專利名稱：：抗肌抑制素抗體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明在藥物領(lǐng)域內(nèi)，特別是抗肌抑制素的單克隆抗體的領(lǐng)域內(nèi)。更具體地本發(fā)明涉及高親和力嵌合抗肌抑制素抗體、人源化抗肌抑制素抗體或人抗肌抑制素抗體以及抗體用于治療、預(yù)防或診斷哺乳動(dòng)物和禽類物種中的多種疾病或病癥的用途。
背景技術(shù)：
：轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子p(TGF-(3)蛋白質(zhì)超家族的成員參與胚胎發(fā)育和成年組織的體內(nèi)穩(wěn)態(tài)。TGF-P超家族成員共有共同的結(jié)構(gòu)，包括蛋白質(zhì)的分泌所需要的肽信號(hào)序列和M末端片段，所述M末端片段是從大的前體蛋白質(zhì)的g末端蛋白水解切割的大約105-140個(gè)氨基酸，從而產(chǎn)生成熟蛋白。成熟蛋白的特征在于高度保守的半胱氨酸殘基，而成熟蛋白的活性形式是經(jīng)蛋白水解切割的前蛋白的二石克鍵連接的同型二聚體(Gray，A"和Maston，A.，Science,247:1328，1990).肌抑制素，也稱作生長(zhǎng)分化因子8(GDF-8)是TGF-P蛋白質(zhì)超家族的成員。肌抑制素與其他TGF-P家族成員共有結(jié)構(gòu)相似性。其包含充當(dāng)分泌信號(hào)的疏水性Jl^末端和對(duì)于蛋白酶解加工是重要的保守的RSRR結(jié)構(gòu)域。蛋白質(zhì)切割產(chǎn)生^^末端潛在相關(guān)肽(latencyassociatedpeptide)和形成生物活性的同型二聚體的M末端成熟信號(hào)肽。肌抑制素主要在發(fā)育中的和成年的骨骼肌中表達(dá)并且作用為骨骼肌的負(fù)調(diào)節(jié)物。成年小鼠中肌抑制素的全身性過(guò)量表達(dá)導(dǎo)致肌萎縮(Zimmers，等人，Science,296:1486-1488，2002)，然而相反地，肌抑制素敲除小鼠的特征在于為骨骼肌的過(guò)度生長(zhǎng)和超常增生，從而導(dǎo)致比它們的野生型同胞仔(littermate)大2至3倍的肌肉質(zhì)量以及脂肪積累的減少(McPherron，等人Nature,387:83-卯，1997)。已報(bào)導(dǎo)具有肌抑制素敲除突變的人與嚴(yán)重的肌肥厚(musclehypertrophy)相關(guān)(Scheulke，等人，NewEng.J.Med.350:2682，2004)。目前可獲得的用于治療肌萎縮或?qū)⑹芤嬗诩∪赓|(zhì)量和/或肌肉力量的增加的疾病或病癥(包括，例如肌營(yíng)養(yǎng)不良、虛弱、廢用性萎縮和惡病質(zhì)以及與肌萎縮關(guān)聯(lián)的疾病例如腎病、心力衰竭或疾病和肝病)的療法非常有限。由于其作為骨骼肌生長(zhǎng)的負(fù)調(diào)節(jié)物的作用，肌抑制素是用于治療或預(yù)防干預(yù)此類疾病或病癥或監(jiān)控此類疾病或病癥的進(jìn)程的希望的靶。除了其在骨骼肌調(diào)節(jié)中的直接作用外，肌抑制素還可以參與其他的生理過(guò)程，包^前月旨^T細(xì)^(preadipocyte)至月旨^r細(xì)^的分-化(Kiiri等/、BBRC，281:卯2-卯6，2001)和間接參與葡萄糖的體內(nèi)穩(wěn)態(tài)(McPherron，A和LeeS-J.JCI109:595，2002)以及骨形成的抑制(Hamrick，M.Mol.CellEvol.Biol.272388-91，2003;Hamrick等人CalcifTissueInt.71:63，2002)。因此，肌抑制素特異性拮抗劑例如肌抑制素特異性抗體也可證明在治療、預(yù)防或監(jiān)控疾病或病癥例如受益于增加骨的密度的疾病或病癥(例如骨質(zhì)疏水^癥)、n型糖尿病、代謝綜合征、肥胖癥和骨關(guān)節(jié)炎中是有用的。肌抑制素是跨物種高度保守的；人、小鼠、大鼠、雞、火雞和家牛中的肌抑制素的成熟形式的#^酸序列是100%的同一(參見圖2和3)。在牛中存在天然發(fā)生的肌抑制素突變，該突變與肌肉加倍的表型關(guān)聯(lián)(McPherron，等人PNAS，94:12457-61，1997)。由于肌抑制素在序列和功能上是跨物種高度保守的，因此抗肌抑制素抗體不僅在人中而且還在其他哺乳動(dòng)物(包括，例如家養(yǎng)動(dòng)物(例如，狗和貓)、運(yùn)動(dòng)動(dòng)物(例如，馬)、食物來(lái)源動(dòng)物(例如，牛、豬和羊))以及在禽類物種(例如，雞、火雞、鴨和其他獵禽和家禽)中提供了增加肌肉質(zhì)量、或治療或預(yù)防上面所列的此類疾病或病癥的具有前景的方法。生長(zhǎng)分化因子ll，也稱作GDF-ll或BMP-ll,是與肌抑制素最同源的TGF-P蛋白質(zhì)超家族的成貫。人肌抑制素的成熟形式與GDF-ll的氨基酸序列具有大約卯％的同一性；然而，GDF-ll相對(duì)于GDF-8在更廣泛的組織中表達(dá)，包括牙髓、腦、心臟、腎臟和肺以及肌肉和脂肪組織(Nakashima,等人Mech.ofDevelopment80:185，1999)。GDF-11敲除小鼠具有多種畸形而在出生后24小時(shí)內(nèi)死亡。特別地，小鼠展示額外的肋骨對(duì)、缺少腎臟和顯示胃、脾和胰臟的缺陷(McPherron等人，NatureGenetics22:260，1999;Esquela和Lee，Dev.Biol.257:356，2003;Harmon等人，Devpt.131:6163，2004)。最近發(fā)現(xiàn)人GDF-11控制時(shí)間窗(temporalwindow),在所述時(shí)間窗期間多能祖先保持產(chǎn)生不同的神經(jīng)后代的能力(Kim，J.等人Science308:1927-1930，2005)。存在對(duì)相對(duì)于與其他TGF-P超家族蛋白質(zhì)特別是GDF-11的結(jié)合，優(yōu)先結(jié)合肌抑制素的抗肌抑制素抗體的治療性需要。此外，存在對(duì)肌抑制素特異性抗體的需要，所述抗體以高親和力特別是高于它們借以結(jié)合GDF-ll的親和力的親和力(即如例如由更低的KD值顯示的更強(qiáng)的親和力)結(jié)合肌抑制素，從而允許患者接受的劑量水平被減少至最低，因而這可使使用這樣的抗體的給藥頻率比使用以更低的親和力(即，更高的Kd)與肌抑制素結(jié)合的抗體的給藥頻率更低。高親和力抗體也是想要的，因?yàn)槠淇梢允菇o患者施用抗體的途徑更靈活，因?yàn)槔缦鄬?duì)于皮下施用，靜脈內(nèi)施用的藥物是較不想要的。為了產(chǎn)生具有最低有效治療劑量的治療性抗肌抑制素抗體，也存在對(duì)在生物活性測(cè)定法中具有較低的或有利的ICs()值的肌抑制素特異性抗體的需要。也希望提供對(duì)于肌抑制素是特異性的抗體，其中由患者接受該抗體i秀發(fā)的對(duì)該抗體的任何免疫反應(yīng)減少至最小。本發(fā)明滿足這些需要和提供相關(guān)的有利方面。發(fā)明概述本發(fā)明的抗體是拮抗或中和與肌抑制素或其部分相關(guān)的至少一種體外或體內(nèi)生物學(xué)活性或性質(zhì)的嵌合的、人源化的或完全人的抗肌抑制素單克隆抗體和其抗原結(jié)合部分。優(yōu)選，本發(fā)明的抗體不以顯著高于背景的水平結(jié)合由成熟的肌抑制素優(yōu)選人肌抑制素的氰基酸40-64(包括界限)、43-57或45-59組成的肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體在體外肌抑制素/SBE報(bào)告基因測(cè)定(參見實(shí)施例5)中具有低于或等于大約40nM、30nM、25nM、20nM或10nM，更優(yōu)選低于或等于大約5nM、4nM、3nM、2nM或1nM的IC50。外GDF-11/SBE凈艮告基因測(cè)定(如此處實(shí)施例5中所描述的)中的ICso低至少20%或50%，更優(yōu)選至少大約2倍、3倍或4倍的ICso。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體的特征在于對(duì)于肌抑制素的強(qiáng)結(jié)合親和力(KD)，即，低于大約4.2xlO_9M或4.0xl(T9M，優(yōu)選低于大約4.6xl(T1()M、4.0xl0-WM或2xl0-WM和更優(yōu)選4氐于大約8xl0-UM、7xl0-"M、5xl(r12M或1.4xl(T12M。可選擇地，本發(fā)明的抗體的特征在于肌抑制素的Kd不大于大約4.2xlO-9M或4.0xlO-9M，優(yōu)選不大于大約4.6xl(T1()M、4.0x1010M或2xl(T"M和更優(yōu)選不大于大約8xl(T11M、7xl(T11M、5xl(T12M或1.4x1012M。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗肌抑制素抗體的特征在于其優(yōu)先結(jié)合肌抑制素，比與GDF-11蛋白質(zhì)的結(jié)合超過(guò)至少20。/。、30%或40%。優(yōu)選，相對(duì)于與GDF-ll的結(jié)合優(yōu)先結(jié)合肌抑制素的本發(fā)明的抗體的另外特征在于具有低于大約4.2xl(T9M或4.0xl(T9M，優(yōu)選低于大約4.6xl(T1()M、4.0xlO_1QM或2x10"°M和更優(yōu)選低于大約5xl(T12M或1.4xl(T12M的對(duì)于肌抑制素的KD。在另一個(gè)實(shí)施方案中，相對(duì)于與GDF-ll的結(jié)合優(yōu)先結(jié)因測(cè)定中具有低于或等于大約40nM、20nM或10nM，更優(yōu)選低于或等于大約5nM、4nM、3nM、2nM或1nM的ICS0。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗肌抑制素單克隆抗體包含具有選自SEQIDNO:74-102、140、141和142的^j^酸序列的輕鏈可變區(qū)("LCVR")多肽(圖9)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗肌抑制素單克隆抗體包含具有選自SEQIDNO:103-138的#^酸序列的重鏈可變區(qū)("HCVR")多肽(圖10)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗肌抑制素單克隆抗體包含(i)包含選自SEQIDNO:74-102、140、141和142的^j^酸序列的LCVR多肽，和(ii)包^il自SEQIDNO:103-138的^J^絲列的HCVR多肽。在優(yōu)選實(shí)施方案中，包含LCVR多肽的本發(fā)明的抗體還包含HCVR多肽，所述LCVR多肽含有具有下表1中所示的SEQIDNO的^J^,列，所述HCVR多肽包含具有相應(yīng)于下表1中特定LCVR的HCVR多肽的SEQIDNO的^J^酸序列。例如，包含含有SEQIDNO:88的^J^紗列的LCVR多肽的本發(fā)明的抗體優(yōu)選還包含含有SEQIDNO:103或119的^J^^列的HCVR多肽。表l(本發(fā)明的優(yōu)選Ab的序列)LCVRHCVR(SEQIDNO)74103751047610477103或11378105791038010681103，104，107，108，109，110，112，114，117,1188210483111841128511386103,108，1158711688103，11989103，120，123，124，125，126，127，128，129，130，131，132，133，134卯103，121，1229112192103，121931209412095120，13796120，1359712098120，13899120，136，138100120101135102136140137141123142138在另一個(gè)實(shí)施方案中，如由本領(lǐng)域內(nèi)可獲得的測(cè)定法(例如，竟?fàn)嶦LISA)所證明的，本發(fā)明的單克隆抗體是可與竟?fàn)幙贵w竟?fàn)帉?duì)人肌抑制素的結(jié)合的抗體，其中所述竟?fàn)幙贵w包含具有選自(i)SEQIDNO:98和138以及(ii)SEQIDNO:74和103的序列的兩個(gè)多肽在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗肌抑制素抗體具有重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其中重鏈可變區(qū)包含具有下列^J^酸序列CDRH1(SEQIDNO:42)、CDRH2(SEQIDNO:71)和CDRH3(SEQIDNO:72)的CDR區(qū)(參見圖7);和/或其中輕鏈可變區(qū)包含具有下列M酸序列CDRLl(SEQIDNO:12)、CDRL2(SEQIDNO:154)和CDRL3(SEQIDNO:37)的CDR區(qū)(參見圖6)。優(yōu)選，如圖7中所示的抗體中一樣，本發(fā)明抗體的重鏈CDR全部一起在一個(gè)抗體中，如圖6中所示的抗體中一樣，本發(fā)明抗體的輕鏈CDR全部一起在一個(gè)抗體中。本發(fā)明的抗肌抑制素單克隆抗體可另外包含選自人(或基本上人來(lái)源的)IgG!、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM和IgD，優(yōu)選IgGi或IgG4的重鏈恒定區(qū)。本發(fā)明的抗肌抑制素單克隆抗體可以另外包含人K或l輕鏈恒定區(qū)。當(dāng)將抗體用作人的治療劑或預(yù)防劑時(shí)，恒定區(qū)優(yōu)選基本上或完全是人來(lái)源的。當(dāng)將抗體用作非人動(dòng)物或非人動(dòng)物的卵的治療劑或預(yù)防劑時(shí)，恒定區(qū)優(yōu)選基本上來(lái)源于其中要將該抗體用作治療劑的動(dòng)物。(參見，例如，Clarkson，C.等人，A^/./附附.30:1195-1204,1993;美國(guó)申請(qǐng)?zhí)?002/01651350;和Genbank登錄號(hào)X69797、U03778、X16701、X07174、AB016711)。此處涉及不同的抗體形式。例如，本發(fā)明的抗肌抑制素單克隆抗體可包含或由完整的抗體(即，全長(zhǎng)，具有完整Fc區(qū)的)、基本上完整的抗體、其抗原結(jié)合部分(例如，F(xiàn)ab、Fab，、F(ab')2)或單鏈Fv片段組成。要理解此處所有此類抗體形式都包含在本文中以及在術(shù)語(yǔ)"抗體"內(nèi)。此外，可用可檢測(cè)的標(biāo)記對(duì)本發(fā)明的抗體進(jìn)行標(biāo)記，將其固定在固相上和/或與異源化合物例如酶或聚乙二醇分子綴合。此外，本發(fā)明的抗體凈皮認(rèn)為是單克隆來(lái)源的，即使它們?cè)谔腔Ｊ缴峡梢圆煌Ｔ诹硪粋€(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的抗肌抑制素單克隆抗體的藥物組合物。本發(fā)明的藥物組合物還可包含可藥用的載體。在所述藥物組合物中，本發(fā)明的抗肌抑制素單克隆抗體是活性成分。優(yōu)選藥物組用于治療用途的組合物是無(wú)菌的和可以是凍干的(任選補(bǔ)充以合適的稀釋劑)。本發(fā)明提供了在需要其的動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物或禽類物種，優(yōu)選人中抑制至少一種肌抑制素的生物學(xué)活性的方法，其包括對(duì)所述哺乳動(dòng)物或禽類物種施用治療有效量的、或預(yù)防有效量的或中和肌抑制素或抑制肌抑制素的量的本發(fā)明的抗肌抑制素單克隆抗體。本發(fā)明還提供了增加肌肉質(zhì)量或治療或預(yù)防通過(guò)中和或拮抗肌抑制素生物學(xué)活性而改善的疾病或障礙或病癥的方法，該方法包括對(duì)需要該治療或預(yù)防的患者(例如，人)施用治療或預(yù)防有效量的本發(fā)明的單克隆抗體。本發(fā)明包括用于藥物制造的本發(fā)明的抗肌抑制素單克隆抗體，所述藥物用于給哺乳動(dòng)物(優(yōu)選人)施用，通過(guò)對(duì)所述哺乳動(dòng)物施用治療有效量或預(yù)防有效量的本發(fā)明的抗肌抑制素單克隆抗體在需要其的哺乳動(dòng)物(優(yōu)選人)中治療例如，虛弱、惡病質(zhì)、年齡相關(guān)少肌癥(age-relatedsarcopenia)、肌萎縮或肌無(wú)力、肌病、肌營(yíng)養(yǎng)不良、骨質(zhì)疏松癥、肥胖癥、COPD、腎衰竭或疾病、肝衰竭或疾病、心力衰竭或疾病、代謝綜合征和II型糖尿病。本發(fā)明包括制造品，所述制造品包含包裝材料和包括在所述包裝材料內(nèi)的本發(fā)明的抗體，其中包裝材料包含標(biāo)明抗體中和肌抑制素活性或減少存在于系統(tǒng)中的肌抑制素水平的"^兌明書。本發(fā)明還提供了編碼本發(fā)明的抗體的核酸；包含該核酸的一個(gè)載體(或多個(gè)載體)，所述核酸任選地與被用該載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞識(shí)別的控制序列有效連接；包含該載體的宿主細(xì)胞；用于產(chǎn)生本發(fā)明的抗體的方法，其包括培養(yǎng)宿主細(xì)胞以使核酸表達(dá)和任選地從宿主細(xì)胞培養(yǎng)基回收抗體。附圖概述圖l顯示人前肌抑制素的M酸序列，信號(hào)序列以下劃線標(biāo)示，位于圖2顯示單體人成熟的肌抑制素的^J^酸序列?；钚匀思∫种扑厥峭ㄟ^(guò)二硫鍵結(jié)合的該多肽的同型二聚體。該序列與小鼠、大鼠、雞、火雞、狗、馬和豬的成熟的肌抑制素的序列同一。圖3顯示多種哺乳動(dòng)物和禽類物種的成熟肌抑制素的氨基酸序列的比對(duì)。圖4顯示人肌抑制素與人GDF-11的成熟形式的M酸序列的比對(duì)。圖5顯示本發(fā)明的抗體的示例性親本抗體YN41的HCVR和LCVR的^J^酸序列。該圖進(jìn)一步顯示編碼YN41抗體的HCVR和LCVR的示例性核苷酸序列。圖6顯示本發(fā)明的多種抗體的LCVR的CDR的M酸序列。圖7顯示本發(fā)明的多種抗體的HCVR的CDR的M酸序列。圖8顯示輕鏈k恒定區(qū)(所述恒定可在本發(fā)明抗體的全長(zhǎng)輕鏈的產(chǎn)生中有效連接至本發(fā)明抗體的LCVR)的M酸序列和IgG4恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域(所述結(jié)構(gòu)域在本發(fā)明的抗體的全長(zhǎng)重鏈的產(chǎn)生中有效連接至本發(fā)明的抗體的HCVR)的M酸序列。本圖還顯示編碼輕鏈k恒定區(qū)的示例性核苷酸序列和編碼重鏈IgG4結(jié)構(gòu)域的示例性核苷酸序列。圖9顯示本發(fā)明的多種抗體的LCVR的氨基酸序列的比對(duì)。CDR結(jié)構(gòu)域在第一個(gè)抗體序列中以下劃線標(biāo)示。圖IO顯示本發(fā)明的多種抗體的HCVR的M酸序列的比對(duì)。CDR結(jié)構(gòu)域在第一個(gè)抗體序列中以下劃線標(biāo)示。發(fā)明詳述本發(fā)明提供能夠特在體外和/或體內(nèi)中和或拮抗至少一種肌抑制素的活性的嵌合、人源化或完全人的抗肌抑制素單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其進(jìn)一步的特征在于在體外肌抑制素/SBE報(bào)告基因測(cè)定中顯示IC別低于大約40nM、20nM或10nM，更優(yōu)選低于或等于大約5nM、4nM、3nM、2nM或1nM和/或優(yōu)選顯示與肌抑制素的強(qiáng)結(jié)合親和力。本發(fā)明的抗體進(jìn)一步的特征在于它們優(yōu)先結(jié)合肌抑制素，比與肌抑制素最近的同源物GDF-ll的結(jié)合強(qiáng)至少20%。定義當(dāng)在此處使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)"成熟的肌抑制素"(對(duì)于人、鼠類、大鼠、雞、火雞、狗、馬和豬物種參見SEQIDNO:2)是指在肌抑制素的375個(gè)M酸的前蛋白形式的Arg266處蛋白水解切割后產(chǎn)生的蛋白質(zhì)的單體或同型二聚體形式。當(dāng)在此處使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)"肌抑制素"是指成熟肌抑制素。當(dāng)在此處使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)"前肌抑制素(promyostatin)"或"肌抑制素的前蛋白形式"，當(dāng)用于指人蛋白時(shí)，是指包含SEQIDNO:1中顯示的序列、作為單體或同型二聚體的蛋白質(zhì)。全長(zhǎng)抗體(當(dāng)其天然存在時(shí))是由通過(guò)二硫鍵互相連接的4條肽鏈(2條重(H)鏈(當(dāng)全長(zhǎng)時(shí)大約為50-70kDa)和2條輕(L)鏈(當(dāng)全長(zhǎng)時(shí)大約為25kDa))組成的免疫球蛋白分子。各條鏈的^J^末端部分包含大約100-110或更多個(gè)M酸的主要負(fù)責(zé)抗原識(shí)別的可變區(qū)。各條鏈的氛基末端部分確定了主要負(fù)責(zé)效應(yīng)子作用的恒定區(qū)。輕鏈分類為k或k鏈并且由本領(lǐng)域內(nèi)已知的特定恒定區(qū)表征。重鏈分類為Y、n、a、8或s鏈，并將抗體的同種型分別定義為IgG、IgM、IgA、IgD和IgE，這些同種型中的幾種可另外的分為亞類(同種型)例如，IgGj、IgG2、IgG3、IgG4、IgA!和IgA2。各重鏈類型的特征在于本領(lǐng)域內(nèi)已知的特定恒定區(qū)。不同種類的抗體的亞基結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)型在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的。各重鏈由N末端重鏈可變區(qū)(在此處為"HCVR")和重鏈恒定區(qū)組成。對(duì)于IgG、IgD和IgA，重鏈恒定區(qū)由三個(gè)結(jié)構(gòu)域(CH1、CH2和CH3)組成；和對(duì)于IgM和IgE，由4個(gè)結(jié)構(gòu)域(CH1、CH2、CH3和CH4)組成。各輕鏈由輕鏈可變區(qū)(在此處為"LCVR")和輕鏈恒定區(qū)CL組成。HCVR和LCVR區(qū)域可另外被再分成高變區(qū)(稱為互補(bǔ)性決定區(qū)域(CDR))，其間散布更加保守的稱為構(gòu)架區(qū)(FR)的區(qū)域。各HCVR和LCVR由3個(gè)CDR和4個(gè)FR組成，從^J^末端至羧基末端按下列順序排列FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。此處重鏈的3個(gè)CDR稱為"CDRH1、CDRH2和CDRH3"，輕鏈的3個(gè)CDR稱為"CDRL1、CDRL2和CDRL3"。CDR包含大多數(shù)與抗原形成特異性相互作用的殘基。CDR3通常是抗體結(jié)合部位中分子多樣性的最大來(lái)源。按照熟知的常規(guī)[例如，Kabat，"SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,"NationalInstitutesofHealth,Bethesda，Md.(1991)或Al畫Lazikani等人，J.Mol.Biol.273:927-948,1997中描述的Chothia編號(hào)方案，也參見國(guó)際互聯(lián)網(wǎng)網(wǎng)址http:www.rubic.rdg.ac.uk/andrew/bioinf.org/abs來(lái)將JL&酸分酉己至各鏈。抗體結(jié)合特定抗原的功能能力極大地受到6個(gè)CDR的影響。關(guān)于本發(fā)明的抗肌抑制素單克隆抗體(或簡(jiǎn)單地，"本發(fā)明的單克隆抗體，，)，術(shù)語(yǔ)"抗體"，如此處所用的，是指單克隆抗體。除非此處另外指出，此處所用的術(shù)語(yǔ)"單克隆抗體"是指嵌合抗體、人源化抗體或完全人抗體。優(yōu)選本發(fā)明的單克隆抗體存在于同質(zhì)的或基本上同質(zhì)的群體中?？墒褂美绫绢I(lǐng)域內(nèi)熟知的雜交瘤技術(shù)以及重組技術(shù)、噬菌體展示技術(shù)、合成技術(shù)克隆抗體"是指從單個(gè)拷貝或克隆(包括例如任何真核、原核或噬菌體克隆)產(chǎn)生的抗體，而不是借以產(chǎn)生其的方法。"單克隆抗體"可以是完整的抗體(包含完整的或全長(zhǎng)的Fc區(qū))、基本上完整的抗體或抗體的包含抗原結(jié)合部分的部分或片段，例如，嵌合抗體、人源化抗體或人抗體的Fab片段、Fab，片段或F(ab，)2片段。各輕^/重鏈對(duì)的可變區(qū)形成了抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)。因此，完整的IgG抗體具有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。除了在雙功能或雙特異性抗體中外，兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)相同。如此處所用的，"抗原結(jié)合部分，，或"抗原結(jié)合區(qū)"或"抗原結(jié)合片段"此處可互換，表示可變區(qū)內(nèi)抗體分子部分，其包含與抗原相互作用和賦予抗體對(duì)于抗原的其特異性和親和力的JL&酸殘基。該抗體部分包括保持抗原結(jié)合殘基的恰當(dāng)構(gòu)象所必需的構(gòu)架氨基酸殘基。優(yōu)選，本發(fā)明的抗體的抗原結(jié)合區(qū)的CDR是鼠類來(lái)源的或基本上是鼠類來(lái)源的，其中某些M酸殘基被改變以提高特定的活性(參見，例如，圖6和7)。優(yōu)選，本發(fā)明抗體的構(gòu)架區(qū)是人來(lái)源的或基本上是人來(lái)源的(至少95%、97%或99%的人來(lái)源；見例如圖9和10)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗原結(jié)合區(qū)或抗原結(jié)合區(qū)的CDR可來(lái)源于其他非人物種，包括但不限于兔子、大鼠或倉(cāng)鼠。在其他實(shí)施方案中，抗原結(jié)合區(qū)可以完全是人來(lái)源的或基本上是人源的，其具有某些氛基酸殘基經(jīng)改變以提高特定的活性例如親和力或特異性(參見，例如，圖6和7的以粗體印刷和下劃線標(biāo)示的M酸位置)。此外，此處所用的"單克隆抗體"可以是可通過(guò)用連接體序列連接編碼l!cVR和HCVR的DNA產(chǎn)生的單鏈Fv片段。(參見，Pluckthun，ThePharmacologyofMonoclonalAntibodies,第113巻,Rosenburg和Moore編著，Springer-Verlag,NewYork,第269-315頁(yè)，1994)。要理解無(wú)論是否指定片段或部分，此處所用的術(shù)語(yǔ)"抗體"包括這樣的片段或部分以及單鏈形式。只要蛋白質(zhì)保持特異性或優(yōu)先結(jié)合其預(yù)期的靶(即，表位或抗原)的能力，其就可包含在術(shù)語(yǔ)"抗體"的范圍內(nèi)。"單克隆抗體的群體"是指同質(zhì)的或基本上同質(zhì)的抗體^(即，群體中至少大約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%,更優(yōu)選至少大約97%或98%或最優(yōu)選至少99%的抗體在ELISA測(cè)定中竟?fàn)幭嗤目乖虮砦??？贵w可以#:或可以不#皮糖基牝并且仍然可落于本發(fā)明的范圍內(nèi)。如果單克隆抗體具有同一的Jl&酸序列，盡管它們可以在翻譯后修飾例如糖基化模式中不同，但它們可以是同質(zhì)的。"變體，，抗肌抑制素抗體，此處是指通過(guò)在親本抗體序列中添加、缺失和/或取代一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基而導(dǎo)致在#^酸序列上與"親本"抗肌抑制素抗體的M酸序列不同的分子。在優(yōu)選實(shí)施方案中，變體在親本抗體的一個(gè)或多個(gè)CDR區(qū)中包含一個(gè)或多個(gè)M酸取代。例如，變體可在親本抗體的一個(gè)或多個(gè)CDR區(qū)中包含至少一個(gè)(例如，從大約1至大約10個(gè)，和優(yōu)選從大約2至大約5個(gè))取代。關(guān)于變體序列的同一性或同源性，此處定義為在比對(duì)序列和如果需要引入空位(以獲得最大的百分?jǐn)?shù)序列同一性)后，變體序列中與親本抗體的殘差湘同的氨基酸殘基的百分?jǐn)?shù)?？贵w序列中的N末端、C末端或內(nèi)部的延伸、缺失或插入不應(yīng)當(dāng)解釋為影響序列的同一性或同源性。變體保留了結(jié)合肌抑制素的能力并且優(yōu)選具有優(yōu)于親本抗體的性質(zhì)。例如，變體在SBE/報(bào)告基因測(cè)定中可以具有更強(qiáng)的結(jié)合親和力、更^f氐的IC5Q或增強(qiáng)的抑制肌抑制素的生物學(xué)活性的能力。此處特定目的變體抗體是當(dāng)與親本抗休相比時(shí)，在生物活性上展示至少大約5倍，優(yōu)選至少大約10倍，和更優(yōu)選至少大約20、30或50倍增強(qiáng)的抗體。此處的"親本"抗體是由用于變體的制備的氨基酸序列編碼的抗體。親本抗體可以具有鼠類構(gòu)架區(qū)，但優(yōu)選具有人構(gòu)架區(qū)。親本抗體可以是鼠類(參見，例如，此處的圖x)抗體、嵌合抗體、人源化抗體或人抗體。此處所用的術(shù)語(yǔ)"特異性結(jié)合是指這樣的情況，其中特定結(jié)合對(duì)的一個(gè)成員不顯著地結(jié)合除了其特異性結(jié)合伴侶外的分子(，如可通過(guò)本領(lǐng)域可獲得的技術(shù)例如竟?fàn)嶦LISA、BIACORE測(cè)定或KINEXA測(cè)定測(cè)量的。當(dāng)例如本發(fā)明抗體的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域?qū)τ谠S多抗原具有的特定表位是特異性的，也可使用該術(shù)語(yǔ)，在該情況下，具有抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的特異性抗體將能夠特異性結(jié)合具有該表位的不同抗原。因此，本發(fā)明的單克隆抗體特異性結(jié)合GDF8和GDFll。此處使用的術(shù)語(yǔ)"優(yōu)先結(jié)合"是指這樣的情況，其中抗體對(duì)特異性抗原的結(jié)合，如通過(guò)本領(lǐng)域可獲得的技術(shù)例如竟?fàn)嶦LISA或使用BIACORE或KINEXA測(cè)定法的KD測(cè)量所測(cè)量的，比其對(duì)不同的抗原的結(jié)合大至少大約20%。因此，本發(fā)明的單克隆抗體相對(duì)于對(duì)GDF-ll的結(jié)合優(yōu)先結(jié)合GDF-8。類似地，抗體可優(yōu)先于相同抗原內(nèi)的不同表位而與抗原內(nèi)的一個(gè)表位優(yōu)先結(jié)合。術(shù)語(yǔ)"表位"是指分子的能夠被抗體在一個(gè)或多個(gè)抗體的抗原結(jié)合區(qū)域識(shí)別和結(jié)合的部分。表位通常由分子的化學(xué)活性表面基團(tuán)例如氨基酸或糖的側(cè)鏈組成并且具有特定的三維結(jié)構(gòu)特征和特定的電荷特征。"抑制性表位"和/或"中和表位")是指當(dāng)在完整分子(在本案中，肌抑制素)的背景中時(shí)該分子的生物的生物學(xué)活性的喪失或減小的表位。術(shù)語(yǔ)"表位"，如此處所用的，還指在動(dòng)物優(yōu)選哺乳動(dòng)物例如小鼠或人中具有抗原和/或免疫原性活性的多肽的部分。術(shù)語(yǔ)"抗原性表位"，如此處所用的，定義為多肽的抗體可特異性結(jié)合(如可通過(guò)本領(lǐng)域內(nèi)熟知的任何方法例如通過(guò)常規(guī)免疫測(cè)定法確定的)的部分?？乖砦徊恍枰欢ㄊ敲庖咴缘?，但可以是免疫原性的。"免疫原性表位"，如此處所用的，定義為多肽的在動(dòng)物中引起抗體應(yīng)答(通過(guò)本領(lǐng)域內(nèi)已知的任何方法確定的)的部分。(參見，例如，Geysen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:3998-4002(1983))。關(guān)于本發(fā)明的抗體，術(shù)語(yǔ)"生物學(xué)性質(zhì)"或"生物活性"、"活性"、"生物學(xué)活性，，此處可互換使用，其包括但不限于表位/抗原親和力和特異性，在體內(nèi)或體外中和或拮抗肌抑制素的活性的能力、肌抑制素/SBE才艮告基因測(cè)定法中的ICso或體外活性測(cè)定法中其他的、抗體的體內(nèi)穩(wěn)定性和抗體的免疫原性質(zhì)。抗體的其他可鑒定的生物學(xué)性質(zhì)包括例如交叉反應(yīng)性(即，通常地，與被乾向的肽的非人同源物或與其他蛋白質(zhì)或組織的交叉反應(yīng)性)和在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中保持蛋白質(zhì)的高表達(dá)水平的能力?？墒褂帽绢I(lǐng)域承認(rèn)的技術(shù)觀察或測(cè)量或估量上述性質(zhì)或特征而不限制受體結(jié)合、細(xì)胞因子或生長(zhǎng)因子的產(chǎn)生和/或分泌、爪蟾屬(Xen叩us)動(dòng)物冠發(fā)育、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和使用來(lái)自不同來(lái)源包括人、靈長(zhǎng)類動(dòng)物或當(dāng)需要時(shí)任何其他所需來(lái)源的組織切片的免疫組織化學(xué)，所述技術(shù)包括但不限于ELISA、竟?fàn)嶦LISA、表面等離振子共振分析、體外和體內(nèi)中和測(cè)定法。此處使用的術(shù)語(yǔ)"肌抑制素的活性，，是指與活性肌抑制素蛋白質(zhì)關(guān)聯(lián)的一種或多種生理生長(zhǎng)調(diào)節(jié)或形態(tài)發(fā)生活性。例如，活性肌抑制素是骨骼肌質(zhì)量的負(fù)調(diào)節(jié)物?；钚约∫种扑匾部烧{(diào)節(jié)肌肉特異性酶(例如，肌酸激酶)的產(chǎn)生、刺激成肌細(xì)胞增殖和調(diào)控前脂肪細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞。關(guān)于本發(fā)明的抗體的活性，此處使用的術(shù)語(yǔ)"抑制"或"中和"是指基本上拮抗、抑制、阻止、限制、減緩、中斷、消除、終止、減少或逆轉(zhuǎn)例如要被抑制的那些(包括但不限于生物學(xué)活性或性質(zhì)、疾病或病癥)的進(jìn)程或嚴(yán)重性的能力。抑制或中和優(yōu)選是至少大約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、卯％、95%或更高。術(shù)語(yǔ)"分離的"，當(dāng)用于核酸或蛋白質(zhì)(例如，抗體)方面時(shí)，是指4皮鑒定的并且從至少一種通常在其天然來(lái)源中與其結(jié)合的污染物分離的核^列和蛋白質(zhì)。優(yōu)選，"分離的抗體"U本上不含具有不同抗原特異性的其他抗體的抗體(例如，本發(fā)明的藥物組合物包含特異性結(jié)合肌抑制素的分離的抗體并且基本不含特異性結(jié)合除了肌抑制素以外的抗原的抗體)。術(shù)語(yǔ)"Kabat編號(hào)"和"Kabat標(biāo)記，，此處可互換使用。在本領(lǐng)域內(nèi)承認(rèn)的這些術(shù)語(yǔ)是指給抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)中比其他氨基酸殘基更可變(即，高變的)的氨基酸殘基編號(hào)的系統(tǒng)(Kabat，等人，Ann.NYAcad.Sci.190:382-93(1971);Kabat，等人，SequencesofProteinsofImmunological，'Interest,第5版，U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIH公開號(hào)No.91-3242(1991))。當(dāng)將其置于與另一種多核苷酸的功能關(guān)系中時(shí)，多核苷酸,皮"有效連接"。例如，如果啟動(dòng)子或增強(qiáng)子影響序列的轉(zhuǎn)錄那么它們有效連接至編碼序列。當(dāng)編碼肽的多核苷酸有效連接時(shí)，優(yōu)選當(dāng)它們處于相同的可讀框中時(shí)，所述肽"有效連接至"另一個(gè)肽。術(shù)語(yǔ)"個(gè)體"、"受試者"和"患者"此處可互換使用，意指動(dòng)物優(yōu)選哺乳動(dòng)物(包括非靈長(zhǎng)類和靈長(zhǎng)類動(dòng)物)或禽類物種，包括但不限于鼠類、猿、人、哺乳動(dòng)物農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物(farmanimal)(例如，牛、豬、羊)、哺乳動(dòng)物運(yùn)動(dòng)動(dòng)物(例如，馬)和哺乳動(dòng)物寵物(例如，狗和貓)；優(yōu)選該術(shù)語(yǔ)是指人。術(shù)語(yǔ)也指禽類物種，包括但不限于雞和火雞。在某些實(shí)施方案中，受試者，優(yōu)選哺乳動(dòng)物(優(yōu)選人)另外的特征在于患有可受益于肌抑制素的減少的水平或減少的生物活性的疾病或障礙或病癥。在另一個(gè)實(shí)施方案中受試者(優(yōu)選哺乳動(dòng)物優(yōu)選人)另外表征為處于發(fā)生可受益于肌抑制素的減少的水平或肌抑制素的減少的生物活性的障礙、疾病或病癥的風(fēng)險(xiǎn)中。術(shù)語(yǔ)"栽體"包括能夠運(yùn)輸其所連接的另一種核酸的核酸分子，包括但不限于質(zhì)粒和病毒載體。某些載體能夠在它們被導(dǎo)入的宿主細(xì)胞中自主復(fù)制，而其他載體可在導(dǎo)入宿主細(xì)胞后被整合入宿主細(xì)胞的基因組，從而隨著宿主基因組被復(fù)制。此外，某些載體能夠指導(dǎo)有效連接至其的基因的表達(dá)。這樣的載體此處稱為"重組表達(dá)載體，，(或簡(jiǎn)稱為"表達(dá)載體")，示例性載體在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的。如此處所用的，措辭"細(xì)胞"、"宿主細(xì)胞"、"細(xì)胞系"和"細(xì)胞培養(yǎng)物"此處可互換使用，包括作為本發(fā)明的任何分離的多核苷酸或包含編碼本發(fā)明的HCVR、LCVR或單克隆抗體的序列的任何重組栽體的受者的單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞培養(yǎng)物。宿主細(xì)胞包括單個(gè)宿主細(xì)胞的后代，由于天然的、意外的或有意的突變和/或改變，后代可以不必與原始親本細(xì)胞完全同一(在形態(tài)學(xué)上或在總DNA套(DNAcomplement)上)。宿主細(xì)胞包括在體內(nèi)或體外用一個(gè)或多個(gè)重組載體或表達(dá)本發(fā)明的單克隆抗體或其輕鏈或重鏈的多核苷酸轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或感染的細(xì)胞。包含本發(fā)明的重組載體(穩(wěn)定地?fù)饺胨拗魅旧w或沒有)的宿主細(xì)胞也可稱為"重組宿主細(xì)胞"。用于本發(fā)明的優(yōu)選的宿主細(xì)胞是CHO細(xì)胞(例如，ATCCCRL-9096)、NSO細(xì)胞、SP2/0細(xì)胞和COS細(xì)胞(ATCC例如，CRL-1650、CRL曙1651)、HeLa(ATCCCCL-2)。用于本發(fā)明的其他宿主細(xì)胞包括植物細(xì)胞、酵母細(xì)胞、其他哺乳動(dòng)物細(xì)胞和原核細(xì)胞?？贵w表征本發(fā)明涉及以高親和力特異性結(jié)合肌抑制素的分離的單克隆抗體。本發(fā)明的抗體優(yōu)選是嵌合抗體、人源化抗體或人抗體或其抗原結(jié)合部分。此外，本發(fā)明的抗體在體內(nèi)或體外中和肌抑制素的生物學(xué)活性。本發(fā)明的抗肌抑制素單克隆抗體對(duì)肌抑制素的特異性結(jié)合允許本發(fā)明的抗體被用作肌抑制素相關(guān)性病癥、疾病或障礙(即，受益于降4氐肌抑制素的水平或拮抗或抑制肌抑制素的生物學(xué)活性的病癥、疾病或障礙)的治療劑或預(yù)防劑。在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了以低于大約4.2x1(T9M或4.0x10-9M，優(yōu)選低于大約4.6xl(T1()M、4.0xl(T1()M或2xl(T1()M和更優(yōu)選低于大約8xlO-"M、7xlOuM、5xlO"M或1.4xlO"M的對(duì)于肌抑制素的結(jié)合親和力(kd)結(jié)合肌抑制素或其部分的抗肌抑制素單克隆抗體?？蛇x擇地，本發(fā)明的抗體表征為對(duì)肌抑制素的Ko不高于大約4.2xlO力M或4.0x1(T9M，優(yōu)選不高于大約4.6xl(T10M、4.0xl(T1()M或2xl(T10M和更優(yōu)選不高于大約8xl(rUM、7xl(T"M、5xl(T12M或1.4xl(T12M?？贵w親和力可以通過(guò)下文實(shí)施例所描述的確定。優(yōu)選，此處描述的由強(qiáng)結(jié)合親和力所表征的本發(fā)明的這些抗體在體外肌抑制素/SBE報(bào)告基因測(cè)定中也具有低于40nM、30nM、25nM、20nM或10nM，更優(yōu)選低于或等于大約5nM、4nM、3nM、2nM或1nM的IC5o。甚至更優(yōu)選地，此處描述的由強(qiáng)結(jié)合親和力所表征的抗體在體外肌抑制素/SBE報(bào)告基因測(cè)定中具有的ICso比抗體在體外GDF-11/SBE報(bào)告基因測(cè)定(如此處實(shí)施例5中所描述的)中的ICso低至少20%,更優(yōu)選至少大約2倍、3倍或4倍。優(yōu)選此處描述的由強(qiáng)結(jié)合親和力表征的本發(fā)明的此類抗體的進(jìn)一步的特征在于如通過(guò)本領(lǐng)域的技術(shù)例如通過(guò)竟?fàn)嶦LISA測(cè)定法或通過(guò)BIACORE或KINEXA測(cè)定測(cè)量的，它們優(yōu)先與GDF-8反應(yīng)，超過(guò)與GDF-ll的>^應(yīng)至少20%，從而證明抗體對(duì)GDF-8的親和力比對(duì)GDF-ll的親和力高至少20%(即，更低的Kd)。優(yōu)選此處描述的由強(qiáng)結(jié)合親和力所表征的本發(fā)明的這些抗體的進(jìn)一步特征在于它們不結(jié)合由成熟的肌抑制素優(yōu)選人肌抑制素的氨基酸40-64(包含界P艮)、43-57或45-59組成的肽。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抗肌抑制素單克隆抗體，其具有的ICso在體外肌抑制素/SBE報(bào)告基因測(cè)定中低于或等于大約40nM、30nM、25nM、20nM或10nM，更優(yōu)選低于或等于大約5nM、4nM、3nM、2nM或lnM。甚至更優(yōu)選，抗肌抑制素單克隆抗體在體外肌抑制素/SBE報(bào)告基因測(cè)定中的ICs。比該抗體在體外GDF-11/SBE報(bào)告基因測(cè)定(如此處實(shí)施例5中所描述的)中的ICso低至少大約2倍、3倍或4倍。具有上述ICso的本發(fā)明抗體的進(jìn)一步特征在于對(duì)于肌抑制素的Kd低于大約4.2x10-9M或4.0xl(T9M,優(yōu)選低于大約4.6xl(T10M、4廁010M或2xlO"。M和更優(yōu)選低于大約8x1(T"M、7x10-"M、5x10"2m或1.4xl(T12M的；可選擇地，對(duì)于肌抑制素的Ko不大于大約4.2xlO力M或4.0xlO_9M,優(yōu)選不大于大約4.6xl(r1GM、4.0xlO"qM或2xl(r1QM和更優(yōu)選不大于大約8xl(T"M、7xlO-11M、5xl0-12M或1.4xl0"2M，該對(duì)于肌抑制素的KD比該抗體具有的對(duì)于GDF-ll的Kd低至少大約20%。具有上述ICs。的本發(fā)明的抗體的進(jìn)一步的特在可在于，如使用本領(lǐng)域內(nèi)可獲得的方法例如ELISA測(cè)定法或竟?fàn)嶦LISA測(cè)定法或例如使用BIACORE或KINEXA測(cè)定法測(cè)量的KD值測(cè)量的，當(dāng)與它們結(jié)合GDF-ll的能力相比，它們優(yōu)先結(jié)合肌抑制素至少大約20%,優(yōu)選至少大約2倍、3倍或4倍。具有上述ICso的本發(fā)明的抗體的進(jìn)一步的特征可在于(例如，在ELISA測(cè)定中)其不以顯著高于背景的水平結(jié)合由成熟的肌抑制素(優(yōu)選人肌抑制素)的氨基酸40-64(包括界限)、43-57或45-59的組成的肽。優(yōu)選，就本發(fā)明的抗體的優(yōu)先結(jié)合而被檢測(cè)的肌抑制素和GDF-ll多肽都是成熟蛋白(優(yōu)選哺乳動(dòng)物或禽類來(lái)源的，甚至更優(yōu)選人來(lái)源的)的同型二聚體形式。然而，就本發(fā)明的抗體的優(yōu)先結(jié)合而被檢測(cè)的肌抑制素和GDF-ll多肽可以是成熟蛋白的單體形式或前蛋白形式?？墒褂帽绢I(lǐng)域內(nèi)廣泛已知的雜交瘤方法(參見例如，Kohler等人,A^wre，256:495，1975)或可4吏用重組DNA方法(例如，如美國(guó)專利號(hào)4,816,567中所描述的)制備單克隆抗體。通常，可通過(guò)將合適的無(wú)限增殖細(xì)胞系(例如，骨髓瘤細(xì)胞系例如SP2/0)與,皮免疫的動(dòng)物的抗體產(chǎn)生性細(xì)胞融合來(lái)產(chǎn)生雜交瘤。從用目的抗原免疫的動(dòng)物獲得抗體產(chǎn)生性細(xì)胞，優(yōu)選脾或淋巴節(jié)的抗體產(chǎn)生性細(xì)胞?？墒褂眠x擇培養(yǎng)條件分離融合的細(xì)胞(雜交瘤)，然后通過(guò)有限稀釋對(duì)其進(jìn)行克隆。就針對(duì)抗原的單克隆抗體的產(chǎn)生測(cè)定其中雜交瘤生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。優(yōu)選，通過(guò)免疫沉淀或通過(guò)體外結(jié)合測(cè)定法例如放射免疫測(cè)定(RIA)或ELISA確定雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的mab的結(jié)合特異性?？赏ㄟ^(guò)合適的篩選測(cè)定法選擇產(chǎn)生具有希望的結(jié)合性質(zhì)的抗體的細(xì)胞。用于這樣的分離和篩選的方法在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的?？墒褂卯a(chǎn)生或分離本發(fā)明的抗體的其他合適的方法，所述方法包括例如從文庫(kù)選擇重組抗體(例如，單鏈Fv或Fab)的方法或依賴于能夠產(chǎn)生人抗體譜的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(例如，小鼠)免疫的方法(參見例如，Jakobovits等人，7V"漢爿cflu/.Sc/.t/S/i，90:2551-2555，1993;Jakobovits等人，7VW""，362:255-258，1993;Lonberg等人，美國(guó)專利號(hào)5,545,806;Surani等人，美國(guó)專利號(hào)5,545,807)。本發(fā)明和術(shù)語(yǔ)"抗體"也包括包含來(lái)源于不同物種的部分的單鏈抗體和嵌合抗體、人源化抗體或靈長(zhǎng)類源化(primatized)(嫁接CDR的)抗體以及嵌合的或嫁接CDR的單鏈抗體等?？赏ㄟ^(guò)常規(guī)技術(shù)化學(xué)地、合成地將這些抗體的不同部分連接在一起，或可使用遺傳工程技術(shù)將其制備為連續(xù)的蛋白質(zhì)。例如，可表達(dá)編碼嵌合的或人源化的鏈的核酸來(lái)產(chǎn)生連續(xù)的蛋白質(zhì)。參見例如，美國(guó)專利號(hào)4,816,567;歐洲專利號(hào)0，125，023Bl;美國(guó)專利號(hào)4,816,397;歐洲專利號(hào)0，120，694Bl;WO86/01533;歐洲專利號(hào)0，194，276Bl;美國(guó)專利號(hào)5,225，539;歐洲專利號(hào)0,239,400Bl和美國(guó)專利號(hào)5，585，089和5，698，762。關(guān)于靈長(zhǎng)類源化抗體也參見，Newman,R.等人BioTechnology，10:1455-1460，1993,關(guān)于單鏈抗體，參見Ladner等人，美國(guó)專利號(hào)4,946,778和Bird,R.E.等人，Science,242:423-426，1988。此外，也可產(chǎn)生抗體的功能性部分，包括嵌合抗體、人源化抗體、人抗體或單鏈抗體的抗原結(jié)合部分。上述抗體的功能性部分保留了其所來(lái)源的全長(zhǎng)抗體的至少一種抗原結(jié)合功能和/或生物學(xué)功能或生物活性。優(yōu)選功能性部分保留相應(yīng)的全長(zhǎng)抗體的抗原結(jié)合功能(例如，結(jié)合哺乳動(dòng)物的肌抑制素的成熟形式的能力)。特別優(yōu)選的功能性部分或片段保留抑制哺乳動(dòng)物成熟肌抑制素的一種或多種功能或生物活性特征例如結(jié)合活性、信號(hào)傳導(dǎo)活性和/或細(xì)胞應(yīng)答的刺激的能力。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，功能性部分或片段可抑制成熟的肌抑制章與一種或多種其配體的相互作用和/或可抑制一種或多種受體介導(dǎo)的功能。能夠結(jié)合成熟的肌抑制素(的抗體部分或片段包括但不限于Fv、Fab、Fab，和F(ab，)2片段并且包含在本發(fā)明內(nèi)?？赏ㄟ^(guò)酶促切割或通過(guò)重組技術(shù)產(chǎn)生此類片段。例如，木瓜蛋白酶或胃蛋白酶切割可以分別產(chǎn)生Fab或F(ab，)2片段。最小的抗原結(jié)合片段是Fv，其由HCVR和LCVR結(jié)構(gòu)域組成。Fab片段由在恒定區(qū)之間通過(guò)二硫鏈共價(jià)連接的HCVR-CH1和LCVR-CL結(jié)構(gòu)域組成。為克服當(dāng)在宿主細(xì)胞內(nèi)共表達(dá)時(shí)Fv中的非共價(jià)連接的HCVR和LCVR結(jié)構(gòu)域分離的傾向，可構(gòu)建所謂的單鏈(sc)Fv片段(scFv)，在該片段中柔性的和足夠長(zhǎng)的多肽將HCVR的C末端連接至LCVR的N末端或?qū)CVR的C末端連接至HCVR的N末端。最常使用的連接體是15個(gè)殘基(Gly4Ser)3的肽，但其他連接體在本領(lǐng)域內(nèi)也是已知的。也可j吏用其中已在天然終止位點(diǎn)的上游導(dǎo)入一個(gè)或多個(gè)終止密碼子的抗體基因產(chǎn)生以許多種截短的形式存在的抗體。例如，可設(shè)計(jì)編碼F(ab，)2重鏈部分的嵌合基因以包含編碼重鏈的結(jié)構(gòu)域和鉸鏈區(qū)的DNA序列。使用富集技術(shù)例如噬菌體展示(MatthewsDJ和WellsJA.Science.260:1113-7,1993)、核糖體展示(Hanes，等人,Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)95:14130-5,1998)、細(xì)菌展示(SamuelsonP.，等人，JournalofBiotechnology.96:129-54，2002)或酵母展示(KiekeMC，等人，ProteinEngineering,10:1303-10，1997)從文庫(kù)選擇抗體片段已證明是經(jīng)典的雜交瘤技術(shù)的成功的另一種選擇(近年來(lái)的綜述LittleM.等人，ImmunologyToday,21:364-70，2000;)。變體抗體隆抗體或人抗體(在例如轉(zhuǎn)基因小鼠中產(chǎn)生的)是親本抗體?？墒褂帽绢I(lǐng)域內(nèi)熟知的方法進(jìn)一步改變鼠類親本抗體以產(chǎn)生抗體的嵌合形式或人源化形式。此類嵌合抗體或人源化抗體可用作用于進(jìn)一步變異或誘變的親本抗體?？闪硗獾脑贑DR結(jié)構(gòu)域內(nèi)(參見例如，圖6和7)誘變處理本發(fā)明的親本抗體以產(chǎn)生具有本發(fā)明的最優(yōu)化的目的性質(zhì)(例如，結(jié)合親和力、IC5o、特異性等)的變體抗體。氨基酸取代的變體抗體是優(yōu)選的，具有親本抗體分子的至少一個(gè)M酸殘基被除去，然后在其位置插入不同的殘基。進(jìn)行取代型誘變的最吸引人的位點(diǎn)包括CDR區(qū)，但也涉及FR的改變。保守性氨基酸取代是優(yōu)選的。如果這樣的取代導(dǎo)致抗體的生物學(xué)活性改變，那么可導(dǎo)入更實(shí)質(zhì)的改變，即非保守性氬基酸的改變，并且篩選產(chǎn)物。用于產(chǎn)生取代型變體的常規(guī)方法是使用噬菌體展示的親和力成熟法。簡(jiǎn)而言之，突變幾個(gè)CDR區(qū)的位點(diǎn)以在M點(diǎn)上產(chǎn)生所有可能的氨基酸取代。所產(chǎn)生的抗體變體作為與包裝在各顆粒內(nèi)的M13的基因III產(chǎn)物的融合在絲狀噬菌體顆粒上以單價(jià)形式展示。然后就此處公開的它們的生物學(xué)活性(例如，結(jié)合親和力、特異性、ICso)篩選噬菌體展示的變體。為了鑒定用于修飾的候選CDR區(qū)的位點(diǎn)，可進(jìn)行丙氨酸分區(qū)誘變以鑒定顯著促進(jìn)抗原結(jié)合的CDR區(qū)的殘基?？蛇x擇地，或另外地，分析抗原-抗體復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)對(duì)于鑒定抗體和肌抑制素之間的接觸點(diǎn)可以是有益的。該接候選殘基?？蛇x擇地，或另外地，當(dāng)CDR有效連接至可變區(qū)或當(dāng)CDR不依賴于其他可變區(qū)序列時(shí)可在一個(gè)或多個(gè)殘基位置對(duì)一個(gè)或多個(gè)CDR序列進(jìn)行隨機(jī)誘變，然后使用重組DNA技術(shù)將改變的CDR返回至可變區(qū)。一旦產(chǎn)生這樣的變體抗體后，如此處所描述的將成組變體進(jìn)行篩選，可選擇在一個(gè)或多個(gè)在相關(guān)測(cè)定中具有優(yōu)良性質(zhì)的抗體以進(jìn)行進(jìn)一步開發(fā)?？扇〈?通常用絲氨酸)不參與保持本發(fā)明的抗肌抑制素抗體的適當(dāng)構(gòu)象的任何半胱氨酸殘基以改善分子的氧化穩(wěn)定性和防止異常交聯(lián)。相反地，可向抗體中加入半胱氨酸鍵以提高其穩(wěn)定性(特別是當(dāng)抗體是抗體片段例如Fv片段時(shí))。另一種類型的抗體的氨基酸變體改變了抗體的原始糖基化模式。改變是指缺失一個(gè)或多個(gè)抗體中發(fā)現(xiàn)的糖類部分，和/或加入一個(gè)或多個(gè)在親本抗體中不存在的糖基化位點(diǎn)?？贵w的糖基化通常是N連接或O連接的。N連接是指將糖類部分附著至天冬酰胺殘基的側(cè)鏈。當(dāng)X是除了脯氨酸外的任何氨基酸時(shí)，三肽序列天冬酰胺-X-絲氨酸和天冬酰胺-X-蘇氨酸是糖類部分至天冬酰胺側(cè)鏈的酶促附著的識(shí)別序列。因此多肽中的這些三肽序列的存在產(chǎn)生了潛在的糖基化位點(diǎn)。O連接的糖基化是指將糖N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖中的一種附著至羥氨基酸(最常見地絲氨酸或蘇氨酸，盡管也可使用5-羥脯氨酸或5-羥賴氨酸)。通過(guò)改變^J^酸序列以使其包含一個(gè)或多個(gè)上述三肽序列(對(duì)于N連接的糖基化位點(diǎn))來(lái)常規(guī)地實(shí)現(xiàn)向抗體加入糖基化位點(diǎn)。還可通過(guò)向原始抗體序列加入一個(gè)或多個(gè)絲氨酸或蘇氨酸殘基或用所述殘基進(jìn)行取代(對(duì)于O連接的糖基化位點(diǎn))來(lái)產(chǎn)生改變(對(duì)于O連接的糖基化位點(diǎn))。序列本發(fā)明的優(yōu)選單克隆抗體具有LCVR和/或HCVR，所述LCVR包含具有選自SEQIDNO:74-102、140、141和142的序列的肽(圖9)，所述HCVR包含具有選自SEQIDNO:103-138的序列的肽(圖10)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，包含LCVR多肽的本發(fā)明抗體還包含HCVR多肽，所述LCVR多肽含有具有此處的表1中所示的SEQIDNO的M酸序列，所述HCVR多肽包含具有相應(yīng)于表1中的特定LCVR的HCVR多肽的SEQIDNO的M酸序列。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到本發(fā)明的抗體不限定于此處的圖9和10中所述的HCVR和LCVR的特定序列，而且還包括保持本發(fā)明的抗體的抗原結(jié)合能力和其他功能性質(zhì)的這些序列的變體。使用此處描述的本領(lǐng)域內(nèi)已知的技術(shù)可從提供的序列衍生出此類變體。此外，本發(fā)明的單克隆抗體是與成熟的人肌抑制素(或其部分)的結(jié)合被包含兩個(gè)多肽的竟?fàn)幮詥慰寺】贵w竟?fàn)幮砸种频目贵w，所述多肽具有選自(i)SEQIDNO:98和138以及(ii)SEQIDNO:74和103的序列?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的測(cè)定法例如竟?fàn)嶦LISA測(cè)定法測(cè)量抗體之間的該竟?fàn)幰种啤?yōu)選，本發(fā)明的與上面定義的竟?fàn)幮钥贵w竟?fàn)幍目贵w的進(jìn)一步的特征在于如通過(guò)本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)例如通過(guò)竟?fàn)嶦LISA或通過(guò)BIACORE或KINEXA測(cè)定法測(cè)量的，其優(yōu)先結(jié)合GDF-8，超過(guò)與GDF-ll的結(jié)合至少20%、30%或40%，從而證明抗體對(duì)GDF-8的親和力比對(duì)GDF-ll的高至少20%、30%或40%(即，更4氐的KD)。優(yōu)選，本發(fā)明的與上面定義的竟?fàn)幮钥贵w竟?fàn)幍目贵w的進(jìn)一步的特征在于具有的對(duì)于肌抑制素的KD低于大約4.2xl(T9M或4.0xl(T9M，優(yōu)選低于大約4.6x1010M、4.0xl(T10M或2xl(T^M和更優(yōu)選低于大約8xl(T11M、7xl(T11M、5xl(T12M或1.4xl(T12M;或可選擇地特征在于對(duì)于肌抑制素的Kd不高于大約4.2xl(T9M或4.0xlO_9M，優(yōu)選不高于大約4.6xl(T1()M、4.0xlO'1()M或2xlO_1()M和更優(yōu)選不高于大約8xl0-11M、7xl(T11M、5xl(T12M或1.4xl(T12M和/或進(jìn)一步的特征在于在體外肌抑制素/SBE報(bào)告基因測(cè)定中具有的ICso低于或等于大約40nM、20nM或10nM，更優(yōu)選低于或等于大約5nM、4nM、3nM、2nM或1nM。甚至更優(yōu)選，本發(fā)明的與上面定義的竟?fàn)幮钥贵w竟?fàn)幍目贵w的進(jìn)一步的特征在于在體外肌抑制素/SBE報(bào)告基因測(cè)定中ICso低于或等于大約40nM、30nM、25nM、20nM或10nM,更優(yōu)選低于或等于大約5nM、4nM、3nM、2nM或lnM。甚至更優(yōu)選，在體外肌抑制素/SBE報(bào)告基因測(cè)定中，抗肌抑制素單克隆抗體的IC5。至少比抗體在體外GDF-11/SBE報(bào)告基因測(cè)定(如此處實(shí)施例5中所描述的)中的IC鄰低至少大約2倍、3倍或4倍。甚至更優(yōu)選，本發(fā)明的與上面定義的竟?fàn)幮钥贵w竟?fàn)幍目贵w的進(jìn)一步的特征在于不結(jié)合由成熟的肌抑制素優(yōu)選人肌抑制素的氮基酸40-64(包括界限)、43-57或45-59組成的肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗肌抑制素抗體具有重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其中重鏈可變區(qū)包含具有下列^j^酸序列CDRH1(SEQIDNO:42)、CDRH2(SEQIDNO:71)和CDRH3(SEQIDNO:72)的CDR區(qū)；和/或其中輕鏈可變區(qū)包含具有下列^j-絲列CDRL1(SEQIDNO:12)、CDRL2(SEQIDNO:154)和CDRL3(SEQIDNO:37)的CDR區(qū)。優(yōu)選，本發(fā)明的抗體的重鏈CDR示于圖7中，本發(fā)明的抗體的輕鏈CDR區(qū)示于圖6中。還涉及的是本發(fā)明的抗肌抑制素抗體包含HCVR，所述HCVR包含含有選自SEQIDNO:38-41的序列的CDRH1和/或含有選自SEQIDNO:43-70和73的序列的CDRH2和/或包含SEQIDNO:72的序列的CDRH3。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗肌抑制素抗體包含LCVR，所述LCVR包含含有選自SEQIDNO:9-11的序列的CDRL1和/或含有選自SEQIDNO:13-23的序列的CDRL2和/或含有選自SEQIDNO:24-36的序列的CDRL3。在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗肌抑制素抗體包含含有選自SEQIDNO:38-42的序列的CDRH1和/或含有選自SEQIDNO:43-70和73的序列的CDRH2和/或含有SEQIDNO:72的序列的CDRH3，并且還包含LCVR，所述LCVR包含含有選自SEQIDNO:9-11的序列的CDRL1和/或含有選自SEQIDNO:13-23的序列的CDRL2和/或^^有選自SEQIDNO:24-36的序列的CDRL3。具有本發(fā)明的CDR的結(jié)構(gòu)通常是抗體重鏈或輕鏈序列或其實(shí)質(zhì)部分，其中CDR位于相應(yīng)于天然存在的HCVR和LCVR的CDR的位置(Kabat等人，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,USDeptofHHS，1991)。優(yōu)選，在人構(gòu)架區(qū)中以下式FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4代表的連續(xù)序列的形式提供各鏈(重鏈和輕鏈)的三個(gè)CDR區(qū)。當(dāng)與CDR以所述順序排列為連續(xù)序列時(shí)，重鏈或輕鏈的FR1、FR2、FR3和FR4組合形成完整的構(gòu)架區(qū)。優(yōu)選，本發(fā)明抗體的構(gòu)架區(qū)是人、人源化的或基本上人來(lái)源的。在人源化抗體(所述抗體在人中用于治療用途)中，構(gòu)架序列優(yōu)選完全或基本上是人來(lái)源的(即，至少卯％、92%、95%、96%、97%、98%或99%的人來(lái)源)。優(yōu)選本發(fā)明的人源化抗體、人抗體或嵌合抗體的輕鏈構(gòu)架區(qū)示于圖9,其由具有SEQIDNO:143的FR1、具有SEQIDNO:144的FR2、具有SEQIDNO:145的FR3和具有SEQIDNO:146或147的FR4組成。優(yōu)選本發(fā)明的人源化抗體、人抗體或嵌合抗體的重鏈構(gòu)架區(qū)示于圖10，其由具有SEQIDNO:148或149的FR1、具有SEQIDNO:150或151的FR2、具有SEQIDNO:152或153的FR3、具有SEQIDNO:139的FR4組成。例如抗體3-74/ClE4包含輕鏈可變區(qū)，其含有具有SEQIDNO:143的FR1、具有SEQIDNO:9的CDR1、具有SEQIDNO:144的FR2、具有SEQIDNO:18的CDR2、具有SEQIDNO:145的FR3、具有SEQIDNO:25的CDR3和具有SEQIDNO:146的FR4?？贵w3-74/ClE4還包含重鏈可變區(qū)，其含有具有SEQIDNO:149的FR1、具有SEQIDNO:40的CDR1、具有SEQIDNO:151的FR2、具有SEQIDNO:60的CDR2、具有SEQIDNO:153的FR3、具有SEQIDNO:72的CDR3和具有SEQIDNO:139的FR4。在用于非人動(dòng)物的抗體中，構(gòu)架區(qū)序列可以基本上來(lái)源于人基因組(優(yōu)選用在當(dāng)期為胚胎或新生時(shí)的非人動(dòng)物中)或來(lái)源于其中其被治療性使用的動(dòng)物的基因組。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗肌抑制素抗體進(jìn)一步的特征在于其為在體內(nèi)或體外拮抗或中和至少一種肌抑制素的活性的嵌合抗體、人源化抗體或完全人抗體或其抗原結(jié)合部分，在所述抗肌抑制素抗體中，可變區(qū)的全部或部分受到此處的SEQIDNO中所示的特定序列的限制。其中可變區(qū)的全部或部分受到此處的SEQIDNO中顯示的特定序列限制的本發(fā)明的抗肌抑制素抗體的進(jìn)一步的特征在于如通過(guò)本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)例如通過(guò)竟?fàn)嶦LISA或通過(guò)BIACORE或KINEXA測(cè)定法測(cè)量的，其優(yōu)先結(jié)合GDF-8，超過(guò)與GDF-11的結(jié)合至少20%、30%或40°/。，從而證明抗體對(duì)GDF-8的親和力比對(duì)GDF-11的高至少20%、30%或40%(即，更低的KD)。優(yōu)選，其中可變區(qū)的全部或部分受到此處的SEQIDNO中顯示的特定序列限制的本發(fā)明的抗體的進(jìn)一步的特征在于具有的對(duì)于肌抑制素的KD低于大約4.2x109M或4.0x109M,優(yōu)選低于大約4,6xl010M、4.0xl010M或2x10"°M和更優(yōu)選低于大約8xl(K"M、7xl(T"M、5xl(T12M或1.4xl(T12M;或可選擇地特征在于對(duì)于肌抑制素的Kd不高于大約4.2xlO_9M或4.0xl(T9M，優(yōu)選不高于大約4.6xl(T10M、4.0xlO_10M或2xlO_10M和更優(yōu)選不高于大約8xl(T11M、7xl(T11M、5xl(T12M或1,4xl0"2M和/或進(jìn)一步的特征在于在體外肌抑制素/SBE報(bào)告基因測(cè)定中具有的ICso低于或等于大約40nM、20nM或10nM，更優(yōu)選低于或等于大約5nM、4nM、3nM、2nM或1nM。甚至更優(yōu)選，其中可變區(qū)的全部或部分受到此處的SEQIDNO中顯示的特定序列限制的本發(fā)明的抗肌抑制素抗體的進(jìn)一步的特征在于在體外肌抑制素/SBE報(bào)告基因測(cè)定中的ICso低于或等于大約40nM、30nM、25nM、20nM或10nM，更優(yōu)選在體外肌抑制素/SBE報(bào)告基因測(cè)定中低于或等于大約5nM、4nM、3nM、2nM或1nM。甚至更優(yōu)選，在體外肌抑制素/SBE報(bào)告基因測(cè)定中，抗肌抑制素單克隆抗體的ICs。至少比抗體在體外GDF-11/SBE才艮告基因測(cè)定中的ICso低至少大約2倍、3倍或4倍(如此處實(shí)施例5中所描述的)。甚至更優(yōu)選，其中可變區(qū)的全部或部分受到此處的SEQIDNO中顯示的特定序列限制的本發(fā)明的抗肌抑制素抗體的進(jìn)40-64(包括界P艮)、43-57或45-59組成的肽?？贵w的表達(dá)本發(fā)明還涉;MJi本發(fā)明的抗肌抑制素單克隆抗體或其部分的細(xì)胞系?？墒褂帽绢I(lǐng)域內(nèi)已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)產(chǎn)生和分離產(chǎn)生本發(fā)明的單克隆抗體的細(xì)胞系。優(yōu)選細(xì)胞系包括COS、CHO、SP2/0、NSO和酵母(可從公共保藏庫(kù)(repositorie)例如ATCC，美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection),Manassas,VA獲得)?？墒褂脧V泛的宿主表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)本發(fā)明的抗體，所a達(dá)系統(tǒng)包括原核(細(xì)菌)和真核表達(dá)系統(tǒng)(例如酵母、桿狀病毒、植物、哺乳動(dòng)物和其他動(dòng)物細(xì)胞、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和雜交瘤細(xì)胞)以及嗟菌體展示表達(dá)系統(tǒng)。合適的細(xì)菌表達(dá)載體的實(shí)例是pUC119，合適的真核表達(dá)載體是經(jīng)修飾的具有減弱的DHFR選擇系統(tǒng)的pcDNA3.1載體。其他抗體表達(dá)系統(tǒng)在本領(lǐng)域內(nèi)也是已知的并且為此處所涉及?？赏ㄟ^(guò)在宿主細(xì)胞中重組表達(dá)免疫球蛋白的輕鏈和重鏈基因來(lái)制備本發(fā)明的抗體。為了重組表達(dá)抗體，用一個(gè)或多個(gè)具有DNA片段(其編碼抗體的免疫球蛋白輕鏈和/或重鏈)的重組表達(dá)載體對(duì)宿主細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、感染等等，從而使得輕鏈和/或重鏈在宿主細(xì)胞中表達(dá)?？稍谝粋€(gè)載體中從與重鏈和輕鏈有效連接的不同的啟動(dòng)子獨(dú)立地表達(dá)重鏈和輕鏈，或可選擇地，可在兩個(gè)載體(一個(gè)表達(dá)重鏈，一個(gè)表達(dá)輕鏈)中從與重鏈和輕鏈有效連接的不同的啟動(dòng)子獨(dú)立地表達(dá)重鏈和輕鏈。任選地可在不同的宿主細(xì)胞中表達(dá)重鏈和輕鏈。優(yōu)選，將重組抗體分泌入培養(yǎng)宿主細(xì)胞的、從中可回收或純化抗體的培養(yǎng)基?？墒褂脴?biāo)準(zhǔn)的重組DNA方法獲得抗體的重鏈和輕鏈基因，將這些基因摻入重組表達(dá)載體，并將所述載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞。在例如Sambrook，F(xiàn)ritsch和Maniatis(編著)，MolecularCloning;ALaboratoryManual,第2版，ColdSpringHarbor,N.Y.，1989;Ausubel，等人(編著)CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingAssociates,1989中描述了這些標(biāo)準(zhǔn)的重組DNA技術(shù)?？赏ㄟ^(guò)將編碼HCVR的DNA有效連接至編碼重鏈恒定區(qū)(CHl、CH2和CH3)的另一種DNA分子來(lái)將分離的編碼HCVR區(qū)的DNA轉(zhuǎn)變成全長(zhǎng)重鏈基因。人重鏈恒定區(qū)基因的序列在本領(lǐng)域內(nèi)是已知的。參見，例如，Kabat，等人，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版，U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIH^>開號(hào)No.91-3242(1991)。可以例如通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的PCR擴(kuò)增獲得包含這些區(qū)域的DNA片段。重鏈恒定區(qū)可以是任何類型(例如，IgG、IgA、IgE、IgM或IgD)、種類(dass)(例如，IgGpIgG2、IgG3和IgG4)或亞類恒定區(qū)和Kabat(同上)中描述的其任何異型變體?？蛇x擇地，抗原結(jié)合部分可以是Fab片段、Fab，片段、F(ab，)2片段、Fd或單鏈Fv片段(scFv)。對(duì)于Fab片段重鏈基因，可將編碼HCVR的DNA有效連接至只編碼重鏈CHI恒定區(qū)的另一個(gè)DNA分子?？赏ㄟ^(guò)將編碼LCVR的DNA有效連接至編碼輕鏈恒定區(qū)CL的另一個(gè)DNA分子來(lái)將分離的編碼LCVR區(qū)的DNA轉(zhuǎn)變成全長(zhǎng)輕鏈基因(以及轉(zhuǎn)變成Fab輕g因)。人輕鏈恒定區(qū)基因的序列在本領(lǐng)域內(nèi)是已知的。參見，例如，Kabat，同上?？赏ㄟ^(guò)標(biāo)準(zhǔn)的PCR擴(kuò)增獲得包含這些區(qū)域的DNA片段。輕鏈恒定區(qū)可以是K或k恒定區(qū)。為產(chǎn)生scFv基因，將編碼HCVR和LCVR的DNA片段有效連接至編碼柔性連接體(例如編碼M酸序列(Gly4-Ser)3)的另一個(gè)片段，這樣HCVR和LCVR序列可以表達(dá)為連續(xù)的單鏈蛋白質(zhì)，其中LCVR和HCVR通過(guò)柔性連接體連接。參見，例如，Bird,等人，Science242:423-6，1988;Huston,等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-83，1988;McCafferty,等人，Nature348:552-4，1990。為表達(dá)本發(fā)明的抗體，將如上所述獲得的編碼部分或全長(zhǎng)輕鏈和/或重鏈的DNA插入表達(dá)載體以使基因有效連接至轉(zhuǎn)錄和翻譯控制序列。選擇與使用的表達(dá)宿主細(xì)胞相容的表達(dá)載體和表達(dá)控制序列?？蓪⒖贵w輕鏈基因和抗體重鏈基因插入分開的載體或更常見地，將兩個(gè)基因插入相同的表達(dá)載體。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法將抗體基因插入表達(dá)載體。此外，重組表達(dá)載體可編碼有助于抗肌抑制素單克隆抗體的輕鏈和/或重鏈從宿主細(xì)胞分泌的信號(hào)肽?？蓪⒖辜∫种扑貑慰寺】贵w的輕鏈和/或重鏈基因克隆入載體以使信號(hào)肽符合讀框地有效連接至抗體鏈基因的ll&末端。信號(hào)肽可以是免疫球蛋白的信號(hào)肽或異源信號(hào)肽。除了抗體的重鏈和/或輕鏈基因外，本發(fā)明的重組表達(dá)載體還攜帶控制宿主細(xì)胞中抗體鏈基因的表達(dá)的調(diào)控序列。術(shù)語(yǔ)"調(diào)控序列"希望包括啟動(dòng)子、增強(qiáng)子和當(dāng)需要時(shí)控制抗體鏈基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯的其他表達(dá)控制元件(例如，多腺普酸化信號(hào))。表達(dá)載體的設(shè)計(jì)(包括調(diào)控序列的選擇)可以依賴于這樣的因素例如待轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞的選擇、希望的蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。用于哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞表達(dá)的優(yōu)選調(diào)控序列包括在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中指導(dǎo)高水平蛋白質(zhì)表達(dá)的病毒元件，例如來(lái)自細(xì)胞巨細(xì)胞病毒(CMV)、猿猴病毒40(SV40)、腺病毒(例如，腺病毒主要晚期啟動(dòng)子(AdMLP))和多瘤病毒的啟動(dòng)子和/或增強(qiáng)子。除了抗體的重鏈和/或輕鏈基因和調(diào)控序列外，本發(fā)明的重組表達(dá)載體還可具有額外的序列，例如在宿主細(xì)胞中調(diào)控載體的復(fù)制的序列(例如，復(fù)制起點(diǎn))和一個(gè)或更多個(gè)選擇標(biāo)記基因。選擇標(biāo)記基因有助于已導(dǎo)入載體的宿主細(xì)胞的選擇。例如，通常選擇標(biāo)記基因在已導(dǎo)入載體的宿主細(xì)胞中提供對(duì)藥物例如G418、潮霉素或氨甲蝶呤的抗性。優(yōu)選選擇標(biāo)記基因包括二氫葉酸還原酶(DHFR)基因(用于使用氨曱蝶呤進(jìn)軒選擇/擴(kuò)增的DHFR負(fù)型宿主細(xì)胞)、neo基因(用手G"8選擇)和在GS陰性細(xì)胞系(例如NS0)中用于選擇/擴(kuò)增的谷氨酰胺合成酶(GS)。為了表達(dá)輕鏈和/或重鏈，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)例如電穿孔、磷酸鉤沉淀、DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)導(dǎo)、感染等將編碼重鏈和/或輕鏈的表達(dá)載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞。盡管理論上可能在原核或真核宿主細(xì)胞中表達(dá)本發(fā)明的抗體，但真核細(xì)胞是優(yōu)選的，最優(yōu)選哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞，因?yàn)榇祟惣?xì)胞更可能裝配和分泌正確折疊的和具有免疫活性的抗體。優(yōu)選的用于表達(dá)本發(fā)明的重組抗體的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞包括中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO細(xì)胞)(包括Urlaub和Chasin，Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216-20，1980中描述的、與例如Kaufman和Sharp,丄Mol.Biol.159:601-21，1982中描述的DHFR選擇標(biāo)記一^使用的DHFR-CHO細(xì)胞)、NSO骨髓瘤細(xì)胞、COS細(xì)胞和SP2/0細(xì)胞。當(dāng)將編碼抗體基因的重組表達(dá)載體導(dǎo)入哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞時(shí)，通過(guò)一段時(shí)間培養(yǎng)宿主細(xì)胞來(lái)產(chǎn)生抗體，所述時(shí)間足以允許抗體在宿主細(xì)胞中表達(dá)或更優(yōu)選允許抗體分泌入其中宿主細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基中。可使用標(biāo)準(zhǔn)的純化方法從宿主細(xì)胞和/或培養(yǎng)基回收抗體。還可通過(guò)常規(guī)的技術(shù)將宿主細(xì)胞用于產(chǎn)生完整抗體的部分或片段例如Fab片段或scFv分子。本領(lǐng)域技術(shù)人員理解上述方法的變化在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。例如，可能希望用編碼本發(fā)明的抗體的輕鏈或重鏈的DNA轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞。也可以使用重組DNA技術(shù)除去一些或所有編碼對(duì)于結(jié)合肌抑制素不是必需的輕鏈或重鏈之一或輕鏈和重鏈二者的DNA。本發(fā)明的抗體也包括從此類截短的DNA分子表達(dá)的分子。在用于本發(fā)明的抗體的重組表達(dá)的優(yōu)選系統(tǒng)中，通過(guò)例如磷酸釣介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染將編碼抗體的重鏈和抗體的輕鏈的重組表達(dá)載體導(dǎo)入DHFR-CHO細(xì)胞。在重組表達(dá)載體內(nèi)，抗體的重鏈和輕因各自有效連接至增強(qiáng)子/啟動(dòng)子調(diào)控元件(例如，來(lái)源于SV40、CMV、腺病毒等的調(diào)控元件，例如元件)以驅(qū)動(dòng)高水平基因轉(zhuǎn)錄。重組表達(dá)載體還具有DHFR基因，該基因允許使用氨甲蝶呤選擇/擴(kuò)增來(lái)選擇已用載體轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞。培養(yǎng)選擇的轉(zhuǎn)化體宿主細(xì)胞以使抗體的重鏈和輕鏈表達(dá)，并且從培養(yǎng)基回收完整的抗體。使用標(biāo)準(zhǔn)的分子生物學(xué)技術(shù)制備重組表達(dá)載體、轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞、選擇轉(zhuǎn)化體、培養(yǎng)宿主細(xì)胞和從培養(yǎng)基回收抗體。本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分可在動(dòng)物(例如，小鼠)中表達(dá)，所述動(dòng)物是人免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因的動(dòng)物(參見，例如，Taylor,等人，NucleicAddsRes.20:6287-95，1992)。表達(dá)后，可按照本領(lǐng)域內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)方法純化本發(fā)明的完整抗體、其二聚體、單個(gè)輕鏈和重鏈或其他免疫球蛋白形式，所述方法包括硫酸銨沉淀法、離子交換層析、親和層析、反相柱層析、疏水作用柱層析、凝膠電泳等。對(duì)于藥物用途，至少大約90%、92%、94%或96%的同質(zhì)性的基本上純的免疫球蛋白是優(yōu)選的，98至99%或更高的同質(zhì)性是最優(yōu)選的。在某種程度上純化或純化達(dá)到希望的同質(zhì)性后，如此處指示的，則可治療或預(yù)防性使用肽。嵌合抗體如此處所用的，術(shù)語(yǔ)"嵌合抗體"包括單價(jià)、二價(jià)或多價(jià)免疫球蛋白。單價(jià)嵌合抗體是通過(guò)二硫鍵將嵌合重鏈與嵌合輕鏈結(jié)合而形成的二聚體。二價(jià)嵌合抗體是兩個(gè)重鏈-輕鏈二聚體通過(guò)至少一個(gè)二硫鍵結(jié)合而形成的四聚體?？贵w的嵌合重鏈包含來(lái)源于對(duì)于肌抑制素是特異的非人抗體的重鏈的抗原結(jié)合區(qū)，該抗原結(jié)合區(qū)有效連接至人或基本上人(或與抗原結(jié)合區(qū)來(lái)源的物種不同的特種)的重鏈恒定區(qū)的至少一部分例如CH1或CH2，或優(yōu)選連接至全長(zhǎng)重鏈恒定區(qū)。用在人中的抗體的嵌合輕鏈包含完全或基本上來(lái)源于對(duì)肌抑制素特異性的非人抗體的輕鏈的抗原結(jié)合區(qū)，該抗原結(jié)合區(qū)有定區(qū)(CL)的至少一部分，或優(yōu)選連接至全長(zhǎng)輕鏈恒定區(qū)。也可按照已知的方法步驟通過(guò)單個(gè)多肽鏈的恰當(dāng)結(jié)合來(lái)制備具有嵌合重鏈和輕鏈的抗體、片段或衍生物，所述重鏈和輕鏈具有相同或不同的可變區(qū)結(jié)合特異性。通過(guò)該方法，將表達(dá)嵌合重鏈的宿主與表達(dá)嵌合輕鏈的宿主分開培養(yǎng)，分開回收免疫球蛋白鏈，然后使其結(jié)合。可選擇地，可共培養(yǎng)宿主，使鏈在培養(yǎng)基中自發(fā)結(jié)合，然后回收裝配的免疫球蛋白或片段。用于產(chǎn)生嵌合抗體的方法在本領(lǐng)域內(nèi)是已知的(參見，例如，美國(guó)專利號(hào)6,284,471、5,807,715、4,816,567和4,816,397)。人源化抗體優(yōu)選用于治療目的的本發(fā)明的抗體可具有來(lái)源于哺乳動(dòng)物(其中所述抗體將被用作治療劑)的構(gòu)架區(qū)和恒定區(qū)的序列(達(dá)到其在抗體中存在的程度)，以減少該哺乳動(dòng)物引發(fā)針對(duì)治療性抗體的免疫應(yīng)答的可能性。人源化抗體是特別有益的，因?yàn)樗鼈儽徽J(rèn)為對(duì)于治療應(yīng)用是有價(jià)值的并且避免在使用嚙齒類動(dòng)物的抗體的情況下經(jīng)常觀察到的人抗小鼠抗體應(yīng)答。此外，在人源化抗體中，效應(yīng)子部分是人的，這樣其可更好地與人免疫系統(tǒng)的其他部分相互作用(例如，通過(guò)依賴于補(bǔ)體的細(xì)胞毒性或抗體依賴性細(xì)胞毒作用更有效地破壞靶細(xì)胞)。還有，注射的人源化抗體比例如鼠類抗體具有與天然發(fā)生的人抗體的半衰期更相似的半衰期，因而允許更少量和更低頻率的給藥。此處使用的術(shù)語(yǔ)"人源化抗體，，是指包含不同來(lái)源的抗體的部分的抗體，其中至少一個(gè)部分是人來(lái)源的。例如，人源化抗體可包含來(lái)源于具有必需的特異性的非人來(lái)源(例如小鼠)的抗體和來(lái)源于人來(lái)源的抗體的部分，所述部分通過(guò)常規(guī)技術(shù)(例如，合成)化學(xué)地連接在一起或使用基因工程技術(shù)作為連續(xù)多肽被制備。優(yōu)選，"人源化抗體"具有來(lái)源于非人抗體(優(yōu)選小鼠單克隆抗體)的CDR，而構(gòu)架區(qū)和恒定區(qū)(達(dá)到其存在的程度)(或其有意義的或?qū)嵸|(zhì)的部分，即至少大約90%、92%、94%、95%、96%、97%、98%或99%)由存在于人種系免疫球蛋白區(qū)域(參見，theInternationalImMunoGeneTics數(shù)據(jù)庫(kù))或存在于其重組或突變的形式中的核酸序列信息編碼，無(wú)論所述抗體是否在人細(xì)胞中產(chǎn)生。可從人源化抗體CDR所來(lái)源的非人親本抗體的CDR優(yōu)化該人源化抗體的CDR，以產(chǎn)生希望的性質(zhì)例如特異性、親和力和容量(capacity)。當(dāng)與親本CDR相比時(shí)，優(yōu)化的CDR可具有M酸取代、添加和/或缺失。例如，圖6和7中中下劃線標(biāo)示和以粗體印刷的CDR的M酸位置是已從圖5中顯示的親本CDR優(yōu)化的位置。非人(例如，鼠類)抗體的人源化形式包括完整的抗體、基本上完整的抗體、包含抗原結(jié)合位點(diǎn)的抗體部分，或包含F(xiàn)ab片段、Fab，片段、F(ab，)2或單鏈Fv片段的抗體部分。人源化抗體優(yōu)選包含來(lái)源于非人免疫球蛋白的最小序列。人源化抗體還可包含在接受體抗體和引入的CDR或構(gòu)架序列中都未發(fā)現(xiàn)的殘基。通常，人源化抗體將基本上包含至少一個(gè)和通常兩個(gè)可變結(jié)構(gòu)域的全部，在所述可變結(jié)構(gòu)域中，CDR區(qū)中的所有或基本上所有J^酸對(duì)應(yīng)于非人免疫球蛋白的CDR區(qū)，并且FR區(qū)中的所有或基本上所有M^I:人免疫球蛋白共有序列的氨基酸。人源化抗體最好還包含至少免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc)的一部分，通常為人免疫球蛋白的恒定區(qū)的部分。[Jones等人，Nature,321:522-525(1986);Riechmann等人，Nature,332:323-329(1988);和Presta，Curr.Op.Struct.Biol"2:593-596(1992).可使用本領(lǐng)域內(nèi)常規(guī)使用的方法將人源化抗體進(jìn)行體外誘變(或，當(dāng)使用人Ig序列的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物時(shí)，進(jìn)行體內(nèi)體細(xì)胞誘變)，從而，人源化重組抗體的HCVR和LCVR區(qū)的構(gòu)架區(qū)^J^酸序列是這樣的序列，即當(dāng)所述序列來(lái)源于與人種系HCVR和LCVR序列相關(guān)的序列時(shí)，其可以是非天然地存在于體內(nèi)人抗體種系庫(kù)內(nèi)。要理解人源化重組抗體的HCVR和LCVR的構(gòu)架區(qū)的這些^J^酸序列與人種系序列至少卯。/。、92%、94%、95%、96%、98%或最優(yōu)選至少99%的同一。優(yōu)選，將保留親本抗體(例如，鼠類抗體或通常從其衍生人源化抗體的抗體)的維持或影響結(jié)合部位結(jié)構(gòu)的那些構(gòu)架殘基?？赏ㄟ^(guò)例如親本抗體或Fab片段的X射線晶體分析法鑒定這些殘基，從而鑒定抗原結(jié)合位點(diǎn)的三維結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的人源化抗體可包含或衍生自人種系輕鏈構(gòu)架。在特定的實(shí)施方案中，輕鏈種系序列選自人VK序列，包括但不限于A1、AIO、All、、A14、A17、A18、A19、A2、A20、A23、A26、A27、A3、A30、A5、A7、B2、B3、Ll、L10、Lll、L12、L14、L15、L16、L18、L19、L2、L20、L22、L23、L24、L25、L4/18a、L5、L6、L8、L9、Ol、Oll、012、014、018、02、04和08。在某些實(shí)施方案中，此輕^A種系構(gòu)架選自Vl-ll、Vl畫13、Vl-16、Vl-17、Vl-18、Vl國(guó)19、Vl-2、Vl-20、Vl-22、Vl國(guó)3、Vl-4、Vl畫5、Vl畫7、Vl-9、V2國(guó)l、V2國(guó)11、V2誦13、V2國(guó)14、V2-15、V2-17、V2國(guó)19、V2國(guó)6、V2-7、V2-8、V3-2、V3-3、V3-4、V4國(guó)l、V4畫2、V4畫3、V4-4、V4-6、V5-l、V5-2、V5-4和V5-6。關(guān)于不同種系序列的描述，參見PCTWO2005/005604。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的人源化抗體可包含或衍生自人種系重鏈構(gòu)架。在特定的實(shí)施方案中，該重^A種系構(gòu)架選自VH1-18、VHl-2、VHl-24、VHl-3、VH1誦45、VHl-46、VHl-58、VHl-69、VHl-8、VH2畫26、VH2曙5、VH2-70、VH3-11、VH3-13、VH3畫15、VH3畫16、VH3-20、VH3-21、VH3-23、VH3-30、VH3-33、VH3-35、VH3-38、VH3-43、VH3畫48、VH3畫49、VH3-53、VH3-64、VH3-66、VH3-7、VH3-72、VH3-73、VH3-74、VH3-9、VH4-28、VH4-31、VH4-34、VH4畫39、VH4-4、VH4-59、VH4曙61、VH5畫51、VH6-1和VH7-81。關(guān)于不同的種系序列的描述參見PCTWO2005/005604。在特定的實(shí)施方案中，te鏈可變區(qū)和/或重鏈可變區(qū)包含構(gòu)架區(qū)或至少構(gòu)架區(qū)的一部分(例如，包含2或3個(gè)亞區(qū)例如FR2和FR3)。在某些實(shí)施方案中，至少FRL1、FRL2、FRL3或FRL4是完全人的。在其他實(shí)施方案中，至少FRH1、FRH2、FRH3或FRH4是完全人的。在一些實(shí)施方案中，至少FRL1、FRL2、FRL3或FRL4是種系序列(例如，人種系)或包含特定構(gòu)架的人共有序列。在其他實(shí)施方案中，至少FRH1、FRH2、FRH3或FRH4是種系序歹iK例如，人種系)或包含特定構(gòu)架的人共有序列。在優(yōu)選實(shí)施方案中，構(gòu)架區(qū)是人構(gòu)架區(qū)。通常，可這樣產(chǎn)生人源化抗體，即獲得編碼抗體(例如鼠類抗體或通過(guò)雜交瘤產(chǎn)生的抗體)的HCVR和LCVR的核酸序列(所述抗體結(jié)合本發(fā)明的肌抑制素表位)，鑒定了所蜂HCVR和LCVR(非人)中的CDR,然后將編碼該CDR的核酸序列嫁接至選擇的編碼人構(gòu)架的核酸序列上。任選地，可通過(guò)隨機(jī)誘變或在特定的位置進(jìn)行誘變以在將CDR區(qū),入構(gòu)架區(qū)之前在CDR中用不同的M酸取代一個(gè)或多個(gè)氨基酸來(lái)最優(yōu)化CDR區(qū)?？蛇x擇地，使用本領(lǐng)域技術(shù)人員可獲得的方法，可在插入人構(gòu)架區(qū)之后優(yōu)化CDR區(qū)。優(yōu)選，選擇人構(gòu)架^J^酸序列以使所得的抗體可能適合在人中體內(nèi)施用。這可基于例如包含該人構(gòu)架序列的抗體的以前的施用進(jìn)行確定。優(yōu)選，人構(gòu)架序列本身將不具有顯著的免疫原性?？蛇x擇地，可將待人源化抗體的構(gòu)架^J^酸序列與已知的人構(gòu)架序列進(jìn)行比較，所i^A構(gòu)架序列被用于CDR-嫁接，并以它們包含與結(jié)合肌抑制素的親本抗體例如鼠類抗體的序列高度相似的序列為基礎(chǔ)來(lái)被選擇。已分離了許多人構(gòu)架序列并且在本領(lǐng)域內(nèi)報(bào)導(dǎo)了它們的序列。這增加了所得的CDR嫁接的人源化抗體將基本上保持親本抗體的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)，從而保持親本抗體的結(jié)合親和力的可能性，所述CDR嫁接的人源化抗體包含嫁接至選擇的人構(gòu)架(以及也可能有人恒定區(qū))上的親本(例如，鼠類)的CDR或親本抗體的優(yōu)化的CDR。為保持顯著程度的抗原結(jié)合親和力，選在任一方法中，獲得編碼優(yōu)選鼠類抗肌抑制素抗體的HCVR和LCVR區(qū)的DNA序列。用于克隆編碼免疫球蛋白的核酸序列的方法在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的。此類方法可以例如包括使用合適的S1物通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增待克隆的免疫球蛋白編碼序列。文獻(xiàn)中已報(bào)導(dǎo)了適合于擴(kuò)增免疫球蛋白核酸序列，并且特別是鼠類HCVR和LCVR序列的引物。在克隆這樣的免疫球蛋白編碼序列后，通過(guò)本領(lǐng)域內(nèi)熟知的方法對(duì)其進(jìn)行測(cè)序。在將編碼CDR的序列嫁接至選擇的編碼人構(gòu)架的序列上后，則表達(dá)所得的編碼"人源化"可變重鏈序列和可變輕鏈序列的DNA序列以產(chǎn)生結(jié)合肌抑制素的人源化Fv或人源化抗體。人源化HCVR和LCVR可表達(dá)為完整的抗肌抑制素抗體分子的一部分，即，表達(dá)為與人恒定結(jié)構(gòu)域序列的融合蛋白，所i^A恒定結(jié)構(gòu)域序列的DNA編碼序列可從商購(gòu)可獲得的文庫(kù)獲得或使用例如上述用于獲得DNA序列的方法中或本領(lǐng)域內(nèi)的一種方法獲得。然而，HCVR和LCVR序列也可在恒定序列不存在的情況下表達(dá)，從而產(chǎn)生人源化抗肌抑制素Fv。然而，人恒定序列至可變區(qū)的融合是潛在想要的，因?yàn)樗玫娜嗽椿辜∫种扑乜贵w可具有人效應(yīng)子作用。用于合成編碼已知序列的蛋白質(zhì)的DNA的方法在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的。通過(guò)使用這樣的方法，合成編碼主(subject)人源化HCVR和LCVR序列(與或不與恒定區(qū))的DNA序列，然后將其在適合用于重組抗體表達(dá)的載體系統(tǒng)中進(jìn)行表達(dá)。這可在任何載體系統(tǒng)中實(shí)現(xiàn)，所述載體系統(tǒng)提供了以與人恒定結(jié)構(gòu)域序列的融合蛋白形式表達(dá)并且結(jié)合以產(chǎn)生功能性(抗原結(jié)合)抗體或抗體片段的的主人源化HCVR和LCVR序列。人恒定結(jié)構(gòu)域序列在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的，并且已在文獻(xiàn)中進(jìn)行了報(bào)導(dǎo)。優(yōu)選人恒定輕鏈序列包括k和X恒定輕鏈序列。優(yōu)選人恒定重鏈序列包括人IgG"人IgG"人lgG3、人lgG4和提供改變的效應(yīng)子作用(例如增加的體內(nèi)半衰期、減少的Fc受體結(jié)合、改變的脫酰胺作用語(yǔ)等)的其突變形式。如果存在，人構(gòu)架區(qū)優(yōu)選來(lái)源于人抗體可變區(qū)，其具有與抗原結(jié)合區(qū)供體(即，親本抗體)的類似或相當(dāng)區(qū)域的序列相似性。人源化抗體的來(lái)源于人的部分的構(gòu)架區(qū)的其他來(lái)源包括人可變共有序列(參見例如，Kettleborough，C.A.等人ProteinEngineering4:773-783(1991);Carter等人，WO94/04679。例如，如Kabat等人SequencesofProteinsofImmunologicalInterest，第5版，NIH，U.S.GovernmentPrintingOffice(1991)中所述，可將用于獲得非人部分的抗體或可變區(qū)的序列與人序列比較。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，人源化抗體鏈的構(gòu)架區(qū)來(lái)源于人可變區(qū)，所述可變區(qū)與非人供體的可變區(qū)具有至少大約60%的總的序列同一性，優(yōu)選至少大約70%的總的序列同一性和更優(yōu)選至少大約85%的總的序列同一性。人部分也可來(lái)源于人抗體，所i^A抗體當(dāng)與非人,的相當(dāng)部分(例如，F(xiàn)R)相比時(shí)在使用的特定部分(例如，F(xiàn)R)內(nèi)具有至少大約65。/。的序列同一性和優(yōu)選至少大約70%的序列同一性。。另外描述的可使用的涉;s^源化小鼠抗體的方法的參考文獻(xiàn)是例如Queen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:2869，1991;美國(guó)專利號(hào)5，693，761;美國(guó)專利號(hào)4,816,397;美國(guó)專利號(hào)5,225,539;Levitt,M"J.Mol.Biol.168:595-620,1983中描述的計(jì)算機(jī)程序ABMOD和ENCAD;可基本上按照Winter和其同事的方法進(jìn)行人源化[Jones等人，Nature,321:522-525(1986);Riechmann等人，Nature,332:323-327(1988);Verhoeyen等人，Science,239:1534-1536(1988)。人抗體作為人源化的另一選擇，可產(chǎn)生人抗體?？墒褂帽绢I(lǐng)域內(nèi)已知的多種技術(shù)包括噬菌體展示文庫(kù)產(chǎn)生人抗體。Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol"227:381(1991);Marks等人，J.Mol.Biol"222:581(1991)。Cole等人和Boerner等人的技術(shù)也可用于人單克隆抗體的制備。Cole等人，MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,AlanR.Liss，第77頁(yè)(1985)和Boerner等人，J.Immunol"147(1):86曙95(1991)。類似地，可通過(guò)將人或完全失活的小鼠來(lái)制備人抗體。在例如用包含本發(fā)明的免疫原性表位的抗原免疫后，獲得在所有方面(包括基因重排、裝配和抗體譜)與人中看到的非常相似的完全人抗體產(chǎn)生鐠。在例如美國(guó)專利號(hào)5,545,807、5,545,806、5，569，825、5,589,369、5，591，669、5，625，126、5，633，425、5，661，016和下列科學(xué)出版物Marks等人，BioTechnology10:779-783，1992;Lonberg等人，Nature368:856-859，1994;Morrison,Nature368:812-13，1994;Fishwild等人，NatureBiotechnology14:845-51，1996;Neuberger，NatureBiotechnology14:826(1996);Lonberg和Huszar,Intern,Rev.Immunol.13:65-93(1995)和Jobkobovits等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:2551，1993中描述了該方法。也在Bruggemann等人Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA86:6709-6713(1989)中描述了將人免疫球蛋白基因?qū)胄∈髲亩a(chǎn)生能夠通過(guò)具有人序列的抗體對(duì)抗原應(yīng)答的轉(zhuǎn)基因小鼠。存在幾種用于生成產(chǎn)生人抗體的哺乳動(dòng)物的策略。特別地，存在"微小基因座，，方法，在該方法中通過(guò)包含來(lái)自Ig基因座的片段(單個(gè)基因)(參見，例如，美國(guó)專利5,545,807、5，545，806、5,625,825、5，625，126、5,633,425、5,661,016、5,770,429、5,789,650和5,814,318、5,612,205、5,721,367、5,789,215)、YAC導(dǎo)入Ig基因座的大的和基本上的種系片段[見Mendez等人NatureGenetics15:146-156(1997)，Green和JakobovitsJ.Exp,Med.188:483-495(1998)以及通過(guò)使用微細(xì)胞融合導(dǎo)入完整的或基本上完整的基因座(參見歐洲專利申請(qǐng)?zhí)朎P0843961Al)iM莫擬外源Ig基因座。當(dāng)使用本領(lǐng)域技術(shù)人員可獲得的方法時(shí)，例如當(dāng)用包含本發(fā)明的免疫原性表位的多肽免疫任何轉(zhuǎn)基因小鼠(所述小鼠能夠通過(guò)具有人序列的抗體應(yīng)答)時(shí)，該小鼠可用于產(chǎn)生本發(fā)明的抗肌抑制素抗體。用途本發(fā)明的抗體用于此處描述的治療、預(yù)防和研究應(yīng)用。本發(fā)明的抗體可用于診斷與人肌抑制素的表W目關(guān)的障礙或疾病。以相似的方式，可在測(cè)定中使用本發(fā)明的抗體監(jiān)控進(jìn)行肌抑制素相關(guān)性病癥治療的受試者的肌抑制素水平。研究應(yīng)用包括利用本發(fā)明的抗體和標(biāo)記來(lái)檢測(cè)樣品中例如人體液中或細(xì)胞或組織提取物中的肌抑制素的方法?？墒褂镁哂行揎椈虿痪哂行揎椀谋景l(fā)明的抗體，并且通過(guò)可檢測(cè)部分的共價(jià)附著或非共價(jià)附著標(biāo)記所述本發(fā)明的抗體?？蓹z測(cè)部分可以是能夠直接或間接產(chǎn)生可檢測(cè)信號(hào)的任何部分。例如，可檢測(cè)部分可以是放射性同位素例如311、"C、32P、"S或1251、熒光化合物或化學(xué)發(fā)光化合物例如異硫氰酸熒光素、羅丹明或安光素；或酶例如堿性磷酸酶、p-半乳糖苷酶或辣根過(guò)氧化物酶。可使用本領(lǐng)域內(nèi)已知的用于將抗體分開綴合至可檢測(cè)部分的任何方法，包括由Hunter,等人，Nature144:945，1962;David,等人，Biochemistry13:1014，1974;Pain,等人，J.Immunol.Meth.40:219，1981;和Nygren，J.Histochem.AndCytochem.30:407，1982描述的方法。許多種用于測(cè)量肌抑制素的常規(guī)方案包括例如ELISA、RIA和FACS在本領(lǐng)域內(nèi)是已知的，其提供了診斷肌抑制素的表達(dá)的改變的或異常的水平的基礎(chǔ)。使用本領(lǐng)域內(nèi)已知的任何技術(shù)例如通過(guò)將包含肌抑制素多肽的樣品與例如抗體在適合形成抗原:抗體復(fù)合物的條件下結(jié)合來(lái)確定正?；驑?biāo)準(zhǔn)的表達(dá)值。用可檢測(cè)的物質(zhì)直接或間接地標(biāo)記抗體以幫助檢測(cè)結(jié)合或未結(jié)合的抗體。合適的可檢測(cè)的物質(zhì)包括多種酶、輔基、熒光材料、發(fā)光材料和放射性材料。合適的酶的實(shí)例包括辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶、P-半乳糖苷酶或乙酰膽堿酯酶；合適的輔基復(fù)合物的實(shí)例包括鏈霉抗生物素/生物素和抗生物素蛋白/生物素；合適的熒光材料的實(shí)例包括傘形酮、熒光素、異硫氰酸熒光素、羅丹明、二氯三嗪胺(dichlorotriazinylamine)熒光素、丹磺酰氯或藻紅蛋白；發(fā)光材料的實(shí)例包括魯米諾；以M射性材料的實(shí)例包括125I、131I、35S或3H。(參見，例如，Zola，MonoclonalAntibodies:AManualofTechniques,CRCPress,Inc.(1987))。通過(guò)不同的方法例如光度測(cè)定法定量所形成的標(biāo)準(zhǔn)復(fù)合物的量。然后將在樣品中表達(dá)的肌抑制素多肽的量與標(biāo)準(zhǔn)值對(duì)比。為方便起見，可在試劑盒中提供本發(fā)明的抗體，所述試劑盒是預(yù)先確定的量的試劑和進(jìn)行診斷測(cè)定的說(shuō)明書的包裝組合。當(dāng)用酶標(biāo)記抗體時(shí)，試劑盒將包含底物和酶所需要的輔因子(例如，提供可檢測(cè)的發(fā)色團(tuán)或熒光基團(tuán)的底物前體)。此外，可以包括其他添加劑例如穩(wěn)定劑、緩沖液(例如，封閉緩沖液或裂解緩沖液)等?？梢詫挿旱刈兓喾N試劑的相對(duì)量以提供基本上使測(cè)定的靈敏度最優(yōu)化的試劑的溶液濃度。特別地，可以以干粉(通常為凍干的)的形式提供包含賦形劑的試劑，所述試劑在溶解后可提供具有合適濃度的試劑溶液?？贵w的治療用途肌抑制素在肌肉的發(fā)育和許多相關(guān)的障礙或疾病中起著重要作用。在成人中，主要在骨駱肌中檢測(cè)到肌抑制素mRNA，雖然也在脂肪組織和心臟組織中也發(fā)現(xiàn)更低的濃度(Sharma,M.，等到，J.CellPhysiol.180:1，1999)。肌抑制素敲除小鼠具有比它們的野生型同胞仔高2至3倍的肌肉質(zhì)量。增加的肌肉質(zhì)量是纖維過(guò)度生長(zhǎng)和超常增生造成的(McPherron，A.，等人Nature387:83-90，1997和Zhu，X.等人，F(xiàn)EBSLetters474:71)。此外，肌抑制素敲除小鼠積累了比其野生型同胞仔更少的脂肪，但表現(xiàn)正常和健康。最近也顯示肌抑制素;O旨肪生成的重要調(diào)節(jié)物(Rebbapragada，A.,等人，Mol.andCell.Bio.23:7230-7242，2003)。此外，近來(lái)已在肌抑制素缺陷型小鼠中研究了骨結(jié)構(gòu)和含量(HamrickM.W.，等人，J.OrthopaedicResearch21:1025，2003;Hamrick，M.W.，等人，CalcifTissueInt71:63，2002。因此，包含本發(fā)明的抗肌抑制素單克隆抗體的藥物組合物可用于增加肌肉質(zhì)量，增加骨的密度，減少肌萎縮，或可用于治療或預(yù)防其中肌抑制素的存在引起或促成不希望的病理效應(yīng)或肌抑制素水平的減少在哺乳動(dòng)物(優(yōu)選人)中具有治療益處的病癥，包括但不限于肌萎縮、肌肉損傷、手術(shù)、被損傷的肌肉的修復(fù)、虛弱、年齡相關(guān)少肌癥、廢用性萎縮、骨質(zhì)疏;^癥、骨關(guān)節(jié)炎、韌帶生長(zhǎng)和修復(fù)、肥胖癥、體脂肪積累的抑制、肥胖癥、任何類型的肌營(yíng)養(yǎng)不良、重癥監(jiān)護(hù)性肌病(criticalcaremyopaythy)、酒精中毒性肌病、惡病質(zhì)(例如，癌癥相關(guān)性或HIV誘導(dǎo)的或由COPD、慢性肺病、從膿毒癥的恢復(fù)、腎衰竭、肝衰竭、心力衰竭或疾病引起的)、代謝綜合征、燒傷后肌萎縮和II型糖尿病。廢用性萎縮可由許多因素或偶然事件造成，所述因素或偶然事件包括導(dǎo)致長(zhǎng)期不能運(yùn)動(dòng)(prolongedimmobility)或廢用或臥床休養(yǎng)的任何障礙或疾病或狀態(tài)，包括但不限于實(shí)體器官(solidorgan)移植、關(guān)節(jié)置換術(shù)、中風(fēng)、脊髓損傷、從重度燒傷恢復(fù)、久坐的慢性血液透才斤(sedentarychronichemodialysis),膿毒癥后'恢復(fù)和暴露于孩吏重力。因?yàn)榧∫种扑卦谛蛄泻凸δ苌鲜强缥锓N高度保守的，因此本發(fā)明的抗體可用于增加肌肉質(zhì)量，增加骨的密度或治療或預(yù)防非人哺乳動(dòng)物或禽類物種[例如，家養(yǎng)動(dòng)物(例如，狗和貓)、運(yùn)動(dòng)動(dòng)物(例如，馬)、食物來(lái)源動(dòng)物(例如，牛、豬和羊)、禽類物種(例如，雞、火雞、其他獵禽或家禽)l中的病癥，其中肌抑制素的存在51起或促成不希望的病理效應(yīng)或肌抑制素水平的降低具有治療益處。此處涉及本發(fā)明的抗肌抑制素單克隆抗體用于治療或預(yù)防至少一種上述疾病的用途，在所述疾病中肌抑制素的活性是有害的或其受益于生物活性肌抑制素的水平降低。此外，涉及本發(fā)明的抗肌抑制素單克隆抗體用于藥物制造的用途，所述藥物用于治療至少一種上述病癥。如此處所用的，術(shù)語(yǔ)"^療"、"進(jìn)行治療"等是指獲得希望的藥理學(xué)和/或生理學(xué)效應(yīng)。就完全或部分地預(yù)防疾病或其癥狀而言，效應(yīng)可以是預(yù)防性的和/或就部分或完全治愈疾病和/或可歸因于該疾病的不利影響而言效應(yīng)是治療性的。如此處使用的，"治療"包括施用本發(fā)明的化合物以治療哺乳動(dòng)物特別是人中的疾病或病癥，并且包括(a)在可以是對(duì)該疾病易感但還未被診斷為患有其的受試者中預(yù)防疾病發(fā)生；(b)抑制疾病，即，使其停止M;和(c)減輕疾病，即，^使疾病或障礙消退或減輕其癥狀或并發(fā)癥?？烧{(diào)整劑量方案以提供最適宜的希望的應(yīng)答(例如，治療性或預(yù)防性應(yīng)答)。例如，可施用快速灌注劑(singlebolus)，可在一段時(shí)間內(nèi)施用幾次分開的劑量或可按照治療狀況的緊迫性所指示的按比例減少或增加劑量。藥物組合物可將本發(fā)明的抗體摻入適合用于給受試者施用的藥物組合物中。本發(fā)明的化合物可以以單劑量或多劑量的單獨(dú)地或與可藥用的栽體、稀釋劑和/或賦形劑組合施用。設(shè)計(jì)適合用于選擇的施用模式的用于施用的藥物組合物，根據(jù)需要使用可藥用的稀釋劑、載體、和/或賦形劑例如M劑、緩沖劑、表面活性劑、防腐劑、增溶劑、等滲劑、穩(wěn)定劑等。按照例如Remington,TheScienceandPracticeofPharmacy,第19版，Gennaro，編著，MackPublishingCo.,Easton，PA1995(其提供了對(duì)于醫(yī)生通常是已知的配制劑技術(shù)的概要)中的常規(guī)技術(shù)設(shè)計(jì)所述組合物?？赏ㄟ^(guò)使用標(biāo)準(zhǔn)的施用技術(shù)(包括口服、靜脈內(nèi)、^M內(nèi)、皮下、肺的、經(jīng)皮膚、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、口腔、舌下或栓劑施用)對(duì)處于此處描述的病狀的風(fēng)險(xiǎn)中或展示所述病狀的受試者施用包含本發(fā)明的抗肌抑制素單克隆抗體的藥物組合物。本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選是"治療有效量"或"預(yù)防有效量"的本發(fā)明的抗體。"治療有效量"是指在必要的劑量和時(shí)間的情況下有效地獲得希望的治療結(jié)果的量?？贵w的治療有效量可根據(jù)因素例如個(gè)體的疾病狀態(tài)、年齡、性別和體重以及抗體或抗體部分在個(gè)體中引發(fā)希望的應(yīng)答的能力而變化。治療有效量也是其中抗體的治療有益效應(yīng)超過(guò)其任何毒性或有害效應(yīng)的量。"預(yù)防有效量，，是指在必要的劑量和時(shí)間的情況下有效地獲得希望的預(yù)防結(jié)果的量。通常，由于在疾病之前或在疾病的早期將預(yù)防性劑量用于受試者，因此預(yù)防有效量將低于治療有效量。治療有效量或預(yù)防有效量是至少為受試者提供治療益處所必需的活性劑的最低劑量，但低于毒性劑量。換而言之，本發(fā)明的抗體的治療有效量是在哺乳動(dòng)物優(yōu)選人中增加肌肉質(zhì)量、增加骨的密度或治療病癥的量，所述病癥中，肌抑制素的存在引起或促成不希望的病理效應(yīng)或肌抑制素水平的減少在哺乳動(dòng)物優(yōu)選人中導(dǎo)致有益的治療效應(yīng)，所述病癥包括但不限于肌萎縮、肌肉損傷、術(shù)后虛弱(surgeryfrailty)、年齡相關(guān)少肌癥、廢用性萎縮、骨質(zhì)疏;^癥、骨關(guān)節(jié)炎、韌帶生長(zhǎng)和修復(fù)、肥胖癥、體脂肪積累的抑制、任何類型的肌營(yíng)養(yǎng)不良、重癥監(jiān)護(hù)性肌病、惡病質(zhì)(例如，癌癥相關(guān)性或HIV誘導(dǎo)的或由COPi)、腎衰竭、肝衰竭、心力衰竭或疾病引起的)、代謝綜合征和II型糖尿病。廢用性萎縮可由許多因素或偶然事件造成，所述因素或偶然事件包括導(dǎo)致長(zhǎng)期不能運(yùn)動(dòng)或廢用或臥席沐養(yǎng)的任何障礙或疾病或狀態(tài)，包括但不限于實(shí)體器官移植、關(guān)節(jié)置換術(shù)、中風(fēng)、脊髓損傷、從重度燒傷恢復(fù)、久坐的慢性血液透析、膿毒癥后恢復(fù)和暴露于微重力。本發(fā)明抗體的施用途徑可以是口服、腸胃外、通過(guò)p及入或局部的。優(yōu)選，可將本發(fā)明的抗體摻入適合用于腸胃外施用的藥物組合物。此處使用的術(shù)語(yǔ)腸胃外包括靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、直腸、陰道或自內(nèi)施用。通過(guò)靜脈內(nèi)或皿內(nèi)或皮下注射進(jìn)行的外周全身性遞送是優(yōu)選的。用于這樣的注射的合適的媒介物在本領(lǐng)域內(nèi)是已知的。藥物組合物通常在制造和在提供的容器(包括例如密封的小瓶或注射器)中貯存的條件下必須是無(wú)菌的和穩(wěn)定的。因此，在產(chǎn)生制劑后可對(duì)藥物組合物進(jìn)行過(guò)濾滅菌或使其是微生物學(xué)可接受的。用于靜脈內(nèi)輸注的典型組合物可具有多至250-1000ml的液體(例如無(wú)菌^M^(Ringer)溶液、生理鹽水、葡萄糖溶液和Hank溶液)體積和治療有效劑量(例如，1至100mg/mL或更高)的抗體濃度。劑量可依賴于疾病的類型和嚴(yán)重度而變化。如在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域內(nèi)所熟知的，用于任何一個(gè)受試者的劑量依賴于許多因素，包括患者的身材大小、體表面積、年齡、待施用的特定化合物、性別、施用的時(shí)間和途徑、總體健康狀況和同時(shí)施用的其他藥物。典型劑量可以在例如0.001至1000照的范圍內(nèi)；然而，低于或高于該示例范圍的劑量是可以預(yù)期的，特別是考慮到上述因素時(shí)。日常腸胃外給藥方案可以是每天大約0.1將/kg至大約100mg/kg的總體重，優(yōu)選大約0.3|ng/kg至10mg/kg和更優(yōu)選大約1照/kg至1mg/kg，甚至更優(yōu)選大約0.5至10mg/kg的體重。通過(guò)定期估量來(lái)監(jiān)控進(jìn)程。對(duì)于在數(shù)天或更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)的重復(fù)施用，根據(jù)病癥，重復(fù)治療直至發(fā)生希望的疾病癥狀的抑制。然而，其他給藥方案可以是有用的，并且不能由此排除。根據(jù)醫(yī)生希望獲得的藥物動(dòng)力學(xué)衰減模式，可通過(guò)抗體的單次推注施用、多次推注施用或連續(xù)輸注施用來(lái)遞送希望的劑量。對(duì)抗體的這些建議的量進(jìn)行大量的治療性判斷。選擇合適的劑量和日程中的關(guān)鍵因素是獲得的結(jié)果。本文中考慮的因素包括正進(jìn)行治療的特定疾病、被治療的特定哺乳動(dòng)物、個(gè)體患者的臨床情況、疾病的病因、抗體遞送的位置、抗體的特定類型、施用方法、施用日程和醫(yī)生已知的其他因素。可將本發(fā)明的治療劑冷凍或凍干以進(jìn)行貯存和在使用之前將其在合適的無(wú)菌載體中重建。凍干和重建可導(dǎo)致不同程度的抗體活性丟失。可能需要調(diào)整劑量來(lái)補(bǔ)償。通常，pH6至pH8是優(yōu)選的。制造品在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了包含用于治療或預(yù)防上述疾病或病癥的材料的制造品。制造品包括容器和標(biāo)簽。合適的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器和試管?？捎迷S多種材料例如玻璃或塑料形成容器。容器裝有對(duì)于預(yù)防或治療疾病或病癥是有效的本發(fā)明的組合物并且可具有無(wú)菌入口(例如容器可以是靜脈內(nèi)施用溶液袋(intravenoussolutionbag)或具有可用皮下注射針穿透的塞子的小瓶)。組合物中的活性劑是本發(fā)明的抗肌抑制素抗體。容器上的或與其連接的標(biāo)簽標(biāo)明組合物用于治療選擇的病病癥。制造品還可包含第二容器，所述第二容器包含可藥用的緩沖液例如磷酸緩沖的鹽溶液、林格溶液和葡萄糖溶液。其還可包含在商業(yè)和用戶立場(chǎng)考慮希望的其他材料，包括其他緩沖液、稀釋劑、過(guò)濾器、針頭、注射器和具有使用說(shuō)明的說(shuō)明書。，僅以舉例說(shuō)明的目的提供下列實(shí)施例，并且不希望其以任何方式限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例實(shí)施例1:ELISA測(cè)定法A.肌抑制素和GDF-ll包被的平板在ELISA測(cè)定中檢測(cè)本發(fā)明的小鼠/人嵌合抗肌抑制素Fab，在所述測(cè)定法中測(cè)量Fab對(duì)以不同濃度包被在96孔上的成熟的肌抑制素(二聚體形式)的結(jié)合。用50jil人重組肌抑制素(安迪生物有限/i^司(R&Dsystems),無(wú)載體的，首先重懸于4mMHC1中，然后以在碳酸鹽緩沖液，pH9.6中l(wèi)照/ml進(jìn)行包被)或50nl重組人GDF-ll(派柔泰克有限公司(Peprotech，Inc.)，貨號(hào)120-11，無(wú)栽體的，首先重懸于4mMHC1中，然后以在碳酸鹽緩沖液，pH9.6中的l照/ml進(jìn)行包被)包被兩個(gè)96孔板的各孔。將平板在4°C下溫育過(guò)夜。抽吸孔，用PBST(PBS+0.1%Tween-20)洗滌2次。用每孔200pl封閉緩沖液(1%的PBST中的BSA，進(jìn)行1小時(shí))封閉平板。將待檢測(cè)的來(lái)自周質(zhì)提取物(periplasmicextract)的Fab連續(xù)稀釋入PBST。向GDF誦8和GDF-ll包被的平板柱(platecolumn)中加入50微升的各Fab溶液。將平板在室溫下溫育1小時(shí)。然后用PBST洗滌孔3次。向各孔加入堿性磷酸酶綴合的二抗(50pl以1:1000在PBST中稀釋的山羊抗小鼠kAP(南方生物技水公司(SouthernBiotech))),并且在室溫下溫育30分鐘。然后用PBST洗滌孔3次。向各孔加入50微升的顯色底物(AMP/PMP)，然后讓其在室溫下顯色。以560nm的OD讀取孔的吸光度。對(duì)于各Fab，獲得滴定曲線，并且報(bào)告了參照Fab的曲線的中點(diǎn)(midpoint)處的相對(duì)OD。這些數(shù)據(jù)證明所有受試Fab結(jié)合與平板結(jié)合的人成熟肌抑制素，與GDFll發(fā)生交叉反應(yīng)。B.Fab捕獲ELISA用50nl在碳酸鹽緩沖液中的2ng/ml的山羊抗人k抗體包被96孑L板。將平板在4。C下溫育過(guò)夜。抽吸孔，并用PBST(PBS+0.1%Tween-20)洗滌2次。用每孔200nl封閉緩沖液(PBST中1%的BSA，進(jìn)行1小時(shí))封閉平板。將待檢測(cè)的來(lái)自周質(zhì)提取物的Fab在37°C下在平板上的柱子中2小時(shí)以進(jìn)行捕獲。在用PBST洗滌3次后，向捕獲的Fab的各柱子中加入50^12倍連續(xù)稀釋的生物素化肌抑制素(從100nM至780pM)，并且在37°C下溫育1小時(shí)。然后用PBST洗滌平板，在37°C下與PBST—起溫育1至3小時(shí)。向各孔加入堿性磷酸酶綴合的Neutravidin(皮爾斯公司(Pierce),以1:1000在PBST中稀釋的)，然后在室溫下溫育2分鐘。然后用PBST洗滌孔3次。向各孔加入50微升的顯色底物(AMP/PMP)，然后讓其在室溫下顯色。以560nm的OD讀取孔的吸光度。報(bào)導(dǎo)了與參照Fab的最大OD的吸光度相比的相對(duì)OD。所有受試的本發(fā)明的Fab都結(jié)合可溶性的人成熟肌抑制素。實(shí)施例2肌抑制素中和測(cè)定通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的方法從階段8-9嚢胚期爪蟾胚胎取出外胚層外植體并將其在18°C下在0.5xMBS(lxMBS:88mMNaCl、1mMKCl、0.7mMCaCl2、lmMMgS04、5mMHEPES、2.5mMNaHC03、1:1000v/v艮他霉素、0.1。/。牛血清清蛋白)(加入了生長(zhǎng)因子(GDF8或GDFll)的以+標(biāo)示或指明)中培養(yǎng)18小時(shí)，經(jīng)歷該時(shí)間，對(duì)照胚胎達(dá)到早期神經(jīng)胚期(階段15-16)。對(duì)外植體照相，并且使用設(shè)計(jì)用于動(dòng)物冠定量的圖像分析算法測(cè)量各外植體的長(zhǎng)度。未用生長(zhǎng)因子或Fab(對(duì)照)處理的外植體長(zhǎng)成球形表皮。肌抑制素和GDF-ll在這些外胚層外植體中誘導(dǎo)使外植體延長(zhǎng)并且形成啞鈴狀結(jié)構(gòu)的中胚層。當(dāng)就中和活性進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，在整個(gè)培養(yǎng)期長(zhǎng)度中將抗體或Fab加入含有肌抑制素的培養(yǎng)基中，然后估量它們抑制生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的延伸運(yùn)動(dòng)的能力。以25ng/ml向外植體加入肌抑制素。以20照/ml加入待測(cè)試的抗體或Fab。將針對(duì)無(wú)關(guān)抗原產(chǎn)生的Fab用作對(duì)照。可將商購(gòu)可獲得的單克隆抗小鼠GDF8抗體作為對(duì)照進(jìn)行檢測(cè)，這一抗體在用純化的小鼠GDF8免疫的山羊中產(chǎn)生，并由廠商證明當(dāng)以大約10-20照/ml的存在時(shí)，中和由25ng/ml的鼠類GDF8引發(fā)的爪蟾動(dòng)物冠的延伸(安迪生物有限公司(R&DSystems)貨號(hào)MAB788)。ImagePro(v4.5.1.22，來(lái)自美迪賽博/^司(MediaCybernetics))用于圖象處理。寫入宏指令以使圖像處理自動(dòng)化。宏指令處理圖像和記錄以比特為單位的長(zhǎng)度。如本領(lǐng)域內(nèi)已知的可使用可供選擇的測(cè)量方法。本發(fā)明的抗體在動(dòng)物冠測(cè)定中涉及中和GDF8的活性。實(shí)施例3:Fab的親和力測(cè)量使用包含CM4傳感器芯片的BIAcore2000儀器測(cè)量本發(fā)明的抗肌抑制素Fab的親和力(Ko)和kon以及koff率。BIAcore⑧利用表面等離振子共振的光學(xué)性質(zhì)#測(cè)葡聚糖生物傳感器基質(zhì)中的相互作用的分子的蛋白質(zhì)濃度的改變。除了已指出的，所有試劑和材料均購(gòu)自百克AB公司(BIAcoreAB)(Upsala，Sweden),在25°C下進(jìn)行所有測(cè)量。將包含F(xiàn)ab的樣品溶解在HBS-EP緩沖液(150mM氯化鈉、3mMEDTA、0.05%(w/v)表面活性劑P-20和10mMHEPES,pH7.4)中。使用氨偶聯(lián)化學(xué)將肌抑制素或GDF-ll(安迪生物有P艮公司(R&DSystems))固定在CM4芯片的流動(dòng)室上。使用0.1MN-羥基琥珀酰亞胺和0.1M3-(N，N-二曱^J0丙基-N-乙基碳二胺的1:1混合物以20jil/分鐘的流速活化流動(dòng)室(l-4)。以10nL/分鐘的流速，對(duì)單個(gè)流動(dòng)室手動(dòng)注射肌抑制素或GDF-ll(在10mM醋酸鈉中的2.5|Ug/mL，pH4.5)。監(jiān)測(cè)表面密度，直至各流動(dòng)室達(dá)到大約150個(gè)反應(yīng)單位(RU)的表面密度。用50jal1M乙醇胺-HCl，pH8.5(10^L/分鐘)的注射封閉表面。為確保完全除去任何非共價(jià)結(jié)合的肌抑制素或GDF-ll,兩次注射15pl的10mM甘氨酸，pH1.5。用于動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)的運(yùn)行緩沖液包含10mMHEPES，pH7.4、150mMNaCl、0.005%P20。在最大流速(100pI/分鐘)進(jìn)行動(dòng)力結(jié)合數(shù)據(jù)的收集。各分析循環(huán)由(i)對(duì)所有4個(gè)流動(dòng)室進(jìn)行250piFab(以2倍的稀釋增量(dilutionincrement)從50nM至0.4nM的濃度范圍)注射，其中以流動(dòng)室1作變參照流動(dòng)室；(ii)20分鐘的解離(緩沖液流動(dòng))，(iii)通過(guò)兩次15|Lil10mM甘氨酸，pH1.5的注射再生GDF-8或GDF-ll表面，(iv)15pl運(yùn)行緩沖液的空白注射，和(v)在下一個(gè)循環(huán)開始之前進(jìn)行2分鐘的穩(wěn)定時(shí)間。按照流動(dòng)室2減去流動(dòng)室1，流動(dòng)室3減去流動(dòng)室1和流動(dòng)室4減去流動(dòng)室1來(lái)監(jiān)控信號(hào)。以隨機(jī)的順序一式兩份注射樣品和緩沖液空白。使用SCRUBBER(生物分子相互作用分析中心(CenterforBiomolecularInteractionAnalysis),Univ.ofUtah)軟件處理數(shù)據(jù)。通過(guò)使用ClampXP(生物分子相互作用分析中心，Univ.ofUtah)將生物傳感器數(shù)據(jù)擬合簡(jiǎn)單的關(guān)聯(lián)模型來(lái)確定每一個(gè)循環(huán)的結(jié)合和解離率，從而得出kon和koff速率常數(shù);使用關(guān)系式Kd=koff/kon計(jì)算平衡結(jié)合常數(shù)Kd。當(dāng)在上面的測(cè)定中測(cè)量時(shí)，F(xiàn)ab41-1和412-6分別具有4.16nM(4.16xl(T9M)和0.46nM(4.6xl010M)的對(duì)于GDF-8的親和力，以及分別具有8.96nM和0.81nM的對(duì)于GDF-ll的親和力；相對(duì)于GDF-ll，兩種Fab對(duì)于GDF-8的相對(duì)特異性都優(yōu)先大約2倍。(表2)表2<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>實(shí)施例4:Mab的親和力的測(cè)量使用SapidyneKINEXA測(cè)定法確定本發(fā)明的全長(zhǎng)單克隆抗體的結(jié)合親和力測(cè)量。使用本發(fā)明的的抗體預(yù)包被NHS激活的快速流動(dòng)瓊脂糖珠子(GE健康護(hù)理公司(GEHealthcare))(每ml的珠子50照抗肌抑制素抗體)，并且用1MTris-HCl，pH8.0中的10mg/mlBSA進(jìn)行封閉。然后在室溫下將2pM、4pM和40pM的本發(fā)明的抗體(例如3-74/ClE4)與不同濃度(例如，2.4pM至10nM，連續(xù)稀釋)的肌抑制素一起在運(yùn)行緩沖液(PBS、0.005%(v/v)Tween-20和1mg/ml卵清蛋白)中溫育10小時(shí)。為確定平衡時(shí)游離抗體的存在，使各樣品通過(guò)包祐肌抑制素的珠子。然后通過(guò)使在運(yùn)行緩沖液中以1:4000稀釋的熒光(Cy5)標(biāo)記的山羊抗人Fc抗體(杰克免疫研究公司(JacksonImmunoResearch))的溶液通過(guò)珠子來(lái)定量結(jié)合珠子的抗體的量。測(cè)量的熒光信號(hào)與平衡時(shí)游離抗體的濃度成正比。以一式兩份測(cè)量肌抑制素的各濃度。使用多重曲線、單點(diǎn)同質(zhì)結(jié)合模型(one-sitehomogeneousbindingmodd)(KINEXA軟件)從竟?fàn)幥€的非線性回歸獲得平衡解離常數(shù)(Kd)。也使用SapidyneKINEXA測(cè)定確定GDF-8的結(jié)合速率常數(shù)(k^)。使用上述的相同條件將2pM的抗體與20pMGDF-8混合。在不同的時(shí)間上，使用上述的用于平衡結(jié)合的條件就游離的抗體探測(cè)樣品，然后使用KINEXA軟件使所得的時(shí)間依賴性擬合以確定結(jié)合速率(kon)。使用表達(dá)式koff=Ki)Xkon計(jì)算解離速率常數(shù)(koff)。使用描述的測(cè)定法測(cè)量全長(zhǎng)單克隆抗體3-74/ClE4(有效連接至IgG4Fc區(qū))，獲得的結(jié)果描述于下面的表3中。表3MabKD，pM(95%CI)Kon，ivrV1(95%CI)計(jì)算的Kofps3-74/C1E41.39(0.20-3.58)1.49xl06(1.39-1.58xl06)2.08xl0_6實(shí)施例5肌抑制素/SBE報(bào)告基因測(cè)定法在該才艮告基因測(cè)定中，當(dāng)分子例如肌抑制素、GDF-ll或其他TGF-p超家族成員結(jié)合其自身受體從而觸發(fā)產(chǎn)生能夠結(jié)合SBE的磷酸化SMAD復(fù)合物的SMAD信號(hào)傳導(dǎo)時(shí)，編碼SMAD結(jié)合元件("SBE")(更具體地(CAGA)u)下游的報(bào)告基因(即荄光素酶基因)的質(zhì)粒表達(dá)螢光素酶蛋白質(zhì)。以前報(bào)導(dǎo)CAGA序列為TGF-P誘導(dǎo)的基因PAI-1的啟動(dòng)子內(nèi)的TGF-卩應(yīng)答序列(Denner等人，EMBOJ.，17:3091-3100，1998)。暴露于細(xì)胞的活性肌抑制素的量與產(chǎn)生的螢光素酶的量直接成正比，所述螢光素酶的量與產(chǎn)生的并且為可測(cè)量的光量直接成正比。抑制劑(例如，結(jié)合肌抑制素的抗體)的存在減少了能夠激活SBE的肌抑制素的量，這最終導(dǎo)致光的產(chǎn)生減少。在此處引用的國(guó)際公開號(hào)WO2004/037861中也描述了該測(cè)定法。要了解肌抑制素/SBE報(bào)告基因測(cè)定法不限于此處描述的確定的條件，也可使用其他類型的細(xì)胞，例如293HEK(ATCC)或A204Rhabso肌肉瘤細(xì)胞(Rhabsomyosarcomacell)(參見，例如，Whittemore，等人BBRC，200:965-71,2003);可使用真他類型的報(bào)告基因例如CAT、(5-gal、GFP和用于細(xì)胞生長(zhǎng)的其他生長(zhǎng)條件和測(cè)定條件，包括在反應(yīng)中可使用不同量的肌抑制素。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠容易地確定測(cè)定是否落在肌抑制素/SBE報(bào)告基因測(cè)定的范圍內(nèi)，這根據(jù)其是否具有被導(dǎo)入宿主細(xì)胞的包含位于報(bào)告基因的上游的SBE元件的載體，其中使用的SBE元件應(yīng)答SMAD,所述SMAD是響應(yīng)肌抑制素結(jié)合肌抑制素的受體而產(chǎn)生的。R.S.Thies，等人，GrowthFactors,18:251-259，2001描述了相似的測(cè)定法而Wittemore,L.等人，BBRC，300:965-971，2003描述了對(duì)響應(yīng)肌抑制素結(jié)合其受體而產(chǎn)生的SMAD:^應(yīng)的SBE元件。在該測(cè)定中，將T-75培養(yǎng)瓶中的293E細(xì)胞(艾格生物技術(shù)公司(EdgeBiosystems))培養(yǎng)在DMEM/F12培養(yǎng)基(l:l)(吉布克7^司(Gibco)10565-042)和10%FBS中。用100nllipofectamine2000(英俊公司(Invitrogen)11668-019)、5mlOptiMEMI(吉布克公司(Gibco)51985-034)和30pgSB-螢光素酶DNA的混合物在37。C轉(zhuǎn)染細(xì)胞，進(jìn)行4小時(shí)。除去轉(zhuǎn)染混合物，加入完全培養(yǎng)基，在37。C下進(jìn)行1小時(shí)。然后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行胰蛋白酶消化，并且以2xl(^個(gè)細(xì)胞/ml重懸于完全培養(yǎng)基中，用50jil在Biocoat96孔板(BD35-6461)的各個(gè)孔中進(jìn)行'涂板，在37。C下溫育1小時(shí)。在完成溫育后，用100nl各待測(cè)Fab替換培養(yǎng)基，所述Fabl:2連續(xù)稀釋并在37。C下與在完全培養(yǎng)基中的40ng/ml肌抑制素(安迪生物公司(R&DSystems)788-G8)或GDF-ll(安迪生物公司(R&DSystems))的1:1的溶液一起預(yù)溫育l小時(shí)。將平板在37。C、5%C02中放置過(guò)夜，第二天向各孔中加入100nlGIo裂解緩沖液和Bright-Glo螢光素酶試劑(普洛麥格公司(Promega))的1:1的混合物，通過(guò)移液管抽吸進(jìn)行混合。將150jil該混合物轉(zhuǎn)移至白色96孔板，然后使用發(fā)光計(jì)測(cè)量發(fā)光。然后將發(fā)光對(duì)Fab的濃度作圖，計(jì)算各Fab對(duì)于肌抑制素和GDF-ll的IC50。使用上述條件檢測(cè)的Fab產(chǎn)生下面的表4中所列的ICso值。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>實(shí)施例6藥物動(dòng)力學(xué)可以以1mg/kg的劑量在單次靜脈內(nèi)(IV)或自內(nèi)(IP)施用后在C57B6/SCID小鼠中估量本發(fā)明抗體的藥物動(dòng)力學(xué)(PK)。使動(dòng)物接受上述劑量的未標(biāo)記的和12SI標(biāo)記的抗體的混合物，基于血清中的1251放射性和注射的劑量的特異性活性確.定血清濃度。將靜脈內(nèi)或自內(nèi)施用的抗體的血清濃度對(duì)時(shí)間作圖。實(shí)施例7對(duì)肌肉質(zhì)量和力量的體內(nèi)效應(yīng)為確定本發(fā)明的抗體是否在體內(nèi)阻斷肌抑制素的活性，在成年SCID小鼠中檢測(cè)本發(fā)明的抗體。SCID小鼠患有嚴(yán)重的聯(lián)合免疫缺陷(severecombinedimmunedefkieney)'M-而在^主射本iC明的抗體后不育b產(chǎn)生免疫反應(yīng)。肌肉質(zhì)量用作用本發(fā)明抗體處理的小鼠中肌抑制素活性的指標(biāo)。對(duì)雌性SCID/CB17小鼠(泰克生物技術(shù)公司(TaconicBiotechnology))稱重并分入10個(gè)組。將PBS緩沖液中的本發(fā)明的抗體(41C1E4)以不同的劑量(IO、5和2mg/kg)在第0和笫7天皮下注射入小鼠。在對(duì)照組中，在第0和第7天以10mg/kg將IgG皮下注射入小鼠。在第14天，使用握力檢測(cè)計(jì)(例如，型號(hào)1027csx，哥倫布儀器公司(ColumbusInstruments))測(cè)量肌肉的力量(前肢的力量)。處死動(dòng)物，并且通過(guò)核磁共振(NMR)估量肌肉質(zhì)量。也測(cè)量腓腸肌和四頭肌肌肉的濕重以及體重。結(jié)果(不同參數(shù)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤差)示于下面的表5中。用BoxCox轉(zhuǎn)化法(BoxCoxtransformationmethod)轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)以使數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化。使用JMP5.1軟件(SAS有限公司)通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法鑒定各個(gè)參數(shù)的極端值并將其從數(shù)據(jù)集中排除。使用ANOVA和學(xué)生t檢驗(yàn)確定統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性。低于0.05的p值被認(rèn)為是顯著的。對(duì)于所有受試參數(shù)，以5mg/kg和10mg/kg進(jìn)行檢測(cè)的抗體相對(duì)于對(duì)照IgG組導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的結(jié)果。對(duì)于NMR肌肉、四頭肌濕重和腓腸肌濕重參數(shù)，相對(duì)于對(duì)照IgG組，以2mg/kg進(jìn)行檢測(cè)的抗體導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的結(jié)果。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>權(quán)利要求1.以不高于7×10-11M的親和力特異性結(jié)合肌抑制素的抗肌抑制素單克隆抗體。234-78XXXXX<table>tableseeoriginaldocumentpage141</column></row><table>41H-E741H-E941H-E1241H-F1041H-F1241C1A241C1A441C1C141C1E441C2A141C2A441C2E441C2G83-74/ClA23-74/ClA43-74/C1E43-74/C2A4GIjTFSRYGMSGIiTFSRYGMSGIiTFSRYGMSGIiTFSRYGMSGIjTFSRYGMSgi/tfsry￡msG3jTfsry￡msGIjTFSRY互MSGliTFSRY更MSGIjTFSRY互MSGLTFSRY互MSG1jTFSRY更MSGIjTFSRYfMSGLTFSRY互MSGI/TFSRY互MSGLTFSRYMS共有序列GLX3FSRYX8MSX3:T或NXB:G,T或P42X^XsX^sGX^TXmYSDTVKG71A:A,R或HH或QX3:N,T或KX4:S或AX7:G或SX10:Y或K或EA工KASGGSTYYSDWKGAg^S亙GGSTYYSDTVKG^I^sfGGSTYYSDTVKG互i至s亙ggstyysdtvkgai^s互ggstyysdtvkgai至s互ggstyysdtvk:gai^s亙ggstyysdtvkgai^s亙ggstyysdtvkgs工^s互ggstyysdtvkg五i至s互ggstyysdtvkgl工至S互GGSTYYSDTVKG!Sl至S互GGSTYYSDTVKGAI至siGGSTYYSDTVKGs6:lpdy7267LiPDY7268IiPDY7269LiPDY7270LPDY7263IiPDY72637261IjPDY72607260IjPDY7260LPDY7261IiPDY7263IiPDY7263LPDY72637260LPDY7260IjPDY72圖8<image>imageseeoriginaldocumentpage143</image><image>imageseeoriginaldocumentpage144</image><image>imageseeoriginaldocumentpage0</image><formula>formulaseeoriginaldocumentpage146</formula>圖10(續(xù))CDR1CDR2"Ii2-E9411/3-F1241Ii3-G241H-B8EVQLLESGGGI/VQPGGSIiRLSCAASGLgFSRYGMSWVRQAPGKGIiEWVSAISSSGGSryYSDTVKGRFTISRDlJSKNTIiYLQMNSLRAEDTAVYyCARLPDYWGOGTLVTVSS41H-D1141H-E1141-E541H-E741H-E941C1A241C1A441C1C141C1E441C2A141C2A441C2E441C2G83-74/CLA23-74/ClE43-74/C2A4EVQIiLESGGGLVQPGGStiRLSCAASGI/TFSRYGMSWVRQAPGKGIiEWVSAIISSGGST^SDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYVCARLPDyWGQGTLVTVSSEVQLriESGGGLVQPGGSriRTiSCAASGLTFSRYGMSWVRQAPGKGIiEWVSAI^ftSGGSlSfSDTVKGRFTISRDlISKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLPDYWGQGTIiVTVSSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGLTFSEYGMSWVRQAPGKGIjEWVSAI至sgGGSTYYSDTVKGRFTrSRDNSKNTLYLQ卿SLRAED:rAVYYCARLPDYWGQGTIiVTVSSEVQLIiESGGGIiVQPGGSIiRLSCAASGIiTFSRYGMSWVRQAPGKGLEWVSA^SSGGSTyySDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNStjRAEDTAVyyCARLPDYWGQGTLVTVSSEVQLLESGGGI;VQE>GGSIiRIiSCAASGLTFSRY￡MSWVRQAPGKGLEWVS^i^SSGGSTYySDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYyCARLPDYWGQGTLVTVSS12312412512S127128131132133134135135136123123123136135EVQL]J[BSGGGLVQPGGSIjRLSCAASGLTFSRY5MSWVRQAPGKGLYWVSS工ZSSGGSTYYSDTVKGKFTISRDN晝KNTIiYLQMNSIjRAEDTAVYYCARLPDYWGQGTLVTVSSEVQL^ESGGGLVQPGGSLRLSCAASGLTFSRy^MSWVRQAPGKGL^WVsglSsSGGSTYYSDTVKGRFTlSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLPDYWGQGTLVTVSSEVQL^"一-—HEVQIiLESG(3GLVQPGGSIiRLSCAASSEQIDNO148H-FR1BEVQIjVESGGGIiVQPGGSLRLSCAASSEQIDNO149H-FR2WVRQAPGKGLEWVSSEQ工DNO150H-FR2BWVRQAPGKGLVWVSSEQIDNO151H.'FR3HFT工SRDNSKNTLYLQMNSIiRAEDTAVYYCARSEQIDNO152H-FR3BRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEQIDNO153H-FR4WGQG1XVTVSSSEQIDNO139全文摘要鑒定抗肌抑制素抗體，其特征在于具有高親和力，并且可以是嵌合抗體、人源化抗體或完全人抗體、抗體的免疫交聯(lián)物或其抗原結(jié)合片段。本發(fā)明的抗體用于在哺乳動(dòng)物和禽類物種中增加肌肉質(zhì)量、增加骨密度或用于治療多種疾病。文檔編號(hào)C07K16/22GK101282992SQ200680037572公開日2008年10月8日申請(qǐng)日期2006年10月5日優(yōu)先權(quán)日2005年10月12日發(fā)明者A·I·科里特科,B·E·瓊斯,J·戴維斯,L·O·奧布萊恩(尼托比亞斯),P·J·米切爾,R·C·史密斯,R·王申請(qǐng)人:伊萊利利公司