專利名稱：蛋白質(zhì)濃縮/純化方法及其裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)濃縮/純化，具體是蛋白質(zhì)濃縮/純化方法及其裝置。
背景技術(shù)：
目前蛋白質(zhì)的濃縮Z純化方法很多，主要有
(一) 利用蛋白質(zhì)溶解度不同進(jìn)行分離，此類方法又可分為蛋白質(zhì)鹽析 法、等電點(diǎn)沉淀法，低溫有機(jī)溶劑沉淀法；
(二) 利用蛋白質(zhì)分子大小差別進(jìn)行分離，這類方法主要有透析和超濾， 凝膠過濾法；
(三) 根據(jù)蛋白質(zhì)帶電性質(zhì)進(jìn)行分離，此類方法又分為電泳法和離子交換. 層析法，其中前者目前只用于分析，而非純化制備；
(四) 根據(jù)配體特異性進(jìn)行分離，即親和色譜法。 至今還沒有單獨(dú)或一套現(xiàn)成的方法能夠把任何一種蛋白質(zhì)從復(fù)雜的混合蛋
白質(zhì)中提取出來，因此往往采取幾種方法聯(lián)合使用。
上述分離方法存在的問題是
1. 操作過程較復(fù)雜；
2. 純化所需的時(shí)間較長；
3. 純化成本較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種方法易行，操作過程簡 易，成本低的蛋白質(zhì)濃縮/純化方法；
本發(fā)明的另一目的是提供實(shí)現(xiàn)該濃縮/純化蛋白質(zhì)方法的裝置。
本發(fā)明通過下述技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)
本發(fā)明蛋白質(zhì)濃縮/純化方法是
利用氨基酸及蛋白質(zhì)等兩性離子在不同PH溶液中，其帶電的性質(zhì)不同的特 性，采用凝膠架橋一分離技術(shù)，在專用裝置中，通過調(diào)節(jié)原池溶液PH值至待純 化氨基酸及蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，使之不帶電荷，在電場作用下，凡是等電點(diǎn)不等 于原池溶液PH值的氨基酸及蛋白質(zhì)分別由原池通過凝膠橋管的凝膠分別移動(dòng)到 正極池或負(fù)極池，而待純化氨基酸及蛋白質(zhì)因其等電點(diǎn)等于原池溶液PH不帶電
荷而留在原池，當(dāng)電場停止作用時(shí)，凝膠管的凝膠便由橋通道作用轉(zhuǎn)為隔離作 用。這樣便實(shí)現(xiàn)了某種氨基酸及蛋白質(zhì)，在電場的作用下，由一個(gè)容器向另一 個(gè)容器轉(zhuǎn)移而達(dá)到分離純化的目的。這種純化制備氨基酸及蛋白質(zhì)的方法稱為 等電凝膠橋隔離電泳法。其制備工藝包括如下步驟
1. 將緩沖液分別加入到原池、正極池、負(fù)極池中；
2. 將待濃縮/純化的蛋白質(zhì)溶液加入到純化設(shè)備的原池中；
3. 在4"C的溫度條件下，向純化設(shè)備的正極池、負(fù)極池通電，在電場作用 下，等電點(diǎn)不同于原池PH值的蛋白質(zhì)、氨基酸離子，沿玻璃凝膠橋管分別向正 極池和負(fù)極池轉(zhuǎn)移。而等于原池PH值的蛋白質(zhì)離子則留在原池；
4. 調(diào)變改變?cè)氐腜H值，改變蛋白質(zhì)、氨基酸的等電點(diǎn)，使另一批蛋白
質(zhì)離子向正、負(fù)極池轉(zhuǎn)移，直至完全純化為止。
用于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的裝置是
它由直流電源、待濃縮/純化蛋白質(zhì)原池、正極池、負(fù)極池及凝膠玻璃橋管 組成。正極池、負(fù)極池與直流電源的正、負(fù)極接通。正極池、負(fù)極池分別由凝 膠玻璃橋管與待濃縮/純化蛋白質(zhì)溶液原池連通；原池在正極池、負(fù)極池上面或
下面均可。
所述凝膠玻璃橋管，用1%瓊脂將其下端封住，冷凝30分鐘，灌1 12%的隔 離膠，灌到4 15cm，用水封住，冷凝30分鐘將水倒出，吸干，冷凝30分鐘后 備用。使用時(shí)，玻璃橋管要浸在正、負(fù)極池及原池中。
所述的正極池、負(fù)極池倒入緩沖液5ml，原池加入緩沖液100 150ml，再把 待分離純化的蛋白質(zhì)溶液加入原池。
所述的池中緩沖液(PH值2 9): 36.6gTris， 48ml mo1/1的HC1或先加水 至80ml，用濃HC1調(diào)PH，再定容至100ml。
所述的隔離膠由4. 9ml蒸餾水，1 6.0ml30。/。的丙烯酰胺，3. 8ml1. 5mo1/1 Tris-HC1， 150 10%的過硫酸銨，6 " 1 TEMED配制而成。
系統(tǒng)安裝好后，加上電泳電壓，此時(shí)待分離的蛋白質(zhì)及氨基酸分別按其電 荷的性質(zhì)從原池通過凝膠橋管進(jìn)入正極池及負(fù)極池，而等屯點(diǎn)等于原池PH的蛋 白質(zhì)則留在原池。通過調(diào)節(jié)原池的PH值，使不同等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)在電場作用下 進(jìn)入正、負(fù)極池，直至純化為止。
分離純化的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)純度以SDS-丙烯酰胺凝膠電泳圖譜出現(xiàn)單一區(qū)帶 為標(biāo)準(zhǔn)；氨基酸純度以氨基酸分析儀出現(xiàn)單峰為標(biāo)準(zhǔn)。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于濃縮純化方法新穎，操作容易，分離設(shè)備簡單，成本 低，分離純化時(shí)間縮短、效率高。


圖1為本發(fā)明系統(tǒng)結(jié)構(gòu)示意圖。
1為直流電池、2為正極池、3為負(fù)極池、4為凝膠玻璃橋管、5為待分離純
化物質(zhì)原池。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明蛋白質(zhì)濃縮純化系統(tǒng)由50 300V的直流電源1、 l厘米i有機(jī)玻璃正 極池2、 .1厘米:'有機(jī)玻璃負(fù)極池3、裝有凝膠的玻璃橋管4、 1000厘米:'待分離 純化蛋白質(zhì)原池5組成。直流電源1的正、負(fù)極分別與正極池2、負(fù)極池3連接， 凝膠橋管4分別連通正極池2與原池5、負(fù)極池3與原池5，并浸沒池中。
正極池2、負(fù)極池3、原池5，分別加入緩沖液，緩沖液(PH2-9.0)的制備 方法36.6gTris， 48mllmol/1的HC1或先加水至80ml，用濃HC1調(diào)PH，再定 容至100ml。
凝膠橋管4內(nèi)灌充6~12%隔離膠，下端用1%的瓊脂封住，凝膠橋管4浸沒 在正極池2、負(fù)極池3、原池5中。
隔離膠的制備方法是由4.9ml蒸餾水，1 6.0ml3(m的丙烯酰胺， 3.8mll.5mo1/1 Tris-HC1, 150 u 110%的過硫酸銨，6 " ITEMED配制而成。
權(quán)利要求
1.蛋白質(zhì)濃縮/純化方法，其特征是該方法包括下列步驟(1)將緩沖液分別加入到原池、正極池、負(fù)極池中；(2)將待濃縮/純化的蛋白質(zhì)溶液加入到蛋白質(zhì)濃縮/純化裝置的原池中；(3)在4℃的溫度條件下，向純化設(shè)備的正極池、負(fù)極池通電，在電場作用下，等電點(diǎn)不同于原池PH值的蛋白質(zhì)、氨基酸離子，沿玻璃凝膠橋管分別向正極池和負(fù)極池轉(zhuǎn)移。而等于原池PH值的蛋白質(zhì)離子則留在原池；(4)調(diào)變改變?cè)氐腜H值，改變蛋白質(zhì)、氨基酸的等電點(diǎn)，使另一批蛋白質(zhì)離子向正、負(fù)極池轉(zhuǎn)移，直至完全純化為止。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)濃縮/純化方法，其特征是所述的電源(1)為直流電源，電泳電壓為5(K300V。
3. —種用于實(shí)現(xiàn)權(quán)利要求l的方法的裝置，其特征是它主要由直流電源(1)、正極池(2)、負(fù)極池(3)、原池(5)、凝膠橋管(4)組成，正極池(2)、 負(fù)極池(3)分別與直流電源的正、負(fù)極連接，凝膠橋管(4)分別連通原池(5) 與正極池(2)、負(fù)極池(3)，正極池(2)、負(fù)極池(3)、原池(5)內(nèi)盛緩沖液。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的蛋白質(zhì)濃縮/純化的裝置，其特征是所述的緩沖 液為PH二2-9.0，由36.6gTris， 48mll mo1/1的HC1或先加水至80ml，用濃HC1 調(diào)PH，再定容至100ml而成。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的蛋白質(zhì)濃縮/純化的裝置，其特征是所述的凝膠 橋管內(nèi)裝隔離膠，隔離膠由4.9ml蒸餾水，1 6.0ml3(m的丙烯酰胺， 3. 8ml1. 5mo1/1 Tris-HCl， 150 u 110%的過硫酸銨，6 u ITEMED配制而成。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蛋白質(zhì)濃縮/純化方法及其裝置，它是利用蛋白質(zhì)、氨基酸離子帶電荷性質(zhì)的不同，在專用設(shè)備中的電場作用下通過凝膠橋管從一個(gè)容器轉(zhuǎn)移到另一個(gè)容器，而等電點(diǎn)等于原池pH值的則留在原地，通過改變?cè)豴H值，使另一部分等電點(diǎn)不等于調(diào)整后原池pH值的蛋白質(zhì)分子轉(zhuǎn)移，直至純化完為止。其裝置主要由原池、正極池、負(fù)極池、凝膠橋管、直流電源組成，直流電源的正負(fù)極分別與正極池、負(fù)極池連接，凝膠橋管分別連通原池與正極池、原池與負(fù)極池。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于分離純化方法新穎，易操作掌握，分離設(shè)備簡單，成本低，分離時(shí)間短，效率高。
文檔編號(hào)C07K1/00GK101195651SQ20071004929
公開日2008年6月11日 申請(qǐng)日期2007年6月8日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月8日
發(fā)明者仇小強(qiáng), 施文祥, 李勝聯(lián), 陸明深, 陳森洲 申請(qǐng)人:桂林醫(yī)學(xué)院