專利名稱：具有改善性質(zhì)的新的 1 , 4 -苯并硫氮雜 - 1 , 1 -二氧化物衍生物、制備它們的方法 ...的制作方法
具有改善性質(zhì)的新的1，4-苯并硫氮雜萆-1，1-二氧化物衍生物、制備它們的 方法、包含所述化合物的藥物以及它們的用途本發(fā)明涉及取代的1，4-苯并硫氮雜萆(benzothiazepine)-l，l-二氧化物矛;t 生物及其生理學(xué)可接受的鹽。1，4-苯并硫氮雜萆-1，1-二氧化物衍生物及其用于治療高脂血癥和動脈 硬化以及高膽固醇血癥已經(jīng)被描述(EP 1 169 313)。本發(fā)明的目的是提供與EP 1 169 313中描述的化合物相比具有更好功 效的化合物。因此，本發(fā)明涉及式A化合物及其可藥用鹽。由于它們比起始化合物或基礎(chǔ)化合物在水中更可溶，可藥用鹽特別適 用于醫(yī)學(xué)應(yīng)用。這些鹽必須具有可藥用陰離子或陽離子。本發(fā)明化合物的 適合的可藥用酸加成鹽是無機酸鹽，所述的無機酸例如鹽酸、氬溴酸、磷 酸、偏磷酸、硝酸和A乾酸，以及有機酸鹽，所述的有機酸例如乙酸、 酸、苯甲酸、檸檬酸、乙磺酸、富馬酸、葡糖酸、羥基乙酸、羥乙磺酸、 乳酸、乳糖酸、馬來酸、蘋果酸、甲磺酸、琥珀酸、對甲苯磺酸和酒石酸。包含不可藥用陰離子的鹽(例如三氟乙酸鹽)也屬于本發(fā)明的范圍，該 鹽用作中間體用于制備或純化可藥用鹽和/或用于非治療應(yīng)用(例如體外應(yīng) 用)。本發(fā)明化合物還可以以不同的多晶型形式存在，例如作為無定形和晶 狀多晶型形式。本發(fā)明化合物的所有多晶型形式屬于本發(fā)明范圍并且是本 發(fā)明的另一個方面。在下文中所有涉及"式A化合物，，的指的是以上描述的式A化合物及 其鹽和溶劑化物。式A化合物還可以與其它活性化合物組合施用。為了獲得所需的生物學(xué)作用而需要的式A化合物的量取決于很多因 素，例如所選的特別化合物、預(yù)期的用途、施用類型和患者的臨床狀態(tài)。 通常，日劑量在0.01 mg至100 mg(通常在0.05 mg至50 mg)/天/千克體重 范圍內(nèi)，例如0.1-10 mg/kg/天?？梢钥诜┯玫膯蝿┝恐苿缙瑒┗蚰z嚢劑例如可以包含1.0至 1000 mg,通常是10至600 mg。當(dāng)式A化合物本身可以用作治療上述病 癥的化合物時，它們優(yōu)選與可接受載體一起以藥物組合物形式存在。載體 當(dāng)然必須是可接受的，這意味著它與其它組合物的成分是相容的并且對患 者的健康沒有危害。載體可以是固體或液體或兩種均可并且優(yōu)選與化合物 配制成單劑量，例如包含0.05%至95%體重活性化合物的片劑。還可以存 在其它藥物活性物質(zhì)，包括其它式A化合物。本發(fā)明藥物組合物可以-使用 已知的制藥方法中的一種方法來制備，該方法實質(zhì)上包括將組分與可藥用 載體物質(zhì)和/或輔助物質(zhì)混合。本發(fā)明藥物組合物是適合口服和經(jīng)口(例如舌下)施用的那些，即使最 適合的施用方式(在每個單獨情況中)取決于所治療病癥的性質(zhì)和嚴(yán)重程度 以及每個情況中使用的式A化合物的性質(zhì)。糖包衣制劑和糖包衣緩釋制劑 也屬于本發(fā)明的范圍。優(yōu)選抗酸和抗胃液的制劑。適合的抗胃液包衣包括 醋酞纖維素、聚醋酸乙烯鄰苯二甲酸酯、羥丙基甲基纖維素鄰苯二曱酸酯 和曱基丙烯酸和曱基丙烯酸甲酯的陰離子聚合物。用于口月艮施用的適合的藥物化合物可以以單獨單位存在，例如膠嚢劑、 扁嚢劑、錠劑或片劑，其在每個情況中包含特別量的式A化合物;散劑或 顆氺立劑；在水或非水液體中的溶液劑或混懸劑；或水包油型或油包水型乳 劑。正如已經(jīng)提及的，這些組合物可以使用任何適合的制藥方法來制備，其包括其中將活性化合物和載體(其可以包括一種或多種另外的成分)接觸 的步驟。通常，組合物通過將活性化合物與液體和/或細(xì)微分開的固體栽體 進行均勻并且均相混合，如果需要再將產(chǎn)物模制來制備。因此，片劑可以 例如借助將化合物的粉末或顆粒(如果適合的話，與 一種或多種另外的成分 一起)壓制或模制來制備。壓制片劑可以通過將自由流動形式的化合物(例 如粉末或顆粒)壓片來制備，如果適合的話，將化合物與粘合劑、潤滑劑、 惰性稀釋劑和/或(幾種)表面活性劑/分散劑在適合的機器中混合。模制片可 以通過將粉狀的化合物(將其用惰性、液體稀釋劑在適合的機器中潤濕)模 制來制備。適合經(jīng)口 (舌下)施用的藥物組合物包括錠劑(其包含式A化合物以及矯 味劑，通常是蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠)和軟錠劑(其包括在惰性基質(zhì)中的 化合物，所述的惰性基質(zhì)例如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠)。本發(fā)明的藥物組合物的另 一個實施方案包含適合的金屬鹽，例如鉀、 鋁、鐵、銅、鋅、鎂、錳或鋅鹽。優(yōu)選的是釣和鋅鹽，例如磷酸鋅、乳酸 4丐、碳酸鉀、葡糖酸4丐、乙酸鉀、磷酸鋅、乳酸鋅、碳酸鋅、葡糖酸鋅或 乙酸鋅。向藥物組合物中加入這些鹽可以減少或預(yù)防患者腹瀉的發(fā)生。以下適合用作組合制劑的另外的活性化合物在Roten Liste [Red List] 2005的第12章中命名的所有抗糖尿病藥。 它們可以與本發(fā)明式A化合物組合，特別用于協(xié)同改善作用的目的。該活式(其中在一個藥物制劑中存在數(shù)個活性化合物)施用來施用。以下引用的 大多數(shù)活性化合物7>開于USP Dictionary of USAN and International Drug Names, US Pharmacopeia, Rockville, 2001)中?？固悄虿∷幇ㄒ葝u素和胰島素衍生物(例如Lantus⑧(參見 www.lantus.com)或HMR 1964)、快速作用胰島素(參見US 6,221,633)、 GLP-1衍生物(例如WO 98/08871中Novo Nordisk A/S公開的、WO/04156 中Zealand公開的以及WO 00/3433l中Beaufour-Ipsen公開的那些)以及 還包括口服有效降血糖的活性化合物?？谠卖抻行Ы笛堑幕钚曰衔飪?yōu)選包括磺酰脲類、雙胍類、氯茴苯酸類、5悉二唑烷二酮類、瘞唑烷二酮類、葡萄糖普酶和糖原磷酸化酶抑制劑、胰高血糖素拮抗劑、GLP-l-激動劑、鉀通道開放劑(例如WO 97/26265和 WO 99/03861中Novo NordiskA/S公開的那些)、胰島素增敏劑、肝酶(涉 及剌激糖異生和/或糖原分解)抑制劑、葡萄糖攝取、葡萄糖轉(zhuǎn)運和葡萄糖 重吸收的調(diào)節(jié)劑、改變脂肪代謝的化合物(例如抗高血脂活性化合物和抗血 脂活性化合物)、降低食物攝取的化合物、PPAR激動劑和PXR激動劑以 及作用于P細(xì)胞的ATP-依賴性鉀通道的活性化合物。在本發(fā)明的一個實施方案中，式A化合物與HMGCoA還原酶抑制劑 組合施用，所述的HMGCoA還原酶抑制劑例如辛伐他汀、氟伐他汀、普 伐他汀、洛伐他汀、阿托伐他汀、西立伐他汀或羅蘇伐他汀。在本發(fā)明的一個實施方案中，式I化合物與膽固醇吸收抑制劑例如依 澤替米貝、替奎安、帕馬普組合施用，或與PCT/EP 2004/00269、 PCT/EP 2003/05815、 PCT/EP 2003/05814、 PCT/EP 2003/05816、 EP 0114531或 US 6，498，156中描述的化合物組合施用。在本發(fā)明的一個實施方案中，式A化合物與PPAR y激動劑組合施用， 所述的PPARY激動劑例如羅格列酮、吡格列酮、JTT-501或GI 262570。在本發(fā)明的一個實施方案中，式A化合物與PPAR a激動劑組合施用， 所述的PPAR (t激動劑例如GW 9578或GW 7647。在本發(fā)明的一個實施方案中，式A化合物與混合的PPAR o/y激動劑 組合施用，所述的混合的PPAR oAr激動劑例如GW 1536、 AVE 8042、 AVE 8134或AVE 0847或PCT/US 00/11833、 PCT/US 00/114卯或WO 03/020269中描述的。在本發(fā)明的一個實施方案中，式A化合物與貝特類組合施用，所述的 貝特類例如非諾貝特、氯貝特或勤L貝特。在本發(fā)明的一個實施方案中，式A化合物與MTP抑制劑組合施用， 所述的MTP抑制劑例如英普他派、BMS-201038或R-103757。在本發(fā)明的一個實施方案中，式A化合物與CETP抑制劑組合施用， 所述的CETP抑制劑例如JTT-705。在本發(fā)明的一個實施方案中，式A化合物與聚膽汁酸吸收劑組合施用，所迷的聚膽汁酸吸收劑例如考來烯胺或考來維侖。在本發(fā)明的一個實施方案中，式A化合物與LDL受體誘導(dǎo)劑(參見US 6，342,512)組合施用。在本發(fā)明的一個實施方案中，式A化合物與ACAT抑制劑組合施用， 所述的ACAT抑制劑例如阿伐麥布。在本發(fā)明的一個實施方案中，式A化合物與抗氧化劑組合施用，所述 的抗氧化劑例如OPC-14117。在本發(fā)明的一個實施方案中，式A化合物與脂蛋白脂肪酶抑制劑組合 施用，所述的脂蛋白脂肪酶抑制劑例如NO-1886。在本發(fā)明的一個實施方案中，式A化合物與ATP檸檬酸裂解酶抑制 劑組合施用，所迷的ATP檸檬酸裂解酶抑制劑例如SB-204990。在本發(fā)明的一個實施方案中，式A化合物與角鯊烯合成酶抑制劑組合 施用，所述的角鯊烯合成酶抑制劑例如BMS-188494。在本發(fā)明的一個實施方案中，式A化合物與脂蛋白(a)拮抗劑組合施用 所述的脂蛋白(a)拮抗劑例如CI-1027或煙酸。在本發(fā)明的一個實施方案中，式A化合物與脂肪酶抑制劑組合施用， 所述的脂肪酶抑制劑例如奧利司他。在本發(fā)明的一個實施方案中，式A化合物與胰島素組合施用。在一個實施方案中，式A化合物與磺酰脲類組合施用，所述的磺酰脲 類例如甲笨璜丁脲、格列本脲、格列吡溱或格列美脲。在一個實施方案中，式A化合物與雙胍類組合施用，所述的雙胍類例 如二甲雙胍。在另一個實施方案中，式A化合物與氯茴苯酸類組合施用，所述的氯 茴苯酸類例如瑞格列奈。在一個實施方案中，式A化合物與瘞唑烷二酮類組合施用，所述的瘞 唑烷二酮類例如曲格列酮、環(huán)格列酮、吡格列酮、羅格列酮或WO 97/41097 中Dr. Reddy，s Research Foundation公開的化合物，特別是5-[[4-(3，4-二氬 -3-甲基-4-氧代-2-喹唑啉基甲氧基)苯基曱基]-2，4-噻唑烷二酮)。在一個實施方案中，式A化合物與a-葡萄糖普酶抑制劑組合施用，所述的a-葡萄糖苷酶抑制劑例如米格列醇或阿卡波糖。在一個實施方案中，式A化合物與腺苷Al激動劑組合施用，所述的 腺苷Al激動劑例如EP 0912520或PCT/EP 06749中描述的那些。在一個實施方案中，式A化合物與作用于P細(xì)胞的ATP依賴性鉀通道 的活性化合物組合施用，所述的作用于P細(xì)胞的ATP依賴性鉀通道的活性 化合物例如甲苯磺丁脲、格列本脲、格列吡喚、格列美脲或瑞格列奈。在一個實施方案中，式A化合物與多于一種的上述化合物組合施用， 例如與磺酰脲類和二曱雙胍、磺酰脲類和阿卡波糖、瑞格列奈和二甲雙胍、 胰島素和磺酰脲類、胰島素和二曱雙胍、胰島素和曲格列酮、胰島素和洛 伐他汀等組合施用。在另一個實施方案中，式A化合物與以下物質(zhì)組合施用CART調(diào)節(jié) 劑(參見"cocaine-amphetamine畫regulated transcript influences energy metabolism, anxiety and gastric emptying in mice" Asakawa， A等人，M.: Hormone and Metabolic Research (2001)， 33(9)， 554-558)、 NPY拮抗劑(例 如萘小磺酸—(4-[(4-氨基喹唑啉-2-基氨基)甲基]環(huán)己基-甲基}酰胺鹽酸鹽 (CGP 71683A))、大麻素受體1拮抗劑(參見例如EP 0656354、 WO 00/15609 或WO 02/076949)、 MC4激動劑(例如l-^-l，2，3，4-四氬萘-2-甲酸2-(3a-芐基-2-甲基-3-氧代-2，3，3a,4，6，7-六氫吡唑并[4，3-c吡啶-5-基)-l-(4-氯苯 基)-2-氧代乙基酰胺；(WO 01/91752))、食欲肽拮抗劑(例如l-(2-甲基苯并 哺、唑-6-基)-3-l，5]二氮雜萘-4-基脲鹽酸鹽(SB-334867-A))、 H3激動劑(3-環(huán) 己基-l-(4，4-二甲基-1，4，6，7-四氫咪唑并[4，5-c吡啶-5-基)-丙-1-酮草酸鹽 (WO 00/63208))、 TNF激動劑、CRT拮抗劑(例如2-甲基-9-(2，4，6-三甲基 苯基)-9H-l，3，9-三氮雜茴-4-基l二丙胺(WO 00/66585))、 CRF BP拮抗劑(例 如尿皮質(zhì)素(urocortin))、尿皮質(zhì)素激動劑、|33-激動劑(例如l-(4-氯-3-甲磺 ?；谆交?-2-[2-(2，3-二甲基-lH-吲哚-6-基氧基)乙基氨基乙醇鹽酸鹽 (WO 01/83451))、 MSH(促黑素細(xì)胞激素)激動劑、MCH(濃縮黑色素激素) 受體拮抗劑(參見例如WO 03/15769)、 CCK-A激動劑(例如{2-[4-(4-氯-2,5-二甲氧基苯基)-5-(2-環(huán)己基乙基)噻唑-2-基氨基甲?；?/b>-5，7-二甲基吲哚-l-基}乙酸三氟乙酸鹽(WO 99/15525)或SR-146131(WO 0244150)或SSR-125180)、 5-羥色胺重攝取抑制劑(例如右芬氟拉明)、混合的5-羥色胺 能和去甲腎上腺素能化合物(例如WO 00/71549)、 5HT激動劑(例如1-(3-乙基苯并呋喃-7-基)哌溱草酸鹽(WO 01/09111))、鈴蟾肽激動劑、甘丙肽拮 抗劑、生長激素(例如人生長激素)、釋;故生長激素的化合物(6-節(jié)氧基-1-(2-二異丙基氨基乙基氨基甲?；?-3，4-二氫-lH-異喹啉-2-甲酸叔丁酯(WO 01/85695))、 TRH激動劑(參見例如EP 0 462 884)、解偶聯(lián)蛋白2或蛋白3 調(diào)節(jié)劑、瘦蛋白激動劑(參見例如Lee， Danid W.; Leinung, Matthew C.; Rozhavskaya-Arena， Marina; Grasso， Patricia. Leptin agonists as a potential approach to the treatment of obesity. Drugs of the Future (2001)， 26(9)， 873-881)、 DA激動劑(溴隱亭、doprexin)、脂肪酶/淀粉酶抑制劑(例 如WO 00/40569)、 PPAR調(diào)節(jié)劑(例如WO00〃8312)、 lip-HSDl(ll-P畫羥 基類固醇脫氫酶1型)抑制劑(參見例如WO 01/90094或T. Barf等人，J. Med. Chem. (2002)， 45， 3813-3815)、乙酰輔酶A羧化酶(ACC;參見例如 WO 99/46262)抑制劑、二肽基肽酶IV(DPP-IV;參見例如EP 1259246)抑 制劑、RXR調(diào)節(jié)劑或TR-P-激動劑。在本發(fā)明的一個實施方案中，其它活性化合物是瘦蛋白，參見例如 "Perspectives in the therapeutic use of leptin，，， Salvador, Javier; Gomez-Ambrosi, Javier; Fruhbeck， Gema， Expert Opinion on Pharmacotherapy (2001)， 2(10), 1615-1622。在一個實施方案中，其它活性化合物是右苯丙胺或苯丙胺。 在一個實施方案中，其它活性化合物是芬氟拉明或右芬氟拉明。 在另一個實施方案中，其它活性化合物是西布曲明。 在一個實施方案中，其它活性化合物是奧利司他。 在一個實施方案中，其它活性化合物是馬吲哚或芬特明。 在一個實施方案中，式A化合物與壓載物質(zhì)(ballast substance),優(yōu)選 不溶性的壓載物質(zhì)(參見例如carob/Caromax⑧(Zunft H J等人，Carob pulp preparation for treatment of hypercholesterolemia, ADVANCES IN THERAPY (2001 Sep-Oct)， 18(5)， 230-6)組合施用。Caromax是含角豆的產(chǎn) 物，來源于Nutrinova, Nutrition Specialties & Food Ingredients GmbH，Industriepark Hoechst, 65926 Frankfurt/Main 。與Caromax⑧的纟且合可以 在一個制劑中或通過分別施用式A化合物和Caromax⑧來發(fā)揮作用。關(guān)于 這一點，Caromax⑧也可以以食品(例如以面包、餅和軟點心或早餐棒 (muesli bar))形式施用。應(yīng)當(dāng)理解的是本發(fā)明化合物與一種或多種上述化合物以及(如果需要) 一種或多種另外的藥物活性物質(zhì)的每個適合的組合被認(rèn)為包括在本發(fā)明的 被保護范圍內(nèi)。<formula>formula see original document page 12</formula><formula>formula see original document page 13</formula><formula>formula see original document page 14</formula>化合物la的合成對映異構(gòu)體純的化合物la是通過手性色譜法由外消旋苯胺 (anmde)l(EP 1169313化合物8a/b)獲得的，手性色鐠法使用Chiralpak AS-H76,流動相是正庚烷/甲醇/乙醇10/1/1加0.1% DEA。通過從THF/EA/ 正庚烷中結(jié)晶，進一步純化化合物la(ee 99.9。/。)是可能的。優(yōu)對映體具有 正的旋光性，并且絕對立體化學(xué)通過單晶X-射線結(jié)構(gòu)來確定。化合物5的合成在80°C下，將4.5 g的葡糖胺4(Aldrich)溶于100 mL的DMF中，然 后加入5 g的N-(千氧基m^氧基)琥珀酰亞胺(ABCR)。 20分鐘后，滴加 100 mL的乙酸酐/吡啶(l:l)，并且將反應(yīng)溶液在50。C下保持1小時。將溶 劑在高真空下蒸餾，并且將殘留物經(jīng)快速色i普純化。產(chǎn)量10.1 g(77。/。)的5， 其為無色固體。TLC(正庚烷/乙酸乙酯1:2)， <formula>formula see original document page 14</formula>。化合物6的合成將17.45 g的五乙酸酯5溶于200 mL的0.25 M曱醇鹽酸中，并且在 氬氣氣氛下加入1.3 g的10%鈀活性碳。在5 bar的氫氣壓下，在室溫下將 混合物氫化1小時。將催化劑除去并且蒸餾出約150 mL的甲醇。加入MTB 醚后，將鹽酸鹽6沉淀出來。獲得13 g(92。/。)的無色固體6。<formula>formula see original document page 14</formula>。化合物2的合成將1.5 g的鹽酸鹽6懸浮于50 mL的二氯甲烷中并且在氬氣下冷卻至0 。C。在該懸浮液中依次加入1.5g的三光氣和3mL的三乙胺，并且將混合 物在0t:下攪拌1小時。將反應(yīng)溶液用50 mL的正庚烷/乙酸乙酯(l:l)稀釋 并且通過少量硅膠過濾。將溶劑蒸餾，得到1.52 g的無定形固體2，其為 粗產(chǎn)物，其不經(jīng)進一步純化直接用于下一步?；衔?的合成在室溫下，將$.45 g(12.3 mmol)的苯胺la和3.58 g(8.5 mmol)的異氰 酸酯2溶于150 mL的二氯曱烷中。室溫下l小時后，將混合物濃縮并且 將殘留物經(jīng)快速色譜純化。產(chǎn)量4.72g(64。/o)的3，其為無色固體。TLC(正 庚烷/乙酸乙酯l:2)， R產(chǎn)0.3。 C42H60N4O13S(861.03)。 MS(M+H)+=861.59?；衔顰的合成將4.7 g的3溶于60 mL的甲醇和20 mL的三乙胺中并且在室溫下放 置16小時。將溶液濃縮并且將殘留物經(jīng)快速色譜純化(二氯甲烷/甲醇/濃氨 30/10/3)。產(chǎn)量2.17 g(60。/。)的A，其為無定形固體。TLC(二氯甲烷/曱醇/ 濃氨30/10/3)， R產(chǎn)0.4。 C32H50N4O8S(650.84)。 MS(M+H)+=651.34。本發(fā)明的化合物A的生物學(xué)試驗是應(yīng)用體外IBAT抑制試驗來進行 的。該試驗檢查了本發(fā)明化合物對重組表達(dá)的人鈉依賴性回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運 體的轉(zhuǎn)運活性的作用(IBAT-回腸Na+Z膽汁酸共轉(zhuǎn)運體，ASBT-頂端鈉依 賴性膽汁酸轉(zhuǎn)運體，SLC10A2-溶質(zhì)栽體家族10，成員2)。體外IB AT抑制試驗的準(zhǔn)備和實踐1. 人IBAT表達(dá)載體的克隆使用例如Joseph Sambrook和David Russell的Molecular Cloning: A Laboratory Manual中描述的分子生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)方法克隆人IBAT的 cDNA(互補脫氧核糖核酸)并且將其引入到pcDNAl載體(來自Invitrogen) 中。引入片段的隨后測序顯示其與P. A. Dawson描述的并且存放在 GenBank序列數(shù)據(jù)庫(GenBank Accesion Number: U10417)中的人IBAT 的堿基序列的堿基599至1645完全一致。堿基599至1645相應(yīng)于人IBAT 的完全編碼區(qū)。2. 組成性表iiAlBAT的重組細(xì)胞系的制備將人IBAT表達(dá)載體通過穩(wěn)定轉(zhuǎn)染引入到CHO(中國倉鼠卵巢)細(xì)胞 中。為了挑選單細(xì)胞克隆，將400嗎/mL的遺傳霉素加入到細(xì)胞培養(yǎng)基 (Ham's F12培養(yǎng)基，補充有10%胎牛血清、100單位/mL的青霉素、100 單位/mL的鏈霉素)中。由篩選獲得的單細(xì)胞克隆的功能性通過它們對》文射 性標(biāo)記的牛磺膽酸(^H-TCA)的攝取活性進行試驗。將對pH-TCA具有最 高攝取活性的細(xì)胞克隆(后面以CHO-hIBAT表示)挑選出來進行進一步試 驗并且在400嗎/mL的遺傳霉素的存在下進一步培養(yǎng)。3.本發(fā)明化合物對IBAT依賴性攝取?；悄懰徇M入細(xì)胞的抑制作用的測量將CHO-hIBAT細(xì)胞以40000個細(xì)胞/孔的濃度接種于在聚-D-賴氨酸 包被的96孔板中的細(xì)胞培養(yǎng)基中并且培養(yǎng)24小時。然后將細(xì)胞用不含鈉 的轉(zhuǎn)運試驗緩沖液(140 mM氯化膽堿、2 mM氯化鉀、1 mM氯化鎂、1 mM 氯化釣、10 mM HEPES/Tris， pH 7.5)洗滌一次，然后在室溫下用不含鈉 的轉(zhuǎn)運試驗緩沖液(作為陰性對照)或與含鈉的轉(zhuǎn)運試驗緩沖液(140 mM氯 化鈉、2 mM氯化鉀、1 mM氯化鎂、1 mM氯化釣、10 mM HEPES/Tris， pH 7.5)(作為陽性對照)培養(yǎng)30分鐘。同時，將試驗孔也在不同濃度的待測 化合物的存在下在室溫下、在含鈉的轉(zhuǎn)運試驗緩沖液中培養(yǎng)30分鐘。使用 在二曱亞砜中的10 mM儲備液，將試驗物質(zhì)在轉(zhuǎn)運試驗緩沖液中適當(dāng)稀釋 (40 pL/孔)。然后通過加入10 laL/孔的放射性標(biāo)記的?；悄懰?卩H]-TCA) 和未標(biāo)記的牛磺膽酸的混合物開始試驗。試驗中牛磺膽酸的終濃度是10 ^M。在室溫下培養(yǎng)60分鐘后，通過加入100pL/孔的不含鈉的轉(zhuǎn)運試驗緩 沖液(4'C)來終止反應(yīng)，并且每孔用不含鈉的轉(zhuǎn)運試驗緩沖液洗滌三次。最 后，在每孔中加入100 (iL的閃爍液，并且在MicroBeta閃爍微量板讀數(shù)器 (來自Wallac)上確定才IU^細(xì)胞中的放射性。試驗化合物的半最大抑制作用(IC50值，抑制濃度50)確定如下 1.0%抑制值的確定。這是在物質(zhì)不存在下，在含鈉的轉(zhuǎn)運試驗緩沖液 中測定的值。2.100%抑制值的測定。這是在物質(zhì)不存在下，在不含鈉的轉(zhuǎn)運試驗緩 沖液中測定的值。3.測量的抑制值(百分?jǐn)?shù))的計算，該測量在不同濃度的待測化合物的 存在下進行。使用這些數(shù)值，才可能確定牛磺膽酸攝取減少50%時的化合 物濃度(IC50值)。對于實施例A， IC50(人IBAT)為0.155 ^M。為了進行比較，還測定了來自EP 1 169 313的結(jié)構(gòu)最相似的化合物。 對于下式化合物lla(來自實施例5): <formula>formula see original document page 17</formula> IC50(人IBAT)為0.319uM,本發(fā)明的化合物A的活性是來自EP 1 169 313的比較的實施例的活性 的206%。
權(quán)利要求
1.式A化合物或其可藥用鹽
2. 藥物，該藥物包含權(quán)利要求l中要求的化合物。
3. 藥物，該藥物包含權(quán)利要求l中要求的化合物以及至少一種其它活 性化合物。
4. 權(quán)利要求3中要求的藥物，其包含作為其它活性化合物的一種或多 種^f吏脂質(zhì)代謝正?；幕衔?。
5. 權(quán)利要求3或4中要求的藥物，其包含作為其它活性化合物的一種 或多種抗糖尿病藥、降血糖活性化合物、減肥藥、減食欲藥、HMG-CoA 還原酶抑制劑、膽固醇吸收抑制劑、PPAR y激動劑、PPAR a激動劑、PPAR a"激動劑、貝特類、MTP抑制劑、CETP抑制劑、聚膽汁酸吸收劑、LDL 受體誘導(dǎo)劑、ACAT抑制劑、抗氧化劑、脂蛋白脂肪酶抑制劑、ATP檸檬 酸裂解酶抑制劑、角鯊烯合成酶抑制劑、脂蛋白(a)拮抗劑、脂肪酶抑制劑、 胰島素、磺酰脲類、雙胍類、氯茴苯酸類、噻唑烷二酮類、a-葡萄糖苷酶 抑制劑、作用于P細(xì)胞的ATP-依賴性鉀通道的活性化合物、CART激動劑、 NPY激動劑、大麻素受體l拮抗劑、MCH受體拮抗劑、MC4激動劑、食 欲肽激動劑、H3激動劑、TNF激動劑、CRF激動劑、CRFBP拮抗劑、 GLP-1衍生物、urocortin激動劑、P3激動劑、MSH(促黑素細(xì)胞激素)激 動劑、CCK-A激動劑、5-羥色胺重才聶取抑制劑、混合的5-羥色胺和去甲腎 上腺素能化合物、5HT激動劑、鈴蟾肽激動劑、甘丙肽拮抗劑、生長激素、釋放生長激素的化合物、TRH激動劑、解偶聯(lián)蛋白-2或-3調(diào)節(jié)劑、瘦蛋白 激動劑、DA激動劑(溴隱亭、d叩rexin)、脂肪酶/淀粉酶抑制劑、11(3-HSD1 抑制劑、ACC抑制劑、DPP-IV抑制劑、PPAR調(diào)節(jié)劑、RXR調(diào)節(jié)劑或 TR-P-激動劑或苯丙胺。
6. 權(quán)利要求2、 3、 4或5中任意一項要求的藥物，其包含作為其它輔 劑的一種或多種金屬鹽。
7. 權(quán)利要求l中要求的化合物，其用作治療脂質(zhì)代謝障礙的藥物。
8. 制備包含權(quán)利要求l中要求的化合物的藥物的方法，該方法包括將 活性化合物與可藥用載體混合并且將該混合物制成適合施用的形式。
9. 權(quán)利要求l中要求的化合物在制備用于治療高脂血癥的藥物中的用途。
10. 權(quán)利要求1中要求的化合物在制備用于降低血清膽固醇濃度的藥 物中的用途。
11. 權(quán)利要求1中要求的化合物在制備用于治療動脈硬化癥狀的藥物 中的用途。
12. 權(quán)利要求1中要求的化合物在制備用于治療抗胰島素性的藥物中 的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(A)化合物及其生理學(xué)可接受的鹽。所述的化合物適合作為例如降血脂藥。
文檔編號C07D281/10GK101218217SQ200680025006
公開日2008年7月9日 申請日期2006年7月13日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月15日
發(fā)明者H·格隆比克, H·霍耶爾, H-L·舍費爾, S·泰斯, W·弗里克 申請人:塞諾菲-安萬特德國有限公司