專利名稱：：糖皮質(zhì)激素受體表達(dá)的調(diào)節(jié)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本文公開了用于調(diào)節(jié)糖皮質(zhì)激素受體在細(xì)胞、組織或動物中的表達(dá)的化合物、組合物和方法。
背景技術(shù)：
：因?yàn)樵黾拥奶钱惿灰暈樘悄虿≈性黾拥钠咸烟巧a(chǎn)的主要來源，所以用于抑制肝葡萄糖生成的許多治療靶已得到研究。由于糖皮質(zhì)激素受體(也稱為細(xì)胞核受體亞家族3，組C,成員1;NR3C1;GCCR;GCR;GRL;糖皮質(zhì)激素受體，淋巴細(xì)胞)拮抗劑在動物沖莫型中改善糖尿病的能力，此類化合物屬于正在探究的潛在療法。然而，存在糖皮質(zhì)激素受體拮抗劑的有害全身效應(yīng)，包括HPA軸的活化(Link,CurrOpinInvestigDrugs,2003，4，421-429)。增加的HPA軸活性與免疫相關(guān)的炎性作用抑制相關(guān)，這可以增加對于傳染劑和贅生物的敏感性。通過HPA軸或其耙組織中的缺陷與免疫介導(dǎo)的炎癥抑制相關(guān)的狀況包括庫欣氏綜合征、慢性應(yīng)激、慢性酒精中毒和憂郁型抑郁癥(Chrousos,NEnglJMed,1995,332，1351-1362)。因此，開發(fā)肝和脂肪特異性糖皮質(zhì)激素受體拮抗劑是很有價(jià)值的。發(fā)明概述本發(fā)明涉及靶向編碼GCCR的核酸分子且可與編碼GCCR的核酸分子雜交的寡聚化合物，所述寡聚化合物調(diào)節(jié)GCCR的表達(dá)。本文提供了被稱為"缺口聚體(gapmers)"的嵌合寡核苷酸，所述嵌合寡核苷酸包含在5，和3'末端中的每一個(gè)上與"翼"側(cè)接的脫氧核苷酸區(qū)域或"缺口"，所述"翼"包含1-4個(gè)2，-0-甲氧乙基核苷酸。本發(fā)明的寡核苷酸的脫氧核苷酸區(qū)域包含超過IO個(gè)脫氧核苷酸，因此與包含IO個(gè)脫氧核苷酸的缺口區(qū)域的嵌合化合物，例如美國公開US2005-0164271(所述專利整體引入本文作為參考)中例示的化合物比較，本發(fā)明的缺口聚體是"缺口加寬的，，。在某些實(shí)施方案中，與具有相同序列但包含在5，和3，末端上都與5個(gè)2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸側(cè)接的IO個(gè)脫氧核苷酸區(qū)域的寡核苷酸比較，缺口加寬的寡核苷酸具有相似或改善的效力，而沒有寡核苷酸在肝中的積聚增加。因此，本發(fā)明的實(shí)施方案包括靶向GCCR的缺口加寬的寡核苷酸，其中效力與具有相同序列但包含在5，和3，末端上都與5個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的10個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域的寡核苷酸相似或更佳，而沒有寡核苷酸在靶組織中的積聚增加。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案包括靶向GCCR的缺口加寬的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸的腎濃度相對于具有相同序列但包含在5'和3'末端上都與5個(gè)2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸側(cè)接的IO個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域的寡核苷酸相似或降低，同時(shí)維持或改善在靶組織例如肝中的效力。進(jìn)一步提供了調(diào)節(jié)細(xì)胞、組織或動物中的GCCR表達(dá)的方法，所述方法包括使所述細(xì)胞、組織或動物與本發(fā)明的一種或多種化合物或組合物接觸。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物或組合物可以用于減少細(xì)胞、組織或動物中的GCCR表達(dá)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療動物中由糖皮質(zhì)激素表達(dá)介導(dǎo)的疾病或狀況的方法，所述方法包括使動物與有效量的本發(fā)明的化合物接觸。所述疾病或狀況包括糖尿病、2型糖尿病、肥胖、代謝綜合征X、高血糖癥、高脂血癥或肝脂肪變性。在某些實(shí)施方案中，高脂血癥與升高的脂質(zhì)例如血膽固醇或升高的血甘油三酯相關(guān)。血脂包括血漿脂質(zhì)和血清脂質(zhì)。進(jìn)一步提供了通過施用本發(fā)明的化合物降低血脂水平的方法，減少體脂量的方法，降低肝臟甘油三酯水平的方法，和改善動物中的胰島素敏感性的方法。還提供了降低動物中的血糖水平的方法，所述方法包括施用本發(fā)明的化合物。血糖水平可以是空腹或餐后葡萄糖水平，并且血糖水平包括血清或血漿葡萄糖水平。進(jìn)一步提供了增加胰島素敏感性和抑制肝葡萄糖排出的方法。本發(fā)明的另一個(gè)方面是通過施用本發(fā)明的化合物延遲或預(yù)防動物中的血脂或血糖水平開始增加的方法。本申請還與整體引入作為參考的美國申請?zhí)?0/718，684相關(guān)。本申請還與各自整體？I入本文作為參考的美國申請?zhí)?1/231,243和PCT申請?zhí)朠CT/US2005/033837相關(guān)。詳述概述本文公開了用于在編碼GCCR的核酸分子表達(dá)調(diào)節(jié)中使用的寡聚化合物，包括反義寡核普酸和其他反義化合物。這通過提供與一種或多種編碼GCCR的靶核酸分子雜交的寡聚化合物來完成。依照本發(fā)明的是用于調(diào)節(jié)GCCR(也稱為糖皮質(zhì)激素受體；細(xì)胞核受體亞家族3，組C,成員1;GR;GRL;NR3C1)表達(dá)的組合物和方法。表1中列舉了可以用于設(shè)計(jì)靶向GCCR的寡聚化合物的序列的GENBANK⑧登記號。本發(fā)明的寡聚化合物包括與表1中所示的一種或多種靶核酸分子雜交的寡聚化合物，以及與編碼GCCR的其他核酸分子雜交的寡聚化合物。寡聚化合物可以靶向編碼GCCR的核酸分子的任何區(qū)域、片段或位點(diǎn)。合適的靶區(qū)域、片段和位點(diǎn)包括但不限于，5'UTR、起始密碼子、終止密碼子、編碼區(qū)、3，UTR、5'帽區(qū)、內(nèi)含子、外顯子、內(nèi)含子-外顯子連接處、外顯子-內(nèi)含子連接處、和外顯子-外顯子連接處。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>活性寡聚化合物將與之雜交的粑核酸上的位置在下文中被稱為"驗(yàn)證的靼片段"。如本文所使用的，術(shù)語"驗(yàn)證的耙片段"被定義為活性寡聚化合物所耙向的輩巴區(qū)域的至少8個(gè)核堿基的部分。盡管不希望被理論束縛，但目前認(rèn)為這些靶片段代表容易進(jìn)行雜交的靶核酸的部分。本發(fā)明包括是嵌合化合物的寡聚化合物。嵌合化合物的例子是具有由非脫氧核苷酸區(qū)域或"翼"側(cè)接的2'個(gè)脫氧核苷酸區(qū)域或"缺口"的缺口聚體。盡管不希望被理論束縛，但缺口聚體的缺口提供了當(dāng)與RNA靶結(jié)合時(shí)可由RNA酶H識別的底物，而翼不是最佳底物但可以賦予其他性質(zhì)，例如促成雙鏈體穩(wěn)定性或有利的藥代動力學(xué)效應(yīng)。每個(gè)翼可以是一種或多種非脫氧寡核苷酸單體。在一個(gè)實(shí)施方案中，缺口聚體包含在5，和3'末端中的每一個(gè)上由2個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸的翼側(cè)接的16個(gè)2'個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。這被稱為2-16-2缺口聚體。因此，這種嵌合寡聚化合物或缺口聚體的"基序"是2-16-2。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所有核苷間鍵都是硫代磷酸酯鍵。在另一個(gè)實(shí)施方案中，缺口聚體的胞嘧啶是5-曱基胞嘧啶。本發(fā)明的實(shí)施方案包括包含長度為13-26個(gè)核苷酸的序列的寡聚化合物，所述序列包含在5，和3'末端的每一個(gè)上與至少一個(gè)2，-0-(2-曱氧乙基)核普酸側(cè)接，長度超過10個(gè)核堿基的脫氧核苷酸區(qū)域。優(yōu)選的"缺口加寬的"寡核苷酸在寡核苷酸的缺口部分中包含11個(gè)、12個(gè)、13個(gè)、14個(gè)、15個(gè)、16個(gè)、17個(gè)或18個(gè)脫氧核苷酸。優(yōu)選的5，和3，側(cè)翼區(qū)包含1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)或4個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸。優(yōu)選的缺口加寬的缺口聚體具有包括1-18-1、1-17-2、2-17-1、2-16-2、3-14-3和4-12-4的基序。在優(yōu)選實(shí)施方案中，寡聚化合物粑向GCCRRNA或與GCCRRNA雜交。在另一個(gè)實(shí)施方案中，寡聚化合物減少GCCRRNA的表達(dá)。在其他實(shí)施方案中，寡聚化合物減少GCCR的表達(dá)，其中GCCR的表達(dá)減少至少10%、至少20%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%。本發(fā)明的寡核苷酸包括其中所述寡核苷酸的腎濃度相對于具有相同序列但包含在5，和3'末端上都與5個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的10個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域的寡核苷酸降低的那些。本發(fā)明的寡核苷酸包含其中所述寡核苷酸的腎濃度相對于具有相同序列但包含在5'和3，末端上都與5個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的10個(gè)脫氧核苦酸的區(qū)域的寡核苷酸的那些相似或降低的那些。本發(fā)明的寡核苷酸包括其中關(guān)于靶減少的效力或療效與具有相同序列但包含在5，和3'末端上都與5個(gè)2'-0-(2-甲氧乙基)核普酸側(cè)接的10個(gè)脫氧核苦酸的區(qū)域的寡核普酸的那種相似或更佳，而沒有寡核苷酸在乾組織中的增加積聚的那些。優(yōu)選的耙組織包括肝和脂肪組織。本發(fā)明提供了靶向編碼GCCR的核酸分子、長度為13-26個(gè)核堿基的反義寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含第一個(gè)區(qū)域、第二個(gè)區(qū)域和第三個(gè)區(qū)域，其中所述第一個(gè)區(qū)域包含至少11個(gè)脫氧核苷酸并且其中所述第二個(gè)和第三個(gè)區(qū)域包含l-4個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸，所述第二個(gè)和第三個(gè)區(qū)域在所述笫一個(gè)區(qū)域的5，和3，末端上側(cè)接第一個(gè)區(qū)域。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸與GCCR特異性雜交且減少GCCR的表達(dá)。在某些實(shí)施方案中，"缺口"區(qū)域包含ll個(gè)、12個(gè)、13個(gè)、14個(gè)、15個(gè)、16個(gè)、17個(gè)或18個(gè)核堿基。在某些實(shí)施方案中，反義寡核苷酸長度為20個(gè)核堿基。寡聚化合物可以包含約8-約80個(gè)核堿基(即約8-約80個(gè)連接的核苷)，優(yōu)選地約13-約26個(gè)核堿基。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解預(yù)期的優(yōu)選的寡聚化合物包括長度為13個(gè)、14個(gè)、15個(gè)、16個(gè)、17個(gè)、18個(gè)、19個(gè)、20個(gè)、21個(gè)、22個(gè)、23個(gè)、24個(gè)、25個(gè)或26個(gè)核堿基的化合物。本發(fā)明的化合物包括這樣的寡核苷酸序列，其包含來自舉例說明性反義化合物之一的5'末端的至少8個(gè)連續(xù)核堿基(剩余核堿基是相同寡核普酸的連續(xù)段，其在可與耙核酸特異性雜交的反義化合物的5，末端緊鄰的上游開始，且持續(xù)直至寡核苷酸包含約13-約26個(gè)核堿基)。其他化合物可以由這樣的寡核苷酸序列表示，其包含來自舉例說明性反義化合物之一的3'末端的至少8個(gè)連續(xù)核堿基(剩余核堿基是相同寡核苷酸的連續(xù)段，其在可與靶核酸特異性雜交的反義化合物的3'末端緊鄰的下游開始，且持續(xù)直至寡核苷酸包含約13-約26個(gè)核堿基)。還應(yīng)當(dāng)理解化合物可以由這樣的寡核普酸序列表示，其包含來自舉例說明性化合物的序列內(nèi)部部分的至少8個(gè)連續(xù)核堿基，并且可以在2個(gè)方向的任一方向或2個(gè)方向上延伸直至寡核苷酸包含約13-約26個(gè)核堿基。本發(fā)明的寡核苷酸包括長度為20個(gè)核堿基的反義寡核苷酸，所述反義寡核苷酸靶向編碼GCCR的核酸分子，并且包含SEQIDNO:34、33、35、36、37、42、45、56、61、63或96的至少8個(gè)核堿基的部分。ii在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸是靶向核酸分子的、長度為20個(gè)核堿基的反義寡核苷酸，所述核酸分子編碼GCCR并且具有SEQIDNO:34、33、35、36、37、42、45、56、61、63或96的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苦酸具有SEQIDNO:37的核堿基序列。本發(fā)明提供了包含SEQIDNO:37的核堿基序列的反義寡核苷酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸包含SEQIDNO:37的核石咸基序列的至少8個(gè)核堿基的部分。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了長度為20個(gè)核堿基的反義寡核苷酸，所述寡核普酸靶向編碼GCCR的核酸分子，并且包含SEQIDNO:34、33、35、36、37、42、45、56、61、63或96的至少8個(gè)核石咸基的部分，其中所述寡核苷酸包含長度為12個(gè)、13個(gè)、14個(gè)、15個(gè)、16個(gè)、17個(gè)或18個(gè)核堿基的脫氧核苷酸區(qū)域，所述脫氧核普酸區(qū)域在其5，和3，末端上與1-4個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接，并且其中所述寡核苷酸與GCCRRNA特異性雜交且減少GCCRRNA的表達(dá)。在一個(gè)實(shí)施方案中，側(cè)翼區(qū)是對稱的(在5，側(cè)翼區(qū)中具有與3'側(cè)翼區(qū)中相同數(shù)目的核苷酸)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，側(cè)翼區(qū)是不對稱的(與3，側(cè)翼區(qū)比較，在5，側(cè)翼區(qū)中具有不同數(shù)目的核苷酸)。本發(fā)明的反義寡核苷酸可以包含至少一個(gè)經(jīng)修飾的核苷間鍵。經(jīng)修飾的核苷間鍵包括硫代磷酸酯鍵。本發(fā)明的反義寡核苷酸還可以包含至少一個(gè)經(jīng)修飾的核堿基。在優(yōu)選實(shí)施方案中，至少一個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧咬。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明包括具有SEQIDNO:37的核堿基序列的反義寡核苷酸，其中所述反義寡核苷酸的特征在于在5，和3，末端上與4個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核普酸側(cè)接的12個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域，在5，和3，末端上與3個(gè)2，-0-(2-曱氧乙基)核普酸側(cè)接的14個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域，在5，和3，末端上與2個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的16個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域，在5，和3'末端上與1個(gè)或2個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的17個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域，或在5，和3'末端上與1個(gè)2，-0-(2-曱氧乙基)核苦酸側(cè)接的18個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，反義寡核苷酸具有SEQIDNO:37的核堿基序列，其中所述反義寡核苷酸具有在5，和3'末端上與4個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的12個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，反義寡核苷酸與GCCR特異性雜交且減少GCCR的表達(dá)。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)胞嘧啶是5-曱基胞嘧啶。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，反義寡核苷酸具有SEQIDNO:37的核石咸基序列，其中所述反義寡核苷酸具有在5，和3，末端上與3個(gè)2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸側(cè)接的14個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，反義寡核苷酸與GCCR特異性雜交且減少GCCR的表達(dá)。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，反義寡核普酸具有SEQIDNO:37的核堿基序列，其中所述反義寡核苷酸具有其5，和3'末端上與2個(gè)2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸側(cè)接的16個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，反義寡核苷酸與GCCR特異性雜交且減少GCCR的表達(dá)。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)核苦間鍵是硫代磷酸酯鍵。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)胞嘧啶是5-曱基胞嘧啶。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，反義寡核苷酸具有SEQIDNO:37的核堿基序列，其中所述反義寡核苷酸具有在5，和3，末端上與1個(gè)或2個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的17個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，反義寡核苷酸與GCCR特異性雜交且減少GCCR的表達(dá)。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，反義寡核苷酸具有SEQIDNO:37的核石咸基序列，其中所述反義寡核苷酸具有在5，和3'末端上與1個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的18個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，反義寡核苷酸與GCCR特異性雜交且減少GCCR的表達(dá)。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)核普間鍵是硫代磷酸酯鍵。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在另一個(gè)實(shí)施方案中，反義寡核苷酸包含SEQIDNO:33的核堿基序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸包含SEQIDNO:33的核堿基序列的至少8個(gè)核堿基的部分。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明包括具有SEQIDNO:33的核堿基序列的反義寡核苷酸，其中所述反義寡核苷酸的特征在于在5，和3，末端上與4個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核普酸側(cè)接的12個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域，在5，和3，末端上與3個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的14個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域，在5，和3'末端上與2個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核香酸側(cè)接的16個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域，在5，和3，末端上與1個(gè)或2個(gè)2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸側(cè)接的17個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域，或在5，和3，末端上與1個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的18個(gè)脫氧核苦酸的區(qū)域。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，反義寡核苷酸具有SEQIDNO:33的核堿基序列，其中所述反義寡核普酸具有在5，和3，末端上與4個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的12個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，反義寡核苷酸與GCCR特異性雜交且減少GCCR的表達(dá)。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，反義寡核苷酸具有SEQIDNO:33的核堿基序列，其中所述反義寡核苷酸具有在5，和3'末端上與3個(gè)2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸側(cè)接的14個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，反義寡核苷酸與GCCR特異性雜交且減少GCCR的表達(dá)。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，反義寡核苷酸具有SEQIDNO:37的核石咸基序列，其中所述反義寡核苷酸具有在5，和3'末端上與2個(gè)2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸側(cè)接的16個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，反義寡核苷酸與GCCR特異性雜交且減少GCCR的表達(dá)。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，反義寡核苷酸具有SEQIDNO:37的核堿基序列，其中所述反義寡核苷酸具有在5，和3，末端上與1個(gè)或2個(gè)2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸側(cè)接的17個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，反義寡核苷酸與GCCR特異性雜交且減少GCCR的表達(dá)。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)胞嘧啶是5-曱基胞嘧啶。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，反義寡核苷酸具有SEQIDNO:37的核堿基序列，其中所述反義寡核苷酸具有在5，和3'末端上與1個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的18個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，反義寡核苷酸與GCCR特異性雜交且減少GCCR的表達(dá)。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)胞嘧啶是5-曱基胞嘧啶。本發(fā)明提供了包含SEQIDNO:45的核堿基序列的反義寡核苷酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸包含SEQIDNO:45的核堿基序列的至少8個(gè)核堿基的部分。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明包括具有SEQIDNO:45的核堿基序列的反義寡核苷酸，其中所述反義寡核苷酸的特征在于在5，和3，末端上與4個(gè)2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸側(cè)接的12個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域，在5，和3，末端上與3個(gè)2，-0-(2-曱氧乙基)核苦酸側(cè)接的14個(gè)脫氧核普酸的區(qū)域，在5，和3，末端上與2個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的16個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域，在5，和3，末端上與1個(gè)或2個(gè)2，-0-(2-曱氧乙基)核苦酸側(cè)接的17個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域，或在5'和3'末端上與1個(gè)2，-0-(2-曱氧乙基)核普酸側(cè)接的18個(gè)脫氧核普酸的區(qū)域。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，反義寡核苷酸具有SEQIDNO:45的核石威基序列，其中所述反義寡核苷酸具有在5，和3，末端上與4個(gè)2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸側(cè)接的12個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，反義寡核苷酸與GCCR特異性雜交且減少GCCR的表達(dá)。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，反義寡核苷酸具有SEQIDNO:45的核堿基序列，其中所述反義寡核苷酸具有在5，和3'末端上與3個(gè)2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸側(cè)接的14個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，反義寡核苷酸與GCCR特異性雜交且減少GCCR的表達(dá)。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，反義寡核普酸具有SEQIDNO:45的核堿基序列，其中所述反義寡核苷酸具有在5，和3'末端上與2個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的16個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，反義寡核苷酸與GCCR特異性雜交且減少GCCR的表達(dá)。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)胞嘧啶是5-曱基胞嘧啶。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，反義寡核苷酸具有SEQIDNO:45的核石咸基序列，其中所述反義寡核苷酸具有在5，和3，末端上與1個(gè)或2個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的17個(gè)脫氧核普酸的區(qū)域。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，反義寡核苷酸與GCCR特異性雜交且減少GCCR的表達(dá)。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)核苦間鍵是疏代磷酸酯鍵。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，反義寡核苷酸具有SEQIDNO:45的核i威基序列，其中所述反義寡核苷酸具有在5，和3，末端上與1個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的18個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，反義寡核苷酸與GCCR特異性雜交且減少GCCR的表達(dá)。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，至少一個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。本文還涉及藥物組合物，所述藥物組合物包含本發(fā)明的反義寡核苷酸并任選包含藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、增強(qiáng)劑或賦形劑。本發(fā)明的化合物還可以在用于治療與由GCCR介導(dǎo)的糖皮質(zhì)激素活性相關(guān)的疾病和病癥的藥物制備中^f吏用。本發(fā)明的實(shí)施方案包括減少細(xì)胞或組織中的GCCR表達(dá)的方法，所述方法包括使所述細(xì)胞或組織與本發(fā)明的藥物組合物或反義寡核苷酸接觸，降低動物中的血糖水平、血甘油三酯水平或血膽固醇水平的方法，所述方法包括給所述動物施用本發(fā)明的藥物組合物。血液水平可以是血漿或血清水平。還涉及增加胰島素敏感性的方法，降低肝臟甘油三酯水平的方法，和抑制動物中的肝葡萄糖排出的方法，所述方法包括給所述動物施用本發(fā)明的藥物組合物。增加的胰島素敏感性可以由循環(huán)胰島素水平中的降低來指示。本發(fā)明的另一個(gè)方面是減少動物中的體脂量的方法。本發(fā)明的其他實(shí)施方案包括治療具有與糖皮質(zhì)激素受體表達(dá)相關(guān)的疾病或狀況的動物的方法，所述方法包括給所述動物施用治療或預(yù)防有效量的本發(fā)明的反義寡核苷酸。疾病或狀況可以是代謝疾病或狀況。在某些實(shí)施方案中，代謝疾病或狀況是糖尿病、肥胖、代謝綜合征X、高血糖癥、高脂血癥或胰島素抵抗。在某些實(shí)施方案中，疾病是2型糖尿病。在某些實(shí)施方案中，肥胖是飲食誘導(dǎo)的。在某些實(shí)施方案中，高脂血癥與升高的血脂水平相關(guān)。脂質(zhì)包括膽固醇和甘油三酯。在一個(gè)實(shí)施方案中，狀況是肝脂肪變性。在某些實(shí)施方案中，脂肪變性是脂肪肝或非酒精性脂肪肝。還提供了預(yù)防或延遲動物中升高的血糖或血脂水平開始的方法。本發(fā)明的化合物可以用于調(diào)節(jié)有需要的動物例如人中的GCCR表達(dá)。在一個(gè)非限制性實(shí)施方案中，該方法包括給所述動物施用有效量的反義化合物的步驟，所述反義化合物減少GCCR的表達(dá)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的反義化合物有效減少GCCRRNA的水平或功能。因?yàn)镚CCRmRNA水平中的減少也可以導(dǎo)致表達(dá)的GCCR蛋白質(zhì)產(chǎn)物中的改變，使用此類所得到的改變也可以進(jìn)行測量。有效減少GCCRRNA或表達(dá)的蛋白質(zhì)產(chǎn)物的水平或功能的本發(fā)明反義化合物被視為活性反義化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，如通過本文例示的測定法測量的，本發(fā)明的反義化合物減少GCCR的表達(dá)，引起RNA減少至少10%、至少20%、至少25%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%。"反義機(jī)制"是涉及化合物與靶核酸雜交的所有那些，其中雜交的結(jié)果或效應(yīng)是耙降解或把占據(jù)，伴隨涉及例如轉(zhuǎn)錄或剪接的細(xì)胞機(jī)制停止。如本文所使用的，為了方便起見，術(shù)語"耙核酸"和"編碼GCCR的核酸分子"已用于包含編碼GCCR的DNA,由此類DNA轉(zhuǎn)錄的RNA(包括前-mRNA和mRNA或其部分)，以及由此類RNA衍生的cDNA。^試，,拔和在,《少一個(gè)J巴區(qū)域、片段或位點(diǎn)，從而使得將導(dǎo)致所需效應(yīng),、例如表達(dá)的調(diào)節(jié)。"區(qū)域"被定義為具有至少一種可鑒定的結(jié)構(gòu)、功能或特征的靶核酸的部分。在靶核酸的區(qū)域內(nèi)是片段。"片段"被定義為靶核酸內(nèi)的區(qū)域的較小或亞部分。如本發(fā)明所使用的，"位點(diǎn)"被定義為靼核酸內(nèi)的獨(dú)特核堿基位置。一旦鑒定一個(gè)或多個(gè)耙區(qū)域、片段或位點(diǎn)，就設(shè)計(jì)與耙充分互補(bǔ)的寡聚化合物，即充分良好地雜交并且具有足夠的特異性，以產(chǎn)生所需效應(yīng)。麟本領(lǐng)域還已知的是由DNA的相同基因組區(qū)域可以產(chǎn)生可變RNA轉(zhuǎn)錄物。這些可變轉(zhuǎn)錄物一般稱為"變體"。更具體而言，"前mRNA變體"是由相同基因組DNA產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄物，所述轉(zhuǎn)錄物在其起始或終止位置方面不同于由相同基因組DNA產(chǎn)生的其他轉(zhuǎn)錄物，并且包含內(nèi)含子和外顯子序列。在剪接過程中一個(gè)或多個(gè)外顯子或內(nèi)含子區(qū)域或其部分切除后，前mRNA變體產(chǎn)生較小的"mRNA變體"。因此，mRNA變體由前mRNA變體進(jìn)行加工，并且由于剪接，每個(gè)獨(dú)特的前mRNA變體必須始終產(chǎn)生獨(dú)特的mRNA變體。這些mRNA變體也稱為"可變剪接變體"。如果不存在前mRNA的剪接，那么前mRNA變體等同于mRNA變體。本領(lǐng)域還已知的是變體可以通過使用可變信號以起始或終止轉(zhuǎn)錄來產(chǎn)生，并且前mRNAs和mRNAs可以具有超過一個(gè)起始密碼子或終止密碼子。源于使用可變起始密碼子的前mRNA或mRNA的變體纟皮稱為那種前mRNA或mRNA的"可變起始變體"。-使用可變終止密碼子的那些轉(zhuǎn)錄物被稱為那種前mRNA或mRNA的"可變終止變體"?？勺兘K止變體的一種具體類型是"聚腺苷酸變體"，其中產(chǎn)生的多個(gè)轉(zhuǎn)錄物來源于通過轉(zhuǎn)錄機(jī)制的"聚腺苷酸終止信號"之一的可變選擇，從而產(chǎn)生在獨(dú)特的聚腺苷酸位點(diǎn)處終止的轉(zhuǎn)錄物。因此，本文描述的變體類型也是合適的耙核酸。乾表迷^源，"調(diào)節(jié)，，意指功能干擾，例如，表達(dá)中的增加(刺激或誘導(dǎo))或降低(抑制或減少)。作為另一個(gè)例子，表達(dá)的調(diào)節(jié)可以包括干擾前mRNA加工的剪接位點(diǎn)選擇。"表達(dá)"包括基因的編碼信息通過其轉(zhuǎn)變成細(xì)胞中存在和運(yùn)作的結(jié)構(gòu)的所有功能。這些結(jié)構(gòu)包括轉(zhuǎn)錄和翻譯產(chǎn)物。"表達(dá)的調(diào)節(jié)"意指此類功能的干擾。"調(diào)節(jié)劑"是調(diào)節(jié)GCCR表達(dá)并且包含與有效耙片段互補(bǔ)的至少8核堿基部分的那些化合物。乾核酸表達(dá)的調(diào)節(jié)可以通過改變?nèi)魏螖?shù)目的核酸(DNA或RNA)功能來達(dá)到。待調(diào)節(jié)的DNA功能可以包括復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。復(fù)制和轉(zhuǎn)錄例如可以來自內(nèi)源性細(xì)胞模板、載體、質(zhì)粒構(gòu)建體或其他。待調(diào)節(jié)的RNA功能可以包括易位功能，這包括但不限于，RNA易位至蛋白質(zhì)翻譯位點(diǎn)，RNA易位至細(xì)胞內(nèi)遠(yuǎn)離RNA合成位點(diǎn)的位點(diǎn)，和來自RNA的蛋白質(zhì)翻譯。可以進(jìn)行調(diào)節(jié)的RNA加工功能包括但不限于，RNA剪接以產(chǎn)生一種或多種RNA種類、RNA加帽、RNA的3'成熟和可以由RNA參與或由RNA促進(jìn)的涉及RNA的催化活性或復(fù)合物形成。表達(dá)的調(diào)節(jié)可以暫時(shí)地或通過凈穩(wěn)態(tài)水平導(dǎo)致一個(gè)或多個(gè)核酸種類的水平增加，或一個(gè)或多個(gè)核酸種類的水平降低。對于耙核酸功能的此類干擾的一種結(jié)果是GCCR表達(dá)的調(diào)節(jié)。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，表達(dá)的調(diào)節(jié)可以意指靶RNA或蛋白質(zhì)水平的增加或降低。在另一個(gè)實(shí)施方案中，表達(dá)的調(diào)節(jié)可以意指一種或多種RNA剪接產(chǎn)物的增加或降低，或2種或更多剪接產(chǎn)物比率的改變。"雜交"意指寡聚化合物的互補(bǔ)鏈配對。盡管不限制于具體機(jī)制，但最常見的配對機(jī)制涉及在寡聚化合物鏈的互補(bǔ)核苷或核苷酸堿基(核堿基)之間的氫鍵結(jié)合，所述氫鍵結(jié)合可以是沃森-克里克、Hoogsteen或反向Hoogsteen氬鍵結(jié)合。例如，腺噪呤和胸腺嘧啶是通過形成氫鍵配對的互補(bǔ)核堿基。雜交可以在不同環(huán)境下發(fā)生。當(dāng)在希望特異性結(jié)合的條件下，即，在體內(nèi)測定法或治療性處理的情況下在生理?xiàng)l件下，和在體外測定法的情況下進(jìn)行測定的條件下，存在足夠程度的互補(bǔ)性以避免寡聚化合物與非靶核酸序列的非特異性結(jié)合時(shí)，寡聚化合物是可特異性雜交的。"嚴(yán)格雜交條件"或"嚴(yán)格條件"指寡聚化合物將與其靶序列雜交，但與最少數(shù)目的其他序列雜交的條件。嚴(yán)格條件是序列依賴性的，并且在不同環(huán)境下將是不同的，并且寡聚化合物與靶序列雜交的"嚴(yán)格條件"由寡聚化合物的性質(zhì)和組成以及它們在其中進(jìn)行研究的測定法決定。如本文所使用的，"互補(bǔ)性"指1條或2條寡聚化合物鏈上的2個(gè)核堿基之間精確配對的能力。例如，如果反義化合物的某個(gè)位置上的核堿基能夠與靶核酸的某個(gè)位置上的核堿基氫鍵鍵合，那么寡核苷酸和靶核酸之間的氫鍵鍵合位置被視為互補(bǔ)位置。當(dāng)每個(gè)分子中足夠數(shù)目的互補(bǔ)位置由可以與彼此氬鍵鍵合的核堿基占據(jù)時(shí)，寡聚化合物和進(jìn)一步的DNA或RNA彼此互補(bǔ)。因此，"可特異性雜交的"和"互補(bǔ)的"是用穩(wěn)定和特異性結(jié)合在寡聚^合物和靶核酸之間發(fā)生^術(shù)語。'本領(lǐng)域中理解，寡聚化合物的序列無需與其可特異性雜交的靶核酸的序列100%互補(bǔ)。此外，寡核苷酸可以在一個(gè)或多個(gè)片段上雜交，從而使得插入或鄰近片段不參與雜交事件(例如，環(huán)結(jié)構(gòu)、錯(cuò)配或發(fā)夾結(jié)構(gòu))。本發(fā)明的寡聚化合物與其靶向的靶核酸序列內(nèi)的靶區(qū)域包含至少70%、或至少75%、或至少80%、或至少85%、或至少90%、或至少92%、或至少95%、或至少97%、或至少98%、或至少99%的序列互補(bǔ)性。例如，其中反義化合物的20個(gè)核堿基中的18個(gè)與靶區(qū)域互補(bǔ)并且因此是可特異性雜交的寡聚化合物，將表示90%的互補(bǔ)性。在這個(gè)例子中，剩余的非互補(bǔ)核堿基可以成蔟或散布在互補(bǔ)核堿基內(nèi)并且無需彼此鄰接或與互補(bǔ)核堿基鄰接。因此，長度為18個(gè)核堿基，具有由與靶核酸完全互補(bǔ)的2個(gè)區(qū)域側(cè)接的4個(gè)(四個(gè))非互補(bǔ)核堿基的寡聚化合物將與靶核酸具有77.8%的總互補(bǔ)性，并且因此將包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。寡聚化合物與耙核酸區(qū)域的互補(bǔ)性百分比可以使用本領(lǐng)域已知的BLAST程序(基本局部比對檢索工具)和PowerBLAST程序進(jìn)行常規(guī)測定(Altschul等人，J.Mol.Biol.，1990,215，403-410;Zhang和Madden,GenomeRes.,1997,7,649-656)。同源性百分比、序列同一性或互補(bǔ)'l"生可以通過例J(口Gap牙呈序(WisconsinSequenceAnalysisPackage,Version8forUnix,GeneticsComputerGroup,UniversityResearchPark,MadisonWI)，使用缺省設(shè)置進(jìn)行測定，所述Gap程序使用Smith和Waterman(Adv.Appl.Math.,1981,2，482-489)的算法。差,必合參術(shù)語"寡聚化合物"指能夠與核酸分子區(qū)域雜交的聚合結(jié)構(gòu)。這個(gè)術(shù)語包括寡核苷酸、寡核苷、寡核苷酸類似物、寡核苷酸^t擬物和這些他方式制備成環(huán)狀的。此外，分支結(jié)構(gòu)是本領(lǐng)域已知的。"反義化合物"或"反義寡聚化合物，，指與核酸分子區(qū)域至少部分互補(bǔ)的寡聚化合物，所述核酸分子與之雜交并且調(diào)節(jié)(增加或降低)其表達(dá)。因此，盡管所有反義化合物都可以說成寡聚化合物，但并非所有寡聚化合物都是反義化合物。"反義寡核苷酸"是這樣的反義化合物，其是基于核酸的寡聚物。反義寡核苷酸可以進(jìn)行化學(xué)修飾。寡聚化合物的非限制性例子包括引物、探針、反義化合物、反義寡核苷酸、外部指導(dǎo)序列(EGS)寡核苷酸、可變剪接子和siRNAs。因此，這些化合物可以以單鏈、雙鏈、環(huán)狀、分支或發(fā)夾的形式引入，并且包含結(jié)構(gòu)元件例如內(nèi)部或末端突起或環(huán)。寡聚雙鏈化合物可以是雜交的2條鏈以形成雙鏈化合物，或具有足夠的自我互補(bǔ)性的單鏈以允許雜交和形成完全或部分雙鏈的化合物。在本發(fā)明上下文中的"嵌合"寡聚化合物或"嵌合體"是單或雙鏈寡聚化合物，例如寡核普酸，其包含2個(gè)或更多個(gè)化學(xué)上不同的區(qū)域，各自包含至少一個(gè)單體單位，即，在寡聚化合物的情況下是核苷酸。"缺口聚體"被定義為具有由非脫氧寡核苷酸片段側(cè)接的2'-脫氧寡核苦酸區(qū)域的寡聚化合物，一般是寡核苦酸。中央?yún)^(qū)被稱為"缺口"。側(cè)接片段被稱為"翼"。如果翼之一具有O個(gè)非脫氧寡核苷酸單體，那么描述了"半聚體，，。術(shù)語"非酒精性脂肪性肝病"(NAFLD)包含從肝細(xì)胞中的簡單甘油三酯積聚(肝脂肪變性)到具有炎癥(脂肪肝)、纖維化和硬化的肝脂肪變性的疾病譜。非酒精性脂肪肝(NASH)由NAFLD超過甘油三酯沉積的進(jìn)展而發(fā)生。能夠誘導(dǎo)壞死、炎癥和纖維化的第二擊是NASH發(fā)展所需的。關(guān)于第二擊的候選物可以分成廣泛的種類引起氧化應(yīng)激增加的因子和促進(jìn)促炎細(xì)胞因子表達(dá)的因子。已提出增加的肝臟甘油三酯導(dǎo)致動物和人肝細(xì)胞中增加的氧化應(yīng)激，表明肝臟甘油三酯積聚、氧化應(yīng)激和肝脂肪變性進(jìn)展至NASH之間潛在的原因和效應(yīng)關(guān)系(Browning和Horton,/./"veW.,2004，//么147-152)。高甘油三酯血癥和高脂肪酸血癥(hyperfattyaddemia)可以引起周圍組織中的甘油三酯積聚(Shimamura等人，S/oc/zem.6iop/zjAS.Commim.,2004，322,1080-1085)。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是通過施用預(yù)防或治療有效量的本發(fā)明的寡聚化合物減少動物肝中的脂質(zhì)的方法。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是通過施用預(yù)防或治療有效量的本發(fā)明的寡聚化合物治療動物中的肝脂肪變性的方法。在某些實(shí)施方案中，脂肪變性是脂肪肝。在某些實(shí)施方案中，脂肪變性是NASH。經(jīng)修飾和可替代的核堿基本發(fā)明的寡聚化合物還包括不同的堿基存在于化合物的一個(gè)或多個(gè)核苷酸位置上的變體。例如，如果第一種核苷酸是腺苷，那么可以產(chǎn)生在那個(gè)位置上包含胸苷、鳥苷或胞苷的變體。這可以在寡聚化合物的任何位置上進(jìn)行。這些化合物隨后使用本文描述的方法進(jìn)行檢測以確定其使GCCRmRNA表達(dá)減少的能力。寡聚化合物還可以包括核堿基(在本文中通常稱為雜環(huán)堿基或簡單地"堿基")修飾或取代。如本文所使用的，"未修飾的"或"天然的"核堿基包括噤呤堿基腺噤呤(A)和鳥嘌呤(G),以及嘧啶堿基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)。"取代"是用另一種未修飾的或天然的堿基替換未修飾的或天然的堿基。"經(jīng)修飾的"核堿基意指其他合成的和天然的核堿基例如5-甲基胞嘧啶(5-me-C),5-羥甲基胞嘧啶，黃噤呤，次黃嘌呤，2-氨基腺嘌呤，腺嘌呤和鳥嘌呤的6-曱基及其他烷基衍生物，腺噪呤和鳥噪呤的2-丙基及其他烷基衍生物，2-硫尿嘧啶，2-硫代胸腺嘧啶和2-硫胞嘧啶，5-囟代尿嘧啶和胞嘧啶，5-丙炔基(-OC-CH3)尿嘧啶和胞嘧啶以及嘧啶堿基的其他炔基衍生物、6-偶氮尿嘧咬、胞嘧啶和胸腺嘧咬，5-尿嘧咬(假尿嘧p定)，4-硫尿嘧啶，8-卣素、8-氨基、8-巰基、8-烷硫基、8-羥基及其他8-取代腺嘌呤和鳥嘌呤，5-卣代特別是5-溴、5-三氟曱基及其他5-取代尿嘧啶和胞嘧啶，7-甲基鳥嘌呤和7-曱基腺嘌呤，2-F-腺。票呤，2-氨基-腺嘌呤，8-氮鳥嘌呤和8-氮腺噪呤，7-脫氮鳥噤呤，7-脫氮腺嘌呤和3-脫氮鳥噤呤和3-脫氮腺嘌呤。進(jìn)一步修飾的核堿基包括三環(huán)嘧啶例如吩嗜嗪胞苷(1H-嘧啶并(5,4-b)(1,4)苯并^惡。秦-2(3H)-酮),吩噻。秦胞苷(lH-嘧啶并(5,4-b)(1,4)苯并p塞。秦-2(3H)-酮)，G-夾(clamps)例如取代的吩哺嗪胞苷(例如9-(2-氨基乙氧基)-H-嘧啶并(5,4-b)(1,4)苯并嚅嗪-2(3H)-酉同),?？ㄟ虬?2H-嘧啶并(4,5-b)吲哚-2-酮),吡啶并吲哚胞苷(H-吡啶并(3',2':4,5)吡咯并(2,3-d)嘧咬-2-酮)。經(jīng)修飾的核堿基還可以包括噤呤或嘧啶堿基替換為其他雜環(huán)的那些，例如7-脫氮-腺嘌呤、7-脫氮鳥苷、2-氨基吡啶和2-吡啶酮。更多的核堿基包括美國專利號3，687，808中乂>開的那些，77^Co""^5Vzcyc/o/^d,a0/尸o/yww^wg/"een'wg,第858-859頁，Kroschwitz，J丄，編輯JohnWiley&Sons,1990中7>開的那些，由Englisch等人，Jwgemw^eC7zem/e,InternationalEdition,1991,J仏613描述的那些，和由Sanghvi,Y.S.，第15章，y^"se朋ei^earc/z頂t/4P/^'ca加似，第289-302頁，Crooke,S.T.和Lebleu,B.,編輯，CRCPress,1993公開的那些。這些核堿基中的某些是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知為適合于增加本發(fā)明的化合物的結(jié)合親和力。這些包括5-取代嘧咬，6-氮嘧啶和N-2、N-6和0-6取代噤呤，包括2-氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。5-曱基胞嘧啶取代已顯示使核酸雙鏈體穩(wěn)定性增加0.6-1.2°C，并且是目前合適的堿基取代，甚至更特別是當(dāng)與2'-0-甲氧乙基糖修飾組合時(shí)。本領(lǐng)域應(yīng)當(dāng)理解堿基修飾不會使得此類化學(xué)修飾能夠在核酸序列中產(chǎn)生取代。教導(dǎo)了上述經(jīng)修飾的核堿基中的某些以及其他經(jīng)修飾的核堿基的制備的代表性美國專利包括但不限于，上文描述的U.S.3，687,808，以及U.S.:4,845,205;5,130,302;5,134,066;5,175,273;5,367,066;5,432,272;5,457,187;5,459,255;5,484,908;5,502,177;5,525,711;5,552,540;5,587，469;5,594,121,5,596,091;5,614,617;5,645,985;5,830,653;5,763,588;6,005,096;5,681,941;和5,750,692。本發(fā)明的寡聚化合物還可以包括多環(huán)雜環(huán)化合物代替一個(gè)或多個(gè)天然存在的雜環(huán)堿基部分。許多三環(huán)雜環(huán)化合物先前已得到報(bào)道。這些化合物常規(guī)地用于反義應(yīng)用中以增加經(jīng)修飾的鏈與靶鏈的結(jié)合性質(zhì)。研究最多的修飾靶向鳥苷，因此它們已命名為G-夾或胞苷類似物。在第二條鏈中與鳥苦形成3個(gè)氫鍵的代表性胞嘧啶類似物包括1,3-二氮雜吩嚅漆-2-酉同(Kurchavov,等人,A^c/eos7.desam/A^c/eo"csfes1,1997,16,1837-1846),1,3-二氮雜吩噻漆畫2-酮，(Lin，K,Y.;Jones,R.J.;Matteucci,M.J.Am.Chem.Soc.1995,117,3873-3874)和6,7,8,9-四氟-l,3-二氮雜吩夢惡漆國2-酮(Wang,J.;Lin,K,Y.,Matteucci，M.TetrahedronLett1998，39，8385-8388)。摻入寡核苷酸內(nèi)的這些堿基修飾顯示與互補(bǔ)鳥嘌呤雜交，并且后者也顯示與腺嘌呤雜交并且通過延伸的疊加相互作用增強(qiáng)螺旋的熱穩(wěn)定性(還參見美國授權(quán)前公開20030207804和20030175906)。當(dāng)胞嘧啶類似物/取代物具有與剛性1,3-二氮雜吩嚅。秦-2-S同支架附著的氨基乙氧基部分時(shí)，已觀察到進(jìn)一步的螺旋穩(wěn)定性質(zhì)(Lin,K,Y.;Matteucci，M.J.Am.Chem,Soc.1998,120,8531-8532)。結(jié)合研究證實(shí)單個(gè)摻入可以增強(qiáng)模型寡核苦酸與其互補(bǔ)靶DNA或RNA的結(jié)合親和力，其中相對于5-曱基胞嘧啶(dC5me),ATm最高達(dá)18。C,這是關(guān)于單個(gè)修飾的高親和力增加。另一方面，螺旋穩(wěn)定性中的增加不會破壞寡核苷酸的特異性。適于在本發(fā)明中使用的更多的三環(huán)雜環(huán)化合物和使用其的方法公開于美國專利6,028,183和6,007,992中。吩嗜。秦衍生物增強(qiáng)的結(jié)合親和力連同其不受破壞的序列特異性使得它們成為有價(jià)值的核堿基類似物用于開發(fā)更有效的基于反義的藥物。事實(shí)上，有希望的數(shù)據(jù)已從體外實(shí)驗(yàn)獲得，證實(shí)包含吩嚅。秦取代的七核苷酸能夠活化RNA酶H、增強(qiáng)細(xì)胞攝取并且顯示增加的反義活性(Lin,K畫Y;Matteucci，M.J.Am.Chem,Soc,1998，120，8531-8532)。活性增加在G-夾的情況下甚至更顯著，因?yàn)閱蝹€(gè)取代顯示明顯改善20聚體2，-脫氧硫代磷酸酯寡核苷酸的體外效力(Flanagan,W.M.;Wolf，J丄;Olson,P.;Grant,D.;Lin,K.-Y.;Wagner,R.W.;Matteucci,M.Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1999，96，3513-3518)。作為雜環(huán)堿基有用的更多的經(jīng)修飾的多環(huán)雜環(huán)化合物公開于下述專利中，但不限于下述專利上文描述的美國專利3,687,808,以及美國專利4,845，205;5,130,302;5,134,066;5,175,273;5,367,066;5,432,272;5,434,257;5,457,187;5,459,255;5,484,鄉(xiāng)；5,502,177;5,525,711;5,552,540;5,587,469;5,594,121,5,596,091;5,614,617;5,645，985;5,646,269;5,750,692;5,830,653;5,763,588;6,005,096;和5,681,941,以及美國授權(quán)前公開20030158403。邀合本發(fā)明的組合物可以包含2種或更多寡聚化合物。在另一個(gè)相關(guān)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物可以包含靶向第一種核酸的一種或多種反義化合物，特別是寡核苷酸，和靶向笫二種核酸靶的一種或多種另外的反義化合物?？商娲兀景l(fā)明的組合物可以包含粑向相同核酸輩巴的不同區(qū)域的2種或更多反義化合物。2種或更多組合的化合物可以一起或順次使用。本發(fā)明的化合物可以在組合療法中使用，其中通過施用本發(fā)明的一種或多種化合物和一種或多種其他合適的治療/預(yù)防化合物以治療狀況來達(dá)到附加效應(yīng)。合適的一種或多種治療/預(yù)防化合物包括但不限于，降糖劑、減肥藥、和降脂劑。降糖劑包括但不限于，激素，激素模擬物或腸降血糖素沖莫擬物(例如，胰島素，包括吸入胰島素，GLP-1或GLP-1類似物例如liraglutide、或依西奈肽)，DPP(IV)抑制劑，磺酰脲(例如，乙酸己脲、氯磺丙脲、曱苯磺丁脲、甲磺吖庚脲、格列美脲、格列吡。秦、格列本脲或格列齊特)，雙胍(二甲雙胍)，氯茴苯酸(例如，那格列奈或瑞格列奈)，噻唑烷二酮或其他PPAR-y激動劑(例如，吡格列酮或羅格列酮)，a-葡糖苷酶抑制劑(例如,阿卡波糖或米格列醇)，或不靼向GCCR的反義化合物。還包括了雙PPAR-激動劑(例如，由Bristol-MyersSquibb開發(fā)的莫格列他，或由Astm-Zeneca開發(fā)的替才各列扎)。還包括了在開發(fā)中的其他糖尿病治療(例如，由Novartis開發(fā)的LAF237;由Merck開發(fā)的MK-0431;或由Sanofi-Aventis開發(fā)的利莫那班)。減肥藥包括但不限于，食欲抑制劑(例如苯丁胺或MeridiaTM)，脂肪吸收抑制劑例如奧利司他(例如XenicalTM),和抑制刺激食欲的饑餓信號的改良形式的睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子。降脂劑包括但不限于，膽鹽掩蔽樹脂(例如考來烯胺、考來替泊和鹽酸考來維侖)，HMGCoA-還原酶抑制劑(例如，洛伐他汀、普伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀和氟伐他汀)，煙酸，纖維酸衍生物(例如，氯貝丁酯、吉非貝齊、非諾貝特、苯扎貝特和環(huán)丙貝特)，普羅布可，新霉素，右曱狀腺素，植物stanol酯，膽固醇吸收抑制劑(例如，依澤替米貝)，CETP抑制劑(例如，拖徹普和JTT-705),MTP抑制劑(例如，英普他派)，膽酸轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑(頂端鈉依賴性膽酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白)，肝CYP7a調(diào)節(jié)劑，ACAT抑制劑(例如Avasimibe),雌激素替代療法(例如，它莫西芬)，合成HDL(例如，ETC-216),抗炎劑(例如，糖皮質(zhì)激素)，或不靶向GCCR的反義化合物。這些藥物中的一種或多種可以與GCCR的一種或多種反義抑制劑組合以達(dá)到附加療效。寡聚物合成經(jīng)修飾的和未修飾的核苷的寡聚化可以根據(jù)關(guān)于DNA(ProtocolsforOligonucleotidesandAnalogs,編輯Agrawal(1993)，HumanaPress)和/或RNA(Scaringe，Methods(2001),23,206-217.Gait等人，ApplicationsofChemicallysynthesizedRNAinRNA:ProteinInteractions,編輯Smith(1998),1-36.Gallo等人，Tetrahedron(2001)，57，5707-5713)的文獻(xiàn)操作和美國公開號US2005-0164271常規(guī)地進(jìn)行，所述專利引入本文作為參考。本發(fā)明的寡聚化合物可以通過眾所周知的固相合成技術(shù)來方便地和常規(guī)地制備。用于此類合成的設(shè)備由幾個(gè)廠商出售，包括，例如AppliedBiosystems(FosterCity，CA)。可以另外地或可替代地使用本領(lǐng)域已知的用于此類合成的任何其他方法。眾所周知的是使用相似技術(shù)以制備寡核苷酸例如硫代磷酸酯和烷基化衍生物。寡聚物純化和分析寡核苷酸純化和分析的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。分析方法包括毛細(xì)管電泳法(CE)和電霧化質(zhì)鐠法。此類合成和分析方法可以在多孔板中進(jìn)行。#艱力容和//入作》參^#盡管已依照某些實(shí)施方案具體地描述了本發(fā)明的某些化合物、組合對其進(jìn)行限制。本申請中引用的參考文獻(xiàn)、GENBANK⑧登記號等各自整體引入本文作為參考。實(shí)施例1測定表達(dá)的調(diào)節(jié)GCCR表達(dá)的調(diào)節(jié)可以以本領(lǐng)域已知的各種方法進(jìn)行測定。GCCRmRNA水平可以通過例如RNA印跡分析、竟?fàn)幘酆厦告準(zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)或?qū)崟r(shí)PCR來定量。RNA分析可以通過本領(lǐng)域已知的方法對總細(xì)胞RNA或poly(A)+mRNA來進(jìn)行。RNA分離的方法在例如Ausubel,F.M.等人,Cwn^wf/Vc^oco/sz力A^o/ecw/or5/o/ogy,笫1巻,第4.1.1-4.2.9和4.5.1-4.5.3頁，JohnWiley&Sons,Inc.,1993中教導(dǎo)。RNA印跡分析是本領(lǐng)域常規(guī)的，并且在例如Ausubel,F.M.等人，Cw/rewf尸n9toco/5w'wMo/ecw/or5/o/ogy，第1巻，第4.2.1-4.2.9頁,JohnWiley&Sons，Inc.,1996中教導(dǎo)。實(shí)時(shí)定量(PCR)可以使用商購可得的ABIPRISM7700序列檢測系統(tǒng)來方便地完成，其可從PE-AppliedBiosystems,FosterCity,CA獲得并且根據(jù)制造商的說明書來使用。由GCCR編碼的蛋白質(zhì)水平可以以本領(lǐng)域眾所周知的各種方法進(jìn)行定量，例如免疫沉淀、蛋白質(zhì)印跡分析(免疫印跡)、ELISA或熒光激活的細(xì)胞分選(FACS)。針對由GCCR編碼的蛋白質(zhì)的抗體可以從各種來源進(jìn)行鑒定且獲得，例如MSRS抗體目錄(AerieCorporation,Birmingham,MI),或可以經(jīng)由常規(guī)抗體產(chǎn)生方法進(jìn)行制備。用于制備多克隆抗血清的方法在例如Ausubel，F(xiàn).M.等人，CurrentProtocolsinMolecularBiology,第2巻，第11,12.1-11.12.9頁，JohnWiley&Sons,Inc.，1997中教導(dǎo)。用于制備單克隆抗體的方法在例如Ausubel,F.M.等人，CurrentProtocolsinMolecularBiology,第2巻，第11.4.1-11.11.5頁，JohnWiley&Sons,Inc.,1997中教導(dǎo)。免疫沉淀法是本領(lǐng)域標(biāo)準(zhǔn)的，并且可以在例如Ausubel,F.M.等人，CurrentProtocolsinMolecularBiology,第2巻，第10.16.1-10.16.11頁，JohnWiley&Sons，Inc.,1998找到。蛋白質(zhì)印跡(免疫印跡)分析是本領(lǐng)域標(biāo)準(zhǔn)的，并且可以在例如Ausubel,F.M.等人，CurrentProtocolsinMolecularBiology,笫2巻，第10.8.1-10.8.21頁，JohnWiley&Sons,Inc.,1997找到。酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)是本領(lǐng)域標(biāo)準(zhǔn)的，并且可以在4列^t口Ausubel,F.M.等人，CurrentProtocolsinMolecularBiology,第2巻，第11.2.1-11.2.22頁，JohnWiley&Sons,Inc.,1991找到。本發(fā)明的寡聚化合物對靶核酸表達(dá)的影響可以在各種細(xì)胞類型中的任何一種中進(jìn)行測試，條件是粑核酸以可測量的水平存在。本發(fā)明的寡聚化合物對靶核酸表達(dá)的影響可以使用例如PCR或RNA印跡分析常頭見地測定。細(xì)胞系衍生自正常組織和細(xì)胞類型并且衍生自與各種病癥27(例如過度增殖性病癥)相關(guān)的細(xì)胞。衍生自多種組織和種類的細(xì)胞系可以得自美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC,Manassas,VA)、日本癌癥研究資源庫(JapaneseCancerResearchResourcesBank)(Tokyo,Japan)、或英國應(yīng)用微生物與研究中心(CentreforAppliedMicrobiologyandResearch)(Wiltshire,UnitedKingdom)。原代細(xì)胞或從動物中分離且不實(shí)施連續(xù)培養(yǎng)的那些細(xì)胞可以根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行制備，或從各種商業(yè)供應(yīng)者獲得。此外，原代細(xì)胞包括從臨床情況中的人受試者(即供血者，手術(shù)患者)獲得的那些。細(xì)胞類型寡聚化合物對靶核酸表達(dá)的影響在HepG2細(xì)胞和原代大鼠肝細(xì)胞中進(jìn)行測試。HepG2細(xì)胞人肝胚細(xì)胞瘤細(xì)胞系HepG2得自美國典型培養(yǎng)物保藏中心(Manassas，VA)。HepG2細(xì)胞在Eagle'sMEM中進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，所述Eagle'sMEM補(bǔ)充有10%胎牛血清、1mM非必需氨基酸和1mM丙酮酸鈉(InvitrogenLifeTechnologies,Carlsbad,CA)。當(dāng)它們達(dá)到約90%匯合時(shí)，細(xì)胞通過胰蛋白酶消化和稀釋進(jìn)行常規(guī)傳代。通過用在磷酸鹽緩沖鹽水中1:100稀釋的1型大鼠尾部膠原(BDBiosciences,Bedford,MA)包被，制備多孔培養(yǎng)板用于細(xì)胞培養(yǎng)。包含膠原的板于37。C溫育約1小時(shí)，這之后去除膠原并且用磷酸鹽緩沖鹽水洗滌孔2次。以約8,000個(gè)細(xì)胞/孔的密度將細(xì)胞種植到96孔板(Falcon-Primaria#353872，BDBiosciences,Bedford,MA)內(nèi)用于在寡聚化合物轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中使用。原代大鼠肝細(xì)胞原4戈大鼠肝細(xì)月包由購自CharlesRiverLabs(Wilmington,MA)的Spmgue-Dawley大鼠制備，并且在高糖DMEM(InvitrogenLifeTechnologies,Carlsbad,CA)中進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，所述DMEM補(bǔ)充有IO%胎牛血清(InvitrogenLifeTechnologies,Carlsbad,CA)、100單位/mL青霉素和100|ug/ml鏈霉素(InvitrogenLifeTechnologies,Carlsbad,CA)。以約4,000-6,000個(gè)細(xì)胞/孔的密度將細(xì)胞種植到96孑L板(Falcon國Primaria#353872,BDBiosciences,Bedford,MA)內(nèi)用本發(fā)明的寡聚化合物處理。用寡聚化合物處理當(dāng)細(xì)胞達(dá)到合適的匯合時(shí)，如所述的使用轉(zhuǎn)染方法將它們用寡核苷酸進(jìn)行處理。本領(lǐng)域已知的其他合適的轉(zhuǎn)染試劑包括但不限于，LIPOFECTAMINETM、OLIGOFECTAMINE和FUGENETM。本領(lǐng)域已知的其他合適的轉(zhuǎn)染方法包括但不限于電穿孔。LIPOFECTIN當(dāng)細(xì)胞達(dá)到65-75%匯合時(shí)，將它們用寡核苷酸進(jìn)行處理。使寡核苷酸在Opti-MEMTM-l減少的血清培養(yǎng)基(InvitrogenLifeTechnologies,Carlsbad,CA)中與LIPOFECTINTM(InvitrogenLifeTechnologies,Carlsbad,CA)進(jìn)行混合，以達(dá)到寡核苷酸的所需濃度和2.5或3yg/mL/100nM寡核苦酸的LIPOFECTINTM濃度。使這種轉(zhuǎn)染混合物在室溫下溫育約0.5小時(shí)。對于在96孔板中生長的細(xì)胞，細(xì)胞用100)LiLOPTI-MEMTM-l洗涂1次，并隨后用130轉(zhuǎn)染混合物進(jìn)4亍處理。在24孔板或其他標(biāo)準(zhǔn)組織培養(yǎng)板中生長的細(xì)胞使用合適體積的培養(yǎng)基和寡核苷酸進(jìn)行類似地處理。一式兩份或一式三份地處理細(xì)胞且獲得數(shù)據(jù)。于37。C處理約4-7小時(shí)后，將包含轉(zhuǎn)染混合物的培養(yǎng)基替換為新鮮培養(yǎng)基。在寡核苷酸處理后16-24小時(shí)收獲細(xì)胞。CYTOFECTIN當(dāng)細(xì)胞達(dá)到65-75%匯合時(shí)，將它們用寡核苷酸進(jìn)行處理。使寡核苷酸在Opti-MEMTM-l減少的血清培養(yǎng)基(InvitrogenLifeTechnologies,Carlsbad,CA)中與CYTOFECTINTM(GeneTherapySystems,SanDiego，CA)進(jìn)行混合，以達(dá)到寡核苷酸的所需濃度和2或4iag/mL/100nM寡核普酸的CYTOFECTINTM濃度。使這種轉(zhuǎn)染混合物在室溫下溫育約0.5小時(shí)。對于在96孔板中生長的細(xì)胞，細(xì)胞用100|uLOPTI-MEMTM-l洗滌1次，并隨后用130轉(zhuǎn)染混合物進(jìn)行處理。在24孔板或其他標(biāo)準(zhǔn)組織培養(yǎng)板中生長的細(xì)胞使用合適體積的培養(yǎng)基和寡核苷酸進(jìn)行類似地處理。一式兩份或一式三份地處理細(xì)胞且獲得數(shù)據(jù)。于37X:處理約4-7小時(shí)后，將包含轉(zhuǎn)染混合物的培養(yǎng)基替換為新鮮培養(yǎng)基。在寡核苷酸處理后16-24小時(shí)收獲細(xì)胞。對照寡核苷酸對照寡核苷酸用于測定關(guān)于特定細(xì)胞系的最佳寡聚化合物濃度。此外，當(dāng)本發(fā)明的寡聚化合物在寡聚化合物篩選實(shí)驗(yàn)或表型分析中進(jìn)行測試時(shí)，對照寡核苷酸與本發(fā)明的化合物平行地進(jìn)行測試。在某些實(shí)施方案中，對照寡核苷酸用作陰性對照寡核苷酸，即作為用于測量對基因表達(dá)或表型的影響不存在的手段。在可替代的實(shí)施方案中，對照寡核苷酸用作陽性對照寡核苷酸，即作為已知影響基因表達(dá)或表型的寡核普酸。對照寡核苷酸顯示于表2中。"靶名稱"指寡核苷酸靶向的基因。"靶種類"指其中寡核苷酸與靶mRNA完全互補(bǔ)的種類。"基序"是包含寡核苷酸的化學(xué)上獨(dú)特區(qū)域的指示。表2中的某些化合物是嵌合寡核苷酸，包含由2，-脫氧核苷酸組成的中央"缺口"區(qū)，所述中央"缺口"區(qū)在兩側(cè)(5'和3，)上由"翼"側(cè)接。翼由2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸，也稱為2'-MOE核苷酸組成。每個(gè)缺口聚體寡核苷酸的"基序"在表2中舉例說明，并且指出了每個(gè)缺口區(qū)和翼中的核苷酸數(shù)目，例如"5-10-5"指具有由5個(gè)核苷酸的翼側(cè)接的10個(gè)核苷酸的缺口區(qū)的缺口聚體。ISIS29848是隨機(jī)化的寡聚化合物的混合物；其序列顯示于表2中，其中N可以是A、T、C或G。表2中的寡核苷酸自始至終核普間(主鏈)鍵是硫代磷酸酯。未修飾的胞嘧啶由核苷酸序列中的"UC"指出；所有其他胞嘧啶都是5-甲基胞嘧啶。<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>細(xì)胞，陽性對照寡核苷酸可以是例如ISIS15770。導(dǎo)致靶mRNA減少80%的陽性對照寡核普酸的濃度，隨后用作對于那種細(xì)胞系的后續(xù)實(shí)驗(yàn)中關(guān)于新寡核苷酸的篩選濃度，所述靶mRNA例如對于ISIS15770是大鼠Raf激酶C。如果未達(dá)到80%減少，那么導(dǎo)致靶mRNA減少60%的陽性對照寡核苷酸的最低濃度，隨后用作對于那種細(xì)胞系的后續(xù)實(shí)驗(yàn)中的寡核苷酸篩選濃度。如果未達(dá)到減少60%,那么那種特定細(xì)胞系被視為不適合于寡核苷酸轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。當(dāng)反義寡核苷酸使用脂質(zhì)體試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，本文使用的反義寡核普酸濃度為50nM-300nM,當(dāng)反義寡核苷酸通過電穿孔進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，濃度為1mM-40juM。實(shí)施例2GCCRmRNA水平的實(shí)時(shí)定量PCR分析GCCRmRNA水平的定量通過實(shí)時(shí)定量PCR使用ABIPRISM7600、7700或7900序列沖企測系統(tǒng)(PE-AppliedBiosystems,FosterCity,CA)根據(jù)制造商的說明書來完成。通過RT、實(shí)時(shí)PCR獲得的基因靼量使用表達(dá)恒定的基因-GAPDH的表達(dá)7J^平，或通過^吏用RiboGreenTM(MolecularProbes,Inc.Eugene,OR)定量總RNA進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。總RNA使用RiboGreenRNA定量試劑(MolecularProbes,Inc.Eugene,OR)進(jìn)行定量。將170|nLRiboGreenTM工作試劑(在10mMTris-HCl，ImMEDTA,pH7.5中l(wèi):350稀釋的RiboGreenTM試劑)移液到包含30|iL純化的細(xì)胞RNA的96孔板內(nèi)。板在CytoFluor4000(PEAppliedBiosystems)中進(jìn)行讀數(shù)，其中在485nm處激發(fā)和在530nm處發(fā)射。GAPDH表達(dá)通過RT、實(shí)時(shí)PCR與靶的定量同時(shí)或分開進(jìn)行定量。對于與耙水平的測量同時(shí)的測量，就其在定量PCR分析前與GAPDH擴(kuò)增反應(yīng)"多路進(jìn)行(multiplexed)"的能力評估對測量的靶基因特異的引物-探針組。多路進(jìn)行指在單管中進(jìn)行多個(gè)DNA種類(在這種情況下是靶和內(nèi)源性GAPDH對照)的檢測，這要求GAPDH的引物-探針組不干擾靶的擴(kuò)增。用于在實(shí)時(shí)PCR中使用的探針和引物^皮設(shè)計(jì)成與靶特異性序列雜交。引物和探針設(shè)計(jì)的方法是本領(lǐng)域已知的。用于在實(shí)時(shí)PCR中使用的引物和探針的設(shè)計(jì)可以使用商購可得的軟件來進(jìn)行，例如PrimerExpress,PEAppliedBiosystems,FosterCity,CA。引物和才果4十及與之雜交的靶核酸序列呈現(xiàn)于表4中。靶特異性PCR探針具有與5'末端共價(jià)連接的FAM和與3'末端共價(jià)連接的TAMRA或MGB,其中FAM是熒光染料，TAMRA或MGB是猝滅染料。分離后，對RNA實(shí)施順次的逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)反應(yīng)和實(shí)時(shí)PCR,這兩者都在同一孔中進(jìn)行。RT和PCR試劑得自InvitrogenLifeTechnologies(Carlsbad,CA)。RT、實(shí)時(shí)PCR通過向包含30juL總RNA溶液(20_200ng)的96孔板中加入20juLPCR混合物(cocktail)(2.5xPCR緩沖液減MgCl2,6.6mMMgCl2,dATP、dCTP、dCTP和dGTP各375juM,正向引物和反向引物各375nM,125nM探針，4單位RNA酶抑制劑，1.25單位PLATINUMTaq,5單位MuLV逆轉(zhuǎn)錄酶和2.5xROX染料)同樣進(jìn)行。通過于48。C溫育30分鐘來進(jìn)行RT反應(yīng)。于95。C溫育10分鐘以激活PLATINUMTaq后，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)的2步PCR方案95°C15秒(變性)，隨后為60°C1.5分鐘(復(fù)性/延伸)。通過如本文其他實(shí)施例中所述的定量實(shí)時(shí)PCR,評估本發(fā)明的化合物對人耙mRNA水平的影響，其中使用設(shè)計(jì)為與人GCCR雜交的引物-探針組。例如正向引物TTGACATTTTGCAGGATTTGGA(作為SEQIDNO:17引入本文)反向引物CCAAGGACTCTCATTCGTCTCTTT(作為SEQIDNO:18引入本文)和PCR探針FAM-TTTCTTCTGGGTCCCC-MGB(作為SEQIDNO:19引入本文)，其中FAM是熒光染料，MGB是非熒光猝滅染料。通過如本文其他實(shí)施例中所述的定量實(shí)時(shí)PCR，評估本發(fā)明的化合物對大鼠靶mRNA水平的影響，其中使用設(shè)計(jì)為與大鼠GCCR雜交的引物-探針組。例如正向引物AAACAATAGTTCCTGCAGCATTACC(作為SEQIDNO:20引入本文)反向引物CATACAACACCTCGGGTTCAATC(作為SEQIDNO:21引入本文)和PCR探針FAM隱ACCCCTACCTTGGTGTCACTGCT-TAMRA(作為SEQIDNO:22引入本文)，其中FAM是熒光染料，TAMRA是猝滅染料。通過如本文其他實(shí)施例中所述的定量實(shí)時(shí)PCR,評估本發(fā)明的化合物對小鼠靶mRNA水平的影響，其中使用設(shè)計(jì)為與小鼠GCCR雜交的引物-探針組。例如正向引物GACATCTTGCAGGATTTGGAGTT(作為SEQIDNO:23引入本文)反向引物AACAGGTCTGACCTCCAAGGACT(作為SEQIDNO:24引入本文)和PCR探針FAM誦CGGGTCCCCAGGTAAAGAGACAAACGA國TAMRA(作為SEQIDNO:25引入本文)，其中FAM是萸光染料，TAMRA是猝滅染料。實(shí)施例3通過5-10-5缺口聚體反義抑制人GCCR表達(dá)設(shè)計(jì)一系列寡聚化合物以靶向人GCCR的不同區(qū)域，其中使用表1中引用的公開序列?；衔镲@示于表3中。表3中的所有化合物都是長度為20個(gè)核苷酸的嵌合寡核苷酸("缺口聚體")，包含由10個(gè)2，-脫氧核苷酸組成的中央"缺口"區(qū)，所述中央"缺口"區(qū)在兩側(cè)(5，和3，)上由5-核苷酸"翼"側(cè)接。翼由2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸，也稱為2，-MOE核苷酸組成。寡核苷酸自始至終核苷間(主鏈)鍵是硫代磷酸酯。所有胞嘧啶都是5-甲基胞嘧啶。表3中顯示的是寡核苷酸的序列，以及化合物結(jié)合的粑序列上的第一個(gè)(最5，)位置的靶位點(diǎn)。通過如本文其他實(shí)施例中所述的定量實(shí)時(shí)PCR分析化合物對基因靶mRNA水平的影響，其中使用設(shè)計(jì)為與人GCCR雜交的引物-探針組。數(shù)據(jù)是來自3次實(shí)驗(yàn)的平均值，在所述實(shí)驗(yàn)中HepG2細(xì)胞用50nM公開的寡聚化合物使用LIPOFECTINTM進(jìn)行處理。表達(dá)的減少表示為表3中的抑制百分比。如果存在，那么"N.D."指"未測定，，。這些寡聚化合物所抑制的耙區(qū)域在本文中被稱為"驗(yàn)證的耙片段"。表3通過5-10-5缺口聚體抑制人GCCRmRNA水平<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>表3中顯示的使GCCR表達(dá)減少至少30%的5-10-5缺口聚體寡核苦酸是優(yōu)選的。與這些優(yōu)選序列互補(bǔ)的耙片段在本文中被稱為"優(yōu)選靶明的另一個(gè)方面是靶向GCCR的反義化合物，其包含SEQIDNOs:26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112或113的8個(gè)核石咸基的部分，其中所述化合物與GCCR特異性雜交且減少GCCR的表達(dá)。在一個(gè)實(shí)施方案中，反義化合物是長度為20個(gè)核堿基的反義寡核苷酸，其特征在于在5，和3，末端上與5個(gè)2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸側(cè)接的10個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。在一個(gè)實(shí)施方案中，所有核苷間鍵都是硫代磷酸酯鍵。在一個(gè)實(shí)施方案中，所有胞嘧啶都是5-甲基胞嘧啶。實(shí)施例4通過缺口加寬的寡核苷酸反義抑制人GCCR表達(dá)依照本發(fā)明，還測試了具有與表4中所述化合物相同序列的缺口加寬的寡核苷酸。表4中的所有化合物都是長度為20個(gè)核苷酸的嵌合寡核苷酸("缺口聚體")，包含由16個(gè)2，-脫氧核苷酸組成的中央"缺口，，區(qū)，所述中央"缺口"區(qū)在兩側(cè)(5，和3，)上由2-核苷酸"翼"側(cè)接。翼由2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸，也稱為2'-MOE核苷酸組成。寡核苷酸自始至終核苷間(主鏈)鍵是硫代磷酸酯。所有胞嘧啶都是5-甲基胞嘧啶。表4中顯示的是寡核苷酸的序列，以及化合物與之結(jié)合的靶序列上的第一個(gè)(5'最末端)位置的靶位點(diǎn)。通過如本文所述的定量實(shí)時(shí)PCR就其對基因粑mRNA水平的影響分析2-16-2基序化合物。數(shù)據(jù)是來自3次實(shí)驗(yàn)的平均值，在所述實(shí)驗(yàn)中HepG2細(xì)胞用50nM公開的寡聚化合物使用LIPOFECTINTM進(jìn)行處理。表達(dá)的減少表示為表4中的抑制百分比。如果存在，那么"N.D."指"未測定"。這些寡聚化合物所抑制的耙區(qū)域在本文中被稱為"驗(yàn)證的耙片段"。表4通過2-16-2缺口聚體抑制人GCCRmRNA水平<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>表4中顯示的使GCCR表達(dá)減少至少30%的2-16-2寡核苷酸是優(yōu)選的。與這些優(yōu)選序列互補(bǔ)的靶片段在本文中被稱為"優(yōu)選靶片段"，并且因此對于通過本發(fā)明的化合物的粑向是優(yōu)選的。本發(fā)明的另一個(gè)方面是靶向GCCR的反義化合物，其包含SEQIDNOs:26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112或113的8個(gè)核堿基的部分，其中所述化合物與GCCR特異性雜交且減少GCCR的表達(dá)。在一個(gè)實(shí)施方案中，反義化合物是長度為20個(gè)核堿基的反義寡核苷酸，其特征在于在5，和3，末端上與2個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的16個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。在一個(gè)實(shí)施方案中，所有核苷間鍵都是硫代磷酸酯鍵。在一個(gè)實(shí)施方案中，所有胞嘧啶都是5-曱基胞嘧啶。實(shí)施例5靶向GCCR的跨物種寡核苷酸先前實(shí)施例中描述的某些寡核普酸是跨物種互補(bǔ)的，并且因此預(yù)期減少跨物種的糖皮質(zhì)激素受體表達(dá)。表5中顯示的是此類跨物種的寡核苷酸的序列，以及寡核苷酸的5-10-5基序形式和2-16-2基序形式的ISIS編號。關(guān)于每個(gè)序列還指出的是與化合物結(jié)合的人靶序列(NM_000176.1，作為SEQIDNO:1引入本文)上的第一個(gè)(最5，)位置的靶位點(diǎn)。指出了關(guān)于人、獼猴、大鼠和小鼠GCCRmRNA的互補(bǔ)性("是"意指完全互補(bǔ)性，"1mm"意指來自完全互補(bǔ)性的1個(gè)錯(cuò)配)。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>實(shí)施例6人和大鼠GCCRmRNA水平的反義抑制-使用5-10-5缺口聚體的劑量反應(yīng)研究在本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，選擇11種寡核苷酸用于另外的劑量反應(yīng)研究。原代大鼠肝細(xì)胞用5、10、25、50、100或200nMISIS180274、ISIS180275、ISIS180276、ISIS180281、ISIS180304、ISIS361137、ISIS361141、ISIS361151、ISIS361156、ISIS345198、ISIS361137或陰性對照寡核苦酸ISIS141923(CCTTCCCTGAAGGTTCCTCC,作為SEQIDNO:114引入本文)進(jìn)行處理，并且如本文的其他實(shí)施例中所述測量mRNA水平。ISIS141923是包含由2，-MOE翼側(cè)接的10個(gè)脫氧核苷酸的缺口和碌u代磷酸酯主鏈的5-10-5缺口聚體。所有胞嘧啶都是5-曱基胞嘧啶。未處理的細(xì)胞充當(dāng)對照，數(shù)據(jù)對其進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。這些研究的結(jié)果顯示于表6中。通過如本文所描述的實(shí)時(shí)PCR測量靶mRNA水平。數(shù)據(jù)是來自3次實(shí)驗(yàn)的平均值并且表示為相對于未處理對照的抑制百分比。表6在大鼠原代肝細(xì)胞中的GCCR表達(dá)的劑量依賴性抑制<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>在本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，在人HepG2細(xì)胞系中測試相同的寡核苷酸在指出的劑量時(shí)減少GCCRmRNA表達(dá)的能力。未處理的細(xì)胞充當(dāng)對照，數(shù)據(jù)對其進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。這些研究的結(jié)果顯示于表7中。通過如本文所描述的實(shí)時(shí)PCR測量靶mRNA水平。數(shù)據(jù)是來自3次實(shí)驗(yàn)的平均值并且表示為相對于未處理對照的抑制百分比。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>如表6和表7中所示，耙向GCCR的反義寡核普酸在以劑量依賴性方式減少人和大鼠耙mRNA水平方面是有效的。實(shí)施例7大鼠GCCRmRNA水平的反義抑制-用5-10-5缺口聚體的體內(nèi)劑量反應(yīng)研究在大鼠中以各種劑量評估5種5-10-5缺口聚體基序寡核苷酸(ISIS180281、ISIS361137、ISIS345198、ISIS180304和ISIS361141)減少肝中的GCCRmRNA水平的能力。將8周齡的SpragueDawley大鼠分成經(jīng)由注射接受50、25或12.5mg/kg劑量的指出的寡核苷酸之一的治療組。每個(gè)治療組包含4只動物，并且每周給藥2次，共3周。單獨(dú)用鹽水注射的動物充當(dāng)對照組。每周評估動物的標(biāo)準(zhǔn)血液參數(shù)(ALT/AST、膽固醇、甘油三酯和葡萄糖)。在研究結(jié)束時(shí)處死動物，并且收集肝組織并使用本文描述的實(shí)時(shí)PCR分析法分析靶減少。結(jié)果作為用指出的寡核苦酸的指出的劑量處理后測量的GCCRmRNA的減少百分比顯示于表8a和8b(分開實(shí)驗(yàn))中。表8a體內(nèi)大鼠篩選-GCCR反義寡核苷酸<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>表8b體內(nèi)大鼠篩選-GCCR反義寡核苷酸<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>表8a和8b中的數(shù)據(jù)顯示粑向GCCR的反義寡核普酸在以劑量依賴性方式體內(nèi)減少表達(dá)方面是有效的。選擇ISIS345198(GTCAAAGGTGCTTTGGTCTG;SEQIDNO:37)用于在集中于缺口優(yōu)化的結(jié)構(gòu)-活性實(shí)驗(yàn)中的進(jìn)一步評估。這種化合物與小鼠、大鼠、人、猴、兔和豚鼠糖皮質(zhì)激素受體RNA完全互補(bǔ)。實(shí)施例8體內(nèi)GCCRmRNA水平的反義抑制-缺口優(yōu)化研究設(shè)計(jì)一系列寡聚化合物以耙向具有各種大小的脫氧核苷酸缺口和2，-MOE翼的GCCR。測試的每種寡核苷酸具有相同的核堿基序列(GTCAAAGGTGCTTTGGTCTG,作為SEQIDNO:37引入本文)且因此耙向SEQIDNO:1的相同片段(核堿基689-709)。如實(shí)施例5中所示，這種寡核苷酸也與大鼠GCCR完全互補(bǔ)?；衔镲@示于表9中。文本指脫氧核苷酸，用粗體、加下劃線的文本指定的核堿基是2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸。自始至終，核苷間鍵是硫代磷酸酯，所有胞嘧啶都是5-甲基胞嘧啶。表9中指出的是每種化合物指示包含寡核苷酸的化學(xué)上獨(dú)特區(qū)域的"基序"。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>9周齡的Sprague-Dawley大鼠用50、25、12.5和6.25mg/kg劑量的表9中呈現(xiàn)的寡核苷酸每周處理2次，共3周。單獨(dú)用鹽水注射的動物充當(dāng)對照組。每個(gè)處理組包含4只動物，并且每周監(jiān)控動物的血漿轉(zhuǎn)氨酶、脂質(zhì)、葡萄糖水平和體重增加。如對于正常動物預(yù)期的，沒有觀察到葡萄糖中的大量改變?；€(在治療開始前)血漿膽固醇(CHOL)和甘油三酯(TRIG)水平和在第3周時(shí)測量的水平以mg/dL作為每個(gè)治療組的平均值顯示于表10中。表10在正常大鼠中靶向GCCR的寡核苷酸對血漿脂質(zhì)水平的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>如表10中所示，用粑向GCCR的反義寡核普酸處理引起膽固醇和甘油三酯水平的劑量依賴性降低。因此，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是降低動物中的血脂水平的方法，所述方法包括給所述動物施用缺口加寬的寡核苷酸。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，缺口加寬的寡核苷酸具有SEQIDNO:37的序列。在其他優(yōu)選實(shí)施方案中，缺口加寬的寡核苷酸是ISIS372339、ISIS377130或ISIS377131。在研究結(jié)束時(shí)，處死動物，測量器官重量，并且收集組織用于測定耙減少和寡核苦酸濃度。使用本文描述的實(shí)時(shí)PCR分析方法分析白色脂肪組織的靶減少。結(jié)果作為用指出的寡核苷酸的指出的劑量處理后測量的GCCRmRNA的減少百分比顯示于表lla、llb和11c(分開實(shí)驗(yàn))中。測定來自用每種缺口加寬的寡核苷酸處理的動物的組織的靶減少，與來自用5-10-5基序寡核苷酸處理的動物的組織一起用于比較。表lla<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>表lib使用3-14-3寡核苷酸的白色脂肪組織中GCCR水平的體內(nèi)減少<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>表llc使用4-12-4寡核苷酸的白色脂肪組織中GCCR水平的體內(nèi)減少<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>同樣使用本文描述的實(shí)時(shí)PCR分析方法分析肝組織的靶減少。結(jié)果作為用指出的寡核普酸的指出的劑量處理后測量的GCCRmRNA的減少百分比顯示于表12a、12b和12c(分開實(shí)驗(yàn))中。測定來自用每種缺口加寬的寡核苷酸處理的動物的組織的靶減少，與來自用5-10-5基序寡核香酸處理的動物的組織一起用于比較。表12a<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>如表lla、llb和llc中所示，測試的所有缺口加寬的寡核苷酸在體內(nèi)以劑量依賴性方式減少GCCR水平方面都是有效的。此外，缺口加寬的寡核苷酸顯示在肝中朝向比5-10-5缺口聚體更大的效力的趨勢。此外，為了確定改變?nèi)笨诖笮λ幋鷦恿W(xué)的影響，測定了腎和肝中的寡核苷酸濃度。測定組織中的寡核苷酸濃度的方法是本領(lǐng)域已知的(Geary等人，t5,oc/^w,1999，27(241-248)。總寡核苷酸是在組織中檢測到的所有寡核普酸代謝產(chǎn)物總和。表12中顯示的是用指出濃度的指出的寡核苷酸處理的動物肝中的總濃度和全長寡核苷酸(pg/g)濃度。表12<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>如表12中所示，與ISIS345198比較，對于ISIS372339和ISIS377130,肝中的全長寡核苦酸水平是相似或減少的。加上如表11中所示的耙減少，這些數(shù)據(jù)顯示缺口加寬的化合物的增強(qiáng)效力不是由于化合物在肝中的增加積聚。因此，本發(fā)明的優(yōu)選寡核苷酸包括缺口加寬的寡核苷酸，其相對于相應(yīng)的5-10-5缺口聚體的在靶減少方面顯示增加或相似的效力，而沒有化合物在靶組織中的增加積聚。在某些實(shí)施方案中，靶組織是脂肪，在某些實(shí)施方案中，靶組織是肝。權(quán)利要求1.一種長度為20個(gè)核堿基的反義寡核苷酸，所述寡核苷酸靶向編碼GCCR的核酸分子，并且包含SEQIDNO:34、33、35、36、37、42、45、56、61、63或96的至少8個(gè)核石咸基的部分，其中所述寡核苷酸包含長度為12個(gè)、13個(gè)、14個(gè)、15個(gè)、16個(gè)、17個(gè)或18個(gè)核堿基的脫氧核普酸區(qū)域，所述脫氧核普酸區(qū)域在其5，和3'末端上與1-4個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接，并且其中所述寡核苷酸與GCCR特異性雜交且減少GCCR的表達(dá)。2.權(quán)利要求1的反義寡核苷酸，其中在所述5，和3'末端上與所述脫氧核苷酸區(qū)域側(cè)接的所述核普酸數(shù)目相同。3.權(quán)利要求1的反義寡核苷酸，其中在所述5，和3'末端上與所述脫氧核苦酸區(qū)域側(cè)接的所述核苷酸數(shù)目不同。4.權(quán)利要求1的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。5.權(quán)利要求1的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)胞嘧啶是5-曱基胞嘧口定。6.權(quán)利要求1的反義寡核苷酸，其具有SEQIDNO:37的核堿基序列。7.權(quán)利要求6的反義寡核苷酸，其特征在于在5，和3'末端上與2個(gè)2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸側(cè)接的16個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。8.權(quán)利要求7的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)核普間鍵是硫代磷酸酯鍵。9.權(quán)利要求7的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)胞嘧啶是5-曱基胞嘧咬。10.權(quán)利要求6的反義寡核苷酸，其特征在于在5，和3'末端上與3個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的14個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。11.權(quán)利要求10的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。12.權(quán)利要求10的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。13.權(quán)利要求6的反義寡核苷酸，其特征在于在5，和3，末端上與4個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苦酸側(cè)接的12個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。14.權(quán)利要求13的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。15.權(quán)利要求13的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧咬。16.權(quán)利要求6的反義寡核苷酸，其特征在于在5'和3，末端上與1個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的18個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。17.權(quán)利要求16的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。18.權(quán)利要求16的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧。定。19.權(quán)利要求6的反義寡核苦酸，其特征在于在5，和3，末端上與1個(gè)或2個(gè)2，-0-(2-曱氧乙基)核苦酸側(cè)接的17個(gè)脫氧核普酸的區(qū)域。20.權(quán)利要求19的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。21.權(quán)利要求19的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。22.權(quán)利要求1的反義寡核苷酸，其具有SEQIDNO:33的核堿基序列。23.權(quán)利要求22的反義寡核苷酸，其特征在于在5，和3'末端上與2個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核普酸側(cè)接的16個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。24.權(quán)利要求23的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。25.權(quán)利要求23的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。26.權(quán)利要求22的反義寡核苷酸，其特征在于在5，和3'末端上與3個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苦酸側(cè)接的14個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。27.權(quán)利要求26的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。28.權(quán)利要求26的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)胞嘧啶是5-曱基胞嘧啶。29.權(quán)利要求22的反義寡核苷酸，其特征在于在5，和3'末端上與4個(gè)2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸側(cè)接的12個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。30.權(quán)利要求29的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)核苦間鍵是硫代磷酸酯鍵。31.權(quán)利要求29的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧咬。32.權(quán)利要求22的反義寡核苷酸，其特征在于在5，和3，末端上與1個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的18個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。33.權(quán)利要求32的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。34.權(quán)利要求32的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧咬。35.權(quán)利要求22的反義寡核苷酸，其特征在于在5，和3，末端上與1個(gè)或2個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的17個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。36.權(quán)利要求35的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。37.權(quán)利要求35的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。38.權(quán)利要求1的反義寡核苷酸，其具有SEQIDNO:45的核堿基序列。39.權(quán)利要求38的反義寡核苷酸，其特征在于在5，和3，末端上與2個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的16個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。40.權(quán)利要求39的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)核苦間鍵是硫代磷酸酯鍵。41.權(quán)利要求39的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)胞嘧啶是5-曱基胞嘧啶。42.權(quán)利要求38的反義寡核苷酸，其特征在于在5，和3，末端上與3個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的14個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。43.權(quán)利要求42的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。44.權(quán)利要求42的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。45.權(quán)利要求38的反義寡核苷酸，其特征在于在5，和3'末端上與4個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的12個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。46.權(quán)利要求45的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。47.權(quán)利要求45的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)胞嘧啶是5-甲基月包嘧啶。48.權(quán)利要求38的反義寡核苷酸，其特征在于在5，和3'末端上與1個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核普酸側(cè)接的18個(gè)脫氧核苦酸的區(qū)域。49.權(quán)利要求48的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。50.權(quán)利要求48的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)胞嘧啶是5-曱基胞嘧啶。51.權(quán)利要求38的反義寡核苷酸，其特征在于在5，和3'末端上與1個(gè)或2個(gè)2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸側(cè)接的17個(gè)脫氧核苷酸的區(qū)域。52.權(quán)利要求51的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。53.權(quán)利要求51的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)胞嘧啶是5-曱基胞嘧啶。54.—種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1的反義寡核苷酸并任選包含藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、增強(qiáng)劑或賦形劑。55.—種減少細(xì)胞或組織中的糖皮質(zhì)激素受體表達(dá)的方法，其包括使所述細(xì)胞或組織與權(quán)利要求54的藥物組合物接觸。56.權(quán)利要求55的方法，其中所述組織是脂肪或肝組織。57.—種治療動物中由糖皮質(zhì)激素表達(dá)介導(dǎo)的疾病或狀況的方法，其包括使所述動物與有效量的權(quán)利要求54的藥物組合物接觸。58.權(quán)利要求57的方法，其中所述疾病或狀況是糖尿病、肥胖、代謝綜合征X、高血糖癥或高脂血癥。59.權(quán)利要求57的方法，其中所述疾病是2型糖尿病。60.權(quán)利要求57的方法，其中所述疾病是與升高的血膽固醇或升高的血甘油三酯水平相關(guān)的高脂血癥。61.權(quán)利要求57的方法，其中所述狀況是肝脂肪變性。62.權(quán)利要求61的方法，其中所述脂肪變性是脂肪肝。63.權(quán)利要求61的方法，其中所述脂肪變性是非酒精性脂肪肝。64.—種降低動物中的血糖水平的方法，其包括給所述動物施用治療有效量的權(quán)利要求54的藥物組合物。65.權(quán)利要求64的方法，其中所述動物是人。66.權(quán)利要求64的方法，其中所述血糖水平是空腹血糖水平。67.—種降低動物中的血脂水平的方法，其包括給所述動物施用治療有效量的權(quán)利要求54的藥物組合物。68.權(quán)利要求67的方法，其中所述血脂水平是血膽固醇水平。69.權(quán)利要求67的方法，其中所述血脂水平是血甘油三酯水平。70.—種降低動物中的肝臟甘油三酯水平的方法，其包括給所述動物施用治療有效量的權(quán)利要求54的藥物組合物。71.—種減少動物中的體脂量的方法，其包括給所述動物施用治療有效量的權(quán)利要求54的藥物組合物。72.—種減少或改善動物中的胰島素敏感性的方法，其包括給所述動物施用治療有效量的權(quán)利要求54的藥物組合物。73.—種抑制動物中的肝葡萄糖排出的方法，其包括給所述動物施用治療有效量的權(quán)利要求54的藥物組合物。74.—種延遲或預(yù)防動物中的血脂或血糖水平開始增加的方法，其包括給所述動物施用治療有效量的權(quán)利要求54的藥物組合物。75.—種治療具有代謝疾病或狀況的動物的方法，其包括給所述動物施用與選自下述的抗糖尿病劑組合的權(quán)利要求1的化合物PPAR激動劑，包括PPAR-Y、雙PPAR或全PPAR激動劑、二肽基肽酶(IV)抑制劑、GLP-1類似物、胰島素和胰島素類似物、胰島素促分泌素、SGLT2抑制劑、人胰淀素類似物，包括普蘭林肽、葡萄糖激酶活化劑、雙胍和a-葡萄糖苷酶抑制劑，以達(dá)到附加的療效。全文摘要提供了用于調(diào)節(jié)糖皮質(zhì)激素受體表達(dá)的化合物、組合物和方法。組合物包括具有特別的體內(nèi)性質(zhì)，靶向編碼糖皮質(zhì)激素受體的核酸的反義化合物，特別是反義寡核苷酸。提供了使用這些化合物用于調(diào)節(jié)糖皮質(zhì)激素受體表達(dá)和用于治療疾病的方法。文檔編號C07H21/00GK101313066SQ200680043242公開日2008年11月26日申請日期2006年9月19日優(yōu)先權(quán)日2005年9月19日發(fā)明者B·P·莫尼亞,L·沃茨,R·麥凱,S·M·弗賴爾,S·巴諾特申請人:強(qiáng)生醫(yī)藥研究及開發(fā)有限責(zé)任公司