專利名稱：丹參素鈉純品的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從中藥丹參中提取、分離、精制丹參素鈉的制備方法。
背景技術(shù)：
丹參為常用中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品。中國藥典(2005年版) 規(guī)定丹參為唇形科植物丹參S"/v/" /m7ft'wr/^" Bge.的干燥根及根莖。
丹參素是丹參中水溶性有效成分之一，具有多方面的藥理作用[尤晶克，自 榮兵，蔣榮海，中華實(shí)用醫(yī)學(xué)，2002; 4 (23) ]。
抗動(dòng)脈粥樣硬化，②保護(hù)肝 細(xì)胞，③抗炎及增強(qiáng)機(jī)體免疫，④保護(hù)心臟，⑤改善微循環(huán)及抗凝， 舒張冠 狀動(dòng)脈，⑦抑制血小板聚集，⑧耐缺氧。
目前，制備丹參素鈉的專利主要有四項(xiàng)-
(1) 申請?zhí)?1126883.2 大孔吸附樹脂吸附，再萃取
(2) 申請?zhí)?00510043608.3先用弱堿性樹脂吸附，再用弱極性樹脂吸附
(3) 申請?zhí)?00410021414.9超濾，有機(jī)溶劑萃取，正相色譜分離
(4) 申請?zhí)?00610117931.5酸水醇提取，過大孔吸附樹脂柱，過聚酰胺柱， 或過S印hadexLH-20柱，MCI GEL CHP20P柱，C4、 Cs或dg鍵合相硅膠柱。
這四項(xiàng)專利所制備的丹參素鈉，其純度達(dá)不到98%，而且有的專利不適合 工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明提供的方法，既能使丹參素鈉的純度達(dá)到98%(中檢所標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定)， 又適合工業(yè)化生產(chǎn)，而且成本低，環(huán)境污染小。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種成本低、純度高、收率 高，易于工業(yè)化生產(chǎn)的丹參素鈉的制備方法。
本發(fā)明的丹參素鈉的制備方法，基本是由丹參用水熱提，醇沉，大孔吸附 樹脂柱分離；或者聚酰胺柱分離，硅膠柱分離，Sephadex LH-20柱或反向硅膠 柱分離，結(jié)晶等步驟組成。 本發(fā)明通過下述技術(shù)方案予以實(shí)施
(a) 丹參用水熱提，提取液濃縮，加乙醇醇沉，過濾；
(b) 濾液濃縮，加乙醇醇沉，過濾；
(c) 濾液濃縮，加水，過濾，濾液上大孔吸附樹脂柱，用水洗；
(d) 水洗液濃縮后，按步驟(e)進(jìn)行；或者水洗液上聚酰胺柱，用水洗，濃 縮水洗液后，按步驟(e)進(jìn)行；
(e) 濃縮后的水洗液拌硅膠，烘干，裝柱，用含有機(jī)酸的有機(jī)溶劑洗脫，收集 洗脫液，回收至干，得干膏。
(f) 取干膏，用有機(jī)溶劑溶解，調(diào)PH值，放置，析晶；或者取干膏，用水、含水或無水甲醇、含水或無水乙醇溶解，上Sephadex LH-20柱或反相硅膠 柱(Rp-2， Rp-8， Rp-18)，用水、含水或無水甲醇、含水或無水乙醇洗色 譜柱，收集洗脫液，根據(jù)TLC合并洗脫液，回收至少量，加入適量有機(jī)溶 劑，用適量堿液調(diào)PH值，放置，析晶。 其中，步驟(a)中，加水煎煮2—4次，每次4—8小時(shí)，加水量為丹參重量的 5—8倍量，合并濾液，濃縮至適量，加入95%乙醇，至溶液含醇量為40— 60%，放置6—24小時(shí)(最佳為8—15小時(shí))，過濾；
步驟(b)中，濾液濃縮至適量，加入95%乙醇，至溶液含醇量為70—85%， 放置6—24小時(shí)(最佳為8—15小時(shí))，過濾；
步驟(c)中，濾液濃縮至適量，加水2—6倍量(最佳為2—4倍量)，過 濾，濾液上大孔吸附樹脂柱，用水洗；
步驟(d)中，水洗液濃縮后，按步驟(e)進(jìn)行；或者水洗液上聚酰胺柱， 用水洗，濃縮水洗液后，按步驟(e)進(jìn)行；
步驟(e)中，濃縮后的水洗液拌硅膠(60~-400目)(最佳為100~200目)， 烘干(30"12(TC)(最佳為50"7(TC);有機(jī)溶劑是丙酮、乙酸乙酯、氯仿， 有機(jī)酸是甲酸和醋酸；
步驟(f)中，取干膏，用甲醇或乙醇溶解，加氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫 鈉水溶液調(diào)PH值至弱堿性，放置，析晶；或者取干膏，用5—95% (最佳 為20~60%)甲醇或乙醇水溶液溶解，上Sephadex LH-20柱或反相硅膠柱 (Rp-2， Rp-8， Rp-18)，用5~95% (最佳為20~60%)甲醇或乙醇水溶液 洗色譜柱，收集洗脫液，根據(jù)TLC合并洗脫液，回收至少量，加入適量甲 醇或乙醇，用氫氧化鈉、碳酸鈉或碳酸氫鈉水溶液調(diào)PH值至弱堿性，放置， 析晶。
依本發(fā)明的方法制成的丹參素鈉，其純度大于或等于98% (中檢所標(biāo)準(zhǔn)品 標(biāo)定)，可用于治療冠心病、心絞痛、慢乙肝肝纖維化、動(dòng)脈粥樣硬化等；可制 成任何一種藥劑學(xué)上所說的劑型，也可配合其它藥物或組分一起制成制劑使用。 本發(fā)明的優(yōu)勢與特點(diǎn)
1、成本低，環(huán)境污染小，易于工業(yè)化生產(chǎn)
(1) 工藝中，大量使用的溶劑是乙醇和水，可以回收反復(fù)使用。
(2) 大孔吸附樹脂和聚酰胺可以反復(fù)使用。
(3) 洗硅膠柱用的有機(jī)溶劑可以回收反復(fù)使用。
(4) SephadexLH-20和反相硅膠填料可以反復(fù)使用，洗脫劑可以回收反復(fù)使用。
2、產(chǎn)品純度高
用本發(fā)明的方法制備的丹參素鈉，其純度大于或等于98%。用外標(biāo)一點(diǎn)法 計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)品由中國生物制品檢定所提供。
具體實(shí)施例方式
下述各實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而非對本發(fā)明的限制 實(shí)施例一
丹參(個(gè)子貨)3kg，加水煮3次，第一次加水7倍量，煮8小時(shí)，后二次 各加水5倍量，各煮4小時(shí)，過濾，合并三次濾液；濃縮至適量，冷卻至室溫， 加入95%乙醇，邊加邊攪拌，至溶液含醇量為50%;于室溫放置12小時(shí)后，過 濾，濾液濃縮至適量，冷卻至室溫；加入95%乙醇，邊加邊攪拌，至溶液含醇 量為80%，于室溫放置12小時(shí)后，過濾；濾液濃縮至適量，冷卻至室溫，加入 4倍量的水，邊加邊攪拌，放置l一2小時(shí)，過濾；濾液上大孔吸附樹脂柱(AB-8， 800g),用水洗脫，收集洗脫液，洗脫液上聚酰胺柱(60~100目，250g)，用水 洗脫，收集洗脫液；濃縮洗脫液至適量，拌硅膠1000g (100—200目)，至烘箱 中烘干(65°C)。硅膠裝柱，用乙酸乙酯甲酸(50:0.1)洗硅膠柱，收集洗脫液， 回收至干，得干膏。取干膏，加甲醇溶解，用碳酸氫鈉水溶液調(diào)PH值至弱堿性， 放置，析晶，得丹參素鈉結(jié)晶(98.85%)。 實(shí)施例二
丹參(個(gè)子貨)3kg，加水煮3次，第一次加水7倍量，煮8小時(shí)，后二次 各加水5倍量，各煮4小時(shí)，過濾，合并三次濾液；濃縮至適量，冷卻至室溫， 加入95%乙醇，邊加邊攪拌，至溶液含醇量為50%;于室溫放置12小時(shí)后，過 濾，濾液濃縮至適量，冷卻至室溫；加入95%乙醇，邊加邊攪拌，至溶液含醇 量為80%，于室溫放置12小時(shí)后，過濾；濾液濃縮至適量，冷卻至室溫，加入 4倍量的水，邊加邊攪拌，放置1—2小時(shí)，過濾；濾液上大孔吸附樹脂柱(AB-8， 800g)，用水洗脫，收集洗脫液；濃縮洗脫液至適量，拌硅膠1000g (100~200 目)，至烘箱中烘干(65°C)。硅膠裝柱，用乙酸乙酯甲酸(50:0.1)洗硅膠柱， 收集洗脫液，回收至干，得干膏。取干膏，加甲醇溶解，用碳酸氫鈉水溶液調(diào) PH值至弱堿性，放置，析晶，得丹參素鈉結(jié)晶(98.25%)。 實(shí)施例三
丹參(飲片)3kg，加水煮3次，第一次加水6倍量，煮6小時(shí)，后二次各 加水5倍量，各煮4小時(shí)，過濾，合并三次濾液；濃縮至適量，冷卻至室溫， 加入95%乙醇，邊加邊攪拌，至溶液含醇量為40%;于室溫放置12小時(shí)后，過 濾，濾液濃縮至適量，冷卻至室溫；加入95%乙醇，邊加邊攪拌，至溶液含醇 量為70%，于室溫放置12小時(shí)后，過濾；濾液濃縮至適量，冷卻至室溫，加入 3倍量的水，邊加邊攪拌，放置1—2小時(shí)，過濾；濾液上大孔吸附樹脂柱(D101， 800g)，用水洗脫，收集洗脫液，洗脫液上聚酰胺柱(60~100目，250g),用水 洗脫，收集洗脫液；濃縮洗脫液至適量，拌硅膠1000g (100—200目)，至烘箱 中烘干(65°C)。硅膠裝柱，用丙酮:醋酸(50.'0.05)洗硅膠柱，收集洗脫液， 回收至干，得干膏。取干膏，用20%甲醇水溶液溶解，上SephadexLH-20柱，用20%甲醇水溶液洗色譜柱，收集洗脫液，根據(jù)TLC合并洗脫液，回收至少量， 加入適量甲醇，用氫氧化鈉水溶液調(diào)PH值至弱堿性，放置，析晶，得丹參素鈉 結(jié)晶(99.95%)。 實(shí)施例四
丹參(個(gè)子貨)3kg，加水煮3次，第一次加水6倍量，煮6小時(shí)，后二次 各加水5倍量，各煮4小時(shí)，過濾，合并三次濾液；濃縮至適量，冷卻至室溫， 加入95%乙醇，邊加邊攪拌，至溶液含醇量為60%;于室溫放置12小時(shí)后，過 濾，濾液濃縮至適量，冷卻至室溫；加入95%乙醇，邊加邊攪拌，至溶液含醇 量為85%，于室溫放置12小時(shí)后，過濾；濾液濃縮至適量，冷卻至室溫，加入 4倍量的水，邊加邊攪拌，放置l一2小時(shí)，過濾；濾液上大孔吸附樹脂柱(D101， 800g)，用水洗脫，收集洗脫液，洗脫液上聚酰胺柱(60—100目，250g)，用水 洗脫，收集洗脫液；濃縮洗脫液至適量，拌硅膠1000g (100"200目)，至烘箱 中烘干(65°C)。硅膠裝柱，用氯仿:醋酸(50:1)洗硅膠柱，收集洗脫液，回 收至干，得干膏。取干膏，用40%乙醇水溶液溶解，上反相硅膠柱(Rp-18)， 用40%乙醇水溶液洗色譜柱，收集洗脫液，根據(jù)TLC合并洗脫液，回收至少量， 加入適量甲醇，用碳酸鈉水溶液調(diào)PH值至弱堿性，放置，析晶，得丹參素鈉結(jié) 晶(99.25%)。 實(shí)施例五
丹參(飲片)3kg，加水煮3次，第一次加水6倍量，煮8小時(shí)，后二次各 加水5倍量，各煮4小時(shí)，過濾，合并三次濾液；濃縮至適量，冷卻至室溫， 加入95°/。乙醇，邊加邊攪拌，至溶液含醇量為40%;于室溫放置12小時(shí)后，過 濾，濾液濃縮至適量，冷卻至室溫；加入95%乙醇，邊加邊攪拌，至溶液含醇 量為70%，于室溫放置12小時(shí)后，過濾；濾液濃縮至適量，冷卻至室溫，加入 3倍量的水，邊加邊攪拌，放置1^2小時(shí)，過濾；濾液上大孔吸附樹脂柱(H103， 800g)，用水洗脫，收集洗脫液；濃縮洗脫液至適量，拌硅膠1000g (100~200 目)，至烘箱中烘干(65°C)。硅膠裝柱，用乙酸乙酯:醋酸(50:0.5)洗硅膠柱， 收集洗脫液，回收至干，得干膏。取干膏，用60%乙醇水溶液溶解，上Sephadex LH-20柱，用60%乙醇水溶液洗色譜柱，收集洗脫液，根據(jù)TLC合并洗脫液， 回收至少量，加入適量乙醇，用碳酸鈉水溶液調(diào)PH值至弱堿性，放置，析晶， 得丹參素鈉結(jié)晶(99.81%)。 實(shí)施例六
丹參(飲片)3kg，加水煮3次，第一次加水8倍量，煮8小時(shí)，后二次各 加水5倍量，各煮5小時(shí)，過濾，合并三次濾液；濃縮至適量，冷卻至室溫， 加入95%乙醇，邊加邊攪拌，至溶液含醇量為50%;于室溫放置12小時(shí)后，過 濾，濾液濃縮至適量，冷卻至室溫；加入95%乙醇，邊加邊攪拌，至溶液含醇 量為80%，于室溫放置12小時(shí)后，過濾；濾液濃縮至適量，冷卻至室溫，加4倍量的水，邊加邊攪拌，放置1^2小時(shí)，過濾；濾液上大孔吸附樹脂柱(H103， 800g)，用水洗脫，收集洗脫液；濃縮洗脫液至適量，拌硅膠1000g (100—200 目)，至烘箱中烘干(65°C)。硅膠裝柱，用氯仿甲酸(50:0.8)洗硅膠柱，收 集洗脫液，回收至干，得干膏。取干膏，用30%甲醇水溶液溶解，上反相硅膠 柱(Rp-18)，用30%甲醇水溶液洗色譜柱，收集洗脫液，根據(jù)TLC合并洗脫液， 回收至少量，加入適量乙醇，用碳酸氫鈉水溶液調(diào)PH值至弱堿性，放置，析晶， 得丹參素鈉結(jié)晶(99.05%)。
權(quán)利要求
1、一種丹參素鈉純品的制備方法，其特征是，包括如下步驟(a)丹參用水熱提，提取液濃縮，加乙醇醇沉，過濾；(b)濾液濃縮，加乙醇醇沉，過濾；(c)濾液濃縮，加水，過濾，濾液上大孔吸附樹脂柱，用水洗；(d)水洗液濃縮后，按步驟(e)進(jìn)行；或者水洗液上聚酰胺柱，用水洗，濃縮水洗液后，按步驟(e)進(jìn)行。(e)濃縮后的水洗液拌硅膠，烘干，裝柱，用有機(jī)溶劑洗脫，收集洗脫液，回收至干，得干膏。(f)取干膏，用有機(jī)溶劑溶解，調(diào)PH值，放置，析晶；或者取干膏，用溶劑溶解，上Sephadex LH-20柱或反相硅膠柱，洗脫液調(diào)PH值，放置，析晶。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是，步驟(a)中還包括，丹參加 水煎煮2—4次，每次4—8小時(shí)，加水量為丹參重量的5—8倍量，合并濾 液，濃縮至適量，加入95%乙醇或無水乙醇，至溶液含醇量為40—60%, 放置6—24小時(shí)，過濾；步驟(b)中還包括，濾液濃縮至適量，加入95% 乙醇或無水乙醇，至溶液含醇量為70—85%，放置6—24小時(shí)，過濾；步 驟(c)中還包括，濾液濃縮至適量，加水2—6倍量，過濾，濾液上大孔 吸附樹脂柱，用水洗；步驟(d)中還包括，水洗液濃縮后，按步驟(e) 進(jìn)行；或者水洗液上聚酰胺柱，用水洗，濃縮水洗液后，按步驟(e)進(jìn)行。 步驟(e)中還包括，濃縮后的水洗液拌硅膠(60—400目)，烘干(30~120 °C)，裝柱，用含有機(jī)酸的有機(jī)溶劑洗色譜柱，收集洗脫液，回收至干，得 干膏；步驟(f)中還包括，取干膏，用甲醇、乙醇或丙酮溶解，加適量堿 液調(diào)PH值，放置，析晶；或者取干膏，用水、含水或無水甲醇、含水或無水乙醇溶解，上Sephadex LH-20柱或反相硅膠柱(Rp-2， Rp-8， Rp-18)， 用水、含水或無水甲醇、含水或無水乙醇洗色譜柱，收集洗脫液，根據(jù)TLC 合并洗脫液，回收至少量，加入適量甲醇、乙醇或丙酮，用適量堿液調(diào)PH 值，放置，析晶。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是，步驟(a)中還包括，加入95%乙醇醇沉，放置8—15小時(shí)；步驟(b)中還包括，加入95%乙醇醇沉， 放置8—15小時(shí)；步驟(c)中還包括，加水2—4倍量，所述大孔吸附樹 脂為苯乙烯型；步驟(d)中所述聚酰胺為聚己內(nèi)酰胺(尼龍~6)。
4、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是，步驟(e)中還包括，硅膠為100^200目，烘干溫度為50—7(TC，有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮、 乙酸乙酯、氯仿、乙醚、正丁醇、異丁醇、正己垸、環(huán)己烷、石油醚；有 機(jī)酸包括甲酸、醋酸、丙酸、丁酸、草酸、丙二酸、丁二酸。
5、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是，步驟(e)中還包括，有機(jī)溶劑包括丙酮、乙酸乙酯、氯仿，有機(jī)酸包括甲酸、醋酸；步驟(f)中還包括，取干膏，用甲醇或乙醇溶解，加氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉水溶液調(diào)PH值至弱堿性。
6、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是，步驟(f)中還包括，取干膏，用5—95%甲醇或乙醇水溶液溶解，上色譜柱，用5—95%甲醇或乙醇水溶 液洗色譜柱。
7、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是，步驟(f)中還包括，取干膏，用20—60%甲醇或乙醇水溶液溶解，上Sephadex LH-20柱或反相硅膠柱 (Rp-2， Rp-8， Rp-18)，用20~60%甲醇或乙醇水溶液洗色譜柱，收集洗 脫液，根據(jù)TLC合并洗脫液，回收至少量，加入適量甲醇或乙醇，用氫氧 化鈉、碳酸鈉或碳酸氫鈉水溶液調(diào)PH值至弱堿性，放置，析晶。
8、根據(jù)權(quán)利要求2所述方法制備的丹參素鈉，其純度大于或等于98% (中檢 所標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定)。
全文摘要
本發(fā)明公開一種丹參素鈉純品的制備方法。工藝步驟為1.丹參用水熱提取，提取液濃縮，醇沉，過濾；2.濾液濃縮，醇沉，過濾；3.濾液濃縮，加水，過濾，濾液上大孔吸附樹脂柱，用水洗；4.水洗液濃縮后，按步驟(5)進(jìn)行；或者水洗液上聚酰胺柱，用水洗，濃縮水洗液后，按步驟(5)進(jìn)行。5.濃縮后的水洗液拌硅膠，烘干，裝柱，用有機(jī)溶劑洗脫，收集洗脫液，回收至干，得干膏。6.取干膏，用有機(jī)溶劑溶解，調(diào)PH值，放置，析晶；或者取干膏，用溶劑溶解，上Sephadex LH-20柱或反相硅膠柱，洗脫液調(diào)PH值，放置，析晶。用本方法制備的丹參素鈉，其純度大于或等于98％(中檢所標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定)，而且成本低、環(huán)境污染小，易于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07C59/52GK101434534SQ20071016615
公開日2009年5月20日 申請日期2007年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月12日
發(fā)明者峰 魏 申請人:北京科士藍(lán)醫(yī)藥技術(shù)有限公司