專利名稱：：半胱氨酸蛋白酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及半胱氨酸蛋白酶抑制劑，特別是那些木瓜蛋白酶超家族的抑制劑。本發(fā)明提供用于源于生理蛋白酶(比如組織蛋白酶K)失衡的疾病的預(yù)防或者治療中的新穎化合物。相關(guān)領(lǐng)域的描述半胱氨酸蛋白酶的木瓜蛋白酶超家族廣泛分布于包括哺乳動(dòng)物、無脊推動(dòng)物、原生動(dòng)物、植物和細(xì)菌的多種物種中。已經(jīng)將多種哺乳動(dòng)物組織蛋白酶，包括組織蛋白酶B、F、H、K、L、O和S歸于該超家族，并且它們活性的不適當(dāng)調(diào)整與多種代謝失調(diào)具有復(fù)雜的聯(lián)系，包括關(guān)節(jié)炎、肌營養(yǎng)不良、炎癥、腎小球腎炎和腫瘤侵入。比如酶的致病組織蛋白酶包4舌牙法艮p卜對木單胞菌(bacterialgingipains)、malarialfalcipainsI、II、III及其下屬和來源于卡氏肺嚢蟲、克氏錐蟲和布氏錐蟲、Crithidiafusiculata、血吸蟲物種的半胱氨酸蛋白酶。組織蛋白酶K的不適當(dāng)調(diào)整已經(jīng)與多種疾病具有復(fù)雜的聯(lián)系，包括骨質(zhì)疏+〉癥、齒齦疾病(比如牙齦炎和牙周炎)、佩吉特病、惡性腫瘤的血釣過多和新陳代謝骨骼疾病。鑒于在骨關(guān)節(jié)炎滑膜的破軟骨細(xì)胞中的升高水平，組織蛋白酶K與多種特征在于過度軟骨或者基體降解的疾病具有復(fù)雜的聯(lián)系，比如骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。轉(zhuǎn)移性的腫瘤細(xì)胞一般表達(dá)高水平的降解周圍基體的蛋白水解酶，和由此，對組織蛋白酶K的抑制作用可以有助于治療胂瘤形成。國際專利申請WO02057270公開了式I化合物其中UVWXY寬泛地對應(yīng)于二肽半胱氨酸蛋白酶抑制劑的P3和P2,Z尤其為O、S、亞甲基或-NR-,W為烷基、烷基芳基等等，和P1和Q1各自為亞曱基，任選被多種碳鏈和環(huán)狀基團(tuán)取代。所述化合物宣稱可以用于治療比如錐體蟲的原生動(dòng)物感染。其中沒有具體公開P2/P3酰胺鍵的卣代烷基電子等排體。我們現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)，在特定的環(huán)位置引入卣素原子結(jié)合離化P3/P2連接產(chǎn)生組織蛋白酶K的有效抑制劑。發(fā)明簡述根據(jù)本發(fā)明，提供了式II化合物R^和R^中之一為卣素和另一個(gè)為H或者卣素；R3為任選氟化的-CrCs直鏈或者支鏈烷基，或者CH2CRSC3-CV環(huán)烷基；R5為H、C廣C2烷基、d-C2卣代烷基、鞋基、OC廣C2烷基、氟；RS為穩(wěn)定的、任選取代的單環(huán)或者二環(huán)碳環(huán)或者雜環(huán)，所述或各個(gè)環(huán)具有4、5或者6個(gè)環(huán)原子和03個(gè)選自S、O和N的雜原子，和其中任選的取代基包括1~3個(gè)選自R7的成員；R7獨(dú)立地選自卣素、氧代、腈、硝基、d-C4烷基、-XNRdRe、-XNReR8、-NReXR8、NH2CO-、X-R8、X-O-R8、O-X畫R8、X-C(=0)R8、X-(OO)NRdR8、X-NReC(=0)R8、X-NHSOmR8、X-S(=0)mR8、X-C(喝OR8、X-NReC(=0)OR8;RS獨(dú)立地為H、d-C4烷基、C3-C6環(huán)烷基、吡咯烷基、哌啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、哌嗪基、二氫。引哚基、吡喃基、硫代吡喃基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、p惡唑基、異-惡唑基、瘞唑基、咪唑基、吡啶基、嘧啶基、吡。秦基、吲哚基、苯基，它們各自任選被最多3個(gè)選自119的其中R4為H;成員取代；R9獨(dú)立地選自羥基、XR1。、-XNRdRe、-XNReR1Q、-NReC廣Q烷基R10、氰基、-S(=0)mRe、羧基、氧代、d-C4烷基、d-C4鹵代烷基、d-Qr烷氧基、d-C4烷?；?、氨基曱?；籖^為C3-C6環(huán)烷基、吡咯烷基、哌啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、哌嗪基、二氫吲哚基、吡喃基、硫代吡喃基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、哺唑基、異喝唑基、噻唑基、咪唑基、吡咬基、嘧啶基、吡溱基、吲哚基、苯基，它們?nèi)我槐籨-C4烷基、卣素、羥基、d-Ct烷氧基取代；X獨(dú)立地為結(jié)合鍵或者C廣C4亞烷基；Ra獨(dú)立地為H、d-C4烷基或者CH3C(=0);Rb為CrC4囟代烷基；Rc為H、C廣C4烷基；Rd獨(dú)立地為H、CrCt烷基或者CH3C(=0);Re獨(dú)立地為H、d-C4烷基；或者Rd和Re與它們連接的N原子合起來形成任選被W取代的嗎啉、旅咬、。底漆或者吡咯烷環(huán)；m獨(dú)立地為0、1或者2;或者其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或者N-氧化物。式歸于具體i量，在此^用的pi:p2和p3^又僅是:為了便二起見進(jìn)行提供，它們具有它們的常規(guī)含義，表示抑制劑被認(rèn)為分別充填所述酶S1、S2和S3亞位點(diǎn)的那些部分，其中S1鄰近斷裂位點(diǎn)并且S3遠(yuǎn)離斷裂位點(diǎn)。優(yōu)選p1基團(tuán)的立體化學(xué)如以下部分結(jié)構(gòu)所表明優(yōu)選W和/或R的卣素為氯，并且最優(yōu)選為氟。當(dāng)前優(yōu)選W為卣素，特別是氟，和W為H,但是本發(fā)明擴(kuò)展至其中W為鹵素，特別是R1*、R2F,和112為H或者W和I^各自為F的化合物。應(yīng)當(dāng)理解，Pl基團(tuán)可以以備選形式存在，比如且本發(fā)明擴(kuò)展至所有所述備選形式。優(yōu)選P2基團(tuán)的立體化學(xué)對應(yīng)于如以下部分結(jié)構(gòu)所表明的L-氨基酸:但是本發(fā)明還擴(kuò)展至D-異構(gòu)體。本發(fā)明還包括在其它手性中心上的所有異構(gòu)體和對映異構(gòu)體。當(dāng)前優(yōu)選的P2基團(tuán)包括其中114為H和其中W為異丁基或者均叔丁基(即-CH2C(CH3)3)的那些P2基團(tuán)，如下所示當(dāng)R"為H時(shí)，RS的其它實(shí)施方案包括具有以下部分結(jié)構(gòu)的那些:其中RS如上所定義。合意地，RS為H,由此限定了P2上的環(huán)丁基曱基側(cè)鏈。W的代表值包括甲基、羥基、氟代甲基、二氟曱基或者三氟曱基:據(jù)此，P2側(cè)鏈的優(yōu)選值包括，特別是反映L氨基酸的那些。當(dāng)前優(yōu)選的P2基團(tuán)包括z<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>當(dāng)前，優(yōu)選表明在式II中的Ra為H。優(yōu)選Rb的卣代烷基包括卣代甲基，比如氟代曱基、二氟甲基并且優(yōu)選三氟曱基。一^:地Rc為H和RS為如以下部分結(jié)構(gòu)所示的獨(dú)立環(huán)狀系統(tǒng)其中為了例證說明的目的，R6的例證為取代苯基和Rb為三氟甲基優(yōu)選本發(fā)明化合物包含在帶有卣代烷基Rb的碳上具有高光學(xué)異構(gòu)體純度的S立體構(gòu)型，比如大于80%,優(yōu)選大于95%,比如大于97%。以下部分結(jié)構(gòu)表示Rb為三氟甲基和Rc為H的典型S-對映異構(gòu)體現(xiàn)在返回至式II,一般116為具有5或者特別是6個(gè)環(huán)原子的單環(huán)，或者包含稠合至4、5或者6元環(huán)上的6元環(huán)的二環(huán)結(jié)構(gòu)。一般的R6基團(tuán)包括飽和或者不飽和的雜環(huán)或者飽和或者不飽和的碳環(huán)，它們各自任選如上所述被取代。例證性的變量包括C^環(huán)烷基、苯基、千基、四氫萘基、茚基、茚滿基和雜環(huán)基，比如氮雜環(huán)庚烷基、azocanyl、吡咯烷基、哌啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、哌嗪基、二氫吲味基、吡喃基、四氫吡喃基、四氫瘞喃基、硫代吡喃基、呋喃基、四氫呋喃基、噻吩基、吡咯基、-惡唑基、異哺唑基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、四唑基、吡唑基、p引咪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并嚅唑基、苯并異嘈、唑基、壹淋基、四氳喹啉基、異全啉基、四氫異會(huì)啉基、喹唑啉基、四氫喹唑啉基和會(huì)喔啉基，其任一可以如上所述被取代。由此，所述飽和雜環(huán)包括比如以下的基團(tuán)，吡咯啉基、吡咯烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、哌啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、吡喃基、硫代吡喃基、哌嗪基、二氫吲哚基、氮雜環(huán)丁烷基、四氫吡喃基、四氫噻喃基、四氫^^喃基、六氫嘧咬基、六氫。達(dá)。秦基、1,4,5,6-四氫嘧啶基胺、二氫喵唑基、1,2-噻。秦基-1,1-二氧化物、1,2,6-噻二。秦基-1,1-二氧化物、異噻唑啉基-l,l-二氧化物和咪唑啉基-2,4-二酮，同時(shí)不飽和雜環(huán)包括以下基團(tuán)，比如呋喃基、噻吩基、吡咯基、P惡唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、異^惡唑基、異噻唑基、哺二唑基、三唑基、四唑基、噻二唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、中氮茚基、吲咮基、異氮雜茚基。在各種情形中，所述雜環(huán)可以與苯基環(huán)縮合，從而形成雙環(huán)系統(tǒng)。優(yōu)選的單環(huán)R"基團(tuán)包括取代吡啶基、取代嘧啶基、取代苯基，特別是被環(huán)狀基團(tuán)取代的苯基，所述環(huán)狀基團(tuán)比如吡咯烷-l-基、哌啶-l-基、4-曱基哌啶-l-基、4-(哌啶-3-基曱基)-哌啶-l-基、嗎啉-4-基、4-甲基哌嗪-l-基、2-嗎啉-4-基-乙氨基、2-嗎啉-4-基-乙氧基、l-吡啶-2-基曱基氨基、哌溱-l-基、哌啶-4-基或者N-哌嗪基，被RaN-取代，或者被-NRaRb4-取代的艱。定-l-基。苯基W合意地在3或者4位(對或者間位)被取代，例如被所述環(huán)狀基團(tuán)取代。單環(huán)R6(比如苯基)的另一種環(huán)狀取代基包括芳基(比如苯基)或者5或6元雜芳基(比如p塞吩、呋喃基、三唑、瘞唑、二唑、吡唑或者吡咯烷)。關(guān)于這一點(diǎn)，優(yōu)選的環(huán)狀取代基包括噻唑-2-基、吡啶-3-基并且特別是吡啶-2-基、噻吩-2-基或者噻唑-5-基。該環(huán)狀取代基(即R7)一般直接鍵接在所述RS基團(tuán)上(即X為結(jié)合鍵)，但是還可以包括例如胺間隔基(比如-NH-、-N(Me)、-CH2NH、-CH2N(Me)-)、C廣C3烷基間隔基(比如-CHr)或者C廣CV烷氧基間隔基(比如乙氧基)。在前一段中，RS的任何環(huán)狀取代基可以如上所述被R"取代。例如，比如p塞唑基的雜環(huán)R卩基團(tuán)可以被d-C4烷基(比如曱基)取代。優(yōu)選在前兩段中，R6的任何環(huán)狀取代基可以自身被一般為飽和雜環(huán)基團(tuán)的環(huán)狀基團(tuán)(比如哌啶、哌。秦或者嗎啉)取代(即，R7包含119部分)，所述飽和環(huán)狀基團(tuán)任選被取代，例如被d-C3烷基、氟、二氟、d-C3烷氧基或者d-C3烷氧基d-C3烷基取代。如f定義中所提供，該飽和環(huán)狀基團(tuán)(即R9)可以通過X(例如d-C3烷基)、胺(例如-NH-)、酰胺、胺磺酰等等與W基團(tuán)隔離，但是一般直接鍵接或者經(jīng)亞曱基鍵接。對應(yīng)于前一段的代表性W基團(tuán)包括雜環(huán)，比如吡咯烷-l-基、哌啶_1一基、4-曱基咪咬-l-基、4-(哌咬-3-基曱基)-哌啶-l-基、嗎啉-4-基、4-甲基哌嗪-l-基、2-嗎啉-4-基-乙氨基、2-嗎啉-4-基-乙氧基、l-吡啶-2-基曱基氨基、哌嗪-l-基、哌啶-4-基或者N-哌嗪基，被RaN-取代，或者被-NRaRb4-取代的哌咬畫l畫基。當(dāng)前優(yōu)選的119取代基包括4-取代的哌嗪-4-基(比如4-甲基-哌嗪-4-基或者4-曱氧基乙基-哌嗪-4-基)、任選被氟或者二氟取代的哌啶-l-基曱基或者嗎啉基甲基。單環(huán)R6(比如苯基)的其它優(yōu)選取代基包括-NRaRb、-CH2NRaRb、CrC4直鏈或者支鏈烷基或者-O-R9。單環(huán)R6(比如苯基)的其它優(yōu)選取代基包括含有非堿性部分的基團(tuán)，比如卣素、羥基、羧基、d-C4卣代烷基、d-C4烷氧基和下式基團(tuán)-S(K))md-C4烷基、-S(=0)mC3-C6環(huán)烷基或者具有以下部分結(jié)構(gòu)的氨基曱酰基取代的環(huán)烷基其中Rg為H、C!-C4烷基或者環(huán)丙基，Rh為H、C廣Q烷基；或者Rg和Rh與它們連接的N原子合起來限定吡咯烷、嗎啉、哌啶、，派嗪或者N-曱基哌。秦。代表性的W基團(tuán)包括<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>其中Rq和Rq獨(dú)立地選自H、C廣C4烷基或者d-C4烷酰基或者一起限定不飽和5-7元環(huán)，比如哌啶、哌。秦或者嗎啉，可以進(jìn)而:f皮對應(yīng)于R1Q的基團(tuán)取代，特別是CrC4烷基、氟或者二氟。當(dāng)前優(yōu)選的W基團(tuán)包括對于R6,代表性的二環(huán)基團(tuán)包括萘基，特別是萘-2-基；苯并[1,3]二氧雜環(huán)戊烯基，特別是苯并[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基,苯并呋喃基，特別是苯并呋喃-2-基，和特別是d-C6烷氧基取代的苯并呋喃基，更特別是5-(2-哌嗪-4-羧酸叔丁酯乙氧基)苯并呋喃-2-基、5-(2-嗎啉_4-基-乙氧基)-苯并呋喃-2-基、5-(2-哌嗪-1-基-乙氧基)苯并呋喃-2-基、5-(2-環(huán)己基-乙氧基)-苯并呋喃-2-基；7-曱氧基-苯并呋喃-2-基、5-曱氧基-苯并吹喃-2-基、5,6-二甲氧基-苯并呋喃-2-基，特別是鹵素取代的苯并呋喃基，更特別是5-氟-苯并呋喃-2-基、5,6-二氟-苯并呋喃-2-基,特別是d-Q烷基取代的苯并呋喃基，最特別是3-甲基-苯并呋喃-2-基；苯并[b]噻吩基，特別是苯并[b]噻吩-2-基；特別是d-C6烷氧基取代的苯并[b]噻吩基，更特別是5,6-二甲氧基-苯并[b]噻吩-2-基，喹啉基，特別是p奎啉-2-基、*啉-3-基、會(huì)啉-4-基、p奎啉-6-基和喹啉-S-基；喹喔啉基，特別是喹喔啉-2-基；1,8-萘啶基，特別是1,8-萘啶-2-基；。引咮基，特別是吲哚-2-基，特別是吲哚-6-基、吲咮-5-基，特別是d-C6烷基取代的吲哚基，更特別是N-曱基吲哚-2-基；呋喃并[3,2-b]吡啶基，特別是呋喃并[3,2-b]吡啶-2-基，和Cr(V烷基取代的呋喃并[3,2-b]吡啶基，特別是3-曱基-呋喃并[3,2-b]吡啶-2-基；噻吩并[3,2-b]噻吩，特別是噻吩并[3,2-b]噻吩-2-基，更特別是C廣C6烷基取代的噻吩并[3,2七]漆吩-2-基，更特別是5-叔丁基-3-曱基噻吩并[3,2-b]噻吩-2-基。有利的W基團(tuán)包括二環(huán)，比如萘基、喹啉?；?、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基和二氫吲哚基，特別其中連接物連接到環(huán)的2位上。二環(huán)R6的有利取代基包括吡咯烷-l-基、哌啶-l-基、4-曱基哌啶-l-基、4-(哌啶-3-基曱基)-哌啶-l-基、嗎啉-4-基、4-甲基哌嗪-l-基、2-嗎啉-4-基-乙氨基、2-嗎啉-4-基-乙氧基、l-吡啶-2-基甲基氨基、哌嗪-l-基、哌啶-4-基或者N-哌溱基，被RaN-取代，或者被-NRaRb4-取代的哌啶-1-基。特別優(yōu)選的取代基，特別是結(jié)合苯并呋喃基的取代基包括2-嗎啉-4-基-乙氧基和N-曱基-哌啶-4-基氧基和如下定義的取代基。當(dāng)前優(yōu)選的二環(huán)R6基團(tuán)是任選取代的苯并噻唑或者苯并呋喃基或者苯并嚅唑基，包括其中取代基為-OR9或者-NRbR9的那些。例如，有利的W基團(tuán)包括苯并呋喃-2-基，未被取代或者在3位被d-C4烷基(比如曱基)或者C廣Ct鹵代烷基(比如三氟甲基)取代和/或在5位被飽和雜環(huán)(比如哌啶、哌,或者嗎啉)取代，所述雜環(huán)任選被CrC3烷基取代和/或通過氧基、曱氧基或者乙氧基與苯并呋喃基間隔。由此，特別有利的苯并呋喃基R6基團(tuán)包括返回式II,通常X—般為亞甲基或者特別是結(jié)合鍵。其中n為4的C廣Cn烷基自身或者在比如C廣C4烷氧基的化合物表達(dá)式內(nèi)，包括曱基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、環(huán)丙基和甲基環(huán)丙基等等，對于其它n值，以類似的方式擴(kuò)展。例如，Cs烷基包括均叔丁基(-CH2C(CH3)3)。鹵素或者卣包括溴、氯和特別是氟。卣代烷基是指其中至少一個(gè)碳原子帶有1~3個(gè)卣素原子的如上所定義的烷基，優(yōu)選氟原子。代表性的卣代烷基包括氟代曱基、二氟曱基、三氟曱基、2-氟乙基、2,2-二氟乙基和2,2,2-三氟乙基等等。有利的本發(fā)明化合物包括那些通過獨(dú)立地從各個(gè)表格A、B和C中選擇P3、P2和P1成員形成的排列表API基團(tuán)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表BP2基團(tuán)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表CP3基團(tuán)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>本發(fā)明的另一方面包括藥物組合物，包括如上定義的化合物以及藥學(xué)上可接受的載體或者稀釋劑。本發(fā)明的另一方面涉及如上所定義的化合物在制造用于治療組織蛋白酶K介導(dǎo)的疾病的藥物中的用途，比如骨質(zhì)疏松癥，齒齦疾病，比如牙齦炎和牙周炎，佩吉特病，惡性肺瘤的血釣過多新陳代謝骨骼疾病特征在于過度軟骨或者基體降解的疾病，比如骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，骨癌，包括腫瘤形成，疼痛。認(rèn)為本發(fā)明對骨質(zhì)疏松癥、骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和/或骨骼轉(zhuǎn)移具有特定用途。本發(fā)明化合物可以形成鹽，這構(gòu)成本發(fā)明的另一方面。式II化合物的適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)上可接受的鹽包括有機(jī)酸鹽，特別是羧酸鹽，包括但不限于乙酸鹽、三氟乙酸鹽、乳酸鹽、葡糖酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、泛酸鹽、羥乙基磺酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、丁酸鹽、二葡糖酸鹽、環(huán)戊酸鹽、葡庚酸鹽、甘油磷酸鹽、乙二酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、富馬酸鹽、煙酸鹽、樸酸鹽、pectinate、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、酒石酸鹽、乳糖酸鹽、pivolate、樟腦酸鹽、十一酸鹽和琥珀酸鹽，有機(jī)磺酸鹽，比如甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、樟腦磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、苯磺酸鹽、對氯苯磺酸鹽和對曱苯磺酸鹽；和無機(jī)酸鹽，比如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽硫酸氫鹽、半錄u酸鹽、硫氰酸鹽、過硫酸鹽、磷酸鹽和磺酸鹽。在某些情形中，還可以將式II化合物分離為水合物。水合物一般通過在含水/有機(jī)溶劑混合物中，使用比如二哺英、四氫呋喃或者曱醇的有機(jī)溶劑進(jìn)行重結(jié)晶進(jìn)行制備。式(I)化合物的N-氧化物可以通過本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟知的方法進(jìn)行制備。例如，N-氧化物可以通過以下方法進(jìn)行制備，在大約0°C下，在適宜的惰性有機(jī)溶劑(例如，卣代烴，比如二氯甲烷)中，用氧化劑(例如，三氟過乙酸、過馬來酸、過苯曱酸、過乙酸或者間-氯過氧苯甲酸等等)處理式(I)化合物的未氧化形式。另外地，式(I)化合的N-氧化物進(jìn)行制備。未氧化形式的式(I)化合物可以由式(I)化合物的N-氧化物通過以下方式進(jìn)行制備，在080。C下，在適宜的惰性有機(jī)溶劑(例如，乙腈、乙醇或者含水二氧六環(huán)等等)中，用還原劑(例如，硫、二氧化硫、三苯膦、硼氫化鋰、硼氫化鈉、二氯化磷或者三溴化磷等等)進(jìn)行處理。使化合物的外消旋混合物與旋光活性拆分試劑反應(yīng)，從而形成一對非對映異構(gòu)體化合物，分離非對映異構(gòu)體和回收光學(xué)純的對映異構(gòu)體。雖然對映異構(gòu)體的拆分可以利用式(I)化合物的共價(jià)非對映異構(gòu)衍生物進(jìn)行，但是優(yōu)選可分離的配合物(例如，晶體；非對映異構(gòu)體的鹽)。非對映異構(gòu)體具有不同的物理性質(zhì)(例如，熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、溶解性、反應(yīng)性等等)，并且可以通過利用這些差異得到輕易分離。非對映異構(gòu)體可以通過色譜法進(jìn)行分離，例如HPLC,或者優(yōu)選基于溶解性的差異通過分離/拆分工藝進(jìn)行分離。然后，通過任何不會(huì)導(dǎo)致外消旋化的實(shí)踐方法回收光學(xué)純的對映異構(gòu)體以及拆分試劑。適用于從它們的外消旋混合物中拆分化合物的立體異構(gòu)體的工藝的更詳細(xì)說明可以發(fā)現(xiàn)于JeanJacquesAndreCollet,SamuelH.Wilen,Enantiomers,Racemates和Resolutions,JohnWiley&Sons,Inc.(1981)中。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明擴(kuò)展至前藥、溶劑化物、配合物和其它體內(nèi)釋放式II化合物的形式。雖然可以將活性劑單獨(dú)給藥，但是優(yōu)選它作為藥物制劑的一部分存在。所述制劑將包括上述定義的活性劑與一種或者多種可接受的載體/賦形劑和任選的其它治療學(xué)成分。所述載體必須是"可接受的"，其含義是與制劑中的其它成分相容并且對其受者無害。所述制劑包括適用于直腸、經(jīng)鼻、局部(包括口腔和舌下)、陰道或者胃腸外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)和真皮內(nèi))給藥，但是優(yōu)選所述制劑為口服給藥制劑。所述制劑可以合意地以單元?jiǎng)┬偷男问酱嬖冢缙瑒┖途忈屇z嚢，并且可以通過任何制藥領(lǐng)域熟知的方法進(jìn)行制備。組合物通過以下方式進(jìn)行制備、將活性:分均勻和密切地與液體載:或者細(xì)碎的固體載體或者二者結(jié)合，隨后，如果必要，將其成型為產(chǎn)品。本發(fā)明包括制備藥物組合物的方法，包括使式II化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽與藥學(xué)上可接受的載體或者賦形劑聯(lián)合或者結(jié)合。如果藥物制劑的制造涉及密切混合藥物賦形劑和鹽形式的活性成分，那么通常優(yōu)選使用本質(zhì)上非堿性的賦形劑，即酸性或者中性賦形劑。在本發(fā)明中，用于口服給藥的制劑可以存在為分離單元，比如膠嚢、扁嚢劑或者片劑，它們各自含有預(yù)定量的活性劑；為粉劑或者粒劑；或者為活性劑在含水液體或者非水液體中的溶液或懸浮劑；或者為水包油液體乳劑或者油包水液體乳劑和為彈丸等等。對于口服給藥的組合物(例如片劑和膠嚢)，術(shù)語適宜的載體包括賦形劑，比如普通賦形劑，例如粘合劑，例如糖漿、阿拉伯膠、凝膠、山梨醇、西黃蓍膠、聚乙烯吡咯烷酮(Povidone),曱基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素、蔗糖和淀粉；填料和載體，例如玉米淀粉、凝膠、乳糖、蔗糖、微晶纖維素、高嶺土、甘露醇、磷酸二鈣、氯化鈉和藻酸；和潤滑劑，比如硬脂酸鎂、硬脂酸鈉和其它金屬硬脂酸鹽、甘油硬脂酸酯硬脂酸、硅酮流體、滑石、石蠟、油類和膠態(tài)氧化硅。還可以使用增香劑，比如胡椒薄荷、冬青油、櫻桃香精等等?？梢院弦獾丶尤胫珓?，從而使得劑型可以;故輕易辨識(shí)。還可以通過本領(lǐng)域熟知的方法對片劑進(jìn)行包衣。片劑可以通過壓縮或者鑄模進(jìn)行制備，任選與一種或者多種助劑一起。壓片劑可以通過在適宜的設(shè)備中壓縮自由流動(dòng)形式(比如粉末或者顆粒)的活性劑進(jìn)行制備，任選所述活性劑與結(jié)合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或者分散劑混合。鑄^t片劑可以通過在適宜的設(shè)備中鑄模用惰性液體稀釋劑潤濕的粉末化合物的混合物進(jìn)行制備。可以任選對片劑進(jìn)行包衣或者刻痕和進(jìn)行配制，從而提供活性劑的緩釋或者控釋。其它適用于口服給藥的制劑包括錠劑，其中將活性劑包含在香料基體中，通常為蔗糖和阿拉伯膠或者西黃蓍膠；軟錠劑，其中將活性劑包含在惰性基體中，比如凝膠和甘油或者蔗糖和阿拉伯膠；和漱口藥，其中將活性劑包含在適宜的液體載體中。本發(fā)明化合物或者制劑的適當(dāng)劑量將取決于適應(yīng)癥和患者，并且可以通過常規(guī)動(dòng)物試驗(yàn)輕易進(jìn)行確定。提供大約0.01-100juM的胞內(nèi)(用于抑制木瓜蛋白酶超家族的生理蛋白酶)濃度的劑量一般是合意和可獲得的，更優(yōu)選0.01畫10jLiM,比如0.1畫25iuM。本發(fā)明化合物通過多種溶液和固相化學(xué)過程進(jìn)行制備。化合物一般被制備為反映最終產(chǎn)品抑制劑的Pl、P2和P3部分的結(jié)構(gòu)單元。并不希望以任何方式通過理論對其進(jìn)行束縛或者將試驗(yàn)性連接才莫式歸于具體變量，在此應(yīng)用的抽象概念P1、P2和P3僅僅是為了便利起見進(jìn)行提供，它們具有基本上它們的常規(guī)Schlecter&Berger含義，表示抑制劑^f皮確認(rèn)為分別充填所述酶Sl、S2和S3亞位點(diǎn)的那些部分，其中Sl鄰近斷裂位點(diǎn)并且S3遠(yuǎn)離斷裂位點(diǎn)。不論連接方式如何，通過式I定義的化合物都意圖包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。廣泛地說，Pl結(jié)構(gòu)單元將是N-保護(hù)的-6-氟-3-氧代-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯，P2將是N-保護(hù)的氨基酸，P3—般包含封端基團(tuán)，比如取代的雜芳?；蛘叻减；糠郑?jīng)Rb-卣代烷基取代的碳連接物連接在P2上。適當(dāng)保護(hù)的單個(gè)結(jié)構(gòu)單元可以首先進(jìn)行制備，和隨后將它們偶聯(lián)在一起，即P2+P1—P2-P1。另外地，結(jié)構(gòu)單元的前體可以偶聯(lián)在一起和在合成抑制劑序列的后來步驟中進(jìn)行改性。然后，可以將其它期望結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)單元、結(jié)構(gòu)單元前體或者預(yù)制的更大片段偶聯(lián)在增長鏈上，例如R3-E-P2*+Pl~>R3-E-P2-P1或者R3-E*+P2-P1—R3-E-P2-P1,其中*表示活化形式。肽鍵的形成，即偶聯(lián)可以利用標(biāo)準(zhǔn)偶聯(lián)方法進(jìn)行，比如疊氮化物方法，混合碳-羧酸酸酐(氯甲酸異丁酯)方法，碳二亞胺(二環(huán)己基碳二亞胺、二異丙基碳二亞胺或者水溶性的碳二亞胺)方法，活性酯對硝基苯酯、N-羥基丁二酸亞氨基酯)方法、Woodward試劑K-方法、羰二咪唑方法、磷試劑或者氧化還原法。一些上述方法(特別是碳二亞胺方法)可以通過加入1-羥基苯并三唑或者4-DMAP得到增強(qiáng)。這些偶聯(lián)反應(yīng)可以在溶液(液相)或者固相中進(jìn)行。更明確地，偶聯(lián)步驟涉及在偶聯(lián)劑存在下，使一種反應(yīng)物的游離羧基與另一種反應(yīng)物的游離氨基去氬化偶聯(lián)，從而形成連接的酰胺鍵。所述偶聯(lián)劑的描述通常發(fā)現(xiàn)于關(guān)于肽化學(xué)的通用教科書中，例如，M.Bodanszky,"PeptideChemistry"，2ndreved.,Springer-Verlag,Berlin,Germany,(1993),在下文僅稱為Bodanszky,其內(nèi)容在此引入作為參考。適宜的偶聯(lián)劑的實(shí)例為N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺、N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺存在下的1-羥基苯并三唑或者N-乙基-N'-[(3-二曱基氨基)丙基]碳二亞胺。現(xiàn)實(shí)和有用的偶聯(lián)劑為市售的(苯并三唑-l-基氧基)三-(二曱基氨基)磷徵六氟磷酸鹽，其自然存在或者在1-羥基苯并三唑或者4-DMAP中存在。另一種現(xiàn)實(shí)和有用的偶聯(lián)劑是市售2-(lH-苯并三唑-l-基)-N,N,N',N'-四曱基脲镥四氟硼酸鹽。另一種現(xiàn)實(shí)和有用的偶聯(lián)劑是市售0-(7-氮雜苯并三唑-l-基)-N,N,N',N'-四甲基脲镥六氟磷酸鹽。該偶聯(lián)反應(yīng)在惰性溶劑中進(jìn)行，例如二氯甲烷、乙腈或者二甲基甲酰胺。將過量的叔胺，例如二異丙基乙胺、N-曱基嗎啉、N-曱基吡咯烷或者4-DMAP加入其中，以保持反應(yīng)混合物的pH值為約8。反應(yīng)溫度通常在0°C~50°C的范圍內(nèi)，和反應(yīng)時(shí)間通常在15min~24h的范圍內(nèi)。在偶聯(lián)反應(yīng)期間，通常必須對組分非天然氨基酸的官能團(tuán)進(jìn)行保護(hù)，以避免形成不期望的4定?？梢詰?yīng)用的〗呆護(hù)基列于Greene，"ProtectiveGroupsinOrganicChemistry",JohnWiley&Sons，NewYork(1981)和"ThePeptides:Analysis,Synthesis,Biology",Vol.3，AcademicPress,NewYork(1981)中，在下文僅僅將其稱為Greene,其公開內(nèi)容在此引入作為參考。C末端殘基的a羧基通常被保護(hù)為可以裂解給出羧酸的酯?？梢允褂玫谋Ｗo(hù)基包括l)烷基酯，比如曱基、三曱基曱硅烷基和叔丁基酯，2)芳烷基酯，比如千基和取代千基酯，或者3)可以通過弱堿或者溫和還原方法裂解的酯，比如三氯乙酯和苯曱酰甲基酯。意欲進(jìn)行偶聯(lián)的各個(gè)氨基酸的a-氨基一般進(jìn)行N-保護(hù)?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的任何保護(hù)基。所述基團(tuán)的實(shí)例包括l)?；?，比如曱?；?、三氟乙酰基、鄰苯二甲?；蛯?曱苯磺?；?)芳香氨基曱酸酯基團(tuán)，比如千氧羰基(Cbz或者Z)和取代的bensyloxycarbonyl和9-藥曱氧羰基(Fmoc);3)脂族氨基甲酸酯基團(tuán)，比如叔丁氧羰基(Boc)、乙氧羰基、二異丙基甲氧羰基和烯丙氧羰基；4)環(huán)狀的氨基曱酸烷基酯基團(tuán)，比如環(huán)戊基氧基羰基和金剛烷氧基羰基；5)烷基，比如三苯曱基和千基；6)三烷基甲硅烷基，比如三甲基曱硅烷基；和7)含有硫醇的基團(tuán)，比如苯硫基羰基和二硫代琥珀?；?。優(yōu)選a-氨基保護(hù)基為Boc或者Fmoc。許多適當(dāng)保護(hù)用于肽合成的氨基酸衍生物都可以市場購買到。一般在下一偶聯(lián)步驟之前，所述a-氨基保護(hù)基被裂解。當(dāng)使用Boc基團(tuán)時(shí)，選擇的方法為單獨(dú)使用或者在二氯曱烷中的三氟乙酸，或者為在二氧六環(huán)或者乙酸乙酯中的HC1。然后在偶聯(lián)之前或者原位用堿性溶液(比如緩沖水溶液，或者在二氯曱烷或者乙腈或者二曱基曱酰胺中的叔胺)對所得銨鹽進(jìn)行中和。當(dāng)使用Fmoc基團(tuán)時(shí)，選擇的反應(yīng)物為在二曱基曱酰胺中的哌啶或者取代哌啶，但是任何仲胺都可以使用。所述去保護(hù)在0°C~室溫之間進(jìn)行，通常為20-22。C。在使用任何上述基團(tuán)制備所述肽期間，一般要對任何具有側(cè)鏈官能團(tuán)的天然或者非天然氨基酸進(jìn)行保護(hù)。本領(lǐng)域熟練的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，對于這些側(cè)鏈官能團(tuán)，適當(dāng)保護(hù)基的選擇和應(yīng)用取決于氨基酸以及肽上其它保護(hù)基團(tuán)的存在。在對上述保護(hù)基進(jìn)行選擇時(shí)，期望在去保護(hù)和偶聯(lián)a-氨基期間，所述基團(tuán)沒有被除去。例如，當(dāng)Boc用作a-氨基保護(hù)基時(shí)，以下側(cè)鏈保護(hù)基是適宜的對-甲苯磺酰部分可以用于保護(hù)比如賴氨酸和精氨酸的氨基酸氨基側(cè)鏈；乙酰氨基曱基、千基(Bn)或者叔丁基磺酰部分可以用于保護(hù)含有半胱氨酸側(cè)鏈的硫化物；千基(Bn)醚可以用于保護(hù)含有絲氨酸、蘇氨酸或者羥脯氨酸側(cè)鏈的鞋基；和卡基酯可以用于保護(hù)含有天冬氨酸和谷氨酸側(cè)鏈的羧基。當(dāng)選擇Fmoc用于a-胺保護(hù)時(shí)，通?；谑宥』谋Ｗo(hù)基是可以接受的。例如，Boc可以用于保護(hù)賴氨酸和精氨酸，叔丁基醚可以用于保護(hù)絲氨酸、蘇氨酸和羥脯氨酸以及叔丁基酯可以用于保護(hù)天冬氨酸和谷氨酸。三苯曱基(Trityl)部分可以用于保護(hù)含有半胱氨酸側(cè)鏈的硫化物。一旦抑制劑順序合成得到完成，所述任何保護(hù)基就被以任何通過選擇保護(hù)基而確定的方式除去。這些方法為本領(lǐng)域熟練的技術(shù)人員所熟知的方法。通式II化合物的合成中的第一步驟一般是在溶液中制備官能化的Pl結(jié)構(gòu)單元。根據(jù)本發(fā)明，可以使用不同的化合物命名。為了方便起見，在此通常使用碳水化合物命名法。合成二環(huán)Pi基團(tuán)的一般方案由適當(dāng)保護(hù)的中間體的環(huán)閉合開始，所述中間體由1,2:5,6-二-0-異亞丙基-D-異呋喃糖通過4步得到，描述在MayerzumReckendorf,Chem.Ber.101(1968),3802-3807中，給出了3S,4R立體化學(xué)的前體。方案l.a)H2，Pd/C,曱醇。b)氯曱酸千酯，吡啶，二氯甲烷在方案l中，將衍生物1的疊氮基還原成游離胺，例如，通過以下方式在比如醇(例如乙醇或者甲醇)的適宜溶劑中，使用在炭上的鈀或者其它適宜的催化劑通過催化氬化進(jìn)行還原。獲得的親核氮原子自發(fā)或者任選在適宜的鍵(比如，三乙胺或者乙酸鈉)存在下與C-6位反應(yīng)，從而形成5,5-二環(huán)。在根據(jù)本發(fā)明的化合物的整個(gè)合成過程中，C-6的離去基團(tuán)并不限于磺酸酯，還可以使用比如鹵素的其它離去基團(tuán)。將疊氮化物殘基還原成胺還可以通過其它已知于文獻(xiàn)中的方法進(jìn)行，比如，用三烷基-或者三芳基磷處理疊氮化物衍生物，隨后水解形成的亞胺衍生物。在環(huán)閉合之后，胺可以用適宜的保護(hù)基進(jìn)行N-保護(hù)，比如氨基甲酸酯，比如化合物3的氨基甲酸節(jié)酯或者任何其他類似的通常不用酸裂解的寸呆護(hù)基。適宜的4呆護(hù)基可以發(fā)3見于Protectivegroupsinorganicchemistry,第三版，1999，TheodoraW.Greene和PeterGM.Wuts(Wiley&sons)。對于3R,4S二環(huán)，可以使用類似的方法，由可以如TetrahedronAsymmetry,10(1999)1855-1859中所述進(jìn)行制備的3-疊氮基-3-脫氧-1,2:5,6-二-0異亞丙基-0-呋喃葡糖開始。然后，可以如方案2中所述對該中間體進(jìn)行處理。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage29</formula>方案2.a)含水乙酸。b)對-甲苯-黃酰氯，吡啶，DCM，c)H2，Pd/C,曱醇。b)氯曱酸芐酯，吡啶，二氯甲烷。化合物4可以用選擇性水解化合物4的5,6-縮醛的弱酸(比如稀乙酸或者類似的酸)進(jìn)行處理，從而獲得二醇。伯醇可以選擇性與烷基-或者芳基磺酰氯(比如對曱苯磺酰氯)反應(yīng)，從而給出化合物5。例如，在比如醇(例如乙醇或者甲醇)的適宜溶劑中，使用在炭上的鈀或者其它適宜的催化劑通過催化氫化將衍生物5的疊氮基還原成游離胺。獲得的親核氮自發(fā)或者任選在適宜的堿(比如，例如三乙胺或者乙酸鈉)存在下與C-6位反應(yīng)形成可以任選被適宜的保護(hù)基N-保護(hù)的5,5-二環(huán)(比如，例如它的氨基曱酸千酯(Cbz)),從而給出化合物6。另外地，根據(jù)方案3，3-疊氮基-3-脫氧-l,2:5，6-二-0-異亞丙基-D-艾杜呋喃糖(idofuranose)(Bull.Chem.Soc.Japan,57,1(1984),237-241)可以是3R，4S二環(huán)的適宜原料。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula>方案3.a)含水乙酸。b)對-甲苯磺酰氯，吡啶，DCM,c)H2，Pd/C,甲醇。b)氯曱酸千酯，吡啶，二氯甲烷?；衔?可以用選擇性水解化合物6的5,6-縮醛的弱酸(比如稀乙酸或者類似的酸)進(jìn)行處理，從而獲得二醇。伯醇可以選擇性與烷基-或者芳基磺酰氯(比如對甲苯磺酰氯)反應(yīng)，從而給出化合物7。例如，在比如醇(例如乙醇或者甲醇)的適宜溶劑中，使用在炭上的鈀或者其它適宜的催化劑通過催化氫化將衍生物7的疊氮基還原成游離胺。獲得的親核氮自發(fā)或者任選在適宜的堿(比如，例如三乙胺或者乙酸鈉)存在下與C-6位反應(yīng)形成可以任選被適宜的保護(hù)基N-保護(hù)的5,5-二環(huán)(比如，例如它的氨基甲酸爺酯(Cbz)),從而給出化合物8。環(huán)閉合并不限于以上所示的基質(zhì)，還可以用于方案4中所示的衍生物。方案4.a)將疊氮化物還原成胺，隨后環(huán)閉合。b)保護(hù)胺。方案4中的Rx可以選自曱基、三氟甲基、對曱基苯基或者存在于輕易可獲得的烷基磺酰卣中的類似殘基，優(yōu)選如Chem.Ber.101(1968),3802-3807中所述，適于在二醇的伯醇上進(jìn)行區(qū)域選擇性反應(yīng)的大體積Rx。R1，和R2，如R^和R所定義。Pg可以是適宜的保護(hù)基，比如氨基甲酸酯(比如氨基曱酸千酯)或者任何通常不用酸裂解的類似保護(hù)基。其它用于環(huán)閉合反應(yīng)的基質(zhì)可以是方案5中所示的化合物。方案5.a)將疊氮化物還原成胺，隨后環(huán)閉合。b)保護(hù)胺(任選)。方案5中的Rx可以選自曱基、三氟曱基、對曱基苯基或者存在于輕易可獲得的烷基磺酰卣中的類似殘基，優(yōu)選如Chem.Ber.101(1968),3802-3807中所述，適于在二醇的伯醇上進(jìn)行區(qū)域選擇性反應(yīng)的大體積Rx。R1，和R2，為如上所定義的R/和R2。Ry可以為氫或者羥基保護(hù)基，優(yōu)選醚類型的保護(hù)基。優(yōu)選Ry為氫。PG可以為方案5中衍生物的適宜的N-保護(hù)基，比如氨基曱酸酯，Ry—般為氫。其它獲得5,5-二環(huán)的方法由G.Lin和Z.Shi在Tetrahedron,53，4,1369-1382,1997中公開。在方案1中獲得的5,5-二環(huán)化合物的其它變型示于方案6中。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula>方案6.a)千基溴，氫化鈉，DMF。b)BF3.Et20,Et3SiH，DCM。c)H2,Pd/C,Boc20,1:1EtOAc-EtOH。d)外匕咬，乙酸酐。e)H2,Pd/C,EtOAc化合物9用適宜的酸穩(wěn)定保護(hù)基(比如取代的曱基醚，特別是二卡基醚)進(jìn)行保護(hù)，通過用堿(比如氫化鈉或者氫氧化鈉)在非質(zhì)子溶劑(比如N,N-二甲基甲酰胺(DMF))中，在期望的烷基化試劑(比如，千基卣化物，特別是千基溴)存在下處理單-醇9得到。然后，根據(jù)G.J.Ewing和M.J.Robins,Org.Lett.1,4，1999,635-636所述的方法，可以將獲得的物質(zhì)還原成化合物10，或通過其中的參考文獻(xiàn)。優(yōu)選利用過量三氟化硼乙醚絡(luò)合物，在比如三烷基硅烷的還原劑存在下，特別是過量三乙基硅烷在適宜的非質(zhì)子溶劑(比如二氯甲烷)中進(jìn)行還原。利用例如在炭上的鈀，在適宜的溶劑或者溶劑混合物(比如乙酸乙酯-乙醇)中，在氫氣氣氛中，在二碳酸二叔丁酯存在下催化氫化化合物10,隨后在吡啶中用乙酸酐處理所得產(chǎn)品，給出中間體ll。通過重復(fù)如上所述的催化氫化，得到單-醇12?？梢詫⒎氲交衔?2上，和然后根據(jù)方案7對二環(huán)化合物進(jìn)行N-去保護(hù)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula>方案7.a)Deoxo-Fluor,二氯曱烷。b)甲醇性甲醇鈉。c)1:1二氯曱烷-三氟乙酸?；衔?3可以用氟化劑(比如[二-(2-曱氧基乙基)氨基硫三氟化物](Deoxo-Fluor)或者用類似的氟化劑(比如二乙基氨基硫三氟化物(DAST)進(jìn)行處理，通過在C-5位置進(jìn)行構(gòu)型轉(zhuǎn)化，給出產(chǎn)品14。然后，通過例如用曱醇性曱醇鈉或者具有無機(jī)堿(比如氫氧化鈉或者碳酸鈉)的任何類似的石成性溶液處理，化合物14進(jìn)行脫乙?；?，隨后利用酸性條件(比如二氯曱烷-三氟乙酸溶液)或者其它可以發(fā)現(xiàn)于ProtectiveGroupsinOrganicChemistry,第三片反,1999,TheodoraW.Greene和PeterG.M.Wuts(Wiley&Sons)中的其它方法進(jìn)行N-脫保護(hù)。另外，差向異構(gòu)的氟可以通過根據(jù)方案8處理以上衍生物9獲得。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>方案8.a)二異丙基偶氮二羧酸酯，苯曱酸，PPh3,THF。b)曱醇性甲醇鈉。c)節(jié)基溴，氬化鈉，DMF。d)BF3.Et20,Et3SiH，二氯曱烷。e)H2,Pd/C,Boc20，1:1EtOAe-EtOH。f)吡啶，乙酸酐。g)H2,Pd/C,EtOAc。h)Deoxo-Fluor，二氯甲烷。i)曱醇性甲醇鈉。j)1:1二氯甲烷-三氟乙酸。在C-5上的構(gòu)型轉(zhuǎn)化可以通過使化合物16在Mitsunobo條件下反應(yīng)得到實(shí)現(xiàn)，給出苯曱酸酯。用曱醇性曱醇鈉進(jìn)行酯水解，隨后用芐基溴處理單-醇，提供千基保護(hù)的差向異構(gòu)體17。方案8中反應(yīng)步驟d-j如方案6和7中所述。另一種合成其中W和W為氟的"二氟衍生物"的路線示于方案9<formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>H31方案9.a)芐基溴，氫化鈉，DMF。b)Et3SiH,BF3.Et20或者三甲基甲硅烷基三氟曱磺酸酯，DCM。c)H2,Pd/C,Boc20,EtOAc-EtOH。d)苯曱酰氯，吡啶，DCM。e)H2,Pd/C,EtOAc。f)Bu2SnO，曱苯，回流。g)芐基溴，氟化銫，DMF。H)Dess-Martin過碘烷。i)Deoxo-Fluor或者二乙基氨基硫三氟化物，DCM。j)曱醇性曱醇鈉。k)H2，Pd/C，EtOAc。1)對-曱苯石黃酰氯，吡啶，DCM。m)DCM,三氟乙酸。n)三乙胺，二氯甲烷。Pl結(jié)構(gòu)單元的合成可以由化合物21(3-疊氮基-3-脫氧-l,2-0-異亞丙基-D-異吹喃糖)開始，所述化合物21由MayerzumReckendorf，Chem.Ber.101(1968),3802-3807進(jìn)行描述。用比如節(jié)基溴或者千基氯的千化劑，在比如氬化鈉或者氫氧化鈉的堿存在下，在非質(zhì)子性極性溶劑(比如N,N-二甲基曱酰胺)中處理化合物21,給出衍生物22。然后，用三烷基硅烷(比如三乙基硅烷)與過量的路易斯酸(比如或者三氟化硼乙醚絡(luò)合物或三甲基甲硅烷基三氟曱磺酸酯)，在比如二氯甲烷的非質(zhì)子溶劑中處理化合物22。然后，通過利用例如在炭上的鈀，在二碳酸二叔丁酯存在下進(jìn)行催化氪化，可以對所得疊氮化物進(jìn)行選擇性還原，從而獲得化合物23。另外，所述疊氮化物可以用已知于文獻(xiàn)的其它方法進(jìn)行還原，比如三苯基膦-水，隨后進(jìn)行保護(hù)，給出適宜的氨基甲酸酯。為了避免以下步驟中區(qū)域選擇性的問題，可以用?；噭?比如酰氯或者酸酐，比如苯曱酰氯)，在純有機(jī)堿(比如吡啶或者三乙胺)或者在非質(zhì)子溶劑的混合物(比如二氯化物和堿)中對化合物23進(jìn)行處理，從而給出化合物24。如上所述對化合物24進(jìn)行催化氫化，給出二醇25。在化合物25的伯醇上的選擇性千基化作用可以通過數(shù)種在文獻(xiàn)中已知的方法實(shí)現(xiàn)。在方案9中，使二醇與氧化二丁錫在適宜的溶劑(比如曱苯)中回流，從而形成錫縮酪。然后，所得錫縮醛可以與少量過量的千基溴和氟化銫在DMF中反應(yīng)，給出期望的化合物26。在二氯甲烷中，用適宜的氧化劑(比如Dess-Martin過碘烷)氧化化合物26,將仲醇轉(zhuǎn)化為適宜于轉(zhuǎn)化成二氟化物28的酮化合物27。該步驟可以通過用過量氟化劑(比如Deoxo-Fluor)或者用二乙基氨基硫三氟化物(DAST)在比如二氯甲烷或者1,2-二氯乙烷的非質(zhì)子溶劑中處理化合物27實(shí)現(xiàn)?；衔?8的苯曱酸酯可以用堿(比如甲醇性曱醇鈉)進(jìn)行裂解，隨后利用催化氬化脫去卡基，從而獲得二醇29。在伯醇上選擇性引入磺酸酯可以通過以下方法實(shí)現(xiàn)用少量過量的烷基-或者芳基磺酰氯在比如吡啶的堿存在下，在比如二氯曱烷的適宜溶劑中處理化合物29,在低溫下加入磺?；噭┖途従弻囟壬咧潦覝?，給出單-醇30。在二氯曱烷-三氟乙酸的酸性條件下處理化合物30釋放出胺，和用比如三乙胺的堿處理該產(chǎn)品促進(jìn)內(nèi)部環(huán)閉合，給出結(jié)構(gòu)單元31。另外的合成5,5-二環(huán)的路線示于方案10和11中。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage38</formula>方案10.a)氟化劑。b)還原胺或者N-脫保護(hù)，任選隨后進(jìn)行N-保護(hù)。c)還原劑。在方案10中，比如在C-3和C-4位置的取代基為順式關(guān)系的化合物32(可如上所述獲得或者利用本領(lǐng)域熟知的方法獲得)的衍生物，Lg為比如卣素或者磺酸酯的離去基團(tuán)，和R等于疊氮化物或者用適宜的N-保護(hù)基保護(hù)的氮，可以用比如上述的氟化劑進(jìn)行處理，形成化合物33。通過或者還原疊氮化物或者通過適宜的脫保護(hù)方法釋放受掩蔽的胺，所述胺可以在C-6位置上進(jìn)行分子內(nèi)進(jìn)攻，產(chǎn)生結(jié)構(gòu)34的5,5-二環(huán)，其可以任選進(jìn)行N-保護(hù)(Pg—呆護(hù)基或者氫)。用比如上述的適宜還原劑或者用類似的還原劑還原C-l將給出結(jié)構(gòu)單元35。在方案11中，表明了另一種合成二氟-5,5-二環(huán)的路線。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage38</formula>方案11.a)氧化。b)氟化劑。c)還原疊氮化物或者N-脫保護(hù),任選隨后進(jìn)行N-保護(hù)。d)還原劑。在方案11中，在C-3和C-4位置的取代基為順式關(guān)系的化合物36(可如上所述獲得或者利用本領(lǐng)域熟知的方法獲得)，Lg為比如卣素或者磺酸酯的離去基團(tuán)，和R等于疊氮化物或者用適宜的N-保護(hù)基保護(hù)的氮，可以利用Swern類型反應(yīng)或者其它適宜的方法進(jìn)行氧化，從而可以給出化合物37。根據(jù)方案11,用過量的比如上述的氟化劑處理化合物37，給出化合物38。通過還原疊氮化物或者通過適宜的脫保護(hù)方法釋放38的受掩蔽的胺，所述胺可以在C-6上進(jìn)行分子內(nèi)進(jìn)攻，形成結(jié)構(gòu)39的5,5-二環(huán)，其可以任選進(jìn)行N-保護(hù)(Pg-保護(hù)基或者氫)。用比如上述的適宜還原劑或者用類似的還原劑還原C-l將給出結(jié)構(gòu)單元40。合成其中W或者W為卣素(比如氯)的化合物的適宜路線示于方案12中。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>方案12a)亞硫酰氯，b)曱醇性曱醇鈉，c)1:l二氯曱烷-三氟乙酸，d)亞石克酰氯，p比p定。Pl結(jié)構(gòu)單元一般通過常規(guī)的液相或者固相化學(xué)過程，比如以下公開i程，用天然或者非i然P2氨基酸來i長(或者P3+P2結(jié)構(gòu)單元)。P2和P3基團(tuán)或者市售為對映異構(gòu)體或者可以從外消旋物拆分或者可以利用本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的簡單化學(xué)變型獲得。例如，4-(曱基-哌嗪-1-基)-苯甲酸可以利用Buchwald化學(xué)過程(S.L.Buchwald&J.P.Wolfe,JournalofOrganicChemistry,2000,65,1144)獲得，和隨后進(jìn)4亍津青加工。其它P3核，比如4-(l-哌啶-4-基)-苯甲酸由1-(4-苯基-哌啶-1-基)-乙酮利用Friedel-Cmfts?；磻?yīng)進(jìn)行制備，和隨后利用本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)變型進(jìn)行精加工。另外地，其它P3部分，比如5-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]-2-苯并呋喃-2-羧酸利用固相進(jìn)行的Mitsimobu反應(yīng)進(jìn)行制備，如L.S.Richter&T.R.Gadek在TetrahedronLett,1994，35,4705中所詳述。式il方案13.環(huán)酮的典型延長另外地，為羥基的Pl結(jié)構(gòu)單元可以進(jìn)行延長和隨后進(jìn)行氧化，如方案14所示。R1、.R21.N-脫保護(hù)R23.脫保護(hù)4.酰胺偶聯(lián)1.DCM/TFA或其它脫保護(hù)2.酰胺偶聯(lián)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>方案14,羥基化的Pl結(jié)構(gòu)單元的典型延長(P3端一般通過使下式的中間體化合物南代烷基<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>其中RS和Rc如上所定義，和LG為常規(guī)的離去基團(tuán)，比如三氟甲磺酸酯等等，與以上所示的N-脫保護(hù)的Pl/P2結(jié)構(gòu)單元反應(yīng)進(jìn)行延長。該反應(yīng)在適宜的有機(jī)溶劑中進(jìn)行，包括但不限于卣化的有機(jī)溶劑(比如二氯醚類溶劑(比如乙醚、四氫呋喃)、乙腈或者芳香溶劑(比如苯、曱苯和二曱苯等等)或者其混合物，和任選在有機(jī)或者無機(jī)堿存在下進(jìn)行。優(yōu)選有機(jī)堿為三乙胺、吡啶、N-曱基嗎啉、甲基吡咬和二異丙基乙胺等等。優(yōu)選所述無機(jī)堿為碳酸銫、碳酸鈉和碳酸氫鈉等等。該反應(yīng)任選在比如分子篩的干燥劑存在下進(jìn)行。該反應(yīng)優(yōu)選在室溫下進(jìn)4亍。中間體可以通過本領(lǐng)域熟知的方法進(jìn)4亍制備。例如，其中W是苯基或者4-氟苯基，Rb為三氟曱基，和Rc為氫的化合物可以分別由市售2,2,2-三氟苯乙酮或者2,2,2,4'-四氟苯乙酮輕易進(jìn)行制備，通過適宜的還原劑(比如硼氫化鈉和氫化鋁鋰等等)將酮基還原成醇基。使用的溶劑取決于還原劑的類型。例如，當(dāng)使用硼氫化鈉時(shí)，反應(yīng)在醇類有機(jī)溶劑中進(jìn)行，比如曱醇和乙醇等等。例如，當(dāng)使用氫化鋁鋰時(shí)，反應(yīng)在醚類溶劑中進(jìn)行，比如四氫呋喃等等。2,2,2-三氟-1-苯基乙醇或者2,2,2-三氟-1-(4-氟苯基)乙醇與三氟甲磺酸酐的反應(yīng)提供期望的化合物。手性富集的中間體可以通過以下方式獲得在適宜的催化劑(比如(A或者(R)CBS催化劑或者(A或者(R)-^-二苯基-2-吡咯烷-曱醇)存在下，在BBN存在下，用適宜的還原劑(比如兒茶盼硼烷或者BH3-DMS配合物)還原相應(yīng)的卣化苯乙酮。在相應(yīng)的方式中，下式中間體卣代烷基可以與羧基保護(hù)的P2結(jié)構(gòu)單元反應(yīng)，其隨后可以進(jìn)行脫保護(hù)和用在此所述的Pl結(jié)構(gòu)單元進(jìn)行延長。另外地，上述中間體尚代烷基<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>RcR5R5'LG為適宜的離去基團(tuán)，比如三氟曱磺酸酯，和PG為適宜的羥基保護(hù)基，比如三烷基甲硅烷基等等，在上述反應(yīng)條件下反應(yīng)。將所得的O-保護(hù)輕乙酰胺氧化成相應(yīng)的羧酸和偶聯(lián)在如下所述的Pl結(jié)構(gòu)單元上。適宜的羥基保護(hù)基和用于使它們進(jìn)行保護(hù)以及將它們除去的反應(yīng)條件可以發(fā)現(xiàn)于Greene,T.W.;和Wuts,RG.M.ProtectingGroupsinOrganicSynthesis;JohnWiley&Sons,Inc.I999中。P2羥乙胺可以由相應(yīng)的天然或者非天然氨基酸通過本領(lǐng)域熟知的方法進(jìn)行制備。一些所述方法描述在PCT申請公開No.WO03/075836中，其全部公開內(nèi)容在此引入作為參考。另外地，其中E為-CRbRc-的化合物可以通過使下式化合物其中RS為如上所定義的環(huán)狀基團(tuán)和Rb為卣代曱基，優(yōu)選三氟曱基，與N-脫保護(hù)、羧基-保護(hù)的P2結(jié)構(gòu)單元或者如上所示的Pl/P2結(jié)構(gòu)單元在還原氨基化反應(yīng)條件下進(jìn)行反應(yīng)。該反應(yīng)在適宜的脫水劑(比如TiC14、硫酸鎂、異丙基三氟乙酸鹽)存在下，在堿(比如二異丙基乙胺和吡啶等等)存在下，和在適宜的有機(jī)溶劑(比如二氯甲烷)中進(jìn)行，從而給出亞胺。亞胺用適宜的還原劑(比如硼氬化鈉和氰基硼氫鈉等等)在適宜的有機(jī)溶劑(比如曱醇和乙醇等等)中進(jìn)行還原。另外地，其中E為-CRbRc-的化合物可以通過使卣代烷基醛與如下所示的胺反應(yīng)進(jìn)行制備R5、R5，、R6和Rb如上所定義。應(yīng)用Dean-Stark裝置，使卣代烷基醛與氨基乙醇(通過用適宜的還原劑(比如氫化鋁鋰等等)在本領(lǐng)域fbR5R,熟知的條件下還原相應(yīng)的5/5，a氨基酸進(jìn)行制備)縮合，提供所示的環(huán)狀縮醛胺，其通過與式WMgX(其中X是卣素)的格氏試劑或者式!^Lil的有機(jī)鋰試劑反應(yīng)，提供所示的羥基乙酰胺。用適宜的氧化劑(比如Jones氧化劑或者H5I06/Cr03等等)氧化羥基乙酰胺，然后提供P3/P2結(jié)構(gòu)單元，其C-末端用Pl結(jié)構(gòu)單元進(jìn)行延長和根據(jù)需要進(jìn)行氧化。如上所述的延長一般在適宜的偶聯(lián)劑存在下，例如苯并三唑-l-基氧基三吡咯烷4,镥六氟4f酸鹽(PyBOP)、O-苯并三唑-l-基-N,N,N'，N'-四曱基-脲鏃六氟磷酸鹽(HBTU)、0-(7-氮雜苯并三唑-l-基)-l,l,3,3-四曱基-脲鐿六氟磷酸鹽(HATU)、l-(3-二曱基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)或者1,3-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)，任選在1-羥基苯并三唑(HOBT)和堿(比如N,N-二異丙基乙胺、三乙胺、N-甲基嗎啉等等)存在下進(jìn)行。該反應(yīng)一般在20-3(TC下進(jìn)行，優(yōu)選在大約25。C下進(jìn)行，并且需要2~24小時(shí)至完成。適宜的反應(yīng)溶劑是惰性有機(jī)溶劑，比如卣代有機(jī)溶劑(例如，二氯曱烷和氯仿等等)、乙腈、N,N-二甲基曱酰胺、醚類溶劑(比如四氫呋喃和二^烷等等)。另外地，上述延長偶聯(lián)步驟可以通過以下方式進(jìn)行首先將P3/P2結(jié)構(gòu)單元轉(zhuǎn)化成活性酸衍生物，比如琥珀酰亞胺酯，然后使其與Pl胺反應(yīng)。該反應(yīng)一般需要2~3小時(shí)反應(yīng)完全。在該反應(yīng)中使用的條件取決于活性酸衍生物的本性。例如，如果它是酰氯衍生物4,該反應(yīng)在適宜的堿(例如三乙胺、二異丙基乙胺和吡啶等等)存在下進(jìn)行。適宜的反應(yīng)溶劑為極性有機(jī)溶劑，比如乙腈、N,N-二曱基曱酰胺、二氯曱烷或者其任何適宜的混合物。利用如上所述的工藝，上述方法還可以用于制備其中Rc不是氫的化合物，但是用式R6RbCO的酮替換R6COH和然后用RcLi/RcMgX處理所得的環(huán)狀縮醛胺，隨后進(jìn)行氧化，從而給出游離酸。然后，使游離酸在如上所述的條件下進(jìn)行縮合。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然其中E為CRbRc的化合物還可以制備如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage45</formula>特別是，常規(guī)o-保護(hù)上述氨基乙醇，隨后與卣代烷基半縮醛反應(yīng)提供所示的卣代烷基亞胺化合物，用R6Li的有機(jī)鋰化合物對其進(jìn)行處理，其中RS如上所定義。除去氧保護(hù)基提供在上一方案中所述的羥基乙酰胺，以相應(yīng)的方式將其氧化成羧酸和用Pl結(jié)構(gòu)單元進(jìn)行延長。適宜的氧保護(hù)基和用于使它們進(jìn)行保護(hù)以及將它們除去的反應(yīng)條件可以發(fā)現(xiàn)于Greene,T.W.;和Wuts,P.G.M.ProtectingGroupsinOrganicSynthesis;JohnWiley&Sons,Inc.I999中。另外地，其中E為CRbRc和RS為芳基或者雜芳基的化合物可以如下所示進(jìn)行制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage45</formula>特別是，使上述鹵代烷基半縮醛與受保護(hù)的P2結(jié)構(gòu)單元反應(yīng)，從而得到所示的2-(l-羥曱基氨基)乙酸酯中間體。該反應(yīng)在催化量的酸(比如對甲苯磺酸)存在下和在芳香烴溶劑(比如甲苯和苯等等)中進(jìn)行。在Friedel-Crafts反應(yīng)條件/BF3.EtT20下，用R6H處理2-(l-羥曱基氨基)乙酸酯中間體提供羧基保護(hù)的P3/P2結(jié)構(gòu)單元，如上所述使其進(jìn)行延長。類似地，可以使卣代烷基半縮醛與P2/P1結(jié)構(gòu)單元反應(yīng)，和根據(jù)需要將其氧化成酮。在此使用的術(shù)語"N-保護(hù)基"或者"N-保護(hù)的"是指那些意欲保護(hù)氨基酸或者肽的N-末端或者保護(hù)氨基，使其在合成工藝期間不發(fā)生不期望的反應(yīng)的基團(tuán)。通常應(yīng)用的N-保護(hù)基公開于Greene,"ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis"(JohnWiley&Sons,NewYork,1981)中，其在此引入作為參考。N-保護(hù)基包括?；?，比如曱?；?、乙?；?、丙酰基、新戊酰、叔丁基乙酰基、2-氯乙?；?、2-溴乙?；?、三氟乙?；?、三氯乙?；?、鄰苯二曱?；?、鄰-硝基苯氧基乙酰基、oc-氯丁?；?、苯曱酰基、4-氯苯甲酰基、4-溴苯曱?；?-硝基苯曱?；鹊?；磺?；?，比如苯磺?；蛯?甲苯磺?；鹊龋话被姿狨バ纬苫鶊F(tuán)，比如芐氧羰基、對-氯芐氧羰基、對-甲氧基芐氧羰基、對-硝基芐氧羰基、2-硝基芐氧羰基、對-溴芐氧羰基、3,4-二曱氧基芐氧羰基、4-曱氧基芐氧羰基、2-硝基-4,5-二曱氧基千氧羰基、3,4,5-三曱氧基芐氧羰基、l-(對-聯(lián)苯基)-l-曱基乙氧基羰基、oc,a-二曱基-3,5-二曱氧基千氧羰基、二苯曱氧羰基、叔丁氧羰基、二異丙基曱氧羰基、異丙氧羰基、乙氧羰基、甲氧羰基、烯丙氧羰基、2,2,2-三氯乙氧羰基、苯氧羰基、4-硝基苯氧羰基、芴基-9-甲氧羰基、環(huán)戊基氧基羰基、金剛烷基氧基羰基、環(huán)己基氧基羰基和苯硫基羰基等等；烷基，比如節(jié)基、三苯曱基和節(jié)氧基甲基等等；和曱硅烷基，比如三甲基甲硅烷基等等。優(yōu)選的N-保護(hù)基包括曱?；?、乙?；?、苯甲?；?、新戊酰、叔丁?；?、苯磺酰基、節(jié)基、叔丁氧羰基(BOC)和千氧羰基(Cbz)。羥基和/或羧基保護(hù)基還在同上的Greene中進(jìn)行了廣泛綜述，并且包括醚，比如甲基、取代曱基醚，比如曱氧基曱基、曱硫基曱基、千氧基甲基、叔丁氧基曱基和2-甲氧基乙氧基曱基等等，曱硅烷基醚，比如三曱基甲硅烷基(TMS)、叔丁基二曱基曱硅烷基(TBDMS)、三芐基甲硅烷基、三苯曱硅烷基、叔丁基二苯基曱硅烷基和三異丙基甲硅烷基等等，取代的乙醚，比如l-乙氧基甲基、l-曱基-l-曱氧基乙基、叔丁基、烯丙基、爺基、對甲氧基爺基、二苯基曱基和三苯甲基等等，芳烷基，比如三苯曱基，和pixyl(9-羥基-9-苯基夾氧雜蒽衍生物，特別是氯化物)。酯羥基保護(hù)基包括酯，比如甲酸酯、節(jié)基曱酸酯、氯乙酸酯、曱氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、新戊酸酯、金剛烷酯、茶酸酯和苯曱酸酯等等。碳酸酯羥基保護(hù)基包括曱基乙烯基、烯丙基、肉桂基和千基等等。實(shí)施方案的詳細(xì)說明現(xiàn)在參考以下實(shí)施例，僅僅通過例證的方式對本發(fā)明的多種實(shí)施方案進(jìn)行描述。實(shí)施例1<formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula>在輕微正壓力下，對54(5.2g,13.0mmol)、碳載鈀(10%,Acros,0.66g)的甲醇混合物進(jìn)行氬化。在l小時(shí)時(shí)間內(nèi)，將氫氣變化3次，在TLC(石油醚-乙酸乙酯7:3和二氯曱烷-甲醇9:1，用鉬酸銨-硫酸鈰著色)表明原料完全轉(zhuǎn)化成著色AMC的主要非UV活性斑點(diǎn)和一些較弱的更高移動(dòng)的斑點(diǎn)(二氯甲烷-曱醇9:1)。然后，將反應(yīng)混合物濾過硅藻土并且進(jìn)行濃縮，給出粗化合物55。在0。C下，向所得殘余物的二氯曱烷(60ml)和吡啶(3.2ml,40mmol)的懸浮液中加入氯曱酸節(jié)酯(0.93ml,6.5mmol)。在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)，在此之后，在0。C下將另外的吡啶(3ml)和氯甲酸千酯(0.8ml)加入其中。然后，在室溫下將上述反應(yīng)混合物攪拌過夜，然后用二氯曱烷(IOOml)稀釋，順序用1M硫酸水溶液(2x50ml)和1M碳酸氫鈉水溶液(1x50ml)洗滌，然后進(jìn)行干燥(硫酸鈉)、過濾和在二氧化硅上進(jìn)行濃縮。使用乙酸乙酯:石油醚1:4(350ml)、2:3(250ml)、1:1(250ml)、3:2(250ml)和3:1(150ml)對所得殘余物進(jìn)行快速色譜法分離(直徑4cm,YMC-凝膠50g,填充洗脫液乙酸乙酯:石油醚1:4)，在真空中干燥過夜之后，給出為泡沫狀漿液的化合物56(2.71g,8.1mmol，2步驟產(chǎn)率62%)。NMR數(shù)據(jù)(400MHz,CDC13):1H,1.33,1.52(2s,6H,C(CH3)2),2.34(2d,IH,-OH),3.04(m,1H,H-6a),3.97(m,1H,H-6b),4.19(m,1H,H-5),4.33(m,1H,H國3),4.68,4.84(2d,1H,H-2),4.79(t,1H,H-4),5.08-5.24(m,2H，CH2Ph),5.86(brs,1H,H-l),7.30-7.42(m,5H,Ar-H).步驟b)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage48</formula>在5分鐘時(shí)間內(nèi)，向攪拌的氫化鈉(在礦物油中為60%,Aldrich,0.34g,8.4mmol)和化合物56(2.17g，6.47mmol)的二曱基曱酰胺(30ml)懸浮液中加入千基溴(0.81mmol,6.8mmol)。攪拌1小時(shí)之后(TLC:乙酸乙酯:石油醚2:3),將曱醇(大約2ml)加入其中以破壞過量試劑，然后立即將其分配在乙酸乙酯(180ml)和水(150ml)之間。所得有機(jī)層用水(3x100ml)洗滌，然后進(jìn)行干燥(硫酸鈉)、過濾和在二氧化硅上進(jìn)行濃縮。使用乙酸乙酯:石油醚1:4(100ml)、3:7(250ml)和2:3(250ml)對殘余物進(jìn)行快速色譜法分離(直徑4cm,YMC-凝膠40g,填充洗脫液乙酸乙酯:石油醚1:4),在真空中干燥過夜之后，給出無色漿液(2.7g,6.35mmol,98%)。NMR數(shù)據(jù)(400MHz,CDC13):1H,1.31(s,3H,C(CH3)(CH3))，1.51(d3H,C(CH3)(CH3))，3.29(m,1H,H-6a),3.78-3.96(m,2H,H-5和H-6b),4.22(dd,1H,H畫3),4.64,4.84(2M,4H,H-2,H-4和CH2Ph),5.07-5.22(m,1H,CH2Ph),5.94(m,1H,H畫l),7.28-7.39(m,10H,Ar-H).步驟c)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage48</formula>在0。C下，向攪拌的化合物7(2.635g，6.19mmo1)的二氯曱烷(28ml)和三乙基硅烷(9.9ml，61.9mmo1)溶液中一次加入三氟化硼乙醚配合物(7.9ml,61.9mmol)。然后，在室溫下將上述反應(yīng)混合物攪拌24h(TLC:石油醚-乙酸乙酯4:1和乙酸乙酯-曱苯3:2),然后將1M碳酸氫鈉水溶液(40ml)和一些固體碳酸氫鈉小心地加入其中，直至停止鼓泡為止。將所得混合物分配在二氯曱烷(100mL)和水(100mL)之間。所得有機(jī)層用1M碳酸氫鈉水溶液(1x100ml)和鹽水(1x100ml)洗滌，然后進(jìn)行干燥(硫酸鈉)、過濾和在二氧化硅上進(jìn)行濃縮。使用乙酸乙酉旨曱苯3:2(750ml),對殘余物進(jìn)行快速色語法分離(直徑4cm，YMC-凝膠48g,填充洗脫液乙酸乙酯-甲苯3:2),根據(jù)TLC，給出約85-90%純度的無色硬漿液(1.38g,3.74mmol,60%)。LR-MS:C21H24N05:計(jì)算值370.2.實(shí)測值370.0[M+H].在輕微過壓下，對化合物58(1.38g,3.74mmo1)、碳載鈀(Acros,10%，0.12g)和二石友酸二A又丁酯(0.82g，3.7mmol)的乙酸乙酯(50ml)混合物進(jìn)行氫化。在l小時(shí)時(shí)間內(nèi)，將氫氣改變兩次，并且通過LC-MS對反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)控。1小時(shí)之后，將另外的碳載鈀(0.1g)加入其中，并且反應(yīng)混合物另外用氬氣處理又1小時(shí)。然后，將反應(yīng)混合物濾過硅藻土并進(jìn)行濃縮。所得殘余物用2:1吡啶-乙酸酐(18ml)處理過夜，然后進(jìn)行濃縮。將所得殘余物再溶解于二氯甲烷(60ml)中，并且用1M碌u酸水溶液(2x40ml)和1M石灰酸氬鈉水溶液(1x40ml)順序洗滌，然后進(jìn)行干燥(硫酸鈉)、過濾和濃縮。使用乙酸乙酯曱苯l:4(200ml)和1:3(150ml)對殘余物(溶于曱苯-乙酸乙酯4:1中)進(jìn)行快速色譜法分離(直徑3cm，YMC-凝膠20g,填充洗脫液乙酸乙酯曱苯1:4),在真空中干燥過夜之后，給出無色漿液(1.13g,3.Ommo1,80%)。NMR數(shù)據(jù)(400MHz,CDC13):1H,1.45(s,9H,C(CH3)3),2.08(s,3H,步驟d)COCH3),3.10(m,1H,H-6a),3.74-3.99(m，3H,H-la,H國5和H-6b),4.11(m1H,H-lb),4.16-4.74(m,4HH-3,H-4和CH2Ph),5.31(m,1H,H-2)，7.28-7.40(m,5H,Ar-H).步驟e)、'^""^OAcd)二-(2_曱^基乙基)-,、nv""V0Ac62iNT,C)Ac"乂一—T科丞o恭廣,、ntnL丄氨基硫三氟化物乂丄59%在輕微過壓下，將化合物60(1.08g,2.86mmol)和碳載釔(10%,0.15g)的乙酸乙酯(30ml)混合物氫化2h(TLC:曱苯-乙酸乙酯4:l和l:l),然后將其濾過硅藻土并且進(jìn)行濃縮。在二氯曱烷(3xl0ml)中對混合物進(jìn)行濃縮，然后將其溶于二氯曱烷中并且在ot:下，向該溶液中加入二-(2-曱氧基乙基)氨基硫三氟化物(在THF中為50%,2.12ml,2當(dāng)量)。在室溫下攪拌過夜之后，將另外的二(2-曱氧基乙基)氨基硫三氟化物(在THF中為50%,2ml)加入其中并且在室溫下另外將反應(yīng)混合物攪拌一夜(TLC:曱苯-乙酸乙酯l:l，茚三酮著色)，然后將1M碳酸氳鈉水溶液小心地加入其中，直至停止鼓泡為止。所得混合物用二氯曱烷(50ml)稀釋，和所得有機(jī)層用1M碳酸氫鈉水溶液(40ml)洗滌一次，然后進(jìn)行干燥(硫酸鈉)、過濾和濃縮。使用甲苯-乙酸乙酯4:l對所得殘余物(溶于曱苯-乙酸乙酯4:l中)進(jìn)行快速色譜法分離(直徑3cm，二氧化硅25g,填充洗脫液曱苯-乙酸乙酯4:l),在真空中干燥過夜之后，給出為無色漿液的化合物62(0.49g，1.7mmo1,59%)。一些原料和硫中間體可以從反應(yīng)混合物中進(jìn)行回收。LR-MS:C9H13FN05:計(jì)算值234.1.實(shí)測值234.0[M+2H-叔丁基].實(shí)施例2用典型P2進(jìn)行延長步驟a)f)DCM-TFA88%e)NaOMeCF;COOH向化合物62(0.49g,1.7mmol)的曱醇(9.5ml)溶液中加入0.5M甲醇性甲醇鈉(lml),然后在室溫下將其攪拌30分鐘(TLC:曱苯-乙酸乙酯3:2，茚三酮著色)。將曱醇洗滌的DowexWX8(50-100網(wǎng)目，H+-形式)小心地加入其中(pH值通過pH-試紙進(jìn)行監(jiān)控)，直至達(dá)到中性為止，然后對混合物進(jìn)行過濾和濃縮。將殘余物溶于二氯曱烷中，并且在O"C下將三氟乙酸加入其中。在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌55分鐘(TLC:二氯甲烷-甲醇9:1,茚三酮著色)，然后進(jìn)行濃縮。使用甲醇:二氯曱烷5:95(150ml)、7:93(100ml)和1:9(200ml),對殘余物(溶于二氯曱烷-曱醇95:5中)進(jìn)行柱色譜分離(直徑2cm,二氧化硅15g,填充洗脫液二氯甲烷-曱醇95:5)，通過放置結(jié)晶，給出硬漿液(0.39g,1.50mmol,88%)。NMR數(shù)據(jù)(400MHz,DMSO-d6):1H，3.34,3.44(2dd,1H,H-6a)，3.60-3.70(m,2H,H-la和H-6b),3.89(dd,1H,H-lb),4.15(d,1H,H-3),4.51(brs,1H,H-2),4.76(dd，1H,H-4),5.26(dd，2Jh,f=48.3Hz,H-5).向攪拌的化合物64(0.34g,1.30mmol)、N-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(0.28g,1.43mmol)、l-羥基苯并三唑水合物(0.22g)和N-(叔丁氧羰基)-L-亮氨酸一水合物(0.34g，1.37mmol)的DMF(10ml)溶液中加入三乙胺(0.54ml，3.9mmol),然后在室溫下將其攪拌24小時(shí)。將上述反應(yīng)混合物分配在10%檸檬酸水溶液(30ml)和乙酸乙酯(10ml)之間。所得水層用乙酸乙酯(3x10ml)提取，步驟b)CF,COOHH然后將有機(jī)層合并，和順序用水(1x20ml)和1M石灰酸氫鈉水溶液(3x20ml)洗滌，然后進(jìn)行干燥(硫酸鈉)、過濾和在二氧化硅上進(jìn)行濃縮。利用乙酸乙酯的石油醚溶液(40-60%,分步梯度洗脫)對所得殘余物進(jìn)行快速色譜法分離，給出為無色無定形固體的15(0.35g,0.98mmol,75%)。LR-MS:C13H22FN205:計(jì)算值305.1.實(shí)測值305.1[M+2H-叔丁基].實(shí)施例3氧化成P1酮。該實(shí)施例表明了模型P3+P2+羥基化的Pl化合物的氧化。在室溫下，向攪拌的化合物66(0.10g,0.25mmol)的二氯曱烷(4ml)溶液中加入Dess陽Martin過碘烷(0.12g,0.28mmol)。攪拌90分鐘之后，所得反應(yīng)混合物用二氯甲烷(10ml)稀釋，用1:11M碳酸氬鈉水溶液-10%硫代硫酸鈉水溶液(4x10ml)洗滌，然后進(jìn)行干燥(硫酸鈉)、過濾和在二氧化硅上進(jìn)行濃縮。利用乙酸乙酯的石油醚溶液(50-60%，分步梯度洗脫)對所得殘余物進(jìn)行快速色譜法分離，給出為無色泡沫的67(0.072g,0.18mmo1,71%)?；衔?7被獲得為幾何異構(gòu)體(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)和它們的水合物的混合物。LR-MS:C21H24FN205:計(jì)算值403.2.實(shí)測值403.0[M+H].67的酮式NMR樣品獲得如下；將5mg化合物67(幾何異構(gòu)體和水合物形式比例為水合物/酮6:4的混合物)溶于DMS0-d6中，然后在NMR裝置中將其加熱至IO(TC，然后使其達(dá)到50。C,籍此NMR僅僅表示微量的水合物形式和旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的比例為2:1。NMR數(shù)據(jù)(500MHz,DMSO-d6,50。C):0.90-1.04(m,4xCH3,主要和次要形式)，1.39-1.82(m,2xCH2CH(CH3)2和2xCH2CH(CH3)2,主要和次要形式)，3.56(m,H-6a,次要)，3.82(m,H-6A,主要)，3.97-4.25(m,4xH-l，主要和次要形式和H-6b,次要)，4.37(dd,H-6b,主要)，4.62(d,H-3,次要)，4.79(m,H,主要)，4.84(d,H-3,主要)，4.94(m,H國4，主要)，5.12(m,H-4,次要)，5.15-5.34(m,H-5主要和H-5次要，H次要,Jh,f主要=49.1Hz,Jh,f次要=49.4Hz),7.35(t,1H,Ar畫H),7.47(t,1H,Ar國H),7.57-7.70(m,2H,Ar國H),7.78(d,1H,Ar-H),8.18(d,-麗,次要)，8.70(d,-NH,主要)。實(shí)施例4備選的Pl差向異構(gòu)體。步驟a)o人o/V、72在室溫下，向攪拌的化合物(60)(1.58g,4.19mmo1)的曱醇(20mL)溶液中加入0.5M甲醇鈉的甲醇溶液(5mL),然后將其攪拌40分鐘。然后，反應(yīng)混合物用Dowex50WX8(H^形式)中和，進(jìn)行過濾，力口入三乙胺至輕微堿性，然后進(jìn)行濃縮和在甲苯(2x20mL)中進(jìn)行濃縮。在0。C下，向攪拌的殘余物和咪唑(0.43g,6.28mmo1)的DMF(10mL)溶液中加入叔丁基二曱基氯硅烷(0.76g，5.02mmo1),然后在室溫下將其攪拌過夜。然后，反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(100mL)進(jìn)行稀釋，順序用10%檸檬酸水溶液(3x50mL)和1M碳酸氫鈉水溶液(3x50mL)洗滌，進(jìn)行干燥(硫酸鈉)、過濾和在二氧化硅上進(jìn)行濃縮。對所得殘余物進(jìn)行柱色譜分離(分步梯度洗脫，乙酸乙酯的曱苯溶液，5-20%)，提供為漿液的完全保護(hù)的中間體(1.86g)。將在炭上的鈀(Aldrich10%,0.28g)和以上獲得的中間體(1.80g,4.00mmo1)的乙酸乙酯(40mL)混合物在輕微過壓下氫化l小時(shí)，然后將其濾過硅藻土并且進(jìn)行濃縮。在真空中通過干燥對所得物質(zhì)進(jìn)行結(jié)晶，提供為針形物的72(1.34g，90%)。NMR數(shù)據(jù)(400MHz,CDC13):1H,50.14(m,6H,Si(CH3)2)，0.90(m,9H,SiC(CH3)3),1.48(m,9H,C(CH3)3),2.53(m,1H,OH),2.78(dd,1H，-H畫6A),3.67-4.05(m,3H,H畫IA,H-1B和H-6B),4.05-4.21(m,2H,H-3和H-5),4.35-4.50(2brs,1H,H-2),4.57(m,1H,H國4).步驟b)在0。C下，在20分鐘時(shí)間內(nèi)，向攪拌的(72)(1.068g,2.97mmol)、苯曱酸(0.50g,4.46mmol)和三苯基膦(1.17g,4.46mmol)的THF(15mL)溶液中滴加加入二異丙基偶氮二羧酸酯(0.88mL,4.46mmol)的THF(5mL)溶液。然后，在室溫下將上述反應(yīng)混合物攪拌過夜，然后在二氧化硅上進(jìn)行濃縮。使用石油醚-乙酸乙酯9:1作為洗脫液對所得殘余物進(jìn)行快速色譜法分離，給出無色漿液(1.34g,97%)。麗R數(shù)據(jù)(400MHz,CDC13):1H,50.08-0.21(m,6H,Si(CH3)2),0.90(s,9H,SiC(CH3)3),1.42-1.56(m,9H,C(CH3)3),3.48(m,1H,H畫6A),3.70-4.01(m,3H，H誦1A,H-1B,H-6B次要和主要)，4.21,4.30(2d,1H,H-3),4.44,4.56(2brs,1H,H-2),4.72(m,1H,H-4),5.34(d,1H,H-5),7.45(t,2H,Ar-H),7.58(t,1H,Ar畫H),8.00(d,2H,Ar-H).步驟c)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage54</formula>在室溫下，向攪拌的化合物73(1.34g，2.89mmol)的曱醇(6mL)溶液中加入0.5M甲醇鈉的曱醇溶液(6mL),然后將其攪拌15分鐘。然后，反應(yīng)混合物用Dowex50WX8(H+-形式)中和并且進(jìn)行過濾。將獲得的溶液加入到類似于以上由(II)(0.187g,0.40mmo1)開始獲得的溶液中，然后進(jìn)行濃縮。使用甲苯-乙酸乙酯3:2作為洗脫液對所得殘余物進(jìn)行快速色譜法分離，通過在真空中干燥進(jìn)行結(jié)晶，給出為無色漿液的74(1.091g,92%)。NMR數(shù)據(jù)(400MHz,CDC13):1H,S0.06-0.20(m,6H,Si(CH3)2),0.89(s,9H,SiC(CH3)3),1.42-1.54(m,9H,C(CH3)3)，2.03(brs,1H,OH),3.28(dd,IH,H-6A),3.53-3.79(m,3H,H-1A,H隱IB,H-6B),4.19和4.34-4.56(2m,4H,H-2,H-3,H國4和H-5).在室溫下，向在Teflon涂覆的燒瓶中攪拌的(74)(0.428g，1.19mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入Deoxofluor(在THF中為50%,0.53mL),導(dǎo)致輕微升溫。在室溫下將所得反應(yīng)混合物攪拌72小時(shí)，然后用二氯甲烷(20mL)稀釋，用1M碳酸氫鈉水溶液(2x20mL)洗滌，進(jìn)行干燥(硫酸鈉)、過濾和在二氧化硅上進(jìn)行濃縮。使用石油醚-乙酸乙酯9:1作為洗脫液對所得殘余物進(jìn)行快速色譜法分離，給出為無色油的(IV)(0.118g，27%)。NMR數(shù)據(jù)(400MHz,CDC13):IH,S0.08-0.20(m,6H,Si(CH3)2),0.89(s,9H,SiC(CH3)3),1.42-1.53(m,9H,C(CH3)3),3.26和3.36(2dd,IH,H-6A),3.64(m,IH,H-1A),3.73-4.04(m，3H,H-1B,H國6B),4.20(dd，IH,H-3*),4.40,4.51(2s,IH,H-2),4.69(m,IH,H-4*)4.86,4.98(2brs,IH,H-5).*可以:帔互換。步驟e)向攪拌的(75)(0.229g，0.63mmol)的THF(8mL)溶液中加入1M四丁基氟化銨的THF溶液(0.70mL)，然后在室溫下將其攪拌40分鐘。然后，在二氧化硅上對上述反應(yīng)混合物進(jìn)行濃縮。使用曱苯-乙酸乙酯1:1作為洗脫液對所得殘余物進(jìn)行柱色譜分離，給出為無色硬漿液的75(0.150g,96%)。NMR數(shù)據(jù)(400MHz,CDC13):1H，^1.46-1.53(m,9H,C(CH3)3),2.70(d,0.3H,OH-次要)，3.26-3.46(m,1.7H,H-6A和OH-主要)，3.75-4.04(m,3H,H誦IA,H-1B和H畫6B),4.29,4.34(2d，1H,H-3*次要和主要)，4.43,4.50(2brs,1H,H-2次要和主要)，4.74(m,1H,H-4*),4.89,5.02(2brs,1H,H-5).在(TC下，向(75)(0.099g,0.40mmol)的二氯曱烷(2mL)溶液中加入三氟乙酸(2mL)，然后在室溫下攪拌35min，然后進(jìn)行濃縮和在曱苯(3x5mL)中進(jìn)行濃縮。向所得殘余物、1-羥基苯并三唑水合物(0.067g,0.44mmol)、N-乙基-N，-(3-二曱基氨基丙基)碳二亞胺xHCl(0細(xì)g,0.44mmol)和N-(叔丁氧羰基)-L-亮氨酸一水合物(0.105g,0.42mmol)的DMF(4mL)懸浮液中加入三乙胺(0.17mL,1.2mmol),然后在室溫下將其攪拌過夜。然后將上述反應(yīng)濃縮至一半體積，用乙酸乙酯(25mL)稀釋，順序用10%檸檬酸水溶液(3x15mL)和IM碳酸氬鈉水溶液(3xl5mL)洗滌，進(jìn)行干燥(硫酸鈉)、過濾和濃縮。使用乙酸乙酯-曱苯3:2對所得殘余物進(jìn)行柱色譜分離，提供為無色硬漿液的步驟f)(76)C0.137g，95%)。畫R數(shù)據(jù)(400MHz,CDC13,選擇的信號(hào))1H，§0,89-1.01(m,6H,C(CH)2),4.98,5.07(2dd，1H,H-5主要和H-5次要).LR-MS:CnH3oFN205計(jì)算值361.2.實(shí)測值361.1[M+H].LR-MS:CuH26FN205:計(jì)算值405.2.實(shí)測值405.1[M+H].P2-P1結(jié)構(gòu)單元與適宜的卣代烷基化的封端基團(tuán)偶聯(lián)，和如以上才莫型化合物所示將Pl羥基氧化成酮。實(shí)施例5新穎的P2結(jié)構(gòu)單元ZBotNH人CO,M9\z卜lH》催化劑*V^ji^_[j""^bMeOHBocNH人CO,MeDBU,DCM2RT,N243*(+)-1，2-雙(2S,5S)-diethylphosphonolanbenzene(環(huán)辛二烯)銠(I)三氟曱磺酸鹽1-曱基-環(huán)丁烷羧酸乙酯1由環(huán)丁烷羧酸乙酯通過J.Am.Chem.Soc.,Vol.103NO.21981436-442中所述的方法進(jìn)行制備。在0。C下，在氮?dú)鈿夥障?，?-甲基-環(huán)丁烷羧酸乙酯1(l叫)在無水THF中進(jìn)行攪拌。向該溶液中分份加入氫化鋁鋰(1.5eq),并且在室溫下將所得懸浮液攪拌3小時(shí)。所得反應(yīng)混合物在水上進(jìn)行冷卻，用1MHC1(水溶液)處理并且在0。C下攪拌20分鐘。使所得溶液通過硅藻土墊片，并且將所得濾液提取入乙醚中。所得有機(jī)相用MgS04干燥、進(jìn)行過濾和在真空中進(jìn)行濃縮，從而給出(l-甲基-環(huán)丁基)-甲醇2。將氯鉻酸吡啶镎(1.25eq)和相同重量的硅藻土吸收在無水二氯甲烷中作為懸浮液。向該懸浮液中滴加加入化合物2(l叫)的無水二氯甲烷溶液，并且在室溫下將得到的多相混合物攪拌3小時(shí)。使反應(yīng)混合物通過二氧化硅墊片，用19:1異己烷:乙酸乙酯洗脫，從而給出1-曱基環(huán)丁烷曱醛3。在攪拌下將化合物3(leq)溶于無水二氯曱烷中，并且向該溶液中加入Boc-磷甘氨酸三曱酉旨(0.5eq)和1,8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]-7-烯(1.2叫)。在氮?dú)庀?，將所得溶液在環(huán)境溫度下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物分配在二氯甲烷和相繼的1MHCl(水溶液)、飽和NaHC03(水溶液)和飽和NaCl(水溶液)中。有機(jī)層用MgS04干燥、進(jìn)行過濾和在真空下進(jìn)行濃縮。通過快速柱色語對所得油進(jìn)行純化，用1%曱醇的二氯曱烷溶液洗脫，從而給出2-叔丁氧羰基氨基-3-(l-甲基-環(huán)丁基)-丙烯酸甲酯4。將化合物4溶于無水曱醇中并且用氮?dú)饷摎狻?+)-l,2-二(2S,5S)-diethylphosphonolanbenzene(環(huán)辛二烯)銠(I)三氟甲磺酸鹽加入其中并且繼續(xù)脫氣IO分鐘。在氫氣氣氛下(4bar)將該反應(yīng)振搖48小時(shí)。在真空中對溶液進(jìn)行濃縮并且通過快速色譜法進(jìn)行純化，用二氯曱烷洗脫，從而給出2S-叔丁氧羰基氨基-3-(l-甲基-環(huán)丁基)-丙酸曱酯5。HPLC保留時(shí)間5.88min(在215和254nm下監(jiān)控)HPLC使用SynergyMaxRP80jum50x4.6mm柱，10—90%6min溶液B梯度(溶液A=0.1%TFA的水溶液和溶液B=10%A的乙腈溶液)，流速2ml/min。MS[M+H]+272.08(20%)[M-Boc+H]+172.06(100%)電噴射離子化，用乙腈/曱酸銨緩沖液洗脫。&NMR(400MHz,CDC13.4.89-4.79(IH，m)4.33-4,27(1H,m)3.71(3H,s)1.98-1.62(8H,m)1.42(9H，s)1.22(3H,s)實(shí)施例6(S)-2-[(S)-l-(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氨基]-4-曱基-戊酸.該標(biāo)題化合物如Li,C.S.等人BiooRg.Med.Chem.Lett200616，1985中所示進(jìn)行制備。實(shí)施例7(S)4-異丁基J-三氟曱基-喁唑烷該標(biāo)題化合物如Ishii,A.等人Synlett1997,1381中所示進(jìn)行制備。實(shí)施例8[(S)-l-(叔丁基-二曱基-硅烷氧基甲基)-3-曱基-丁基]-[2,2,2-三氟-乙畫(E)-亞基]-胺該標(biāo)題化合物如Li,C.S.等人BiooRg.Med.Chem.Lett.200616，1985中所示進(jìn)行制備。實(shí)施例9(3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-镲;氯化物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage59</formula>該標(biāo)題化合物通過對實(shí)施例1的結(jié)構(gòu)單元去保護(hù)和用鹽酸處理進(jìn)行制備。實(shí)施例10(S)畫2-[l-(4陽溴-苯基)-2，2,2-三氟-乙氨基]國4-甲基-戊畫l畫醇在-78。C下，在N2中，向攪拌的1,4-二溴苯(1.79g，7.61mmo1)的無水THF(5ml)溶液中滴加加入1.6M丁基鋰的己烷溶液(4.5ml，7.61mmo1)。在-78。C下，將所得溶液進(jìn)一步攪拌20分鐘，在此之后，將(S)-4-異丁基-2-三氟甲基-喁唑烷(0.5g,2.54mmo1)的無水THF(5ml)溶液滴加加入到芳基鋰溶液中。在-78。C下，繼續(xù)攪拌l小時(shí)。反應(yīng)混合物用5ml2M鹽酸溶液猝滅并且使混合物升溫至室溫。所得溶液用10ml氫氧化鈉進(jìn)行堿化，和所得溶液用乙酸乙酯(2x30ml)提取，對合并的有機(jī)組分進(jìn)行干燥(MgS04)和在真空中進(jìn)行濃縮。通過快速柱色譜(乙酸乙酯:異己烷1:4)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為黃色油的標(biāo)題產(chǎn)品(0.620g,53%),它是非對映異構(gòu)體的2:1混合物。MSM+H355,保留時(shí)間4.9&5.1min10-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例11(S)-4-甲基-2-[2,2,2-三氟-l-(4'-曱磺?；?聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊-l-醇向攪拌的(S)-2-[l-(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氨基]-4-曱基-戊-l-醇(0.1g,0.28mmo1)的DMF(5ml)溶液中加入(4-曱磺酰苯基)硼酸(0.067g,0.34mmo1)、碳酸鈉溶液(O細(xì)g,0.85mmo1,在5ml水中)和[1,1'-二(二苯膦基)二茂鐵]鈀(II)氯化物與CH2CU々1:1配合物(0.023g，0.03mmo1)。在80°C下將上述所得溶液加熱60分鐘。使上述反應(yīng)混合物冷卻至室溫并且用CH2C12(20ml)進(jìn)行稀釋。將有機(jī)物分離、進(jìn)行干燥(MgS04)并且在真空中進(jìn)行濃縮。通過快速柱色譜(異己烷:乙酸乙酉旨，5-66%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為黃色固體的標(biāo)題產(chǎn)品(0.087g,53o/o),它是非對映異構(gòu)體的2:l混合物。保留時(shí)間4.2&4.3min10-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例12(S)-4-曱基-2-[(S)-2,2,2-三氟-l-(4'-曱磺?；?聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊酸&(S)-4-曱基-2-[(R)-2，2,2-三氟-l-(4'-曱磺?；?聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊酸向攪拌的過碘酸(5.7g,4.19mmol)的乙腈(55ml)懸浮液中加入氧化鉻(VI)(llmg,O.Ollmmol)和水(0.25ml)。在室溫下將所得懸浮液攪拌數(shù)小時(shí)，然后在冰浴上將其冷卻至0°C,并且將(S)-4-曱基國2-[2,2,2-三氟-1-(4'-曱磺酰基-聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊-l-醇(1.8g,4.19mmol)滴加加入到10ml乙腈中，在0°C下繼續(xù)攪拌30分鐘。將反應(yīng)傾倒入酸化的Na2HP04溶液(12.0g，在200ml水中，用濃HC1調(diào)節(jié)pH值3)中，然后用乙醚(3x100ml)提取，合并的有機(jī)提取物連續(xù)用鹽水(1x100ml)、亞硫酸氬鈉溶液(1x100ml)和鹽水(1x100ml)洗滌。對有機(jī)提取物進(jìn)行干燥(Na2S04)和濃縮，從而給出為黃色油的標(biāo)題產(chǎn)品(1.3g,53%)，它是非對映異構(gòu)體的2:1混合物。保留時(shí)間4.2&4.4min10-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱。產(chǎn)品的非對映異構(gòu)混合物進(jìn)一步通過制備-HPLC[PhenomenexSynergiC1210mm10x150mm柱，30—90%15min溶液B梯度(溶液A=0.1%TFA水溶液和溶液B=10%A的乙腈溶液)流速18ml/min]進(jìn)行純化，從而得到比例為2:1的為白色固體的標(biāo)題化合物的兩種分離的非對映異構(gòu)體，(S)-4-曱基-2-[(S)-2,2,2-三氟-l-(4'-甲磺?；?聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊酸(0.192g)M+H444,(S)-4-曱基-2-[(R)-2,2，2-三氟-l-(4'-甲磺?；?聯(lián)苯-4_基)_乙氨基]-戊酸(0.120g)M+H444.實(shí)施例13(S)-l-((3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)誦4國甲基-2-[(R)-2,2,2-三氟-1-(4'-曱磺酰基-聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊-1-酮0向攪拌的(3R,3aR，6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-鏡;氯化物(0.05g,0.30mmo1)的CH2C12(2ml)和(S)-4-曱基-2誦[(R)-2,2,2畫三氟_1_(4'-甲磺酰基-聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊酸(0.120g,0.27mmo1)溶液中加入二環(huán)己基碳二亞胺(0.12g，0.54mmo1)和二異丙基乙胺(0.047ml,0.27mmo1)。在室溫下將上述所得溶液攪拌60分鐘。然后將反應(yīng)濾過硅藻土，和然后所得有機(jī)物用2MHC1(1x2ml)、飽和NaHC03(1x2ml)洗滌，進(jìn)行千燥(MgS04)和在真空中進(jìn)行濃縮。通過快速柱色譜(異己烷乙酸乙酯，25-100%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為白色泡沫的標(biāo)題產(chǎn)品(0.061g,39%),M+H573,保留時(shí)間5.8min10-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱。買施例13A(S)-l-((3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3，2-b]吡咯-4-基)-4-曱基-2-[(S)-2,2,2-三氟-1-(4'-曱磺酰基-聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊-1-酮向攪拌的(3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3，2-b]敗咯-4-镥:氯化物(0.08g,0.47mmo1)的CH2C12(2ml)和(3)畫4-甲基國2國[(8)-2,2,2-三氟_1_(4'-曱磺酰基-聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊酸(0.19g，0.43mmo1)溶液中加入二環(huán)己基碳二亞胺(0.18g,0.86mmo1)和二異丙基乙胺(0.074ml,0.43mmo1)。在室溫下將上述所得溶液攪拌60分鐘。然后將反應(yīng)濾過硅藻土，和然后所得有機(jī)物用2MHC1(1x2ml)、飽和NaHC03(lx2ml)洗滌，進(jìn)行干燥(MgS04)和在真空中進(jìn)行濃縮。通過快速柱色譜(異己烷:乙酸乙酯，25-100%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為白色泡沫的標(biāo)題產(chǎn)品(0.072g,29%),M+H573,保留時(shí)間5.8min10-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱。實(shí)施例14(3aS,6S,6aS)-6-氟-4-((S)-4-甲基-2-[(S)-2,2,2-三氟-l-(4'-曱磺酰基-聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊?；?-四氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-3-酉同向攪拌的(S)-1-((3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-bp比咯-4-基)-4-曱基-2-[(S)-2,2,2-三氟-l-(4'-曱磺酰基-聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊-l-酮(0.072g，0.13mmo1)的CH2C12(5ml)溶液中加入DessMartin過碘烷(0.11g,0.25mmol)。在室溫下將上述所得溶液攪拌2小時(shí)。所得反應(yīng)混合物用CH2C12(20ml)稀釋，用飽和NaHC03(2x10ml)洗滌，進(jìn)行干燥(MgS04)和在真空中進(jìn)行濃縮。通過制備-HPLC[PhenomenexSynergiC1210jum10x150mm柱，30一90%15min溶液B梯度(溶液A=0.1%TFA的水溶液和溶液B=10%A的乙腈溶液)流速18ml/min]對產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為白色固體的標(biāo)題化合物(a038g,52%),是與它的酮水合物的混合物。MSM+H571,M+H20+H589。保留時(shí)間5.5&5.9min10-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例15(3aS,6S，6aS)-6-氟-4-((S)-4-曱基-2-[(R)-2，2,2-三氟-l-(4'-曱磺酰基-聯(lián)苯_4_基)_乙氨基]_戊?；鶀_四氫_呋喃并[3,2-1)]吡咯-3-酉同將實(shí)施例14中所述的工藝用于(S)-l-((3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2國b]吡咯-4-基)-4-曱基-2-[(R)-2,2,2-三氟-l-(4'誦曱磺?；鶉?lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊-l-酉同(0.061g,O.llmmol)。通過制備-HPLC[PhenomenexSynergiC1210jnm10x150mm柱，30—卯％15實(shí)施例16(S)-2-[(S)-l-(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氨基]-l-((3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2七〗吡咯-4-基)-4-曱基-戊-1-酮<formula>formulaseeoriginaldocumentpage65</formula>向攪拌的(3S,3aS,6S，6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-鏃氯化物(2.250g,12.25mmo1)的DMF(40ml)和(S)畫2-[(S)-l-(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氨基]-4-甲基-戊酸(4.lg，11.14mmo1)溶液中加入HATU(5.08g,13.36mmo1)和二異丙基乙胺(5.8mls,33.41mmo1)。在室溫下將上述所得溶液攪拌過夜，然后在真空中對其進(jìn)行濃縮。將所得殘余物分散在水(50ml)中并且用乙酸乙酯(2x150ml)提取。合并的有機(jī)組分用飽和石友酸氫鈉溶液(1x100ml)洗滌，和用石危酸鎂進(jìn)行干燥并且進(jìn)行濃縮。通過快速柱色語(異己烷:乙酸乙酯，5-66%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為黃色油的標(biāo)題產(chǎn)品(2.95g，53%)MSM+H497,保留時(shí)間5.8min10-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱。實(shí)施例17(S)-l-((3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)-4-曱基-2-[(S)-2,2,2-三氟-1-(3'-甲磺酰基-聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊-1-酉同<formula>formulaseeoriginaldocumentpage65</formula>向攪拌的(S)-2-[(S)-l-(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氨基]-l-((3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)-4誦甲基陽戊-l-酮(O.lg,0.20mmol)的DMF(1ml)溶液中加入(3-曱磺?；交?硼酸(0.044g，0.22mmol)、2M碳酸鈉溶液(1ml)和[l，l'-二(二苯膦基)二茂鐵]鈀(II)氯化物與CH2C12(0.016g,0.02mmol)的1:1配合物。將所得溶液密封在試管中，并且在微波中將其加熱至160°C，保持5分鐘。使上述反應(yīng)混合物冷卻至室溫并且用CH2C12:H20(1:1,10ml)進(jìn)行稀釋。將有機(jī)物分離、進(jìn)行干燥(MgS04)并且在真空中進(jìn)行濃縮。通過快速柱色譜(異己烷:乙酸乙酯，5-66%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為黃色油的標(biāo)題產(chǎn)品(0.048g,42%)。MSM+H573.保留時(shí)間5.4min10-90MeCN:0.05%TFA6mki梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例18(3aS,6S,6aS)-6-氟-4-((S)-4-甲基-2-[(S)-2,2,2-三氟-l-(3'-曱磺?；?聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊酰基卜四氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-3-酉同將實(shí)施例14所述的工藝用于(S)-l-((3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2七]吡咯-4-基)-4-曱基-2-[(S)-2,2,2-三氟-1-(3'-甲磺?；?聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊-l-酮(0.048g,O.llmmol)。通過快速柱色譜(異己烷乙酸乙酯，5-66%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而給出標(biāo)題產(chǎn)品(0.013g,29%)，為與它的酮水合物的混合物。MSM+H571,M+H20+H589,保留時(shí)間4.2&4.7min10-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例19(3)-1-((311,3&11,63,6&3)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2七]吡咯-4-基)-4-曱基-2-[(S)-2,2,2-三氟-1-(4'-氟-聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊-1-酮將實(shí)施例17中所述的工藝用于(3)-2-[(3)-1-(4-溴-苯基)-2,2，2-三氟-乙氨基]-1-((3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫畫呋喃并[3,2-b]吡咯畫4-基)-4-甲基-戊-l-酮(0.15g,0.30mmo1)和4-氟苯基硼酸。通過快速柱色譜(異己烷:乙酸乙酯，5-66%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為油的標(biāo)題產(chǎn)品(0.069g，45%)。MSM+H513.保留時(shí)間5.6min30-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例20(3aS,6S,6aS)-6-氟-4-{(S)-4-甲基-2-[(S)-2,2,2-三氟-1-(4'曙氟-聯(lián)苯畫4國基)-乙氨基]-戊?；?-四氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-3-酮將實(shí)施例14所述的工藝用于(S)-l-((3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3，2七]吡咯-4-基)-4-甲基-2-[(3)-2,2,2-三氟-1-(4'-氟-聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊-l-酮(0.069g，0.13mmo1)。通過制備-HPLC[PhenomenexSynergiCi210jLim10x150mm柱，30—90%15min溶液B梯度(溶液A=0.1%TFA的水溶液和溶液B=10%A的乙腈溶液)流速18ml/min]對產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而獲得為白色固體的標(biāo)題化合物(0.036g,34%),是與它的實(shí)施例214'隱((S)畫2,2,2誦三氟-l畫[(S)-l-((3R,3aR,6S，6aS)-6-氟-3國羥基-六氫-呋喃并[3,2七]吡咯-4-羰基)-3-曱基-丁基氨基]-乙基}-聯(lián)苯-4-腈將實(shí)施例17所述的工藝用于(S)-2-[(S)-l國(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟誦乙氨基]-1-((311,3&11,63,6&3)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2七]吡咯-4-基)-4-曱基-戊-l-S同(0.15g,0.30mmo1)和4-氰基苯基硼酸。通過快速柱色譜(異己烷:乙酸乙酯，5-66%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為油的標(biāo)題產(chǎn)品(0.054g,35%)。MSM+H513.保留時(shí)間5.2min30-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱。實(shí)施例224'國((S)-2,2,2-三氟-l-[(S)-l-((3aS,6S,6aS)-6-氟-3-氧代-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-曱基-丁基氨基]-乙基卜聯(lián)苯-4-腈將實(shí)施例14中所述的工藝用于4'-{(S)-2,2,2-三氟-l-[(S)-l-((3aS，6S,6aS)-6-氟-3-氧代-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-曱基-丁基氨基]-乙基卜聯(lián)苯-4-腈(0.054g,0.13mmo1)。通過制備-HPLC[PhenomenexSynergiC1210jum10x150mm柱，30—90%15min溶液B梯度(溶液A=0.1%TFA的水溶液和溶液B=10%A的乙腈溶液)流速18ml/min]對產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而獲得為白色固體的標(biāo)題化合物(0.026g，34%),是與它的酮水合物的混合物。MSM+H518,M+H20+H536.保留時(shí)間5.1&5.61^1130-901^60^:0.05%?。堪?111^梯度(312反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例230-1-((311,3&11,63,6&3>6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3，2-1)]吡咯-4-基)-4-甲基-2-[(S)-2,2,2-三氟-1-(4'-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊-1-酮將實(shí)施例17中所述的工藝用于(3)-2-[(3)-1-(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氨基]-l-((3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)_4-曱基-戊-1-酮(0.15g,0.3Ommo1)和4-三氟苯基硼酸。通過快速柱色譜(異己烷:乙酸乙酯，5-66%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為油的標(biāo)題產(chǎn)品(0.086g,51%)。MSM+H563.保留時(shí)間5.9min30-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例24(3aS,6S,6aS)-6-氟-4-((S)-4.甲基-2-[(S)-2，2,2-三氟-l-(4'-三氟甲基畫聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊?；?-四氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-3-酮將實(shí)施例14中所述的工藝用于(S)-l-((3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)-4-甲基-2-[(S)-2,2,2-三氟-l-(4'-三氟甲基-聯(lián)苯_4-基)-乙氨基]-戊-l-酮(0.086g,0.15mmo1)。通過制備-HPLC[PhenomenexSynergiC1210jum10x150mm柱，30—90%15min溶液B梯度(溶液A=0.1%TFA的水溶液和溶液B=10%A的乙腈溶液)流速18ml/min]對產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而獲得為白色固體的標(biāo)題化合物(0.056g，34%)，是與它的酮水合物的混合物。MSM+H561,M+H20+H579.保留時(shí)間6.0&6.5min30-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例25(3)-1-((311,3&11,63,6&8)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-1)]吡咯-4-基)誦4-甲基-2-[(S)-2,2,2-三氟-1-(2'-氟-聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊-1-酮將實(shí)施例17中所述的工藝用于在二甲醚乙醇(1:1,1ml)中的(S)-2-[(S)-l-(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氨基]-l-((3R,3aR，6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)-4-曱基-戊-l-酉同(0.13g,0.26mmol)和2-氟苯基硼酸。通過快速柱色譜(異己烷:乙酸乙酯，5-66%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為油的標(biāo)題產(chǎn)品(0.05g,38%)。MSM+H513.保留時(shí)間5.4min30-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例26(3aS,6S，6aS)-6-氟-4-{(S)-4-甲基-2-[(S)-2，2,2-三氟-1-(2'-氟-聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊?；?-四氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-3-酉同將實(shí)施例14中所述的工藝用于(8)-1-((311,3&11,63,6&3)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-13]吡咯-4-基)-4-曱基-2-[(3)-2,2,2-三氟-1-(2'-氟-聯(lián)苯隱4-基)-乙氨基]-戊-l-酮(0.05g,O.lOmmol)。通過制備-HPLC[PhenomenexSynergiC1210pm10xl50mm柱，30—90%15min溶液B梯度(溶液A=0.1%TFA的水溶液和溶液B=10%A的乙腈溶液)流速18ml/min]對產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而獲得為白色固體的標(biāo)題化合物(0.036g,72%),是與它的酮水合物的混合物。MSM+H511,M+H20+H529.保留時(shí)間5.5&6.0min30-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例27(8)-1-((311,3&11,68,6&5)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-1)]吡咯-4-基)-4-甲基-2-[(S)-2,2,2-三氟-l-(4'-曱基硫烷基-聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊-l-酮將實(shí)施例17中所述的工藝用于在二曱醚乙醇(1:1,1ml)中的(S)-2-[(S)-l畫(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氨基]-l-((3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)-4-甲基-戊-l-酮(0.13g,0，26mmol)和4-曱疏基苯基硼酸。通過快速柱色譜(異己烷:乙酸乙酯，5-66%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為油的標(biāo)題產(chǎn)品(0.07g，50%)。MSM+H541.保留時(shí)間5.8min30-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例28(3aS,6S,6aS)-6-氟-4-((S)-4-曱基-2-[(S)-2,2,2-三氟-l-(4'-曱基硫烷基國聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊?；?-四氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-3-酉同將實(shí)施例14中所述的工藝用于(3)-1-((311,3&11,63,6&3)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3，2-b]吡咯-4-基)-4-曱基-2-[(S)-2,2,2-三氟-1-(4'-曱基硫烷基-聯(lián)苯_4-基)-乙氨基]-戊-l-酮(0.07g,0.13mmo1)。通過制備-HPLC[PhenomenexSynergiC1210|um10x150mm柱，30—90%15min溶液B梯度(溶液A=0.1%TFA的水溶液和溶液B=10%A的乙腈溶液)流速18ml/min]對產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而獲得為白色固體的標(biāo)題化合物(0.007g,10%),是與它的酮水合物的混合物。MSM+H539,M+H20+H557.保留時(shí)間5.7&6.3min30-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例29(3aS,6S,6aS)-6-氟-4-((S)-4-曱基-2-[(S)-2,2,2-三氟-l-(4'-曱基亞砜-聯(lián)苯_4_基)_乙氨基]_戊?；匪臍鋉呋喃并[3，2七]吡咯-3-酮將實(shí)施例14中所述的工藝用于(3)-1-((311,3&11,63,6&3)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-13]吡咯-4-基)-4-曱基-2-[(3)-2,2,2-三氟-1-(4'-甲基硫烷基-聯(lián)苯-4-基)國乙氨基]畫戊-l畫酉同(0.07g,CU3mmo1)。通過制備-HPLC[PhenomenexSynergiC1210|um10x150mm柱，30—90%15min溶液B梯度(溶液A=0.1%TFA的水溶液和溶液B=10%A的乙腈溶液)流速18ml/min]對產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而獲得為白色固體的標(biāo)題化合物(0.027g,39%),是與它的酮水合物的混合物。MSM+H555，M+H20+H573.保留時(shí)間3.9&4.5min30-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例30(S)-l-((3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3，2-b]吡咯-4-基)國4-曱基-2-[(S)-2，2,2-三氟-l-(4'-曱氧基-聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊-l-酉同將實(shí)施例17中所述的工藝用于在二曱醚:乙醇(1:1,1ml)中的(S)誦2-[(S)-l-(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氨基〗-l-((3R,3aR，6S，6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)-4-曱基-戊-l-酮(0.13g,0.26mmol)和4-曱氧基苯基硼酸。通過快速柱色譜(異己烷:乙酸乙酯，5-66%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為油的標(biāo)題產(chǎn)品(0力49g，36%)。MSM+H525.保留時(shí)間5.6min30-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例31(3aS,6S，6aS)-6-氟-4-((S)-4-曱基-2-[(S)-2,2,2-三氟-l-(4'-曱氧基-聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊?；匪臍?呋喃并[3,2七]吡咯-3-酮將實(shí)施例14中所述的工藝用于(S)-l-((3R,3aR，6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)-4-曱基-2-[(S)-2，2,2-三氟-l-(4'-曱氧基-聯(lián)苯_4-基)-乙氨基]-戊-1-酮(0.049g,0.09mmo1)。通過制備-HPLC[PhenomenexSynergiC1210|um10x150mm柱，30—90%15min溶液B梯度(溶液A=0.1%TFA的水溶液和溶液B=10%A的乙腈溶液)流速18ml/min]對產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而獲得為白色固體的標(biāo)題化合物(0.033g，68%),是與它的酮水合物的混合物。MSM+H523,M+H20+H541.保留時(shí)間5.3&5.9min30-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.一主實(shí)施例32(S)-l-((3R，3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)-4-甲基-2-[(S)-2,2,2-三氟-l-(4'-甲基-聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊-l-酮將實(shí)施例17中所述的工藝用于在二曱醚:乙醇(1:1,1ml)中的(S)-2-[(SH-(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氨基]-l-((3R,3aR,6S,6aS)-6-氟誦3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)-4-甲基-戊-l-酮(0.13g,0.26mmol)和4-甲基苯基硼酸。通過快速柱色譜(異己烷:乙酸乙酯，5-66%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為油的標(biāo)題產(chǎn)品(0.051g,38%)。MSM+H509.保留時(shí)間5.8min30-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例33(3aS,6S,6aS)-6畫氟-4-((S)-4-甲基-2國[(S)-2,2,2國三氟畫l-(4'-甲基-聯(lián)苯-4誦基)-乙氨基]-戊?；匪臍?呋喃并[3,2-b]吡咯-3-酮將實(shí)施例14中所述的工藝用于(3)-1-((311,3&11,63,633)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)-4-曱基-2-[(S)-2,2,2-三氟-l-(4'-曱基-聯(lián)苯_4-基)-乙氨基]-戊-1-酮(0.05&O.lOmmol)。通過制備-HPLC[PhenomenexSynergiC1210|um10x150mm柱，30—90%15min溶液B梯度(溶液A=0.1%TFA的水溶液和溶液B=10%A的乙腈溶液)流速18ml/min]對產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而獲得為白色固體的標(biāo)題化合物(0.033g,66%),是與它的酮水合物的混合物。MSM+H507,M+H20+H525.保留時(shí)間5.8&6.4min30-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例34[(S)-l-(3-溴-苯基)-2,2，2-三氟-乙基]-[(S)-l-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基曱基)-3-曱基-丁基]-胺在-78。C下，在N2中，向攪拌的1,3-二溴苯(9.1g，38.53mmo1)的無水THF(100ml)溶液中滴加加入1,6M丁基鋰的己烷溶液(24.1ml，38.53mmo1)。在-78。C下，將所得溶液另外攪拌20分鐘，在此之后將[(S)-l-(叔丁基-二曱基-硅烷氧基曱基)-3-曱基-丁基]-[2,2,2-三氟-乙-(E》)的無水THF(10ml)溶液滴加加入到芳基鋰的溶液中。在-78。C下，繼續(xù)攪拌1小時(shí)。反應(yīng)混合物用50ml2M鹽酸溶液猝滅并且使混合物升溫至室溫。所得溶液用100ml氫氧化鈉進(jìn)行堿化，和所得溶液用乙酸乙酯(2x100ml)提取，對合并的有機(jī)組分進(jìn)行干燥(MgS04)和在真空中進(jìn)行濃縮。通過反相C18柱色譜(H20:MeCN,50-100%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為黃色油的標(biāo)題產(chǎn)品(2.55g42%)MSM+H468,保留時(shí)間8.3min50-97MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例35(S)J-[(S)-l-(;溴-苯基)-H^三氟-乙氨基H-曱基-戊-l-醇向攪拌的[(S)-l-(3-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙基]-[(S)-l-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基曱基)-3-甲基-丁基]-胺(2.55g，5.4mmol)的曱醇(60ml)溶液中加入濃鹽酸(lml)，并且在O"C下加熱18小時(shí)。使反應(yīng)冷卻并且在真空中對其進(jìn)行濃縮。通過快速柱色譜(異己烷:乙酸乙酯，1-33%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為黃色油的標(biāo)題產(chǎn)品(1.57g,82%)。MSM+H354.保留時(shí)間4.1min30-97MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例36(S)J-[(S)-l-C3-溴-苯基)-2義^三氟-乙氨基]-4-甲基-戊酸向攪拌的過碘酸Ul.5g,50.82mmol)的乙腈(100ml)懸浮液中加入氧化鉻(VI)(23mg,0,023mmol)和水(0.25ml)。在室溫下將所得懸浮液攪拌數(shù)小時(shí)，然后在冰浴上將其冷卻至0。C，將(S)-2-[(S)-l-(3-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氨基]-4-曱基-戊-l-醇(1.5g，4.19mmo1)滴加加入到10ml乙腈中，在0。C下繼續(xù)攪拌30分鐘。將反應(yīng)傾倒入酸化的Na2HP04溶液(12.0g,在200ml水中，用濃HCl調(diào)節(jié)pH值3)中，然后用乙醚(3x100ml)提取，合并的有機(jī)提取物順序用鹽水(1x100ml)、亞硫酸氬鈉溶液(1x100ml)和鹽水(1x100ml)洗滌。對所得有機(jī)提取物進(jìn)行干燥(Na2S04)和濃縮，從而給出為黃色油的標(biāo)題產(chǎn)品(1.3g,85%)MSM+H368,保留時(shí)間5.0min30-97MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱。實(shí)施例37(S)-2-[(S)-l畫(3-溴-苯基)陽2,2,2國三氟-乙氨基]-l-((3R，3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)-4-曱基-戊-l-酉同向攪拌的(3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-镥;氯化物(0.71g,3.88mmo1)的DMF(10ml)和(S)-2-[(S)-l-(3-溴-苯基)-2,2,2-三氟畫乙氨基]-4畫曱基-戊酸(1.3g,3.53mmo1)溶液中加入HATU(1.6g,4.24mmo1)和二異丙基乙胺(1.8ml，10.59mmo1)。在室溫下將上述所得溶液攪拌過夜，然后在真空中對其進(jìn)行濃縮。然后將所得殘余物分散在水(50ml)中并且用乙酸乙酯(2xl50ml)提取。合并的有機(jī)組分用飽和碳酸氬鈉溶液(1x100ml)洗滌，和用硫酸鎂進(jìn)行干燥并且進(jìn)行濃縮。通過反相C18柱色i普(H20:乙腈，30-90%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為實(shí)施例38(3)-1-((311,3&11,63,6&3)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2七]吡咯-4-基)-4-曱基-2-[(S)-2,2,2-三氟-l-(4'-甲基-聯(lián)苯-3-基)-乙氨基]-戊-l-酉同向攪拌的(S)-2-[(S)-l-(3-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氨基]-l-((3R,3aR，6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]p比咯-4-基)-4-甲基-戊-l-酮(0.15g,0.30mmo1)的二曱基醚乙醇(1:1,1ml)溶液加入4-曱磺酰基苯基硼酸(0.044g，0.22mmo1)、2M碳酸鈉溶液(lml)和聚合物負(fù)載的四(三苯基膦)釔(0)(0.15g,0.015mmo1)。將所得溶液密封在試管中，并且在微波中將其加熱至160°C,保持5分鐘。使上述反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用CH2C12:H20(l:l,10ml)進(jìn)行稀釋并且進(jìn)行過濾。將有機(jī)物分離、進(jìn)行干燥(MgS04)并且在真空中進(jìn)行濃縮。通過快速柱色譜(異己烷:乙酸乙酯，5-66%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為透明油的標(biāo)題產(chǎn)品(0.071g,48%)。MSM+H509.保留時(shí)間5.5min10-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例39(3&3,68,6&3)-6-氟-4陽{(3)-4-曱基-2-[(3)-2,2,2-三氟-1-(4'陽曱基-聯(lián)苯-3-基)-乙氨基]-戊?；?-四氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-3-酉同將實(shí)施例14中所述的工藝用于(3)-1-((311,3311,63,6&8)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)-4-曱基-2-[(S)-2,2,2-三氟-l-(4'-曱基-聯(lián)苯-3誦基)-乙氨基]-戊-1-酮(0.072g,0.14mmo1)。通過制備-HPLC[PhenomenexSynergiC1210jlim10x150mm柱，30—90%15min溶液B梯度(溶液A=0.1%TFA的水溶液和溶液B=10%A的乙腈溶液)流速18ml/min]對產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而獲得為白色固體的標(biāo)題化合物(0.033g,46%),是與它的酮水合物的混合物。MSM+H507,M+H20+H525.保留時(shí)間5.9&6.6min30-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例40(S)-l-((3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)-4國曱基-2-[(S)-2，2,2-三氟-l-(4'-曱磺酰基-聯(lián)苯-3-基)-乙氨基]-戊-l-酉同將實(shí)施例38中所述的工藝用于(S)-2-[(S)-l-(3-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氨基]-l-((3R,3aR,6S，6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)_4_甲基_戊_1_酮(0.15g，0.30mmol)和4-甲磺?；交鹚帷Ｍㄟ^快速柱色譜(異己烷乙酸乙酯，5-100%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為油的標(biāo)題產(chǎn)品(0.07^41。/。)。MSM+H573.保留時(shí)間4.3min30-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例41(3aS，6S,6aS)-6-氟-4-((S)-4-甲基-2-[(S)-2,2,2-三氟-l-(4'-甲磺?；?聯(lián)苯_3-基)-乙氨基]-戊?；鶀-四氫-呋喃并[3,2七]吡咯-3-酉同將實(shí)施例14中所述的工藝用于(3)-1-((311，3&11,63,633)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-1)]吡咯-4-基)-4-曱基-2-[(S)-2,2，2-三氟-1-(4'-曱磺?；?聯(lián)苯_3-基)-乙氨基]-戊-1-酮(0.07g,0.12mmo1)。通過制備-HPLC[PhenomenexSynergiC1210nm10x150mm柱，30—卯％15min溶液B梯度(溶液A=0.1%TFA的水溶液和溶液B=10°/。A的乙腈溶液)流速18ml/min]對產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而獲得為白色固體的標(biāo)題化合物((X027g，39%)，是與它的酮水合物的混合物。MSM+H571,M+H20+H589.保留時(shí)間5.2&5.4min30-90MeCN:0.05yoTFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例42(S)-l-((3R,3aR，6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)-4誦曱基-2-[(S)-2,2,2-三氟-l-(3'-甲磺?；?聯(lián)苯-3-基)-乙氨基]-戊-l-酉同將實(shí)施例38所述的工藝用于(S)-2-[(S)-l-(3-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氨基]-1-((311,3&11,63，6&3)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-1)]吡咯-4-基)-4-甲基-戊-l-酮(0.15g,0.30mmol)和3-甲磺?；交鹚?。通過快速柱色譜(異己烷乙酸乙酯，5-100%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為油的標(biāo)題產(chǎn)品(0.1g，60o/。)。MSM+H573.保留時(shí)間4.4min30-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d柱實(shí)施例43(3aS,6S,6aS)-6-氟-4-((S)-4-甲基-2-[(S)-2,2,2-三氟-l-(3'-甲磺酰基-聯(lián)苯_3_基)_乙氨基]_戊?；鶀_四氫_呋喃并[3,2七]吡咯-3-酉同<formula>formulaseeoriginaldocumentpage81</formula>將實(shí)施例14中所述的工藝用于(8)-1-((311,3&11,63,638)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)-4-甲基-2-[(S)-2,2,2-三氟-H3'-曱磺?；?聯(lián)苯-3-基)-乙氨基]-戊-l-酮(0.1g,0.18mmo1)。通過制備-HPLC[PhenomenexSynergiC1210jum10x150mm柱，30—90%15min溶液B梯度(溶液A=0.1%TFA的水溶液和溶液B=10%A的乙腈溶液)流速18ml/min]對產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而獲得為白色固體的標(biāo)題化合物(0.051g，51%),是與它的酮水合物的混合物。MSM+H571,M+H20+H589.保留時(shí)間5.3&5.5min30-90MeCN:0.05%TFA,6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例44(3)-1-((311,3311,68,6&3)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2七]吡咯-4-基)誦4-甲基-2-[(S)-2,2,2-三氟-l-(2'-氟-聯(lián)苯-3-基)-乙氨基]-戊-l-酮<formula>formulaseeoriginaldocumentpage81</formula>將實(shí)施例38中所述的工藝用于(3)-2-[(3)-1-(3-溴-苯基)-2，2,2-三氟-乙氨基]-l-((3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)_4_甲基_戊_1_酉同(0.15g,0.30mmol)和2-氟苯基硼酸。通過快速柱色譜(異己烷:乙酸乙酯，5-66%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為油的標(biāo)題產(chǎn)品(O.llg,69%)。MSM+H513.保留時(shí)間5.1min30-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例45(3aS，6S,6aS)-6-氟-4-{(S)-4-甲基-2-[(S)-2，2>三氟-1-(2'-氟-聯(lián)苯-3-基)-乙氨基]-戊?；?四氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-3-酉同將實(shí)施例14中所述的工藝用于(8)-1-((311,3&11,63,6&3)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2七]吡咯-4-基)-4-曱基-2-[(3)-2,2,2-三氟-1-(2'-氟-聯(lián)苯-3-基)-乙氨基]畫戊誦l-酮(0.11g,0.21mmo1)。通過制備-HPLC[PhenomenexSynergiC1210jLim10x150mm柱，30—90%15min溶液B梯度(溶液A=0.1%TFA的水溶液和溶液B=10%A的乙腈溶液)流速18ml/min]對產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而獲得為白色固體的標(biāo)題化合物(0.054g，51%)，是與它的酮水合物的混合物。MSM+H511,M+H20+H529.保留時(shí)間5.4&6.1min30-90MeCN:0.05%TFA,6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例46(S)-l-((3R,3aR,6S，6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)-4國曱基-2-[(S)-2,2,2-三氟-l-(3-吡啶-4-基-苯基)-乙氨基]-戊-l-酮將實(shí)施例38中所述的工藝用于(S)-2-[(S)-l-(3-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氨基]-1-((3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)_4_甲基_戊_1_酮(0.15g,0.30mmol)和4-吡啶基硼酸。通過快速柱色譜(異己烷乙酸乙酯，5-100%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為油的標(biāo)題產(chǎn)品(0.071g,47o/o)。MSM+H496.保留時(shí)間3.7min30-90MeCN:10mM(NH3)2CO36min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例47(3aS,6S,6aS)-6-氟-4-((S)-4-甲基-2-[(S)-2,2,2-三氟-l-(3-吡啶-4-基-苯基)-乙氨基]-戊?；鶀-四氫-呋喃并[3,2七]吡咯-3-酮將實(shí)施例14中所述的工藝用于(8)-1-((311,3&11,63,6&3)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)-4-曱基-2-[(S)-2,2,2-三氟-l-(3-吡啶-4-基-苯基)-乙氨基]-戊-l-酮(0.071g,0.14mmo1)。通過制備-HPLC[PhenomenexSynergiC1210|um10x150mm柱，30—90%15min溶液B梯度(溶液A=0.1%TFA的水溶液和溶液B=10%A的乙腈溶液)流速18ml/min]對產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而獲得為白色固體的標(biāo)題化合物(0.008g,11%)，是與它的酮水合物的混合物。MSM+H494,M+H20+H512.保留時(shí)間4.0&4.6min30-90MeCN:10mM(NH3)2CO3,6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例481_(4_溴_噻唑基_2-基)-4-曱基-哌。秦標(biāo)題化合物如Palmer等人J.Med.Chem.2005,48,7520-7534中所示進(jìn)行制備。實(shí)施例49(3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3，2-b]吡咯-4-羧酸千酯該標(biāo)題化合物通過由實(shí)施例1的結(jié)構(gòu)單元進(jìn)行常規(guī)脫保護(hù)/保護(hù)進(jìn)行制備。實(shí)施例50(S)-2-[(S)-l-(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氨基]-4-曱基-戊酸異丙酯向攪拌的(S)-2-[(S)-l-(4-溴-苯基)-2，2,2-三氟-乙氨基]-4-曱基-戊酸(1.80g，4.9mmo1)的異丙醇(100ml)溶液加入到濃硫酸(2ml)中。在80。C下將上述反應(yīng)混合物加熱4小時(shí)。使反應(yīng)混合物冷卻、在真空中進(jìn)行濃縮并且將所得油分散在CH2Cl2(100ml)中、用飽和NaHC03(2x50ml)洗滌、進(jìn)行干燥(MgS04)和在真空中進(jìn)行濃縮，從而得到為棕色油的標(biāo)題化合物(1.77g,88%)。MSM+H412.保留時(shí)間6.6min30-97MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例51(S)-4-曱基-2-((S)-2,2,2-三氟-l-[4-(4,4,5,5-四曱基-[l,3，2]二氧硼戊環(huán)-2-基)-苯基]-乙氨基}-戊酸異丙酯向攪拌的(S)-2-[(S)-l-(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氨基]-4-甲基-戊酸異丙酯(2.2g,5.36mmoI)的DMF(30ml)溶液中加入二(頻哪基)硼烷(2.0g，8.04mmol)、乙酸鉀(1.6g,16.1mmol)和與CH2C12的[1,1'國二(二苯膦基)二茂鐵]鈀(II)氯化物1:1配合物(0.438g，0.54mmol)。將所得溶液密封在試管中，并且在微波中將其加熱至160°C,保持20分鐘。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并且濾過用乙酸乙酯(500ml)洗滌的短二氧化硅柱。在真空中對所得溶液進(jìn)行濃縮并且通過反相C18柱色譜(H20:MeCN,50-100%梯度)對所得粗產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為棕色油的標(biāo)題化合物(0.920g,38yo)。MSM+H458.保留時(shí)間4.6min70-97MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例52(S)-4-甲基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-{4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-噻唑基-4-基]-苯基}-乙氨基)-戊酸異丙酯向攪拌的(S)-4-曱基曙2-((S)-2,2,2-三氟-l-[4-(4,4,5,5-四甲基-[l,3,2]二氧硼戊環(huán)-2-基)-苯基]-乙氨基}-戊酸異丙酯(0.72g,1.57mmo1)的DMF:H20(1:1,20ml)溶液中加入l-(4-溴-噻唑-2-基)-4-曱基-哌。秦(0.5g,1.89mmo1)、碳酸鈉(0.2g，1.89mmo1)和與CH2C1"々[1,1'-二(二苯膦基)二茂鐵]鈀(II)氯化物1:1配合物(0.129g,0.16mmo1)。將所得溶液密封在試管中，并且在微波中將其加熱至160°C,保持20分鐘。使上述反應(yīng)混合物冷卻并且用CH2C12(100ml)進(jìn)行稀釋。將有機(jī)相分離、進(jìn)行干燥(MgS04)并且在真空中進(jìn)行濃縮。通過快速柱色譜(乙酸乙酯:MeOH,9:1)對所得粗產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為暗紅色固體的標(biāo)題產(chǎn)品(0.150g，13%)。MSM+H513.保留時(shí)間4.0min50-9710mM(NH3)2CO3:MeCN6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例53(S)-4-甲基-2-((S)-2,2,2-三氟-l-(4-[2-(4-曱基-哌嗪-l-基)-噻唑-4-基]國苯基卜乙氨基)-戊酸;鹽酸鹽向攪拌的2M鹽酸和二喁烷(1:1,10ml)混合物中加入(S)-4-甲基-2-((3)-2,2,2-三氟-1-{4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-噻唑基-4-基]-苯基}-乙氨基)-戊酸異丙酯(0.15g,0.29mmol)。然后，在IO(TC下將所得溶液加熱20小時(shí)，然后在真空中濃縮至干燥，從而給出為暗褐色固體的標(biāo)題化合物(0.14g,98%),其不需要進(jìn)一步純化即可使用。MSM-H469.實(shí)施例54(3aS,6S,6aS)-6-氟-3-氧代-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羧酸千酯向攪拌的(3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3，2七]吡咯-4-羧酸節(jié)酯(1.25g,4.44mmo1)的CH2C12(50ml)溶液中加入Dess-Martin過碘烷(2.1g,4.44mmol)。在室溫下將上述所得溶液攪拌2小時(shí)。上述反應(yīng)混合物用飽和NaHC03和10Q/()Na2S2O3溶液的混合物(1:1，100ml)猝滅，對有機(jī)相進(jìn)行干燥(MgS04)和在真空中進(jìn)行濃縮。通過快速柱色譜(異己烷:乙酸乙酯1:1)對所得粗產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而給出為透明油的標(biāo)題化合物(U5g，92%)。MSM+H280,TLCRf0.2(異己烷乙酸乙酯1:2)實(shí)施例55(3aS,6S,6aS)-6-氟-3,3-二曱氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羧酸芐酯向攪拌的(3aS,6S,6aS)-6-氟-3-氧代-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羧酸千酯(1.15g，4.1mmol)的曱醇(10ml)溶液中加入原甲酸三甲酯(5ml)和對曱苯磺酸(0.02g)。在60。C下將所得溶液攪拌3小時(shí)，然后使其冷卻并且在真空中進(jìn)行濃縮。通過快速柱色譜(異己烷:乙酸乙酯，5-66%梯度)對所得粗產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而給出為透明油的標(biāo)題產(chǎn)品U.07g，80%)。MSM+H326,TLCRf0.2(異己烷乙酸乙酯1:4)實(shí)施例56(3aS,6S,6aS)-6-氟-3,3-二曱氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯在H-Cube氫化器上，使(3aS,6S,6aS)-6-氟-3,3-二甲氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羧酸千酯(0.07g，0.22mmo1)的曱醇(10ml)溶液以lml/min的流速通過含有10%Pd/C(10mg)的柱體。對所得溶液進(jìn)行濃縮，從而給出為透明油的標(biāo)題產(chǎn)品(0.042g,99%)。MSM+H192.實(shí)施例57(S)-l-((3aS,6S,6aS)-6-氟-3,3-二曱氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4陽基)-4-曱基-2-((S)-2,2,2-三氟-l-(4-[2-(4-甲基-哌嗪-l-基)-噻唑-4-基]-苯基卜乙氨基)-戊-l-酮向攪拌的(3aS,6S,6aS)-6-氟-3,3-二曱氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯(O細(xì)g,0.44mmol)的DMF(10ml)和(S)-4-甲基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-{4-[2-(4-曱基-哌。秦-1-基)-噻唑-4-基]-苯基}-乙氨基)-戊酸；鹽酸鹽(0.14g,0.29mmol)的溶液中加入HATU(0.17g,0.44mmo1)和二異丙基乙胺(0.15ml,0.88mmol)。在室溫下將上述所得溶液攪拌過夜，然后在真空中對其進(jìn)行濃縮。然后，將所得殘余物分散在CH2Cl2(20ml)中和用飽和碳酸氬鈉溶液(1x10ml)洗滌，并且用石克酸4美干燥和進(jìn)行濃縮。通過反相C18柱色譜(H20:乙腈，30-90%梯度)對所得產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到為淺褐色油的標(biāo)題化合物(0.39g,55%)MSM+H644,保留時(shí)間4.7min30-9710mM(NH3)2CO3:MeCN6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱。實(shí)施例58(3aS.6S，6aS)-6-氟-4-[(S)-4畫曱基-2-((S)畫2,2,2-三氟-l國(4-[2-(4-曱基-哌嗪-1_基)_噻唑-4-基]-苯基}-乙氨基)-戊?；鵠-四氫-呋喃并[3,2-13]吡咯-3-向攪拌的(S)-l-((3aS,6S,6aS)-6-氟-3,3-二曱氧基-六氬-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-基)-4-曱基-2-((3)-2,2,2-三氟-1-{4-[2-(4-曱基-哌。秦-1-基)-瘞唑畫4-基]-苯基)國乙氨基)陽戊國l-酮(0.04g,O麓mmol)的三氟乙酸U.8ml)溶液中加入水(0.2ml)。在室溫下將上述所得溶液攪拌24小時(shí)。反應(yīng)混合物用CH2C12(5ml)稀釋，和利用N2氣流將溶劑混合物蒸發(fā)。然后，將所得粗產(chǎn)品再溶解于CH2C12中和用2MNa2C03溶液(lml)中和，將有機(jī)層分離并且在真空中進(jìn)行濃縮。通過制備-HPLC[PhenomenexSynergiC1210|um10x150mm柱，30—90%15min溶液B梯度(溶液A=10mM(NH3)2CO3的水溶液和溶液B=10%A的乙腈溶液)]對產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而獲得為白色固體標(biāo)題化合物(O.Olg,27%),是與它的酮水合物的混合物。MSM+H598,M+H20+H616.保留時(shí)間3.2&3.8min30-9710mM(NH3)2CO3:MeCN6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例59(S)-2-[l-(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氨基]-4-甲基-戊酸向攪拌的過碘酸(11.6g,50.82mmol)的乙腈(100ml)懸浮液中加入氧化4各(VI)(23mg,0.023mmol)和水(0.5ml)。在室溫下將所得懸浮液攪拌數(shù)小時(shí)，然后在水浴上將其冷卻至0°C,將(S)-2-[l-(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氨基]-4-曱基-戊-l-醇(1.5g,4.23mmo1)滴加加入到10ml乙腈中，在0。C下繼續(xù)攪拌30分鐘。將反應(yīng)傾倒入酸化的Na2HP04溶液(12.0g，在200ml水中，用濃HC1調(diào)節(jié)pH值3)中，然后用乙醚(3x100ml)提取，合并的有機(jī)提取物連續(xù)用鹽水(1x100ml)、亞硫酸氬鈉溶液(1x100ml)和鹽水(1x100ml)洗滌。對有機(jī)提取物進(jìn)行干燥(Na2S04)和濃縮，從而給出為黃色油的標(biāo)題化合物(1.61g，97%),它是非對映異構(gòu)體的2:1混合物。MSM+H368.保留時(shí)間5.2min10-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱實(shí)施例60(3)國2-[1-(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氨基]-1-((311,3&11,68,6&3)-6-氟陽3-羥基-六氫-呋喃并[3，2-b]吡咯-4-基)-4-曱基-戊-l-酮向攪拌的(311,3&11,68，6&3)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3,2七]吡咯-4-氯化物(0.09g，0.60mmol)的CH2C12(2ml)和(S)-2-[l-(4-溴-苯基)-2,2,2誦三氟-乙氨基]-4-甲基-戊酸(0.2g,0.54mmo1)的溶液中加入DCC(0.22g,1.09mmo1)和二異丙基乙胺(O.lml，0.54mmo1)。在室溫下將上述所得溶液攪拌過夜，然后將其濾過硅藻土并且在真空中對其進(jìn)行濃縮。通過快速柱色譜(異己烷乙酸乙酯，1:1)對所得化合物進(jìn)行純化，從而得到為黃色固體的標(biāo)題化合物(0.155,58%)MSM+H497,保留時(shí)間5.8min10-90MeCN:0.05%TFA6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱。實(shí)施例61(3aS,6S,6aS)-6-氟-4-((S)-4-甲基-2-[2,2,2-三氟-1-(3'-曱磺?；?聯(lián)苯-4-基)-乙氨基]-戊酰基}-四氫-呋喃并[3,2七]吡咯-3-酉同將實(shí)施例14中所述的工藝用于(S)-l-((3R,3aR,6S,6aS)-6-氟-3-羥基-六氫-呋喃并[3，2-b]吡咯-4-基)-4-甲基-2-[2,2，2-三氟-l-(3'-甲磺酰基-聯(lián)苯-4-基)畫乙氨基]-戊-l-酮(0.120g,0.27mmo1)。通過制備-HPLC[PhenomenexSynergiC1210|am10x150mm柱，30—90%15mm溶液B梯度(溶液A=0.1%TFA的水溶液和溶液B=10%A的乙腈溶液)流速18ml/min〗對產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而獲得為白色固體的標(biāo)題化合物(0.036g,34%)，是與它的酮水合物的混合物。MSM+H495,M+H20+H513.保留時(shí)間5.9&6.4min10-90MeCN:0.05%TFA,6min梯度C12反相50mm*4.6mmi.d.柱生物學(xué)實(shí)施例組織蛋白酶K蛋白水解催化活性的測定組織蛋白酶K的適宜測定〗吏用人類重組細(xì)胞酶進(jìn)^亍，比如如PDB中所述。IDBC016058標(biāo)準(zhǔn)；mRNA;HUM;1699BP。DE人類組織蛋白酶K(致密性成骨不全癥)，mRNA(cDNA克隆MGC:23107RXMEDLINE;.RXPUBMED;12477932.DRRZPD;IRALp962G1234.DRSWISS-PROT;P43235;重組細(xì)胞組織蛋白酶K可以在多種市售表達(dá)系統(tǒng)中進(jìn)行表達(dá)，包括大腸桿菌、畢赤氏酵母屬和桿狀病毒體系。純化的酶通過常規(guī)方法除去前序列進(jìn)行活化。測定動(dòng)力學(xué)常數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)測定條件使用熒光肽基質(zhì)，一般為H-D-Ala-Leu-Lys-AMC,并且或者在含有1mMEDTA和10mM2-巰基乙醇的100mMMes/Tris,pH7.0中進(jìn)行確定，或者在100mM磷酸鈉，imMEDTA,0.1%PEG4000pH6.5或者含有5mMEDTA和20mM半胱氨酸的lOOmM乙酸鈉，pH5.5中進(jìn)行，在各種情形中，任選含有作為穩(wěn)定劑的1MDTT。使用的酶濃度為5nM。原料基質(zhì)溶液在DMSO中制備為10mM濃度。篩選在60jliM的固定基質(zhì)濃度下進(jìn)行，詳細(xì)的動(dòng)力學(xué)研究使用250mm的基質(zhì)的倍比稀釋法進(jìn)行。在測定中，總的dmso濃度保持在3%以下。所有測定都在環(huán)境溫度下進(jìn)行。產(chǎn)品熒光(在390nm下激發(fā),在460nm下發(fā)射)使用LabsystemsFluoroskanAscent焚光板讀數(shù)器進(jìn)行監(jiān)控。產(chǎn)品發(fā)展曲線在15分鐘時(shí)間后，隨著AMC產(chǎn)品的形成而產(chǎn)生。組織蛋白酶siq測定測定使用表達(dá)桿狀病毒的人類組織蛋白酶S和得自于Bachem的boc-Val-Leu-Lys-AMC熒光基質(zhì)以384孔板規(guī)格進(jìn)行，其中7種測試化合物可以與含有已知的組織蛋白酶S抑制劑對照物的陽性對照平行進(jìn)行。基質(zhì)稀釋以280jLil/孔將12.5%DMSO加入到96深孔聚丙烯板的兩列的B-H行中。將70iul/孔的基質(zhì)加入到行A中。將2x250jul/孔的測定緩沖液(100mM磷酸鈉，lOOmMNaCl,pH6.5)加入到行A中，混合，并且沿著板二倍稀釋至行H。抑制劑稀釋。將100ju1/孔的測定緩沖液加入到96孔V底聚丙烯板的4行中的列2-5和7-12中。將200ju1/孔的測定緩沖液加入到列1和6中。將在DMSO中制備的第一種測試化合物加入到頂行的列1中，一般以提供10~30倍最初確定的粗Ki的體積提供。粗IQ根據(jù)初步運(yùn)行進(jìn)行計(jì)算，其中將10)ul/孑L的lmMboc-VLK-AMC(稀釋在測定緩沖液中的10mM原料的DMSO溶液的1/10稀釋物)分配到96孑LMicrofluorTM板的行B-H中和以20|u1/孔分配到行A中。將2ju1各種10mM測試化合物加入到行A,列1-10的各個(gè)單獨(dú)的孔中。將90ju1含有l(wèi)mMDTT和2nM組織蛋白酶S的測定緩沖液加入至4亍B-H的每個(gè)孔中，和以180iu1加入到行A中。使用多通道移液管混合行A和雙倍稀釋在行G中?；旌闲蠬和在熒光分光光度計(jì)上進(jìn)行讀數(shù)。讀數(shù)是擬合竟?fàn)幮砸种品匠痰睦忡R(Prism)數(shù)據(jù)，設(shè)置S=100|uM和KM=100juM,從而獲得IQ的估計(jì)值，最大最多100yM。將第二測試化合物加入到首行的列6中，將第三測試化合物加入到第二行的列1中，等等。向末行的列6中加入1jul對照物?；旌狭?和雙倍稀釋至列5?；旌狭?和雙倍稀釋至列10。使用設(shè)置為5x10ju1的8-通道多級移液管將10M1/孔的基質(zhì)分布到384孔測定板中。將基質(zhì)稀釋板的第一列分布到以行A開始的測定板的所有列中。多通道移液管的尖端間隔將正確地跳過交替的行。將第二列分布到以行B開始的所有列中。使用設(shè)置為4x10jul的12-通道多級移液管將10jil/孔的抑制劑分布到384孔測定板中。將抑制劑稀釋板的第一行分布到以Al開始的測定板的交替行中。多通道移液管的尖端間隔將正確地跳過交替的列。類似地，將第二、第三和第四行分別分布到以A2、B1和B2開始的交替行和列中。混合20ml測定緩沖液和20y11MDTT。加入足以給出2nM最后濃度的充分組織蛋白酶S。使用比如Multidrop384的分配器，將30p1/孔加入到測定板的所有孔中，并且在比如Ascent的熒光分光光度計(jì)上進(jìn)行讀數(shù)。反映熒光基質(zhì)的酶裂解程度的熒光讀數(shù)(激發(fā)和發(fā)射波長分別為390nm和460nm,使用帶通過濾器設(shè)置)，雖然是抑制劑，是各個(gè)孔的擬合線速度。使用SigmaPlot2000,使各種抑制劑的所有孔的擬合速率擬合至竟?fàn)幮砸种品匠?，從而確定V、Km和Ki值。組織蛋白酶LKi具有以下修正的方法用于測定組織蛋白酶L的Ki。所述酶是市售人類組織蛋白酶L(例如Calbiochem)?；|(zhì)為可以得自于Bahcem的H-D-Val-Leu-Lys-AMC。測定緩沖液為100mM乙酸鈉，lmMEDTA,pH5.5。在測定緩沖液中將DMSO原料(在100%DMSO中為10mM)稀釋至10%。在即將使用之前，在測定緩沖液中將酶制備為5nM濃度加上lmM二石克蘇糖醇。將在100%DMSO中制備的2ul10mM抑制劑分配入行A中。10ul50uM基質(zhì)(=在DMSO中的10mM原料的l/200稀釋物，在測定緩沖液中稀釋)抑制研究利用上述測定，使用變化濃度的測試化合物對潛在抑制劑進(jìn)行篩選。反應(yīng)通過將酶加入到基質(zhì)緩沖溶液和抑制劑中得到啟動(dòng)。K,值根據(jù)方程1進(jìn)行計(jì)算<formula>formulaseeoriginaldocumentpage94</formula>其中vo為反應(yīng)速度，V為最大速度，S為Michaelis常數(shù)KM的基質(zhì)的濃度，和I是抑制劑的濃度。本發(fā)明代表性的化合物在上述測定中測定組織蛋白酶K效能和選擇性。應(yīng)當(dāng)指出，組織蛋白酶L和S數(shù)據(jù)為微摩爾，而化合物如此有效地對抗組織蛋白酶K使得結(jié)果以納摩爾存在。<table>tableseeoriginaldocumentpage95</column></row><table>顯然，本發(fā)明化合物對組織蛋白酶K非常有效，而且對緊密相關(guān)的半胱氨酸蛋白酶組織蛋白酶L和S具有至少IOO倍的選擇性。另外，這些化合物一般具有良好的透水性(如下進(jìn)行測試)和其它DMPK性能。滲透性該實(shí)施例測量抑制劑通過人類胃腸通道細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)效果。該測定利用熟知的傳代數(shù)為40~60的Caco-2細(xì)胞。頂點(diǎn)到底外側(cè)的轉(zhuǎn)運(yùn)通常，每種化合物將在2~4個(gè)孔中進(jìn)行測試。底外側(cè)和頂端孔將分別含有1.5mL和0.4mL轉(zhuǎn)運(yùn)緩沖液(TB),和測試物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)濃度為10jLiM。此外，所有測試溶液和緩沖液將含有1%DMSO。在試驗(yàn)之前，使轉(zhuǎn)運(yùn)板預(yù)涂覆含有10%血清的培養(yǎng)介質(zhì)30分鐘，從而避免與塑料材料的非特異結(jié)合。在濾網(wǎng)支撐器上的培養(yǎng)基中21~28天之后，將細(xì)胞預(yù)備用于滲透性試驗(yàn)。轉(zhuǎn)運(yùn)板nol包含3行，每行4個(gè)孔。行l(wèi)表示洗滌液，行2"30分鐘"，和行3"60分鐘"。轉(zhuǎn)運(yùn)板no2包含3行，每行4個(gè)孔，一個(gè)表示行4"90分鐘",行5"120分鐘"和剩余行未指定。將培養(yǎng)介質(zhì)從頂端孔中除去，和將嵌入物轉(zhuǎn)入無嵌入物的2板中的轉(zhuǎn)運(yùn)板(板no.l)的洗滌行(No.1),其在行1~5中已經(jīng)用1,5mL轉(zhuǎn)運(yùn)緩沖液(HBSS,25mMHEPES,pH7.4)進(jìn)行了制備。在A—B篩選中，底外側(cè)孔的TB中還含有1%牛血清蛋白。將0.5mL轉(zhuǎn)運(yùn)緩沖液(HBSS,25mMMES，pH6.5)加入到嵌入物中，并且在37。C下，在polymix振蕩器中，將細(xì)胞單層在轉(zhuǎn)運(yùn)緩沖體系中緩沖30分鐘。在用緩沖體系平衡之后，通過EVOM切割粘著儀器對各個(gè)孔中的Transepithelial電阻值(TEER)進(jìn)行測量。TEER值通常為400-1000Q/孔(取決于應(yīng)用的傳代數(shù))。將轉(zhuǎn)運(yùn)緩沖液(TB,pH6.5)從頂側(cè)中除去，并且將嵌入物轉(zhuǎn)入30分鐘行(No.2)和新鮮的425inLTB(pH6.5)中，包括將測試物質(zhì)加入到頂端(給體)孑L中。在37。C下，以大約150~300rpm的低振搖速度，在polymix振蕩器中對板進(jìn)行培養(yǎng)。在行2中培養(yǎng)30分鐘之后，每30分鐘將嵌入物移到新預(yù)升溫的底外側(cè)(接收器)孑L中；行3(60分鐘)，4(90分鐘)和5(120分鐘)。在~2分鐘之后和在試-瞼結(jié)束時(shí)，從頂點(diǎn)溶液中提取25pL樣品。這些樣品表示試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)的給體樣品。在各個(gè)預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)，從底外側(cè)(接收器)孔中提取300)liL,并且在試^r結(jié)束時(shí)測量TEER的后來值。向所有收集的樣品中加入乙腈，直至其在樣品中的最后濃度為50%。將所有收集的樣品貯存在-20。C下，直至通過HPLC或者LC-MS進(jìn)行分析為止。底外側(cè)到頂點(diǎn)的轉(zhuǎn)運(yùn)通常，每種化合物將在2~4個(gè)孔中進(jìn)行測試。底外側(cè)和頂端孔將分別含有1.55mL和0.4mLTB,和測試物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)濃度為10juM。此外，所有測試溶液和緩沖液將含有1%DMSO。在試^^之前，使轉(zhuǎn)運(yùn)板預(yù)涂覆含有10%血清的培養(yǎng)介質(zhì)30分鐘，從而避免與塑料材料的非特異結(jié)合。在濾網(wǎng)支撐器上的培養(yǎng)基中21-28天之后，細(xì)胞預(yù)備用于滲透性試驗(yàn)。將培養(yǎng)介質(zhì)從頂端孔中除去，和將嵌入物轉(zhuǎn)入無嵌入物的新板(轉(zhuǎn)運(yùn)板)的洗滌行(No.l)中。該轉(zhuǎn)運(yùn)板包含3行，每行4個(gè)孔。行l(wèi)表示"洗滌"和行3為"試樣行"。轉(zhuǎn)運(yùn)板預(yù)先由在洗滌行No.1中1.5mLTB(pH7.4)和由在試-瞼行No.3(給體側(cè))中1.55mLTB(pH7.4)(包括測試物質(zhì))進(jìn)行制備。將0.5mL轉(zhuǎn)運(yùn)緩沖液(HBSS,25mMMES,pH6.5)加入到行No.l的嵌入物中，并且在37。C下，在polymix振蕩器中，將細(xì)胞單層在轉(zhuǎn)運(yùn)緩沖體系中平衡30分鐘。在用緩沖體系平衡之后，通過EVOM切割粘著儀器對各個(gè)孔中的TEER值進(jìn)行測量。將轉(zhuǎn)運(yùn)緩沖液(TB,pH6.5)從頂側(cè)中除去，并且將嵌入物轉(zhuǎn)入行3，并將新鮮的400pLTB(pH6.5)加入到嵌入物中。30分鐘之后，從頂端(接收器)孔中取出250pL并且用新鮮轉(zhuǎn)運(yùn)緩沖液替換。此后，每30分鐘將250ml樣品取出和用新鮮的轉(zhuǎn)運(yùn)緩沖液替換，直至在笫120分鐘試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，最后在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)測量TEER的后來值。在~2分鐘之后和在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，從底外側(cè)(給體)隔室中取出25jaL樣品。這些樣品表示試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)的給體樣品。向所有收集的樣品中加入乙腈，直至其在樣品中的最后濃度為50%。將所有收集的樣品貯存在-20"C下，直至通過HPLC或者LC-MS進(jìn)行分析為止。計(jì)算測定相對于時(shí)間吸收的累積分?jǐn)?shù)FAcum。FAeum由以下進(jìn)行計(jì)算廣F八=其中C^為間隔i結(jié)束時(shí)的接受器濃度，和Cm為間隔i開始時(shí)的給體濃度。應(yīng)當(dāng)獲得線性關(guān)系。滲透系數(shù)(Papp,cm/s)的測定由以下進(jìn)行計(jì)算p=("0)其中k為轉(zhuǎn)運(yùn)速率(min"),定義為通過以時(shí)間(min)為函數(shù)的吸收的累積分?jǐn)?shù)(FAeum)的線性回歸獲得的斜率，VR是吸收室中的體積(mL),和A為過濾器的面積(cm2)。參比化合物97在人類中吸收的類別標(biāo)記物在人類中的吸收％被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)<table>tableseeoriginaldocumentpage98</column></row><table>所有在此申請中引用的參考文獻(xiàn)，包括專利和專利申請，都在最大可能程度上引入作為參考。在整個(gè)說明書和隨后的權(quán)利要求中，除非上下文另有需要，措詞"包括"及其變體，比如"包含，，和"含有，，應(yīng)當(dāng)理解為包括所述整數(shù)、步驟、整數(shù)群或者步驟組，但不排斥任何其它整數(shù)、步驟、整數(shù)群或者步驟組。權(quán)利要求1.式II化合物其中R1和R2中之一為鹵素和另一個(gè)為H或者鹵素；R3為任選氟化的-C1-C5直鏈或者支鏈烷基，或者-CH2CR5C3-C4-環(huán)烷基；R4為H；R5為H、C1-C2烷基、C1-C2鹵代烷基、羥基、OC1-C2烷基、氟；R6為穩(wěn)定的、任選取代的單環(huán)或者二環(huán)碳環(huán)或者雜環(huán)，所述或各個(gè)環(huán)具有4、5或者6個(gè)環(huán)原子和0～3個(gè)選自S、O和N的雜原子，和其中任選的取代基包括1～3個(gè)選自R7的成員；R7獨(dú)立地選自鹵素、氧代、腈、硝基、C1-C4烷基、-XNRdRe、-XNReR8、-NReXR8、NH2CO-、X-R8、X-O-R8、O-X-R8、X-C(＝O)R8、X-(C＝O)NRdR8、X-NReC(＝O)R8、X-NHSOmR8、X-S(＝O)mR8、X-C(＝O)OR8、X-NReC(＝O)OR8；R8獨(dú)立地為H、C1-C4烷基、C3-C6環(huán)烷基、吡咯烷基、哌啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、哌嗪基、二氫吲哚基、吡喃基、硫代吡喃基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、唑基、異唑基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚基、苯基，它們各自任選被最多3個(gè)選自R9的成員取代；R9獨(dú)立地選自羥基、XR10、-XNRdRe、-XNReR10、-NReC1-C4烷基R10、-S(＝O)mRe、氰基、羧基、氧代、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4-烷氧基、C1-C4烷酰基、氨基甲?；?；R10為C3-C6環(huán)烷基、吡咯烷基、哌啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、哌嗪基、二氫吲哚基、吡喃基、硫代吡喃基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、唑基、異唑基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚基、苯基，它們各自任選被C1-C4烷基、鹵素、羥基、C1-C4烷氧基、氰基、-S(＝O)mRe、C1-C4鹵代烷基取代；X獨(dú)立地為結(jié)合鍵或者C1-C4亞烷基；Ra獨(dú)立地為H、C1-C4烷基或者CH3C(＝O)；Rb為C1-C4鹵代烷基；Rc為H、C1-C4烷基；或者Rc與R6以及它們都連接的碳原子合起來形成如R6所定義的碳環(huán)或者雜環(huán)；Rd獨(dú)立地為H、C1-C4烷基或者CH3C(＝O)；Re獨(dú)立地為H、C1-C4烷基；或者Rd和Re與它們連接的N原子合起來形成任選被R9取代的嗎啉、哌啶、哌嗪或者吡咯烷環(huán)；m獨(dú)立地為0、1或者2；或者其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或者N-氧化物。2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中該立體化學(xué)如以下部分結(jié)構(gòu)中所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中該立體化學(xué)如以下部分結(jié)構(gòu)中所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>4.根據(jù)權(quán)利要求l的化合物，其中Rb為三氟曱基和該立體化學(xué)如以下部分結(jié)構(gòu)中所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>5.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中112為氟和R1為H。6.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中113為CrC4支鏈烷基。7.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物，其中W為異丁基。8.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中在式II中所示的Ra為H。9.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中116為取代苯基。10.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物，其中取代基包含-NRdRe、-CH2NRdRe、-NReR9、-NReXR9、d-C4直鏈或者支鏈烷基或者-O-R9。11.根據(jù)權(quán)利要求IO的化合物，其中取代基包含-NH-CH2苯基、-NHCH2吡啶基或者-NH-苯基，其中各個(gè)苯基或者吡啶基環(huán)被d-CV烷基、-NRaRb、-NRbR8或者-NRbd-C4烷基R8取代。12.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物，其中取代基包含Cs-C6環(huán)烷基、吡咯烷基、哌啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、哌嗪基、二氫吲哚基、吡喃基、硫代吡喃基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、-惡唑基、異喁唑基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚基、苯基，它們各自任選被R9取代。13.根據(jù)權(quán)利要求12的化合物，其中取代基選自二氫吲哚基、吡喃基、硫代吡喃基、吡咯基、-惡唑基、異哺唑基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、嘧啶基、吡噪基、P引哚基，它們各自任選被R"取代。14.根據(jù)權(quán)利要求13的化合物，其中取代基為噻唑基、5-曱基-噻唑基或者噻吩基，它們各自任選被119取代。15.根據(jù)權(quán)利要求14的化合物，其中取代基為噻唑-4-基、5-曱基噻唑_4-基或者。塞吩-2-基，它們各自任選被R"取代。16.根據(jù)權(quán)利要求15的化合物，其中噻唑基、5-曱基噻唑基或者噻吩基被嗎啉基、嗎啉基曱基-、哌啶基、哌啶基甲基-、哌嗪基、哌嗪基甲基取代，所述嗎啉基、嗎啉基甲基-、哌啶基、哌啶基甲基-、哌嗪基、哌嗪基曱基中任一被C廣C3烷基、氟、二氟或者d-C3烷基-0-C廣C3烷基-取代。17.根據(jù)權(quán)利要求16的化合物，其中噻唑基、5-曱基噻唑基或者噻吩基的取代基為被曱基取代的哌啶-4-基，被C!-C3烷基或者甲基氧基乙基-進(jìn)行N-取代的哌。秦基，或者未被取代或者被氟或者二氟4-取代的哌啶-l-基甲基-。18.根據(jù)權(quán)利要求10的化合物，其中取代基包含任選被119取代的嗎啉、艱咬或者咪，秦環(huán)。19.根據(jù)權(quán)利要求18的化合物，包含咪咬-4-基或者N-咪。秦基，被RaN-取代，或者被-NRdRe4-取代的哌啶-l-基。20.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中RS為苯并噻唑基、苯并呋喃基、3-曱基苯并呋喃基或者苯并嚅唑基，它們各自任選被一個(gè)或者兩個(gè)117取代。21.根據(jù)權(quán)利要求20的化合物，其中一個(gè)所述取代基為-OR8、-OXR8、.NReR8或者-NReXR8。22.根據(jù)權(quán)利要求21的化合物，其中118為哌啶-4-基、咪溱-l-基或者哌啶-l-基或者嗎啉代，它們?nèi)我槐籆rC3烷基取代。23.根據(jù)權(quán)利要求22的化合物，其中116的任選取代基為N-嗎啉基乙氧基、N-嗎啉基曱氧基、N-曱基哌啶-4-基氧基或者N-甲基嗎啉-3-基曱氧基。24.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中任選的取代基W選自羥基、XR10、-XNRdRe、-XNReR10、-NReCrC4烷基R10、畫氰基、羧基、氧代、C廣C4烷基、Ci-Q-烷氧基、d-C4烷酰基或者氨基曱?；?。25.—種藥物組合物，包含如權(quán)利要求1-24任一項(xiàng)所定義的化合物及其藥學(xué)上可接受的載體或者稀釋劑。26.如權(quán)利要求l-24任一項(xiàng)中所定義的化合物在制造用于治療特征在于組織蛋白酶K的不適當(dāng)表達(dá)或者活化的疾病的藥物中的用途。27.根據(jù)權(quán)利要求26的用途，其中所述疾病選自骨質(zhì)疏松癥，齒齦疾病，比如牙齦炎和牙周炎，佩吉特病，惡性腫瘤的血4丐過多新陳代謝骨骼疾病特征在于過度軟骨或者基體降解的疾病，比如骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，骨癌，包括腫瘤形成，疼痛。28.如權(quán)利要求124任一項(xiàng)所定義的化合物，用作藥物。29.如權(quán)利要求l-24任一項(xiàng)所定義的化合物，用于治療或者預(yù)防特征在于組織蛋白酶K的不適當(dāng)表達(dá)或者活化的疾病。30.—種治療或者預(yù)防特征在于組織蛋白酶K的不適當(dāng)表達(dá)或者活化的疾病的方法，包括給藥需要其的主體安全和有效量的根據(jù)權(quán)利要求124任一項(xiàng)的化合物。全文摘要式II化合物，其中R¹和R²中之一為鹵素和另一個(gè)為H或者鹵素；R³為任選氟化的-C₁-C₅直鏈或者支鏈烷基，或者-CH₂CR⁵C₃-C₄-環(huán)烷基；R⁴為H；R⁵為H、C₁-C₂烷基、C₁-C₂鹵代烷基、羥基、OC₁-C₂烷基、氟；R⁶為穩(wěn)定的、任選取代的單環(huán)或者二環(huán)碳環(huán)或者雜環(huán)，所述或各個(gè)環(huán)具有4、5或者6個(gè)環(huán)原子和0～3個(gè)選自S、O和N的雜原子；Rb為鹵代烷基；Rc為H或者C₁-C₄烷基；和藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或者其N-氧化物，其特征在于組織蛋白酶K的不適當(dāng)表達(dá)或者活化的疾病的治療中具有效用，比如骨質(zhì)疏松癥、骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或者骨骼轉(zhuǎn)移。文檔編號(hào)C07D471/04GK101258153SQ200680032869公開日2008年9月3日申請日期2006年7月6日優(yōu)先權(quán)日2005年7月7日發(fā)明者D·蒂克爾,K·帕克斯,M·托澤,U·格拉博斯卡申請人:美迪維爾公司