專利名稱：毒素偶聯(lián)的Eph受體抗體的制作方法
技術領域：
本發(fā)明提供了釆用與毒素偶聯(lián)的抗-EphA2或抗-EphA4抗體來誘 導癌細胞或其他超增生性細胞(hyperproliferative cell)的細胞死亡或停滯的 組合物和方法。
背景技術：
癌癥 每年有120萬美國人患上癌癥。癌癥是美國的第二大死因，如 果以這種趨勢繼續(xù)發(fā)展，預計到2010年癌癥將稱為第一大死因。肺癌和 前列腺癌是美國的頭號男性癌癥殺手。肺癌和乳腺癌是美國的頭號女性癌 癥殺手。在美國，每兩名男性中就有一人將在其生命的某個時刻被診斷出 癌癥。在美國，每三名女性中就有一人將在其生命的某個時刻被診斷出癌 癥。目前的治療方法，如外科手術、化療和放療，通常要么無效要么有嚴 重的副作用。轉移 目前，癌癥療法可包括外科手術、化療、激素療法和/或放射治
療以消除患者體內的腫瘤細胞(參見，例如，Stockdale， 1998，"癌癥患者 管理原貝ll" (Principles of Cancer Patient Management),選自Rubenstein禾口 Federman編的《科學美國醫(yī)學》(Scientific American: Medicine),第3 巻，第12章，第IV部分)。所有這些方法對于患者而言都有顯著缺點。例 如，外科手術可能由于患者的健康問題而無法實施或者不為患者所接受。 此外，外科手術可能不能完全除去腫瘤組織。放療僅當腫瘤組織對于輻射 的敏感性高于正常組織時才有效，且放療也會引發(fā)嚴重的副作用。激素療 法很少單獨施用，且盡管有效也只是通常在已經用其他治療方法除去大部 分癌細胞后用來預防或延遲癌癥復發(fā)。Fc/FqR復合物的形成使效應細胞集中到抗原結合部位，這通 常在細胞內導致信號傳導事件和重要的后續(xù)免疫應答，如釋放炎性介質、 B細胞激活、胞吞作用、吞噬作用以及細胞毒攻擊。介導細胞毒和吞噬效 應功能的能力是抗體破壞靶細胞的潛在機制。表達FcYR的非特異性細胞 毒細胞識別結合于靶細胞的抗體并隨后造成靶細胞溶胞的細胞介導反應 稱為依賴于抗體的細胞介導細胞毒性(ADCC)(Raghavan等，1996， Annu Rev Cell Dev Biol 12:181-220; Ghetie等，2000， Annu Rev Immunol 18:739-766; Ravetch等，2001， Annu Rev Immunol 19:275-290)。注意，介 導ADCC的主要細胞(primary cell), NK細胞僅表達FcyRIIIA，而單核細 胞表達FcyRI、 FcyRII和FcYRIII(Ravetch等，1991，同上)。
另一種重要的Fc配體是補體蛋白Clq。結合于Clq的Fc介導 稱為依賴于補體的細胞毒性(CDC)的過程(回顧見Ward等，1995， Ther Immunol 2:77-94)。 Clq能夠結合6種抗體，盡管結合兩種IgG就足以激活 補體級聯(lián)。Clq與Clr與Cls絲氨酸蛋白酶形成復合物從而形成補體途徑 的C1復合物?？贵w的一些關鍵特征包括但不限于對靶的特異性、能夠介導 免疫效應機制、以及在血清中較長的半衰期，這些使得抗體以及相關免疫 球蛋白分子成為有力的治療方法。許多單克隆抗體目前正處于開發(fā)階段或 者已經在治療上使用以治療包括癌癥在內的各種病癥。這些抗體的例子包 括米迪繆尼公司麥迪免疫公司(Medlmmune)的Vitaxin , —種人源化的 整聯(lián)蛋白av卩3抗體(例如，PCT公開WO 2003/075957);基因技術公司 (Genentech)的赫賽汀(Herceptin)⑧， 一種批準用于治療乳腺癌的人源化抗 -Her2/neu抗體(例如，U.S. 5,677,171);塞圖科公司(Centocor)的CNTO 95， 一種人整聯(lián)蛋白av抗體(PCT公開WO 02/12501); IDEC/基因技術公司/ 羅氏公司(IDEC/Genentech/Roche)的Rituxan , —種批準用于治療非霍奇 金淋巴瘤的嵌合抗-CD20抗體(例如，U.S. 5,736,137);以及免疫克隆公司 (ImClone)的Erbitux , —種抗誦EGFR抗體(例如，U.S. 4,943,533)。文中，術語"遞送載體"指可用來將治療藥或預防藥施用于對象， 尤其是人的物質。遞送載體可優(yōu)先將治療/預防藥遞送到特定的細胞亞類。 例如，借助遞送載體的固有特征或者通過與載體相偶聯(lián)的部分、包含在其 內的部分(或者與載體結合的部分，從而使得該部分和該遞送載體維持在一 起，進而使得該部分足以靶向遞送載體)使遞送載體靶向某些類型的細胞， 所述部分，例如，通過結合代表所靶向的細胞亞類特征性細胞表面分子而 特異性結合特定的細胞亞類。遞送載體還可提高要遞送的試劑的體內半衰 期和/或要遞送的試劑的生物利用度。遞送載體的非限制性例子是病毒載 體、病毒樣顆粒、聚陽離子載體、肽載體、脂質體和雜交載體。在具體的 實施方式中，所述遞送載體不直接偶聯(lián)于結合EphA2和/或EphA4的部分。 在其他實施方式中，所述遞送載體不是結合EphA2和/或EphA4的抗體。 文中，術語"肝配蛋白"或"肝配蛋白配體"指已經或將由Eph命 名委員會(Eph命名委員會，1997， Ce//，卯403-404)鑒定并認可的任何肝
配蛋白配體。本發(fā)明的肝配蛋白包括但不限于肝配蛋白A1、肝配蛋白
24A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白 B2和肝配蛋白B3。在具體的實施方式中，肝配蛋白多肽，尤其是肝配蛋 白A1，來自任何物種。在其他實施方式中，肝配蛋白多肽，尤其是肝配 蛋白A1，來自人。肝配蛋白多肽的核苷酸和/或氨基酸序列可在文獻或公 共數據庫(例如，GenBank)中找到，或者可采用精通本領域的技術人員已知 的克隆和測序技術來測定該核苷酸和/或氨基酸序列。例如，人肝配蛋白 Al變體1的核苷酸和氨基酸序列的GenBank登錄號分別為NM_004428.2 和NP—004419.2。人肝配蛋白Al變體2的核苷酸和氨基酸序列的GenBank 登錄號分別為NM_182685.1和NP一872626.1。文中，術語"人源化抗體"指非人(例如，鼠科)形式的抗體，該 抗體含有少量源自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗體。人源化抗體的大部
分是人免疫球蛋白(受者抗體)，其中受者抗體的超變區(qū)殘基用非人物種， 例如小鼠、大鼠、兔或非人靈長類抗體(供者抗體)的具有所需特異性、親 和力和結合能力的超變區(qū)殘基替代。在一些例子中，人免疫球蛋白的框架 區(qū)(FR)殘基可被相應的非人殘基替代。此外，人源化抗體可含有在受者抗 體或供者抗體中沒有的殘基。進行這些修飾可進一步優(yōu)化抗體性能。人源 化抗體通?？珊兄辽僖粋€，通常兩個可變結構域的基本上全部(殘基)， 其中所有或基本上所有的超變區(qū)對應于非人免疫球蛋白的，所有或基本上 所有的FR是人免疫球蛋白序列的。人源化抗體還將任選包含免疫球蛋白 恒定區(qū)(Fc)的至少一部分，該部分通常是特異性結合于EphA2或EphA4多肽的人免疫球蛋白的一部分，已通過引入氨基酸殘基取代、缺失或添加 而改變(即，突變)。
一些實施方式中，人源化抗體是衍生物。這種人源化 抗體在一個或多個非人CDR中包含氨基酸殘基取代、缺失或添加。與非 衍生的人源化抗體相比，人源化抗體衍生物可具有基本相同的結合能力、
更好的結合能力或更差的結合能力。在具體的實施方式中，CDR的1、 2、 3、 4或5個氨基酸殘基已被取代、刪除或加入(即，突變)。有關人源化抗 體的更多細節(jié)見歐洲專利號EP 239,400、 EP 592,106和EP 519,596;國際
發(fā)明者C·巴赫, D·泰斯, H·吳, M·S·金奇, P·D·森特, 高長壽 申請人:米迪繆尼有限公司;西雅圖基因公司