專利名稱：一種純化去氨加壓素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥化工領(lǐng)域，具體涉及一種純化去氨加壓素的方法。
背景技術(shù)：
去氨加壓素(Desmopressin)是天然精氨加壓素的結(jié)構(gòu)類似物，系對天 然激素的化學(xué)結(jié)構(gòu)進行兩處改動而得。它主要用來治療血友病、尿崩癥及 治療性控制出血和手術(shù)前預(yù)防出血，其效果較好且副作用小，是一種很有 市場前景的多肽藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供了一條適于產(chǎn)業(yè)化純化去氨加壓素的工藝方 法，使用反相高效液相色譜法純化去氨加壓素，純度高且收率好，達到產(chǎn) 業(yè)化要求。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案
第一步純化將合成所得粗肽溶解后用以十八烷基硅垸鍵合硅膠為固
定相，以磷酸鹽緩沖溶液為A相、色譜純乙腈(ACN)為B相，進行梯度
洗脫純化。
第二步純化將第一步純化所得目的肽溶液濃縮后用以十八烷基硅烷
鍵合硅膠為固定相，以冰醋酸水溶液為A相、色譜純乙腈(ACN)為B相， 進行梯度洗脫純化。
轉(zhuǎn)鹽采用陰離子交換法將磷酸鹽、三氟醋酸鹽轉(zhuǎn)成醋酸鹽。
純化規(guī)模包括以下規(guī)格色譜柱5 cm X 25 cm (柱子直徑X長度)、 本發(fā)明的優(yōu)點在于操作簡單方便，產(chǎn)品純度高、收率好，達到產(chǎn)業(yè)化 要求，成本低廉，利于推廣。
具體實施例方式
下面以實施例對本發(fā)明做進一步詳細說明 實施例一
1、 樣品處理每克粗肽用10%-30%冰醋酸水溶液溶解，使樣品完全溶 解后用濾膜過濾，收集濾液備用。
2、 第一次純化純化條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固
定相的色譜柱,柱子直徑和長度為5 cm X 25 cm 。流動相A相磷 酸二氫鉀水溶液用氫氧化鉀溶液調(diào)pH至5.0-7.0 ; B相色譜純乙腈。 流速50-60 ml/min。檢測波長230 nm。梯度B%: 10% 40% 40-60 min。 進樣量為1-2 g 。
純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈沖洗干凈后上樣，上樣量為 15-20ml樣品溶液。線性梯度洗脫40-50min，收集目的峰，將收集的目的肽 溶液于水溫不超過37 。C下減壓旋蒸濃縮至約25-30 ml/g后備用。
3、 第二次純化純化條件色譜柱以十八烷基硅垸鍵合硅膠為固定
相的色譜柱，柱子直徑和長度為5 cm X 25 cm 。流動相A相0.1%-10% 冰醋酸水溶液為A相；B相色譜純乙腈。流速50-60 ml/min。檢測波長 230 nm。梯度B°/。 10% 40% 50-70 min。進樣量為1-2 g 。
純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈沖洗干凈后上樣，上樣量為
15-20ml樣品溶液。線性梯度洗脫50-70min，收集目的峰，將收集的目的肽 溶液于水溫不超過37 r下減壓旋蒸濃縮至約70-80 ml /g后備用。4、轉(zhuǎn)鹽取50-60 g陰離子交換樹脂置于合適大小的^! 芯漏斗中，用 超純水沖洗至中性后上樣，可上樣10-20 g，減壓抽濾并收集濾液，濾液于 水溫不超過37 'C下減壓旋蒸濃縮至約5-8 ml/g后轉(zhuǎn)至合適大小西林瓶。 冷凍干燥后即可得到純度大于99%的醋酸去氨加壓素，純化收率可達87% 以上。
實施例二
1、 樣品處理每克粗肽用10%-30%冰醋酸水溶液溶解，使樣品完全溶 解后用濾膜過濾，收集濾液備用。
2、 第一次純化純化條件色譜柱以十八垸基硅垸鍵合硅膠為固
定相的色譜柱,柱子直徑和長度為15 cm X 25 cm 。流動相A相:磷 酸二氫鉀水溶液用氫氧化鉀溶液調(diào)pH至5.0-7.0 ; B相色譜純乙腈。 流速450-550 ml/min。檢測波長230 nm。梯度B%: 10% 40% 80-100 min。進樣量為10-20g 。
純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈沖洗干凈后上樣，上樣量為 180ml-220ml樣品溶液。線性梯度洗脫80-100min，收集目的峰，將收集的 目的肽溶液于水溫不超過37 'C下減壓旋蒸濃縮至約30-40 ml/g后備用。
3、 第二次純化純化條件色譜柱以十八垸基硅烷鍵合硅膠為固定 相的色譜柱，柱子直徑和長度為15 cm X 25 cm 。流動相A相 0.1%-10%冰醋酸水溶液為A相；B相色譜純乙腈。流速450-550 ml/min。 檢測波長230 nm。梯度B%: 10% 40% 130-150 min。進樣量為10-20 g °
純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈沖洗干凈后上樣，上樣量為
180ml-220ml樣品溶液。線性梯度洗脫90-110min，收集目的峰，將收集的 目的肽溶液于水溫不超過37 'C下減壓旋蒸濃縮至約70-80 ml /g后備用。
4、轉(zhuǎn)鹽取200-250 g陰離子交換樹脂置于合適大小的砂芯漏斗中， 用超純水沖洗至中性后上樣，可上樣25-35 g，減壓抽濾并收集濾液，濾液 于水溫不超過37 'C下減壓旋蒸濃縮至約5-8ml/g后轉(zhuǎn)至合適大小西林瓶。 冷凍干燥后即可得到純度大于99%的醋酸去氨加壓素，純化收率可達89% 以上。
實施例三
1、 樣品處理每克粗肽用10%-30%冰醋酸水溶液溶解，使樣品完全溶 解后用濾膜過濾，收集濾液備用。
2、 第一次純化純化條件色譜柱以十八烷基硅垸鍵合硅膠為固
定相的色譜柱，柱子直徑和長度為30cm X 25 cm 。流動相A相磷 酸二氫鉀水溶液用氫氧化鉀溶液調(diào)pH至5.0-7.0 ; B相色譜純乙腈。 流速1900-2200 ml/min。檢測波長230 nm。梯度B%: 10% 40% 150-180 min。進樣量為55-75 g 。
純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈沖洗干凈后上樣，上樣量為 700ml-900ml樣品溶液。線性梯度洗脫180-220min，收集目的峰，將收集的 目的肽溶液于水溫不超過37 'C下減壓旋蒸濃縮至約25-30 ml/g后備用。
3、 第二次純化純化條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定 相的色譜柱，柱子直徑和長度為30 cm X 25 cm 。流動相A相 0.1%-10%冰醋酸水溶液為A相；B相色譜純乙腈。流速1900-2200 ml/min。 檢測波長230 nm。梯度B%: 10% 40% 200-240 min。進樣量為55-75 g 。
純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈沖洗干凈后上樣，上樣量為 700ml-卯0ml樣品溶液。線性梯度洗脫200-240 min，收集目的峰，將收集 的目的肽溶液于水溫不超過37 。C下減壓旋蒸濃縮至約60-70 ml /g后備用。
4、轉(zhuǎn)鹽取1000-1200g陰離子交換樹脂置于合適大小的砂芯漏斗中， 用超純水沖洗至中性后上樣，可上樣90-120g，減壓抽濾并收集濾液，濾液 于水溫不超過37 'C下減壓旋蒸濃縮至約5-8ml/g后轉(zhuǎn)至合適大小西林瓶。 冷凍干燥后即可得到純度大于99%的醋酸去氨加壓素，純化收率可達88% 以上。
權(quán)利要求
1.一種純化去氨加壓素的方法，其特征在于它包括以下步驟第一步純化將合成所得粗肽溶解后用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以磷酸鹽緩沖溶液為A相、色譜純乙腈(ACN)為B相，進行梯度洗脫純化。第二步純化將第一步純化所得目的肽溶液濃縮后用以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以冰醋酸水溶液為A相、色譜純乙腈(ACN)為B相，進行梯度洗脫純化。轉(zhuǎn)鹽采用陰離子交換法將磷酸鹽、三氟醋酸鹽轉(zhuǎn)成醋酸鹽。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種純化去氨加壓素的方法，其特征在于采 用以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，作為A相的磷酸鹽緩沖溶液pH應(yīng) 小于7，但不低于5。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種純化去氨加壓素的方法，其特征在于采 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，作為A相的冰醋酸水溶液濃度應(yīng)小于 10%，但不低于0.1%。
4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種純化去氨加壓素的方法，其特征在于 采用陰離子交換法將磷酸鹽、三氟醋酸鹽轉(zhuǎn)成醋酸鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種純化去氨加壓素的方法。去氨加壓素主要用于治療血友病、尿崩癥及治療性控制出血和手術(shù)前預(yù)防出血，其效果較好且副作用小，是一種很有市場前景的多肽藥物。本發(fā)明采取以下技術(shù)方案第一步純化將合成所得粗肽溶解后用以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以磷酸鹽緩沖溶液為A相、色譜純乙腈(ACN)為B相，進行梯度洗脫純化。第二步純化將第一步純化所得目的肽溶液濃縮后用以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以冰醋酸水溶液為A相、色譜純乙腈(ACN)為B相，進行梯度洗脫純化。轉(zhuǎn)鹽采用陰離子交換法將磷酸鹽、三氟醋酸鹽轉(zhuǎn)成醋酸鹽。本發(fā)明的優(yōu)點在于操作簡單方便，產(chǎn)品純度高、收率好，達到產(chǎn)業(yè)化要求，成本低廉，利于推廣。
文檔編號C07K1/14GK101372504SQ20071007654
公開日2009年2月25日 申請日期2007年8月22日 優(yōu)先權(quán)日2007年8月22日
發(fā)明者李紅玲, 覃亮政, 馬亞平 申請人:深圳市翰宇藥業(yè)有限公司