專利名稱：晉美拉肽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療性功能障礙的晉美拉肽(PT141)的制備方法。些旦始士 疼爾漢不性功能障礙，包括男性性功能障礙和女性性功能障礙，是影響面很廣的醫(yī) 學(xué)病癥。性功能障礙的病因有精神型、器質(zhì)型以及混合型。緊張、抑郁、器質(zhì) 性疾病如循環(huán)系統(tǒng)疾病、神經(jīng)系統(tǒng)損傷、動(dòng)脈硬化、糖尿病、高血壓和高膽固 醇等均會(huì)導(dǎo)致會(huì)導(dǎo)致性功能障礙。在臨床治療上，根據(jù)不同的病因主要采取藥物治療和輔助器械治療?，F(xiàn)在 常用的藥物有西地那非、瓦地那非等，這些藥物均是PDE5抑制劑，它致使環(huán)腺 苷酸(cAMP)在體內(nèi)維持及升高致勃起所需濃度。這些藥物是通過擴(kuò)張動(dòng)脈血管 和降低靜脈排出量作用的。肽的合成一般采用液相合成法或固相合成法，本發(fā)明釆用固相合成法，即 把目的肽的C-末端第一個(gè)氨基酸偶聯(lián)在載體樹脂上，然后以活化劑活化肽序列 C-末端第二個(gè)氨基酸殘基的羧基，并偶聯(lián)于前一個(gè)氨基酸的氨基上形成肽鍵。 未反應(yīng)的氨基酸衍生物原料可以用溶劑DMF徹底洗掉，依此類推，直到合成整 個(gè)目的肽。工藝釆用Fmoc固相肽合成路線，該路線的基本步驟以Fmoc基團(tuán)保 護(hù)每一個(gè)氨基酸衍生物的oc-氨基，以20%的哌嚏脫除Fmoc基團(tuán)，其側(cè)鏈保護(hù) 基團(tuán)是釆用TFA可脫除的基團(tuán)，如Boc(叔丁氧羰基)，tBu (叔丁基)，Trt(三 苯甲基)等。本相研究采用Fmoc-Lys(Boc)-Wang Resin,樹脂與肽的連接TFA 都可以切割下來。此工藝收率為17%左右，收率穩(wěn)定，且原料易得，國內(nèi)巿場 都有銷售。美國專利US6579968公開了晉美拉肽(PT141)及藥物制劑的發(fā)明創(chuàng)造。中國專利申請(qǐng)公開說明書CN1563076A，公開了合成上述多肽的方法，含有上述多 肽的用于治療性功能障礙的藥物組合物及其制備方法，以及該藥物組合物在治 療性功能障礙疾病，包括男性性功能障礙如勃起功能障礙和女性性功能障礙的 用途。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的申請(qǐng)人通過長期研究發(fā)明了一種晉美拉肽的新的固相合成制備方法。晉美拉肽的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下I I AcNleAsp-His-DPheArgTrp-Lys-OH.CH3COOH發(fā)明人采用Fmoc(荀甲氧羰基)保護(hù)的固相合成法，整個(gè)工藝共分成五大步 驟1、固相合成帶保護(hù)基的晉美拉肽；2、樹脂上環(huán)化晉美拉肽；3、從樹脂上 切割晉美拉肽；4、 HPLC純化晉美拉肽；5、轉(zhuǎn)為醋酸晉美拉肽。合成路線如下晉美拉肽固相合成- 樹脂上環(huán)化晉美拉肽- 從樹脂上切割晉美拉肽- HPLC純化-> 轉(zhuǎn)鹽- 凍干得成品實(shí)驗(yàn)方法及理論依據(jù)肽的合成一般采用液相合成法或固相合成法，本發(fā) 明采用固相合成法，即把目的肽的C-末端第一個(gè)氨基酸偶聯(lián)在載體樹脂上，然 后以活化劑活化肽序列C-末端第二個(gè)氨基酸殘基的羧基，并偶聯(lián)于前一個(gè)氨基 酸的氨基上形成肽鍵。未反應(yīng)的氨基酸衍生物原料可以用溶劑DMF徹底洗掉， 依此類推，直到合成整個(gè)目的肽。本項(xiàng)工藝采用Fmoc固相肽合成路線，該路線 的基本步驟完全按照標(biāo)準(zhǔn)的Fmoc固相肽合成法進(jìn)行，即以Fmoc基團(tuán)保護(hù)每一 個(gè)氨基酸衍生物的a-氨基，以20y。的哌啶脫除Fmoc基團(tuán)，其側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)是 采用TFA可脫除的基團(tuán)，如Boc(叔丁氧羰基)，tBu (叔丁基)，Trt(三苯甲基) 等。本相研究釆用Fmoc-Lys(Boc)-Wang Resin，樹脂與肽的連接TFA都可以切 割下來。此工藝收率為17%左右，收率穩(wěn)定，且原料易得，國內(nèi)巿場都有銷售工藝步驟如下Fmoc-Lys(Mmt)-Wang Resin- Trp(Boc)-Lys(Mmt)-Wang ResinArg(pbf)-Trp(Boc)-Lys(Mmt)-WangResin - D-Phe-Arg(pbf)-Trp(Boc)-Lys(Mmt)隱WangResin - His(Trt)-D-Phe-Arg(pbO-Trp(Boc)-Lys(Mmt)國WangResin-Asp(0-2-Phipr)國His(Trt)-D國Phe-Arg(pbf)國Trp(Boc)國Lys(Mmt)-WangResinNle-Asp(0國2曙Phipr)-His(Trt)誦D-Phe-Arg(pbf)-Trp(Boc)-Lys(Mmt)-WangResin- Ac- Nle-Asp(0-2陽Phipr)國His(Trt)-D國Phe-Arg(pbf)-Trp(Boc)-Lys(Mmt)-Wang Resin——^環(huán)化-^裂解——^HPLC—— 純化-^轉(zhuǎn)鹽一~-凍干得純品具體實(shí)施方式
發(fā)明人更進(jìn)一步通過實(shí)施例詳細(xì)描述本發(fā)明。 實(shí)施例1 Trp(Boc)-Lys(Mmt)-Wang Resin的合成1、反應(yīng)式Fmoc-Lys(Mmt)國Wang Resin 20%哌啶/DMF(二甲基甲酰胺) Lys(Mmt)-Wang ReSinFmoc-Trp(Boc)、 NMM(N-甲基嗎啡啉) Fmoc-Trp(Boc)-Lys(Mmt)-Wang Resin - DMF(二甲基甲酰胺)、HBTU20。/。哌啶/DMF(二甲基甲酰胺) Trp(Boc)-Lys(Mmt)-Wang Resin2、投料量及配比投料配比 投料量 分子量 摩爾比Fmoc-Lys (Mmt) -Wang 0. 73亳摩爾1 10克 1Resin /克Fmoc-Trp (Boc) 1. 152(克/克)11. 52克 526 3HBTU 0.83(克/克) 8.30克 379 30. 168(毫升/N醒 2.40毫升 101 3克)3. 06 (亳升/DMF 44毫升 73 78.1克)3、操作精確稱取10克(O. 73亳摩爾/克)的Fmoc-Lys(Mmt) Wang Resin加入200 亳升的反應(yīng)瓶中，并加入100毫升副F溶脹樹脂30分鐘，抽干，再用DMF振蕩 洗滌樹脂三次，每次50亳升，2分鐘一次，抽干。加50亳升脫保護(hù)試劑(20% 哌啶/DMF)振蕩反應(yīng)30分鐘，抽出脫保護(hù)液，用DMF洗滌樹脂三次，抽干，取 少許樹脂做茚三酮檢測，呈陽性。(茚三酮溶液的配置稱取500亳克茚三酮溶 于IO毫升乙醇中)[茚三酮檢測方法及判斷取少許待檢測樹脂于檢測池中，用DMF洗滌樹脂 一次，加兩滴已配好的茚三酮，75攝氏度下反應(yīng)IO分鐘。取出觀察樹脂顏色， 若樹脂呈藍(lán)色或深藍(lán)色，則表明樹脂有游離的-NH2，即陽性；若樹脂是透明無 色的，則表明樹脂沒有游離的-NH2，即陰性。]依次向反應(yīng)瓶中加入44亳升DMF、 11. 52克Fmoc-Trp (Boc) 、 8. 30克HBTU、 2.40毫升N薩，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做苗三酮檢測，呈陰性。抽出反 應(yīng)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，每次大約一分鐘，抽干。加50亳升脫保護(hù) 液于樹脂中，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陽性。抽出脫保 護(hù)液，用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。實(shí)施例2 Arg(pbf)-Trp(Boc)-Lys(Mmt)-Wang Resin的合成1、 反應(yīng)式Trp(Boc)-Lys(Mmt)-Wang Resin Fmoc國Arg(pbf)、畫M、 DMF、 HBTU Fmoc- Arg(pbi)-Trp(Boc)-Lys(Mmt)-Wang Resin 20V^底嚏/DMF Arg(pbf)-Trp(Boc)-Lys(Mmt)-Wang Resin2、 投料量及配比投料配比投料量 分子量:爾比Fmoc-Arp(pbf)HBTU謹(jǐn)0. 57(克/克) 0. 164(亳升/ 克)3. 01(毫升/克)14.61克 8. 30克2. 40亳升44亳升64137910173126. 4面F 3、操作接上步反應(yīng)，依次向反應(yīng)瓶中加入44毫升DMF、 ".61克Fmoc-Arg(pbf)、 8. 30克HBTU、 2. 40亳升N廳，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚三酮檢測， 呈陰性。抽出反應(yīng)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。量取50亳升脫保護(hù)液加入反應(yīng)瓶中，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚 三酮檢測，呈陽性。抽出脫保護(hù)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。實(shí)施例3 D-Phe-Arg(pbf)醒Trp(Boc)-Lys(Mmt)國Wang Resin1、 反應(yīng)式Arg(pbf)-Trp(Boc)隱Lys(Mmt)-Wang Resin Fmoc-D-Phe、 HBTU、 NMMDMFFmoc隱D-Phe隱Arg(pbf)隱Trp(Boc)-Lys(Mmt)-Wang Resin 20。/。哌嚏/DMF D隱Phe-Arg(pbf)-Trp(Boc)-Lys(Mmt)-Wang Resin2、 投料量及配比投料配比Fmoc—D—PheHBTU投料量 8.82克分子:摩爾比0. 94(克/克)8. 30克387379謹(jǐn)0.272 (毫升/克)2.40亳升101DMF 4.99(亳升/克)44毫升 73 26.43、操作接上步反應(yīng)，依次向反應(yīng)瓶中加入44亳升DMF、 8. 82克Fmoc-D-Phe、 8.30 克HBTU、 2.40亳升N醒，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陰 性。抽出反應(yīng)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。量取脫保護(hù)液50亳升加入反應(yīng)瓶中，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚 三酮檢測，呈陽性。抽出脫保護(hù)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。實(shí)施例4 His(Trt)國D曙Phe-Arg(pbf)國Trp(Boc)國Lys(Mmt)誦Wang Resin1、 反應(yīng)式D-Phe-Arg(pbf)-Trp(Boc)-Lys(Mmt)-WangResin Fmoc-His(Trt)、 HBTU畫M、 DMFFmoc-His(Trt)-D-Phe誦Arg(pbf)-Trp(Boc)-Lys(Mmt)-Wang Resin 20。/o哌嗖/D^IF His(Trt)-D-Phe隱Arg(pbf)-Trp(Boc)國Lys(Mmt)-WangResin2、 投料量及配比投料配比投料量 分子量 摩爾比Fmoc-His HBTU(Trt)14. 12克 8. 30克620 3791畫DMF2. 40亳升44亳升10173126. 40.59(克/克) 0. 17(毫升/ 克)3. 12(亳升/克) 3、操作接上步反應(yīng)，依次向反應(yīng)瓶中加入44亳升DMF、 14. 12克Fmoc-His(Trt) 8. 30克HBTU、 2.40毫升N醒，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚三酮檢測， 呈陰性。抽出反應(yīng)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。量取脫保護(hù)液50亳升加入反應(yīng)瓶中，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚 三酮檢測，呈陽性。抽出脫保護(hù)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。實(shí)施例5Asp(0畫2-Phipr)-His(Trt)-D畫Phe-Arg(pbf)畫Trp(Boc) -Lys(Mmt)-Wang Resin1、 反應(yīng)式His(Trt)國D-Phe-Arg(pbf)-Trp(Boc)-Lys(Mmt)-Wang ResinFmoc-Asp(0-2-Phipr)、 HBTU謂M、 DMFFmoc匿Asp(0-2國Phipr)-His(Trt)-D-Phe國Arg(pbf)-Trp(Boc)-Lys(Mmt)-WangResin 2(T/c哌啶/DMF Asp(0-2-Phipr)-His(Trt)-D-Phe曙Arg(pbf)-Trp(Boc)-Lys(Mmt)WangResin2、 投料量及配比投料配比 投料量 分子量摩爾比10. 80(克/克) 0.23(亳升/克) 4.24(亳升/克)10. 37克 8. 30克 2.40亳升 44亳升473. 5 379 101 731 1 126. 4 9.37克Fmoc-Asp(0-2-Phipr) HBTU ■ 匿3、操作接上步反應(yīng)，依次向反應(yīng)瓶中加入44亳升DMF Fmoc-Asp (0-2-Phipr)、 8. 30克HBTU、 2. 40亳升N應(yīng)，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少 許樹脂做茚三酮檢測，呈陰性。抽出反應(yīng)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。量取脫保護(hù)液50亳升加入反應(yīng)瓶中，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚 三酮檢測，呈陽性。抽出脫保護(hù)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。實(shí)施例6 Nle誦Asp(0畫2-Phipr)-His(Trt)-D曙Phe-Arg(pbf)隱Trp(Boc) 一Lys (Mmt)-Wang Resin1、反應(yīng)式Asp(0陽2-Phipr)-His(Trt)隱D-Phe-Arg(pbf)-Trp(Boc)-Lys(Mmt)-Wang Resin Fmoc-Nle、 HBTU Fmoc-Me-Asp(0-2-Phipr)-His(Trt)-D-Phe-Arg(pbf)-Trp(Boc)-Lys(Mmt)隱Wang Resin醒M、畫F2、投料量及配比Fmoc-NleHBTU薩DMF3、操作 接上步反應(yīng) 克HBTU、 2. 40 ^性。抽出反應(yīng)液投料配比 11. 03(克/克) 0. 30(亳升/克) 5.47(亳升/克)投料量 8. 05克8. 30克2. 40亳升44亳升分子:35337910173摩爾比 1 1 126. 4依次向反應(yīng)瓶中加入44亳升DMF、 8. 05克Fmoc-Nle、 8.30 升N醒，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陰 再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。 量取脫保護(hù)液50亳升加入反應(yīng)瓶中，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚 三酮檢測，呈陽性。抽出脫保護(hù)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。實(shí)施例7 AC-Nle國Asp(0-2-Phipr)誦His(Trt)-D-Phe-Arg(pbf)-Trp(Boc)曙 Lys(Mmt)-Wang Resin1、 反應(yīng)式Nle-Asp(0-2-Phipr)-His(Trt)-D-Phe-Arg(pbf)陽Trp(Boc)-Lys(Boc)-Wang Resin 50。/o醋酐/DMF AC-Nle-Asp(OtBu)隱His(Trt)隱D-Phe-Arg(pbf)國Trp(Boc)-Lys(Mmt)-Wang Resin2、 投料量及配比投料量 分子量 50y。醋酐/DMF 50亳升 1023、 操作接上步反應(yīng)，向反應(yīng)瓶中加入50亳升5056醋酐/DMF，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陰性。抽出反應(yīng)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次, 抽干。干燥。實(shí)施例8 AC-Nle-[Asp-His(Trt)國D-Phe誦Arg(pbf)-Trp-Lysl-Wang Resin1、反應(yīng)式AC陽Nle-Asp(0-2扁Phipr)-His(Trt)-D-Phe-Arg(pbf)隱Trp(Boc)-Lys(Mmt)^W5Hf"Resin 1%TFAINDCM 、AC-Nle-Asp-His(Trt)國D-Phe-Arg(pbf)-Trp(Boc)-Lys-Wang ResinHBTUAC陽Nle- [Asp-His(Trt)-D陽Phe-Arg(pbf)-Trp(Boc)-Lys-Wang Resin2、投料量及配比投料量 400亳升 3.8克 50毫升 1. IO亳升投料配比 105.26亳升/克 113.16亳升/克 1.1毫升/克IOTA IN DCM HBTU DMF 匪 3、搡作接上步反應(yīng)，將已千燥好的肽樹脂加入反應(yīng)瓶中，再將已配制好的400亳 升1"/。TFA IN DCM反應(yīng)液加入反應(yīng)瓶中，25度下反應(yīng)l小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，用 DCM洗滌樹脂三次，DMF振蕩洗滌樹脂4次，再用5%NMM/DMF洗滌樹脂3次， 抽干，茚三酮檢測呈陽性。依次向反應(yīng)瓶中加50亳升DMF、 3.8克HBTU、 1.1 毫升N醒，振蕩反應(yīng)l小時(shí)，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陰性，抽出反應(yīng)液， 再用DMF振蕩洗滌樹脂3次，甲醇洗滌樹脂3次，真空干燥8小時(shí)。實(shí)施例9 AC-Nle-[Asp-His(Trt)-D誦Phe-Arg(pbf)-Trp-LysI國OH1、 反應(yīng)式AC-Nle-[Asp國His(Trt)-D-Phe-Arg(pbf)-Trp國Lys-Wang Resin 芻解潘, AC-Nle-[Asp-His(Trt)-D陽Phe-Arg(pbf)國Trp-Lys卜OH2、 投料量及配比投料量三氟乙酸46.25亳升37間甲苯酚1.25亳升1乙二硫醇1.25毫升1水1.25亳升1體積配比3、操作將已配置好的裂解液加入盛有晉美拉肽樹脂的反應(yīng)瓶中，振蕩反應(yīng)2.5小 時(shí)，抽濾出裂解液，再用IOO亳升三氟乙酸分三次洗滌樹脂，收集裂解液和洗 滌液，減壓濃縮至原體積的1/3,緩慢加入已冷卻好的乙醚中，攪拌，有白色 沉淀析出，在_20攝氏度的冰柜中放置2小時(shí)，抽濾，濾餅用乙醚泡洗3次， 抽干，真空干燥，得粗肽6.4克，收率為80.8%。
權(quán)利要求
1. 一種晉美拉肽的制備方法，其特征在于包含1、固相合成帶保護(hù)基的晉美拉肽；2、樹脂上環(huán)化晉美拉肽；3、從樹脂上切割晉美拉肽；4、HPLC純化晉美拉肽；5、轉(zhuǎn)為醋酸晉美拉肽。
2、 如權(quán)利要求l的制備方法，反應(yīng)步驟如下1) 稱取10克(0. 73亳摩爾/克)的Fmoc-Lys (Mmt) Wang Resin加入200亳 升的反應(yīng)瓶中，并加入100亳升DMF溶脹樹脂30分鐘，抽干，再用DMF振蕩洗 滌樹脂三次，每次50亳升，2分鐘一次，抽干。加50亳升脫保護(hù)試劑(20%哌 啶/DMF)振蕩反應(yīng)30分鐘，抽出脫保護(hù)液，用DMF洗滌樹脂三次，抽干，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陽性。依次向反應(yīng)瓶中加入44亳升DMF、 11. 52克Fmoc-Trp (Boc) 、 8. 30克HBTU、 2.40亳升N固，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陰性。抽出反 應(yīng)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，每次大約一分鐘，抽干。加50毫升脫保護(hù) 液于樹脂中纟振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陽性。抽出脫保 護(hù)液，用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。2) 依次向反應(yīng)瓶中加入44毫升DMF、 14. 61克Fmoc-Arg(pbf)、 8. 30克 HBTU、 2.40亳升N廳，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陰性。 抽出反應(yīng)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。量取50毫升脫保護(hù)液加入反應(yīng)瓶中，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚 三酮檢測，呈陽性。抽出脫保護(hù)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。3) 依次向反應(yīng)瓶中加入44毫升DMF、 8. 82克Fmoc-D-Phe、 8. 30克HBTU、 2.40亳升N畫，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陰性。抽出反 應(yīng)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。量取脫保護(hù)液50亳升加入反應(yīng)瓶中，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚 三酮檢測，呈陽性。抽出脫保護(hù)液，再用DMF振'蕩洗滌樹脂三次，抽干。4) 依次向反應(yīng)瓶中加入44亳升DMF、 14. 12克Fmoc-His(Trt)、 8. 30克 HBTU、 L40毫升N醒，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陰性。 抽出反應(yīng)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。量取脫保護(hù)液50亳升加入反應(yīng)瓶中，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚 三酮檢測，呈陽性。抽出脫保護(hù)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。5) 依次向反應(yīng)瓶中加入44亳升DMF、 9. 37克Fmoc-Asp (O-2-Phipr) 、 8. 30 克HBTU、 2.40亳升N腿，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陰 性。抽出反應(yīng)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。量取脫保護(hù)液50亳升加入反應(yīng)瓶中，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚 三酮檢測，呈陽性。抽出脫保護(hù)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。6)依次向反應(yīng)瓶中加入44亳升函F、 8. 05克Fmoc-Nle、 8. 30克HBTU、 2.40亳升N醒，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陰性。抽出反 應(yīng)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。量取脫保護(hù)液50亳升加入反應(yīng)瓶中，振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂做茚 三酮檢測，呈陽性。抽出脫保護(hù)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。7) 向反應(yīng)瓶中加入50亳升5(^醋酐/DMF,振蕩反應(yīng)30分鐘，取少許樹脂 做茚三酮檢測，呈陰性。抽出反應(yīng)液，再用DMF振蕩洗滌樹脂三次，抽干。干 燥。8) 將已干燥好的肽樹脂加入反應(yīng)瓶中，再將已配制好的400亳升1%TFAIN DCM反應(yīng)液加入反應(yīng)瓶中，25度下反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，用DCM洗滌樹脂 三次，DMF振蕩洗滌樹脂4次，再用5W醒/DMF洗滌樹脂3次，抽干，茚三酮 檢測呈陽性。依次向反應(yīng)瓶中加50亳升畫F、 3. 8克HBTU、 1. 1亳升NMM，振 蕩反應(yīng)l小時(shí)，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陰性，抽出反應(yīng)液，再用匿F振 蕩洗滌樹脂3次，甲醇洗滌樹脂3次，真空干燥8小時(shí)。9) 將已配置好的裂解液加入盛有晉美拉肽樹脂的反應(yīng)瓶中，振蕩反應(yīng)2.5 小時(shí)，抽濾出裂解液，再用ioo亳升三氟乙酸分三次洗滌樹脂，收集裂解液和洗滌液，減壓濃縮至原體積的1/3,緩慢加入已冷卻好的乙醚中，攪拌，有白 色沉淀析出，在-20攝氏度的冰柜中放置2小時(shí)，抽濾，濾餅用乙醚泡洗3次， 抽干，真空干燥，得粗肽6.4克，收率為80.8%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于治療性功能障礙的晉美拉肽(pt141)采用Fmoc(芴甲氧羰基)保護(hù)的固相合成法的制備方法，包含1.固相合成帶保護(hù)基的晉美拉肽；2.樹脂上環(huán)化晉美拉肽；3.從樹脂上切割晉美拉肽；4.HPLC純化晉美拉肽；5.轉(zhuǎn)為醋酸晉美拉肽。
文檔編號(hào)C07K1/00GK101280005SQ20071004882
公開日2008年10月8日 申請(qǐng)日期2007年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月6日
發(fā)明者曉 張, 王和平, 袁辛婭 申請(qǐng)人:揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)四川海蓉藥業(yè)有限公司