專利名稱：：使疏水基質(zhì)官能化的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種使疏水基質(zhì)官能化的新方法，本發(fā)明進(jìn)一步涉及結(jié)合配體的捕獲試劑，并且涉及制備這些捕獲劑的方法，以及鑒定結(jié)合目的特異性配體的捕獲劑的方法。
背景技術(shù)：
：使用不同的分子將各種表面如玻璃或硅官能化，以允許配體與所述表面結(jié)合，或者形成各種類型的點(diǎn)陣，是公知的。Pro.SPIE，4205，75(2001)，描述了結(jié)合到用環(huán)氧化物衍生的石英表面上，或者直接結(jié)合到金表面上的環(huán)己肽的應(yīng)用。這一文件描述了其中每隔一個(gè)其它氨基酸都是不同的肽。所述肽通過(guò)賴氨?；虬腚装滨?cysteiyl)殘基附著到表面上。然后測(cè)定氨基酸與所述表面-結(jié)合的肽的結(jié)合。AnalyticaChimicaActa,392，213，(1999)也描述了結(jié)合到用環(huán)氧化物衍生的石英表面上的環(huán)己肽。一個(gè)或三個(gè)賴氨酰殘基用于表面錨定。環(huán)肽比線性肽工作得更好，并且通過(guò)單一的賴氨酰殘基錨定比用三個(gè)賴氨酰殘基錨定工作得更好。使用分光鏡橢圓光度法測(cè)定與揮發(fā)性有機(jī)化合物的結(jié)合。在Angew.Chem.Int.Ed.(德國(guó)應(yīng)用化學(xué))，41，127,(2002)中，已經(jīng)用鑲納米碳管頭的原子力顯微鏡(carbonnanotubetippedatomicforcemicroscopy)研究了由肽制成的LangmuirBlodgett膜。在原子力顯微鏡下觀察到晶體排序，并且這似乎是卩-折疊聚集的結(jié)果。在J.Am.Chem.Soc.(美國(guó)化學(xué)學(xué)會(huì)雜志)，107,7684,(1985)中，使用賴氨酰和亮氨酰殘基在空氣-水界面制成確定構(gòu)象的肽。使用LangmuirBlodgett技術(shù)，可以將這些轉(zhuǎn)移到基質(zhì)上。a螺旋和p折疊都可以由具有相同構(gòu)象但是具有不同的疏水周期性的肽形成。P折疊可以由7mers形成，但是為了產(chǎn)生a螺旋，需要14mers。在BioconjugateChem.(生物綴合物化學(xué)),12,346，(2001)中，構(gòu)建了肽微點(diǎn)陣和小分子微點(diǎn)陣?；瘜W(xué)選擇性連接可以與肽和載玻片表面一起使用。N-端半胱氨酰殘基與在所述載玻片表面的ot酮醛反應(yīng)，產(chǎn)生噻唑烷環(huán)。其他人已經(jīng)應(yīng)用在游離硫羥基和馬來(lái)酰亞胺之間的自由基米氏加成。如果存在多個(gè)硫羥基，由于不能區(qū)分它們，所以不能應(yīng)用這種方法。JournaloftheAmericanChemicalSociety(美國(guó)化學(xué)學(xué)會(huì)雜志)，126,14730,(2004)描述了通過(guò)天然的化學(xué)連接的蛋白質(zhì)與表面的選擇性共價(jià)附著。蛋白質(zhì)硫代酸酯與半胱氨酸-衍生的玻璃表面反應(yīng)。
發(fā)明內(nèi)容因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供使疏水表面官能化的備選方法。按照本發(fā)明的第一方面，提供一種使基質(zhì)官能化的方法，其包括將至少一種多聚體肽固定在所述基質(zhì)上，其中，所述至少一種多聚體肽包括至少第一肽鏈和第二肽鏈，所述第一肽鏈包括至少一個(gè)疏水氨基酸殘基和至少一個(gè)官能化部分，其中所述至少一個(gè)疏水氨基酸殘基和至少一個(gè)官能化部分位于肽的一級(jí)結(jié)構(gòu)中，以形成疏水面，和包括所述官能化部分的基本上非疏水性面，并且其中，所述肽與基質(zhì)的接觸使得所述肽固定在其上。優(yōu)選地，所述至少第一和第二肽鏈?zhǔn)枪矁r(jià)連接的，以形成所述多聚體肽。優(yōu)選地，所述基質(zhì)是疏水基質(zhì)。優(yōu)選地，所述第一肽鏈通過(guò)在基質(zhì)與肽的疏水面之間的疏水性相互作用而固定在所述基質(zhì)上。應(yīng)該理解，所述基質(zhì)自身可以是疏水性的，諸如疏水物質(zhì)或疏水溶劑，或者可以被疏水層覆蓋。優(yōu)選地，所述基質(zhì)通過(guò)在存在基本上水性的溶劑下，將肽自我裝配到疏水基質(zhì)上而官能化。優(yōu)選地，自我裝配是受與疏水基質(zhì)接觸時(shí)水性溶劑中的熵作用推動(dòng)的。優(yōu)選地，所述疏水氨基酸殘基是選自由L-氨基酸、D-氨基酸、氨基酸模擬物、間隔氨基酸、P氨基酸或任何其它的手性氨基酸單體組成的組的氨基酸。優(yōu)選地，基本上純的氨基酸是L-氨基酸和/或D-氨基酸。優(yōu)選地，其側(cè)鏈形成疏水面的所述疏水氨基酸選自由亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸、纈氨酸、正纈氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸組成的組。更優(yōu)選地，所述疏水氨基酸是苯丙氨酸。優(yōu)選地，所述第一肽鏈包括4-40個(gè)疏水氨基酸殘基，更優(yōu)選地6-25個(gè)，并且最優(yōu)選地6-12個(gè)。優(yōu)選地，每個(gè)疏水氨基酸單體基本上是對(duì)映體純的。應(yīng)該理解，所述官能化部分可以包括使用本領(lǐng)域的技術(shù)人員己知的合成策略可以結(jié)合到肽中的任何適當(dāng)?shù)牟糠?，例如，它可以選自羥基、硫羥基、羧酸基團(tuán)、氨基基團(tuán)、酰胺基團(tuán)、胍基團(tuán)、咪唑基團(tuán)、芳族基團(tuán)、發(fā)色團(tuán)、熒光團(tuán)、同位素標(biāo)記、螯合基團(tuán)、半抗原以及許多其它的部分。優(yōu)選地，所述官能化部分包括選自包括下列各項(xiàng)的組的至少一個(gè)氨基酸L-氨基酸、D-氨基酸、氨基酸模擬物、間隔氨基酸、p氨基酸或任何其它的手性氨基酸單體。優(yōu)選地，所述氨基酸是L-氨基酸和/或D-氨基酸。優(yōu)選地，其側(cè)鏈形成官能化部分的每個(gè)氨基酸單體基本上是對(duì)映體純的。優(yōu)選地，所述第一肽鏈包括這樣的一級(jí)結(jié)構(gòu)，即，其包括如圖l所示的交替的疏水和基本上不疏水氨基酸殘基。技術(shù)人員應(yīng)該理解，可以容易地設(shè)計(jì)導(dǎo)致側(cè)鏈的分布以形成疏水和基本上不疏水的面的其它的肽序列，例如，在疏水殘基之間可能存在3個(gè)不疏水氨基酸殘基，或者奇數(shù)氨基酸的任何組合。備選地，所述肽可以包括，例如，L-、D-、和P-氨基酸的組合，以形成疏水和基本上不疏水的面。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，放置形成所述官能化部分的每個(gè)氨基酸側(cè)鏈，以位于第一肽鏈的基本上不疏水的面上，并且所述氨基酸側(cè)鏈選自基本上由少于20種氨基酸，更優(yōu)選地少于12種氨基酸，甚至更優(yōu)選地少于6種氨基酸，并且最優(yōu)選地4種氨基酸組成的組。優(yōu)選地，所述第一肽鏈包括10%-90%的疏水氨基酸殘基，更優(yōu)選地，20%-80%，甚至更優(yōu)選地，30%-70%，并且最優(yōu)選地，40%-60%的疏水氨基酸殘基。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述第一肽鏈包括50%的疏水氨基酸殘基。應(yīng)該理解，其側(cè)鏈位于形成官能化部分的基本上不疏水的面上的氨基酸還可以包括疏水殘基，例如，氨基丁酸(aminobutyrate)殘基。優(yōu)選地，所述官能化部分包括10個(gè)或更少的其側(cè)鏈位于基本上不疏水的面上的氨基酸殘基；更優(yōu)選地，8個(gè)或更少；更優(yōu)選地，6個(gè)或更少；甚至更優(yōu)選地，4個(gè)或更少；并且最優(yōu)選地，3個(gè)或更少。優(yōu)選地，多聚體肽包括包含第一和第二肽的肽二聚體。顯而易見(jiàn)地，所述肽二聚體可以由第一和第二肽在第一肽與疏水基質(zhì)接觸之前、同時(shí)或之后而組裝。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述肽二聚體在疏水基質(zhì)上組裝。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述基質(zhì)通過(guò)將肽分散到基質(zhì)上而衍生。優(yōu)選地，使用非接觸性分散器(例如，Piezorray系統(tǒng)，PerkinElmerLAS)，將所述肽單獨(dú)分散到基質(zhì)上，并且在那里它們?cè)唤M裝。優(yōu)選地，所述第二肽鏈還包括至少一個(gè)疏水氨基酸殘基和至少一個(gè)非疏水氨基酸殘基，其中所述氨基酸位于肽的一級(jí)結(jié)構(gòu)中，以致放置所述氨基酸側(cè)鏈，以產(chǎn)生疏水面和包括官能化部分的基本上不疏水的面。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述第二肽鏈包括比第一肽更少的氨基酸，并且包含更少的疏水殘基，以致在所述肽和疏水表面之間的相互作用相對(duì)弱一些。在這一實(shí)施方案中，當(dāng)與所述第一肽二聚化時(shí)，所述第二肽鏈只保留在疏水基質(zhì)上。技術(shù)人員應(yīng)該顯而易見(jiàn)，將它們保持在基質(zhì)上所需要的第一和第二肽的長(zhǎng)度和疏水氨基酸殘基的數(shù)目將取決于所述表面的疏水性以及在第一和第二肽中存在的疏水氨基酸，并且還取決于待結(jié)合的配體的性質(zhì)。技術(shù)人員還應(yīng)該顯而易見(jiàn)，保持在基質(zhì)上的肽的量將取決于對(duì)所述基質(zhì)進(jìn)行清洗的嚴(yán)格性。優(yōu)選地，在肽固定后，例如，將所述基質(zhì)用在10mMtris-HCl(pH8.0)中的1.0MNaCl清洗。優(yōu)選地，所述第二肽包括1-6個(gè)疏水氨基酸殘基，更優(yōu)選地，2-5個(gè)，并且最優(yōu)選地，2-4個(gè)疏水氨基酸殘基，所述氨基酸殘基的側(cè)鏈形成疏水面。優(yōu)選地，所述第一和第二肽分別包含10個(gè)或更少的殘基，其側(cè)鏈位于基本上不疏水的面官能化部分上；更優(yōu)選地，8個(gè)或更少；更優(yōu)選地，6個(gè)或更少；甚至更優(yōu)選地，4個(gè)或更少；并且最優(yōu)選地，3個(gè)。應(yīng)該容易地顯而易見(jiàn)，所述至少第一和第二肽可以具有相同的或不同的一級(jí)氨基酸序列。還應(yīng)該顯而易見(jiàn)，所述第一和第二肽可以由第一和第二氨基酸組合成，并且每個(gè)氨基酸組可以是相同的或不同的。優(yōu)選地，所述肽以本領(lǐng)域公知的組合方式由所述氨基酸組生成。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照一組法則生成所述肽，例如，所述法則可以確定肽中的每個(gè)氨基酸的最小和最大水平，或者可以提供結(jié)合的疏水氨基酸的百分?jǐn)?shù)的最大和最小水平。優(yōu)選地，所述肽在固相上合成，更優(yōu)選地，所述肽在用于第一方面的方法之前從所述固相上分裂下來(lái)。肽以及它們的鹽和衍生物的合成，包括固相和液相肽合成，在本領(lǐng)域中是充分確定的。參見(jiàn)，例如，Stewart等，(1984)SolidPhasePeptideSynthesis(固相肽合成)(第2版)；和Chan(2000)"FMOCSolidPhasePeptideSynthesis,APracticalApproach(FMOC固相月太合成，一種實(shí)用方法)，"牛津大學(xué)出版社。肽可以使用自動(dòng)化肽合成儀(例如，PioneerTM肽合成儀，應(yīng)用生物系統(tǒng)(AppliedBiosystems),福斯特市，CA)而合成。例如，肽可以使用FMOC固相肽合成在Rink酰胺樹(shù)脂上制備，然后通過(guò)三氟乙酸(95%)去保護(hù)作用并且從樹(shù)脂上分裂。優(yōu)選地，所述第一和第二肽分別包含至少一個(gè)反應(yīng)性基團(tuán)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，在所述肽上存在的反應(yīng)性基團(tuán)反應(yīng)，以導(dǎo)致多聚體捕獲劑的形成。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述反應(yīng)性基團(tuán)可以在肽合成過(guò)程中被保護(hù)，并且在用于按照第一方面產(chǎn)生捕獲劑之前去保護(hù)。這樣的技術(shù)是本領(lǐng)域的技術(shù)人員公知的，例如，標(biāo)準(zhǔn)的基于FMOC的固相肽組裝。在這種技術(shù)中，產(chǎn)生具有保護(hù)的側(cè)鏈和游離氨基端的樹(shù)脂結(jié)合的肽。然后，在標(biāo)準(zhǔn)的肽合成條件下，在N端的氨基基團(tuán)可以與任何相容的羧酸反應(yīng)性基團(tuán)綴合物反應(yīng)。例如，可以結(jié)合具有三苯甲基或甲氧基三苯甲基保護(hù)的硫羥基的半胱氨酸。用三氟乙酸去保護(hù)將在溶液中產(chǎn)生不保護(hù)的肽。應(yīng)該理解，可以應(yīng)用任何適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)，形成肽多聚體，例如，例如在環(huán)戊二烯基(cyclopentadienyl)官能化的肽和馬來(lái)酰亞胺官能化的肽之間的狄爾斯-阿德?tīng)柗磻?yīng)，在硫羥基官能化的肽和馬來(lái)酰亞胺官能化的肽之間的米氏反應(yīng)，在硫羥基官能化的肽和含有活化的硫羥基(例如，用(硝基)硫代吡啶部分活化)的肽之間的反應(yīng)以形成二硫化物，在疊氮化物官能化的肽和硫代磷酸酯官能化的肽之間的Staudinger連接，以及在硫代酸酯和N-端半胱氨酸之間的天然化學(xué)連接。應(yīng)該理解，所述反應(yīng)性基團(tuán)可以位于所述第一和第二肽的一級(jí)肽結(jié)構(gòu)中的任何適當(dāng)?shù)奈恢?，例如，所述反?yīng)性基團(tuán)可以位于一級(jí)肽序列中，以致它們位于所述肽的基本上不疏水的面上，并且位于所述官能化部分的N-端側(cè)。備選地，所述反應(yīng)性基團(tuán)可以位于第一和第二肽的一級(jí)肽結(jié)構(gòu)中，以致它們位于所述肽的基本上不疏水的面上，并且在所述第一肽中，位于配體-結(jié)合位點(diǎn)的N-端側(cè)，并且在所述第二肽中朝向所述官能化部分的C-端側(cè)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述反應(yīng)性基團(tuán)可以位于第一和第二肽的一級(jí)肽結(jié)構(gòu)中，以致在所述第一肽中，它位于所述肽的基本上不疏水的面上，并且朝向所述官能化部分的N-端側(cè)，并且在所述第二肽中，它位于所述官能化部分的相對(duì)(疏水)面，并且朝向這一位點(diǎn)的C-端側(cè)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，在所述第一肽上的反應(yīng)性基團(tuán)位于基本上不疏水的面上的一級(jí)氨基酸結(jié)構(gòu)中，并且朝向所述官能化部分的N-端側(cè)，并且在所述第二肽中，位于疏水面中，并且朝向所述官能化部分的N-端側(cè)，如圖2所示。優(yōu)選地，所述反應(yīng)性基團(tuán)選自，但不限于，硫羥基、馬來(lái)酰亞胺、環(huán)戊二烯、疊氮化物、硫代磷酸酯、硫代酸酯和(硝基)硫代吡啶部分活化的硫羥基。更優(yōu)選地，所述反應(yīng)性基團(tuán)是硫羥基。優(yōu)選地，當(dāng)所述反應(yīng)性基團(tuán)是硫羥基時(shí)，至少一個(gè)硫羥基是活化的硫羥基。優(yōu)選地，所述硫羥基用硫代硝基吡啶基或硫代吡啶基基團(tuán)活化。優(yōu)選地，所述官能化部分允許配體與固定的肽結(jié)合。應(yīng)該顯而易見(jiàn)，所述配體是已知的分子，或者備選地，所述官能化部分可以作用與未知的分子結(jié)合。還應(yīng)該是顯而易見(jiàn)的，取決于在所述肽中存在的氨基酸殘基，所述官能化部分將具有不同的特點(diǎn)。例如，氨基酸側(cè)鏈可以為配體-結(jié)合提供正電荷。優(yōu)選地，所述正電荷由下列各項(xiàng)提供賴氨酰殘基(在肽鏈和正電荷之間有4個(gè)CH2基團(tuán))，鳥(niǎo)氨酰殘基(在肽鏈和正電荷之間有3個(gè)CH2基團(tuán))，或者最優(yōu)選地，二氨基丁?；鶜埢?在肽鏈和正電荷之間具有2個(gè)CH2基團(tuán))。所述氨基酸側(cè)鏈可以備選地為配體-結(jié)合提供能夠作用為氫鍵供體和/或受體的羥基基團(tuán)。優(yōu)選地，所述羥基基團(tuán)由絲氨酰殘基(在肽鏈和OH基團(tuán)之間有一個(gè)CH2基團(tuán))提供，或者更優(yōu)選地，由高絲氨酰殘基(在肽鏈和OH基團(tuán)之間有2個(gè)CH2基團(tuán))提供。所述氨基酸側(cè)鏈可以為配體-結(jié)合提供疏水部分。優(yōu)選地，丙氨酰殘基(在肽鏈和甲基基團(tuán)之間無(wú)CH2基團(tuán))，或更優(yōu)選地，氨基丁?；鶜埢?在肽鏈和甲基基團(tuán)之間具有1個(gè)CH2基團(tuán))提供所述疏水部分。備選地，所述氨基酸側(cè)鏈可以為配體-結(jié)合提供負(fù)電荷。優(yōu)選地，所述負(fù)電荷由谷氨?；鶜埢?在肽鏈和羧酸基團(tuán)之間有2個(gè)CH2基團(tuán))，或者更優(yōu)選地，天冬氨酰殘基(在肽鏈和羧酸基團(tuán)之間有一個(gè)CH2基團(tuán))提供。還應(yīng)該顯而易見(jiàn)，所述官能化的基質(zhì)可以包括多個(gè)固定的肽，并且這些肽可以是同一種肽的多個(gè)拷貝，或者可以包括多種不同的肽。當(dāng)提及將分子(例如，肽)固定到基質(zhì)上時(shí)，術(shù)語(yǔ)"固定"和"附著"在此處互換地使用，并且兩個(gè)術(shù)語(yǔ)都意欲包括疏水相互作用，除非另外明確地或通過(guò)上下文指明。通常，所需要的全部都是，在意欲使用所述基質(zhì)的條件下，例如，在需要肽配體-結(jié)合的應(yīng)用中，將所述分子(例如，肽)保持固定或者附著到基質(zhì)上。本發(fā)明的某些實(shí)施方案可以利用由惰性基質(zhì)或基底(例如，玻璃載玻片、聚合物珠子等)組成的固體支持物，其已被"官能化"，例如，通過(guò)應(yīng)用包括反應(yīng)性基團(tuán)的中間物質(zhì)的層或涂層而被"官能化"，所述反應(yīng)性基團(tuán)允許生物分子如肽的疏水附著。應(yīng)該理解，所述基質(zhì)可以是任何適當(dāng)?shù)氖杷|(zhì)，例如，通過(guò)疏水有機(jī)硫醇處理修飾的金，通過(guò)表面處理而修飾的玻璃，或塑料。優(yōu)選地，所述基質(zhì)是塑料。優(yōu)選地，所述固定的肽以點(diǎn)陣排列在表面上。優(yōu)選地，所述點(diǎn)陣包括許多離散的可尋址的空間編碼位點(diǎn)。優(yōu)選地，在點(diǎn)陣上的每個(gè)位點(diǎn)包括不同的固定的肽，并且更優(yōu)選地，每個(gè)位點(diǎn)包括肽的多個(gè)拷貝。在多種肽點(diǎn)陣中，在點(diǎn)陣上的不同的區(qū)域包括多種肽分子。優(yōu)選地，在點(diǎn)陣上的每個(gè)位點(diǎn)包括一種個(gè)體肽的多個(gè)拷貝。固定的肽分子的多種肽點(diǎn)陣可以使用本領(lǐng)域公知的技術(shù)生產(chǎn)。當(dāng)提及配體與固定的肽的結(jié)合時(shí)，術(shù)語(yǔ)結(jié)合意欲包括直接的或間接的，共價(jià)的或非共價(jià)的附著，除非另外明確地或通過(guò)上下文指明。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，共價(jià)附著可以是優(yōu)選的，但是通常，所需要的都是，在意欲使用所述基質(zhì)的條件下，例如，在需要其它配體受體相互作用的應(yīng)用中，配體保持與固定的肽結(jié)合。按照本發(fā)明的第二方面，提供用于結(jié)合配體的捕獲劑，其包括至少第一和第二肽，所述第一肽包括至少一個(gè)疏水氨基酸殘基和至少一個(gè)配體-結(jié)合部分，其中所述至少一個(gè)疏水氨基酸殘基和至少一個(gè)配體-結(jié)合部分位于肽的一級(jí)結(jié)構(gòu)中，以致所述第一肽包括疏水面，和基本上不疏水的配體-結(jié)合面。優(yōu)選地，所述第一和第二肽共價(jià)連接，以形成捕獲劑。優(yōu)選地，所述第一肽包括多個(gè)疏水氨基酸。優(yōu)選地，所述第二肽包括4-40個(gè)疏水氨基酸殘基，更優(yōu)選地6-25個(gè)，并且最優(yōu)選地6-12個(gè)。應(yīng)該理解，所述配體-結(jié)合部分可以包括使用本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的合成策略可以結(jié)合到肽中的任何適當(dāng)?shù)牟糠郑?，它可以選自羥基基團(tuán)、硫羥基、羧酸基團(tuán)、氨基基團(tuán)、酰胺基團(tuán)、胍基團(tuán)、咪唑基團(tuán)、芳族基團(tuán)、發(fā)色團(tuán)、熒光團(tuán)、同位素標(biāo)記、螯合基團(tuán)、半抗原以及許多其它的部分。優(yōu)選地，所述配體-結(jié)合部分包括至少一個(gè)氨基酸。更優(yōu)選地，所述配體-結(jié)合部分包括多個(gè)氨基酸。應(yīng)該理解，每種氨基酸單體可以是L-氨基酸、D-氨基酸、氨基酸模擬物、間隔氨基酸、P氨基酸或任何其它的手性氨基酸單體。優(yōu)選地，氨基酸是L-氨基酸和/或D-氨基酸。優(yōu)選地，每個(gè)氨基酸單體基本上是對(duì)映體純的。應(yīng)該理解，位于配體-結(jié)合面上的氨基酸還可以包括疏水殘基，例如氨基丁酰殘基。優(yōu)選地，所述第一肽包括這樣的一級(jí)結(jié)構(gòu)，g卩，其包括如圖l所示的交替的疏水和基本上不疏水氨基酸殘基。技術(shù)人員應(yīng)該理解，可以容易地設(shè)計(jì)導(dǎo)致側(cè)鏈的分布以形成疏水和基本上不疏水的面的其它的肽序列，例如，在疏水殘基之間可能存在3個(gè)不疏水氨基酸殘基，或者奇數(shù)氨基酸的任何組合。備選地，所述肽可以包括，例如，L-、D-、和p-氨基酸的組合，以形成疏水和基本上不疏水的面。優(yōu)選地，這樣放置以致它的側(cè)鏈位于配體-結(jié)合面上的每個(gè)氨基酸選自基本上由少于20種氨基酸，更優(yōu)選地少于12種氨基酸，甚至更優(yōu)選地少于6種氨基酸，并且最優(yōu)選地4種氨基酸組成的組。優(yōu)選地，所述第一肽鏈包括10%-90%的疏水氨基酸殘基，更優(yōu)選地，20%-80%，甚至更優(yōu)選地，30%-70%，并且最優(yōu)選地，40%-60%的疏水氨基酸殘基。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述第一肽包括50%的疏水氨基酸殘基。優(yōu)選地，形成疏水面的疏水氨基酸選自由亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸、纈氨酸、正纈氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸組成的組。更優(yōu)選地，所述疏水氨基酸是苯丙氨酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述捕獲劑位于疏水基質(zhì)上，以致所述基本上不疏水的配體-結(jié)合面易于配體-結(jié)合。優(yōu)選地，所述捕獲劑通過(guò)基質(zhì)與所述第一肽的疏水面之間的疏水相互作用而與疏水基質(zhì)結(jié)合。應(yīng)該理解，所述基質(zhì)可以是任何適當(dāng)?shù)氖杷|(zhì)，例如，通過(guò)疏水有機(jī)硫醇處理修飾的金，通過(guò)表面處理修飾的玻璃，或塑料。優(yōu)選地，所述基質(zhì)是塑料。備選地，在存在基本上水性的溶劑時(shí)，所述基質(zhì)可以包被在允許所述捕獲劑固定在其上的疏水化合物中。優(yōu)選地，所述捕獲劑包括包含第一和第二肽的肽二聚體。更優(yōu)選地，所述肽二聚體通過(guò)在第一和第二肽之間的共價(jià)連接而形成。優(yōu)選地，所述肽二聚體與疏水基質(zhì)結(jié)合。應(yīng)該顯而易見(jiàn)，所述肽二聚體可以由所述第一和第二肽在所述第一肽與疏水基質(zhì)接觸之前、同時(shí)或之后而組裝。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述肽二聚體在疏水基質(zhì)上組裝。優(yōu)選地，所述第二肽還包括至少一個(gè)疏水氨基酸殘基和至少一個(gè)非疏水氨基酸殘基，其中所述氨基酸位于肽的一級(jí)結(jié)構(gòu)中，以致所述氨基酸側(cè)鏈位于產(chǎn)生疏水面和基本上不疏水的配體-結(jié)合面的空間內(nèi)。優(yōu)選地，所述第二肽包括多個(gè)不疏水的氨基酸殘基。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述第二肽包括比第一肽更少的氨基酸，并且含有更少的疏水殘基，以致在所述肽和所述疏水面之間的相互作用相對(duì)較弱。在這一實(shí)施方案中，當(dāng)與第一肽二聚化時(shí)，所述第二肽只保留在疏水基質(zhì)上。技術(shù)人員應(yīng)該顯而易見(jiàn)，將它們保持在基質(zhì)上所需要的第一和第二肽的長(zhǎng)度和疏水氨基酸殘基的數(shù)目將取決于所述表面的疏水性以及在第一和第二肽中存在的疏水氨基酸，并且還取決于待結(jié)合的配體的性質(zhì)。技術(shù)人員還應(yīng)該容易地顯而易見(jiàn)，保持在基質(zhì)上的肽的量將取決于對(duì)所述基質(zhì)進(jìn)行清洗的嚴(yán)格性。優(yōu)選地，在肽固定后，例如，將所述基質(zhì)用在10mMtris-HCl(pH8.0)中的l.OMNaCl清洗。優(yōu)選地，所述第二肽在疏水面上包括l-6個(gè)疏水氨基酸殘基，更優(yōu)選地，2-5個(gè)，并且最優(yōu)選地，2-4個(gè)疏水氨基酸殘基。優(yōu)選地，所述第一和第二肽分別包含10個(gè)或更少的配體-結(jié)合殘基，其側(cè)鏈位于基本上不疏水的配體-結(jié)合面上；更優(yōu)選地，8個(gè)或更少；更優(yōu)選地，6個(gè)或更少；甚至更優(yōu)選地，4個(gè)或更少；并且最優(yōu)選地，3個(gè)或更少。優(yōu)選地，所述肽以本領(lǐng)域公知的組合方式由所述氨基酸組生成。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，按照一組法則生成所述肽，例如，所述法則可以確定肽中的每個(gè)氨基酸的最小和最大水平，或者可結(jié)合的疏水氨基酸的百分?jǐn)?shù)。優(yōu)選地，所述第一和第二肽在固相上合成，更優(yōu)選地，所述肽在用于第二方面之前從所述固相上分裂下來(lái)。肽以及它們的鹽和衍生物的合成，包括固相和液相肽合成，在本領(lǐng)域中是充分確定的。參見(jiàn)，例如，Stewart等，(1984)SolidPhasePeptideSynthesis(固相肽合成)(第2版)；和Chan(2000)"FMOCSolidPhasePeptideSynthesis,APracticalApproach(FMOC固相肽合成，一種實(shí)用方法)，"牛津大學(xué)出版社。肽可以使用自動(dòng)化肽合成儀(例如，Pioneer肽合成儀，應(yīng)用生物系統(tǒng)(AppliedBiosystems)，福斯特市，CA)而合成。例如，肽可以使用FMOC固相肽合成在Rink酰胺樹(shù)脂上制備，然后進(jìn)行三氟乙酸(95%)去保護(hù)作用并且從樹(shù)脂上分裂。應(yīng)該容易地顯而易見(jiàn)，所述至少第一和第二肽可以具有相同的或不同的一級(jí)氨基酸序列。還應(yīng)該顯而易見(jiàn)，所述第一和第二肽可以由第一和第二氨基酸組合成，并且每個(gè)氨基酸組可以是相同的或不同的。優(yōu)選地，所述第一和第二肽分別包含至少一個(gè)反應(yīng)性基團(tuán)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，在肽上存在的所述反應(yīng)性基團(tuán)反應(yīng)，以導(dǎo)致多聚體捕獲劑的形成。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述反應(yīng)性基團(tuán)可以在肽合成過(guò)程中被保護(hù)，并且在用于按照第二方面產(chǎn)生捕獲劑之前去保護(hù)。這樣的技術(shù)是本領(lǐng)域的技術(shù)人員公知的，例如，標(biāo)準(zhǔn)的基于FMOC的固相肽組裝。在這種技術(shù)中，產(chǎn)生具有保護(hù)的側(cè)鏈和游離氨基端的樹(shù)脂結(jié)合的肽。然后，在標(biāo)準(zhǔn)的肽合成條件下，在N端的氨基基團(tuán)可以與任何相容的羧酸/反應(yīng)性基團(tuán)綴合物反應(yīng)。例如，可以結(jié)合具有三苯甲基或甲氧基三苯甲基保護(hù)的硫羥基的半胱氨酸。用三氟乙酸去保護(hù)將在溶液中產(chǎn)生不保護(hù)的肽。應(yīng)該理解，可以應(yīng)用任何適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)，形成肽多聚體，例如，例如在環(huán)戊二烯基官能化的肽和馬來(lái)酰亞胺官能化的肽之間的狄爾斯-阿德?tīng)柗磻?yīng)，在硫羥基官能化的肽和馬來(lái)酰亞胺官能化的肽之間的米氏反應(yīng)，在硫羥基官能化的肽和含有活化的硫羥基(例如，用(硝基)硫代吡啶部分活化)的肽之間的反應(yīng)以形成二硫化物，在疊氮化物官能化的肽和硫代磷酸酯官能化的肽之間的Staudinger連接，以及在硫代酸酯和N-端半胱氨酸之間的天然化學(xué)連接。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述肽多聚體通過(guò)形成二硫鍵而形成。應(yīng)該理解，所述反應(yīng)性基團(tuán)可以位于所述第一和第二肽的一級(jí)肽結(jié)構(gòu)中的任何適當(dāng)?shù)奈恢茫?，所述反?yīng)性基團(tuán)可以位于一級(jí)肽序列中，以致它們位于所述肽的基本上不疏水的配體-結(jié)合面上，并且位于所述配體-結(jié)合位點(diǎn)的N-端側(cè)。備選地，所述反應(yīng)性基團(tuán)可以位于第一和第二肽的一級(jí)肽結(jié)構(gòu)中，以致它們位于所述肽的基本上不疏水的配體-結(jié)合面上，并且在所述第一肽中，位于配體-結(jié)合位點(diǎn)的N-端側(cè)，并且在所述第二肽中朝向配體結(jié)合位點(diǎn)的C-端側(cè)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述反應(yīng)性基團(tuán)可以位于第一和第二肽的一級(jí)肽結(jié)構(gòu)中，以致在所述第一肽中，它位于所述肽的基本上不疏水的配體-結(jié)合面上，并且朝向所述配體-結(jié)合位點(diǎn)的N-端側(cè)，并且在所述第二肽中，它位于所述配體-結(jié)合位點(diǎn)的相對(duì)(疏水)面，并且朝向所述配體-結(jié)合位點(diǎn)的C-端側(cè)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，在第一肽上的反應(yīng)性基團(tuán)位于在基本上不疏水的配體-結(jié)合面上的一級(jí)氨基酸結(jié)構(gòu)中，并且朝向所述配體-結(jié)合位點(diǎn)的N-端側(cè)，并且在第二肽中，在疏水面中，并且朝向所述配體-結(jié)合位點(diǎn)的N-端側(cè)，如在圖2中所示。優(yōu)選地，所述反應(yīng)性基團(tuán)選自，但不限于，硫羥基、馬來(lái)酰亞胺、環(huán)戊二烯、疊氮化物、硫代磷酸酯、硫代酸酯和(硝基)-硫代吡啶基活化的硫羥基。更優(yōu)選地，所述反應(yīng)性基團(tuán)是硫羥基。優(yōu)選地，當(dāng)所述反應(yīng)性基團(tuán)是硫羥基時(shí)，至少一個(gè)硫羥基是活化的硫羥基。優(yōu)選地，所述硫羥基用硫代硝基吡啶基或硫代吡啶基活化。應(yīng)該顯而易見(jiàn)，取決于在所述肽中存在的氨基酸殘基，所述捕獲劑將具有不同的特點(diǎn)。例如，氨基酸側(cè)鏈可以為配體-結(jié)合提供正電荷。優(yōu)選地，所述正電荷由下列各項(xiàng)提供賴氨酰殘基(在肽鏈和正電荷之間有4個(gè)CH2基團(tuán))，鳥(niǎo)氨酰殘基(在肽鏈和正電荷之間有3個(gè)CH2基團(tuán))，或者最優(yōu)選地，二氨基丁酰基殘基(在肽鏈和正電荷之間具有2個(gè)CH2基團(tuán))。所述氨基酸可以備選地為配體結(jié)合提供能夠作用為氫鍵供體和/或受體的羥基基團(tuán)。優(yōu)選地，所述羥基基團(tuán)由絲氨酰殘基(在肽鏈和OH基團(tuán)之間有一個(gè)CH2基團(tuán))提供，或者更優(yōu)選地，由高絲氨酰殘基(在肽鏈和OH基團(tuán)之間有2個(gè)CH2基團(tuán))提供。所述氨基酸可以為配體結(jié)合提供疏水部分。優(yōu)選地，丙氨酰殘基(在肽鏈和甲基基團(tuán)之間無(wú)CH2基團(tuán))，或更優(yōu)選地，氨基丁酰基殘基(在肽鏈和甲基基團(tuán)之間具有1個(gè)CH2基團(tuán))提供所述疏水部分。備選地，所述氨基酸可以為配體結(jié)合提供負(fù)電荷。優(yōu)選地，所述負(fù)電荷由谷氨?；鶜埢?在肽鏈和羧酸基團(tuán)之間有2個(gè)CH2基團(tuán))，或者更優(yōu)選地，天冬氨酰殘基(在肽鏈和羧酸基團(tuán)之間有一個(gè)CH2基團(tuán))提供。優(yōu)選地，第二方面的捕獲劑結(jié)合在基質(zhì)上，以產(chǎn)生點(diǎn)陣。應(yīng)該理解，所述點(diǎn)陣可以采取任何便利的形式。因此，本發(fā)明的方法適用于所有類型的"高密度"點(diǎn)陣，包括單分子點(diǎn)陣。優(yōu)選地，所述點(diǎn)陣包括許多離散的可尋址的空間編碼位點(diǎn)。優(yōu)選地，在所述點(diǎn)陣上的每個(gè)位點(diǎn)包括不同的捕獲劑，并且更優(yōu)選地，每個(gè)位點(diǎn)包括捕獲劑的多個(gè)拷貝。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述第一肽具有在SEQIDNol中列出的結(jié)構(gòu)(Phe-Gly)n陽(yáng)Phe-Cys-Phe-X-Phe畫(huà)Y-Phe-Z-Phe國(guó)Gly-Phe其中X，Y和Z是配體-結(jié)合殘基，并且Cys提供用于形成二聚體形成的親核硫羥基。所述第二肽具有在SEQIDNo2中列出的結(jié)構(gòu)CysS(N)P-X，-Phe-Y，畫(huà)Phe畫(huà)Z，-Phe其中X',Y',和Z'是配體-結(jié)合殘基，并且CysS(N)P是用于形成二聚體的活化的硫羥基(最優(yōu)選地，是用硫代硝基吡啶基或硫代吡啶基活化的)。應(yīng)該理解，前述優(yōu)選的實(shí)施方案只是舉例的方式，并且并不認(rèn)為是限制。熟練的技術(shù)人員應(yīng)該顯而易見(jiàn)，許多其它的反應(yīng)性基團(tuán)和激活基團(tuán)可以用于本發(fā)明。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，將按照本發(fā)明的第二方面的捕獲劑分散在適當(dāng)?shù)幕|(zhì)上，以形成組合的變化的二聚體的可尋址空間編碼點(diǎn)陣。優(yōu)選地，使用非接觸分散劑(例如，Piezorray系統(tǒng)，PerkinElmerLAS)，將所述肽單一分散在基質(zhì)上，并且在原位組裝。按照本發(fā)明的第三方面，提供在其上固定至少一種按照第二方面的捕獲劑的基質(zhì)。按照本發(fā)明的第四方面，還提供通過(guò)第一方面的方法衍生的基質(zhì)。按照本發(fā)明，還提供鑒定與目的配體結(jié)合的多聚體捕獲劑的方法，所述方法包括，產(chǎn)生按照本發(fā)明第二方面的組合的捕獲劑的點(diǎn)陣，將目的配體與所述點(diǎn)陣接觸，并且鑒定所述配體與哪一種捕獲劑結(jié)合。熟練的技術(shù)人員應(yīng)該顯而易見(jiàn)，所述配體與捕獲劑的結(jié)合可以以本領(lǐng)域已知的許多方法進(jìn)行鑒定，例如，可以將所述配體或所述捕獲劑標(biāo)記，以致可以鑒定在所述點(diǎn)陣上與所述配體結(jié)合的位置。例如，這種標(biāo)記可以是放射活性的或熒光標(biāo)記，例如，使用熒光團(tuán)。備選地，目的配體與捕獲劑的結(jié)合可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的各種其它技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，例如，熱量測(cè)定、吸收波譜、NMR方法、原子力顯微鏡和掃描隧道顯微鏡、電泳或?qū)游觥①|(zhì)譜、毛細(xì)管電泳、表面等離振子共振檢測(cè)、表面聲波感應(yīng)和許多基于微懸臂的方法。應(yīng)該理解，由于捕獲劑將結(jié)合的特異性配體將取決于形成所述捕獲劑的肽的長(zhǎng)度和序列，所以，本發(fā)明的多聚體捕獲劑和多聚體捕獲劑的點(diǎn)陣可以用來(lái)鑒定任何選擇的分析物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述配體包括真核細(xì)胞、原核細(xì)胞、病毒、噬菌體、朊病毒、孢子、花粉顆粒、過(guò)敏原、核酸、蛋白質(zhì)、肽、碳水化合物、脂質(zhì)、有機(jī)化合物、或無(wú)機(jī)化合物。所述配體優(yōu)選地是生理學(xué)或藥理學(xué)代謝物，并且最優(yōu)選地是在可以用作診斷性或預(yù)兆性衛(wèi)生保健標(biāo)記的人或動(dòng)物體液中的生理學(xué)或藥理學(xué)代謝物。本發(fā)明的其它目的、特征和強(qiáng)度將通過(guò)下述描述而清楚。此外，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)將參考附圖而從下述闡釋中顯而易見(jiàn)。附圖簡(jiǎn)述參考下述實(shí)驗(yàn)實(shí)施例和附圖，將進(jìn)一步理解本發(fā)明，在所述附圖中圖1顯示包括交替的疏水和非疏水氨基酸的肽。圖2顯示具有疏水面和基本上不疏水的配體-結(jié)合面的二聚體捕獲劑的實(shí)例。圖3是顯示各種疏水肽在96孔平板中的位置的圖示。圖4顯示表示各種肽在孔中的存在的圖3的96孔平板的熒光成像。圖5顯示圖4的400V掃描的定量結(jié)果。圖6A顯示表示多肽Pl-l到Pl-5和P2-l到P2-2在聚丙烯表面上的保持的熒光成像。圖6B顯示表示多肽Pl-l到Pl-5和P2-l到P2-2在聚丙烯表面上的保持的熒光成像。圖7顯示圖6A，6B的定量結(jié)果的圖示。圖8顯示表示沉淀在聚丙烯疏水表面上的肽2DOS-2的pH抗性的熒光成像。圖9顯示圖8的300V掃描的定量結(jié)果的圖示。圖10顯示表示在存在水性緩沖液時(shí)，沉淀在聚丙烯疏水表面上的肽2DOS-2的時(shí)間依賴性持續(xù)性的熒光成像。圖11顯示圖10的300V掃描的結(jié)果的圖示。圖12是顯示添加到平底和V-底聚丙烯96孔平板中的各種疏水肽的位置的圖示。圖13顯示進(jìn)行和不進(jìn)行清洗時(shí)，顯示疏水肽的保持的圖10的平板的熒光成像。圖14是關(guān)于V-底平板的圖13的500V掃描的結(jié)果的圖示。圖15是關(guān)于平底平板的圖13的500V掃描的結(jié)果的圖示。圖16是表示添加到聚丙烯和聚苯乙烯V-底96孔平板中的各種疏水肽的位置的圖示。圖17顯示進(jìn)行和不進(jìn)行清洗時(shí)，顯示疏水肽的保持的圖16的平板的熒光成像。圖18是顯示在清洗后各種肽在聚丙烯和聚苯乙烯平板上的保持的百分?jǐn)?shù)的圖示。圖19A顯示使用'液相'方法的實(shí)驗(yàn)的微量滴定平板的熒光成像。圖19B是在表19中所示的熒光成像的數(shù)據(jù)的圖示。圖20A顯示使用"共同干燥"方法的實(shí)驗(yàn)的微量滴定平板的熒光成像。圖20B是在表22中所示的熒光成像的數(shù)據(jù)的圖示。圖21顯示表示在聚丙烯薄片上二聚體形成的產(chǎn)量的熒光成像。圖22顯示肽二聚體的256-單元微點(diǎn)陣的熒光成像。實(shí)施發(fā)明的最佳模式當(dāng)用于本文時(shí)，術(shù)語(yǔ)間隔氨基酸是指其側(cè)鏈在配體結(jié)合中不起作用的氨基酸、合成的氨基酸、氨基酸類似物或氨基酸模擬物。當(dāng)用于本文時(shí)，術(shù)語(yǔ)捕獲劑是指具有某種結(jié)構(gòu)的肽分子，所述結(jié)構(gòu)以致當(dāng)使得配體與所述捕獲劑接觸時(shí)，配體與其結(jié)合。當(dāng)用于本文時(shí)，術(shù)語(yǔ)多聚體捕獲劑是指包括至少兩個(gè)連接的亞基的捕獲劑。當(dāng)用于本文時(shí)，術(shù)語(yǔ)肽是指包括2個(gè)或更多個(gè)氨基酸殘基、合成的氨基酸、氨基酸類似物或氨基酸模擬物、或它們的任何組合的鏈。術(shù)語(yǔ)肽和多肽在本說(shuō)明書(shū)中互換地使用。當(dāng)用于本文時(shí)，術(shù)語(yǔ)基本上對(duì)映體純的表示，所述殘基包括基本上一種類型的異構(gòu)體，任何其它的異構(gòu)體形式只作為雜質(zhì)存在。當(dāng)用于本文時(shí)，術(shù)語(yǔ)以有利于配體-結(jié)合的方式位于空間內(nèi)，是指組成多聚體捕獲劑的所述肽的側(cè)鏈這樣放置，以致它們能夠與配體接觸并且相互作用。當(dāng)用于本文時(shí)，術(shù)語(yǔ)基本上不疏水意指基本上包括比疏水殘基更多的親水殘基。實(shí)施例1合成下述系列的肽，以證明當(dāng)與所述有機(jī)溶劑層或疏水表面接觸時(shí)，在水性溶劑中通過(guò)熵作用的推動(dòng)，肽自我組裝到有機(jī)溶劑層中或疏水表面上。所有的肽在N-端用羅丹明染料TAMRA標(biāo)記。使用5-TAMRA和6-TAMRA異構(gòu)體的混合物進(jìn)行標(biāo)記。<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>在下文中，在紙的平面前突出的殘基側(cè)鏈表示組合的變化的'配體-結(jié)合面'。在紙的平面后突出的殘基側(cè)鏈表示'疏水面'(或陰性對(duì)照殘基)。在肽2DOS-l到2DOS-8組中，已經(jīng)使用了四種側(cè)鏈(天冬氨酰、丙氨酰、絲氨酰和賴氨酰)的混合物。在肽2DOS-9到2DOS-16組中，已經(jīng)使用了四種疏水(天冬氨酰)鏈。在肽2DOS-l到2DOS-4組中和肽2DOS-9到2DOS-12組中，已經(jīng)將5種殘基側(cè)鏈用于'疏水面'(或陰性對(duì)照殘基)。在肽2DOS-5到2DOS-8組中和肽2DOS-13到2DOS-16組中，已經(jīng)將3種殘基側(cè)鏈用于'疏水面，(或陰性對(duì)照殘基)。對(duì)于肽2DOS-1,2DOS-5,2DOS-9，和2DOS-13,正亮氨酰殘基已經(jīng)用于'疏水面，。對(duì)于肽2DOS-2,2DOS-6,2DOS-10，和2DOS-14，苯丙氨酰殘基己經(jīng)用于'疏水面'。對(duì)于肽2DOS-3,2DOS-7,2DOS-11，和C-OHi,o吸收Q墨0-2DOS-15，絲氨酰殘基已經(jīng)用作'疏水面'的弱陰性對(duì)照。對(duì)于肽2DOS-4,2DOS-8,2DOS-12,和2DOS-16,天冬氨酰殘基已經(jīng)用作'疏水面，的強(qiáng)陰性對(duì)照表1<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>Asp-C使用標(biāo)準(zhǔn)FMOC化學(xué)(Alta生物科學(xué))，以2pmol規(guī)格合成肽，并且在50%(v/v)水性乙腈中溶解至10pM。然后，研究肽2DOS-l到2DOS-16在疏水面(聚丙烯微量滴定平板的孔)上的保留。在50%(v/v)水性乙腈中的10mMtris-HCl(pH8.0)用作肽和TAMRA的溶劑。將10jLiM肽2DOS-l至U2DOS-16和10pMTAMRA的100pl等分試樣置于Costar微量滴定平板的孔中，如圖3所示。在TyphoonTrioPlus可變模式成像儀(安瑪西亞生物科學(xué))上，使用綠色(532nm)激光和580BP30濾器，在下文指示的PMT電壓和正常靈敏度下，在200um分辨率將所述微量滴定平板成像。掃描高度設(shè)置在+3mm，并且在掃描過(guò)程中將樣品擠壓。允許所述肽在暗處蒸發(fā)干燥過(guò)夜，并且將所述微量滴定平板如上文所述再次掃描。然后，將孔用250pl水清洗10次。將殘留的平面-結(jié)合的肽最后重懸在100pl在50%(v/v)水性乙腈中的10mMtris-HCl(pH8.0)中，并且將所述微量滴定平板如上文所述再次掃描。使用ImageQuantTLv2003.03(安瑪西亞生物科學(xué))分析熒光成像。在實(shí)驗(yàn)的三個(gè)階段在600V,500V,400V,和300V的PMT電壓掃描的微量滴定平板的熒光成像顯示在圖4中。定量數(shù)據(jù)(使用來(lái)自400V掃描的數(shù)據(jù))在表2中給出，并且在圖5中圖示。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>結(jié)果表明苯丙氨酰殘基導(dǎo)致比正亮氨酰殘基更大的保留。它們還表明具有5個(gè)疏水'錨定殘基'的肽比具有3個(gè)疏水'錨定殘基'的等價(jià)的肽保留得更好。將'配體-結(jié)合'殘基從天冬氨酰、苯丙氨酰、絲氨酰和賴氨酰改變成一排4個(gè)天冬氨酰殘基導(dǎo)致在聚丙烯表面上的保留的下降。進(jìn)行其它的實(shí)驗(yàn)，研究在表3中所示的肽Pl-l到Pl-5和P2-l到P2-2在聚丙烯表面上的保留。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>在使用之前，將聚丙烯薄層用50。/。(v/v)水性乙腈擦拭。使用Piezorray系統(tǒng)(PerkinElmerLAS)，將8x重復(fù)的20nl體積的在二甲亞砜(DMSO)中的1^M肽P1-1到Pl-5和P2-1到P2-2以及TAMRA以1mm的間隔分散到3"xl"xlmm的聚丙烯薄層上。使用'附帶槽(sideshoot)，選擇預(yù)先分散500滴，并且將調(diào)諧設(shè)置在72V3(His。在TyphoonTrioPlus可變模式成像儀(安瑪西亞生物科學(xué))上，使用綠色(532nm)激光和580BP30濾器，在600VPMT電壓以及正常靈敏度下，在10pm分辨率將載玻片成像。在壓盤(pán)(platen)設(shè)置掃描高度，并且在掃描過(guò)程中將樣品擠壓。使用ImageQuantTLv2003.03(安瑪西亞生物科學(xué))分析熒光成像。然后，將所述載玻片的下半部分(包含檢測(cè)點(diǎn)陣)在含有10mMtris-HCl(pH8.0)的100ml1MNaCl中洗滌1分鐘，并且如上文所述重新掃描。然后，將所述載玻片的同一部分在含有10mMtris-HCl(pH8.0)的100ml1MNaCl中第二次洗滌30分鐘，并且如上文所述重新掃描。然后，將所述載玻片的同一部分在100ml水中第三次洗滌30分鐘，并且如上文所述重新掃描。各種點(diǎn)陣的熒光成像顯示在圖6A，6B中。關(guān)于在圖6A，6B中所示的各種排列的肽的熒光值顯示在下表4-6在第一次洗滌之后表4a<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>平均載玻片背景=146,691,673表4b<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>平均載玻片背景=154,497,959在第二次洗滌之后:表5a<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>表5b<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>平均載玻片背景-132,447,303在第三次洗滌之后:表6a<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>表6b<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>這些結(jié)果圖示在圖7中。附圖清楚地表明，存在與增加的肽鏈長(zhǎng)度有關(guān)的肽的增加的保留時(shí)間的梯度?？梢郧宄乜闯?，具有19個(gè)氨基酸的鏈長(zhǎng)度的肽Pl-5具有最高的保留。實(shí)施例2研究了在聚丙烯疏水表面上沉淀的肽2DOS-2(見(jiàn)上文)的pH抗性:在Costar微量滴定平板的孔中，將12份在50%(v/v)水性乙腈中的10mMtris-HCl(pH8.0)中的肽2DOS-2的50pl等分試樣干燥。允許肽樣品在暗處蒸發(fā)至干燥。按照在表7中所示的方案，在室溫下，將在開(kāi)始11個(gè)孔中的干燥的肽樣品用200pi100mM磷酸緩沖液溫育30分鐘表7<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>將所有的上清吸出，并且將在所有12個(gè)孔中的殘留的表面-結(jié)合的肽最后重懸在50^在50%(v/v)水性乙腈中的10mMtris-HCl(pH8.0)中，并且在TyphoonTrioPlus可變模式成像儀(安瑪西亞生物科學(xué))上，使用綠色(532nm)激光和580BP30濾器，在下文指定的PMT電壓以及正常靈敏度下，在200^m分辨率將所述微量滴定平板成像。掃描高度設(shè)置在+3mm，并且在掃描過(guò)程中將樣品擠壓。使用ImageQuantTLv2003.03(安瑪西亞生物科學(xué))分析熒光成像。表示沉淀在聚丙烯上的2DOS-2的pH抗性的熒光成像顯示在圖8中。關(guān)于肽2DOS-2保留的定量數(shù)據(jù)(使用來(lái)自300V掃描的數(shù)據(jù))在表8中給出，并且在圖9中圖示。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>118.52815,706661,78181結(jié)果表明肽2DOS-2在聚丙烯表面上的保留因此在寬范圍的pH值內(nèi)是穩(wěn)定的，在低和高pH具有最大保留，并且在約pH6.5具有最小保留。實(shí)施例3研究了在水性緩沖液的存在下，在聚丙烯疏水表面上沉淀的肽2DOS-2(見(jiàn)上文)的時(shí)間依賴性保持性，如下文所示將12份在75%(v/v)水性乙腈中的5mMtris-HCl(pH8.0)中的5pM肽2DOS-2的100pl等分試樣分散在Costar微量滴定平板的上行孔中。允許肽樣品在暗處蒸發(fā)至干燥。在室溫下，將在孔1-10中的干燥的肽樣品用250^在10mMtris-HCl(pH8.0)中的1MNaCl溫育下文指定的時(shí)間。在溫育之后，將所有的上清上下吹吸8次，然后，將上清移出，并且置于微量滴定平板的底行的孔中。在全部12個(gè)孔中的殘留的表面-結(jié)合的肽最后重懸在50pi在50%(v/v)水性乙腈中的10mMtris-HCl(pH8.0)中，并且在TyphoonTrioPlus可變模式成像儀(安瑪西亞生物科學(xué))上，使用綠色(532nm)激光和580BP30濾器，在下文指定的PMT電壓以及正常靈敏度下，在200[im分辨率將所述微量滴定平板成像。掃描高度設(shè)置在+3mm，并且在掃描過(guò)程中將樣品擠壓。使用ImageQuantTLv2003.03(安瑪西亞生物科學(xué))分析熒光成像。在水性緩沖劑的存在下，對(duì)于沉淀在聚丙烯疏水表面上的肽2DOS-2的時(shí)間依賴性保持的熒光數(shù)據(jù)顯示在圖10中。對(duì)于肽2DOS-2保留的定量數(shù)據(jù)(使用來(lái)自300V掃描的數(shù)據(jù))顯示在表9和圖11中。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>結(jié)果表明，在1MNaCl/10mMtris-HCl(pH8.0)中，對(duì)于延長(zhǎng)的時(shí)間階段，肽2DOS-2在疏水聚丙烯表面上的保留是穩(wěn)定的。實(shí)施例4研究了肽2DOS-l到2DOS-16(見(jiàn)上文)在不同幾何學(xué)的聚丙烯孔上的保留將在50%(v/v)水性乙腈中的10mMtris-HCl(pH8.0)用作肽和TAMRA的溶劑。按照在圖12中所示的下述方案，將10^M肽2DOS-l到2DOS-16和10pMTAMRA的1pi等分試樣吸取到CostarV-底聚丙烯微量滴定平板和Greiner平底聚丙烯微量滴定平板的孔中允許所述肽樣品在暗處蒸發(fā)至干燥。然后，在室溫下，將在微量滴定平板的頂部?jī)尚械碾臉悠吩?50^1在10mMtris-HCl(pH8.0)中的1MNaCl中溫育15分鐘。在溫育之后，在移出上清之前，在每個(gè)孔中，將洗滌緩沖液上下吹吸8次。然后，將洗滌的和未處理的肽樣品重懸在50^在50%(v/v)水性乙腈中的10mMtris-HCl(pH8.0)中。在TyphoonTrioPlus可變模式成像儀(安瑪西亞生物科學(xué))上，使用綠色(532nm)激光和580BP30濾器，在下文指定的PMT電壓以及正常靈敏度下，在200^m分辨率將所述微量滴定平板成像。在壓盤(pán)設(shè)置掃描高度，并且在掃描過(guò)程中將樣品擠壓。使用ImageQuantTLv2003.03(安瑪西亞生物科學(xué))分析熒光成像。在600V和500V的PMT電壓掃描的平板的熒光成像顯示在圖13中。對(duì)于V-底孔的定量數(shù)據(jù)(使用來(lái)自500V掃描的數(shù)據(jù))顯示在表10和圖14中表10<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>對(duì)于平底孔的定量數(shù)據(jù)(使用來(lái)自500V掃描的數(shù)據(jù))顯示在表ll和圖15中表11<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>結(jié)果表明，肽2DOS-l到2DOS-16在不同幾何學(xué)的聚丙烯孔上的保留是相當(dāng)?shù)?，這表明，保留不取決于在具有V-底幾何學(xué)的孔中的干燥。實(shí)施例5比較了肽2DOS-l到2DOS-16(見(jiàn)上文)在聚丙烯和聚苯乙烯表面上的保留將在75%(v/v)水性乙腈中的5mMtris-HCl(pH8.0)用作肽和TAMRA的溶劑。按照在圖16中所示的方案，將5pM肽2DOS-l到2DOS-16和5TAMRA的20^等分試樣吸入到CostarV-底聚丙烯微量滴定平板、GreinerV-底聚丙烯微量滴定平板、和GreinerV-底聚苯乙烯微量滴定平板的孔中允許所述肽樣品在暗處蒸發(fā)至干燥。然后，在室溫下，將在所述微量滴定平板的頂部?jī)尚械碾臉悠吩?50pl在10mMtris-HCl(pH8.0)中的1MNaCl中溫育15分鐘。在溫育之后，在移出上清前，在所述孔中，將洗滌緩沖液上下吹吸8次。然后，將洗滌的和未處理的肽樣品重懸在50^在50%(v/v)水性乙腈中的10mMtris-HCl(pH8.0)中。在TyphoonTrioPlus可變模式成像儀(安瑪西亞生物科學(xué))上，使用綠色(532nm)激光和580BP30濾器，在下文指定的PMT電壓以及正常靈敏度下，在200nm分辨率將所述微量滴定平板成像。掃描高度設(shè)置在+3mm，并且在掃描過(guò)程中將樣品擠壓。使用ImageQuantTLv2003.03(安瑪西亞生物科學(xué))分析熒光成像。在600V,500V，和400V的PMT電壓掃描的載玻片的熒光成像顯示在圖17中洗滌在平板的上半部分的肽樣品，并且不處理在平板的下半部分的肽樣品。關(guān)于Costar聚丙烯V-底孔的定量數(shù)據(jù)(使用來(lái)自400V掃描的數(shù)據(jù))在表12中給出-<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>表13<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>關(guān)于Greiner聚苯乙烯V-底孔的定量數(shù)據(jù)(使用來(lái)自400V掃描的數(shù)據(jù))在表14中給出<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>8種肽的完整組顯示在表15和16中:表15<table>tableseeoriginaldocumentpage159</column></row><table>表16<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>為了研究二聚體形成，使用肽SB-1到SB-4和TLSP-1到TLSP-4。使用了兩種不同的方法。在'液相'方法中，將SB肽干燥到聚丙烯表面上。然后，在洗滌孔和測(cè)定保留的熒光物質(zhì)之前，將TLSP肽添加到水性溶液中。在'共同-干燥，方法中，將SB肽與TLSP肽混合，并且然后，在洗滌孔和測(cè)定保留的熒光物質(zhì)之前，將二者一起干燥到聚丙烯表面上。本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以容易地實(shí)現(xiàn)另外一種方法，在所述方法中，將SB肽與TLSP肽在水性溶液中混合，并且允許反應(yīng)，以產(chǎn)生肽二聚體，然后將所述肽二聚體干燥到聚丙烯表面上。在所述4夜相'方法中，按照表17所示的方案，在CostarV-底微量滴定板的孔中，添加50pl在50%(v/v)水性乙腈中的1mMNaH2P04中的lOpM肽SB-1到SB-4。<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>將所述樣品在暗處干燥過(guò)夜。然后，按照在表18中所示的方案，將50pl在10mMNaH2P04中的100肽TLSP-1到TLSP-4加入到孔中。表18<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>將所述樣品在室溫下在暗處溫育1小時(shí)。移出上清，并且將孔用200^在10mMtris-HCl(pHS.0)中的1MNaCl洗滌兩次。最后向所述孔中加入50|Lil在50%(v/v)水性乙腈中的10mMtris-HCl(pH8.0)中。在TyphoonTrioPlus可變模式成像儀(安瑪西亞生物科學(xué))上，使用綠色(532nm)激光和580BP30濾器，在500VPMT電壓以及正常靈敏度下，在200^m分辨率將微量滴定平板成像。掃描高度設(shè)置在+3mm，并且在掃描過(guò)程中將樣品擠壓。使用ImageQuantTLv2003.03(安瑪西亞生物科學(xué))分析熒光成像。在'共同-干燥'方法中，按照在表19中所示的方案，將50pl在50。/。(v/v)水性乙腈中的1mMNaH2P04中的10pM肽SB-l到SB-4加入到CostarV-底微量滴定平板的孔中表19<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>按照在表20中所示的方案，將50|^在50%(v/v)水性乙腈中的1mMNaH2P04中的100肽TLSP-1到TLSP-4加入到孔中表20<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>將所述樣品在暗處干燥過(guò)夜。然后，將所述孔用200pi在10mMtris-HCl(pH8.0)中的1MNaCl洗滌兩次。最后向所述孔中加入50|al在50%(v/v)水性乙腈中的10mMtris-HCl(pHS.O)。在TyphoonTrioPlus可變模式成像儀(安瑪西亞生物科學(xué))上，使用綠色(532nm)激光和580BP30濾器，在500VPMT電壓以及正常靈敏度下，在200pm分辨率將所述微量滴定平板成像。掃描高度設(shè)置在+3mm，并且在掃描過(guò)程中將樣品擠壓。使用ImageQuantTLv2003.03(安瑪西亞生物科學(xué))分析熒光成像。來(lái)自使用'液相'方法的實(shí)驗(yàn)的關(guān)于微量滴定平板的熒光成像顯示在圖19A中。關(guān)于'液相'方法的熒光數(shù)據(jù)在表21中給出表21<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>對(duì)于來(lái)自使用'共同-干燥'方法的實(shí)驗(yàn)的微量滴定平板的熒光成像顯示在圖20A中。關(guān)于'共同-干燥'方法的熒光數(shù)據(jù)在表22中給出表2<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>二聚體的產(chǎn)量通過(guò)熒光標(biāo)記的肽的保留而測(cè)定，其取決于可以結(jié)合聚丙烯表面和熒光標(biāo)記的肽的未標(biāo)記的肽的存在。對(duì)于所述'液相方法'，二聚體產(chǎn)量比^共同-干燥'方法的低，但是關(guān)于二聚體形成的化學(xué)特異性更好。當(dāng)表面肽具有游離的硫羥基，并且溶液肽(solutionpeptide)具有S-硝基吡啶基活化的硫羥基時(shí)，觀察到最大程度的二聚體形成。當(dāng)表面肽具有S-硝基吡啶基活化的硫羥基，并且溶液肽也具有S-硝基吡啶基活化的硫羥基時(shí)；當(dāng)表面肽具有游離的硫羥基，并且溶液肽也具有游離的硫羥基時(shí)；并且當(dāng)表面肽具有S-硝基吡啶基活化的硫羥基，并且溶液肽具有游離的硫羥基時(shí)，也觀察到二聚體形成。與游離硫羥基偶聯(lián)的游離的硫羥基可以是由于簡(jiǎn)單的需氧氧化作用，形成二硫鍵而導(dǎo)致。S-硝基吡啶基活化的硫羥基與S-硝基吡啶基活化的硫羥基的偶聯(lián)可以是不完全硫羥基活化的結(jié)果，留下一些游離的硫羥基能夠與剩余的S-硝基吡啶基活化的硫羥基反應(yīng)的結(jié)果，或者是一些其它的機(jī)制的結(jié)果。關(guān)于'共同-干燥'方法的結(jié)果反映了上文所述的那些。使用這種方法，二聚體產(chǎn)量通常更高，但是非特異性結(jié)合也是更高的。特別地，在附著到表面上的羥基化肽和含有游離硫羥基和S-硝基吡啶基活化的硫羥基的溶液肽之間觀察到一些反應(yīng)性。實(shí)施例7在這一實(shí)施例中，使用Piezorray(PerkinElmerLAS)不接觸分散器，在平面塑料表面上構(gòu)建肽二聚體。Piezorray(PerkinElmerLAS)專門(mén)設(shè)計(jì)用于吸取納升體積到密集的點(diǎn)陣中。通過(guò)壓電槍頭控制液體體積。所述Piezorray系統(tǒng)含有源平板固定器、超聲洗滌盆、計(jì)算機(jī)和監(jiān)測(cè)儀、以及用于系統(tǒng)液體的瓶子。聚丙烯薄層從SBA塑料0^://\￥^^^&丄0.111</,Propylex天然聚丙烯薄層2440x1220x1mm)獲得，并且在使用前，用50%(v/v)水性乙腈擦拭。按照在表23中所示的方案，使用Piezorray系統(tǒng)，將5nl在50%(v/v)水性乙腈中的lmMNaH2P04中的lOOixM肽SB-l和SB-3或溶劑對(duì)照的ix10x10點(diǎn)陣分散到切成3"xl，，的1mm的聚丙烯薄層上。表23_在5(H(v/v)水性乙腈中的lmMNaH2P04在50%(v/v)水性乙腈中的lmMNaH2PO.肽SB-1肽SB-1肽SB-3肽SB-3然后按照在表24中所示的方案，使用Piezorray系統(tǒng)，將5nl在50%(v/v)水性乙腈中的lmMNaH2PO4中或在50。/。(v/v)水性乙腈和10%(v/v)甘油中的lmMNaH2P04的100pM肽TLSP-4的6個(gè)10x10點(diǎn)陣分散到先前的點(diǎn)上表24月太TIjSP-4在IOS甘油中的肽TLSP-4肽TLSP-4在10%甘油中的肽TLSP-4肽TLSP-4在10%甘油中的肽TLSP-4將所述樣品在室溫下在暗處溫育30分鐘。然后，將載玻片在100ml在10mMtris-HCl(pH8.0)中的50mMNaCl中清洗，然后在所述載玻片上流過(guò)自來(lái)水1分鐘。在TyphoonTrioPlus可變模式成像儀(安瑪西亞生物科學(xué))上，使用綠色(532nm)激光和580BP30濾器，在400VPMT電壓以及正常靈敏度下，在10pm分辨率將所述微量滴定平板成像。在壓盤(pán)設(shè)置掃描高度，并且在掃描過(guò)程中將樣品擠壓。使用ImageQuantTLv2003.03(安瑪西亞生物科學(xué))分析熒光成像。關(guān)于所述聚丙烯載玻片的熒光成像在圖21中顯示二聚體的產(chǎn)量通過(guò)熒光標(biāo)記的肽停留而測(cè)定，其取決于可以與所述聚丙烯表面和熒光標(biāo)記的肽二者結(jié)合的未標(biāo)記的肽的存在。因此，當(dāng)所述表面肽具有游離硫羥基，并且所述溶液肽具有S-硝基吡啶基活化的硫羥基時(shí)，觀察到二聚體形成。簡(jiǎn)單的方法(無(wú)甘油防止揮發(fā))給出更高的二聚體產(chǎn)量。實(shí)施例8在本實(shí)施例中，平行構(gòu)建了包括肽L1-P1-1到16和Ll-P2-1到16的二聚體的20種256-單元的微點(diǎn)陣。將1mm聚丙烯薄層切成136mmx80mm，用玻璃紙輕輕磨光，并且在使用前用50。/。(v/v)水性乙腈擦拭。使用Piezorray系統(tǒng)(PerkinElmerLAS)，按照表25所示，將18x6nlPl肽的等分試樣以0.72mm的間隔排列在聚丙烯載玻片的列上。表25<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>DMSO=二甲亞砜TCEP=三(2-羧基乙基)膦Pl肽的序列'TAMRA-Phe-Gly-Phe-Gly-Phe-Gly-Phe-Gly-Phe-Gly-Phe-Ser-Phe-Ala-Phe-Asp-Phe-Gly-PheL1-P1-2L1-P1-3Phe-Gly-Phe-Gly-Phe-Gly-Ph&-Qy-Phe*G(y-Phe-Gly-Phe-Gly-Phe-Cys-Phe-DAB-Phe-At>u-Phe-Gly-PheU-P1"4Phe國(guó)Gly-Phe-Qy-Phe-Giy-Phe-Qy-Phe-Gly-Phe-Gly-Phe-G)y-Phe-Cys-Phe-DAB-Phe-Asp-Phe-Qy-PheL1-P1-7Phe-Gly-Phe-Gly-Phe-Gly-Phe-Gly-Phe-Gly-Phe-Gly-Phe-Gly-Phe-Cys-Phe-Hse-Phe-Abu-Phe-Gly-PheL1-P1-8PheC^y-Phe-Gly-Phe-Giy-Phe-Gly-Phe-C^y-Ph—Gly-Phe-Gly-Phe-Cys-Phe-Hse-Ph&-AsP"Phe-Gly-PheLi-pi-9Phe-Gly-Phe-Gly-Phe-G餘y-Phe-Gfy-Phe-Gly-Phe"Gly-Phe"Gly-Phe-Cys-Phe-Abu-Phe^DAB-Phe-Gly-PheL1-P1.11^-01六？^-(3~-9卜&01>^^$-0^^-3~^^-(5^^&-3~-1^-0:^-1^^1^卞|16^1>1>911&-3~-^16Phe-G^PW&-G、y-PV^-Giy-Ph&-G、y-Ph&-G、y-Ph&-G、y-Phe-G^Phe-Cys-Phe-Abu-Phe-Asp-Phe-G、y-PheL1-P1-13'Phe-Gfy-Phe-Gly-Phe-Gly-Phe^Gly-Phe-Gly-Phe-Gy-Phe-Gly-Phe-Cys-Re-^sp-Phe"DAB-Phe-G*y-PheL1-P1-15Phe-G,y-Phe-G,y-Ph&-G，y-Phe-Gly-Phe-Gly-Phe-Gly-Phe-Gly-Phe-Cys-Pf)e-Asp-Phe-Abu.Phe-Gly-Phe在樣品揮發(fā)后，使用Piezorray系統(tǒng)(PerkinElmerLAS)，按照表26所示，將18x12nl在90。/。(v/v)DMSO，1mMtris-HCl(pH8.0)中的Ll-P2肽的等分試樣以0.72mm的間隔排列在聚丙烯載玻片的行上。表26<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>在樣品揮發(fā)之后，將所述載玻片在50ml含有0.1%(v/v)吐溫-20的10mMtris-HCl(pH8.0)中清洗10分鐘。在TyphoonTrioPlus可變模式成像儀(安瑪西亞生物科學(xué))上，使用綠色(532nm)激光和580BP30濾器，在500VPMT電壓以及正常靈敏度下，在10[im分辨率將所述微量滴定平板成像。在壓盤(pán)設(shè)置掃描高度。使用ImageQuantTLv2003.03(安瑪西亞生物科學(xué))分析熒光成像。關(guān)于二聚體和對(duì)照點(diǎn)的18x18點(diǎn)陣的熒光成像顯示在圖22中。對(duì)于分散在點(diǎn)陣上的每一L1-P1肽列，熒光信號(hào)是可觀察到的。這表明，所述U-P1肽的每一種已經(jīng)成功地分散，并且能夠形成二聚體。對(duì)于分散到點(diǎn)陣上的每一L1-P1肽行，熒光信號(hào)也是可觀察到的。這表明，所述L1-P1肽的每一種已經(jīng)成功地分散，并且能夠形成二聚體。與關(guān)于用競(jìng)爭(zhēng)L1-P1肽硫羥基的未標(biāo)記的P2肽和TAMRA-標(biāo)記的P2肽構(gòu)建的16x16點(diǎn)陣的二聚體熒光相比較，只用TAMRA-標(biāo)記的P2肽的樣品的二聚體熒光更高。這表明，所有的Ll-P2肽己經(jīng)成功地與它們的TAMRA-標(biāo)記的負(fù)體競(jìng)爭(zhēng)，并且因此成功地在全部16種L1-P1肽和全部16種Ll-P2肽之間形成肽二聚體。這樣描述了本發(fā)明，應(yīng)該顯而易見(jiàn)，相同的方法可以以許多方式變化。不應(yīng)該認(rèn)為這樣的變化背離本發(fā)明的精神和范圍，并且對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的所有這樣的改進(jìn)都意欲包含在后附的權(quán)利要求的范圍內(nèi)。工業(yè)適用性本發(fā)明提供具有增加的序列可變性的合成的捕獲劑。所述捕獲劑可以官能化各種表面，例如，玻璃或硅，以允許配體與表面的結(jié)合，或者形成各種類型的點(diǎn)陣。權(quán)利要求1.一種使基質(zhì)官能化的方法，其包括將至少一種多聚體肽固定在所述基質(zhì)上，其中，所述至少一種多聚體肽包括至少第一和第二肽鏈，所述第一肽鏈包括至少一個(gè)疏水氨基酸殘基和至少一個(gè)官能化部分，其中所述至少一個(gè)疏水氨基酸殘基和至少一個(gè)官能化部分位于所述肽的一級(jí)結(jié)構(gòu)中，以致形成疏水面，和包括所述官能化部分的基本上不疏水的面，并且其中，所述肽與所述基質(zhì)的接觸使得所述肽固定在其上。2.按照權(quán)利要求l的方法，其中，所述基質(zhì)是疏水基質(zhì)。3.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述基質(zhì)包被在疏水層中。4.按照權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的方法，其中所述第一肽鏈通過(guò)在所述基質(zhì)和所述肽的疏水面之間的疏水相互作用而固定在所述基質(zhì)上。5.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中，其側(cè)鏈形成疏水面的疏水氨基酸選自由亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸、纈氨酸、正纈氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸組成的組。6.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中所述疏水氨基酸是苯丙氨酸。7.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中每個(gè)疏水氨基酸單體基本上是對(duì)映體純的。8.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中，所述官能化部分包括選自包括下列各項(xiàng)的組的至少一個(gè)氨基酸L-氨基酸、D-氨基酸、氨基酸模擬物、間隔氨基酸、(3氨基酸或任何其它的手性氨基酸單體。9.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中，形成官能化部分的每個(gè)氨基酸單體基本上是對(duì)映體純的。10.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中，所述第一肽鏈包括包含交替的疏水和基本上不疏水氨基酸殘基的一級(jí)結(jié)構(gòu)。11.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中所述第一肽鏈包括20%-80%的疏水氨基酸殘基。12.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中，所述官能化部分包括10個(gè)或更少的氨基酸殘基。13.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中，所述多聚體肽包括包含第一和第二肽鏈的肽二聚體。14.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中，所述肽二聚體在所述疏水基質(zhì)上組裝。15.按照權(quán)利要求13或14的方法，其中，所述第二肽鏈還包括至少一個(gè)疏水氨基酸殘基和至少一個(gè)不疏水的氨基酸殘基，其中所述氨基酸位于肽的一級(jí)結(jié)構(gòu)中，以致氨基酸側(cè)鏈這樣放置，以產(chǎn)生疏水面和包括所述官能化部分的基本上不疏水的面。16.按照權(quán)利要求13到15中任一項(xiàng)的方法，其中，所述第二肽鏈包括比所述第一肽鏈更少的氨基酸。17.按照權(quán)利要求13到16中任一項(xiàng)的方法，其中，所述第二肽鏈包括l-6個(gè)疏水氨基酸殘基。18.按照權(quán)利要求13到17中任一項(xiàng)的方法，其中，所述第二肽鏈包含IO個(gè)或更少的氨基酸殘基，所述氨基酸殘基形成官能化部分。19.按照權(quán)利要求13到18中任一項(xiàng)的方法，其中，所述第一和第二肽鏈分別包含至少一個(gè)反應(yīng)性基團(tuán)。20.按照權(quán)利要求19的方法，其中，所述在第一肽鏈上的反應(yīng)性基團(tuán)位于在所述基本上不疏水的面上的一級(jí)氨基酸結(jié)構(gòu)中，并且朝向所述官能化部分的N-端側(cè)，并且在所述第二肽鏈中，位于所述疏水面中，并且朝向所述官能化部分的N-端側(cè)。21.按照權(quán)利要求19或20的方法，其中，所述反應(yīng)性基團(tuán)是選自由下列各項(xiàng)組成的組硫羥基、馬來(lái)酰亞胺、環(huán)戊二烯、疊氮化物、硫代磷酸酯、硫代酸酯和(硝基)硫代吡啶基活化的硫羥基。22.按照權(quán)利要求21的方法，其中，所述硫羥基是用硫代硝基吡啶基或硫代吡啶基活化的。23.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中，所述官能化部分允許配體與所述固定的肽結(jié)合。24.按照權(quán)利要求1到23中任一項(xiàng)的方法官能化的基質(zhì)。25.—種包括按照權(quán)利要求1到23中任一項(xiàng)的方法官能化的基質(zhì)的點(diǎn)陣，其中所述點(diǎn)陣包括多個(gè)固定的肽。26.按照權(quán)利要求25的點(diǎn)陣，其包括許多離散的可尋址的空間編址位點(diǎn)。27.按照權(quán)利要求25或26的點(diǎn)陣，其中，在所述點(diǎn)陣上在給定的位點(diǎn)的基本上全部的所述肽基本上是相同的。28.按照權(quán)利要求25到27中任一項(xiàng)的點(diǎn)陣，其中，在所述點(diǎn)陣上的每個(gè)位點(diǎn)包括不同的固定的肽。29.—種用于結(jié)合配體的捕獲劑，其包括至少第一和第二肽，所述第一肽包括至少一個(gè)疏水氨基酸殘基和至少一個(gè)配體-結(jié)合部分，其中所述至少一個(gè)疏水氨基酸殘基和至少一個(gè)配體-結(jié)合部分位于肽的一級(jí)結(jié)構(gòu)中，以致所述第一肽包括疏水面，和基本上不疏水的配體-結(jié)合面。30.按照權(quán)利要求29的捕獲劑，其中，所述第一肽包括6到12個(gè)疏水氨基酸殘基。31.按照權(quán)利要求29或30的捕獲劑，其中所述配體-結(jié)合部分選自由下列各項(xiàng)組成的組羥基、硫羥基、羧酸基團(tuán)、氨基、酰胺基團(tuán)、胍基團(tuán)、咪唑基團(tuán)、芳族基團(tuán)、發(fā)色團(tuán)、熒光團(tuán)、同位素標(biāo)記、螯合基團(tuán)、半抗原以及生物素。32.按照權(quán)利要求29到31中任一項(xiàng)的捕獲劑，其中，所述配體-結(jié)合部分包括至少一個(gè)氨基酸。33.按照權(quán)利要求29到權(quán)利要求32中任一項(xiàng)的捕獲劑，其中這樣放置以致位于所述配體-結(jié)合面上的每個(gè)氨基酸是選自由少于6個(gè)氨基酸組成的組。34.按照權(quán)利要求29到33中任一項(xiàng)的捕獲劑，其中所述第一肽包括包含交替的疏水和不疏水氨基酸殘基的一級(jí)結(jié)構(gòu)。35.按照權(quán)利要求29到權(quán)利要求34中任一項(xiàng)的捕獲劑，其中所述第一肽包括20%-80%的疏水氨基酸殘基。36.按照權(quán)利要求29到權(quán)利要求35中任一項(xiàng)的捕獲劑，其中形成疏水面的所述疏水氨基酸選自由下列各項(xiàng)組成的組亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸、纈氨酸、正纈氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸。37.按照權(quán)利要求29到權(quán)利要求36中任一項(xiàng)的捕獲劑，其中存在于所述疏水面上的所述疏水氨基酸是苯丙氨酸。38.按照權(quán)利要求29到37中任一項(xiàng)的捕獲劑，其中所述第二肽包括至少一個(gè)疏水氨基酸殘基和至少一個(gè)不疏水氨基酸殘基，其中所述氨基酸位于所述肽的一級(jí)結(jié)構(gòu)中，以致所述氨基酸側(cè)鏈位于產(chǎn)生疏水面和基本上不疏水的配體-結(jié)合面的空間中。39.按照權(quán)利要求29到38中任一項(xiàng)的捕獲劑，其中所述第二肽包括比所述第一肽更少的氨基酸的鏈。40.按照權(quán)利要求29到39中任一項(xiàng)的捕獲劑，其中所述第二肽包括比所述第一肽更少的疏水殘基。41.按照權(quán)利要求29到40中任一項(xiàng)的捕獲劑，其中所述第二肽包括1-6個(gè)疏水氨基酸殘基。42.按照權(quán)利要求29到41中任一項(xiàng)的捕獲劑，其中所述第一肽包括位于所述基本上不疏水的配體-結(jié)合面上的10個(gè)或更少的配體-結(jié)合殘基。43.按照權(quán)利要求29到42中任一項(xiàng)的捕獲劑，其中所述第二肽包括位于所述基本上不疏水的配體-結(jié)合面上的10個(gè)或更少的配體-結(jié)合殘基。44.按照權(quán)利要求29到權(quán)利要求43中任一項(xiàng)的捕獲劑，其中所述捕獲劑與基質(zhì)結(jié)合，以致所述基本上不疏水的配體-結(jié)合面易于配體結(jié)合。45.按照權(quán)利要求44的捕獲劑，其中所述基質(zhì)是疏水基質(zhì)。46.按照權(quán)利要求45的捕獲劑，其中所述捕獲劑通過(guò)疏水相互作用附著在所述疏水基質(zhì)上。47.按照權(quán)利要求45或46的捕獲劑，其中所述疏水基質(zhì)選自通過(guò)疏水有機(jī)硫醇處理修飾的金、通過(guò)表面處理修飾的玻璃、或塑料。48.按照權(quán)利要求44到47中任一項(xiàng)的捕獲劑，其中所述肽二聚體在所述基質(zhì)上組裝。49.按照權(quán)利要求29到48中任一項(xiàng)的捕獲劑，其中所述第一和第二肽分別包含至少一個(gè)反應(yīng)性基團(tuán)。50.按照權(quán)利要求49的捕獲劑，其中在所述第一肽上的反應(yīng)性基團(tuán)位于所述基本上不疏水的配體-結(jié)合面上的一級(jí)氨基酸結(jié)構(gòu)中，并且朝向所述配體-結(jié)合位點(diǎn)的N-端側(cè)，并且在所述第二肽中，位于所述疏水面上，并且朝向所述配體-結(jié)合位點(diǎn)的N-端側(cè)。51.按照權(quán)利要求49或50的捕獲劑，其中所述反應(yīng)性基團(tuán)選自由下列各項(xiàng)組成的組硫羥基、馬來(lái)酰亞胺、環(huán)戊二烯、疊氮化物、硫代磷酸酯、硫代酸酯和(硝基)硫代吡啶基活化的硫羥基。52.按照權(quán)利要求51的捕獲劑，其中所述反應(yīng)性基團(tuán)是硫羥基。53.按照權(quán)利要求52的捕獲劑，其中至少一個(gè)硫羥基是活化的硫羥基。54.按照權(quán)利要求53的捕獲劑，其中所述硫羥基是用硫代硝基吡啶基或硫代吡啶基活化的。55.按照權(quán)利要求29到54中任一項(xiàng)的捕獲劑，其中所述第一肽具有在SEQIDNo1中列出的序列。56.按照權(quán)利要求29到54中任一項(xiàng)的捕獲劑，其中所述第二肽具有在SEQIDNo2中列出的序列。57.—種基質(zhì)，在其上固定了至少一種按照權(quán)利要求29到56中任一項(xiàng)的捕獲劑。58.—種包括按照權(quán)利要求29到56中任一項(xiàng)的捕獲劑的點(diǎn)陣。59.權(quán)利要求58的點(diǎn)陣，其中所述點(diǎn)陣包括許多離散的可尋址的空間編碼位點(diǎn)。60.權(quán)利要求58或權(quán)利要求59的點(diǎn)陣，其中，在所述點(diǎn)陣上在給定的位點(diǎn)的基本上全部的所述捕獲劑基本上是相同的。61.按照權(quán)利要求60的點(diǎn)陣，其中在所述點(diǎn)陣上的每個(gè)位點(diǎn)包括不同的捕獲劑。62.—種鑒定結(jié)合目的配體的多聚體捕獲劑的方法，所述方法包括產(chǎn)生按照權(quán)利要求29到56中任一項(xiàng)的組合的捕獲劑的點(diǎn)陣，將目的配體與所述點(diǎn)陣接觸，并且鑒定所述配體與哪一種捕獲劑結(jié)合。63.按照權(quán)利要求62的方法，其中所述配體選自包含下列各項(xiàng)的組真核細(xì)胞、原核細(xì)胞、病毒和噬菌體、朊病毒、孢子、花粉顆粒、過(guò)敏原、核酸、蛋白質(zhì)、肽、碳水化合物、脂質(zhì)、有機(jī)化合物、和無(wú)機(jī)化合物。64.按照權(quán)利要求62或權(quán)利要求63的方法，其中所述配體是生理或藥理學(xué)代謝物。全文摘要本發(fā)明涉及一種使基質(zhì)官能化的方法，其包括將至少一種多聚體肽固定在所述基質(zhì)上，其中，所述至少一種多聚體肽包括至少第一和第二肽鏈，所述第一肽鏈包括至少一個(gè)疏水氨基酸殘基和至少一個(gè)官能化部分，其中所述至少一個(gè)疏水氨基酸殘基和至少一個(gè)官能化部分位于所述肽的一級(jí)結(jié)構(gòu)中，以致形成疏水面，和包括所述官能化部分的基本上不疏水的面，并且其中，所述肽與所述基質(zhì)的接觸使得所述肽固定在其上。文檔編號(hào)C07K4/00GK101331401SQ20068004705公開(kāi)日2008年12月24日申請(qǐng)日期2006年12月19日優(yōu)先權(quán)日2005年12月20日發(fā)明者薩莉·安德森,邁克爾·A·里夫申請(qǐng)人:夏普株式會(huì)社