專利名稱：：一種從魚(yú)露中分離提取β-3激動(dòng)劑章魚(yú)胺的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種從魚(yú)露中分離提取富含3—3激動(dòng)劑章魚(yú)胺的制備方法，具體地說(shuō)是運(yùn)用大孔吸附樹(shù)脂法工業(yè)化地從魚(yú)露中吸附章魚(yú)胺，并用洗脫劑洗分離富含章魚(yú)胺的魚(yú)露提取物。技術(shù)背景章魚(yú)胺是一種重要的生物胺和神經(jīng)介質(zhì)。起廣泛的生理作用，有調(diào)節(jié)代謝與能量平衡的功效，是目前唯一商品化的防治肥胖癥與糖尿病的P3_腎上腺素能受體激動(dòng)劑。有增加代謝、產(chǎn)生熱量、調(diào)節(jié)血糖、減少體脂、抑制食欲、提高注意力等多種作用。而枳實(shí)和魚(yú)露是天然章魚(yú)胺的主要來(lái)源。在已有技術(shù)中，曾有關(guān)于從枳實(shí)中提取章魚(yú)胺的報(bào)道。但枳實(shí)中章魚(yú)胺含量?jī)H為0.010.03%。而魚(yú)露中相對(duì)豐富的章魚(yú)胺含量約O.1%。使從魚(yú)露中提取章魚(yú)胺開(kāi)發(fā)健康產(chǎn)品成為可能。魚(yú)露在中國(guó)的東南沿海乃至整個(gè)東南亞是水產(chǎn)加工鏈上重要的一環(huán)，由于極高的含鹽量使進(jìn)一步的利用十分困難。近年來(lái)，食品安全性被高度重視，由于天然產(chǎn)生的章魚(yú)胺的生物活性是化學(xué)合成章魚(yú)胺的3倍，因?yàn)?，從魚(yú)露中提取的章魚(yú)胺較之化學(xué)合成的章魚(yú)胺服用量少，也更安全。由于魚(yú)露中含有20%以上的氯化鈉，在此條件下，要分離提取含量為0.1%的章魚(yú)胺是極為困難的，要保持魚(yú)露原有的風(fēng)味更是困難。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于克服上述不足之處，從而提供一種從魚(yú)露中分離提取0—3激動(dòng)劑章魚(yú)胺的制備方法，利用大孔吸附樹(shù)脂法，有效吸附魚(yú)露中的章魚(yú)胺；保持或提高了經(jīng)樹(shù)脂吸附后魚(yú)露的風(fēng)味，從而使魚(yú)露資源得到有效利用，并能提高魚(yú)露產(chǎn)品附加值。本發(fā)明的主要解決方案是這樣實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明一種從魚(yú)露中分離提取e—3激動(dòng)劑章魚(yú)胺的制備方法采用以下工藝步驟1、過(guò)濾發(fā)酵熟成的粗魚(yú)露，經(jīng)離心機(jī)過(guò)濾成澄清的魚(yú)露，目數(shù)為100_120目，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為1000—1200轉(zhuǎn)/分；2、大孔吸附樹(shù)脂吸附工藝將上述過(guò)濾后的魚(yú)露，于H103大孔吸附柱上柱吸附，以柱中H103大孔吸附樹(shù)脂的體積為1BV，上柱的魚(yú)露量為2BV一4BV，魚(yú)露上柱的流速為1BV—3BV.h—、收集過(guò)柱后流出的魚(yú)露，供配置調(diào)味品用；3、大孔吸附樹(shù)脂的洗脫工藝對(duì)上述吸附章魚(yú)胺后的樹(shù)脂，從樹(shù)脂柱底部抽真空5—10分鐘，抽去樹(shù)脂間殘存的魚(yú)露，用乙醇水溶液洗脫H103大孔吸附樹(shù)脂吸附的章魚(yú)胺，乙醇洗脫液的乙醇濃度為10%—90%(V/V)，洗脫液的上柱速度為lBV*h—、乙醇洗脫液的用量為0.4BV—1BV;4、真空濃縮干燥收集上述乙醇洗脫液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，絕對(duì)真空度為0.03MPa—0.05MPa，溫度為50°C—60QC，回收的乙醇洗脫液，供循環(huán)上柱洗脫用，洗脫液呈濃漿后取出，烘干為干燥提取物，絕對(duì)中空度為-0.03MPa—0.05MPa，溫度60°C—80°C，時(shí)間為12h—14h;5、將干燥的提取物粉碎，篩取80目一120目粉末，得富含章魚(yú)胺的黃色提取物干粉。本發(fā)明所述的乙醇洗脫液的乙醇濃度以30%為佳。本發(fā)明所述的上柱的魚(yú)露量以3BV為佳，魚(yú)露上柱的流速以1BVh—t為佳。本發(fā)明所述的乙醇洗脫液的用量以0.6BV為佳。本發(fā)明與已有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明解決了從高鹽的魚(yú)露中利用H103大孔吸附樹(shù)脂吸附分離章魚(yú)胺的技術(shù)，利用章魚(yú)胺含量相對(duì)豐富的魚(yú)露作為原料，具有章魚(yú)胺分離提取率高，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)便快捷，成本低的特點(diǎn)；并使上柱后的魚(yú)露保持或改善了原有的風(fēng)味，為魚(yú)露資源的綜合利用，建立了新的技術(shù)途徑，從而使魚(yú)露資源得到有效利用，提高了魚(yú)露產(chǎn)業(yè)的附加值；章魚(yú)胺的含量為0.71%—2.62%。本發(fā)明首次報(bào)告了用H103大孔吸附樹(shù)脂處理魚(yú)露，提取了活性成分章魚(yú)胺，并使處理過(guò)的魚(yú)露有望成為適合更廣大人群的新的調(diào)味料。提取的洗脫液干燥后的干粉中，除章魚(yú)胺外，還含有多種營(yíng)養(yǎng)成分，有廣泛而重要的生理作用，可作為健康食品用于運(yùn)動(dòng)人群、減控體重人群、心血管疾病及糖尿病人群。圖1為本發(fā)明工藝流程圖。具體實(shí)施方式下面本發(fā)明將結(jié)合附圖中的實(shí)施例作進(jìn)一步描述實(shí)施例一本發(fā)明一種從魚(yú)露中分離提取P—3激動(dòng)劑章魚(yú)胺的制備方法采用以下工藝步驟取市售發(fā)酵熟成的粗魚(yú)露，經(jīng)三足式離心機(jī)過(guò)濾成基本澄清的魚(yú)露，過(guò)濾介質(zhì)為細(xì)密的尼龍布，目數(shù)100目，離心機(jī)轉(zhuǎn)速1000轉(zhuǎn)/分。預(yù)處理過(guò)的H103大孔吸附樹(shù)脂濕法裝入離子交換柱，體積10cmX96cm，約7.5L。將上述過(guò)濾后的螺魚(yú)魚(yú)露30L(章魚(yú)胺含量0.909mg/ml，含鹽量276.12g/L—1，氨基氮6.12g/L—')于H103大孔吸附柱上柱吸附，以柱中H103大孔吸附樹(shù)脂的體積為1BV，上柱的魚(yú)露量為4BV。魚(yú)露上柱的流速為1BV"h一1。經(jīng)吸附，章魚(yú)胺吸附在樹(shù)脂上，收集上柱后魚(yú)露，每5L最后部分取樣，HPLC作章魚(yú)胺含量分析。過(guò)柱后流出的魚(yú)露收集供配制調(diào)味品用。表l:H103樹(shù)脂對(duì)魚(yú)露中章魚(yú)胺動(dòng)態(tài)吸附的數(shù)值表上柱體積(5L吸附前濃度吸附后濃度累計(jì)吸附量<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>當(dāng)H103大孔吸附樹(shù)脂處理的魚(yú)露為樹(shù)脂本身的2BV時(shí)，對(duì)章魚(yú)胺的吸附率達(dá)到86.84%，為3.3BV時(shí)，達(dá)64.74%。吸附完成后，將上述吸附章魚(yú)胺后的樹(shù)脂從柱底部真空抽IO分鐘，抽去樹(shù)脂間殘存的魚(yú)露。以不同濃度乙醇水溶液(V/V)對(duì)飽和吸附的H103大孔吸附樹(shù)脂的靜態(tài)吸附率見(jiàn)表2。以30%的乙醇水溶液為最佳。表2:<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>以30%乙醇溶液作為洗脫劑，流速控制在1BV*h—、每0.5L收集洗脫液，測(cè)定各收集管洗脫液中章魚(yú)胺的濃度，測(cè)定數(shù)據(jù)詳見(jiàn)表3?？梢钥闯?，洗脫液體積達(dá)3.5L時(shí)，洗脫液中章魚(yú)胺含量達(dá)到最高值，到4.5L時(shí)吸附于樹(shù)脂上的章魚(yú)胺基本上被洗脫下來(lái)。由此得到魚(yú)露上柱體積為3.3BV時(shí)，每0.5L洗脫液中章魚(yú)胺濃度的數(shù)值及在HPLC分析中章魚(yú)胺峰面積與總的峰面積的百分面積比。見(jiàn)表3。表3:動(dòng)態(tài)的洗脫液中章魚(yú)胺濃度及在HPLC中峰的百分面積比<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>說(shuō)明30%的乙醇洗脫液用量為0.46BV時(shí)，流出液中章魚(yú)胺含量達(dá)到最大濃度，并快速下降。平衡章魚(yú)胺濃度與峰面積比，洗脫液的用量以0.6BV為佳。以0.93BV洗脫液處理章魚(yú)胺的回收率為74y。左右。HPLC分析結(jié)果指出，經(jīng)百分面積歸一法計(jì)算，章魚(yú)胺在流出液中的相對(duì)濃度，隨洗脫液體積的增加而降低，即其它物質(zhì)的濃度不斷增加，章魚(yú)胺純度降低正收集上述乙醇洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，絕對(duì)真空度為0.03MPa，溫度為50flC?；厥盏囊掖枷疵撘海┭h(huán)上柱洗脫用。洗脫液呈濃槳后取出，用遠(yuǎn)紅外真空烘箱中烘干，絕對(duì)真空度為0.03MPa，溫度60°C，時(shí)間為12h。干燥的提取物粉碎機(jī)粉碎，篩取80目粉末，得富含章魚(yú)胺的黃色提取物干粉1.06Kg，HPLC方法分析，含章魚(yú)胺0.925%。上柱后的魚(yú)露風(fēng)味見(jiàn)表4:表4:魚(yú)露經(jīng)H103大孔吸附樹(shù)脂吸附后感官評(píng)定色澤澄明度氣味口感原魚(yú)露棕紅色稍濁強(qiáng)烈魚(yú)腥味鮮、口感雜樹(shù)脂處理后淺棕黃色微濁微弱魚(yú)腥味鮮、口感純實(shí)施例二本發(fā)明一種從魚(yú)露中分離提取e—3激動(dòng)劑章魚(yú)胺的制備方法采用以下工藝步驟市售發(fā)酵熟成的粗魚(yú)露，經(jīng)三足式離心機(jī)過(guò)濾成基本澄清的魚(yú)露，過(guò)濾介質(zhì)為細(xì)密的尼龍布，目數(shù)120目，離心機(jī)轉(zhuǎn)速1000轉(zhuǎn)/分。預(yù)處理過(guò)的H103大孔吸附樹(shù)脂濕法裝入離子交換柱(5cmX52cm)，約1L。過(guò)濾后的鍉魚(yú)魚(yú)露3L(章魚(yú)胺含量0.909mg/ml，含鹽量276.12g/L—\氨基氮6.12g/L—')于H103大孔吸附柱上柱吸附，以柱中H103大孔吸附樹(shù)脂的體積為1BV，上柱的魚(yú)露量為3BV。魚(yú)露上柱的流速控制在lBV*h—''，章魚(yú)胺吸附在樹(shù)脂上，收集上柱后魚(yú)露，每0.5L最后部分取樣HPLC作章魚(yú)胺含量分析。收集過(guò)柱后流出的魚(yú)露，供配置調(diào)味品用。當(dāng)H103大孔吸附樹(shù)脂處理的魚(yú)露為樹(shù)脂本身的2BV時(shí)，對(duì)章魚(yú)胺的吸附率達(dá)到86.44%，為3BV時(shí)，達(dá)63.55%。上述吸附章魚(yú)胺后的樹(shù)脂，從樹(shù)脂柱底部真空抽8分鐘，抽去樹(shù)脂間殘存的魚(yú)露。以30%乙醇溶液作為洗脫劑，流速控制在1BV'h—1，每0.2L收集洗脫液。說(shuō)明30%的乙醇洗脫液的上柱速度為1BV、洗脫液用量為0.6BV時(shí)，流出液中章魚(yú)胺含量達(dá)到最大濃度。以lBV洗脫液處理章魚(yú)胺的回收率為75y。左右。收集上述乙醇洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，絕對(duì)真空度為0.04MPa，溫度為55°C。回收的乙醇洗脫液可供循環(huán)上柱洗脫用。洗脫液呈濃漿后取出，用遠(yuǎn)紅外真空烘箱中烘干，絕對(duì)中空度為0.04MPa，溫度70°C，時(shí)間為13h。干燥的提取物粉碎機(jī)粉碎，篩取100目粉末，得富含章魚(yú)胺的黃色魚(yú)露提取干粉O.042Kg,HPLC分析含章魚(yú)胺2.62y。。實(shí)施例三本發(fā)明一種從魚(yú)露中分離提取P—3激動(dòng)劑章魚(yú)胺的制備方法采用以下工藝步驟市售發(fā)酵熟成的粗七星魚(yú)魚(yú)露，經(jīng)三足式離心機(jī)過(guò)濾成基本澄清的魚(yú)露，過(guò)濾介質(zhì)為細(xì)密的尼龍布，目數(shù)120目，離心機(jī)轉(zhuǎn)速1200轉(zhuǎn)/分。預(yù)處理過(guò)的H103大孔吸附樹(shù)脂濕法裝入離子交換柱(5cmX52cm)，約1L。過(guò)濾后的七星魚(yú)魚(yú)露3L(章魚(yú)胺含量0.658mg/ml,含鹽量279.63g/L—1，氨基氮11.90g/L—0于H103大孔吸附柱上柱吸附，以柱中H103大孔吸附樹(shù)脂的體積為1BV,上柱的魚(yú)露量為3BV。魚(yú)露上柱的流速控制在1BVh—"經(jīng)吸附，章魚(yú)胺吸附在樹(shù)脂上，收集上柱后魚(yú)露每0.2L最后lml取樣HPLC作章魚(yú)胺含量分析。收集過(guò)柱后流出的魚(yú)露，供配置調(diào)味品用。當(dāng)H103大孔吸附樹(shù)脂處理的魚(yú)露為樹(shù)脂本身的2BV時(shí)，對(duì)章魚(yú)胺的吸附率達(dá)到86.21%，為3BV時(shí)，達(dá)62.43%。上述吸附章魚(yú)胺后的樹(shù)脂，從樹(shù)脂柱底部真空抽8分鐘，抽去樹(shù)脂間殘存的魚(yú)露。以30%乙醇溶液作為洗脫劑，流速控制在1BVh—1，每200mL收集洗脫液。說(shuō)明30%的乙醇洗脫液的上柱速度為1BVh-1，洗脫液用量為0.6BV時(shí)，流出液中章魚(yú)胺含量達(dá)到最大濃度。以1BV洗脫液處理章魚(yú)胺的回收率為73%左右。HPLC分析結(jié)果指出，經(jīng)百分面積歸一法計(jì)算，章魚(yú)胺在流出液中的相對(duì)濃度，隨洗脫液體積的增加而降低，即其它物質(zhì)的濃度不斷增加，章魚(yú)胺純度降低。收集上述乙醇洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，絕對(duì)真空度為0.05MPa，溫度為60QC?；厥盏囊掖枷疵撘汗┭h(huán)上柱洗脫用。洗脫液呈濃漿后取出，用遠(yuǎn)紅外真空烘箱烘干，絕對(duì)真空度為0.05MPa，溫度80°C，時(shí)間為14h。干燥的提取物粉碎機(jī)粉碎，篩取100目粉末，得七星魚(yú)魚(yú)露提取物干粉0.134Kg,HPLC分析含章魚(yú)胺O.71%。權(quán)利要求1、一種從魚(yú)露中分離提取β-3激動(dòng)劑章魚(yú)胺的制備方法，其特征是采用以下工藝步驟(1)、過(guò)濾取粗魚(yú)露，經(jīng)離心機(jī)過(guò)濾，目數(shù)為100-120目，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為1000-1200轉(zhuǎn)/分；(2)、大孔吸附樹(shù)脂吸附工藝將上述過(guò)濾后的魚(yú)露，于大孔吸附柱上柱吸附，以柱中大孔吸附樹(shù)脂的體積為1BV，上柱的魚(yú)露量為2BV-4BV，魚(yú)露上柱的流速為1BV-3BV·h-1；(3)、大孔吸附樹(shù)脂的吸附工藝取上述吸附章魚(yú)胺后的樹(shù)脂，從樹(shù)脂柱底部抽真空5-10分鐘，用乙醇水溶液洗脫大孔吸附樹(shù)脂吸附的章魚(yú)胺，乙醇洗脫液的乙醇濃度為10％-90％，洗脫液的上柱速度為1BV·h-1，乙醇洗脫液的用量為0.4BV-1BV；(4)、真空濃縮干燥收集上述乙醇洗脫液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，絕對(duì)真空度為0.03MPa-0.05MPa，溫度為50℃-60℃，回收的乙醇洗脫液，供循環(huán)上柱洗脫用，洗脫液呈濃漿后取出，烘干為干燥提取物，絕對(duì)中空度為0.03MPa-0.05MPa，溫度60℃-80℃，時(shí)間為12h-14h；(5)、將干燥的提取物粉碎，篩取80目-120目粉末，得富含章魚(yú)胺的黃色提取物干粉。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從魚(yú)露中分離提取P—3激動(dòng)劑章魚(yú)胺的制備方法，其特征在于所述的乙醇洗脫液的乙醇濃度以30%為佳。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從魚(yú)露中分離提取P—3激動(dòng)劑章魚(yú)胺的制備方法，其特征在于所述的上柱的魚(yú)露量以3BV為佳，魚(yú)露上柱的流速以1BVh—'為佳。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從魚(yú)露中分離提取P—3激動(dòng)劑章魚(yú)胺的制備方法，其特征在于所述的乙醇洗脫液的用量以0.6BV為佳。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從魚(yú)露中分離提取P—3激動(dòng)劑章魚(yú)胺的制備方法，其特征在于所述的上柱后流出的魚(yú)露，供配置調(diào)味品用。全文摘要本發(fā)明涉及一種從魚(yú)露中分離提取β-3激動(dòng)劑章魚(yú)胺的制備方法，具體地說(shuō)是運(yùn)用大孔吸附樹(shù)脂法工業(yè)化地從魚(yú)露中吸附章魚(yú)胺，并用洗脫劑洗分離富含章魚(yú)胺的魚(yú)露提取物。特征是運(yùn)用H103大孔吸附樹(shù)脂吸附魚(yú)露中的章魚(yú)胺，再用30％的乙醇水溶液作洗脫劑，上柱后的洗脫液真空濃縮回收乙醇洗脫液富含章魚(yú)胺的濃縮液，經(jīng)真空紅外干燥，得到富含章魚(yú)胺的魚(yú)露提取物粉末。本發(fā)明可有效吸附魚(yú)露中的章魚(yú)胺；保持或提高了經(jīng)樹(shù)脂吸附后魚(yú)露的風(fēng)味，從而使魚(yú)露資源得到有效利用，并能提高魚(yú)露產(chǎn)品附加值，是一種安全的可長(zhǎng)期服用的保健食品原料。文檔編號(hào)C07C215/00GK101157621SQ20071013350公開(kāi)日2008年4月9日申請(qǐng)日期2007年9月30日優(yōu)先權(quán)日2007年9月30日發(fā)明者李毓寧,楊禮明,王建中,范榕斌,董云雄申請(qǐng)人:無(wú)錫生命科技發(fā)展股份有限公司