專利名稱：：一類新型二肽基肽酶抑制劑、合成方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一類新型二肽基肽酶IV(Dip印tidylp印tidases，DPP-IV)抑制劑、其制備方法以及其在制備治療DPP-IV相關(guān)的疾病藥物、特別是制備治療糖尿病，肥胖癥，高血脂藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：糖尿病是一種由于胰島素分泌不足或胰島素抵抗而導(dǎo)致的碳水化合物、脂肪及蛋白質(zhì)代謝異常，而以慢性高血糖(空腹血糖濃度大于130mg/dL)和糖尿為主要特征的一組臨床綜合癥。持續(xù)的高血糖會導(dǎo)致許多并發(fā)癥的產(chǎn)生，如視網(wǎng)膜、腎臟、神經(jīng)系統(tǒng)病變及血管并發(fā)癥，尤其心血管并發(fā)癥是糖尿病患者致死致殘的主要威脅，所以控制病人的血糖水平對于延緩或阻斷并發(fā)癥的產(chǎn)生極為重要。目前，治療2型糖尿病的藥物主要有胰島素、雙胍類如二甲雙胍、磺酰尿類如格列美脲、a-葡萄糖苷酶抑制劑如阿卡波糖、列奈類如那格列奈、列酮類如羅格列酮。但這些藥物除療效有限外，都有明顯的副作用，因此迫切需要新的更有效、更安全的治療糖尿病藥物。胰高血糖素樣肽-l(GLP-l)由胰島a細(xì)胞和腸道L細(xì)胞分泌，具有葡萄糖依賴性促胰島素分泌以及增加胰島素的生物合成的作用，因此使用GLP-1治療糖尿病引起科學(xué)家極大興趣。GLP-1除了具有促進(jìn)胰島素分泌作用外，還具有促進(jìn)e-細(xì)胞增生、抗e-細(xì)胞凋亡、抑制胰高血糖素和肝糖的生成、抑制食欲、降低胃腸排空速度、保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞等生理功能[TrendsEndocrinolMetab，1999,10(6):229-235]。GLP-1是含有30個氨基酸的多肽，葡萄糖和脂肪可刺激其釋放。GLP-1這些特點使其成為理想的糖尿病治療藥物。GLP-l連續(xù)靜脈滴注可以降低糖尿病患者血糖，甚至對磺酰脲治療失敗的患者依然有效，但是單次皮下注射GLP-1無效，而連續(xù)6周皮下注射效果理想。產(chǎn)生這一現(xiàn)象的原因是GLP-1在體內(nèi)的半衰期僅數(shù)分鐘，能被內(nèi)源性二肽基肽酶(DPP-IV)迅速降解，除去W端二肽，而失去促胰島素分泌活性[ExpertOpin.Investing.Drugs,2004，13(9):1091-1102]。DPP-IV在人體內(nèi)廣泛分布，是GLP-1的主要代謝酶，在調(diào)控GLP-l活性中發(fā)揮著重要作用。因此抑制DPP-IV的活性化合物即DPPIV抑制劑，可增強(qiáng)GLP-l(腸降糖素)的作用，可望成為新型的2型糖尿病治療藥物?，F(xiàn)有文獻(xiàn)和專利公開了許多DPP-IV抑制劑[CurrentMedicinalChemistry,1999，6，311-327;Biochemistry1999，38，11597-11603;ExpertOpin.Investing.Drugs,2005，15(10):1387-1407;ExpertOpin.Ther.Patents,2003，13(4):499-510]。WO00/34241公開了具有DPP-IV抑制活性的N-取代-2-氰基吡咯類化合物，其金剛垸部分為單取代或簡單垸基取代，US2003/0100563公開了用于治療糖尿病的P-氨基雜環(huán)類DPP-IV抑制劑，WO03/057666公開了環(huán)丙烷化的2-氰基吡咯類DPP-IV抑制劑，US2004/0171848公開了一系列含有偕二苯基側(cè)鏈的2-氰基吡咯化合物，WO2005/095381公開了一類新結(jié)構(gòu)的2，4-二氧-3，4-二氫嘧啶類DPP-IV抑制劑。然而，現(xiàn)有技術(shù)中這些化合物對二肽基肽酶的抑制性還不夠令人滿意，因此本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)高活性的二肽基肽酶抑制劑，以便治療各種與二肽基肽酶(DPP-IV)相關(guān)的各種疾病。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一類新型二肽基肽酶IV(Dip印tidylp印tidases,DPP-IV)抑制劑、其制備方法及其應(yīng)用。本發(fā)明的第一方面，提供了一種式(I)所示的化合物，或其各光學(xué)異構(gòu)體、各晶型、藥學(xué)上可接受的無機(jī)或有機(jī)鹽、水合物或溶劑合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>式中，仏為氫、氯、氟、溴、羥基或C「C6的烷氧基;R2為氫、氯、氟、溴或羥基；R3為氫或氟；且當(dāng)R3為氫時，Ri、R2中至少一個為鹵素。在另一優(yōu)選例中，R為氯或氟。在另一優(yōu)選例中，R2為氫或羥基。在另一優(yōu)選例中，R3為氟。在另一優(yōu)選例中，所述化合物選自下組(2S)-1-[(3-氟-5-羥基-1-金剛烷基)氨基乙?；鵠-2-氰基吡咯垸(YF-4);(2S，4S)-1-[(3-氟-5-羥基-1-金剛垸基)氨基乙?；鵠-4_氟-2-氰基吡咯烷(YF-12);(2S，4S)-1-[(3-羥基-1-金剛烷基)氨基乙?；鵠-4-氟-2-氰基吡咯烷(YF-8);(2S)-1-[(3-氯-5-羥基-1-金剛烷基)氨基乙?；鵠-2-氰基吡咯烷(YF-3);(2S，4S)-l-[(3-氯-5-羥基-1-金剛烷基)氨基乙?；鵠-4-氟-2-氰基吡咯烷(YF-9)。本發(fā)明的第二方面，提供了一種藥物組合物，它含有藥理上可接受的賦形劑或載體，以及本發(fā)明的上述化合物、或其各光學(xué)異構(gòu)體、各晶型、藥學(xué)上可接受的無機(jī)或有機(jī)鹽、水合物或溶劑合物。本發(fā)明的第三方面，提供了本發(fā)明的上述化合物、或其各光學(xué)異構(gòu)體、各晶型、藥學(xué)上可接受的無機(jī)或有機(jī)鹽、水合物或溶劑合物的用途，它們被用于制備DPP-IV抑制劑。本發(fā)明的第四方面，提供了本發(fā)明上述化合物、或其各光學(xué)異構(gòu)體、各晶型、藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑合物的用途，它們被用于制備治療、預(yù)防以及緩解與DPP-IV相關(guān)的疾病的藥物。在另一優(yōu)選例中，所述的與DPP-IV相關(guān)的疾病選自糖尿病、肥胖癥、高血脂。本發(fā)明的第五方面，提供了本發(fā)明上述化合物、或其各光學(xué)異構(gòu)體、各晶型、藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑合物的制造方法，其中所述方法包括如下步驟在惰性溶液中，堿性條件下，使式(II)所示化合物與式(III)所示化合物反應(yīng)生成式(I)所示化合物，6式中，R,為氫、氯、氟、溴、羥基或d-C6的烷氧基；R2為氫、氯、氟、溴或羥基；R3為氫或氟；且當(dāng)R3為氫時，RhR2中至少一個為鹵素。在另一優(yōu)選例中，所述方法的各式中，R為氟，R2為羥基，R3為氫。在另一優(yōu)選例中，所述方法的各式中，R,為氟，R2為羥基，&為氟。在另一優(yōu)選例中，所述方法的各式中，R,為羥基，&為氫，&為氟。具體實施例方式本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，篩選了大量的化合物，首次發(fā)現(xiàn)式(I)化合物對DPP-IV具有很高的抑制作用，特別適合作為DPP-IV的抑制劑。本發(fā)明人在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。本文中"本發(fā)明的化合物"是指式(I)所示的化合物。該術(shù)語還包括式(I)化合物的各種晶型、藥學(xué)上可接受的無機(jī)或有機(jī)鹽、水合物或溶劑合物。本發(fā)明化合物存在1個或多個不對稱碳原子，因此通式(I)包括外消旋體物，外消旋混合物，單一對映體，非對映體混合物和單一非對映體。本發(fā)明化合物中吡咯環(huán)上R3和氰基可以是順式，也可以是反式。如本文所用"藥學(xué)上可接受的鹽"只要是藥學(xué)上可以接受的鹽就沒有特別的限定，具體地可列舉與酸形成的鹽，適合成鹽的酸包括(但不限于)鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等無機(jī)酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯磺酸等有機(jī)酸以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸。d-Ce的烷氧基，其垸基可以是d-Ce的直鏈或支鏈烷基，可例舉如甲基、乙基、丙基、異丙基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊活性成分基、異戊基、新戊基、叔戊基、1-甲基丁基、2-甲基丙基、己基、異己基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基丁基、l，l-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、3，3-二甲基丁基、l-乙基丁基、2-乙基丁基、1,1,2-三甲基丙基、1，2，2-三甲基丙基、l-乙基-l-甲基丙基以及l(fā)-乙基-2-甲基丙基。這些基團(tuán)中，優(yōu)選為甲基、乙基、丙基、環(huán)丙基、異丙基、丁基等碳原子數(shù)為l-4個的烷基。本發(fā)明的式(I)所示的化合物中具有代表性的化合物名稱及結(jié)構(gòu)式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>制備方法下面更具體地描述本發(fā)明結(jié)構(gòu)式(I)化合物的制備方法，但這些具體方法不對本發(fā)明構(gòu)成任何限制。此外反應(yīng)條件，例如反應(yīng)物、溶劑、堿、所用化合物的量、反應(yīng)溫度、反應(yīng)所需時間等不限于下面的解釋。本發(fā)明化合物還可以任選將在本說明書中描述的或本領(lǐng)域已知的各種合成方法組合起來而方便的制得，這樣的組合可由本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員容易的進(jìn)行。在本發(fā)明的制備方法中，各反應(yīng)通常在惰性溶劑中，在0。C至溶劑回流溫度(優(yōu)選室溫8(TC)下進(jìn)行。反應(yīng)時間通常為0.1小時60小時，較佳地為0.548小時。在一優(yōu)選例中，本發(fā)明式(I)化合物可按如下路線I制備-路線1其中，a:S0C12，CC14，b:1-氯乙?；?2-氰基吡咯，K2C03,THF步驟1.3-羥基-1-金剛烷胺鹽酸鹽1[SyntheticCommunications;1988，18(16):1975-1978]，在非質(zhì)子溶劑中，于堿存在下與氯化試劑反應(yīng)可高產(chǎn)率得到3-氯-卜金剛烷胺。適合上述反應(yīng)的溶劑為四氯化碳、二氯甲垸、苯、甲苯、二甲基甲酰胺以及氯仿，適合的堿為三乙胺和吡啶。氯化試劑可以是二氯亞砜、三氯氧磷、五氯化磷，反應(yīng)溫度為室溫到溶劑回流的溫度。步驟2.在有機(jī)溶劑四氯化碳、二氯甲烷、苯、甲苯、二甲基甲酰胺、四氫呋喃、二氧六環(huán)、甲基叔丁基醚中，化合物2或化合物3[J.Chem.Soc.2000，122,466-473]在堿性條件下與(2S)-1-氯乙?；?2-氰基吡咯[J.Med.Chem;2003,46，2774-2789]反應(yīng)，得到Y(jié)F-1禾卩YF-2。反應(yīng)溫度在O'C到溶劑回流溫度的范圍內(nèi)，最佳溫度為035°C。反應(yīng)使用的堿為三乙胺、吡啶等有機(jī)堿或碳酸鉀、碳酸鈉、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氟化鉀、氟化鈉等無機(jī)堿。在反應(yīng)中加入碘化鈉或碘化鉀，以加快反應(yīng)速度。步驟3.根據(jù)需要，YF-1.和YF-2可制成各種晶型，藥學(xué)上可接受的無機(jī)或有機(jī)鹽，水合物或溶劑合物，以及含有它們做為活性成分的藥物組合物。在另一優(yōu)選例中，本發(fā)明式(i)化合物可按如下路線n制備路線II7R=OCH311R=OCH3其中，a:KMn04，2%K0H;b:DPPA，BnOH，TEA,苯；c:H2/Pd/C;d:1-氯乙?；?2-氰基吡咯，K2C03，THF步驟1.3位取代的金剛垸羧酸化合物47[ChemBer;1962，95:667]在堿性水溶液中，被氧化2472小時，一般24士2小時為宜，得到化合物5-羥基-3-取代的金剛烷甲酸化合物811。反應(yīng)使用的堿為氫氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鋰等，氧化劑為高錳酸鉀、濃硝酸、濃硫酸等，反應(yīng)的溫度0100°C，適宜溫度為406(TC。步驟2.在四氯化碳、二氯甲垸、苯、甲苯、四氫呋喃、二氧六環(huán)、甲基叔丁基醚等非質(zhì)子溶劑中，金剛垸甲酸化合物811在堿性條件下與DPPA(二苯氧基磷?；B氮)、芐醇加熱回流，進(jìn)行重排反應(yīng)，得到5-羥基-3-取代-(1-芐氧羰基氨基)-l-金剛烷化合物1215。反應(yīng)中所使用的堿為三乙胺或吡啶等有機(jī)堿。步驟3.在醋酸、甲醇、乙醇等極性質(zhì)子溶劑中，010(TC溫度下、最適宜溫度25土5'C，化合物1215在Pd/C或其它金屬催化劑如鎳、銠、釕等的催化下氫化還原，脫去芐氧?；玫?-羥基-3-取代-1-金剛垸胺醋酸鹽1619,最適合的溶劑為醋酸。步驟4.在四氯化碳、二氯甲烷、苯、甲苯、二甲基甲酰胺、四氫呋喃、二氧六環(huán)或甲基叔丁基醚等有機(jī)溶劑中，化合物1619在堿性條件下與(2S)-1-氯乙?；?2-氰基吡咯以摩爾比110:1反應(yīng)，得到Y(jié)F-3、YF-4、YF-5、YF-6。反應(yīng)最適宜的摩爾比為2:1，反應(yīng)溫度在0"C到溶劑回流溫度的范圍內(nèi)，最佳溫度為035°C，反應(yīng)使用的堿為三乙胺、吡啶等有機(jī)堿或碳酸鉀、碳酸鈉、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氟化鉀、氟化鈉等無機(jī)堿，在反應(yīng)中可以加入碘化鈉或碘化鉀，以加快反應(yīng)速度。步驟5.根據(jù)需要，YF-3、YF-4、YF-5、YF-6可制成各種晶型，藥學(xué)上可接受的無機(jī)或有機(jī)鹽，水合物或溶劑合物，以及含有它們做為活性成分的藥物組合物。在另一優(yōu)選例中，本發(fā)明式(I)化合物可按如下路線(III)制備路線III2324YF-7其中，a:MeOH，濃H2S04;bSOCh和CCl"c:KOH,50%EtOH/H20;d:KMn04，2%K0H;e:DPPA，BnOH，TEA,苯；f:H2/Pd/C;g:1-氯乙酰基_2-氰基吡咯，K2C03，THF步驟1.以甲醇為溶劑，加入少量硫酸或者二氯亞砜，加熱回流即可制得酯化物20。步驟2.化合物20在非質(zhì)子溶劑中，在堿存在下與氯化試劑反應(yīng)可得到化合物21。適合于上述反應(yīng)的溶劑為四氯化碳、二氯甲烷、苯、甲苯、二甲基甲酰胺氯仿，適合的堿為三乙胺、吡啶，氯化試劑可以是二氯亞砜、三氯氧磷、五氯化磷，反應(yīng)溫度在室溫到溶劑回流溫度的范圍內(nèi)。步驟3.在如水、乙醇、二氧六環(huán)的極性溶劑中，于堿性條件下水解化合物21可以得到化合物22。適合的堿為氫氧化鋰、氫氧化鉀或氫氧化鈉，反應(yīng)溫度為0100°C，最佳溫度為30-50°C。步驟4.用與制備化合物12相似的方法可以由化合物22制得化合物23。步驟5.用與制備化合物16相似的方法可以由化合物23制得化合物24。步驟6.用與制備化合物YF-3相似的方法可以由化合物24和(2S)-1-氯乙?；?2-氰基吡咯制得化合物YF-7。步驟7.根據(jù)需要，YF-7可制成各種晶型，藥學(xué)上可接受的無機(jī)或有機(jī)鹽，水合物或溶劑合物，以及含有它們做為活性成分的藥物組合物。在另一優(yōu)選例中，本發(fā)明式(I)化合物可按如下路線IV制備路線IV<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>其中，Im代表咪唑基；a:飽和NaHC03,Cbz-Cl，5_10°C;b:咪唑，S02C12,CH2C12;c:HF/TEA，CH3C00Et,60°C;d:K0H，EtOH;e:EDC，HOBT，CH3CN;f:H2/Pd/C;g:氯乙酰氯,K2C03，THF，TFAA;h:3，5二取代金剛烷胺鹽酸鹽，K2C03，THF步驟1以s威7k終欲沐終氛"HS某—t—晡富贈田船「us9nrum718481>少|(zhì)<丄,ty外zj、f(__|iai廠fTzT乂丄"^T"M巾FU^，A口Lu"^vv丄v/丄,丄^/上u」與芐氧酰氯在-550"C反應(yīng)，得到化合物26。反應(yīng)最適合溫度為510°C，反應(yīng)適合的堿為碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鈉、氫氧化鉀。步驟2.在無水條件下，用DMF或二氯甲浣作溶劑，將化合物26與磺酰氯、咪唑混合，在溫度為050°C、優(yōu)選為2025卩下反應(yīng)15小時、優(yōu)選為2小時，得到化合物27。步驟3.在極性非質(zhì)子溶劑如1，2-二氯乙烷、乙酸乙酯、甲苯、二甲基甲酰胺中，用HF/TEA對咪唑磺酰基進(jìn)行SN2反應(yīng)，得到構(gòu)型翻轉(zhuǎn)的氟代產(chǎn)物28。反應(yīng)溫度為4(TC到溶劑回流溫度，最佳溫度為7080°C。另外，化合物26和DAST在惰性溶劑中反應(yīng)，也可以一步制得28。步驟4.于305(TC，在如水、乙醇或二氧六環(huán)的極性溶劑中，用氫氧化鋰、氫氧化鉀或氫氧化鈉水解化合物28，即可得到化合物29。步驟5.在二甲基甲酰胺或乙腈等極性非質(zhì)子溶劑中，用碳二亞胺(EDC)、N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)或卡特縮合劑(BOP)等縮合劑使1-羥基苯并三唑(HOBt)與化合物29反應(yīng)形成活性酯，然后和氨氣反應(yīng)，氨解形成的活性酯，得到酰胺化合物30。反應(yīng)適合的溫度為040°C，最適宜溫度在203(TC之間。步驟6.在醋酸、甲醇、乙醇等極性質(zhì)子溶劑中，于010(TC溫度、優(yōu)選為25'C下，使化合物30在Pd/C或其它金屬催化劑如鎳、銠、釕等的催化下氫化還原，脫去芐氧酰基得到31，最適合的溶劑為醋酸，最適合的溫度為1025°C。步驟7.使化合物31在無水四氫呋喃、二氧六環(huán)等醚類溶劑或二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙腈等溶劑中，于堿存在下，與氯乙酰氯在035。C反應(yīng)lIO小時后，進(jìn)行過濾，再向濾液中加入三氟乙酸酐，于室溫攪拌115小時，得到化合物32。步驟8.在有機(jī)溶劑四氯化碳、二氯甲垸、苯、甲苯、二甲基甲酰胺、四氫呋喃、二氧六環(huán)、甲基叔丁基醚中，化合物l、2、3、16、17在堿性條件下與化合物32反應(yīng)，分別得到Y(jié)F-8、YF-9、YF-IO、YF-11、YF-12。反應(yīng)溫度在(TC到溶劑回流溫度之間，最佳溫度為035°C，反應(yīng)使用的堿為三乙胺、吡啶等有機(jī)堿或碳酸鉀、碳酸鈉、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氟化鉀、氟化鈉等無機(jī)堿，在反應(yīng)中加入碘化鈉或碘化鉀，以加快反應(yīng)速度。步驟9.根據(jù)需要，YF-8、YF-9、YF-10、YF-11、YF-12可制成各種晶型，藥學(xué)上可接受的無機(jī)或有機(jī)鹽，水合物或溶劑合物，以及含有它們做為活性成分的藥物組合物。藥物組合物和施用方法由于本發(fā)明化合物具有優(yōu)異的DPP-IV抑制作用，因此本發(fā)明化合物及其各種晶型、藥學(xué)上可接受的無機(jī)或有機(jī)鹽、水合物或溶劑合物，以及含有本發(fā)明化合物為主要活性成分的藥物組合物可用于治療、預(yù)防以及緩解DPP-IV相關(guān)疾病。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明化合物可用于治療2型糖尿病、肥胖癥、高血脂。本發(fā)明的藥物組合物包含安全、有效量范圍內(nèi)的本發(fā)明化合物或其藥理上可接受的鹽及藥理上可以接受的賦形劑或載體。其中"安全、有效量"指的是化合物的量足以明顯改善病情，而不至于產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用。通常，藥物組合物含有l(wèi)-1000mg本發(fā)明化合物/劑，較佳地5-500mg本發(fā)明化合物/劑，更佳地，含有10-200mg本發(fā)明化合物/劑。本發(fā)明的化合物及其藥理上可接受的鹽可制成各種制劑，其中包含安全、有效量范圍內(nèi)的本發(fā)明化合物或其藥理上可接受的鹽及藥理上可以接受的賦形劑或載體。其中"安全、有效量"指的是化合物的量足以明顯改善病情，而不至于產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用?；衔锏陌踩⒂行Я扛鶕?jù)治療對象的年齡、病情、療程等具體情況來確定。"藥理上可以接受的賦形劑或載體"指的是一種或多種相容性固體或液體填料或凝膠物質(zhì)，它們適合于人使用，而且必須有足夠的純度和足夠低的毒性。"相容性"在此指的是組合物中各組份能與本發(fā)明的化合物以及它們之間相互摻和，而不明顯降低化合物的藥效。藥理上可以接受的賦形劑或載體部分例子有纖維素及其衍生物(如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素鈉、纖維素乙酸酯14等)、明膠、滑石、固體潤滑劑(如硬脂酸、硬脂酸鎂)、硫酸鈣、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄欖油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化劑(如吐溫@)、潤濕劑(如十二烷基硫酸鈉)、著色劑、調(diào)味劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑、防腐劑、無熱原水等。施用本發(fā)明化合物時，可以口服、直腸、腸胃外(靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下)、局部給藥。用于口服給藥的固體劑型包括膠囊劑、片劑、丸劑、散劑和顆粒劑。在這些固體劑型中，活性化合物與至少一種常規(guī)惰性賦形劑(或載體)混合，如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，或與下述成分混合(a)填料或增容劑，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合劑，例如，羥甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯基吡咯垸酮、蔗糖和阿拉伯膠；(C)保濕劑，例如，甘油；(d)崩解劑，例如，瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些復(fù)合硅酸鹽、和碳酸鈉；(e)緩溶劑，例如石蠟；(f)吸收加速劑，例如，季胺化合物；(g)潤濕劑，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；(h)吸附劑，例如，高嶺土；禾B(i)潤滑劑，例如，滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉，或其混合物。膠囊劑、片劑和丸劑中，劑型也可包含緩沖劑。固體劑型如片劑、糖丸、膠囊劑、丸劑和顆粒劑可采用包衣和殼材制備，如腸衣和其它本領(lǐng)域公知的材料。它們可包含不透明劑，并且，這種組合物中活性化合物或化合物的釋放可以延遲的方式在消化道內(nèi)的某一部分中釋放?？刹捎玫陌窠M分的實例是聚合物質(zhì)和蠟類物質(zhì)。必要時，活性化合物也可與上述賦形劑中的一種或多種形成微膠囊形式。用于口服給藥的液體劑型包括藥學(xué)上可接受的乳液、溶液、懸浮液、糖漿或酊劑。除了活性化合物外，液體劑型可包含本領(lǐng)域中常規(guī)釆用的惰性稀釋劑，如水或其它溶劑，增溶劑和乳化劑，例知，乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特別是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油或這些物質(zhì)的混合物等。除了這些惰性稀釋劑外，組合物也可包含助劑，如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、嬌味劑和香料。除了活性化合物外，懸浮液可包含懸浮劑，例如，乙氧基化異十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、甲醇鋁和瓊脂或這些物質(zhì)的混合物等。用于腸胃外注射的組合物可包含生理上可接受的無菌含水或無水溶液、分散液、懸浮液或乳液，和用于重新溶解成無菌的可注射溶液或分散液的無菌粉末。適宜的含水和非水載體、稀釋劑、溶劑或賦形劑包括水、乙醇、多元醇及其適宜的混合物。用于局部給藥的本發(fā)明化合物的劑型包括軟膏劑、散劑、貼劑、噴射劑和吸入劑?；钚猿煞衷跓o菌條件下與生理上可接受的載體及任何防腐劑、緩沖劑，或必要時可能需要的推進(jìn)劑一起混合。本發(fā)明化合物可以單獨(dú)給藥，或者與其他藥學(xué)上可接受的化合物聯(lián)合給藥。使用藥物組合物時，是將安全有效量的本發(fā)明化合物適用于需要治療的哺乳動物(如人)，其中施用時劑量為藥學(xué)上認(rèn)為的有效給藥劑量，對于60kg體重的人而言，日給藥劑量通常為11000mg，優(yōu)選20500mg。當(dāng)然，具體劑量還應(yīng)考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi)的。本發(fā)明的主要優(yōu)點包括(1)本發(fā)明化合物對二肽基肽酶(DPP-IV)有更強(qiáng)的抑制活性。(2)本發(fā)明化合物是一類新型的二肽基肽酶(DPP-IV)抑制劑。(3)本發(fā)明化合物制備方法簡單，制造成本低。下面結(jié)合具體實施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則份數(shù)和百分比為重量份和重量百分比。所有實施例中，熔點用MEL-TEMP熔點儀測定，溫度計未校正；力-醒R用VarianMercury400核磁共振儀記錄，化學(xué)位移以S(ppm)表示；分離采用硅膠，未說明均為200-300目，柱層析和TLC檢測展開劑比例為體積比。實施例1:(2S)-1-[(3-氟-l-金剛烷基)氨基乙?；鵠-2-氰基吡咯烷(YF-l)在室溫下，將3-氟-1-金剛烷胺鹽酸鹽(245mg，1.45mmo1)、碳酸鉀(500mg，3.6mmol)和四氫呋喃(15ml)—起加入反應(yīng)瓶中，開動攪拌，滴加入(2S)-1-氯乙?；?2-氰基吡咯(100mg，0.58mmol)的四氫呋喃溶液，滴加完畢，加入碘化鈉(O.lg)。室溫下攪拌反應(yīng)混合物15h，用TLC(CH2C12/MeOH=10:l)監(jiān)測反應(yīng)。待反應(yīng)完全后，進(jìn)行冷卻，過濾掉碳酸鉀固體，濾液減壓蒸干溶劑，直接進(jìn)行柱層析，(展開劑CH2C12/MeOH=25:l)得黃色粘稠狀物。向黃色粘稠狀物加入氯化氫的乙醚飽和溶液生成鹽酸鹽，過濾后得到白色固體(61mg,12%)。Mp:190-200。C。'H醒R(400MHz，CDCl3)S1.48-2.37(m，19H)，3.36-3.68(m，4H)，4.74-4.82(dd，1H)。實施例2:(2S)-l-[(3-氯-l-金剛垸基)氨基乙?；鵠-2-氰基吡咯烷(YF-2)1.3-氯-l-金剛垸胺(化合物2)將3-羥基金剛烷胺(500mg，3mmol)溶于四氯化碳(20ml)中，加入二氯亞砜(0.5ml，7.5mmo1)，攪拌回流22h，旋出溶劑得粘稠狀物(650mg，100%)。直接投入下一步反應(yīng)。'HNMR(400MHz，CDC13)S1.46-1.56(m，則，1.97-2.07(m，6H)，2.25(s，2H)。2.(2S)-1-[(3-氯-1-金剛烷基)氨基乙酰基]-2-氰基吡咯垸(YF-2)將化合物2(555mg，3.0mmol)和(2S)-1-氯乙酰基-2-氰基吡咯(172mg，lmmol)按實施例1方法進(jìn)行反應(yīng)和處理得白色固體(54g，5.6%)。Mp:134-138。C。^醒R(400MHz，CDC13)S1.49-2.29(m，19H)，3.35-3.59(m，4H)，4.71-4.73(dd，1H)。實施例3:(2S)-1-[(3-氯-5-羥基-1-金剛烷基)氨基乙?；鵠-2-氰基吡咯烷(YF-3)1.3-氯-5-羥基-l-金剛垸甲酸(化合物9)將高錳酸鉀(1.58g，0.Olmol)和K0H溶液(2.0%,50ml)—起加入瓶中，在攪拌下，分批加入3-氯-卜金剛垸甲酸(2g，0.009mol)，添加完成后，升溫至50-6(TC反應(yīng)20h。之后，將混合液冷卻，用濃鹽酸調(diào)為強(qiáng)酸性，加入亞硫酸氫鈉固體，直到混合液變?yōu)榘咨?，過濾固體，用乙酸乙酯萃取濾液，萃取液用無水硫酸鈉干燥，過濾，旋干為白色固體化合物9(900mg，41%)。Mp:198-200°C。^NMR(400MHz，DMSO)S1.48-1.66(m，IIH)，2.ll(s，2H)。2.3-氯-5-羥基-(1-芐氧酰基)-l-金剛烷胺(化合物13)將化合物9(820mg,3.56mmol)、DPPA(1.2g，0.93ml,4.2mmo1)、三乙胺(430mg，0.6mmol)和苯(60ml)—起加入反應(yīng)瓶中，攪拌回流lh后加入芐醇(1.4ml，13.5mmol)回流12h。旋出溶劑，加入乙酸乙酯稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽水洗滌，分出有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，過濾，旋干，柱層析得白色固體化合物13(500mg，51%)。^NMR(400MHz，CDC13)S1.49—1.51(m，2H)，1.65(s，4H)，1.82—1.91(m，5H)，2.23(s，2H)，2.40(s，1H)4.86(s，1H)，5.OO(s，1H)7.26-7.32(m，5H)。3.3-氯-5-羥基-l-金剛垸胺醋酸鹽(化合物17)將化合物13(500g，1.49mmol)溶于冰醋酸(25ml)中，加入Pd/C(100mg)，通氫氣室溫攪拌10h。濾掉Pd/C，蒸出乙酸，加入甲苯旋干帶出多余的乙酸溶劑得白色固體化合物17(420mg，100%)。Mp:230-240°C。力醒R(400MHz，DMSO)S1.37-1.72(m，13H)，2.07(s，1H)，5.74(s，2H)。4.(2S)-l-[(3-氯-5-羥基-1-金剛垸基)氨基乙?；鵠-2-氰基吡咯烷(YF-3)將化合物17(120mg，0.46mmol)和(2S)-1-氯乙?；?2-氰基吡咯(52mg，0.3Chnmol)按實施例1方法進(jìn)行反應(yīng)和處理得白色固體為化合物YF-3(42g，27%)。Mp:200-205°C。力NMR(400MHz，CDC13)S1.23-2.31(m，18H)，3.35-3.61(m，4H)，4.74-4.85(dd，1H)。實施例4:(2S)-1-[(3-氟-5-羥基-1-金剛烷基)氨基乙?；鵠-2-氰基吡咯烷(YF-4)將化合物16[J.Chem.Soc;2000，122，466-473](161mg，0.87mmo1)和(2S)-1-氯乙?；?2-氰基吡咯(100mg，0.58mmol)按實施例1方法進(jìn)行反應(yīng)和處理得白色固體為化合物YF-4(43mg，20%)。Mp:220-223°C。'HNMR(400MHz，CDC13)S1.43-2.40(m，18H)，3.34-3.60(m，4H)，4.71-4.77(dd，1H)。實施例5:(2S)-1-[(3-溴-5-羥基-l-金剛垸基)氨基乙?；鵠-2-氰基吡咯烷(YF-5)將化合物18(410mg，1.34mmol)和(2S)-1-氯乙酰基-2-氰基吡咯(182mg，lmmol)按實施例1方法進(jìn)行反應(yīng)和處理得白色固體為化合物YF-5(42mg，7.5%)。Mp:148-153。CNMR(300MHz，CDC13)S1.49—1.67(m，IIH)，1.95(s，3H)，2.39(s，1H)，2.04-2.34(m，5H)，3.33-3.66(m，4H)，4.72-4.86(m，1H)。實施例6:(2S)-1-[(3-甲氧基-5-羥基-1-金剛垸基)氨基乙?；鵠-2-氰基吡咯烷(YF-6)將化合物19(272mg，1.38mmol)和(2S)-l-氯乙?；?2-氰基吡咯(172.5mg，lmmol)按實施例1方法進(jìn)行反應(yīng)和處理得白色固體為化合物YF-6(66mg，20%)。Mp:167-175。C。'HNMR(400MHz，CDCl3)S1.43-1.80(m，14H)，2.10-2.31(m，4H)，2.39(s，1H)，3.25(s，1H)，3.38-3.62(m，4H)，4.75-4.77(m，1H)。實施例7:(2S)-l-[(3,5-二氯-l-金剛垸基)氨基乙?；鵠-2-氰基吡咯垸(YF-7)1.5-羥基-3-氯-1-金剛烷甲酸甲酯(化合物20)將化合物9(1.7g，7.4mmo1)、甲醇(60ml)和濃硫酸(0.2ml)—起加入反應(yīng)瓶中，攪拌回流8h。旋出溶劑，加入二氯甲垸稀釋，依次用飽和碳酸氫鈉，飽和氯化鈉溶液洗滌，有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，過濾，旋干得粘稠狀物(2.6g，98%)。2.3，5-二氯-1-金剛烷甲酸甲酯(化合物21)將化合物20(2.6g，0.01mol)溶于二氯甲烷(60ml)中，加入二氯亞砜(2ml)攪拌回流14h。旋出溶劑得油狀物(2.75g，98%)。直接投入下一步反應(yīng)。3.3,5-二氯-1-金剛烷甲酸(化合物22)將原料化合物21(3.6g，0.014mol)溶于50y。的乙醇水溶液(50ml)中，加入固體氫氧化鉀(852mg，0.015mol)升溫至4(TC攪拌10h，冷卻溶液，加水稀釋，用2NHC1酸化為PH=2，過濾得白色固體(1.8g，56%)。4.3,5-二氯-(l-芐氧?；?-l-金剛垸胺(化合物23)將化合物22(1.8g，0.007mol)、DPPA(l.88ml，0.0087mol)、三乙胺(l.2ml，0.0084mol)和苯(120ml)—起加入反應(yīng)瓶中，攪拌回流lh后加入芐醇(2.75ml，0.0266mol)回流12h。冷卻后旋出溶劑，加入乙酸乙酯稀釋，依次用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和氯化鈉溶液洗滌，有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，過濾，旋干，柱層析得白色固體(1.2g，50%)。(洗脫劑石油醚乙酸乙酯二2:1)'HNMR(400MHz，CDC13)S1.56-2.09(m，10H)，2.28—2.35(m，4H)，4.74(s，1H)，5.04(s，2H)，7.25-7.41(m，5H)。5.3，5-二氯-1-金剛垸胺醋酸鹽(化合物24)將化合物23(1.2g，0.0036mol)溶于乙酸(30ml)中，加入Pd/C(322mg)，通氫氣室溫攪拌2h。過濾，旋干濾液，加入甲苯稀釋，旋出得粘狀物(lg，78%)。6.(2S)-l-[(3,5-二氯-l-金剛烷基)氨基乙?；鵠-2-氰基吡咯垸(YF-7)將化合物24(200mg，0.71mmo1)和(2S)-1-氯乙?；?2-氰基吡咯(60.7mg，0.48mmol)按實施例1方法進(jìn)行反應(yīng)和處理得白色固體為化合物YF-7(36mg，29%)。Mp:155-160°C'H腿(400MHz，CDC13)S1,51—2.32(m，18H)，3.35-3.62(m，4H)，4.75-4.76(dd，1H)。實施例8:(2S,4S)-l-[(3-羥基-1-金剛烷基)氨基乙?；鵠-4-氟2-氰基吡咯垸(YF-8)1.(4R)-芐氧羰基-4-羥基-L-脯氨酸甲酯(化合物26)將(4R)-4-羥基-L-脯氨酸甲酯(5.0g，27.7mmol)溶于飽和Na線溶液(150ml)，冰浴降溫5-10°C，加入氯甲酸芐酯(6.0g，6ml)，室溫攪拌4h，TLC檢測反應(yīng)進(jìn)程(CH2Cl2/CH30H=15/1)。用乙醚萃取反應(yīng)液，用飽和NaCl洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，旋干，柱層析得淡黃色液體(7.75g，100%)(洗脫劑石油醚/乙酸乙酯=4/1)。NMR(300MHz，CDC13)57.36-7.26(5H，m)，5.23-5.05(3H，m)，4.53-4.47(2H，m)，3.76-3.55(5H，m)，2.30-2.05(1H，m)。2.(4R)-1-芐氧羰基-4-咪唑磺?；?L-脯氨酸甲酯(化合物27)將化合物26(2.OOg，7.2mmol)溶于二氯甲烷(50ml)中，在-20。C攪拌，滴加S02C12(1.08g，8.Ommol)，加畢，分批加入咪唑(544mg，8.Ommol)。升溫至室溫攪拌2h，TLC檢測反應(yīng)進(jìn)程(石油醚/乙酸乙酯=2/1)。加入水分層，分出有機(jī)層，水層用二氯甲垸萃取，合并有機(jī)相，用飽和氯化鈉洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，旋干，得黃色液體(2.62g，70%)。3.(4S)-l-芐氧羰基-4-氟-L-脯氨酸甲酯(化合物28)20將化合物27(1.8g，6.4mmol)溶于乙酸乙酯(50ml)，加入HF/TEA(0.45ml，20ramo1)，升溫6(TC攪拌4h，再升溫70°C反應(yīng)12h。TLC檢測反應(yīng)進(jìn)程(石油醚/乙酸乙酯=1/1)。加入水分層，分出有機(jī)層，水層用乙酸乙酯萃取，飽和氯化鈉洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋干得黃色液體(620mg，62%)。!H-醒R(400MHz，CDC13)S7.34-7.26(5H，m)，5.19-5.03(2H，m)，4.51-4.32(2H，ra)，4.01-3.93(1H，m)，3.72-3.68(2H，m)，3.61-3.52(1H，s)，2.71-2.62(1H，m)，2.43-2.37(1H，m)4.(4S)-l-芐氧羰基-4-氟-L-脯氨酸(化合物29)將化合物28(620mg，2.2mmo1)溶于50%的乙醇水溶液(30ml)，加入氫氧化鉀(140mg，2.5mmo1)，升溫至4(TC攪拌10h。TLC跟蹤監(jiān)測(石油醚/乙酸乙酯=2/1)。冷卻，加水稀釋，用乙醚萃取，水層用2N的鹽酸酸化Pi^2。用二氯甲垸萃取水層，用飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾旋干得黃色液體(560mg，94%)。力-麗R(400MHz，CDC13)S10.73(1H，s)，7.38-7.26(5H，m)，5.29-5.13(2H，m)，4.58—4.48(1H，m)，4.41—4.40(1H，m)，4.05—3.96(1H，m)，3.79—3.71(1H，m)，2.76-2.68(1H，m)，2.53-2.49(1H，m)5.(4S)-1-芐氧羰基-4-氟-L-脯氨酰胺(化合物30)將化合物29(560mg，2.07mmo1)溶于乙腈(30ml)中，冷卻至0°C，加入H0BT(338mg，2.5mmo1)和EDC(480mg，2.5mmo1)，室溫攪拌14h，TLC檢測(石油醚/乙酸乙酯=1/4)。用冰水冷卻，加入濃氨水(lml)，攪拌20min，升溫至室溫攪拌20min。加入乙腈，濾去不溶物，濾液旋干，過層析柱得黃色液體(380mg，68%)(洗脫劑石油醚/乙酸乙酯二1/4)。工H-NMR(400MHz，CDC13)S7.31-7.26(5H，s)，6.75-6.39(2H，m)，5.16-5.07(2H，m)，4.36(2H，s)，3.92(1H，s)，3.67(1H，s)，2.57-2.49(2H，m)6.(4S)-4-氟-L-脯氨酰胺(化合物31)將化合物30(380mg，1.6mraol)溶于甲醇(50ml)，加入Pd/C(76mg)，通入氫氣，室溫攪拌4h。TLC檢測(CH2Cl2/CH301^6/1)。過濾，旋干，過層析柱(洗脫劑CH2C12/C驟=6/1)得化合物31(100mg，53%)。NMR(400MHz，DMSO)S7.46—7.12(2H，s)4.41—4.36(1H，m)，3.55—3.46(1H，dd)，3.21—3.15(1H，dt)，2.89-2.85(1H，dd)，2.57—2.49(2H，m)，1.95-1.89(1H，m)7.(2S，4S)-l-氯乙?；?4-氟-2-氰基吡咯(化合物32)將碳酸鉀(2.6g，18.8mraol)和無水四氫呋喃溶液(60ml)加入反應(yīng)瓶中，攪拌，在冰水浴下(5-1(TC)滴加入氯乙酰氯(1.2g，0.88ml，lOmmol)，加畢，分批加入化合物31(627mg，3.72mmo1)，升溫至室溫攪拌2h。過濾，濾液用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液在冰水浴下(5l(TC)加入三氟乙酸酐(2ml)，室溫攪拌5h。旋出溶劑，加入乙酸乙酯稀釋，再旋干(如此操作三次)，旋干的溶液用乙酸乙酯稀釋，用碳酸氫鈉溶液洗滌，分出有機(jī)層，水層用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)層，用無水硫酸鈉干燥，過濾，旋干，過層析柱(洗脫劑石油醚乙酸乙酯4:2)得黃色固體(710mg，100%)。Mp:118-126°C。H醒R(300MHz，CDC13)S2.31-2.76(m，2H)，3.81-4.29(m，4H)，4.93-5.05(dd，1H)，5.36-5.55(dd，1H)。8.(2S，4S)-1-[(3-羥基-1-金剛烷基)氨基乙?；鵠-4-氟2-氰基吡咯垸(YF-8)將3-羥基-1-金剛烷胺(145mg，0.87mmo1)、碳酸鉀(200mg，L2mmol)和四氫呋喃(15ml)—起加入反應(yīng)瓶中，滴加入化合物32(55mg，0.30mmo1)的四氫呋喃溶液，滴加完畢，加入碘化鈉(50mg)，反應(yīng)混合物在室溫攪拌20h。按實施例1方法處理得白色固體化合物YF-8(43mg，42%)。Mp:128-133°C。'HNMR(300MHz，CDC13)S1.48-1.87(m，15H)，2.26-2.66，3.34—3.60(m，4H)，4.92—5.50(dd，2H)。實施例9:(2S，4S)-1-[(3-羥基-5-氯-1-金剛垸基)氨基乙?；鵠-4-氟-2-氰基吡咯烷(YF-9)將化合物17(300mg，1.15mmol)與化合物32(100mg，0.52mmo1)按實施例8方法進(jìn)行反應(yīng)和處理得白色固體化合物YF-9(24mg，10%)。Mp:225-232。C(分解)。'HNMR(400MHz，CDC13)S1.52-1.69(m，卿，1.96(s，3H)，2.28-2.74(m，4H)，3.40-3.97(m，4H)，4.95—5.19(dd，1H)，5.28—5.50(dd，1H)。實施例10:(2S，4S)-1-[(3-氟-1-金剛垸基)氨基乙?；鵠-4-氟-2-氰基吡咯垸(YF-10)將3-氟-1-金剛垸胺鹽酸鹽(160mg，0.78mmol)與化合物32(100rag，0.52mraol)按實施例8方法進(jìn)行反應(yīng)和處理得白色固體化合物YF-10(94mg，46%)。Mp:165-175°C。力NMR(400MHz,CDC13)S1.47—1.87(m，13H)，2.23—2.73(m，4H)，3.34-3.97(ra，4H)，4.91—5.10(dd，1H)，5.27-5.49(dd，1H)。實施例11:(2S，4S)-1-[(3-氯-1-金剛垸基)氨基乙?；鵠-4-氟2-氰基吡咯烷(YF-11)將化合物2(350rag，1.5mmol)與化合物32(100mg，0.52ramo1)按實施例8方法進(jìn)行反應(yīng)和處理得白色固體化合物YF-11(42mg，7%)。Mp:140-145°C。^NMR(400MHz，CDC13)S1.52—2.08(m，13H)，2.23-2.73(m，4H)，3.34-3.95(m，4H)，4.92-5.10(dd，1H)，5.27-5.49(dd，1H)。實施例12:(2S，4S)-1-[(3-氟-1-金剛烷基)氨基乙?；鵠-4-氟2-氰基吡咯烷(YF-12)將化合物16(161mg，0.87mmol)與化合物32(100mg，0.52mmo1)按實施例8方法進(jìn)行反應(yīng)和處理得白色固體化合物YF-12(42mg，7%)。Mp:140-145°C。NMR(400MHz，CDC13)51.52-2.08(m，13H)，2.23-2.73(m，4H)，3.34-3.95(m，4H)，4.92-5.10(dd，1H)，5.27-5.49(dd，1H)。實施例13.DPP-IV抑制活性測定DPP-IV抑制活性測定可用常規(guī)方法進(jìn)行。DPP-IV為應(yīng)用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)并經(jīng)純化的純酶，純酶的H^均與文獻(xiàn)報道相符，表明表達(dá)純化得到的DPP-IV純酶在酶學(xué)性質(zhì)上完全正常。反應(yīng)體系在PH7.5的緩沖液中進(jìn)行，酶反應(yīng)底物為丙氨酸-脯氨酸-7-氨基-4-甲基香豆素(Ala-Pro-AMC)。DPP-IV可降解底物Ala-Pro-AMC生成產(chǎn)物AMC，AMC被355nm的紫外光激發(fā)產(chǎn)生460nm的發(fā)射光。通過動態(tài)測量AMC在460nra處熒光值的上升的速度來測定DPP-IV的活性。將受試化合物、酶和反應(yīng)緩沖液混勻，在37'C預(yù)孵15min，加入底物啟動反應(yīng)，連續(xù)測定460nra熒光值5min。同時設(shè)置不加底物的空白對照組、以DMS0替代受試化合物的溶劑對照組、以及LAF-237[Bioorg.Med.Chem.Lett.，2005,15，4770-4773]陽性對照組。所有反應(yīng)終體積均為100ul。每個樣品每個濃度設(shè)3個復(fù)孔。首先計算酶初速度期內(nèi)單位時間熒光強(qiáng)度的增量(單位RFU/sec)，以此代表酶的初速度，然后計算樣品各濃度組的活性百分?jǐn)?shù)，公式如下活性％二_^_><100%其中OM表示樣品各濃度組的初速度，r皿。表示DMS0組的初速度以濃度的對數(shù)值對活性百分?jǐn)?shù)作圖，然后采用非線性回歸算出擬和曲線，計算得到IC50值。本發(fā)明代表性化合物的分子結(jié)構(gòu)式及部分化合物的生物活性測試結(jié)果見表1。表1本發(fā)明部分化合物對DPP-IV抑制活性<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>CIYF-11分l23.94±2.66FYF-12、。廠Z10.84±1.02其中LAF-237是做為對比的現(xiàn)有技術(shù)而提出的，由表1中的數(shù)據(jù)可以看出本發(fā)明的化合物對DPP-IV的抑制活性明顯強(qiáng)于DPP-IV，尤其YF-1、YF-4、YF-12的DPP-IV抑制活性比LAF-237強(qiáng)25倍，因此，本發(fā)明化合物相對于現(xiàn)有藥物具有更優(yōu)的生物活性。實施例13藥物組合物化合物YF-1220g淀粉140g微晶纖維素60g按常規(guī)方法，將實施例13所得的藥物組合物混合均勻后，裝入普通明膠膠囊，得到1000顆膠囊。按類似方法，分別制得含化合物YF-8或YF-4的膠囊。實施例14:膠囊劑的制備化合物YF-1250g淀粉400g微晶纖維素200g按常規(guī)方法，將實施例14所得的藥物組合物混合均勻后，裝入普通明膠膠囊，得到1000顆膠囊。按類似方法，分別制得含化合物YF-4或YF-8的膠囊。在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。2權(quán)利要求1.一種式(I)所示的化合物，或其各光學(xué)異構(gòu)體、各晶型、藥學(xué)上可接受的無機(jī)或有機(jī)鹽、水合物或溶劑合物式中，R1為氫、氯、氟、溴、羥基或C1-C6的烷氧基；R2為氫、氯、氟、溴或羥基；R3為氫或氟；且當(dāng)R3為氫時，R1、R2中至少一個為鹵素。2.如權(quán)利要求l所述的化合物，其特征在于，R為氯或氟。3.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，R2為氫或羥基。4.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，&為氟。5.如權(quán)利要求l所述的化合物，其特征在于，所述化合物選自下組(2S)-1-[(3-氟-5-羥基-1-金剛烷基)氨基乙?；鵠-2-氰基吡咯烷；(2S，4S)-1-[(3-氟-5-羥基-l-金剛垸基)氨基乙?；鵠-4-氟-2-氰基吡咯院；(2S，4S)-1-[(3-羥基-l-金剛烷基)氨基乙酰基]-4-氟-2-氰基吡咯烷；(2S)-1-[(3-氯-5-羥基-1-金剛垸基)氨基乙?；鵠-2-氰基吡咯垸；(2S,4S)-1-[(3-氯-5-羥基-1-金剛烷基)氨基乙?；鵠-4-氟-2-氰基吡咯烷。6.—種藥物組合物，其特征在于，它含有藥理上可接受的賦形劑或載體，以及權(quán)利要求l所述的化合物、或其各光學(xué)異構(gòu)體、各晶型、藥學(xué)上可接受的無機(jī)或有機(jī)鹽、水合物或溶劑合物。7.—種權(quán)利要求1所述的化合物、或其各光學(xué)異構(gòu)體、各晶型、藥學(xué)上可接受的無機(jī)或有機(jī)鹽、水合物或溶劑合物的用途，其特征在于，用于制備DPP-IV抑制劑。8.—種權(quán)利要求1所述的化合物、或其各光學(xué)異構(gòu)體、各晶型、藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑合物的用途，其特征在于，用于制備治療、預(yù)防以及緩解與DPP-IV相關(guān)的疾病的藥物。9.如權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于，所述的與DPP-IV相關(guān)的疾病選自糖尿病、肥胖癥、高血脂。10.—種制備式(I)所示化合物的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟在惰性溶液中，堿性條件下，使式(II)所示化合物與式(III)所示化合物反應(yīng)生成式(I)所示化合物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>(II)(III)(I)式中，Ri為氫、氯、氟、溴、羥基或d-C6的垸氧基；R2為氫、氯、氟、溴或羥基；R3為氫或氟；且當(dāng)R3為氫時，K、R2中至少一個為齒素。全文摘要本發(fā)明提供了如下式(I)所示的二肽基肽酶IV的抑制劑，式中，R₁為氫、氯、氟、溴、羥基或C₁-C₆的烷氧基，R₂為氫、氯、氟、溴或羥基，但R₂為氫時排除R₁為羥基或C₁-C₆的烷氧基，R₃為氫或氟。這類化合物可用于治療或預(yù)防與二肽基肽酶IV相關(guān)的疾病，如糖尿病，肥胖，高血脂。本發(fā)明還提供(I)所示化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、藥物組合物的制備方法及其用于制備治療或預(yù)防與二肽基肽酶IV相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。文檔編號C07D207/00GK101318922SQ200710041760公開日2008年12月10日申請日期2007年6月8日優(yōu)先權(quán)日2007年6月8日發(fā)明者陳義朗,陳慧茹申請人:上海陽帆醫(yī)藥科技有限公司