專利名稱：作為促卵泡激素受體(fsh-r)拮抗劑的吡咯并苯并二氮雜以及雜環(huán)甲酰胺衍生物的制作方法
本申請(qǐng)要求2005年5月12日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)第60/680,235號(hào)優(yōu)先權(quán)的權(quán)益，其通過整體引用而并入本文。
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及對(duì)FSH受體有拮抗劑活性的吡咯并苯并二氮雜及其衍生物，以及它們作為避孕藥的用途。
女人的生育取決于女性生殖系統(tǒng)的幾個(gè)隔室的動(dòng)態(tài)相互作用。下丘腦-垂體-性腺軸協(xié)調(diào)一系列影響卵巢和子宮-子宮內(nèi)膜隔室的事件，所述隔室導(dǎo)致成熟卵子生成、排卵以及最后受精所需的適當(dāng)條件。具體地說，下丘腦釋放出來的促黃體生成激素釋放激素(LHRH)引起促性腺激素、黃體化激素(LH)和促卵泡激素(FSH)由垂體釋放。這些激素通過促使粒狀和膜細(xì)胞增殖和分化，直接作用于卵巢以促進(jìn)選中的卵泡的發(fā)展。FSH刺激雄激素芳構(gòu)化為雌激素，并增加膜細(xì)胞內(nèi)LH受體的表達(dá)。卵泡進(jìn)而分泌類固醇(雌二醇、黃體酮)和肽(抑制素、活化素)。在月經(jīng)周期的卵泡期，雌二醇和抑制素水平遞增，直至排卵。抑制素減少垂體腺的FSH分泌，同時(shí)雌二醇作用于下丘腦和垂體，引起中期LH峰，由此導(dǎo)致排卵。后來，排卵后，破裂的卵泡形成黃體，黃體生成黃體酮。卵巢激素又通過經(jīng)典的長(zhǎng)負(fù)反饋機(jī)制，調(diào)節(jié)促性腺激素的分泌。這些控制機(jī)制的闡明提供了開發(fā)有效策略以控制生育的機(jī)會(huì)，包括加強(qiáng)生育和避孕。至于FSH作用的近期回顧，參見“FSH action and intraovarian regulation(FSH作用與卵巢內(nèi)調(diào)節(jié))”，B.C.J.M.Fauser編輯，Parthenon PublishingGroup，第6卷，1997以及A.J.Hsueh、T.Bicsak、X-C.Ja、K.D.Dahl、B.C.J.M.Fauser、A.B.Galway、N.Czwkala、S.Pavlou、H.Pakoff、J.Keene、I.Boime，“Granulosa Cells as Hormone TargetsThe Role ofBiologically Active Follicle-Stimulating Hormone in Reproduction(粒細(xì)胞作為激素靶點(diǎn)生物活性促卵泡激素在生育中的作用)”，Rec.Prog.Horm.Res.45，209-227，1989。
目前的激素避孕方法本質(zhì)上是甾體的(黃體酮和雌激素)，調(diào)節(jié)促性腺激素分泌的長(zhǎng)反饋抑制，并影響外周機(jī)制，例如精子移動(dòng)和受精。開發(fā)FSH(FSH-R)受體特異性拮抗劑，將提供供選的激素避孕方法。這種拮抗劑會(huì)阻礙FSH-介導(dǎo)的卵泡發(fā)展，導(dǎo)致排卵阻塞，由此產(chǎn)生預(yù)期的避孕效果。引起對(duì)抗性卵巢綜合癥(導(dǎo)致婦女不孕)的機(jī)制提供了對(duì)這種方法有效性的支持。這些婦女的不孕是非功能性FSH受體導(dǎo)致的(K.Aittomaki、J.L.D.Lucena、P.Pakarinen、P.Sistonen、J.Tapainainnen、J.Gromoll、R.Kashikari、E.-M.Sankila、H.Lehvaslaiho、A.R.Engel、E.Nieschlag、I.Huhtaniemi、A.de IaChapelle“Mutations in the Follicle-Stimulating Hormone Receptor GeneCauses Hereditary Hypergonadotropic Ovarian Failure(促卵泡激素受體基因突變導(dǎo)致遺傳的高促性腺激素性卵巢衰竭)”Cell，82，959-968，1995)。這種避孕方法也可適用于男人，因?yàn)橄忍煨阅行圆辉酗@得與FSH結(jié)合位置的減少有關(guān)。此外，選擇性FSH缺乏的男人是具有正常睪丸激素水平的寡精子癥或無精子癥患者，并呈現(xiàn)正常的男性第二性征(G.Lindstedt、E.Nystrom、C. Matthews、I.Ernest、P.O.Janson、K.Chattarjee，Clin.Lab.Med.36，664，1998)。因此，具有口服活性的低分子量FSH拮抗劑可以提供通用的避孕新方法。可以預(yù)期這種拮抗劑妨礙卵泡發(fā)展，從而妨礙排卵，同時(shí)保持足夠的雌激素產(chǎn)生和對(duì)骨質(zhì)量的有益作用。
通過將激素結(jié)合到只在卵巢內(nèi)表達(dá)的特異性跨膜G蛋白偶聯(lián)受體，來介導(dǎo)FSH作用，致使激活腺嘌呤環(huán)化酶系統(tǒng)并提高第二信使cAMP的細(xì)胞內(nèi)水平(A.Mukherjee、O.K.Park-Sarge、K.Mayo，Endocrinology，137，3234(1996))。
發(fā)明概述 本發(fā)明的一些實(shí)施方式包括式I化合物
或其藥學(xué)上可接受的鹽， 其中 R1和R2獨(dú)立選自氫、(C1-C6)烷基、鹵素、氰基、三氟甲基、羥基、(C1-C6)烷氧基、-OCF3、羧基、(C1-C6烷氧基)羰基、-CONH2、-CONH[(C1-C6)烷基]、-CON[(C1-C6)烷基]2、氨基、(C1-C6)烷基氨基或-NHCO[(C1-C6)烷基]； R3是選自氫、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、羥基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、-C(O)(C1-C6)烷基或鹵素的取代基； B為
其中Q為
其中R5、R6、R7、R8、R9和R10獨(dú)立選自氫、烷基、(C1-C6)烷基、烷氧基、(C1-C6)烷氧基、羥基烷基、羥基(C1-C6)烷基、烷氧基烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基、(C2-C7)酰氧基(C1-C6)烷基、(C1-C6烷基)羰基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、(C3-C8)環(huán)烷基、甲?；?、(C3-C8)環(huán)烷基羰基、羧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C3-C8環(huán)烷基)氧基羰基、芳基(C1-C6)烷氧基羰基、氨基甲?；?O-CH2-CH＝CH2、被1至3個(gè)鹵素原子取代的(C1-C6)烷基、三鹵代甲基、三氟甲基、鹵素、OCF3、烷硫基、(C1-C6)烷硫基、-C(O)烷基、任選被烷基取代的-C(O)芳基；羥基、-CH(OH)烷基、-CH(烷氧基)烷基、硝基、-SO2烷基、(C1-C6)烷基磺?；被酋；?、(C1-C6)烷基氨基磺?；?、-SO2NHR11、-SO2N(R11)2、-OC(O)N[(C1-C6)烷基]2、-CONH[(C1-C6)烷基]、-CON[(C1-C6)烷基]2、-(CH2)PCN、 (C1-C6)烷基氨基、二-(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)烷基二-(C1-C6)烷基氨基、-(CH2)PNR13R14、-(CH2)PCONR13R14、-(CH2)PCOOR12、-CH＝NOH、-CH＝NO-(C1-C6)烷基、三氟甲基硫基、

或
R11和R12各獨(dú)立為氫、C3-C8環(huán)烷基或(C1-C6)烷基； R13和R14各獨(dú)立為氫、C3-C8環(huán)烷基或(C1-C6)烷基； 或者R13和R14可以與其連接的氮一起形成任選包含O、S或N的4至6元飽和環(huán)； P為0或1； R為

基團(tuán)； R15為氫或(C1-C6)烷基； Z具有式-L-M； L具有式
其中t為1至2的整數(shù)； R16選自氫或(C1-C6)烷基， M選自
其中R17和R18為任選取代的芳基； R19、R20、R21和R22各自獨(dú)立為(C1-C6)烷基； R23為烷基、C1-C6烷基或任選取代的(C6-C20)芳烷基。
本發(fā)明的其它實(shí)施方式提供了制備這些化合物或其藥學(xué)上可接受鹽的方法。
通過閱讀本說明書和權(quán)利要求書的其余部分，本發(fā)明的其它實(shí)施方式對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員將是顯而易見的。
發(fā)明詳述 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了式(I)化合物
或其藥學(xué)上可接受的鹽， 其中 R1和R2獨(dú)立選自氫、(C1-C6)烷基、鹵素、氰基、三氟甲基、羥基、(C1-C6)烷氧基、-OCF3、羧基、(C1-C6烷氧基)羰基、-CONH2、-CONH[(C1-C6)烷基]、-CON[(C1-C6)烷基]2、氨基、(C1-C6)烷基氨基或-NHCO[(C1-C6)烷基]； R3選自氫、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、羥基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、-C(O)(C1-C6)烷基或鹵素； B為
其中Q為
其中R5、R6、R7、R8、R9和R10獨(dú)立選自氫、烷基、(C1-C6)烷基、烷氧基、(C1-C6)烷氧基、羥基烷基、羥基(C1-C6)烷基、烷氧基烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基、(C2-C7)酰氧基(C1-C6)烷基、(C1-C6烷基)羰基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、(C3-C8)環(huán)烷基、甲?；?、(C3-C8)環(huán)烷基羰基、羧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C3-C8環(huán)烷基)氧基羰基、芳基(C1-C6)烷氧基羰基、氨基甲酰基、-O-CH2-CH＝CH2、被1至3個(gè)鹵素原子取代的(C1-C6)烷基、三鹵代甲基、三氟甲基、鹵素、OCF3、烷硫基、(C1-C6)烷硫基、-C(O)烷基、任選被烷基取代的-C(O)芳基；羥基、-CH(OH)烷基、-CH(烷氧基)烷基、硝基、-SO2烷基、(C1-C6)烷基磺?；?、氨基磺?；?C1-C6)烷基氨基磺?；?、-SO2NHR11、-SO2N(R11)2、-OC(O)N[(C1-C6)烷基]2、-CONH[(C1-C6)烷基]、-CON[(C1-C6)烷基]2、-(CH2)PCN、(C1-C6)烷基氨基、二-(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)烷基二-(C1-C6)烷基氨基、-(CH2)PNR13R14、-(CH2)PCONR13R14、-(CH2)PCOOR12、-CH＝NOH、-CH＝NO-(C1-C6)烷基、三氟甲基硫基、

或
R11和R12各獨(dú)立為氫、C3-C8環(huán)烷基或(C1-C6)烷基； R13和R14各獨(dú)立為氫、C3-C8環(huán)烷基或(C1-C6)烷基； 或者R13和R14可以與其連接的氮一起形成任選包含O、S或N的4至6元飽和環(huán)； P為0或1； R為

基團(tuán)； R15為氫或(C1-C6)烷基； Z具有式-L-M； L具有式
其中t為1至2的整數(shù)； R16選自氫或(C1-C6)烷基， M選自
其中R17和R18為任選取代的芳基； R19、R20、R21和R22各自獨(dú)立為(C1-C6)烷基； R23為烷基、C1-C6烷基或任選取代的(C6-C20)芳烷基。
這里所用?；?，是指R-C(＝O)-，其中R是含1至6個(gè)碳原子的烷基。例如，C2-C7?；侵窻為含1至6個(gè)碳原子的烷基的R-C(＝O)-。一種適宜的?；且阴；?br> 這里所用烯基，是指含1個(gè)或多個(gè)C＝C的烴基。烯基的例子包括但不限于，乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、丁二烯基、戊二烯基和己二烯基。在一些實(shí)施方式中，烯基可以被至多4個(gè)取代基取代，如下所述。所述烯基適宜為2至6個(gè)碳的基團(tuán)。
這里所用烷氧基，是指-O-烷基。烷氧基的例子包括甲氧基、乙氧基、丙氧基(如正-丙氧基和異丙氧基)、叔-丁氧基等。烷氧基可以包含1至約20個(gè)、1至約10個(gè)、1至約8個(gè)、1至約6個(gè)、1至約4個(gè)，或1至約3個(gè)碳原子。在一些實(shí)施方式中，烷氧基可以被至多4個(gè)取代基取代，如下所述。
烷氧基烷基，單獨(dú)使用或與其它術(shù)語聯(lián)用，是指前面所述的烷氧基進(jìn)一步與未取代的(C1-C10)直鏈烴或未取代的(C2-C10)支鏈烴以共價(jià)鍵結(jié)合。烷氧基烷基的例子包括但不限于，例如但不限于以下的化學(xué)基團(tuán)甲氧基甲基、-CH2CH(CH3)OCH2CH3以及同系物、異構(gòu)體等。在某些實(shí)施方式中，所述烷氧基烷基為(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基或(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基。
烷氧基羰基，單獨(dú)使用或與其它術(shù)語聯(lián)用，除另有說明外，這里是指前面所述的烷氧基進(jìn)一步與羰基形成酯。烷氧基羰基的例子包括但不限于，例如以下的化學(xué)基團(tuán)，甲氧基羰基、乙氧基羰基、異丙氧基羰基、仲-丁氧基羰基、叔-丁氧基羰基、癸氧基羰基以及同系物、異構(gòu)體等。
烷基是指直鏈或支鏈的飽和烴基。烷基的例子包括但不限于，甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(如正-丙基和異丙基)、丁基(如正-丁基、異丁基、仲-丁基、叔-丁基)、戊基(如正-戊基、異戊基、新戊基)等。烷基可以包含1至約20個(gè)、1至約10個(gè)、1至約8個(gè)、1至約6個(gè)、1至約4個(gè)，或1至約3個(gè)碳原子。在一些實(shí)施方式中，烷基可以被至多4個(gè)取代基取代，如下所述。低級(jí)烷基是指含至多6個(gè)碳原子的烷基。
烷基氨基，單獨(dú)使用或與其它術(shù)語聯(lián)用，是指具有一個(gè)烷基的部分，其中所述烷基是未取代(C1-C6)直鏈的之前定義的烷基，或者未取代的(C3-C8)的之前定義的環(huán)烷基。烷基氨基的例子包括但不限于例如以下的化學(xué)基團(tuán)，-NH(CH3)、-NH(CH2CH3)、-NH-環(huán)戊基以及同系物等。
這里所用烷基氨基磺酰基，除非另作說明，是指前面所述的烷基氨基部分進(jìn)一步與磺酰基鍵合。
這里所用烷基磺酰基，是指R-S(O)2-，其中R是前面所述的烷基。
這里所用炔基，是指含一個(gè)或多個(gè)C≡C的烴基。炔基的例子包括但不限于，乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基等。在一些實(shí)施方式中，炔基可以被至多4個(gè)取代基取代，如下所述。所述炔基適宜為2至6個(gè)碳原子的炔基。
這里所用芳酰基，是指Ar-C(＝O)-基，其中Ar為如下所述的芳基。例如，C6至C14芳酰基是指Ar為芳族的6至14元或5至13元碳環(huán)的Ar-C(＝O)-基。
這里所用芳基，是指包括單環(huán)或多環(huán)芳烴的芳族碳環(huán)基，例如苯基、1-萘基、2-萘基、蒽基、菲基等。在一些實(shí)施方式中，芳基有5至約20個(gè)碳原子。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，芳基是任選包含至多4個(gè)，優(yōu)選至多2個(gè)取代基的苯基或萘基，如下所述。所述芳基適宜為6至14個(gè)碳原子的基團(tuán)。
這里所用芳族烷基或芳烷基，是指-烷基-芳基，其中芳基如前所述。優(yōu)選地，芳烷基的烷基部分是低級(jí)烷基，也就是C1-C6烷基，更優(yōu)選C1-C3烷基。芳烷基的例子包括但不限于，苯甲基和萘基甲基。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，芳烷基可以任選被至多4個(gè)，優(yōu)選至多2個(gè)取代基取代。
這里所用芳氧基，是指-O-芳基，其中芳基如前所述，例如但不限于，苯氧基。
這里所用氨基甲?；侵?C(＝O)N＜基。
羰基，單獨(dú)使用或與其它術(shù)語聯(lián)用，這里是指，除非另作說明，二價(jià)的一個(gè)碳進(jìn)一步與氧原子以雙鍵鍵合。例子如
這里所用羧基，是指-COOH。
這里所用氰基，是指-CN。
這里所用環(huán)烷基，是指包括環(huán)化的烷基、烯基和炔基的非芳族碳環(huán)基。環(huán)烷基可以是單環(huán)(如環(huán)己基)或多環(huán)(如2、3或4個(gè)稠合環(huán))的環(huán)系統(tǒng)。環(huán)烷基的例子包含但不限于，環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、環(huán)己二烯基、環(huán)庚三烯基、降冰片基(norbornyl)、降蒎烷基(norpinyl)、降蒈烯基(norcarenyl)、金剛烷基(adamantyl)等。環(huán)烷基的定義還包括一個(gè)或多個(gè)芳族環(huán)與環(huán)烷基環(huán)稠合(也就是有共用鍵)的基團(tuán)，例如環(huán)戊烷的苯并衍生物(茚滿基)、環(huán)己烷的苯并衍生物(四氫萘基)等。
這里所用環(huán)烷基烷基，是指式-烷基-環(huán)烷基，例如環(huán)丙基甲基。所述烷基適宜為如上所述的C1至C6烷基，且所述環(huán)烷基如上所述。
這里所用環(huán)烷基羰基，是指式-羰基-環(huán)烷基，例如環(huán)己基羰基。所述環(huán)烷基如上所述。
二烷基氨基，單獨(dú)使用或與其它術(shù)語聯(lián)用，除非另作說明，是具有兩個(gè)獨(dú)立烷基的部分，其中烷基是未取代(C1-C6)直鏈的之前定義的烷基，或未取代(C3-C8)的之前定義的環(huán)烷基。這兩個(gè)基團(tuán)可以連接在一起形成未取代的(C1-C6)-亞烷基-基團(tuán)。二烷基氨基的例子包括但不限于例如以下的化學(xué)基團(tuán)，-N(CH3)2、-N(CH2CH3)2、-NCH3(CH2CH3)、

以及同系物等。
二烷基氨基烷基，單獨(dú)使用或與其它術(shù)語聯(lián)用，除非另作說明，是如前所述的二烷基氨基進(jìn)一步與含1至6個(gè)碳原子的直鏈烷基以共價(jià)鍵結(jié)合。二烷基氨基烷基的例子包括但不限于例如以下的化學(xué)基團(tuán)，-CH2N(CH3)2、-CH2CH2N(CH2CH3)2、-CH2CH2CH2NCH3(CH2CH3)，以及同系物等。
鹵代或鹵素包括氟、氯、溴和碘。
Hnig′s堿是N，N-二異丙基乙胺，這里也稱為i-Pr2NEt。
這里所用羥基，是指-OH。
羥基烷基，單獨(dú)使用或與其它術(shù)語聯(lián)用，這里是指，除非另作說明，末端被羥基取代的(C1-C10)直鏈烴，例如(C1-C6)烷基。羥基烷基的例子包括但不限于例如以下的化學(xué)基團(tuán)，-CH2OH、-CH2CH2OH、-CH2CH2CH2OH，和更高級(jí)的同系物。
硝基，單獨(dú)使用或與其它術(shù)語聯(lián)用，這里是指-NO2。
這里所用被取代，是指例如含1至約5個(gè)取代基，且更優(yōu)選1至約3個(gè)取代基的芳基或雜芳基的基團(tuán)，所述取代基獨(dú)立選自鹵素原子、氰基、硝基、羥基、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。優(yōu)選的取代基是鹵素原子、羥基或C1-C6烷基。
烷硫基，單獨(dú)使用或與其它術(shù)語聯(lián)用，這里是指硫與烷基(例如如上所述的(C1-C6)烷基)以共價(jià)鍵結(jié)合。
在本說明書的不同地方，本發(fā)明化合物的取代基以組或范圍的方式公開。特別地，期望本發(fā)明包括這些組和范圍的成員的每個(gè)單獨(dú)的子組。例如，術(shù)語C1-C6烷基特別意指單獨(dú)公開甲基、乙基、丙基、異丙基、正-丁基、仲-丁基、異丁基等。
一些實(shí)施方式提供了這種化合物，其中R15和R16各為氫；且t為1。還有其它實(shí)施方式提供了化合物，其中M選自
在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了這種化合物，其中M選自
在一些實(shí)施方式中，Q為

因此，B的結(jié)構(gòu)式為
在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了化合物，其中R1、R2和R3各為氫。
在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了式I化合物，其結(jié)構(gòu)式為
或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些這種實(shí)施方式中，R5選自H或C1-C3烷基。在一些其它實(shí)施方式中，R8和R9獨(dú)立選自H、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基。
在其它這種實(shí)施方式中，R5選自H或C1-C3烷基；且R8和R9獨(dú)立選自H、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基。在一些其它實(shí)施方式中，M為
其中，R17為任選取代的芳基。在一些實(shí)施方式中，R17為任選被1至3個(gè)選自C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和鹵素的取代基取代的苯基。在一些實(shí)施方式中，C1-C3烷氧基是甲氧基。
在一些實(shí)施方式中，R5選自H或C1-C3烷基；且R8和R9獨(dú)立選自H、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基，且M為
其中，R18為任選取代的芳基。在一些實(shí)施方式中，R18為任選被1至3個(gè)選自C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和鹵素的取代基取代的苯基。在一些實(shí)施方式中，所述鹵素為氯。
在一些實(shí)施方式中，R5選自H或C1-C3烷基；且R8和R9獨(dú)立選自H、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基，且 M為
其中，R19為C1-C6烷基，優(yōu)選甲基。
在一些實(shí)施方式中，R5選自H或C1-C3烷基；且R8和R9獨(dú)立選自H、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基，且M為
其中，R20為C1-C6烷基，優(yōu)選甲基。
在一些實(shí)施方式中，R5選自H或C1-C3烷基；且R8和R9獨(dú)立選自H、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基，且 M為
其中，R21和R22各獨(dú)立為C1-C6烷基。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了這種化合物，其中R21與R22相同。在一些實(shí)施方式中，R21和R22各為甲基。
在一些實(shí)施方式中，R5選自H或C1-C3烷基；且R8和R9獨(dú)立選自H、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基，且M為
在一些實(shí)施方式中，R5選自H和C1-C3烷基；且R8和R9獨(dú)立選自H、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基，且M為
其中，R23為任選取代的C6-C20芳烷基，優(yōu)選苯甲基。
在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了權(quán)利要求1的化合物，其中M為
其中，R17為任選取代的芳基。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明還提供了這種化合物，其中R17為任選被1至3個(gè)選自C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和鹵素的取代基取代的苯基。在一些實(shí)施方式中，所述R17的C1-C3烷氧基為甲氧基。
在一些這種實(shí)施方式中，M為
其中，R18為任選取代的芳基。在一些這種實(shí)施方式中，R18為任選被1至3個(gè)選自C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和鹵素(優(yōu)選氯)的取代基取代的苯基。
在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了式I化合物，及其藥學(xué)上可接受的鹽，M為
其中，R19為C1-C6烷基，優(yōu)選甲基。
在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了式I化合物，及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中M為
其中，R20為C1-C6烷基，優(yōu)選甲基。
在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了式I化合物，及其藥學(xué)上可接受的鹽，M為
其中，R21和R22各自獨(dú)立為C1-C6烷基。在一些實(shí)施方式中，R21與R22相同。在一些這種實(shí)施方式中，R21和R22各為甲基。
在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了式I化合物，及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中M為
在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了式I化合物，及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中M為
其中，R23為任選取代的C7-C20芳烷基，優(yōu)選苯甲基。
在一些實(shí)施方式中，Q為

且因此，B的結(jié)構(gòu)式為
本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員通過閱讀本說明書和權(quán)利要求書將很容易理解其它實(shí)施方式。
式I的示例性化合物包括但不限于下表中這些



實(shí)施本技術(shù)的人員會(huì)很容易理解，一些本發(fā)明化合物根據(jù)各種取代基定義，可以包含一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱中心，并且可以產(chǎn)生對(duì)映異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體。本發(fā)明包括所有的立體異構(gòu)體，包括具有所述活性的單獨(dú)非對(duì)映異構(gòu)體和拆分的對(duì)映體純R和S立體異構(gòu)體；以及外消旋體和R和S立體異構(gòu)體的所有其它混合物，及其藥學(xué)上可接受的鹽。通過本技術(shù)領(lǐng)域技術(shù)人員公知的標(biāo)準(zhǔn)程序可以獲得純的光學(xué)異構(gòu)體。也可被理解的是，本發(fā)明包括所有可能的具有所述活性的區(qū)域異構(gòu)體(regioisomers)、E-Z異構(gòu)體、內(nèi)-外異構(gòu)體，及其混合物。通過本技術(shù)領(lǐng)域技術(shù)人員公知的標(biāo)準(zhǔn)程序可以獲得這種純的異構(gòu)體。
實(shí)施本技術(shù)的人員會(huì)很容易理解，一些本發(fā)明化合物根據(jù)各種取代基定義，可以由于位阻旋轉(zhuǎn)而為手性，并且產(chǎn)生阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體，通過本技術(shù)領(lǐng)域技術(shù)人員公知的標(biāo)準(zhǔn)程序可以拆分并獲得這種純的異構(gòu)體。本發(fā)明也包括本發(fā)明化合物的所有多型體和水合物。
本發(fā)明還包括式I化合物藥學(xué)上可接受的鹽。“藥學(xué)上可接受的鹽”是指式I化合物與藥學(xué)上可接受的堿加成而得的相應(yīng)的鹽。“藥學(xué)上可接受的”是指一種物質(zhì)從毒理學(xué)角度來看在藥學(xué)應(yīng)用中是可接受的，并且不會(huì)與活性成分發(fā)生不利的相互作用。藥學(xué)上可接受的鹽，包括單鹽和雙鹽，包括但不限于衍生自有機(jī)酸或無機(jī)酸的鹽，所述有機(jī)酸或無機(jī)酸例如但不限于乙酸、乳酸、檸檬酸、肉桂酸、酒石酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、丙二酸、扁桃酸、蘋果酸、草酸、丙酸、鹽酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、乙醇酸、丙酮酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、水楊酸、苯甲酸以及類似公知可接受的酸。
本發(fā)明的其它實(shí)施方式提供了制備上述式I化合物或其藥學(xué)上可接受鹽的方法，其中所述方法包括使式(2)三氯乙酰化合物
其中，R1、R2、R3和B如上所述。
與式(3) RH (3) 適當(dāng)取代的伯胺或仲胺，其中R如上所述，在足以生成式(I)化合物的條件下進(jìn)行反應(yīng)。在一些實(shí)施方式中，所述反應(yīng)在1，4-二烷、二甲基亞砜或兩者的存在下進(jìn)行。在一些實(shí)施方式中，所述反應(yīng)在有機(jī)堿的存在下進(jìn)行。在一些實(shí)施方式中，所述有機(jī)堿是叔胺，優(yōu)選三乙胺或N，N-二異丙基乙胺。在一些實(shí)施方式中，所述反應(yīng)在例如但不限于乙腈的溶劑中進(jìn)行。在有溶劑存在時(shí)，所述反應(yīng)在約室溫至該溶劑回流溫度的溫度下進(jìn)行。
在一些實(shí)施方式中，式(2)三氯乙酰化合物用以下方法制備使式(1)的三環(huán)氮雜
其中，R1、R2、R3和B如上所述， 與全鹵代烷酰鹵，在足以生成預(yù)期式(2)三氯乙酰化合物的條件下進(jìn)行反應(yīng)。在一些實(shí)施方式中，所述全鹵代烷酰鹵是三氯乙酰氯。在一些實(shí)施方式中，所述反應(yīng)在有機(jī)堿(例如但不限于N，N-二異丙基乙胺)存在下在疏質(zhì)子有機(jī)溶劑中進(jìn)行。所述有機(jī)溶劑可以是任何適當(dāng)?shù)氖栀|(zhì)子有機(jī)溶劑，例如但不限于二氯甲烷或1，4-二烷。在一些這種實(shí)施方式中，所述反應(yīng)在約-10℃至約室溫的溫度下進(jìn)行。
本發(fā)明一些實(shí)施方式提供了制備式I化合物的方法，所述方法包括使式(4)化合物
其中，R1、R2、R3和B如上所述， 其中W為OH或鹵素，與式(3) RH (3) 適當(dāng)取代的伯胺或仲胺，其中R如上所述，在足以生成權(quán)利要求1的式(I)化合物的條件下偶合。在一些實(shí)施方式中，W為Cl或Br。在一些實(shí)施方式中，式(4)酰鹵與式(3)取代胺在叔胺存在下在疏質(zhì)子溶劑中進(jìn)行偶合。適當(dāng)?shù)氖栀|(zhì)子溶劑包括但不限于，二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺和四氫呋喃。示例性的叔胺是N，N-二異丙基乙胺。在一些實(shí)施方式中，式(4)酰鹵與式(3)取代胺在約室溫至所述溶劑回流溫度的溫度下進(jìn)行偶合。
在其它實(shí)施方式中，W為OH。
酰胺化 在一些實(shí)施方式中，所述偶合包括在至少一種活化試劑或偶合試劑的存在下，使羧酸(4)與式(3)的伯胺或仲胺在足以生成式(I)化合物的條件下進(jìn)行反應(yīng)。適當(dāng)?shù)幕罨噭┌ǖ幌抻?，在疏質(zhì)子溶劑中的三光氣，在1-羥基苯并三唑存在下的N，N-二環(huán)己基碳二亞胺、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽；或者在疏質(zhì)子溶劑中的N，N’-羰基二咪唑。在一些這種實(shí)施方式中，所述反應(yīng)在有機(jī)堿(例如但不限于叔胺)存在下進(jìn)行。所述有機(jī)堿可以是但不限于，N，N-二異丙基乙胺。
在一些實(shí)施方式中，所述反應(yīng)在催化劑(例如但不限于4-(二甲基氨基)吡啶)存在下進(jìn)行。
在一些實(shí)施方式中，所述偶合試劑選自羥基苯并三唑四甲基脲六氟磷酸鹽(hydroxybenzotriazole tetramethyluroniumhexafluorophosphate)、疊氮化磷酸二苯酯(diphenylphosphoryl azide)、二乙基氰基膦酸酯(diethylcyanophosphonate)或苯并三唑-1-基-氧基-三-(二甲氨基)轔六氟磷酸鹽。
?；? 本發(fā)明一些實(shí)施方式提供了制備式I化合物的方法，所述方法包括使式(4)化合物
其中，R1、R2、R3和B如上所述， 其中W為Cl或Br，是通過轉(zhuǎn)化其中W為OH的式4化合物而制備的，與式(3) RH (3) 適當(dāng)取代的伯胺或仲胺，其中R如上所述，在足以生成式(I)化合物的條件下進(jìn)行偶合。在一些這種實(shí)施方式中，所述轉(zhuǎn)化步驟包括使其中W為OH的式4化合物與亞硫酰鹵或乙二酰鹵反應(yīng)。在一些實(shí)施方式中，在至少一種無機(jī)堿(例如但不限于碳酸鉀)和有機(jī)堿存在下在疏質(zhì)子溶劑中進(jìn)行轉(zhuǎn)化。在一些實(shí)施方式中，所述有機(jī)堿包括但不限于吡啶、4-(二甲氨基)吡啶，或者叔胺，例如但不限于三乙胺。適當(dāng)?shù)氖栀|(zhì)子溶劑包括但不限于二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺和四氫呋喃。在一些實(shí)施方式中，轉(zhuǎn)化在約-5℃至約50℃的溫度下進(jìn)行。
本發(fā)明的一些實(shí)施方式提供了制備式I化合物的方法，所述方法包括在足以生成式(I)化合物的條件下，使式(1)三環(huán)二氮雜
其中，R1、R2、R3和B如上所述， 與雙光氣和式(3) RH (3) 的伯胺或仲胺，其中R如上所述，在疏質(zhì)子溶劑中進(jìn)行反應(yīng)。任何適當(dāng)?shù)氖栀|(zhì)子溶劑可以使用，包括但不限于，二氯甲烷。在一些實(shí)施方式中，所述反應(yīng)在有機(jī)堿(例如但不限于三乙胺)存在下進(jìn)行。
化合物制備的一般合成流程 本發(fā)明化合物可以依照下述一般方法中的一種或多種來制備。
通式(I)化合物，其中B為

且 Q為

或

可以方便地如流程I所示制備。
流程I
依照上述優(yōu)選方法，在有機(jī)堿(例如但不限于N，N-二異丙基乙胺)(Hünig′s堿)的存在下，在約-10℃至約室溫的溫度下，式(1)三環(huán)氮雜，其中R1、R2、R3和B如前所述，與全鹵代烷酰鹵，優(yōu)選三氯乙酰氯，在疏質(zhì)子有機(jī)溶劑(例如但不限于，二氯甲烷或1，4-二烷)中進(jìn)行反應(yīng)，獲得所需的式(2)三氯乙酰中間體。然后，式(2)中間體與式(3)適當(dāng)取代的伯胺或仲胺，在回流的1，4-二烷中進(jìn)行反應(yīng)，或者與二甲基亞砜任選在有機(jī)堿(例如三乙胺)存在下，在例如但不限于乙腈的溶劑中，在約室溫至該溶劑回流溫度的溫度下，進(jìn)行反應(yīng)，獲得所需的式(1)化合物，其中R1、R2、R3和B如前所述。
另一優(yōu)選的方法如下流程II所示。
流程II
依照上述優(yōu)選方法，在約-10℃至約室溫的溫度下，用堿水(例如但不限于氫氧化鈉)在有機(jī)溶劑(例如但不限于四氫呋喃或丙酮)中水解式(2)三氯乙酰中間體，獲得式(4)中間體酸。隨后與式(3)的伯胺或仲胺的偶合所需的羧酸(4)的活化可以通過幾種途徑實(shí)現(xiàn)。因此，可以通過在約-5℃至約50℃的溫度下，在疏質(zhì)子溶劑(例如但不限于二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺或四氫呋喃)中與亞硫酰氯、亞硫酰溴、乙二酰氯或乙二酰溴或本技術(shù)領(lǐng)域公知的類似試劑反應(yīng)，將式(4)中間體轉(zhuǎn)化為酰鹵，優(yōu)選式(5)的酰氯或酰溴，其中J為COCl或COBr，獲得中間體?；难苌?5)，該反應(yīng)可以在不存在其他物質(zhì)時(shí)(neat)，或者在無機(jī)堿(例如但不限于碳酸鉀)存在下，或者在有機(jī)堿(例如但不限于吡啶、4-(二甲基氨基)吡啶或叔胺(例如但不限于三乙胺))存在下進(jìn)行。然后，在化學(xué)計(jì)量Hünig′s堿的存在下，在疏質(zhì)子溶劑(例如但不限于二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺或四氫呋喃)中，在約室溫至溶劑回流溫度的溫度下，式(5)?；然蝓；?，其中J為COCl或COBr，與式(3)適當(dāng)取代的伯胺或仲胺，進(jìn)行偶合，獲得所需的式(I)化合物，其中R1、R2、R3和B如前所述。
或者，?；镔|(zhì)可以是相應(yīng)羧酸的混合酸酐，例如但不限于，依照Inanaga等人在Bull.Chem.Soc.Jpn.52，1989(1979)中的方法，用2，4，6-三氯苯甲酰氯在疏質(zhì)子有機(jī)溶劑(例如但不限于二氯甲烷)中，處理式(4)所述酸而制得的酸酐。在疏質(zhì)子溶劑(例如但不限于二氯甲烷)中，在約室溫至溶劑回流溫度的溫度下，用式(3)適當(dāng)取代的伯胺或仲胺處理式(5)所述混合酸酐，獲得所需的式(I)化合物，其中R1、R2、R3和B如前所述。
或者，通過在疏質(zhì)子溶劑(例如但不限于二氯甲烷)中，用三光氣處理所述酸，然后在約-10℃至約室溫的溫度下，使活化中間體與式(3)適當(dāng)取代的伯胺或仲胺，在有機(jī)堿(例如但不限于Hünig′s堿)存在下進(jìn)行反應(yīng)，以有效地實(shí)現(xiàn)式(4)羧酸的酰胺化。
制備本發(fā)明式(I)化合物(其中R1、R2、R3和B如前所述)的另一優(yōu)選方法包括，在1-羥基苯并三唑的存在下，用活化試劑，例如但不限于N，N-二環(huán)己基碳二亞胺或1-乙基-3-(3-二甲基氨基-丙基)碳二亞胺鹽酸鹽，處理式(4)的酸，然后在約-10℃至約室溫的溫度下，在疏質(zhì)子溶劑(例如但不限于二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺或四氫呋喃)中，優(yōu)選在有機(jī)堿(例如但不限于Hünig′s堿)和催化量4-(二甲基氨基)吡啶的存在下，使活化的中間體與式(3)適當(dāng)取代的伯胺或仲胺反應(yīng)。
在另一優(yōu)選的方法中，可以通過在疏質(zhì)子溶劑(例如但不限于二氯甲烷或四氫呋喃)中，溫度范圍從約-10℃至溶劑的回流溫度，用其它活化劑(例如但不限于N，N′-羰基二咪唑)處理，來活化式(4)的酸。隨后，活化的中間體咪唑化合物(imidazolide)與式(3)適當(dāng)取代的伯胺或仲胺反應(yīng)，獲得所需的式(I)化合物，其中R1、R2、R3和B如前所述。
或者，可以通過用羥基苯并三唑四甲基脲六氟磷酸鹽作為偶合試劑，在-10℃至約室溫的溫度下，在有機(jī)堿(例如但不限于Hünig′s堿)存在下，在例如但不限于N，N-二甲基甲酰胺的溶劑中，有效地實(shí)現(xiàn)式(3)適當(dāng)取代的伯胺或仲胺與式(4)所述酸的偶合，獲得所需的良好分離產(chǎn)量和純度的式(I)化合物，其中R1、R2、R3和B如前所述。
相關(guān)的偶合試劑，例如但不限于，疊氮化磷酸二苯酯、二乙基氰基膦酸酯、苯并三唑-1-基-氧基-三-(二甲氨基)六氟磷酸鹽，以及其它所有文獻(xiàn)中已知在肽合成中用于形成酰胺鍵的偶合試劑，也可以用于制備式(I)化合物，其中R1、R2、R3和B如前所述。
由式(4)中間體羧酸制備式(I)化合物所用的方法的最終選擇，是基于其與R1、R2、R3和B基團(tuán)的相容性，以及其與式(1)三環(huán)二氮雜的反應(yīng)性。
制備(I)的另一優(yōu)選方法如流程III所示。式(1)三環(huán)二氮雜與雙光氣在疏質(zhì)子溶劑(例如但不限于二氯甲烷)中，優(yōu)選在有機(jī)堿(例如但不限于三乙胺)的存在下反應(yīng)，然后所得?；虚g體與式(3)適當(dāng)取代的伯胺或仲胺反應(yīng)，獲得所需的式(I)化合物，其中R1、R2、R3和B如前所述。
流程III
流程I的式(I)三環(huán)二氮雜，其中B為

且 Q為

或

可以方便地如流程IV所示制備。
流程IV
因此，在無機(jī)堿(例如但不限于碳酸鉀)存在下，或者在有機(jī)堿(例如但不限于吡啶、4-(二甲基氨基)吡啶或者叔胺，例如但不限于三乙胺、N，N-二異丙基乙胺或N，N-二甲基苯胺)存在下，在疏質(zhì)子溶劑(例如但不限于，二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃或1，4-二□烷)中，在約-5℃至約50℃，用適當(dāng)取代的?；瘎绲幌抻诜减｛u，優(yōu)選式(7)適當(dāng)取代的酰基氯或?；?其中J為COCl或COBr，其中B的最終選擇是基于其與本反應(yīng)流程的相容性)處理式(6)的三環(huán)二氮雜，獲得通式(1)的中間體。
或者，式(7)的?；锟梢允窍鄳?yīng)羧酸的混合酸酐，例如但不限于，依照Inanaga等人在Bull.Chem.Soc.Jpn.52，1989(1979)中的方法，用2，4，6-三氯苯甲酰氯在疏質(zhì)子有機(jī)溶劑(例如但不限于二氯甲烷)中處理所述酸而制得的酸酐。在例如但不限于二氯甲烷的溶劑中，在例如但不限于4-(二甲基氨基吡啶)的有機(jī)堿存在下，用式(6)三環(huán)二氮雜處理通式(7)所述的混合酸酐，溫度范圍從約0℃至溶劑的回流溫度，獲得流程IV的中間體?；苌锸?1)。
最終選擇式(7)的酰化中間體，是基于其與B基的相容性，以及其與式(6)三環(huán)二氮雜的反應(yīng)性。
流程IV的所需式(7)中間體，其中B為(a)，可以方便地用流程V所示方法來制備。因此，式(8)適當(dāng)取代的芳基碘、芳基溴、芳基氯或三氟甲烷磺酸芳酯，其中Pg為羧酸保護(hù)基，優(yōu)選Pg為烷基或苯甲基，M為I、Br、Cl或OTf，且R5、R6和R7如前所述，與式(9)的芳基三(烷基)錫(IV)衍生物，其中T為Sn(烷基)3，優(yōu)選為Sn(正-丁基)3，其中R8、R9和R10如前所述，在Pd(0)催化劑的存在下，在存在或不存在無機(jī)鹽(例如LiCI或銅(I)鹽)時(shí)反應(yīng)，以獲得式(10)中間體的酯。隨后通過水解、氫解或本技術(shù)領(lǐng)域公知的類似方法暴露羧基官能團(tuán)，然后活化式(11)中間體的酸，獲得所需的式(7)化合物，其中R5、R6、R7、R8、R9和R10如前所述，適合與式(6)的三環(huán)二氮雜偶合。
流程V
流程IV的所需式(7)中間體，其中Q為(b)，可以用流程V示例的類似方法來制備，用適當(dāng)取代的萘基中間體替代式(9)的中間體。
或者，流程V的所需式(10)中間體，其中Q為(a)，可以通過將式(8)的碘化物、溴化物、氯化物或三氟甲烷磺酸酯(其中M為I、Br、Cl或OTf)與式(9)適當(dāng)取代的芳基硼衍生物(其中優(yōu)選T為B(OH)2)，在鈀催化劑(例如但不限于乙酸鈀(II)或四(三苯基膦)鈀(0))和有機(jī)堿(例如但不限于三乙胺)或無機(jī)堿(例如但不限于碳酸鈉、碳酸鉀或碳酸銫)的存在下，加入或不加入四丁基溴化銨或四丁基碘化銨，在混合溶劑(例如但不限于，甲苯-乙醇-水、丙酮-水、水或水-乙腈)中，在約室溫至溶劑的回流溫度下，進(jìn)行偶合制備(Suzuki，Pure & Appl. Chem.66，213-222(1994)、Badone等人，J.Org.Chem.62，7170-7173(1997)、Wolfe等人，J.Am.Chem.Soc.121，9559(1999)，Shen，Tetr.Letters.38，5575(1997))。鹵化物與硼酸中間體Suzuki偶合的確切條件的選擇是基于底物和取代基的性質(zhì)。流程V的所需式(10)中間體可以類似地由式(8)溴化物(其中M為Br)和式(9)硼酸，在例如但不限于二□烷的溶劑中，在磷酸鉀和鈀(0)催化劑的存在下來制備。
或者，式(9)的芳基鹵或三氟甲烷磺酸酯，其中T為Br、I或OTf，與式(8)頻那醇(pinacolato)衍生物，其中M為

B(OH)2、或SnBu3，進(jìn)行鈀催化的交叉偶合反應(yīng)，獲得所需的式(10)中間體，采用流程V的方式將其轉(zhuǎn)化為式(1)化合物。
流程V的所需式(10)中間體，其中Q為(b)，可以通過用適當(dāng)取代的萘基中間體替代式(9)中間體的類似方式來制備。
流程V所需的式(8)適當(dāng)取代的芳基鹵，其中M為Br或I，可以從商業(yè)上采購，或者是本技術(shù)領(lǐng)域公知的，或者容易地通過以下方法定量、高純度地獲取將式(8)相應(yīng)取代的苯胺(其中Pg為H、烷基或苯甲基，且M為NH2)重氮化，接著分別基本上依照Street等人，J.Med.Chem.36，1529(1993)和Coffen等人，J.Org.Chem.49，296(1984)中的方法，使中間體重氮鹽與碘和碘化鉀在酸性水介質(zhì)中反應(yīng)，或者與溴化銅(l)反應(yīng)(March，Advanced Organic Chemistry，第3版，第647-648頁，John Wiley & Sons，New York(1985))。
或者，流程V的所需式(11)中間體，其中Q為(a)，可以方便地如流程VI所示來制備，使式(13)適當(dāng)取代的硼酸頻那醇酯，其中R8、R9和R10如前所述，與式(14)的三氟甲烷磺酸芳基酯(其中W為OTf)或者芳基鹵(其中W為Br或I鹵化物)，其中R5、R6和R7如前所述，進(jìn)行交叉偶合反應(yīng)，該反應(yīng)依照Ishiyama等人，Tetr.Lett.38，3447-3450(1997)和Giroux等人，Tetr.Lett.38，3841-3844(1997)的一般方法，然后將式(15)的中間體腈進(jìn)行堿水解或酸水解(cf.March，Advanced Organic Chemistry，第3版，John Wiley & Sons，New York，第788頁，(1985))。
流程VI
或者，式(12)的碘化物、溴化物、氯化物或三氟甲烷磺酸酯，其中L為Br、Cl、I或OTf，與式(14)的硼酸或三烷基錫(IV)衍生物(其中W為B(OH)2或SnBu3)進(jìn)行反應(yīng)，獲得所需的式(15)中間體，其用流程VI的方式被轉(zhuǎn)化為式(11)化合物。
流程VI的所需式(15)中間體，其中Q為(b)，可以通過用適當(dāng)取代的萘基中間體替代式(13)中間體的類似方式來制備。
流程VI的所需式(13)苯基硼酸酯，可以方便地通過式(16)的聯(lián)硼酸頻那醇酯與式(12)適當(dāng)取代的芳基鹵(優(yōu)選溴化物或碘化物，其中L為Br、I)或三氟甲烷磺酸芳基酯(其中L為OTf)的鈀催化交叉偶合反應(yīng)來制備，依照Ishiyama等人，J.Org.Chem.60，7508-7510(1995)和Giroux等人，Tetr.Lett.38，3841-3844(1997)中公開的方法進(jìn)行。
或者，流程IV的所需式(1)化合物，其中Q為(a)，可以采用流程VII所示方法來制備。
流程VII
因此，使用前面所述任何方法，用適當(dāng)取代的酰化劑(例如但不限于式(17)的鹵代芳酰鹵，優(yōu)選碘代芳酰氯或溴代芳酰溴，其中J為COCl或COBr，且K為I或Br，其中R5、R6和R7如前所述)，處理式(6)的三環(huán)二氮雜，獲得流程VII通式(18)的?；虚g體。
或者，式(17)的酰化物可以是相應(yīng)羧酸的混合酸酐。依照前面所述方法，用式(6)的三環(huán)二氮雜對(duì)所述通式(17)的混合酸酐進(jìn)行處理，獲得式(18)中間體?；难苌?。
最終式(17)酰化中間體的選擇，是基于其與R5、R6和R7基的相容性，以及其與式(6)三環(huán)二氮雜的反應(yīng)性。
式(18)的化合物(其中K為I)與適當(dāng)取代的有機(jī)錫試劑，例如但不限于式(9)的三烷基錫(IV)衍生物，優(yōu)選三-正-丁基錫(IV)衍生物，T為SnBu3，其中R8、R9和R10如前所述，在例如但不限于四(三苯基膦)鈀(0)的催化劑存在下，在例如但不限于甲苯和N，N-二甲基甲酰胺的疏質(zhì)子有機(jī)溶劑中，在約室溫至約150℃，進(jìn)行Stille偶合反應(yīng)(cf.Farina等人，J.Org.Chem，59，5905(1994)和其中所引用的參考文獻(xiàn))，獲得所需的式(1)化合物，其中R1、R2、R3、R5、R6、R7、R8、R9和R10如前所述。
或者，式(18)化合物，其中K為Cl、Br或I，與式(9)適當(dāng)取代的芳基硼酸，其中T為B(OH)2，其中R5、R6、R7、R8、R9和R10如前所述，在例如但不限于甲苯-乙醇-水的混合溶劑中，在鈀(0)催化劑和例如但不限于碳酸鈉的堿存在下，在室溫至溶劑的回流溫度下進(jìn)行反應(yīng)，獲得所需的式(1)化合物，其中R1、R2、R3、R5、R6、R7、R8、R9和R10如前所述。
流程VII優(yōu)選的式(17)取代的芳?；然蛘叻减；澹渲蠯為I或Br，且J為COCl或COBr，其中R5、R6和R7如前所述，可以商業(yè)上采購，或者是本技術(shù)領(lǐng)域公知的，或者可以容易地用文獻(xiàn)中已知化合物的類似方法來制備。
流程VII的式(9)中間體，其中T為Sn(烷基)3，烷基優(yōu)選為正-丁基，可以商業(yè)上采購，或者可以方便地如流程VIII所示由式(19)相應(yīng)的溴起始原料(其中R8、R9和R10如前所述)來制備，首先將它們與正丁基鋰反應(yīng)，然后使鋰化的中間體與三烷基(優(yōu)選三甲基或三-正-丁基)氯化錫(IV)，優(yōu)選三甲基氯化錫(IV)或三-正-丁基氯化錫(IV)進(jìn)行反應(yīng)。
流程VIII
優(yōu)選的式(9)取代芳基硼酸，其中T為B(OH)2，可以商業(yè)上采購，或者是本技術(shù)領(lǐng)域公知的，或者可以容易地用文獻(xiàn)中已知化合物的類似方法來制備。
流程VII的所需式(1)化合物，其中B為為(b)，可以通過用適當(dāng)取代的萘基中間體替代式(9)中間體的類似方式來制備。
或者，如流程IX所示，式(20)適當(dāng)取代的芳酰基鹵，優(yōu)選芳?；?其中J＝COCl)，其中R5、R6和R7如前所述，與式(6)三環(huán)二氮雜反應(yīng)，獲得式(21)中間體溴化物。然后(21)與六烷基-二-錫(優(yōu)選六-正-丁基-二-錫(IV))在例如四(三苯基膦)鈀(0)的鈀(0)催化劑和氯化鋰或銅(1)鹽存在下反應(yīng)，獲得式(22)錫烷中間體。接下來，式(22)的三-正-丁基錫(IV)衍生物與式23的適當(dāng)取代芳基鹵(其中M＝溴或碘)，其中R8、R9和R10如前所述，在例如四(三苯基膦)鈀(0)的鈀(0)催化劑存在下反應(yīng)，獲得所需的式(1)化合物，其中Q為(a)，且R1、R2、R3、R5、R6、R7、R8、R9和R10如前所述。
流程IX
流程IX的所需式(1)化合物，其中Q為(b)，可以通過用適當(dāng)取代的萘基中間體替代式(23)中間體的類似方式來制備。
或者，流程IX的所需式(1)化合物，其中Q為(a)，可以如流程X所示來制備。
流程X
因此，式(24)適當(dāng)取代的聯(lián)苯，其中R5、R6、R7、R8、R9和R10如前所述，用一氧化碳在式(6)三環(huán)二氮雜、鈀(0)催化劑(優(yōu)選PdBr2(Ph3P)2)和叔胺(優(yōu)選正-三丁基胺)的存在下，在例如但不限于茴香醚或二□烷的溶劑中，在約室溫至溶劑的回流溫度下進(jìn)行處理(cf.Schoenberg等人，J.Org.Chem.39，3327(1974))，獲得所需的式(1)化合物，其中R1、R2、R3、R5、R6、R7、R8、R9和R10如前所述。
以類似的方式，可以制備流程X的式(1)化合物，其中Q為(b)，條件是用適當(dāng)取代的萘基中間體替代式(24)的中間體。
制備流程I所需的通式(I)化合物的優(yōu)選方法(其中B選自如前所述的(a)或(b))如流程XI所示。
流程XI
因此，式(25)的三環(huán)二氮雜，其中R1、R2和R3如前所述，帶有保護(hù)基(Pg)，保護(hù)基(Pg)例如但不限于芴基烷氧羰基，優(yōu)選芴基甲氧羰基(Pg為Fmoc)，或者烷氧羰基保護(hù)基，優(yōu)選叔丁氧羰基(Pg為Boc)，其與全鹵代烷酰鹵，優(yōu)選三氯乙酰氯，在有機(jī)堿(例如但不限于N，N-二異丙基乙胺(Hünig′s堿)或叔胺(例如但不限于三乙胺)存在下，在約-10℃至約室溫，任選在催化量的4-(二甲基氨基)吡啶存在下，在疏質(zhì)子有機(jī)溶劑(例如但不限于二氯甲烷)中反應(yīng)，獲得所需的式(26)三氯乙酰中間體。然后與式(3)的伯胺或仲胺在流程I的條件下反應(yīng)，獲得式(27)中間體酰胺，其中Pg為Boc，然后將其脫保護(hù)(式(28)中間體)，并酰化為所需的式(I)產(chǎn)物。或者，通過在二甲基亞砜存在下，在疏質(zhì)子溶劑(例如但不限于乙腈)中，在溶劑的回流溫度下，用式(3)的伯胺處理式(26)中間體(其中Pg為Fmoc)，用單一步驟將(26)轉(zhuǎn)化為式(28)中間體。
或者，如流程XII所示，在約-10℃至約室溫的溫度下，用堿水(例如但不限于氫氧化鈉)在有機(jī)溶劑(例如但不限于丙酮)中水解三氯乙酸中間體(26)，同時(shí)去除保護(hù)基(Pg為Fmoc)，獲得式(29)中間體酸。可以通過在1-羥基苯并三唑的存在下，用活化試劑(例如但不限于N，N-二環(huán)己基碳二亞胺或1-乙基-3-(3-二甲基氨基-丙基)碳二亞胺鹽酸鹽)處理式(29)羧酸，接著在約-10℃至約室溫的溫度下，在疏質(zhì)子溶劑(例如但不限于二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺或四氫呋喃)中，優(yōu)選在Hünig’s堿或催化量4-(二甲基氨基)吡啶的存在下，使活化的中間體與式(3)適當(dāng)取代的伯胺或仲胺反應(yīng)，有效地實(shí)現(xiàn)所需的式(29)羧酸的酰胺化。隨后，式(28)酰胺在流程IV條件下進(jìn)行?；?，獲得所需的式(I)化合物。
流程XII
其它文獻(xiàn)中已知在肽合成中用于形成酰胺鍵的偶合試劑，也可以用于制備式(28)化合物。最終選擇由式(29)中間體羧酸制備式(28)化合物所用的方法，是基于其與R1、R2和R3基團(tuán)的相容性。
或者，流程XII的式(29)中間體酸，其中R1、R2和R3如前所述，可以通過下述方法獲得。如流程XIII所示例，在無機(jī)堿(例如但不限于碳酸鉀)或有機(jī)堿(例如但不限于N，N-二異丙基乙胺)存在下，式(6)三環(huán)二氮雜與過量的?；瘎?優(yōu)選三氟乙酸酐或三氯乙酰氯)在疏質(zhì)子溶劑(例如但不限于N，N-二甲基甲酰胺)中反應(yīng)，然后，在約室溫至溶劑回流溫度的溫度下，在質(zhì)子有機(jī)溶劑(例如但不限于乙醇)中，優(yōu)選用含水氫氧化鈉將式(30)中間體雙-三氟乙?；?三氯乙酰基)中間體堿水解。
流程XIII
流程I式(I)化合物，其中Q為(a)，且R1、R2、R3、R5、R6、R7、R8、R9和R10如前所述，其優(yōu)選的制備方法同樣是用流程VII的式(17)?；瘎﹣眭；鞒蘕II的中間體(28)，如流程XIV所示。接著用式(9)適當(dāng)取代的芳基硼酸，其中T為B(OH)2，在例如但不限于二甲氧基乙烷和水或者乙腈和水的混合溶劑中偶合式(31)的中間體，其中K為Br或I，所述偶合在鈀(0)催化劑，例如但不限于四(三苯基膦)鈀(0)，或者鈀(II)催化劑，例如但不限于[1，1’-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯鈀(II)，以及例如但不限于碳酸鉀或碳酸鈉的堿的存在下，在約室溫至回流的溫度下進(jìn)行，獲得所需的式(I)化合物。
流程XIV
或者，流程I的優(yōu)選式(I)化合物，其中Q為(a)，且R1、R2、R3、R5、R6、R7、R8、R9和R10如前所述，可以如流程XV所示來制備，用流程IX的式(20)酰化劑來?；鞒蘕II的式(28)中間體。
流程XV
或者，流程(I)的優(yōu)選式(I)化合物，其中Q為(a)，且R1、R2、R3、R5、R6、R7、R8、R9和R10如前所述，可以如流程XVI所示來制備，用流程V的式(7)酰化劑(其中J如前所述)來?；鞒蘕II的式(28)酰胺中間體。
流程XVI
制備流程XIV的式(31)酰胺中間體的優(yōu)選方法如流程XVII所示。用式(17)?；瘎?其中K為Br或I)酰化式(6)的三環(huán)苯并二氮雜，獲得式(34)中間體。式(34)中間體又與全鹵代烷酰鹵(優(yōu)選三氯乙酰氯)在流程I的條件下反應(yīng)，獲得式(35)三氯乙酰中間體。然后，式(35)中間體與適當(dāng)?shù)牟坊蛑侔芬苍诹鞒蘄的條件下反應(yīng)，獲得所需的式(31)產(chǎn)物。
流程XVII
生物學(xué)試驗(yàn)方法簡(jiǎn)述和結(jié)果的文本摘要 藥理學(xué) 通過在下列試驗(yàn)方法中評(píng)估本發(fā)明代表性化合物，說明本發(fā)明化合物的FSH拮抗劑活性。
促卵泡激素受體依賴性CRE-熒光素酶報(bào)告基因分析用以 鑒定促卵泡激素(FSH)拮抗劑 本方法用來識(shí)別并測(cè)定人FSH受體拮抗劑的相對(duì)效價(jià)，使用可穩(wěn)定產(chǎn)生人FSH受體的中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞系和cAMP應(yīng)答元件調(diào)控的熒光素酶報(bào)告基因。
原料和方法試劑 化合物載體將原料化合物以30mM溶于適當(dāng)?shù)妮d體中，優(yōu)選磷酸鹽緩沖液(PBS)或者二甲基亞砜(DMSO)。接著在DMSO中將所述化合物稀釋為供2-劑量試驗(yàn)?zāi)Ｊ降?和20或30mM工作稀釋物，和供劑量-效應(yīng)模式的1μM至10mM工作稀釋物。將DMSO稀釋物在無菌培養(yǎng)基[D-MEM/F-12(GIBCO/BRL；Grand Island NY)中稀釋500倍，該無菌培養(yǎng)基包含15mM HEPES、2mM 1-谷氨酰胺、維生素B6鹽酸鹽、苯酚紅和5％FetalClone II(HyClone Laboratories，Inc；Logan，UT)、0.2％DMSO、100單位青霉素G/ml和100μg硫酸鏈霉素/毫升(GIBCO/BRL)。各化合物稀釋物中的載體濃度都是一樣的。
陽性對(duì)照購自Cortex Biochem，Inc.(San Leandro，CA)的純化人FSH(＞98％)和得自Wyeth Research化合物庫的已知的FSH-R噻唑烷酮拮抗劑。
細(xì)胞的制備 CHO FSH-R 6CRE-Luc細(xì)胞(1D7細(xì)胞)購自Affymax(Palo Alto，CA)。這些中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO-K1)被基因工程改造，以在6拷貝cAMP應(yīng)答元件調(diào)控下穩(wěn)定地表達(dá)重組人FSH受體基因和熒光素酶報(bào)告基因。在處理的前一天，將細(xì)胞放入96孔白色不透明的平板中，在培養(yǎng)基中的密度為50,000細(xì)胞/100μl/孔。在處理當(dāng)天，通過抽吸從孔中除去培養(yǎng)基，并向每個(gè)孔加入50μl新鮮的培養(yǎng)基。將細(xì)胞在有5％CO2/95％空氣的潮濕培養(yǎng)箱中在37℃下培養(yǎng)。
檢測(cè) 在包含2X EC50純化人FSH(0.8ng/ml)的培養(yǎng)基中，將試驗(yàn)化合物稀釋至2X終濃度，加入孔中以得到終體積為100μl的包含0.25％(v/v)載體的培養(yǎng)基。處理的細(xì)胞在有5％CO2/95％空氣的潮濕培養(yǎng)箱中37℃下培養(yǎng)4小時(shí)。在培養(yǎng)期終點(diǎn)，通過化學(xué)發(fā)光法，使用商業(yè)上可獲得的試劑盒(LucScreen，Tropix，Inc.Bedfford，MA)，依照廠商的說明書來測(cè)量熒光素酶活性，只是在向每個(gè)孔加入100μl組合試劑之前，將緩沖液1和緩沖液2以相等比例混合在一起。使用發(fā)光計(jì)(EG & G Berthold Microlumat LB 96 P，Wallac，Gaithersburg，MD)檢測(cè)化學(xué)發(fā)光，化學(xué)發(fā)光的測(cè)定為1秒/孔。
在加入LucScreen試劑之前，測(cè)量每個(gè)孔的本底發(fā)光。
實(shí)驗(yàn)組 在96-孔2-劑量的模式中，每種化合物的每個(gè)劑量重復(fù)檢測(cè)2次。同樣，每個(gè)平板上的對(duì)照重復(fù)檢測(cè)2次，包括載體對(duì)照和3個(gè)陽性對(duì)照(在EC50的純化人FSH存在下，EC50的phFSH(0.4ng/ml)、EC100的phFSH(1000ng/ml)和IC50的3-[(2S*，5R*)-5-{[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基氨基甲?；鵠-甲基}-4-氧代-2-(5-苯基乙炔基-噻吩-2-基)-噻唑烷-3-基]-苯甲酰胺(2μM))。一個(gè)平板用來檢測(cè)最多22種化合物。
在96-孔劑量-效應(yīng)的模式中，在EC50的純化人FSH存在下，每種化合物在6個(gè)劑量中的每個(gè)劑量下重復(fù)測(cè)定3次。用每種試驗(yàn)化合物對(duì)單獨(dú)的純化人FSH的EC50重復(fù)試驗(yàn)3次。每種化合物檢測(cè)所選用的劑量是從初始的2-劑量篩選方法外推的。和試驗(yàn)化合物一起，純化人FSH也在陽性對(duì)照和質(zhì)量對(duì)照的劑量應(yīng)答(0.03、0.1、0.3、1、3、10和30ng/ml)中檢測(cè)。一個(gè)平板用于3種試驗(yàn)化合物和FSH陽性對(duì)照。
結(jié)果分析 熒光素酶活性以相對(duì)光單位/秒/孔表示。拮抗劑中的熒光素酶活性與適當(dāng)?shù)年幮院完栃詫?duì)照比較。對(duì)于2-劑量試驗(yàn)，結(jié)果以熒光素酶活性報(bào)道，并表示成從EC50FSH所獲得的效應(yīng)的抑制％。對(duì)于劑量-效應(yīng)試驗(yàn)，結(jié)果以IC50值報(bào)道。通過有適當(dāng)加權(quán)和變換的單向方差分析和Biometrics(Wyeth Research，Princeton，NJ)確定的相關(guān)配對(duì)檢驗(yàn)，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。用Biometrics開發(fā)的有適當(dāng)加權(quán)和變換的Stat/Excel程序計(jì)算IC50值。
參考化合物 在2-劑量模式中，和劑量-效應(yīng)模式中的EC50濃度純化人FSH中，試驗(yàn)化合物與純化人FSH和3-[(2S*，5R*)-5-{[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基氨基甲酰基]-甲基}-4-氧代-2-(5-苯基乙炔基-噻吩-2-基)-噻唑烷-3-基]-苯甲酰胺的效果對(duì)比。
參考 1.Kelton，C.A.Cheng，S.V.Y.Nugent，N.P.Schweickhardt，R.L.Rosenthal，J.L.Overton，S.A.Wands，G.D.Kuzeja，J.B.Luchette，CA.和Chappel，S.C.(1992).The cloning of the human folliclestimulating hormone receptor and its expression in COS-7，CHO，and Y-1cells(人促卵泡激素受體的克隆及其在COS-7、CHO和Y-1細(xì)胞中的表達(dá))，MoI.Cell.Endocrinol.89141-151。
2.Tilly，J.L.Aihara，T.Nishimori，K.Jia，X.-C，Billig，H.Kowalski，Kll Perlas，E.A.和Hsueh，A.J.W.(1992).Expression ofrecombinant human follicle-stimulating hormone receptorSpecies-specific ligand binding，signal transduction，and identification of multipleovarian messenger ribonucleic acid transcripts(重組人促卵泡激素受體的表達(dá)種屬特異性配體結(jié)合、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以及多重卵巢信使核糖核酸轉(zhuǎn)錄的鑒別)，Endocrinology 131799-806。
3.George，S.E.Bungay，P.J.和Naylor，LH.(1997).Evaluation of aCRE-directed luciferase reporter gene assay as an alternative tomeasuring cAMP accumulation(CRE-導(dǎo)向的熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)評(píng)估作為測(cè)量cAMP積聚的供選方法)，J.Biomol.Screening 2235-240。
FSH受體激動(dòng)劑和拮抗劑的體外生物檢測(cè) FSH受體激動(dòng)劑和拮抗劑的選擇性和依賴性 該檢測(cè)用于驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)抑制FSH-R-CRE熒光素酶驅(qū)動(dòng)報(bào)告基因的標(biāo)的(hits)的體外效價(jià)、功效、選擇性和受體依賴性。
方法試劑 化合物載體原料化合物以30mM溶于100％DMSO(SigmaChemical Co.)。然后在用于生物測(cè)定之前，將化合物稀釋于由含0.1％(w/v)BSA(Sigma)的Opti-MEMI(Life Technologies)組成的無菌測(cè)定培養(yǎng)基中。DMSO的測(cè)定終濃度為0.1％。
CHO-3D2細(xì)胞的制備 在試驗(yàn)前一天，將CHO-3D2細(xì)胞(hFSH-R)(1)放入96-孔的組織培養(yǎng)板(Falcon)中，密度為30,000細(xì)胞/孔，細(xì)胞處于補(bǔ)充有5％FetalClone II(Hyclone)、2mM L-谷氨酰胺(Life Technologies)和青霉素/鏈霉素(100U/ml，Life Technologies)的DMEM/F12培養(yǎng)基(LifeTechnologies)中。然后在37℃下，將平板細(xì)胞在潮濕的5％CO2/95％空氣的大氣中培養(yǎng)。
測(cè)定 在測(cè)定當(dāng)天，細(xì)胞用100μl/孔的由含0.1％(w/v)BSA(Sigma)的Opti-MEMI(Life Technologies)組成的檢測(cè)培養(yǎng)基洗滌三次。除去培養(yǎng)基，并向每個(gè)孔加入100μl的檢測(cè)培養(yǎng)基。在37℃下將板再培養(yǎng)30分鐘。然后除去培養(yǎng)基，在37℃下，存在或不存在試驗(yàn)化合物時(shí)，在50μl的包含載體、純化人FSH(＞95％純度；Cortex Biochem，Inc.San Leandro，CA)的檢測(cè)培養(yǎng)基中攻擊細(xì)胞30分鐘。通過向各個(gè)孔中加入50μl的0.2N鹽酸終止反應(yīng)，通過放射免疫測(cè)定(RIA)用商業(yè)上可獲得的試劑盒(Amersham)測(cè)量cAMP-積聚。
實(shí)驗(yàn)組 所有試驗(yàn)化合物都是用劑量-效應(yīng)范例評(píng)價(jià)，范圍從約0.01至30μM。在96-孔模式中，對(duì)照和試驗(yàn)化合物一式四份進(jìn)行評(píng)價(jià)。用載體，EC20(1.85ng/mL為53pM)hFSH，或者化合物(存在或不存在EC20劑量的hFSH)處理細(xì)胞。用RIA評(píng)價(jià)化合物抑制因hFSH引起的cAMP-積聚的能力。
在每次檢測(cè)中計(jì)算EC20濃度，只有那些EC20濃度等于1.85±0.4ng/mL的試驗(yàn)可作為有效的而被接受。在96-孔的模式中，第一欄包含陰性對(duì)照(檢測(cè)培養(yǎng)基+0.1％DMSO)，第二欄包含陽性對(duì)照，EC20的hFSH+0.1％DMSO(1.85ng/mL或53pM)，然后是范圍約0.03至30μM的6種濃度化合物，hFSH以其EC20濃度(1.85ng/mL或53pM)存在。
和試驗(yàn)化合物一起，F(xiàn)SH也作為激動(dòng)劑模式中的陽性對(duì)照，使用的濃度范圍為約0.1至1000ng/mL。
選擇性研究 如上述CHO-3D2細(xì)胞一樣，用CHO-25(hTSH-R)細(xì)胞對(duì)cAMP積聚進(jìn)行測(cè)定，除下列不同將CHO-25細(xì)胞以密度50,000個(gè)細(xì)胞/孔置于平板內(nèi)(2)。所有試驗(yàn)化合物以劑量-響應(yīng)的模式進(jìn)行評(píng)價(jià)，范圍為0.01至30μM。對(duì)照和試驗(yàn)化合物一式四份進(jìn)行評(píng)價(jià)。用載體、EC20濃度的hTSH(5nM；hTSH＞98％純度，Cortex Biochem，Inc.)，或者化合物(存在或不存在EC20濃度的hTSH)處理細(xì)胞。用RIA評(píng)價(jià)化合物抑制由hFSH引起的cAMP-積聚的能力。
和試驗(yàn)化合物一起，hTSH也作為激動(dòng)劑模式中的陽性對(duì)照，使用的濃度范圍為0.01μM至1000μM。
非受體介導(dǎo)的響應(yīng) 如上述CHO-3D2細(xì)胞一樣，用CHO-K1(親代細(xì)胞系)細(xì)胞對(duì)cAMP積聚進(jìn)行測(cè)定。所有試驗(yàn)化合物以劑量-響應(yīng)的模式進(jìn)行評(píng)價(jià)，范圍為約0.01至30μM。對(duì)照和試驗(yàn)化合物一式四份進(jìn)行評(píng)價(jià)。用載體、5μM forskolin(其引起由EC20濃度hFSH引起的相等fmol/ml濃度的cAMP-積聚(5μM forskolin，Sigma Chemical Co；先前在生物檢測(cè)鑒定期間計(jì)算))，或者化合物(存在或不存在5μM forskolin)處理細(xì)胞。用RIA評(píng)價(jià)化合物抑制由forskolin引起的cAMP-積聚的能力。
和試驗(yàn)化合物一起，forskolin也作為激動(dòng)劑模式中的陽性對(duì)照，使用的濃度范圍為0.01μM至1000μM。
結(jié)果分析 cAMP積聚以fmol/ml表示。激動(dòng)劑模式中的cAMP積聚，或者拮抗劑模式中化合物抑制hFSH、hTSH或forskolin引起的cAMP積聚的能力，與適當(dāng)?shù)年幮院完栃詫?duì)照對(duì)比。用單向方差分析來分析數(shù)據(jù)，用最小顯著差試驗(yàn)(Least Significant Difference test)測(cè)定處理和對(duì)照之間的顯著性差異。
參考化合物 試驗(yàn)化合物與純化人FSH的效果對(duì)比，在范例中，hFSH引起cAMP積聚的濃度-依賴性增加，表觀EC80＝22.55ng/ml、EC50＝6.03ng/ml和EC20＝1.85ng/ml，用四參數(shù)邏輯計(jì)算方程計(jì)算。用hFSH和forskolin進(jìn)行相同的比較。
生物活性 基于標(biāo)準(zhǔn)藥理試驗(yàn)方法所獲得的結(jié)果，本發(fā)明化合物顯示，可以體外阻礙FSH的細(xì)胞功能，包括大鼠卵巢粒細(xì)胞中第二信使cAMP和雌二醇的生成。我們發(fā)現(xiàn)本發(fā)明代表性化合物可以選擇性地與FSH受體相互作用，但不拮抗FSH與其受體的結(jié)合(表1)。
因此，本發(fā)明化合物可以用作女性避孕劑。
表1 實(shí)施例 實(shí)施例1 2，2，2-三氯-1-{10-[(2′-甲氧基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}乙酮 用超過5分鐘的時(shí)間，將三氯乙酰氯(2.63毫升，23.6毫摩爾)逐滴加到(2′-甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-(5H，11H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-10-基)-甲酮(3.0克，7.60毫摩爾)和N，N-二異丙基乙胺(2.65毫升，15.2毫摩爾)的二氯甲烷(60毫升)溶液中。氮?dú)庀率覝財(cái)嚢柙摲磻?yīng)過夜，然后用水猝滅。有機(jī)層用0.1N鹽酸和水洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾并濃縮成油狀物。該油狀物經(jīng)硅膠Merck-60閃色譜法純化，洗脫劑為0至5％梯度乙酸乙酯/二氯甲烷，獲得黃色泡沫的標(biāo)題化合物(2.34克)。
MS[(+)ESI，m/z]539[M+H]+。
C28H21Cl3N2O3+0.2 C4H8O2的分析計(jì)算值C 62.05，H 4.09，N5.03。實(shí)測(cè)值C 62.28，H 4.47，N 4.86。
實(shí)施例2 10-[(2′-甲氧基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-N-[(1-甲基-1H-吡咯-2-基)甲基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-甲酰胺 向?qū)嵤├?的2，2，2-三氯-1-{10-[(2′-甲氧基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}乙酮(1.175克，2.17毫摩爾)的乙腈(15毫升)懸浮液中，加入(1-甲基-1H-吡咯-2-基)甲胺(0.263克，2.38毫摩爾)，接著加入二甲基亞砜(0.710克，9.06毫摩爾)和三乙胺(0.400克，4毫摩爾)。氮?dú)庀掠?0℃加熱該混合物4小時(shí)。真空除去溶劑，殘余物經(jīng)硅膠Merck-60閃色譜法純化，0-25％乙酸乙酯/二氯甲烷梯度洗脫，產(chǎn)生黃色泡沫，用乙酸乙酯和己烷處理后獲得固體(0.464克)，熔點(diǎn)mp148-150℃。
MS[(+)ESI，m/z]53116[M+H]+。
C33H30N4O3的分析計(jì)算值C 74.70，H 5.70，N 10.56。實(shí)測(cè)值C74.56，H 6.15，N 10.20。
實(shí)施例3 2，2，2-三氯-1-{10-[(2，2′，6′-三甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}乙酮 步驟A.2，2′，6′-三甲基-聯(lián)苯基-4-羧酸甲酯 將2，6-二甲基硼酸(13.7克，91毫摩爾)和3-甲基苯甲酸甲酯(20.9克，91毫摩爾)溶于甲苯(425毫升)中。然后加入乙醇(250毫升)和水(250毫升)，再加入碳酸鈉(38.7克，365毫摩爾)。該系統(tǒng)用氮?dú)獯祾吆?，加入?三苯基膦)鈀(0)催化劑(10.5克，9毫摩爾)。氮?dú)庀录訜嵩摶旌衔?1小時(shí)，并通過C鹽過濾。用大量乙酸乙酯洗滌濾餅，合并的濾液用水和鹽水洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥后濃縮得到固體。殘余物經(jīng)硅膠Merck-60閃色譜法純化，0-20％乙酸乙酯/己烷梯度洗脫，獲得白色固體的標(biāo)題化合物(19.2克，83％)。
C17H18O2的分析計(jì)算值C 80.28，H 7.13。實(shí)測(cè)值C 80.37，H7.21。
步驟B.2，2′，6′-三甲基-聯(lián)苯基-4-羧酸 用1N氫氧化鈉(250毫升)處理步驟A的2，2′，6′-三甲基-聯(lián)苯基-4-羧酸甲酯(18.5克，75.4毫摩爾)的四氫呋喃溶液，并于90℃加熱20小時(shí)。用濃鹽酸將該混合物酸化至pH～1，用二氯甲烷萃取，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，并濃縮獲得白色粉末的標(biāo)題化合物(15.63克)。從水性乙醇中重結(jié)晶，獲得白色片狀物，熔點(diǎn)m.p.172-173℃。
MS[(-)ES，m/z]239.1[M-H]-。
C16H16O2的分析計(jì)算值C 79.97，H 6.71。實(shí)測(cè)值C 79.71，H6.70。
步驟C.(5H，10)-[(2，2′，6′-三甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜 用35毫升(479毫摩爾)亞硫酰氯攪拌步驟B的2，2′，6′-三甲基-聯(lián)苯基-4-羧酸(11.4克，47.4毫摩爾)，并加熱至70℃3小時(shí)。借助于甲苯真空除去過量的亞硫酰氯。將粗的?；热苡诙燃淄?100毫升)中，并將10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜(12.23克，47.4毫摩爾)的二氯甲烷(50毫升)溶液逐滴加入。室溫下攪拌過夜后，該混合物用水、1N鹽酸、飽和的碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾后濃縮。殘余物經(jīng)硅膠Merck-60閃色譜法純化，1∶1至4∶1二氯甲烷/己烷梯度洗脫，獲得純的標(biāo)題化合物，從乙醇水溶液中重結(jié)晶，得到細(xì)的半透明的片狀物，熔點(diǎn)m.p.170-171℃。
MS[(+)ESI，m/z]407.2[M+H]+。
C28H26N2O·0.15H2O的分析計(jì)算值C 82.18，H 6.48，N 6.85。實(shí)測(cè)值C 82，28，H 6.32，N 6.76。
步驟D.2，2，2-三氯-1-{10-[(2，2′，6′-三甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}乙酮0.15水 向步驟C的(5H，10)-[(2，2′，6′-三甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜(7.934克，19.5毫摩爾)的二氯甲烷(160毫升)溶液中，加入三氯乙酰氯(11克，60.5毫摩爾，3.1eq.)、N，N-二異丙基乙胺(5.54克，43毫摩爾，2.2eq.)和4-(二甲氨基)吡啶(10摩爾％)。室溫下攪拌該混合物16.5小時(shí)，然后用水(100毫升)猝滅，并攪拌1小時(shí)。有機(jī)層用0.1N鹽酸和鹽水洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，并濃縮得到黃色泡沫。
MS[(+)ES，m/z]551.1[M+H]+。
C30H25Cl3N2O2·H2O的分析計(jì)算值C 64.97，H 4.60，N 5.05。實(shí)測(cè)值C64.79，H 4.97，N 4.58。
實(shí)施例4 N-[(5-甲基異唑-3-基)甲基]-10-[(2，2′，6′-三甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-甲酰胺 依照實(shí)施例2的方法制備標(biāo)題化合物。從實(shí)施例3的2，2，2-三氯-1-{10-[(2，2′，6′-三甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}乙酮(1.8克，3.26毫摩爾)、(5-甲基-3-異唑基)甲胺(0.305克，2.7毫摩爾)、二甲基亞砜(1.06克，13.6毫摩爾)和三乙胺(0.605克，6毫摩爾)的乙腈(20毫升)溶液開始。殘余物經(jīng)硅膠Merck-60閃色譜法純化，0-35％乙酸乙酯/二氯甲烷梯度洗脫，獲得橘黃色泡沫。從乙酸乙酯/二氯甲烷/己烷中重結(jié)晶，得到白色粉末(0.334克)，熔點(diǎn)m.p.233-234℃。
MS[(+)ESI，m/z]545.2[M+H]+。
C34H32N4O3·0.15C5H10O2的分析計(jì)算值C 74.49，H 6.00，N10.04。實(shí)測(cè)值C 74.46，H 6.11，N 10.06。
實(shí)施例5 10-[(2′-甲氧基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-N-[(5-甲基異唑-3-基)甲基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-甲酰胺 依照實(shí)施例2的方法制備標(biāo)題化合物。從實(shí)施例1的2，2，2-三氯-1-{10-[(2′-甲氧基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}乙酮(1.483克，2.75毫摩爾)、(5-甲基-3-異唑基)甲胺(0.256克，1.0eq.)、二甲基亞砜(5.0eq.0.896克，11.45毫摩爾)和三乙胺(2.2eq.0.510克，5毫摩爾)的乙腈(20毫升)溶液開始。殘余物經(jīng)硅膠Merck-60閃色譜法純化，0-20％乙酸乙酯/二氯甲烷梯度洗脫，獲得泡沫(0.460克)，用乙酸乙酯/己烷處理后得到類白色固體，熔點(diǎn)m.p.111-113℃。
MS[(+)ESI，m/z]533.12[M+H]+。
C32H28N4O4的分析計(jì)算值C 72.17，H 5.30，N 10.52。實(shí)測(cè)值C 71.85，H 5.27，N 10.25。
實(shí)施例6 N-[(2，5-二甲基-3-呋喃基)甲基]-10-[(2′-甲氧基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-甲酰胺 依照實(shí)施例2的方法制備標(biāo)題化合物。從2，5-二甲基-3-呋喃基甲胺(0.264克，2.1毫摩爾)、實(shí)施例1的2，2，2-三氯-1-{10-[(2′-甲氧基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}乙酮(1.138克，2.1毫摩爾)、三乙胺(0.470克，2.2eq.4.6毫摩爾)和二甲基亞砜(1.1克，5.0eq.10.5毫摩爾)的乙腈(20毫升)溶液開始。殘余物經(jīng)硅膠Merck-60閃色譜法純化，30-45％乙酸乙酯/己烷梯度洗脫，得到白色粉末(0.453克)。通過制備HPLC進(jìn)一步純化，色譜柱Primesphere C18(2×25厘米)，流動(dòng)相68％乙腈/含三氟乙酸的水，100毫升/分鐘，254納米檢測(cè)。純的餾份用氫氧化銨中和后蒸發(fā)，得到無定型固體(0.153克)。
MS[(+)ESI，m/z]546.2[M+H]+。
MS[(-)ESI，m/z]544.2[M-H]-。
實(shí)施例7 N-[(4-苯甲基嗎啉-2-基)甲基]-10-[(2′-甲氧基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-甲酰胺 依照實(shí)施例2的方法制備標(biāo)題化合物。從實(shí)施例1的2，2，2-三氯-1-{10-[(2′-甲氧基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}乙酮(0.619克，1.15毫摩爾)、(4-苯甲基-1，4-嗪-2-基)-甲胺(01.97克，0.955毫摩爾)、二甲基亞砜(0.374克，4.8毫摩爾)和三乙胺(0.213克，2.1毫摩爾)的乙腈(15毫升)溶液開始。殘余物吸附在硅膠Merck-60上，經(jīng)閃色譜法(0-75％乙酸乙酯/二氯甲烷)純化，獲得類白色固體(0.241克)，熔點(diǎn)m.p.180-182℃。
MS[(+)ESI，m/z]627.19[M+H]+。
C39H38N4O4·0.35C5H10O2的分析計(jì)算值C 73.79，H 6.25，N 8.52。實(shí)測(cè)值C 73.62，H 6.07，N 8.55。
實(shí)施例8 N-[(1-甲基-1H-吡咯-2-基)甲基]-10-[(2，2′，6′-三甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-甲酰胺 依照實(shí)施例2的方法制備標(biāo)題化合物。從實(shí)施例3的2，2，2-三氯-1-{10-[(2，2′，6′-三甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}乙酮(1.4克，2.5毫摩爾)、(1-甲基-1H-吡咯-2-基)甲胺(0.234克，2.1毫摩爾)、二甲基亞砜(0.822克，10.5毫摩爾)和三乙胺(0.470克，4.6毫摩爾)的乙腈(15毫升)溶液開始。殘余物經(jīng)硅膠Merck-60閃色譜法(0-25％乙酸乙酯/二氯甲烷)純化，得到泡沫(0.924克)，用乙酸乙酯/己烷/二氯甲烷處理后得到固體，熔點(diǎn)m.p.222-224℃。
MS[(+)ESI，m/z]543.3[M+H]+；[(-)ESI，m/z]541.3[M-H]-。
實(shí)施例9 2，2，2-三氯-1-{10-[(2，2′-二甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}乙酮 步驟A.2，2′-二甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-羧酸甲基酯 將4-溴-3-甲基苯甲酸甲酯(25.0克，110毫摩爾)、o-甲苯基硼酸(16.5克，120毫摩爾)和碳酸鉀(50克，360毫摩爾)在二烷∶水(300毫升∶200毫升)中的混合物，吹掃氮?dú)?小時(shí)。加入[1，1′-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯鈀(II)(4.5克，5.5毫摩爾)，將該反應(yīng)混合物在劇烈攪拌下于100℃加熱3.5小時(shí)。冷卻的反應(yīng)混合物經(jīng)C鹽過濾，濾餅用乙酸乙酯(500毫升)洗滌。合并的有機(jī)相用1M氫氧化鈉水溶液(500毫升)和鹽水(500毫升)洗滌，經(jīng)無水碳酸鉀干燥，過濾后真空濃縮，得到深色油(28.6克)。經(jīng)閃色譜法純化，2％乙酸乙酯/己烷為溶劑，得到淺黃色油狀的標(biāo)題化合物(24.7克)。
HRMS.C16H17O2的計(jì)算值241.12231。實(shí)測(cè)值[(+)ESI，m/z]24 1.12205。
C16H16O2的分析計(jì)算值C 79.97，H 6.71。實(shí)測(cè)值C 79.67，H6.61。
步驟B.2，2′-二甲基-聯(lián)苯基-4-羧酸 向步驟A的2，2′-二甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-羧酸甲酯(24.7克，103毫摩爾)的5∶1四氫呋喃甲醇(200毫升)溶液中，加入1M氫氧化鈉水溶液(108毫升，108毫摩爾)。在回流溫度加熱該反應(yīng)混合物1小時(shí)，冷卻后真空濃縮，除去有機(jī)溶劑。將所得水溶液冷卻至0℃，并向其中緩慢加入2M鹽酸水溶液(60毫升，120毫摩爾)，再加入水(60毫升)以便于攪拌沉淀出來的產(chǎn)物。于0℃攪拌該懸浮液1小時(shí)，然后過濾，得到白色固體的標(biāo)題化合物(22.6克)，熔點(diǎn)m.p.140-143℃。
MS[(+)ESI，m/z]225[M-H]-。
步驟C.(10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-10-基)-(2，2′-二甲基-聯(lián)苯基-4-基)-甲酮 于室溫氮?dú)庀拢虿襟EB的2，2′-二甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-羧酸(22.4克，99.0毫摩爾)的無水二氯甲烷(500毫升)懸浮液中，加入無水N，N-二甲基甲酰胺(5毫升)，再逐滴加入2.0M乙二酰氯的二氯甲烷(60毫升，120毫摩爾)溶液，室溫下攪拌該反應(yīng)混合物2小時(shí)，然后真空濃縮，將殘余物重新溶于無水二氯甲烷(200毫升)中。真空濃縮該溶液，得到棕色油狀的粗的酰基氯。將?；热苡诙燃淄?500毫升)中，加入10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜(21.9克，119毫摩爾)，再加入N，N-二異丙基乙胺(87毫升，500毫摩爾)，氮?dú)庀掠谑覝財(cái)嚢柙摲磻?yīng)混合物16小時(shí)。然后該反應(yīng)混合物用1M鹽酸水溶液(5×1升)、10％氫氧化鈉水溶液(1升)和鹽水(500毫升)洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾后真空濃縮，得到深色泡沫。經(jīng)閃色譜法純化，用2.5-40％乙酸乙酯/己烷的溶劑梯度洗脫，得到褐色固體，從乙酸乙酯/己烷中重結(jié)晶，得到淺橘黃色固體的標(biāo)題化合物(12.4克)。母液經(jīng)閃色譜法純化，又得到白色固體的標(biāo)題化合物(11.5克)，熔點(diǎn)m.p.145-148℃。
MS[(+)ESI，m/z]393[M+H]+。
C27H24N2O的分析計(jì)算值C 82.62，H 6.16，N 7.14。實(shí)測(cè)值C82.26，H 5.83，N 6.50。
步驟D.2，2，2-三氯-1-{10-[(2，2′-二甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}乙酮 在～5℃下，向步驟C的(10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-10-基)-(2，2′-二甲基-聯(lián)苯基-4-基)-甲酮(8.38毫摩爾)和三乙胺(16.76毫摩爾)的二氯甲烷(30毫升)溶液中，快速滴加三氯乙酰氯(25毫摩爾)。攪拌該混合物并升溫至室溫過夜。該混合物用0.1N鹽酸和稀鹽水洗滌，然后經(jīng)無水硫酸鈉干燥并蒸發(fā)，剩下淺綠色的油。該化合物經(jīng)Merck硅膠-60塞過濾(用二氯甲烷洗脫)純化，然后用熱的乙酸乙酯/己烷(3/1)處理，獲得淡黃色結(jié)晶固體，熔點(diǎn)m.p.212-214℃。
MS[(+)ESI，m/z]537[M+H]+。
C29H23Cl3N2O2的分析計(jì)算值C 64.76，H 4.31，N 5.21。實(shí)測(cè)值C 64.70，H 4.35，N 4.96。
實(shí)施例10 10-[(2，2′-二甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-N-{[5-(4-甲氧基苯基)-1，2，4-二唑-3-基]甲基}-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-甲酰胺 步驟A.[5-(4-甲氧基苯基)-1，2，4-二唑-3-基]甲胺 向3-氯甲基-5-(4-甲氧基-苯基)-[1，2，4]二唑(8.90毫摩爾)的N，N-二甲基甲酰胺(10毫升)溶液中，加入疊氮化鈉(17.8毫摩爾)。室溫下攪拌該混合物20小時(shí)。將反應(yīng)混合物傾入水(30毫升)中，并用二氯甲烷(3×)萃取。合并有機(jī)萃取物，用水洗滌(2×)，經(jīng)無水硫酸鈉干燥并蒸發(fā)。然后將澄清的油狀殘余物放置高真空下，并逐漸加溫18小時(shí)。冷卻后，該物質(zhì)固化。將該固體溶于四氫呋喃(15毫升)中，并用三苯基膦(9.0毫摩爾)處理。立即可見明顯起泡。攪拌該混合物16小時(shí)，然后用水(3.0毫升)處理。該混合物在45℃油浴中加熱3小時(shí)。產(chǎn)物經(jīng)閃色譜法(硅膠；2∶1醚/二氯甲烷)純化，熔點(diǎn)m.p.66-68℃。
MS[(+)ESI，m/z]206[M+H]+。
C10H11N3O2的分析計(jì)算值C 58.53，H 5.40，N 20.48。實(shí)測(cè)值C 58.5，H 5.38，N 20.59。
步驟B.10-[(2，2′-二甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-N-{[5-(4-甲氧基苯基)-1，2，4-二唑-3-基]甲基}-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-甲酰胺 將實(shí)施例9的2，2，2-三氯-1-{10-[(2，2′-二甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}乙酮(0.26毫摩爾)、二甲基亞砜(100微升)和步驟A的[5-(4-甲氧基苯基)-1，2，4-二唑-3-基]甲胺(0.546毫摩爾)在乙腈(2.5毫升)中的混合物，加熱至85℃16小時(shí)。冷卻之后，蒸發(fā)溶劑，殘余物于二氯甲烷(10毫升)中處理。用水洗滌(2×)，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，并蒸發(fā)。殘余物經(jīng)HPLC(正相，Luna CN鍵合填料)純化，從乙酸乙酯/己烷中結(jié)晶，熔點(diǎn)m.p.133-135℃。
MS[(+)ESI，m/z]622[M+H]+。
C38H33N5O4的分析計(jì)算值C 73.18，H 5.33，N 11.23。實(shí)測(cè)值C 71.95，H 5.64，N 11.52。
實(shí)施例11 N-{[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}-10-[(2，2′-二甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-甲酰胺 步驟A.2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲胺 依照實(shí)施例10的方法，由4-氯甲基-2-(4-氯-苯基)-噻唑制備標(biāo)題化合物。熔點(diǎn)m.p.61-64℃。
MS[(+)ESI，m/z]225[M+H]+。
C10H9ClN2S的分析計(jì)算值C 53.45，H 4.04，N 12.47。實(shí)測(cè)值C 53.57，H 4.05，N 12.45。
步驟B.N-{[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}-10-[(2，2′-二甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-甲酰胺 依照實(shí)施例10步驟B的方法，由實(shí)施例9的2，2，2-三氯-1-{10-[(2，2′-二甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}乙酮和步驟A的2-(4-氯苯基)-噻唑-4-基]甲胺合成標(biāo)題化合物。熔點(diǎn)nm.p.198-201℃。
MS[(+)ESI，m/z]641[M+H]+。
實(shí)施例12 10-[(2，2′-二甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-N-(哌啶-3-基甲基)-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-甲酰胺 步驟A.3-{[({10-[(2，2′-二甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，1-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}羰基)氨基]甲基}哌啶-1-羧酸叔丁酯 向?qū)嵤├?的2，2，2-三氯-1-{10-[(2，2′-二甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}乙酮(0.54克，1.0毫摩爾)和3-氨基甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.43克，2.0毫摩爾)的無水乙腈(5毫升)懸浮液中，加入二甲基亞砜(0.35毫升，4.9毫摩爾)，氮?dú)庀聦⒃摲磻?yīng)混合物加熱至80℃保持3天。冷卻后的反應(yīng)混合物用二氯甲烷(25毫升)稀釋，用水(2×25毫升)和鹽水(25毫升)洗滌，經(jīng)無水碳酸鉀干燥，過濾并真空濃縮，得到棕色油(0.81克)。經(jīng)閃色譜法純化，溶劑梯度為3至20％乙酸乙酯/二氯甲烷，獲得白色泡沫的標(biāo)題化合物(0.45克)。
HRMS.C39H45N4O4的計(jì)算值633.34354。實(shí)測(cè)值[(+)ESI，m/z]633.34262。
步驟B.10-[(2，2′-二甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-N-(哌啶-3-基甲基)-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-甲酰胺 向步驟A的3-{[({10-[(2，2′-二甲基-1，1′-聯(lián)苯基-4-基)羰基]-10，11-二氫-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮雜-3-基}羰基)氨基]甲基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.42克，0.66毫摩爾)的無水二氯甲烷(3毫升)溶液中，加入三氟乙酸(0.51毫升，6.6毫摩爾)，氮?dú)庀掠谑覝財(cái)嚢柙摲磻?yīng)混合物20小時(shí)。然后該反應(yīng)混合物用二氯甲烷(50毫升)稀釋，用1M氫氧化鈉溶液(50毫升)和鹽水(25毫升)洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮，得到粉紅色玻璃狀物。用閃色譜法純化，溶劑梯度為2.5至10％氨飽和的甲醇/二氯甲烷，獲得淺黃色的油(0.31克)。從二乙醚(2毫升)中結(jié)晶，獲得淺黃色固體的標(biāo)題化合物(0.19克)。
HRMS.C34H37N4O2的計(jì)算值533.29111。實(shí)測(cè)值[(+)ESI，m/z]533.29102。
所有這里引用的參考，包括但不限于文章、文本、專利、專利申請(qǐng)和書籍，通過整體引用而并入本文。
權(quán)利要求
1.一種式I表示的化合物
或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中，
R1和R2獨(dú)立選自氫、(C1-C6)烷基、鹵素、氰基、三氟甲基、羥基、(C1-C6)烷氧基、-OCF3、羧基、(C1-C6烷氧基)羰基、-CONH2、-CONH[(C1-C6)烷基]、-CON[(C1-C6)烷基]2、氨基、(C1-C6)烷基氨基或-NHCO[(C1-C6)烷基]；
R3是選自氫、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、羥基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、-C(O)(C1-C6)烷基或鹵素的取代基；
B為
其中Q為
其中R5、R6、R7、R8、R9和R10獨(dú)立選自氫、烷基、(C1-C6)烷基、烷氧基、(C1-C6)烷氧基、羥基烷基、羥基(C1-C6)烷基、烷氧基烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基、(C2-C7)酰氧基(C1-C6)烷基、(C1-C6烷基)羰基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、(C3-C8)環(huán)烷基、甲酰基、(C3-C8)環(huán)烷基羰基、羧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C3-C8環(huán)烷基)氧基羰基、芳基(C1-C6)烷氧基羰基、氨基甲?；?、-O-CH2-CH＝CH2、被1至3個(gè)鹵素原子取代的(C1-C6)烷基、三鹵代甲基、三氟甲基、鹵素、OCF3、烷硫基、(C1-C6)烷硫基、-C(O)烷基、任選被烷基取代的-C(O)芳基；羥基、-CH(OH)烷基、-CH(烷氧基)烷基、硝基、-SO2烷基、(C1-C6)烷基磺?；?、氨基磺?；?C1-C6)烷基氨基磺?；?、-SO2NHR11、-SO2N(R11)2、-OC(O)N[(C1-C6)烷基]2、-CONH[(C1-C6)烷基]、-CON[(C1-C6)烷基]2、-(CH2)PCN、(C1-C6)烷基氨基、二-(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)烷基二-(C1-C6)烷基氨基、-(CH2)PNR13R14、-(CH2)PCONR13R14、-(CH2)PCOOR12、-CH＝NOH、-CH＝NO-(C1-C6)烷基、三氟甲基硫基、和
R11和R12為氫、C3-C8環(huán)烷基或(C1-C6)烷基；
R13和R14為氫、C3-C8環(huán)烷基或(C1-C6)烷基；
或者R13和R14可以與其連接的氮一起形成任選包含O、S或N的4至6元飽和環(huán)；
P為0或1；
R為
基團(tuán)；
R15為氫或(C1-C6)烷基；
Z具有式-L-M；
L具有式
其中t為1至2的整數(shù)；
R16為氫或(C1-C6)烷基，
M選自
或
其中R17和R18各自獨(dú)立為任選取代的芳基；
R19、R20、R21和R22各自獨(dú)立為(C1-C6)烷基；
R23為烷基、C1-C6烷基或任選取代的(C6-C20)芳烷基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R15和R16各為氫；且t為1。
3.權(quán)利要求1或2的化合物，其中M選自
4.權(quán)利要求1或2的化合物，其中M選自
5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的化合物，其中B的結(jié)構(gòu)為
6.權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的化合物，其中R1、R2和R3各為氫。
7.權(quán)利要求1的化合物，其結(jié)構(gòu)式為
或其藥學(xué)上可接受的鹽。
8.權(quán)利要求7的化合物，其中R5選自H和C1-C3烷基。
9.權(quán)利要求7或8的化合物，其中R8和R9獨(dú)立選自H、C1-C3烷基和C1-C3烷氧基。
10.權(quán)利要求1、2或權(quán)利要求5至9中任一項(xiàng)的化合物，其中M為
其中R17為任選取代的芳基。
11.權(quán)利要求10的化合物，其中R17為任選被1至3個(gè)選自C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和鹵素的取代基取代的苯基。
12.權(quán)利要求11的化合物，其中所述R17的所述C1-C3烷氧基為甲氧基。
13.權(quán)利要求1的化合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)式
14.權(quán)利要求1、2或權(quán)利要求5至9中任一項(xiàng)的式I化合物，其中M為
其中R18為任選取代的芳基；
或其藥學(xué)上可接受的鹽。
15.權(quán)利要求14的化合物，其中R18為任選被1至3個(gè)選自C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和鹵素的取代基取代的苯基。
16.權(quán)利要求15的化合物，其中所述鹵素為氯。
17.權(quán)利要求1的化合物，其具有以下結(jié)構(gòu)式
18.權(quán)利要求1或2或權(quán)利要求5至9中任一項(xiàng)的化合物，其中M為
其中R19為C1-C6烷基；
或其藥學(xué)上可接受的鹽。
19.權(quán)利要求18的化合物，其中R19為甲基。
20.權(quán)利要求1的化合物，其具有以下結(jié)構(gòu)式
21.權(quán)利要求1的化合物，其具有以下結(jié)構(gòu)式
22.權(quán)利要求1或2或權(quán)利要求5至9中任一項(xiàng)的化合物，其中M為
其中R20為C1-C6烷基；
或其藥學(xué)上可接受的鹽。
23.權(quán)利要求22的化合物，其中R20為甲基。
24.權(quán)利要求1的化合物，其具有以下結(jié)構(gòu)式
25.權(quán)利要求1的化合物，其具有以下結(jié)構(gòu)式
26.權(quán)利要求1或2或權(quán)利要求5至9中任一項(xiàng)的化合物，其中M為
其中R21和R22各獨(dú)立為C1-C6烷基。
27.權(quán)利要求26的化合物，其中R21和R22相同。
28.權(quán)利要求27的化合物，其中R21和R22各為甲基。
29.權(quán)利要求1的化合物，其具有以下結(jié)構(gòu)式
30.權(quán)利要求1或2或權(quán)利要求5至9中任一項(xiàng)的化合物，其中M為
31.權(quán)利要求1的化合物，其具有以下結(jié)構(gòu)式
32.權(quán)利要求1或2或權(quán)利要求5至9中任一項(xiàng)的化合物，其中M為
其中R23為任選取代的C7-C20芳烷基。
33.權(quán)利要求32的化合物，其中R23為苯甲基。
34.權(quán)利要求1的化合物，其具有以下結(jié)構(gòu)式
35.一種制備權(quán)利要求1的化合物的方法，其包括
在足以生成式(1)化合物的條件下，使式(2)三氯乙酰化合物
與式(3)
RH
(3)
適當(dāng)取代的伯胺或仲胺進(jìn)行反應(yīng)。
36.權(quán)利要求35的方法，其中所述反應(yīng)在1，4-二烷、二甲基亞砜或兩者的存在下進(jìn)行。
37.權(quán)利要求36的方法，其中所述反應(yīng)在有機(jī)堿的存在下進(jìn)行。
38.權(quán)利要求37的方法，其中所述有機(jī)堿為叔胺。
39.權(quán)利要求38的方法，其中所述叔胺為三乙胺或N，N-二異丙基乙胺。
40.權(quán)利要求27至39中任一項(xiàng)的方法，其中所述反應(yīng)在溶劑中進(jìn)行。
41.權(quán)利要求40的方法，其中所述溶劑是乙睛。
42.權(quán)利要求41的方法，其中反應(yīng)在約室溫至所述溶劑回流溫度的溫度下進(jìn)行。
43.權(quán)利要求35的方法，其中所述式(2)三氯乙?；衔镉靡韵路椒ㄖ苽?br> 使式(1)三環(huán)氮雜
與全鹵代烷酰鹵在足以生成所需式(2)三氯乙?；衔锏臈l件下進(jìn)行反應(yīng)。
44.權(quán)利要求43的方法，其中所述全鹵代烷酰鹵是三氯乙酰氯。
45.權(quán)利要求43或44的方法，其中所述反應(yīng)在有機(jī)堿存在下在疏質(zhì)子有機(jī)溶劑中進(jìn)行。
46.權(quán)利要求45的方法，其中所述有機(jī)堿是N，N-二異丙基乙胺。
47.權(quán)利要求45的方法，其中所述疏質(zhì)子有機(jī)溶劑是二氯甲烷或1，4-二烷。
48.權(quán)利要求45至47中任一項(xiàng)的方法，其中所述反應(yīng)在約-10℃至約室溫的溫度下進(jìn)行。
49.一種制備權(quán)利要求1的式I化合物的方法，所述方法包括使式(4)化合物
其中W為OH或鹵素；
與式(3)
RH
(3)
適當(dāng)取代的伯胺或仲胺，在足以生成權(quán)利要求1的式(I)化合物的條件下進(jìn)行偶合。
50.權(quán)利要求49的方法，其中W為Cl或Br。
51.權(quán)利要求50的方法，其中式(4)酰鹵與式(3)取代胺在叔胺存在下在疏質(zhì)子溶劑中進(jìn)行偶合。
52.權(quán)利要求51的方法，其中所述疏質(zhì)子溶劑為二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺或四氫呋喃；且所述叔胺為N，N-二異丙基乙胺。
53.權(quán)利要求51的方法，其中式(4)酰鹵與式(3)取代胺在約室溫至所述溶劑回流溫度的溫度下進(jìn)行偶合。
54.權(quán)利要求49的方法，其中W為OH。
55.權(quán)利要求54的方法，其中所述偶合包括
在至少一種活化試劑或偶合試劑的存在下，使所述羧酸(4)與式(3)的伯胺或仲胺在足以生成式(I)化合物的條件下進(jìn)行反應(yīng)。
56.權(quán)利要求55的方法，其中所述活化試劑選自
在疏質(zhì)子溶劑中的三光氣、
在1-羥基苯并三唑存在下的N，N-二環(huán)己基碳二亞胺或1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽；或者
在疏質(zhì)子溶劑中的N，N′-羰基二咪唑。
57.權(quán)利要求56的方法，其中所述反應(yīng)在有機(jī)堿存在下進(jìn)行。
58.權(quán)利要求57的方法，其中所述有機(jī)堿是叔胺。
59.權(quán)利要求57的方法，其中所述有機(jī)堿是N，N-二異丙基乙胺。
60.權(quán)利要求57至59中任一項(xiàng)的方法，其中所述反應(yīng)在催化劑存在下進(jìn)行。
61.權(quán)利要求60的方法，其中所述催化劑是4-(二甲基氨基)吡啶。
62.權(quán)利要求55至61中任一項(xiàng)的方法，其中所述偶合試劑選自羥基苯并三唑四甲基脲六氟磷酸鹽、疊氮化磷酸二苯酯、二乙基氰基膦酸酯或苯并三唑-1-基-氧基-三-(二甲氨基)六氟磷酸鹽。
63.權(quán)利要求51的方法，其中所述其中W為Cl或Br的式4化合物是通過轉(zhuǎn)化其中W為OH的式4化合物而制備的。
64.權(quán)利要求54的方法，其中所述轉(zhuǎn)化包括
使所述其中W為OH的式4化合物與亞硫酰鹵或乙二酰鹵進(jìn)行反應(yīng)。
65.權(quán)利要求64的方法，其中所述轉(zhuǎn)化在無機(jī)堿和有機(jī)堿的至少一種存在下，在疏質(zhì)子溶劑中進(jìn)行。
66.權(quán)利要求65的方法，其中所述無機(jī)堿是碳酸鉀。
67.權(quán)利要求65的方法，其中所述有機(jī)堿是吡啶、4-(二甲氨基)吡啶或叔胺。
68.權(quán)利要求67的方法，其中所述叔胺是三乙胺。
69.權(quán)利要求65的方法，其中所述疏質(zhì)子溶劑是二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺或四氫呋喃。
70.權(quán)利要求65的方法，其中所述轉(zhuǎn)化在約-5℃至約50℃的溫度下進(jìn)行。
71.一種制備權(quán)利要求1的式I化合物的方法，所述方法包括
在足以生成式(I)化合物的條件下，使式(1)三環(huán)二氮雜
與雙光氣和式(3)
RH
(3)
的伯胺或仲胺，在疏質(zhì)子溶劑中進(jìn)行反應(yīng)。
72.權(quán)利要求71的方法，其中所述溶劑是二氯甲烷。
73.權(quán)利要求71的方法，其中所述反應(yīng)在有機(jī)堿存在下進(jìn)行
74.權(quán)利要求73的方法，其中所述有機(jī)堿是三乙胺。
75.一種制備權(quán)利要求1的化合物的方法，所述方法包括
在足以生成式(27)
中間體酰胺的條件下，使式(26)三氯乙?；衔?br> 其中Pg為保護(hù)基，與式(3)
RH
(3)
適當(dāng)取代的伯胺或仲胺進(jìn)行反應(yīng)。
76.權(quán)利要求75的方法，其中Pg選自芴基烷氧羰基和烷氧羰基。
77.權(quán)利要求76的方法，其中Pg為芴基甲氧基羰基。
78.權(quán)利要求75的方法，其中Pg為叔丁氧基羰基。
79.權(quán)利要求75至78中任一項(xiàng)的方法，其中所述反應(yīng)在1，4-二烷、二甲基亞砜或兩者的存在下進(jìn)行。
80.權(quán)利要求79的方法，其中所述反應(yīng)在有機(jī)堿存在下進(jìn)行。
81.權(quán)利要求80的方法，其中所述有機(jī)堿是叔胺。
82.權(quán)利要求81的方法，其中所述叔胺是三乙胺或N，N-二異丙基乙胺。
83.權(quán)利要求80的方法，其中所述反應(yīng)在溶劑中進(jìn)行。
84.權(quán)利要求83的方法，其中所述溶劑是乙睛。
85.權(quán)利要求84的方法，其中所述反應(yīng)在約室溫至所述溶劑回流溫度的溫度下進(jìn)行。
86.權(quán)利要求75的方法，所述方法進(jìn)一步包括在足以生成式(28)中間體
的條件下，使式(27)中間體酰胺脫保護(hù)。
87.權(quán)利要求88的方法，所述方法進(jìn)一步包括在足以生成式I化合物的條件下，將式(28)中間體酰化。
88.權(quán)利要求75的方法，其中所述式(26)三氯乙?；衔镉靡韵路椒ㄖ苽?br> 在足以生成所需式(26)三氯乙酰化合物的條件下，使式(1)三環(huán)氮雜
25
其中Pg為保護(hù)基，與全鹵代烷酰鹵進(jìn)行反應(yīng)。
89.權(quán)利要求88的方法，其中所述全鹵代烷酰鹵是三氯乙酰氯。
90.權(quán)利要求88或89的方法，其中所述反應(yīng)在有機(jī)堿存在下在疏質(zhì)子有機(jī)溶劑中進(jìn)行。
91.權(quán)利要求90的方法，其中所述有機(jī)堿是N，N-二異丙基乙胺。
92.權(quán)利要求90的方法，其中所述疏質(zhì)子有機(jī)溶劑是二氯甲烷或1，4-二烷。
93.權(quán)利要求88至92中任一項(xiàng)的方法，其中所述反應(yīng)在約-10℃至約室溫的溫度下進(jìn)行。
94.一種制備權(quán)利要求1的化合物的方法，所述方法包括
使式(26)化合物
其中Pg為保護(hù)基，與堿水反應(yīng)，并除去Pg得到式(29)中間體
95.權(quán)利要求94的方法，所述方法進(jìn)一步包括在足以生成式(28)中間體
的條件下，用活化試劑和式(3)
RH
(3)
適當(dāng)取代的伯胺或仲胺，處理式(29)中間體。
96.權(quán)利要求95的方法，所述方法進(jìn)一步包括在足以生成式I化合物的條件下，將式(28)中間體?；?。
全文摘要
本發(fā)明提供了式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R、R1、R2、R3和B如說明書中所述。本發(fā)明還提供了制備這些化合物的方法。
文檔編號(hào)C07D487/04GK101213197SQ200680024251
公開日2008年7月2日 申請(qǐng)日期2006年5月11日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月12日
發(fā)明者A·A·費(fèi)利, D·A·夸利亞托, G·赫菲爾南, R·科夫蘭, 申盛珉 申請(qǐng)人:惠氏公司