專利名稱：：作為蛋白激酶抑制劑的化合物和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供了一類新的化合物、含有這些化合物的藥物組合物和使用這些化合物來治療或預(yù)防與激酶活性異?；蚴д{(diào)有關(guān)的疾病或病癥，特別是涉及Abl、Bcr-Abl、Aurora-A、SGK、Tie-2、Trk-B、FGFR3、c-kit、b-RAF、c腳RAF、DYRK2、Fms、Fyn和PDGFRa以及PDGFR卩激酶異常激活的疾病或病癥的方法。背景蛋白激酶代表一大族蛋白質(zhì)，它們在調(diào)節(jié)各種細胞過程和保持對細胞功能的控制中扮演重要角色。這些激酶的部分非限定性例子包括:受體酪氨酸激酶例如血小板衍生生長因子受體激酶(PDGF-R)，神經(jīng)生長因子受體trkB、Met，和成纖維細胞生長因子受體FGFR3;非受體酪氨酸激酶例如Abl和融合激酶BCR-Abl、Lck、Csk、Fes、Bmx和c-src;以及絲氨^7蘇氨酸激酶如b-RAF、c-RAF、sgk、MAP激酶(例如MKK4、MKK6等)和SAPK2a、SAPK2卩和SAPK3。在許多疾病狀態(tài)中已經(jīng)觀察到了異常的激酶活性，包括良性和惡性的增殖性疾病以及由免疫和神經(jīng)系統(tǒng)不合適的激活所導(dǎo)致的疾病。本發(fā)明的新化合物可以抑制一種或多種蛋白激酶活性，因此預(yù)期其可用于治療激酶相關(guān)的疾病。發(fā)明概述一方面，本發(fā)明提供了式I化合物及其N-氧化物衍生物、前藥衍生物、被保護的衍生物、單個的異構(gòu)體及異構(gòu)體混合物；和這些化合物的可藥用鹽和溶劑化物(例如水合物)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中Xj選自CH和N;Y選自S和NRs;其中Rs選自氫和d-6烷基；Z選自C和S(O);A選自氫和d-6烷基；R2選自C6.12芳基和-NRsR4;R3選自氫和C"烷基；R4是-XRs;其中X選自鍵、C,-6亞烷基和Cwo亞雜芳基；其中Rs選自C64芳基和Cw。雜芳基；其中所述的R5的芳基或雜芳基任選地被1至3個獨立地選自d.6烷基、鹵代-d-6烷基、<:3-8雜環(huán)烷基、-<:(0)116117和^116<:(0)117的基團所取代；其中R6選自氫和C"烷基；R7選自<:6-10芳基和Cwo雜芳基；其中所述的R7的芳基或雜芳基任選地被1至3個獨立地選自-Rs和-ORs的基團所取代；其中Rs選自Cw烷基、卣代-C^烷基、<:6.12芳基、Cwc雜芳基和C3-8雜環(huán)烷基-C(M烷基；其中所述的Rs的芳基、雜芳基和雜環(huán)烷基取代基任選地被Cw烷基所取代；或者R3和R4同R3和R4所連接的原子一起形成任選地被-C(0)NR6R9取代的Cw雜環(huán)烷基；其中R6選自氫和d_6烷基且R9選自Cwo芳基和Ci"o雜芳基。第二方面，本發(fā)明提供了包含式I化合物或其N-氧化物衍生物、單個的異構(gòu)體及異構(gòu)體混合物；或其可藥用鹽，和一種或多種合適的賦形劑的混合物的藥物組合物。第三方面，本發(fā)明提供了治療動物疾病的方法，其中抑制激酶活性，特別是抑制Abl、Bcr畫Abl、Aurora畫A、SGK、Tie畫2、Trk-B、FGFR3、c畫kit、b畫RAF、c畫RAF、DYRK2、Fms、Fyn和PDGFRa和/或PDGFRp活性可預(yù)防、抑制或改善疾病的病理和/或癥狀，該方法包括給動物施用治療有效量式I的化合物或其N-氧化物衍生物、單個的異構(gòu)體及異構(gòu)體混合物、或其可藥用鹽。第四方面，本發(fā)明提供了式I化合物在制備用于治療動物疾病的藥物中的用途，其中在所述疾病中，激酶活性，特別是Abl、Bcr-Abl、Aurora-A、SGK、Tie-2、Trk-B、FGFR3、c-kit、b畫RAF、c畫RAF、DYRK2、Fms、Fyn和PDGFRa和/或PDGFRp活性對于該疾病的病理和/或癥狀起作用。第五方面，本發(fā)明提供了制備式I化合物及其N-氧化物衍生物、前藥衍生物、被保護的衍生物、單個的異構(gòu)體及異構(gòu)體混合物和其可藥用鹽的方法。本發(fā)明的詳細描述定義作為基團或者作為其它基團例如卣代烷基和烷氧基的結(jié)構(gòu)元素的"烷基"可以是直鏈或支鏈的。d-4-烷氧基包括甲氧基、乙氧基等。卣代烷基包括三氟甲基、五氟乙基等。"芳基"是指包含6至10個環(huán)碳原子的單環(huán)或稠合雙環(huán)芳環(huán)系統(tǒng)。例如，芳基可以是苯基或萘基，優(yōu)選苯基。"亞芳基"是指由芳基衍生的二價基團。"雜芳基"是其中一個或多個環(huán)碳原子被雜原子代替的如上面所定義的芳基。例如，Cwo雜芳基包括嗎啉代、吡咬基、吲咮基、-引喳基、喹喔啉基、喹啉基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、苯并[1，3間二氧雜環(huán)戊烯、咪唑基、苯并-咪唑基、嘧咬基、呋喃基、嗜唑基、異嚅唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、塞吩基等。"環(huán)烷基"是指包含所示環(huán)原子數(shù)的飽和或部分不飽和的單環(huán)、稠合的雙環(huán)或橋接的多環(huán)系統(tǒng)。例如，Cwo環(huán)烷基包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。"雜環(huán)烷基"是指如本申請中所定義的環(huán)烷基，條件是所述的一個或多個環(huán)碳原子被選自-O-、-N=、-NR-、-C(O)-、-S-、-S(O)-或-S(OV的部分所替代，其中R是氫、d—4烷基或氮保護基團。例如，本申請中用于描述本發(fā)明化合物的Qj-8雜環(huán)烷基包括嗎啉代、吡咯烷基、吡咯烷基-2-酮、哌嗪基、哌咬基、哌啶酮、1，4-二氧雜-8-氮雜-螺4.5癸-8-基等。"卣素"(或卣代)優(yōu)選地表示氯或氟，但是也可以是溴或碘。"激酶小組，，是一種激酶目錄，其包含Abl(人)、Abl(T3151)、JAK2、JAK3、ALK、JNKlal、ALK4、KDR、Aurora國A、Lck、Blk、MAPK1、Bmx、MAPKAP誦K2、BRK、MEK1、CaMKII(大鼠)、Met、CDKl/細胞周期蛋白B、p70S6K、CHK2、PAK2、CK1、PDGFRa、CK2、PDK1、c-kit、Pim-2、c-RAF、PKA(h)、CSK、PKBoucSrc、PKCa、DYRK2、Plk3、EGFR、ROCK-I、Fes、Ron、FGFR3、Ros、Flt3、SAPK2a、Fms、SGK、Fyn、SIK、GSK鄧、Syk、IGF畫1R、Tie-2、IKK卩、TrKB、IR、WNK3、IRAK4、ZAP畫70、ITK、AMPK(大鼠)、LIMK1、Rsk2、Axl、LKB1、SAPK2(5、BrSK2、Lyn(h)、SAPK3、BTK、MAPKAP-K3、SAPK4、CaMKIV、MARK1、Snk、CDK2/細胞周期蛋白A、MINK、SRPK1、CDK3/細月包周期蛋白E、MKK4(m)、TAK1、CDK5/p25、MKK6(h)、TBK1、CDK6/細胞周期蛋白D3、MLCK、TrkA、CDK7/細胞周期蛋白H/MAT1、MRCKp、TSSK1、CHK1、MSK1、Yes、CKld、MST2、ZIPK、c-Kit(D816V)、MuSK、DAPK2、NEK2、DDR2、NEK6、DMPK、PAK4、DRAK1、PAR誦lBa、EphAl、PDGFRp、EphA2、Pim國l、EphA5、PKB卩、EphB2、PKC卩I、EphB4、PKC8、FGFR1、PKCii、FGFR2、PKC0、FGFR4、PKD2、Fgr、PKGip、Fltl、PRK2、Hck、PYK2、HIPK2、Ret、IKKa、RIPK2、IRR、ROCK醫(yī)II(人)、JNK2a2、Rse、JNK3、Rskl(h)、PI3Ky、PI3和PI3-K卩。用激酶小組(野生型和/或其突變型)對本發(fā)明的化合物進行篩選，所述化合物抑制至少一種所述小組成員的活性。"BCR-Abl突變型，，是指野生型序列中的一個或多個氨基酸發(fā)生改變。BCR-ABL中的突變通過破壞蛋白和抑制劑(例如，Gleevec等)之間的關(guān)鍵接觸點而起作用，其更經(jīng)常通過誘導(dǎo)從無活性狀態(tài)向活性狀態(tài)的轉(zhuǎn)變，即轉(zhuǎn)化成BCR-ABL和Gleevec不能結(jié)合的構(gòu)象而起作用。根據(jù)臨床樣品分析，發(fā)現(xiàn)與抗性表型相關(guān)的突變型的所有組成成分隨時間進行緩慢但持續(xù)不斷地日益增加。突變似乎聚集于四個主要區(qū)域中。一組突變(G250E、Q252R、Y253F/H、E255K/V)包括形成ATP的磷酸結(jié)合回路(也稱為P-回路)的氨基酸。在Gleevec結(jié)合部位中可以發(fā)現(xiàn)第二組突變(V289A、F311L、T315I、F317L)并且其通過氫鍵或范德華相互作用直接與該抑制劑發(fā)生相互作用。第三組突變(M351T、E355G)親密聚集于催化結(jié)構(gòu)域附近。第四組突變(H396R/P)位于活化回路中，其構(gòu)象是控制激酶活化/失活的分子開關(guān)。在CML和ALL患者中探測到的與Gleevec抗藥性有關(guān)的BCR-ABL點突變包括M224V、L248V、G250E、G250R、Q252R、Q252H、Y253H、Y253F、E255K、E255V、D276G、T277A、V289A、F311L、T315I、T315N、F317L、M343T、M315T、E355G、F359V、F359A、V379I、F382L、L387M、L387F、H396P、H396R、A397P、S417Y、E459K和F486S(用單一字母代碼表示的氨基酸位置是GenBank序列，登記號AAB60394的這些位置，并且相當于la型ABL;Martinelli等人，Haematologica/TheHematologyJournal,2005年4月；卯-4)。除非在本發(fā)明中特別說明，否則Bcr-Abl是指該酶的野生型及其突變型形式。"治療"是指減輕或減少疾病和/或其伴發(fā)癥狀的方法。優(yōu)選實施方案說明融合蛋白BCR-Abl是將Abl原癌基因與Bcr基因融合的相互易位的結(jié)果。繼而BCR-Abl能夠通過增加有絲分裂活性來轉(zhuǎn)化B細胞。這種增加導(dǎo)致對細胞凋亡的敏感性下降，并且改變CML祖細胞的粘附與復(fù)位。本發(fā)明提供了用于治療與激酶有關(guān)的疾病、特別是與Abl、Bcr-Abl、Aurora-A、SGK、Tie畫2、Trk畫B、FGFR3、c-kit、b-RAF、c-RAF、DYRK2、Fms、Fyn和PDGFRa和PDGFRp激酶有關(guān)的疾病的化合物、組合物和方法。例如，與BCR-Abl有關(guān)的白血病和其它增殖性病癥可通過抑制野生型和突變型的BCR-Abl進行治療。在一個實施方案中，涉及的式I的化合物是式Ia的化合物其中&選自CH和N;Y選自S和NRs;其中Rs選自氫和d-6烷基；n選白0、1和2;R！選自氫和烷基；且Rl2選自氫、d-6烷基、鹵代-d-6烷基、C3-8雜環(huán)烷基、-C(0)NR6R7和-NR6C(0)R7;其中R6選自氫和C"烷基；&選自C6.10芳基和Cw。雜芳基；其中所述的R7的芳基或雜芳基任選地被1至3個獨立地選自-Rs和-ORs的基團所取代；其中Rs選自Cw烷基、鹵代-d-6烷基、C^芳基、Cwo雜芳基和Cw雜環(huán)烷基-QM烷基；其中所述的Rs的芳基、雜芳基和雜環(huán)烷基取代基任選地被d—6烷基所取代。在另一個實施方案中，^選自CH和N;Y選自S和N(CH3);且是氫。在另一個實施方案中，Ri2是氫、曱基、-C(0)NHR7、-NHC(0)R7、-N(CH3)C(0)R7和嗎啉代；其中R7選自苯基和異-惡唑基；其中所述的R7的苯基或喝唑基任選地被l至2個選自異-丁基、三氟甲基、苯氧基、乙基-哌溱基-甲基、曱基-哌嗪基-曱基、甲基-咪唑基和嗎啉代-甲基的基團所取代。本發(fā)明優(yōu)選的化合物選自6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省(indacene)-2-甲酸3-(3-三氟甲基-苯基氨基甲?；?-苯基-酰胺；l-曱基-l，6畫二氫-l，5，6-三氮雜-as-引達省-2-甲酸[3-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基l-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸苯基酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸3-三氟甲基-千基酰胺；嗎啉-4-基-(6H-l-硫雜-5，6-二氮雜隱as-引達省-2-基)-曱酮；2-苯磺?；?l-甲基-l，6-二氫-l，5，6-三氮雜-as-引迖4';6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸[3-(3-三氟甲基-苯曱?；被?-苯基l-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸[3-(3-三氟甲基-苯基氨基甲?；?-苯基-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸[2-曱基-5-(3-三氟甲基-苯甲酰基氨基)-苯基-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-曱酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯基氨基甲?；?-苯基-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸{2-甲基-5-[甲基-(3-三氟甲基-苯甲?；?-氨基卜苯基}-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-曱酸{5-[4-(4-乙基-哌溱-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基氨基曱?；?2-甲基-苯基}-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸{2-曱基-5-[3-(4-曱基-咪唑-l-基)-5-三氟甲基-苯曱?；被?苯基}-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸2-甲基-5-(3-嗎啉_4-基甲基-5-三氟甲基-苯基氨基曱?；?-苯基卜酰胺；6H-l-硫雜-5,6-二氮雜-as-《1達省-2-甲酸{2-甲基-5-[4-(2-甲基-咪唑-l-基)-3-三氟甲基-苯甲酰基氨基l-苯基)-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-曱酸{2-甲基_5-[4-(4-甲基-哌溱-l-基曱基)-3-三氟甲基-苯基氨基曱?；?苯基}-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-曱酸[5-(5-叔-丁基-異嗜、唑-3-基氨基甲?；?-2-曱基-苯基j-酰胺；4-(6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-羰基)-哌溱-1-甲酸(4-苯氧基-苯基)-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸{1-[3-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基l-lH-咪唑-2-基)-酰胺；1-甲基-1，6-二氫-1，5，6-三氮雜-as-《1達省-2-曱酸[2-甲基-5-(3-三氟曱基-苯曱酰基氨基)-苯基-酰胺；l-甲基-l,6-二氫-l，5，6-三氮雜-as-引達省-2-曱酸[3-(3-三氟甲基-苯曱?；被?-苯基]-酰胺；l-曱基-l，6-二氫-l,5,6-三氮雜-as-引達省-2-曱酸3-(3-三氟甲基-苯基氨基甲?；?-苯基l-酰胺；6H-l-硫雜-5,6，7-三氮雜-as-引達省-2-甲酸[3-(3-三氟曱基-苯甲?；被?-苯基]-酰胺；6H-l-硫雜-5，6，7-三氮雜-as-引達省-2-甲酸[2-曱基-5-(3-三氟曱基-苯曱酰基氨基)-苯基I-酰胺；6H-l-硫雜-5，6，7-三氮雜-as-引達省-2-甲酸[2-甲基-5-(4-嗎啉-4-基曱基-3-三氟甲基-苯基氨基甲酰基)-苯基l-酰胺；611-1-硫雜-5，6-二氮雜-38-引達省-2-甲酸3-甲氧基-5-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基-酰胺；6H-1-硫雜-5，6-二氮雜^-引達省-2-甲酸[3-甲氧基-5-(3-三氟甲基-苯基氨基曱?；?-苯基-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-曱酸[3-甲氧基-5-(4-嗎啉-4-基甲基-3-三氟曱基-苯基氨基甲酰基)-苯基I-酰胺；6H-l-硫雜-5,6-二氮雜-as-1達省-2-曱酸{3-甲氧基-5-[3-(4-甲基-咪唑-l-基)-5-三氟甲基-苯基氨基甲?；?-苯基}-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-曱酸(3-4-(4-乙基-哌嗪-l-基)-3-三氟甲基-苯基氨基曱酰基卜5-甲氧基-苯基}-酰胺；和6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸[2-甲基-5-(5-三氟曱基-lH-苯并咪唑-2-基)-苯基I-酰胺。本發(fā)明另外優(yōu)選的化合物詳述于下文的實施例和表I中。藥理和用途本發(fā)明的化合物可調(diào)節(jié)激酶的活性并因此可用于治療其中激酶與疾病的病理和/或癥狀有關(guān)的的疾病或病癥。用這里所述的化合物和組合物以及用這里所述方法來抑制的激酶的實例非限制性地包括Abl、Bcr-Abl(野生型和突變型形式)、Aurora-A、SGK、Tie-2、Trk-B、FGFR3、c-kit、b-RAF、c畫RAF、DYRK2、Fms、Fyn和PDGFRa和PDGFRp。Aurora有絲分裂蛋白激酶(A、B和C)是絲氨^/蘇氨酸激酶，其在得自各類腫瘤的細胞中常常過表達。Aurora-A通過其與包括p53在內(nèi)的各種細胞周期調(diào)節(jié)劑的相互作用而在M期中調(diào)節(jié)中心體功能。Aurora-A中共有的編碼區(qū)多形性也影響著乳癌或食管癌的風(fēng)險。Abelson酪氨酸激酶(即Abl、c-Abl)參與細胞周期的調(diào)節(jié)、細胞對基因毒性應(yīng)激反應(yīng)的響應(yīng)以及通過整聯(lián)蛋白信號對細胞環(huán)境信息的傳遞?？傊珹bl蛋白似乎作為整合各種細胞內(nèi)和細胞外信號的細胞組件起到復(fù)雜的作用，并對細胞周期和細胞凋亡起著決定性影響。Abelson酪氨酸激酶包括亞型衍生物如具有失調(diào)的酪氨酸激酶活性的嵌合融合的(癌蛋白)BCR-Abl，或v-Abl。BCR-Abl在95。/。的慢性骨髓性白血病(CML)和10%的急性淋巴細胞白血病的發(fā)病機制中起關(guān)鍵的作用。STI-571(Gleevec)是致癌性BCR-Abl酪氨酸激酶的抑制劑并用于治療慢性骨髓性白血病(CML)。然而，CML急性發(fā)作階段的一些患者由于BCR-Abl激酶的突變而對STI-571耐受。目前已報道了超過22種突變，最常見的是G250E、E255V、T315I、F317L和M351T。本發(fā)明化合物抑制abl激酶，尤其是v-abl激酶。本發(fā)明化合物也抑制野生型BCR-Abl激酶和突變的BCR-Abl激酶并因此適于治療Bcr-abl陽性的癌癥和腫瘤疾病，如白血病(尤其是慢性骨髓性白血病和急性淋巴細胞白血病，在這些疾病中尤其是發(fā)現(xiàn)了細胞凋亡作用機制)，并且還顯示對白血病干細胞亞組有作用，并且有可能用于在取出所述細胞(例如，取出骨髓)后在體外純化這些細胞并在清除了其中的癌細胞后再將細胞植入(例如，再植入被純化的骨髓細胞)。Ras-Raf-MEK-ERK信號通路介導(dǎo)了對生長信號的細胞應(yīng)答。在約15%的人類癌癥中Ras突變?yōu)橹掳┗虻男问?。Raf家族屬于絲氨^/蘇氨酸蛋白激酶，它包括三個成員，A-Raf、B-Raf和c-Raf(或Raf-l)。Raf成為藥物耙點的焦點集中于Raf作為Ras的下游效應(yīng)器的關(guān)系上。然而，最近的資料表明B-Raf在某些腫瘤的形成中起到突出的作用，并不需要活化的Ras等位基因(Nature417，949-954(2002年7月1日)。特別是已經(jīng)在很大比例的惡性黑色素瘤中檢測到了B-Raf突變?，F(xiàn)有的對黑素瘤的醫(yī)學(xué)治療受限于其療效，尤其是對晚期黑素瘤。本發(fā)明化合物還抑制涉及b-Raf激酶的細胞過程，這提供了一種新的治療人類癌癥、尤其是黑素瘤的機會。本發(fā)明化合物還抑制涉及c-Raf激酶的細胞過程。c-Raf被ras致癌基因活化，該基因在大量人類癌癥中產(chǎn)生突變。因此，對c-Raf激酶活性的抑制可提供預(yù)防ras介導(dǎo)的腫瘤生長的途經(jīng)Campbe11，S.L.，Oncogene,17，1395(1998)。PDGF(血小板衍生的生長因子)是一種十分常見的生長因子，它在細胞正常生長和病理性細胞增殖中都起到重要作用，如在癌發(fā)生和血管平滑肌細胞疾病如動脈粥樣硬化和血栓形成中所見到的。本發(fā)明化合物可抑制PDGF受體(PDGFR)活性，因此適用于治療肺瘤疾病，如神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肉瘤、前列腺肺瘤以及結(jié)腸、乳腺和卵巢的腫瘤。本發(fā)明化合物不僅可用作肺瘤抑制物質(zhì)(例如在小細胞肺癌中)，而且可用作治療非惡性增殖性病癥(例如動脈粥樣硬化、血栓形成、銀屑病、硬皮病和纖維化)以及保護干細胞(例如對抗化療藥如5-氟尿嗜啶的血液毒性作用)和治療哮喘的藥物。本發(fā)明化合物尤其可用于治療對抑制PDGF受體激酶有反應(yīng)的疾病。本發(fā)明化合物顯示出對治療由移植，例如同種異體移植導(dǎo)致的疾病，尤其是組織排斥反應(yīng)，如尤其是閉塞性細支氣管炎(OB),即同種異體肺移植物的慢性排斥反應(yīng)有效。與未患OB的患者相比，那些OB患者經(jīng)常表現(xiàn)出支氣管肺泡灌洗液中PDGF濃度升高。本發(fā)明化合物對于與血管平滑肌細胞遷移和增殖相關(guān)的疾病(其中PDGF和PDGF-R通常也起作用)，例如再狹窄和動脈粥樣硬化也有效。這管平滑肌細胞增殖和遷移的影'本發(fā)明化合物來證明，也可通過研究其對體內(nèi)機械性損傷后血管內(nèi)膜增厚的影響來證明。神經(jīng)營養(yǎng)因子受體的trk家族(trkA、trkB、trkC)促進神經(jīng)元和非神經(jīng)元組織的存活、生長和分化。TrkB蛋白在小腸和結(jié)腸的神經(jīng)內(nèi)分泌型細胞、胰臟的a細胞、淋巴結(jié)和脾臟的單核細胞和巨噬細胞、以及表皮顆粒層中進行表達(Shibayama和Koizumi,1996)。TrkB蛋白的表達與Wilms腫瘤和成神經(jīng)細胞瘤的不良*有關(guān)。而且，TrkB可在癌性前列腺細胞中表達，而在正常細胞中不表達。Trk受體的信號通路下游涉及通過Shc、活化的Ras、ERK-1和ERK-2基因的MAPK活化級聯(lián)反應(yīng)，以及PLC-y轉(zhuǎn)導(dǎo)通路(Sugimoto等人，2001)。激酶c-Src傳遞許多受體的致癌信號。例如，在腫瘤中EGFR或HER2/neu的過表達可引起c-src的組成型激活，其為惡性細胞所特有，在正常細胞中不存在。另一方面，c-src表達缺失的小鼠表現(xiàn)出骨硬化病的表型，這說明c-src在破骨細胞功能中起關(guān)鍵作用，并且可能涉及于相關(guān)的病癥。Tec家族的激酶Bmx是一種非受體蛋白酪氨酸激酶，控制著乳房上皮癌細胞的增殖。成纖維細胞生長因子受體3顯示對骨生長具有負面調(diào)節(jié)作用，并抑制軟骨細胞增殖。致死性發(fā)育不全是成纖維細胞生長因子受體3的不同突變導(dǎo)致的，且一種突變型TDIIFGFR3具有組成型酪氨酸激酶活性，其活化轉(zhuǎn)錄因子Statl，導(dǎo)致細胞周期抑制因子的表達、生長停止和異常骨發(fā)育(Sn等人，Nature,1997，386，288-292)。FGFR3也經(jīng)常在多發(fā)性骨髓瘤型癌癥中表達。FGFR3活性的抑制劑可用于治療T-細胞介導(dǎo)的炎癥或自身免疫性疾病，包括但不限于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、II型膠原關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥(MS)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、銀屑病、青少年型糖尿病、干燥綜合征、甲狀腺疾病、結(jié)節(jié)病、自身免疫性眼色素層炎、炎癥性腸病(局限性回腸炎和潰瘍性結(jié)腸炎)、乳糜瀉和重癥肌無力。胃腸間質(zhì)腫瘤(GIST)是人胃腸道最常見的間質(zhì)腫瘤。差不多所有的GIST都表達Kit(一種原癌基因c-kit編碼的受體酪氨酸激酶)。與基因擴增相比，在食管和肺腺癌中更頻繁地發(fā)生DYRK2(雙重特異性酪氨酸-磷酸化和-調(diào)節(jié)的蛋白激酶2)過表達。血清和糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶(SGK)的活性與紊亂的離子通道特別是鈉和/或鉀通道活性有關(guān)，因此本發(fā)明的化合物可用于治療高血壓。Lin等人(1997)J.Clin.Invest.100，8:2072-2078和P.Lin(1998)PNAS95,8829-8834已經(jīng)證明，在腺病毒感染期間或在乳房腫瘤和黑素瘤異種移植模型中注射Tie-2(Tek)的胞外結(jié)構(gòu)域期間，腫瘤生長和血管形成受到抑制，且肺轉(zhuǎn)移減少。Tie2抑制劑可用于新血管形成不當?shù)那闆r(即，可用于糖尿病性視網(wǎng)膜病、慢性炎癥、銀屑病、卡波齊肉瘤、由黃斑變性導(dǎo)致的慢性新血管形成、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、嬰兒血管瘤和癌癥中)。Lck在T-細胞信號傳導(dǎo)中起作用。缺乏Lck基因的小鼠形成胸腺細胞的能力很差。作為T-細胞信號正向激活劑的Lck功能表明Lck抑制劑可以用于治療自身免疫疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。已經(jīng)表明JNK同其它MAPK—起在介導(dǎo)細胞對下列疾病的響應(yīng)中起作用癌癥、凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集、免疫缺陷病癥、自身免疫性疾病、細胞死亡、過敏癥、骨質(zhì)疏松癥及心臟病。與JNK通路的激活有關(guān)的治療靶點包括慢性骨髓性白血病(CML)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、骨關(guān)節(jié)炎、局部缺血、癌癥和神經(jīng)變性疾病。鑒于與肝病和肝缺血發(fā)作有關(guān)的JNK活化的重要性，本發(fā)明化合物還可用于治療各種肝臟病癥。JNK在心血管疾病如心肌梗塞或充血性心衰中的作用也已有報道，它表明JNK介導(dǎo)對各種形式的心臟應(yīng)激的肥大響應(yīng)。已證明JNK級聯(lián)在T-細胞活化(包括IL-2啟動子的激活)中也起作用。所以，JNK抑制劑在改變病理性免疫應(yīng)答中具有治療價值。在各種癌癥中，JNK活化的作用也已被確定，提示JNK抑制劑在癌癥中的潛在用途。例如，組成型活化的JNK與HTLV-1介導(dǎo)的腫瘤發(fā)生有關(guān)[Oncogene13:135-42(1996)1。JNK可能在卡波齊肉瘤(KS)中也起作用。涉及KS增殖的其他細胞因子(例如血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、IL-6及TNFot)的其他增殖作用可能也是由JNK介導(dǎo)的。另外，在p210BCR-ABL轉(zhuǎn)化細胞中c-jun基因的調(diào)控對應(yīng)于JNK活性，提示JNK抑制劑在治療慢性骨髓性白血病中的作用(CML)[Blood92:2450-60(1998)1。認為某些異常增殖情況與raf的表達有關(guān)，因此認為其對raf表達的抑制有響應(yīng)。Raf蛋白異常的高水平表達也與轉(zhuǎn)化及異常的細胞增殖有關(guān)。認為這些異常增殖情況也會對raf表達的抑制有響應(yīng)。例如，據(jù)報道所有肺癌細胞系的60%都表達異常高水平的c-rafmRNA和蛋白，因此相信c-raf蛋白的表達在異常細胞增殖中起到一定的作用。異常增殖病癥的另外的實例有過度增殖性疾病，例如癌癥、腫瘤、增生、肺纖維化、血管生成、銀屑病、動脈粥樣硬化和血管中平滑肌細胞增殖，例如狹窄或血管成形術(shù)后的再狹窄。Raf參與其中的細胞信號通路還涉及以T-細胞增殖(T-細胞活化和生長)為特征的炎性病癥，例如，組織移植排斥、內(nèi)毒素性休克和腎小球腎炎。應(yīng)激活化蛋白激酶(SAPK)是蛋白激酶的一個家族，它代表了導(dǎo)致c-jun轉(zhuǎn)錄因子活化和c-jun調(diào)控的基因表達的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的倒數(shù)第二步。具體而言，c-jun涉及編碼參與由于基因毒性損傷而受損的DNA修復(fù)的蛋白的基因轉(zhuǎn)錄。所以，在細胞中抑制SAPK活性的藥物能夠阻止DNA修復(fù)并使細胞對導(dǎo)致DNA損傷或抑制DNA合成并誘導(dǎo)細胞凋亡或抑制細胞增殖的藥物敏感。有絲分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)是保守信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的成員，其響應(yīng)于各種細胞外信號而活化轉(zhuǎn)錄因子、翻譯因子及其它靶分子。通過有絲分裂原活化的蛋白激酶激酶(MKK)，MAPK通過具有Thr-X-Tyr序列的雙磷酸化基序上的磷酸化作用而活化。在高級真核細胞中，MAPK信號傳遞的生理學(xué)作用與細胞事件如增殖、肺瘤形成、發(fā)展及分化相關(guān)聯(lián)。因此，通過這些通路(尤其通過MKK4和MKK6)調(diào)節(jié)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的能力可導(dǎo)致開發(fā)出用于與MAPK信號傳遞有關(guān)的疾病如炎性疾病、自身免疫性疾病和癌癥的治療和預(yù)防性療法。18人核糖體S6蛋白激酶家族由至少8個成員組成(RSK1、RSK2、RSK3、RSK4、MSK1、MSK2、p70S6K和p70S6Kb)。核糖體蛋白S6蛋白激酶發(fā)揮重要的多效性功能，其中一個重要的作用是在蛋白生物合成過程中調(diào)節(jié)mRNA翻譯(Eur.J.Biochem2000年11月；267(21):6321-30,ExpCellRes.1999年11月25曰；253(1):100-9，MolCellEndocrinol.1999年5月25日；151(1-2):65-77)。S6核糖體蛋白通過p70S6的磷酸化作用也參與了細胞游動性(Immunol.CellBiol.2000年8月；78(4):447-51)和細胞生長(Prog.NucieicAcidRes.Mol.Bioi"2000;65:101陽27)的調(diào)節(jié),因此在腫瘤轉(zhuǎn)移、免疫應(yīng)答和組織修復(fù)以及其它病癥中非常重要。SAPK，s(也稱為"junN末端激酶"或"JNK's")是蛋白激酶的一個家族，它代表了導(dǎo)致c-jun轉(zhuǎn)錄因子活化和c-jim調(diào)控的基因表達的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的倒數(shù)第二步。具體而言，c-jun涉及編碼參與由于基因毒性損傷而受損的DNA修復(fù)的蛋白的基因轉(zhuǎn)錄。在細胞中抑制SAPK活性的藥物能夠阻止DNA修復(fù)并使細胞對那些通過誘導(dǎo)DNA損傷而起作用的癌癥治療方式敏感。BTK在自身免疫和/或炎性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性血管炎(multiplevasculitides)、特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)、重癥肌無力和孝喘中起作用。由于BTK在B-細胞活化中的作用，BTK抑制劑可用作B細胞介導(dǎo)的致病行為(例如產(chǎn)生自身抗體)的抑制劑，并用于治療B細胞淋巴瘤和白血病。CHK2是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶的檢查點激酶家族的一員并參與DNA損傷例如由環(huán)境誘變劑和內(nèi)源性的活性氧類所致?lián)p傷的監(jiān)督機制。因此，它可以作為腫瘤抑制物和癌癥治療的耙點。CSK影響癌癥細胞，特別是結(jié)腸癌的轉(zhuǎn)移能力。Fes是參與多種細胞因子的信號傳導(dǎo)通路和骨髓細胞的分化的非-受體蛋白酪氨酸激酶。Fes也是粒細胞分化機制的關(guān)鍵成分。在白血病和骨髓增生異常綜合征中涉及Flt3受體酪氨酸激酶活性。在約25。/。的AML中，白血病細胞在細胞表面上表達自身礴酸化(p)FLT3酪氨酸激酶的組成型活性形式。p-FLT3的活性利于白血病細胞生長和存活。急性白血病患者(其白血病細胞表達p-FLT3激酶活性)具有較差的總體臨床效果。p-FLT3激酶活性的抑制誘導(dǎo)了白血病細胞的細胞凋亡(程序性細胞死亡)。IKKa和IKK卩(l&2)的抑制劑用于治療下列疾病，包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、移植排斥反應(yīng)、炎性腸病、骨關(guān)節(jié)炎、哮喘、慢性阻塞性肺病、動脈粥樣硬化、4艮屑病、多發(fā)性硬化癥、中風(fēng)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、阿爾茨海默癥、腦缺血、外傷性腦損傷、帕金森病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、蛛網(wǎng)膜下腔出血或其他與腦內(nèi)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)炎癥介質(zhì)的過量產(chǎn)生有關(guān)的疾病或病癥。Met與大多數(shù)類型的主要人類癌癥有關(guān)，其表達通常與較差的預(yù)后和轉(zhuǎn)移相關(guān)聯(lián)。Met抑制劑可用于治療下列疾病，包括癌癥如肺癌、NSCLC(非小細胞肺癌)、骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚或眼內(nèi)黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門癌、胃癌、結(jié)腸癌、乳癌、婦科腫瘤(例如子宮肉瘤、輸卵管癌、子宮內(nèi)膜癌、子宮頸癌、陰道癌或外陰癌)、霍奇金病、食管癌、小腸癌、內(nèi)分泌系統(tǒng)癌癥(例如，甲狀腺、曱狀旁腺或腎上腺癌)、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌癥、慢性或急性白血病、兒童實體瘤、、淋巴細胞淋巴瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌癥(例如腎細胞癌、腎盂癌)、兒科惡性腫瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)瘤(例如，原發(fā)性CNS淋巴瘤、脊柱肺瘤、腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤或垂體腺瘤)、血液癌(例如急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病等)、巴雷特食管(癌前綜合征)、贅生性皮膚疾病、銀屑病、蕈樣真菌病和良性前列腺肥大、糖尿病相關(guān)的疾病(例如糖尿病性視網(wǎng)膜病、^L網(wǎng)膜缺血和視網(wǎng)膜新生血管形成)、肝硬化、心血管疾病(如動脈粥樣石更化)、免疫性疾病(如自身免疫性疾病)和腎臟疾病。優(yōu)選的疾病為癌癥，如急性骨髓性白血病和結(jié)直腸癌。Nima-相關(guān)的激酶2(Nek2)是細胞周期調(diào)控的蛋白激酶，當位于中心體的有絲分裂開始時它具有最大活性。功能研究表明Nek2調(diào)節(jié)中心體的分離和紡錘體的形成。在衍生自人類腫瘤(包括子宮頸、卵巢、前列腺的腫瘤并且特別是乳房腫瘤)的細胞系中，Nek2蛋白提高了2-5倍。p70S6K介導(dǎo)的疾病或情況非限制性地包括增殖性疾病，如癌癥和結(jié)節(jié)性硬化癥。根據(jù)前述，本發(fā)明進一步提供了在需要此類治療的患者中預(yù)防或治療任何上述疾病或病癥的方法，該方法包括給所述患者施用治療有效量(參見下文中的"給藥和藥物組合物")式I的化合物或其可藥用鹽。對于任何上述用途，所需劑量將根據(jù)給藥方式、待治療的具體情況和所期望的療效而變化。給藥和藥物組合物本發(fā)明的化合物通常將通過本領(lǐng)域已知的任何常規(guī)和可接受的方式、單獨地或與一種或多種治療藥物組合來以治療有效量進行給藥。治療有效量可隨疾病的嚴重程度、個體的年齡和相對健康狀況、所用化合物的效能和其它因素而廣泛進行變化。表明以每日每公斤體重約0.03至2.5mg的日劑量系統(tǒng)給藥通常可獲得滿意結(jié)果。對于大型哺乳動物例如人而言，每日推薦劑量為約0.5mg至約100mg,例如方^f更地以每日最多4次的分次劑量或以緩釋劑型進行給藥?？诜o藥的適宜單位劑型包含大約1至50mg活性成分。本發(fā)明化合物可通過任何常規(guī)途徑以藥物組合物的形式給藥，特別是可以被經(jīng)腸給藥，例如，口服給藥，例如以片劑或膠嚢劑的形式進行給藥；或胃腸外給藥，例如，以可注射的溶液或混懸液的形式進行給藥；局部給藥，例如，以洗劑、凝膠劑、軟骨劑或霜劑的形式進行給藥；或以鼻腔制劑或栓劑的形式進行給藥。包含游離形式或可藥用鹽形式的本發(fā)明化合物和至少一種可藥用載體或稀釋劑的藥物組合物可按照常規(guī)方式，通過混合、制?；虬路椒▉磉M行制備。例如，口服組合物可以是片劑或明膠膠嚢，它含有活性組分和a)稀釋劑，例如，乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纖維素和/或甘氨酸；b)潤滑劑，例如，二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其鎂鹽或鈣鹽和/或聚乙二醇；對于片劑來說還可以含有c)粘合劑，例如，硅酸鎂鋁、淀粉糊、明膠、西黃蓍膠、曱基纖維素、羧曱基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要還可以含有d)崩解劑，例如，淀粉、瓊脂、藻酸或其鈉鹽，或泡騰混合物；和/或e)吸收劑、著色劑、矯味劑和甜味劑?？勺⑸涞慕M合物可以是等滲水溶液或混懸液，并且栓劑可以由脂肪乳劑或混懸液來進行制備。組合物可以被滅菌和/或含有輔助劑,如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑或乳化劑、溶解促進劑、調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑。另外，它們還可以含有其它有治療價值的物質(zhì)。適宜的經(jīng)皮用制劑包含有效量本發(fā)明的化合物和載體。載體包括有助于通過宿主皮膚的可吸收的藥理學(xué)上可接受的溶劑。例如，經(jīng)皮吸收裝置是一種含有背襯膜、含有所述化合物并任選地含有載體和使所述化合物在較長的一段時間內(nèi)以受控和預(yù)定速度釋放到宿主皮膚的控速屏障的貯藥庫、以及確保所述裝置附著在皮膚上的部件的繃帶形式。也可以使用基質(zhì)經(jīng)皮制劑。合適的局部用，例如皮膚和眼睛用制劑優(yōu)選為本領(lǐng)域眾所周知的水溶液、軟骨劑、霜劑或凝膠。所述制劑可包含增溶劑、穩(wěn)定劑、張力增強劑、緩沖劑和防腐劑。本發(fā)明化合物可以與一種或多種治療劑一起(藥物組合)以治療有效量進行給藥。例如，可以與其它免疫調(diào)節(jié)或抗炎物質(zhì)一起產(chǎn)生協(xié)同作用，例如，當與環(huán)孢菌素、雷帕霉素或子嚢霉素或其免疫抑制劑類似物，例如環(huán)孢菌素A(CsA)、環(huán)孢菌素G、FK-506、雷帕霉素或相當?shù)幕衔?、皮質(zhì)類固醇、環(huán)磷酰胺、硫唑嘌呤、曱氨蝶呤、布喹那、來氟米特、咪唑立賓、麥考酚酸、麥考酚酸莫酯、15-脫氧精胍菌素、免疫抑制劑抗體，尤其是白細胞受體的單克隆抗體例如MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD25、CD28、B7、CD45、CD58或它們的配體，或其它免疫調(diào)節(jié)化合物，如CTLA41g聯(lián)用時。當本發(fā)明化合物與其它治療劑一同給藥時，共同給藥的化合物的劑量當然將根據(jù)一起使用的藥物類型、所使用的特定藥物、；故治療的情況等來進行調(diào)整。本發(fā)明也提供了一種藥物組合，例如藥盒，其包含a)游離形式或可藥用鹽形式的第一種藥物，它是本文所公開的本發(fā)明化合物，和b)至少一種聯(lián)用的藥物。該藥盒可包含用于指導(dǎo)給藥的使用說明。這里所用的術(shù)語"共同給藥"或"聯(lián)合給藥"等，是指包括將所選擇的治療藥物給予同一患者，并且意圖包括不一定以相同的給藥途徑或在相同時間施用的治療方案。這里所用的術(shù)語"藥物組合"是指由一種以上的活性成分混合或組合所形成的產(chǎn)品，且包括活性成分的固定組合和不固定組合。術(shù)語"固定組合"是指活性成分例如式I的化合物和聯(lián)用的藥物以單一實體或劑型被同時給予患者。術(shù)語"不固定組合"是指活性組分例如式I的化合物和聯(lián)用的藥物分別作為不同的實體同時、一起或沒有具體時間限制地依次給予患者，其中這類給藥可在患者體內(nèi)提供兩種化合物的治療有效水平。后者也用于雞尾酒療法，例如給予三種或三種以上的活性組分。制備本發(fā)明化合物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明還包括制備本發(fā)明化合物的方法。在所述反應(yīng)中，可能有必要保護在終產(chǎn)物中所需的反應(yīng)性官能團，例如羥基、氨基、亞氨基、巰基或羧基，以避免它們不必要地參與反應(yīng)?？砂凑諛藴什僮魇褂贸Ｒ?guī)的保護基團，例如，參見T.W.Greene和P.G.M.Wuts，"有機化學(xué)中的保護基團(ProtectiveGroupsinOrganicChemistry)",JohnWiley和Sons,1991。式la的化合物可通過下面反應(yīng)流程圖I中的方法來進行制備反應(yīng)流程圖I<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>(2)(la)其中n、XpR和Ru如"發(fā)明概述"中所定義。式I的化合物可以通過將式2的化合物在存在適宜溶劑(例如DMF等)、適宜偶合劑(例如HATU等)和適宜堿(例如DIEA等)的情況下進行反應(yīng)來合成。該反應(yīng)是在約0°C至約4(TC的溫度范圍內(nèi)進行的并且可進行約10小時以反應(yīng)完全。可在下文的實施例中找到式I化合物合成的詳細例子。制備本發(fā)明化合物的其它方法可通過將游離堿形式的化合物與可藥用的無機或有機酸反應(yīng)來將本發(fā)明化合物制備為可藥用酸加成鹽的形式?；蛘?，可通過將游離酸形式的化合物與可藥用的無機或有機堿反應(yīng)來制備本發(fā)明化合物的可藥用的堿加成鹽?；蛘?，鹽形式的本發(fā)明化合物可利用起始材料或中間體的鹽來進行制備。游離酸或游離堿形式的本發(fā)明化合物可分別從相應(yīng)的堿加成鹽或酸加成鹽制備。例如可通過用合適的堿(例如，氫氧化銨溶液、氬氧化鈉等)進行處理來將酸加成鹽形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的游離堿。可通過用合適的酸(例如，鹽酸等)進行處理來將堿加成鹽形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的游離酸。非氧化形式的本發(fā)明化合物可通過在適宜的惰性有機溶劑(例如乙腈、乙醇、二^惡烷水溶液等)中，于0至80。C下，用還原劑(例如，硫、二氧化硫、三苯基膦、硼氫化鋰、硼氫化鈉、三氯化磷、三溴化磷等)處理本發(fā)明化合物的N-氧化物而制備。本發(fā)明化合物的前藥衍生物可用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法(例如，詳情見Saulnier等人(1994),BioorganicandMedicinalChemistryLetters,第4巻，第1985頁)來進行制備。例如，合適的前藥可通過將未衍生化的本發(fā)明化合物與適宜的氨基甲?；噭?例如，l，l-酰氧基烷基羰基氯(carbanochloridate)、對硝基苯基碳酸酯等)反應(yīng)來制備。行制備。用于產(chǎn)生保護基團和除去保護基團的技術(shù)的詳細描述可見于T.W.Greene,"有機化學(xué)中的保護基團(ProtectingGroupsinOrganicChemistry)",第3版，JohnWiley和Sons,Inc.,1999。在本發(fā)明化合物的制備過程中，本發(fā)明化合物可方便地被制備為或形成溶劑化物(例如7K合物)。本發(fā)明化合物的水合物可通過采用有機溶劑如二"惡英、四氫呋喃或甲醇，在7JC/有機溶劑混合物中重結(jié)晶來方便地制備。應(yīng)以形成一對非對映異構(gòu)體化合物、分離非對映異構(gòu)體并回收光學(xué)純的對映異構(gòu)體來制備其單個的立體異構(gòu)體。盡管對映異構(gòu)體的拆分可利用本發(fā)明化合物的共價非對映異構(gòu)體衍生物來進行，但優(yōu)選易于解離的復(fù)合物(例如，結(jié)晶的非對映異構(gòu)體鹽)。非對映異構(gòu)體具有不同的物理性質(zhì)(例如，熔點、沸點、溶解度、反應(yīng)性等)并且可以很容易地利用這些差異進行分離。非對映異構(gòu)體可以通過色鐠法分離，或者優(yōu)選通過基于溶解度差異的分離/拆分技術(shù)進行分離。然后通過任何不會導(dǎo)致消旋化的操作方法回收光學(xué)純的對映異構(gòu)體與拆分劑。用于從外消旋混合物中拆分化合物的立體異構(gòu)體的寺支術(shù)的更詳細描述可見于JeanJacques,AndreCollet,SamuelH.Wilen，"對映異構(gòu)體，夕卜消3走體和拆分(Enantiomers，RacematesandResolutions)",JohnWileyAndSons,Inc.,1981。總之，式I化合物可通過下述方法制備，其包括(a)反應(yīng)流程圖I中的方法；和(b)任選地將本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為可藥用鹽；(c)任選地將鹽形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為非鹽形式；(d)任選地將非氧化形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為可藥用的N-氧化物；(e)任選地將N-氧化物形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為其非氧化物形式；(f)任選地從異構(gòu)體混合物拆分本發(fā)明化合物的單個的異構(gòu)體；(g)任選地將未^f汙生化的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為可藥用的前藥衍生物；和25(h)任選地將本發(fā)明化合物的前藥衍生物轉(zhuǎn)化為其未衍生化的形式。當本文中未對起始材料的制備進行具體描述時，則所述化合物是已知的或者可通過本領(lǐng)域已知的類似方法或如下文實施例所述進行制備。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當理解，上述轉(zhuǎn)化僅僅是制備本發(fā)明化合物方法的代表，并可類似地使用其他眾所周知的方法。實施例通過下列闡明本發(fā)明式I化合物制備方法的實施例來進一步對本發(fā)明進行非限制性舉例說明。實施例1611-1-硫雜-5,6-二氮雜-38-引達省-2-甲酸3-(3-三氟曱基-苯基氨基曱?；?-苯基l-酰胺4-氯-l-三異丙基硅烷基-l好-吡咯并[2，3-6吡啶的合成:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>向在-78。C下冷卻的4-氯-lH-吡咯并[2，3-6吡啶(3.21g，21mmol)在THF(60mL)中的溶液中緩慢加入正丁基鋰(1.6M的己烷溶液，13.8mL，22mmol)。在攪拌30分鐘后，加入IPSOTf(5.77mL,21.4mmol)。使該混合物升溫至室溫并用水終止反應(yīng)。將該混合物在己烷(200mL)和鹽水之間進行分配。將有機萃取物用鹽水洗滌，用Na2S04進行干燥，過濾并將其濃縮。將殘余物用柱色語進行純化(硅膠，用己烷進行洗脫)，從而得到標題化合物NMR600MHz(丙酮-^)S8.19(d，1H，《/=5.4Hz),7.57(d，1H,/=3.0Hz)，7.18(d，1H，/=5.4Hz)，6.69(d，1H，/=3.0Hz)，1.92(m/^，3H，/=7.2Hz)，1.12(d，18H，/=7.2Hz);MSm/z309.2(M+1)。4-氯-l-三異丙基硅烷基-lH-吡咯并[2，3-W吡啶-5-甲醛的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>向在-78。C下冷卻的4-氯-l-三異丙基硅烷基-l/T-吡咯并2，3-W吡啶(O.卯g，2.91mmol)在THF(8mL)中的溶液中緩慢加入仲丁基鋰(1.4M的己烷溶液，4.16mL，5.82mmol)。在攪拌45分鐘后，在-78。C下向其中加入DMF(0.68mL，8.74mmol)。將該混合物攪拌1小時并用HC1的乙醚溶液(1M，8.73mL,8.73mmol)終止反應(yīng)。4吏該混合物加溫至室溫。用飽和碳酸氫鈉溶液將該反應(yīng)混合物堿化至pH為8并用乙酸乙酯對其進行萃取。將有機萃取物用鹽水洗滌，用Na2S04進行干燥，過濾并將其濃縮，從而得到標題化合物的混合物，將其在不進行任何純化的情況下用于下一個反應(yīng):MSm/z337.2(M+l)。4-甲基氨基-lH-吡咯并[2，3-bl吡啶-5-甲醛的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>將4-氯-177-吡咯并[2，3-6吡啶-5-甲醛和4-氯-l-三異丙基珪烷基-liZ-吡咯并[2，3-W吡啶-5-甲醛(2.0g，得自上面的步驟)、甲胺(40。/。水溶液，16mL，100mmol)在甲氧基-乙醇(4mL)中的混合物在110。C下在密封管中加熱一夜。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并將其濃縮。將殘余物溶解于HC1溶液(1N，20mL)中并將其在50。C下進行加熱。在將其在50。C下攪拌1.5小時后，將該反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉溶液中和至pH為8。通過過濾收集固體并用水、然后用己烷對其進行洗滌，干燥，從而得到淡黃色固體形式的標題化合物MSw/z176.1(M+1)。6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸甲酯的合成將4-氯-l-三異丙基珪烷基-liZ-吡咯并[2，3-W吡啶(900mg，2.14mmol)溶解于DMF中。在加入K2C03(5^mg，4.28mmol)，然后加入thioglucidol(0.2mL，2.35mmol)后，將該反應(yīng)混合物在65。C下攪拌3.5小時。然后，將該反應(yīng)混合物冷卻并將其傾倒到冰冷的水上。通過過濾收集殘余物并對其進行干燥。然后，用硅膠柱色鐠對粗品進行純化，從而得到米白色無定形化合物&NMR400MHz(DMSO-^)812.21(s，1H)，8.卯(s,1H),8.40(s，1H)，7.59(d，1H，/=3.0Hz)，6.79(d，1H，J=3.1Hz)，3.91(s，3H);MS233.1(M+l)。6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸的合成將6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸甲酯(100mg，0.43mmol)、LiOH(25.5mg，1.07mmol)的混合物溶解于THF(4ml)和H20(1mL)中。將該混合物在60。C下攪拌3小時。用乙酸酸化，產(chǎn)生一種褐色固體，通過過濾對其進行收集。然后，將其真空千燥并在不進行任何進一步純化的情況下將其用于下一步。6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸[3-(3-三氟甲基-苯基氨基甲?；?-苯基I-酰胺的合成在室溫下，將6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸(30mg，0,138mmol)與DIEA(0.030ml，0.172mmol)和HATU(57.71mg，0.151mmol)—起在2mlDMF中進行混合。0.5小時后，向該反應(yīng)混合物中加入3-氨基-N-(3-三氟甲基-苯基)-苯甲酰胺(38.6mg，0.138mmol)。將其在室溫下攪拌2小時后，將該反應(yīng)混合物濃縮并用制備型HPLC對其進行純化，從而得到TFA鹽形式的標題化合物NMR400MHz(DMSO-^)812.09(s，1H),10.70，(s，1H)，10.55(s，1H)，8.84(s，1H)，8.29(s，1H)，8.19(s，1H)，8.03-7.979(m，2H)，7.69(d，1H,/=7.6Hz)，7.57-7.49(m，3H)，7.40(d，1H，/=7.6Hz)，6.72(瓶1H，/=3.2，1.6Hz;MSm/z481.1(M+1)。實施例2l-甲基-l,6-二氫-l,5,6-三氮雜-as-引達省-2-曱酸3-(3-三氟曱基-苯曱?；被?-苯基l-酰胺l-甲基-l，6-二氫-l,5,6-三氮雜-as-引達省-2-甲酸乙酯的合成:將4-氯-l-三異丙基硅烷基-lH-吡咯并[2，3-W吡啶(700mg，2.08mmol)溶解于DMF中。在加入K2C03(573mg，4.16mmol)，然后加入肌氨酸乙酯鹽酸鹽(383.3mg，2.49mmol)后，將該反應(yīng)混合物在65。C下攪拌36小時。然后，將該反應(yīng)混合物冷卻并將其傾倒到水冷的水上。通過過濾收集殘佘物并對其進行干燥，從而得到粗品，然后用硅膠柱色譜對其進行純化，從而得到所需化合物^NMR400MHz(DMSO-^)&12.41(s，1H)，8.68(s，1H),8.57(s，1H)，7.75(d，1H，/=3.0Hz)，6.73(d，1H，/=3.1Hz)，4.32(《，2H，/=6.8Hz),4.28(s，3H)，1.35(t，3H，/=6.8Hz);MS/m/z244.1(M+1)。l-曱基-l，6-二氫-l，5，6-三氮雜-as-引達省-2-曱酸的合成將6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-曱酸甲酯(100mg，0.464mmol)、LiOH(25.5mg，1.07mmol)的混合物溶解于THF(4ml)和H20(1mL)中。將該混合物在60。C下攪拌3小時。用乙酸酸化，產(chǎn)生一種褐色固體，通過過濾對其進行收集。然后，將其真空干燥并在不進行任何進一步純化的情況下將其用于下一步。1-甲基-l，6-二氫-l，5，6-三氮雜-as-引達省-2-甲酸[3-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基l-酰胺的合成30在室溫下，將l-曱基-l，6-二氫-l，5，6-三氮雜-as-引達省-2-甲酸(35mg,0.162mmol)與DIEA(0.030ml，0.172mmol)和HATU(67.8mg，0.178mmol)—起在2mlDMF中進行混合。在0.5小時后，向該反應(yīng)混合物中加入N-(3-氨基-苯基)-3-三氟曱基-苯甲酰胺(45.53mg，0.162mmol)。在將其在室溫下攪拌2小時后，將該反應(yīng)混合物濃縮并用制備型HPLC對其進行純化，從而得到TFA鹽形式的標題化合物^NMR400MHz(DMSO-^)512.37(s，1H)，10.56，(s，2H)，8.87(s，1H),8.40(s，1H)，8.33(s,1H)，8.29(d，1H，/=8.0Hz)，7.98(d，1H，/=7.6Hz)，7.84(t，1H，/=8.0Hz)，7.68(s，1H)，7.57-7.54(m，3H)，7.37(t，1H，/=8.0Hz)，7.09-7.07(m，1H)，4.32(s，3H)Hz;MS/w/z481.1(M+l)。通過重復(fù)上述實施例的方法，利用合適的起始原料，獲得表l中所示的下列式I化合物。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>812.20(s，1H)，10.59(s，1H)，8.95(s，1H)，8.62(s，1H),7.87(s，1H)，7.84(s，1H),7.64-7.63(m，1H)，7.47-7.43(m,2H)，7.21-7.18(m，1H)，6.84-6.83(s，1H)，MS;n/z294.2(M+l)。_S12.07(brs，1H),9.38-9.35(m，1H)，8.81(s，1H)，8.36(s，1H)，7.71-7.46(m，5H)，6.73-6.72(m，1H)，4.67(brs，2H);MS376.11w/z(M+1)。MS/m/z362.1(M+l)。812.05(s，1H)，8.75(s，1H)，7.92(s，1H)，7,51-7.42(m，1H)，6.69-6.68-7.03(m，1H)，3.68(d，4H，J=4.4Hz)，3.64-3.62(m，4H);MSm/z288.1(M+l)。<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>試驗測定了與母本32D細胞相比本發(fā)明化合物選擇性地抑制表達BCR-Abl的32D細胞(32D-p210)的細胞增殖的能力。對選擇性抑制這些BCR-Abl轉(zhuǎn)化的細胞增殖的化合物進行測試，以考察對表達野生型或突變型BCR-Abl的Ba/F3細胞的抗增殖活性。此外，測定了化合物抑制Abl、Bcr-Abl、Aurora國A、SGK、Tie-2、Trk-B、FGFR3、c-kit、b-RAF、c-RAF、DYRK2、Fms、Fyn和PDGFRa和PDGFR卩激酶的能力。對細胞BCR-Abl依賴性增殖的抑制(高通量方法)所使用的鼠細月包系是用BCR-AblcDNA轉(zhuǎn)化的32D造血祖細胞系(32D-p210)。將這些細胞保持在補充有青霉素50jig/mL、鏈霉素50|iig/mL和L-谷酰胺200mM的RPMI/10Vo胎牛血清(RPMI/FCS)中。將未轉(zhuǎn)化的32D細胞保持在類似條件下并添加15%WEHI條件培養(yǎng)基作為IL3源。將50|J32D或32D-p210細胞懸浮液以每孔5000個細胞的密度接種于Greiner384孔微孔板(黑色)中。在每孔中加入50nl測試化合物(lmM,在DMSO儲備液中)(包括STI571作為陽性對照)。在37。C、5%032下將細胞培養(yǎng)72小時。在各孔中加入10|il60%的AlamarBlue溶液(Tek診斷試劑)并將細胞再培養(yǎng)24小時。使用Acquest系統(tǒng)(MolecularDevices)測定熒光強度(530nm、激發(fā)，580nm發(fā)射)。對細胞BCR-Abl依賴性增殖的抑制將32D-p210細胞以每孔15,000個細胞的密度接種于96孔TC板中。向各孔中加入50|iL測試化合物的兩倍系列稀釋液(Qnax為40|LlM)(包括STI571作為陽性對照)。將細胞在37。C、5。/。CX)2下培養(yǎng)48小時后，向各孔中加入15(iLMTT(Promega)并將細胞再培養(yǎng)5小時。通過分光光度法定量測定570nm處的光密度并通過量效曲線確定50%抑制作用所需的化合物濃度，即IQo值。對細胞周期分布的影響將32D和32D-p210細胞以每孔5mL培養(yǎng)基中2.5x106個細胞的數(shù)量接種于6孔TC寺反中并加入1或10|liM的測試化合物(包括STI571作為對照)。然后，將細胞在37。C、5%COz下培養(yǎng)24或48小時。用PBS洗滌2ml細胞懸浮液，在70%EtOH中固定1小時并用PBS/EDTA/RNaseA處理30分鐘。加入碘化丙錠(Cf-10ng/ml)并用流式細胞儀在FACScaliburTM系統(tǒng)(BDBiosciences)上測定熒光強度。本發(fā)明的測試化合物顯示對32D-p210細胞具有細胞凋亡作用但不在32D母本細胞中誘導(dǎo)細胞凋亡。對細胞BCR-Abl自身磷酸化的影響使用c-abl特異性捕獲抗體和抗磷酸酪氨酸抗體通過捕獲Elisa測定BCR-Abl的自身磷酸化作用。將32D-p210細胞以每孔50juL培養(yǎng)基中2x10s個細胞的數(shù)量加入96孔TC板中。每孔加入50pL測試化合物的兩倍系列稀釋液(Cmax為10nM)(包括STI571作為陽性對照)。在37。C、5%COz下培養(yǎng)細胞90分鐘。然后，將細胞在冰上用150|iL含有蛋白酶和磷酸酶抑制劑的裂解緩沖液(50mMTris-HCl，pH7.4，150mMNaCl，5mMEDTA，lmMEGTA和1%NP-40)處理1小時。將50|xL細胞溶胞產(chǎn)物加到96孔光學(xué)板中，該板預(yù)先用抗-abl特異性抗體涂覆和封閉。在4。C下培養(yǎng)該板4小時。用TBS-吐溫20緩沖液洗滌后，加入50nL結(jié)合有堿性礴酸酶的抗-磷酸酪氨酸抗體并將該板在4。C下培養(yǎng)過夜。用TBS-吐溫20緩沖液洗滌后，加入90^L發(fā)光底物并用Acquest體系(MolecularDevices)定量測定發(fā)光情況。所測試的本發(fā)明化合物以劑量依賴性方式抑制表達BCR-Abl的細胞的增殖并抑制細胞BCR-Abl的自身磷酸化。對表達突變型BCR-Abl的細胞增殖的影響測試本發(fā)明4匕合物對表達野生型或突變型BCR-Abl(G250E、E255V、T315I、F317L、M351T)的Ba/F3細胞的抗增殖作用，所述BCR-Abl可以引起對STI571耐受或?qū)ζ涿舾行越档?。?0、3.3、1.1和-BCR-Abl的細胞和未轉(zhuǎn)化的細胞的抗增殖作用。由如上所述獲得的量效曲線確定對未轉(zhuǎn)化的細胞沒有毒性的化合物的ICso值。FGFR3(酶試驗)在終體積為10|uL的含有0.25|tig/mL酶的激酶緩沖液(30mMTris-HClpH7.5、15mMMgCU、4.5mMMnCl2、15|iMNa3V(50嗎/mLBSA)和底物(5ng/mL生物素-聚-EY(Glu，Tyr)(CIS-US，Inc.)和3)iMATP)中，使用純化的FGFR3(Upstate)進行激酶活性試驗。制備兩種溶液首先將含有位于激酶緩沖液中的FGFR3酶的5pL的第一種溶液分配到384-型ProxiPlate(Perkin-Elmer)中，隨后加入溶于DMSO中的50nL的化合物；然后，向各孔中加入含有位于激酶緩沖液中的底物(聚-EY)和ATP的5nl的第二種溶液。將該反應(yīng)在室溫下賻育1小時，通過加入10nLHTRF測試混合物來終止該反應(yīng)，所述混合物含有30mMTris-HClpH7.5、0.5MKF、50mMETDA、0.2mg/mLBSA、15|ug/mL鏈霉抗生物素-XL665(CIS-US，Inc.)和150ng/mL結(jié)合有抗磷酸酪氨酸抗體的穴合物(CIS-US，Inc.)。于室溫下培養(yǎng)1小時使鏈霉抗生物素-生物素相互作用后，在AnalystGT(MolecularDevicesCorp.)上讀取隨時間改變的熒光信號。根據(jù)每一化合物在12個濃度下(從50|nM到0.28nM的1:3稀釋液)的抑制百分比的線性回歸分析計算ICso值。在本試驗中，本發(fā)明化合物的ICs。的范圍為10nM到2jiM。FGFR3(細胞試驗)測試本發(fā)明化合物抑制轉(zhuǎn)化的Ba/F3-TEL-FGFR3細胞增殖(取決于FGFR3細胞激酶的活性)的能力。將Ba/F3-TEL-FGFR3在懸浮液中培養(yǎng)至多達800,000細胞/mL,用補充有10%胎牛血清的RPMI1640作為培養(yǎng)基。將細胞以每孔5000個細胞分配于384-孔板中的50nL培養(yǎng)介質(zhì)中。將本發(fā)明化合物在二甲基亞砜(DMSO)中溶解和稀釋。用DMSO制備12個1:3的系列稀釋液以產(chǎn)生范圍通常在10mM到0.05nM的濃度梯度。將50nL的稀釋化合物加到細胞中，在細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時。向細胞中加入AlamarBlue(TREKDiagnosticSystems)(可用于監(jiān)測由增殖細胞產(chǎn)生的還原性環(huán)境)，終濃度達到10%。在37。C的細胞培養(yǎng)器中再培養(yǎng)4小時后，在AnalystGT(MolecularDevicesCorp.)上定量測定,皮還原的AlamarBlue⑧的熒光信號(于530nm激發(fā)，于580nm發(fā)射)。根據(jù)每個化合物12個濃度的抑制百分比的線性回歸分析來計算ICs。值。FLT3和PDGFRP(細月包試驗)采用上述FGFR3細胞活性的相同方法，但分別采用Ba/F3-FLT3-ITD和Ba/F3-Td-PDGFR卩代替Ba/F3-TEL-FGFR3，分析本發(fā)明化合物對FLT3和PDGFRP的細l包活性的影響。b-Raf-酶試驗測試本發(fā)明化合物抑制b-RAF活性的能力。在黑色壁和透明底的384孔MaxiSorp板(NUNC)中進行測定。將底物IkBcx在DPBS中稀釋(1:750)并向各孔中加入15jaL。將這些板在4。C下培養(yǎng)過夜并用EMBLA板清洗器以TBST(25mMTris，pH8.0，150mMNaCl和0.05%吐溫-20)洗滌3次。在室溫下用Superblock(15pL/孔)封閉板子3小時，用TBST洗滌3次并輕拍干燥。將含有20|uMATP(lOiiL)的測試緩沖液加入各孑L,然后加入lOOnL或500nL化合物。將B-RAF在測試緩沖液中稀釋(liiL稀釋至25|^1)并將10|ul被稀釋的B-RAF加入各孔(0.4jig/孔)。將這些板在室溫下孵育2.5小時。用TBST洗滌該板6次以終止激酶反應(yīng)。以Superblock稀釋Phosph-lKBa(Ser32/36)抗體(1:IO,OOO)并將15|nL加入各孔。將這些板在4。C下孵育過夜并用TBST洗滌6次。用Superblock稀釋結(jié)合有AP的山羊-抗-小鼠IgG(1:1，500)并將15|liL加到各孔中。將這些板在室溫下孵育1小時并用TBST洗滌6次。在各孔中加入15|liLAttophosAP熒光底物(Promega)并將這些板在室溫下孵育15分鐘。在Acquest或AnalystGT上使用熒光強度程序?qū)@些板進行讀數(shù)(于530nm激發(fā)，于580nm發(fā)射)。b-Raf-細胞試驗在A375細胞中測試本發(fā)明化合物抑制MEK磚酸化的能力。A375細胞系(ATCC)衍生自人類黑色素瘤患者，它在B-Raf基因上具有V599E突變。由于B-Raf突變使得磷酸化的MEK水平上升。在無血清培養(yǎng)基中，在37"C下將接近匯合到匯合的A375細胞與化合物一起孵育2小時。然后用冷PBS洗滌細胞一次并用含有l(wèi)%TritonX100的裂解緩沖液裂解細胞。離心后，上清液進行SDS-PAGE，接著將其轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。然后將膜用抗-磷酸MEK抗體(ser217/221)(細胞信號傳導(dǎo))進行蛋白質(zhì)印跡分析。通過磷酸化MEK在硝酸纖維素膜上的條帶密度考察磷酸化MEK的量。UpstateKinaseProfilerTM-力文射-酶促過濾結(jié)合試驗對本發(fā)明化合物抑制激酶小組各成員的能力進行評價。按照常規(guī)方法一式兩份地測定終濃度為IO^iM的化合物。需要注意的是激酶緩沖液成分和底物隨"UpstateKinaseProfilerTM"中激酶的不同而變化。在置于冰上的微量離心管中混合激酶緩沖液(2.5nL,10x,需要時可含有MnCl2)、活化的激酶(0.001-0.01個單位；2.5inL)、在激酶緩沖液中的特異性或多聚(Glu4-Tyr)肽(5-500iuM或0.01mg/ml)和激酶緩沖液(50iLiM;5pL)。加入Mg/ATP混合物(lOpL;67.5(或33.75)mMMgCl2、450(或225)ATP和lnCi/nl[，32P1-ATP(3000Ci/mmol))并在約30。C下將反應(yīng)孵育約IO分鐘。將反應(yīng)混合物(2(Hil)點在2cmx2cmP81(磷酸纖維素，用于帶正電的肽底物)或WhatmanNo.l(用于多聚(Glu4-Tyr)肽底物)方形紙上。用0.75。/。磷酸洗滌該方形紙4次，每次5分鐘，并用丙酮洗滌一次，洗滌5分鐘。將該方形紙轉(zhuǎn)移到閃爍小瓶中，加入5ml閃爍混合液并用Beckman閃爍計數(shù)器定量摻入肽底物中的32P(cpm)。計算每個反應(yīng)的抑制百分比。43游離形式或可藥用鹽形式的式I化合物表現(xiàn)出有價值的藥理特性，例如，如本申請的體外試驗所述。例如，式I化合物優(yōu)選對野生型BCR-Abl以及G250E、E255V、T315I、F317L和M351TBCR陽Abl突變體具有1x1010到1x1()5m的IC50，優(yōu)選小于500nM、250nM、IOOiiM和50nM。式I化合物優(yōu)選在10|iiM的濃度下，對Abl、Bcr隱Abl、Aurora-A、SGK、Tie-2、Trk-B、FGFR3、c-kit、b-RAF、c-RAF、DYRK2、Fms、Fyn和PDGFRa和/或PDGFRp激酶具有優(yōu)選超過50%的抑制百分比，優(yōu)選超過約70%。應(yīng)當理解，本文所述的實施例和實施方案僅僅是出于舉例說明的目的，本領(lǐng)域4支術(shù)人員可以據(jù)此進行各種修飾或改變，并且這些修飾和改變均包括在本申請的精神和范圍內(nèi)以及所附權(quán)利要求的保護范圍之內(nèi)。本文所引用的所有公開出版物、專利和專利申請均引入本文作為參考并用于所有目的。權(quán)利要求1.式I化合物及其可藥用的鹽id="icf0001"file="S200680038578XC00011.gif"wi="46"he="21"top="47"left="87"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中X1選自CH和N；Y選自S和NR5；其中R5選自氫和C1-6烷基；Z選自C和S(O)；R1選自氫和C1-6烷基；R2選自C6-12芳基和-NR3R4；R3選自氫和C1-6烷基；R4是-XR5；其中X選自鍵、C1-6亞烷基和C1-10亞雜芳基；其中R5選自C6-10芳基和C1-10雜芳基；其中所述的R5的芳基或雜芳基任選地被1至3個獨立地選自C1-6烷基、鹵代-C1-6烷基、C3-8雜環(huán)烷基、-C(O)NR6R7和-NR6C(O)R7的基團所取代；其中R6選自氫和C1-6烷基；R7選自C6-10芳基和C1-10雜芳基；其中所述的R7的芳基或雜芳基任選地被1至3個獨立地選自-R8和-OR8的基團所取代；其中R8選自C1-6烷基、鹵代-C1-6烷基、C6-12芳基、C1-10雜芳基和C3-8雜環(huán)烷基-C0-4烷基；其中所述的R8的芳基、雜芳基和雜環(huán)烷基取代基任選地被C1-6烷基所取代；或者R3和R4同R3和R4所連接的原子一起形成任選地被-C(O)NR6R9取代的C3-8雜環(huán)烷基；其中R6選自氫和C1-6烷基；且R9選自C6-10芳基和C1-10雜芳基。2.具有式Ia的權(quán)利要求1所述的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中X1選自CH和N;Y選自S和NRs;其中Rs選自氫和CL6垸基；n選白0、1和2;Ri選自氫和C^烷基；Ri2選自氫、C!-6烷基、卣代-Cw烷基、<:3-8雜環(huán)烷基、-C(0)NR6R7和-NR6C(0)R7;其中R6選自氫和d-6烷基；117選自C6_10芳基和C,.,o雜芳基；其中所述的R7的芳基或雜芳基任選地被1至3個獨立地選自-Rs和-ORs的基團所取代；其中Rs選自C^烷基、鹵代-d，6烷基、<:6_12芳基、Cwo雜芳基和C^雜環(huán)烷基-C(M烷基；其中所述的Rs的芳基、雜芳基和雜環(huán)烷基取代基任選地被烷基所取代。3.權(quán)利要求2的化合物，其中Xi選自CH和N;Y選自S和N(CH3);并且Ri是氫。4.權(quán)利要求3的化合物，其中R,2是氫、甲基、-C(0)NHR7、-NHC(0)R7、-N(CH3)C(0)R7和嗎啉代；其中R7選自苯基和異嚅唑基；其中所述的R7的苯基或嚅唑基任選地被1至2個選自異-丁基、三氟曱基、苯氧基、乙基-P底噪基-曱基、曱基-派溱基-甲基、甲基-咪唑基和嗎啉代-曱基的基團所取代。5.權(quán)利要求l的化合物，其選自6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-曱酸[3-(3-三氟甲基-苯基氨基曱?；?-苯基-酰胺；1-曱基-1，6-二氫-1，5，6-三氮雜-as-引達省-2-甲酸[3-(3-三氟曱基-苯甲?；被?-苯基l-酰胺；6H-1-疏雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺；611-1-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-曱酸苯基酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸3-三氟甲基-爺基酰胺；嗎啉-4-基-(6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-基)-甲酮；2-苯磺?；?l-曱基-l，6-二氫-l，5,6-三氮雜-as-引達?。?H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-曱酸[3-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸[3-(3-三氟甲基-苯基氨基曱?；?-苯基-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基卜酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-曱酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯基氨基甲酰基)-苯基卜酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-《1達省-2-甲酸{2-甲基-5-[甲基-(3-三氟甲基-苯甲?；?-氨基I-苯基卜酰胺；6H-l-疏雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-曱酸(5-[4-(4-乙基-哌溱-l-基甲基)-3-三氟曱基-苯基氨基甲?；?2-曱基-苯基}-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-曱酸{2-甲基-5-[3-(4-曱基-咪唑-l-基)-5-三氟甲基-苯甲?；被鵭-苯基}-酰胺；6H-l-疏雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-曱酸[2-甲基-5-(3-嗎啉-4-基甲基-5-三氟甲基-苯基氨基甲酰基)-苯基I-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸{2-甲基-5-[4-(2-甲基-咪唑-l-基)-3-三氟曱基-苯甲?；被?苯基)-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸{2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基曱基)-3-三氟甲基-苯基氨基甲?；?-苯基}-酰胺；6H-l-硫雜-5,6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸5-(5-叔-丁基-異嗜唑-3-基氨基甲?；?-2-甲基-苯基-酰胺；4-(6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-羰基)-哌溱-l-曱酸(4-苯氧基-苯基)-酰胺；6H-l-硫雜-5,6-二氮雜-as-引達省-2-曱酸{1-3-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基卜lH-咪唑-2-基)-酰胺；l-甲基-l，6-二氫-l,5，6-三氮雜-as-引達省-2-甲酸[2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯曱?；被?-苯基I-酰胺；1-甲基-l，6-二氫-1，5，6-三氮雜-as-S1達省-2-甲酸[3-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基-酰胺；l-甲基-l,6-二氫-l，5，6-三氮雜-as-引達省-2-甲酸[3-(3-三氟曱基-苯基氨基甲酰基)-苯基]-酰胺；6H-l-硫雜-5，6，7-三氮雜-as-引達省-2-甲酸[3-(3-三氟甲基-苯曱?；被?-苯基I-酰胺；6H-l-硫雜-5，6，7-三氮雜-as-引達省-2-甲酸2-甲基-5-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基l-酰胺；6H-l-硫雜-5，6，7-三氮雜-as-引達省-2-曱酸[2-甲基-5-(4-嗎啉-4-基曱基-3-三氟曱基-苯基氨基曱?；?-苯基-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-曱酸3-甲氧基-5-(3-三氟甲基-苯甲?；被?-苯基l-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-曱酸[3-甲氧基-5-(3-三氟甲基-苯基氨基甲?；?-苯基-酰胺；6H-1-硫雜-5，6-二氮雜-站-引達省-2-甲酸[3-甲氧基-5-(4-嗎啉-4-基甲基-3-三氟甲基-苯基氨基甲酰基)-苯基I-酰胺；6H-l-硫雜-5,6-二氮雜-as-引達省-2-曱酸{3-甲氧基-5-[3-(4-甲基-咪唑-l-基)-5-三氟甲基-苯基氨基甲酰基1-苯基}-酰胺；6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-曱酸{3-[4-(4-乙基-哌噪-l-基)-3-三氟甲基-苯基氨基甲?；?-5-甲氧基-苯基}-酰胺；和6H-l-硫雜-5，6-二氮雜-as-引達省-2-甲酸2-甲基-5-(5-三氟曱基-lH-苯并咪唑-2-基)-苯基卜酰胺。6.包含治療有效量權(quán)利要求l的化合物和可藥用賦形劑的藥物組合物。7.在動物中治療其中抑制激酶活性可以預(yù)防、抑制或改善疾病的病理和/或癥狀的疾病的方法，其包括給動物施用治療有效量的權(quán)利要求l的化合物。8.權(quán)利要求7的方法，其中所述激酶選自Abl、Bcr-Abl、Aurora-A、SGK、Tie國2、Trk畫B、FGFR3、c-kit、b-RAF、c曙RAF、DYRK2、Fms、Fyn和PDGFRa和PDGFRp。9.權(quán)利要求1的化合物在制備用于在動物中治療其中Abl、Bcr-Abl、Aurora-A、SGK、Tie-2、Trk-B、FGFR3、c畫kit、b-RAF、c誦RAF、DYRK2、Fms、Fyn和/或PDGFRa和PDGFR卩的激酶活性有助于疾病的病例和/或癥狀的疾病的藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明提供了一類新化合物、含有這些化合物的藥物組合物和使用這些化合物來治療或預(yù)防與激酶活性異常或失調(diào)有關(guān)的疾病或病癥，特別是涉及Abl、Bcr-Abl、Aurora-A、SGK、Tie-2、Trk-B、FGFR3、c-kit、b-RAF、c-RAF、DYRK2、Fms、Fyn和PDGFRα和PDGFRβ激酶異常激活的疾病或病癥的方法。文檔編號C07D471/14GK101291938SQ200680038578公開日2008年10月22日申請日期2006年8月15日優(yōu)先權(quán)日2005年8月16日發(fā)明者B·奧克拉姆,N·S·格雷,任平達申請人:Irm責(zé)任有限公司;斯克里普斯研究所