峰，其熔點為174℃±3℃。在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1和9.0±0.1°2θ處的衍射峰，其熔點為174℃±3℃。在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1、9.0±0.1和16.9±0.1°2θ處的衍射峰，其熔點為174℃±3℃。
在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在3247±3cm-1處的吸收譜帶，其熔點為174℃±3℃。在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1和9.0±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在3247±3cm-1處的吸收譜帶，其熔點為174℃±3℃。在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1、9.0±0.1和16.9±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在3247±3和696±2cm-1處的吸收譜帶，其熔點為174℃±3℃。在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1、9.0±0.1和16.9±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在696±2、1188±2和3247±3cm-1處的吸收譜帶，其熔點為174℃±3℃。
在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在3247±3cm-1處的吸收譜帶，拉曼譜圖包括在3255±3cm-1處的譜帶。在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1和9.0±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在696±2和3247±3cm-1處的吸收譜帶，拉曼譜圖包括在1569±2和3255±3cm-1處的譜帶。在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1、16.9±0.1和22.5±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在696±2、1188±2和3247±3cm-1處的吸收譜帶，拉曼譜圖包括在1569±2和3255±3cm-1處的譜帶。
在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1和9.0±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在696±2和3247±3cm-1處的吸收譜帶，拉曼譜圖包括在1569±2和3255±3cm-1處的譜帶，其熔點為174℃±3℃。在另一實施方式中，晶型A的PXRD譜圖包括在8.5±0.1、16.9±0.1和22.5±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在696±2、1188±2和3247±3cm-1處的吸收譜帶，拉曼譜圖包括在1569±2和3255±3cm-1處的譜帶，其熔點為174℃±3℃。
晶型B的其它實施方式 在一個實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在1452±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在1395±2和1452±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在1211±2、1395±2和1452±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在722±2、920±2、1211±2、1395±2和1452±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1和7.2±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在1211±2、1395±2和1452±2cm-1處的吸收譜帶。
在一個實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1°2θ處的衍射峰，其熔點為218℃±3℃。在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1和7.2±0.1°2θ處的衍射峰，其熔點為218℃±3℃。在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1、7.2±0.1和23.8±0.1°2θ處的衍射峰，其熔點為218℃±3℃。在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1、7.2±0.1、10.1±0.1、14.4±0.1和23.8±0.1°2θ處的衍射峰，其熔點為218℃±3℃。
在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在1452±2cm-1處的吸收譜帶，其熔點為218℃±3℃。在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在1395±2和1452±2cm-1處的吸收譜帶，其熔點為218℃±3℃。在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1、7.2±0.1、10.1±0.1、14.4±0.1和23.8±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在722±2、920±2、1211±2、1395±2和1452±2cm-1處的吸收譜帶，其熔點為218℃±3℃。
在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1°2θ處的衍射峰，拉曼譜圖包括在1299±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1°2θ處的衍射峰，拉曼譜圖包括在689±2和1299±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1°2θ處的衍射峰，拉曼譜圖包括在689±2、1299±2和1535±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1°2θ處的衍射峰，拉曼譜圖包括在689±2、1299±2、1456±2和1535±2cm-1處的吸收譜帶。
在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在1452±2cm-1處的吸收譜帶，拉曼譜圖包括在1299±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在1395±2和1452±2cm-1處的吸收譜帶，拉曼譜圖包括在1299±2和689±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在1395±2、1452±2和1535±2cm-1處的吸收譜帶，拉曼譜圖包括在1299±2和689±2cm-1處的吸收譜帶。
在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在1395±2cm-1和1452±2cm-1處的吸收譜帶，拉曼譜圖包括在1299±2cm-1處的吸收譜帶，其熔點為218℃±3℃。在另一實施方式中，晶型B的PXRD譜圖包括在3.6±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在1395±2cm-1、1452±2和1535±2cm-1處的吸收譜帶，拉曼譜圖包括在1299±2和689±2cm-1處的吸收譜帶，其熔點為218℃±3℃。
晶型C的其它實施方式 在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在881±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在881±2和661±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在881±2、797±2、703±2和661±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1和26.1±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在881±2和661±2cm-1處的吸收譜帶。
在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1°2θ處的衍射峰，其熔點為188℃±3℃。在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1和26.1±0.1°2θ處的衍射峰，其熔點為188℃±3℃。在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1、20.2±0.1和17.7±0.1°2θ處的衍射峰，其熔點為188℃±3℃。在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1、10.6±0.1、14.0±0.1、17.7±0.1和20.2±0.1°2θ處的衍射峰，其熔點為188℃±3℃。
在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1°2θ處的衍射峰，拉曼譜圖包括在2988±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1°2θ處的衍射峰，拉曼譜圖包括在707±2和2988±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1° 2θ處的衍射峰，拉曼譜圖包括在707±2、1447±2和2988±2cm-1處的吸收譜帶。在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1和26.1±0.1°2θ處的衍射峰，拉曼譜圖包括在707±2、1447±2和2988±2cm-1處的吸收譜帶。
在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在661±2cm-1和881±2cm-1處的吸收譜帶，其熔點為188℃±3℃。在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1和20.2±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在661±2、881±2和797±2cm-1處的吸收譜帶，其熔點為188℃±3℃。
在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在881±2cm-1處的吸收譜帶，拉曼譜圖包括在2988±2cm-1處的吸收譜帶，其熔點為188℃±3℃。在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在661±2cm-1和881±2cm-1處的吸收譜帶，拉曼譜圖包括在2988±2cm-1處的吸收譜帶，其熔點為188℃±3℃。在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1和20.2±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在661±2cm-1和881±2cm-1處的吸收譜帶，拉曼譜圖包括在707±2和2988±2cm-1處的吸收譜帶，其熔點為188℃±3℃。在另一實施方式中，晶型C的PXRD譜圖包括在6.7±0.1和20.2±0.1°2θ處的衍射峰，F(xiàn)T-IR譜圖包括在881±2、797±1、703±2和661±2cm-1處的吸收譜帶，拉曼譜圖包括在707±2、1447±2和2988±2cm-1處的吸收譜帶，其熔點為188℃±3℃。
晶型A、晶型B和晶型C的純相形式和其組合 各個晶型A、晶型B和晶型C可以以基本上純的相形式得到。或者晶型A、晶型B和晶型C中的每個可以與一個或更多個其它晶型組合共存。
在一個實施方式中，本發(fā)明包括N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺，其中，至少約50重量％的化合物是晶型A。在另一實施方式中，本發(fā)明包括N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺，其中，至少約20重量％、至少約30重量％或至少約40重量％的化合物是晶型A。在另一實施方式中，本發(fā)明包括N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺，其中，至少約60重量％、至少約70重量％、至少約80重量％、至少約85重量％、至少約90重量％、至少約95重量％、至少約96重量％、至少約97重量％、至少約98重量％或至少約99重量％的化合物是晶型A。在另一實施方式中，本發(fā)明包括N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺，該化合物是基本上純的晶型A。
在一個實施方式中，本發(fā)明包括N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺，其中，至少約50重量％的化合物是晶型B。在另一實施方式中，本發(fā)明包括N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺，其中，至少約20重量％、至少約30重量％或至少約40重量％的化合物是晶型B。在另一實施方式中，本發(fā)明包括N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺，其中，至少約60重量％、至少約70重量％、至少約80重量％、至少約85重量％、至少約90重量％、至少約95重量％、至少約96重量％、至少約97重量％、至少約98重量％或至少約99重量％的化合物是晶型B。在另一實施方式中，本發(fā)明包括N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺，該化合物是基本上純的晶型B。
在一個實施方式中，本發(fā)明包括N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺，其中，至少約50重量％的化合物是晶型C。在另一實施方式中，本發(fā)明包括N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺，其中，至少約20重量％、至少約30重量％或至少約40重量％的化合物是晶型C。在另一實施方式中，本發(fā)明包括N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺，其中，至少約60重量％、至少約70重量％、至少約80重量％、至少約85重量％、至少約90重量％、至少約95重量％、至少約96重量％、至少約97重量％、至少約98重量％或至少約99重量％的化合物是晶型C。在另一實施方式中，本發(fā)明包括N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺，該化合物是基本上純的晶型C。
F.用于制備晶型A、晶型B和晶型C的方法 本發(fā)明還包括用于制備晶型A、晶型B和晶型C的方法。本申請的實施例中公開了具有代表性的方法。
本發(fā)明還包括根據(jù)本申請所公開的方法制備的各個晶型A、晶型B和晶型C。在一個實施方式中，本發(fā)明包括根據(jù)這種方法制備的晶型A。在另一實施方式中，本發(fā)明包括根據(jù)這種方法制備的晶型B。在另一實施方式中，本發(fā)明包括根據(jù)這種方法制備的晶型C。
G.藥物組合物 晶型A、晶型B和晶型C和上述晶型的組合可以通過任何適當?shù)耐緩浇o藥，優(yōu)選地以適于上述途徑的藥物組合物形式并以治療有效劑量進行給藥。因此，本發(fā)明具體包括藥物組合物，該組合物包括至少一種N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的無水結(jié)晶形式以及一種或更多種藥學上可接受載體。服用的晶型A、晶型B和/或晶型C的量和采用晶型A、晶型B和/或晶型C用于治療疾病或功能障礙的給藥方案依賴于各種因素，包括年齡、體重、性別和患者的身體狀況、疾病的嚴重程度、給藥的途徑和頻率和所采用的特定化合物，因此上述用量和給藥方案可以在很寬的范圍內(nèi)變化。藥物組合物包含的晶型A、晶型B和/或晶型C的量為約0.1到2000mg，優(yōu)選約0.5到500mg，最優(yōu)選約1到200mg。日常劑量為約0.01到100mg/kg體重，優(yōu)選為約0.5到約20mg/kg體重，最優(yōu)選為約0.1到10mg/kg體重是適當?shù)摹Ｈ粘┝靠梢砸悦刻煲坏剿拇蔚姆绞椒谩?br>
在一個實施方式中，藥物組合物包括晶型A和藥學上可接受載體。在另一實施方式中，藥物組合物包括基本上是純相晶型A的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺和藥學上可接受載體。在另一實施方式中，藥物組合物包括晶型B和藥學上可接受載體。在另一實施方式中，藥物組合物包括基本上是純相晶型B的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺和藥學上可接受載體。在另一實施方式中，藥物組合物包括晶型C和藥學上可接受載體。在另一實施方式中，藥物組合物包括基本上是純相晶型C的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺和藥學上可接受載體。
在另一實施方式中，藥物組合物包括至少兩種N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶型的組合和藥學上可接受載體，上述晶型選自晶型A、晶型B和晶型C。在一個實施方式中，第一晶型與第二晶型的重量比為至少約1∶1。在另一實施方式中，該比為至少約3∶2、至少約7∶3、至少約4∶1、至少約9∶1、至少約95∶5、至少約96∶4、至少約97∶3、至少約98∶2或至少約99∶1。在另一實施方式中，藥物組合物包括N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的三種晶型和藥學上可接受載體，上述晶型選自晶型A、晶型B和晶型C。
H.治療方法 本發(fā)明還包括用于治療患有或易于患有病癥患者的病癥的方法，所述方法通過給患者服用治療有效量的晶型A、晶型B、晶型C或上述這些晶型的組合的一種或更多種混合物進行治療。在一個實施方式中，該治療是預防性治療。在另一實施方式中，該治療是緩解性治療。在另一實施方式中，該治療是恢復性治療。
根據(jù)本發(fā)明可以被治療的病癥是PDE-5介導病癥。該病癥包括心血管疾病、代謝疾病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、肺病、性功能障礙和腎功能障礙。
在一個實施方式中，病癥包括心血管疾病，具體是選自如下疾病的心血管疾病高血壓(包括原發(fā)性高血壓、肺高血壓、繼發(fā)性高血壓、單純收縮期高血壓、糖尿病引發(fā)的高血壓、動脈硬化引發(fā)的高血壓、以及腎血管高血壓)，高血壓并發(fā)癥(例如，血管器官受損、充血性心力衰竭、心絞痛、中風、青光眼和腎功能虛弱)，瓣膜關(guān)閉不全，穩(wěn)定型、不穩(wěn)定型和變異型(Prinzmetal)心絞痛，外周脈管疾病，心肌梗死，中風，血栓病，再狹窄(restenosis)，動脈硬化，動脈粥狀硬化，肺動脈高壓，旁路后血管狹窄(angiostenosis after bypass)，血管成形術(shù)治療的疾病(例如經(jīng)皮血管腔內(nèi)血管成形術(shù)治療的疾病或經(jīng)皮穿刺腔內(nèi)冠狀動脈成形術(shù)治療的疾病)，高脂血，低氧性血管受縮，脈管炎(例如，Kawasaki氏綜合癥)，心力衰竭(例如，充血、代謝失調(diào)、心臟收縮、心臟舒張和左心室心力衰竭，右心室心力衰竭，和左心室肥大)，Raynaud氏疾病、子癇前癥，妊娠高血壓，心肌癥和動脈粥樣硬化閉塞癥。
在另一實施方式中，病癥是高血壓。在另一實施方式中，病癥是肺動脈高壓。在另一實施方式中，病癥是心力衰竭。在另一實施方式中，病癥是心臟舒張心力衰竭。在另一實施方式中，病癥是心臟收縮心力衰竭。在另一實施方式中，病癥是心絞痛。在另一實施方式中，病癥是血栓癥。在另一實施方式中，病癥是中風。
在另一實施方式中，病癥是代謝疾病，具體是選自如下的代謝疾病綜合癥X，胰島素抵抗癥或耐糖量受損，糖尿病(例如，I型和II型糖尿病)，胰島素抵抗綜合癥(例如，胰島素受體失調(diào)癥、Rabson-Mendenhall綜合癥、矮妖綜合征、Kobberling-Dunnigan綜合癥、Seip綜合癥、Lawrence綜合癥、Cushing綜合癥、肢端肥大癥、嗜鉻細胞瘤、胰高糖素瘤、初級醛甾酮增多癥、生長抑制素瘤、Lipoatrophic糖尿病、β-細胞毒素誘發(fā)的糖尿病、Grave疾病、Hashimoto甲狀腺炎和先天性Addison疾病)，糖尿病并發(fā)癥(例如，糖尿病性壞疽、糖尿病關(guān)節(jié)炎、糖尿病腎病、糖尿病腎小球硬化、糖尿病deramatopathy、糖尿病神經(jīng)病、外周糖尿病神經(jīng)病、糖尿病白內(nèi)障和糖尿病視網(wǎng)膜病)，高血糖癥和肥胖。
在另一實施方式中，病癥是胰島素抵抗。在另一實施方式中，病癥是腎病。
在另一實施方式中，病癥是中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，具體是選自如下的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病血管性癡呆、顱腦損傷、腦梗死、癡呆、集中障礙(concentration disorder)、Alzheimer氏疾病、Parkinson氏疾病、運動神經(jīng)元病(ALS)、Huntington氏疾病、多發(fā)性硬化、Creutzfeld-Jacob、焦慮癥、抑郁癥、睡眠障礙和偏頭痛。在一個實施方式中，病癥是Alzheimer氏疾病。在另一實施方式中，病癥是Parkinson氏疾病。在一個實施方式中，病癥是ALS。在另一實施方式中，病癥是集中障礙。
在一個實施方式中，病癥是肺病，具體是選自如下的肺病哮喘、急性呼吸窘迫、囊腫性纖維化、慢性阻塞性肺病(COPD)、支氣管炎和慢性可逆性肺部阻塞(chronic reversible pulmonary obstruction)。
在一個實施方式中，病癥是性功能障礙，具體是選自如下的性功能障礙陽痿(器官的或精神的)、男性勃起功能障礙、陰蒂功能障礙、脊髓損傷后的性功能障礙、女性性喚起障礙、女性性器官功能障礙、女性性交不適功能紊亂和女性性欲減退功能障礙。在另一實施方式中，病癥是勃起功能障礙。
在另一實施方式中，病癥是腎功能障礙，具體是選自如下的腎功能障礙急性或慢性腎衰竭、腎病(例如糖尿病腎病)、腎小球病和腎炎。
在另一實施方式中，病癥是疼痛。在另一實施方式中，病癥是急性疼痛。急性疼痛的例子包括，與受傷或手術(shù)相關(guān)的急性疼痛。在另一實施方式中，病癥是慢性疼痛。慢性疼痛的例子包括，神經(jīng)痛(包括帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛和與外周相關(guān)的疼痛、癌癥或糖尿病神經(jīng)病)，腕管綜合癥，背部疼痛(包括與腰椎間盤成疝或斷裂或腰椎小關(guān)節(jié)畸形、骶骨關(guān)節(jié)、豎脊肌或后縱韌帶骨化相關(guān)的疼痛)，頭痛，癌痛(包括腫瘤痛，例如骨痛、頭痛、面痛或內(nèi)臟痛)或與癌治療相關(guān)的疼痛(包括化療后綜合癥、慢性術(shù)后疼痛綜合癥、輻射后綜合癥、與免疫療法相關(guān)的疼痛或與激素療法相關(guān)的疼痛)，關(guān)節(jié)炎痛(包括骨關(guān)節(jié)炎或風濕性關(guān)節(jié)炎)，慢性術(shù)后疼痛，帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛，三叉神經(jīng)痛，HIV神經(jīng)病，截肢術(shù)后幻肢痛，中風后中樞神經(jīng)痛和與慢性酒精中毒相關(guān)的疼痛，甲狀腺機能減退，尿毒癥，多發(fā)性硬化，骨髓受損，Parkinson氏疾病，癲癇癥和維生素缺乏癥。在另一實施方式中，病癥是傷害感受性疼痛(nociceptive pain)，包括，源自中樞神經(jīng)損傷、緊張/扭傷、燒傷、心肌梗死和急性胰腺炎的疼痛，術(shù)后疼痛(任何類型術(shù)后造成的疼痛)，外傷后疼痛，腎絞痛，癌痛和背部疼痛。在另一實施方式中，病癥是與炎癥相關(guān)的疼痛，包括，關(guān)節(jié)炎痛(例如，骨關(guān)節(jié)炎痛和風濕性關(guān)節(jié)炎痛)，強直性脊柱炎，內(nèi)臟痛(包括炎癥性腸病、功能性腸功能障礙、胃食管反流、消化不良、腸易激綜合癥、功能性腹痛綜合癥、Crohn氏疾病、回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、原發(fā)性痛經(jīng)、膀胱炎、胰腺炎和骨盆痛)。在另一實施方式中，病癥是由肌肉骨骼功能障礙引起的疼痛，包括，肌痛、fibromyalgia、脊椎炎、免疫力低下(非風濕性)關(guān)節(jié)炎、纖維組織炎、肌營養(yǎng)不良、肝糖分解、多肌炎和膿性肌炎。在另一實施方式中，病癥選自心臟痛和血管痛(包括由心絞痛引起的疼痛、心肌梗塞、二尖瓣狹窄、心包炎、Raynaud氏現(xiàn)象、scleredoma和骨骼肌缺血)。在另一實施方式中，病癥選自頭痛(包括偏頭痛，例如帶有先兆的偏頭痛和沒有先兆的偏頭痛)，叢集性頭痛，緊張引起的頭痛和與血管功能障礙相關(guān)的頭痛；面痛，包括壓痛、耳痛、灼口綜合癥和顳下頜肌筋膜疼痛。
在另一實施方式中，病癥是選自如下的泌尿道病癥膀胱出口阻塞、失禁和良性前列腺增生。
在另一實施方式中，病癥是選自如下的眼科病癥視網(wǎng)膜疾病、黃斑變性和青光眼。
在另一實施方式中，病癥選自如下疾病腎小管間質(zhì)性病變、肛裂、禿頂、癌性惡病質(zhì)、腦溢血、胃腸運動功能障礙、腸運動功能障礙、痛經(jīng)(原發(fā)性和繼發(fā)性)、青光眼、黃斑變性、抗血小板、痔疾、失禁、腸易激綜合癥(IBS)、腫瘤轉(zhuǎn)移、多發(fā)性硬化、瘤形成、不耐硝酸鹽性、尖嘴鉗樣食管、骨質(zhì)疏松癥、不孕、早產(chǎn)、牛皮癬、視網(wǎng)膜疾病、皮膚壞死和風疹。在另一實施方式中，病癥是骨質(zhì)疏松癥。
在另一實施方式中，病癥與內(nèi)皮細胞功能障礙相關(guān)，具體是選自如下的病癥粥樣動脈硬化、心肌缺血、外周缺血、瓣膜功能不全、肺動脈高壓、心絞痛、血管替代管后的血管并發(fā)癥、血管膨脹、vascularrepermeabilisation和心臟移植。
本發(fā)明的方法和組合物適于哺乳動物使用，例如人類、其它靈長類(例如，猴子、黑猩猩)、伴侶動物(例如，狗、貓、馬)、農(nóng)場動物(例如，山羊、綿羊、豬、牛)、實驗室動物(例如，小鼠、大鼠)和野生和動物園圈養(yǎng)動物(例如，狼、熊、鹿)。在另一實施方式中，患者是人類。
I.在藥物制備過程中的用途 本發(fā)明還包括用于制備藥物組合物(或“藥物”)的方法，所述方法包括將晶型A、晶型B、晶型C或上述晶型的組合與一種或更多種藥學上可接受載體和/或用于治療上述病癥的其它活性成分進行組合。
J.實施例 實施例1N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的制備方法 N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的制備方法如下 步驟1 1-(2-乙氧基乙基)-4-硝基-1H-吡唑-3，5-二羧酸二甲酯
將4-硝基-1H-吡唑-3，5-二羧酸二甲酯(2.0g，8.83mmol，WO00/24745，48頁，制備方法2)加入2-乙氧基乙基溴(1.18mL，10.45mmol)和碳酸鉀(1.32g，9.56mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(35mL)溶液中，將反應混合物在室溫下攪拌48小時。反應混合物在真空下濃縮，殘余物在乙酸乙酯(200mL)和水(100mL)之間進行分配。將有機層進行分離，用硫酸鎂干燥并且真空濃縮。粗制產(chǎn)物通過柱色譜在采用戊烷/乙酸乙酯(100∶0到70∶30)進行洗脫的硅膠柱上進行純化，得到標題產(chǎn)物，1.63g。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.07(s，3H)，3.41(q，2H)，3.73(t，2H)，3.89(s，3H)，3.94(s，3H)，4.76(t，2H)。MS APCI+m/z 302，[MH]+。
步驟2 4-硝基-1-(2-乙氧基乙基)-1H-吡唑-3，5-二羧酸3-甲基酯
將步驟1的酯(1.63g，5.4mmol)加入氫氧化鉀(330mg，5.9mmol)的甲醇(20mL)溶液中，將反應混合物在室溫下攪拌18小時。反應混合物真空濃縮，將粗產(chǎn)物溶于水中并用醚洗滌。水相用2M的鹽酸進行酸化，并用二氯甲烷(3×100mL)萃取。將有機相合并，用硫酸鎂干燥并真空濃縮得到標題產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.07(s，3H)，3.47(q，2H)，3.80(t，2H)，3.88(s，3H)，4.77(t，2H)。MS APCI+m/z 288[MH]+。
步驟3 5-氨基甲酰-1-(2-乙氧基乙基)-4-硝基-1H-吡唑-3-羧酸甲酯
將草酰氯(1.2mL，13.76mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(39μL)加入步驟2羧酸(1.33g，4.63mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中，將反應混合物在室溫下攪拌2小時。反應混合物真空濃縮，并與二氯甲烷(3×50mL)共沸。將產(chǎn)物溶于四氫呋喃(50mL)中，在冰浴中進行冷卻，用0.88氨水溶液(10mL)進行處理，并在室溫下攪拌18小時。混合物真空濃縮并且殘余物在二氯甲烷(200mL)和水(50mL)之間進行分配。有機相用硫酸鎂進行干燥并真空濃縮得到標題產(chǎn)物。
1H NMR(DMSO-D6，400MHz)δ1.06(t，3H)，3.40(m，2H)，3.77(m，2H)，3.84(s，3H)，4.38(m，2H)，8.35(m，1H)，8.46(m，1H)。MS APCI+m/z287[MH]+。
步驟4 4-氨基-5-氨基甲酰-1-(2-乙氧基乙基)-1H-吡唑-3-羧酸甲酯
將氫氧化鈀(II)加入步驟3硝基化合物(970mg，3.39mmol)的甲醇(20mL)溶液中，將混合物加熱至回流。加入甲酸銨(1.07g，16.97mmol)，將反應混合物在回流下攪拌2小時。通過Arbocel過濾除去催化劑，反應混合物真空濃縮得到標題產(chǎn)物。
1H NMR(DMSO-D6，400MHz)δ1.02(t，3H)，3.33(m，2H)，3.66(m，2H)，3.80(s，3H)，4.57(m，2H)，5.11(m，2H)，7.49(m，2H)。MS APCI+m/z257[MH]+。
步驟5 1-(2-乙氧基乙基)-5，7-二氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羧酸甲酯
將步驟4酰胺(570mg，3.38mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液采用N，N’-羰基二咪唑(658mg，4.06mmol)進行處理，將反應混合物在室溫下攪拌1小時，然后在90℃下攪拌18小時。反應混合物真空濃縮，將粗產(chǎn)物懸浮在丙酮中并超聲30分鐘。將固體產(chǎn)物濾出并真空干燥得到標題產(chǎn)物。
1H NMR(DMSO-D6，400MHz)δ1.02(t，3H)，3.37(m，2H)，3.77(m，2H)，3.83(s，3H)，4.63(m，2H)，10.75(s，1H)，11.40(s，1H)。MS ES-m/z 281[M-H]-。
步驟6 5，7-二氯-1-(2-乙氧基乙基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羧酸甲酯
將氯氧化磷(934μL，10.0mmol)和氯化四乙基銨(195mg，1.50mmol)加入步驟5二酮(140mg，0.50mmol)的丙腈(5mL)溶液中，將反應混合物回流18小時。反應混合物真空濃縮，粗制產(chǎn)物在乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)之間進行分配。有機層用硫酸鎂干燥并真空濃縮。粗制產(chǎn)物通過柱色譜在采用戊烷∶乙酸乙酯(100∶0到75∶25)進行洗脫的硅膠柱上純化得到標題產(chǎn)物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.05(t，3H)，3.41(m，2H)，3.84(m，2H)，4.06(s，3H)，5.00(m，2H)。MS APCI+m/z 319[MH]+。
步驟7 5-氯-1-(2-乙氧基乙基)-7-(4甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-3-羧酸甲酯
將步驟6所得二氯化物(1.98g，6.20mmol)溶于二甲基亞砜(10mL)中，將溶液采用2-氨基-4-甲基吡啶(1.34g，12.4mmol)進行處理。將反應混合物在室溫下攪拌18小時。反應混合物在二氯甲烷(300mL)和水(500mL)之間進行分配，將二氯甲烷層分離出來。將有機相用水(3×100mL)進行洗滌，用硫酸鎂干燥并真空濃縮。殘余物通過柱色譜在采用二氯甲烷∶甲醇(100∶0到98∶2)進行洗脫的硅膠柱上純化。粗產(chǎn)物用醚(50mL)研磨，過濾并真空濃縮得到標題產(chǎn)物，1.2g。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ1.06(t，3H)，2.49(s，3H)，3.62(m，2H)，4.00(t，2H)，4.06(s，3H)，5.05(m，2H)，6.98(m，1H)，8.16(m，1H)，8.50(m，1H)。MS APCI+m/z 391[MH]+。
步驟8 5-氯-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1-(2-乙氧基乙基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羧酸
將步驟7的酯(4.3g，11mmol)溶于二氧雜環(huán)己烷(50mL)中，該溶液采用1M氫氧化鈉的水溶液(22.0mL，22.0mmol)進行處理。然后，將反應混合物在室溫下攪拌18小時。將反應混合物蒸發(fā)至干燥，將殘余物溶于水(100mL)中并用二氯甲烷(50mL)進行洗滌。然后將水相用1M檸檬酸酸化至pH為4-5，形成黃色沉淀物。將混合物攪拌15分鐘，然后過濾，固體產(chǎn)物在真空中通過五氧化磷干燥，得到標題產(chǎn)物，3.75g。
1H NMR(DMSO-D6，400MHz)δ1.00(t，3H)，2.34(s，3H)，3.45(m，2H)，3.81(m，2H)，4.84(m，2H)，6.93(m，1H)，7.89(m，1H)，8.16(m，1H)。
步驟9 N-[5-氯-1-(2-乙氧基乙基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺
將步驟8的羧酸(1.0g，2.70mmol)、甲磺酰胺(330mg，3.5mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二酰亞胺鹽酸鹽(660mg，3.5mmol)和4-二甲基氨基吡啶(390mg，3.5mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中，將反應混合物在室溫下攪拌60小時。加入額外的甲磺酰胺(165mg，1.7mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二酰亞胺鹽酸鹽(330mg，1.7mmol)和4-二甲基氨基吡啶(195mg，1.7mmol)，將反應混合物再攪拌20小時。再加入甲磺酰胺(165mg，1.7mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二酰亞胺鹽酸鹽(330mg，1.7mmol)和4-二甲基氨基吡啶(195mg，1.7mmol)，將反應混合物攪拌最后18小時。反應混合物真空濃縮，殘余物在二氯甲烷(25mL)和水(25mL)之間進行分配。將有機相分離出來，用水洗滌(2×25mL)，用硫酸鎂干燥并真空濃縮。殘余物通過柱色譜在采用二氯甲烷∶甲醇∶乙酸(100∶0∶0到96∶3.5∶0.5)進行洗脫的硅膠柱上純化。粗產(chǎn)物在溫乙酸乙酯(10mL)中研磨得到標題產(chǎn)物，290mg。
1H NMR(DMSO-D6，400MHz)δ0.95(t，3H)，2.40(s，3H)，3.40(s，3H)，3.45(d，2H)，3.85(m，2H)，4.95(m，2H)，7.15(d，1H)，7.85(s，1H)，8.25(d，1H)。MS ES-m/z 452[M-H]-。
步驟10 N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺
將步驟9所得氯化物(110mg，0.24mmol)、N-甲基-乙基胺(79mg，1.2mmol)、N-乙基二異丙基胺(210μL，120mmol)和氟化銫(37mg，0.24mmol)溶于二甲基亞砜(1mL)中，將反應混合物在ReactiVialTM中加熱至110℃ 5小時。反應混合物在乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)之間進行分配，將有機相分離出來，并用水(2×10mL)進行洗滌。然后，有機相用硫酸鎂干燥并真空濃縮。殘余物通過柱色譜在采用二氯甲烷∶甲醇(99∶1到97∶3)的硅膠柱上純化。將經(jīng)純化的物質(zhì)脫水并干燥得到淺黃色固體(66mg)。該固體的PXRD譜圖為圖14。
1H NMR(DMSO-D6+CF3CO2D，400MHz)δ0.99(t，3H)，1.17(t，3H)，2.44(s，3H)，3.18(s，3H)，3.41(s，3H)，3.44(d，2H)，3.66(d，2H)，3.88(t，2H)，4.93(t，2H)，7.16(d，1H)，8.09(s，1H)，8.26(d，1H)。MS ES-m/z 475[M-H]- 實施例2N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的制備方法 圖15合成示意圖中描述了用于制備N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的另一合成方案。
實施例3晶型A的制備方法(由乙酸乙酯重結(jié)晶) N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶型A的制備方法如下 步驟1 1-(2-乙氧基乙基)-4-硝基-1H-吡唑-3，5-二羧酸二甲酯
將4-硝基-1H-吡唑-3，5-二羧酸二甲酯(WO00/24745，48頁，制備方法2)加入2-乙氧基乙基溴(1.18mL，10.45mmol)和碳酸鉀(1.32g，9.56mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(35mL)溶液中，將反應混合物在室溫下攪拌48小時。反應混合物在真空下濃縮，殘余物在乙酸乙酯(200mL)和水(100mL)之間進行分配。將有機層進行分離，用硫酸鎂干燥并且真空濃縮。粗制產(chǎn)物通過柱色譜在采用戊烷/乙酸乙酯(100∶0到70∶30)進行洗脫的硅膠柱上進行純化，得到標題產(chǎn)物，1.63g。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.07(s，3H)，3.41(q，2H)，3.73(t，2H)，3.89(s，3H)，3.94(s，3H)，4.76(t，2H)。MS APCI+m/z 302，[MH]+。
步驟2 4-硝基-1-(2-乙氧基乙基)-1H-吡唑-3，5-二羧酸3-甲基酯
將步驟1的酯(1.63g，5.4mmol)加入氫氧化鉀(330mg，5.9mmol)的甲醇(20mL)溶液中，將反應混合物在室溫下攪拌18小時。反應混合物真空濃縮，將粗產(chǎn)物溶于水中并用醚洗滌。水相用2M的氫氯酸進行酸化并用二氯甲烷(3×100mL)萃取。將有機相合并，用硫酸鎂干燥并真空濃縮得到硝基產(chǎn)物。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.07(s，3H)，3.47(q，2H)，3.80(t，2H)，3.88(s，3H)，4.77(t，2H)。MS APCI+m/z 288[MH]+。
步驟3 5-氨基甲酰-1-(2-乙氧基乙基)-4-硝基-1H-吡唑-3-羧酸甲酯
將草酰氯(1.2mL，13.76mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(39μL)加入步驟2羧酸(1.33g，4.63mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中，將反應混合物在室溫下攪拌2小時。反應混合物真空濃縮，并與二氯甲烷(3×50mL)共沸。將產(chǎn)物溶于四氫呋喃(50mL)中，在冰浴中進行冷卻，用0.88氨水溶液(10mL)進行處理并在室溫下攪拌18小時?；旌衔镎婵諠饪s并且殘余物在二氯甲烷(200mL)和水(50mL)之間進行分配。有機相用硫酸鎂進行干燥并真空濃縮得到硝基產(chǎn)物。
1H NMR(DMSO-D6，400MHz)δ1.06(t，3H)，3.40(m，2H)，3.77(m，2H)，3.84(s，3H)，4.38(m，2H)，8.35(m，1H)，8.46(m，1H)。MS APCI+m/z287[MH]+。
步驟4 4-氨基-5-氨基甲酰-1-(2-乙氧基乙基)-1H-吡唑-3-羧酸甲酯
將氫氧化鈀(II)加入步驟3硝基化合物(970mg，3.39mmol)的甲醇(20mL)溶液中，將混合物加熱至回流。加入甲酸銨(1.07g，16.97mmol)，將反應混合物在回流下攪拌2小時。通過Arbocel過濾除去催化劑，反應混合物真空濃縮得到酰胺產(chǎn)物。
1H NMR(DMSO-D6，400MHz)δ1.02(t，3H)，3.33(m，2H)，3.66(m，2H)，3.80(s，3H)，4.57(m，2H)，5.11(m，2H)，7.49(m，2H)。MS APCI+m/z257[MH]+。
步驟5 1-(2-乙氧基乙基)-5，7-二氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羧酸甲酯
將步驟4酰胺(570mg，3.38mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液采用N，N’-羰基二咪唑(658mg，4.06mmol)進行處理，將反應混合物在室溫下攪拌1小時，然后在90℃下攪拌18小時。反應混合物真空濃縮，將粗產(chǎn)物懸浮在丙酮中并超聲30分鐘。將固體產(chǎn)物濾出并真空干燥得到二酮產(chǎn)物。
1H NMR(DMSO-D6，400MHz)δ1.02(t，3H)，3.37(m，2H)，3.77(m，2H)，3.83(s，3H)，4.63(m，2H)，10.75(s，1H)，11.40(s，1H)。MS ES-m/z 281[M-H]-。
步驟6 5，7-二氯-1-(2-乙氧基乙基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羧酸甲酯
將氯氧化磷(934μL，10.0mmol)和氯化四乙基銨(195mg，1.50mmol)加入步驟5二酮(140mg，0.50mmol)的丙腈(5mL)溶液中，將反應混合物回流18小時。反應混合物真空濃縮，粗制產(chǎn)物在乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)之間進行分配。有機層用硫酸鎂干燥并真空濃縮。粗制產(chǎn)物通過柱色譜在采用戊烷∶乙酸乙酯(100∶0到75∶25)進行洗脫的硅膠柱上純化得到二氯產(chǎn)物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.05(t，3H)，3.41(m，2H)，3.84(m，2H)，4.06(s，3H)，5.00(m，2H)。MS APCI+m/z 319[MH]+。
步驟7 5-氯-1-(2-乙氧基乙基)-7-(4甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-3-羧酸甲酯
將步驟6所得二氯化物(1.98g，6.20mmol)溶于二甲基亞砜(10mL)中，該溶液采用2-氨基-4-甲基吡啶(1.34g，12.4mmol)進行處理。將反應混合物在室溫下攪拌18小時。反應混合物在二氯甲烷(300mL)和水(500mL)之間進行分配，將二氯甲烷層分離出來。將有機相用水(3×100mL)進行洗滌，用硫酸鎂干燥并真空濃縮。殘余物通過柱色譜在采用二氯甲烷∶甲醇(100∶0到98∶2)進行洗脫的硅膠柱上純化。粗產(chǎn)物用醚(50mL)研磨，過濾并真空濃縮得到單氯產(chǎn)物，1.2g。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ1.06(t，3H)，2.49(s，3H)，3.62(m，2H)，4.00(t，2H)，4.06(s，3H)，5.05(m，2H)，6.98(m，1H)，8.16(m，1H)，8.50(m，1H)。MS APCI+m/z 391[MH]+。
步驟8 1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(6-乙基吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羧酸甲酯
將N-乙基甲基胺(4.6mL，53.8mmol)的N-甲基吡咯烷-2-酮(7mL)溶液在110℃下加入步驟7的單氯化物(7.0g，17.93mmol)的N-甲基吡咯烷-2-酮(28mL)溶液中。將反應混合物加熱過夜，完成后，將溶液冷卻至室溫，并添加水(25mL)。在室溫下攪拌2小時后，將漿液過濾并用2×15mL水進行洗滌。固體在55℃下真空中干燥過夜，得到桔色固體(5.988g，15.0mmol，84％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.12(m，3H)，1.25(m，3H)，2.40(s，3H)，3.21(m，2H)，3.23(s，3H)，3.60(m，2H)，3.75(m，2H)，3.96(s，3H)，4.80(m，2H)，6.94(m，1H)，8.16(m，1H)，8.34(m，1H)。MS APCI-m/z 412[M-H]- 步驟9 1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(6-乙基吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羧酸
將步驟8的酯(13.57g，32.83mmol)和1M的氫氧化鈉水溶液(90mL)溶于甲醇(10mL)中，并將反應混合物在85℃下攪拌1小時。將反應混合物冷卻至室溫，并用10％檸檬酸水溶液(90mL)酸化。將水層用二氯甲烷萃取兩次(36mL和24mL)。將水層用10％的檸檬酸水溶液(20mL)再次酸化，并用二氯甲烷(24mL)萃取。將上述二氯甲烷萃取物合并，并添加乙醇(13mL)。溶液在環(huán)境壓力下蒸餾，用乙醇(52mL)替代蒸餾出的二氯甲烷。加入水(12mL)，將混合物冷卻至5℃并攪拌1小時。將漿液過濾并用水(24mL)洗滌，在55℃下真空中干燥，得到黃色固體(8.858g，22.2mmol，68％)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ1.10(t，3H)，1.30(t，3H)，2.43(s，3H)，3.24(s，3H)，3.57(m，2H)，3.70(m，2H)，3.93(t，2H)，4.84(m，2H)，7.02(m，1H)，8.13(m，1H)，8.16(m，1H)。MS APCI+m/z 400[M-H]+。
步驟10 N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺
將步驟9的羧酸(29.0g，72.6mmol)、甲磺酰胺(8.28g，87mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二酰亞胺鹽酸鹽(18.0g，94mmol)和4-二甲基氨基吡啶(10.59g，94mmol)溶于二氯甲烷(385mL)中，將反應混合物在室溫下攪拌過夜。將反應混合物用二氯甲烷稀釋(至1500mL)，用檸檬酸水溶液(200mL中含有50g檸檬酸)洗滌兩次，然后用檸檬酸和氫氧化鈉混合物的酸性溶液洗滌一次。二氯甲烷相用硫酸鎂干燥，并真空濃縮。固體殘余物在異丙醇(1L)中回流20分鐘，待其冷卻，濾出所得固體。然后，將分離出的黃色固體在乙酸乙酯(2000mL)進行回流，直到形成溶液，其中，乙酸乙酯的體積減少至1000mL。將所得溶液過濾，并過夜待其冷卻至室溫，然后置于冰浴中并攪拌1.5小時。將所得固體濾出并用醚(2×50mL)洗滌，在濾墊上干燥3小時，然后在真空中用五氧化磷干燥得到白色粉末(16.7g)。該粉末的PXRD分析表明，該粉末是N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的晶型A結(jié)晶形式。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.20(t，3H)，1.29(t，3H)，2.41(s，3H)，3.24(s，3H)，3.45(s，3H)，3.64(q，2H)，3.75(m，2H)，3.99(t，2H)，4.82(m，2H)，6.87 (d，1H)，8.20(d，1H)，8.29(s，1H)，9.87(br，1H)。MS ES+m/z 477[MH]+。測試為C，50.25H，5.90N，23.41；計算為C20H28N8O4S；C，50.41H，5.92N，23.51。
實施例4晶型A的制備方法(由異丙醇重結(jié)晶) N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的晶型A結(jié)晶形式的制備方法如下 N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺
將粗制的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺(16.7g)(參見實施例1)在二氯甲烷(20mL)和異丙醇(70mL)中漿化。將漿液加熱至回流(約60℃)并且固體物質(zhì)看起來仍保持基本上不溶。將額外量的二氯甲烷(40mL)以5mL遞增的方式加入漿液中。所得溶液回流約1分鐘并停止加熱。這個過程結(jié)束時，固體看起來已經(jīng)溶解得到了黃色溶液。然后將該溶液冷卻至35℃，沒有結(jié)晶的征兆。用少量(少于0.5g)的粗制N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺作為該溶液的晶種，沒有結(jié)晶的征兆。將溶液再冷卻至室溫，仍沒有結(jié)晶的征兆。當冷卻至5℃是，溶液變成漿液。將該漿液在約5℃的溫度下進行攪拌，然后過濾，將過濾器上收集到的物質(zhì)在50℃下干燥得到固體(7.7g)。該固體的PXRD分析表明，該固體是N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的晶型A結(jié)晶形式。
實施例5晶型B的制備方法(甲醇回流) N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的晶型B結(jié)晶形式的制備方法如下 將含有結(jié)晶形式晶型A的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺(13.9g)(參見實施例3)溶于回流的二氯甲烷(160mL)和甲醇(200mL)中。蒸餾出二氯甲烷(收集到約110mL蒸餾物)。將混合物冷卻至室溫，成粒30分鐘，并過濾。將固體用甲醇(30mL)進行洗滌，并真空干燥，得到亮黃色固體(10.8g)。該固體的PXRd分析表明，該固體是N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的晶型B結(jié)晶形式。
實施例6晶型B的制備方法(甲醇回流) N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的晶型B結(jié)晶形式的制備方法如下 將1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰酸(1.19kg，2.98摩爾)(參見實施例3，步驟9)、甲磺酰胺(344g，3.6摩爾)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二酰亞胺鹽酸鹽(810.0g，4.21摩爾)和4-二甲基氨基吡啶(488.8g，4.01摩爾)在氮氣氛下溶于二氯甲烷(12L)中，將反應混合物在室溫下進行攪拌。3小時后，將另外一部分4-二甲基氨基吡啶(62.0g，總共551.7g，4.52摩爾)加入該溶液中，并將反應混合物在室溫下再攪拌20小時。反應混合物用10％檸檬酸水溶液(12L)進行稀釋，將有機相分離出來，用10％檸檬酸水溶液(12L)進行洗滌，然后用水洗滌。
將所得溶液(10L)過濾，并在環(huán)境壓力下蒸餾至約初始體積的一半，將熱溶液用甲醇(總共14L)分批稀釋，同時通過蒸餾將二氯甲烷分批除去(蒸餾物部分總共11L，在55℃下回流的終體積為13L)。將黃色漿液冷卻至室溫，攪拌過夜，然后冷卻至5℃。然后，將漿液過濾并用已冷凍的甲醇分批(總共5.8L)進行洗滌。將由過濾器上收集到的物質(zhì)在55℃下真空中干燥3天，得到亮黃色固體狀產(chǎn)物(1.038kg，產(chǎn)率73％)，該產(chǎn)物是N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的晶型B結(jié)晶形式。
實施例7晶型B的制備方法(脫氧化和甲醇回流) N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶型B結(jié)晶形式的制備方法如下； 將二氯甲烷(260mL)在流經(jīng)反應器頂部的氮氣流條件下回流，使得體積減少至240mL，然后在氮氣環(huán)境下冷卻至室溫。將1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(6-乙基吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羧酸(24g，60毫摩)(參見實施例3，步驟9)，甲磺酰胺(6.88g，72毫摩)和4-二甲基氨基吡啶(10.98g，90毫摩)在氮氣環(huán)境下溶于二氯甲烷(240mL)中。將該溶液攪拌30分鐘，然后加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二酰亞胺鹽酸鹽(16.13g，84毫摩)，將反應混合物在室溫下氮氣環(huán)境下攪拌過夜。將反應混合物用10％檸檬酸水溶液(240mL)進行稀釋，將有機相分離出來，用10％檸檬酸水溶液(240mL)進行洗滌，然后再用水(240mL)洗滌。
所得溶液在環(huán)境壓力下蒸餾至約為初始體積的一半(約120mL)。將熱溶液用甲醇(240mL)慢慢稀釋，然后將混合物在環(huán)境壓力下蒸餾至約240mL。將熱混合物再次用甲醇(120mL)稀釋，再在環(huán)境壓力下蒸餾至約240mL。將熱混合物又一次用甲醇(120mL)稀釋，再在環(huán)境壓力下蒸餾至約240mL。將混合物冷卻至室溫同時攪拌1小時，然后再冷卻至0-5℃同時攪拌1小時。然后，將所得黃色漿液過濾，將固體用冰冷的甲醇洗滌(96mL)。固體在55℃下真空中干燥過夜，得到亮黃色固體(25.78g，產(chǎn)率90％)，該產(chǎn)物是N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的晶型B結(jié)晶形式。
實施例8晶型B的制備方法(離子交換樹脂和甲醇回流) N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的晶型B結(jié)晶形式的制備方法如下。
將1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(6-乙基吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羧酸(24g，60.1毫摩)(參見實施例3，步驟9)，甲磺酰胺(6.88g，72.4毫摩)和4-二甲基氨基吡啶(10.98g，90毫摩)在氮氣環(huán)境下溶于二氯甲烷(240mL)中。將溶液攪拌30分鐘，然后加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二酰亞胺鹽酸鹽(16.14g，84.1毫摩)，將反應混合物在室溫下攪拌直到5小時后斷定該反應基本上完成了。將反應混合物用10％檸檬酸水溶液(240mL)進行稀釋，將有機相分離出來，用10％檸檬酸水溶液(240mL)洗滌，然后在用水(240mL)洗滌。
將Amberlite IRN-78(24g)(一種堿性離子交換樹脂)加入經(jīng)攪拌的分離出來的有機相中，然后將混合物攪拌3小時。濾出樹脂球，濾餅用二氯甲烷(48mL)進行洗滌，將合并的濾出液用10％檸檬酸水溶液(120mL)洗滌，然后用水(240mL)洗滌兩次。
所得溶液在環(huán)境壓力下蒸餾至約為初始氣體的一半(約120mL)。將熱溶液用甲醇(240mL)慢慢稀釋，沉淀出黃色固體，然后將混合物在環(huán)境壓力下蒸餾至約240mL。將熱混合物再次用甲醇(240mL)稀釋，再在環(huán)境壓力下蒸餾至約240mL。將黃色漿液冷卻至室溫同時攪拌過夜，然后在冰浴中冷卻1小時(約0-5℃)。然后將所得漿液過濾，固體用甲醇(96mL)洗滌。所得固體在50℃下真空中干燥過夜，得到亮黃色固體(21.51g，產(chǎn)率75.1％)，該固體是N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶型B結(jié)晶形式。
實施例9晶型B的制備方法(漿液轉(zhuǎn)化) 將約25mg晶型A(參見實施例3)在室溫下用1mL甲醇漿化。漿液的顏色在10分鐘內(nèi)迅速變黃。由漿液中取出少量樣品。對該樣品進行PXRD分析表明，該樣品是N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶型B結(jié)晶形式。
實施例10晶型B的制備方法(溫度轉(zhuǎn)化) 將晶型A樣品(參見實施例3)利用DSC加熱至180℃。樣品熔融并以晶型B的形式重結(jié)晶。將樣品冷卻至室溫。為了確認沒有晶型A剩余且完全轉(zhuǎn)化成晶型B，將樣品在DSC中再次加熱至175℃。沒有探測到明顯的熱量變化。將樣品冷卻至室溫。將該樣品再次加熱至250℃。在220℃觀察到晶型B熔融。
實施例11晶型C的制備方法(漿液轉(zhuǎn)化) N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的晶型C結(jié)晶形式的制備方法如下 將晶型B樣品(參見實施例5到9)在4℃下THF/H2O(50∶50體積/體積)中進行漿化。16天后，過濾出少量樣品，并在室溫下干燥，得到淺黃色固體。該樣品的DSC分析與晶型C的結(jié)果一致。將另外一少部分樣品從漿液中以潮態(tài)形式取出。該樣品的PXRD分析與晶型C的結(jié)果一致。漿化31天后，將另外一少部分樣品從漿液以潮態(tài)形式取出。該樣品的PXRD分析與晶型C的結(jié)果一致。
實施例12晶型C的制備方法(播種法) N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的晶型C結(jié)晶形式的制備方法如下 將晶型B樣品(參見實施例5到9)(129.6g)在23℃下氮氣環(huán)境中在丙酮(1300mL)中進行攪拌。加入晶型C種子(20mg)，在室溫下繼續(xù)攪拌13天。通過過濾收集固體，并在高于20℃的環(huán)境溫度下真空中干燥，得到產(chǎn)率為92.4％的晶型C產(chǎn)物(119.8g)。圖4表示該產(chǎn)物的粉末X射線衍射譜圖。
實施例13晶型A和晶型B的穩(wěn)定性 晶型A和晶型B的熱力學穩(wěn)定性的比較如下首先，將約25mg晶型A在約1mL甲醇中進行漿化。漿液的顏色迅速變黃。將一少部分樣品從漿液中取出。PXRD分析確認，該樣品是晶型B。第二，將晶型A和晶型B分別通過DSC進行分析，并且晶型A和晶型B樣品的示意性數(shù)據(jù)列在圖5和圖6中。DSC數(shù)據(jù)表明，晶型B的熔點高于晶型A的熔點。因此，漿液轉(zhuǎn)化分析和DSC分析的結(jié)果證實了，晶型B比晶型A在熱力學上更穩(wěn)定。
實施例14晶型B和晶型C的穩(wěn)定性 在如下溶劑體系中進行銜接性研究，以確定晶型B和晶型C的相對熱力學穩(wěn)定性(1)THF/H2O(50∶50體積/體積)，(2)甲基乙基甲酮(“MEK”)，(3)甲醇，和(4)甲醇/二氯甲烷(DCM)(50∶50體積/體積)。MEK研究在室溫下進行，在其它三種溶劑體系中的研究在40℃和60℃進行。在各項研究中，制備晶型B在適當溶劑體系中的懸浮液。然后，將約10mg的晶型C加入各種懸浮液中。接著，將懸浮液在適當溫度下漿化特定時間。如下為各項研究中的溶劑體系、溶劑體系的溫度和將懸浮液進行漿化的時間 (1)研究A在室溫下，MEK中，漿化3天； (2)研究B在40℃下，THF/H2O(50∶50)中，漿化3天； (3)研究C在60℃下，THF/H2O(50∶50)中，漿化3天； (4)研究D在40℃下，甲醇中，漿化21天； (5)研究E在60℃下，甲醇中，漿化21天； (6)研究F在40℃下，甲醇/DCM中，漿化5天；和 (7)研究G在60℃下，甲醇/DCM中，漿化21天。
在漿化結(jié)束后，將樣品從各個漿液中取出，并用PXRD進行分析。PXRD分析表明，在室溫下和在40℃下制備的所有樣品是晶型C，在60℃下制備的所有樣品是晶型B。正如先前所述，晶型B和晶型C的熱力學穩(wěn)定性在40和60℃之間存在交叉(即，上述兩種晶型是雙變性晶體)。在低于該交叉點的溫度下，晶型C是熱力學最穩(wěn)定的形式。在高于交叉點的溫度下，晶型B是熱力學最穩(wěn)定的形式。
實施例15體外試驗 方法A主動脈環(huán)試驗 該方案描述了一個過程，該過程用于測量暴露于N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺中的大鼠主動脈環(huán)的直接松弛。在這個試驗中，PDE5抑制化合物通過增強由穩(wěn)定的體外NO-供體二乙基三胺NONOate(二氮-1-鎓-1，2-二醇酯)(“DETA-NO”)所引起的cGMP信號，促使主動脈環(huán)發(fā)生松弛。具有95％置信區(qū)間的EC50是化合物引發(fā)松弛能力的指標。EC50是PDE5抑制化合物的濃度，該濃度下對PDE5抑制化合物產(chǎn)生最高可能有效響應的50％。
用CO2氣體使雄性Sprague-Dawley大鼠(250-350g)窒息，將其胸主動脈小心切離，并放置在Krebs緩沖液中。然后，將沒有結(jié)締組織的主動脈小心切開，分成8部分，每部分長3-4mm。
將主動脈環(huán)，在1克的靜止拉力下，懸浮在用水(37℃)套裝的15mL組織浴中的平行不銹鋼環(huán)之間。張力用等容積的張力傳感器進行測量，并用Ponemah組織平臺系統(tǒng)進行記錄。在進行藥物測試以前，將每種制備方法制備的化合物平衡至少60分鐘。在這段時間期間，組織也用200μM的NG-單甲基L-精氨酸(“L-NMMA”)進行培養(yǎng)，培養(yǎng)介質(zhì)每15-20分鐘變化一次(每次洗滌后，加入L-NMMA以使各個組織浴中的最終濃度保持在200μM)。
平衡以后，記錄每個組織的基線張力。評估對新富林(phenylepherine)(1μM)的血管收縮反應，當對新富林的反應達到最大時，隨后通過接觸乙酰膽堿(1μM)來評估血管的反應性。再次沖洗后，記錄第二基線值，將血管收縮去甲腎上腺素(25nM)加入各浴中，將組織培養(yǎng)一定時間(約15分鐘)，足以使組織達到穩(wěn)定。使用穩(wěn)定的NO供體DETA-NO供應體外NO。滴定DETA-NO的濃度(以半對數(shù)(half-log)增加的方式進行累加)，以使由去甲腎上腺素引起的血管收縮(preconstriction)發(fā)生約5-15％的松弛。在如下條件下得到累加的濃度-響應曲線單環(huán)，通常使用5劑量/環(huán)，每次添加之間為15分鐘。
方法B主動脈環(huán)試驗 對方法A的方案進行修正，以測量暴露于PDE5抑制化合物中的大鼠主動脈環(huán)的松弛。該方法與方法A的不同如下 對于該方法，在制備環(huán)(去內(nèi)皮環(huán))之前，首先通過將指部之間的血管內(nèi)腔進行小心擦拭來除去內(nèi)皮。靜止張力設(shè)定為2克，評估對最高濃度的新富林(1μM)的血管收縮反應，在沖洗一段時間后，接著兩次暴露于300nM的新富林中。在0.1到300nM的濃度范圍內(nèi)，構(gòu)建各個組織中去甲腎上腺素的濃度——響應關(guān)系。再次沖洗后，將組織采用EC90濃度的去甲腎上腺素進行收縮，用于化合物測試。
實施例16體內(nèi)試驗 方法ACulexTM試驗 使用有意識的未插管(pre-cannulated)自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)用于評估N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺在降低全身動脈血血壓中的功效。該試驗使用自動采血(ABS)系統(tǒng)進行。CulexTMABS系統(tǒng)(Bioanalytical System，Inc.，West Lafayette，IN)包括膝上型計算機、四個對照單元和代謝籠。該ABS系統(tǒng)允許從單一大鼠中收集若干血樣而不會對大鼠施加不適當?shù)膲毫Α?br>
另外，該ABS系統(tǒng)允許收集可用于生物指示物的識別的尿樣。通過該種途徑，在有意識的非受限SHR大鼠中進行療效和標準藥物動力學研究，以定義血漿游離型藥物的濃度或可能的生物指示物與藥物療效(降低平均動脈血壓)之間的關(guān)系。
對12至16周大，重約300g的SHR大鼠進行頸靜脈和右側(cè)頸動脈的手術(shù)插管。手術(shù)恢復以后，將動物放置在CulexTM籠中，并拴在帶有傳感器的移動響應臂上，當試驗動物運動時，該傳感器控制籠子移動，從而防止導管纏繞在一起。在用于血液采樣的右側(cè)頸靜脈導管和CulexTM無菌管道裝置和用于化合物給藥的左側(cè)頸靜脈導管之間進行連接，且右側(cè)頸動脈中的導管連接到壓力傳感器上以監(jiān)測血壓。為了使導管處于開放狀態(tài)，通過CulexTM的“tend”功能維持右側(cè)頸筋脈套管，其中，CulexTM每12分鐘或者在兩次采樣之間用20μL肝磷脂鹽水(10單位/mL)沖洗導管，左側(cè)頸靜脈套管充滿了肝磷脂鹽水(20單位/mL)。通過如下方法使右側(cè)頸動脈套管處于開放狀態(tài)當未記錄到血壓時將肝磷脂鹽水慢慢的直接灌輸?shù)窖由旃艿乐?，或在血壓監(jiān)測過程中通過壓力傳感器慢慢灌輸肝磷脂。進行化合物評估之前，使動物適應環(huán)境至少兩個小時。PDE5抑制化合物可以通過靜脈內(nèi)或口腔強飼給藥。使用CulexTM軟件設(shè)定血液采樣方案(采樣時間和體積)。從每只動物中抽取的血液總量不超過750μL/24小時，且在兩個星期內(nèi)不超過10mL/kg。監(jiān)測心率、血壓和藥物濃度。全身動脈血壓和心率通過PONEMAH(Gould Instrument System，Valley View，OH)壓力傳感器采用數(shù)據(jù)獲取系統(tǒng)進行記錄，該數(shù)據(jù)獲取系統(tǒng)根據(jù)實驗方案記錄血壓和心率6到24小時。分析平均動脈血壓(主要試驗目標)來評估化合物的療效。
使用下述LC/MS/MS方法分析血樣，來測量血漿藥物濃度，并評估可能的生物指示物。
LC/MS/MS方法 樣品制備方法將血漿樣品(50μL未知、對照或空白)與10μL乙腈水或PDE-5抑制化合物的標準溶液以及150μL內(nèi)標溶液(乙腈中含有100ng/mLPDE-5抑制化合物)進行混合。將混合物在3000rpm下離心5分鐘，并將125μL上層清液轉(zhuǎn)移到96孔盤中。在氮氣流下蒸發(fā)掉溶劑，殘余物用80μL乙腈/0.1％甲酸水溶液(2080v/v)進行再生。
將20μL體積的各個已制備的樣品注射到Phenomenex Synergi 4μmMAX-RP 2.0×75mm柱中，以0.4mL/min利用從0.1甲酸水溶液(流動相A)到乙腈(流動相B)的梯度洗脫液進行洗脫。梯度程序包括初始應用90％的流動相A，在注射后從0.2分鐘到1.15分鐘直線變化至75％流動相B，將75％流動相B保持2.0分鐘。從2.00分鐘到2.10分鐘流動相線性變回90％流動相A，在3.00分鐘處進行下次注射。通過質(zhì)譜利用陽離子電子噴霧(ESI)對變換進行多步反應監(jiān)測m/z 454.00(MH+PDE-5抑制化合物)→m/z 408.00，m/z 466.24(MH+PDE-5抑制化合物)→409.33，從而進行探測。離子噴霧電壓被設(shè)定為5000。通過被分析物與內(nèi)標的峰面積之比繪制校準曲線。由峰面積比與校準曲線進行反向預測，來確定待測物的濃度。
方法B在自發(fā)性高血壓大鼠中植入無線電發(fā)射機，并通過遙感法得到血壓 自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)采用異氟烷氣體經(jīng)由異氟烷麻醉機進行麻醉，該麻醉機在氧氣穿過機器內(nèi)腔時輸送一定范圍的百分比的異氟烷。動物被放置在吸入室內(nèi)，并吸入4-5％的異氟烷，以達到手術(shù)所需的麻醉程度。然后，在手術(shù)過程中通過鼻錐給藥，使麻醉劑維持在1-2％，其中，異氟烷通過較小的異氟烷麻醉設(shè)備輸送到手術(shù)臺上。
吸入麻醉劑后，在無菌過程中，將具有可商購無菌無線電-遙感部件(Data Sciences，International，Roseville，MN 55113-1136)的發(fā)射機植入大鼠中。手術(shù)之前，對手術(shù)部位進行刮毛，用DialTM牌抗菌溶液(含有4％葡萄糖酸氯己定和4％異丙醇)擦拭，接著應用碘酒(10％)噴霧溶液。進行2.5到3.0cm的剖腹手術(shù)，無線電-遙感部件被植入腹部，其中，導管頂端插入腹部動脈。Baby Weitlaner牽引器用于保留住軟組織。1cm的腹部動脈部分被部分切開，該部分被十字鉗暫時阻斷，用21規(guī)格的針刺破，發(fā)射機導管頂端被引入血管中，并通過固定到相鄰的腰肌肌肉上的單根4.0絲制縫合線來固定。然后，將發(fā)射機主體插入腹腔內(nèi)，同時固定到腹肌壁上，并用連續(xù)的4.0絲制縫合線來閉合。皮膚層采用皮下連續(xù)4.0可吸收縫合線來閉合。在閉合過程中，分別在縫合線內(nèi)部和周圍進行皮下麥卡因給藥和局部涂敷碘酒。在恢復意識以前，所有大鼠都接受皮下丁丙諾菲0.05mg/kg術(shù)后注射。對于0.300kg的大鼠典型劑量是0.050ml。在服用丁丙諾菲以前，大鼠必須從手術(shù)麻醉中完全恢復。然后，動物每天接受同樣劑量，服用持續(xù)兩天，除非動物表示已能忍受術(shù)后疼痛。
手術(shù)后，大鼠返回籠中，并單獨安置在帶有紙墊的底部。開始實驗過程以前，恢復期不少于7天。觀察到，術(shù)后數(shù)天大鼠通常是高血壓，術(shù)后約第七天恢復到“正常血壓”水平。實驗過程中，喂養(yǎng)大鼠標準鼠飼料和水。
化合物進行胃飼(例如，使用帶有球末端的不銹鋼、21/2英寸、18規(guī)格的強飼針進行強飼)給藥。對于單日給藥，目標體積例如為3.33ml/kg(胃飼)。根據(jù)化合物的溶解性，所服用的化合物的載體可以變化，但，甲基纖維素(0.5％)的水溶液將是首選。
利用Data Sciences International的數(shù)據(jù)獲取程序得到血壓數(shù)據(jù)。為了進行完整研究，每天24小時，間隔1.5-3分鐘記錄血壓樣品，記錄時間持續(xù)5秒。數(shù)據(jù)用Data Science的數(shù)據(jù)分析軟件進行處理，得到所希望時間間隔的平均值。在Microsoft ExcelTM電子數(shù)據(jù)表中進行所有的其它數(shù)據(jù)處理。
方法CSHR大鼠 設(shè)計試驗方案，針對血壓降低來篩選N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺。自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)的頸靜脈和頸動脈中分別插管，一個用于化合物給藥，一個用于直接測量血壓。在手術(shù)和所有試驗在一個工作日內(nèi)完成后，動物完全恢復意識。待評估的主要參數(shù)是血壓降低。然而，也收集心臟收縮壓和心臟舒張壓，以及心率數(shù)據(jù)。在上述攝入后，大鼠以逐漸增加或累加的方式服藥，以觀察響應。這種特定方法允許利用同樣的動物在一天內(nèi)對多種劑量進行篩選。
方法 麻醉大鼠用5％異氟烷實現(xiàn)麻醉。切口處進行刮毛并進行消毒以進行手術(shù)。然后，大鼠被轉(zhuǎn)移到帶有加熱墊、異氟烷供給并被維持在37℃的手術(shù)場所，異氟烷在整個手術(shù)過程中起作用。
手術(shù)動脈插管和靜脈插管分別植入頸靜脈和頸動脈中。套管在皮下通到頸的背面，在頸背面上述套管經(jīng)由皮膚離開體內(nèi)。不銹鋼釘用于閉合各個切口。然后，導管通過彈性繩穿到旋轉(zhuǎn)裝置上，該裝置使套管在試驗過程中免受動物咀嚼。
恢復大鼠被放置在帶有計數(shù)平衡臂儀的不透明聚碳酸酯籠中，該計數(shù)平衡臂支撐繩和旋轉(zhuǎn)裝置的重量。將紙墊材料鋪在籠底部。大鼠在鋪有紙墊材料的籠底部從手術(shù)中進行恢復，且在恢復階段初期它們接受2mL體積。未給動物提供食物。
當介紹本發(fā)明或其示例性實施方式是，本文中的“該”和“所述”意指一個或更多個因素。術(shù)語“包括”是含有的，意指可以是除了所列因素以外的其它因素。盡管本發(fā)明根據(jù)具體實施方式
進行描述，但是這些實施方式的細節(jié)并不構(gòu)成任何限制。
權(quán)利要求
1.一種N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，所述晶體的X射線粉末衍射譜圖包括在8.5±0.1°2θ處的衍射峰。
2.如權(quán)利要求1所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，其中，所述X射線粉末衍射譜圖還包括至少一個選自9.0±0.1、16.9±0.1、20.0±0.1和22.5±0.1°2θ的衍射峰。
3.如權(quán)利要求2所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，其中，所述X射線粉末衍射譜圖不包括至少一個選自3.6±0.1和7.2±0.1°2θ的衍射峰。
4.如權(quán)利要求1所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，所述晶體的傅立葉變換紅外譜圖包括在3247±3cm-1處的吸收譜帶。
5.如權(quán)利要求1所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，其中，所述傅立葉變換紅外譜圖還包括至少一個選自696±2、1085±2、1188±2和1540±2cm-1的吸收譜帶。
6.如權(quán)利要求1所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，其中，所述傅立葉變換紅外譜圖不包括在1645±2cm-1處的吸收譜帶。
7.如權(quán)利要求1所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，所述晶體的拉曼譜圖包括在3255±3cm-1處的譜帶。
8.如權(quán)利要求1所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，其中，所述拉曼譜圖還包括至少一個選自993±2、1383±2、1473±2和1569±2cm-1的譜帶。
9.如權(quán)利要求1所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，其中，所述拉曼譜帶不包括在1652±2cm-1處的譜帶。
10.一種藥物組合物，所述組合物包括治療有效量的權(quán)利要求1所述N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體和藥學可接受載體。
11.一種藥物組合物，所述組合物包括治療有效量的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺和藥學可接受載體，其中，至少約50重量％的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺以權(quán)利要求1所述N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體的形式存在。
12.一種N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，所述晶體的X射線粉末衍射譜圖包括在3.6±0.1°2θ處的衍射峰。
13.如權(quán)利要求12所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，其中，所述X射線粉末衍射譜圖還包括至少一個選自7.2±0.1、10.1±0.1、14.4±0.1和23.8±0.1°2θ處的衍射峰。
14.如權(quán)利要求13所述的N-1[-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，其中，所述X射線粉末衍射譜圖不包括至少一個選自8.5±0.1、20.2±0.1和22.5±0.1°2θ處的衍射峰。
15.如權(quán)利要求12所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，所述晶體的傅立葉變換紅外譜圖包括在1452±2cm-1處的吸收譜帶。
16.如權(quán)利要求12所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，其中，所述傅立葉變換紅外譜圖還包括至少一個選自722±2、920±2、1211±2和1395±2cm-1的吸收譜帶。
17.如權(quán)利要求12所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，其中，所述傅立葉紅外變換譜圖不包括在962±2cm-1處的吸收譜圖。
18.如權(quán)利要求12所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，所述晶體的拉曼譜圖包括在1299±2cm-1處的譜帶。
19.如權(quán)利要求12所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，其中，所述拉曼譜圖還包括至少一個選自689±2、1456±2和1535±2cm-1的譜帶。
20.如權(quán)利要求12所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，其中，所述拉曼譜圖不包括在1316±2cm-1處的譜帶。
21.一種藥物組合物，所述組合物包括治療有效量的權(quán)利要求1所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體和藥學上可接受載體。
22.一種藥物組合物，所述組合物包括治療有效量的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺和藥學可接受載體，其中，至少約50重量％的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺以權(quán)利要求12所述N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體的形式存在。
23.一種N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，所述晶體的X射線粉末衍射譜圖包括在6.7±0.1°2θ處的衍射峰。
24.如權(quán)利要求23所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，其中，所述X射線粉末衍射譜圖還包括至少一個選自10.6±0.1、14.0±0.1、17.7±0.1和20.2±0.1°2θ的衍射峰。
25.如權(quán)利要求24所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，其中，所述X射線粉末衍射譜圖不包括至少一個選自3.6±0.1和9.0±0.1°2θ的衍射峰。
26.如權(quán)利要求23所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，所述晶體的傅立葉變換紅外譜圖包括在881±2cm-1處的吸收譜帶。
27.如權(quán)利要求23所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，其中，所述傅立葉變換紅外譜圖還包括至少一個選自661±2、703±2、797±2、909±2和1269±2cm-1的吸收譜帶。
28.如權(quán)利要求23所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，其中，所述傅立葉變換紅外譜圖不包括至少一個選自688±2和696±2cm-1的吸收譜帶。
29.如權(quán)利要求23所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，所述晶體的拉曼譜圖包括在2988±2cm-1處的譜帶。
30.如權(quán)利要求23所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，其中，所述拉曼譜圖還包括至少一個選自707±2和1447±2cm-1的吸收譜帶。
31.如權(quán)利要求23所述的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體，其中，所述拉曼譜圖不包括在1417±2cm-1處的譜帶。
32.一種藥物組合物，所述組合物包括治療有效量的權(quán)利要求23所述N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體和藥學上可接受載體。
33.一種藥物組合物，所述組合物包括治療有效量的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺和藥學可接受載體，其中，至少約50重量％的N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺以權(quán)利要求23所述N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺晶體的形式存在。
34.一種治療患者PDE-5介導病癥的方法，所述方法包括，給患者施用治療有效量的權(quán)利要求1所述N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺。
35.一種治療患者PDE-5介導病癥的方法，所述方法包括，給患者施用治療有效量的權(quán)利要求12所述N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺。
36.一種治療患者PDE-5介導病癥的方法，所述方法包括，給患者施用治療有效量的權(quán)利要求23所述N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺。
全文摘要
本發(fā)明包括(1)N-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的無水結(jié)晶形式；(2)含有至少一種上述晶型的藥物組合物；(3)使用至少一種上述晶型用于治療磷酸二脂酶-5介導病癥的方法；和(4)用于制備上述晶型的方法?；衔颪-[1-(2-乙氧基乙基)-5-(N-乙基-N-甲基氨基)-7-(4-甲基吡啶-2-基-氨基)-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-3-羰基]甲磺酰胺的結(jié)構(gòu)式如上。
文檔編號C07D487/04GK101175758SQ200680016340
公開日2008年5月7日 申請日期2006年5月3日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月12日
發(fā)明者戴維·安德魯·恩斯威斯爾, 彼得·瓦倫斯·馬歇爾, 斯特凡·克林·約翰·泰勒 申請人:輝瑞有限公司