專利名稱：從西蘭花籽中分離制備葡萄糖萊菔子苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品加工技術(shù)領(lǐng)域，涉及西蘭花籽深加工技術(shù)，特別是從西蘭花籽中分離制 備葡萄糖萊菔子苷的方法。
背景技術(shù)：
西蘭花籽是我國的傳統(tǒng)特產(chǎn)蔬菜，其風(fēng)味獨(dú)特，且具有很高的營養(yǎng)保健價(jià)值，含有豐富 的營養(yǎng)物質(zhì)和活性物質(zhì)，硫代葡萄糖苷類化合物是其中最主要的一類活性成分。西蘭花籽硫 苷主要成分為葡萄糖萊菔子苷。國內(nèi)外研究表明葡萄糖萊菔子苷具有抗氧化、抗癌、抗突變 等生物活性，并對DNA分裂有保護(hù)作用和減輕眼睛的疲勞、提高夜間視力和改善視覺瞬間 改變適應(yīng)性。從西蘭花籽分離制備葡萄糖萊菔子苷未有文獻(xiàn)報(bào)道。
現(xiàn)有關(guān)于硫代葡萄糖苷的分離主要采用制備型高效液相色譜，其局限性是分離量少。其 次，高效液相色譜柱價(jià)格昂貴、再生使用相對困難，分離得到硫代葡萄糖苷成本較高，難以 發(fā)展成為制備量大的分離技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種成本較低、經(jīng)濟(jì)適用的從西蘭花籽中分離制備葡萄糖萊菔子苷 的方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案采用甲醇浸提西蘭花籽中的硫苷；用萃取 法對浸提得到提取物進(jìn)行初步純化，得到西蘭花籽硫苷粗提物；以逆流色譜儀為分離設(shè)備分 離純化西蘭花籽花色苷粗提物中的葡萄糖萊菔子苷.，其溶劑系統(tǒng)由常溫常壓下處于液態(tài)的乙
腈、正丁醇和10%硫酸銨水溶液組成，乙腈、正丁醇和10%硫酸銨的體積比為0.5:2 4:1， 水的用量應(yīng)至少保證使溶劑系統(tǒng)上下相分層，硫酸銨水溶液的濃度為10%。下相做固定相， 上相做流動相。
以上方案按步驟敘述如下
1. 采用甲醇溶劑浸提西蘭花籽中的葡萄糖萊菔子苷，得到葡萄糖萊菔子苷提取液。
2. 將葡萄糖萊菔子苷提取液真空濃縮至含固形物；
3. 在上述濃縮液中加入適量的水，用乙酸乙酯萃取兩次，脫脂為水相葡萄糖萊菔子苷；
4. 將葡萄糖萊菔子苷水相真空濃縮至糊狀，再冷凍干燥，獲西蘭花籽葡萄糖萊菔子苷粗提 物；
5. 采用逆流色譜方法分離純化葡萄糖萊菔子苷粗提物；
6.收集逆流色譜分離的葡萄糖萊菔子苷組分進(jìn)行真空濃縮，直至固形物濃度達(dá)到40%以上， 再采用冷凍干燥，得到純化的葡萄糖萊菔子苷粉末，純度達(dá)95%以上。 步驟(1)所述的浸提過程是采用甲醇溶劑，浸提溶劑與西蘭花籽的體積比為5 10: 1，
條件為沸水浴，浸提時(shí)間為l小時(shí)，浸提次數(shù)2 3次。
步驟(2)、步驟(4)和步驟(6)所述真空濃縮的真空度低于0.09Mpa，溫度為35~40。C。
步驟(4)和步驟(6)所述冷凍干燥的真空度低于50Pa，溫度低于-35'C。 步驟(5)所述逆流色譜方法為采用逆流色譜儀為分離設(shè)備，溶劑系統(tǒng)由常溫常壓下處 于液態(tài)的正丁醇、乙腈和10%硫酸銨水溶液組成，乙腈、正丁醇和10%硫酸銨的體積比為0.5: 2 4: 1，水的用量應(yīng)至少保證使溶劑系統(tǒng)上下相分層，硫酸銨水溶液的濃度為10%，下相做 固定相，上相做流動相；用泵將上述溶劑系統(tǒng)的下相注入逆流色譜儀的色譜柱，并取上述溶 劑系統(tǒng)的部分上相溶解花色苷粗提物制備逆流色譜樣品溶液；開啟逆流色譜儀和流動相輸液 泵，將樣品溶液和流動相輸入逆流色譜分離柱；用紫外-可見檢測器檢測逆流色譜流出液，根 據(jù)所得的色譜圖收集葡萄糖萊菔子苷組分。
步驟(5)所述逆流色譜方法中的逆流色譜儀為高速逆流色譜儀(HSCCC)或低速逆流 色譜儀(SRCCC)。


圖1為本發(fā)明的工藝流程圖。
圖2為實(shí)施例1的HSCCC分離圖譜。
圖3為實(shí)施例1分離所得的葡萄糖萊菔子苷的HPLC圖譜。
圖4為實(shí)施例2的HSCCC分離圖譜。
圖5為實(shí)施例3的SRCCC分離圖譜。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
本實(shí)施例的溶劑系統(tǒng)采用乙腈:正丁醇10%硫酸銨水溶液=0.5:3:1，硫酸銨水溶液濃度為 10%;逆流色譜儀為HSCCC-D1000高速逆流色譜儀，葡萄糖萊菔子苷粗提物中葡萄糖萊菔 子苷約占3.6%。
量取乙腈500 ml、正丁醇3000 ml和10%硫酸銨1000 ml，置于5000 ml分液漏斗，充分 搖勻，靜置分層后，將上下兩相分別裝入試劑瓶。將下相以40ml/min的流速注入高速逆流色
譜的色譜柱。稱取葡萄糖萊菔子苷粗提物2.0g溶于50ml下相中制備逆流色譜樣品溶液，開 啟逆流色譜儀至800轉(zhuǎn)/min，然后以1.0 ml/min的流速輸入樣品溶液，待進(jìn)樣結(jié)束后，再以 2.0 ml/min的流速輸入流動相以洗脫柱內(nèi)的組分，用紫外可見檢測器在253nm下檢測逆流色 譜流出液，根據(jù)檢測器采集的圖譜收集葡萄糖萊菔子苷組分。分離得到葡萄糖萊菔子苷組分 131 mg，純度達(dá)86%以上。
實(shí)施例2
本實(shí)施例的溶劑系統(tǒng)采用乙腈:正丁醇10%硫酸銨水溶液=0.5:2:1，硫酸銨水溶液濃度為 10%，逆流色譜儀為HSCCC-D1000高速逆流色譜儀，西蘭花籽花色苷提取物中葡萄糖萊菔 子苷約占6.6%。
量取乙腈500 ml、正丁醇2000 ml和10%硫酸銨1000 ml，置于5000 ml分液漏斗，充分 搖勻，靜置分層后，將上下兩相分別裝入試劑瓶。將下相以40ml/min的流速注入高速逆流色 譜的色譜柱。葡萄糖萊菔子苷粗提物2.0g溶于50ml下相中制備逆流色譜樣品溶液，開啟逆 流色譜儀至800轉(zhuǎn)/min,然后以1.0 ml/min的流速輸入樣品溶液，待進(jìn)樣結(jié)束后，再以2.0 ml/min的流速輸入流動相洗脫柱內(nèi)的組分，用紫外可見檢測器在253nm下檢測逆流色譜流出 液，根據(jù)檢測器采集的圖譜收集葡萄糖萊菔子苷組分。分離得到葡萄糖萊菔子苷組分130 mg， 純度達(dá)88%以上。
實(shí)施例3
本實(shí)施例的溶劑系統(tǒng)采用乙腈:正丁醇10%硫酸銨水溶液=0.5:4:1，硫酸銨水溶液濃度為 10%，逆流色譜儀為SRCCC-D40L低速逆流色譜儀，西蘭花籽花色苷提取物中葡萄糖萊菔子 苷約占6.6%。
量取乙腈20L、正丁醇160 L和水40L，置于不銹鋼桶中，充分?jǐn)嚢鑴?，靜置分層后， 將上下兩相分別裝入試劑桶。將上相以600ml/min的流速注入低速逆流色譜的色譜柱。稱取 葡萄糖萊菔子苷粗提物500g溶于18L下相中制備逆流色譜樣品溶液，開啟低速逆流色譜儀至 80轉(zhuǎn)/min，然后以5.0ml/min的流速輸入樣品溶液，待進(jìn)樣結(jié)束后，再以15.0 ml/min的流速 輸入流動相洗脫柱內(nèi)的花色苷組分，用紫外可見檢測器在235nm下檢測逆流色譜流出液，根 據(jù)檢測器采集的圖譜收集葡萄糖萊菔子苷組分。分離得到葡萄糖萊菔子苷組分35.0g，純度在 85%以上。
權(quán)利要求
1、從西蘭花籽中分離制備葡萄糖萊菔子苷的方法，其特征在于以下步驟(1)采用甲醇溶劑浸提西蘭花籽中的葡萄糖萊菔子苷，得到葡萄糖萊菔子苷提取液。(2)將葡萄糖萊菔子苷提取液真空濃縮至含固形物；(3)在上述濃縮液中加入適量的水，用乙酸乙酯萃取兩次，脫脂為水相葡萄糖萊菔子苷；(4)將葡萄糖萊菔子苷水相真空濃縮至糊狀，再冷凍干燥，獲西蘭花籽葡萄糖萊菔子苷粗提物；(5)采用逆流色譜方法分離純化葡萄糖萊菔子苷粗提物；(6)收集逆流色譜分離的葡萄糖萊菔子苷組分進(jìn)行真空濃縮，直至固形物濃度達(dá)到40％以上，再采用冷凍干燥，得到純化的葡萄糖萊菔子苷粉末。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述從西蘭花籽中分離制備葡萄糖萊菔子苷的方法，其特征在于步驟(l)所述的浸提過程是采用甲醇浸提溶劑與西蘭花籽的液料體積比為5 10: 1，條件為水浴加熱，浸提時(shí)間1小時(shí)，浸提次數(shù)2~3次。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述從西蘭花籽中分離制備葡萄糖萊菔子苷的方法，其特征在于步驟(2)、步驟(4)和步驟(6)所述真空濃縮的真空度低于0.09Mpa，溫度為35 40'C。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述從西蘭花籽中分離制備葡萄糖萊菔子苷的方法，其特征在于步 驟(4)和步驟(6)所述冷凍干燥的真空度低于50Pa，溫度低于-35-C。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述從西蘭花籽中分離制備葡萄糖萊菔子苷的方法，其特征在于步驟 (5)所述逆流色譜方法為采用逆流色譜儀為分離設(shè)備，溶劑系統(tǒng)由常溫常壓下處于液態(tài)的正丁醇、乙腈、和10%硫酸銨水溶液組成，乙腈、正丁醇和10%硫酸銨的體積比為0.5: 2 4: 1，硫酸銨水溶液的濃度為10%，下相做固定相，上相做流動相；用泵將上述溶劑系統(tǒng)的 上相注入逆流色譜儀的色譜柱，并取上述溶劑系統(tǒng)的部分下相溶解硫苷粗提物制備逆流色譜 樣品溶液；開啟逆流色譜儀和流動相輸液泵，將樣品溶液和流動相輸入逆流色譜分離柱；用 紫外-可見檢測器檢測逆流色譜流出液，根據(jù)所得的色譜圖收集葡萄糖萊菔子苷組分。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述從西蘭花籽中分離制備葡萄糖萊菔子苷的方法，其特征在于步 驟(5)所述逆流色譜方法所用的逆流色譜儀為高速逆流色譜儀(HSCCC)或低速逆流色譜 儀(SRCCC)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從西蘭花籽中分離制備葡萄糖萊菔子苷的方法。采用甲醇浸提西蘭花籽中的硫苷；用萃取法對浸提得到提取物進(jìn)行初步純化，得到西蘭花籽硫苷粗提物；以逆流色譜儀為分離設(shè)備分離純化西蘭花籽花色苷粗提物中的葡萄糖萊菔子苷，其溶劑系統(tǒng)由常溫常壓下處于液態(tài)的正丁醇、乙腈、和10％硫酸銨水溶液組成，乙腈、正丁醇和10％硫酸銨的體積比為0.5∶2～4∶1，本發(fā)明的方案成本較低、經(jīng)濟(jì)適用，分離所得葡萄糖萊菔子苷純度在85％以上。
文檔編號C07H1/08GK101100475SQ200710069958
公開日2008年1月9日 申請日期2007年7月9日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月9日
發(fā)明者崔洪剛, 杜琪珍, 沈蓮清 申請人:浙江工商大學(xué)