專利名稱：改性的氨基酸的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及改性的氨基酸及其作為肽和氨基酸模擬物(mimetic)或類似物的結構單元的用途。

背景技術：
氨基酸衍生物被用作或已被用作化學制品部分，其模擬具有改良的穩(wěn)定性、降解或反應性特性的氨基酸的生物功能，尤其在肽模擬物中使用這類改性的氨基酸或氨基酸類似物。例如，氨基酸衍生物已應用于用于治療人類或動物疾病的范圍廣泛的藥物和治療劑或農作物保護劑如除草劑、殺蟲劑或殺真菌劑的合成和制造。
改性肽的設計中的一個特別方面是通過提供它們的天然或非天然的氨基酸殘基的三維排列以與它們的生物目標如受體、酶、蛋白質和其它大分子或小分子相互作用和/或連接至它們的生物目標如受體、酶、蛋白質和其它大分子或小分子，從而獲得代謝穩(wěn)定且仍發(fā)揮它們的所需特性的產物的目的。作為一個實例，二級結構肽模擬的方法是基于生物學意義的蛋白質先導研發(fā)新的非肽藥物試劑的理論方法(Eguchi等人，Mini-Reviewsin Medicinal Chemistry(2002)，2(5)447-462)。氨基酸衍生物包括酮、醛、縮醛、酯、醚等，并設計為增強的穩(wěn)定性，已延長例如肽藥物的生物利用度或增強其與具體目標的反應性而用于目標抑制。
在某些領域，先導化合物源自天然或非天然肽的測試庫。通常，由于這類先導代謝不穩(wěn)定或顯示其它不利的物理化學特性，它們不能用作藥物或其它生物活性物質，因而通過各種方式改變這類先導，例如通過制備逆-、反-和逆-反類似物，通過導入原始肽基序的其它構象的固定、插入或缺失，本發(fā)明的化合物可用作結構單元和子結構以獲得生物活性部分，或其本身是生物活性的(WO 94/05311 A1)。例如Ranganathan等人(J.Chem.Soc.(1)(1993)92-4)描述了作為逆肽模擬物的草酰胺。
根據US 5,618,914 B，公開了肽模擬物形成β-轉角基序。其中提供了用于合成模擬物的模組件或結構單元，其能組裝成各種三維約束的β-轉角基序。這些結構單元是氨基酸衍生物，其中連接基團被連接至模板氨基酸的氨基基團。
肽模擬物是小的類蛋白質鏈、環(huán)或環(huán)/鏈結合，其包含天然和非天然的氨基酸。以連接至目標蛋白質為目的設計和合成它，以導致各種生物作用，從而模擬細胞中關鍵的相互作用。
這類作用的一個實例是誘導癌細胞成為所謂的吞噬作用的細胞程序性死亡的形式。當多細胞有機體內的所有健康細胞不再被需要時，它們均進行細胞程序性死亡；但癌細胞具有躲避吞噬作用以及身體試圖除去它們的能力。因此，肽模擬物是研究者、研究實驗室和研究機構廣泛努力的部分，以產生通過在特性細胞內的重建或活化凋亡途徑的方式治療癌癥。
在WO 2005/103012 A中，公開了聯(lián)氨基取代的雜環(huán)腈氨基酸衍生物，在許多其它物質中，其用作半胱氨酸蛋白酶抑制劑。
DE 1150391公開了合成芳族聯(lián)氨的方法。這些化合物用作染料中的UV吸收劑。
已報道了模擬蛋白β-折疊片的結構和氫鍵模式，但已不具體指向結合蛋白質的化合物。Kemp和合作者描述了2，8-二氨基表吲哚二酮分子模板，其模擬肽β-股的一個邊緣的氫鍵功能并將該β-股連接至肽以產生類似于分子內氫鍵的β-折疊片結構(Kemp等人，J.Org.Chem.(1990)554650-4657). WO 01/14412和Nowick等人的文章(J.Am.Chem.Sec.(2000)122:7654-7661)中公開了β-折疊片模擬物。其中，C-α原子被5-氨基-2-甲氧安息香酸取代，其中甲氧基與酰胺基形成氫鍵，從而形成剛性結構，其在肽上施加平的β-折疊片基序的三維結構。該氨基酸類似物已在分子動態(tài)學模擬中進行研究，以研究二聚作用和β-折疊片折疊機理(Yu等人，ProteinsStructure，F(xiàn)unction，and Bioinformatics(2004)54116-127)。


發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供具有廣泛應用，尤其是在制備具有所需特性的分子的改性肽的合成中作為結構單元和子結構的新的氨基酸模擬物。
因此，本發(fā)明提供一種具有通式1的化合物，

式1 其中 ●X是CO-聯(lián)氨與NR1-草酸、草酸酯或草酰胺基團之間的連接，且是未取代的5-11元雜芳基，或選自C3-20-環(huán)烷基、3-20元雜環(huán)基，以及 ■直鏈， ■支鏈， ■環(huán)狀或稠環(huán)或雙環(huán)或稠雙環(huán)的 C1-20-烷基、C2-20-烯基或C2-20-炔基，優(yōu)選C2-10-烷基的任選取代的基；以及 ●R5選自-SR10、-OR10或-NR10R11，條件是-NR10R11不是氨基酸酰肼的酰胺官能團，或R5可與R2或R3合作形成鍵或8-10元雜環(huán)，以及 ●R10和R11是任選取代的并獨立地選自H、C3-14-環(huán)烷基、C5-14-芳基、3-14元雜環(huán)或雜芳基、直鏈或支鏈C1-14-烷基、C2-14-烯基、C2-14-炔基以及 ●R3和R4一起可組成至基團R12的雙鍵；其中R12是任選取代的并選自C3-14-環(huán)烷基、3-14元雜環(huán)或雜芳基，直鏈或支鏈C1-14-烷基、C2-14-烯基、C2-14-炔基；以及 ●R2是任選取代的并選自H、C3-14-環(huán)烷基、3-14元雜環(huán)或雜芳基、直鏈或支鏈C1-14-烷基、C2-14-烯基、C2-14-炔基；優(yōu)選R2是H；以及 ●R1、R3和R4是任選取代的并獨立地選自H、C3-14-環(huán)烷基、C5-14-芳基、3-14元雜環(huán)或雜芳基、直鏈或支鏈C1-14-烷基、C2-14-烯基、C2-14-炔基；以及 ●任選地，R1、R2、R3和R4中至少兩個與X可合作形成(優(yōu)選單環(huán))3-10元環(huán)，優(yōu)選1、2、3或4環(huán)由R1、R2、R3、R4和X形成，甚至更優(yōu)選X或作為另一種選擇的R2與R3和R4之一合作形成環(huán)；或者 其酯、酰胺、鹽、立體異構體或消旋體； 條件是 ●其中X是CH2，R3和R4通過單鍵相連，且R2選自 ■H(或D或T)， ■C3-20-環(huán)烷基 ■C5-20-芳基 ■3-20元雜環(huán)或雜芳基 ■直鏈或支鏈C2-20-烯基、C2-20-炔基，或未取代的C1-4-烷基，以及 ●其中X是雜芳基，優(yōu)選X不與R3、R4或R5合作形成環(huán)，尤其是雜環(huán)烷環(huán)。
本發(fā)明的化合物可用作肽模擬物合成的結構單元，作為與天然或非天然氨基酸的反應搭檔或作為蛋白質中的氨基酸取代基。聯(lián)氨和草酸、酯或酰胺的特性是其對天然氨基酸胺鍵的模擬能力。
帶有聯(lián)氨和草酸基團的化合物已例如在WO 97/22619、Borloo等人(L.Pept.Science 2(3/4)(1995)198-202)、US 4 863 947 A、Cave等人(Europ.J.Med.Chem.25(1)(1990)75-9)、WO 20051075475、JP2000 141893和WO20051103012中描述，其作為h或多或少惰性藥物試劑或殺蟲劑，但不作為肽模擬物合成的氨基酸模擬物。本發(fā)明的化合物，尤其是在它們的優(yōu)選實施方案中，被設計它們與其它氨基酸的反應性，考慮標準肽合成的要求，例如使用保護基團。
在一個具體實施方案中，當X和R1合作形成環(huán)烷基環(huán)時，R5不包含另一個聯(lián)氨基，R2不與R3或R4一起形成芳環(huán)，且R3和R4均不含有硫。優(yōu)選地，當X和R1形成環(huán)烷基環(huán)時，X是3、4、5或6元環(huán)的一部分。尤其優(yōu)選基團X不包括1，6-二氮雜萘或萘啶。這些限制性條件也可推廣至其它實施方案中的式1的其它化合物。優(yōu)選地，NR10R11中的基團R10和R11不共價連接至且不包含除了式1的NR3R4NR2的聯(lián)氨基團之外的另一聯(lián)氨基團。優(yōu)選X是3、4、5、6、7、8、9、10或10-15元的。如果R3或R4中至少一個形成酰胺，那么酰胺優(yōu)選連接至酸性基團，優(yōu)選保護基團。代替一個或多個氨基酸的這些結構單元可用于肽模擬，以修飾各種肽和蛋白質。還包括所述化合物的藥用鹽。在Handbook of Pharmaceutical SaltsProperties，Selection，andUse，P.H.Stahl和G.Wermuth(編者)，出版者Helvetica Chimica Acta，Zürich 2002中給出了對藥用鹽的縱覽。
任何芳基或雜芳基優(yōu)選是5-20元的，更優(yōu)選5-15或6-10元的，尤其是6元的，任何環(huán)烷基或雜環(huán)基優(yōu)選是3-20元的，更優(yōu)選5-15或5-10元的，尤其是6-8元的，任何烷基、烯基或炔基，任選主鏈是取代的，優(yōu)選是2-20元的，更優(yōu)選3-15或4-10元的，尤其是5-8元的。
本發(fā)明提供如式1的化合物所示的氨基酸的某些新穎的衍生物，其中在原始模板中，氨基酸(例如，但不限于，天然或非天然、任選取代的、α、β、γ等至ω氨基酸)是在由羧酸取代的且?guī)в凶鳛槿〈蜃鳛榄h(huán)的一部分的氨基酸基團的碳環(huán)芳族或雜環(huán)化合物中，通過由草酸官能團取代原來的堿性氨基，氨基和羧酸的官能性在形式上發(fā)生翻轉，從而導致分子酸性末端，并且原來的酸性端轉變?yōu)轷ｋ?，從而導致分子堿性末端。
優(yōu)選地，在根據式1的化合物中，烷基是甲基、乙基、丙基、異丙基、n-丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、2-戊基、異物基、新戊基、己基、2-己基、3-己基或3-甲基戊基。此外，烯基優(yōu)選是乙烯基、丙烯基、1-丁-3-烯基、1-戊-3-烯基或1-己-5-烯基。炔基優(yōu)選是乙炔基、丙炔基、丁炔基或戊炔-2-基。同樣優(yōu)選地，烷氧基(或O-烷基)是甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、n-丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、異戊氧基、新戊氧基、己氧基或3-甲基戊氧基。環(huán)烷基優(yōu)選是環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基，取代的或未取代的。
芳基優(yōu)選是苯基、1-萘基、2-萘基、茚滿基、茚基、二氫萘基、四氫萘基或6，7，8，9-四氫-5H-苯并[a]環(huán)庚烯基，取代的或未取代的。
雜芳基優(yōu)選是吡啶基、嘧啶基、喹啉基、苯并噻吩基、吲哚基、二氫吲哚基、噠嗪基、吡嗪基、異氮雜茚基、異喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、2，3-二氮雜萘基、咪唑基、異噁唑基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、中氮茚基、吲唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、噁二唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、噁唑并吡啶基、咪唑并吡啶基、異噻唑基、1，5-二氮雜萘基、噌啉基、咔唑基、β-咔啉基、異苯并二氫吡喃基、二氫吡喃基、四氫異喹啉基、異二氫吲哚基、異苯并四氫呋喃基、異苯并四氫噻吩基、異苯并噻吩基、苯并噁唑基、吡啶并吡啶基、苯并四氫呋喃基、苯并四氫噻吩基、嘌啉基、苯并間二氧雜環(huán)戊烯基、三嗪基、吩噁嗪基、吩噻嗪基、碟啶基、苯并噻唑基、咪唑并吡啶基、咪唑并噻唑基、二氫苯并異噁嗪基、苯并異噁嗪基、苯并噻嗪基、二氫苯并異噻嗪基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、香豆素基、異香豆素基、色酮基、苯并二氫吡喃-4-酮基、吡啶基-N-氧化物、四氫喹啉基、二氫喹啉基、二氫喹啉酮基(dihydroquinolinonyl)、二氫異喹啉酮基、二氫香豆素基、二氫異香豆素基、異吲哚酮基、苯并二噁烷基、苯并噁唑啉酮基、吡咯基-N-氧化物、嘧啶基-N-氧化物、噠嗪基-N-氧化物、吡嗪基-N-氧化物、喹啉基-N-氧化物、吲哚基-N-氧化物、二氫吲哚基-N-氧化物、異喹啉基-N-氧化物、喹唑啉基-N-氧化物、喹喔啉基-N-氧化物、2，3-二氮雜萘基-N-氧化物、咪唑基-N-氧化物、異噁唑基-N-氧化物、噁唑基-N-氧化物、噻唑基-N-氧化物、中氮茚基-N-氧化物、吲唑基-N-氧化物、苯并噻唑基-N-氧化物、苯并咪唑基-N-氧化物、吡咯基-N-氧化物、噁二唑基-N-氧化物、噻二唑基-N-氧化物、三唑基-N-氧化物、四唑基-N-氧化物、苯并噻喃基-S-氧化物或苯并噻喃基-S，S-二氧化物，取代的或未取代的。
在另一個實施方案中，雜環(huán)基或雜環(huán)烷基優(yōu)選是4-，5-，6-或7-元環(huán)的碳環(huán)體系，其包括包含至少一個至四個選自氮、氧或硫的雜原子的8-18原子的稠環(huán)體系。更優(yōu)選地，雜環(huán)烷基或雜環(huán)基是嗎啉基、硫代嗎啉基、硫代嗎啉基-S-氧化物、硫代嗎啉基-S，S-二氧化物、哌嗪基、高哌嗪基、吡咯烷基、吡咯啉基、四氫吡喃基、哌啶基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、高哌啶基、高嗎啉基、高硫代嗎啉基、高硫代嗎啉基-S，S-二氧化物、噁唑烷酮基、二氫吡唑基、二氫吡咯基、二氫吡嗪基、二氫吡啶基、二氫嘧啶基、二氫呋喃基、二氫吡喃基、四氫噻吩基-S-氧化物、四氫噻吩基-S，S-二氧化物和高硫代嗎啉基-S-氧化物。
鹵素優(yōu)選是F、Cl、Br或I。
式1化合物中的化學基團優(yōu)選被1、2、3、4、5或6個取代基取代。術語“任選取代的”是指各化學基團的至少一個氫原子的取代，其中取代基選自-OH、-SH、-NH2、-SO2、-SO3、-PO4、-O-C1-4-烷基、-S-C1-8-烷基、-NH-C1-8-烷基、-C1-8-烷基、-O-C2-8-烯基、-S-C2-8-烯基、-NH-C2-8-烯基、-C2-8-烯基、-O-C2-8-炔基、-S-C2-8-炔基、-NH-C2-8-炔基、-C2-8-炔基、-C5-10-芳基或芳氧基、-C5-10-羥基芳基、或5-10元雜芳基或雜芳氧基、-C5-10-環(huán)烷基或-環(huán)烯基、5-10元雜環(huán)烷基、胍基(guanidinyl)、鹵素原子、C2-16-?；?、-酰胺基或-酰氧基、氨基、氨基羰基、烷氧基羰基氨基、疊氮基、氰基、酮基、硫代羰基、羧基、羧基-C1-8-烷基、C5-10-芳硫基、5-10元雜芳硫基、5-10元雜環(huán)基、雜環(huán)硫基或雜環(huán)氧基、巰基、C1-8烷硫基、氨磺酰基、氨基羰基氨基、羥氨基、烷氧氨基、硝基、-SO-C1-8-烷基、-SO-C5-10-芳基、-SO-C5-10-雜芳基、-SO2-C1-8-烷基、-SO2-C5-10-芳基和-SO2-C5-10-雜芳基、羧基、羧基-C1-8-烷基、CF3、取代的氨基。所述取代基任選被進一步取代。
優(yōu)選地，R1或R2是氫或甲基。
雜取代提供由優(yōu)選選自O、S、N或P的雜原子取代主鏈碳原子的取代。這類雜取代被包含在術語“任選取代的”之內。這些雜原子也計算在基團大小之內。氫不計算在內。
如果X是芳基或雜芳基基團，那么X優(yōu)選不被進一步取代。在剛性芳族基團的情況下，可通過側鏈取代基防止進一步收縮而維持X基團的伸縮性，因此式1的化合物仍可采用作為一般的氨基酸衍生物的必需的功能。如果X是取代的芳基或雜芳基，那么取代基優(yōu)選選自OH、O-、NH-或S-C2-10-烷基、C0-10-烷基-5-14元(雜)芳基或-(雜)環(huán)烷基、SH、NH2。
式1中的基團X形成CO-聯(lián)氨和NR1-草酸或酯基團之間的連接基團。X基團的原子編號采用使用希臘字母的針對氨基酸的標準位次命名法，即，α位是在X中與CO-聯(lián)氨基團相連的原子的位置(如同在氨基酸中與羧酸基團相連的原子，從該處可衍生得到CO-聯(lián)氨基團)。β位將是α原子之后的下一個主鏈原子，以及諸如此類。NR1-草酸或酯基團可在α、或β、γ等位置上與X結合，作為α、β、γ等氨基酸。
化合物優(yōu)選是在C-α位置上的L-或D-立體異構體。
在一個具體實施方案中，式1中的X是如下式2-6之一的化學基團
式2 式3式4式5 式6 其中R6、R7、R8和R9是任選取代的，并獨立地選自H、C3-14-環(huán)烷基、C5-12芳基、3-12元雜環(huán)基或雜芳基以及直鏈或支鏈C1-14-烷基、C2-14-烯基或C2-14-炔基；并且任選地，R6、R7、R8和R9中的至少兩個可合作形成3-22元(優(yōu)選3-12元)任選取代的或稠環(huán)烷基或雜環(huán)基環(huán)，或其雙環(huán)；且n和m獨立地是0-5的整數(shù)，優(yōu)選1、2、3或4。
優(yōu)選地，X是天然的或非天然的氨基酸官能團的取代物。因此，這些氨基酸的側鏈由X表達。在一個具體實施方案中，X是(優(yōu)選α、β或γ)NR1-草酸或酯結合基團，選自C1-2-烷基、胍基丁基(guanidinylbutyl)、2-甲基-丁基、苯基乙基、p-羥苯基乙基、3-吲哚基乙基、羥乙基、甲基硫丙基、硫乙基、C2-3-烷基酸、C2-3-烷基酰胺基、氨基戊基、4-咪唑基乙基，或X和R1合作形成丁基，與NR1-草酸或酯基團的氮形成吡咯烷環(huán)，其中α是指式1的CO-聯(lián)氨和NR1-草酸、草酸酯或草酸酰胺基團連接至X基團的相同原子，優(yōu)選碳(“C-α”)上，β是指式1的CO-聯(lián)氨和NR1-草酸、草酸酯或草酸酰胺基團連接至X基團的相鄰原子(優(yōu)選分別在“C-α”和“C-β”碳原子)上，以及γ是指式1的CO-聯(lián)氨和NR1-草酸、草酸酯或草酸酰胺基團連接至由一個原子(優(yōu)選C原子“C-β”)隔開的X基團的原子(優(yōu)選“C-α”和“C-γ”碳原子)上。
在一個尤其優(yōu)選的實施方案中，X是-CHR13-，其中R13是H或D或選自如下氨基酸的氨基酸側鏈丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯基丙氨酸、輔氨酸、4-羥基輔氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈氨酸，優(yōu)選其L-對映異構體。
術語“氫”或“H”也包括氫的不同同位素，如H、D(即2H)或T(即3H)。如C、N、O、S或P的其它元素也包括這些元素的所有已知的同位素，穩(wěn)定的或不穩(wěn)定的。
優(yōu)選R10和R11選自H、未取代的C1-5-烷基、C2-10-烯基、C2-10-炔基、C3-14-環(huán)烷基、C5-14-芳基、3-14元雜環(huán)基或3-14元雜芳基。
在另一個實施方案中，X選自O-、S-、N-或P-雜取代的3-20元O-、S-、N-或P-雜取代的雜芳基或選自任選取代的雜環(huán)烷基、直鏈或支鏈的1-20元雜烷基、2-20元雜烯基或雜炔基，尤其選自除1，6-二氮雜萘之外的O-、S-、N-或P-雜取代的3-20元雜環(huán)。
在任何情況下優(yōu)選R3和R4之一是保護基，優(yōu)選Fmoc。
尤其優(yōu)選的是如上所述的根據式1的化合物，其選自下表1中的化合物。這些化合物可以是與表1的1個、至少2個、至少3個或至少4個不同化合物配套的形式。如所描述的帶有Fmoc保護基的化合物，如表1中所描述的在它們的聯(lián)氨或草酸官能團上帶有其它保護基的化合物也包含在本發(fā)明之內。但是，F(xiàn)moc是優(yōu)選的保護基。
表1化合物



在另一個優(yōu)選的實施方案中，R3和R5形成鍵，從而得到通(子)式10的雜環(huán)化合物，
式10 其中X、R1、R2和R4如上所定義。式10的化合物類似于例如通過Zaleska等人(Pol.Synthesis 16(2003)2559-2563)和Lenman等人(J.Chem.Soc.Perkin Trans.1(1997)2297-2311)已知的1，2，5-三氮雜卓(triazepine)結構(尤其是如果X是C1-烷基)。但是，根據本發(fā)明，所有環(huán)鍵都是單鍵且環(huán)具有酰胺基團和草酸基團(oxalic group)。由于僅有較少的1，2，5-三氮雜卓類型的物質是已知的，因而該方法提供一種獲得該環(huán)體系的新方法。在另一個實施方案中，R2和R5形成鍵，從而得到另一種雜環(huán)化合物。
在進一步優(yōu)選的實施方案中，所述化合物選自下表2。也可包括與上述表1的化合物配套的這些化合物。
表2非α化合物
在優(yōu)選實施方案中，R3或R4是N-保護基，其選自Boc、Fmoc、Alloc、三氟乙?；⒓籽豸驶?、乙氧羰基、芐氧羰基、2-(三甲基硅基)乙氧羰基、2，2，2-三氯乙氧羰基、芳基磺?；?、2-(三甲基硅基)-乙基磺酰基、三苯甲基，和/或R5是羧酸保護基或活化基團，選自OMe、OEt、O-t-Bu、OBn、OCHPh2、苯乙酮酯、烷氧基烷基酯、2，2，2-三氯乙酯、2-(三甲基硅基)乙酯、2-甲苯磺?；阴?、硅酯或活化基團，優(yōu)選N-羥磺胺吡啶酯、1-羥苯并三唑酯、4-硝基苯基酯，或原位制備的酯，優(yōu)選使用試劑HNTU(＝2-(內-5-降冰片烯-2，3-二甲酰亞胺)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯)、HOCt(＝1-羥基-1H-1，2，3-三唑-4-羧酸酯)、HONB(＝N-羥基-5-降冰片烯-2，3-聯(lián)羧基)，并且其中保護基團或活化基團均可以它們的聚合物形式或樹脂結合形式使用。
優(yōu)選的是本發(fā)明的酯或酰胺，優(yōu)選帶有保護基團或活化基團。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，末端氨基由保護基取代，所述保護基選自Boc、Fmoc、CBz、Alloc、羰基、磺?；?、亞磺?；?、磷?；⒀趿谆?。另一個具體實施方案的特點在于末端羰基的酯，該酯(優(yōu)選芐基酯或丁基酯)作為保護基團，或作為具有與原始的羧酸相比增強的反應性的活化基團?？墒褂昧硗獾谋Ｗo基團或活化基團，如“Handbook of Reagents for OrganicSynthesisActivating and Agents and Protecting Groups”.Pearson，Anthony J.；Roush，William R.；Editors.UK.(1999)，513pp.Publisher(Wiley，Chichester，UK)或者Protective Groups in Organic Synthesis.2nd Ed.Greene，Theodora W.；Wuts，Peter G.M.USA.(1991)，473pp.Publisher(John Wiley and Sons，Inc.，New York，N.Y.)中所描述的。
大部分保護基團是本領域已知的。胺或OH保護基的一個實例是具有一般反應性的芐氧羰基(benzylcarboxycarbonyl)(縮寫Z或Cbz)
其中芳族苯基(Ph)可任選取代的，例如被鹵原子取代(見實施例)，或如有機化學領域中已知的進一步變化，例如被允許在溫和條件下進行脫保護的一個至三個烷氧基(代表性的是甲氧基)進一步取代。進一步優(yōu)選的保護基包括t-丁氧羰基(t-BOC)
或9-芴甲氧羰基(Fmoc)保護基，
及其它。根據本發(fā)明的化合物中結合的保護基優(yōu)選包括9-芴甲氧羰酰胺(Fmoc-NRR′)、t-丁氧羰基(Boc-NRR’)、氨基甲酸芐酯(Z-NRR′，Cbz-NRR′)、乙酰胺、三氟乙酰胺、苯鄰二甲酰亞胺、芐胺(Bn-NRR’)、三苯基甲胺(Tr-NRR′)，任選被另外的氯原子取代，亞芐基胺、p-甲苯磺酰胺(Ts-NRR’)、N-烯丙氧羰基(Alloc)酯、甲酯、t-丁酯、芐基酯、S-t-丁基酯、2-烷基-1，3-唑啉、乙酸酯、新戊酸酯、安息香酸酯、磺酰酯、磷酰酯和氨基酸酯。根據本發(fā)明可使用的保護基的詳細概述記載在“Synthesis of peptides and peptidomimetics”ed.M.Goodman，Vol.22a和22b(protecting and activating groups)，22c和22d(peptidelpeptidemimeticsynthesis)，Georg Thieme Verlag，Stuttgart，New York(2002)中。22c和22d還公開了側鏈修飾的方法，當合成根據式1的(衍生的)化合物和本發(fā)明的肽模擬物時也可以使用該方法。
在根據本發(fā)明的化合物中，保護基優(yōu)選取代R3、R4、R5或R10，從而形成CO-聯(lián)氨或NR1-草酸基團的酯或酰胺，從而形式上取代R3、R4、R5或R10。
本發(fā)明還提供了一種制備上述所定義的式1的化合物的方法，其中根據式7的化合物或前體，
式7 以任何順序與式8的聯(lián)氨或聯(lián)氨衍生物
式8 和式9的草酸、酯或衍生物接觸，
式9 其中X、R1、R2、R3、R4和R5如上針對式1的最終化合物的定義，且L1、L2、L3和L4獨立地選擇任意的離去基團，優(yōu)選L4是Cl或OH或活化的酯，例如苯基-或4-硝基苯基酯，或包括混合酐的酐，例如MeO-CO-CO-O-CO-CO-OMe或1，4-二噁烷-2，3，5，6-四酮。優(yōu)選地，根據式9的化合物是草酸酯酰氯或草酸酐。X、R1、R2、R3、R4和R5中的兩個之間的其它化學鍵可通過傳統(tǒng)化學合成步驟形成，包括酯、酰胺和保護基團和活化基團的化學反應。優(yōu)選地，式9的化合物可在加入式8的化合物之前或之后加入。如果所有化合物在一個步驟中加入，那么得到所有起始物質的混合物。
離去基團是有機化學領域中熟知的，并優(yōu)選形成共軛酸(見如上所述的“Synthesis of peptides and peptidomimetics”)。它們的官能團特征在于固有的不穩(wěn)定性。優(yōu)選L1、L2、L3和L4獨立地選自氨基(-NH2)、甲氧基(CH3O-)、羥基(HO-)、羧酸根(CH3COO-)、-NO3、F-、Cl-、Br-、I-、疊氮基(N3-)、硫氰酸根(SCN-)、硝基(-NO2)和氰基(-CN)。L2和L3優(yōu)選是氫。
在最優(yōu)選的實施方案中，R3或R4是保護基，優(yōu)選是Fmoc，例如通過Fmoc-Cl酐與NH2-NH2，或更普遍的NHR3-R2L3反應而合成。
根據本發(fā)明的化合物優(yōu)選用于制備具有其它氨基酸或氨基酸模擬物的肽模擬物。這類蛋白質或肽模擬物包括根據通式1的化合物
式1 其中X、R1、R2、R3、R4和R5如權利要求1-10中任一項中所定義的，作為分子部分，以及天然的或非天然的氨基酸或另外的氨基酸模擬物，優(yōu)選通過酰胺鍵結合。因此，在其最低限度內，肽或蛋白質模擬物包含至少兩個氨基酸或氨基酸模擬物，其中至少一個是如式1所描述的。優(yōu)選蛋白質或肽模擬物包含至少三個、四個、五個或至少六個氨基酸或氨基酸模擬物(氨基酸類似武)。肽或蛋白質模擬物包含尤其是至少2個，優(yōu)選至少3個，甚至更優(yōu)選至少5個，尤其優(yōu)選至少10個或最優(yōu)選至少20個除了式1的化合物之外的天然的或非天然的氨基酸或另外的氨基酸模擬物。
或者，在肽或蛋白質模擬物中，X是CO-聯(lián)氨和NR1-草酸或酯基團之間的連接，并且X是一個鍵，5-20元雜芳基或芳基，或任選地選自C3-20-環(huán)烷基、3-20元雜環(huán)基，和直鏈或支鏈C1-20-烷基、C2-20-烯基或C2-20-炔基的取代基；以及R5選自-OR10和-NR10R11，或R5與R2或R3合作形成一個鍵或8-10元雜環(huán)；以及R3和R4一起可組成至R12的雙鍵；R1、R2、R3、R4、R10、R11和R12是任選取代的，且獨立地選自H、C3-14-環(huán)烷基、C5-14-芳基、3-14元雜環(huán)基或雜芳基、直鏈或支鏈C1-14-烷基、C2-14-烯基、C2-14-炔基；以及任選地R1、R2、R3、R4和X中的至少兩個合作形成3-12元環(huán)烷基或雜環(huán)烷基環(huán)；或者其酯、酰胺、鹽、立體異構體或消旋體；作為分子部分，以及天然的或非天然的氨基酸或另外的氨基酸模擬物，優(yōu)選通過酰胺鍵結合。如同根據式1的單獨化合物的情況一樣，當X是芳基或雜芳基時，X優(yōu)選是未被取代的。式1的化合物最優(yōu)選經其聯(lián)氨或草酸基團連接至另一個主要氨基酸，優(yōu)選通過兩者連接至不同的氨基酸。因此，式1的化合物包含于在其它氨基酸、肽或其它氨基酸類似物中的肽模擬物中，優(yōu)選包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個其它天然的或非天然的氨基酸。優(yōu)選這些氨基酸中的至少一個選自丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯基丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸和輔氨酸，最優(yōu)選連接在R3、R4或R5位置，在式1化合物中的這些位置上取代任何可能的取代基。另一個優(yōu)選的化合物或肽模擬物子結構是苯基乙二胺，其可用于產生轉角基序(turn mofit)。這類酰胺可模擬在蛋白質中發(fā)現(xiàn)的氨基酸的三維外觀，例如酰胺鍵的氫鍵受體和供體特性。令人驚訝地，使用式1的化合物可產生大部分天然蛋白質結構，包括α-螺旋和β-折疊片。
因此，在一個優(yōu)選實施方案中，肽模擬物模擬α-螺旋、β-折疊片或轉角基序的三維結構。通過這個三維結構可形成天然蛋白質基序，其允許在大量蛋白質或肽部分中使用所述化合物。因此，可能形成具有各模板的生物功能性但具有作為其改良的化學性質的實例的改良的穩(wěn)定性、生物利用度或分布的肽模擬物。
在蛋白質四級結構、蛋白質-蛋白質相互作用以及蛋白質聚集中普遍發(fā)生β-折疊片的氫鍵邊緣之間的相互作用，并且包含在健康的生物過程以及從癌癥和AIDS到炭疽熱和阿爾茨海默病的疾病中。由于其基本性質，這些蛋白質-蛋白質的相互作用組成一種在生物過程中非常重要的分子識別。本發(fā)明的化合物可用于合成在序列選擇性模式中識別蛋白質β-折疊片的改性的肽。在因特網上建立其中可并入本發(fā)明化合物的β-折疊片的數(shù)據庫(http:llwww.igb.uci.edu/serverslicbs/)。
蛋白質的二級結構如α-螺旋、β-折疊片和β-轉角是三維結構和蛋白質的生物活性的重要特征。肽和蛋白質結構的模仿已成為生物有機化學和藥物化學的焦點。在藥物活性化合物、人工受體、不對稱催化劑和新材料的研發(fā)中，設計由短肽組成的二級結構模擬物已吸引了很多關注。Rizo和Gierasch(Annu.Rev.Biochem 1992.61387-418)綜述了人工α-螺旋、β-折疊片和轉角以及它們的設計的實質研究。這類模擬物的化學合成可如此中所描述的進行，例如通過使用式1的化合物的固相合成?？筛鶕izo和Gierasch或Loughlin等人(Chem Rev 2004，1046085-6117)設計α-螺旋、β-折疊片和(β-)轉角的折疊預后。
模擬蛋白質β-折疊片的結構和氫鍵模式的化合物作為候選藥物以及作為研究蛋白質結構和穩(wěn)定性的模型體系是非常重要的。β-折疊片的形成在許多與疾病和正常功能相關的生物過程中扮演關鍵角色。蛋白質之間的β-折疊片的相互作用已顯示或假定包含在細胞信號和與通過絲氨酸/蘇氨酸致活酶Raf的Ras和Rap的結合、通過PDZ區(qū)域的膜離子通道的聚類、通過細胞間粘附分子-1(ICAM-1)的與淋巴細胞功能相關的抗原-1(LFA-1)的結合，以及CD4受體和HIV病毒蛋白gp120之間的相互作用相關的癌基因表達中，以斷裂肽、蛋白水解酶，如HIV-1蛋白酶或高血壓蛋白原酶，形成具有其肽基質的氫鍵的β-折疊片狀網狀物。HIV-1蛋白酶通過四-相互螯合的(four-interchelating)β-股二聚。Met阻抑物，包含在基因調控中的蛋白質，也起到β-折疊片二聚物的作用；在這種情況下，β-折疊片(thatforms)直接參與至DNA大溝的結合。許多蛋白質聚集以形成與阿爾茨海默病、卡特茲佛德-雅各布(Kreutzfeld-Jacob)病和其它朊蛋白病相關的不溶的β-折疊片結構，并且與三核苷酸(CAG)相關的進行性神經變性疾病重復。
本發(fā)明的化合物可提供氫鍵供體和受體模式交替排列如三肽β-股，并可用作β-股模擬物以形成與適當?shù)姆肿庸羌芙Y合的β-折疊片狀結構。通過氫鍵供體和受體功能性實現(xiàn)在β-折疊片中的根據式1的化合物的應用，例如根據如下安排
三肽β-股 Ac-NXO-NMe三肽β-股模擬物 圖1中示出了β-股中的化合物的具體實施例的2D和3D。
在20蛋白質的氨基酸中，輔氨酸是氨基酸的Cα-N鍵是吡咯烷環(huán)的一部分的唯一氨基酸。這個環(huán)狀側鏈強烈限制了肽的構象。經常觀察到輔氨酸在β-轉角結構的(i+1)位置上。輔氨酸衍生物(其中X與R1合作形成環(huán)結構)還可用作β-轉角模擬物，如圖3的實施例是轉角基序的結構。
式1的化合物例如可衍生自天然氨基酸，其中氨基酸的氨基官能團通過草酸連接(ligation)而轉化為羧基官能團，并且羧基官能團通過聯(lián)氨轉化為酰胺官能團。在對氨基酸的氨基和羧基官能性的模擬中，這些反轉的官能性可用于相同的目的，如使用相同或相似的氨基酸保護基的液相或固相蛋白質合成。
本發(fā)明提供了一種使用通式1的化合物合成肽模擬物的方法，其中包含胺的反應目標與根據式1的化合物接觸，且R3和R4組成帶有保護基(優(yōu)選Fmoc)的酰胺。通過這一步驟，在肽合成的標準條件下形成肽鍵。在普通的肽合成過程的這一步驟中，待結合的氨基酸被根據式1的化合物取代。包含氨基的反應目標可以是氨基酸或衍生物或另一目標，如固體樹脂。尤其優(yōu)選Fmoc和Boc保護基，因為它們可再次通過不可逆過程除去，其中Fmoc和Boc的羧基通過CO2的消除而被除去，優(yōu)選在三氟乙酸的酸性條件下。這具有高產率的優(yōu)點，尤其在結合固相合成時，其中在固體樹脂上逐步合成肽。與在核糖體處的天然生物合成相反，固相肽合成優(yōu)選以C-末端至N-末端的方式進行，其中通過任意保護基保護氨基。在下一步中，除去該保護基，例如根據式1的化合物的帶有R3和R4保護基的酰胺。然后，通過將下一個氨基酸或氨基酸模擬物的羧基官能團連接至目前未保護的氨基官能團上而進行氨基酸鏈的延長或氨基酸模擬物的連接。在本領域已知的其它化合物中，根據本發(fā)明的化合物是這類氨基酸模擬物的一個例子。
在此處提供的方法的另一方面，優(yōu)選在除去R3和R4保護基的步驟之后，氨基酸或氨基酸模擬物(優(yōu)選帶有被保護的氨基)與根據式1的化合物接觸。
優(yōu)選地，肽模擬物合成的方法是一種固相合成方法，即反應目標是固體，優(yōu)選是固體樹脂，例如Merrifield樹脂，珠狀的苯乙烯和氯甲基苯乙烯的共聚物(Steward和Young，Solid Phase Peptides Synthesis，Pierce，Rockford，IL(1984))。這包括氨基酸或其它化合物已被連接至樹脂以及式1的化合物被連接至這些固定化氨基酸或化合物的氨基上的情況。當然，其他氨基酸和其它化合物然后可連接至式1的化合物。
在實施例中，已應用數(shù)個固相合成方法將式1的結構單元結合為人工肽。這些結構單元也可由肽合成自動儀器使用。術語“保護基”還包括保護基的固相形式。由于這些結構單元可并入固相合成和自動化肽合成器，因而存在式1化合物的眾多應用。
另一方面，本發(fā)明提供了包含式1化合物的蛋白質或蛋白質片斷，作為在蛋白質氨基酸序列的任何位置上的共價結合插入物。為了這一目的，使用人工的、生物的或微生物的方法合成所述蛋白質。式1的化合物可連接至這類蛋白質或蛋白質片斷或另個片斷，例如一個蛋白質的兩個片斷，由此式1的化合物插入至蛋白質的氨基酸序列中。
為了這一目的，提供制備蛋白質或蛋白質片斷的方法，包括將式1化合物連接至肽、蛋白質或蛋白質片斷的步驟。如上所提到的，式1化合物的優(yōu)點在于可使用標準蛋白質和肽的合成方法。
優(yōu)選地，所述方法進一步包括將另一肽、蛋白質或蛋白質片斷連接至式1化合物上的步驟。優(yōu)選的是使用式1化合物作為蛋白質例如親和肽中的氨基酸取代物(其中蛋白質的一個或多個氨基酸被取代)，其中所述化合物穩(wěn)定在特定的三維結構中的肽。
根據本發(fā)明的化合物的一個優(yōu)選用途是作為間隔部分，尤其是作為親水間隔。間隔部分具有廣泛的應用。例如在生物化學中，間隔用于將藥學試劑固定于生物分子例如抗體上，或為了色譜的目的，用于將親和目標(affinity target)固定于樹脂上。此處公開的化合物具有天然氨基酸的氨基和羧基的特征，并能通過標準蛋白質化學技術處理。因此，式1的化合物可用作連接子部分，其中連接子的長度可通過X基團的大小測定。尤其在生物親和純化領域中，由于與不需要的生物分子的低的非特定結合，這類連接子是優(yōu)良的。
在另一方面，本發(fā)明提供了根據本發(fā)明的化合物作為動態(tài)組合庫中的組分的用途。動態(tài)組合庫由結構單元組裝成的庫成員組成，結構單元通過動態(tài)組合化學的可逆鍵相連接。動態(tài)組合化學是一種使用自組裝方法產生用于例如主-客體相互作用和藥物發(fā)現(xiàn)的化合物庫的方法。本發(fā)明的化合物可作為這樣的結構單元，氨基酸、蛋白質或肽模擬物作為庫成員。
將通過下述圖和實施例進一步闡明本發(fā)明，但不限于此。



圖1A包含改性的丙氨酸(式1中的X是C1-烷基化的C-α)的β-折疊片模式的2D結構，較低股；B通過氫鍵穩(wěn)定的β-折疊片的3D結構。
圖2氫鍵β-折疊片二聚化合物的結構，A2D，B3D。
圖3輔氨酸類似物的β-轉角的結構，A2D，B3D。

具體實施例方式 實施例 縮寫 Boct-丁氧羰基；DCC二環(huán)己基碳二亞胺；DCM:DCM:DCHU:二環(huán)己基脲；DIPA:二異丙基乙胺(＝Hünig’s堿)；DIC:二異丙基碳二亞胺；EtOH:乙醇；EtOAc:乙酸乙酯；EDCl.HCl:乙基二異丙基碳二亞胺鹽酸鹽；Fmoc:芴甲氧羰基；HOBt1-羥基苯并三唑；MeOH:甲醇；THF:四氫呋喃；TFA:三氟乙酸:Z:芐氧羰基。
(S)-2-(甲氧乙二?；?氨基)-3-苯基-丙酸(實施例1)
單甲基草酰氯(3.34mL，36.32mmol)在0℃下滴加至DMF(15mL)中的L-苯基丙氨酸(3.0g，18.16mmol)和NaHCO3(7.63g，90.81mmol)溶液中。在室溫下繼續(xù)攪拌反應混合物2小時。蒸發(fā)除去DMF，所得剩余物溶解于水(50mL)中，用二乙醚(2×10mL)洗滌，用1NHCl酸化(pH4)并用EtOAc(3×15mL)萃取。合并的有機層用鹽水(2×5mL)洗滌，干躁(Na2SO4)并濃縮得到2.58g(56％)微黃色粘稠油狀物。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)9.06(d，J＝9.2Hz，1H)，7.15-7.31(m，5H)，4.43-4.54(m，1H)，3.76(s，3H)，2.97-3.21(m，2H)。
N-[(S)-1-芐基-2-(N’-t-丁氧羰基-聯(lián)氨基)-2-氧-乙基]-草酰胺酸甲基酯(實施例2)
在DCM(30mL)中的(S)-2-(甲氧基-草酰-氨基)-3-苯基-丙酸(實施例1)(1.6g，6.37mmol)溶液中加入HOBt(903.6mg，6.69mmol)，隨后加入DCC(1.38g，6.69mmol)，并在室溫下攪拌30分鐘。將Boc-咔唑鹽(883.8mg，6.69mmol)加入其中，并在室溫下攪拌混合物過夜。過濾除去沉淀的DCHU，并蒸發(fā)濃縮濾液。通過隨后使用冷的EtOAc的研制(trituration)和過濾除去其余的DCHU。使用1NHCl(10mL)、10％NaHCO3(10mL)、鹽水(10mL)洗滌EtOAc溶液，干燥(Na2SO4)并濃縮得到2.1g粗化合物，通過柱色譜提純粗化合物得到1.64g(70％)白色固體；熔點72-73℃；[α]D-28.6(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.2(br s，1H)，7.8(br d，J＝9.98Hz，1H)，7.19-7.35(m，5H)，6.56(br s，1H)，4.74-4.86(m，1H)，3.85(s，3H)，3.06-3.32(m，2H)，1.45(s，9H).13C NMR(200 MHz，CDCl3)δ(ppm)169.53，160.21，156.38，155.23，135.75，129.24，128.69，127.16，82.04，53.66，53.2，37.55，28.06。IR(KBr)v 4000-3292(br.)，3031，2980，1742，1688(br.)cm-1。
N-[(S)-1-芐基-2-(N’-t-丁氧羰基-聯(lián)氨基)-2-氧-乙基]-草酰胺酸(實施例3)
將氫氧化鋰(38mg，1.57mmol)加入至MeOH(10mL)中的N-[(S)-1-芐基-2-(N’-t-丁氧羰基-聯(lián)氨基)-2-氧-乙基]-草酰胺酸甲基酯(實施例2)溶液中，隨后加入2滴水。在室溫下攪拌反應混合物1小時。蒸發(fā)除去MeOH，所得的剩余物溶解于水(30mL)中，用醚(2×10mL)洗滌。用冰浴冷卻水層，用1N HCl酸化(pH＝4)并用EtOAc(3×10mL)萃取。合并的有機層用鹽水(10mL)洗滌，干躁(Na2SO4)并濃縮得到333g(66％)灰白色固體；熔點82-85℃。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)9.32(br，1H)，8.9(br s，1H)，8.1(br d，J＝7.24 Hz，1H)，7.14(br，5H)，6.96(br，1H)，4.75(m，1H)，2.95-3.23(m，2H)，1.36(s，9H)。IR(KBr)v 4000-3300(br.)，3031，2981，2934，1689(br.)cm-1。
N-{(S)-1-芐基-2-[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-聯(lián)氨基]-2-氧-乙基}-草酰胺酸甲基酯(實施例4)
在實施例2的步驟之后，使用(S)-2-(甲氧草?；?氨基)-3-苯基-丙酸和Fmoc-咔唑鹽，得到粗化合物，通過柱色譜提純得到975mg(61％)白色固體；熔點91-93℃；[α]D-19.4(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)10.08(br s，1H)，9.38(br s，1H)，8.99(d，J＝8.4Hz，1H)，7.89(d，J＝7.04Hz，2H)，7.72(d，J＝6.26Hz，2H)，7.17-7.46(m，9H)，4.53-4.64(m，1H)，4.26-4.34(m，3H)，3.73(s，3H)，2.93-3.15(m，2H)。13C NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)169.98，160.67，156.82，155.94，143.61，140.74，137.44，129.08，128.19，127.65，126.99，126.43，125.11，120.05，66.24，53.13，52.70，46.42，36.62。IR(KBr)v 4000-3275(br.)，3030，2954，1734，1704(br.)cm-1。
(S)-2-t-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙酸(實施例5)
在實施例1的步驟之后，使用單叔丁基草酰氯，獲得250mg無色粘稠油狀的粗化合物，其用于進一步的反應。
N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙酰基)-聯(lián)氨羧酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例6)
在實施例2的步驟之后，使用Boc-L-苯基丙氨酸和Fmoc-咔唑鹽，得到4.4g粗化合物，使用CHCl3-石油醚結晶得到3.6g(95％)白色固體；熔點160-161℃。Rf＝0.26(1.5:3.5 EtOAc/石油醚)；[α]D-11.2(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200 MHz，DMSO-d6)δ(ppm)9.94(br s，1H，d2o exch.)，9.35(br s，1H，d2o exch.)，7.88(d，J＝6.86Hz，2H)，7.73(d，J＝7.04Hz，2H)，7.17-7.45(m，9H)，6.93(d，J＝8.6Hz，1H，d2o exch.)，4.28-4.31(m，4H)，2.69-3.0(m，2H)，1.27(s，9H)。13C NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)171.67，155.95，155.13，143.58，140.65，137.94，129.15，127.95，127.64，127.06，126.16，125.24，120.05，79.09，77.93，66.11，54.16，46.44，28.05。IR(KBr)v4000-3364，3309，3250，3037，3003，2980，1757，1692，1675，1517cm-1。
N-{(S)-1-芐基-2-[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-聯(lián)氨基]-2-氧-乙基}-草酰胺酸叔丁基酯(實施例7)
在0℃攪拌下，將HCl飽和的EtOAc(10mL)緩慢加入至在EtOAc(10mL)中的N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙?；?-聯(lián)氨羧酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例6)(1.2g，2.39mmol)溶液中。在室溫下攪拌反應混合物30分鐘。蒸發(fā)除去溶劑，并在高真空下干燥反應混合物。得到的剩余物溶解于干燥的DMF(30mL)中，將NaHCO3(1.41g，16.75mmol)加入至反應混合物中，隨后于0℃在氬氣中加入叔丁基草酰氯(0.59g，3.59mmol)。在室溫下攪拌反應混合物30分鐘。用水(100mL)稀釋混合物，并用EtOAc(3×30mL)萃取，用1N HCl(30mL)洗滌合并的有機層，隨后用10％NaHCO3(30mL)和水(3×30mL)洗滌，在隨后用鹽水(20mL)洗滌。干燥EtOAc層(Na2SO4)并濃縮得到770mg(60％)白色粉末；熔點106-108℃。Rf＝0.29(1.5:3.5 EtOAc/石油醚)；[α]D-18.0(c 0.5，DMF)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.49(br s，1H，d2o exch.)，7.64(d，J＝7.42Hz，3H，1H，d2o exch.)，7.46(d，J＝7.42Hz，2H)，7.14-7.31(m，9H)，6.96(br s，1H，d2o exch.)，4.66-4.77(m，1H)，4.21-4.35(m，2H)，4.06-4.13(m，1H)，2.96-3.19(m，2H)，1.37(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)170.02，158.36，157.78，156.03，143.46，141.23，135.69，129.32，128.74，127.77，127.22，127.14，125.14，119.95，85.01，68.11，53.35，46.80，37.59，27.61。IR(KBr)v 4000-3285，3065，2980，1751，1732，1692，1701，1517，1451，1371，1219，1155，1031，840，758，740，cm-1。
N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙酰基)-聯(lián)氨羧酸芐基酯(實施例8) 在實施例2的步驟之后，使用Boc-L-苯基丙氨酸和z-咔唑鹽，得到6.4g粗化合物，通過柱色譜提純得到4.2g(89％)灰白色固體；熔點112-113℃。Rf＝0.23(1.5:3.5 EtOAc/石油醚)；[α]D-10.2(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.65(br s，1H，d2o exch.)，7.12-7.22(m，11H)，5.27(br s，1H，d2o可交換的)，5.03(s，2H)，4.45(m，1H)，2.78-3.21(m，2H)，1.24(s，9H)。13C NMR(200 MHz，CDCl3)δ(ppm)171.65，156.14，155.79，136.42，135.64，129.39，128.50，128.27，128.14，126.81，80.42，67.71，53.99，38.27，28.2。IR(KBr)v 4000-3372，3313，3002，2971，2929，1762，1688，1672，1628，1526cm-1。
N-[(S)-1-芐基-2-(N’-芐氧羰基-聯(lián)氨基)-2-氧-乙基]-草酰胺酸叔丁基酯(Z-NPheO-O-t-Bu；實施例9) 在實施例7的步驟之后，使用N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙酰基)-聯(lián)氨羧酸芐基酯(實施例8)，得到770mg(60％)無色粘稠油狀產物，經戊烷研制后得到白色粉末；熔點72.7℃。Rf＝0.29(1.5:3.5 EtOAc/石油醚)；[α]D-23.0(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.51(br s，1H，d2o exch.)，7.71(d，J＝8.2Hz，1H，d2o exch.)，7.24-7.31(m，10H)，6.95(br s，1H，d2o exch.)，5.12(s，2H)，4.72-4.83(m，1H)，3.04-3.26(m，2H)，1.48(s，9H)。13C NMR(200 MHz，CDCl3)δ(pprn)169.97，158.37，157.70，155.99，135.70，135.50，129.33，128.70，128.52，128.33，128.14，127.18，84.94，67.83，53.29，37.57，27.60。IR(KBr)v 4000-3293，3063，3032，2982，2934，1732(br.)，1703(br.)，1519，1498，1455，1371，1219，1154，1028，840，742，698cm-1。
N-[(S)-1-芐基-2-(N’-芐氧羰基-聯(lián)氨基)-2-氧-乙基]-草酰胺酸甲基酯(Z-NPheO-OMe；實施例10) 在實施例7的步驟之后，使用N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙?；?-聯(lián)氨羧酸芐基酯(實施例8)和甲基草酰氯，得到1.1g(94％)無色粘稠油狀產物，經戊烷研制后得到白色粉末；熔點87-89℃。Rf＝0.42(1:1石油醚/EtOAc)；[α]D-24.6(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200 MHz，CDCl3)δ(ppm)8.52(br s，1H)，7.77(br s，1H)，7.14-7.22(m，11H)，5.02(s，2H)，4.73-4.76(m，1H)，3.67(s，3H)，2.85-3.36(m，2H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)169.92，160.07，156.47，156.07，135.64，135.47，129.25，128.68，128.52，128.36，128.15，127.16，67.88，53.63，53.25，37.59。IR(KBr)v 4000-3285(br.)，3031，2953，1742，1683，1525，1498，1456，1218，1028，980，741，697cm-1。
N’-[(S)-2-芐氧羰基氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-丙?；?-聯(lián)氨羧酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例11) 在實施例2的步驟之后，使用Z-L-色氨酸和Fmoc-咔唑鹽，得到1.7g粗化合物，經柱色譜提純得到1.39g(81％)白色固體；熔點191-192℃；[α]D-30.2(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200 MHz，DMSO-d6)δ(ppm)10.82(s，1H)，10.08(br s，1H)，9.37(br s，1H)，7.89(d，J＝7.04Hz，2H)，7.67-7.77(m，3H)，6.94-7.46(m，14H)，4.93(s，2H)，4.34(m，4H)，2.88-3.19(m，2H)。13C NMR(200 MHz，DMSO-d6)δ(ppm)171.79，155.99，155.76，143.62，140.68，136.88，136.04，128.22，127.67，127.41，127.09，125.27，123.99，120.82，120.08，118.48，118.2，111.26，109.87，66.15，65.21，53.93，46.46，27.84。IR(KBr)v4000-3385，3276，3062，2949，1730，1708，1694，1681，1668，1623cm-1。
N’-[(S)-2-t-丁氧羰基氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-丙?；?-聯(lián)氨羧酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例12) 在實施例2的步驟之后，使用Boc-L-色氨酸和Fmoc-咔唑鹽，得到1.56g(87％)白色固體產物；熔點181-182℃。Rf＝0.36(1:1石油醚/EtOAc)；[α]D-13.0(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)10.8(s，1H)，9.97(br s，1H)，9.36(br s，1H)，7.89(d，J＝7.04Hz，2H)，7.74(d，J＝8.0Hz，2H)，7.65(d，J＝7.24Hz，1H)，7.3-7.46(m，5H)，6.94-7.19(m，3H)，6.76(d，J＝8.8Hz，1H)，4.28(m，4H)，2.85-3.16(m，2H)，1.29(s，9H)。13C NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)171.96，155.98，155.10，143.61，140.69，135.98，127.67，127.29，127.08，125.28，123.80，120.75，120.11，118.51，118.11，111.25，109.93，77.90，59.72，53.41，46.48，28.08，27.79。IR(KBr)v4000-3328，3052，2977，2933，1748，1674，1626cm-1。
N-[(S)-2-[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-聯(lián)氨基]-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧-乙基}-草酰胺酸叔丁基酯(Fmoc-NTrpO-O-t-Bu；實施例13) 在實施例7的步驟之后，使用N’-[(S)-2-t-丁氧羰基氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酰基)-聯(lián)氨羧酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例12)，得到882mg(83％)無色粘稠油狀產物，用戊烷研制后得到灰白色粉末；熔點157-159℃。Rf＝0.24(1:1石油醚/EtOAc)；[α]D-37.2(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.4(br s，1H)，8.19(br s，1H)，7.65-7.81(m，4H)，7.52(d，J＝7.24Hz，2H)，6.96-7.4(m，9H)，4.72-4.82(m，1H)，4.12-4.41(m，3H)，3.28(m，2H)，1.46(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)170.4，158.43，157.58，156.06，143.46，143.39，141.21，136.12，127.79，127.16，125.13，123.95，122.18，119.97，119.76，118.53，111.43，109.23，85.04，68.01，52.9，46.76，27.96，27.59。IR(KBr)v 4000-3336(br.)，2979，1695，1507，1451，1371，1219，1153，758，740cm-1。
(S)-3-(1H-吲哚-3-基)-2-(甲氧草?；?氨基)-丙酸(實施例14) 在實施例1的步驟之后，使用L-色氨酸，得到185mg(65％)粘稠油狀目標化合物。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)10.83(s，1H)，8.93(d，J＝8.6Hz，1H)，7.52(d，J＝8.02Hz，1H)，7.33(d，J＝7.24Hz，1H)，6.93-7.14(m，3H)，4.47-4.58(m，1H)，3.74(s，3H)，3.13-3.33(m，2H)。
N-[(S)-2-[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-聯(lián)氨基]-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧-乙基}-草酰胺酸甲基酯(Fmoc-NTrpO-OMe；實施例15) 在實施例2的步驟之后，使用(S)-3-(1H-吲哚-3-基)-2-(甲氧草酰基-氨基)-丙酸(實施例14)和Fmoc-聯(lián)氨，得到265mg粗化合物，經柱色譜提純得到135mg(46％)白色固體，熔點141-142℃；[α]D-37.2(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)10.86(s，1H)，10.18(br s，1H)，9.43(br s，1H)，8.88(d，J＝7.62Hz，1H)，7.95(d，J＝7.64Hz，2H)，7.78(d，J＝7.04Hz，2H)，7.68(d，J＝7.62Hz，1H)，7.35-7.51(m，5H)，6.98-7.23(m，3H)，4.67-4.74(m，1H)，4.32-4.43(m，3H)，3.77(s，3H)，3.13-3.32(m，2H)。13CNMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)170.30，160.75，156.85，155.98，143.61，140.69，136.03，127.67，127.13，125.29，123.88，120.94，120.08，118.35，111.29，109.34，66.25，52.80，52.37，46.40，27.03。IR(KBr)v 4000-3389(br.)，3040(br.)，1741，1680cm-1。
N’-[(S)-2-t-丁氧羰基氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-丙?；?-聯(lián)氨羧酸芐基酯(實施例16) 在實施例2的步驟之后，使用Boc-L-色氨酸和Z-聯(lián)氨，得到2.16g(96％)粘稠油狀產物，經戊烷研制后得到灰白色粉末；熔點88-89℃。Rf＝0.42(1:1石油醚/EtOAc)；[α]D-18.2(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.35(br s，2H)，7.49(d，J＝7.44Hz，1H)，6.91-7.18(m，10H)，5.25(br d，1H)，4.94(s，2H)，4.45(m，1H)，3.1(m，2H)，1.26(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)171.94，156.21，155.71，135.97，135.56，128.52，128.31，128.1，127.54，123.67，121.96，119.47，118.51，111.29，109.53，80.51，67.72，53.79，34.11，28.2。IR(KBr)v 4000-3303(br.)，3036，2977，1687(br.)，1499，1457，1393，1367，1226，1165，1049，741，697cm-1。
N-[(S)-2-(N’-芐氧羰基-聯(lián)氨基)-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧-乙基}-草酰胺酸叔丁酯(Z-NTrpO-O-t-Bu；實施例17) 在實施例7的步驟之后，使用N’-[(S)-2-t-丁氧羰基氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-丙?；?-聯(lián)氨羧酸芐基酯(實施例16)，得到0.85g(80％)無色粘稠油狀產物，經戊烷研制后得到灰白色粉末。Rf＝0.32(2:1石油醚/EtOAc)；[α]D-56.8(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.55(br s，1H)，8.26(br s，1H)，7.77(d，J＝8.02Hz，1H)，7.63(d，J＝7.42Hz，1H)，7.03-7.31(m，10H)，5.05(s，2H)，4.68-4.78(m，1H)，3.25(m，2H)，1.45(s，9H)。13CNMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)170.47，158.42，157.53，156.12，136.12，135.48，128.54，128.35，128.10，127.34，124.05，122.04，119.66，118.45，111.47，109.06，85，67.80，52.92，27.96，27.58。IR(KBr)v 4000-3328(br.)，3058，2981，2934，1736(br.)，1692(br.)，1517，1457，1371，1219，1153，838，742cm-1。
N-[(S)-2-(N’-芐氧羰基-聯(lián)氨基)-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧-乙基}-草酰胺酸甲基酯(Z-NTrpO-OMe；實施例18) 在實施例7的步驟之后，使用N’-[(S)-2-t-丁氧羰基氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-丙?；?-聯(lián)氨羧酸芐基酯(實施例16)和甲基草酰氯，得到569mg(58％)白色固體產物，熔點:97-99℃。Rf＝0.12(1:1EtOAc/戊烷)；[α]D-37.4(c0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)10.81(s，1H)，10.13(s，1H)，9.31(s，1H)，8.82(d，J＝7.24Hz，1H)，6.94-7.63(m，10H)，5.1(s，2H)，4.63(m，1H)，3.72(s，3H)，3.19(m，2H)。13C NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)170.25，160.75，156.77，156，136.53，135.99，128.33，127.93，127.7，127.06，123.79，120.88，118.28，111.27，109.38，65.95，52.77，52.36，27.13。IR(KBr)v 4000-3299(br)，3034，2954，1739，1702，1679，1524，1457，1436，1342，1266，1221，1027，1010，743，697cm-1。
碳酸2-溴-芐基酯4-{(S)-2-t-丁氧羰基氨基-3-[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-聯(lián)氨基]-3-氧-丙基}-苯基酯(實施例19) 在實施例2的步驟之后，使用Boc-L-Tyr(2-Br-Z)-OH和Fmoc-聯(lián)氨，得到2.5g粗化合物，經柱色譜提純得到2.1g(94％)白色固體；熔點77-79℃。Rf＝0.57(1:1石油醚/EtOAc)；[α]D-5.8(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)9.95(br s，1H)，9.37(br s，1H)，7.89(d，J＝7.04Hz，2H)，7.68-7.75(m.3H)，7.55-7.67(m，1H)，7.33-7.54(m，8H)，7.16(d，J＝8.4Hz，2H)，6.98(d，J＝8.02Hz，1H)，5.31(s，2H)，4.22-4.36(m，4H)，2.7-3.04(m，2H)，1.29(s，9H)。13C NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)171.56，155.96，155.17，152.80，149.25，143.59，140.69，134.05，132.66，130.69，130.29，128.05，127.66，127.13，125.29，122.99，120.68，120.09，78.04，69.22，63.25，54.11，46.44，33.30，28.10。IR(KBr)v 4000-3309，3250，2976，1763，1717，1684，1627cm-1。
N-{(S)-1-[4-(2-溴-芐氧羰基氧)-芐基]-2-[N’-(9H-芴-9-基-甲氧羰基)-聯(lián)氨基]-2-氧-乙基}-草酰胺酸甲基酯(Fmoc-NTyr(2-Br-Z)O-OMe；實施例20) 在實施例7的步驟之后，使用碳酸2-溴-芐基酯4-{(S)-2-t-丁氧羰基氨基-3-[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-聯(lián)氨基]-3-氧-丙基}-苯基酯(實施例19)和甲基草酰氯，得到970mg的粗化合物，經柱色譜(硅膠)提純得到957mg(88％)白色粉末；熔點205-206℃；[α]D-10.2(c 0.5，DMF)。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)10.10(br s，1H)，9.38(br s，1H)，9.04(br d，J＝9.2Hz，1H)，7.88(d，J＝7.62Hz，2H)，7.67-7.70(m，3H)，7.32-7.57(m，9H)，7.14(d，J＝9.18Hz，2H)，5.30(s，3H)，4.53-4.66(m，1H)，4.16-4.34(m，3H)，3.73(s，3H)，2.96-3.15(m，2H)。13C NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)169.82，160.59，156.87，155.94，152.76，149.35，143.61，140.67，135.47，134.08，132.76，130.74，130.20，128.02，127.64，127.02，125.24，122.99，120.82，120.12，69.21，66.19，53.01，52.77，46.49，35.83。IR(KBr)v 4000-3382，3296，3019，2955，1765，1735，1709，1683，1509cm-1。
N-{(S)-1-[4-(2-溴-芐氧羰基氧)-芐基]-2-[N’-(9H-芴-9-基-甲氧羰基)-聯(lián)氨基]-2-氧-乙基}-草酰胺酸叔丁基酯(Fmoc-NTyr(2-Br-Z)O-O-t-Bu；實施例21) 在實施例7的步驟之后，使用碳酸2-溴-芐基酯4-{(S)-2-t-丁氧羰基氨基-3-[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-聯(lián)氨基]-3-氧-丙基}-苯基酯(實施例19)和t-丁基草酰氯，得到440mg(84％)無色粘稠油狀產物，經戊烷研制后得到白色粉末；熔點124-126℃。Rf＝0.38(1:1石油醚/EtOAc)；[α]D-12.4(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.53(br s，1H)，7.71-7.75(m，3H)，7.47-7.62(m，4H)，7.18-7.41(m，8H)，7.04-7.13(m，3H)，5.35(s，2H)，4.73-4.83(m，1H)，4.16-4.47(m，3H)，3.05-3.27(m，2H)，1.48(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)169.82，158.38，157.78，156.01，153.35，150.21，143.44，141.23，134.19，133.66，132.93，130.48，130.17，130.08，127.78，127.63，127.14，125.12，123.45，121.22，119.96，85.14，69.63，68.1，53.17，46.81，36.92，27.61。IR(KBr)v 4000-3291(br.)，2979，1761，1695，1509，1451，1372，1220，1153，758，740cm-1。
碳酸4-[(S)-3-(N’-芐氧羰基-聯(lián)氨基)-2-t-丁氧羰基氨基-3-氧-丙基}-苯基酯2-溴-芐基酯(實施例22) 在實施例2的步驟之后，使用Boc-L-Tyr(2-Br-Z)-OH和Z-聯(lián)氨，得到1.26g(96％)粘稠油狀產物，經戊烷研制得到灰白色粉末；熔點64-66℃。Rf＝0.78(1:1石油醚/EtOAc)；[α]D-15.6(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.61(br s，1H)，7.61(d，J＝7.82Hz，1H)，7.5(dd，J＝1.36，1.18Hz，1H)，7.07-7.38(m，12H)，5.36(br s，3H)，5.13(s，2H)，4.51(m，1H)，2.89-3.19(m，2H)，1.36(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)171.39，156.1，155.74，153.41，150.02，135.57，134.29，134.23，132.93，130.5，130.16，130.08，128.52，128.32，128.15，127.63，123.46，121，80.62，69.59，67.78，53.9，37.48，28.20。IR(KBr)v 4000-3287(br)，3034，2978，2932，1764，1683(br)，1509，1379，1368，1219，1163，1028，1018，751cm-1。
N-{(S)-2-(N’-芐氧羰基-聯(lián)氨基)-1-[4-(2-溴-芐氧羰基氧)-芐基]-2-氧-乙基}-草酰胺酸叔丁基酯(Z-NTyr(2-Br-Z)O-O-t-Bu；實施例23) 在實施例7的步驟之后，使用碳酸4-[(S)-3-(N’-芐氧羰基-聯(lián)氨基)-2-t-丁氧羰基氨基-3-氧-丙基}-苯基酯2-溴-芐基酯(實施例22)和叔丁基草酰氯，得到無色粘稠油狀產物0.49g(94％)，經戊烷研制后得到灰白色粉末；熔點93-94℃。Rf＝0.73(1:1戊烷/EtOAc)；[α]D-10.4(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.53(br s，1H)，7.74(d，J＝8.2Hz，1H)，7.61(dd，J＝1.16，1.16Hz，1H)，7.5(dd，J＝1.56，1.74Hz，1H)，7.0-7.39(m，12H)，5.35(s，2H)，5.12(s，2H)，4.7-4.81(m，1H)，2.95-3.25(m，2H)，1.48(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)169.85，158.4，157.73，156.02，153.34，150.18，135.49，134.20，133.68，132.93，130.47，130.17，130.1，128.53，128.35，128.15，127.64，123.46，121.16，85.06，69.61，67.85，53.12，36.91，27.61。IR(KBr)v 4000-3287(br.)，3035，2981，1760(br.)，1508，1372，1218，838，750，696cm-1。
N-{(S)-2-(N’-芐氧羰基-聯(lián)氨基)-1-[4-(2-溴-芐氧羰基氧)-芐基]-2-氧-乙基}-草酰胺酸甲基酯(Z-NTyr(2-Br-Z)O-OMe；實施例24) 在實施例7的步驟之后，使用碳酸4-[(S)-3-(N’-芐氧羰基-聯(lián)氨基)-2-t-丁氧羰基氨基-3-氧-丙基}-苯基酯2-溴-芐基酯(實施例22)和甲基草酰氯，得到白色固體產物460mg(94％)；熔點78-79℃。Rf＝0.2(1:1EtOAc/戊烷)；[α]D-9.0(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.69(br s，1H)，7.92(d，J＝7.82Hz，1H)，7.6(dd，J＝0.98，0.98Hz，1H)，7.49(dd，J＝1.56，1.58Hz，1H)，7.06-7.38(m，12H)，5.34(s，2H)，5.10(s，2H)，4.75-4.82(m，1H)，3.76(s，3H)，3.0-3.26(m，2H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)169.81，160.05，156.54，156.12，153.4，150.15，135.47，134.17，133.65，132.93，130.42，130.19，130.1，128.53，128.37，128.13，127.64，123.46，121.14，69.64，67.89，53.7，53.09，36.93。IR(KBr)v 4000-3281(br.)，3034，2955，1761，1702，1688，1507，1379，1218，1027，1017，750，696cm-1。
(S)-2-(甲氧草?；?氨基)-4-甲基-戊酸(實施例25) 在實施例1的步驟之后，使用L-亮氨酸，得到3.2g(96％)無色粘稠油狀目標產物。
N-[(S)-1-(N’-t-丁氧羰基-聯(lián)氨基羰基)-3-甲基-丁基]-草酰胺酸甲基酯(Boc-NLeuO-OMe)(實施例26) 在實施例2的步驟之后，使用(S)-2-(甲氧草?；?氨基)-4-甲基-戊酸(實施例25)，得到4.5g粗化合物，經柱色譜提純得到3.7g(75％)白色固體產物；在71℃軟化且在83℃熔化；[α]D-43.4(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.90(br s，1H)，7.87(br d，J＝8.6Hz，1H)，6.89(br s，1H)，4.57-4.68(m，1H)，3.80(s，3H)，1.51-1.69(m，3H)，1.37(s，9H)，0.87(dd，J＝5.66，5.48Hz，6H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)170.67，160.43，156.52，155.36，81.77，53.64，50.44，40.64，28.05，24.54，22.87，21.66。IR(KBr)v 4000-3292(br.)，2960，2873，1742，1687(br.)cm-1。
N’-[(S)-2-t-丁氧羰基氨基-4-甲基-戊?；?-聯(lián)氨羧酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例27) 在實施例2的步驟之后，使用Boc-L-亮氨酸一水合物和Fmoc-聯(lián)氨，得到粗化合物，經柱色譜提純得到7.2g(95％)白色固體產物；在82℃軟化且在92℃熔化；[α]D-37.0(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)9.04(br s，1H)，7.74(d，J＝7.44Hz，2H)，7.58(d，J＝7.22Hz，2H)，7.22-7.41(m，5H)，5.24-5.30(m，1H)，4.38(d，J＝6.84Hz，2H)，4.18-4.32(m，1H)，1.58-1.84(m，3H)，1.54(s，9H)，0.95(dd，J＝5.28，5.48Hz，6H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)172.86，156.21，156.14，143.54，141.2，127.72，127.12，125.2，119.92，80.51，67.99，51.3，46.85，41.15，28.3，24.57，22.91，21.84。IR(KBr)v 4000-3287(br.)，2958，2871，1685(br.)cm-1。
N-{(S)-1-[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-聯(lián)氨基羰基]-3-甲基-丁基}-草酰胺酸甲基酯(Fmoc-NLeuO-OMe)(實施例28) 在實施例7的步驟之后，使用N’-[(S)-2-t-丁氧羰基氨基-4-甲基-戊?；?-聯(lián)氨羧酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例27)和甲基草酰氯，得到3.7g粗化合物，經柱色譜(硅膠)提純得到3.4g(90％)白色粉末產物；在82℃軟化且在87.3℃熔化；[α]D-42.0(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.85(s，1H)，7.62-7.72(m，3H)，7.47(d，J＝7.22Hz，2H)，7.13-7.32(m，5H)，4.56-4.68(m，1H)，4.29(d，J＝7.24，2H)，4.02-4.14(m，1H)，3.72(s，3H)，1.5-1.79(m，3H)，0.84(dd，J＝5.48Hz，6H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)170.95，160.45，156.47，156.22，143.55，141.24，127.79，127.15，125.23，119.98，68.11，53.76，50.68，46.85，40.7，24.69，22.9，21.75。IR(KBr)v 4000-3283(br.)，2956，2925，2854，1739，1684(br.)cm-1。
N-{(S)-1-[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-聯(lián)氨基羰基]-3-甲基-丁基)-草酰胺酸叔丁基酯(Fmoc-NLeuO-O-t-Bu；實施例29) 在實施例7的步驟之后，使用N’-[(S)-2-t-丁氧羰基氨基-4-甲基-戊?；?-聯(lián)氨羧酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例27)和叔丁基草酰氯，得到1.0g(88％)無色粘稠油狀產物，經戊烷研制后得到灰白色粉末；熔點91-93℃。Rf＝0.63(1:1石油醚/EtOAc)；[α]D-35.2(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.91(br s，1H)，7.55-7.76(m，5H)，7.23-7.41(m，4H)，7.12(br s，1H)，4.66-4.74(m，1H)，4.17-4.45(m，3H)，1.19-1.84(m，12H)，0.86-0.97(m，6H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)171.04，158.71，157.81，156.1，143.49，141.21，127.76，127.13，125.16，119.94，85.07，68.18，50.56，46.8，40.75，27.62，24.62，22.76，21.99。IR(KBr)v 4000-3286(br.)，2958，1703，1684，1520，1451，1370，1304，1217，1155，759，740cm-1。
N’-[(S)-2-t-丁氧羰基氨基-4-甲基-戊?；?-聯(lián)氨羧酸芐基酯(實施例30) 在實施例2的步驟之后，使用Boc-L-Leu和Z-聯(lián)氨，得到2.16g(94％)粘稠油狀產物，經戊烷研制后得到灰白色粉末；熔點57-59℃。Rf＝0.76(1:1石油醚/EtOAc)；[α]D-42.6(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.96(br s，1H)，7.31(s，6H)，5.21(br s，1H)，5.12(s，2H)，4.3(m，1H)，1.51-1.71(m，3H)，1.4(s，9H)，0.88-0.93(m，6H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)172.85，156.23，156.04，135.63，128.46，128.24，128.12，80.49，67.64，51.21，41.16，28.24，24.5，22.85，21.82。IR(KBr)v 4000-3296(br.)，2959，1683(br.)，1521，1393，1368，1221，1166，1047，741，696cm-1。
N-[(S)-1-(N’-芐氧羰基-聯(lián)氨基羰基)-3-甲基-丁基]-草酰胺酸叔丁基酯(Z-NLeuO-O-t-Bu；實施例31) 在實施例7的步驟之后，使用N’-[(S)-2-t-丁氧羰基氨基-4-甲基-戊?；?-聯(lián)氨羧酸芐基酯(實施例30)和叔丁基草酰氯，得到0.84g(78％)無色粘稠油狀產物，經戊烷研制后得到灰白色粉末；熔點69-71℃。Rf＝0.72(1:1戊烷/EtOAc)；[α]D-41.6(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.85(br s，1H)，7.66(br s，1H)，7.31(s，5H)，7.04(br s，1H)，5.18(s，2H)，4.59-4.63(m，1H)，1.61-1.82(m，3H)，1.51(s，9H)，0.90(br s，6H)。13CNMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)171.02，158.73，157.72，156.07，135.52，128.5，128.29，128.15，84.95，67.78，50.51，40.78，27.61，24.55，22.71，21.94。IR(KBr)v 4000-3294(br.)，2960，1685(br.)，1523，1370，1306，1218，1156，842，741，697cm-1。
N-[(S)-1-(N’-芐氧羰基-聯(lián)氨基羰基)-3-甲基-丁基]-草酰胺酸甲基酯(Z-NLeuO-OMe；實施例32) 在實施例7的步驟之后，使用N’-[(S)-2-t-丁氧羰基氨基-4-甲基-戊?；?-聯(lián)氨羧酸芐基酯(實施例30)和甲基草酰氯，得到771mg(88％)白色固體產物。Rf＝0.24(1:1EtOAc/戊烷)；[α]D-43.8(c 0.5，MeOH)。1HNMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.97(br s，1H)，7.82(br s，1H)，7.3(br s，6H)，5.1(s，2H)，4.63-4.66(m，1H)，3.79(s，3H)，1.68(m，3H)，0.89(br s，6H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)171.99，160.26，156.62，156.16，135.5，128.5，128.31，128.14，67.8，53.65，50.55，40.69，24.55，22.73，21.74。IR(KBr)v 4000-3287(br)，3036，2958，1686(br)，1525，1456，1217，1043，986，741，697cm-1。
(S)-2-[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-聯(lián)氨基羰基]-吡咯烷-1-羧酸叔丁基酯(實施例33)
在DCM(15mL)中的Boc-L-輔氨酸琥珀酰胺酯(0.5g，1.6mmol)溶液中加入Fmoc-聯(lián)氨(0.41g，1.6mmol)，并在室溫下攪拌過夜。用EtOAc(50mL)稀釋反應混合物，并用1N HCl(15mL)、10％NaHCO3(15mL)、鹽水(15mL)洗滌，干燥(Na2SO4)并濃縮得到701mg(96％)白色固體產物；熔點81-82℃。Rf＝0.3(1:1EtOAc/戊烷)；[α]D-59.8(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.85(br s，1H)，7.65(d，J＝7.24Hz，2H)，7.5(d，J＝7.24Hz，2H)，7.11-7.33(m，5H)，4.25-4.34(m，3H)，4.1-4.17(m，1H)，3.37(m，2H)，1.69-2.08(m，4H)，1.38(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)172.02，171.17，156.07，143.56，141.23，127.73，127.11，125.15，119.93，80.85，67.92，58.38，47.1，46.9，28.36，24.42，14.17。IR(KBr)v 4000-3277(br)，2977，1696(br)，1451，1405，1366，1246，1164，759，740cm-1。
(S)-2-(N’-芐氧羰基-聯(lián)氨基羰基)-吡咯烷-1-羧酸叔丁基酯(實施例34) 在實施例33的步驟之后，使用Z-聯(lián)氨，得到1.1g(94％)粘性物產物。Rf＝0.28(1:1EtOAc/戊烷)；[α]D-82.0(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.76(br s，1H)，7.25(s，5H)，6.94(br s，1H)，5.07(s，2H)，4.22(br s，1H)，3.32(br s，2H)，1.68-2.21(m，4H)，1.37(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)171.99，156.02，135.66，128.48，128.25，128.1，80.79，67.64，58.24，47.03，28.32，24.41，14.15。IR(KBr)v 4000-3280(br)，2979，1699(br)，1456，1404，1367，1219，1164，742，697cm-1。
{(S)-2-[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-聯(lián)氨基羰基]-吡咯烷-1-基}-氧-乙酸叔丁基酯(Fmoc-NProO-O-t-Bu；實施例35) 在實施例7的步驟之后，使用(S)-2-[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-聯(lián)氨基羰基]-吡咯烷-1-羧酸叔丁基酯(實施例33)和叔丁基草酰氯，得到637mg(99％)白色固體產物；熔點86-87℃。Rf＝0.13(1:1EtOAc/戊烷)；[α]D-68.6(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.83(s，1H)，7.73(d，J＝7.04Hz，2H)，7.58(d，J＝7.24Hz，2H)，7.17-7.41(m，5H)，4.57-4.74(m，1H)，4.37-4.41(m，2H)，4.19-4.26(m，1H)，3.63-3.81(m，2H)，1.94-2.4(m，4H)，1.53(s，9H)。(還觀測到小部分的另一旋轉異構體)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)170.47，160.85，160.56，156.1，143.59，141.21，127.71，127.13，125.21，119.91，84.81，68.01，58.49，48.22，46.85，27.86，27.74，24.91。IR(KBr)v 4000-3282(br)，2980，1733，1700，1656，1652，1451，1370，1252，1149，759，740cm-1。
[(S)-2-(N’-芐氧羰基-聯(lián)氨基羰基)-吡咯烷-1-基]-氧-乙酸叔丁基酯(Z-NProO-O-t-Bu；實施例36) 在實施例7的步驟之后，使用(S)-2-(N’-芐氧羰基-聯(lián)氨基羰基)-吡咯烷-1-羧酸叔丁基酯(實施例34)和叔丁基草酰氯，得到807mg(99％)白色固體產物；熔點51-52℃。Rf＝0.15(1:1EtOAc/戊烷)；[α]D-70.8(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.76(br s，1H)，7.31(s，5H)，7.12(br s，1H)，5.12(s，2H)，4.5-4.67(m，1H)，3.6-3.66(m，2H)，1.85-2.26(m，4H)，1.53(s，9H)(還觀測到小部分的另一種旋轉異構體)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)170.47，160.81，160.39，156.06，135.73，128.46，128.18，128.07，84.69，67.59，58.46，48.16，27.85，27.68，24.81。IR(KBr)v4000-3290(br)，2982，1733(br)，1651(br)，1456，1371，1253，115，742，698cm-1。
[(S)-2-(N’-芐氧羰基-聯(lián)氨基羰基)-吡咯烷-1-基]-氧-乙酸甲基酯(Z-NProO-OMe；實施例37) 在實施例7的步驟之后，使用(S)-2-(N’-芐氧羰基-聯(lián)氨基羰基)-吡咯烷-1-羧酸叔丁基酯(實施例34)和單甲基草酰氯，得到620mg(86％)粘性物產物。
N’-((DL)-2-t-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙酰基)-聯(lián)氨羧酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例38) 在實施例2的步驟之后，使用Boc-DL-苯基丙氨酸和Fmoc-聯(lián)氨，得到514mg(67％)白色固體產物。
N’-((DL)-2-t-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙酰基)-聯(lián)氨羧酸芐基酯(實施例39) 在實施例2的步驟之后，使用Boc-DL-苯基丙氨酸和Z-聯(lián)氨，得到617mg(98％)白色固體產物。
N-{(DL)-1-芐基-2-[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-聯(lián)氨基]-2-氧-乙基}-草酰胺酸叔丁基酯(Fmoc-N(DL)PheO-O-O-tBu；實施例40) 在實施例7的步驟之后，使用N’-((DL)-2-t-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙?；?-聯(lián)氨羧酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例38)和叔丁基草酰氯，得到450mg粗化合物，經柱色譜提純得到278mg(52％)白色固體。
N-[(DL)-1-芐基-2-(N’-芐氧羰基-聯(lián)氨基]-2-氧-乙基}-草酰胺酸叔丁基酯(Z-N(DL)PheO-O-O-tBu；實施例41) 在實施例7的步驟之后，使用N’-((DL)-2-t-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙?；?-聯(lián)氨羧酸芐基酯(實施例39)和叔丁基草酰氯，得到430mg粗化合物，經柱色譜提純得到304mg(56％)白色固體。
N’-((R)-2-t-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙?；?-聯(lián)氨羧酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例42) 在實施例2的步驟之后，使用Boc-D-苯基丙氨酸和Fmoc-聯(lián)氨，得到760mg粗化合物，經柱色譜提純得到710mg(93％)白色固體。Rf＝0.26(1.5:3.5EtOAc/石油醚)；[α]D+10.8(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)9.94(br s，1H，d2o exch.)，9.35(br s，1H，d2o exch.)，7.88(d，J＝6.86Hz，2H)，7.73(d，J＝7.04Hz，2H)，7.17-7.45(m，9H)，6.93(d，J＝8.6Hz，1H，d2o exch.)，4.28-4.31(m，4H)，2.69-3.0(m，2H)，1.27(s，9H)。13C NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)171.67，155.95，155.13，143.58，140.65，137.94，129.15，127.95，127.64，127.06，126.16，125.24，120.05，79.09，77.93，66.11，54.16，46.44，28.05。
N-{(R)-1-芐基-2-[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-聯(lián)氨基]-2-氧-乙基}-草酰胺酸叔丁基酯(Fmoc-N(D)PheO-O-O-tBu；實施例43) 在實施例7的步驟之后，使用N’-((R)-2-t-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙?；?-聯(lián)氨羧酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例42)和叔丁基草酰氯，得到835mg(79％)白色粉末產物。Rf＝0.29(1.5:3.5EtOAc/石油醚)；[α]D+18.4(c0.5，DMF)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.49(br s，1H，d2o exch.)，7.64(d，J＝7.42Hz，3H，1H，d2o exch.)，7.46(d，J＝7.42Hz，2H)，7.14-7.31(m，9H)，6.96(br s，1H，d2o exch.)，4.66-4.77(m，1H)，4.21-4.35(m，2H)，4.06-4.13(m，1H)，2.96-3.19(m，2H)，1.37(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)170.02，158.36，157.78，156.03，143.46，141.23，135.69，129.32，128.74，127.77，127.22，127.14，125.14，119.95，85.01，68.11，53.35，46.80，37.59，27.61。
(S)-6-芐基-[1，2，5]三氮雜環(huán)庚烷-3，4，7-三酮(實施例44)
在CH2Cl2(15mL)中的N-[(S)-1-芐基-2-(N’-t-丁氧羰基-聯(lián)氨基)-2-氧-乙基]-草酰胺酸甲基酯(實施例2)(1.0g，2.74mmol)溶液中滴加入TFA(15mL)，在氬氣中于室溫下繼續(xù)攪拌反應混合物30分鐘。然后，蒸發(fā)反應混合物除去草酰氯，并在高真空下徹底干燥。所得剩余物溶解于干燥的CH2Cl2(15mL)中，并用10％NaHCO3洗滌。用CH2Cl2(3×10mL)萃取水溶液，用Na2SO4干燥合并后的有機層，并減壓蒸發(fā)。所得剩余物于氮氣下在MeOH(15mL)中回流過夜。蒸發(fā)脫去溶劑，所得粗化合物經柱色譜提純得到350mg(54％)白色固體目標化合物。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.3(br s，1H)，8.1(br s，1H)，7.1-7.4(m，5H)，6.7(br s，1H)，4.7-4.9(m，1H)，3.04-3.36(m，2H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)171.83，159.2，158.6，135.7，129.23，128.67，127.1，53.1，37.5。
N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-丙酰基)-聯(lián)氨羧酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例45) 在實施例2的步驟之后，使用Boc-L-丙氨酸和Fmoc-聯(lián)氨，得到4.4g(97％)白色固體產物；熔點71-72℃。Rf＝(1:1戊烷/EtOAc)；[α]D-36.0(c0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.78(br s，1H)，7.74(d，J＝7.42Hz，2H)，7.57(d，J＝7.44Hz，2H)，7.23-7.41(m，5H)，5.31(br s，1H)，4.39(d，J＝7.02Hz，2H)，4.18-4.33(m，1H)，1.38-1.44(m，12H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)172.88，156.24，155.77，143.48，141.22，127.74，127.11，125.13，119.93，80.56，67.98，48.45，46.85，28.29，18.09。IR(KBr)v4000-3293(br.)，2979，2934，1668(br.)，1506，1451，1368，1247，1167，1046，759，740cm-1。
N-{(S)-2-[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-聯(lián)氨基]-1-甲基-2-氧-乙基}-草酰胺酸叔丁基酯(Fmoc-NAlaO-O-O-tBu；實施例46) 在實施例7的步驟之后，使用N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-丙?；?-聯(lián)氨羧酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例45)和叔丁基草酰氯，得到3.8g(93％)白色固體產物，熔點79-80℃。Rf＝(1:1戊烷/EtOAc)；[α]D-31.4(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.74(br s，1H)，7.63-7.72(m，3H)，7.47(d，J＝7.24Hz，2H)，7.09-7.32(m，5H)，4.47-4.61(m，1H)，4.3(d，J＝7.04Hz，2H)，4.1-4.15(m，1H)，1.37-1.43(m，12H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)171.31，158.62，157.62，156.17，143.45，141.22，127.77，127.12，125.11，119.95，85.06，68.08，47.84，46.81，27.63，17.65。IR(KBr)v4000-3290(br.)，2982，2936，1732，1692(br.)，1520，1451，1371，1296，1220，1156，759，741cm-1。
N-{(S)-2-[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-聯(lián)氨基]-1-甲基-2-氧-乙基}-草酰胺酸(Fmoc-NAlaOOH；實施例47)
0℃在攪拌下，在DCM(15mL)中的N-{(S)-2-[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-聯(lián)氨基]-1-甲基-2-氧-乙基}-草酰胺酸叔丁基酯(實施例46)(1.0g，2.21mmol)溶液中緩慢加入TFA(15mL)。在室溫下攪拌反應混合物30分鐘。蒸發(fā)脫去溶劑，在高真空下徹底干燥得到870mg粗化合物，經EtOAc-石油醚結晶后得到752mg(85％)白色固體目標化合物。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)9.92(s，1H)，9.33(s，1H)，8.73(d，J＝7.82Hz，1H)，7.87(d，J＝7.02Hz，2H)，7.71(d，J＝7.02Hz，2H)，7.28-7.44(m，4H)，4.27-4.4(m，4H)，1.33(d，J＝6.84Hz，3H)。13CNMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)171.08，161.67，157.86，155.88，143.56，140.66，127.65，127.06，125.21，120.07，66.12，47.22，46.43，17.72。
N-((S)-1-聯(lián)氨基羰基-乙基)-草酰胺酸叔丁基酯(NAlaO-O-t-Bu；實施例48)
在DMF(15mL)5％哌啶中的N-{(S)-2-[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-聯(lián)氨基]-1-甲基-2-氧-乙基}-草酰胺酸叔丁基酯(實施例46)(2.1g，4.63mmol)溶液在室溫下攪拌20分鐘。蒸發(fā)脫去溶劑，并在高真空下徹底干燥反應混合物。所得的粗化合物經柱色譜提純得到137mg(12％)粘稠產物。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)7.81(d，J＝7.82Hz，1H)，4.37-4.51(m，1H)，4.06(br s，2H)，1.48(s，9H)，1.36(d，J＝7.04Hz，3H)。
N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-丙?；?-聯(lián)氨羧酸芐基酯(實施例49) 在實施例2的步驟之后，使用Boc-L-丙氨酸和Z-聯(lián)氨，得到6.9g(96％)白色固體產物；熔點130-131℃。Rf＝(石油醚/EtOAc)；[α]D-43.6(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3-2滴DMSO-d6)δ(ppm)9.37(bs，1H)，8.29(bs，1H)，7.3(s，5H)，5.72(bs，1H)，5.1(s，2H)，4.23(bs，1H)，1.4(s，9H)，1.31(d，J＝6.64Hz，3H)。13C NMR(200MHz，CDCl3-2滴DMSO-d6)δ(ppm)177.7，161.11，160.02，140.87，133.15，132.84，132.75，84.19，71.77，53.33，33.08，23.55。
N-[(S)-2-(N’-芐氧羰基-聯(lián)氨基)-1-甲基-2-氧-乙基}-草酰胺酸叔丁基酯(Z-NAlaO-O-O-t-Bu；實施例50) 在實施例7的步驟之后，使用N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-丙?；?-聯(lián)氨羧酸芐基酯(實施例49)和叔丁基草酰氯，得到2.8g(86％)白色固體產物；熔點49-51℃。Rf＝(1:1戊烷/EtOAc)；[α]D-44.0(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.87(br s，1H)，7.84(d，J＝7.64Hz，1H)，7.3(s，5H)，7.21(s，1H)，5.1(s，2H)，4.51-4.65(m，1H)，1.5(s，9H)，1.42(d，J＝6.66Hz，3H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)171.43，158.65，157.53，156.2，135.52，128.5，128.31，128.12，84.93，67.78，47.83，27.61，17.71。IR(KBr)v 4000-3296(br.)，2984，2938，1733，1699(br.)，1517，1456，1371，1297，1219，1156，840，740，697cm-1。
N-[(S)-2-(N’-芐氧羰基-聯(lián)氨基)-1-甲基-2-氧-乙基}-草酰胺酸甲基酯(Z-NAlaO-OMe；實施例51) 在實施例7的步驟之后，使用N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-丙?；?-聯(lián)氨羧酸芐基酯(實施例49)和單甲基草酰氯，得到640mg(22％)白色固體產物；熔點51-52℃。Rf＝0.37(1:1戊烷/EtOAc)；[α]D-47.6(c 0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.93(s，1H)，8.0(d，J＝7.24Hz，1H)，7.35(s，1H)，7.3(s，5H)，5.09(s，2H)，4.56-4.64(m，1H)，3.79(s，3H)，1.41(d，J＝6.64Hz，3H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)171.37，160.24，156.39，156.28，135.5，128.5，128.34，128.11，67.81，53.68，47.84，17.65。IR(KBr)v 4000-3293(br.)，3035，2956，1702，1689(br.)，1524，1456，1283，1218，985，742，667cm-1。
N-[(S)-2-(N’-芐氧羰基-聯(lián)氨基)-1-甲基-2-氧-乙基}-草酰胺酸(Z-NAlaO-OH；實施例52) 在實施例47的步驟之后，使用N-[(S)-2-(N’-芐氧羰基-聯(lián)氨基)-1-甲基-2-氧-乙基}-草酰胺酸叔丁基酯(實施例50)，得到2.2g(99％)白色固體目標產物；熔點173-174℃。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)9.7(s，1H)，9.04(s，1H)，8.52(d，J＝7.62Hz，1H)，7.14(s，5H)，4.86(s，2H)，4.08-4.15(m，1H)，1.1(d，J＝6.46Hz，3H)。13C NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)172.27，162.81，159.04，157.05，137.66，129.5，129.11，128.93，67.03，48.36，18.82。
[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-聯(lián)氨基]-氧-乙酸叔丁基酯(實施例53)
在氬氣下冰浴中，在緩慢攪拌下將叔丁基草酰氯(0.06mL，0.39)加入至Fmoc-聯(lián)氨(0.100mg，0.39mmol)、DIPEA(0.08mL，0.43mmol)和二氯甲烷(10mL)的混合物中。在室溫下繼續(xù)攪拌反應混合物15分鐘。用1N HCl(5mL)，隨后10％NaHCO3(5mL)和鹽水(5mL)洗滌反應混合物，并濃縮得到140mg粗化合物，經柱色譜提純得到94mg(62％)白色固體，熔點79-80℃。Rf＝0.45(2:1戊烷/EtOAc)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.94(br s，1H)，7.75(d，J＝7.42Hz，2H)，7.58(d，J＝7.24Hz，2H)，7.26-7.43(m，5H)，4.44(d，J＝7.22Hz，2H)，4.23(t，J＝7.14Hz，1H)，1.57(m，12H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ.(ppm)157.78，156.38，155.51，143.33，141.25，127.84，127.16，125.1，120.01，85.69，68.3，46.79，27.70。
[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-聯(lián)氨基]-氧-乙酸(實施例54)
在實施例47的步驟之后，使用[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-聯(lián)氨基]-氧-乙酸叔丁基酯(實施例53)，得到76mg(100％)白色固體產物，熔點178-179℃。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)10.64(s，1H)，9.5(s，1H)，7.88(d，J＝7.24Hz，2H)，7.72(d，J＝6.64Hz，2H)，7.32-7.45(m，4H)，4.22-4.35(m，3H)。13C NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)161.19，158.19，155.43，143.51，140.67，127.67，127.06，125.18，120.09，66.19，46.38。
N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙?；?-N-甲基-聯(lián)氨羧酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例55)
在實施例2的步驟之后，使用Boc-L-苯基丙氨酸和1-Fmoc-1-甲基聯(lián)氨，得到794mg(81％)白色固體產物；熔點81-82℃。Rf＝0.68(1:1EtOAc/戊烷)；[α]D-12.0(c0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.48(bs，1H)，7.75(d，J＝7.22Hz，2H)，7.56(d，J＝7.24Hz，2H)，7.23-7.43(m，9H)，5.24(bs，1H)，4.19-4.41(m，4H)，3.07(bs，5H)，1.37(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)170.06，155.9，155.56，143.66，141.23，136.35，129.42，128.58，127.73，127.14，126.96，125.06，119.95，80.5，68.31，54.03，46.96，38.32，37.32，28.21。IR(KBr)v 4000-3289(br.)，3064，3029，2977，1681(br.)，1478，1496，1451，1392，1366，1348，1249，1165，758，740cm-1。
N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙酰基)-N’-甲基-聯(lián)氨羧酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例56)
在實施例2的步驟之后，使用Boc-L-苯基丙氨酸和1-Fmoc-2-甲基聯(lián)氨，得到632mg(65％)白色固體產物；熔點108-109℃；[α]D+23.6(c0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)7.79(d，J＝7.24Hz，2H)，7.17-7.74(m，12H)，5.3(bs，1H)，4.91(bs，1H)，4.49(bs，2H)，4.21(m，1H)，2.66-3.31(m，5H)，1.39(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)173.92，155.35，154.71，143.32，141.36，136.53，129.35，128.47，127.9，127.17，126.9，124.91，120.07，79.88，67.77，51.23，46.94，35.64，28.27。IR(KBr)v4000-3383，3224，3064，3004，2977，2929，1742，1697，1647，1516，1451，1391，1366，1248，1170，1115，1083，1048，756，740cm-1。
N-{(S)-1-芐基-2-[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-N’-甲基-聯(lián)氨基]-2-氧-乙基}-草酰胺酸叔丁基酯(實施例57)
0℃在攪拌下，在DCM(10mL)中的N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙酰基)-N-甲基-聯(lián)氨羧酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例55)(687mg，1.33mmol)溶液中緩慢加入TFA(10mL)，在室溫下攪拌反應混合物過夜。蒸發(fā)脫去溶劑并在高真空下徹底干燥。所得剩余物溶解于干燥的DCM(30mL)中，在氬氣中0℃下將DIPEA(0.7mL，4.0mmol)加入至反應混合物中，隨后加入叔丁基草酰氯(219mg，1.33mmol)。在室溫下繼續(xù)攪拌反應混合物30分鐘。用1N HCl(15mL)，隨后10％NaHCO3(15mL)和鹽水(15mL)洗滌混合物。干燥有機相(Na2SO4)并濃縮得到770mg粗化合物，經柱色譜提純得到635mg(87％)白色粉末產物。Rf＝0.2(1:2EtOAc/戊烷)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.64(s，1H)，7.62(d，J＝7.04Hz，3H)，7.43(d，J＝7.04Hz，2H)，7.13-7.3(m，9H)，4.78(q，J＝7.24Hz，1H)，3.97-4.27(m，3H)，3.03(bs，2H)，2.93(s，3H)，1.33(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)169.0，158.29，157.49，155.82，143.61，141.2，135.7，129.42，128.69，127.75，127.23，127.12，125.05，119.95，85.01，68.44，53.08，46.87，38.11，37.51，27.56。
N-{(S)-1-芐基-2-[N’-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-N-甲基-聯(lián)氨基]-2-氧-乙基}-草酰胺酸叔丁基酯(實施例58)
在實施例57的步驟之后，使用N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙酰基)-N’-甲基-聯(lián)氨羧酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例56)，得到463mg(83％)白色粉末產物。Rf＝0.26(1:2EtOAc/戊烷)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)7.68(d，J＝7.22Hz，2H)，7.07-7.6(m，13H)，4.98(bs，1H)，4.39(bs，2H)，4.11(bs，1H)，2.97(bs，5H)，1.43(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)172.37，158.6，157.07，154.76，143.29，141.35，135.75，129.32，128.61，127.91，127.23，127.16，124.91，120.07，84，78，67.75，50.73，46.93，35.69，27.68。
N’-{(S)-2-[((S)-1-二甲氨基甲?；?乙基氨基草?；?-氨基]-3-苯基-丙?；鶀-聯(lián)氨羧酸叔丁基酯(實施例59)
在實施例2的步驟之后，使用N-[(S)-1-芐基-2-(N’-t-丁氧羰基-聯(lián)氨基)-2-氧-乙基]-草酰胺酸(實施例3)和(S)-2-氨基-N，N-二甲基-丙酰胺，得到122mg(35％)灰白色固體產物；熔點104-107℃；[α]D-(c0.5，MeOH)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.6(br s，1H)，8.25-8.29(br，2H)，7.14-7.2(m，5H)，6.59(br s，1H)，4.68-4.8(m，2H)，3.29(dd，J＝5.28Hz，1H)，2.93-3.07(m，4H)，2.88(s，3H)，1.35(s，9H)，1.26(d，J＝6.26Hz，3H)。13CNMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)171.17，169.77，159.60，158.42，155.18，136.39，129.25，128.60，126.93，81.75，53.11，45.66，37.29，36.98，35.84，28.08，17.88。IR(KBr)v 4000-3292(br.)，3030，2980，2935，1674(br.)，1641，1498cm-1。
{(S)-1-芐基-2-[N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-丙?；?-聯(lián)氨]-2-氧-乙基}-氨基甲酸芐基酯(實施例60)
將Boc-L-Ala(1.81g，9.57mmol)溶解于DCM(30mL)中，加入HOBt(1.36g，10.05mmol)，隨后加入EDCl.HCl(1.93g，10.05mmol)。將N-芐氧羰基-L-苯基丙氨酸聯(lián)氨(3.0g，9.57mmol)加入該溶液中，隨后加入三乙胺(1.47mL，10.53mmol)。在室溫下繼續(xù)攪拌反應混合物過夜。旋轉蒸發(fā)除去DCM，所得剩余物溶解于EtOAc(50mL)中。用1N HCl(15mL)、10％NaHCO3(15mL)和鹽水(15mL)洗滌EtOAc溶液。加熱EtOAc以溶解沉淀的化合物，并加入石油醚(10mL)。靜置溶液過夜。過濾結晶出的化合物，得到3.7g(79％)白色晶狀固體產物；熔點197-198℃。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)10.18(br s，1H)，9.93(br s，1H)，7.54(d，J＝8.4Hz，1H)，7.17-7.35(m，10H)，6.96(d，J＝7.62Hz，1H)，4.92(s，2H)，4.25-4.36(m，1H)，4.0-4.08(m，1H)，2.69-3.09(m，2H)，1.38(s，9H)，1.23(d，J＝7.24Hz，3H)。
{(S)-1-[N’-((S)-2-氨基-3-苯基-丙酰基)-聯(lián)氨羰基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯(實施例61)
在帕爾設備中，在室溫、60psi(磅/平方英寸)下使用10％Pd/C(125mg，15％w/w)氫化在MeOH(15mL)中的{(S)-1-芐基-2-[N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-丙?；?-聯(lián)氨]-2-氧-乙基}-氨基甲酸芐基酯(實施例60)(835mg，1.72mmol)溶液2小時。用燒結玻璃漏斗過濾催化劑，蒸發(fā)濾液得到568mg(94％)灰白色固體產物；熔點76-77℃。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)7.26(br s，5H)，6.94(d，J＝9.78Hz，1H)，4.02-4.09(m，1H)，3.46-3.53(m，1H)，2.93-3.02(m，1H)，2.57-2.67(m，1H)，1.38(s，9H)，1.21(d，J＝5.68Hz，3H)。
N-{(S)-1-芐基-2-[N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-丙酰基)-聯(lián)氨基]-2-氧-乙基}-草酰胺酸甲基酯(Boc-Ala-NPheO-OMe；實施例62)
0℃氬氣下，將三乙胺(1.56mL，11.13mmol)加入至在干燥DCM(10mL)中的{(S)-1-[N’-((S)-2-氨基-3-苯基-丙?；?-聯(lián)氨羰基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯(實施例61)(2.6g，7.42mmol)溶液中，隨后加入甲基草酰氯(0.72mL，7.79mmol)，反應混合物在0℃攪拌30分鐘，在室溫下攪拌1.5小時?；旌衔镉肊tOAc(50mL)稀釋，并用1N HCl(10mL)、10％NaHCO3(10mL)和鹽水(10mL)洗滌。干燥(Na2SO4)EtOAc層，并濃縮得到3.2g粗化合物，經EtOAc-石油醚結晶得到2.92g(90％)白色晶狀固體；熔點134-135℃。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)10.21(s，1H)，9.9(s，1H)，8.96(d，J＝8.6Hz，1H)，7.16-7.29(m，5H)，6.97(d，J＝7.64Hz，1H)，4.54-4.66(m，1H)，4.0-4.08(m，1H)，3.74(s，3H)，2.94-3.18(m，2H)，1.38(s，9H)，1.22(d，J＝7.64Hz，3H)。
N-{(S)-1-芐基-2-[N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-丙?；?-聯(lián)氨基]-2-氧-乙基}-草酰胺酸(Boc-Ala-NPheO-OH；實施例63)
在實施例3的步驟之后，使用N-{(S)-1-芐基-2-[N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-丙?；?-聯(lián)氨基]-2-氧-乙基}-草酰胺酸甲基酯(實施例62)，得到2.25g(79％)白色晶狀固體；熔點162-163℃。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)10.21(s，1H)，9.90(s，1H)，8.69(d，J＝10.16Hz，1H)，7.15-7.27(m，5H)，6.97(d，J＝7.24Hz，1H)，4.51-4.62(m，1H)，3.99-4.07(m，1H)，2.93-3.16(m，2H)，1.36(s，9H)，1.21(d，J＝7.24Hz，3H)。13C NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)171.79，168.99，161.44，158.11，154.92，137.47，129.1，128.05，126.35，77.90，53.07，48.15，36.86，28.15，18.14。IR(KBr)v4000-3331，3258，3032，2980，2937，1765，1686，1616，1529，1481cm-1。
[(S)-1-(N’-{(S)-2-[((S)-1-二甲氨基甲酰基-乙基氨基草?；?-氨基]-3-苯基-丙酰基}-聯(lián)氨基羰基)-乙基]-氨基甲酸叔丁基酯(Boc-Ala-NPheO-Ala-NMe2；實施例64)
在實施例60的步驟之后，使用N-{(S)-1-芐基-2-[N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-丙?；?-聯(lián)氨基]-2-氧-乙基}-草酰胺酸(實施例63)和(S)-2-氨基-N，N-二甲基-丙酰胺，得到晶狀固體目標產物；熔點199℃。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)10.24(s，1H)，9.92(s，1H)，8.57(d，J＝8.4Hz，1H)，8.37(d，J＝7.64Hz，1H)，7.15-7.28(m，5H)，6.97(d，J＝7.24Hz，1H)，4.56-4.72(m，2H)，3.99-4.07(m，1H)，3.05-3.1(m，2H)，2.99(s，3H)，2.82(s，3H)，1.37(s，9H)，1.18-1.23(m，6H)。13C NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)171.8，170.57，168.89，159.19，158.09，154.94，137.25，129.14，128.08，126.44，77.92，53.04，48.14，45.22，37.02，36.35，35.21，28.15，18.11，17.22。IR(KBr)v4000-3353，3280，3030，2983，2936，1718，1686，1656，1627，1516cm-1。
(Boc-Ala-NPheO-O-Merrifield；實施例65)
將羥甲基樹脂(100mg，0.104mmol)懸浮于9:1v/v的CH2Cl2/DMF(1mL)中。在分離瓶(separate flask)中，將HOBt(42.16mg，0.31mmol)加入至在極小量DMF中的N-{(S)-1-芐基-2-[N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-丙?；?-聯(lián)氨基]-2-氧-乙基}-草酰胺酸(實施例64)(131.8mg，0.31mmol)中。攪拌混合物直至HOBt溶解，并且將溶液加入至樹脂內。然后將DIC(0.05mL，0.31mmol)加入至反應混合物中，隨后加入極小量DMF中的DMAP(13mg，0.11mmol)溶液。在氬氣中室溫下，用機械攪拌器攪拌反應混合物過夜。將乙酸酐和吡啶(相對于樹脂2當量)加入至反應混合物，并在室溫下繼續(xù)攪拌30分鐘，以端蓋(end-cap)樹脂上任何未反應的羥基。在細燒結玻璃漏斗中過濾樹脂，用DMF(3×5mL)、DCM(3×5mL)和MeOH(3×5mL)洗滌，并真空干燥至恒定重量。
(Ala-NPheO-O-Merrifield；實施例66)
使用機械攪拌器在室溫下攪拌在50％(v/v)TFA/DCM(1mL)中的樹脂(實施例65)(0.104mmol)的懸浮液30分鐘。在細燒結玻璃漏斗中過濾樹脂，并用DCM(3×5mL)洗滌，隨后用5％(v/v)DIPEA(2mL)洗滌，以除去TFA，并真空干燥至恒定重量。
(Boc-Phe-Ala-NPheO-O-Merrifield；實施例67)
將樹脂(實施例66)(0.104mmol)懸浮于9:1v/v的CH2Cl2/DMF(1mL)中。在分離瓶中，將HOBt(42.16mg，0.31mmol)加入至極小量DMF中的Boc-L-苯丙胺酸(82.8mg，0.31mmol)溶液中。攪拌混合物直至HOBt溶解，并將該溶液加入至樹脂中。然后加入DIC(0.05mL，0.31mmol)，并在氬氣下使用機械攪拌器在室溫下攪拌反應混合物過夜。
在細燒結玻璃漏斗中過濾樹脂，用DMF(3×5mL)、DCM(3×5mL)和MeOH(3×5mL)洗滌，并真空干燥至恒定重量。
N-((S)-1-芐基-2-{N’-[(S)-2-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙酰胺基)-丙?；鵠-聯(lián)氨基}-2-氧-乙基)-草酰胺酸甲基酯(Boc-Phe-Ala-NPheO-OMe；實施例68)
在0℃攪拌下，將TFA(5mL)緩慢加入至在DCM(5mL)中的N-{(S)-1-芐基-2-[N’-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-丙?；?-聯(lián)氨基]-2-氧-乙基}-草酰胺酸甲基酯(實施例62)(178mg，0.41mmol)溶液中。在室溫下攪拌反應混合物30分鐘。蒸發(fā)除去DCM和TFA，并在高真空下徹底干燥反應混合物，所得剩余物溶解于干燥的DCM(5mL)中，并將其加入至含有在DCM(5mL)中的Boc-L-苯丙氨酸(113.6mg，0.43mmol)、HOBt(57.86mg，0.43mmol)和EDCl.HCl(82.09mg，0.43mmol)溶液的另一燒瓶中。加入三乙胺(0.17mL，1.22mmol)，然后反應混合物在室溫下攪拌過夜。旋轉蒸發(fā)除去DCM，所得剩余物溶解于EtOAc(10mL)中。用1N HCl(5mL)、10％NaHCO3(5mL)和鹽水(5mL)洗滌EtOAc溶液，干燥(Na2SO4)并濃縮得到95mg(39％)白色固體目標產物。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)10.29(br s，1H)，10.05(br s，1H)，9.04(d，J＝9.78Hz，1H)，8.17(d，J＝8.42Hz，1H)，7.27-7.35(m，10H)，6.95(d，J＝9.78Hz，1H)，4.61-4.72(m，1H)，4.41-4.49(m，1H)，4.07-4.32(m，1H)，3.8(s，3H)，2.94-3.25(m，3H)，2.68-2.82(m，1H)，1.34(m，12H)。
N-((S)-1-芐基-2-{N’-[(S)-2-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙酰胺基)-丙?；鵠-聯(lián)氨基}-2-氧-乙基)-草酰胺酸(Boc-Phe-Ala-NPheO-OH；實施例69)
a)經固相合成將NaOCH3(0.6mg，0.01mmol)加入至在1:4v/vMeOH-THF(2mL)中的樹脂(實施例67)(0.104mmol)的懸浮液中。反應混合物在70℃攪拌18小時。加入水(3滴)，并在70℃繼續(xù)攪拌30分鐘。經細玻璃燒結漏斗過濾反應混合物，用MeOH(5mL)洗滌。濃縮濾液以除去MeOH，所得剩余物溶解于10％NaHCO3水溶液(5mL)中，并用乙醚(2×5mL)洗滌。冷卻水層，用1N HCl酸化，并用EtOAc(3×5mL)萃取。用鹽水(2×5mL)洗滌合并后的有機層，干燥(Na2SO4)并濃縮得到9mg(15％)灰白色固體。

b)經液相合成將NaOCH3(6mg，0.15mmol)加入至在MeOH(2mL)中的N-((S)-1-芐基-2-{N’-[(S)-2-((S)-2-t-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙酰胺基)-丙?；鵠-聯(lián)氨基}-2-氧-乙基)-草酰胺酸甲基酯(Boc-Phe-Ala-NPheO-OMe；實施例68)(85mg，0.15mmol)溶液中，并在室溫下攪拌1小時。蒸發(fā)除去MeOH，所得剩余物溶解于水(10mL)中，用乙醚(2×5mL)洗滌。在冰浴中冷卻水層，用1N HCl酸化(pH＝4)，并用EtOAc(3×10mL)萃取。用鹽水(10mL)洗滌合并后的有機層，干燥(Na2SO4)并濃縮得到26mg(31％)灰白色晶狀固體目標化合物，熔點155-156℃。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)10.28(br s，1H)，10.04(br s，1H)，8.79(br s，1H)，8.15(br s，1H)，6.5-7.27(m，10H)，4.39(m，2H)，2.76-3.2(m，5H)，1.29(br s，12H)。IR(KBr)v 4000-3299(寬的)，3030，2979，2933，1702，1696，1687，1674，1652，1508cm-1。
[(S)-2-甲基-1-((S)-3-甲基-1-甲基氨基甲?；?丁基氨基甲酰基)-丁基]-氨基甲酸叔丁基酯(實施例70) 步驟1 ((S)-3-甲基-1-甲基氨基甲?；?丁基)-氨基甲酸叔丁基酯
將HOBt(1.14mg，8.42mmol)加入至在DCM(30mL)中的Boc-L-Leu一水合物(2.0g，8.02mmol)溶液中，隨后加入DCC(1.74g，8.42mmol)。將在DCM(15mL)中的甲胺鹽酸鹽(596mg，8.82mmol)和三乙胺(1.68mL，12.03mmol)的懸浮液加入至上述溶液中，并在室溫下攪拌混合物24小時。過濾除去沉淀出的DCHU，并蒸發(fā)濾液。通過隨后用冷的EtOAc研制和過濾除去另外的DCHU。用1N HCl(2×15mL)、10％NaHCO3(15mL)和鹽水(15mL)洗滌EtOAc溶液，干燥(Na2SO4)并濃縮得到1.5g(76％)白色固體。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)6.73(br s，1H)，5.2(br s，1H)，4.07-4.1(m，1H)，2.71(d，J＝4.7Hz，3H)，1.36-1.67(m，3H)，1.3(s，9H)，0.86(dd，J＝2.34，2.14Hz，6H)。13C NMR(200 MHz，CDCl3)δ(ppm)173.46，155.81，79.76，53，41.62，28.26，26.03，24.68，22.88，21.91。
步驟2
0℃攪拌下，將TFA(15mL)緩慢加入至在DCM(15mL)中的((S)-3-甲基-1-甲基氨基甲?；?丁基)-氨基甲酸叔丁基酯(1.47g，6.02mmol)溶液中。在室溫下攪拌反應混合物30分鐘。蒸發(fā)除去溶劑，并在高真空下徹底干燥，所得剩余物溶解于DCM(30mL)中。將Boc-異亮氨酸(化合物71)(1.53g，6.62mmol)、HOBt(0.89g，6.62mmol)和DCC(1.74g，6.62mmol)加入上述溶液中，隨后加入三乙胺(2.53mL，18.05mmol)，在室溫下攪拌混合物過夜。過濾除去沉淀出的DCHU，并蒸發(fā)濾液。通過隨后用冷的EtOAc研制和過濾除去另外的DCHU。用1N HCl(2×15mL)、10％NaHCO3(15mL)和鹽水(15mL)洗滌EtOAc溶液，干燥(Na2SO4)并濃縮得到2.1g(97％)白色固體目標產物。熔點151-152℃。Rf＝(1:1EtOAc/戊烷)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)7.19(br s，1H)，6.95(br s，1H)，5.42(d，J＝8.2Hz，1H)，4.37-4.48(m，1H)，3.92-4.0(m，1H)，2.69(d，J＝4.7Hz，3H)，1.36-1.81(m，5H)，1.27(s，9H)，0.97-1.25(m，1H)，0.77-0.86(m，12H)。13CNMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)172.51，172.18，155.97，79.74，59.36，51.69，40.44，37.08，28.25，26.03，24.92，24.71，22.79，21.98，15.39，11.22。
{(S)-1-[(S)-2-甲基-1-((S)-3-甲基-1-甲基氨基甲酰基-丁基氨基甲?；?-丁基氨基甲酰基]-2-苯基-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯(實施例71)
0℃攪拌下，將TFA(15mL)緩慢加入至在DCM(15mL)中的[(S)-2-甲基-1-((S)-3-甲基-1-甲基氨基甲?；?丁基氨基甲?；?-丁基]-氨基甲酸叔丁基酯(實施例70)(2.1g，6.02mmol)溶液中。在室溫下攪拌反應混合物30分鐘。蒸發(fā)除去溶劑，并在高真空下徹底干燥，所得剩余物溶解于DCM(30mL)中。將Boc-Phe(1.53g，6.62mmol)、HOBt(0.89g，6.62mmol)和DCC(1.74g，6.62mmol)加入上述溶液中，隨后加入三乙胺(2.53mL，18.05mmol)，在室溫下攪拌混合物過夜。過濾除去沉淀出的DCHU，并蒸發(fā)濾液。通過隨后用冷的EtOAc研制和過濾除去另外的DCHU。用1N HCl(2×15mL)、10％NaHCO3(15mL)和鹽水(15mL)洗滌EtOAc溶液，干燥(Na2SO4)并濃縮得到2.1g(97％)白色固體目標產物。熔點151-152℃。Rf＝(1:1EtOAc/戊烷)。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)7.98(d，J＝7.82Hz，1H)，7.78(br s，2H)，7.23(s，5H)，6.97(d，J＝7.82Hz，1H)，4.19-4.23(m，3H)，2.53-2.97(m，5H)，1.01-1.72(m，15H)，0.79-0.82(m，12H)。
使用式1的化合物作為子結構合成β-轉角肽序列(實施例72) 步驟1
2-[[(2-乙氧基-2-氧乙基)氨基]羰基]-聯(lián)氨羧酸，1，1-二甲基乙基酯(Boc-aza-Gly-OEt) 以30分鐘時間將在CH2Cl2(15mL)中的甘氨酸乙酯鹽酸鹽(4.0g，28.66mmol)和DIEA(14.87mL，85.97mmol)的混合物加入至在CH2Cl2(10mL)中的三光氣(3.4g，11.46mmol)溶液中。繼續(xù)攪拌15分鐘后，將CH2Cl2(15mL)中的Boc-聯(lián)氨(3.79g，28.66mmol)溶液一次性加入。進一步回流反應混合物2小時，蒸發(fā)至干燥，用EtOAc稀釋，用10％NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用Na2SO4干燥并蒸發(fā)得到5.6g粗化合物，經柱色譜提純得到3.63g(48％)粘稠產物，經在室溫下過夜靜置后得到灰白色固體；熔點137-138℃。Rf＝0.29(5％MeOH于CH2Cl2中)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)7.2(bs，1H)，7.05(s，1H)，6.2(t，J＝5.46Hz，1H)，4.11(q，J＝7.04Hz，2H)，3.92(d，J＝5.66Hz，2H)，1.39(s，9H)，1.2(t，J＝7.04Hz，3H).13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)171.07，158.95，156.43，81.51，61.25，41.79，28.09，14.04。
此步驟的參考文獻 如Gacel，G.Zajac，J.M.Delay-Goyet，P.Dauge，V.Roques，B.P.中描述的制備該混合物。結構參數(shù)的檢測涉及線性的與腦啡肽相關的肽的μ和δ阿片類受體識別。雜志Medicinal Chemistry(1988)，31(2)，374-83。
步驟2Boc-Pro-aza-Gly-OEt
0℃攪拌下，將TFA(15mL)緩慢加入至在DCM(15mL)中的Boc-aza-Gly-OEt(3.63g，13.89mmol)溶液中，在室溫下攪拌反應混合物30分鐘。蒸發(fā)除去溶劑，并在高真空下徹底干燥，所得剩余物溶解于DCM(15mL)中。在另一個燒瓶中將Boc-Pro(2.99g，13.89mmol)、HOBt(1.97g，14.59mmol)和DCC(3.09g，14.59mmol)溶解于DCM(15mL)中，并在室溫下攪拌15分鐘，將在DCM(15mL)中的上述TFA鹽和三乙胺(4.77mL，34.73mmol)的混合物加入至上述溶液中，并在室溫下攪拌混合物過夜。過濾除去沉淀出的DCHU，并蒸發(fā)濾液。通過隨后用冷的EtOAc研制和過濾除去另外的DCHU。用1N HCl(2×15mL)、10％NaHCO3(15mL)和鹽水(15mL)洗滌EtOAc溶液，干燥(Na2SO4)并濃縮得到5.2g粗化合物，經柱色譜提純得到3.2g(48％)褐色固體產物。熔點58-59℃。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)9.03(bs，1H)，7.47(bs，1H)，6.65(bs，1H)，3.76-4.2(m，5H)，3.35-3.49(m，2H)，1.67-2.08(m，4H)，1.35(s，9H)，1.19(t，J＝7.04Hz，3H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)173.1，172.7，171.07，155.48，80.56，61.19，59.02，47.13，41.78，29.38，28.33，24.62，14.07。
EtO-Gly-NProO-O-tBu(步驟3和實施例73)
0℃攪拌下，將TFA(15mL)緩慢加入至在DCM(15mL)中的Boc-Pro-aza-Gly-OEt(實施例73)(2.63g，7.34mmol)溶液中，在室溫下攪拌反應混合物過夜。蒸發(fā)除去溶劑，并在高真空下徹底干燥。所得剩余物溶解于DCM(30mL)中，在0℃攪拌下將三乙胺(4.1mL，29.35mmol)加入其中，隨后加入叔丁基草酰氯(1.27g，7.71mmol)，并在室溫下氬氣中進一步攪拌反應混合物30分鐘。蒸發(fā)除去溶劑，所得粗化合物經柱色譜提純得到2.2g(77％)粘稠物。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)9.1(bs，1H)，7.54(bs，1H)，6.46(t，J＝5.48Hz，1H)，4.38(t，J＝5.48Hz，1H)，4.09(q，J＝7.04Hz，2H)3.58-4.0(m，4H)，1.73-2.16(m，4H)，1.47(s，9H)，1.18(t，J＝7.04Hz，3H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)171.26，171.16，160.59，160.02，158.76，84.6，61.29，59.08，48.57，41.85，28.62，27.83，27.68，25.1，14.05。
Boc-aza-Gly-N(Me)2(步驟4和實施例74)
在室溫下將在EtOH(20mL)中的33％的二甲胺溶液中的Boc-aza-Gly-OEt(73步驟1)(3.8g，14.54mmol)溶液攪拌過夜。蒸發(fā)除去溶劑并在高真空下徹底干燥，得到3.78g(100％)灰白色固體；熔點71-72℃。Rf＝0.24(5％MeOH于CH2Cl2中)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)7.35(bs，1H)，7.07(s，1H)，6.48(t，J＝4.3Hz，1H)，4.0(d，J＝4.3Hz，2H)，2.92(s，3H)，2.89(s，3H)，1.38(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)169.15，158.74，156.33，81.08，41.8，36.01，35.64，28.13。
Boc-Pro-aza-Gly-N(Me)2(步驟5和實施例75)
0℃攪拌下，將HCl飽和的EtOAc(10mL)緩慢加入至在EtOAc(10mL)中的Boc-aza-Gly-N(Me)2(實施例75)(1.87g，7.2mmol)溶液中。在室溫下攪拌反應混合物30分鐘。蒸發(fā)除去溶劑，并在高真空下干燥反應混合物。在另一個燒瓶中將Boc-Pro(1.55g，7.2mmol)、HOBt(1.02g，7.56mmol)和DCC(1.56g，7.56mmol)溶解于DCM(15mL)中，并在室溫下攪拌15分鐘，將在DCM(15mL)中的上述HCl鹽和三乙胺(3.0mL，21.6mmol)的混合物加入至上述溶液中，并在室溫下攪拌混合物過夜。過濾除去沉淀出的DCHU，并蒸發(fā)濾液。通過隨后用冷的EtOAc研制和過濾除去另外的DCHU。濃縮EtOAc溶液。粗化合物經柱色譜提純得到2.1g(81％)白色固體產物。熔點74-75℃。Rf＝0.51(10％MeOH/CH2Cl2)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.89(bs，1H)，7.75(bs，1H)，6.56(bs，1H)，3.87-4.22(m，3H)，3.41(m，2H)，2.91(s，3H)，2.88(s，3H)，1.68-2.1(m，4H)，1.36(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)172.46，169.06，158.28，155.33，80.33，58.72，53.44，47.07，41.83，36.05，35.71，28.33，24.49。t-BuO-草酰基-Pro-aza-Gly-(NMe)2((Me)2N-Gly-NProO-OtBu；實施例76)
0℃攪拌下，將TFA(10mL)緩慢加入至在DCM(10mL)中的Boc-Pro-aza-Gly-N(Me)2(實施例76)(0.72g，2.02mmol)溶液中，在室溫下氬氣中進一步攪拌反應混合物30分鐘。蒸發(fā)除去溶劑，并在高真空下干燥。所得剩余物溶解于DCM(25mL)中，在0℃攪拌下將三乙胺(0.85mL，6.04mmol)緩慢加入其中，隨后加入叔丁基草酰氯(0.33g，2.02mmol)，并在室溫下氬氣中進一步攪拌反應混合物30分鐘。蒸發(fā)除去溶劑，所得粗化合物經柱色譜提純得到250mg(32％)白色固體產物，熔點172-173℃。Rf＝0.36(10％MeOH/CH2Cl2)。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)9.78(bs，1H)，8.15(s，1H)，6.28(m，1H)，4.41(m，1H)，3.97(m，2H)，3.56(m，2H)，2.91(s，3H)，2.83(s，3H)，1.8-2.35(m，4H)，1.46(s，9H)。
((Me)2N-Gly-NProO-NCH(CH3)2實施例77)
0℃攪拌下，將TFA(5mL)緩慢加入至在DCM(5mL)中的t-BuO-草?；?Pro-aza-Gly-N(Me)2(實施例77)(220mg，0.57mmol)溶液中，在室溫下攪拌反應混合物過夜。蒸發(fā)除去溶劑，并在高真空下徹底干燥。所得剩余物溶解于DCM(15mL)中，在攪拌下將SOCl2(0.21mL，2.85mmol)加入其中，隨后加入起催化作用的DMF(2滴)。在室溫下氬氣中進一步攪拌反應混合物過夜。旋轉蒸發(fā)儀上蒸發(fā)除去溶劑，在高真空下除去過量的SOCl2。所得剩余物溶解于DCM(15mL)中，0℃攪拌下將異丙基胺(0.15mL，1.72mmol)緩慢加入其中。用EtOAc(30mL)稀釋混合物，并用1N HCl(10mL)、隨后用10％NaHCO3(10mL)和鹽水(10mL)洗滌。用Na2SO4干燥EtOAc層并濃縮得到150mg(70％)白色固體。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)9.71(bs，1H)，9.56(bs，1H)，8.11(bs，1H)，6.28(bs，1H)，4.34(m，1H)，4.05(m，2H)，3.94(m，1H)，3.6(m，2H)，2.92(s，3H)，2.89(s，3H)，1.87-2.39(m，4H)，1.18-1.3(m，6H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)170.5，164.9，162.1，162.0，158.5，62.7，46.57，43.1，41.1，36.8，37.2，30.1，25.27，23.63，24.1。
(S)-2-(t-丁氧草?；?乙基-氨基)-丁酸(步驟7和實施例78)
0℃攪拌下，將TFA(15mL)緩慢加入至在DCM(15mL)中的(S)-2-(t-丁氧草?；?乙基-氨基)-丁酸甲基酯(根據參考文獻Tetrahedron Letters(1998)，39(23)，3957-3960進行制備)(4.1g，15.94mmol)溶液中，在室溫下攪拌反應混合物過夜。蒸發(fā)除去溶劑，并在高真空下徹底干燥得到3.2g(100％)棕色粘稠油狀產物。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)5.09(dd，J＝3.52，3.32Hz，1H)，4.53(dd，J＝3.52Hz，1H)，3.52-4.02(m，10H)，1.85-2.36(m，8H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ.(ppm)170.58，169.73，157.76，155.99，155.87，59.74，59.22，51.2，48.1，47.46，29.85，26.97，23.43，20.54，20.28。(譜中可看到兩種旋轉異構體) 實施例80的化合物的合成已描述于Kraus，George A.Meleknov，Alex中。直接從α-酮酸和α-酰胺酸到?；鶜漉穆肪€。Tetrahedron Letters(1998)，39(23)，3957-3960。
(S)-1-異丙基氨基草酰基-吡咯烷-2-羧酸甲基酯(步驟7和實施例79)
在攪拌下將SOCl2(5.81mL，79.53mmol)加入至在DCM(30mL)中的(S)-2-(t-丁氧草酰基-乙基-氨基)-丁酸(實施例78)(3.2g，15.91mmol)溶液中，隨后加入起催化作用的DMF(2滴)，在室溫下氬氣中進一步攪拌反應混合物過夜。在旋轉蒸發(fā)儀上蒸發(fā)溶劑，在高真空下除去過量的SOCl2。所得剩余物溶解于DCM(30mL)中，0℃攪拌下將異丙基胺(3.4mL，39.77mmol)緩慢加入其中。用EtOAc(50mL)稀釋混合物，并用1N HCl(10mL)、隨后用10％NaHCO3(10mL)和鹽水(10mL)洗滌。用Na2SO4干燥EtOAc層并濃縮得到3.4g(88％)深棕色粘稠油狀目標化合物。Rf＝0.32(1:2EtOAc/戊烷)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)7.35(bs，2H)，5.17(dd，J＝3.92，3.7Hz，1H)，4.4(dd，J＝4.3，4.1Hz，1H)，3.48-4.12(m，10H)，1.66-2.34(m，7H)，1.1-1.22(m，10H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)172.75，171.88，159.74，159.68，159.1158.95，60.75，52.25，49.24，48.61，41.50，41.45，31.82，28.33，25.49，22.27，22.24，22.19，21.71。(在譜中可看到兩種旋轉異構體) (2-苯基氨基-乙基)-氨基甲酸9H-芴-9-基甲基酯(步驟8，實施例80)
在攪拌下，冰浴中，氬氣下，以30分鐘的時間將在DCM(25mL)中的9-芴基甲基氯甲酸酯(5.72g，22.12mmol)溶液加入至苯基乙二胺(3.0g，22.12mmol)、DIPEA(4.65mL，26.54mmol)和DCM(25mL)的混合物中，在室溫下進一步攪拌反應混合物15分鐘。然后用1N HCl(15mL)、隨后用10％NaHCO3(15mL)和鹽水(15mL)洗滌反應混合物，干燥(Na2SO4)并濃縮得到7.8g粗化合物，經EtOAc結晶得到6.5g(82％)白色固體純產物，熔點174-175℃。Rf＝0.54(1:2EtOAc/戊烷)。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)7.87(d，J＝7.24Hz，2H)，7.67(m，3H)，7.27-7.43(m，9H)，4.2-4.31(m，3H)，3.31(bs，4H)。13C NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)156.07，143.74，140.66，138.6，138.18，129.63，127.58，127.03，125.16，121.09，120.06，65.56，48.46，46.6，36.97。
Boc-aza-(2-苯基氨基-乙基)-氨基甲酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例81)
在30分鐘時間內將在CH2Cl2(10mL)中的(2-苯基氨基-乙基)-氨基甲酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例80)(1.79g，4.99mmol)和DIEA(1.0mL，5.99mmol)的混合物緩慢加入至在CH2Cl2(10mL)中的三光氣(578mg，1.95mmol)溶液中。在進一步攪拌15分鐘之后，一次性加入在DCM(10mL)中的Boc-聯(lián)氨(990mg，7.49mmol)溶液。進一步回流反應混合物2小時，蒸發(fā)至干燥，用EtOAc稀釋，用10％NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用Na2SO4干燥并蒸發(fā)得到1.9g粗化合物，經柱色譜提純得到1.1g(42％)白色固體；熔點69-70℃。Rf＝0.51(5％MeOH于CH2Cl2中)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)7.67(d，J＝7.22Hz，2H)，7.53(d，J＝7.24Hz，2H)，7.18-7.42(m，9H)，6.33(bs，1H)，5.96(bs，1H)，5.63(bs，1H)，4.23(d，J＝6.84Hz，2H)，4.11(t，J＝6.44Hz，1H)，3.77(m，2H)，3.33(m，2H)，1.37(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)157.77，156.61，156.28，144.02，141.23，140.22，130.41，128.52，128.27，127.63，127.04，125.23，119.91，81.39，66.85，49.44，47.18，40.3，28.17。
制備(S)-1-異丙基氨基草酰基-吡咯烷-2-羧酸甲基酯(實施例82)
0℃攪拌下，將三乙胺(7.15mL，64.87mmol)緩慢加入至在DCM(30mL)中的L-丙氨酸甲基酯鹽酸鹽(3.02g，21.62mmol)溶液中，隨后加入叔丁基草酰氯(3.74g，22.7mmol)。在室溫下氬氣中進一步攪拌反應混合物30分鐘。用EtOAc(50mL)稀釋混合物，并用1N HCl(10mL)、隨后用10％NaHCO3(10mL)和鹽水(10mL)洗滌。用Na2SO4干燥EtOAc層并濃縮得到4.92g(98％)深棕色粘稠油狀純產物。Rf＝0.51(1:2EtOAc/戊烷)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)7.58(bs，1H)，4.55(m，1H)，3.74(s，3H)，1.53(s，9H)，1.44(d，J＝7.24Hz，3H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)172.33，159.02，156.8，84.62，52.61，48.42，27.63，17.97。
(S)-2-(t-丁基氨基草?；?氨基)-丙酸甲基酯(實施例83)
0℃攪拌下，將TFA(10mL)緩慢加入至在DCM(10mL)中的(S)-1-異丙基氨基草?；?吡咯烷-2-羧酸甲基酯(實施例82)(1.71g，7.4mmol)溶液中，在室溫下攪拌反應混合物過夜。蒸發(fā)除去溶劑，并在高真空下徹底干燥得到1.3g(100％)棕色粘稠油狀產物。所得剩余物溶解于DCM(30mL)中，在攪拌下將SOCl2(2.7mL，36.97mmol)加入其中，隨后加入起催化作用的DMF(2滴)。在室溫下氬氣中進一步攪拌反應混合物過夜。旋轉蒸發(fā)儀上蒸發(fā)除去溶劑，在高真空下除去過量的SOCl2。所得剩余物溶解于DCM(30mL)中，0℃攪拌下將異丙基胺(2.33mL，22.18mmol)緩慢加入其中。用EtOAc(50mL)稀釋混合物，并用1N HCl(10mL)、隨后用10％NaHCO3(10mL)和鹽水(10mL)洗滌。用Na2SO4干燥EtOAc層并濃縮得到1.37g(80％)灰白色固體；熔點80-81℃。Rf＝0.67(1:2EtOAc/戊烷)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)7.94(bs，1H)，7.25(bs，IH)，4.47(m，1H)，3.69(s，3H)，1.4(d，J＝7.24Hz，3H)，1.33(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)172.03，160.5，158.24，52.53，51.46，48.34，29.87，28.2，17.89。
(S)-2-(t-丁基氨基草?；?氨基)-丙酸(實施例84)
在MeOH(5mL)中的(S)-2-(t-丁基氨基草?；?氨基)-丙酸甲基酯(實施例83)(500mg，2.17mmol)溶液中滴加入在0.5mL水中的LiOH(62mg，2.61mmol)水溶液。在室溫下進一步攪拌反應混合物20分鐘。蒸發(fā)除去MeOH，所得剩余物溶解于水(10mL)中，用乙醚(2×5mL)洗滌，用1N HCl酸化(pH＝4)并用EtOAc(3×105mL)萃取。合并的EtOAc層用鹽水(2×5mL)洗滌，干躁(Na2SO4)并濃縮得到400mg(85％)白色固體；熔點118-119℃。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)11.1(bs，1H)，8.22(d，J＝7.04Hz，1H)，7.43(s，1H)，4.5(m，1H)，1.45(d，J＝7.24Hz，3H)，1.33(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3).δ(ppm)175.64，160.17，158.4，51.79，48.32，28.17，17.44。
實施例85肽模擬物
0℃攪拌下，將TFA(10mL)緩慢加入至在DCM(10mL)中的Boc-aza-(2-苯基氨基-乙基)-氨基甲酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例81)(900mg，1.7mmol)溶液中，在室溫下進一步攪拌反應混合物30分鐘(在攪拌過夜后將形成副產物，因此僅攪拌30分鐘是關鍵的)。蒸發(fā)除去溶劑，并在高真空下徹底干燥，所得剩余物溶解于DCM(15mL)中。在另一個燒瓶中將(S)-2-(t-丁基氨基草?；?氨基)-丙酸(實施例84)(377mg，1.74mmol)、HOBt(247mg，1.83mmol)和DCC(377mg，1.83mmol)溶解于DCM(15mL)中，并在室溫下攪拌15分鐘，將在DCM(15mL)中的上述TFA鹽和DIPEA(0.34mL，1.92mmol)的混合物加入至上述溶液中，并在室溫下攪拌混合物過夜。過濾除去沉淀出的DCHU，并蒸發(fā)濾液。通過隨后用冷的EtOAc研制和過濾除去另外的DCHU。用1N HCl(15mL)、10％NaHCO3(15mL)和鹽水(15mL)洗滌EtOAc溶液，干燥(Na2SO4)并濃縮得到1.1g粗化合物，經柱色譜提純得到974mg(90％)白色固體產物。熔點48-49℃。Rf＝0.42(5％MeOH于CH2Cl2中)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)9.25(bs，1H)，8.35(d，J＝8.6Hz，1H)，7.75(d，J＝7.22Hz，2H)，7.58(d，J＝7.24Hz，2H)，7.25-7.45(m，10H)，6.48(bs，1H)，5.88(bs，1H)，4.55-4.75(m，1H)，4.14-4.29(m，3H)，4.25(m，2H)，3.4(m，2H)，1.45(d，J＝7.04Hz，3H)，1.35(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3).δ(ppm)170.52，160.5，158.29，157.26，156.57，143.95，141.22，139.94，130.46，128.74，128.1，127.63，127.02，125.16，119.92，66.78，51.53，49.64，47.74，47.16，39.78，28.26，17.67。
實施例86肽模擬物
在室溫下攪拌在CH2Cl2(15mL)10％哌啶中的化合物(實施例85)(915mg，1.49mmol)溶液。蒸發(fā)除去溶劑，在高真空下徹底干燥反應混合物以除去痕量的哌啶。所得剩余物經EtOAc-戊烷結晶得到575mg(98％)游離胺。將游離胺溶解于MeOH(15mL)中，將丙烯腈(0.15mL，2.23mmol)加入至其中，并在室溫下氬氣中攪拌反應混合物過夜。蒸發(fā)除去溶劑，經柱色譜提純粗化合物得到333mg(50％)白色固體；熔點62-63℃。Rf＝0.42(5％MeOH于CH2Cl2中)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.14(d，J＝8.4Hz，1H)，7.21-7.43(m，6H)，4.4-4.55(m，1H)，3.72(t，J＝6.06Hz，2H)，2.84(t，J＝6.54Hz，2H)，2.71(t，J＝6.06Hz，2H)，2.41(t，J＝6.65Hz，2H)，1.37(d，J＝7.04Hz，3H)，1.3(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3).δ(ppm)170.51，160.4，158.23，157.09，140.11，130.27，128.48，128.23，118.81，51.51，49.52，47.69，47.01，44.83，28.25，18.61，17.8。
實施例87肽模擬物
在25mL一頸圓底燒瓶中裝入化合物(實施例71)的鹽酸鹽(363mg，0.82mmol)、10mLCH2Cl2和10mL飽和的NaHCO3水溶液。在冰浴中將兩相混合物冷卻至0℃。停止攪拌，分層，經注射器將在甲苯(0.85mL，1.64mmol)中的1.93M的光氣溶液一次性加入至較低(有機)相中。立即重新開始攪拌，以600rpm攪拌冰冷卻的反應混合物10分鐘。分層，水相用CH2Cl2(3×5mL)萃取，用Na2SO4干燥合并后的有機相，過濾并濃縮。所得剩余物溶解于甲苯(15mL)中，將化合物(實施例86)(333mg，0.75mmol)加入至其中。進一步回流反應混合物過夜，蒸發(fā)至干躁，用EtOAc稀釋，并用10％NaHCO3水溶液、鹽水洗滌，用Na2SO4干燥并蒸發(fā)得到粗化合物，經柱色譜提純得到(68％)白色固體。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)9.12(bs，1H)，8.04(d，J＝7.82Hz，1H)，7.56(bs，1H)，7.15-7.37(m，12H)，6.91(bs，1H)，6.42(bs，1H)，6.23(bs，1H)，2.28-4.52(m，17H)，1.29-1.69(m，14H)，0.6-0.77(m，16H)。
實施例90β-轉角模式肽的合成 步驟1Boc-aza-Gly-OEt(實施例73的步驟1)
以30分鐘時間將在CH2Cl2(15mL)中的甘氨酸乙酯鹽酸鹽(4.0g，28.66mmol)和DIEA(14.87mL，85.97mmol)的混合物加入至在CH2Cl2(10mL)中的三光氣(3.4g，11.46mmol)溶液中。繼續(xù)攪拌15分鐘后，將在CH2Cl2(15mL)中的Boc-聯(lián)氨(3.79g，28.66mmol)溶液一次性加入。進一步回流反應混合物2小時，蒸發(fā)至干燥，用EtOAc稀釋，用10％NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用Na2SO4干燥并蒸發(fā)得到5.6g粗化合物，經柱色譜提純得到3.63g(48％)粘稠產物，經在室溫下過夜靜置后得到灰白色固體；熔點137-138℃。Rf＝0.29(5％MeOH于CH2Cl2中)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)7.2(bs，1H)，7.05(s，1H)，6.2(t，J＝5.46Hz，1H)，4.11(q，J＝7.04Hz，2H)，3.92(d，J＝5.66Hz，2H)，1.39(s，9H)，1.2(t，J＝7.04Hz，3H)。13C NMR(200MHz，CDCl3).δ(ppm)171.07，158.95，156.43，81.51，61.25，41.79，28.09，14.04。
參考文獻 1994 JOC 1937Majer，Pavel；Randad，Ramnarayan S.A Safe and EfficientMethod for Preparation of N，N’-Unsymmetrically Disubstituted UreasUtilizing Triphosgene.Journal of Organic Chemistry(1994)，59(7)，1937-8。
步驟2 Boc-aza-Gly-N(Me)2(如實施例75中的)
在室溫下將在EtOH(20mL)中的33％的二甲胺溶液中的Boc-aza-Gly-OEt(實施例73的步驟1)(3.8g，14.54mmol)溶液攪拌過夜。蒸發(fā)除去溶劑并在高真空下徹底干燥，得到3.78g(100％)灰白色固體；熔點71-72℃。Rf＝0.24(5％MeOH于CH2Cl2中)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)7.35(bs，1H)，7.07(s，1H)，6.48(t，J＝4.3Hz，1H)，4.0(d，J＝4.3Hz，2H)，2.92(s，3H)，2.89(s，3H)，1.38(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)169.15，158.74，156.33，81.08，41.8，36.01，35.64，28.13。
步驟3 Boc-Pro-aza-Gly-N(Me)2(如實施例76中的)
0℃攪拌下，將HCl飽和的EtOAc(10mL)緩慢加入至在EtOAc(10mL)中的Boc-aza-Gly-N(Me)2(實施例75)(1.87g，7.2mmol)溶液中。在室溫下攪拌反應混合物30分鐘。蒸發(fā)除去溶劑，并在高真空下干燥反應混合物。在另一個燒瓶中將Boc-Pro(1.55g，7.2mmol)、HOBt(1.02g，7.56mmol)和DCC(1.56g，7.56mmol)溶解于DCM(15mL)中，并在室溫下攪拌15分鐘，將在DCM(15mL)中的上述HCl鹽和三乙胺(3.0mL，21.6mmol)的混合物加入至上述溶液中，并在室溫下攪拌混合物過夜。過濾除去沉淀出的DCHU，并蒸發(fā)濾液。通過隨后用冷的EtOAc研制和過濾除去另外的DCHU。濃縮EtOAc溶液。粗化合物經柱色譜提純得到2.1g(81％)白色固體產物。熔點74-75℃。Rf＝0.51(10％MeOH/CH2Cl2)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.89(bs，1H)，7.75(bs，1H)，6.56(bs，1H)，3.87-4.22(m，3H)，3.41(m，2H)，2.91(s，3H)，2.88(s，3H)，1.68-2.1(m，4H)，1.36(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)172.46，169.06，158.28，155.33，80.33，58.72，53.44，47.07，41.83，36.05，35.71，28.33，24.49。
步驟3t-BuO-草?；?Pro-aza-Gly-(NMe)2(如實施例77中的)
0℃攪拌下，將TFA(10mL)緩慢加入至在DCM(10mL)中的Boc-Pro-aza-Gly-N(Me)2(實施例76)(0.72g，2.02mmol)溶液中，在室溫下氬氣中進一步攪拌反應混合物30分鐘。蒸發(fā)除去溶劑，并在高真空下干燥。所得剩余物溶解于DCM(25mL)中，在0℃攪拌下將三乙胺(0.85mL，6.04mmol)緩慢加入其中，隨后加入叔丁基草酰氯(0.33g，2.02mmol)，并在室溫下氬氣中進一步攪拌反應混合物30分鐘。蒸發(fā)除去溶劑，所得粗化合物經柱色譜提純得到250mg(32％)白色固體產物，熔點172-173℃。Rf＝0.36(10％MeOH/CH2Cl2)。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)9.78(bs，1H)，8.15(s，1H)，6.28(m，1H)，4.41(m，1H)，3.97(m，2H)，3.56(m，2H)，2.91(s，3H)，2.83(s，3H)，1.8-2.35(m，4H)，1.46(s，9H)。
步驟4(Me)2N-Gly-NProO-NCH(CH3)2(如實施例78中的)
0℃攪拌下，將TFA(5mL)緩慢加入至在DCM(5mL)中的t-BuO-草?；?Pro-aza-Gly-N(Me)2(實施例77)(220mg，0.57mmol)溶液中，在室溫下攪拌反應混合物過夜。蒸發(fā)除去溶劑，并在高真空下徹底干燥。所得剩余物溶解于DCM(15mL)中，在攪拌下將SOCl2(0.21mL，2.85mmol)加入其中，隨后加入起催化作用的DMF(2滴)。在室溫下氬氣中進一步攪拌反應混合物過夜。旋轉蒸發(fā)儀上蒸發(fā)除去溶劑，在高真空下除去過量的SOCl2。所得剩余物溶解于DCM(15mL)中，0℃攪拌下將異丙基胺(0.15mL，1.72mmol)緩慢加入其中。用EtOAc(30mL)稀釋混合物，并用1N HCl(10mL)、隨后用10％NaHCO3(10mL)和鹽水(10mL)洗滌。用Na2SO4干燥EtOAc層并濃縮得到150mg(70％)白色固體。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)9.71(bs，1H)，9.56(bs，1H)，8.11(bs，1H)，6.28(bs，1H)，4.34(m，1H)，4.05(m，2H)，3.94(m，1H)，3.6(m，2H)，2.92(s，3H)，2.89(s，3H)，1.87-2.39(m，4H)，1.18-1.3(m，6H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)170.5，164.9，162.1，162.0，158.5，62.7，46.57，43.1，41.1，36.8，37.2，30.1，25.27，23.63，24.1。
實施例91β-折疊片模擬物的合成 步驟1(2-苯基氨基-乙基)-氨基甲酸9H-芴-9-基甲基酯(如實施例82中的)
在攪拌下，冰浴中，氬氣下，以30分鐘的時間將在DCM(25mL)中的9-芴基甲基氯甲酸酯(5.72g，22.12mmol)溶液加入至苯基乙二胺(3.0g，22.12mmol)、DIPEA(4.65mL，26.54mmol)和DCM(25mL)的混合物中，在室溫下進一步攪拌反應混合物15分鐘。然后用1N HCl(15mL)、隨后用10％NaHCO3(15mL)和鹽水(15mL)洗滌反應混合物，干燥(Na2SO4)并濃縮得到7.8g粗化合物，經EtOAc結晶得到6.5g(82％)白色固體純產物，熔點174-175℃。Rf＝0.54(1:2EtOAc/戊烷)。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)7.87(d，J＝7.24Hz，2H)，7.67(m，3H)，7.27-7.43(m，9H)，4.2-4.31(m，3H)，3.31(bs，4H)。13C NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)156.07，143.74，140.66，138.6，138.18，129.63，127.58，127.03，125.16，121.09，120.06，65.56，48.46，46.6，36.97。
步驟2Boc-aza-(2-苯基氨基-乙基)-氨基甲酸9H-芴-9-基甲基酯(如實施例83中的)
在30分鐘時間內將在CH2Cl2(10mL)中的(2-苯基氨基-乙基)-氨基甲酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例82)(1.79g，4.99mmol)和DIEA(1.0mL，5.99mmol)的混合物緩慢加入至在CH2Cl2(10mL)中的三光氣(578mg，1.95mmol)溶液中。在進一步攪拌15分鐘之后，一次性加入在DCM(10mL)中的Boc-聯(lián)氨(990mg，7.49mmol)溶液。進一步回流反應混合物2小時，蒸發(fā)至干燥，用EtOAc稀釋，用10％NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用Na2SO4干燥并蒸發(fā)得到1.9g粗化合物，經柱色譜提純得到1.1g(42％)白色固體；熔點69-70℃。Rf＝0.51(5％MeOH于CH2Cl2中)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)7.67(d，J＝7.22Hz，2H)，7.53(d，J＝7.24Hz，2H)，7.18-7.42(m，9H)，6.33(bs，1H)，5.96(bs，1H)，5.63(bs，1H)，4.23(d，J＝6.84Hz，2H)，4.11(t，J＝6.44Hz，1H)，3.77(m，2H)，3.33(m，2H)，1.37(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)157.77，156.61，156.28，144.02，141.23，140.22，130.41，128.52，128.27，127.63，127.04，125.23，119.91，81.39，66.85，49.44，47.18，40.3，28.17。
步驟3制備(S)-1-異丙基氨基草?；?吡咯烷-2-羧酸甲基酯(如實施例84中的)
0℃攪拌下，將三乙胺(7.15mL，64.87mmol)緩慢加入至在DCM(30mL)中的L-丙氨酸甲基酯鹽酸鹽(3.02g，21.62mmol)溶液中，隨后加入叔丁基草酰氯(3.74g，22.7mmol)。在室溫下氬氣中進一步攪拌反應混合物30分鐘。用EtOAc(50mL)稀釋混合物，并用1N HCl(10mL)、隨后用10％NaHCO3(10mL)和鹽水(10mL)洗滌。用Na2SO4干燥EtOAc層并濃縮得到4.92g(98％)深棕色粘稠油狀純產物。Rf＝0.51(1:2EtOAc/戊烷)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)7.58(bs，1H)，4.55(m，1H)，3.74(s，3H)，1.53(s，9H)，1.44(d，J＝7.24Hz，3H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)172.33，159.02，156.8，84.62，52.61，48.42，27.63，17.97。
步驟4(S)-2-(t-丁基氨基草?；?氨基)-丙酸甲基酯(如實施例85中的)
0℃攪拌下，將TFA(10mL)緩慢加入至在DCM(10mL)中的(S)-1-異丙基氨基草?；?吡咯烷-2-羧酸甲基酯(實施例84)(1.71g，7.4mmol)溶液中，在室溫下攪拌反應混合物過夜。蒸發(fā)除去溶劑，并在高真空下徹底干燥得到1.3g(100％)棕色粘稠液狀產物。所得剩余物溶解于DCM(30mL)中，在攪拌下將SOCl2(2.7mL，36.97mmol)加入其中，隨后加入起催化作用的DMF(2滴)。在室溫下氬氣中進一步攪拌反應混合物過夜。旋轉蒸發(fā)儀上蒸發(fā)除去溶劑，在高真空下除去過量的SOCl2。所得剩余物溶解于DCM(30mL)中，0℃攪拌下將異丙基胺(2.33mL，22.18mmol)緩慢加入其中。用EtOAc(50mL)稀釋混合物，并用1N HCl(10mL)、隨后用10％NaHCO3(10mL)和鹽水(10mL)洗滌。用Na2SO4干燥EtOAc層并濃縮得到1.37g(80％)灰白色固體；熔點80-81℃。Rf＝0.67(1:2EtOAc/戊烷)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)7.94(bs，1H)，7.25(bs，1H)，4.47(m，1H)，3.69(s，3H)，1.4(d，J＝7.24Hz，3H)，1.33(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)172.03，160.5，158.24，52.53，51.46，48.34，29.87，28.2，17.89。
步驟5(S)-2-(t-丁基氨基草?；?氨基)-丙酸(如實施例86中的)
在MeOH(5mL)中的(S)-2-(t-丁基氨基草?；?氨基)-丙酸甲基酯(實施例85)(500mg，2.17mmol)溶液中滴加入在0.5mL水中的LiOH(62mg，2.61mmol)水溶液。在室溫下進一步攪拌反應混合物20分鐘。蒸發(fā)除去MeOH，所得剩余物溶解于水(10mL)中，用乙醚(2×5mL)洗滌，用1N HCl酸化(pH＝4)并用EtOAc(3×105mL)萃取。合并的EtOAc層用鹽水(2×5mL)洗滌，干躁(Na2SO4)并濃縮得到400mg(85％)白色固體；熔點118-119℃。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)11.1(bs，1H)，8.22(d，J＝7.04Hz，1H)，7.43(s，1H)，4.5(m，1H)，1.45(d，J＝7.24Hz，3H)，1.33(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3).δ(ppm)175.64，160.17，158.4，51.79，48.32，28.17，17.44。
步驟6(如實施例87中的)
0℃攪拌下，將TFA(10mL)緩慢加入至在DCM(10mL)中的Boc-aza-(2-苯基氨基-乙基)-氨基甲酸9H-芴-9-基甲基酯(實施例83)(900mg，1.7mmol)溶液中，在室溫下進一步攪拌反應混合物30分鐘(在攪拌過夜后將形成副產物，因此僅攪拌30分鐘是關鍵的)。蒸發(fā)除去溶劑，并在高真空下徹底干燥，所得剩余物溶解于DCM(15mL)中。在另一個燒瓶中將(S)-2-(t-丁基氨基草酰基-氨基)-丙酸(實施例86)(377mg，1.74mmol)、HOBt(247mg，1.83mmol)和DCC(377mg，1.83mmol)溶解于DCM(15mL)中，并在室溫下攪拌15分鐘，將在DCM(15mL)中的上述TFA鹽和DIPEA(0.34mL，1.92mmol)的混合物加入至上述溶液中，并在室溫下攪拌混合物過夜。過濾除去沉淀出的DCHU，并蒸發(fā)濾液。通過隨后用冷的EtOAc研制和過濾除去另外的DCHU。用1N HCl(15mL)、10％NaHCO3(15mL)和鹽水(15mL)洗滌EtOAc溶液，干燥(Na2SO4)并濃縮得到1.1g粗化合物，經柱色譜提純得到974mg(90％)白色固體產物。熔點48-49℃。Rf＝0.42(5％MeOH于CH2Cl2中)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)9.25(bs，1H)，8.35(d，J＝8.6Hz，1H)，7.75(d，J＝7.22Hz，2H)，7.58(d，J＝7.24Hz，2H)，7.25-7.45(m，10H)，6.48(bs，1H)，5.88(bs，1H)，4.55-4.75(m，1H)，4.14-4.29(m，3H)，4.25(m，2H)，3.4(m，2H)，1.45(d，J＝7.04Hz，3H)，1.35(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3).δ(ppm)170.52，160.5，158.29，157.26，156.57，143.95，141.22，139.94，130.46，128.74，128.1，127.63，127.02，125.16，119.92，66.78，51.53，49.64，47.74，47.16，39.78，28.26，17.67。
步驟7(如實施例88中的)
在室溫下攪拌在CH2Cl2(15mL)10％哌啶中的化合物(實施例87)(915mg，1.49mmol)溶液。蒸發(fā)除去溶劑，在高真空下徹底干燥反應混合物以除去痕量的哌啶。所得剩余物經EtOAc-戊烷結晶得到575mg(98％)游離胺。將游離胺溶解于MeOH(15mL)中，將丙烯腈(0.15mL，2.23mmol)加入至其中，并在室溫下氬氣中攪拌反應混合物過夜。蒸發(fā)除去溶劑，經柱色譜提純粗化合物得到333mg(50％)白色固體；熔點62-63℃。Rf＝0.42(5％MeOH于CH2Cl2中)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.14(d，J＝8.4Hz，1H)，7.21-7.43(m，6H)，4.4-4.55(m，1H)，3.72(t，J＝6.06Hz，2H)，2.84(t，J＝6.54Hz，2H)，2.71(t，J＝6.06Hz，2H)，2.41(t，J＝6.65Hz，2H)，1.37(d，J＝7.04Hz，3H)，1.3(s，9H)。13C NMR(200MHz，CDCl3).δ(ppm)170.51，160.4，158.23，157.09，140.11，130.27，128.48，128.23，118.81，51.51，49.52，47.69，47.01，44.83，28.25，18.61，17.8。
步驟8(如實施例89中的)
在25mL一頸圓底燒瓶中裝入化合物(實施例71)的鹽酸鹽(363mg，0.82mmol)、10mLCH2Cl2和10mL飽和的NaHCO3水溶液。在冰浴中將兩相混合物冷卻至0℃。停止攪拌，分層，經注射器將在甲苯(0.85mL，1.64mmol)中的1.93M的光氣溶液一次性加入至較低(有機)相中。立即重新開始攪拌，以600rpm攪拌冰冷卻的反應混合物10分鐘。分層，水相用CH2Cl2(3×5mL)萃取，用Na2SO4干燥合并后的有機相，過濾并濃縮。所得剩余物溶解于甲苯(15mL)中，將化合物(實施例88)(333mg，0.75mmol)加入至其中。進一步回流反應混合物過夜，蒸發(fā)至干躁，用EtOAc稀釋，并用10％NaHCO3水溶液、鹽水洗滌，用Na2SO4干燥并蒸發(fā)得到粗化合物，經柱色譜提純得到(68％)白色固體。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)9.12(bs，1H)，8.04(d，J＝7.82Hz，1H)，7.56(bs，1H)，7.15-7.37(m，12H)，6.91(bs，1H)，6.42(bs，1H)，6.23(bs，1H)，2.28-4.52(m，17H)，1.29-1.69(m，14H)，0.6-0.77(m，16H)。
N’-(2-芐氧羰基氨基-3-苯基-丙?；?-聯(lián)氨羧酸叔丁基酯(實施例92)
-10℃攪拌下將三乙胺(1.85mL，13.23mmol)緩慢加入至在THF(30mL)中的Z-L-苯基丙氨酸(3.6g，12mmol)溶液中，隨后加入乙基氯甲酸酯(1.26mL，13.23mmol)。在相同溫度下氬氣中攪拌反應混合物30分鐘，并在攪拌下緩慢加入在干燥的THF(20mL)中的肼基甲酸叔丁酯(1.59g，12.03mmol)溶液，在室溫下繼續(xù)攪拌反應混合物1小時。用EtOAc(50mL)稀釋混合物，并用1N HCl(10mL)、隨后用10％NaHCO3(10mL)和鹽水(10mL)洗滌。用Na2SO4干燥并濃縮得到5.2g粗化合物，經柱色譜提純得到3.6g(72％)無色粘稠油狀純產物，在室溫下靜置過夜，結晶為白色固體；熔點104-105℃。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)8.13(br s，1H)，7.09-7.25(m，10H)，6.51(br s，1H)，5.43(d，J＝6.98Hz，1H)，4.95(dd，J＝12.34，12.36Hz，2H)，4.28-4.59(m，1H)，3.1(dd，J＝5.9，6.44Hz，1H)，2.93(dd，J＝7.92Hz，1H)，1.38(s，9H)。
權利要求
1.通式1的化合物，
式1
其中
●X是CO-聯(lián)氨與NR1-草酸、草酸酯或草酰胺基團之間的連接，且是未取代的5-11元雜芳基或選自C3-20-環(huán)烷基、3-20元雜環(huán)基，優(yōu)選不包括1，6-二氮雜萘，以及
■直鏈，
■支鏈，
■環(huán)狀或稠環(huán)或雙環(huán)或稠雙環(huán)的
C1-20-烷基、C2-20-烯基或C2-20炔基，優(yōu)選C2-10-烷基的任選取代的基團；以及
●R5選自-SR10、-OR10或-NR10R11，條件是-NR10R11不是氨基酸酰肼的酰胺官能團，或R5可與R2或R3合作形成鍵或8-10元雜環(huán)，以及
●R10和R11是任選取代的并獨立地選自H、C3-14-環(huán)烷基、C5-14-芳基、3-14元雜環(huán)或雜芳基、直鏈或支鏈C1-14-烷基、C2-14-烯基、C2-14-炔基以及
●R3和R4一起可組成與基團R12相連的雙鍵；其中R12是任選取代的并選自C3-14-環(huán)烷基、3-14元雜環(huán)或雜芳基，直鏈或支鏈C1-14-烷基、C2-14-烯基、C2-14-炔基；以及
●R2是任選取代的并選自H、C3-14-環(huán)烷基、3-14元雜環(huán)或雜芳基、直鏈或支鏈C1-14-烷基、C2-14-烯基、C2-14-炔基；優(yōu)選R2是H；以及
●R1、R3和R4是任選取代的并獨立地選自H、C3-14-環(huán)烷基、C5-14-芳基、3-14元雜環(huán)或雜芳基、直鏈或支鏈C1-14-烷基、C2-14-烯基、C2-14-炔基；以及
●任選地，R1、R2、R3和R4中至少兩個與X可合作形成(優(yōu)選單環(huán))3-10元環(huán)，優(yōu)選1、2、3或4環(huán)由R1、R2、R3、R4和X形成，甚至更優(yōu)選X或作為另一種選擇的R2與R3和R4之一合作形成環(huán)；或者
其酯、酰胺、鹽、立體異構體或消旋體；
條件是
●其中X是CH2，R3和R4通過單鍵相連，且R2選自
■H，
■C3-20-環(huán)烷基
■C5-20-芳基
■3-20元雜環(huán)或雜芳基
■直鏈或支鏈C2-20-烯基、C2-20-炔基，或未取代的C1-4-烷基，
以及
●其中X是雜芳基，優(yōu)選X不與R3、R4或R5合作形成環(huán)，尤其是雜環(huán)烷環(huán)。
2.根據權利要求1所述的化合物，其特征在于，X是式2-6之一的化學基團，
式2 式3 式4 式5式6
其中R6、R7、R8和R9是任選取代的，并獨立地選自H、C3-14-環(huán)烷基、C5-12芳基、3-12元雜環(huán)基或雜芳基以及直鏈或支鏈C1-14-烷基、C2-14-烯基或C2-14-炔基；以及
任選地，R6、R7、R8和R9中的至少兩個可合作形成3-22元任選取代的或稠環(huán)烷基或雜環(huán)基環(huán)，或其雙環(huán)；且n和m獨立地是0-5的整數(shù)，優(yōu)選1、2、3或4。
3.根據權利要求1或2所述的化合物，其特征在于，X是，優(yōu)選α、β或γ，NR1-草酸或酯結合基團，選自C1-2-烷基、胍基丁基、2-甲基-丁基、苯基乙基、p-羥苯基乙基、3-吲哚基乙基、羥乙基、甲基硫丙基、硫乙基、C2-3-烷基酸、C2-3-烷基酰胺基、氨基戊基、4-咪唑基乙基，或X和R1合作形成丁基，與NR1-草酸或酯基團的氮形成吡咯烷環(huán)，其中α是指式1的CO-聯(lián)氨和NR1-草酸、草酸酯或草酸酰胺基團結合至X基團的相同原子，優(yōu)選碳(“C-α”)上，β是指式1的CO-聯(lián)氨和NR1-草酸、草酸酯或草酸酰胺基團結合至X基團的相鄰原子(優(yōu)選分別在“C-α”和“C-β”碳原子)上，以及γ是指式1的CO-聯(lián)氨和NR1-草酸、草酸酯或草酸酰胺基團結合至由一個原子(優(yōu)選C原子“C-β”)隔開的X基團的原子(優(yōu)選“C-α”和“C-γ”碳原子)上。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的化合物，其特征在于，X是-CHR13-，其中R13是H或D或選自如下氨基酸的氨基酸側鏈丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯基丙氨酸、輔氨酸、4-羥基輔氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈氨酸，優(yōu)選其L-對映異構體。
5.根據權利要求1-4中任一項所述的化合物，其特征在于，R10和R11選自H、未取代的C1-5-烷基、C2-10-烯基、C2-10-炔基、C3-14-環(huán)烷基、C5-14-芳基、3-14元雜環(huán)基或3-14元雜芳基。
6.根據權利要求1-5中任一項所述的化合物，選自下表中的化合物
7.根據權利要求1所述的化合物，其特征在于，X選自除了1，6-二氮雜萘之外的O-、S-、N-或P-雜取代的3-20元雜環(huán)。
8.根據權利要求1所述的化合物，其中R3和R5形成鍵，從而得到通式10的雜環(huán)化合物，
式10
其中X、R1、R2和R4如權利要求1中所定義的。
9.根據權利要求1-8中任一項所述的化合物，其中R3或R4是N-保護基，其選自Boc、Fmoc、Alloc、三氟乙?；⒓籽豸驶?、乙氧羰基、芐氧羰基、2-(三甲基硅基)乙氧羰基、2，2，2-三氯乙氧羰基、芳基磺?；?、2-(三甲基硅基)乙基磺酰基、三苯甲基，和/或R5是羧酸保護基或活化基團，選自OMe、OEt、O-t-Bu、OBn、OCHPh2、苯乙酮酯、烷氧基烷基酯、2，2，2-三氯乙酯、2-(三甲基硅基)乙酯、2-甲苯磺?；阴?、硅酯或活化基團，優(yōu)選N-羥磺胺吡啶酯、1-羥苯并三唑酯、4-硝基苯基酯，或原位制備的酯，優(yōu)選使用試劑HNTU(＝2-(內-5-降冰片烯-2，3-二甲酰亞胺)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯)、HOCt(＝1-羥基-1H-1，2，3-三唑-4-羧酸酯)、HONB(＝N-羥基-5-降冰片烯-2，3-聯(lián)羧基)，并且其中保護基團或活化基團均可以它們的聚合物形式或樹脂結合形式使用。
10.根據權利要求1或2所述的化合物，選自下表中的化合物
11.制備根據權利要求1-10中任一項所述的化合物的方法，其特征在于，根據式7的化合物
式7
以任何順序與根據式8的聯(lián)氨或聯(lián)氨衍生物
式8
和根據式9的草酸、酯或衍生物接觸，
式9
其中X、R1、R2、R3、R4和R5如權利要求1-10中任一項中所定義的，且L1、L2、L3和L4獨立地是任意的離去基團或氫，優(yōu)選L4是Cl或OH、活化的酯或酐。
12.根據權利要求11所述的方法，其特征在于，R3或R4之一是保護基團，優(yōu)選Fmoc。
13.包含至少一種根據通式1的化合物的肽或蛋白質模擬物，
式1
其中X、R1、R2、R3、R4和R5如權利要求1-10中任一項中所定義的，作為分子部分，以及天然的或非天然的氨基酸或另外的氨基酸模擬物，優(yōu)選通過酰胺鍵結合。
14.根據權利要求13所述的模擬物，包含至少2個，優(yōu)選至少3個，甚至更優(yōu)選至少5個，尤其優(yōu)選至少10個或最優(yōu)選至少20個除了式1的化合物之外的天然的或非天然的氨基酸或另外的氨基酸模擬物。
15.根據權利要求13或14所述的模擬物，其模擬α-螺旋、β-折疊片或轉角基序的三維結構。
16.使用如權利要求13或14中所定義的通式1的化合物合成根據權利要求13-15的肽模擬物的方法，其中包含胺的反應目標與根據式1的化合物接觸，且R3或R4組成帶有保護基，優(yōu)選Fmoc的酰胺。
17.根據權利要求16所述的方法，進一步包括除去R3或R4保護基團的步驟。
18.根據權利要求17所述的方法，其中優(yōu)選在除去R3或R4保護基團的步驟之后，氨基酸或氨基酸模擬物，優(yōu)選帶有被保護的氨基，與根據式1的化合物接觸。
19.根據權利要求16-18中任一項所述的方法，其特征在于，反應目標是固體，優(yōu)選固體樹脂。
20.作為在蛋白質氨基酸序列的任何位置上的共價連接插入物或取代物的，包含如權利要求13-15中所定義的通式1的化合物的肽、蛋白質或蛋白質片斷。
21.制備根據權利要求20的肽、蛋白質或蛋白質片斷的方法，包括將如權利要求13-15中所定義的式1的化合物連接至肽、蛋白質或蛋白質片斷的步驟。
22.根據權利要求21所述的方法，進一步包括將另一氨基酸、肽、蛋白質或蛋白質片斷連接至如權利要求13-15中所定義的式1的化合物的步驟。
23.根據權利要求1-10中任一項所述的化合物作為間隔部分的用途。
24.根據權利要求1-10中任一項所述的化合物作為動態(tài)組合庫中的組分的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供通式(I)的化合物以及其用途和合成方法，如右式(Ⅰ)，其中X是CO-聯(lián)氨與NR1-草酸或草酸酯基團之間的連接。這些化合物代表氨基酸衍生物，其中氨基基團通過草酸基團轉變?yōu)樗嵝曰鶊F，且羧酸通過聯(lián)氨基團轉變?yōu)榘被倌軋F；以及包含所述化合物的肽模擬物以其合成方法。
文檔編號C07C243/28GK101389599SQ200680053471
公開日2009年3月18日 申請日期2006年11月24日 優(yōu)先權日2006年2月27日
發(fā)明者烏爾里克·喬迪斯, 杰伊旺特·B·波帕塞 申請人:維也納技術大學