專利名稱：一種從梔子中提取制備西紅花酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從梔子中提取制備西紅花酸的方法。
技術(shù)背景梔子，為茜草科植物梔子的干燥成熟果實，主產(chǎn)于江西、湖南、廣西、四川等地，常 見的栽培品種為梔子(Gardeniajasminodes Ellis)，為藥典規(guī)定品種；水梔子(G. jasminodes Ellis f. longiarpaZ. W. XieetOkada)，梔子的變型，作為染料、色素用品種；大花梔子(重 瓣梔子)(G. jasminodes Ellis var. fortuniana(Lindl)Ham)，梔子的變種，園林栽培。目前除 在中醫(yī)藥應(yīng)用外，梔子主要作為提取天然色素的原料，用于制備梔子蘭、梔子紅、梔子黃 色素。其中，梔子黃色素的主要成分為西紅花苷(那莎，郭田國.梔子及其有效成分藥理 研究進展.中國中醫(yī)藥信息雜志，2005， 12 (1): 90-92)，而西紅花苷有良好的抗腫瘤活性， 對于心血管疾病、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)也有療效。西紅花苷在西紅花中含量較高，可達10% 以上，但我國西紅花資源較少，主要依靠進口，價格昂貴，約6000元RMB/公斤，難以實 現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。我國梔子資源豐富，江西、四川、廣西等地均有符合GAP要求的梔子種植基 地。梔子中西紅花苷含量約0.5-1.2%，水梔子和大花梔子的西紅花苷含量較高(王春芳等， 藥物分析雜志，17 (5): 321-323， 1997;賈琳等，華西藥學(xué)雜志，20(3): 223-225， 2005)。 雖然梔子中西紅花苷含量低于西紅花，但梔子產(chǎn)量豐富，價格低廉，可滿足規(guī)?；a(chǎn)對 資源的需求。由于梔子中還含有大量梔子苷等環(huán)烯醚萜苷類物質(zhì)，需經(jīng)過大孔樹脂柱、硅 膠柱純化才得到純度較高的西紅花苷，步驟繁瑣，溶劑消耗量大，回收率較低，因此目前 國內(nèi)梔子產(chǎn)品的研發(fā)仍局限于梔子苷和梔子黃色素的制備，難以進行醫(yī)藥級別的西紅花苷 原料生產(chǎn)(王建新等，中國食品添加劑，6: 16-18, 2002;肖坤福，食品研究與開發(fā)，3: 48-50， 2005;郭克琳等，中國食品添加劑，2: 24-26， 1996;梁華正等，廣州食品工業(yè)科技，2: 20， 2005; CN1151420A，CN1670037A，CN1216946C， CN1807441A， CN1059444C)，而梔子中西紅花酸的提取純化尚未見報道。西紅花酸是西紅花苷的前體，同樣具有抗腫瘤活性，可改善血漿中的氧擴散及消耗， 也可用于治療高血壓、冠心病、高血月旨等癥(Fikratl.Abdullaev，"a/" Toxicology Letters, 70 (2)， 243-251,1994; Tseng TH, " aA， Cancer Lett" 97: 61-67， 1995; Wang CJ， e/a/.， Mol Carcinogen, 17(4): 235， 1996; Mano Giaccio, Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 44(3), 155-172， 2004)。另有文 獻報道，西紅花苷在體內(nèi)以西紅花酸吸收，并代謝成西紅花酸葡萄糖醛酸(AkiraAsai,efa/,J. Agnc. FoodChem., 53: 7302-7306,2005)。在西紅花和梔子中含有的西紅花苷種類和含量不同， 但經(jīng)水解后，僅得到反式和順式西紅花酸，且因為西紅花酸難溶于水，易與其他成分分離。本發(fā)明在于利用西紅花酸的溶解性，從梔子中提取西紅花苷后，直接水解制備西紅花 酸，或用大孔樹脂將梔子苷與西紅花苷分離，再將西紅花苷濃縮液水解制備西紅花酸，工 藝簡便，可進行規(guī)模化生產(chǎn)，可提高梔子的綜合利用價值，也為西紅花酸制劑開發(fā)及應(yīng)用 奠定基礎(chǔ)。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種從梔子提取制備西紅花酸的方法。采用本發(fā)明制備西紅花酸，工 藝簡便可行，有利于梔子的深度開發(fā)，尤其為制劑研發(fā)和應(yīng)用奠定原料基礎(chǔ)。本發(fā)明涉及 一種從梔子提取制備西紅花酸的方法，其特征在于以下步驟1、 梔子干果實粉碎，過10-120目篩，用蒸餾水或20-95%乙醇溶液超聲提取，料液 比為1:5-1:50，提取次數(shù)1-4次，提取溫度常溫，超聲功率3-100W/cm2，提取時 間10-90min，提取液經(jīng)過濾或離心，清液真空濃縮；水提液濃縮后經(jīng)60%-80%醇 沉，取濾液濃縮；2、 步驟l)得到的濃縮液直接或經(jīng)稀釋后采用大孔樹脂純化，將水洗液和10-30%乙 醇溶液洗脫液濃縮可得到梔子苷粗品，將30-95%乙醇溶液洗脫液合并，濃縮回收 乙醇，得到西紅花苷濃縮液；3、 步驟l)或2)的濃縮液經(jīng)過濾或離心，清液調(diào)節(jié)A440nm為500-3000，力B0.5-4M堿溶液調(diào)節(jié)pH至12-14， 20-50'C堿化0.5-12h，加酸溶液調(diào)節(jié)pH至4-6，離心得 沉淀；或?qū)⑶逡杭觢-4M酸溶液調(diào)節(jié)pH至1-3, 20-5(TC水解l-12h，離心得沉淀， 沉淀加蒸餾水洗漆2-4次，過濾或離心取沉淀，即得西紅花酸粗品； 4、上述西紅花酸粗品加醇溶解，滴加0.1-4M酸溶液至含醇量為1/5-1/3，靜置析出沉 淀，離心，真空干燥或冷凍干燥，得反式西紅花酸純品。實施例一1) 干燥梔子果實粉碎，過20目篩，梔子粉末加15倍量的50%乙醇溶液，25'C超聲提取 40min，功率50W/cm2，提取液過濾，殘渣加8倍量乙醇溶液，再提取20min，提取液過濾、合并，真空濃縮除去乙醇，其濃縮液加水稀釋至A440nm為1000，抽濾，取澄清濾液；2) 步驟1)的西紅花苷清液加2M KOH溶液，調(diào)節(jié)pH至13， 2(TC靜置6h，然后用2M 的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至4.5， 5000rpm離心20min,上清液棄去，取沉淀，加水洗滌2-3 次，如上操作離心取沉淀，為西紅花酸粗品，純度約90%;3) 步驟2)的西紅花酸粗品加甲醇溶解，加入0.5M的醋酸溶液為甲醇量的1/4，析出的 沉淀離心，5000rpm離心20min，沉淀真空干燥或冷凍干燥，為反式西紅花酸純品，純 度>99.5%。實施例二1) 干燥梔子果實粉碎，過40目篩，梔子粉末加20倍量的30%乙醇溶液，25。C超聲提取 10min，功率80W/cm2，提取液過濾，殘渣加10倍量30%乙醇溶液，再提取10min，提取液過濾、合并，真空濃縮除去乙醇，其濃縮液加水稀釋至A4咖m為250-500，抽濾，取澄清濾液；2) 上述澄清濾液加到ADS-7大孔樹脂柱，柱徑高比為h 15，加樣量與柱床體積比h 1， 用水及20%乙醇溶液各4倍柱床體積量洗脫，收集洗脫液，濃縮可得梔子苷粗品，再 用50%及75%乙醇洗脫，各5倍柱床體積量，洗脫液濃縮除去乙醇，得西紅花苷濃縮液；3) 步驟2)的西紅花苷濃縮液調(diào)節(jié)A440nm至1500，加2M KOH溶液，調(diào)節(jié)pH至12， 50 。C靜置lh，然后用1M的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至4.5， 5000rpm離心20min，上清液棄去， 取沉淀，加水洗滌2-3次，如上操作離心取沉淀，為西紅花酸粗品，純度約90%;4) 歩驟3)的西紅花酸粗品加甲醇溶解，加入0.2M的鹽酸溶液為甲醇量的1/5，析出的 沉淀5000rpm離心20min，沉淀真空干燥或冷凍干燥，為反式西紅花酸純品，純度》 99.5%。實施例三1) 干燥梔子果實粉碎，過60目篩，梔子粉末加20倍量的80%乙醇溶液，25T〕超聲提取 30min，功率30W/cm2，提取液過濾，真空濃縮除去乙醇，其濃縮液加水稀釋至A440nm 為500，抽濾，取澄清濾液；2) 步驟2)的西紅花苷澄清濾液加2M KOH溶液，調(diào)節(jié)pH至14， 5(TC靜置0.5h，然后 用1M的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至4.5, 5000rpm離心20min，上清液棄去，取沉淀，加水 洗滌2-3次，如上操作離心取沉淀，得純度約90%的西紅花酸粗品；3) 步驟3)的西紅花酸粗品加甲醇溶解，加入0.5M的醋酸溶液為甲醇量的1/4，析出的 沉淀5000rpm離心20min，沉淀真空干燥或冷凍干燥，為反式西紅花酸純品，純度》 99.5%。實施例四1) 干燥梔子果實粉碎，過100目篩，梔子粉末加40倍量的蒸餾水，25'C超聲提取30min， 功率80W/cm2，提取液過濾，殘渣加5倍量蒸餾水，再提取2次，各10min，提取液 過濾、合并濃縮，濃縮液加95。/。乙醇至含醇量為60%，抽濾取濾液，真空濃縮除去乙醇，其濃縮液加水稀釋至A44Qnm為2000，抽濾，取澄清濾液；2) 步驟1 )的西紅花苷清液加2M HCI溶液，調(diào)節(jié)pH至1 ， 2(TC靜置12h， 5000rpm離心 20min，上清液棄去，取沉淀，加水洗滌2-3次，如上操作離心取沉淀，為西紅花酸粗 品，純度約85%;3)步驟2)的西紅花酸粗品加甲醇溶解，加入1M的磷酸溶液為乙醇量的1/5，析出的沉 淀5000rpm離心20min，沉淀真空干燥或冷凍干燥，得反式西紅花酸純品，純度》99.5%。 實施例五1) 干燥梔子果實粉碎，過120目篩，梔子粉末加30倍量的蒸餾水，25。C超聲提取20min， 功率100W/cm2，提取液過濾，殘渣加10倍量蒸餾水，再提取1次，15min，提取液過 濾、合并濃縮，濃縮液加95%乙醇至含醇量為70%,抽濾取濾液，真空濃縮除去乙醇，其濃縮液加水稀釋至A440nm為2000，抽濾，取澄清濾液；2) 步驟l)的西紅花苷清液加1M硫酸溶液，調(diào)節(jié)pH至3， 50'C靜置3h， 5000rpm離心 20min，上清液棄去，取沉淀，加水洗滌2-3次，如上操作離心取沉淀，為西紅花酸粗 品，純度約85%;3) 步驟2)的西紅花酸粗品加甲醇溶解，加入0.5M的硫酸溶液為乙醇量的1/4，析出的 沉淀5000rpm離心20min,沉淀真空干燥或冷凍干燥，得反式西紅花酸純品，純度》 99.5%。
權(quán)利要求
1. 一種從梔子中提取制備西紅花酸的方法，其特征在于以下步驟1)梔子干果實粉碎，過10-120目篩，用蒸餾水或20-95％乙醇溶液超聲提取，料液比為1∶5-1∶50，提取次數(shù)1-4次，提取溫度常溫，超聲功率3-100W/cm2，提取時間10-90min，提取液經(jīng)過濾或離心，清液真空濃縮；水提液濃縮后經(jīng)60-80％醇沉，取濾液濃縮；2)步驟1)得到的濃縮液直接或經(jīng)稀釋后采用大孔樹脂純化，將水洗液和10-30％乙醇溶液洗脫液濃縮可得到梔子苷粗品，將30-95％乙醇溶液洗脫液合并，濃縮回收乙醇，得到西紅花苷濃縮液；3)步驟1)或2)的西紅花苷濃縮液經(jīng)過濾或離心，清液調(diào)節(jié)A440nm為500-3000，加0.5-4M堿溶液調(diào)節(jié)pH至12-14，20-50℃堿化0.5-12h，加酸溶液調(diào)節(jié)pH至4-6，離心得沉淀；或?qū)⑶逡杭?-4M酸溶液調(diào)節(jié)pH至1-3，20-50℃水解1-12h，離心得沉淀，沉淀加蒸餾水洗滌2-4次，過濾或離心取沉淀，即得西紅花酸粗品；4)上述西紅花酸粗品加醇溶解，滴加0.1-4M酸溶液至含醇量為1/5-1/3，靜置析出沉淀，離心，真空干燥，或冷凍干燥，得反式西紅花酸純品。
2. 權(quán)利要求1所述的制備西紅花酸的方法，其特征在于，所述步驟l)釆用的梔子果實為 梔子(Gardenia jasminodes Ellis)， zK梔子(G. jasminodes Ellis f. longiarpa Z. W. Xie et Okada)，大花梔子(重瓣梔子)(G. jasminodes Ellis var. fortuniana(Lindl)Ham)的果實。
3. 權(quán)利要求1所述的制備西紅花酸的方法，其特征在于，所述步驟2)使用的大孔樹脂為 HPDIOO、 HPD400、 ADS-8、 ADS-7、 AB-8。
4. 權(quán)利要求1所述的制備西紅花酸的方法，其特征在于，所述步驟3)使用的堿溶液為 氫氧化鈉、氫氧化鉀溶液；使用的酸溶液為鹽酸、醋酸、磷酸、硫酸溶液。
5. 權(quán)利要求1所述的制備西紅花酸的方法，其特征在于，所述步驟4)使用的醇為甲醇、 乙醇；使用的酸溶液為鹽酸、醋酸、磷酸、硫酸溶液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從梔子中提取制備西紅花酸的方法，將梔子粉碎經(jīng)蒸餾水或乙醇溶液超聲強化提取，提取液過濾后濃縮或經(jīng)大孔樹脂分離梔子苷類物質(zhì)后將西紅花苷洗脫液濃縮，酸水解或堿水解(堿水解液需調(diào)pH至酸性)，離心，水洗沉淀得西紅花酸粗品；進一步純化西紅花酸粗品，將反式西紅花酸與順式西紅花酸分離，得到高純度的反式西紅花酸；高純度的反式西紅花酸便于進行結(jié)構(gòu)修飾，形成不同水溶性和藥效特點的西紅花酸衍生物，從而為相關(guān)的制劑研發(fā)和應(yīng)用提供原料。本發(fā)明生產(chǎn)高純度西紅花酸的方法簡便、快速、成本低，為梔子產(chǎn)品的深加工建立了新途徑。
文檔編號C07C57/13GK101225040SQ20071000111
公開日2008年7月23日 申請日期2007年1月18日 優(yōu)先權(quán)日2007年1月18日
發(fā)明者王曉東, 王玉春, 兵 趙, 陳文浩 申請人:中國科學(xué)院過程工程研究所