專利名稱：2，6喹啉基衍生物、其制備工藝以及其作為藥物的用途的制作方法
2，6喹啉基衍生物、其制備工藝以及其作為藥物的用途
本發(fā)明涉及2,6喹啉基衍生物、其制備工藝、包含其的藥物組合 物和其作為藥物的用途。
整聯(lián)蛋白o(hù)c 4 P 1 (也稱為VLA-4或很晚期抗原-4并確定為 CD49d/CD29)主要在嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和嗜堿性粒 細(xì)胞上表達(dá)。它大部分與脈管細(xì)胞表面附著分子VCAM-1結(jié)合，VCAM-1 是對炎性細(xì)胞因子(TNF-ot、 IL-1和選擇性的IL-4和IL-13)和細(xì)胞
外基質(zhì)蛋白纖維連接蛋白應(yīng)答，在內(nèi)皮組織上表達(dá)的。
由于oc4P1不在，抵抗感染的第一道防線的循環(huán)中性粒細(xì)胞上表
達(dá)，因此它是炎癥疾病藥理控制的目標(biāo)。
一些體外和體內(nèi)的研究表明，oc4P 1在細(xì)胞附著介導(dǎo)的炎癥病理
學(xué)中起重要作用，阻斷其功能是有益的。疾病包括哮喘、多發(fā)性硬化 癥(MS)、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)或炎性腸道疾病。
a4 P 1也在白血病細(xì)胞上表達(dá)，這表明通過結(jié)合在骨髓基質(zhì)細(xì)胞 上表達(dá)的纖維連接蛋白可增加存活率。在化學(xué)療法的存在下阻斷這種 相互作用，對預(yù)防急性骨髓內(nèi)產(chǎn)生的白血病的復(fù)發(fā)是有益的。
a4P1和VCAM-1也出現(xiàn)在成人主動(dòng)脈的內(nèi)膜動(dòng)脈粥樣硬化增厚 處的平滑肌細(xì)胞中。阻斷這種相互作用，對預(yù)防平滑肌分化和動(dòng)脈粥 樣硬化是有益的。
已表明a4 |3 l在炎癥細(xì)胞上與纖維連接蛋白的相互作用還可增加 慢性同種異體移植物的失敗。阻斷該相互作用對保持移植存活率是有益的。
整聯(lián)蛋白cc 4 P 7 (也稱為LPAM-1)在某些T和B淋巴細(xì)胞亞群和 嗜酸性粒細(xì)胞上表達(dá)。類似a4pi， oc4卩7也結(jié)合VCAM-1和纖維連 接蛋白。此外，a4P7還結(jié)合至細(xì)胞表面附著分子MAdCAM-1，該 MAdCAM-l在腸胃道優(yōu)先表達(dá)，并且認(rèn)為與粒細(xì)胞復(fù)位至腸胃道粘膜有
關(guān)。ot4 e 7和MAdCAM-l之間的相互作用也是粘膜組織之外炎癥的重 要位置。
一些研究已表明a4 P 7與炎性腸道疾病有關(guān)，并且阻斷其功能是 有益的。
國際專利申請WO00/15612公開了具有下列通式的化合物
其中R代表某些取代基例如氫、-COOH、 -COO烷基。這些化合物 和用作制備藥物化合物的中間化合物，但它們本身沒有發(fā)現(xiàn)具有藥物 用途。
國際專利申請WO03/093237公開了 2， 6-喹啉基和2， 6-萘基衍生物 作為藥物用于治療VLA-4依賴的炎癥疾病。
我們現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)這些2，6-喹啉基化合物的一些類似物是a4整聯(lián)蛋 白，例如a4 P 1和/或ct4 P 7的有效的選擇性抑制劑，并證明有改善 的口服生物利用度、低清除率和高吸收率。這些化合物對其他亞族的 a整聯(lián)蛋白沒有或具有最小的抑制作用。
在一方面，本發(fā)明提供具有通式I的化合物，其對映異構(gòu)體、非 對映異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽
其中 <formula>formula see original document page 5</formula>
W是氫、羥基或C"烷基; R2是氫或卣素；
n是0-5; R3是氫或卣素； n'是0-4。
此處所用的術(shù)語"烷基"，代表具有直鏈或支鏈部分的飽和的， 單價(jià)的爛基或其組合，并含有1-6個(gè)碳原子，優(yōu)選I-2個(gè)碳原子或、 亞曱基(-CH廣)中的一個(gè)可被氧原子替換。優(yōu)選的烷基為曱氧基。
術(shù)語"羥基"，此處代表通式-OH。
術(shù)語"卣素"，此處代表氯、溴、氟或碘原子。優(yōu)選鹵素為氟。 通常地，f是氫，羥基或Cw烷基。優(yōu)選r是羥基和甲氧基。最 優(yōu)選I0是羥基。
通常地，112是氫或卣素。優(yōu)選R2是卣素。更優(yōu)選R2是氯。最優(yōu)選
W是氯并在苯環(huán)的2位和6位。
通常地，n是0至5。優(yōu)選n為l， 2或3。更優(yōu)選n是2。 通常地，113是氫或卣素。優(yōu)選R3是卣素。更優(yōu)選R3是氯。最優(yōu)選
^是氯并在吡啶環(huán)的3位和5位。
通常地，n'是0至4。優(yōu)選n'是l， 2或3。更優(yōu)選n'是2。 通常地，W是苯環(huán)上2位或4位上的氯原子。優(yōu)選地，f是苯環(huán)
上2位或4位上的至少一個(gè)氯原子。更優(yōu)選R2是苯環(huán)上2位和4位上
的氯原子。
通常地，f是在吡啶環(huán)的3位或5位氯原子。優(yōu)選地，113是在吡 啶環(huán)的3位或5位的至少一個(gè)氯原子。更優(yōu)選地113是在吡啶環(huán)的3位 和5位的氯原子。
優(yōu)選的化合物是甲基-(2S)-2-[(3，5- 二氯異煙酰 (dichloroisonicotinoyl ))氨基]-3-[2-(2， 6-二氯苯基)-6-喹啉基] 丙酸酯和(2S) -2- [ (3， 5- 二氯異煙酰)氨基]-3- [2- (2， 6- 二氯苯 基)-6-喹啉基]丙酸和其藥學(xué)上可接受的鹽。
最優(yōu)選的化合物是(2S) -2- [ (3， 5-二氯異煙酰)氨基]-3- [2- (2， 6-二氯苯基)-6 -喹啉基]丙酸以及其藥學(xué)上可接受的鹽。
通式I的化合物和它的一些中間產(chǎn)物在其結(jié)構(gòu)中至少具有一個(gè)立 體中心。該立體中心可呈現(xiàn)R或S構(gòu)型，所述R和S符號按照Pure Appl. Chem. (1976)， 45， 11-30中描述的規(guī)則使用。
在所有上述范圍中，不對稱的碳原子，優(yōu)選為"S，，-構(gòu)型。
本發(fā)明中"藥學(xué)上可接受的鹽"包括通式I化合物可形成的有治 療活性的、非毒性的堿和酸的鹽形式。
游離堿形式的通式I化合物的酸加成鹽形式可通過將游離堿用合 適的酸處理獲得，例如無機(jī)酸，如，氬卣酸如鹽酸或氫溴酸、硫酸、 硝酸、磷酸等等；或有機(jī)酸，例如乙酸、羥乙酸、丙酸、乳酸、丙酮 酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、 曱磺酸、乙磺酸、苯磺酸、p-甲苯磺酸、環(huán)己烷氨基磺酸(cyclamic)、 水楊酸、p-氨基水楊酸、亞曱基雙羥萘酸(pamoic)等等(Handbook of Pharmaceutical Salts, P. Heinrich Stahl & Camille G. Wermuth (Eds), Verlag Helvetica Chimica Acta - Ziirich， 2002， 329-345)。
包含酸性質(zhì)子的通式I化合物可通過將其用合適的有機(jī)堿和無機(jī) 堿處理，轉(zhuǎn)化為其有治療活性的，非毒性的堿加成鹽形式，例如，金 屬或胺鹽。合適的堿鹽形式包括，例如，銨鹽、堿金屬鹽和堿土金屬 鹽，例如，鋰、鈉、鉀、鎂、鈣鹽等等，有機(jī)堿的鹽，例如N-甲基-D-葡萄糖胺、海巴鹽(hydrabamine salts )，和與例如精氨酸、賴氨酸 的氨基酸生成的鹽等等(Handbook of Pharmaceutical Salts, P. Heinrich Stahl & Camille G. Wermuth (Eds), Verlag Helvetica Chimica Acta - Ziirich， 2002， 329-345)。
可逆地，所述鹽形式可通過用合適的堿或酸處理轉(zhuǎn)化為游離形式。
通式I的化合物和其鹽，在本發(fā)明的范圍內(nèi)也可以是溶劑化物的 形式。該溶劑化物包括例如水合物，醇化物等等。
本發(fā)明還涉及通式I化合物的所有立體異構(gòu)形式例如對應(yīng)異構(gòu)體 和非對應(yīng)異構(gòu)體形式或其混合物(包括所有可能的立體異構(gòu)體的混合)。
通式I的一些化合物也可以以互變異構(gòu)體的形式存在。雖然該形 式不能在上述通式中明示，但也意圖包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。在本發(fā)明的范圍內(nèi)涉及到的化合物或多個(gè)化合物，意為包含該化 合物的每個(gè)可能的異構(gòu)體形式及其混合物，除非某個(gè)具體的異構(gòu)體形 式被特別地提及。
本發(fā)明中的化合物可以以不同的多形態(tài)形式存在。雖然沒有在上 述通式中明示，但該形式也意圖包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本發(fā)明還涉及制備通式I化合物的工藝。
通式I的化合物按照它們的發(fā)明可用類似常規(guī)方法制備，如對有
機(jī)合成化學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的W0 03/093237中描述的方法。
當(dāng)通式I化合物呈現(xiàn)一個(gè)立體中心，并使用非立體選擇性的制備 方法，立體異構(gòu)體混合物的拆分最好使用下列一個(gè)或多個(gè)步驟，包括 一般地連續(xù)分離非對映體混合物成其構(gòu)成的外消旋體，優(yōu)選采用非手 性或手性相，以反相或優(yōu)選正相模式的色譜法分離，隨后有至少一個(gè) 最終步驟將各個(gè)外消旋體拆分成它的對應(yīng)異構(gòu)體，最優(yōu)選用手性相的、 以反相或優(yōu)選正相模式的色i普分離?？蛇x地，當(dāng)使用部分立體選擇性 的制備方法，最終步驟為，優(yōu)選使用非手性相或手性相、以反相或優(yōu) 選正相的色譜分離來分離非對映異構(gòu)體。
目前已發(fā)現(xiàn)通式I化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽可用于各種藥物 適應(yīng)癥0 ■
例如，本發(fā)明的化合物可用于治療哮喘，過敏性鼻炎，鼻竇炎， 結(jié)膜炎，食物過敏，炎性皮膚疾病包括皮炎、牛皮癬、蕁麻疹、搔癢 癥和濕滲，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，炎性腸道疾病包括克隆氏病和潰瘍性結(jié)腸 炎，多發(fā)性硬化癥和其他自身免疫疾病、急性髓性白血病、移植術(shù)和
動(dòng)脈粥樣;埂化。
因此，本發(fā)明在另一個(gè)方面涉及通式I化合物或其可藥學(xué)上可接 受的鹽在制備治療上述疾病的藥物中的用途。
特別地，本發(fā)明涉及通式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備
治療a4 (3 1和/或ct4 0 7依賴性炎癥或醫(yī)學(xué)病癥的藥物中的用途，所 述病癥例如哮喘，過敏性鼻炎，鼻竇炎，結(jié)膜炎，食物過敏，炎性皮 膚疾病包括皮炎、牛皮癬、蕁麻滲、搔癢癥和濕療，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，
炎性腸道疾病包括克隆氏病和潰瘍性結(jié)腸炎，多發(fā)性硬化癥和其他自 身免疫疾病、急性髓性白血病、移植術(shù)和動(dòng)脈粥樣硬化。
本發(fā)明的化合物可用于治療由附著機(jī)制介導(dǎo)的病癥。這些病癥優(yōu) 選包括哞喘，過敏性鼻炎，鼻竇炎，結(jié)膜炎，食物過敏，炎性皮膚疾 病包括皮炎、牛皮癬、蕁麻疹、搔癢癥和濕疹，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，炎性 腸道疾病包括克隆氏病和潰瘍性結(jié)腸炎，多發(fā)性硬化癥和其他自身免 疫疾病、急性髓性白血病、移植術(shù)和動(dòng)脈粥樣硬化。
患有需要治療的a4pi和/或oc4P 7依賴性炎癥或醫(yī)學(xué)病癥，優(yōu) 選哞喘，過敏性鼻炎，鼻竇炎，結(jié)膜炎，食物過敏，炎性皮膚疾病包 括皮炎、牛皮癬、蕁麻滲、搔癢癥和濕疹，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，炎性腸道 疾病包括克隆氏病和潰瘍性結(jié)腸炎，多發(fā)性硬化癥和其他自身免疫疾 病、急性髓性白血病、移植術(shù)和動(dòng)脈粥樣硬化的對象，可通過給予病 人包含在藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑中的、有效量的一種或多種上 述化合物或其藥學(xué)上可接受的衍生物或鹽進(jìn)行治療，以減少氧自由產(chǎn) 生。活性物質(zhì)可以任何適合的途徑給藥，例如，口服、非腸道、靜脈 注射、皮內(nèi)注射、皮下、肌肉內(nèi)或局部給藥，以液體、乳劑、凝膠或 固體形式、經(jīng)口腔或鼻腔噴霧或氣溶膠。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及通式I化合物在制備用于治療應(yīng)用的藥物中的 用途。特別地,本發(fā)明涉及通式I化合物在制備治療可能與oc4 P 1和 /或cc4P7依賴性病癥的藥物中的用途。本發(fā)明涉及通式I化合物在 制備治療下列疾病的藥物中的用途譯喘，過敏性鼻炎，鼻竇炎，結(jié) 膜炎，食物過敏，炎性皮膚疾病包括皮炎、牛皮癬、蕁麻疹、搔癢癥 和濕滲，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，炎性腸道疾病包括克隆氏病和潰瘍性結(jié)腸炎， 多發(fā)性硬化癥和其他自身免疫疾病、急性髓性白血病、移植術(shù)和動(dòng)脈 粥樣硬化。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及通式I化合物用作藥物。本發(fā)明涉及通式I化 合物用作藥物用于治療津喘，過敏性鼻炎，鼻竇炎，結(jié)膜炎，食物過 敏，炎性皮膚疾病包括皮炎、牛皮癬、蕁麻疹、搔癢癥和濕疹，類風(fēng) 濕關(guān)節(jié)炎，炎性腸道疾病包括克隆氏病和潰瘍性結(jié)腸炎，多發(fā)性硬化
癥和其他自身免疫疾病、急性髓性白血病、移植術(shù)和動(dòng)脈粥樣硬化。 在所公開化合物的光學(xué)異構(gòu)體之間，活性化合物的活性和性質(zhì)、
口服利用度和體外或體內(nèi)的穩(wěn)定性可能變化很大。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，活性化合物以對映異構(gòu)體濃集的方式
給藥，即，實(shí)質(zhì)上為單一異構(gòu)體的形式。
本發(fā)明還涉及在需要此種治療的哺乳動(dòng)物中治療a4 P 1和/或a
4 3 7依賴性炎癥或醫(yī)學(xué)病癥(優(yōu)選哞喘，過敏性鼻炎，鼻竇炎，結(jié)膜
炎，食物過敏，炎性皮膚疾病包括皮炎、牛皮癬、蕁麻疹、搔癢癥和
濕滲，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，炎性腸道疾病包括克隆氏病和潰瘍性結(jié)腸炎，
多發(fā)性硬化癥和其他自身免疫疾病、急性髓性白血病、移植術(shù)和動(dòng)脈
粥樣硬化)的方法，包括向病人給予治療量的至少一種通式I化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明的方法包括向患有上述病癥或疾病的哺乳動(dòng)物(優(yōu)選人)， 給予有效量的本發(fā)明的化合物以減輕或預(yù)防病癥或疾病。
化合物可以便利地以任何合適的單位劑量形式給藥，包括但不限 于每個(gè)單位劑量形式包含0. 01至2000mg，優(yōu)選0. 05至500mg活性成分。
本文中的術(shù)語"治療，，包括治愈性治療和預(yù)防性治療。
本文中的術(shù)語"實(shí)質(zhì)上"指的是含有大于或等于95%，優(yōu)選98 %的一種異構(gòu)體的組合物。
"治愈性"指治療疾病或病癥當(dāng)前癥狀發(fā)作有效。 "預(yù)防性"指預(yù)防疾病或病癥的發(fā)生或復(fù)發(fā)。
化合物用于調(diào)整細(xì)胞附著并且特別用于預(yù)防和治療其中白細(xì)胞外 滲起作用的疾病或病癥，本發(fā)明還延伸至該用途以及化合物在制備治 療上述疾病或病癥的藥物中的用途。
該類型的疾病或病癥包括炎性關(guān)節(jié)炎例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、脈管 炎或多發(fā)性皮肌炎(polydermatomyositis )、多發(fā)性硬化癥、移植術(shù)、
糖尿病、炎性皮膚病例如牛皮癬或皮炎、哮喘和炎性腸道疾病。
本發(fā)明的一個(gè)方面包括治療oc4相關(guān)的癌癥(包括癌癥，實(shí)體的
或造血系的)。該癌癥包括但不限于，肺癌例如非小細(xì)胞肺癌、胰腺
癌、前列腺癌、腎癌、子宮頸癌、卵巢癌、結(jié)腸直腸癌、乳腺癌、子
宮內(nèi)膜癌、膀胱癌、惡性黑色素瘤、精原細(xì)胞瘤、曱狀腺癌、急性髓
性白血病和胃癌。
通式I化合物獲得的結(jié)果表明具有很強(qiáng)的藥理作用。 用于治療疾病時(shí)，將有效日劑量的通式I化合物或其藥學(xué)上可接
受的鹽以藥物組合物的形式給藥。
因此，本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案涉及一種藥物組合物，包含有效
量的通式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。
制備本發(fā)明中的藥物組合物時(shí)，將一種或多種通式I化合物或其 藥學(xué)上可接受的鹽，按照熟練的專業(yè)人員已知的常規(guī)制藥技術(shù)，與制 藥用稀釋劑或輔料直接混合。
合適的稀釋劑和栽體可根據(jù)希望的給藥方式的不同，例如，口服、 直腸給藥或非腸胃道給藥，選擇各式各樣的形式。
包含本發(fā)明化合物的藥物組合物，例如可口服給藥或非腸胃道給
藥，即，靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下或膜內(nèi)給藥(intrathecally)。
適合口服給藥的藥物組合物可以是固體或液體，例如以片劑、丸
劑、錠劑、明膠膠嚢、溶液劑、糖漿等形式。
最后將活性成分與惰性稀釋劑或非毒性藥學(xué)上可接受的載體例 如，淀粉或乳糖混合。任選地，這些藥物組合物還可包含粘合劑例如 微晶纖維素、黃蓍膠或明膠，崩解劑如海藻酸，潤滑劑如硬脂酸鎂， 助流劑如膠狀二氧化硅，甜味劑如蔗糖或糖精，或著色劑或矯味劑如 薄荷或水楊酸甲酯。
本發(fā)明還涉及以一種控制方式釋放活性物質(zhì)的組合物。用于非胃 腸道給藥的藥物組合物可為常規(guī)形式，例如通常包含在安瓿、 一次性 注射器、玻璃或塑料針劑瓶或注入容器中的水溶液或油溶液或懸浮劑。
除了有效成分外，這些溶液或懸浮液中還可以任選包含一種無菌 稀釋劑，例如注射用水、生理鹽水、油、聚乙烯醇、甘油、丙二醇或
其它合成溶劑，抗菌劑例如苯甲醇，抗氧化劑例如抗壞血酸或亞硫酸 氫鈉，螯合劑如乙二胺四乙酸，緩沖劑如醋酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽 和，滲透壓調(diào)節(jié)劑如氯化鈉和葡萄糖。
這些藥劑形式可用藥劑師常用的方法制備。
藥物組合物中活性成分的量可落在很寬泛的濃度范圍，并依賴于 各種因素，例如病人的性別、年齡、體重和醫(yī)學(xué)癥狀，以及給藥方式。
因此口服的組合物中通式I化合物的量占組合物總重量的至少0. 5 o/o, 可至多到80%。
對于優(yōu)選的口服組合物，通式I化^^物的日劑量為0.01至2000 毫克(mg)。
在用于非腸道給藥的組合物中，通式I化合物的量為組合物總重 量的至少0.5%，可至多達(dá)到33%。對于優(yōu)選的非腸道給藥組合物， 通式I化合物的日劑量為0. 01至2000mg。
日劑量可以是寬泛的通式I化合物的計(jì)量單位范圍，通常在0.01 至2000mg。然而，應(yīng)當(dāng)理解具體的劑量可以根據(jù)個(gè)體需求適用于特別 案例，由醫(yī)師判斷。
提供下列實(shí)施例僅在說明，而不意在、也不應(yīng)認(rèn)為以任何方式對 本發(fā)明的限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員能理解下列實(shí)施例中的常規(guī)變化和改 良可在不超出本發(fā)明的精神或范圍的情況下做出。
實(shí)施例中提到的化合物的IUPAC名稱是按照ACD version 6.00 的規(guī)定產(chǎn)生的。
除非在實(shí)施例中另有說明，化合物的鑒定按照下列方法進(jìn)行 MR光讒記錄用Bruker AV-300或DRX-400分光計(jì)，在300. 1 3 MHz 或400. 13 MHz運(yùn)行檢測質(zhì)子，并運(yùn)行Bruker XWINNMR軟件包。除非 另由說明，光譜需要在室溫下進(jìn)行?；瘜W(xué)位移以ppm為單位并參考內(nèi) 部TMS或殘余溶劑信號。
HPLC分析使用下列系統(tǒng)之一執(zhí)行連接到Hnnigan LC-Q質(zhì)譜儀 的HP 1100 (Diode Array), ESI才莫式Pos/Neg電離作用，檢測波長
DAD 200-400nm，裝備有LUNA C 18(2)， DP 5 ja m， 100 X 4. 6 mm分 析柱。梯度運(yùn)行在6. 5min內(nèi)由從溶劑A (水+ 0. 08%曱酸)到溶劑B (乙腈+ 0. 08。/。甲酸)，且95。/。B保持9. 7min， 5 % B保持11. 82min。 流速設(shè)定為3 ml/min。色譜法在35。C下進(jìn)行。
實(shí)施例中將使用下列縮寫TFA三氟乙酸
TEA三乙胺
DCM二氯甲烷
NaOH氫氧化鈉
HC1鹽酸
NaHC03碳酸氬鈉
MgS04硫酸鎂
THF四氫呋喃
MgCl H20氯化鎂一水合物
NaCl氯化鈉
H202過氧化氫
MeOH甲醇
EtOH乙醇
EtAc乙酸乙酯
CaCl2氯化鈣
KC1氯化鉀
MnCl2氯化錳
NaH2P04 2H20磷酸二氬鈉二水合物
TMB四曱基聯(lián)苯胺
PBS磷酸鹽緩沖液
TBS三羥曱基氨基曱烷緩沖鹽
ADP5'-二磷酸腺苷
BSA牛血清白蛋白
FCS胎牛血清
RT 室溫 W 重量 V 體積
實(shí)施例1:甲基-(2S)-2-[(3，5-二氯異煙酰)氨基]-3-(2-(2，6-二氯苯基)-6-喹啉基)丙酸酯的合成。 (1)
W026 UCB專利VO03093237
將甲基-(2S) -2-[(叔丁氧羰基)氨基]-3- [2- (2， 6-二氯苯基)+ 喹啉基]丙酸酯(化合物No 26，國際專利申請W0 03/093237 ) (500mg, 1. 05mmol)溶解于DCM (5ml)，在10分鐘內(nèi)逐滴加入含有TFA (0. 8ml， 10. 5mmol)的DCM (2ml)溶液。加入完畢后，反應(yīng)物在室溫下攪拌過夜。 反應(yīng)物冷卻至0°C,在10分鐘內(nèi)逐滴加入含有TEA (2. lml， 15. 8mmo1) 的DCM (2ml)溶液。將反應(yīng)物冷卻至-l(TC，在10分鐘內(nèi)，在反應(yīng)物 回溫至室溫前，逐滴加入3， 5二氯-異煙酰氯(Bioorg. Med. Chem. Lett. 2002， 12， 1591- 1594) (663mg， 3. 0睡1)。 1小時(shí)后用HC1溶液(1N， 10ml)洗涂反應(yīng)物，然后再用NaHC03水溶液(飽和的，10ml)洗滌。用 MgS04干燥DCM層，過濾并在真空中除去溶劑得到灰白色固體。用快速 色語法(洗脫液EtAc)提純該固體得到標(biāo)題化合物為白色粉末(432mg, 75%)。 LCMSM+1 (552， 550， 548)，保留時(shí)間3. 82min， 'H NMR， 300Mz， d6-DMSO - 9. 50(1H, d) ， 8.63 (2H， s) ， 8.42 (1H， d) ， 7.98 (1H， d)， 7.94 (1H， d)， 7.78 (1H， dd) ， 7.65 (2H， d) ， 7.55 (2H， m) ， 4.95 (1H, m)， 3.74 (3H， s) ， 3.45 (1H， dd) ， 3.20 (1H， dd)。
實(shí)施例2: (2S)-2-[(3，5-二氯異煙酰)氨基]-3-[2-(2，6-二氯苯 基)-6-查啉基]丙酸的合成。(2)
將甲基-(2S)-2-[(3， 5-二氯異煙酰)氨基]-3-[2-(2， 6-二氯苯
基)-6-會啉基]丙酸酯(410mg， 0. 75mraol)溶解于THF (2ml)中，在3 小時(shí)內(nèi)將其逐滴加入攪拌中的NaOH (2M， 2.5ml)水溶液中。加入完畢 后，反應(yīng)物在RT下攪拌1小時(shí)，然后在真空中除去THF。得到的漿狀 物用水(6ml)稀釋并用HC1 (12M)酸化至pH-4。收集過濾得到生成的沉 淀，用水(15ml)洗滌，在真空(40。C)中干燥過夜得到期望產(chǎn)物為白色 粉末(274mg， 68%)。 LCMS M+l (535， 537)， M-l(534， 536)保留時(shí)間 3. 39min， ^ NMR， 300Mz， d6-DMSO - 13. 00 (1H， brs)， 9.40(1H， d)， 8.65 (2H, s)， 8.42 (1H， d) ， 7.98 (1H， d) ， 7.94 (1H， d) ， 7.78 (1H， dd), 7.65 (2H， d) ， 7.54 (2H， m) ， 4.90 (1H， m) ， 3.45 (1H， brs)， 3.20 (1H， dd)。手性HPLC 97% ee (對映體過量值)保留時(shí)間 6. 29 min (柱—CHIRALPAK AD 250*4. 6mm， 10jjm;溶劑A 1-丙醇+0. 1% TFA，溶劑B異己烷；配比為20% A: 80% B;溫度40°C;運(yùn)行時(shí)間 15 min;檢測280nM)。 實(shí)施例3
下面的細(xì)胞試驗(yàn)用于證明本發(fā)明化合物的效力和選擇性。每個(gè)試 驗(yàn)中都將測定每個(gè)測試化合物的IC5。，其顯示對細(xì)胞附著起50%抑制 作用必須的化合物濃度，其中100% -沒有測試化合物時(shí)評定的附著， 而0%=沒有接收到細(xì)胞的孔內(nèi)吸光度。
ct4 P 1整聯(lián)蛋白依賴的Jurkat細(xì)胞對VCAM-Ig的附著
將96孔的NUNC板用F(abh片段山羊抗人IgG Fc y-特應(yīng)性抗體 [Jackson Immuno Research 109-006-098: 100 jil濃度2 jj g/ml的 0. 1M NaHC03溶液，pH 8.4]涂布，在4。C下過夜。板用PBS清洗(3x)， 然后室溫下在搖擺平臺上在PBS/ 1% BSA中密封lh。清洗(3x用PBS) 后，加入9 ng/ml純化的、用PBS/ 1% BSA稀釋的2d VCAM-Ig，板在 RT下在搖擺平臺上放置60分鐘。清洗板(3x用PBS)， 37。C下，在總 量為200 ia 1含有2. 5 x 105Jurkat細(xì)胞中，存在或不存在滴定的測試 化合物，進(jìn)行檢測30分鐘。
每塊板用介質(zhì)清洗(2x)，附著的細(xì)胞用10 0 ja 1 MeOH固定10分鐘， 之后再清洗。室溫下5分鐘內(nèi)加入100 jn 10. 25%玫瑰紅(Sigma IH507)
的PBS溶液，在PBS中清洗板(3x)。加入100ul 50% (v/v) EtOH的
PBS溶液，將板放置60min后測定吸光度(570認(rèn))。
oc4 P 7整聯(lián)蛋白依賴的JY細(xì)胞對MAdCAM-Ig的附著
除了用MAdCAM-Ig (150ng/ml)代替2d VCAM-Ig, P-淋巴母細(xì)
胞細(xì)胞系的亞系JY代替Jurkat細(xì)胞，該測定與oc4 P 1測定方式相同。
每個(gè)測試化合物的IC5。值按照oc4pi整聯(lián)蛋白測定中描述的方法測定。
oc 4整聯(lián)蛋白的全血VCAM結(jié)合測定
將下列試劑加入FACS試管3jal 100mM MnCl2 (100X所需濃度)、 ljul lmg/ml抗生蛋白鏈菌素FITC(供應(yīng)者Pierce 100X所需濃度)、 2jul 500 jug/ml生物素化的hVCAM-l-mFc(50X所需濃度)、和2 ja 1 連續(xù)稀釋的50X期望最終濃度的測試化合物。將100ja 1來自健康人類 供體的肝素化的血加入每個(gè)FACS試管，然后密封并在室溫下?lián)u動(dòng)30 分鐘。室溫RT下在5分鐘內(nèi)將2ral "FACS細(xì)胞溶解液"(BD Biosciences)溶液加入試管，試管以1200 rpm的速度旋轉(zhuǎn)，并在3ml TBS中清洗2X，最后懸浮在100jul TBS中。流式細(xì)胞計(jì)在Becton Dickinson FACScan上測定能夠結(jié)合VCAM的淋巴細(xì)胞門內(nèi)細(xì)胞的百分 率(％ )。
ot5 (3 1整聯(lián)蛋白依賴的K562細(xì)胞對纖維連接蛋白的附著 37'C下，將96孔組織培養(yǎng)板用5jug/ml人血漿纖維連接蛋白 (Sigma F0895)的PBS溶液涂布2hr。清洗板(3x用PBS)，然后室溫下 在100m 1的PBS/ 1%BSA中，在搖擺平臺上密封lh。清洗(3x用PBS) 密封后的板，37。c下，在總量為200 m1含有2.5 x 105K562細(xì)胞和 10ng/ml波佛醇-12-豆蔻酸鹽-13-醋酸鹽中，存在或不存在滴定的測 試化合物，進(jìn)行檢測。培養(yǎng)時(shí)間為30分鐘。每個(gè)板按照上述ot4pi
測定中描述的方法進(jìn)行固定和染色。
otm(3 2依賴的多形核(polymorphonuclear)嗜中性粒細(xì)胞對塑
料的附著
37。C下，將96孔組織培養(yǎng)板用RPMI 1640/ 10% FCS涂布2h。將 2 x 10S新鮮分離的人靜脈多形核嗜中性粒細(xì)胞(PMN)在lOng/ml波佛 醇-12-豆蔻酸鹽-13-醋酸鹽的存在下的總量200|ul加入孔中，在存在 或不存在測試化合物下，在37。C下培養(yǎng)20min，之后在室溫下培養(yǎng) 30min。用介質(zhì)清洗板，將pH 6. 0的100 u 1約0. 1% (w/v)溴化十六 烷基三曱銨(Sigina H5882)在0. 05M磷酸鉀緩沖液中的溶液加入每個(gè)孔 中。室溫下將板在搖動(dòng)機(jī)上放置60min。用TMB測定內(nèi)源性過氧化物 酶活性如下將PMN溶解產(chǎn)物樣品與0. 22% H202 (Sigma)和50 m g/ml TMB (Boehringer Mannheim)在0. 1M醋酸鈉/檸檬酸鈉緩沖液、pH 6. 0 中的溶液混合，在630nm處測定吸光度。 a lib/ p 3依賴的人血小板聚集
人血小板聚集在Chronolog Whole Blood Lumiaggregometer上 采用阻抗聚集測定。在新鮮人靜脈血中加入0. 38% (v/v)檸檬酸三鈉 抗凝血后以220xg旋轉(zhuǎn)10min,得到人血小板富集血漿(PRP)，并稀釋 到細(xì)胞密度為自體血漿的6 x 107ml。比色皿中含有等量的PRP和過 濾的Tyrode's緩沖液(g/升:NaCl 8.0; MgCl2.H20 0. 427; CaCl2 0.2; KC10. 2; D-葡萄糖1.0; Na跳1. 0; NaH2P04.2H20 0. 065)。加入2. 5 ADP (Sigma),加或不加抑制劑后，監(jiān)測聚集作用。 ocv， 3整聯(lián)蛋白依賴的JY對玻璃粘連蛋白(vitronectin)的附
著-'
37。C下，將96孑L NUNC板用2. 5 p g/ml人玻璃粘連蛋白(Promega) 在pbs中的溶液涂布2h。清洗板(2X用pbs)，然后室溫下在100m1 PBS/1。/。BSA中，在搖擺平臺上密封lh。清洗(2X用PBS)密封后的板， 37。C下，在總量為200 |a 1含有2 x 105JY細(xì)胞和10ng/ml波佛醇-12-豆蔻酸鹽-13-醋酸鹽中，存在或不存在滴定的測試化合物，進(jìn)行檢測。 JY細(xì)胞用5 )ag/ml抗P2整聯(lián)蛋白的單克隆抗體，稱為6. 5E,預(yù)培 養(yǎng)15分鐘，防止P2依賴的非特異性結(jié)合。每個(gè)板按照上述cc4pi 測定中描述的方法固定和染色。
在上述測定中，本發(fā)明的化合物例如實(shí)施例中化合物的ICs。普遍 為a4 P 1測定中小于等于1 mM， a 4 P 7測定中小于等于1 n M。在
a整聯(lián)蛋白的其它亞群的其它鑒定性測試中，相同化合物的IC5。> 50 jaM，因此上述結(jié)果表明這些化合物對ct4整聯(lián)蛋白作用的有效性和選擇性。
權(quán)利要求
1、具有通式I的化合物，其對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽其中R1是氫、羥基或C1-6烷基；R2是氫或鹵素；n是0-5；R3是氫或鹵素；n′是0-4。
2、 權(quán)利要求l所述化合物，其中 ^是羥基或甲氧基；R2是氯；n是2;R3是氯； W是2。
3、 權(quán)利要求1或2所述化合物，其中，不對稱的碳原子為"S" -構(gòu)型。
4、 權(quán)利要求1的化合物，選自甲基-(2S)-2-[(3，5-二氯異煙酰) 氨基]-3- [2- (2， 6-二氯苯基)-6-喹啉基]丙酸酯和(2S) -2- [ (3， 5-二氯 異煙酰)氨基]-3- [2- (2， 6-二氯苯基)-6-喹啉基]丙酸。
5、 化合物(2S) -2- [ (3, 5-二氯異煙酰)氨基]-3- [2- (2, 6-二氯苯 基)-6-喹啉基]丙酸。
6、 一種藥物組合物，包括作為活性組分的治療有效量的權(quán)利要 求1至5任一項(xiàng)所述的化合物，以及藥學(xué)上可接受的輔料、稀釋劑或載 體。
7、 權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的化合物做為藥物的用途。
8、 權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的化合物在制備藥物中的用途。
9、 權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的化合物在制備治療oc4 P 1和/ 或ot4 P 7依賴性炎癥或醫(yī)學(xué)病癥的藥物中的用途。
10、 權(quán)利要求8或9的用途，其是制備治療哮喘，過敏性鼻炎， 鼻竇炎，結(jié)膜炎，食物過敏，炎性皮膚疾病包括皮炎、牛皮痺、蕁麻滲、 搔癢癥和濕滲，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，炎性腸道疾病包括克隆氏病和潰瘍性結(jié) 腸炎，多發(fā)性硬化癥和其他自身免疫疾病、急性髓性白血病、移植術(shù)和 動(dòng)脈粥樣硬化的藥物中的用途。
11、 權(quán)利要求8或9的用途，其是制備用于a4相關(guān)癌癥的藥物中 的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及2，6喹啉基衍生物，其制備工藝、包含其的藥物組合物和作為藥物的用途。例如，本發(fā)明的化合物可用于治療哮喘，過敏性鼻炎，鼻竇炎，結(jié)膜炎，食物過敏，皮膚炎性疾病包括皮炎、牛皮癬、蕁麻疹、搔癢和濕疹，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，炎性腸道疾病包括克隆氏病和潰瘍性結(jié)腸炎、多發(fā)性硬化癥和其他自身免疫疾病、急性髓性白血病、移植術(shù)和動(dòng)脈粥樣硬化。
文檔編號C07D401/00GK101193883SQ200680020318
公開日2008年6月4日 申請日期2006年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月9日
發(fā)明者B·佩里 申請人:Ucb醫(yī)藥有限公司