專利名稱：多西他賽的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于多西他賽(docetaxel)的生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
多西他賽是以紫杉醇(paclitaxel)為基礎(chǔ)改進創(chuàng)新的另一種療效極為顯著的 抗腫瘤藥物，具有廣譜的抗白血病和抗實體腫瘤活性，在世界80多個國家和地 區(qū)批準(zhǔn)上市，現(xiàn)在臨床用于乳腺癌、卵巢癌、非小細(xì)胞肺癌、胃癌和結(jié)腸癌等， 研究表明對前列腺癌、胰腺癌、軟組織肉瘤、頭頸部癌、食管癌等也有很好的 治療作用。
<formula>complex formula see original document page 5</formula>
多西他賽的結(jié)構(gòu)與紫杉醇極為相似，不同在于多西他賽中3'位的氨基上的 叔丁氧羰基代替了苯甲?；?，C-10的羥基代替了乙酰氧基(EP253738， US4814470)。多西他賽不直接存在于天然產(chǎn)物中，只能通過半合成或全合成的 方法獲得，目前半合成方法己經(jīng)取得成功。半合成是指用從天然產(chǎn)物中提取分 離出的與目標(biāo)物有相似結(jié)構(gòu)的紫杉垸類(taxane,稱為先導(dǎo)化合物)為原料，通過 化學(xué)反應(yīng)來得到目標(biāo)物。多西他賽的半合成方法是利用歐洲紅豆杉(Taxus baccata)中提取出來的IO-去乙?；涂ㄍII (10-deacety baccatingIII ,簡稱 10-DAB)為原料，與相關(guān)的側(cè)鏈進行反應(yīng)而制成。目前普通應(yīng)用的相關(guān)側(cè)鏈主 要有直鏈型的N-叔丁氧基羰基-(2R， 3S) -3-苯基異絲氨酸及其酯(Tetrahedron Letter 33:5185,1992)，單一結(jié)構(gòu)的卩-內(nèi)酰胺(J.Org.Chem.56:1681,1991;Tetrahedron 48:6985, 1992)，含N-叔丁氧基羰基的噁唑烷型五元環(huán)酸(CN1087905A)等。 還有一些帶保護基團的N-叔丁氧基羰基-(2R， 3S) -3-苯基異絲氨酸和帶保護
基團的p-內(nèi)酰胺類。半合成法制備多西他賽的技術(shù)己經(jīng)足夠成熟，新開發(fā)出來 的相關(guān)側(cè)鏈也非常多，但如何優(yōu)化工藝過程，提高收率，降低成本，如何充分 利用天然產(chǎn)物中提取分離得到的與目標(biāo)物有相似結(jié)構(gòu)的多種紫杉烷類，廣泛開 拓先導(dǎo)化合物的來源，對于降低產(chǎn)品價格，綜合利用有限資源等，有著十分重 要的意義。
本發(fā)明提供一種新的多西他賽的生產(chǎn)方法，能優(yōu)化工藝過程，提高收率， 充分利用國內(nèi)已有紅豆杉資源，減少原料進口節(jié)省外匯開支，降低產(chǎn)品成本和 價格。
這種新的多西他賽的生產(chǎn)方法，包括
第一步，中間體io-去乙?；涂ㄍ的制備
R2代表氫原子或乙?；?， R3代表氫原子或木糖基，
R4代表苯甲酰基或-CO (CH2) nCH3， n二2或4，或-COC (CH3) =CHCH3， R5代表氫原子或-CH3，
必要時經(jīng)氧化裂解或酶解得R3=H的化合物，再必要時經(jīng)還原反應(yīng)得到 R產(chǎn)H ， R尸H的化合物，即10-去乙?；涂ㄍ。

發(fā)明內(nèi)容
其中R,代表氫原子或下式: 式I包含了可從天然紅豆杉(全球十一個品種)獲得的對腫瘤活性較低的 化合物?，F(xiàn)在這些化合物有些正在被利用，用于半合成紫杉醇或多西他賽，而 絕大部分還仍未被利用。式I代表的化合物中，常見的可用于本發(fā)明的有巴卡
亭in、 io-去乙?；涂ㄍn、三尖杉寧堿、io-去乙?；馍紝帀A、io-去乙 ?；仙即肌?-木糖基巴卡亭m、 7-木糖基-io-去乙酰基巴卡亭m、 7-木糖基-三
尖杉寧堿、7-木糖基-10-去乙?；馍紝帀A、7-木糖基-紫杉醇、7-木糖基-10-去乙?；仙即肌?-木糖基-10-去乙?；仙即糃、 7-木糖基紫杉醇C等。
特別地，當(dāng)式I代表的化合物中含有7-木糖基時，則需經(jīng)氧化裂解或酶解， 除去木糖基使R3=H。具體方法有高碘酸鹽法(US5200534; US5367086; US5856532)和酶法(Semilh， J.Nat.Prod.,1984,47,131;公開號CN1241565A)。
另外，當(dāng)&、 R2都不是氫原子時， 一般都要經(jīng)過還原反應(yīng)使羰基斷開，使
K4、 R2均變成氫原子。
當(dāng)R產(chǎn)R產(chǎn)R^H時，即是本發(fā)明所述的一種中間體——10-去乙?；涂ㄍ?br> III。
特殊地，當(dāng)R3代表氫原子，R2代表乙?；?，R,為式n且R5代表氫原子， R4代表苯甲酰基，則成為具有高抗腫癌活性的紫杉醇。
在紫杉醇結(jié)構(gòu)中，若R4的苯甲?；?CO (CH2) 4CH3代替，則成為紫杉 醇C (參見J .Nat.Prod.,1994,57，116~122)，紫杉醇C及其同系物并不是天然存在 的，但可通過細(xì)胞培養(yǎng)法和半合成法獲得。
第二步，對第一步所得的中間體IO-去乙?；涂ㄍII中7位和IO位的羥
基進行保護，即以G分別代替己成為氫原子的R3、 R2，得到下式<formula>complex formula see original document page 7</formula>
其中G代表羥基保護基。
第三步，以下式化合物對式m進行酯化，
<formula>complex formula see original document page 8</formula>IV
其中PG代表羥基保護基，可以與式III中的G相同，也可以不同，得到下式:
<formula>complex formula see original document page 8</formula> V
其中PG同上定義，脫除PG和G得到目標(biāo)產(chǎn)物一多西他賽。 第四步，多西他賽的純化
① 脫除PG和G所得的含有多西他賽的產(chǎn)物用有機溶液萃取，
② 濃縮萃取液，得到含多西他賽的固體，
③ 所得固體以硅膠、二氯甲烷/乙酸乙酯系統(tǒng)進行柱層析，收集所得有效成 分，干燥，
④ 有效成分干燥物再經(jīng)C18 、乙腈/水系統(tǒng)柱層析，結(jié)晶并將結(jié)晶物干燥， 得到經(jīng)HPLC檢驗純度298%的產(chǎn)品。
如果式I中，R,和/或R2為非氫原子，則需進行還原反應(yīng)，還原劑可選自有
機還原劑或無機還原劑。有機還原劑選自肼及其衍生物如水合肼、苯肼，無機 還原劑為金屬氫化物，選自氫化鋁鋰(LiAlH4)，氫化硼鋰(LiBH4)，氫化硼鈉
(NaBH4)，氫化硼鉀(KBH4)，及其有關(guān)衍生物如三仲丁基氫化硼鋰(<formula>complex formula see original document page 8</formula>，硫代氫化硼鈉(NaBH2S3)，氰基氫化硼鈉(NaBH3CN)等。如 用氫化鋁鋰作還原劑，反應(yīng)需在無水條件下進行，且不能使用含有羥基或巰基的化合物作溶劑，常用無水四氫呋喃作溶劑。以氫化硼鹽作還原劑時反應(yīng)常選 用醇類或醚類作為溶劑，如甲醇、乙醇、異丙醇、二甲氧基乙醚等。優(yōu)選有機 還原劑水合肼，在甲醇中進行，可使反應(yīng)易于控制，且在室溫下進行，反應(yīng)后
易于處理。通過TLC法或HPLC法檢識反應(yīng)完成后，用無機酸(鹽酸、稀硫酸) 或有機酸(乙酸、檸檬酸、乳酸、丙酸)中和，用與反應(yīng)介質(zhì)溶劑不相混溶的 有機溶劑(酯類如乙酸乙酯、醚類如二甲醚、鹵代脂肪烴如二氯甲烷)萃取， 得到含10-去乙?；涂ㄍII的萃取液，去除有機溶劑，經(jīng)過純化(結(jié)晶或色譜 分離)，得到純度295°/。的IO-去乙酰基巴卡亭III (HPLC法)。
對式II進行羥基保護形成式m時，選用的羥基保護基G選自(2，2,2-三氯乙 氧基)羰基、2- (2-三氯甲基丙氧基)羰基、三烷基甲硅垸基、二垸基芳香甲硅 烷基、垸基二芳基甲硅垸基或三芳基甲硅垸基，其中垸基部分有1 4個碳原子， 芳基部分尤指苯基。
式VI中的PG也是羥基保護基，除選自G外，也可選自垸基氧-垸基氧基、 垸?；?、芳基烷酰基，其中垸基部分含有1 4個碳原子，芳基部分尤指苯基。
式ni和式iv的酯化反應(yīng)在密閉的容器中，有惰性氣體保護，以醚類、酮類、
酯類、腈類、脂肪烴、鹵代脂肪烴、芳香烴為介質(zhì)，使用金屬堿性催化劑，在-78 (TC 進行。惰性氣體主要使用氮氣，也可以是二氧化碳，反應(yīng)介質(zhì)中醚類，主要有 四氫呋喃、二甲醚、二異丙基醚、甲基叔丁基醚或二噁唑，酮類如甲基異丁基 酮，酯類如乙酸乙酯、乙酸異丙脂或乙酸正丁酯，腈類如乙腈，脂肪烴類如戊 烷、己烷、庚烷，鹵代脂肪烴如二氯甲垸或l，2-二氯乙烷，芳香烴如苯、甲苯、 二甲苯、乙苯、異丙苯或氯苯。金屬堿性催化劑包括金屬的有機堿、強有機堿， 如NaH、 n-BuLi、 LDA、 LiHMDS、 NaHMDS、 KHMDS。在N2保護下，以四 氫呋喃為介質(zhì)，使用n-BuLi的正己烷溶液，在-45 -3(TC能很好酯化。用有機溶 劑萃取后，再去除有機溶劑即得到酯化產(chǎn)物(式V)。
對式V所示的化合物，當(dāng)羥基保護基G和/或PG為(2,2,2-三氯乙氧基)羰 基、2- (2-三氯甲基丙氧基)羰基，或PG為垸基氧-烷基氧基時，脫除是在無機
酸或有機酸或其混合物和鋅并必要時在銅同時存在下在含有1 3個碳原子的脂 肪醇溶液或脂肪酸酯中于0 70。C進行的；當(dāng)羥基保護基G和/或PG為三烷基甲 硅烷基、二烷基芳香甲硅烷基、烷基二芳基甲硅烷基或三芳基甲硅烷基時，脫
除是在無機酸或有機酸或其混合物存在下在有機溶劑中于0 7(TC進行的。無機
酸如鹽酸、硫酸，有機酸如甲酸、乙酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、對甲苯磺酸， 無機酸或有機酸可用催化量或化學(xué)計算量或過量。有機溶劑選自醇如甲醇、乙 醇、丙醇、異丙醇，醚如四氫呋喃、二異丙醚、甲基叔丁基醚，酯如乙酸乙酯、 乙酸異丙酯、乙酸正丁酯，脂肪烴如戊垸、己烷、庚烷，鹵代脂肪烴如二氯甲
烷或l,2-二氯乙烷，芳香烴如苯、甲苯、二甲苯及腈如乙腈。脫除反應(yīng)以堿中和 而終止。脫除G和PG是一次反應(yīng)同時進行的。
當(dāng)羥基保護基PG是垸?；头枷阃轷；鶗r，脫保護是在有機堿或無機堿存 在下，在有機溶劑中于25"C進行的。有機堿選自伯胺、仲胺、叔胺、四氫吡咯， 無機堿選自氨水、碳酸或磷酸的鉀鹽或鈉鹽。有機溶劑選自醇類、醚類、烴類 及腈類。優(yōu)選在甲醇中使用二乙胺于S15t:下進行。脫除反應(yīng)以酸中和而終止。
當(dāng)脫除G和PG需分步進行時，既可先脫除G，也可先脫除PG。
用于萃取多西他賽的有機溶劑選自與脫除G和域PG的有機溶劑不相混淆， 且同時也不與水相混溶的有機溶劑，如醚類、酯類、鹵代脂肪烴和芳香烴。
純化多西他賽采用兩次柱層析，第一次柱層析為硅膠、二氯甲垸/乙酸乙酯 系統(tǒng)，固定相硅膠選用200-300目柱層析用中性偏酸性硅膠，流動相二氯甲烷/ 乙酸乙酯混合比例為75 55/25 45 (V/V)。第二次柱層析為C18、乙腈/水系統(tǒng)， 固定相C18的PH=6.5~7.5，粒徑20 45pm，標(biāo)稱孔徑IOOA，流動相乙腈/水為 35~55/65 45 (V/V)。第二次柱層析也可以使用性能相當(dāng)?shù)腃18作為固定相。
經(jīng)過兩次層析純化的產(chǎn)物，最后用有機溶劑結(jié)晶。結(jié)晶用的有機溶劑選用 醇類、腈類如乙腈、酮類、醚類如二甲醚、酯類、鹵代脂肪烴類如二氯甲烷或 芳香烴類。結(jié)晶時，這些溶劑可以單獨使用，也可以混合使用。還可以將上述 有機溶劑與能與它們混溶而又不溶解(或略微溶解)多西他賽的有機液體如石 油醚、三氯甲浣混用，也可以將上述有機溶劑中能與水混溶的部分有機溶劑與 水混溶來進行結(jié)晶。本發(fā)明提供的制備多西他賽的方法，在原料來源上并不局限于從歐洲紅豆 杉枝葉中直接提取分離的IO-去乙酰基巴卡亭III，而是充分利用了各種紅豆杉 (全球十一個品種)中提取分離紫杉醇后的多種副產(chǎn)物，通過相應(yīng)的化學(xué)方法
或生物方法將其轉(zhuǎn)化為io-去乙?；涂ㄍ。特別地，通過細(xì)胞培養(yǎng)法和半合
成法產(chǎn)生的紫杉醇C及其同系物，也可用作本發(fā)明的原料，而它們并不是天然 存在的。中國沒有歐洲紅豆杉，因而不能直接通過生產(chǎn)得到天然存在的10-去乙 ?；涂ㄍII，但中國有大量種植的南方紅豆杉、云南紅豆杉和蔓地亞紅豆杉， 它們所含有的各種副產(chǎn)物的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于紫杉醇，因此，利用這些副產(chǎn)物來生產(chǎn) 多西他賽，可減少原料進口，節(jié)省外匯開支，明顯降低產(chǎn)品成本和價格，并大 大提高中國紅豆杉植物種植行業(yè)的附加值。
本發(fā)明采用兩次柱層析純化多西他賽，利用正相層析(硅膠、二氯甲烷/乙 酸乙酯系統(tǒng))和反相層析(C18、乙腈/水系統(tǒng))分別地去除極性大于或小于多 西他賽的雜質(zhì)，能夠高收率地獲得純度較高的產(chǎn)品。
具體實施方式
實施例1
由含7-木糖基的紫杉垸的混合物制備10-DAB ( — )
1.2g上述混合物(比例未知)加入到60ml甲醇/氯仿(4:1)溶液中，加入 0.7g高碘酸鈉和5ml、 0.5M的硫酸，在室溫下反應(yīng)3小時。反應(yīng)混合物加60ml 的水稀釋，用60ml氯仿萃取3次。有機相萃取物濃縮干燥，得到無色固體1.2g。 該固體物質(zhì)(1.2g)用40ml甲醇溶解，向溶液中加4ml濃度為50%的醋酸和0.5ml 苯肼，混合液在5(TC反應(yīng)2小時。加40ml的水稀釋，用40ml氯仿萃取3次。有 機相萃取物濃縮干燥，得到固體1.23g。干燥物以二氯甲垸洗滌，過濾，得到的 固體以10倍重量的甲醇/二氯甲垸(35/65)混合溶劑溶解，攪拌中往其中加入 10 12倍重量的6#溶劑油使晶體析出，過濾，干燥得類白色HPLC峰面積^95。/。 的10-DAB0.5克。 實施例2
由含7-木糖基的紫杉垸的混合物制備10-DAB (二)
稱取上述混合物(比例未知)10.0g置反應(yīng)釜中，加入三氯甲垸/甲醇(1: 4)
混合溶液200ml，攪拌混懸，另稱取高碘酸鈉6.5g以15ml0.5mol/L的稀硫酸溶 解后加入釜中，水浴加熱至4(TC，攪拌反應(yīng)2小時；混合液過濾，濾渣以甲醇 洗滌，合并濾液及洗滌液，往混合液中加水稀釋，析出的沉淀物以二氯甲垸萃 取3次，合并萃取液，減壓濃縮，得含7-二醛-10-去乙?；仙即紳饪s物。
將濃縮物置平底燒瓶中以200ml甲醇溶解，攪拌中加入80e/。的水合肼20ml， 在2(TC下攪拌反應(yīng)3.0小時，TLC檢識，反應(yīng)完全后反應(yīng)混合液以0.5M稀鹽酸 中和至中性，加水稀釋后以乙酸乙酯萃取，有機層進行減壓濃縮，干燥。干燥 物以100ml 二氯甲垸洗滌，過濾，得到的固體以10倍重量的甲醇/二氯甲烷 (35/65)混合溶劑溶解，攪拌中往其中加入10~12倍重量的6#溶劑油使晶體析 出，過濾，干燥后得純度^95%的10-DAB4.0g。 實施例3
由不含7-木糖基的紫杉烷的混合物制備10-DAB
稱取含巴卡亭m/io-去乙酰基紫杉醇/io-去乙?；馍紝帀A/io-去乙?；?br> 紫杉醇C的混合物(比例未知)原料10.0g，用200ml甲醇溶解置平底燒瓶中， 攪拌，并加入80%的水合肼14ml，在溫度為2(TC的條件下，攪拌反應(yīng)2.0小時， TLC檢識(硅膠G， 5%硫酸顯色)，待原料斑點幾乎消失并不再有變化時停止 反應(yīng)。將反應(yīng)混合液以0.5M稀鹽酸中和至中性，加水稀釋甲醇濃度降至40%以 下?；旌弦阂远燃淄檩腿。袡C萃取層減壓濃縮，干燥。干燥物以100ml 二 氯甲烷洗滌，過濾，得到的固體以10倍重量的甲醇/二氯甲垸(35/65)混合溶 劑溶解，攪拌中往其中加入10 12倍重量的6#溶劑油使晶狀析出，過濾，干燥 得類白色HPLC峰面積^95%的10-DAB4.0克。 實施例4
由紫杉醇C制備10-DAB
紫杉醇C10.0g，以200ml甲醇溶解置平底燒瓶中，攪拌中加入1.0g硼氫化 鈉l.Og，在2(TC下攪拌反應(yīng)1.0小時，TLC檢識，反應(yīng)完全后反應(yīng)混合液以0.5M 稀鹽酸中和至中性，加水稀釋后以乙酸乙酯萃取，有機層進行減壓濃縮，干燥。 干燥物以180ml甲醇溶解置平底燒瓶中，攪拌中加入80%的水合肼12ml，在2(TC 下攪拌反應(yīng)2.0小時，TLC檢識，反應(yīng)完全后反應(yīng)混合液以0.5M稀鹽酸中和至
中性，加水稀釋后以乙酸乙酯萃取，有機層進行減壓濃縮，干燥。干燥物以100ml
二氯甲垸洗滌，過濾，得到的固體以10倍重量的甲醇/二氯甲烷(35/65)混合 溶劑溶解，攪拌中往其中加入10~12倍重量的6#溶劑油使晶體析出，過濾，干 燥后得純度35%的10-DAB4.9g。 實施例5
由10-去乙酰基三尖杉寧堿制備10-DAB
10-去乙?；馍紝帀A10g，以200ml甲醇溶解置平底燒瓶中，攪拌中加 入80%的水合肼14ml，在2(TC下攪拌反應(yīng)2.0小時，TLC檢識，反應(yīng)完全后反 應(yīng)混合液以0.5M稀鹽酸中和至中性，加水稀釋后以乙酸乙酯萃取，有機層進行 減壓濃縮，干燥。干燥物以100ml二氯甲垸洗滌，過濾，得到的固體以10倍重 量的甲醇/二氯甲烷(35/65)混合溶劑溶解，攪拌中往其中加入10 12倍重量的 6#溶劑油使晶體析出，過濾，干燥后得純度295%的10-DAB6.5g。 實施例6
由7-木糖-10-去乙酰基三尖杉寧堿制備10-DAB
稱取7-木糖-10-去乙?；仙既馍紝帀A10.0g置反應(yīng)釜中，加入三氯甲烷 /甲醇(i:4)混合溶液200ml，攪拌混懸，另稱取高碘酸鈉6.5g以15ml0.5mol/L 的稀硫酸溶解后加入釜中，水浴加熱至4(TC，攪拌反應(yīng)2小時；混合液過濾， 濾渣以甲醇洗漆，合并濾液及洗滌液，往混合液中加水稀釋，析出的沉淀物以 二氯甲垸萃取3次，合并萃取液，減壓濃縮，得含7-二醛-10-去乙?；馍紝?堿濃縮物。
將濃縮物以200ml甲醇溶解置平底燒瓶中，攪拌中加入80e/。的水合肼20ml， 在2(TC下攪拌反應(yīng)3.0小時，TLC檢識，反應(yīng)完全后反應(yīng)混合液以0.5M稀鹽酸 中和至中性，加水稀釋后以乙酸乙酯萃取，有機層進行減壓濃縮，干燥。干燥 物以100ml 二氯甲烷洗滌，過濾，得到的固體以10倍重量的甲醇/二氯甲垸 (35/65)混合溶劑溶解，攪拌中往其中加入10~12倍重量的6#溶劑油使晶體析 出，過濾，干燥后得純度^95%的10-DAB4.2g。 實施例7
由10-DAB制備7,10-二 Troc-10-DAB
稱取10-DABlO.Og,用160ml經(jīng)4A分子篩脫水處理的吡啶(含水量降至 $0.01%)溶解置密閉帶攪拌反應(yīng)器中，通氮氣保護，冰水浴，使體系溫度3"C， 攪拌中滴加氯甲酸三氯乙酯[提供(2,2,2-三氯乙氧基)羰基]7.5ml，攪拌反應(yīng) 30min后自然升溫，再攪拌2.0h后，TLC檢識(硅膠G， 5%硫酸顯色)反應(yīng)結(jié) 束后將混合液放出?；旌弦杭铀♂屖惯拎さ暮窟_(dá)30%以下后，以二氯甲烷 萃取至水層無反應(yīng)目的物，有機層經(jīng)0.5M稀鹽酸洗滌至無吡啶氣味，將有機層 減壓濃縮、干燥，得淡黃色干燥物。固體用3 5倍量的乙醇水浴加熱溶解，趁 熱往其中加入純化水使乙醇濃度降至50%，冷卻析晶，過濾干燥，得到HPLC 峰面積295%的7,10-二 Troc-10-DAB15.7克。 實施例8
由10-DAB制備7,10-二 Tes-10-DAB
稱取10-DAB10.0g，用160ml經(jīng)4A分子篩脫水處理的吡啶(含水量降至 SO.01%)溶解置密閉帶攪拌反應(yīng)器中，通氮氣保護，冰水浴，使體系溫度^'C， 攪拌中滴加0.7mol的三乙基氯硅垸，攪拌反應(yīng)10h后，TLC檢識(硅膠G， 5% 硫酸顯色)反應(yīng)結(jié)束后將混合液放出?；旌弦杭铀♂屖惯拎さ暮窟_(dá)30%以 下后，以二氯甲垸萃取至水層無反應(yīng)目的物，有機層經(jīng)0.5M稀鹽酸洗滌至無吡 啶氣味，將有機層減壓濃縮、干燥，得淡黃色干燥物。固體用3 5倍量的乙醇 水浴加熱溶解，趁熱往其中加入純化水使乙醇濃度降至50%，冷卻析晶，過濾 干燥，得到HPLC峰面積295%的7,10-二 Tes-10-DAB13.3克。 實施例9
酯化反應(yīng)(一)
稱取7，10- 二 Troc-10-DAB10.0g ， Ac-P內(nèi)酰胺多烯紫杉醇側(cè)鏈 [(3R,4S)-3-(acetyloxy)-2-oxo-4-phenyl-1 -Azetidinecarboxylic acid， 1,1 -dimethylethyl ester] 8.0g置密閉帶攪拌反應(yīng)器中，通氮氣保護，加入經(jīng)4A分子篩脫水處理的 四氫呋喃(含水量降至^).01%) 160ml溶解，低溫冷卻使溫度-35r，攪拌中往 反應(yīng)器緩慢滴加2.5M正丁基鋰正己烷溶液5.2ml，攪拌反應(yīng)30min后自然升溫， 繼續(xù)攪拌反應(yīng)，2.0h后取樣TLC檢識反應(yīng)結(jié)束后將混合液放出?；旌弦杭铀?釋后以二氯甲烷萃取至水層無反應(yīng)目的物，有機層減壓濃縮干燥得含2'-acetyl
隱7，10-二 Troc-Docetaxel固體11.8克。 實施例10
酯化反應(yīng)(二)
稱取7，10- 二 Tes-10-DAB10.0g ， Ac-p內(nèi)酰胺多烯紫杉醇側(cè)鏈 [(3R，4S)-3-(acetyloxy)-2-oxo-4-phenyl-1 -Azetidinecarboxylic acid, 1 ， 1 -dimethylethyl ester] 8.0g置密閉帶攪拌反應(yīng)器中，通氮氣保護，加入經(jīng)4A分子篩脫水處理的 四氫呋喃(含水量降至^).01%) 160ml溶解，低溫冷卻使溫度-40。C，攪拌中往 反應(yīng)器緩慢滴加2.5M正丁基鋰正已垸溶液5.2ml，攪拌反應(yīng)30min后自然升溫， 繼續(xù)攪拌反應(yīng)，2.0h后取樣TLC檢識反應(yīng)結(jié)束后將混合液放出?；旌弦杭铀?釋后以二氯甲垸萃取至水層無反應(yīng)目的物，有機層減壓濃縮干燥得含2'-acetyl -7，10-二 Tes-Docetaxel固體11.2克。 實施例11
由2'-acetyl畫7,10-二 Troc-Docetaxel制備2'-acetyl -Docetaxel固體 取含2'-acetyl -7,10-二 Troc-Docetaxel固體2.0g以40ml甲醇溶解，加入鋅 粒3.0g，冰醋酸12.0ml和純水5.0ml混合，在65。C攪拌2.0h后停止反應(yīng)，反應(yīng) 液以碳酸氫鈉溶液中和至PH6 7，加水稀釋至甲醇濃度降至30%后以二氯甲烷 萃取至水層無反應(yīng)目的物，合并有機層濃縮、干燥得含2'-acetyl -Docetaxel固體 1.3克。 實施例12
由2'-acetyl畫7,10-二 Tes-Docetaxel制備2'-acetyl —Docetaxel固體
取含2'-acetyl -7,10-二 Tes-Docetaxel固體2.0g以40ml四氫呋喃溶解，冰醋
酸10.0ml和純化水5.0ml混合，在室溫下攪拌反應(yīng)6h，反應(yīng)液以碳酸氫鈉溶液
中和至PH6~7，加水稀釋，沉淀物以二氯甲烷萃取至水層無反應(yīng)目的物，合并
有機層濃縮、干燥得含2'-acetyl -Docetaxel固體1.3克。
實施例13
由2'-acetyl-Docetaxel帝U備Docetaxel
取含2'-acetyl-Docetaxel固體2.0g以30ml甲醇溶解，置冰水浴中冷卻至 10°C，攪拌中加入經(jīng)預(yù)冷卻至1(TC的二乙胺甲醇溶液(0.5M) 30ml攪拌反應(yīng)，
TLC檢識，2.0h后停止反應(yīng)，混合液加0.25M稀鹽酸中和至PH6 7，加水稀釋 至甲醇濃度降至30%后以二氯甲烷萃取至水層無反應(yīng)目的物，合并有機層濃縮、 干燥得含Docetaxd固體1.7克。 實施例14
酯化反應(yīng)(三)
7,10- 二 Troc-10-DAB10.0g ， EE-P 內(nèi)酰胺多烯紫杉醇側(cè)鏈 [(3R,4S)-3-( 1 -ethoxyethoxy)-2-oxo-4-phenyl-1 -Azetidinecarboxylic acid， 1,卜 dimethylethyl ester] 8.0g置密閉反應(yīng)器中，通氮氣保護，加入經(jīng)4A分子篩脫水 處理的四氫呋喃160溶解，低溫冷卻使溫度-40。C ，攪拌中往反應(yīng)器緩慢滴加2.5M 正丁基鋰正已烷溶液5.2ml，攪拌反應(yīng)30min后自然升溫，繼續(xù)攪拌反應(yīng)，2.0h 后停止反應(yīng)，混合液加水稀釋后以二氯甲烷萃取，有機層減壓濃縮干燥得含 2'-(l-ethoxyethoxy ) -7，10國Troc-Docetaxel固體12.0克。 實施例15
2'-(l-ethoxyethoxy )-7,10-二 Troc-Docetaxel審lj備Docetaxel
取含2'-(l-ethoxyethoxy ) -7,10-Troc-Docetaxel固體2.0g以40ml甲醇溶解，
加入鋅粒3.0g，冰醋酸12.0ml和純水5.0ml混合，在65'C攪拌2.0h后停止反應(yīng)，
反應(yīng)液以碳酸氫鈉溶液中和至PH6 7以二氯甲烷萃取，有機層減壓濃縮干燥得
含Docetaxel固體1.2克。
實施例16
Docetaxel的純4七
依實施例13所得的含Docetaxel固體10g以二氯甲垸加熱溶解，過濾，冷 卻至室溫。然后以200~300目中性偏酸性硅膠為固定相，二氯甲垸/乙酸乙酯 70/30 (V/V)混合溶劑為流動相按lmL/min的速度進行層析分離純化，用TCL 或HPLC檢識，收集有效成分洗脫液，濃縮、干燥。得到HPLC檢測多西紫杉 醇含量^90%的白色固體6.5克。
稱取含量290。/。的多西紫杉醇6.0g，用純乙腈水浴加熱，攪拌完全溶解；過 濾，然后以PI^6.5 7.5，粒徑20 45^n，標(biāo)稱孔徑100A的C18為固定相，乙 腈/水45/55 (V/V)為流動相。在流速為30ml/min的速度進行分離純化，用紫
外檢測儀檢識，收集，收集有效成分洗脫液，濃縮、干燥。得到HPLC檢測多
西紫杉醇峰面積^98%的白色固體5.0克。
經(jīng)過兩次層析純化的產(chǎn)物，用50ml乙腈水浴加熱溶解，將溶液置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 器中濃縮回收部分溶劑，待溶液體積為原體積l/2時將溶液取出，冷卻析晶，過 濾晶體，干燥后得到HPLC檢測多西紫杉醇含量298%的產(chǎn)品4.8克。
權(quán)利要求
1、一種多西他賽的生產(chǎn)辦法，包括(一)10-去乙酰基巴卡亭III的制備其中R1代表氫原子或下式，R2代表氫原子或乙酰基，R3代表氫原子或木糖基，R4代表苯甲酰基或-CO(CH2)n CH3，n＝2或4，或-COC(CH3)＝CHCH3R5代表氫原子或-CH3，必要時經(jīng)氧化裂解或酶解得R3＝H的化合物，再必要時經(jīng)還原反應(yīng)得到R1＝H，R2＝H的化合物，即10-去乙酰基巴卡亭III；(二)制備下式化合物其中G代表羥基保護基；(三)化合物III與下式化合物酯化，其中PG代表羥基保護基，可以與式III中的G相同，也可以不同，得到下式化合物其中PG同上定義，脫除PG和G得到目標(biāo)產(chǎn)物-多西他賽；(四)多西他賽的純化①脫除PG和G所得的含有多西他賽的產(chǎn)物用有機溶液萃取，②濃縮萃取液，得到含多西他賽的固體，③所得固體以硅膠、二氯甲烷/乙酸乙酯系統(tǒng)進行柱層析，收集所得有效成分，干燥，④所得有效成分干燥物再經(jīng)C 18、乙腈/水系統(tǒng)柱層析，結(jié)晶并將結(jié)晶物干燥，得到經(jīng)HPLC檢驗純度≥98％的產(chǎn)品。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于必要時還原反應(yīng)的還原劑選自有 機還原劑或無機還原劑。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其特征在于有機還原劑選自肼及其衍生 物如水合肼、苯肼，無機還原劑選自金屬氫化物如氫化鋁鋰、氫化硼鋰、氫化 硼鈉、氫化硼鉀、及其有關(guān)衍生物如三仲丁基氫化硼鋰、硫代氫化硼鈉、氰基 氫化硼鈉。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于式III中的G選自(2,2,2-三氯乙 氧基)羰基、2- (2-三氯甲基丙氧基)羰基、三烷基甲硅垸基、二垸基芳香甲硅 垸基、烷基二芳基甲硅烷基或三芳基甲硅烷基，其中烷基部分含有1 4個碳原子，芳基部分尤指苯基。
5、 根據(jù)權(quán)利要求i的方法，其特征在于式m中的PG選自權(quán)利要求4所定義的G或烷基氧-烷基氧基、垸?；?、芳基烷?；?，其中烷基部分含有1 4個 碳原子，芳基部分尤指苯基。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于酯化在密閉容器中、有惰性氣體保護、以醚類、酮類、酯類、腈類、脂肪烴、鹵代脂肪烴、芳香烴為介質(zhì)，使用金屬堿性催化劑，在-78 (TC進行。
7、 根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其特征在于當(dāng)羥基保護基G和/或PG為(2，2,2-三氯乙氧基) 羰基、2- (2-三氯甲基丙氧基)羰基，或PG為烷基氧-垸基氧基時， 脫除是在無機酸或有機酸或其混合物和鋅并必要時在銅同時存在下在含有1 3 個碳原子的脂肪醇溶液或脂肪酸酯中于0 70'C進行的；當(dāng)羥基保護基G和/或 PG為三垸基甲硅烷基、二垸基芳香甲硅垸基、垸基二芳基甲硅垸基或三芳基甲 硅烷基時，脫除是在無機酸或有機酸或其混合物存在下在有機溶劑中于0 70°C 進行的。
8、 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于當(dāng)羥基保護基PG為烷?；头?基烷?；鶗r，脫除是在有機堿或無機堿存在下，在有機溶液中于S25t:進行的。
9、 根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其特征在于有機堿選自伯胺、仲胺、叔胺、 四氫吡咯，無機堿選自氨水、碳酸或磷酸的鉀鹽或鈉鹽。
10、 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于柱層析純化多西他賽時二氯甲烷 /乙酸乙酯=55-75/45-25 (V/V)，乙腈/水=35-55/65隱45 (V/V)，結(jié)晶使用的溶劑 選自醇類、腈類(如乙腈)、酮類、醚類(如二甲醚)、酯類、鹵代脂肪烴(如 二氯甲烷)或芳香烴。
全文摘要
一種多西他賽(docetaxel)的生產(chǎn)方法，以式I的紫杉烷為原料，包括制備10-DAB、保護羥基、與相關(guān)側(cè)鏈的酯化、脫除保護基和分離純化等步驟。式I中R₁代表氫原子或式II，R₂代表氫原子或乙?；琑₃代表氫原子或木糖基，式II中R₄代表苯甲?；?CO(CH₂)_n CH₃，n＝2或4，或-COC(CH₃)＝CHCH₃，R₅代表氫原子或-CH₃。
文檔編號C07D305/00GK101343262SQ200710049558
公開日2009年1月14日 申請日期2007年7月12日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月12日
發(fā)明者丁志堅, 巢雄輝, 波 徐, 健 李, 紅 艾 申請人:桂林暉昂生化藥業(yè)有限責(zé)任公司