專利名稱：9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯的純化工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及氨基酸保護劑9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯(簡稱FMOC-OSu)的純化工藝技 術(shù)領(lǐng)域，尤其是采用去離子水低溫析晶純化9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯(簡稱FMOC-OSu) 的方法。
背景技術(shù)：
多肽藥物和診斷試劑已引起我國的高度重視，我國制定的"十五"期間生物醫(yī)藥研究的重 點方向之一就是多肽藥物和診斷試劑。如多肽疫苗、抗腫瘤多肽、抗病毒多肽、細胞因子模 擬肽、抗菌性活性肽、用于心血管疾病的多肽以及診斷用多肽等，在未來幾年里將會有大量 的多肽藥物和試劑進入臨床試驗。部分將被批準(zhǔn)生產(chǎn)銷售。由于諸如胸腺肽a、抗艾滋病藥 T-20等眾多多肽藥物的不斷推出，以及它們在治療病毒性感染、心血管疾病、抗腫瘤及艾滋 病等疾病的優(yōu)良功效，且沒有傳統(tǒng)氯化、硝化、磺化等工藝生產(chǎn)的常用藥物的副作用。因此， 多肽藥物合成已成為最活躍的生化科技領(lǐng)域之一，也正成為世界各大制藥公司研制與生產(chǎn)的 熱門。
多肽是由氨基酸殘基通過肽鍵連接成的一類化合物，多肽在化學(xué)合成中對氨基酸的保護 要求很高，因此，作為多肽合成最重要的氨基酸保護劑之一的9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯 (FMOC-Osu)市場前景十分廣闊。化學(xué)合成多肽一般需經(jīng)四個步驟1、保護非反應(yīng)性基團； 2、活化羧基；3、形成肽鍵；4、脫保護基團。1963年，R.B Merrifield創(chuàng)立了將氨基酸的末 端固定在不溶性樹脂上，然后在此樹脂上依次縮合氨基酸，延長肽鏈，合成蛋白質(zhì)的固相合 成法，在固相法中，每步反應(yīng)后只需簡單地洗滌樹脂，便可達到純化目的，克服了經(jīng)典液相 合成法中每一步產(chǎn)物都需純化的困難，奠定了自動化合成肽的基礎(chǔ)，為此，Merrifield獲得了 1984年諾貝爾化學(xué)獎。FMOC固相法由于在合成含有酸性條件下不穩(wěn)定的氨基肽時，具有特 別優(yōu)越之處，因而9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯(FMOC-Osu)作為提供FMOC基團最有效的 原料，近年來，得到了飛速發(fā)展。
9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯(FMOC-Osu)的合成方法很多，文獻早有報道，但所得9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯(FMOC-Osu)純度不高，雜質(zhì)多，不能直接用于多肽藥劑的合成, 必須經(jīng)過純化。Lucas Lapatsanis等人在文獻Synthesis Communication 72,671-674(1983)中闡述 了用石油醚重結(jié)晶純化9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯(簡稱FMOC-OSu)的方法。此法雖原料
易得，但需用大量溶劑，且重結(jié)晶時由于溫度較高，易產(chǎn)生9-芴甲烯雜質(zhì)，產(chǎn)品質(zhì)量受到一 定影響。
Alenka Paquet等人在文獻Can丄Chem.60，976-80(1982)中報導(dǎo)了用氯仿一乙醚重結(jié)晶純化 9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯(簡稱FMOC-OSu)的方法。此法操作條件溫和，產(chǎn)品純度也高， 但乙醚揮發(fā)性強，損耗高，且使用極不安全，難以工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供的9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯(簡稱FMOC-OSu)純化工藝，其技術(shù)特征是 先用現(xiàn)有技術(shù)制備出9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯粗品溶液，再采用去離子水低溫析晶純化9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯(簡稱FMOC-OSu)的方法，得到熔點147.2°C 148.2。C、雜質(zhì)9-芴甲烯小于0.1%、純度大于99%的精品9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯(簡稱FMOC-OSu)。在 9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯粗品溶液中，按體積比加入去離子水，去離子水體積與9-芴甲氧 羰酰丁二酰亞胺酯溶液體積比為5 1 : 1，攪拌析晶，析晶溫度為0 25'C，析晶時間為2小 時。過濾，用脂肪醇浸泡，脂肪醇為1 4個碳原子的脂肪醇，脂肪醇與FMOC-OSu較適宜 的體積重量比為2 1 : 1，浸泡時間為1 2小時，洗滌的溫度為0 25。C，洗滌時間為1 2 小時，洗滌次數(shù)為2 3次，烘干后即得熔點147.2。C 148.2°C，雜質(zhì)9-芴甲烯小于0.1%, 純度大于99%的精品9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯(簡稱FMOC-OSu)。所用脂肪醇回收后可 循環(huán)使用。
本發(fā)明所提供的FMOC-OSu純化是在常溫以下進行，不會帶來高溫重結(jié)晶過程易產(chǎn)生雜 質(zhì)以及乙醚易揮發(fā)帶來的不安全隱患，本發(fā)明工藝簡單，條件溫和，原料易得，所用的洗滌 溶劑對FMOC-OSu產(chǎn)品中各不純物質(zhì)均有較大溶解度，而對產(chǎn)品溶解度小，單個雜質(zhì)含量低， 有效的控制了雜質(zhì)9-芴甲烯的生成，使產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，大大提高了產(chǎn)品的純度和收率，純化 所用的溶劑能完全循環(huán)使用，對環(huán)境友好，并且產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，易于工業(yè)化生產(chǎn)，完全滿足 多肽合成中保護氨基酸的要求。


圖l是本發(fā)明的工藝流程圖。 具體實施例
以下結(jié)合實施例，對本發(fā)明作進一步說明，但本發(fā)明不僅僅局限于以下的實施例。 實施例1:
在500ml三口瓶中加入含50g FMOC-OSu的溶液200mL，降溫至0°C ，緩慢加入去離子水200mL，控制溫度低于25'C,加完攪拌1小時，降溫至10'C以下析晶，過濾。將濾餅加入 到250mL乙醇中，控溫低于25'C攪拌1小時，過濾，用少量乙醇洗滌，濾餅干燥，得46g FMOC-OSu，純度99.5%， 9-荷甲烯雜質(zhì)小于0.1%,熔點147.5 M8.2。C。 實施例2:
500ml三口瓶中中，加入含50g FMOC-OSu溶液200mL，降溫至0。C，控制溫度低于25 'C，緩慢加入去離子水200mL，加完攪拌l小時，降溫至10'C以下析晶，過濾，將濾餅加入 250mL異丙醇中，控溫低于25'C攪拌1小時，過濾，用少量異丙醇洗滌，濾餅干燥，得45g FMOC-OSu，純度99.2%， 9-芴甲烯雜質(zhì)小于0.1%，熔點147.2 148.1°C 。
實施例3:
500Lml三口瓶中搪瓷反應(yīng)釜中，加入含50gFMOC-OSu溶液200mL，降溫至0。C，緩慢 加入去離子水200mL，控制溫度小于25t:，加完攪拌1小時，降溫至10'C以下析晶，過濾。 將濾餅加入回收的250mL乙醇中，控溫低于25。C攪袢1小時，過濾，用少量乙醇洗滌，濾餅 干燥，得46g FMOC-OSu，純度99.7%， 9-荷甲烯雜質(zhì)小于0.1%，熔點147.5 148.2°C 。
實施例4:
500ml三口瓶中搪瓷反應(yīng)釜中，加入含50g FMOC-OSu溶液200mL，降溫至0。C，緩慢 加入去離子水200mL，控制溫度小于25'C，加完攪拌1小時，降溫至1(TC以下析晶，過濾。 將濾餅加入二次回收的250mL乙醇中，控溫低于25。C攪拌1小時，過濾，用少量乙醇洗滌， 濾餅干燥，得46g FMOC-OSu，純度99.5%， 9-芴甲烯雜質(zhì)小于0.1%，熔點147.2~148.2°C。
實施例5:
500ml三口瓶中搪瓷反應(yīng)釜中，加入含50g FMOC-OSu溶液200mL，降溫至0。C，緩慢 加入去離子水400mL，控制溫度小于25'C，加完攪拌1小時，降溫至1(TC以下析晶，過濾。 將濾餅加入二次回收的250mL乙醇中，控溫低于25'C攪拌1小時，過濾，用少量乙醇洗滌， 濾餅干燥，得46gFMOC-OSu，純度99.8%， 9-芴甲烯雜質(zhì)小于0.1%，熔點147.8 148.2。C。
實施例6:
500ml三口瓶中搪瓷反應(yīng)釜中，加入含50g FMOC-OSu溶液200mL，降溫至(TC，緩慢 加入去離子水200mL，控制溫度小于15。C，加完攪拌1小時，降溫至1(TC以下析晶，過濾。 將濾餅加入二次回收的250mL乙醇中，控溫低于25。C攪拌1小時，過濾，用少量乙醇洗滌， 濾餅干燥，得46g FMOC-OSu，純度99.6%， 9-芴甲烯雜質(zhì)小于0.1%，熔點147.6 148.2°C。
實施例7:
500ml三口瓶中搪瓷反應(yīng)釜中，加入含50g FMOC-OSu溶液200mL，降溫至0°C ，緩慢 加入去離子水200mL，控制溫度小于25'C，加完攪拌l小時，降溫至1(TC以下析晶，過濾。 將濾餅加入二次回收的500mL乙醇中，控溫低于25'C攪拌1小時，過濾，用少量乙醇洗滌， 濾餅干燥，得46g FMOC-OSu，純度99.7%， 9-芴甲烯雜質(zhì)小于0.1%，熔點147.7 148.2°C 。
權(quán)利要求
1、9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯純化工藝，其特征在于，先用現(xiàn)有技術(shù)制備出9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯粗品溶液，再采用去離子水低溫析晶純化9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯的方法，在9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯粗品溶液中，按體積比加入去離子水，去離子水體積與9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯溶液體積比為5～1∶1，攪拌析晶，析晶溫度為0～25℃，析晶時間為1～2小時，過濾，用脂肪醇浸泡洗滌，浸泡時間為1～2小時，洗滌時間為1～2小時，洗滌的溫度為0～25℃，洗滌次數(shù)為2～3次，烘干后即得熔點147.2℃～148.2℃，雜質(zhì)9-芴甲烯小于0.1％，純度大于99％的精品9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的19-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯純化工藝，其特征在于所述的脂 肪醇為1 4個碳原子的脂肪醇，脂肪醇與9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯的體積重量比為2 1:1。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯的純化工藝，其特征在于純化所用 溶劑脂肪醇循環(huán)使用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種采用去離子水低溫析晶純化9-芴甲氧羰酰丁二酰亞胺酯(簡稱FMOC-OSu)的方法。本發(fā)明所提供的FMOC-Osu純化工藝簡單，條件溫和，原料易得且能完全循環(huán)使用，收率高，易于工業(yè)化生產(chǎn)。精制純化的產(chǎn)品純度高，單個雜質(zhì)含量低，有效的控制了9-芴甲烯雜質(zhì)生成，使產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，完全能滿足多肽合成中保護氨基酸的要求。
文檔編號C07D207/00GK101096356SQ20071003430
公開日2008年1月2日 申請日期2007年1月24日 優(yōu)先權(quán)日2007年1月24日
發(fā)明者徐建兵, 楊興武, 涂昌位, 臧陽陵, 鄧志謀 申請人:湖南化工研究院