專利名稱：鈣網(wǎng)蛋白-vegfr2融合蛋白及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及DNA重組技術(shù)和藥物領(lǐng)域。具體的說，本發(fā)明涉及一種鈣網(wǎng)蛋白 (Calreticulin)與血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR2)的融合蛋白，提供一種鈣網(wǎng)蛋白與 VEGFR2融合蛋白在抗腫瘤血管生成以抑制腫瘤生長方面的用途。
背景技術(shù)：
腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)的腫瘤血管的生成在腫瘤的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移中起著非常關(guān)鍵的作用，一 般體積超過1.0-2.0mn^的腫瘤不僅需要新生血管維持足夠的營養(yǎng)供給和排泄代謝產(chǎn)物，還需 要提供有利于轉(zhuǎn)移的通道。近年來，以抑制或破壞腫瘤血管生成為目的的腫瘤治療新方法已 成為各國腫瘤醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。
鈣網(wǎng)蛋白(Calreticulin)發(fā)現(xiàn)至今已有十幾年了，其主要功能是儲(chǔ)存鈣。人鈣網(wǎng)蛋白 基因的編碼序列有1251個(gè)核苷酸，核苷酸序列見GenBank No. NM—004343，編碼的鈣網(wǎng)蛋白 由417個(gè)氨基酸組成。近年來發(fā)現(xiàn)其N-端具有抗腫瘤的作用，已證明鈣網(wǎng)蛋白的N-端第1一 180位氨基酸或第120 — 180位氨基組成的蛋白質(zhì)可通過抑制腫瘤的新生血管內(nèi)皮細(xì)胞的生 長而發(fā)揮抗腫瘤作用。
很多研究者都將血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和血管內(nèi)皮生長因子受體(VEGFR)作為 治療靶點(diǎn)，因?yàn)樗鼈冊(cè)谘苌烧{(diào)節(jié)中起著非常重要的作用。其中VEGFR2與內(nèi)皮細(xì)胞的增 殖和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，而且顯著表達(dá)在腫瘤組織中而非正常組織中。VEGF與表達(dá)在血管內(nèi)皮 細(xì)胞上的相應(yīng)受體VEGFR2結(jié)合所引起的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是血管生成中的限速步驟，在整個(gè)血管生 成中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。國外有人用可溶性的血管內(nèi)皮生長因子受體2 (sVEGFR2)競(jìng)爭(zhēng)性的 結(jié)合VEGF，從而阻斷VEGF與VEGFR2結(jié)合所引發(fā)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，抑制了腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo) 的血管生成和腫瘤的生長。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種鈣網(wǎng)蛋白(Calreticulin)—血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR2) 的融合蛋白，提供一種鈣網(wǎng)蛋白與VEGFR2融合蛋白在抗腫瘤方面的用途。
本發(fā)明的另一 目的是提供一種新的具有鈣網(wǎng)蛋白和VEGFR2兩者生物學(xué)活性的藥物，它 是此兩者的融合蛋白。
該融合蛋白包括①鈣網(wǎng)蛋白元件，該元件具有人鈣網(wǎng)蛋白或其活性片段的氨基酸序列。
②VEGFR2元件，該元件具有VEGFR2或其活性片段的氨基酸序列。③位于鈣網(wǎng)蛋白元件和VEGFR2元件之間的1一20個(gè)氨基酸的連接肽序列。
具體實(shí)施例方式
所述的Calreticulin - VEGFR2融合蛋白是由Calreticulin和VEGFR2基因融合之后 進(jìn)行表達(dá)的產(chǎn)物，由合適的氨基酸連接臂連接的Calreticulin- VEGFR2。所述的融合蛋白 兼有兩者的生物學(xué)活性，即可通過Calreticulin N-端抑制腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞生長而抗腫瘤， 還可通過競(jìng)爭(zhēng)抑制從而阻斷VEGF與VEGFR2結(jié)合所引發(fā)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，抑制了腫瘤細(xì)胞 誘導(dǎo)的血管生成和腫瘤的生長。因此，本發(fā)明所得到的Calreticulin-VEGFR2融合蛋白可 以在兩者的協(xié)同下增強(qiáng)抗腫瘤的效果，還可減少兩者分別給藥給患者所帶來的麻煩和痛苦， 為抗腫瘤等治療提供新的化合物。
權(quán)利要求
1、一種鈣網(wǎng)蛋白(Calreticulin)—血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR2)的融合蛋白，其特征在于具有鈣網(wǎng)蛋白和VEGFR2元件或其活性片段的氨基酸序列。
2、 如權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于位于鈣網(wǎng)蛋白元件和VEGFR2元件之間 的l一20個(gè)氨基酸的連接肽序列。
全文摘要
本發(fā)明是提供一種鈣網(wǎng)蛋白(Calreticulin)與血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR2)的融合蛋白，提供一種鈣網(wǎng)蛋白與VEGFR2融合蛋白在抗腫瘤血管生成以抑制腫瘤生長方面的用途。所述的Calreticulin-VEGFR2融合蛋白兼有兩者的生物學(xué)活性，通過抑制腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞生長而起抗腫瘤作用，并且在兩者的協(xié)同下增強(qiáng)了抗腫瘤的效果。
文檔編號(hào)C07K19/00GK101469024SQ20071017345
公開日2009年7月1日 申請(qǐng)日期2007年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月27日
發(fā)明者峰 李 申請(qǐng)人:上海匯康生物科技有限公司