專利名稱：作為二肽酶抑制劑的氟代吡咯烷的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抑制二肽酶的化合物諸如II(DPP-II)和IV(DPP-IV)，涉及它們的制備方法以及治療用途。
背景技術(shù)：
二肽酶IV(DPP-IV)是一種存在于包括腎、肝和腸在內(nèi)的機(jī)體各組織中的切割次末端脯氨酸/丙氨酸的絲氨酸蛋白酶。DPP-IV被認(rèn)為能調(diào)節(jié)多種生理學(xué)上重要肽的活性，包括但不限于GLP1、GIP、GLP2、GRP、血管活性腸肽、組氨酸蛋氨酸肽、PYY、P物質(zhì)、β-casomorphine、NPY、PACAP38、催乳激素、絨膜促性腺激素、抑酶肽、促腎上腺皮質(zhì)素類垂體中葉肽、垂體腺苷酰環(huán)化酶活化肽、(Tyr)促黑素抑制素、LD78β-(3-70)，RANTES，eotaxinprocolipase，腸抑制素(enterostatin)、血管抑制素1(vasostatinl)、內(nèi)啡素、morphiceptin、基質(zhì)細(xì)胞源因子、巨嗜細(xì)胞驅(qū)化因子、粒細(xì)胞趨化蛋白質(zhì)-2和GHRH/GRF。作為DPP-IV治療價(jià)值的例子，相信DPP-IV涉及各種代謝、胃腸、病毒和炎癥疾病，包括但不限于糖尿病、肥胖癥、高脂血癥、皮膚病或粘膜疾病、牛皮癬、腸道疾病、便秘、自身免疫病諸如腦脊髓炎、補(bǔ)體介導(dǎo)疾病諸如腎小球性腎炎、脂肪營(yíng)養(yǎng)不良、組織損傷、身心疾病、抑郁、神經(jīng)精神疾病如焦慮、抑郁、失眠癥、精神分裂癥、癲癇、痙攣和慢性疼痛、HIV感染、變態(tài)反應(yīng)、炎癥、關(guān)節(jié)炎、移植排斥、高血壓、充血性心力衰竭、腫瘤和緊張性流產(chǎn)，例如細(xì)胞因子介導(dǎo)的鼠流產(chǎn)。例如也稱為CD26的DPP-IV介導(dǎo)T-細(xì)胞活化和HIV感染(Ohtsuki等人，2000)。在HIV感染的個(gè)體中T-細(xì)胞表達(dá)DPP-IV/CD26被優(yōu)先感染和排除(Ohtsuki等人，2000)。已經(jīng)證實(shí)DPP-IV抑制劑在關(guān)節(jié)炎的動(dòng)物模型上的消炎效果(Tanaka等人，1997)。另外，已經(jīng)表明DPP-IV抑制延長(zhǎng)了心臟移植存活期(Korom等人，1997)。體外研究表明DPP-IV/CD26表達(dá)與皮膚惡性成黑素細(xì)胞的腫瘤擴(kuò)散有關(guān)(Van den Oord，1998)。此外，DPP-IV被認(rèn)為通過(guò)切割在多肽(如胰高血糖素類肽(GLP)和神經(jīng)肽Y(NPY))的氨基端的次末端脯氨酸/丙氨酸來(lái)調(diào)節(jié)代謝(Mentlein，1999)。
更具體地說(shuō)，GLP有助于代謝葡萄糖，并因此GLP的調(diào)節(jié)應(yīng)有助于治療代謝疾病諸如糖尿病，如II型糖尿病(也稱為非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)或maturity-onset)，由于胰島素的絕對(duì)或相對(duì)缺乏導(dǎo)致血糖水平升高。II型糖尿病為糖尿病中較普通的形式，占病例的90％，約1千600百萬(wàn)美國(guó)人患有這種疾病。大多數(shù)II型糖尿病人產(chǎn)生不同并有時(shí)正常的胰島素，但是它們?cè)谧璧K其活動(dòng)的肝和肌肉細(xì)胞中不正常。胰島素連接到細(xì)胞受體上，但葡萄糖并不進(jìn)入其中，形成稱為抗胰島素狀態(tài)。許多II型糖尿病人似乎不能分泌足夠的胰島素來(lái)克服抗胰島素狀態(tài)。GLP-1增強(qiáng)了胰島素分泌。因此，GLP-1的調(diào)節(jié)與胰島素分泌的調(diào)節(jié)相關(guān)。此外，GLP-1降低了肝葡萄糖的生產(chǎn)、胃排空和食物攝入(Deacon等人，1995)。此外，GLP-2通過(guò)對(duì)胃活動(dòng)、養(yǎng)分吸收、隱蔽細(xì)胞增殖和編程性細(xì)胞死亡和腸透性的影響維持了腸粘膜上皮細(xì)胞的完整性(Drucker，2001)。
DPP-IV抑制劑長(zhǎng)時(shí)間保護(hù)GLP-1功能(Balka，1999)。因此，DPP-IV抑制劑能促進(jìn)達(dá)到飽感、減重和增強(qiáng)GLP-1的抗糖尿病效果(Deacon等人，1995；Holst和Deacon，1998)。例如，用已知化合物NVP-DPP728抑制DPP-IV降低了血漿GLP-1(2-36酰胺)濃度并提高了在肥胖zucker鼠的口服葡萄糖耐受性。參見(jiàn)Diabetologia 421324-1331。經(jīng)皮下和靜脈給藥的GLP-1在II型糖尿病人和健康受試者體中均從NH2-端快速降解。參見(jiàn)Diabetes 441126，1995。
此外，DPP-IV抑制劑可長(zhǎng)時(shí)間保護(hù)GLP-2，因此可用于治療腸道機(jī)能不全和粘膜疾病(Hartmann B等人，2000)。
雖然DPP-IV是調(diào)節(jié)GLP轉(zhuǎn)換的優(yōu)勢(shì)蛋白酶，但從相關(guān)蛋白酶上也可觀察到類似的底物或抑制劑專一性。相關(guān)的絲氨酸蛋白酶包括但不限于二肽酶-II(DPP-II)、二肽酶IVβ、二肽酶8、二肽酶9、氨基肽酶P、成纖維細(xì)胞活化蛋白質(zhì)α(seprase)、脯氨酰三肽酶、脯氨酰寡肽酶(內(nèi)切蛋白酶Pro-C)、吸引素(可溶性二肽氨基肽酶)、酰氨基?；拿?N-?；乃饷福籪Met氨基肽酶)和溶酶體Pro-X羧基肽酶(血管緊張肽酶C，脯氨酰羧肽酶)。可享有與DPP-IV類似底物或抑制劑專一性的切割脯氨酸的金屬肽酶包括膜Pro-X羧肽酶(羧肽酶P)、血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶(肽-二肽酶A多肽酶)、膠原酶1(腸膠原酶；基質(zhì)金屬蛋白酶1；MMP-1；Mcol-A)，ADAM 10(α-分泌酶、髓磷脂締合性解整連蛋白金屬蛋白酶)，neprilysin(atriopeptidase；CALLA；CD10；內(nèi)切肽酶24.11；腦啡肽酶)，巨嗜細(xì)胞彈性蛋白酶(金屬?gòu)椥缘鞍酌福换|(zhì)金屬蛋白酶12；MMP-12)、間質(zhì)溶素(基質(zhì)金屬蛋白酶7；MMP-7)和溶神經(jīng)素(內(nèi)肽酶24.16；微粒體內(nèi)肽酶；線粒體寡肽酶)。參見(jiàn)http://merops.iapc.bbsrc.ac.uk/。
此外，除了哺乳動(dòng)物絲氨酸肽酶和切割脯氨酸的金屬肽酶外，其它非哺乳動(dòng)物蛋白酶可享有與DPP-IV類似的底物或抑制劑專一性。這種非哺乳動(dòng)物絲氨酸蛋白酶包括脯氨酰氨基肽酶(脯氨酰亞胺肽酶)、IgAl-特異絲氨酸型脯氨酰內(nèi)肽酶(IgA蛋白酶，Neisseria，Haemophilus)，二肽氨基肽酶A(STE13)(釀酒酵母)、二肽氨基肽酶B(真菌)、脯氨酰寡肽同系物(Pyrococcus sp.)、寡肽酶B(大腸桿菌堿性蛋白酶II；蛋白酶II)，二肽氨基肽酶B1(假單胞桿菌sp.)、二肽酶IV(細(xì)菌)、二肽氨基肽酶(Aureobacterium)、二肽酶IV(昆蟲)、二肽酶V，變應(yīng)素Trit 4(Trichophyton tonsurans)、分泌的丙氨酰DPP(米曲酶)、肽酶II-mes(Prosopis velutina)和竹絲氨酸蛋白酶(Pleioblastushindsii)。這種非哺乳動(dòng)物切割脯氨酸的金屬肽酶的非限定性例子包括penicillolysin(真菌酸性金屬內(nèi)肽酶)、脯氨酸特異肽的二肽酶(鏈霉菌屬)、coccolysin(明膠酶，Enterococcus faecalis)，氨基肽酶Ey(雞蛋黃)(apdE g.p.；Ga1lus gallus domesticus)，gametolysin(衣藻細(xì)胞壁降解蛋白酶)以及蛇毒切割脯氨酸的金屬蛋白酶。進(jìn)一步情況可參見(jiàn)http://merops.iapc.bbsrc.ac.uk/。
二肽酶II(DPP II)是位于細(xì)胞溶酶體的絲氨酸蛋白酶，相信其涉及溶酶體降解和蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)換。DPP-II表達(dá)的順序?yàn)槟I＞＞睪丸＞或＝心臟＞大腦＞或＝肺＞脾＞骨骼?。净颍礁?Araki H等人，J.Biochem(東京)2001，129279-88)。這種表達(dá)表明在腎或溶酶體相關(guān)疾病上可能的效用。底物專一性研究表明純的DPP-II在酸性pH(4.5-5.5)下專一水解丙氨酸或脯氨酸。DPP-II對(duì)休眠細(xì)胞二肽酶和脯氨酰羧肽酶具有明顯的順序?qū)?yīng)性和底物專一性，表明在蛋白酶間可能存在功能重疊(Araki H等人，J.Biochem(東京)2001，129279-88)。
本發(fā)明包括新的DPP-II和/或DPP-IV抑制劑以及其治療使用方法和其制備方法。雖然并未在此限定，但是相信本發(fā)明的化合物可用于治療各種代謝、胃腸、病毒和炎癥疾病，包括但不限于糖尿病、肥胖癥、高脂血癥、皮膚病或粘膜疾病、牛皮癬、腸道疾病、便秘、自身免疫病諸如腦脊髓炎、補(bǔ)體介導(dǎo)疾病諸如腎小球性腎炎、脂肪營(yíng)養(yǎng)不良、組織損傷、身心疾病、抑郁、神經(jīng)精神疾病如焦慮、抑郁、失眠癥、精神分裂癥、癲癇、痙攣和慢性疼痛、HIV感染、變態(tài)反應(yīng)、炎癥、關(guān)節(jié)炎、移植排斥、高血壓、充血性心力衰竭、腫瘤和緊張性流產(chǎn)，例如細(xì)胞因子介導(dǎo)的鼠流產(chǎn)。
與其它二肽酶抑制劑相比，本發(fā)明的化合物提供了改善的穩(wěn)定性、效價(jià)、作用時(shí)間和/或安全性/毒性面貌。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明包括式(I)的化合物 包括其鹽、溶劑合物和藥用功能衍生物，其中X為F或H；R1和R2各自為H、烷基、任選取代的芳基或雜芳基或結(jié)合成任選包含一個(gè)或多個(gè)雜原子以及任選包含一個(gè)或多個(gè)不飽和度的3到14元環(huán)體系。當(dāng)R1和R2為任選取代的芳基或雜芳基時(shí)，R3為H或烷基。否則，R3為 式中n為0-5、m為0-12；Y為S(O)p、O、亞烷基、亞烯基、亞炔基或鍵；p為0-2；當(dāng)Y為S、O、亞烷基、亞烯基、亞炔基或鍵時(shí)，R4為R5，其中R5為任選取代的烷基、烯基、炔基、芳基、環(huán)烷基、雜芳基或雜環(huán)基；當(dāng)Y為S(O)或S(O)2時(shí)，R4為R6，其中R6為任選取代的烷基、芳基、環(huán)烷基、雜芳基、氨基、烷氨基、芳氨基、雜芳基氨基、環(huán)烷基氨基或羥基。
雖然沒(méi)有限定，但是優(yōu)選的任選取代基包括一個(gè)或多個(gè)烷基、烷氧基、芳氧基、鹵基、鹵代烷基、氰基、烷基磺酰基或芳基。更優(yōu)選任選的取代基包括一個(gè)或多個(gè)C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、苯氧基、芐氧基、氟、氯、C1-C6鹵代烷基、氰基、C1-C6烷基磺?；⒈交蚱S基。
在一種實(shí)施方案中，R1和R2各為芳基，R3為H。優(yōu)選各芳基均為苯基。更優(yōu)選各苯基均被鹵素取代。更優(yōu)選各鹵素為氟，更優(yōu)選4-氟。
在另一實(shí)施方案中，R1和R2各為烷基并且R3為 優(yōu)選各個(gè)烷基為C1-C6烷基。更優(yōu)選各個(gè)烷基為甲基。優(yōu)選n為0，m為1并且Y為S(O)p。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，p為0，R4為R5，并且R5為任選取代的芳基。優(yōu)選R5為被烷氧基取代的苯基。更優(yōu)選所述烷氧基為甲氧基。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，p為1或2，R4為R6，并且R6為任選取代的芳基。優(yōu)選R6為被烷氧基取代的苯基。更優(yōu)選所述烷氧基為甲氧基。更優(yōu)選p為2.
在一實(shí)施方案中，優(yōu)選所述NH2基對(duì)所述腈基團(tuán)為順式。在另一實(shí)施方案中，優(yōu)選所述NH2基對(duì)腈基團(tuán)為反式。
優(yōu)選A為H。優(yōu)選所述F對(duì)所述腈為順式。
特別優(yōu)選的本發(fā)明化合物包括式(I)的化合物 包括其鹽、溶劑合物和藥用功能衍生物；其中X為F或H；R1和R2各為任選取代的芳基或雜芳基；并且R3為H或烷基。
特別優(yōu)選的本發(fā)明的化合物包括式(I)的化合物 包括其鹽、溶劑合物和藥用功能衍生物；其中X為F或H；R1和R2各為
(i)烷基；或(ii)結(jié)合成3到14元環(huán)體系，任選包含一個(gè)或多個(gè)雜原子以及任選包含一個(gè)或多個(gè)不飽和度R3為 其中n為0-5；m為0-12；Y為S(O)p、O、亞烷基、亞烯基或亞炔基；p為0-2；當(dāng)Y為S、O、亞烷基、亞烯基或亞炔基時(shí)，R4為R5；其中R5為任選取代的烷基、烯基、炔基、芳基、環(huán)烷基、雜芳基或雜環(huán)基；當(dāng)Y為S(O)或S(O)2時(shí)，R4為R6，其中R6為任選取代的烷基、芳基、環(huán)烷基、雜芳基、氨基、烷氨基、芳氨基、雜芳基氨基、環(huán)烷基氨基或羥基。
優(yōu)選p為1或2。更優(yōu)選p為2。優(yōu)選R1和R2各為烷基。更優(yōu)選R1和R2各為C1-C6烷基。更優(yōu)選R1和R2各為甲基。
特別優(yōu)選的本發(fā)明化合物包括 特別優(yōu)選的化合物選自(1)(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二苯基丙酰基]-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(2)(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-雙(4-氟苯基)丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(3)(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-5-(4-氟苯基)-3，3-二甲基戊?；鵠-4-氟-2-吡咯烷甲腈鹽酸鹽；(4)(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-4-(4-氟苯基)-3，3-二甲基丁?；鵠-4-氟吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(5)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(4-甲氧基芐基)硫基]-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(6)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(3-苯基丙基)硫基]丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(7)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(2-苯基乙基)硫基]丁酰基}-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(8)(2S，4S)-1-((2R)-2-氨基-3-{[3-(4-氟苯基)丙基]硫基}-3-甲基丁?；?-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(9)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(4-甲氧基芐基)磺?；鵠-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(10)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(4-甲氧基芐基)亞磺?；鵠-3-甲基丁酰基}-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(11)(2S，4S)-1-((2R)-2-氨基-3-甲基-3-{[4-(三氟甲基)芐基]硫基}丁?；?-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(12)(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-2-(1-乙烯基環(huán)戊基)乙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(13)(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-5-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基戊?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(14)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(3-苯基丙基)磺?；鵠丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈；(15)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(4-甲基芐基)磺?；鵠丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈；(16)(2S，4S)-1-((2R)-2-氨基-3-{[4-(芐氧基)芐基]磺?；鶀-3-甲基丁酰基)-4-氟代吡咯烷-2-甲腈；(17)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(4-氰基芐基)磺?；鵠-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈；(18)(2S，4S)-1-((2R)-2-氨基-3-甲基-3-{[4-(甲基磺?；?芐基]磺?；鶀丁?；?-4-氟代吡咯烷-2-甲腈；(19)(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-2-[1-(4-氟芐基)環(huán)戊基]乙?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(20)(2S，4S)-1-((2S)-2-氨基-2-{1-[4-(三氟甲基)苯基]環(huán)戊基}乙?；?-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(21)(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-2-[1-(4-氟芐基)環(huán)丙基]乙?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(22)(2S，4S)-1-[(2R)-2-氨基-3-(芐基磺?；?-3-甲基丁酰基]-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(23)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(3-甲氧基芐基)磺?；鵠-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(24)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(1，1′-聯(lián)苯-4-基甲基)磺?；鵠-3-甲基丁酰基}-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(25)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(2-甲氧基芐基)磺?；鵠-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(26)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(吡啶-3-基甲基)硫基]丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈；(27)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(吡啶-2-基甲基)硫基]丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(28)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(吡啶-4-基甲基)硫基]丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(29)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(4-氟芐基)磺?；鵠-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(30)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(3-苯氧基芐基)磺酰基]丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(31)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(3-苯氧基芐基)硫基]丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(32)(2S，4S)-1-((2R)-2-氨基-3-{[(5-氯-1，1-二氧化-1-苯并噻吩-3-基)甲基]磺酰基}-3-甲基丁?；?-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(33)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(2，1，3-苯并二唑-5-基甲基)硫基]-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(34)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(吡啶-4-基甲基)磺酰基]丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(35)(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-吡啶-4-基丙酰基]-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(36)(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-吡啶-3-基丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(37)(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-哌啶-4-基丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈二鹽酸鹽；(38)(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-哌啶-3-基丙酰基]-4-氟代吡咯烷-2-甲腈二鹽酸鹽；(39)(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-哌啶-2-基丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈二鹽酸鹽；(40)(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-3-[1-(異丙基磺?；?哌啶-4-基]丙?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(41)(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-3-[1-(4-甲基苯基磺酰基)哌啶-4-基]丙?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(42)(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-3-[1-(異丙基磺酰基)哌啶-3-基]丙?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(43)(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-3-[1-(4-甲基苯基磺酰基)哌啶-3-基]丙?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(44)(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-(1-苯并噻吩-3-基)丙酰基]-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(45)(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-3-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]丁酰基}-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；和(46)(3R)-3-氨基-4-[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]-2-甲基-4-氧代丁烷-2-磺酸。
本發(fā)明的另一方面包括含本發(fā)明化合物的藥物制劑。優(yōu)選所述藥物制劑還包括藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的另一方面包括通過(guò)給予本發(fā)明的化合物來(lái)抑制切割次末端脯氨酸/丙氨酸的蛋白酶的方法。優(yōu)選所述切割次末端脯氨酸/丙氨酸的蛋白酶為絲氨酸蛋白酶。更優(yōu)選所述絲氨酸蛋白酶為二肽酶。更優(yōu)選所述二肽酶為DPP-II或DPP-IV。
本發(fā)明的另一方面包括通過(guò)給予本發(fā)明的化合物來(lái)治療或預(yù)防代謝疾病、胃腸疾病、病毒疾病、炎癥疾病、糖尿病、肥胖癥、高脂血癥、皮膚病或粘膜疾病、牛皮癬、腸道疾病、便秘、自身免疫病、腦脊髓炎、補(bǔ)體介導(dǎo)疾病、腎小球性腎炎、脂肪營(yíng)養(yǎng)不良、組織損傷、身心疾病、抑郁、神經(jīng)精神疾病、HIV感染、變態(tài)反應(yīng)、炎癥、關(guān)節(jié)炎、移植排斥、高血壓、充血性心力衰竭、腫瘤和緊張性流產(chǎn)，例如細(xì)胞因子介導(dǎo)的鼠流產(chǎn)的方法。優(yōu)選所述給藥用于治療或預(yù)防糖尿病。
本發(fā)明另一方面包括本發(fā)明化合物在制備用于抑制切割次末端脯氨酸/丙氨酸的蛋白酶的藥物中的用途。優(yōu)選所述切割次末端脯氨酸/丙氨酸的蛋白酶為絲氨酸蛋白酶。更優(yōu)選所述絲氨酸蛋白酶為二肽酶。更優(yōu)選所述二肽酶為DPP-II或DPP-IV。
本發(fā)明另一方面包括本發(fā)明化合物在制備用于治療或預(yù)防以下疾病的藥物中的用途代謝疾病、胃腸疾病、病毒疾病、炎癥疾病、糖尿病、肥胖癥、高脂血癥、皮膚病或粘膜疾病、牛皮癬、腸道疾病、便秘、自身免疫病、腦脊髓炎、補(bǔ)體介導(dǎo)疾病、腎小球性腎炎、脂肪營(yíng)養(yǎng)不良、組織損傷、身心疾病、抑郁、神經(jīng)精神疾病、HIV感染、變態(tài)反應(yīng)、炎癥、關(guān)節(jié)炎、移植排斥、高血壓、充血性心力衰竭、腫瘤和緊張性流產(chǎn)。
本發(fā)明的另一方面包括作為治療物質(zhì)的本發(fā)明的化合物。本發(fā)明的化合物另外可用于制備用于抑制絲氨酸蛋白酶的藥物。優(yōu)選這種用途是用于制備用于治療或預(yù)防預(yù)防代謝疾病、胃腸疾病、病毒疾病、炎癥疾病、糖尿病、肥胖癥、高脂血癥、皮膚病或粘膜疾病、牛皮癬、腸道疾病、便秘、自身免疫病、腦脊髓炎、補(bǔ)體介導(dǎo)的疾病、腎小球性腎炎、脂肪營(yíng)養(yǎng)不良、組織損傷、身心疾病、抑郁、神經(jīng)精神疾病、HIV感染、變態(tài)反應(yīng)、炎癥、關(guān)節(jié)炎、移植排斥、高血壓、充血性心力衰竭、腫瘤和緊張性流產(chǎn)的藥物。
具體實(shí)施例方式
術(shù)語(yǔ)“烷基”是指直鏈或支鏈飽和脂族烴基，可任選被取代并可具多個(gè)取代基?！巴榛钡睦影ǖ幌抻诩谆⒁一?、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、仲丁基等。
在整篇專利說(shuō)明書中，優(yōu)選的碳原子數(shù)將通過(guò)例如短語(yǔ)“Cx-Cy烷基”表示，該短語(yǔ)是指如本文中定義的烷基含有特定的碳原子數(shù)。
同樣的術(shù)語(yǔ)也應(yīng)用于其它優(yōu)選的范圍。
術(shù)語(yǔ)“亞烷基”是指二價(jià)直鏈或支鏈脂族烴基，可任選被取代并可具多個(gè)取代基。亞烷基的例子包括但不限于亞甲基，即-CH2-。
術(shù)語(yǔ)“烯基”是指含一個(gè)或多個(gè)碳-碳雙鍵的直鏈或支鏈脂族烴基，可任選被取代并可具多個(gè)取代基。例子包括但不限于乙烯基等。
本文所用術(shù)語(yǔ)“亞烯基”是指含一個(gè)或多個(gè)碳-碳雙鍵的二價(jià)直鏈或支鏈脂族烴基，可任選被取代并可具多個(gè)取代基。“亞烯基”的例子包括但不限于亞乙烯基，即-CH＝CH-。
本文所用術(shù)語(yǔ)“炔基”是指含一個(gè)或多個(gè)三鍵的直鏈或支鏈脂族烴基，可任選被取代并可具多個(gè)取代基。本文所用“炔基”的例子包括但不限于乙炔基等。
本文所用術(shù)語(yǔ)“亞炔基”是指含至少一個(gè)碳-碳三鍵的二價(jià)直鏈或支鏈脂族烴基，可被取代并可具多個(gè)取代基?！耙胰不钡睦影ǖ幌抻趤喴胰不?C≡C-。
術(shù)語(yǔ)“芳基”是指芳環(huán)體系，諸如任選取代的苯環(huán)體系(如苯基)。該術(shù)語(yǔ)包括一個(gè)或多個(gè)任選取代的苯環(huán)形成的稠合體系，例如蒽、菲或萘環(huán)體系。該術(shù)語(yǔ)包括任選取代的環(huán)，可具多個(gè)取代基，同時(shí)也包括一個(gè)任選的亞烷基連接基，如C1-C6亞烷基，通過(guò)該連接基將芳基與母體連接在一起?！胺蓟钡睦影ǖ幌抻诒交?、芐基、2-萘基、1-萘基、聯(lián)苯基以及它們的取代衍生物。
術(shù)語(yǔ)“雜芳基”是指單環(huán)芳環(huán)體系，或是指包括兩個(gè)或多個(gè)芳環(huán)的稠合雙環(huán)體系。這些雜芳基環(huán)包含一個(gè)或多個(gè)氮、硫和/或氧原子，其中氮氧化物、硫氧化物和二氧化物是容許存在的雜原子取代基并且所述環(huán)可任選被多個(gè)取代基取代。該術(shù)語(yǔ)包括任選具多個(gè)取代基的環(huán)體系，并且也包括任選的亞烷基連接基，如C1-C6亞烷基，通過(guò)亞烷基可將雜芳基與母體連接在一起。本文所用“雜芳基”的例子包括呋喃、噻吩、吡咯、咪唑、吡唑、三唑、四唑、噻唑、唑、異唑、二唑、噻二唑、異噻唑、吡啶、噠嗪、吡嗪、嘧啶、喹啉、異喹啉、苯并呋喃、苯并噻吩、吲哚、吲唑和它們的取代產(chǎn)物。
本文所用術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”是指單環(huán)或雙環(huán)烴環(huán)體系，可進(jìn)一步被多個(gè)取代基取代，并且任選包括亞烷基連接基，通過(guò)該連接基可將環(huán)烷基與母體連接在一起?！碍h(huán)烷基”的例子包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。被取代時(shí)，本發(fā)明環(huán)烷基的一個(gè)優(yōu)選取代位為“1-位”。為了說(shuō)明而非限定，一個(gè)優(yōu)選的取代位由下面稱為“R”的取代基表示 或更適當(dāng)?shù)卣f(shuō)，術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”包括橋連或稠合的環(huán)體系，以及如茚烷(hydrindane)、萘烷或金剛烷基。為了便于引用，該術(shù)語(yǔ)范圍也包括環(huán)烷基/芳基稠合體系，例如環(huán)烷基(如環(huán)己基)與芳環(huán)(如苯環(huán))稠合形成的基團(tuán)諸如 本文所用術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)”或術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基”是指飽和或具有一個(gè)或多個(gè)不飽和度、優(yōu)選三到十二元的雜環(huán)。所述雜環(huán)包含一個(gè)或多個(gè)如氮、硫和/或氧原子的雜原子，其中氮氧化物、硫氧化物和二氧化物為可存在的雜原子取代基。本文所用雜環(huán)基團(tuán)可任選被多個(gè)取代基取代，還包括一個(gè)任選的亞烷基連接基，如C1-C6亞烷基，通過(guò)所述連接基可將雜環(huán)基與母體連接。這種環(huán)可任選與一個(gè)或多個(gè)另外的“雜環(huán)”、芳環(huán)或環(huán)烷基環(huán)稠合?！半s環(huán)”的例子包括但不限于四氫呋喃(THF)、吡喃、1，4-二烷、1，3-二烷、哌啶、吡咯烷、嗎啉、四氫噻喃、四氫噻吩等。
術(shù)語(yǔ)“鹵素”是指氟、氯、溴或碘。
術(shù)語(yǔ)“鹵代烷基”是指被至少一個(gè)鹵原子取代的如本文定義的烷基?！胞u代烷基”的非限定性例子包括分別被一個(gè)或多個(gè)鹵原子如氟、氯、溴和/或碘取代的甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基和叔丁基。術(shù)語(yǔ)“鹵代烷基”應(yīng)理解為包括諸如全氟烷基，如三氟甲基CF3等的取代基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“鹵代烷氧基”是指基團(tuán)-ORa，其中Ra是如上定義的鹵代烷基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“烷氧基”是指基團(tuán)-ORa，其中Ra為如上定義的烷基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“芳氧基”是指基團(tuán)-ORb，其中Rb為如上定義的芳基。
作為一個(gè)例子并且適用于整篇專利說(shuō)明書，因?yàn)樾g(shù)語(yǔ)“芳基”包括任選取代的芳基，所以術(shù)語(yǔ)“芳氧基”包括任選取代的芳氧基?！叭芜x取代”應(yīng)用于所有此中所定義的適合術(shù)語(yǔ)中。此外，如上所定義，術(shù)語(yǔ)“芳基”包括亞烷基連接的芳基。因此術(shù)語(yǔ)如“芳氧基”等應(yīng)認(rèn)為包括亞烷基連接的芳基。作為一個(gè)非限定性的例子，所述芳氧基可以是-ORb，其中Rb為芐基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“雜芳氧基”是指基團(tuán)-ORb，其中Rb為如上定義的雜芳基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“烷氧基羰基”是指基團(tuán)-C(O)ORa，其中Ra是如上定義的烷基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“芳氧基羰基”是指基團(tuán)-C(O)ORa，其中Ra是如上定義的芳基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“雜芳氧基羰基”是指基團(tuán)-C(O)ORa，其中Ra是如上定義的雜芳基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“烷氧基硫代羰基”是指基團(tuán)-C(S)ORa，其中Ra是如上定義的烷基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“芳氧基硫代羰基”是指基團(tuán)-C(S)ORa，其中Ra是如上定義的芳基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“雜芳氧基硫代羰基”是指基團(tuán)-C(S)ORa，其中Ra是如上定義的雜芳基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“氧代基”是指基團(tuán)＝O。
本文所用術(shù)語(yǔ)“巰基”是指基團(tuán)-SH。
本文所用術(shù)語(yǔ)“硫基”是指基團(tuán)-S-。
本文所用術(shù)語(yǔ)“亞磺?；笔侵富鶊F(tuán)-S(O)-。
本文所用術(shù)語(yǔ)“磺?；笔侵富鶊F(tuán)-S(O)2-。
本文所用術(shù)語(yǔ)“烷硫基”是指基團(tuán)-SRa，其中Ra為如上定義的烷基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“芳硫基”是指基團(tuán)-SRb，其中基團(tuán)Rb為如上定義的芳基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“雜芳硫基”是指基團(tuán)-SRb，其中基團(tuán)Rb為如上定義的雜芳基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“烷基亞磺酰基”是指基團(tuán)-S(O)Ra，其中Ra為如上定義的烷基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“芳基亞磺?；笔侵富鶊F(tuán)-S(O)Rb，其中Rb為如上定義的芳基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“雜芳基亞磺酰基”是指基團(tuán)-S(O)Rb，其中Rb為如上定義的雜芳基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“烷基磺?；笔侵富鶊F(tuán)-S(O)2Ra，其中Ra為如上定義的烷基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基磺?；笔侵富鶊F(tuán)-S(O)2Ra，其中Ra為如上定義的環(huán)烷基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“芳基磺酰基”是指基團(tuán)-S(O)2Rb，其中Rb為如上定義的芳基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“雜芳基磺?；笔侵富鶊F(tuán)-S(O)2Rb，其中Rb為如上定義的雜芳基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“氨基磺酰基”是指基團(tuán)-S(O)2NH2。
本文所用術(shù)語(yǔ)“氰基”是指基團(tuán)-CN。
本文所用術(shù)語(yǔ)“氰烷基”是指基團(tuán)-RaCN，其中Ra為如上定義的亞烷基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“羧基”是指基團(tuán)-COOH。
本文所用術(shù)語(yǔ)“氨基甲酰基”是指基團(tuán)-C(O)NH2。
本文所用術(shù)語(yǔ)“烷基氨基甲酰基”是指基團(tuán)-C(O)N(Ra)2，其中一個(gè)Ra是烷基，另一個(gè)Ra獨(dú)立地為H或烷基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“芳基氨基甲?；笔侵富鶊F(tuán)-C(O)N(Ra)2，其中一個(gè)Ra是如上定義的芳基，另一個(gè)Ra獨(dú)立地為H或芳基本文所用術(shù)語(yǔ)“雜芳基氨基甲?；笔侵富鶊F(tuán)-C(O)N(Ra)2，其中一個(gè)Ra為如上定義的雜芳基，另一個(gè)Ra獨(dú)立地為H或雜芳基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“硫代氨基甲?；笔侵富鶊F(tuán)-C(S)NH2。
本文所用術(shù)語(yǔ)“烷基硫代氨基甲?；笔侵富鶊F(tuán)-C(S)N(Ra)2，其中一個(gè)Ra為烷基，另一個(gè)Ra獨(dú)立地為H或烷基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“芳基硫代氨基甲酰基”是指基團(tuán)-C(S)N(Ra)2，其中一個(gè)Ra為如上定義的芳基，另一個(gè)Ra獨(dú)立地為H或芳基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“雜芳基硫代氨基甲?；笔侵富鶊F(tuán)-C(S)N(Ra)2，其中一個(gè)Ra為如上定義的雜芳基，另一個(gè)Ra獨(dú)立地為H或雜芳基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“氨基”是指基團(tuán)“-NH2”。
本文所用術(shù)語(yǔ)“烷氨基”是指基團(tuán)-N(Ra)2，其中一個(gè)Ra為如上定義的烷基，另一個(gè)Ra獨(dú)立地為H或烷基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基氨基”是指基團(tuán)-N(Ra)2，其中一個(gè)Ra為如上定義的環(huán)烷基，另一個(gè)Ra獨(dú)立地為H或環(huán)烷基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“芳氨基”是指基團(tuán)-N(Ra)2，其中一個(gè)Ra為如上定義的芳基，另一個(gè)Ra獨(dú)立地為H或芳基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“雜芳基氨基”是指基團(tuán)-N(Ra)2，其中一個(gè)Ra為如上定義的雜芳基，另一個(gè)Ra獨(dú)立地為H或雜芳基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“?；笔侵富鶊F(tuán)-C(O)Ra，其中Ra為如上定義的烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“硫代?；笔侵富鶊F(tuán)-C(S)Ra，其中Ra為如上定義的烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“羥基”是指基團(tuán)-OH。
本文所用術(shù)語(yǔ)“羥烷基”是指基團(tuán)-RaOH，其中Ra為如上定義的亞烷基。
同樣，整篇說(shuō)明書中所用的短語(yǔ)“任選取代的”是指一次或多次用如上定義的下述取代基取代酰基；烷基；烯基；炔基；烷基磺?；?；烷氧基；氰基；鹵素；鹵代烷基；羥基；硝基；芳基，其可進(jìn)一步被?；檠趸?，烷基，烯基，炔基，烷基磺?；?，氰基，鹵素，鹵代烷基，羥基或硝基取代；雜芳基，其可進(jìn)一步被?；?，烷氧基，烷基，烯基，炔基，烷基磺酰基，氰基，鹵素，鹵代烷基，羥基或硝基取代；芳基磺?；?，其可進(jìn)一步被酰基，烷氧基，烷基，烯基，炔基，烷基磺?；?，氰基，鹵素，鹵代烷基，羥基或硝基取代；雜芳基磺?；淇蛇M(jìn)一步被?；?，烷氧基，烷基，烯基，炔基，烷基磺酰基，氰基，鹵素，鹵代烷基，羥基或硝基取代；芳氧基，其可進(jìn)一步被?；檠趸?，烷基，烯基，炔基，烷基磺?；杌?，鹵素，鹵代烷基，羥基或硝基取代；雜芳氧基，其可進(jìn)一步被酰基，烷氧基，烷基，烯基，炔基，烷基磺?；杌?，鹵素，鹵代烷基，羥基或硝基取代；-R′OR′R4或-NR4R5，在各種情況下R′為亞烷基，亞烯基或亞炔基，并且R4和R5分別選自H，烷基，烯基，炔基，環(huán)烷基，雜環(huán)基，芳基，雜芳基，烷基磺酰基，芳基磺酰基或雜芳基磺?；?，在各種情況下這種芳基或雜芳基可被一個(gè)或多個(gè)酰基，烷氧基，烷基，烯基，烷基磺酰基，氰基，鹵素，鹵代烷基，羥基或硝基取代，或者R4和R5可結(jié)合成環(huán)，任選具有另外的雜原子，任選具有一個(gè)或多個(gè)不飽和度并且任選進(jìn)一步被?；?，烷氧基，烷基，烯基，炔基，烷基磺?；杌?，鹵素，鹵代烷基，羥基或硝基取代。
本發(fā)明的化合物可以多種形式結(jié)晶，即具有所謂的多晶型特征。所有多晶型物均在本發(fā)明的范圍內(nèi)。多晶現(xiàn)象通常由于溫度、壓力或兩者的變化而出現(xiàn)，并且也可由于結(jié)晶方法的不同而產(chǎn)生。多晶型可通過(guò)本領(lǐng)域人們熟知的各種物理特性如X-射線衍射圖譜、溶解度和熔點(diǎn)等加以區(qū)分。
這里所述的某些化合物包含一個(gè)或多個(gè)手性中心，即存在多種立體異構(gòu)體。本發(fā)明的范圍包括純的立體異構(gòu)體以及各立體異構(gòu)體的混合物，如純化的對(duì)映異構(gòu)體/非對(duì)映異構(gòu)體或?qū)τ钞悩?gòu)體富集混合物/非對(duì)映異構(gòu)體富集混合物。在本發(fā)明范圍內(nèi)也包括化合物本身的各種異構(gòu)體以及任何其全部或部分平衡混合物。本發(fā)明包括上式表示的各種化合物的異構(gòu)體與其中一個(gè)或多個(gè)手性中心為反轉(zhuǎn)的異構(gòu)體的混合物。
正如上面所述，本發(fā)明包括本發(fā)明化合物的鹽、溶劑合物和藥用功能衍生物。鹽包括加成鹽、金屬鹽或任選的烷基化的銨鹽。這種鹽的例子包括氫氯酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、三氟乙酸鹽、三氯乙酸鹽、草酸鹽、馬來(lái)酸鹽、丙酮酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、扁桃酸鹽、苯甲酸鹽、肉桂酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苦味酸鹽等。
其它鹽包括鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽等。其它鹽的例子包括乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、乙二胺四乙酸鈣、樟磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、棒酸鹽、檸檬酸鹽、二鹽酸鹽、乙二胺四乙酸鹽、乙二磺酸鹽、依托酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、谷氨酸鹽、乙醇酰阿散酸鹽、己基間苯二酚鹽、海巴明，羥基萘甲酸鹽、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂酸鹽、蘋果酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酰化物、甲基溴化物、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、馬來(lái)酸一鉀、粘酸鹽、萘磺酸鹽，硝酸鹽、N-甲基葡糖胺鹽、雙羥萘酸鹽(恩波酸鹽)、棕櫚酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、鉀鹽、水楊酸鹽、鈉鹽、硬脂酸鹽、堿式乙酸鹽、單寧酸鹽、酒石酸鹽、萘綠酸鹽、甲苯磺酸鹽、三乙基碘化物、三甲基銨鹽和戊酸鹽。相關(guān)鹽也可參照通過(guò)引用并入本文的文獻(xiàn)Journal of Pharmaceutical Science，1997，66，2。
本文所用術(shù)語(yǔ)“溶劑合物”是指通過(guò)溶質(zhì)或其鹽或藥用功能衍生物和溶劑形成的可變計(jì)量的絡(luò)合物。這種用于本發(fā)明的溶劑應(yīng)不干擾溶質(zhì)的生物活性。溶劑的例子包括但不限于水、甲醇、乙醇和乙酸。優(yōu)選所用的溶劑為藥學(xué)上可接受的溶劑。藥學(xué)上可接受的溶劑的例子包括水、乙醇和乙酸。
術(shù)語(yǔ)“藥用功能衍生物”是指本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的衍生物，例如酯或酰胺，其對(duì)哺乳動(dòng)物給藥后就能提供(直接或間接)本發(fā)明的化合物或其活性代謝物。這種衍生物無(wú)需過(guò)多實(shí)驗(yàn)就可為本領(lǐng)域技術(shù)人員所認(rèn)識(shí)。還可參照Burger的Medicinal Chemistry andDrug Discovery，第5版，第1卷Principles and Practice中的教導(dǎo)，其描述藥用功能衍生物的內(nèi)容通過(guò)引用并入本文。盡管本發(fā)明的化合物可以原化學(xué)物的形式給藥，但優(yōu)選本發(fā)明的化合物以本領(lǐng)域人們熟悉的藥物制劑活性成分的形式出現(xiàn)。因此，本發(fā)明還包括包含本發(fā)明的化合物或其鹽、溶劑合物或藥用功能衍生物連同一種或多種藥學(xué)上可接受的載體的藥物制劑。任選在所述藥物制劑中還包括其它治療和/或預(yù)防(“活性”)成分。例如，本發(fā)明的化合物可結(jié)合其它抗糖尿病藥如胰島素、α-葡糖苷酶抑制劑、縮二胍、胰島素促分泌素或胰島素增感劑等一種或多種藥物一起使用。α-葡糖苷酶抑制劑的非限定性實(shí)例包括阿卡糖，emiglitate，miglitol和voglibose?？s二胍的非限定性例子包括甲福明，丁福明和苯乙福明。胰島素促分泌素包括磺酰脲。胰島素增感劑的非限定性實(shí)例包括過(guò)氧化物酶體增殖劑(proliferator)活化的受體(PPAR)配體諸如PPAR-γ激動(dòng)劑例如ActosTM和AvandiaTM。
本發(fā)明的藥物制劑包括特別配制成經(jīng)口、口腔、腸胃外、經(jīng)皮、吸入、鼻內(nèi)、肌肉、植入或直腸給藥。在各種給藥形式中，一般優(yōu)選經(jīng)口給藥。對(duì)于經(jīng)口給藥來(lái)說(shuō)，片劑、膠囊和小膠囊可包含常規(guī)的賦形劑，如粘合劑、填充劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑和/或潤(rùn)濕劑。粘合劑的非限定性例子包括糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨糖醇、西黃蓍膠、淀粉粘膠或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。填充劑的非限定性例子包括例如乳糖、蔗糖、微晶纖維素、玉米淀粉、磷酸鈣或山梨糖醇。潤(rùn)滑劑的非限定性例子包括例如硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石、聚乙二醇或硅石。崩解劑的非限定性例子包括例如土豆淀粉或葡糖酸淀粉鈉。潤(rùn)濕劑的非限定性例子包括月桂基硫酸鈉。片劑另外可按照本領(lǐng)域人們熟悉的方法包衣。
或者，本發(fā)明的化合物可混入到口服液制劑如水懸浮液或油懸浮液、溶液、乳濁液、糖漿或酏劑中。此外，含這些化合物的制劑可以干燥產(chǎn)品形式存在，使用前用水或其它適合溶媒配制。液體制劑可包含常規(guī)的添加劑。這種添加劑的非限定性例子包括懸浮劑，如山梨糖醇糖漿、甲基纖維素、葡萄糖/蔗糖糖漿、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化食用油脂。另外，可包括乳化劑諸如卵磷脂、脫水山梨糖醇單油酸酯或阿拉伯膠；非水溶媒(其可包括食用油)，如杏仁油、精餾椰油、油酯、丙二醇或乙醇。制劑中還可混入防腐劑諸如對(duì)羥基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸。這種制劑也可配制成例如含常規(guī)栓劑基料如椰子油或其它甘油酯的栓劑。
另外，本發(fā)明的制劑可配制成供腸胃外的注射或連續(xù)灌注給藥。注射制劑可采用在油或水性溶媒中的懸浮液、溶液或乳狀液形式，并且可包含配制劑諸如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑。或者，活性劑可以是粉末形式，使用前用適合的溶媒如無(wú)菌無(wú)致熱源的水配制。
按照本發(fā)明的制劑也可配制成長(zhǎng)效制劑。這種長(zhǎng)效制劑可通過(guò)例如皮下或肌內(nèi)植入或肌肉注射給藥。因此，本發(fā)明的化合物可用適合的聚合物或疏水物質(zhì)，如在可接受油中的乳狀液、離子交換樹(shù)脂配制或作為微溶衍生物，如微溶鹽配制。
藥物制劑也可以單位劑型存在，每單位劑量含預(yù)定量活性成分。這種單位可根據(jù)所治療的疾病、給藥途徑、患者年齡、體重和病況包含一定量的本發(fā)明化合物。這種量的例子包括含約0.1-99.9％活性成分的制劑。優(yōu)選的單位劑量制劑是那些含預(yù)定劑量，諸如日劑量或其適合分量的活性成分的制劑。這種藥物制劑可通過(guò)任何藥業(yè)中所熟悉的方法制備。
本文所用術(shù)語(yǔ)“有效量”是指引發(fā)例如研究人員或臨床醫(yī)生所研究的組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或人的生物或醫(yī)療反應(yīng)的藥物或藥物制劑的量。此外，術(shù)語(yǔ)“治療有效量”是指與沒(méi)有接受這種量的相應(yīng)受試者相比，對(duì)疾病、障礙或副作用產(chǎn)生改善的治療、愈合、預(yù)防或好轉(zhuǎn)，或降低疾病惡化速率的量。該術(shù)語(yǔ)也包括有效增強(qiáng)正常生理功能的有效量。
本發(fā)明化合物的治療有效量取決于多種因素，包括例如動(dòng)物的年齡和體重、需要治療的確切病狀和其嚴(yán)重性、制劑的性質(zhì)和給藥途徑。治療效果最終將取決于主治醫(yī)生或獸醫(yī)的結(jié)論。所述化合物的鹽或溶劑合物或藥用功能衍生物的有效量可為本發(fā)明化合物本身有效量的一定比例。劑量可根據(jù)治療或預(yù)防各種代謝病、胃腸病、病毒病和炎癥的DPP-IV的適當(dāng)抑制需要而不同，其中所述疾病包括但不限于糖尿病、肥胖癥、高脂血癥、皮膚病或粘膜疾病、牛皮癬、腸道疾病、便秘、自身免疫病諸如腦脊髓炎、補(bǔ)體介導(dǎo)的疾病，如腎小球性腎炎、脂肪營(yíng)養(yǎng)不良、組織損傷、身心疾病、抑郁、神經(jīng)精神疾病(如焦慮、抑郁、失眠癥、精神分裂癥、癲癇、痙攣和慢性疼痛)、HIV感染、變態(tài)反應(yīng)、炎癥、關(guān)節(jié)炎、移植排斥、高血壓、充血性心力衰竭、腫瘤和緊張性流產(chǎn)，例如細(xì)胞因子介導(dǎo)鼠流產(chǎn)。
當(dāng)本發(fā)明的化合物以上述劑量范圍給藥時(shí)，表現(xiàn)出/可預(yù)期不產(chǎn)生毒性反應(yīng)。
下面實(shí)施例將舉例說(shuō)明本發(fā)明的各個(gè)方面，但并不能看作是對(duì)其作出限定。在這些方法、圖表和實(shí)例中所用的符號(hào)和約定與用于當(dāng)代科學(xué)文獻(xiàn)如the Journal of the American Chemical Society或theJournal of Biological Chemistry中的一致。除非另外指明，否則所有原料均由商業(yè)供應(yīng)商獲得并且沒(méi)有進(jìn)一步純化直接使用。
1H NMR光譜在Varian VXR-300、Varian Unity-300、VarianUnity-400儀器或General Electric QE-300上記錄?；瘜W(xué)位移以ppm(δ單位)表示。偶合常數(shù)以赫茲(Hz)為單位。裂解圖案描述了表觀峰裂數(shù)并標(biāo)記為s(單峰)、d(雙峰)、t(三峰)、q(四峰)、m(多峰)、br(寬峰)。
低分辨率質(zhì)譜(MS)在JOEL JMS-AX505HA、JOEL AX-102或SCIEX-APLiii質(zhì)譜儀上記錄；高分辨率MS使用JOEL SX-102A質(zhì)譜儀獲得。所有質(zhì)譜圖均在電噴霧電離(ESI)、化學(xué)離子化(CI)、電子轟擊(EI)或通過(guò)快原子轟擊(FAB)方法下獲得。紅外(IR)譜圖在使用1mm NaCl池的Nicolet 510FT-IR光譜儀獲得。所有反應(yīng)均通過(guò)在0.25mm E.Merck硅膠板(60F-254)上的薄層層析監(jiān)測(cè)，用紫外光、5％磷鉬酸乙醇溶液或?qū)钕闳┮掖既芤猴@色觀察。快速柱層析在硅膠(230-400目，Merck)上進(jìn)行。旋光性使用Perkin Elmer 241型旋光計(jì)獲得。熔點(diǎn)使用Mel-Temp II裝置測(cè)定，但未校準(zhǔn)。
本文包括了IUPAC名稱來(lái)進(jìn)一步確證本發(fā)明的具體化合物。但此中所述的IUPAC名稱并不限定本發(fā)明的范圍。
實(shí)驗(yàn)按照本發(fā)明以及下面的所述，本發(fā)明化合物的一個(gè)例子可通過(guò)在標(biāo)準(zhǔn)偶合條件(如采用HATU、DMF、Hunigs堿)下，使式II的化合物與α-或β-氨基羧酸鹽或與α-或β-氨基活化的羧酸鹽(本文中兩者均通稱為氨基羧酸鹽)反應(yīng)來(lái)制備。
更具體地說(shuō)，式II的化合物可與氨基羧酸鹽反應(yīng)，其中氨基羧酸鹽用合適的保護(hù)基，如叔丁基羧基保護(hù)基對(duì)如α-氮進(jìn)行適當(dāng)?shù)乇Ｗo(hù)。
在一可替用的實(shí)施方案中，式II的化合物可與氨基活化的羧酸鹽如N-羥基琥珀酰亞胺酯或酰氯反應(yīng)，其中氨基活化的羧酸鹽用合適的保護(hù)基如叔丁基羧基保護(hù)基對(duì)如α-氮進(jìn)行適當(dāng)?shù)乇Ｗo(hù)。在適合條件下去除保護(hù)基，如用三氟乙酸去除叔丁基羧基后得到式(I)化合物。
對(duì)于制備用于制備本發(fā)明化合物的氨基羧酸鹽的更詳細(xì)資料可參照WO95/15309和WO98/19998(其中相關(guān)制備資料均通過(guò)引用并入本文)。
中間體實(shí)施例1 (2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽A.(2S，4R)-4-羥基-2-吡咯烷甲酸甲酯鹽酸酯向在冰水浴中冷卻的含L-羥基脯氨酸(62.67g，478mmol)的甲醇溶液(420mL)滴加硫酰氯(58.6g，492.3mmol)。完成加入后立即在室溫下攪拌懸浮液2小時(shí)。然后將混合物加熱回流6小時(shí)，然后冷卻到室溫并真空去除溶劑。在高真空下泵吸殘留固體物得到86.03g(474mmol，99％收率)白色固體狀的化合物A。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ4.62-4.57(m，2H)，3.85(s，3H)，3.43(dd，1H，J＝12.2，3.7Hz)，3.30(m，1H)，2.41(dd，1H，J＝13.6，7.6Hz)，2.19(m，1H)ppm.
B.(2S，4R)-4-羥基-1，2-吡咯烷二甲酸1-叔丁酯·2-甲酯在0℃用1.5小時(shí)向含化合物A(88.67g，0.49mol)和二碳酸二叔丁酯(109.8g，0.50mol)的二氯甲烷溶液(1.4L)滴加三乙胺(123.6g，1.22mol)。然后將得到的溶液緩慢加溫到室溫過(guò)夜。真空除去溶劑后向殘余固體物加入乙醚。真空過(guò)濾收集固體物并用乙醚徹底洗滌。真空去除濾餅中的溶劑并溶解于二氯甲烷中。有機(jī)物經(jīng)飽和氯化鈉和飽和碳酸氫鈉洗滌后用硫酸鎂干燥。過(guò)濾并真空去除溶劑得到淺黃色油狀物，高真空抽吸約15分鐘后固化。向固體加入500mL己烷并攪拌過(guò)夜。真空過(guò)濾收集固體物，并在高真空下抽吸得到104.5g(0.43mol，87％收率)白色固體狀化合物B。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ4.37-4.32(m，2H)，3.72-3.71(m，3H)，3.51(m，1H)，3.43(m，1H)，2.23(m，1H)，2.02(m，1H)，1.42(m，9H)ppm.
C.(2S，4S)-4-氟-1，2-吡咯烷二甲酸1-叔丁酯·2-甲酯.
向冷卻到-30℃的裝有化合物B(124.25g，0.51mol)的1.25L 1，2-二氯乙烷溶液的2L燒瓶中加入純DAST(125g，0.78mol)。用1小時(shí)讓反應(yīng)物緩慢升溫到-10℃，比時(shí)去除冷浴。在室溫下持續(xù)攪拌24小時(shí)，將深色溶液傾入到兩個(gè)分別含碎冰和固體碳酸氫鈉的2L燒瓶中。將燒瓶定時(shí)旋轉(zhuǎn)和攪拌直到無(wú)二氧化碳逸出(注意定時(shí)加入另外的固體碳酸氫鈉)。分離有機(jī)層并將水層用二氯甲烷萃取。經(jīng)硫酸鎂干燥后，真空去除溶劑，將殘留的深色油溶解于200mL乙酸乙酯中并然后加入800mL己烷。向該溶液加入100g二氧化硅。攪拌30分鐘后，將溶液過(guò)濾，用己烷/乙酸乙酯(4∶1，約500mL)洗滌二氧化硅。真空去除溶劑并高真空抽吸過(guò)夜，得到121.81g(0.40mol，97％收率)深色油狀化合物C。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ5.18(d(br)，1H，J＝53Hz)，4.53(d，1/2H，J＝9.7Hz)，4.40(d，1/2H，J＝9.4Hz)，3.87-3.59(m，2H)，3.73(s，3H)，2.51-2.28(m，2H)，1.46(s，3H，rotomer)，1.41(s，6H，rotomer)ppm.
D.(2S，4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-氟-2-吡咯烷甲酸在室溫下向裝有化合物C(121.8g，0.49mol)的1.1L二烷溶液的2L燒瓶中加入380mL水，接著加入氫氧化鋰水合物(103.6g，2.46mol)。將得到的溶液攪拌23小時(shí)(注意TLC分析表明5小時(shí)后反應(yīng)完成)，然后真空除去大部分二烷。將殘留物溶解于另外的水中，加入活性炭。攪拌15分鐘后，將溶液通過(guò)硅藻土床過(guò)濾。向?yàn)V液加入固體氯化鈉直到氧化鈉不再溶解。然后在冰浴中冷卻并用濃鹽酸酸化到pH為3，同時(shí)保持溶液溫度在5-10℃之間。在pH為4時(shí)產(chǎn)物開(kāi)始沉淀出來(lái)，一旦達(dá)到pH 3，就將褐色固體物經(jīng)真空過(guò)濾收集。在高真空抽吸過(guò)夜后，將固體物溶解于乙腈(1.5L)中并經(jīng)硫酸鎂干燥。真空去除溶劑，并高真空干燥得到92.7g(0.40mol，81％收率)褐色固體狀的化合物D。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ12.5(s(br)，1H)，5.22(d(br)，1H，J＝54Hz)，4.25(m，1H)，3.60-3.43(m，2H)，2.45(m，1H)，2.20(m，1H)，1.33(m，9H)ppm.
E.(2S，4S)-2-(氨基羰基)-4-氟-1-吡咯烷甲酸叔丁酯在室溫下向配有空氣驅(qū)動(dòng)攪拌器的2L三頸燒瓶中加入化合物D(92.7g，0.40mol)、乙腈(1.1L)、二碳酸二叔丁酯(130g，0.60mol)和吡啶(32.4g，0.41mol)。攪拌20分鐘后，加入碳酸氫銨(47.2g，0.60mol)。將反應(yīng)物攪拌23小時(shí)后，將大部分乙腈真空去除。殘?jiān)芙庥诙燃淄橹?，?∶1 1M HCl/飽和氯化鈉溶液洗滌。然后將水層用二氯甲烷萃取二次。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥后真空去除溶劑。棕褐色固體在己烷(約0.5L)中研磨并真空過(guò)濾收集。高真空抽吸后獲得68.75g(0.30mol，74％收率)棕褐色固體形式的化合物E。將濾液真空去除溶劑后得到深色油，經(jīng)1H NMR鑒定也顯示出含有其它產(chǎn)物。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ7.21(s(br)，1/2H)，7.14(s(br)，1/2H)，6.94(s(br)，1H)，5.19(d(br)，1H，J＝54Hz)，4.11(m，1H)，3.63-3.47(m，2H)，2.38(m，1H)，2.11(m，1H)，1.39(s，3H，rotomer)，1.34(s，6H，rotomer)ppm.
F.(2S，4S)-2-氰基-4-氟-1-吡咯烷甲酸叔丁酯向含咪唑(2.93g，43.1mmol)的燒瓶中加入吡啶(75g，0.9mol，對(duì)酰胺的容重為15)。然后將溶液冷卻到0℃，接著攪拌10分鐘，一次加入BOC-4-氟脯氨酸酰胺(5.0g，21.6mmo1)。然后將溶液冷卻到-30℃(注意在該溫度以下可能導(dǎo)致形成多相溶液)，用5分鐘滴加POCl3(13.2g，86.4mmol)。完成添加后，用冰水浴代替干冰丙酮浴并在0℃繼續(xù)攪拌1小時(shí)，然后將其傾入到碎冰、固體氯化鈉和乙酸乙酯混合物中。分離有機(jī)層并將水層用乙酸乙酯萃取二次。真空除去溶劑(注意保持旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器水浴溫度＜35℃)并將殘?jiān)芙庥谝宜嵋阴ブ小Ｓ袡C(jī)層用飽和氯化鈉和1M HCl洗滌兩次。經(jīng)硫酸鎂干燥后，真空去除溶劑得到4.0g(18.6mmol，86％收率)淡褐色固體物形式的化合物F。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ5.32(d(br)，1H，J ＝52Hz)，4.78(m，1H)，3.74-3.48(m，2H)，2.55-2.40(m，2H)，1.52-1.43(m，9H)ppm.
G.(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽在室溫下向含化合物F(56.62g，0.26mol)的乙腈溶液(1L)加入對(duì)甲苯磺酸水合物(75.4g，0.40mol)。24小時(shí)后，真空去除乙腈，然后將殘留的棕色油溶解于500mL乙酸乙酯中。1分鐘內(nèi)固體物沉淀出來(lái)，將溶液在冰水浴中冷卻，攪拌1小時(shí)后固體物經(jīng)真空過(guò)濾收集。收集的固體物用冷(約20℃)乙酸乙酯(約500mL)洗滌，然后在高真空抽吸過(guò)夜得到60.94g(0.21mol，82％收率)淡褐色固體物形式的化合物G。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ7.69(d，2H，J＝8.1Hz)，7.23(d，2H，J＝8.0Hz)，5.52(dd，1H，J＝51，3.4Hz)，4.96(dd，1H，J＝9.8，3.6Hz)，3.78(m，1H)，3.55(m，1H)，2.84-2.63(m，2H)，2.36(s，3H)ppm.
中間體實(shí)施例1的另一途徑 (2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(2S，4R)-2-(氨基羰基)-4-羥基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯向冷卻到-15℃的含BOC-L-羥基脯氨酸(30.0g，129mmol)和三乙胺(14.4g，141.9mmol)的四氫呋喃溶液(420mL)中滴加氯甲酸乙酯(15.4g，141.9mmol)。將得到的溶液攪拌10分鐘，加入80mL 28％氫氧化銨。用2小時(shí)讓反應(yīng)物緩慢升溫到5℃，加入飽和氯化銨直到全部白色固體物溶解。分離四氫呋喃并用四氫呋喃萃取水層。將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥并真空去除溶劑。殘留的油用乙醚和少量二氯甲烷和甲醇處理。在冰柜存放1小時(shí)后，真空過(guò)濾收集形成的白色固體，獲得22.0g(95.6mmol，74％收率)化合物A。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ7.33-7.29(d(br)，1H，rotomers)，6.88-6.80(d(br)，1H，rotomers)，4.94(s(br)，1H)，4.18(s(br)，1H)，4.04(m，1H)，3.35(m，1H)，3.21(m，1H)，1.99(m，1H)，1.77(m，1H)，1.36-1.31(d，9H，rotomers)ppm.
B.(2S，4R)-2-氰基-4-羥基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯向冷卻到-20℃的含化合物A(17.89g，77.8mmol)的吡啶溶液(180mL)滴加三氟乙酸酐(40.8g，194.4mmol)。完成添加后，讓反應(yīng)物升溫到室溫。6小時(shí)后，用水猝滅反應(yīng)，并傾入到乙酸乙酯(約500mL)中。有機(jī)物用飽和氯化鈉、1.0M HCl和2.0M NaOH洗滌，接著經(jīng)硫酸鎂干燥。向?yàn)V液加入活性炭，攪拌10分鐘后將溶液通過(guò)硅藻土床過(guò)濾。真空去除溶劑(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器溫度為34℃)，得到13.21g(62.3mmol，80％收率)橙色油狀的化合物B。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ4.60(m，1H)，4.40(s(br)，1H)，3.49-3.41(m，2H)，2.36-2.34(m，2H)，1.51-1.48(m，9H，rotomers)C.(2S，4S)-2-氰基-4-氟-1-吡咯烷甲酸叔丁酯向冷卻到-30℃的含化合物B(13.21g，62.3mmol)的1，2-二氯乙烷溶液(300mL)加入DAST(15.1g，93.4mmol)。30分鐘后，除去冷浴并繼續(xù)攪拌24小時(shí)，然后小心用飽和碳酸氫鈉猝滅反應(yīng)。將溶液傾入到碎冰中并用二氯甲烷萃取有機(jī)物(兩次)。最終用飽和硫酸氫銨洗滌后，有機(jī)物經(jīng)硫酸鎂干燥并真空去除溶劑得到10.86g(50.7mmol，81％收率)棕色半固體狀的化合物C。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ5.32(d(br)，1H，J＝52Hz)，4.78(m，1H)，3.34-3.48(m，2H)，2.55-2.40(m，2H)，1.52-1.43(m，9H)ppm.
D.(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽在室溫下向含化合物C(10.86g，50.7mmol)的乙腈溶液(200mL)加入對(duì)甲苯磺酸(14.8g，78mmol)。將得到的溶液攪拌24小時(shí)后即真空去除乙腈。將殘留棕色油溶解于乙酸乙酯(300mL)中，在1分鐘內(nèi)沉淀出固體物。將溶液在冰浴中冷卻2小時(shí)，真空過(guò)濾收集固體物。將其用300mL冷(-20℃)乙酸乙酯洗滌得到10.07g(35.2mmol，69％收率)化合物D。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ7.69(d，2H，J＝8.1Hz)，7.23(d，2H，J＝8.0Hz)，5.52(dd，1H，J＝51，3.4Hz)，4.96(dd，1H，J＝9.8，3.6Hz)，3.78(m，1H)，3.55(m，1H)，2.84-2.63(m，2H)，2.36(s，3H)ppm.
中間體實(shí)施例2 (2S)-4，4-二氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽A.(2S，4S)-2-(氨基羰基)-4-羥基-1-吡咯烷甲酸叔丁酯向冷卻到-15℃的含BOC-L-羥基脯氨酸(30.0g，129mmol)和三乙胺(14.4g，141.9mmol)的四氫呋喃溶液(420mL)中滴加氯甲酸乙酯(15.4g，141.9mmol)。將得到的白色溶液在-15℃攪拌30分鐘，然后通過(guò)注射器加入80mL 28％氫氧化銨溶液。完成添加后，除去冷浴并繼續(xù)攪拌19小時(shí)。將均相溶液傾入到飽和氯化銨中并分離出有機(jī)層。水層用四氫呋喃萃取，然后將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥。真空除去溶劑并通過(guò)高真空抽吸所得半固體2小時(shí)。真空過(guò)濾收集得到的白色固體，用乙醚洗滌，得到15.86g(68.9mmol，53％收率)化合物A。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ7.34(s(br)，1H，rotomer)，7.31(s(br)，1H，rotomer)，6.90(s(br)，1H，rotomer)，6.82(s(br)，1H，rotomer)，4.95(d，1H，J＝3.1Hz)，4.05(m，1H)，3.36(m，1H)，3.22(m，1H)，2.03(m，1H)，1.78(m，1H)，1.37(s，3H，rotomer)，1.32(s，6H，rotomer)ppm.
B.(2S)-2-(氨基羰基)-4-氧代-1-吡咯烷甲酸叔丁酯向冷卻到-78℃的含草酰氯(607mg，4.78mmol)的二氯甲烷溶液(12mL)加入含DMSO的二氯甲烷溶液(3mL)。5分鐘后，滴加(2S，4S)-2-(氨基羰基)-4-羥基-1-吡咯烷甲酸叔丁酯(1.0g，4.35mmol，如上述步驟E所述)在二氯甲烷/四氫呋喃(20mL/15mL)中的溶液。完成添加后，將反應(yīng)物攪拌20分鐘，加入三乙胺(2.20g，21.7mmol)。10分鐘后，除去冷浴并繼續(xù)攪拌1小時(shí)。將溶液傾入到飽和碳酸氫鈉溶液中，用二氯甲烷萃取有機(jī)物。經(jīng)硫酸鎂干燥后，真空除去溶劑，將殘留黃色油經(jīng)柱層析(二氯甲烷/甲醇(15∶1))純化而得到560mmol(2.45mmol，56％收率)化合物B的白色固體物。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ7.58(s(br)，1H)，7.15(s(br)，1H，rotomer)，7.09(s(br)，1H，rotomer)，4.51(d，1H，J＝9.7Hz，rotomer)，4.46(d，1H，J＝8.8Hz，rotomer)，3.76-3.64(m，2H)，3.02(m，1H)，2.28(m，1H)，1.39(s，3H，rotomer)，1.37(s，6H，rotomer)ppm.
C.(2S)-2-(氨基羰基)-4，4-二氟-1-吡咯烷甲酸叔丁酯向冷卻到-70℃的含化合物B(423mg，1.85mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)加入DAST(889mg，5.50mmol)。將得到的溶液在-70℃攪拌30分鐘，然后在室溫下攪拌2小時(shí)。用飽和碳酸氫鈉猝滅反應(yīng)，并用二氯甲烷萃取有機(jī)物。經(jīng)硫酸鎂干燥后，將留下的黃色固體經(jīng)柱層析(二氯甲烷/甲醇(15∶1))純化，得到211mg(0.84mmol，46％收率)化合物C。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ4.38(m，1H)，3.84-3.75(m，2H)，2.76(m，1H)，2.41(m，1H)，1.44(s(br)，9H)ppm.
D.(2S)-2-氰基-4，4-二氟-1-吡咯烷甲酸叔丁酯.
向冷卻到-35℃的含化合物C(658mg，2.63mmol)和咪唑(358mg，5.26mmol)的吡啶溶液(20mL)加入POCl3(1.61g，10.5mmol)。將得到的淤漿攪拌1.5小時(shí)，然后加溫到10℃。將溶液用乙酸乙酯稀釋并用1M HCl洗滌3次。經(jīng)硫酸鎂干燥后，真空除去溶劑，得到610mg(2.63mmol，100％收率)化合物D，該產(chǎn)物直接用于E(下面)。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ4.88(s(br)，1H)，3.79-3.72(m，2H)，2.87(m，1H)，2.69(m，1H)，1.50(s，9H)ppm.
E.(2S)-4，4-二氟-2-吡啶甲腈4-甲基苯磺酸鹽在室溫下向含化合物D(512mg，2.21mmol)的乙腈溶液(15mL)加入對(duì)甲苯磺酸水合物(839mg，4.42mmol)。將得到的溶液攪拌2小時(shí)后真空去除乙腈。向殘留的油加入乙酸乙酯(約10mL)，然后真空除去。得到的固體物在乙醚中研磨，接著加入乙酸乙酯。經(jīng)真空過(guò)濾收集固體物，得到375mg(1.23mmol，56％收率)化合物E的白色固體。
1H NMR(d4-MeOH)δ400MHzδ7.70(d，2H，J＝8.2Hz)，7.23(d，2H，J＝7.9Hz)，5.12(t，1H，J＝7.9Hz)，3.91-3.78(m，2H)，3.08-2.89(m，2H)，2.89(s，3H)，2.36(s，9H)ppm.
實(shí)施例實(shí)施例1
(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二苯基丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二苯基丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽。
向無(wú)水二甲基甲酰胺(DMF，25mL)加入(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3，3-二苯基丙酸(1.96g，6.0mmol)、HATU(2.28g，6.0mmol)和N，N-二異丙基乙胺(1.05mL，6.0mmol)。在室溫下攪拌30分鐘后，加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(1.31g，4.5mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.783mL，4.5mmol)。在室溫下將溶液攪拌12小時(shí)，然后加入飽和碳酸氫鈉溶液(110mL)。將混合物用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，將有機(jī)物用飽和氯化鈉(100mL)洗滌、經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮至干而得到粗制固體物。將這種固體物進(jìn)行層析(硅膠，己烷/乙酸乙酯4∶1)而得到固體物，將所得固體物在二烷-HCl(4.0M，2.0mL)溶液中攪拌2小時(shí)，接著加入乙醚(100mL)。過(guò)濾收集得到沉淀物，在高真空下干燥，得到1.36g(3.64mmol，81％收率)化合物A的白色固體。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ8.45-8.41(s(br)，3H)，7.70(m，2H)，7.38-7.36(m，2H)，7.29-7.26(m，3H)，7.24-7.18(m，3H)，5.39(d，1H，J＝51Hz)，4.89-4.85(m，2H)，4.38(d，1H，J＝11.3Hz)，3.98(ddd，1H，J＝38.8，12.4Et 3.1Hz)，3.39-3.33(m，1H)，2.30-2.18(m，2H)ppm.
實(shí)施例2
(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-雙(4-氟苯基)丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.3，3-雙(4-氟苯基)-3-羥基丙酸在0℃向正丁鋰(46mL 2.5M溶液，115mmol)無(wú)水四氫呋喃(80mL)溶液滴加二異丙胺(11.13g，115mmol)并將溶液攪拌10分鐘。將溶液保持在0℃下，滴加乙酸(2.64g，44mmol)，將混合物攪拌10分鐘，然后在50℃下加熱。30分鐘后形成許多沉淀，冷卻溶液。在0℃下加入4，4′-二氟二苯酮(9.6g，0.044mol)的四氫呋喃(50mL，無(wú)水)溶液，將溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。加入水(100mL)和乙醚(100mL)，分離水層并用1M HCl酸化到pH為3。用乙酸乙酯萃取有機(jī)物(3×200mL)，接著用硫酸鎂干燥。過(guò)濾并真空去除溶劑，得到粗制白色固體物，可用冷三氯甲烷洗滌來(lái)去除痕量二苯酮。將固體物在高真空下干燥得到5.63g(20.2mmol，46％收率)化合物A可白色固體。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ12.4(s(br)，1H)，7.48-7.39(m，4H)，7.19-7.02(m，4H)，5.91(s(br)，1H)，3.25(s，2H)ppm.
B.3，3-雙(4-氟苯基)丙烯酸向20％硫酸的乙酸溶液(50mL，V/V)中加入化合物A(5.6g，20.2mmol)，并在室溫下攪拌混合物30分鐘。向該溶液加入水(500mL)，用乙酸乙酯(3×150mL)萃取有機(jī)物，接著經(jīng)硫酸鎂干燥。過(guò)濾并真空去除溶劑得到白色固體。將固體物在高真空下干燥，得到4.97g(19.1mmol，95％收率)化合物B的白色固體。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.27-7.21(m，2H)，7.19-7.13(m，2H)，7.10-6.95(m，4H)，6.26(s，1H)ppm.
C.3，3-雙(4-氟苯基)丙酸向化合物B(2.5g，9.61mmol)的乙酸乙酯(250mL)溶液加入10％披鈀碳(50％w/w)，在1大氣壓氫氣壓力下氫化12小時(shí)。將該多相溶液經(jīng)硅藻土過(guò)濾并真空濃縮濾液得到黃色油狀物。將該油狀物在高真空下干燥得到2.40g(9.16mmol，95％收率)化合物C的黃色油狀物。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ12.08(brs，1H)，7.40-7.30(m，4H)，7.15-7.05(m，4H)，4.45(t，1H，J＝8.1Hz)，3.05(d，2H，J＝8.1Hz)ppm.
D.(4S，5R)-3-[3，3-雙(4-氟苯基)丙?；鵠-4-甲基-5-苯基-1，3-唑烷-2-酮向化合物C(2.0g，7.63mmol)的四氫呋喃(50mL，無(wú)水)加入N，N-二異丙基乙胺(1.18g，9.16mmol)，然后將溶液冷卻到-78℃。向該溶液加入三甲基乙酰氯(0.97g，8.01mmol)并用1小時(shí)讓溶液升溫到0℃。將渾濁混合物過(guò)濾并在-78℃下用10分鐘緩慢將濾液加入到鋰化(4S，5R)-(-)-4-甲基-5-苯基-2-唑烷酮[其通過(guò)在-78℃將正丁鋰(3.0mL 2.5M溶液，7.63mmol)滴加到已經(jīng)攪拌10分鐘的(4S，5R)-(-)-4-甲基-5-苯基-2-唑烷酮(1.35g，7.63mmol)來(lái)制備]中。將黃色混合物升溫到0℃并用水(50mL)猝滅，用乙醚(3×250mL)萃取，接著經(jīng)硫酸鎂干燥。過(guò)濾并真空除去溶劑得到固體物?？焖賹游?硅膠，20％乙酸乙酯/己烷)純化得到化合物D。將白色固體在高真空下干燥，得到2.31g(5.49mmol，72％收率)白色固體。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ7.40-7.25(m，9H)，7.18-7.02(m，4H)，5.76(d，1H，J＝7.6Hz)，4.65(m，1H)，4.58(t，1H，J＝7.6Hz)，3.72(dd，1H，J＝16.8，7.0Hz)3.57(dd，1H，J＝16.8，7.0Hz)，0.58(d，3H，J＝6.7Hz)ppm.
E.(4S，5R)-3-[(2S)-2-疊氮基-3，3-雙(4-氟苯基)丙酰基]-4-甲基-5-[(1E，3Z)-1-甲基己-1，3，5-三烯基]-1，3-唑烷-2-酮在-78℃向化合物D(2.0g，475mmol)的四氫呋喃溶液(50mL，無(wú)水)滴加二(三甲基甲硅烷基)氨基化鉀(10.0mL 0.5M甲苯溶液，4.98mmol)。攪拌10分鐘后，一次性加入在無(wú)水四氫呋喃(10mL)中的2，4，6-三異丙基苯磺酰基疊氮化物(1.84g，5.94mmol)。3分鐘后，在-78℃加入乙酸(1.31g，21.8mmol)并快速將反應(yīng)物加溫到30℃，在該溫度下攪拌1小時(shí)，產(chǎn)生淡黃色溶液。向該溶液加入水(100mL)并用乙酸乙酯(500mL)萃取有機(jī)物。用飽和碳酸氫鈉(100mL)洗滌后，經(jīng)硫酸鎂干燥，真空除去溶劑而得到黃色油狀物。經(jīng)柱層析(乙酸乙酯/己烷1∶9)純化得到白色固體狀化合物E。HPLC分析表明為單一非對(duì)映異構(gòu)體。將白色固體在高真空下干燥得到1.71g(3.70mmol，78％收率)白色固體。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.42-7.35(m，H)，7.25-7.18(m，H)，7.10-7.06(m，2H)，7.05-6.92(m，2H)，5.95(d，1H，J＝10.8Hz)，5.05(d，1H，J＝7.1Hz)，4.60(d，1H，J＝10.8Hz)，4.38(m，1H)，0.95(d，3H，J＝6.8Hz)ppm.
F.(2S)-2-疊氮基-3，3-雙(4-氟苯基)丙酸在0℃向化合物E(1.5g，3.25mmol)的THF/H2O(4∶1，50mL)溶液加入氫氧化鋰(0.272g，6.49mmol)在過(guò)氧化氫(1.50mL 30％水溶液，48.75mmol)中的溶液。將混合物在0℃攪拌1小時(shí)，然后用硫酸鈉(6.3g，50mL 1.0M水溶液)猝滅。真空去除THF，在0℃將溶液用6.0M HCl酸化到pH 1。有機(jī)物用乙酸乙酯(2×200mL)萃取，接著經(jīng)硫酸鎂干燥。過(guò)濾并真空去除溶液得到透明油狀物。柱層析(乙酸乙酯/己烷/乙酸50∶50∶1)純化后得到化合物F的白色固體。將固體在高真空下干燥，得到0.78g(2.60mmol，80％收率)的白色固體。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ9.60(s(br)，1H)，7.25-7.10(m，4H)，7.10-6.95(m，4H)，4.50(d，2H，J＝8.6Hz)ppm.
G.(2S)-2-氨基-3，3-雙(4-氟苯基)丙酸向化合物F(1.5g，4.95mmol)的乙酸乙酯(250mL)溶液加入10％披鈀碳(10％w/w)，在1大氣壓氫氣壓力下氫化12小時(shí)。將該多相溶液經(jīng)硅藻土(1g)過(guò)濾并將濾液真空濃縮，得到透明油狀物。將該油狀物在高真空下干燥，得到1.30g(4.70mmol，95％收率)白色固體狀化合物G。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ10.2(s(br)，1H)，7.38-7.27(m，4H)，7.08-6.98(m，4H)，4.25(d，1H，J＝8.3Hz)，3.95(d，1H，J＝8.3Hz)ppm.
H.(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3，3-雙(4-氟苯基)丙酸向化合物G(1.30g，4.69mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液加入三乙胺(2.37g，23.4mmol)和二碳酸二叔丁酯(1.23g，5.63mmol)。攪拌12小時(shí)后，加入水(50mL)和二氯甲烷(300mL)并將溶液用1.0M HCl酸化到pH為3。分離乙酸乙酯層后，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空去除溶劑得到透明油狀物。將該油狀物在高真空下干燥得到1.68g(4.4mmol，95％收率)化合物H的白色固體。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ12.4(s(br)，1H)，7.35-7.22(m，4H)，7.15-6.95(m，4H)，4.78(t，1H，J＝8.9Hz)，4.25(d，1H，J＝8.9Hz)，3.05(m，1H)，1.20(s，3H)，1.15(s，6H)ppm.
I.(2S，4S)-1-[(2S)-2-(叔丁氧基羰基)氨基-3，3-雙(4-氟苯基)丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈。
向化合物H(1.0g，2.65mmol)和HATU(1.0g，2.65mmol)的二甲基甲酰胺(DMF)溶液(25mL，無(wú)水)加入N，N-二異丙基乙胺(0.462mL，2.65mmol)，30分鐘后加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(0.619g，2.12mmol)和另外的N，N-二異丙基乙胺(0.37mL，2.12mmol)。在室溫下將該溶液攪拌12小時(shí)，然后加入飽和碳酸氫鈉(100mL)。將形成的膠狀混合物用乙酸乙酯(3×100mL)萃取，并將有機(jī)物用飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌，接著經(jīng)硫酸鎂干燥。過(guò)濾并真空去除溶劑后得到透明油狀物。將該油狀物經(jīng)硅膠層析(己烷/乙酸乙酯4∶1)純化得到白色固體。將該固體在高真空下干燥，得到815mg(1.72mmol，65％收率)白色固體狀的化合物I。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.38-7.32(m，2H)，7.21-7.15(m，2H)，7.12-6.98(m，4H)，5.15(d，1H，J＝51Hz)，5.03(d，1H，J＝8.9Hz，4.89(d，1H，J＝11.2Hz)，4.86(d，1H，J＝8.9Hz)，4.40(d，1H，J＝11.2Hz)，3.83(ddd，1H，J＝36.8，12.1，3.7Hz)，3.05(d，1H，J＝12.2Hz)，2.62(t，1H，J＝15.3Hz)，2.25(m，1H)，1.38(s，9H)ppm.
J.(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-雙(4-氟苯基)丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向化合物I(0.5g，1.05mmol)加入4.0N HCl的1，4-二烷溶液(10mL，40mmol)并在3小時(shí)后加入乙醚(100mL)。通過(guò)過(guò)濾收集形成的沉淀并在高真空下干燥后獲得0.41g(1.0mmol，95％收率)白色固體狀化合物A。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ8.42(s(br)，3H)，7.72-7.66(m，2H)，7.38-7.32(m，2H)，7.25-7.19(m，2H)，7.06-7.0(m，2H)，5.38(d，1H，J＝51Hz)，4.91(d，2H，J＝8.8Hz)，4.82(d，1H，J＝11.3Hz)，4.41(d，1H，J＝11.3Hz)，3.86(ddd，1H，J＝39.2，12.4，3.1Hz)，3.45(q，1H，J＝12.4Hz)，2.38-2.20(m，2H)ppm.
實(shí)施例3 (2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-5-(4-氟苯基)-3，3-二甲基戊酰基]-4-氟-2-吡咯烷甲腈鹽酸鹽A.4-(4-氟苯基)-2，2-二甲基丁醛向冷卻到-78℃的裝有4-(4-氟苯基)-2，2-二甲基丁腈(該化合物的制備參見(jiàn)Knochel，P等人，Org.Lett.2000，2，3285；)(13.4g，70.2mmol)的300mL甲苯的燒瓶中加入70.2mL 1.5 M DIBAL(105.3mmol)的甲苯溶液。2.5小時(shí)后，逐漸加入含17.9g乙酸鈉和17.9mL乙酸的水/THF(250mL/50mL)溶液。完成添加后，加入硅藻土和乙醚，讓燒瓶升溫到室溫。攪拌1小時(shí)后，將多相溶液通過(guò)硅藻土床過(guò)濾。硅藻土用乙醚洗滌，然后將濾液用水洗滌。經(jīng)硫酸鎂干燥后，真空除去溶劑并將殘余油狀物經(jīng)柱層析(5％乙酸乙酯/己烷)純化，得到11.3g(58.2mmol，83％收率)化合物A。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ9.47(s，1H)，7.12-7.10(m，2H)，7.09-6.93(m，2H)，2.51-2.47(m，2H)，1.77-1.72(m，2H)，1.12(s，6H)ppm.
B.5-(4-氟苯基)-3，3-二甲基-2-({(1R)-1-苯基-2-[(三甲基甲硅烷基)氧基]乙基}氨基)戊腈室溫下向化合物A(9.07g，46.8mmol)的二氯甲烷(250mL)溶液加入(R)-苯基甘氨醇(glycinol)(6.41g，46.8mmol)。將得到的溶液攪拌1.5小時(shí)，然后冷卻到0℃并加入三甲基甲硅烷基氰化物(9.28g，93.5mmol)。將黃色溶液緩慢升溫到室溫過(guò)夜。然后用飽和硫酸氫鈉猝滅并將有機(jī)層分離。有機(jī)物用水洗滌并用硫酸鎂干燥，用活性炭脫色。通過(guò)硅藻土過(guò)濾后，將黃色油通過(guò)柱層析(己烷/乙酸乙酯9∶1))純化，得到11.9g(28.9mmol，62％收率)化合物B，為6∶1非對(duì)映體的混合物形式。
主要非對(duì)映體異構(gòu)體1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.38-7.29(m，5H)，7.11-7.07(m，2H)，6.98-6.93(m，2H)，4.03(dd，1H，J＝9.95，3.8Hz)，3.68(m，1H)，3.52(t，1H，J＝10.2Hz)，3.06(d，1H)，J＝13.4Hz)，2.44-2.34(m，3H)，1.73-1.65(m，2H)，1.11(s，3H)，1.09(s，3H)，0.14(s，9H)ppm.
C.5-(4-氟苯基)-2-{[(1R)-2-羥基-1-苯乙基]氨基}-3，3-二甲基戊腈室溫下向化合物B(11.85g，28.8mmol)的甲醇溶液(300mL)加入氟化鉀(16.7g，287.6mmol)。將溶液攪拌1.5小時(shí)，然后真空除去大部分甲醇。加入二氯甲烷和水并分離有機(jī)層。經(jīng)硫酸鎂干燥后，真空除去溶劑并將得到的殘留油經(jīng)柱層析(己烷/乙酸乙酯(4∶1))純化，得到8.86g(26.1mmol，90％收率)化合物C，為6∶1非對(duì)映體混合物的形式。
主要非對(duì)映體異構(gòu)體1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.38-7.30(m，5H)，7.10-7.06(m，2H)，6.97-6.92(m，2H)，4.06(dd，1H，J＝9.5，4.0Hz)，3.79(m，1H)，3.58(m，1H)，3.D7(d，1H，J＝12.5Hz)，2.43-2.30(m，3H)，1.95(dd，1H，J＝7.8，4.1Hz)，1.74-1.64(m，2H)，1.11(s，3H)，1.09(s，3H)ppm.
D.5-(4-氟苯基)-3，3-二甲基-2-{[(E)-苯基亞甲基]氨基}戊腈向冷卻到0℃的化合物C(494mg，1.45mmol)的二氯甲烷(10mL)/甲醇(4mL)溶液加入四乙酸鉛(838mg，1.89mmol)。將得到的溶液攪拌過(guò)夜，然后升溫到環(huán)境溫度。向該溶液加入20mL pH 7.2磷酸鹽緩沖液。30分鐘后，將渾濁溶液通過(guò)硅藻土床過(guò)濾，將硅藻土用二氯甲烷徹底洗滌。向?yàn)V液加入水后分離出有機(jī)層，水層用二氯甲烷萃取，隨后將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥。真空除去溶劑后將殘留油經(jīng)柱層析(己烷/乙酸乙酯(9∶1))純化，得到270mg(0.88mmol，60％收率)化合物D。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ8.50(d，1H，J＝1.4Hz)，7.81-7.80(d，2H，J＝6.6Hz)，7.54-7.43(m，3H)，7.17-7.13(m，3H)，6.99-6.94(m，2H)，4.48(s，1H)，2.68-2.64(m，2H)，1.81-1.74(m，2H)，1.19(s，3H)，1.15(s，3H)ppm.
E.5-(4-氟苯基)-3，3-二甲基正纈氨酸鹽酸鹽向含化合物D(268mg，0.87mmol)的燒瓶加入7mL濃鹽酸。將溶液加熱回流18小時(shí)，然后冷卻并用乙醚萃取。真空去除去除水層中的溶劑，將殘留油性固體溶解于乙醚/甲醇中并用活性炭脫色。過(guò)濾后真空除去溶劑，殘留物在乙醚中研磨并真空除去溶劑，得到180mg(0.65mmol，75％收率)粗制油狀固體形式的化合物E。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ7.25-7.20(m，2H)，7.01-6.95(m，2H)，4.45(s(br)，1H)，2.67-2.63(m，2H)，1.76-1.72(m，2H)，1.22-1.13(m，6H).
F.N-(叔丁氧基羰基)-5-(4-氟苯基)-3，3-二甲基正纈氨酸室溫下向化合物E(180mg，065mmol)的二烷溶液(5mL)加入2.5mL 2M NaOH溶液。然后向得到的溶液加入二碳酸二叔丁酯(284mg，1.34mmol)。攪拌過(guò)夜后，將溶液用1.0M HCl酸化。將有機(jī)物用乙酸乙酯萃取兩次，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空除去溶劑。殘留油經(jīng)柱層析(5％甲醇/二氯甲烷)純化得到76mg(0.22mmol，34％收率)化合物F。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ7.18-7.15(m，2H)，6.96-6.92(m，2H)，6.62(d，1H，J＝9.3Hz)，4.18(d，1H，J＝9.5Hz)，2.65-2.58(m，2H)，1.62-1.53(m，2H)，1.44(s，9H)，1.05(s，3H)，1.01(s，3H)ppm.
G.(1S)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷基]羰基}-4-(4-氟苯基)-2，2-二甲基丁基氨基甲酸叔丁酯室溫下向化合物F(172mg，0.51mmol)的二甲基甲酰胺溶液(4mL)加入二異丙基乙胺(98mg，0.76mmol)，接著加入HATU(213mg，0.56mmol)。15分鐘后，加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(153mg，0.53mmol)和二異丙基乙胺(68mg，0.53mmol)的二甲基甲酰胺(2mL)溶液。將反應(yīng)物攪拌過(guò)夜，然后將其傾入到乙酸乙酯中。將有機(jī)物用水(兩次)、飽和碳酸氫鈉溶液和飽和硫酸氫鈉溶液洗滌。經(jīng)硫酸鎂干燥后，真空除去溶劑，殘留黃色油經(jīng)柱層析(2％甲醇/二氯甲烷)純化，得到147mg粗制化合物G，其經(jīng)半制備HPLC進(jìn)一步純化而得到80mg化合物G。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.15-7.12(m，2H)，6.96-6.92(m，2H)，5.40(d(br)，1H，J＝52.0Hz)，5.18(d，1H，J＝9.7Hz)，5.04(d，1H，J＝9.3Hz)，4.31(d，1H，J＝9.9Hz)，4.11(s，1H)，4.03(m，1H)，2.70-2.52(m，3H)，2.33(m，1H)，1.64-1.60(m，2H)，1.41(s，9H)，1.11(s，3H)，1.09(s，3H)ppm.
H.(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-5-(4-氟苯基)-3，3-二甲基戊酰基]-4-氟-2-吡咯烷甲腈鹽酸鹽向化合物G(80mg，0.18mmol)的二氯甲烷溶液(4mL)加入71μLTFA(5當(dāng)量)。30分鐘后，再加入5當(dāng)量TFA，1小時(shí)后再加入10當(dāng)量TFA?？偣矓嚢?.5小時(shí)后，真空除去溶劑并將殘留物溶解于乙酸乙酯中。將有機(jī)物用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空除去溶劑。向殘留油加入1.5mL二烷，接著加入2.0mL 4.0M HCl的二烷溶液。真空除去溶劑并加入乙醚。經(jīng)真空過(guò)濾收集沉淀固體物，得到40mg(0.11mmol，60％收率)化合物H。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ7.25-7.22(m，2H)，7.00-6.95(m，2H)，5.46(d(br)，1H，J＝51.1Hz)，5.09(d，1H，J＝9.4Hz)，4.12(m，1H)，4.03(s，1H)，3.90(ddd，1H，J＝37.6，12.7，3.0Hz)，2.68-2.44(m，4H)，1.78-1.73(m，2H)，1.21(s，6H)ppm.
實(shí)施例4 (2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-4-(4-氟苯基)-3，3-二甲基丁?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.3-(4-氟苯基)-2，2-二甲基丙腈向冷卻到0℃的異丁腈(5.0g，72.3mmol)的甲苯溶液(60mL)加入152mL 0.5M KHMDS(76.0mmol)的甲苯溶液。15分鐘后，加入4-氟芐基溴(14.4g，76.0mmol)。將溶液緩慢升溫到環(huán)境溫度過(guò)夜，然后用水猝滅。有機(jī)物用乙酸乙酯萃取并用飽和硫酸氫鈉溶液洗滌。經(jīng)硫酸鎂干燥后，真空除去溶劑將殘留黃色油經(jīng)柱層析(5％乙酸乙酯/己烷)純化，得到10.05g(56.8mmol，79％收率)化合物A。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.25-7.22(m，2H)，7.05-7.00(m，2H)，2.78(s，2H)，1.34(s，6H)ppm.
B.3-(4-氟苯基)-2，2-二甲基丙醇向冷卻到-78℃的化合物A(10.0g，56.5mmol)的甲苯溶液(100mL)加入56.5mL 1.5M DIBAL(84.7mmol)的甲苯溶液。2.5小時(shí)后，加入乙酸鈉(14.3g)的水/THF溶液(160mL/40mL)和乙酸(14.3mL)，接著加入硅藻土。將溶液攪拌1小時(shí)，然后加入乙醚。將溶液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，硅藻土用乙醚徹底洗滌。濾液用水洗滌兩次，然后用飽和碳酸氫鈉洗滌。經(jīng)硫酸鎂干燥后，真空去除溶劑，殘留油經(jīng)柱層析(5％乙酸乙酯/己烷)純化，得到9.23g(51.3mmol，91％收率)化合物B。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ9.56(s，1H)，7.06-7.03(m，2H)，6.97-6.93(m，2H)，2.75(s，2H)，1.04(s，6H)ppm.
C.2-氨基-4-(4-氟苯基)-3，3-二甲基丁腈向化合物B(5.0g，27.8mmol)的甲醇溶液(32mL)加入3.8mL 30％氫氧化銨溶液、氰化鉀(1.9g，29.2mmol)和15mL水。室溫下向該溶液加入氯化銨(1.64g，30.6mmol)。將得到的溶液攪拌過(guò)夜，然后加熱到70℃。5小時(shí)后，將溶液冷卻，用乙酸乙酯稀釋，用水洗滌(兩次)，接著用飽和碳酸氫鈉洗滌。用硫酸鎂干燥后，真空除去溶劑，殘留的黃色油經(jīng)柱層析(己烷/乙酸乙(1∶1))純化，得到3.69g(17.9mmol，64％收率)化合物C。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.17-7.13(m，2H)，7.00-6.95(m，2H)，3.33(t，1H，J＝8.5Hz)，2.80(d，1H，J＝13.4Hz)，2.61(d，1H，J＝13.4Hz)，1.58-1.57(m，2H)，1.03(s，3H)，1.02(s，3H)ppm.
D.2-氨基-4-(4-氟苯基)-3，3-二甲基丁酸向含化合物C(3.69g，17.9mmol)的燒瓶加入80mL濃鹽酸。將該溶液加熱回流24小時(shí)。將多相溶液在冰浴中冷卻，經(jīng)真空過(guò)濾收集白色固體。在高真空下抽吸后獲得4.06g白色粉末。該粗制物直接使用。
E.2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-(4-氟苯基)-3，3-二甲基丁酸向化合物D(2.0g，7.66mmol)的二烷溶液(20mL)加入5mL水和9.6mL 2.0M NaOH水溶液。室溫下向該溶液加入二碳酸二叔丁酯(2.34g，10.7mmol)。攪拌過(guò)夜后，將多相溶液傾入到飽和碳酸氫鈉溶液中并用乙醚洗滌。乙醚層用飽和碳酸氫鈉洗滌，然后將合并的水層用1.0M HCl酸化，用乙酸乙酯萃取兩次。經(jīng)硫酸鎂干燥后，真空除去溶劑，得到928mg(2.86mmol，37％收率)化合物E。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ7.21-7.18(m，2H)，7.00-6.95(m，2H)6.74(d，1H，J＝9.0Hz)，3.98(d，1H，J＝9.0Hz)，2.68(d，1H，J＝13.4Hz)，2.62(d，1H，J＝13.3Hz)，1.45(s(br)，9H)，0.93(s，3H)，0.92(s，3H)ppm.
F.(1S)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-3-(4-氟苯基)-2，2-二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯室溫下向化合物E(928mg，2.86mmol)的DMF溶液(20mL)順序加入二異丙基乙胺(406mg，3.14mmol)和HATU(1.14g，3.00mmol)。30分鐘后，加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(857mg，3.00mmol)和二異丙基乙胺(388mg，3.00mmol)的13mL DMF溶液。攪拌過(guò)夜后，將該溶液傾入到乙酸乙酯并用水洗滌兩次、并再順序用飽和碳酸氫鈉溶液和1.0M HCl溶液洗滌。經(jīng)硫酸鎂干燥后，真空除去溶劑。殘留油經(jīng)柱層析(己烷/乙酸乙酯/二氯甲烷(5∶4∶1))純化，得到273mg(0.65mmol，低Rf物質(zhì))(S)-非異構(gòu)體(由振動(dòng)圓二色性測(cè)定)和226mg(R)-非異構(gòu)體加上未知雜質(zhì)的混合物。使用(S)-非異構(gòu)體。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.15-7.11(m，2H)，7.01-6.96(m，2H)，5.32(dt，1H，J＝51.3，3.3Hz)，5.20(d，1H，J＝9.7Hz)，501(d，1H，J＝9.3Hz)，4.16(d，1H，J＝10.1Hz)，3.91(m，1H)，3.68(dd，1H，J＝23.6，12.1Hz)，2.72-2.56(m，2H)，2.30(m，1H)，1.43(s，9H)，1.08(s，3H)，0.95(s，3H)ppm.
G.(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-4-(4-氟苯基)-3，3-二甲基丁?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽室溫下向化合物F(242mg，0.58mmol)的二氯甲烷溶液(7mL)加入443μL(10當(dāng)量)TFA。30分鐘后，再加入10當(dāng)量TFA，并在總共3小時(shí)后，將反應(yīng)混合物傾入到飽和碳酸氫鈉溶液中。將有機(jī)物用乙酸乙酯萃取，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空除去溶劑。將殘留油溶解于二烷(4mL)中，然后加入4.0mL HCl的二烷溶液。真空除去溶劑，剩余物在乙醚中研磨。經(jīng)真空過(guò)濾收集得到的固體物，得到175mg(0.46mmol，79％收率)鹽G。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ7.22-7.19(m，2H)，7.08-7.04(m，2H)，5.43(d(br)，1H，J＝51.1Hz)，5.09(d，1H，J＝9.5Hz)，4.05(s，1H)，3.97-3.74(m，2H)，2.82(d，1H，J＝13.4Hz)，2.72(d，1H，J＝13.2Hz)，2.64-2.39(m，2H)，1.07(s，3H)，1.00(s，3H)ppm.
實(shí)施例5
(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(4-甲氧基芐基)硫基]-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-[(4-甲氧基芐基)硫基]-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯向(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[(4-甲氧基芐基)硫基]-3-甲基丁酸(2.0g，5.41mmol，1.2當(dāng)量)的DMF溶液(35mL)順序加入N，N-二異丙基乙胺(1.06mL，6.09mmol，1.35當(dāng)量)和HATU(2.9g，7.67mmol，1.7當(dāng)量)。將得到的琥珀色溶液在室溫下攪拌20分鐘。向該攪拌著的溶液加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(1.29g，4.51mmol，1.0當(dāng)量)和N，N-二異丙基乙胺(864μL，4.96mmol，1.1當(dāng)量)的DMF(12mL)溶液。得到的溶液在室溫下攪拌18小時(shí)，然后用飽和碳酸氫鈉溶液(約50mL)猝滅。將渾濁溶液傾入到水(約100mL)中，用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物順序用水(兩次)和鹽水(一次)萃??；經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。得到的琥珀色油使用1∶1己烷/乙酸乙酯作為流動(dòng)相的快速層析純化，分離出1.96g(4.23mmol，78％收率)白色泡沫狀化合物A。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.29(d，2H，J＝8.8Hz)，6.83(d，2H，J＝8.6Hz)，5.48(d，1H，J＝51.4Hz)，5.43(d，1H，J＝9.2Hz)，5.04(d，1H，J＝9.3Hz)，4.38(d，1H，J＝8.9Hz)，4.27(m，1H)，4.04(m，1H)，3.80(s，2H)，3.77(s，3H)，2.72(t，1H，15.5Hz)，2.37(m，1H)，1.47-1.41(m，14H)ppm.
B.(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(4-甲氧基芐基)硫基]-3-甲基丁酰基}-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向三氟乙酸(8mL)的二氯甲烷(60mL)溶液加入化合物A(1.2g，2.58mmol，1.0當(dāng)量)。將得到的淡黃色溶液在室溫下攪拌2小時(shí)，然后真空除去溶劑。通過(guò)加入飽和碳酸氫鈉溶液將得到的TFA鹽轉(zhuǎn)化成游離堿，用乙酸乙酯萃取水層(兩次)。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。得到的灰白色泡沫使用5％甲醇(含0.1％氨)的二氯甲烷溶液作為流動(dòng)相的快速層析純化，得到897mg(2.45mmol，95％收率)的白色泡沫。為了形成鹽酸鹽，將游離堿溶于乙醚中，加入丙酮直到所有固體物溶解。滴加2.0M HCl的乙醚溶液直到不再形成沉淀。然后將沉淀物過(guò)濾并用乙醚洗滌幾次。得到的鹽在高真空下干燥。
1H NMR(D2O)400MHzδ7.31(d，2H，J＝8.6Hz)，6.88(d，2H，J＝8.5Hz)，5.49(d，1H，J＝50.5Hz)，5.00(d，1H，J＝9.8Hz)，4.02-3.52(m，8H)，2.65(t，1H，J＝15.7Hz)，2.40(m，1H)，1.44(s，3H)，1.31(s，3H)ppm.
實(shí)施例6 (2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(3-苯丙基)硫基]丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(2R)-2-氨基-3-巰基-3-甲基丁酸甲酯向L-青霉胺(3.0g，20.11mmol，1.0當(dāng)量)的甲醇(18mL，1.14M)溶液加入硫酰氯(1.5mL，20.7mmol，1.03當(dāng)量)。將得到的混合物加熱回流18小時(shí)并真空除去溶劑。得到的透明半固體用于下一步驟而無(wú)進(jìn)一步純化。分離得到3.28g(20.1mmol，100％收率)。
B.(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-巰基-3-甲基丁酸甲酯向化合物A(3.28g，20.1mmol，1.0當(dāng)量)的二氯甲烷溶液(60mL)加入二碳酸二叔丁酯(4.48g，20.5mmol，1.02當(dāng)量)和三乙胺(7.0mL，50.3mmol，2.5當(dāng)量)。將得到的混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。真空除去溶劑并將殘留物溶于乙醚中。將不溶的白色固體過(guò)濾并將濾液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。得到的白色固體用于下一步驟而無(wú)進(jìn)一步純化。分離得到5.01g(19.02mmol，95％收率)
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ4.26(m，1H)，3.72(s，3H)，1.44-1.42(m，15H)ppm.
C.(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲基-3-[(3-苯丙基)硫基]丁酸甲酯向化合物B(346mg，1.31mmol，1.0當(dāng)量)的乙腈(20mL)溶液加入叔丁醇鈉(138mg，1.44mmol，1.1當(dāng)量)。將得到的淡黃色混合物在室溫下攪拌10分鐘，然后加入1-溴-3-苯基丙烷(219μL，144mmol，1.1當(dāng)量)。將得到的溶液在室溫下攪拌18小時(shí)。然后用飽和氯化銨溶液猝滅反應(yīng)物，傾入到水中并用乙酸乙酯萃取兩次。將合并的萃取物經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。使用以2∶1己烷/乙酸乙酯作為流動(dòng)相的快速層析純化。分離得到376mg(0.988mmol，76％收率)。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.30-7.16(m，5H)，5.38(d，1H，J＝8.8Hz)，4.29(d，1H，J＝9.0Hz)，3.71(s，3H)，2.72(t，2H，J＝7.4Hz)，2.58-2.51(m，2H)，1.89-1.82(m，2H)，1.44(s，9H)，1.36(d，6H，J＝8.8Hz)ppm.
D.(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲基-3-[(3-苯基丙基)硫基]丁酸向化合物C(376mg，0.988mmol，1.0當(dāng)量)的二烷(7.5mL)/水(2.5mL)溶液加入一水合氫氧化鋰(207mg，4.94mmol，5.0當(dāng)量)。得到的多相化合物在室溫下攪拌18小時(shí)。將反應(yīng)物用飽和氯化銨溶液猝滅，傾入到水中并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的萃取物經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。使用以1∶1己烷/乙酸乙酯(含0.1％AcOH)作為流動(dòng)相的快速層析純化。分離得到230mg產(chǎn)物(0.626mmol，64％收率)。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.31-7.16(m，5H)，5.51(d，1H，J＝9.5Hz)，4.33(d，1H，J＝9.5Hz)，3.41(t，2H，J＝6.8Hz)，2.79(t，2H，J＝7.3Hz)，2.20-2.13(m，2H)，1.47-1.44(m，15H)ppm.
E.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基-2-[(3-苯丙基)硫基]丙基氨基甲酸叔丁酯向化合物D(230mg，0.626mmol，1.2當(dāng)量)的DMF溶液(5mL)順序加入N，N-二異丙基乙胺(123μL，0.705mmol，1.35當(dāng)量)和HATU(337mg，0.887mmol，1.7當(dāng)量)。將得到的琥珀色溶液在室溫下攪拌20分鐘。向該攪拌溶液加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(149mg，0.522mmol，1.0當(dāng)量)和N，N-二異丙基乙胺(100μL，0.574mmol，1.1當(dāng)量)的DMF(2mL)溶液。將得到的溶液在室溫下攪拌18小時(shí)并用飽和碳酸氫鈉溶液(約5mL)猝滅。然后將渾濁溶液傾入到水(約20mL)中并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用水(2×)和鹽水(1×)洗滌；經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。將得到的琥珀色油使用以1∶1己烷/乙酸乙酯作為流動(dòng)相的快速層析純化。分離得到190mg(0.411mmol，79％收率)白色泡沫形式的化合物E。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.28-7.17(m，5H)，5.46(d，1H，J＝51.4Hz)，5.37(d，1H，J＝9.0Hz)，5.00(d，1H，J＝9.3Hz)，4.38-4.29(m，2H)，4.01(m，1H)，2.77-2.58(m，5H)，2.35(m，1H)，1.92-1.80(m，2H)，1.44-1.34(m，15H)ppm.
F.(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(3-苯丙基)硫基]丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈向三氟乙酸(1mL)的二氯甲烷(10mL)溶液加入化合物E(190mg，0.411mmol，1.0當(dāng)量)。將得到的淡黃色溶液在室溫下攪拌2小時(shí)，然后真空除去溶劑。通過(guò)加入飽和碳酸氫鈉溶液將得到的TFA鹽轉(zhuǎn)變成游離堿，用乙酸乙酯萃取水層(2X)。將合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。得到的灰白色泡沫使用以5％MeOH(含0.1％NH3)/的二氯甲烷溶液作為流動(dòng)相的快速層析純化，得到134mg(0.389mmol，94％收率)白色泡沫。為了形成鹽酸鹽，將游離堿溶于乙醚中，加入丙酮直到所有固體物溶解。滴加2.0M HCl/乙醚直到不再形成沉淀。然后將沉淀物過(guò)濾并用乙醚洗滌幾次。將得到的鹽在高真空下干燥。
1H NMR(D2O)400MHzδ7.23-7.11(m，5H)，5.46(d，1H，J＝50.4Hz)，4.98(d，1H，J＝9.1Hz)，4.04-3.96(m，2H)，3.68(m，1H)，2.62-2.30(m，6H)，1.78-1.71(m，2H)，1.29(d，6H，J＝9.7Hz)ppm.
實(shí)施例7 (2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(2-苯乙基)硫基]丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲基-3-[(2-苯乙基)硫基]丁酸甲酯向(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-巰基-3-甲基丁酸甲酯(如上所述)(1.26g，4.78mmol，1.0當(dāng)量)的乙腈(50mL)溶液加入叔丁醇鈉(597mg，6.21mmol，1.3當(dāng)量)。得到的淡黃色混合物在室溫下攪拌10分鐘，然后加入(2-溴乙基)苯(718μL，526mmol，1.1當(dāng)量)。得到的溶液在室溫下攪拌18小時(shí)。然后用飽和氯化銨溶液猝滅反應(yīng)物，傾入到水中并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的萃取物經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。使用以5∶1己烷/乙酸乙酯作為流動(dòng)相的快速層析純化。分離得到761mg產(chǎn)物(2.07mmol，45％收率)。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.31-7.19(m，5H)，5.36(d，1H，J＝9.0Hz)，4.33(d，1H，J＝9.1Hz)，3.71(s，3H)，2.83-2.78(m，4H)，1.44(s，9H)，1.36(d，6H，J＝7.5Hz)ppm.
B.(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲基-3-[(2-苯乙基)硫基]丁酸向化合物A(761mg，2.07mmol，1.0當(dāng)量)的二烷(20mL)/水(7mL)溶液加入一水合氫氧化鋰(434mg，10.35mmol，5.0當(dāng)量)。得到的多相混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。用飽和氯化銨溶液猝滅反應(yīng)，傾入到水中并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的萃取物用硫酸鎂干燥并真空濃縮。使用以1∶1己烷/乙酸乙酯(含0.1％乙酸)作為流動(dòng)相的快速層析純化。分離得到502mg產(chǎn)物(1.42mmol，69％收率)。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.31-7.18(m，5H)，5.42(d，1H，J＝8.3Hz)，4.32(s(br)，1H)，2.87-2.81(m，4H)，1.44(s，9H)，1.40(s，3H)，1.36(s，3H)ppm.
C.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基-2-[(2-苯乙基)硫基]丙基氨基甲酸叔丁酯向化合物B(502mg，1.42mmol，1.2當(dāng)量)的DMF溶液(10mL)順序加入N，N-二異丙基乙胺(278μL，1.59mmol，1.35當(dāng)量)和HATU(764mg，2.01mmol，1.7當(dāng)量)。得到的琥珀色溶液在室溫下攪拌20分鐘。向該攪拌著的溶液加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(338mg，1.18mmol，1.0當(dāng)量)和N，N-二異丙基乙胺(226μL，1.3mmol，1.1當(dāng)量)的DMF(5mL)溶液。將得到的溶液在室溫下攪拌18小時(shí)并用飽和碳酸氫鈉溶液(約5mL)猝滅。然后將渾濁溶液傾入到水(約20mL)中，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用水(2×)和鹽水(1×)洗滌；經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。將得到的琥珀色油使用以1∶1己烷/乙酸乙酯作為流動(dòng)相的快速層析純化。分離得到361mg(0.803mmol，80％收率)白色泡沫形式的化合物C。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.30-7.20(m，5H)，5.46(d，1H，J＝51.0Hz)，5.38(d，1H，J＝9.2Hz)，5.01(d，1H，J＝9.4Hz)，4.36-4.25(m，2H)，4.06(m，1H)，2.87-2.84(m，4H)，2.70(t，1H，J＝15.0Hz)，2.35(m，1H)，1.41-1.37(m，15H)ppm.
D.(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(2-苯乙基)硫基]丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈向三氟乙酸(2mL)的二氯甲烷(20mL)溶液加入化合物C(361mg，0.803mmol，1.0當(dāng)量)。將得到的淡黃色溶液在室溫下攪拌2小時(shí)，然后真空除去溶劑。通過(guò)加入飽和碳酸氫鈉溶液將得到的TFA鹽轉(zhuǎn)變成游離堿，并用乙酸乙酯萃取水層(2X)。將合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。得到的灰白色泡沫使用以5％MeOH(含0.1％NH3)/二氯甲烷作為流動(dòng)相的快速層析純化，得到223mg(0.638mmol，80％收率)白色泡沫。為了形成鹽酸鹽，將游離堿溶于乙醚中，加入丙酮直到所有固體物溶解。滴加2.0M HCl/乙醚，直到不再形成沉淀。然后將沉淀物過(guò)濾并用乙醚洗滌幾次。將得到的鹽在高真空下干燥。
1H NMR(D2O)400MHzδ7.20-7.09(m，5H)，5.43(d，1H，J＝50.5Hz)，4.94(d，1H，J＝9.5Hz)，4.13(m，1H)，3.89(s，1H)，3.71(m，1H)，2.84-2.70(m，4H)，2.59(t，1H J＝15.7Hz)，2.37(m，1H)，1.28(s，3H)，1.22(s，3H)ppm.
實(shí)施例8 (2S，4S)-1-[(2R)-2-氨基-3-{[3-(4-氟苯基)丙基]硫基}-3-甲基丁酰基]-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.3-(4-氟苯基)丙-1-醇用0.5小時(shí)向3-(4-氟苯基)丙酸(33.6g，0.2mol)的THF(200mL)溶液加入1.0M LiAlH4的乙醚溶液(200mL，0.2mol)。得到的混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。通過(guò)緩慢加入水猝滅反應(yīng)物，水層用乙醚萃取。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。得到的油沒(méi)有再純化直接用于下一步驟。分離得到31.4g(0.2mol，100％收率)。
B.1-(3-氯丙基)-4-氟苯向化合物A(31.4g，0.2mol)的二氯甲烷(300mL)溶液加入二氯三苯基膦(110g，0.33mol)。得到的混合物在室溫下攪拌20分鐘并真空濃縮。將己烷(約200mL)加熱到殘留物中，并將得到的多相混合物室溫下攪拌30分鐘。將不溶的固體物過(guò)濾并用己烷洗滌。將濾液真空濃縮，得到的油沒(méi)有進(jìn)一步純化直接用于下一步驟。分離得到33.3g產(chǎn)物(0.193mol，96％收率)。
C.(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-{[3-(4-氟苯基)丙基]硫基}-3-甲基丁酸甲酯向(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-巰基-3-甲基丁酸甲酯(如上所述)(1.51g，5.73mmol，1.0當(dāng)量)的乙腈(60mL)溶液加入叔丁醇鈉(716mg，7.45mmol，1.3當(dāng)量)。得到的淡黃色混合物在室溫下攪拌10分鐘，然后加入1-(3-氯丙基)-4-氟苯(如上所述)(1.09g，6.3mmol，1.1當(dāng)量)。得到的溶液在室溫下攪拌18小時(shí)。然后用飽和氯化銨溶液猝滅反應(yīng)物，傾入到水中并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的萃取物經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。使用以5∶1己烷/乙酸乙酯作為流動(dòng)相的快速層析純化。分離得到700mg產(chǎn)物(1.75mmol，31％收率)。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.14-7.10(m，2H)，6.98-6.93(m，2H)，5.36(d，1H，J＝9.1Hz)，4.29(d，1H，J＝9.2Hz)，3.71(s，3H)，2.68((t，2H，J＝7.4Hz)，2.56-2.49(m，2H)，1.86-1.79(m，2H)，1.43(s，9H)，1.35(d，6H，J-6.8Hz)ppm.
D.(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-{[3-(4-氟苯基)丙基]硫基}-3-甲基丁酸向化合物A(700mg，1.75mmol，1.0當(dāng)量)的二烷(20mL)/水(7mL)溶液加入一水合氫氧化鋰(367mg，8.75mmol，5.0當(dāng)量)。得到的多相混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。用飽和氯化銨溶液猝滅反應(yīng)物，傾入到水中并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的萃取物用硫酸鎂干燥并真空濃縮。使用以1∶1己烷/乙酸乙酯(含0.1％乙酸)作為流動(dòng)相的快速層析純化。分離得到512mg產(chǎn)物(1.33mmol，76％收率)。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.13-7.10(m，2H)，6.99-6.93(m，2H)，5.41(d，1H，J＝8.1Hz)，4.29(s(br)，1H)，2.68-2.55(m，4H)，1.88-1.80(m，2H)，1.43(s，9H)，1.39(s，3H)，1.36(s，3H)ppm.
E.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-{[3-(4-氟苯基)丙基]硫基}-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯向化合物B(512mg，1.33mmol，1.2當(dāng)量)的DMF溶液(15mL)順序加入N，N-二異丙基乙胺(261μL，1.5mmol，1.35當(dāng)量)和HATU(717mg，1.89mmol，1.7當(dāng)量)。得到的琥珀色溶液在室溫下攪拌20分鐘。向該攪拌溶液加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(317mg，1.11mmol，1.0當(dāng)量)和N，N-二異丙基乙胺(213μL，1.22mmol，1.1當(dāng)量)的DMF(10mL)溶液。將得到的溶液在室溫下攪拌18小時(shí)并用飽和碳酸氫鈉溶液(約5mL)猝滅。然后將渾濁溶液傾入到水(約20mL)并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用水(2×)和鹽水(1×)洗滌；經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。將得到的琥珀色油使用以1∶1己烷/乙酸乙酯作為流動(dòng)相的快速層析純化。分離得到420mg(0.872mmol，79％收率)白色泡沫形式的化合物C。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.14-7.11(m，2H)，6.97-6.92(m，2H)，5.47(d，1H，J＝50.9Hz)，5.36(d，1H，J＝8.4Hz)，5.00(d，1H，J ＝9.3Hz)，4.42-4.32(m，2H)，4.01(m，1H)，2.74-2.57(m，5H)，2.36(m，1H)，1.89-1.76(m，2H)，1.41-1.37(m，15H)ppm.
F.(2S，4S)-1-((2R)-2-氨基-3-{[3-(4-氟苯基)丙基]硫基}-3-甲基丁?；?-4-氟代吡咯烷-2-甲腈向三氟乙酸(3mL)的二氯甲烷(30mL)溶液加入化合物C(420mg，0.872mmol，1.0當(dāng)量)。將得到的淡黃色溶液在室溫下攪拌2小時(shí)，然后真空除去溶劑。通過(guò)加入飽和碳酸氫鈉溶液將得到的TFA鹽轉(zhuǎn)變成游離堿，用乙酸乙酯萃取水層(2X)。將合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。得到的灰白色泡沫使用以5％MeOH(含0.1％NH3)/二氯甲烷作為流動(dòng)相的快速層析純化，得到275mg(0.721mmol，83％收率)白色泡沫。為了形成鹽酸鹽，將游離堿溶于乙醚中，加入丙酮直到所有固體物溶解。滴加2.0M HCl/乙醚直到不再形成沉淀。然后將沉淀物過(guò)濾并用乙醚洗滌幾次。將得到的鹽在高真空下干燥。
1H NMR(D2O)400MHzδ7.15-7.10(m，2H)，6.96-6.90(m，2H)，5.48(d，1H，J＝50.9Hz)，4.99(d，1H，J＝9.6Hz)，4.07-3.98(m，2H)，3.74(m，1H)，2.64-2.32(m，6H)，1.80-1.68(m，2H)，1.30(d，6H，J＝6.6Hz)ppm.
實(shí)施例9 (2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(4-甲氧基芐基)磺?；鵠-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-[(4-甲氧基芐基)磺?；鵠-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯向(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-[(4-甲氧基芐基)硫基]-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯(如上所述)(473mg，1.017mmol，1.0當(dāng)量)的氯仿(25mL)溶液加入3-氯過(guò)氧苯甲酸(176g，10.18mmol，10當(dāng)量)。得到的混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。然后用1.0NNaOH(約5mL)猝滅反應(yīng)物，分離各層。有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。得到的白色蓬松固體物直接用于下一步驟而無(wú)進(jìn)一步純化。分離得到400mg(0.805mmol，80％收率)。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.35(d，2H，J＝8.8Hz)，6.92(d，2H，J＝8.8Hz)，5.48(d，1H，J＝51.0Hz)，5.04(d，1H，J＝9.1Hz)，4.99(d，1H，J＝9.4Hz)，4.34-3.98(m，4H)，3.81(s，3H)，2.73(t，1H，J＝15.0Hz)，2.39(m，1H)，1.58(s，3H)，1.53(s，3H)，1.42(s，9H)ppm.
B.(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(4-甲氧基芐基)磺酰基]-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈向三氟乙酸(4mL)的二氯甲烷(40mL)溶液加入化合物A(400mg，0.805mmol，1.0當(dāng)量)。將得到的淡黃色溶液在室溫下攪拌2小時(shí)，然后真空除去溶劑。通過(guò)加入飽和碳酸氫鈉溶液將得到的TFA鹽轉(zhuǎn)化成游離堿，用乙酸乙酯萃取水層(兩次)。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。得到的灰白色泡沫使用以5％甲醇(含0.1％氨)的二氯甲烷溶液作為流動(dòng)相的快速層析純化，得到296mg(0.745mmol，93％收率)白色泡沫。為了形成鹽酸鹽，將游離堿溶于乙醚中并加入丙酮直到所有固體物溶解。滴加2.0M HCl的乙醚溶液直到不再形成沉淀。然后將沉淀物過(guò)濾并用乙醚洗滌幾次。得到的鹽在高真空下干燥。
1H NMR(D2O)400MHzδ7.28(d，2H，J＝8.8Hz)，6.92(d，2H，J＝8.8Hz)，5.47(d，1H，J＝50.6Hz)，5.00(d，1H，J＝10.0Hz)，4.66(s，1H)，4.51(s，2H)，4.05(m，1H)，3.61(m，1H)，3.69(s，3H)，2.64(t，1H，J＝15.7Hz)，2.42(m，1H)，1.62(s，3H)，1.48(s，3H)ppm.
實(shí)施例10 (2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(4-甲氧基芐基)亞磺酰基]-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-[(4-甲氧基芐基)亞磺?；鵠-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯向(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-[(4-甲氧基芐基)硫基]-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯(如上所述)(660mg，1.42mmol，1.0當(dāng)量)的甲醇(10mL)溶液加入NaIO4(334mg，1.56mmol，1.1當(dāng)量)的水(10mL)溶液。將所得混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。得到的多相混合物在二氯甲烷和水間分配。有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。得到的白色蓬松固體物直接用于下一步驟而無(wú)進(jìn)一步純化。分離得到600mg非對(duì)映體混合物(1.25mmol，87％收率)。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.27-7.25(m，2H)，6.90-6.88(m，2H)，5.87(s(br)，1H)，5.40(m，1H)，5.03-4.95(m，2H)，4.19-3.66(m，7H)，2.65(m，1H)，2.36(m，1H)，1.49-1.38(m，15H)ppm.
B.(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(4-甲氧基芐基)亞磺酰基]-3-甲基丁酰基}-4-氟代吡咯烷-2-甲腈向三氟乙酸(5mL)的二氯甲烷(50mL)溶液加入化合物A(600mg，1.25mmol，1.0當(dāng)量)。將得到的淡黃色溶液在室溫下攪拌2小時(shí)，然后真空除去溶劑。通過(guò)加入飽和碳酸氫鈉溶液將得到的TFA鹽轉(zhuǎn)化成游離堿，用乙酸乙酯萃取水層(兩次)。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。得到的灰白色泡沫使用以5％甲醇(含0.1％氨)的二氯甲烷溶液作為流動(dòng)相的快速層析純化，得到368mg(0.965mmol，77％收率)白色泡沫。為了形成鹽酸鹽，將游離堿吸收在乙醚中并加入丙酮直到所有固體物溶解。滴加2.0M HCl的乙醚溶液直到不再形成沉淀。然后將沉淀物過(guò)濾并用乙醚洗滌幾次。得到的鹽在高真空下干燥。
1H NMR(D2O)400MHzδ7.25-7.21(m，2H)，6.93-6.90m，2H)，5.42(m，1H)，5.02(m，1H)，4.48(m，1H)，4.24-3.70(m，7H)，2.68-2.31(m，2H)，1.52-1.32(m，6H)ppm.
實(shí)施例11
(2S，4S)-1-((2R)-2-氨基-3-甲基-3-{[4-(三氟甲基)芐基]硫基}丁酰基)-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-巰基-3-甲基丁酸向L-青霉胺(5.0g，33.51mmol，1.0當(dāng)量)的THF(300mL)溶液加入氫氧化鉀(1.88g，33.51mmol，1.0當(dāng)量)。將混合物冷卻到0℃并加入二碳酸二叔丁酯(7.31g，33.51mmol，1.0當(dāng)量)。將得到的混合物攪拌升溫到室溫過(guò)夜。然后將反應(yīng)物傾入到水(約300mL)中并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。得到的白色固體沒(méi)有進(jìn)一步純化直接用于下一步。分離得到7.68g(30.80mmol，92％收率)。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ5.51(d，1H，J＝9.6Hz)，4.33(d，1H，J＝9.6Hz)，1.55(s，3H)，1.45(s，9H)，1.41(s，3H)ppm.
B.(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲基-3-{[4-(三氟甲基)芐基]硫基}丁酸向化合物A(1.0g，4.011mmol，1.0當(dāng)量)的乙腈(40mL)加入叔丁醇鉀(810mg，8.42mmol，2.1當(dāng)量)。得到的淡黃色溶液攪拌10分鐘，然后加入4-(三氟甲基)芐基溴(1.05g，4.41mmol，1.1當(dāng)量)。將得到的混合物加熱到50℃并攪拌18小時(shí)。然后將反應(yīng)物傾入到水(約50mL)中并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的萃取物經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。得到的固體沒(méi)有進(jìn)一步純化直接用于下一步。分離得到1.45g產(chǎn)物(3.55mmol，89％收率)。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.55(d，2H，J＝8.1Hz)，7.44(d，2H，J＝8.1Hz)，5.39(s(br)，1H)，4.44(s(br)，1H)，3.85(s，2H)，1.45-1.43(m，15H)ppm.
C.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基-2-{[4-(三氟甲基)芐基]硫基}丙基氨基甲酸叔丁酯向化合物B(1.45mg，3.55mmol，1.2當(dāng)量)的DMF溶液(30mL)順序加入N，N-二異丙基乙胺(698μL，4.01mmol，1.35當(dāng)量)和HATU(1.92mg，5.05mmol，1.7當(dāng)量)。得到的琥珀色溶液在室溫下攪拌20分鐘。向該攪拌著的溶液加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(849mg，2.97mmol，1.0當(dāng)量)和N，N-二異丙基乙胺(569μL，3.27mmol，1.1當(dāng)量)的DMF(25mL)溶液。將得到的溶液在室溫下攪拌18小時(shí)并用飽和碳酸氫鈉溶液(約5mL)猝滅。然后將渾濁溶液傾入到水(約20mL)并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用水(2×)和鹽水(1×)洗滌；經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。將得到的琥珀色油使用的1∶1己烷/乙酸乙酯作為流動(dòng)相的快速層析純化。分離得到682mg(1.35mmol，45％收率)白色泡沫形式的化合物C。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.55(d，2H，J＝8.1Hz)，7.50(d，2H，J＝8.8Hz)，5.49(d，1H，J＝50.8Hz)，5.42(d，1H，J＝9.9Hz)，5.03(d，1H，J＝10.0Hz)，4.40(d，1H，J＝9.5Hz)，4.32(m，1H)，4.04(m，1H)，3.88(s，2H)，2.74(t，1H，J＝15.1Hz)，2.38(m，1H)，1.47(s，3H)，1.42(s，9H)，1.41(s，3H)ppm.
D.(2S，4S)-1-((2R)-2-氨基-3-甲基-3-{[4-(三氟甲基)芐基]硫基}丁?；?-4-氟代吡咯烷-2-甲腈向三氟乙酸(7mL)的二氯甲烷(70mL)溶液加入化合物A(682mg，1.35mmol，1.0當(dāng)量)。將得到的淡黃色溶液在室溫下攪拌2小時(shí)，然后真空除去溶劑。通過(guò)加入飽和碳酸氫鈉溶液將得到的TFA鹽轉(zhuǎn)變成游離堿，用乙酸乙酯萃取水層(2X)。將合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。得到的灰白色泡沫使用以5％MeOH(含0.1％NH3)/二氯甲烷作為流動(dòng)相的快速層析純化，得到390mg(0.967mmol，72％收率)白色泡沫。為了形成鹽酸鹽，將游離堿溶于乙醚中，加入丙酮直到所有固體物溶解。滴加2.0M HCl/乙醚直到不再形成沉淀。然后將沉淀物過(guò)濾并用乙醚洗滌幾次。將得到的鹽在高真空下干燥。
1H NMR(D2O)400MHzδ7.57(d，2H，J＝8.1Hz)，7.49(d，2H，J＝8.5Hz)，5.46(d，1H，J＝51.4Hz)，4.98(d，1H，J＝9.5Hz)，4.05-3.53(m，5H)，2.62-2.28(m，2H)，1.40(s，3H)，1.31(s，3H)ppm.
實(shí)施例12 (2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-2-(1-乙烯基環(huán)戊基)乙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(1S)-2-[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]-2-氧代-1-(1-乙烯基環(huán)戊基)乙基氨基甲酸叔丁酯將外消旋[(叔丁氧基羰基)氨基](1-乙烯基環(huán)戊基)乙酸(如Robl，Jeffrey A；Sulsky，Richard B.；Augeri，David J.；Magnin，David R.；Hamann，Lawrence G.；Betebemer；David A.二肽酶IV的稠合環(huán)丙基吡咯烷基抑制劑的制備，WO 200168603A2)(1.07g，3.97mmol)的DMF溶液(25mL)加入Hünig氏堿(0.835mL，4.37mmol)和HATU(1.66g，4.37mmol)。將得到的溶液在室溫下攪拌15分鐘，然后用2-3分鐘滴加(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(1.14g，3.97mmol)和Hünig氏堿(0.835mL，4.37mmol)在10mL DMF中的溶液。獲得的溶液在室溫下攪拌18分鐘并然后用水猝滅。將溶液傾入到水中并用乙酸乙酯萃取有機(jī)物(兩次)。順序用飽和氯化鈉溶液和1.0N HCl洗滌，將有機(jī)物經(jīng)硫酸鎂干燥，真空除去溶劑得到深色油，用BiotageFlashElute System，以己烷/乙酸乙酯3∶1到1∶1的洗脫梯度在硅膠上純化，得到約1∶1比例的兩種α-氨基位(C1)的非對(duì)映體產(chǎn)物(582mg非對(duì)映體1、628mg非對(duì)映體2，總收率83％)?；诮K產(chǎn)物的振動(dòng)圓二色性分析，測(cè)得較慢洗脫的非對(duì)映體具有(S)絕對(duì)立體化學(xué)構(gòu)像。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ5.92(dd 1H，J＝10.8，17.3Hz)，5.38(m，1H)，5.22(dd，2H，J＝10.8，27.4Hz)，5.02(d，1H，J＝10.3Hz)，4.23(d，1H，J＝9.2Hz)，4.06(m，2H)，2.63(t，1H，J＝15.5Hz)，2.40-2.23(m，2H)，1.85(m，1H)，1.75-1.52(m，6H)，1.43(m，1H)，1.37(s，9H)ppm.
B.(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-2-(1-乙烯基環(huán)戊基)乙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向裝有(1S)-2-[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]-2-氧代-1-(1-乙烯基環(huán)戊基)乙基氨基甲酸叔丁酯(70mg，0.19mmol)的1mL 1，4-二烷溶液的燒瓶中順序加入2mL 4N HCl/1，4-二烷和1mL 2N HCl/乙醚。得到的溶液在室溫下攪拌3小時(shí)，然后通過(guò)TLC判斷原料消耗情況。將3mL乙醚加入到反應(yīng)混合物中，接著加入3mL己烷。將得到的淡褐色沉淀物過(guò)濾，在乙醚中研磨，真空過(guò)濾收集并真空干燥，得奶油色固體形式的化合物B(35mg，70％收率)。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ5.83(dd，1H，J＝10.7，17.6Hz)，5.36(dd，2H，J＝10.7，27.7Hz)，5.07(d，1H，J＝9.7Hz)，4.16(m，2H)，3.79(m，1H)，2.63(t，1H，J＝16.2Hz)，2.45(m，1H)，1.86-1.58(m，7H)，1.36(M，3H)ppm.
實(shí)施例13 (2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-5-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基戊酰基]-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.4-(4-甲氧基苯基)-2，2-二甲基丁醛向冷卻到-78℃的4-(4-甲氧基苯基)-2，2-二甲基丁腈(3.65g，18.0mmol；參見(jiàn)Knochel，P等人.Org.Lett.2000，2，3285有關(guān)這種化合物的制備)的甲苯溶液(80mL)加入18.0mL 1.5M DIBAL(27.0mmol)的甲苯溶液。在-78℃3小時(shí)后，反應(yīng)物用含乙酸鈉(4.6g)和乙酸(4.6mL)的水/THF溶液(75mL/15mL)在-78℃下猝滅。向該溶液順序加入硅藻土和乙醚。將溶液升溫到室溫，然后通過(guò)硅藻土床過(guò)濾。用乙醚徹底洗滌硅藻土，然后將濾液用水洗滌。經(jīng)硫酸鎂干燥后，真空除去溶劑并將殘留物用快速層析(己烷/乙酸乙酯(9∶1))純化，得到3.55g(17.2mmol，96％收率)化合物A。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ9.47(s，1H)，7.07(d，2H，J＝8.6Hz)，6.81(d，2H，J＝8.4Hz)，3.78(s，3H)，2.48-2.44(m，2H)，1.77-1.73(m，2H)，1.11(s，6H)ppm.
B.1，1，1-三氯-5-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基戊-2-醇用5分鐘向冷卻到-78℃的化合物A(511mg，2.48mmol)的THF溶液(10mL)和無(wú)水氯仿(311mg，2.60mmol)滴加2.6mL 1.0MLiHMDS(2.60mmol)的THF溶液。得到的溶液在-78℃攪拌30分鐘后將反應(yīng)用水猝滅。升溫后有機(jī)物用乙酸乙酯萃取并經(jīng)硫酸鎂干燥，真空除去溶劑。殘留黃色油經(jīng)柱層析(10％乙酸乙酯/己烷)純化，得到588mg(1.81mmol，73％收率)白色固體狀化合物B。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.10(d，2H，J＝8.7Hz)，6.82(d，2H，J＝8.4Hz)，4.05(d，1H，J＝5.7Hz)，3.78(s，3H)，2.95(d，1H，J＝5.7Hz)，2.64-2.59(m，2H)，1.95(m，1H)，1.73(m，1H)，1.32(s，3H)，1.25(s，3H)ppm.
C.2-疊氮基-5-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基戊酸在室溫下向化合物B(581mg，1.79mmol)的DME溶液(4mL)加入7mL含疊氮化鈉(232mg，3.58mmol)和氫氧化鈉(286mg，7.15mmol)的水溶液。攪拌過(guò)夜后，將溶液傾入到2.0M NaOH中并將有機(jī)物用乙醚萃取。水層用飽和硫酸氫鈉酸化并用乙酸乙酯萃取有機(jī)物兩次。經(jīng)硫酸鎂干燥后，真空除去溶劑后，將殘留油用柱層析(5％MeOH/二氯甲烷)純化得到186mg(0.67mmol，37％收率)化合物C。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.09(d，2H，J＝8.4Hz)，6.82(d，2H，J＝8.6Hz)，3.91(s，1H)，3.78(s，3H)，2.58-2.52(m，2H)，1.71-1.61(m，2H)，1.10(s，6H)ppm.
D.(2S，4S)-1-[2-疊氮基-5-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基戊?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈室溫下向化合物C(696mg，2.52mmol)和N，N-二異丙基乙胺(358mg，2.77mmol)的DMF溶液(15mL)加入HATU(1.05g，2.77mmol)。20分鐘后，加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(755mg，2.64mmol)和N，N-二異丙基乙胺(341mg，2.64mmol)的DMF溶液(8mL)。將溶液攪拌過(guò)夜，然后用乙酸乙酯稀釋并用水(三次)、飽和碳酸氫鈉和2.0M HCl順序洗滌。經(jīng)硫酸鎂干燥后，真空除去溶劑。殘留的黃色油經(jīng)柱層析(最初用己烷/乙酸乙酯/二氯甲烷(6∶3∶1)，然后用己烷/乙酸乙酯/二氯甲烷(3∶1∶1))純化而得到605mg(1.62mmol，64％收率)白色固體形式的化合物D。其經(jīng)1H NMR分析為3∶2非對(duì)映體混合物。采用這種非對(duì)映體混合物。
E.(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-5-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基戊?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向100％Pd/C(200mg)的乙醇溶液(8mL)加入化合物D(593mg，1.59mmol)的1∶1 THF/EtOH溶液(10mL)。將該溶液脫氣四次，然后用氫氣氣囊供氫氣保護(hù)。6.5小時(shí)后，將該溶液通過(guò)硅藻土床過(guò)濾并將硅藻土用二氯甲烷徹底洗滌。真空除去溶劑，殘留固體經(jīng)柱層析(5％氨甲醇溶液/二氯甲烷)純化，得到251mg(0.72mmol)游離堿形式的化合物E。然后將該物質(zhì)溶解于2mL二氯甲烷中，加入3.0mL 4.0M HCl的二烷溶液。然后立即將溶劑真空除去，殘留油在乙醚中研磨。殘留固體經(jīng)真空過(guò)濾收集，得到231mg(0.60mmol)化合物E的鹽酸鹽。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ7.13(d，2H，J＝8.6Hz)，6.81(d，2H，J＝8.7Hz)，5.31(d(br)，1H，J＝51.1Hz)，5.09(d，1H，J＝9.5Hz)，4.10(m，1H)，4.01(s，1H)，3.86(m，1H)，3.74(s，3H)，2.65-2.42(m，4H)，1.76-1.72(m，2H)，1.20(s，6H)ppm.
實(shí)施例14 (2S，4S)-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-((3-苯丙基)磺?；鵠丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈A.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基-2-[(3-苯丙基)磺?；鵠丙基氨基甲酸叔丁酯向(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基-2-[(3-苯丙基)硫基]丙基氨基甲酸叔丁酯(如上所述)(830mg，1.79mmol，1.0當(dāng)量)的二氯甲烷(50mL)溶液加入3-氯過(guò)氧苯甲酸(3.09g，17.9mmol，10當(dāng)量)。得到的混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。然后用1.0NNaOH(約10mL)猝滅反應(yīng)物并分層。有機(jī)層用硫酸鎂干燥并真空濃縮。得到的白色蓬松固體沒(méi)有進(jìn)一步純化直接用于下一步。分離得到800mg化合物A(1.62mmol，91％收率)。
B.(2S，45)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(3-苯丙基)磺?；鵠丁酰基}-4-氟代吡咯烷-2-甲腈向三氟乙酸(5mL)的二氯甲烷(50mL)溶液加入化合物A(800mg，1.62mmol，1.0當(dāng)量)。將得到的淡黃色溶液在室溫下攪拌2小時(shí)，然后真空除去溶劑。通過(guò)加入飽和碳酸氫鈉溶液將得到的TFA鹽轉(zhuǎn)化成游離堿并用乙酸乙酯萃取水層(兩次)。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉干燥，真空濃縮。得到的灰白色泡沫使用以5％甲醇(含0.1％氨)的二氯甲烷溶液作為流動(dòng)相的快速層析純化，得到532mg(1.35mmol，83％收率)化合物B的游離堿。為了形成鹽酸鹽，將游離堿溶于乙醚中，加入丙酮直到所有固體物溶解。滴加2.0M HCl的乙醚溶液直到不再形成沉淀。然后將沉淀物過(guò)濾并用乙醚洗滌幾次。得到的鹽在高真空下干燥。
1H NMR(D2O)400MHzδ7.26-7.13(m，5H)，5.48(d，1H，J＝50.7Hz)，5.00(d，1H，J＝9.7Hz)，4.63(s，1H)，4.02(m，1H)，3.81(m，1H)，3.20-3.15(m，2H)，2.71(t，2H，J＝7.5Hz)，2.65-2.33(m，2H)，2.09-2.01(m，2H)，1.50(s，3H)，1.35(s，3H)ppm.
實(shí)施例15 (2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(4-甲基芐基)磺?；鵠丁酰基}-4-氟代吡咯烷-2-甲腈A.(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲基-3-[(4-甲基芐基)硫基]丁酸向(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-巰基-3-甲基丁酸(如上所述)(1.0g，4.01mmol，1.0當(dāng)量)的1.0N NaOH(50mL)溶液加入4-甲基芐基氯(584μL，4.41mmol，1.1當(dāng)量)。將得到的混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物傾入到分液漏斗中并用乙醚洗滌(1×)以除去未反應(yīng)氯化物。向水層加入濃鹽酸直到pH達(dá)到2-3。然后將水層用乙醚萃取兩次。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。得到的白色蓬松固體沒(méi)有進(jìn)一步純化直接用于下一步。分離得到1.29g化合物A(3.65mmol，91％收率)。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.21(d，2H，J＝7.9Hz)，7.11(d，2H，J＝8.3Hz)，5.46(d(br)，1H，J＝8.5Hz)，4.40(s(br)，1H)，3.83(q，2H，J＝11.7Hz)，2.31(s，3H)，1.48-1.42(m，15H)ppm.
B.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基-2-[(4-甲基芐基)硫基]丙基氨基甲酸叔丁酯向化合物A(1.29mg，3.65mmol，1.2當(dāng)量)的DMF溶液(25mL)順序加入N，N-二異丙基乙胺(715μL，4.1mmol，1.35當(dāng)量)和HATU(1.96mg，5.17mmol，1.7當(dāng)量)。得到的琥珀色溶液在室溫下攪拌20分鐘。向該攪拌溶液加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(869mg，3.04mmol，1.0當(dāng)量)和N，N-二異丙基乙胺(582μL，3.34mmol，1.1當(dāng)量)的DMF(15mL)溶液。將得到的溶液在室溫下攪拌18小時(shí)并用飽和碳酸氫鈉溶液(約5mL)猝滅。然后將渾濁溶液傾入到水(約20mL)并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用水(2×)和鹽水(1×)洗滌；經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。將得到的琥珀色油使用以1∶1己烷/乙酸乙酯作為流動(dòng)相的快速層析純化。分離得到1.14g(2.54mmol，84％收率)白色泡沫形式的化合物B。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.26(d，2H，J＝8.4Hz)，7.10(d，2H，J＝7.8Hz)，5.48(d，1H，J＝51.9Hz)，5.44(d，1H，J＝9.5Hz)，5.04(d，1H，J＝9.2Hz)，4.37(d，1H，J＝9.0Hz)，4.25(m，1H)，4.04(m，1H)，3.81(s，2H)，2.72(t，1H，J＝15.2Hz)，2.45-2.28(m，4H)，1.47-1.41(m，15H)ppm.
C.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基-2-[(4-甲基芐基)磺?；鵠丙基氨基甲酸叔丁酯向化合物B(1.14g，2.54mmol，1.0當(dāng)量)的三氯甲烷(75mL)溶液加入3-氯過(guò)氧苯甲酸(3.09g，17.9mmol，10當(dāng)量)。得到的混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。然后用1.0N NaOH(約15mL)猝滅反應(yīng)物并分層。有機(jī)層用硫酸鎂干燥并真空濃縮。得到的白色蓬松固體沒(méi)有進(jìn)一步純化直接用于下一步。分離得到1.03g化合物C(2.14mmol，84％收率)。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.32(d，2H，J＝8.0Hz)，7.19(d，2H，J＝7.9Hz)，5.51(m，1H)，5.48(d，1H，J＝50.7Hz)，5.04(d，1H，J＝9.2Hz)，4.99(d，1H，J＝9.7Hz)，4.32-3.97(m，4H)，2.72(t，1H，J＝15.7Hz)，2.46-2.29(m，4H)，1.58(s，3H)，1.52(s，3H)，1.41(s，9H)ppm.
D.(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(4-甲基芐基)磺?；鵠丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈向三氟乙酸(10mL)的二氯甲烷(100mL)溶液加入化合物C(1.03g，2.14mmol，1.0當(dāng)量)。將得到的淡黃色溶液在室溫下攪拌2小時(shí)，然后真空除去溶劑。通過(guò)加入飽和碳酸氫鈉溶液將得到的TFA鹽轉(zhuǎn)化成游離堿并用乙酸乙酯萃取水層(兩次)。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉干燥，真空濃縮。得到的灰白色泡沫使用以5％甲醇(含0.1％氨)的二氯甲烷溶液作為流動(dòng)相的快速層析純化，得到577mg(1.51mmol，71％收率)白色泡沫狀化合物D。為了形成鹽酸鹽，將游離堿溶于乙醚中并加入丙酮直到所有固體物溶解。滴加2.0M HCl的乙醚溶液直到不再形成沉淀。然后將沉淀物過(guò)濾并用乙醚洗滌幾次。得到的鹽在高真空下干燥。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ7.38(d，2H，J＝8.1Hz)，7.24(d，2H，J＝7.7Hz)，5.56(d，1H，J＝50.7Hz)，5.12(d，1H，J＝9.7Hz)，4.74(s，1H)，4.64(ABq，2H，J＝19.7，13.3Hz)，4.12(m，1H)，3.94(m，1H)，2.70-2.43(m，2H)，2.36(s，3H)，1.76(s，3H)，1.58(s，3H)ppm.
實(shí)施例16
(2S，4S)-1-((2R)-2-氨基-3-{[4-(芐氧基)芐基]磺?；鶀-3-甲基丁?；?-4-氟代吡咯烷-2-甲腈A.(2R)-3-{[4-(芐氧基)芐基]硫基}-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲基丁酸向(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-巰基-3-甲基丁酸(如上所述)(500mg，2.01mmol，1.0當(dāng)量)的1.0N NaOH(25mL)溶液加入4-芐氧基芐基氯(515mg，2.21mmol，1.1當(dāng)量)。將得到的混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物傾入到分液漏斗中并用乙醚洗滌(1×)以除去任何未反應(yīng)氯化物。向水層加入濃鹽酸直到pH達(dá)到2-3。然后將水層用乙醚萃取兩次。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。得到的白色蓬松固體沒(méi)有進(jìn)一步純化直接用于下一步。分離得到700mg化合物A(1.57mmol，78％收率)。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.42-7.31(m，5H)，7.24(d，2H，J＝8.6Hz)，6.90(d，2H，J＝8.6Hz)，5.46(s(br)，1H)，5.03(s，2H)，4.39(s(br)，1H)，3.81(q，2H，J＝11.5Hz)，1.47-1.41(m，15H)ppm.
B.(1R)-2-{[4-(芐氧基)芐基]硫基}-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯向化合物A(700mg，1.57mmol，1.2當(dāng)量)的DMF溶液(20mL)順序加入N，N-二異丙基乙胺(308μL，1.77mmol，1.35當(dāng)量)和HATU(847mg，2.23mmol，1.7當(dāng)量)。得到的琥珀色溶液在室溫下攪拌20分鐘。向該攪拌溶液加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(375mg，1.31mmol，1.0當(dāng)量)和N，N-二異丙基乙胺(251μL，1.44mmol，1.1當(dāng)量)的DMF(10mL)溶液。將得到的溶液在室溫下攪拌18小時(shí)并用飽和碳酸氫鈉溶液(約5mL)猝滅。然后將渾濁溶液傾入到水(約20mL)中并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用水(2×)和鹽水(1×)洗滌；經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。將得到的琥珀色油使用以1∶1己烷/乙酸乙酯作為流動(dòng)相的快速層析純化。分離得到340mg(0.628mmol，48％收率)白色泡沫形式的化合物B。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.42-7.27(m，7H)，6.91(d，2H，J＝8.8Hz)，5.46(d，1H，J＝50.9Hz)，5.43(d，1H，J＝9.3Hz)，5.05-5.01(m，3H)，4.37(d，1H，J＝9.0Hz)，4.26(m，1H)，4.03(m，1H)，3.80(s，2H)，2.71(t，1H，J＝15.2Hz)，2.36(m，1H)，1.47-1.41(m，15H)ppm.
C.(1R)-2-{[4-(芐氧基)芐基]磺酰基}-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯向化合物B(340mg，0.628mmol，1.0當(dāng)量)的三氯甲烷(30mL)溶液加入3-氯過(guò)氧苯甲酸(1.08g，6.28mmol，10當(dāng)量)。得到的混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。然后用1.0N NaOH(約5mL)猝滅反應(yīng)并分層。有機(jī)層用硫酸鎂干燥并真空濃縮。得到的白色蓬松固體沒(méi)有進(jìn)一步純化直接用于下一步。分離得到280mg化合物C(0.488mmol，78％收率)。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.43-7.32(m，7H)，7.00(d，2H，J＝8.8Hz)，5.51(s(br)，1H)，5.48(d，1H，J＝50.7Hz)，5.06-4.97(m，4H)，4.34-3.99(m，4H)，2.73(t，1H，J＝15.2Hz)，2.38(m，1H)，1.59(s，3H)，1.53(s，3H)，1.42(s，9H)ppm.
D.(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-{[4-(芐氧基)芐基]磺?；鶀-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈向三氟乙酸(3mL)的二氯甲烷(27mL)溶液加入化合物C(280mg，0.488mmol，1.0當(dāng)量)。將得到的淡黃色溶液在室溫下攪拌2小時(shí)，然后真空除去溶劑。通過(guò)加入飽和碳酸氫鈉溶液將得到的TFA鹽轉(zhuǎn)化成游離堿，并用乙酸乙酯萃取水層(兩次)。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。得到的灰白色泡沫使用以5％甲醇(含0.1％氨)的二氯甲烷溶液作為流動(dòng)相的快速層析純化，得到182mg(0.385mmol，79％收率)白色泡沫狀化合物D的游離堿。為了形成鹽酸鹽，將游離堿溶于在乙醚中并加入丙酮直到所有固體物溶解。滴加2.0M HCl的乙醚溶液直到不再形成沉淀。然后將沉淀物過(guò)濾并用乙醚洗滌幾次。
得到的鹽在高真空下干燥。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ7.44-7.29(m，7H)，7.05(d，2H，J＝8.8Hz)，5.56(d，1H，J＝50.0Hz)，5.11-5.09(m，3H)，4.72(s，1H)，4.61(ABq，2H，J＝18.1，13.5Hz)，4.13(m，1H)，3.91(m，1H)，2.70-2.42(m，2H)，1.75(s，3H)，1.58(s，3H)ppm.
實(shí)施例17 (2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(4-氰基芐基)磺?；鵠-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈A.(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[(4-氰基芐基)硫基]-3-甲基丁酸向(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-巰基-3-甲基丁酸(如上所述)(500mg，2.01mmol，1.0當(dāng)量)的1.0N NaOH(25mL)溶液加入4-氰基芐基氯(433mg，2.21mmol，1.1當(dāng)量)。將得到的混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物傾入到分液漏斗中，用乙醚洗滌(1×)以除去未反應(yīng)氯化物。向水層加入濃鹽酸直到pH達(dá)到2-3。然后將水層用乙醚萃取兩次。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。得到的白色蓬松固體沒(méi)有進(jìn)一步純化直接用于下一步。分離得到792mg化合物A(1.72mmol，86％收率)。
B.(1R)-2-[(4-氰基芐基)硫基]-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯向化合物A(792mg，1.72mmol，1.2當(dāng)量)的DMF溶液(25mL)順序加入N，N-二異丙基乙胺(337μL，1.93mmol，1.35當(dāng)量)和HATU(924mg，2.43mmol，1.7當(dāng)量)。得到的琥珀色溶液在室溫下攪拌20分鐘。向該攪拌溶液加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(409mg，1.43mmol，1.0當(dāng)量)和N，N-二異丙基乙胺(274μL，1.57mmol，1.1當(dāng)量)的DMF(10mL)溶液。將得到的溶液在室溫下攪拌18小時(shí)，用飽和碳酸氫鈉溶液(約5mL)猝滅。然后將渾濁溶液傾入到水(約20mL)并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用水(2×)和鹽水(1×)洗滌；經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。將得到的琥珀色油使用以1∶1己烷/乙酸乙酯作為流動(dòng)相的快速層析純化。分離得到572mg(1.24mmol，87％收率)白色泡沫形式的化合物B。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.59(d，2H，J＝8.4Hz)，7.50(d，2H，J＝8.4Hz)，5.50(d，1H，J＝50.5Hz)，5.42(d，1H，J＝9.7Hz)，5.03(d，1H，J＝9.5Hz)，4.41-4.30(m，2H)，4.04(m，1H)，3.88(s，2H)，2.75(t，1H，J＝15.7Hz)，2.39(m，1H)，1.46-1.41(m，15H)ppm.
C.(1R)-2-[(4-氰基芐基)磺?；鵠-1-([(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯向化合物B(572mg，1.24mmol，1.0當(dāng)量)的三氯甲烷(50mL)溶液加入3-氯過(guò)氧苯甲酸(2.14g，12.4mmol，10當(dāng)量)。得到的混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。然后用1.0N NaOH(約5mL)猝滅反應(yīng)物并分層。有機(jī)層用硫酸鎂干燥并真空濃縮。得到的白色蓬松固體沒(méi)有進(jìn)一步純化直接用于下一步。分離得到487mg化合物C(0.989mmol，80％收率)。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.70(d，2H，J＝8.5Hz)，7.57(d，2H，J＝8.4Hz)，5.53(s(br)，1H)，5.51(d，1H，J＝50.7Hz)，5.04(d，1H，J＝9.9Hz)，4.99(d，1H，J＝9.8Hz)，4.43-4.29(m，3H)，4.04(m，1H)，2.77(t，1H，J＝15.0Hz)，2.42(m，1H)，1.61(d，6H，J＝5.8Hz)，1.44(s，9H)ppm.
D.(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(4-氰基芐基)磺?；鵠-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈向三氟乙酸(6mL)的二氯甲烷(54mL)溶液加入化合物C(487mg，0.989mmol，1.0當(dāng)量)。將得到的淡黃色溶液在室溫下攪拌2小時(shí)，然后真空除去溶劑。通過(guò)加入飽和碳酸氫鈉溶液將得到的TFA鹽轉(zhuǎn)化成游離堿，用乙酸乙酯萃取水層(兩次)。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。得到的灰白色泡沫使用5％甲醇(含0.1％氨)的二氯甲烷溶液作為流動(dòng)相的快速層析純化，得到285mg(0.726mmol，73％收率)白色泡沫狀化合物D的游離堿。為了形成鹽酸鹽，將游離堿溶于乙醚中并加入丙酮直到所有固體物溶解。滴加2.0M HCl的乙醚溶液直到不再形成沉淀。然后將沉淀物過(guò)濾并用乙醚洗滌幾次。得到的鹽在高真空下干燥。
1H NMR(DzO)400MHzδ7.72(d，2H，J＝8.6Hz)，7.51(d，2H，J＝8.5Hz)，5.49(d，1H，J＝50.6Hz)，5.02(d，1H，J＝9.7Hz)，4.72-4.67(m，3H)，4.08(m，1H)，3.85(m，1H)，2.66-2.35(m，2H)，1.66(s，3H)，1.51(s，3H)ppm.
實(shí)施例18 (2S，4S)-1-((2R)-2-氨基-3-甲基-3-{[4-(甲基磺酰基)芐基]磺?；鶀丁?；?-4-氟代吡咯烷-2-甲腈A.(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲基-3-{[4-(甲基磺酰基)芐基]硫基}丁酸向(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-巰基-3-甲基丁酸(如上所述)(500mg，2.01mmol，1.0當(dāng)量)的1.0N NaOH(25mL)溶液加入4-甲基磺酰基芐基氯(452mg，2.21mmol，1.1當(dāng)量)。將得到的混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物傾入到分液漏斗中并用乙醚洗滌(1×)以除去任何未反應(yīng)氯化物。向水層加入濃鹽酸直到pH達(dá)到2-3。然后將水層用乙醚萃取兩次。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。得到的白色蓬松固體沒(méi)有進(jìn)一步純化直接用于下一步。分離得到768mg化合物A(1.84mmol，92％收率)。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.87(d，2H，J＝8.5Hz)，7.54(d，2H，J＝8.5Hz)，5.39(s(br)，1H)，4.44(s(br)，1H)，3.88(s，2H)，3.03(s，3H)，1.46-1.43(m，15H)ppm.
B.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基-2-{[4-(甲基磺?；?芐基]硫基}丙基氨基甲酸叔丁酯向化合物A(768mg，1.84mmol，1.2當(dāng)量)的DMF溶液(25mL)順序加入N，N-二異丙基乙胺(361μL，2.07mmol，1.35當(dāng)量)和HATU(989mg，2.60mmol，1.7當(dāng)量)。得到的琥珀色溶液在室溫下攪拌20分鐘。向該攪拌溶液加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(438mg，1.53mmol，1.0當(dāng)量)和N，N-二異丙基乙胺(293μL，168mmol，1.1當(dāng)量)的DMF(10mL)溶液。將得到的溶液在室溫下攪拌18小時(shí)并用飽和碳酸氫鈉溶液(約5mL)猝滅。然后將渾濁溶液傾入到水(約20mL)并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。合并的有機(jī)萃取物用水(2×)和鹽水(1×)洗滌；經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。將得到的琥珀色油使用以1∶1己烷/乙酸乙酯作為流動(dòng)相的快速層析純化。分離得到683mg(1.33mmol，87％收率)白色泡沫形式的化合物B。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.86(d，2H，J＝8.5Hz)，7.58(d，2H，J＝8.3Hz)，5.50(d，1H，J＝50.9Hz)，5.43(d，1H，J＝9.9Hz)，4.43-4.30(m，2H)，4.03(m，1H)，3.90(s，2H)，3.02(s，3H)，2.74(t，1H，J＝15.6Hz)，2.39(m，1H)，1.47-1.41(m，15H)ppm.
C.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基-2-{[4-(甲基磺?；?芐基]磺?；鶀丙基氨基甲酸叔丁酯向化合物B(683mg，1.33mmol，1.0當(dāng)量)的三氯甲烷(50mL)溶液加入3-氯過(guò)氧苯甲酸(2.30g，13.3mmol，10當(dāng)量)。得到的混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。然后用1.0N NaOH(約5mL)猝滅反應(yīng)并分離各層。有機(jī)層用硫酸鎂干燥并真空濃縮。得到的白色蓬松固體沒(méi)有進(jìn)一步純化直接用于下一步。分離得到581mg化合物C(1.06mmol，80％收率)。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.98(d，2H，J＝8.6Hz)，7.66(d，2H，J＝8.5Hz)，5.53(s，1H)，5.51(d，1H，J＝50.5Hz)，5.08(d，1H，J＝10.0Hz)，4.99(d，1H，J＝9.5Hz)，4.44-4.32(m，2H)，4.03(m，1H)，3.06(s，3H)，2.77(t，1H，J＝16.0Hz)，2.41(m，1H)，1.63(s，3H)，1.60(s，3H)，1.43(s，9H)ppm.
D.(2S，4S)-1-((2R)-2-氨基-3-甲基-3-{[4-(甲基磺?；?芐基]磺酰基}丁?；?-4-氟代吡咯烷-2-甲腈向三氟乙酸(7mL)的二氯甲烷(63mL)溶液加入化合物C(581mg，1.06mmol，1.0當(dāng)量)。將得到的淡黃色溶液在室溫下攪拌2小時(shí)，然后真空除去溶劑。通過(guò)加入飽和碳酸氫鈉溶液將得到的TFA鹽轉(zhuǎn)化成游離堿并用乙酸乙酯萃取水層(兩次)。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。得到的灰白色泡沫使用5％甲醇(含0.1％氨)的二氯甲烷溶液作為流動(dòng)相的快速層析純化，得到296mg(0.664mmol，63％收率)白色泡沫狀化合物D游離堿。為了形成鹽酸鹽，將游離堿溶于乙醚中并加入丙酮直到所有固體物溶解。滴加2.0M HCl的乙醚溶液直到不再形成沉淀。然后將沉淀物過(guò)濾并用乙醚洗滌幾次。得到的鹽在高真空下干燥。
1H NMR(D2O)400MHzδ7.91(d，2H，J ＝8.1Hz)，7.63(d，2H，J＝8.2Hz)，5.49(d，1H，J＝50.3Hz)，5.02(d，1H，J＝9.7Hz)，4.77-4.68(m，3H)，4.09(m，1H)，3.85(m，1H)，3.14(s，3H)，2.66-2.36(m，2H)，1.67(s，3H)，1.53(s，3H)ppm.
實(shí)施例19
(2S，4R)-1-{(2S)-2-氨基-2-[1-(4-氟芐基)環(huán)戊基]乙?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.1-(4-氟芐基)-環(huán)戊烷甲腈向攪拌著的4-氟芐基溴(10.0g，52.9mmol)的甲苯溶液(100mL)加入環(huán)戊烷甲腈(6.1mL，58.2mmol)。將混合物徹底攪拌并冷卻到0℃。經(jīng)加液漏斗緩慢加入159mL 0.5M KHMDS(79.35mmol)的甲苯溶液，然后將反應(yīng)混合物升溫到室溫并攪拌14小時(shí)。向反應(yīng)混合物加入1.0M HCl到pH＜7將反應(yīng)物猝滅。分離各層后，水層用乙酸乙酯再次萃取。合并的有機(jī)層順序用飽和碳酸氫鈉、水、鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并真空濃縮。經(jīng)硅膠層析(10∶1己烷∶乙酸乙酯)純化，得到8.61g(80％收率)黃色液體形式的化合物A。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.28-7.24(m，2H)，7.01(t，J＝8.7Hz，2H)，2.84(s，2H)，2.07-2.01(m，2H)，1.89-1.66(m，6H)ppm.
B.1-(4-氟芐基)環(huán)戊烷甲醛將經(jīng)攪拌的化合物A(8.61g，42.36mmol)的甲苯(150mL)溶液冷卻到-78℃。用注射器滴加純二異丁基氫化鋁(DIBAL，11.3mL，63.54mmol)并將反應(yīng)混合物在-78℃攪拌2小時(shí)。小心加入THF(100mL)、水(30mL)、乙酸(8mL)和乙酸鈉(7g)的溶液，將反應(yīng)混合物升溫到室溫并再攪拌1小時(shí)。加入乙醚后，將兩相混合物通過(guò)硅藻土板真空過(guò)濾，倒入到分液漏斗中，排掉水層。有機(jī)層順序用飽和碳酸氫鈉溶液、水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并真空濃縮。經(jīng)硅膠層析(10∶1己烷∶乙酸乙酯)純化得到6.55g(75％收率)無(wú)色液體狀化合物B。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ9.53(s，1H)，7.07(dd，J＝8.4，5.5Hz，2H)，6.93(t，J＝8.7Hz，2H)，2.88(s，2H)，1.93-1.87(m，2H)，1.67-1.48(m，6H)ppm.
C.氨基-[1-(4-氟芐基)環(huán)戊基]乙腈向經(jīng)攪拌的化合物B(6.55g，31.76mmol)的甲醇(30mL)和水(18mL)溶液加入4.4mL約30％氫氧化銨溶液(33.35mmol)、氰化鉀(2.17g，33.35mmol)和氯化銨(1.87g，34.94mmol)。將渾濁的反應(yīng)混合物加熱到70℃下14小時(shí)。將溶液冷卻到室溫后，用乙酸乙酯稀釋，然后順序用飽和碳酸氫鈉、水、鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過(guò)濾并真空濃縮。硅膠柱層析(4∶1己烷/乙酸乙酯)純化，得到5.99g(81％收率)無(wú)色粘稠油狀的化合物C。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.23-7.19(m，2H)，6.98(t，J＝8.7Hz，2H)，3.54(d，J＝3.5Hz，1H)，2.97(d，J＝13.6Hz，1H)，2.63(d，J＝13.7Hz，1H)，2.08(br s，2H)，1.75-1.57(m，8H)ppm.
D.氨基-[1-(4-氟芐基)環(huán)戊基]乙酸鹽酸鹽向經(jīng)攪拌的化合物C(5.99g，25.79mmol)的冰乙酸(20mL)溶液加入100mL濃鹽酸。將該反應(yīng)混合液加熱緩慢回流(130℃)16小時(shí)。冷卻到室溫后，將反應(yīng)混合物真空濃縮至干得到白色固體物。將該固體物在玻璃料上經(jīng)真空過(guò)濾，用乙醚洗滌并經(jīng)真空干燥獲得6.33g(85％收率)白色固體形式的化合物D。
1H NMR(CD3OD)400MHzδ7.30(dd，J＝8.7，5.4Hz，2H)，7.04(t，J＝8.8Hz，2H)，3.89(s，1H)，2.85-2.76(m，2H)，1.79-1.43(m，8H)ppm.
E [(叔丁氧基羰基)氨基][1-(4-氟芐基)環(huán)戊基]乙酸向經(jīng)攪拌的化合物D(6.33g，21.99mmol)的二烷溶液(100mL)順序加入76mL 1.0M NaOH(75.57mmol)和24mL水。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌幾分鐘直到原料完全溶解。加入二碳酸二叔丁酯(BOC2O，8.25g，37.78mmol)并將反應(yīng)混合物資室溫下攪拌14小時(shí)。緩慢加入濃鹽酸直到pH＜7，接著用乙酸乙酯稀釋。分離水層，然后再用兩份乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并真空濃縮得到7.95g(90％收率)白色泡沫體形式的化合物E。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.20(dd，J＝8.6，5.5Hz，2H)，6.96(t，J＝8.7Hz，2H)，5.00(d，J＝9.1Hz，1H)，4.28(d，J＝9.0Hz，1H)，2.72-2.64(m，2H)，1.63-1.35(m，8H)，1.45(s，9H)ppm.
F.(1S)-2-[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]-1-[1-(4-氟芐基)環(huán)戊基]-2-氧代乙基氨基甲酸叔丁酯向經(jīng)攪拌的化合物E(1.90g，5.41mmol)的DMF溶液(54mL)順序加入(2S，4S)-4-氟代吡咯烷-2-甲腈4-甲基苯磺酸鹽(1.55g，5.41mmol)、HATU(2.06g，5.41mmol)和二異丙基乙胺(2.83g，16.23mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。加入水(50mL)后，將反應(yīng)混合物用五份乙酸乙酯萃取。合并對(duì)萃取物順序用水、飽和氯化銨溶液、飽和碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾，并真空濃縮。經(jīng)快速硅膠層析(2∶1己烷∶乙酸乙酯)分離兩種非對(duì)映體，得到586mg(25％所需非對(duì)映體收率)無(wú)色油狀的化合物F。兩種非對(duì)映體中化合物F極性較大(Rf值較低)。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.20-7.16(m，2H)，7.00(t，J＝8.7，2H)，5.22(br d，J＝51.1Hz，1H)，5.15(d，J＝5.9Hz，1H)，4.93(d，J＝9.3Hz，1H)，4.26(d，J＝9.7Hz，1H)，3.77-3.63(m，1H)，3.28-3.19(m，1H)，2.78-2.52(m，4H)，2.32-2.11(m，2H)，1.73-1.52(m，6H)，1.42(s，9H)ppm.
G.(2S，4R)-1-{(2S)-2-氨基-2-[1-(4-氟芐基)環(huán)戊基]乙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈向經(jīng)攪拌的化合物F(586mg，1.31mmol)的二氯甲烷溶液(13mL)加入100mL(13.1mmol)TFA。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌14小時(shí)。真空濃縮后，再將反應(yīng)混合物溶解于乙酸乙酯中并用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并真空濃縮。經(jīng)硅膠快速層析(5％MeOH(含2％NH3)的二氯甲烷溶液)純化，得到160mg(35％收率)白色固體狀化合物G。
1H NMR(CDCl3)400MHz δ7.21-7.17(m，2H)，6.99(t，J＝8.6Hz，2H)，5.24(br d，J＝51.1Hz，1H)，4.93(d，J＝9.3Hz，1H)，3.53-3.40(m，1H)，3.34(s，1H)，3.29-3.20(m，1H)，2.92(d，J＝13.6Hz，1H)，2.66(d，J＝13.7Hz，1H)，2.63-2.49(m，2H)，2.31-1.32(m，8H)ppm.
H(2S，4R)-1-{(2S)-2-氨基-2-[1-(4-氟芐基)環(huán)戊基]乙酰基]-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向經(jīng)攪拌的化合物G(160mg，0.460mmol)的乙醚(5mL)溶液加入2.0M HCl/乙醚(1.0mL)溶液。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌5分鐘，期間沉淀出白色固體物。經(jīng)玻璃料真空過(guò)濾收集固體物并高真空干燥過(guò)夜，得到139mg(79％收率)白色固體物形式的化合物H。
1H NMR(CD3OD)400MHzδ7.31-7.27(m，2H)，7.13(t，J＝8.8Hz，2H)，5.30(br d，J＝51.1，1H)，5.01(d，J＝9.5Hz，1H)，4.04(s，1H)，3.56-3.43(m，1H)，3.20-3.11(m，1H)，2.90(d，J＝13.9Hz，1H)，2.73(d，J＝14.0Hz，1H)，2.60-2.30(m，2H)，2.14-1.37(m，8H)ppm.
實(shí)施例20 (2S，4S)-1-((2S)-2-氨基-2-{1-[4-(三氟甲基)苯基]環(huán)戊基}乙?；?-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.1-[4-(三氟甲基)苯基]-環(huán)戊烷甲腈向經(jīng)攪拌的4-氟芐基三氟化物(5.0g，30.47mmol)的甲苯溶液(40mL)加入環(huán)戊烷甲腈(10.5mL，100.55mmol)，接著加入92mL 0.5MKHMDS(45.71mmol)的甲苯溶液。然后將反應(yīng)混合物加熱到70℃并攪拌14小時(shí)。冷卻到室溫后向反應(yīng)混合物加入1.0M HCl到pH＜7將反應(yīng)物猝滅。分離各層，有機(jī)層順序用飽和碳酸氫鈉、水、鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并真空濃縮。經(jīng)硅膠層析(6∶1己烷∶乙酸乙酯)純化，得到7.53g化合物A和殘留環(huán)戊烷甲腈的混合物。因?yàn)檫@兩種混合物不易通過(guò)層析分離，因此將該混合物直接用于下一步。
B.1-[4-(三氟甲基)苯基]環(huán)戊烷甲醛將經(jīng)攪拌的化合物A(7.53g，如上所述)的甲苯(100mL)溶液冷卻到-78℃。用注射器緩慢滴加1.5M二丁基氫化鋁的甲苯溶液(DIBAL，32.0mL，47.21mmol)并將反應(yīng)混合物在-78℃攪拌2小時(shí)。小心加入THF(100mL)、水(20mL)、乙酸(6mL)和乙酸鈉(6.6g)的溶液并將反應(yīng)混合物升溫到室溫，再攪拌1小時(shí)。加入乙醚后，將兩相混合物通過(guò)硅藻土板過(guò)濾，倒入到分液漏斗中，排掉水層。有機(jī)層順序用飽和碳酸氫鈉溶液、水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并真空濃縮。經(jīng)硅膠層析(10∶1己烷∶乙酸乙酯)純化得到3.91g(53％兩步收率)無(wú)色液體狀化合物B。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ9.41(s，1H)，7.61(d，J＝6.1Hz，2H)，7.38(d，J＝8.2Hz，2H)，2.58-2.52(m，2H)，1.93-1.65(m，6H)ppm.
C.氨基-{1-[4-(三氟甲基)苯基]環(huán)戊基}乙腈向經(jīng)攪拌的化合物B(3.91g，16.14mmol)的甲醇(20mL)和水(12mL)溶液加入2.20mL氫氧化銨溶液(氨含量約30％16.95mmol)、氰化鉀(1.11g，16.95mmol)和氯化銨(950mg，17.76mmol)。將渾濁的反應(yīng)混合物加熱到70℃下6小時(shí)。將反應(yīng)混合液冷卻到室溫后，用乙酸乙酯稀釋并然后順序用飽和碳酸氫鈉、水、鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過(guò)濾并真空濃縮。經(jīng)硅膠柱快速層析(2∶1己烷/乙酸乙酯)純化，得到2.16g(50％收率)白色固體狀的化合物C。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.63(d，J＝8.4Hz，2H)，7.54(d，J＝8.4Hz，2H)，3.74(s，1H)，2.43-2.36(m，1H)，2.32-2.25(m，1H)，2.15-2.08(m，1H)，2.01-1.93(m，1H)，1.85-1.72(m，4H)，1.54(br s，2H)ppm.
D.氨基-{1-[4-(三氟甲基)苯基]環(huán)戊基}乙酸鹽酸鹽向經(jīng)攪拌的化合物C(2.16g，8.05mmol)的冰乙酸(10mL)溶液加入50mL濃鹽酸。將該溶液加熱至緩慢回流(130℃)16小時(shí)。冷卻到室溫后，將反應(yīng)混合物真空濃縮至干得到白色固體物。將該固體物經(jīng)高真空干燥獲得2.61g(100％收率)白色固體形式的化合物D。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ7.69(d，J＝8.4Hz，2H)，7.60(d，J＝8.4Hz，2H)，4.20(d，J＝2.4Hz，1H)，2.42-2.34(m，2H)，2.27-2.19(m，1H)，2.14-2.07(m，1H)，1.86-1.79(m，2H)，1.61-1.51(m，2H)ppm.
E.[(叔丁氧基羰基)氨基]{1-[4-(三氟甲基)苯基]環(huán)戊基}乙酸向經(jīng)攪拌的化合物D(2.61g，8.05mmol)的1，4-二烷(20mL)和水(20mL)溶液加入1.08g固體NaOH(27.06mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌幾分鐘后，加入二碳酸二叔丁酯(BOC2O，3.94g，18.04mmol)并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌14小時(shí)。緩慢加入濃鹽酸直到pH＜7，接著用乙酸乙酯稀釋。分離水層，用氯化鈉飽和后再用兩份乙酸乙酯再萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并真空濃縮得到3.01g(86％收率)無(wú)色粘稠油狀的化合物E。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.55(d，J＝7.8Hz，2H)，7.40(d，J＝8.2Hz，2H)，4.85(d，J＝8.5Hz，1H)，4.55(d，J＝8.5Hz，1H)，2.43-1.59(m，8H)，1.42(s，9H)ppm.
F.(1S)-2-[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]-2-氧代-1-{1-[4-(三氟甲基)苯基]環(huán)戊基}乙基氨基甲酸叔丁酯向經(jīng)攪拌的化合物E(1.01g，2.61mmol)的DMF溶液(26mL)順序加入(2S，4S)-4-氟代吡咯烷-2-甲腈4-甲基苯磺酸鹽(747mg，2.61mmol)、HATU(993mg，2.61mmol)和二異丙基乙胺(1.40mL，7.83mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。加入水(20mL)后，將反應(yīng)混合物用五份乙酸乙酯萃取。合并的萃取物順序用水、1.0M硫酸氫鈉、飽和碳酸氫鈉溶液、鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾，并真空濃縮。經(jīng)硅膠層析(1∶1己烷∶乙酸乙酯)分離得到442mg(35％收率)非對(duì)映體混合物形式的產(chǎn)物。進(jìn)一步硅膠層析(2∶1己烷∶乙酸乙酯)分離非對(duì)映體，得到145mg白色泡沫狀化合物F。兩種非對(duì)映體中化合物F極性較大(Rf值較低)。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.63(d，J＝8.4Hz，2H)，7.56(d，J＝8.6Hz，2H)，5.27(d，J＝9.7Hz，1H)，5.08(br d，J＝50.9Hz，1H)，4.84(d，J＝9.5Hz，1H)，4.49(d，J＝9.9Hz，1H)，3.63-3.50(m，1H)，2.77(dd，J＝23.6，12.0Hz，1H)，2.48(t，J＝15.5Hz，1H)，2.25-2.20(m，2H)，2.10-2.03(m，2H)，1.77-1.71(m，2H)，1.52-1.48(m，2H)，1.41(s，9H)ppm.
G.(2S，4S)-1-((2S)-2-氨基-2-{1-[4-(三氟甲基)苯基]環(huán)戊基}乙?；?-4-氟代吡咯烷-2-甲腈向經(jīng)攪拌的化合物F(145mg，0.30mmol)的二氯甲烷溶液(3mL)加入0.116mL(1.50mmol)TFA。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌14小時(shí)。真空濃縮后，再將反應(yīng)混合物溶解于乙酸乙酯中并用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并真空濃縮。經(jīng)硅膠快速層析(5％MeOH(含2％NH3)的二氯甲烷溶液)純化，得到62mg(54％收率)白色固體狀化合物G。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.62(d，J＝8.2Hz，2H)，7.54(d，J＝8.6Hz，2H)，5.12(brd，J＝51.1Hz，1H)，4.86(d，J＝9.5Hz，1H)，3.57(s，1H)，3.55-3.42(m，1H)，2.97-2.88(m，1H)，2.50(t，J＝15.2Hz，1H)，2.24-2.10(m，5H)，1.99(br s，2H)，1.76-1.71(m，2H)，1.54-1.41(m，2H)ppm.
H.(2S，4S)-1-((2S)-2-氨基-2-{1-[4-(三氟甲基)苯基]環(huán)戊基}乙酰基)-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向裝有化合物G(51mg，0.133mmol)的燒瓶加入乙醚(3mL)。加入幾滴丙酮使溶液成為均勻溶液。加入2.0M HCl/乙醚(1.0mL)溶液并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌5分鐘。真空除去溶劑并將得到的固體物在高真空下干燥過(guò)夜，得到55mg(98％收率)白色固體物形式的化合物H。
1H NMR(D2O)400MHzδ7.62(d，J＝8.8Hz，2H)，7.58(d，J＝9.0Hz，2H)，5.13(br d，J＝51.1Hz，1H)，4.86(d，J＝9.5Hz，1H)，4.37(s，1H)，3.54-3.40(m，1H)，2.95-2.86(m，1H)，2.44-2.18(m，4H)，1.92-1.84(m，2H)，1.64-1.58(m，2H)，1.33-1.25(m，2H)ppm.
實(shí)施例21 (2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-2-[1-(4-氟芐基)環(huán)丙基]乙?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.1-(4-氟芐基)-環(huán)丙烷甲腈將環(huán)丙烷甲腈(4.3 mL，58.2mmol)的甲苯溶液(100mL)冷卻0℃。經(jīng)加液漏斗緩慢加入159mL 0.5M KHMDS(79.35mmol)的甲苯溶液，然后將反應(yīng)混合物在0℃攪拌30分鐘。接著在0℃滴加4-氟芐基溴(10.0g，52.9mmol)的甲苯(20mL)溶液。將反應(yīng)混合物升溫到室溫并攪拌3小時(shí)。然后向反應(yīng)混合物加入1.0M HCl到pH＜7將其猝滅。分層后，水層再次用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層順序用飽和碳酸氫鈉、水、鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并真空濃縮。經(jīng)硅膠層析(95∶5己烷∶乙酸乙酯)純化，得到7.76g(84％收率)黃色液體形式的化合物A。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.25-7.22(m，2H)，7.03(t，J＝8.7Hz，2H)，2.77(s，2H)，1.28(dd，J＝7.1，5.1Hz，2H)，0.94(dd，J＝7.1，5.1Hz，2H)ppm.
B.1-(4-氟芐基)環(huán)丙烷甲醛將經(jīng)攪拌的化合物A(7.76g，44.29mmol)的甲苯(150mL)溶液冷卻到-78℃。用注射器滴加純二丁基氫化鋁(DIBAL，11.8mL，66.43mmol)并將反應(yīng)混合物在-78℃攪拌2小時(shí)。小心加入THF(100mL)、水(40mL)、乙酸(8mL)和乙酸鈉(7.5g)的溶液，將反應(yīng)混合物升溫到室溫并再攪拌1小時(shí)。加入乙醚后，將兩相混合物通過(guò)硅藻土板真空過(guò)濾，倒入到分液漏斗中，排掉水層。有機(jī)層順序用飽和碳酸氫鈉溶液、水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并真空濃縮。經(jīng)硅膠層析(95∶5己烷∶乙酸乙酯)純化得到7.20g(91％收率)無(wú)色液體狀化合物B。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ8.71(s，1H)，7.16-7.13(m，2H)，6.94(t，J＝8.8Hz，2H)，2.96(s，2H)，1.20-1.17(m，2H)，1.00-0.97(m，2H)ppm.
C.氨基-[1-(4-氟芐基)環(huán)丙基]乙腈向經(jīng)攪拌掉化合物B(7.20g，40.40mmol)的甲醇(40mL)和水(25mL)溶液加入5.51mL氫氧化銨溶液(氨含量約30％42.42mmol)、氰化鉀(2.76g，42.42mmol)和氯化銨(2.38g，44.44mmol)。將渾濁的反應(yīng)混合物加熱到70℃14小時(shí)。將溶液冷卻到室溫后，用乙酸乙酯稀釋并然后順序用飽和碳酸氫鈉、水、鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過(guò)濾并真空濃縮。經(jīng)硅膠快速柱層析(20％乙酸乙酯的己烷溶液)純化，得到2.21g(27％收率)無(wú)色粘稠油狀的化合物C。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.22-7.19(m，2H)，6.98(t，J＝8.6Hz，2H)，3.62(d，J＝3.3Hz，1H)，3.12(d，J＝14.3Hz，1H)，2.56(d，J＝14.3Hz，1H)，1.93(br s，1H)，1.82(br s，1H)，0.78-0.76(m，2H)，0.67-0.64(m，1H)，0.54-0.51(m，1H)ppm.
D.氨基-[1-(4-氟芐基)環(huán)丙基]乙酸鹽酸鹽向經(jīng)攪拌的化合物C(2.21g，10.82mmol)的冰乙酸(10mL)溶液加入50mL濃鹽酸。將該溶液加熱緩慢回流(130℃)16小時(shí)。冷卻到室溫后，將反應(yīng)混合物真空濃縮至干得到白色固體物。將該固體物在玻璃料上經(jīng)真空過(guò)濾，用乙醚洗滌并經(jīng)高真空干燥獲得2.81g(100％收率)白色固體形式的化合物D。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ7.18(dd，J＝8.8，5.5Hz，2H)，7.01(t，J＝8.8Hz，2H)，3.54(s，1H)，2.84(d，J＝4.9Hz，2H)，0.89-0.84(m，1H)，0.70-0.59(m，2H)，0.51-0.47(m，1H)ppm.
E.[(叔丁氧基羰基)氨基][1-(4-氟芐基)環(huán)丙基]乙酸向經(jīng)攪拌的化合物D(2.81g，10.85mmol)的1，4-二烷溶液(50mL)順序加入33mL 1.0M NaOH(3303mmol)和17mL水。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌幾分鐘直到原料完全溶解。加入二碳酸二叔丁酯(BOC2O，3.60g，16.52mmol)并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌14小時(shí)。緩慢加入濃鹽酸直到pH＜7，接著用乙酸乙酯稀釋。分離水層，然后再用兩份乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并真空濃縮得到4.06g(112％收率)淡黃色粘稠油狀的化合物E。
1H NMR(CDl3)400MHzδ7.19-7.15(m，2H)，6.95(t，J＝8.7Hz，2H)，4.98(d，J＝7.0Hz，1H)，3.98(d，J＝7.5Hz，1H)，2.85(d，J＝14.5Hz，1H)，2.60(d，J＝14.2Hz，1H)，1.45(s，9H)，0.79-0.72(m，2H)，0.51-0.47(m，2H)ppm.
F.(1S)-2-[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]-1-[1-(4-氟芐基)環(huán)丙基]-2-氧代乙基氨基甲酸叔丁酯向經(jīng)攪拌的化合物E(4.06g，12.56mmol)的DMF溶液(125mL)順序加入(2S，4S)-4-氟代吡咯烷-2-甲腈4-甲基苯磺酸鹽(3.60g，12.56mmol)、HATU(4.78g，12.56mmol)和二異丙基乙胺(6.60g，37.68mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。加入水(125mL)后，將反應(yīng)混合物用四份乙酸乙酯萃取。合并的萃取物順序用飽和氯化銨溶液、飽和碳酸氫鈉溶液、水、鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾，并真空濃縮。經(jīng)快速硅膠層析(1∶1己烷∶乙酸乙酯)分離得到1.29g(25收率)非對(duì)映體混合物形式的產(chǎn)物。進(jìn)一步經(jīng)硅膠快速層析(2∶1己烷∶乙酸乙酯)分離非對(duì)映體，得到853mg白色泡沫體形式的化合物F。
兩種非對(duì)映體中化合物F極性較大(Rf值較低)。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.29(dd，J＝8.6，5.5Hz，2H)，7.03(t，J＝82Hz，2H)，5.15(d，J＝9.3Hz，1H)，5.14(br d，J＝51.1Hz，1H)，4.76(d，J＝9.3Hz，1H)，4.42(d，J＝9.3Hz，1H)，3.29-3.16(m，1H)，3.15-3.11(m，1H)，3.07-2.98(m，1H)，2.52(t，J＝15.2Hz，1H)，2.24-2.17(m，1H)，2.14-2.07(m，1H)，1.44(s，9H)，0.86-0.76(m，2H)，0.56-0.45(m，2H)ppm.
G.(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-2-[1-(4-氟芐基)環(huán)丙基]乙?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈向經(jīng)攪拌的化合物F(853mg，2.03mmol)的二氯甲烷溶液(20mL)加入1.56mL(20.4mmol)TFA。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。真空濃縮后，再將反應(yīng)混合物溶解于乙酸乙酯中，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并真空濃縮。經(jīng)硅膠快速層析(5％MeOH(含2％NH3)的二氯甲烷溶液)純化，得到401mg(62％收率)白色固體狀化合物G。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.27-7.24(m，2H)，7.00(t，J＝8.6Hz，2H)，5.17(br d，J＝51.3Hz，1H)，4.76(d，J＝9.3Hz，1H)，3.48(s，1H)，3.32-3.01(m，3H)，2.54(t，J＝15.0Hz，1H)，2.22-2.05(m，2H)，1.74(br s，2H)，0.79-0.71(m，2H)，0.53-0.39(m，2H)ppm.
H.(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-2-[1-(4-氟芐基)環(huán)丙基]乙酰基}-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向裝有化合物G(401mg，1.26mmol)的燒瓶加入乙醚(8mL)。加入約1mL丙酮使溶液均一。加入2.0M HCl/乙醚(6.0mL)溶液并將反應(yīng)混合物攪拌5分鐘。真空除去溶劑得到一種白色固體，將其與一部分HCl/乙醚溶液一起研磨。經(jīng)玻璃料真空過(guò)濾收集固體物并用幾份乙醚洗滌，高真空干燥過(guò)夜，得到376mg(84％收率)白色固體物形式的化合物H。
1H NMR(DzO)400MHzδ7.29-7.23(m，2H)，7.07-7.01(m，2H)，5.22(br d，J＝50.6Hz，1H)，4.82(d，J＝9.1Hz，1H)，4.10(s，1H)，3.25-2.92(m，3H)，2.28(t，J＝16.0Hz，1H)，2.32-2.21(m，2H)，1.16-0.43(m，4H)ppm.
實(shí)施例22 (2S，4S)-1-[(2R)-2-氨基-3-(芐基磺?；?-3-甲基丁酰基]-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(2R)-3-(芐硫基)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲基丁酸室溫下向(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-巰基-3-甲基丁酸(1g，0.00401摩爾)的1.0N KOH溶液(50mL)加入芐基溴(755mg，0.00441摩爾)。17.0小時(shí)后，將反應(yīng)物用水稀釋并用乙醚洗滌。棄去有機(jī)物，將水層冷卻到0-5℃。使用濃鹽酸將水溶液調(diào)成酸性(pH 3.5)，并用乙酸乙酯萃取產(chǎn)物。有機(jī)物經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮至干，得到總共1.1g(81％)純油性固體形式的化合物A。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.32-7.20(m，5H)，5.44(d(br)，1H，J＝7.2Hz，4.38(d(br)，1H，J＝8.0Hz)，3.80(m，2H)，1.45-1.43(m，15H)ppm.
B.(1R)-2-(芐硫基)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯室溫下向化合物A(1.1g，0.0032摩爾)和N，N-二異丙基乙胺(1.4g，0.0107摩爾)的DMF(20mL)溶液加入HATU(1.85g，0.0049摩爾)。30分鐘后，將反應(yīng)混合物與(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(1.0g，0.0035摩爾)混和。攪拌過(guò)夜后，用碳酸氫鈉猝滅反應(yīng)物，有機(jī)物用乙酸乙酯萃取兩次。將有機(jī)物用飽和氯化鈉溶液洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。真空除去溶劑并經(jīng)柱層析(1/1己烷/乙酸乙酯)純化，得到445mg(32％)化合物B。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.36-7.18(m，5H)，5.37(d(br)，1H)，5.45(d(br)，1H，J＝51.6Hz)，5.00(d，1H，J＝9.2Hz)，4.35(d，1H，J＝8.8)，4.27-3.92(m，4H)，2.67-2.59(m，1H)，2.40-2.23(m，1H)，1.46-1.36(m，15H)ppm.
C.(1R)-2-(芐基磺?；?-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯向化合物B(445mg，0.00102摩爾)的二氯甲烷(75mL)溶液加入3-氯過(guò)氧苯甲酸(57-86％)(1.8g，0.0102摩爾)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16.0小時(shí)，然后用2.0N KOH中和。分離有機(jī)物，經(jīng)硫酸鎂干燥，濃縮至干，得到421mg粗制化合物C(88％)。得到的褐色固體沒(méi)有進(jìn)一步純化直接使用。
D.(2S，4S)-1-[(2R)-2-氨基-3-(芐基磺?；?-3-甲基丁?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向化合物C(421mg，0.00102摩爾)的二氯甲烷溶液(45mL)加入TFA(5mL)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16.0小時(shí)，接著用飽和碳酸氫鈉中和。有機(jī)物用硫酸鎂干燥并濃縮至干，得到一種粗制固體。得到的固體物用硅膠層析(99％二氯甲烷/1％含2.0M NH3的甲醇)純化。將純的褐色固體溶解于丙酮/乙醚混合物(1/1)中，使用2.0N HCl/乙醚沉淀。將得到的固體物真空過(guò)濾并用乙醚洗滌。高真空干燥后，總共得到96mg化合物D。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ7.49-7.35(m，5H)，5.47(d(br)，1H，J＝50.8Hz)，5.10(d，1H，J＝8.8Hz)，4.92-4.59(m，3H)，4.15-3.91(m，2H)，2.71-2.43(m，2H)，1.77(s，3H)，1.60(s，3H)ppm.
實(shí)施例23 (2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(3-甲氧基芐基)磺?；鵠-3-甲基丁?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[(3-甲氧基芐基)硫基]-3-甲基丁酸室溫下向(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-巰基-3-甲基丁酸(1g，0.00401摩爾)的1.0N KOH溶液(50mL)加入3-甲氧基芐基氯(691mg，0.00441摩爾)。17.0小時(shí)后，將反應(yīng)混合物用水(50mL)稀釋并用乙醚洗滌。棄去有機(jī)物，將水層冷卻到0-5℃。使用濃鹽酸將水溶液調(diào)成酸性(pH 3.5)，并用乙酸乙酯萃取產(chǎn)物。有機(jī)物經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮至干，得到總共1.35g(91％)化合物A。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.19(dd，1H，J＝7.8Hz)，6.90(d，1H，J＝7.2Hz)，6.86(s，1H)，6.76(dd，1H，J＝8.4Hz)，5.43(d(br)，1H，J＝6.4Hz)，4.39(d(br)，1H，J＝6.8Hz)，3.82-3.74(m，5H)，1.45-1.35(m，15H)ppm.
B.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-[(3-甲氧基芐基)硫基]-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯室溫下向化合物A(1.3g，0.0035摩爾)和N，N-二異丙基乙胺(1.36g，0.0106摩爾)的DMF(25mL)溶液加入HATU(2.0g，0.0053摩爾)。30分鐘后，將反應(yīng)混合物與(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(1.1g，0.0038摩爾)混和。攪拌過(guò)夜后，用碳酸氫鈉猝滅反應(yīng)物，有機(jī)物用乙酸乙酯萃取兩次。將有機(jī)物用飽和氯化鈉溶液洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。真空除去溶劑并經(jīng)柱層析(1/1己烷/乙酸乙酯)純化，得到617mg(38％)化合物B。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.18(dd，1H，J＝7.8Hz)，6.95(s，1H，)，6.92(d(br)，1H，J＝2.8)，6.74(dd，1H，J＝8.2Hz)，5.41(d(br)，1H，J＝8.8Hz)，5.39(d(br)，1H，J＝51.2)，5.00(d，1H，J＝9.6Hz)，4.35(d，1H，J＝8.8Hz)，4.28-3.78(m，7H)，2.71-2.52(m，1H)，2.46-2.27(m，1H)，1.62-1.39(m，15H)ppm.
C.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-[(3-甲氧基芐基)磺酰基]-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯向化合物B(617mg，0.0013摩爾)的二氯甲烷(100mL)溶液加入3-氯過(guò)氧苯甲酸(57-86％)(2.3g，0.013摩爾)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16.0小時(shí)，然后用2.0N KOH中和。有機(jī)物經(jīng)硫酸鎂干燥，濃縮至干，得到647mg粗制化合物C(98％)。得到的灰白色固體沒(méi)有進(jìn)一步純化直接使用。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.30-7.25(m，1H)，7.01-6.98(m，2H，)，6.92-6.88(m，1H)，5.49(d(br)，1H，J＝8.4Hz)，5.39(d(br)，1H，J＝50.8Hz)，5.03(d(br)，1H，J＝9.2)，4.96(d，1H，J＝9.2Hz)，4.32-3.80(m，4H)，3.79(s，3H)，2.71-2.54(m，1H)，2.46-2.24(m，1H)，1.59-1.39(m，15H)ppm.
D.(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(3-甲氧基芐基)磺?；鵠-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向化合物C(647mg，0.0013摩爾)的二氯甲烷溶液(45mL)加入TFA(5mL)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16.0小時(shí)，接著用飽和碳酸氫鈉中和。分離出有機(jī)物，用硫酸鎂干燥并濃縮至干，得到一種粗制固體。得到的固體物用硅膠層析(99％二氯甲烷/1％含2.0M NH3的甲醇)純化。將所述純的固體溶解于丙酮/乙醚混合物(1/1)中并使用2.0N HCl/乙醚沉淀。將得到的固體物真空過(guò)濾并用乙醚洗滌。高真空干燥后，總共得到221mg化合物D。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ7.31(dd，1H，J＝8.0Hz)，7.18-7.06(m，2H)，6.98(d，1H，J＝8.0Hz)，5.49(d(br)，1H，J＝50.8Hz)，5.10(d，1H，J＝9.2Hz)，4.72-4.58(m，3H)，4.15-3.88(m，2H)，3.81(s，3H)，2.69-2.44(m，2H)，1.75(s，3H)，1.59(s，3H)ppm.
實(shí)施例24 (2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(1，1’-聯(lián)苯-4-基甲基)磺酰基]-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(2R)-3-[(1，1’-聯(lián)苯-4-基甲基)硫基]-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲基丁酸室溫下向1，4-二烷(10mL)和(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-巰基-3-甲基丁酸(1g，000401摩爾)的1.0N KOH溶液(50mL)加入4-苯基芐基氯(894mg，0.00441摩爾)。17.0小時(shí)后，將反應(yīng)物用水稀釋并用乙醚洗滌。棄去有機(jī)物，將水層冷卻到0-5℃。使用濃鹽酸將水溶液調(diào)成酸性(pH 3.5)，并用乙醚萃取產(chǎn)物。有機(jī)物經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮至干，得到總共1.4g(82％)白色固體形式的化合物A。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.59-7.31(m，9H)，5.49(m，1H)，4.32.(d(br)，1H，J＝9.6Hz)，3.88-3.71(m，2H)，1.57-1.40(m，15H)ppm.
B.(1R)-2-[(1，1’-聯(lián)苯-4-基甲基)硫基]-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯室溫下向化合物A(1.4g，0.0034摩爾)和N，N-二異丙基乙胺(1.3g，0.0101摩爾)的DMF(25mL)溶液加入HATU(1.9g，0.0051摩爾)。30分鐘后，將反應(yīng)混合物與(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(1.1g，0.0037摩爾)混和。攪拌過(guò)夜后，用碳酸氫鈉猝滅反應(yīng)物，有機(jī)物用乙酸乙酯萃取兩次。將有機(jī)物用飽和氯化鈉溶液洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。真空除去溶劑并經(jīng)柱層析(1/1己烷/乙酸乙酯)純化，得到828mg(48％)極純的產(chǎn)物。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.57-7.30(m，9H)，5.47-5.33(m，2H)，5.03(d(br)，1H，J＝9.6)，4.39(d，1H，J＝8.8Hz)，4.31-3.97(m，2H)，3.89(s，2H)，2.68(dd，1H，J＝15.6Hz)，2.44-2.28(m，1H)，1.58-1.41(m，15H)ppm.
C.(1R)-2-[(1，1’-聯(lián)苯-4-基甲基)磺?；鵠-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯向化合物B(828mg，0.0016摩爾)的二氯甲烷(100mL)溶液加入3-氯過(guò)氧苯甲酸(57-86％)(2.8g，0.0162摩爾)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16.0小時(shí)，然后用2.0N KOH中和。有機(jī)物經(jīng)硫酸鎂干燥，濃縮至干，得到867mg化合物C(99％)。得到的白色固體沒(méi)有進(jìn)一步純化直接使用。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.63-7.33(m，9H)，5.53(d(br)，1H，J＝8.4Hz)，5.42(d(br)，1H，J＝50.8Hz)，5.07(d(br)，1H，J＝9.2)，4.99(d，1H，J＝9.2Hz)，4.39-4.00(m，4H)，2.70(dd，1H，J＝15.2Hz)，2.47-2.34(m，1H)，1.62-1.40(m，15H)ppm.
D.(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(1，1’-聯(lián)苯-4-基甲基)磺酰基]-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向化合物C(867mg，0.0016摩爾)的二氯甲烷溶液(45mL)加入TFA(5mL)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16.0小時(shí)，接著用飽和碳酸氫鈉中和。分離出有機(jī)物，用硫酸鎂干燥并濃縮至干，得到一種粗制固體。得到的固體物用硅膠層析(99％二氯甲烷/1％含2.0M NH3的甲醇)純化。將純的固體溶解于丙酮/乙醚混合物(1/1)中，使用2.0NHCl/乙醚沉淀。將得到的固體物真空過(guò)濾并用乙醚洗滌。高真空干燥后，總共得到307mg化合物D。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ7.66-7.32(m，9H)，5.48(d(br)，1H，J＝50.4Hz)，5.10(d，1H，J＝8.0)，4.86-4.64(m，3H)，4.19-3.86(m，2H)，2.70-2.41(m，2H)，1.78(s，3H)，1.63(s，3H)ppm.
實(shí)施例25 (2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(2-甲氧基芐基)磺?；鵠-3-甲基丁酰基}-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[(2-甲氧基芐基)硫基]-3-甲基丁酸室溫下向(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-巰基-3-甲基丁酸(1g，0.00401摩爾)的1.0N KOH溶液(50mL)加入2-甲氧基芐基氯(691mg，0.00441摩爾)。17.0小時(shí)后，將反應(yīng)物用水稀釋并用乙醚洗滌。棄去有機(jī)物，將水層冷卻到0-5℃。使用濃鹽酸將水溶液調(diào)成酸性(pH 3.5)，并用乙酸乙酯萃取產(chǎn)物。有機(jī)物經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮至干，得到總共1.1g(74％)化合物A。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.25-7.21(m，2H)，6.90-6.85(m，2H)，5.63-5.55(m，1H)，4.31(d(br)，1H，J＝9.2Hz)，3.88-3.79(m，5H)，1.58-1.33(m，15H)ppm.
B.(1R-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-[(2-甲氧基芐基)硫基]-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯室溫下向化合物A(1.0g，0.0027摩爾)和N，N-二異丙基乙胺(1.05g，0.0081摩爾)的DMF(25mL)溶液加入HATU(1.5g，0.00405摩爾)。30分鐘后，將反應(yīng)混合物與(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(851mg，0.003摩爾)混和。攪拌過(guò)夜后，用碳酸氫鈉猝滅反應(yīng)，有機(jī)物用乙酸乙酯萃取兩次。將有機(jī)物用飽和氯化鈉溶液洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。真空除去溶劑并經(jīng)柱層析(1/1己烷/乙酸乙酯)純化，得到668mg(53％)化合物B。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.31(dd，1H，J＝7.6Hz)，7.19(dd，1H，J＝8.0Hz)，6.92-6.83(m，2H)，5.47-5.31(m，2H)，5.03(d(br)，1H，J＝9.2)，4.34(d，1H，J＝8.4Hz)，4.26-3.66(m，7H)，2.68(dd，1H，J＝15.2Hz)，2.43-2.26(m，1H)，1.57-1.37(m，15H)ppm.
C.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-[(2-甲氧基芐基)磺酰基]-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯向化合物B(668mg，0.0014摩爾)的二氯甲烷(75mL)溶液加入3-氯過(guò)氧苯甲酸(57-86％)(2.5g，0.0140摩爾)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16.0小時(shí)并然后用2.0N KOH中和。有機(jī)物經(jīng)硫酸鎂干燥，濃縮至干，得到678mg化合物C(95％)。得到的白色固體沒(méi)有進(jìn)一步純化直接使用。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.44(dd，1H，J＝7.6Hz)，7.34(m，1H)，6.99-6.91(m，2H)，5.61-5.57(m，1H)，5.40(d(br)，1H，J＝51.2Hz)，5.00-4.95(m，2H)，4.49-3.85(m，7H)，2.65(dd，1H，J＝15.6Hz)，2.45-2.28(m，1H)，1.62-1.37(m，15H)ppm.
D.(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(2-甲氧基芐基)磺?；鵠-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-腈鹽酸鹽向化合物C(678mg，0.00136摩爾)的二氯甲烷溶液(45mL)加入TFA(5mL)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16.0小時(shí)，接著用飽和碳酸氫鈉中和。分離有機(jī)物，用硫酸鎂干燥并濃縮至干，得到一種粗制固體。得到的固體物用硅膠層析(99％二氯甲烷/1％含2.0M NH3的甲醇)純化。將純的固體溶解于丙酮/乙醚混合物(1/1)中，使用2.0N HCl/乙醚沉淀。將得到的固體物真空過(guò)濾，用乙醚洗滌。高真空干燥后，總共得到313mg化合物D。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ7.45-7.38(m，2H)，7.06(d，1H，J＝8.4Hz)，6.99-6.99(dd，1H，J＝7.2Hz)，5.49(d(br)，1H，J＝50.8Hz)，5.09(m，1H，J＝9.2)，4.13-3.84(m，6H)，2.67-2.44(m，2H)，1.74(s，3H)，1.58(s，3H)ppm.
實(shí)施例26 (2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(吡啶-3-基甲基)硫基]丁?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲基-[(吡啶-3-基甲基)硫基]丁酸室溫下向(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-巰基-3-甲基丁酸(1g，0.00401摩爾)的1.0N KOH溶液(50mL)加入3-(溴甲基)吡啶氫溴酸鹽(1.1g，0.00441摩爾)。17.0小時(shí)后，將反應(yīng)物用水稀釋并用乙醚洗滌。棄去有機(jī)物，將水層冷卻到0-5℃。使用濃鹽酸將水溶液調(diào)成酸性(pH 4.0)，并用乙酸乙酯萃取產(chǎn)物。有機(jī)物經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮至干，得到總共403mg(30％)純油性固體形式的化合物A。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ8.77(s，1H)，8.56(d，1H，J＝5.6Hz)，7.80(d，1H，J＝8.0Hz)，7.37(dd，1H，J＝8.0Hz)，5.47(d(br)，1H，J＝9.6Hz)，4.53(d(br)，1H，J＝9.6Hz)，3.95(dd，2H，J＝69.6Hz)，1.60-1.35(m，15H)ppm.
B.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基-2-[(吡啶-3-基甲基)硫基]丙基氨基甲酸叔丁酯室溫下向化合物A(400mg，0.0012摩爾)和N，N-二異丙基乙胺(456g，0.0035摩爾)的DMF(20mL)溶液加入HATU(670mg，0.0018摩爾)。30分鐘后，將反應(yīng)混合物與(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(370mg，0.0013摩爾)混和。攪拌過(guò)夜后，用碳酸氫鈉猝滅反應(yīng)物，有機(jī)物用乙酸乙酯萃取兩次。將有機(jī)物用飽和氯化鈉溶液洗滌并經(jīng)硫酸鈉干燥。真空除去溶劑并經(jīng)柱層析(1/1己烷/乙酸乙酯)純化，得到314mg(61％)化合物B。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ8.58(s，1H)，8.46(d，1H，J＝4.8Hz)，7.71(d，1H，J＝8.0Hz)，7.21(dd，1H，J＝8.0Hz)，5.45(d(br)，1H，J＝9.2Hz)，5.43(d(br)，1H，J＝51.2Hz)，5.02(d，1H，J＝9.2Hz)，4.41(d，1H，J＝9.6Hz)，4.37-3.79(m，4H)，2.70(dd，1H，J＝15.6Hz)，2.46-2.29(m，1H)，1.55-1.39(m，15H)ppm.
C.(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(吡啶-3-基甲基)硫基]丁酰基}-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向化合物B(314mg，0.720mmol)的二氯甲烷(22mL)溶液加入TFA(3mL)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16.0小時(shí)，接著用飽和碳酸氫鈉中和。分離有機(jī)物并用硫酸鈉干燥并濃縮至干，得到一種粗制固體。得到的固體物用硅膠層析(99％二氯甲烷/1％含2.0M NH3的甲醇)純化。將純的固體溶解于丙酮/乙醚混合物(1/1)中并使用2.0N HCl/乙醚沉淀。將得到的固體物真空過(guò)濾并用乙醚洗滌。高真空干燥后，總共得到69mg化合物C。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ8.57(s，1H)，8.46(d，1H，J＝5.2Hz)，7.71(d，1H，J＝6.4Hz)，7.23(dd，1H，J＝8.0Hz)，5.44(d(br)，1H，J＝51.2Hz)，4.97(d，1H，J＝9.6Hz)，4.20-3.58(m，5H)，2.66(dd，1H，J＝15.2Hz)，2.39-2.22(m，1H)，1.78(s(br)，2H)，1.48(s，3H)，1.39(s，3H)ppm.
實(shí)施例27 (2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(吡啶-2-基甲基)硫基]丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲基-3-[(吡啶-2-基甲基)硫基]丁酸室溫下向(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-巰基-3-甲基丁酸(1g，0.00401摩爾)的1.0N KOH溶液(50mL)加入2-(溴甲基)吡啶氫溴酸鹽(1.1g，0.00441摩爾)。17.0小時(shí)后，將反應(yīng)物用水稀釋，用乙醚洗滌。棄去有機(jī)物，將水層冷卻到0-5℃。使用濃鹽酸將水溶液調(diào)成酸性(pH 4.0)，并用乙酸乙酯萃取產(chǎn)物。有機(jī)物經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮至干，總共得到557mg(41％)白色固體狀的化合物A。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ8.53(d，1H，J＝4.8Hz)，7.75(dd，1H，J＝7.6Hz)，7.34-7.30(m，2H)，5.73(d(br)，1H，J＝8.8Hz)，4.47(d，1H，J＝8.8Hz)，4.41-4.01(m，2H)1.55(m，15H)ppm.
B.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基-2-[(吡啶-2-基甲基)硫基]丙基氨基甲酸叔丁酯室溫下向化合物A(557mg，0.0016摩爾)和N，N-二異丙基乙胺(635mg，0.0049摩爾)的DMF(20mL)溶液加入HATU(912mg，0.0024摩爾)。30分鐘后，將反應(yīng)混合物與(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(504mg，0.00176摩爾)混和。攪拌過(guò)夜后，用碳酸氫鈉猝滅反應(yīng)物，有機(jī)物用乙酸乙酯萃取兩次。將有機(jī)物用飽和氯化鈉溶液洗滌并經(jīng)硫酸鈉干燥。真空除去溶劑并經(jīng)柱層析(1/1己烷/乙酸乙酯)純化，得到466mg(65％)化合物B。
1H NMR(d6Acetone)400MHzδ8.46(d，1H，J＝4.4Hz)，7.71(dd，1H，J＝7.6Hz)，7.48(d，1H，J＝8.0Hz)，7.21(dd，1H，J＝7.6Hz)，6.25(d(br)，1H，J＝8.4Hz)，5.60(d(br)，1H，J＝50.8Hz)，5.05(m，1H)，4.61(d，1H，J＝8.8Hz)，4.43-3.83(m，4H)，2.83-2.52(m，2H)，1.50-1.35(m，15H)ppm.
C.(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(吡啶-2-基甲基)硫基]丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向化合物B(314mg，1.07mmol)的二氯甲烷(45mL)溶液加入TFA(5mL)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16.0小時(shí)，接著用飽和碳酸氫鈉中和。分離有機(jī)物并用硫酸鈉干燥并濃縮至干，得到一種粗制固體。得到的固體物用硅膠層析(99％二氯甲烷/1％含2.0M NH3的甲醇)純化。將純的固體溶解于丙酮/乙醚混合物(1/1)中并使用2.0N HCl/乙醚沉淀。將得到的固體物真空過(guò)濾并用乙醚洗滌。高真空干燥后，總共得到127mg化合物C。
1H NMR(D2O)400MHzδ8.54(d，1H，J＝5.6Hz)，8.34(dd，1H，J＝8.0Hz)，7.92(d，1H，J＝8.4Hz)，7.21(dd，1H，J＝6.4Hz)，5.44(d(br)，1H，J＝50.4Hz)，5.02(d，1H，J＝10Hz)，4.60(m，5H)，2.62(dd，1H，J＝15.6Hz)，2.54-2.34(m，1H)，1.40(s，6H)ppm.
實(shí)施例28
(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(吡啶-4-基甲基)硫基]丁酰基}-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲基-[(吡啶-4-基甲基)硫基]丁酸室溫下向(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-巰基-3-甲基丁酸(1g，0.00401摩爾)的1.0N KOH溶液(50mL)加入4-(溴甲基)吡啶氫溴酸鹽(1.1g，000441摩爾)。17.0小時(shí)后，將反應(yīng)物用水稀釋并用乙醚洗滌。棄去有機(jī)物，將水層冷卻到0-5℃。使用濃鹽酸將水溶液調(diào)成酸性(pH 4.0)，并用乙酸乙酯萃取產(chǎn)物。有機(jī)物經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮至干，總共得到482mg(35％)白色固體形式的化合物A。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ8.48(d，2H，J＝6.0Hz)，7.40(d，2H，J＝5.6Hz)，5.48(d(br)，1H，J＝9.2Hz)，4.41(d，1H，J＝9.2Hz)，3.82(s，2H)1.52-1.38(m，15H)ppm.
B.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基-2-[(吡啶-4-基甲基)硫基]丙基氨基甲酸叔丁酯室溫下向化合物A(482mg，0.00142摩爾)和N，N-二異丙基乙胺(549mg，0.0042摩爾)的DMF(20mL)溶液加入HATU(810mg，0.00213摩爾)。30分鐘后，將反應(yīng)混合物與(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(447mg，0.00156摩爾)混和。攪拌過(guò)夜后，用碳酸氫鈉猝滅反應(yīng)物，有機(jī)物用乙酸乙酯萃取兩次。將有機(jī)物用飽和氯化鈉溶液洗滌并經(jīng)硫酸鈉干燥。真空除去溶劑并經(jīng)柱層析(1/1己烷/乙酸乙酯)純化，得到476mg(77％)化合物B。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ8.51(d，2H，J＝4.4Hz)，7.31(d，2H，J＝6.4Hz)，5.43(d(br)，1H，J＝9.6Hz)，5.43(d(br)，1H，J＝51.2Hz)，5.01(d，1H，J＝9.6Hz)，4.39(d，1H，J＝9.6Hz)，4.35-3.96(m，2H)，3.80(s，2H)，2.70(dd，1H，J＝15.4)，2.46-2.29(m，1H)，1.45-1.41(m，15H)ppm.
C.(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(吡啶-4-基甲基)硫]丁?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-腈鹽酸鹽向化合物B(476mg，1.09mmol)的二氯甲烷(45mL)溶液加入TFA(5mL)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16.0小時(shí)，接著用飽和碳酸氫鈉中和。分離有機(jī)物，用硫酸鈉干燥并濃縮至干，得到一種粗制固體。得到的固體物用硅膠層析(99％二氯甲烷/1％含2.0M NH3的甲醇)純化。將純的固體溶解于丙酮/乙醚混合物(1/1)中并使用2.0N HCl/乙醚沉淀。將得到的固體物真空過(guò)濾并用乙醚洗滌。高真空干燥后，總共得到107mg化合物C。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ8.81(d，2H，J＝4.8Hz)，8.08(d，2H，J＝6.4Hz)，5.51(d(br)，1H，J＝51.2Hz)，5.10(d，1H，J＝9.2Hz)，4.35-3.96(m，4H)，2.65-2.43(m，2H)，1.62-1.42(m，6H)ppm，實(shí)施例29 (2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(4-氟芐基)磺?；鵠-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[(4-氟芐基)硫基]-3-甲基-丁酸室溫下向(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-巰基-3-甲基丁酸(1g，0.00401摩爾)的1.0N KOH溶液(50mL)加入1-(溴甲基)-4-氟苯(834mg，0.00441摩爾)。17.0小時(shí)后，將反應(yīng)物用水稀釋并用乙醚洗滌。棄去有機(jī)物，將水層冷卻到0-5℃。使用濃鹽酸將水溶液調(diào)成酸性(pH3.5)，并用乙酸乙酯萃取產(chǎn)物。有機(jī)物經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮至干，總共得到1.2g(86％)油狀化合物A。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.29-7.26(m，2H)，6.99-6.94(m，2H)，5.40(d(br)，1H，J＝8.0Hz)，4.40(d(br)，1H，J＝8.0Hz)，3.80-3.74(m，2H)1.50-1.40(m，15H)ppm.
B.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-[(4-氟芐基)硫基]-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯室溫下向化合物A(1.2g，0.0034摩爾)和N，N-二異丙基乙胺(1.3g，0.0101摩爾)的DMF(25mL)溶液加入HATU(1.9g，0.0051摩爾)。30分鐘后，將反應(yīng)混合物與(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(1.1g，0.0037摩爾)混和。攪拌過(guò)夜后，用碳酸氫鈉猝滅反應(yīng)物，有機(jī)物用乙酸乙酯萃取兩次。將有機(jī)物用飽和氯化鈉溶液洗滌并經(jīng)硫酸鈉干燥。真空除去溶劑并經(jīng)柱層析(1/1己烷/乙酸乙酯)純化，得到929mg(61％)化合物B。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.33(dd，2H，J＝8.4Hz)，6.96(dd，2H，J＝8.8Hz)，5.42(d(br)，1H，J＝9.2Hz)，5.43(d(br)，1H，J＝51.6Hz)，5.02(d，1H，J＝9.6Hz)，4.38(d，1H，J＝9.2Hz)，4.34-3.97(m，2H)，3.82(s，2H)，2.69(dd，1H，J＝15.4Hz)，2.46-2.28(m，1H)，1.45-1.41(m，15H)ppm.
C.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-[(4-氟芐基)磺酰基]-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯向化合物B(929mg，0.0019摩爾)的二氯甲烷溶液(100mL)加入3-氯過(guò)氧苯甲酸(57-86％)(3.3g，0.0191摩爾)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16.0小時(shí)，接著用2.0N KOH中和。有機(jī)物經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮至干，得到678mg化合物C(97％收率)。得到的灰白色固體未經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.40(dd，2H，J＝8.8Hz)，7.07(dd，2H，J＝8.6Hz)，5.52(d(br)，1H，J＝9.2Hz)，5.43(d(br)，1H，J＝51.2Hz)，5.03(d，1H，J＝9.6Hz)，4.97(d，1H，J＝9.6Hz)，4.36-3.74(m，4H)，2.70(dd，1H，J＝15.2Hz)，2.47-2.28(m，1H)，1.72-1.35(m，15H)ppm.
D.(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(4-氟芐基)磺酰基]-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向化合物C(678mg，1.40mmol)的二氯甲烷(45mL)溶液加入TFA(5mL)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16.0小時(shí)，接著用飽和碳酸氫鈉中和。分離有機(jī)物，用硫酸鎂干燥并濃縮至干，得到一種粗制固體。得到的固體物用硅膠層析(99％二氯甲烷/1％含2.0M NH3的甲醇)純化。將純的固體溶解于丙酮/乙醚混合物(1/1)中，使用2.0N HCl/乙醚沉淀。將得到的固體物真空過(guò)濾并用乙醚洗滌。高真空干燥后，總共得到254mg化合物D。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.39(dd，2H，J＝8.4Hz)，7.08(dd，2H，J＝8.6Hz)，5.41(d(br)，1H，J＝50.8Hz)，4.94(d，1H，J＝9.6Hz)，4.63(d，1H，J＝13.2Hz)，4.35-3.55(m，4H)，2.70(dd，1H，J＝15.4Hz)，2.43-2.26(m，1H)，1.80-1.39(m，8H)ppm.
實(shí)施例30 (2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(3-苯氧基芐基)磺酰基]丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲基-3-[(3-苯氧基芐基)硫基]丁酸室溫下向(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-巰基-3-甲基丁酸(1g，0.00401摩爾)的1.0N KOH溶液(50mL)加入1-(氯甲基)-3-苯氧基苯(964mg，0.00441摩爾)和1，4-二烷(15mL)。17.0小時(shí)后，將反應(yīng)物用水稀釋并用乙醚洗滌。棄去有機(jī)物，將水層冷卻到0-5℃。使用濃鹽酸將水溶液調(diào)成酸性(pH 3.5)，并用乙醚萃取產(chǎn)物。有機(jī)物經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮至干，總共得到1.4g(82％)化合物A的白色固體。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.34-6.98(m，8H)，6.85(dd，1H，J＝8.0Hz)，5.44(m，1H)，4.38(m，1H)，3.80(m，2H)，1.50-1.40(m，15H)ppm.
B.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基-2-[(3-芐氧基芐基)硫基]丙基氨基甲酸叔丁酯室溫下向化合物A(1.4g，0.0032摩爾)和N，N-二異丙基乙胺(1.3g，0.0100摩爾)的DMF(20mL)溶液加入HATU(1.8g，0.0048摩爾)。30分鐘后，將反應(yīng)混合物與(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(1.0g，0.0035摩爾)混和。攪拌過(guò)夜后，用碳酸氫鈉猝滅反應(yīng)物，有機(jī)物用乙酸乙酯萃取兩次。將有機(jī)物用飽和氯化鈉溶液洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。真空除去溶劑并經(jīng)柱層析(1/1己烷/乙酸乙酯)純化，得到1.1g(65％)化合物B。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.34-6.97(m，8H)，6.84(dd，1H，J＝8.0Hz)，5.44(d(br)，1H，J＝9.2Hz)，5.39(d(br)，1H，J＝51.2Hz)，5.01(d，1H，J＝9.6Hz)，4.36(d，1H，J＝9.2Hz)，4.29-3.90(m，2H)，3.80(s，2H)，2.66(dd，1H，J＝15.4Hz)，2.43-2.26(m，1H)，1.52-1.38(m，15H)ppm.
C.(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基-2-[(3-苯氧基芐基)磺酰基]丙基氨基甲酸叔丁酯向化合物B(600mg，0.0011摩爾)的二氯甲烷溶液(50mL)加入3-氯過(guò)氧苯甲酸(57-86％)(2.0g，0.011摩爾)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16.0小時(shí)，接著用2.0KOH中和。有機(jī)物經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮至干，得到594mg化合物C(93％收率)。得到的白色固體未經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.34-7.00(m，9H)，5.40(d(br)，1H，J＝51.2Hz)，5.27(d(br)，1H，J＝8.8Hz)，4.93(d，1H，J＝9.6Hz)，4.62(d，1H，J＝13.2Hz)，4.46-3.55(m，4H)，2.69(dd，1H，J＝15.4Hz)，2.42-2.25(m，1H)，1.62-1.43(m，15H)ppm.
D.(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(3-苯氧基芐基)磺酰基]丁酰基}-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向化合物C(678mg，1.06mmol)的二氯甲烷(45mL)溶液加入TFA(5mL)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16.0小時(shí)，接著用飽和碳酸氫鈉中和。分離有機(jī)物，用硫酸鎂干燥并濃縮至干，得到一種粗制固體。得到的固體物用硅膠層析(99％二氯甲烷/1％含2.0M NH3的甲醇)純化。將純的固體溶解于丙酮/乙醚混合物(1/1)中，使用2.0N HCl/乙醚沉淀。將得到的固體物真空過(guò)濾并用乙醚洗滌。高真空干燥后，總共得到268mg白色固體狀的化合物D。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ7.42-6.99(m，9H)，5.54(d(br)，1H，J＝51.2Hz)，5.04(d，1H，J＝9.2Hz)，4.70(m，2H)，4.46(m，1H)，4.16-3.79(m，2H)，2.55-2.30(m，2H)，1.55(s，3H)，1.47(s，3H)ppm.
實(shí)施例31 (2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(3-苯氧基芐基)硫基]丁?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基-2-[(3-苯氧基芐基)硫基]丙基氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.0mmol)的二氯甲烷(45mL)溶液加入TFA(5mL)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16.0小時(shí)，接著用飽和碳酸氫鈉中和。分離有機(jī)物，用硫酸鎂干燥并濃縮至干，得到一種粗制固體。得到的固體物用硅膠層析(99％二氯甲烷/1％含2.0M NH3的甲醇)純化。將純的固體溶解于丙酮/乙醚混合物(1/1)中，使用2.0N HCl/乙醚沉淀。將得到的固體物真空過(guò)濾并用乙醚洗滌。高真空干燥后，總共得到132mg題述化合物。
1H NMR(D2O)400MHzδ7.17-6.71(m，9H)，5.38(d(br)，1H，J＝50.4Hz)，5.00(d，1H，J＝9.6Hz)，4.16-3.60(m，4H)，2.62-2.30(m，2H)，1.38-1.29(s，6H)ppm.
實(shí)施例32 (2S，4S)-1-((2R)-2-氨基-3-{[(5-氯-1，1-二氧化-1-苯并噻吩-3-基)甲基]磺?；鶀-3-甲基丁?；?-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-{[(5-氯-1-苯并噻吩-3-基)甲基]硫基}-3-甲基丁酸室溫下向(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-巰基-3-甲基丁酸(1g，0.00401摩爾)的1.0N KOH溶液(50mL)加入3-(溴甲基)-5-氯-1-苯并噻吩(1.2g，0.00441摩爾)和1，4-二烷(10mL)。17.0小時(shí)后，將反應(yīng)物用水稀釋并用乙醚洗滌。棄去有機(jī)物，將水層冷卻到0-5℃。使用濃鹽酸將水溶液調(diào)成酸性(pH 3.5)，用乙醚萃取產(chǎn)物。有機(jī)物經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮至干，總共得到1.0g(59％)化合物A的褐色固體。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.84(s，1H)，7.72(d，1H，J＝8.4Hz)，7.39(s，1H)，7.30(d，1H，J＝8.4Hz)，5.44(m，1H)，4.45(m，1H，J＝7.6Hz)，4.07-4.00(m，2H)，1.55-1.40(m，15H)ppm.
B.(1R)-2-{[(5-氯-1-苯并噻吩-3-基)甲基]硫基}-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯室溫下向化合物A(1.0g，0.0023摩爾)和N，N-二異丙基乙胺(902mg，0.007摩爾)的DMF(20mL)溶液加入HATU(1.3g，0.00345摩爾)。30分鐘后，將反應(yīng)混合物與(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(725mg，0.0025摩爾)混和。攪拌過(guò)夜后，用碳酸氫鈉猝滅反應(yīng)物，有機(jī)物用乙酸乙酯萃取兩次。將有機(jī)物用飽和氯化鈉溶液洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。真空除去溶劑并經(jīng)柱層析(1/1己烷/乙酸乙酯)純化，得到738mg(60％)化合物B。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.91(s，1H)，7.72(d，1H，J＝8.8Hz)，7.47(s，1H)，7.30(d，1H，J＝8.4Hz)，5.49-5.35(m，2H)，5.04(d，1H，J＝9.6Hz)，4.41(d，1H，J＝9.2Hz)，4.35-3.98(m，4H)，2.69(dd，1H，J＝15.2Hz)，2.46-2.29(m，1H)，1.47-1.40(m，15H)ppm.
C.(1R)-2-{[(5-氯-1，1-二氧化-1-苯并噻吩-3-基)甲基]磺?；鶀-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯向化合物B(738mg，0.0014摩爾)的二氯甲烷溶液(100mL)加入3-氯過(guò)氧苯甲酸(57-86)(4.8g，0.028摩爾)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16.0小時(shí)，接著用2.0KOH中和。有機(jī)物經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮至干，得到803mg化合物C(97％收率)。得到的灰白色固體未經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ8.05(s，1H)，7.96(d，1H，J＝7.6Hz)，7.48(m，3H)，5.45(d(br)，1H J＝10Hz)，5.44(d(br)，1H，J＝50.8Hz)，5.02(d，1H，J＝10Hz)，4.95(d，1H，J＝9.6Hz)，4.77-3.96(m，4H)，2.70(dd，1H，J＝4.8Hz)，2.46-2.30(m，1H)，1.70-1.37(m，15H)ppm，D.(2S，4S)-1-((2R)-2-氨基-3-{[(5-氯-1，1-二氧化-1-苯并噻吩-3-基)甲基]磺?；鶀-3-甲基丁酰基)-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向化合物C(500mg，1.0mmol)的二氯甲烷(45mL)溶液加入TFA(5mL)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16.0小時(shí)，接著用飽和碳酸氫鈉中和。分離有機(jī)物，用硫酸鎂干燥并濃縮至干，得到一種粗制固體。得到的固體物用硅膠層析(99％二氯甲烷/1％含2.0M NH3的甲醇)純化。將純的固體溶解于丙酮/乙醚混合物(1/1)中并使用2.0N HCl/乙醚沉淀。將得到的固體物真空過(guò)濾并用乙醚洗滌。高真空干燥后，總共得到132mg化合物D。
1H NMR(D2O)400MHzδ7.99(s，1H)，7.81-7.56(m，3H)，5.44(d(br)，1H，J＝50.4Hz)，5.01(d，1H，J＝9.6Hz)，4.19-3.80(m，4H)，2.66-2.22(m，2H)，1.58(s，3H)，1.43(s，3H)ppm.
實(shí)施例33 (2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(2，1，3-苯并二唑-5-基甲基)硫基]-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(2R)-3-[(2，1，3-苯并二唑-5-基甲基)硫基]-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲基丁酸室溫下向(2R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-巰基-3-甲基丁酸(1g，0.00401摩爾)的1.0N KOH溶液(50mL)加入5-(溴甲基)-2，1，3-苯并二唑(940mg，0.00441摩爾)和1，4-二烷(5mL)。17.0小時(shí)后，將反應(yīng)混合物用水稀釋并用乙醚洗滌。棄去有機(jī)物，將水層冷卻到0-5℃。使用濃鹽酸將水溶液調(diào)成酸性(pH 4.0)，并用乙酸乙酯萃取產(chǎn)物。有機(jī)物經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮至干，總共得到622mg(41％)化合物A的棕色固體。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.76(d，1H，J＝9.2Hz)，7.72(s，1H)，7.44(d，1H，J＝9.2Hz)，5.40(d(br)，1H，J＝8.0Hz)，4.46(d(br)，1H，J＝8.4Hz)，3.89(s，2H)1.47-1.40(m，15H)ppm.
B.(1R)-2-[(2，1，3-苯并二唑-5-基甲基)硫基]-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯室溫下向化合物A(622mg，0.00163摩爾)和N，N-二異丙基乙胺(632mg，0.0049摩爾)的DMF(20mL)溶液加入HATU(930mg，000244摩爾)。30分鐘后，將反應(yīng)混合物與(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(514mg，0.00180摩爾)混和。攪拌過(guò)夜后，用碳酸氫鈉猝滅反應(yīng)物，有機(jī)物用乙酸乙酯萃取兩次。將有機(jī)物用飽和氯化鈉溶液洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。真空除去溶劑并經(jīng)柱層析(1/1己烷/乙酸乙酯)純化，得到444mg(45％)化合物B。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.78(s，1H)，7.76(d，1H，J＝9.2Hz)，7.48(d，1H，J＝9.2Hz)，5.43(d(br)，1H，J＝9.6Hz)，5.45(d(br)，1H，J＝50.8Hz)，5.02(d，1H，J＝9.6Hz)，4.44(d，1H，J＝9.6Hz)，4.39-3.89(m，4H)，2.72(dd，1H，J＝15.2)，2.48-2.32(m，1H)，1.60-1.40(m，15H)ppm.
C.(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(2，1，3-苯并二唑-5-基甲基)硫基]-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向化合物B(444mg，0.770mmol)的二氯甲烷(45mL)溶液加入TFA(5mL)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16.0小時(shí)，接著用飽和碳酸氫鈉中和。分離有機(jī)物并用硫酸鈉干燥并濃縮至干，得到一種粗制固體。得到的固體物用硅膠層析(99％二氯甲烷/1％含2.0M NH3的甲醇)純化。將純的固體溶解于丙酮/乙醚混合物(1/1)中并使用2.0N HCl/乙醚沉淀。將得到的固體物真空過(guò)濾并用乙醚洗滌。高真空干燥后，總共得到105mg化合物C。
1H NMR(d6-DMS0)400MHzδ8.02-7.99(m，2H)，7.63(d，1H，J＝9.6Hz)，5.55(d(br)，1H，J＝51.2Hz)，5.07(d，1H，J＝9.2Hz)，4.22-3.98(m，5H)，2.58-2.32(m，2H)，1.48(s，3H)，1.40(s，3H)ppm.
實(shí)施例34 (2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(吡啶-4-基甲基)磺?；鵠丁?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向(1R)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基-2-[(吡啶-4-基甲基)硫基]丙基氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.1mmol)的二氯甲烷(90mL)溶液加入TFA(10mL)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16.0小時(shí)，接著加入3-氯過(guò)氧苯甲酸(2.0g，0.0114摩爾)。將反應(yīng)混合物攪拌4.0小時(shí)后用2.0N NaOH中和。分離有機(jī)物并用硫酸鈉干燥并濃縮至干，得到一種粗制固體。得到的固體物用硅膠層析(99％二氯甲烷/1％含2.0M NH3的甲醇)純化。將純的固體溶解于丙酮/乙醚混合物(1/1)中并使用2.0N HCl/乙醚沉淀。將得到的固體物真空過(guò)濾并用乙醚洗滌。高真空干燥后，總共得到22mg標(biāo)題化合物。
1H NMR(d4CDCl3)400MHzδ8.64(d，2H，J＝5.6Hz)，7.37(d，2H，J＝5.6Hz)，5.42(d(br)，1H，J＝51.2Hz)，4.94(d，1H，J＝9.6Hz)，4.77(d，1H，J＝13.2Hz)，4.39-3.75(m，4H)，2.71(dd，1H，J＝15.6Hz)，2.43-2.29(m，1H)，2.06-1.86(s(br)，2H)，1.62(s，3H)，1.46(s，3H)ppm.
實(shí)施例35
(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-吡啶-4-基丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向無(wú)水DMF(25mL)加入(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-吡啶-4-基丙酸(705mg，2.65mmol)、HATU(1.0g，265mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.46mL，2.65mmol)。室溫下攪拌30分鐘后，加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(581mg，1.99mmol)和另外的N，N-二異丙基乙胺(0.35mL，1.99mmol)。將該溶液在室溫下攪拌12小時(shí)。然后加入飽和碳酸氫鈉(100mL)，將混合物用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。有機(jī)物用飽和氯化鈉(100mL)溶液洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，濃縮至干，得到一種粗制固體。將該固體經(jīng)柱層析(硅膠，己烷/乙酸乙酯4∶1)純化，得到的固體物在HCl的二烷溶液(4.0M，20mL)攪拌2小時(shí)并接著加入乙醚(100mL)。過(guò)濾收集沉淀的固體物并經(jīng)高真空干燥得到388mg(1.3mmol，65％收率)化合物A的白色固體。
1H NMR(d6-DM5O)400MHzδ8.92(s(br)，3H)，8.84(d，2H，J＝6.2Hz)，7.96(d，2H，J＝6.2Hz)，5.45(d，1H，J＝51Hz)，5.00(d，1H，J＝8.8Hz)，4.47(m(br)，1H)，4.05-3.78(m，2H)，3.41-3.36(m，2H)，2.42-2.25(m，2H)ppm.
實(shí)施例36 (2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-吡啶-3-基丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-吡啶-3-基丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向無(wú)水DMF(25mL)加入(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-吡啶-3-基丙酸(534mg，2.0mmol)、HATU(0.76g，2.0mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.35mL，2.0mmol)。室溫下攪拌30分鐘后，加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(438mg，1.5mmol)和另外的N，N-二異丙基乙胺(0.26mL，1.5mmol)。將該溶液在室溫下攪拌12小時(shí)，然后加入飽和碳酸氫鈉(150mL)。將混合物用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。有機(jī)物用飽和氯化鈉(100mL)溶液洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮至干，得到一種粗制固體。將該固體經(jīng)柱層析(硅膠，己烷/乙酸乙酯4∶1)純化，得到的固體物在二烷-HCl溶液(4.0M，25mL)攪拌2小時(shí)，接著加入乙醚(200mL)。通過(guò)過(guò)濾收集沉淀的固體物并經(jīng)高真空干燥得到266mg(0.89mmol，59％收率)化合物A的白色固體。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ8.88(s，1H)，5.51(d，1H，J＝51Hz)，5.01(d，1H，J＝8.8Hz)，4.45-4.38(m(br)，1H)，4.00-3.86(m，2H)，3.38-3.27(m，2H)，2.42-2.30(m，3H)ppm.
實(shí)施例37 (2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-哌啶-4-基丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈二鹽酸鹽A.(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-哌啶-4-基丙酸乙酸鹽向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-哌啶-4-基丙酸(0.69g，2.58mmol)的乙酸(冰乙酸，50mL)溶液加入10％Pd/C(50％w/w，0.35g)，并在60psi氫氣氣氛下氫化。將溶液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，濃縮而得到一種白色固體。高真空干燥得到822mg(2.48mmol，96％收率)化合物A的乙酸鹽。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ10.5(s(br)，1H)，6.21-6.19(m(br)，1H)，3.69-3.62(m，1H)，3.19-3.06(m，2H)，2.75-2.65(m，2H)，1.92(s，3H)，1.80-1.45(m，6H)，1.35(s，9H)，1.21-1.05(m，1H)ppm.
B.(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶4-基]丙酸向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-哌啶-4-基丙酸乙酸鹽(1.0g，3.00mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液加入三乙胺(1.52g，15mmol)和二碳酸二叔丁酯(786mg，3.6mmol)并攪拌12小時(shí)。然后加入水(50mL)和二氯甲烷(300mL)，用1.0M HCl酸化到pH 4，接著用乙酸乙酯萃取。分離乙酸乙酯層并通經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并真空除去溶劑得到一種透明油。將該油在高真空下干燥得到1.06g(2.86mmol，95％收率)化合物B的白色固體。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ12.4(s(br)，1H)，7.08(d，1H，J＝8.3Hz)，3.98-3.81(m(br)，3H)，2.78-2.59(m(br)，2H)，1.68-1.42(m，6H)，1.39(s，16H)，1.02-0.89(m，2H)ppm.
C.(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-哌啶-4-基丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向無(wú)水DMF(25mL)加入(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酸(0.85g，2.28mmol)、HATU(0.87g，2.28mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.40mL，2.28mmol)。室溫下攪拌30分鐘后，加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(500mg，1.71mmol)和另外的N，N-二異丙基乙胺(0.30mL，1.71mmol)。將該溶液室溫下攪拌12小時(shí)后加入飽和碳酸氫鈉(100mL)。將該混合物用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，將有機(jī)物用飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。真空蒸發(fā)得到粗制固體，經(jīng)層析(硅膠，己烷/乙酸乙酯4∶1)純化得到固體物，將該固體物在二烷-HCl(4.0M，20mL)溶液中攪拌2小時(shí)，接著再加入乙醚(100mL)。通過(guò)過(guò)濾收集得到的沉淀物并在高真空下干燥，得到432mg(1.26mmol，74％收率)化合物C的白色固體。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ9.0-8.83(s(br)，2H)，8.80-8.60(s(br)，3H)，5.52(d，1H，J＝51Hz)，5.06(d，1H，J＝8.8Hz)，4.07-4.01(m(br)，1H)，3.94-3.81(m，2H)，3.23-3.20(m，2H)，2.87(s，1H)，2.74-2.66(m，3H)，2.46-2.37(m，2H)，1.95-1.91(m，1H)，1.77-1.58(m，3H)，1.42-1.31(m，1H)ppm.
實(shí)施例38 (2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-哌啶-3-基丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈二鹽酸鹽A.(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-哌啶-3-基丙酸向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-哌啶-3-基丙酸(0.8g，3.0mmol)的乙酸(冰乙酸，50mL)溶液加入10％Pd/C(50％w/w，0.40g)，并在60psi氫氣氣氛下氫化。將溶液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，濃縮，高真空干燥得到946mg(2.85mmol，95％收率)化合物A的乙酸鹽。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ10.2(s(br)，1H)，6.15-6.05(m，1H)，3.69-2.64(m，1H)，3.21-3.07(m，2H)，2.67-2.61(m，1H)，2.39-2.31(m(br)，1H)，1.95(s，3H)，1.91-1.41(m，6H)，1.91(s，9H)，1.08-1.01(m，1H)ppm.
B.(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-基]丙酸向化合物A(1.0g，300mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液加入三乙胺(1.52g，15mmol)和二碳酸二叔丁酯(786mg，3.6mmol)并攪拌12小時(shí)。然后用水(50mL)和二氯甲烷(300mL)猝滅，用1.0M HCl酸化到pH為4，接著用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層通經(jīng)硫酸鎂干燥，真空除去溶劑得到一種透明油。將該油在高真空下干燥得到1.07g(2.87mmol，95％收率)化合物B的白色固體。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ12.15(s(br)，1H)，7.17(d，1H，J＝8.3Hz)，3.95-3.87(m(br)，3H)，2.61-2.45(m(br)，2H)，1.73-1.40(m，6H)，1.35(s，16H)，1.2-0.89(m，2H)ppm.
C.(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-哌啶-3-基丙酰基]-4-氟代吡咯烷-2-甲腈二鹽酸鹽向無(wú)水DMF(25mL)加入化合物B(0.85g，2.28mmol)、HATU(0.87g，2.28mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.40mL，2.28mmol)。室溫下攪拌30分鐘后，加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(500mg，1.71mmol)和另外的N，N-二異丙基乙胺(0.30mL，1.71mmol)。將該溶液室溫下攪拌12小時(shí)后加入飽和碳酸氫鈉(100mL)。將該混合物用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，將有機(jī)物用飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。真空去除溶劑得到粗制固體，將其層析純化(硅膠，己烷/乙酸乙酯4∶1)而得到一種固體物，將這種固體物在二烷-HCl(4.0M，20mL)溶液中攪拌2小時(shí)，接著再加入乙醚(100mL)。通過(guò)過(guò)濾收集得到的沉淀物并在高真空下干燥，得到419mg(1.23mmol，72％收率)化合物C的白色固體。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ9.0-8.83(s(br)，2H)，8.60-8.50(s(br)，3H)，5.52(d，1H，J＝51Hz)，5.02(d，1H，J＝8.8Hz)，4.13-4.08(m(br)，1H)，3.99-3.87(m，2H)，3.37-3.31(m，2H)，3.05-3.01(m，1H)，2.87(m，2H)，2.46-2.37(m，2H)，1.95-1.91(m，5H)，1.22-1.11(m，1H)ppm.
實(shí)施例39 (2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-哌啶-2-基丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈二鹽酸鹽A.(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-哌啶-2-基丙酸向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-哌啶-2-基丙酸(1.6g，6.0mmol)的乙酸(冰乙酸，50mL)溶液加入10％Pd/C(50％w/w，0.80g)并在60psi氫氣氣氛下氫化。將溶液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，濃縮并高真空干燥得到951mg(2.85mmol，95％收率)化合物A的乙酸鹽。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ10.15(s(br)，1H)，6.21-6.19(m，1H)，3.69-2.64(m，1H)，3.61-3.56(m，2H)，3.27-3.12(m，2H)，2.72-2.65(m，1H)，1.89(s，3H)，1.81-1.63(m，5H)，1.52-2.42(m，1H)，1.91(s，9H)ppm.
B.(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基]丙酸向化合物A(1.5g，4.50mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液加入三乙胺(2.27g，23mmol)和二碳酸二叔丁酯(1.18g，5.4mmol)。攪拌12小時(shí)后加入水(50mL)和二氯甲烷(300mL)，接著用1.0M HCl酸化到pH為3。分離有機(jī)層并通經(jīng)硫酸鎂干燥，真空除去溶劑得到一種透明油。將該油在高真空下干燥得到1.68g(4.45mmol，95％收率)化合物B的白色固體。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ12.2(s(br)，1H)，7.15(d，1H，J＝8.3Hz)，4.25-3.99(m(br)，3H)，3.89-3.78(m(br)，2H)，2.68-2.58(m，1H)1.79-1.40(m，5H)，1.35(s，16H)，1.2-1.14(m，2H)ppm.
C.(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-哌啶-2-基丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈二鹽酸鹽向無(wú)水DMF(25mL)加入化合物B(0.85g，2.28mmol)、HATU(0.869g，2.28mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.40mL，2.28mmol)。室溫下攪拌30分鐘后，加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(500mg，1.71mmol)和另外的N，N-二異丙基乙胺(0.30mL，1.71mmol)。將該溶液室溫下攪拌12小時(shí)后加入飽和碳酸氫鈉(100mL)。將該混合物用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，將有機(jī)物用飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。真空去除溶劑得到粗制固體，將其層析純化(硅膠，己烷/乙酸乙酯4∶1)而得到一種固體物，將這種固體物在二烷-HCl(4.0M，20mL)溶液中攪拌2小時(shí)，接著再加入乙醚(100mL)。通過(guò)過(guò)濾收集得到的沉淀物并在高真空下干燥，得到365mg(1.07mmol，63％收率)化合物C的白色固體。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ9.32-9.10(s(br)，2H)，8.79-8.53(s(br)，3H)，5.51(d，1H，J＝51Hz)，5.04(d，1H，J＝8.8Hz)，4.25-4.21(m(br)，1H)，4.19-3.88(m，2H)，3.58-3.46(m，1H)，3.42-3.32(m，2H)，2.85(s，1H)，2.71-2.63(m，2H)，2.27-2.14(m，1H)，2.05-1.97(m，1H)，1.81-1.40(m，5H)ppm.
實(shí)施例40
(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-3-[1-(異丙基磺?；?哌啶-4-基]丙?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[1-(異丙基磺?；?哌啶-4-基]丙酸向?qū)嵤├?2的化合物A(1.0g，3.00mmol)的乙腈(150mL)溶液加入三乙胺(1.52g，15mmol)和異丙基磺酰氯(513mg，3.6mmol)。攪拌6小時(shí)后，真空除去乙腈并加入水(50mL)和乙酸乙酯(300mL)。分離乙酸乙酯層并通經(jīng)硫酸鎂干燥，真空除去溶劑得到一種固體物，將這種固體物用乙醚洗滌并經(jīng)高真空干燥得到860mg(2.26mmol，75％收率)化合物A的白色固體。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ12.4(s(br)，1H)，7.15(d，1H，J＝8.3Hz)，4.37-4.29(m，1H)，3.99-3.95(m(br)，1H)，3.85-3.80(m，1H)，3.62-3.58(m，1H)，2.97-2.92(m，1H)，2.42-2.37(m，1H)，1.91-1.89(m，1H)1.87-1.46(m，7H)，1.37(s，9H)，1.19-0.89(d，4H)ppm.
B.(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-3-[1-(異丙基磺?；?哌啶-4-基]丙?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向無(wú)水DMF(25mL)加入化合物A(1.75g，4.62mmol)、HATU(1.76g，4.62mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.80mL，4.62mmol)。室溫下攪拌30分鐘后，加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(1.0g，3.47mmol)和另外的N，N-二異丙基乙胺(0.60mL，3.47mmol)。將該溶液室溫下攪拌12小時(shí)后加入飽和碳酸氫鈉(110mL)。將該混合物用乙酸乙酯(2×100mL)萃取并將有機(jī)物用飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。真空去除溶劑得到粗制固體，將其層析純化(硅膠，己烷/乙酸乙酯4∶1)而得到一種固體物，將這種固體物在二烷-HCl(4.0M，20mL)溶液中攪拌2小時(shí)，接著再加入乙醚(100mL)。通過(guò)過(guò)濾收集得到的沉淀物并在高真空下干燥，得到969mg(2.35mmol，68％收率)化合物B的白色固體。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ8.51-8.44(s(br)，3H)，5.15(d，1H，J＝51Hz)，5.06(d，1H，J＝8.8Hz)，4.04-4.01(s(br)，1H)，3.96-3.84(m，2H)，3.72-3.61(m，2H)，3.51-3.37(m(br)，2H)，3.35-3.27(m，1H)，2.79-2.76(m，2H)，1.82-1.69(m，5H)，1.17(m，8H)ppm.
實(shí)施例41 (2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-3-[1-(4-甲基苯基磺酰基)哌啶-4-基]丙?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[1-(4-甲苯基磺?；?哌啶-4-基]丙酸向?qū)嵤├?2的化合物A(1.0g，3.00mmol)的乙腈(150mL)溶液加入三乙胺(1.52g，15mmol)和甲苯磺酰氯(686mg，3.6mmol)。攪拌6小時(shí)后，真空除去乙腈并加入水(50mL)和乙酸乙酯(300mL)。分離乙酸乙酯層并通經(jīng)硫酸鎂干燥，真空除去溶劑得到一種固體物，將這種固體物用乙醚洗滌并經(jīng)高真空干燥得到1.09g(2.56mmol，85％收率)化合物A的白色固體。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ12.4(s(br)，1H)，7.61(d，2H，J＝8.2Hz)，7.42(d，2H，J＝8.2Hz)，7.13(d，1H，J＝8.3Hz)，4.27-4.21(m，1H)，3.98-3.95(m，1H)，3.58-3.52(m，1H)，2.98-2.91(m，1H)，2.42(s，3H)，2.21-2.20(m，1H)，1.81-1.50(m，6H)，1.39(s，9H)，1.21-1.08(m，1H)ppm.
B.(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-3-[1-(4-甲基苯基磺?；?哌啶-4-基]丙?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向無(wú)水DMF(25mL)加入化合物A(2.13g，5.0mmol)、HATU(1.90g，5.00mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.87mL，5.0mmol)。室溫下攪拌30分鐘后，加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(1.1g，3.75mmol)和另外的N，N-二異丙基乙胺(0.65mL，3.75mmol)。將該溶液在室溫下攪拌12小時(shí)后加入飽和碳酸氫鈉(110mL)。將該混合物用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，將有機(jī)物用飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。真空去除溶劑得到粗制固體，將其層析純化(硅膠，己烷/乙酸乙酯4∶1)而得到一種固體物，將這種固體物在二烷-HCl(4.0M，20mL)溶液中攪拌2小時(shí)，接著再加入乙醚(100mL)。通過(guò)過(guò)濾收集得到沉淀物并在高真空下干燥，得到1.10g(2.4mmol，64％收率)化合物B的白色固體。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ8.21-8.05(s(br)，3H)，7.60(d，2H，J＝7.9Hz)，7.43(d，2H，J＝7.9Hz)，3.91-3.88(m，2H)，3.07-2.99(m，1H)，2.43(s，3H)，2.09-2.03(m，1H)，1.94-1.29(m，8H)，1.12-1.02(m，1H)ppm.
實(shí)施例42 (2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-3-[1-(異丙基磺?；?哌啶-3-基]丙?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[1-(異丙基磺?；?哌啶-3-基]丙酸向?qū)嵤├?3的化合物A(1.0g，3.00mmol)的乙腈(150mL)溶液加入三乙胺(1.52g，15mmol)和異丙基磺酰氯(513mg，3.6mmol)。攪拌6小時(shí)后，真空除去乙腈并加入水(50mL)和乙酸乙酯(300mL)。分離乙酸乙酯層并通經(jīng)硫酸鎂干燥，真空除去溶劑得到一種固體物，將這種固體物用乙醚洗滌并經(jīng)高真空干燥得到926mg(2.43mmol，81％收率)化合物A的白色固體。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ12.2(s(br)，1H)，7.18(d，1H，J＝8.3Hz)，3.94-3.89(m，1H)，3.55-3.49(m(br)，，2H)，3.35-3.30(m，2H)，2.89-2.85(m，1H)，2.62-2.57(m，1H)，1.91-1.42(m，5H)，1.39(s，9H)，1.19(d，6H)ppm.
B.(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-3-[1-(異丙基磺?；?哌啶-3-基]丙?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向無(wú)水DMF(25mL)加入化合物A(1.75g，4.62mmol)、HATU(1.76g，4.62mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.80mL，4.62mmol)。室溫下攪拌30分鐘后，加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(1.0g，3.47mmol)和另外的N，N-二異丙基乙胺(0.60mL，3.47mmol)。將該溶液在室溫下攪拌12小時(shí)后加入飽和碳酸氫鈉(110mL)。將該混合物用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，將有機(jī)物用飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。真空去除溶劑得到粗制固體，將其層析純化(硅膠，己烷/乙酸乙酯4∶1)而得到一種固體物，將這種固體物在二烷-HCl(4.0M，20mL)溶液中攪拌2小時(shí)，接著再加入乙醚(100mL)。通過(guò)過(guò)濾收集得到的沉淀物并在高真空下干燥，得到1.01g(2.46mmol，71％收率)化合物B的白色固體。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ8.42-8.39(s(br)，3H)，5.51(d，1H，J＝51Hz)，5.06(d，1H，J＝8.8Hz)，4.07-4.01(s(br)，1H)，3.98-3.84(m，2H)，3.52-3.49(m，1H)，3.41-3.27(m(br)，4H)，3.09-3.02(m，1H)，2.98-2.80(m，1H)，2.65-2.61(m，1H)，1.77-1.63(m，6H)，1.18(m，8H)ppm.
實(shí)施例43 (2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-3-[1-(4-甲苯基磺?；?哌啶-3-基]丙?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[1-(4-甲苯基磺?；?哌啶-3-基]丙酸向?qū)嵤├?3的化合物A(1.0g，3.00mmol)的乙腈(150mL)溶液加入三乙胺(1.52g，15mmol)和甲苯磺酰氯(686mg，3.6mmol)。攪拌6小時(shí)后，真空除去乙腈并加入水(50mL)和乙酸乙酯(300mL)。分離乙酸乙酯層并通經(jīng)硫酸鎂干燥，真空除去溶劑得到一種固體物，將這種固體物用乙醚洗滌并經(jīng)高真空干燥得到946mg(2.22mmol，74％收率)化合物A的白色固體。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ12.4(s(br)，1H)，7.61(d，2H，J＝8.2Hz)，7.41(d，2H，J＝8.2Hz)，7.15(d，1H，J＝8.3Hz)，3.98-3.91(m，1H)，3.45-3.41(m，2H)，2.42(s，3H)，2.21-2.20(m，1H)，2.05-1.95(m，1H)，1.87-1.45(m，6H)，1.42(s，9H)，1.21-1.08(m，1H)ppm.
B.(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-3-[1-(4-甲苯基磺?；?哌啶-3-基]丙酰基}-4-氟代吡咯烷-2-腈鹽酸鹽向無(wú)水DMF(25mL)加入化合物A(2.13g，5.0mmol)、HATU(1.90g，5.00mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.87mL，5.00mmol)。室溫下攪拌30分鐘后，加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(1.1g，3.75mmol)和另外的N，N-二異丙基乙胺(0.65mL，3.75mmol)。將該溶液室溫下攪拌12小時(shí)后加入飽和碳酸氫鈉(110mL)。將該混合物用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，將有機(jī)物用飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。真空去除溶劑得到粗制固體，將其層析純化(硅膠，己烷/乙酸乙酯4∶1)而得到一種固體物，將這種固體物在二烷-HCl(4.0M，20mL)溶液中攪拌2小時(shí)，接著再加入乙醚(100mL)。通過(guò)過(guò)濾收集得到的沉淀物并在高真空下干燥，得到1.17g(2.55mmol，51％收率)化合物B的白色固體。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ8.50-8.43(s(br)，3H)，7.61(d，2H，J＝7.9Hz)，7.43(d，2H，J＝7.9Hz)，5.51(d，1H，J＝51Hz)，5.07(d，1H，J＝8.8Hz)，4.07-4.01(brm，1H)，3.91-3.83(m，1H)，3.48-3.40(m，2H)，3.17-3.05(m，2H)，2.57-2.51(m，1H)，2.38(s，3H)，1.84-1.23(m，8H)，1.07-1.05(m，1H)ppm.
實(shí)施例44 (2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-(1-苯并噻吩-3-基)丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-(1-苯并噻吩-3-基)丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向無(wú)水DMF(25mL)加入(2S)-3-(1-苯并噻吩-3-基)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙酸(1.92g，6.0mmol)、HATU(2.28g，6.0mmol)和N，N-二異丙基乙胺(1.05mL，6.0mmol)。室溫下攪拌30分鐘后，加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(1.31g，4.5mmol)和另外的N，N-二異丙基乙胺(0.78mL，4.5mmol)。將該溶液室溫下攪拌12小時(shí)后加入飽和碳酸氫鈉(110mL)。將該混合物用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，將有機(jī)物用飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。濃縮至干得到粗制固體，將其層析純化(硅膠，己烷/乙酸乙酯4∶1)而得到一種固體物，將這種固體物在二烷-HCl(4.0M，20mL)溶液中攪拌2小時(shí)，接著再加入乙醚(100mL)。通過(guò)過(guò)濾收集得到的沉淀物并在高真空下干燥，得到1.0g(2.84mmol，63％收率)化合物A的白色固體。
1H NMR(d6-DMSO)400MHzδ8.70-8.61(s(br)，3H)，8.05-8.00(m，2H)，7.45-7.36(m，3H)，5.21(d，1H，J＝51Hz)，5.01(d，1H，J＝8.8Hz)，4.23-4.20(m，1H)，3.71(ddd，1H，J＝41.1，12.3，3.2Hz)，3.55-3.51(m，1H)，3.30-324(m，1H)，2.73(q，1H，J＝12.1Hz)，2.39-2.14(m，2H)ppm.
實(shí)施例45 (2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-3-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽A.2-甲基-2-[4-(三氟甲基)苯基]丙醛向冷卻到-78℃的2-甲基-2-[4-(三氟甲基)苯基]丙腈(參見(jiàn)J.Am.Chem.Soc.2000，122，712，Caron，S.等人關(guān)于這種化合物的制備的論述)的甲苯溶液(90mL)加入26.0mL 1.5M DIBAL(39.0mmol)的甲苯溶液。將得到的溶液在-78℃攪拌2.5小時(shí)后，用含乙酸鈉(6.6g)和乙酸(6.6mL)的THF水溶液(105mL/20mL)猝滅。5分鐘后，除去冷浴并在室溫下繼續(xù)攪拌20分鐘，然后加入硅藻土和乙醚。再攪拌30分鐘后，將多相溶液通過(guò)硅藻土床過(guò)濾。硅藻土用乙醚徹底清洗并然后分離水層。有機(jī)物用水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空除去溶劑。殘留油經(jīng)柱層析(5％乙酸乙酯/己烷)純化，得到4.22g(19.5mmol，75％收率)透明油狀的化合物A。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ9.52(s，1H)，7.63(d，2H，J＝8.2Hz)，7.39(d，2H，J＝8.2Hz)，1.49(s，3H)ppm.
B.2-氨基-3-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]丁腈向化合物A(1.87g，8.66mmol)的甲醇溶液(10mL)加入1.2mL30％NH4OH、H2O(6mL)和氰化鉀(592mg，9.09mmol)。室溫下向該溶液加入氯化銨(510mg，9.53mmol)。1小時(shí)后，將溶液加熱到70℃下6小時(shí)。冷卻后，將反應(yīng)物用乙酸乙酯稀釋并用飽和碳酸氫鈉溶液和水順序洗滌。經(jīng)硫酸鎂干燥后，真空除去溶劑，殘留物經(jīng)柱層析(乙酸乙酯/己烷(3∶2))純化，得到1.52g(6.27mmol，72％收率)化合物B。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.63(d，2H，J＝8.4Hz)，7.55(d，2H，J＝8.5Hz)，3.80(t，1H，J＝7.9Hz)，1.56(s，3H)，1.53(s，3H)，1.40(d(br)，2H，J＝6.9Hz)ppm.
C.2-氨基-3-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]丁酸鹽酸鹽向裝有化合物B(2.96g，12.2mmol)的燒瓶中加入10mL乙酸，接著加入60mL濃鹽酸。然后將溶液加熱回流過(guò)夜，冷卻后真空除去大部分溶劑。得到的白色固體在乙醚/己烷(2∶1)中研磨并經(jīng)真空過(guò)濾收集。高真空下抽吸后，得到3.13g(10.5mmol，86％收率)化合物C的白色固體。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ7.69-7.68(m，4H)，4.33(s，1H)，1.57(s，3H)，1.53(s，3H)ppm.
D.2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]丁酸室溫下向化合物C(3.05g，10.2mmol)的二烷(30mL)/水(7mL)溶液順序加入12.8mL 2.0M NaOH溶液(25.6mmol)和二碳酸二叔丁酯(3.13g，14.4mmol)。將溶液攪拌過(guò)夜，然后倒入到飽和碳酸氫鈉溶液中，用乙醚洗滌。乙醚層用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，然后合并水層。用1.0M HCl酸化后，有機(jī)物用乙酸乙酯萃取兩次。經(jīng)硫酸鎂干燥后，真空除去溶劑，得到3.58g(9.92mmol，97％收率)化合物D的白色固體。
1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.57(d，2H，J＝8.2Hz)，7.49(d，2H，J＝8.3Hz)，4.99(d(br)，1H，J＝9.2Hz)，4.63(d(br)，1H，J＝9.3Hz)，1.45(s，3H)，1.44(s，3H)，1.36(s，9H)ppm.
E.(1S)-1-{[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-甲基-2-{4-(三氟甲基)苯基}丙基氨基甲酸叔丁酯室溫下向化合物D(2.0g，5.54mmol)的DMF溶液(45mL)順序加入N，N-二異丙基乙胺(788mg，6.09mmol)和HATU(2.21g，5.82mmol)。將得到的溶液攪拌30分鐘，然后加入(2S，4S)-4-氟-2-吡咯烷甲腈4-甲基苯磺酸鹽(1.66g，5.82mmol)和N，N-二異丙基乙胺(752mg，5.82mmol)的DMF溶液(27mL)。攪拌過(guò)夜后，將溶液用乙酸乙酯稀釋并順序用水(3×)、飽和碳酸氫鈉和1.0M HCl洗滌。經(jīng)硫酸鎂干燥后，真空除去溶劑并將殘留深色油經(jīng)柱層析(己烷/乙酸乙酯/二氯甲烷(5∶4∶1))純化。獲得低Rf物質(zhì)(610mg，1.37mmol)(1H NMR和LC鑒定為單獨(dú)的立體異構(gòu)體)的和335mg含有所需產(chǎn)物但被另一種化合物污染的高Rf物質(zhì)。在體外測(cè)試中所述低Rf物質(zhì)顯示為(S)-非對(duì)映體。
低Rf非對(duì)映體1H NMR(CDCl3)400MHzδ7.65-7.60(m，2H)，7.59-7.55(m，2H)，5.29(d，1H，J＝9.9Hz)，5.06(dt，1H，J＝51.1，3.3Hz)，4.85(d，1H，J＝9.4Hz)，4.34(d，1H，J＝9.9Hz)，3.55(ddd，1H，J＝3.4，12.1，36.2Hz)，2.70(dd，1H，J＝12.3，17.8Hz)，2.48(t，1H，J＝15.4Hz)，2.15(m，1H)，1.53(s，3H)，1.51(s，3H)，1.40(s，9H)ppm.
F.(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-3-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽室溫下向化合物E(643mg，1.44mmol，低Rf異構(gòu)體)的二氯甲烷溶液(10mL)加入TFA(1.65g，14.4mmol)。1小時(shí)后，加入另外5當(dāng)量的TFA，總共2小時(shí)后，真空除去溶劑，將殘留油溶解于5mL二烷中。向該溶液加入10mL 4.0M HCl的二烷溶液。真空除去溶劑，接著加入二氯甲烷和乙醚。將該過(guò)程重復(fù)三次直到形成恒定量固體物。將固體物經(jīng)真空過(guò)濾收集，得到406mg(1.03mmol，72％收率)化合物F。
1H NMR(d4-MeOH)400MHzδ7.74-7.66(m，4H)，5.13(d(br)，1H，J＝51.3Hz)，4.97(d，1H，J＝9.3Hz)，4.25(s，1H)，3.52(m，1H)，2.74(dd，1H，J＝22.0，11.9Hz)，2.47-2.22(m，2H)，1.67(s，3H)，1.60(s，3H)ppm.
實(shí)施例46 (3R)-3-氨基-4-[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]-2-甲基-4-氧代丁烷-2-磺酸A.(4R)-2，2，5，5-四甲基-1，3-噻唑烷-4-甲酸向L-青霉胺(0.300g，2.01mmol)在甲醇(2mL)中的懸浮液內(nèi)加入丙酮(4mL，54.5mmol)。該溶液變得透明，攪拌約3小時(shí)后溶液又變得渾濁。將溶液濃縮得到0.377g化合物A的白色固體(99％收率)。
1H-NMR(d6-DMSO)400MHzδ3.74(s，1H)，2.48(m，2H)，1.54(m，6H)，1.43(s，3H)，1.18(s，3H)ppm.
B.(2S，4S)-4-氟-1-{[(4R)-2，2，5，5-四甲基-1，3-噻唑烷-4-基]羰基}吡咯烷-2-甲腈將化合物A(0.256g，1.35mmol)、(2S，4S)-4-氟代吡咯烷-2-甲腈甲苯磺酸鹽(0.387g，1.35mmol)、1-羥基苯并三唑水合物(0.182g，1.35mmol)和N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺(0.279g，1.35mmol)和N，N’-二異丙基乙胺(0.280mL，1.63mmol)的四氫呋喃(13mL)溶液攪拌約48小時(shí)后濃縮。殘留物溶于乙酸乙酯中并過(guò)濾。濾液用碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌。有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮。粗制混合物經(jīng)硅膠層析(5％MeOH/95％三氯甲烷)純化得到0.171g化合物B的白色固體(44％收率)。
1H-NMR(d6-DMSO)400MHzδ5.48(d，J＝50Hz，1H)，5.02(m，1H)，4.05-3.85(m，3H)，3.48(m，1H)，2.42(m，1H)，1.54(m，5H)，1.47(s，3H)，1.22(s，3H)ppm.
C.(2S，4S)-1-[(2R)-2-氨基-3-巰基-3-甲基丁?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽向化合物B(0.143g，0.501mmol)在50％(v/v)水/甲醇(20mL)溶液加入1.0N HCl(0.550mL，0.550mmol)。將該溶液在約35℃及約500毫巴下混和約1小時(shí)。將溶液濃縮，用四氫呋喃吸收，經(jīng)硫酸鎂干燥并再次濃縮，得到0.163g化合物C的灰白色固體(100％收率)。
1H-NMR(d6-DMSO)400MHzδ8.61(s，1H)，5.54(d，J＝52Hz，1H)，5.05(d，J＝9Hz，1H)，4.28-3.89(m，4H)，2.47(m，DMSO overlap，1H)，1.74(m，3H)，1.43(m，6H)，1.33(s，3H)ppm.
D.(1R)-1-{[(2S，4S)-1-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]羰基}-2-巰基-2-甲基丙基氨基甲酸叔丁酯向化合物C(0.141g，0.501mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.090mL，0.526mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液順序加入二碳酸二叔丁酯(0.120g，0.551mmol)和另外的N，N-二異丙基乙胺(0.100mL，0.584mmol)。將該溶液攪拌約2小時(shí)后濃縮。粗制化合物經(jīng)硅膠柱層析(2％甲醇/98％三氯甲烷)純化，得到0.088g油狀化合物D，其經(jīng)結(jié)晶變成白色固體(51％收率)。
1H-NMR(d6-DMSO)400MHzδ6.99(d，J＝9Hz，1H)，5.53(d，J＝51Hz，1H)，4.97(d，J＝7Hz，1H)，4.37-3.74(m，3H)，2.95(s，1H)，2.40(m，1H)，1.35(m，15H)ppm.
E.(3R)-3-氨基-4-[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]-2-甲基-4-氧代丁烷-2-磺酸向化合物D(4.412g，12.8mmol)的甲醇(18mL)溶液加入30％過(guò)氧化氫水溶液(5.9mL)。將該溶液攪拌約30小時(shí)、濃縮、凍干并在約40℃下用五氧化二磷干燥至少12小時(shí)。粗制混合物用20％甲醇/80％氯仿/乙酸溶液吸收并沉淀出固體物。將懸浮液過(guò)濾，得到0.607g化合物E的粉紅色固體(16％收率)。
1H-NMR(d6-DMSO)400MHzδ8.12(s，3H)，5.50(d，J＝50Hz，1H)，5.07(d，J＝9Hz，1H)，4.27-3.30(m，6H)，2.30(m，DMSO overlap，1H)，1.26(s，3H)，1.15(s，3H)ppm.
生物學(xué)數(shù)據(jù)材料H-Ala-Pro-pNA·HCl購(gòu)自BACHEM Bioscience Inc.(產(chǎn)品編號(hào)L-1115)。用二甲亞砜制備500mM貯備液并存貯于-20℃下。Gly-Pro-AMC購(gòu)自Enzyme System Products(產(chǎn)品編號(hào)AMC-39)并以10mM二甲亞砜貯備液形式存貯于-20℃下。受試化合物溶解成10mM二甲亞砜溶液并用作DPP-IV滴定分析的貯備液。Athens Research andTechnology，Inc制備了純化的人的DPP-IV。該材料使用DeMeester等人在J.Immunol.Methods 189，99-105.(1996)中所述的方法從人的prostasomers分離。
DPP-II分析受試化合物的100％二甲亞砜?jī)杀断盗邢♂屢涸?6-孔聚苯乙烯平底板(Costar，#9017)上進(jìn)行。含二甲亞砜但不含受試化合物的孔的平均酶活性用于計(jì)算百分抑制率的對(duì)照值。DPP-IV(20ng/mL)在微量滴定板上與受試化合物、底物和分析緩沖劑混和而得到在25mM Tris，pH 7.5，10mM KCl、140mM NaCl中的100μM H-Ala-Pro-pNA·HCl。整個(gè)肽包含對(duì)硝基苯基苯胺，其通過(guò)DPP-IV水解而釋放出吸收劑對(duì)硝基苯基苯胺。使用Molecular Device SpectraMax 250吸光度平板讀出計(jì)以20分鐘間隔在387nm波長(zhǎng)處監(jiān)測(cè)吸光度。通過(guò)具有最佳線性的數(shù)據(jù)來(lái)估計(jì)測(cè)定酶活性。酶活性值由平板讀出計(jì)軟件測(cè)得的線性擬合直接得到。
數(shù)據(jù)分析通過(guò)對(duì)數(shù)據(jù)的最佳線性擬合來(lái)估計(jì)測(cè)定。數(shù)據(jù)整理使用Microsoft Excel RoboSage進(jìn)行。
IC50值的測(cè)定將酶活性對(duì)受試化合物的濃度(包括[I]＝0)繪圖，將數(shù)據(jù)代入方程2測(cè)得IC50。
速率＝Vmax/(1+([I]/IC50))(2)Vmax是最大酶活性的最佳擬合估計(jì)值。
Ki值的測(cè)定Ki值使用假設(shè)競(jìng)爭(zhēng)模式的方程3，由IC50值計(jì)算。
Ki=IC50*[1-S(S+Km)]---(3)]]>每個(gè)實(shí)施例化合物的表觀pKi值大于5.0。
DPP-II測(cè)定中間板包含5.3μL受試化合物，沿板以兩倍系列稀釋。向中間板的每個(gè)孔加入209μL含底物(H-Lys-ALa-Pro-pNA·2HCl；產(chǎn)品編號(hào)L-2085；BACHEM Bioscience Inc.)的緩沖液(100mM乙酸鈉，pH 5.5)。向含20μL酶的測(cè)試板轉(zhuǎn)移180μL底物/受試化合物溶液引發(fā)反應(yīng)。測(cè)試時(shí)的最終濃度為100nM酶和1000μM底物/100mM NaOAc，pH5.5，2.5％DMSO，最終體積為200μL。使用Molecular DeviceSpectraMax 250吸光度平板讀出計(jì)以20分鐘間隔在387nm波長(zhǎng)處監(jiān)測(cè)吸光度5小時(shí)。
數(shù)據(jù)分析通過(guò)估計(jì)對(duì)數(shù)據(jù)的最佳線性擬合測(cè)定酶活性。使用Microsoft Excel RoboSage進(jìn)行數(shù)據(jù)整理。
IC50值的測(cè)定將酶活性對(duì)受試化合物的濃度(包括[I]＝0)繪圖，IC50通過(guò)將數(shù)據(jù)代入方程2測(cè)得。
速率＝Vmax/(1+([I]/IC50))(2)Vmax是最大酶活性的最佳擬合估計(jì)值。
Ki值的測(cè)定Ki值使用假設(shè)競(jìng)爭(zhēng)模式的方程3，由IC50值計(jì)算。
Ki=IC50*[1-S(S+Km)]---(3)]]>本發(fā)明某些化合物顯示出對(duì)DPP-II的活性，例如pKi值＞6.0，而其它如上所討論的那樣，顯示出對(duì)DPP-IV的選擇性。
體內(nèi)研究以12小時(shí)光/暗循環(huán)分別在72和50％相對(duì)濕度下飼養(yǎng)年齡和體重適合的雄性CD1小鼠。以10ml/kg載體(0.5％含0.1％吐溫80的甲基纖維素(HPMC))或1mg/kg載于溶媒中的受試化合物經(jīng)口管飼與動(dòng)物。將動(dòng)物用異熒烷麻醉，定時(shí)(0-6小時(shí))采血。按照生產(chǎn)商說(shuō)明書(Enzyme System Products，Livermore CA)使用熒光底物Gly-Pro-AMC(50μM)測(cè)量血漿DPP-IV活性。將底物與50mM Tris(pH 7.8)和20％血漿混和。將樣品在30℃培養(yǎng)20分鐘后使用具360nm激發(fā)波長(zhǎng)和460nm發(fā)射波長(zhǎng)濾光片的細(xì)胞熒光熒光分光光度計(jì)測(cè)定熒光。
對(duì)比實(shí)施例本發(fā)明的化合物證明了許多有益的特征。相信本發(fā)明化合物的有益特征是由于通過(guò)式(I)化合物取代方式的控制獲得的出乎意料的益處，但并不限于此。對(duì)比測(cè)試點(diǎn)結(jié)果示例了幾種令人驚異的益處。更具體地說(shuō)，對(duì)比試驗(yàn)表明本發(fā)明的化合物證明了(i)以血漿測(cè)得的DPP-IV抑制活性表征的提高的效力；(ii)提高的選擇性；(iii)提高的作用時(shí)間；和/或(iv)改善的安全分布。
對(duì)比實(shí)施例對(duì)比實(shí)施例1 對(duì)比實(shí)施例2對(duì)比實(shí)施例3 對(duì)比實(shí)施例4 對(duì)比實(shí)施例5 對(duì)比實(shí)施例6 比較項(xiàng)1-效力/作用時(shí)間就具體用DPP-IV抑制二肽酶來(lái)說(shuō)，證明具有對(duì)酶高親和性(即效能)的化合物令人驚異地并不需要達(dá)到治療效果所需的作用時(shí)間。本文所用術(shù)語(yǔ)“作用時(shí)間”包括化合物在一持續(xù)時(shí)間段保持效力(優(yōu)選治療效力)的能力。具有優(yōu)選作用時(shí)間水平的化合物提供了每日一次給藥的治療效力。每日一次給藥方案為制藥領(lǐng)域人們所偏愛(ài)，因?yàn)榛颊咭缽男院头奖愕脑?，其?yōu)于每日多次給藥。因此，優(yōu)選的化合物應(yīng)不僅充分有效，而且還應(yīng)具有所需的作用時(shí)間水平。
遺憾的是，正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所認(rèn)識(shí)的那樣，在效力和作用時(shí)間之間不存在必要的聯(lián)系。換句話說(shuō)，雖然一種化合物具有對(duì)DPP-IV酶的高親和力，但是這種化合物并不一定具有適合作為優(yōu)選的每日一次給藥的持續(xù)性。下面說(shuō)明效力和作用時(shí)間之間缺乏相關(guān)性。下面數(shù)據(jù)說(shuō)明本發(fā)明，但不能認(rèn)為是對(duì)本發(fā)明的限定。
以12小時(shí)光/暗循環(huán)分別在72和50％相對(duì)濕度下飼養(yǎng)年齡和體重適合的雄性CD小鼠。以溶媒(10mM乙酸)或1mg/kg溶媒中的受試化合物經(jīng)口飼與動(dòng)物。給飼化合物6小時(shí)后，將動(dòng)物用異熒烷麻醉，進(jìn)行心血采集。按照生產(chǎn)商說(shuō)明書(Enzyme System Products，Livermore CA)使用熒光底物Gly-Pro-AMC(50mM)測(cè)量血清DPP-IV活性。將底物與50mM Tris(pH 7.8)/血漿(最終20％v/v)混和并將樣品在30℃培養(yǎng)5-20分鐘。使用具360nm激發(fā)波長(zhǎng)和460nm發(fā)射波長(zhǎng)濾光片的細(xì)胞熒光熒光分光光度計(jì)測(cè)量熒光測(cè)定DPP-IV活性。使用Students T-檢驗(yàn)計(jì)算每組(n＝3)平均偏差和標(biāo)準(zhǔn)偏差并與溶媒處理的小鼠比較來(lái)測(cè)定如表I中所示的百分抑制率。
表I

如表中所示，對(duì)比實(shí)施例1、2和4均非常有效，各具有低于5.6nM的IC50值。示例本發(fā)明的實(shí)施例2和9化合物具有足夠的效力，即分別22和72的IC50值。但是，當(dāng)測(cè)試對(duì)比實(shí)施例1、2和4的作用時(shí)間時(shí)，它們各展現(xiàn)出差的作用時(shí)間水平。本發(fā)明的化合物雖然沒(méi)有它們有效，但是表現(xiàn)出對(duì)整個(gè)治療分布圖優(yōu)選的作用時(shí)間。
對(duì)比實(shí)施例5進(jìn)一步證明了效價(jià)和作用時(shí)間的不可預(yù)測(cè)性。更具體地說(shuō)，對(duì)比實(shí)施例5說(shuō)明了一種同時(shí)具有高結(jié)合親和力和作用時(shí)間的化合物。因此效價(jià)和作用時(shí)間的關(guān)系不能嚴(yán)格地表征為正相關(guān)或反相關(guān)，而是不可預(yù)測(cè)。
效力和作用時(shí)間間相關(guān)性的缺乏帶來(lái)了二肽酶的抑制劑特別是DPP-IV可預(yù)測(cè)性的缺乏。這種不可預(yù)測(cè)性以前并未被認(rèn)識(shí)到。如上所示，單單憑結(jié)合數(shù)據(jù)可能或不可能足以確定這種化合物的治療效用。除了本文討論的其它性能外，本發(fā)明的化合物具有所需的效力和作用時(shí)間水平。
對(duì)比項(xiàng)II-β-取代和環(huán)化正如本文所述，本發(fā)明的化合物具有兩個(gè)相同的β-取代，即R1和R2相同。正如本文所介紹，如實(shí)施例1和10分別示例，本發(fā)明的化合物為雙β-取代； (實(shí)施例1) (實(shí)施例10)因此，使用實(shí)施例10作為一個(gè)例子，一種優(yōu)選的實(shí)施方案是R1和R2各為烷基，更優(yōu)選各為C1-C6烷基，更優(yōu)選各為甲基。另一優(yōu)選的實(shí)施方案由實(shí)施例1示例，即R1和R2各為芳基，更優(yōu)選為苯基，并且如實(shí)施例2示例，更優(yōu)選為被鹵素(優(yōu)選氟)取代的苯基。一般來(lái)說(shuō)，二β-取代化合物(如本發(fā)明的化合物)并不易與腈環(huán)化形成環(huán)脒，因此是穩(wěn)定的。
另一方面，單β-取代化合物(如如上所述的β-碳并不攜帶兩個(gè)相同取代基的對(duì)比實(shí)施例3和4)易于環(huán)化，因此表現(xiàn)出較短穩(wěn)定性半衰期(t1/2)。
此外，通常在β-碳具偕取代型的化合物也表現(xiàn)出更好的選擇性。
對(duì)DPP-IV化合物的穩(wěn)定性研究通常將0.2-0.5mg化合物溶解于在HPLC樣品管瓶中的1mL磷酸鹽緩沖的鹽水(PBS)中，并置于恒溫控制在37℃的自動(dòng)進(jìn)樣器中。獲得在初始時(shí)點(diǎn)的HPLC色譜圖以及后續(xù)在24、48、72等小時(shí)點(diǎn)的HPLC色譜圖。
HPLC方法柱Phenomenex Luna C18(2)，3μ，100×4.6mm，恒溫在40℃流動(dòng)相A95∶5∶0.2％水∶乙腈∶三氟乙酸流動(dòng)相B5∶95∶0.2％水∶乙腈∶三氟乙酸流速1mL/分梯度15分鐘從0到100％BUV檢測(cè)波長(zhǎng)215nm。
將藥物峰下面積與各色譜圖最初面積相比，并以最初時(shí)間(t0)殘留百分比畫圖。
化合物環(huán)化/降解反應(yīng)半衰期(t1/2)的比較表明二-β-取代化合物(如實(shí)施例2和9)顯示出增加的穩(wěn)定性。升高的t1/2直接與升高的化合物穩(wěn)定性相關(guān)。
表2

*注對(duì)于對(duì)比實(shí)施例3來(lái)說(shuō)，自動(dòng)進(jìn)樣器并未如上所述那樣恒溫控制，而是自動(dòng)進(jìn)樣器留在室溫下。一般來(lái)說(shuō)每升高10℃，反應(yīng)速率提高兩倍，依此t1/2降低兩倍。正如會(huì)被本領(lǐng)域技術(shù)人員所認(rèn)識(shí)的那樣，對(duì)對(duì)比實(shí)施例3合理計(jì)算的t1/2將會(huì)是室溫(23℃)下測(cè)量值的一半(或更低)。
因此，除了效價(jià)和作用時(shí)間外，本發(fā)明的化合物也具有所需的穩(wěn)定性。
對(duì)比項(xiàng)III-安全分布狗是常用于滿足常規(guī)需要的普通非嚙齒動(dòng)物。選擇小獵兔犬檢查本發(fā)明化合物的安全性，因?yàn)槿藗兪煜み@種動(dòng)物的普通病理學(xué)和對(duì)各種藥物的反應(yīng)。9到12個(gè)月(5到12kg)的狗(Marshall Farms Inc，North Rose，NY，USA)經(jīng)口每日給飼10mL/kg/天溶媒(10mM乙酸，pH3.3)或含受試化合物的溶媒。每次給藥后用約10mL水沖洗，在各隨后的給藥之間的24-48小時(shí)每日一次。如果沒(méi)有觀察到限定胃腸毒性，在先行給藥約24小時(shí)后立即將劑量增加3倍。限定的胃腸毒性包括腹瀉、松散或粘液糞便、血便和/或腸上皮脫落。治療期間每日至少做三次臨床觀察(給藥前一次、給藥后約一小時(shí)一次和與午后活性檢查一起一次)。按照生產(chǎn)商說(shuō)明書(Enzyme System Products，Livermore CA)使用熒光底物Gly-Pro-AMC(50μM)測(cè)量血清DPP-IV活性。將底物與50mM Tris(pH 7.8)/血漿(最終20％v/v)混和并將樣品在30℃培養(yǎng)5-20分鐘。使用具360nm激發(fā)波長(zhǎng)和460nm發(fā)射波長(zhǎng)濾光片的細(xì)胞熒光熒光分光光度計(jì)測(cè)量熒光測(cè)定DPP-IV活性。
上面示例的化合物(如對(duì)比實(shí)施例5)包含較小的P2部分(通過(guò)分子量測(cè)定)。因此在所述的逐步增加劑量的研究中測(cè)試對(duì)比實(shí)施例5和本文所述的具有較大P2部分的本發(fā)明化合物(即例如實(shí)施例2和9)。
基于對(duì)狗的劑量逐步增加研究，0.3mg/kg對(duì)比實(shí)施例5導(dǎo)致帶少量血的松散/粘液糞便，而1mg/kg本發(fā)明化合物(實(shí)施例9)沒(méi)有不良反應(yīng)。但是增加到3mg/kg后，實(shí)施例9導(dǎo)致帶少量血的松散/粘液糞便。
相反，口服給藥0.2mg/kg對(duì)比實(shí)施例5后12小時(shí)，對(duì)比實(shí)施例5抑制DPP42％。令人驚異的是，0.2mg/kg實(shí)施例9抑制了DPP476％，表明實(shí)施例9顯著抑制了血清中DPP4活性。
同樣，對(duì)其它本發(fā)明化合物來(lái)說(shuō)，10mg/kg的實(shí)施例2對(duì)胃腸毒性沒(méi)有不良影響，0.5mg/kg的實(shí)施例2在口服給藥后12小時(shí)抑制DPP4 45％。
基于對(duì)狗的逐增劑量研究，優(yōu)選具有較大分子量P2部分的本發(fā)明化合物如實(shí)施例2和9。
比較項(xiàng)IV-氟代對(duì)非氟代當(dāng)本發(fā)明化合物在0到10小時(shí)的時(shí)間段體內(nèi)試驗(yàn)時(shí)，本發(fā)明的氟代化合物比非氟代相應(yīng)物質(zhì)具有顯著提高的DPP-IV抑制率。因此本發(fā)明的化合物提供了出乎意料的前所未有的效力。例如對(duì)比了實(shí)施例2和其非氟代物質(zhì)對(duì)比實(shí)施例6來(lái)測(cè)定4-氟取代基的益處。令人驚異的是4-氟取代基極大延長(zhǎng)了酶抑制劑結(jié)合并同時(shí)提供了效價(jià)的顯著增加。這些有益性質(zhì)在此前并未為人所認(rèn)識(shí)。
表3

所有研究遵從實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物養(yǎng)護(hù)原則(NIH發(fā)布號(hào)85-23，1985年修訂)和對(duì)動(dòng)物使用的GlaxoSmithKline政策。
盡管詳細(xì)示例說(shuō)明和描述了本發(fā)明的具體實(shí)施方案，但是本發(fā)明并不限于此。上面對(duì)優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)上面不應(yīng)看作對(duì)本發(fā)明的限定。本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地進(jìn)行修改，所有不背離本發(fā)明宗旨的修改均擬包括在所附權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種選自下面的化合物(1)(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二苯基丙酰基]-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(2)(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-5-(4-氟苯基)-3，3-二甲基戊?；鵠-4-氟-2-吡咯烷甲腈鹽酸鹽；(3)(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-4-(4-氟苯基)-3，3-二甲基丁?；鵠-4-氟吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(4)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(4-甲氧基芐基)硫基]-3-甲基丁酰基}-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(5)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(3-苯基丙基)硫基]丁酰基}-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(6)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(2-苯基乙基)硫基]丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(7)(2S，4S)-1-((2R)-2-氨基-3-{[3-(4-氟苯基)丙基]硫基}-3-甲基丁?；?-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(8)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(4-甲氧基芐基)磺?；鵠-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(9)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(4-甲氧基芐基)亞磺?；鵠-3-甲基丁酰基}-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(10)(2S，4S)-1-((2R)-2-氨基-3-甲基-3-{[4-(三氟甲基)芐基]硫基}丁?；?-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(11)(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-2-(1-乙烯基環(huán)戊基)乙酰基]-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(12)(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-5-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基戊?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(13)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(3-苯基丙基)磺?；鵠丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈；(14)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(4-甲基芐基)磺?；鵠丁酰基}-4-氟代吡咯烷-2-甲腈；(15)(2S，4S)-1-((2R)-2-氨基-3-{[4-(芐氧基)芐基]磺?；鶀-3-甲基丁酰基)-4-氟代吡咯烷-2-甲腈；(16)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(4-氰基芐基)磺?；鵠-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈；(17)(2S，4S)-1-((2R)-2-氨基-3-甲基-3-{[4-(甲基磺?；?芐基]磺?；鶀丁?；?-4-氟代吡咯烷-2-甲腈；(18)(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-2-[1-(4-氟芐基)環(huán)戊基]乙?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(19)(2S，4S)-1-((2S)-2-氨基-2-{1-[4-(三氟甲基)苯基]環(huán)戊基}乙?；?-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(20)(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-2-[1-(4-氟芐基)環(huán)丙基]乙?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(21)(2S，4S)-1-[(2R)-2-氨基-3-(芐基磺?；?-3-甲基丁酰基]-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(22)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(3-甲氧基芐基)磺?；鵠-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(23)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(1，1′-聯(lián)苯-4-基甲基)磺?；鵠-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(24)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(2-甲氧基芐基)磺?；鵠-3-甲基丁酰基}-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(25)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(吡啶-3-基甲基)硫基]丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈；(26)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(吡啶-2-基甲基)硫基]丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(27)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(吡啶-4-基甲基)硫基]丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(28)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(4-氟芐基)磺酰基]-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(29)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(3-苯氧基芐基)磺?；鵠丁酰基}-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(30)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(3-苯氧基芐基)硫基]丁酰基}-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(31)(2S，4S)-1-((2R)-2-氨基-3-{[(5-氯-1，1-二氧化-1-苯并噻吩-3-基)甲基]磺?；鶀-3-甲基丁?；?-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(32)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-[(2，1，3-苯并二唑-5-基甲基)硫基]-3-甲基丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(33)(2S，4S)-1-{(2R)-2-氨基-3-甲基-3-[(吡啶-4-基甲基)磺?；鵠丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(34)(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-吡啶-4-基丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(35)(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-吡啶-3-基丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(36)(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-哌啶-4-基丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈二鹽酸鹽；(37)(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-哌啶-3-基丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈二鹽酸鹽；(38)(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-哌啶-2-基丙?；鵠-4-氟代吡咯烷-2-甲腈二鹽酸鹽；(39)(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-3-[1-(異丙基磺酰基)哌啶-4-基]丙?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(40)(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-3-[1-(4-甲基苯基磺?；?哌啶-4-基]丙?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(41)(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-3-[1-(異丙基磺?；?哌啶-3-基]丙酰基}-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(42)(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-3-[1-(4-甲基苯基磺?；?哌啶-3-基]丙?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(43)(2S，4S)-1-[(2S)-2-氨基-3-(1-苯并噻吩-3-基)丙酰基]4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；(44)(2S，4S)-1-{(2S)-2-氨基-3-甲基-3-[4-(三氟甲基)苯基]丁?；鶀-4-氟代吡咯烷-2-甲腈鹽酸鹽；和(45)(3R)-3-氨基-4-[(2S，4S)-2-氰基-4-氟代吡咯烷-1-基]-2-甲基-4-氧代丁烷-2-磺酸。
2.一種藥物制劑，所述藥物制劑包括權(quán)利要求1的化合物。
3.權(quán)利要求2的藥物制劑，所述藥物制劑還包括一種藥學(xué)上可接受的載體。
4.權(quán)利要求1的化合物在制備用于抑制切割次末端脯氨酸/丙氨酸的蛋白酶藥物中的用途。
5.權(quán)利要求4的用途，其中所述切割次末端脯氨酸/丙氨酸的蛋白酶為絲氨酸蛋白酶。
6.權(quán)利要求5的用途，其中所述絲氨酸蛋白酶為二肽酶。
7.權(quán)利要求6的用途，其中所述二肽酶為DPP-II。
8.權(quán)利要求6的用途，其中所述二肽酶為DPP-IV。
9.權(quán)利要求1的化合物在制備用于治療或預(yù)防代謝病、胃腸病、病毒病、炎癥疾病、糖尿病、肥胖癥、高脂血癥、皮膚病或粘膜疾病、牛皮癬、腸道疾病、便秘、自身免疫病、腦脊髓炎、補(bǔ)體介導(dǎo)的疾病、腎小球性腎炎、脂肪營(yíng)養(yǎng)不良、組織損傷、身心疾病、抑郁、神經(jīng)精神疾病、HIV感染、變態(tài)反應(yīng)、炎癥、關(guān)節(jié)炎、移植排斥、高血壓、充血性心力衰竭、腫瘤和緊張性流產(chǎn)的藥物中的用途。
10.權(quán)利要求9的用途，其中所述疾病為糖尿病。
11.一種藥物制劑，所述藥物制劑包含權(quán)利要求1的化合物和一種或多種另外的抗糖尿病藥。
12.權(quán)利要求11的藥物制劑，其中所述一種或多種另外的抗糖尿病藥選自胰島素、α-葡糖苷酶抑制劑、雙縮胍、胰島素促分泌素、胰島素致敏物或其組合。
13.權(quán)利要求12的藥物制劑，其中所述另外的抗糖尿病藥選自胰島素甲福明、PPAR-γ激動(dòng)劑或其組合。
14.一種藥物制劑，所述藥物制劑包含權(quán)利要求1的化合物和甲福明。
15.一種藥物制劑，所述藥物制劑包含權(quán)利要求1的化合物和Avandia。
16.一種藥物制劑，所述藥物制劑包含權(quán)利要求1的化合物、甲福明和Avandia。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新化合物，其抑制絲氨酸蛋白酶，如二肽酶IV(DPP－IV)等二肽酶的用途及其制備方法和其治療用途。
文檔編號(hào)C07D277/38GK1990468SQ200710004469
公開(kāi)日2007年7月4日 申請(qǐng)日期2002年6月26日 優(yōu)先權(quán)日2001年6月27日
發(fā)明者C·D·哈夫納, D·L·麥克杜加爾德, A·S·蘭哈瓦, S·M·賴斯特, J·M·倫哈德 申請(qǐng)人:史密絲克萊恩比徹姆公司