專利名稱：：與抗砷相關(guān)蛋白及其編碼基因與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種蛋白及其編碼基因與應(yīng)用，特別是涉及一種與抗砷相關(guān)的蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：砷自被發(fā)現(xiàn)以來(lái)就以其毒性而聞名。砷是環(huán)境常見(jiàn)污染物之一，砷可能通過(guò)抑制DNA修復(fù)并發(fā)突變(Lieta7.，1989)，并且可以誘導(dǎo)姊妹單體交換(Jhaeta丄，1992)、基因擴(kuò)增(RossmanandWolosin，1992)、非整倍性(Gurre"〗，1993)和染色體畸變(Jha"s7.,1992)。砷在水生生物中易富集，使得水產(chǎn)品中的砷含量往往比陸生動(dòng)植物高幾倍到幾十倍，人等動(dòng)物若攝入過(guò)多的砷則會(huì)引起癌變，因此，人們?cè)絹?lái)越關(guān)注砷對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)品的安全性問(wèn)題，水產(chǎn)品國(guó)際貿(mào)易往來(lái)中對(duì)砷的檢測(cè)要求也越來(lái)越高。砷中毒對(duì)動(dòng)物和人類的毒性危害已受到廣泛關(guān)注，但其中作用機(jī)理仍不十分清楚，尤其對(duì)魚(yú)類毒性機(jī)制更是處于非常薄弱的環(huán)節(jié)。隨著分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)的迅猛發(fā)展，鼠和人體分離到一些抗砷基因片段，還很難進(jìn)行砷抗性綜合性分析，抗(耐)砷機(jī)制的研究逐步深化(Romach"a厶2000)。在生物進(jìn)化的過(guò)程中，許多生物產(chǎn)生了抗(耐)砷的生理機(jī)制。水環(huán)境中生活的魚(yú)類體內(nèi)很容易富集砷，它們只有產(chǎn)生應(yīng)答砷毒的抗性機(jī)能，才能不被環(huán)境淘汰。而鲇魚(yú)生活在水體底部，各類有害物質(zhì)的綜合富集量一般高于其它水生生物，具有掠食性特征的鲇魚(yú)應(yīng)該只有進(jìn)化出比其它魚(yú)類抗(耐)砷毒能力更強(qiáng)的應(yīng)答機(jī)制才能夠很好的生存和繁衍，因此鲇魚(yú)可能具有比其他植食性和雜食性魚(yú)類更強(qiáng)的抗(耐)砷能力。但是砷對(duì)鲇魚(yú)的毒作用機(jī)理與抗(耐)砷基因的研究未見(jiàn)報(bào)道，因此加強(qiáng)該方面的研究工作具有理論意義和實(shí)際意義。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種蛋白，該蛋白能增加魚(yú)類的抗砷能力。本發(fā)明所提供的蛋白，是如下(a)或(b)的蛋白質(zhì)-(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列表中序列2的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與抗重金屬相關(guān)的由(a)衍生的蛋白質(zhì)。所述重金屬具體可為砷。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種編碼上述蛋白的基因。本發(fā)明所提供的編碼上述蛋白的基因?yàn)槿缦耹)或2)的基因1)其核苷酸序列是序列表中序列1所示的DNA分子；2)在嚴(yán)格條件下與l)限定的DNA序列雜交且編碼所述蛋白的DNA分子；3)與序列表中序列1限定的DNA序列具有90。/。以上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA序列。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種含有上述任一種基因的重組表達(dá)載體。所述重組表達(dá)載體具體可為在表達(dá)載體pCMVnramp的fc^/和&7/酶切位點(diǎn)間插入序列表中序列1所示的核苷酸序列得到的重組表達(dá)載體pCMVnra即-5"i^!7A含有上述任一種基因的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種培育抗重金屬魚(yú)的方法。本發(fā)明所提供的培育抗重金屬魚(yú)的方法，是將上述任一種重組表達(dá)載體導(dǎo)入魚(yú)的受精卵細(xì)胞中，培養(yǎng)得到抗重金屬魚(yú)。其中，重金屬可為砷、鎘等。所述魚(yú)具體可為鲇魚(yú)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明轉(zhuǎn)入重組表達(dá)載體pCMVnra卿-5"i力Z4鲇魚(yú)與轉(zhuǎn)入空載體pCMVnramp鲇魚(yú)相比，其肝臟代謝砷的能力顯著增強(qiáng)。因此本發(fā)明的抗砷相關(guān)蛋白及其編碼基因，以及培育抗重金屬魚(yú)的方法將對(duì)改善水生生物抗砷等其它重金屬的表現(xiàn)特征方面具有重要意義，在魚(yú)的育種中有巨大的應(yīng)用前景。圖1為6^M基因在鲇魚(yú)基因組中的拷貝數(shù)分析。圖2為鲇魚(yú)SiATA基因在砷脅迫條件下的表達(dá)特征。圖3為5""M轉(zhuǎn)基因鲇魚(yú)砷含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖4為在砷脅迫下的轉(zhuǎn)入重組表達(dá)載體pCMVnramp-5X4Z4鲇魚(yú)與轉(zhuǎn)入空載體pCMVnramp鲇魚(yú)照片。圖5為在砷脅迫下的轉(zhuǎn)入重組表達(dá)載體pCMVnramp-5X4Z4鲇魚(yú)與轉(zhuǎn)入空載體pCMVnramp鲇魚(yú)肝臟組織比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果。具體實(shí)施例方式本發(fā)明所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明均為常規(guī)方法。實(shí)施例l、鲇魚(yú)cDNA文庫(kù)的構(gòu)建以及5WMcDNA克隆，序列分析以0.lmg/LNaAs02誘導(dǎo)蘭州鲇(&7wrws^3/^力oi/eT2W's)幼苗15天，采用SuperscriptPlasmidSystemwithGatewayTechnologyforcDNASynthesisandCloning(Invitrogen)構(gòu)建姑魚(yú)cDNA文庫(kù)，按照InvitrogenLifeTechnologiesInstructionManual操作。首先禾U用RNAgentsTotal■IsolationSystem(Promega)提取鲇魚(yú)幼苗總RNA，利用PolyATtractmRNAIsolationSystems(Promega)分離出mRNA，然后在含有7fet/位點(diǎn)的Oligo(dT)錨定引物作為反轉(zhuǎn)錄引物合成cDNA第一鏈以及cDNA第二鏈，在cDNA第一鏈末端連接5"W/接頭，然后定向插入載體中，插入DNA片段大于lKb。鲇魚(yú)幼苗cDNA文庫(kù)的庫(kù)容為lXl()e個(gè)克隆，重組率達(dá)97%，建成鲇魚(yú)cDNA文庫(kù)。以鼠AsnalcDNA(源于Masm/sc"7i/s，注冊(cè)號(hào)為NM019652)為探針篩選了2.5X105未擴(kuò)增斑得到4個(gè)陽(yáng)性斑，其插入片段為1023bp，具有完整的閱讀框，編碼由341個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白。鲇魚(yú)cDNA全序列及氨基酸序列分別如序列表中的序列l(wèi)和序列2。實(shí)施例2、5X4Z4基因在鲇魚(yú)基因組中的拷貝數(shù)分析利用CTAB法提取蘭州鲇(57"/7/s7朋z力oi/e/^is)基因組DNA，通過(guò)0.8%瓊脂糖凝膠檢測(cè)提取的鲇魚(yú)基因組DNA，選擇完整、純的基因組DNA樣品。利用經(jīng)同位素a」卞標(biāo)記的5X4Z4cDNA編碼區(qū)(序列1)為探針，與經(jīng)三種限制性內(nèi)切酶(HindIII、Sall、Xhol)消化的20網(wǎng)鲇魚(yú)基因組DNA，通過(guò)毛細(xì)管作用被原封不動(dòng)地轉(zhuǎn)移到尼龍膜(Nylon+)上，進(jìn)行Southern雜交分析，并經(jīng)過(guò)高嚴(yán)謹(jǐn)度洗膜(高嚴(yán)謹(jǐn)毒的條件是0.5XSSC，0.1XSDS，65'C)。結(jié)果如圖1所示通過(guò)HindIII、SalI、XhoI3種酶消化，產(chǎn)生了清晰的雜交帶。在5X4Z4cDNA中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)HindIII、SalI、XhoI酶切位點(diǎn)，說(shuō)明5X4M在鲇魚(yú)基因組DNA是以單拷貝數(shù)存在。實(shí)施例3、鲇魚(yú)SiATA基因在砷脅迫條件下的表達(dá)特征提取經(jīng)O.lmg/LNaAs02誘導(dǎo)的蘭州鲇(5Y7i/2t^7a加力owe/7w's)幼苗的總RNA，取相同質(zhì)量(20ug)的各樣品在變性1.2%瓊脂糖凝膠中分離，將RNA轉(zhuǎn)移至帶正電荷的尼龍膜上(Nylon+)，利用經(jīng)同位素a-32p標(biāo)記的57^Z4cDNA編碼區(qū)(序歹ll1)為探針(Takaralabelinganddetectionkit,TakaraBioTech(dalian)Co.Ltd)，提取的總RNA與cDNA探針進(jìn)行Northern雜交分析。結(jié)果如圖2所示，其中腦、心臟、腎、肝臟、鰓、骨骼肌肉都有表達(dá)，在不同組織&'力MmRNA累積量不同。5"WZ4基因在腎中轉(zhuǎn)錄水平高，腦、肝臟、鰓轉(zhuǎn)錄水平低于腎。5""M基因在骨骼肌肉中只能檢測(cè)到痕量轉(zhuǎn)錄水平。實(shí)施例4、培育代謝砷轉(zhuǎn)基因鲇魚(yú)的方法(一)重組表達(dá)載體的構(gòu)建提取實(shí)施例1中用0.lmg/LNaAs02誘導(dǎo)蘭州鲇(&7〃riAs7朋z力卯e/2Ws)幼苗的總RNA，反轉(zhuǎn)錄得到cDNA。以該反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，用(TF):5:ACCA|GAATT(^ATGCACCTGATGTIGAG-3，(TR):5'-AACA^TCG^GCGAAIGTGTTGACITTG-3'進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對(duì)該P(yáng)CR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果得到1000bp左右的DNA片段，回收純化PCR產(chǎn)物，對(duì)該P(yáng)CR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果表明，得到的PCR產(chǎn)物具有序列表序列1的核苷酸序列。該核苷酸序列編碼序列表中序列2的SiATA蛋白。用fc^/和5"aJ/限制性內(nèi)切酶酶切該P(yáng)CR產(chǎn)物；將pCMVnramp質(zhì)粒表達(dá)載體(Promega)經(jīng)限制性內(nèi)切酶fcov/和5^/酶切進(jìn)行酶切；將5^M基因插入到表達(dá)載體pCMVnramp的i5bov/和5"a7/酶切位點(diǎn)，得到pCMVnramp-i^Z4。(二)、培育轉(zhuǎn)基因魚(yú)苗采用顯微注射法進(jìn)行鲇魚(yú)轉(zhuǎn)化。蘭州鲇(577w^asj朋Ww朋w's)親魚(yú)來(lái)自寧夏水產(chǎn)研究所繁殖實(shí)驗(yàn)基地，肌肉注射激素，用L服H-A人工催產(chǎn)。采集高質(zhì)量成熟卵子和精子，干法受精獲得大量鲇魚(yú)受精卵，加水激活后取上層優(yōu)質(zhì)浮卵于10-14"C條件下培養(yǎng)，取1-2細(xì)胞期的胚胎用于顯微注射。顯微注射DNA溶液的配置將用限制性內(nèi)切酶5^J/將重組表達(dá)載體pCMVnramp-5X4M線性化，并將其溶解于Tris-HCl(pH:7.6)溶液中，使其終濃度為100ngAC，用0.02Mm濾器過(guò)濾除菌后作為注射液。采用Nikon公司的拉針儀和磨針儀，制成針尖約為4-9Mm注射針，針尖要求尖銳，能夠刺穿受精卵膜，并且Nikon公司的顯微注射儀將轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體射入魚(yú)單細(xì)胞期受精卵動(dòng)物極細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。每卵注射50pL上述外源DNA溶液(濃度為50ng/uL)。在熒光顯微鏡下，檢測(cè)出轉(zhuǎn)化子的胚胎存活率。篩選出產(chǎn)生綠色熒光的轉(zhuǎn)基因胚胎，檢測(cè)AWM在體內(nèi)的整合和表達(dá)，證實(shí)SiATA能夠在鲇魚(yú)胚胎內(nèi)超表達(dá)。將顯微注射受精卵置于培養(yǎng)皿中，用Danieau's液培養(yǎng)(1.74mol/LNaCl，21mmol/LKC1，12,1/LMgS04,18mmol/LCaCl2，150,1/LHEPES，pH:7.6)，每5小時(shí)換培養(yǎng)液。孵化后轉(zhuǎn)入無(wú)菌的暴氣自來(lái)水中培養(yǎng)。得到轉(zhuǎn)入重組表達(dá)載體pCMVnramp-5X4M仔魚(yú)，仔魚(yú)孵化3天后開(kāi)始飼喂。按照上述方法，將空載體pCMVnramp用限制性內(nèi)切酶&7/線性化后，轉(zhuǎn)入魚(yú)中，培育得到轉(zhuǎn)入空載體pCMVnra即的仔魚(yú)，作為對(duì)照。(三)、轉(zhuǎn)基因鲇魚(yú)砷代謝特征檢測(cè)取轉(zhuǎn)入重組表達(dá)載體pCMVnramp-5"WM的鲇魚(yú)苗和轉(zhuǎn)入空載體pCMVnramp的鲇魚(yú)苗，體長(zhǎng)均5cm，體重約45g。餌料為水蚯蚓。飼養(yǎng)魚(yú)苗采用過(guò)濾自來(lái)水，水質(zhì)參數(shù)pH:7.3±0.27，堿度186.65±22.4mg/L，Cr乂13mg/L，K+、Na+〈24.3mg/L，Ca2+<29,5mg/L，P<0.01mg/L，H2S、Hg、As未檢出。水溫2226"C。實(shí)驗(yàn)用水族箱規(guī)格為200craX100cmX75cm，整體并聯(lián)lkw羅磁鼓風(fēng)機(jī)增氧設(shè)備一套。實(shí)驗(yàn)前14d，將魚(yú)苗投放到水族箱以適應(yīng)環(huán)境。取4只水族箱，分別加入1200L水，分別加入NaAs02至終濃度為0.lmg/LNaAs02。向其中的2只水族箱分別放入20尾上述轉(zhuǎn)入重組表達(dá)載體pCMVnramp-57力M的魚(yú)苗，另外2只水族箱分別放入20尾上述轉(zhuǎn)入空載體pCMVnra^)的魚(yú)苗。每24h換一次含有O.lmg/LNaAs02的水。在培養(yǎng)第4d、7d、14d、21d分別采集5尾轉(zhuǎn)入重組表達(dá)載體pCMVnramp-57/1M和轉(zhuǎn)入空載體pCMVnramp的魚(yú)肝臟，進(jìn)行砷含量測(cè)定，如圖3所示。砷含量測(cè)定分別稱取上述組織樣品0.5000g置于高壓消解罐中，加入7mL濃HN03和lmL濃HC104，在微波消解系統(tǒng)中消解。溫度下降后，樣品用滅菌去離子水轉(zhuǎn)移至lOOmL燒杯，置電熱板上，170'C趕酸至消解液剩約lmL，冷卻后，用5%(V:V)鹽酸轉(zhuǎn)移至25mL比色管中，加入5%抗壞血酸和5%硫脲各5mL，用5%鹽酸定容至25mL，混勻，放置30min后上機(jī)測(cè)定。儀器測(cè)定條件還原試劑1%NaBH4溶液+0.3MNaOH溶液；載流2%(V:V)鹽酸；載氣Ar(99.99%)，流量0.4L/min;屏蔽氣Ar(99.99%)，流量0.8L/min;負(fù)高壓260V;燈電流50mA;原子化器高度12mm。輸入?yún)?shù)樣品質(zhì)量(g)、稀釋體積(mL)、位置號(hào)、樣品空白，并選擇mg/kg濃度單位，逐步將爐溫升至所需溫度，穩(wěn)定后測(cè)量，連續(xù)用標(biāo)準(zhǔn)空白進(jìn)樣，待讀數(shù)穩(wěn)定后，在轉(zhuǎn)入試樣測(cè)量之前，先進(jìn)行試劑空白消化液進(jìn)樣，空白測(cè)定，儀器自動(dòng)扣除空白值。測(cè)定樣品。樣品中砷含量按下式計(jì)算X=(C「C。)V/1000m(其中X—試樣中砷的含量(mg/kg)，d—試樣消化液測(cè)定濃度(ng/mL)，C。一試劑空白液測(cè)定濃度(ng/mL)，V—試樣消化液的總體積(mU，m—試樣質(zhì)量(g)。)表l相同濃度的各待測(cè)樣品在相同條件下測(cè)得的含砷量的結(jié)果mg/kg<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>結(jié)果如表1和圖3所示被NaAs02染毒轉(zhuǎn)入重組表達(dá)載體pCMVnramp-5X4"鲇魚(yú)比轉(zhuǎn)入空載體pCMVnramp鲇魚(yú)肝臟組織砷代謝增強(qiáng)。在砷脅迫下的轉(zhuǎn)入重組表達(dá)載體pCMVnramp-5X4M鲇魚(yú)和轉(zhuǎn)入空載體pCMVnramp鲇魚(yú)見(jiàn)圖4。砷脅迫下的轉(zhuǎn)入空載體pCMVnramp鲇魚(yú)肝臟表現(xiàn)為肝組織壞死，細(xì)胞腫大，細(xì)胞核丟失，有空洞，細(xì)胞界限不清，有脂質(zhì)聚集，而轉(zhuǎn)入重組表達(dá)載體pCMVnramp-鲇魚(yú)肝組織健康，如圖5所示。序列表<160〉2〈210〉1<211>1023〈212〉DNA〈213〉鲇屬蘭州鲇(5Y7〃2tas2朋^o〃e/7w'50<400>1atggcagcttcagtggaagcacgttaaaaaatataatagaggcgttgggaa羅gacatgagcgtcctcatcatctccacttctccaaggtccccaccaaCCg3gtttgggtgtggccgsatgggcaageiagatgatgcaagctatgccgaggttatgagacggctcctacaggccacacctgggccgcctcatgcagatatgctggggctgggtgatatcctgtgatccgctccgtcaggtgtgcatcgccgagttcctaagtgtcgcatcgacacgcaagaccctgcaagatgtgcgagaggacctgtatgaagatttggagccgacaaggtcaacac<210〉2〈211〉341<212〉PRT<213〉鲇屬蘭州鲇(&7w/yas73/7z力ow朋sis)<400>2MetAlaAlaSerValGluAlaGluPheGluAspAlaProAspValGlucgaatttgaagatgcacctgatgtagagcctttagagccg60gcaaaaatctctgaaatggatttttgtaggtggaaaaggc120cagctgcagtctggcggtccagctgtccacagtgagggag180cgacccggcacacaacatctccgacgccttcgaccagaag240agtgaagggctacgataacctcttcgctatggagattgac300gctcccggatgagttttttgaagaagacaacatgctgagt360ggaggccatgagcgccttccctggtatcgacgaggccatg420gttagttaaagggatgaacttctccgtggtggtgttcgac480gctacgcctgctcaacttccccaccatcgtagagcgcggc540caagaaccagatcagccccttcatttctcagatgtgtaac600gaacgccgatcagctggcctccaaactggaggagaccctt660cgagcsgtttaaagacccggagcaga_cga_cgttcstctgc720gtccctgtacgagacggagcggctgatccaggagctggcc780caacatcatcgtcaaccagctggtgttccccgacaccgag840ggccaggcacaagatccagtccaagtacctggaccagatg900ccacatagtcaaactgcctctactaccacatgaggtacga960tttctccaagcagctgctggagccctacagccctcccaaa10201015ProLeuGluProThrLeuLysAsnlielieGluGinLysSerLeuLys202530TrpliePheValGlyGlyLysGlyGlyValGlyLysThrThrCysSer354045CysSerLeuAlaValGinLeuSerThrValArgGluSerValLeulie505560lieSerThrAspProAlaHisAsnlieSerAspAlaPheAspGinLys65707580PheSerLysValProThrLysValLysGlyTyrAspAsnLeuPheAla859095MetGlulieAspProSerLeuGlyValAlaGluLeuProAspGluPhe100105110PheGluGluAspAsnMetLeuSerMetGlyLysLysMetMetGinGlu115120125AlaMetSerAlaPheProGlylieAspGluAlaMetSerTyrAlaGlu130135140ValMetArgLeuValLysGlyMetAsnPheSerValValValPheAsp145150155160ThrAlaProThrGlyHisThrLeuArgLeuLeuAsnPheProThrlie165170175ValGluArgGlyLeuGlyArgLeuMetGinlieLysAsnGinlieSer180185190ProPhelieSerGinMetCysAsnMetLeuGlyLeuGlyAspMetAsn195200205AlaAspGinLeuAlaSerLysLeuGluGluThrLeuProVallieArg210215220SerValSerGluGinPheLysAspProGluGinThrThrPhelieCys225230235240ValCyslieAlaGluPheLeuSerLeuTyrGluThrGluArgLeulie245250255GinGluLeuAlaLysCysArglieAspThrHisAsnlielieValAsn260265270GinLeuValPheProAspThrGluArgProCysLysMetCysGluAla275280285ArgHsLyslieGinSerLysTyrLeuAspGinMetGluAspLeuTyr290295300GluAspPheHislieValLysLeuProLeuLeuProHisGluValArg305310315320GlyAlaAspLysValAsnThrPheSerLysGinLeuLeuGluProTyr325330335SerProProLysLys340權(quán)利要求1、一種蛋白，是如下(a)或(b)的蛋白質(zhì)(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列表中序列2的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與抗重金屬相關(guān)的由(a)衍生的蛋白質(zhì)。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的蛋白，其特征在于所述所述重金屬為砷。3、權(quán)利要求l所述蛋白的編碼基因。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的基因，其特征在于所述蛋白編碼基因?yàn)槿缦耹)或2)或3)的基因1)其核苷酸序列是序列表中序列1所示的DNA分子；2)在嚴(yán)格條件下與l)限定的DNA序列雜交且編碼所述蛋白的DNA分子；3)與序列表中序列i限定的DNA序列具有9(m以上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA序列。5、含有權(quán)利要求3或4所述基因的重組表達(dá)載體。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組表達(dá)載體，其特征在于所述重組表達(dá)載體為在表達(dá)載體pCMVnramp的fcoy/和6"a7/酶位點(diǎn)間插入序列表中序列1所示的核苷酸序列得到的重組表達(dá)載體pCMVnramp-5X4"。7、含有權(quán)利要求3或4所述基因的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。8、一種培育抗重金屬魚(yú)的方法，是將權(quán)利要求5或6所述的重組表達(dá)載體導(dǎo)入魚(yú)的受精卵細(xì)胞中，培養(yǎng)得到抗重金屬魚(yú)。9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于所述重金屬為砷。10、根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的方法，其特征在于所述魚(yú)為鲇魚(yú)。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種與抗砷相關(guān)的蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。該抗砷相關(guān)的蛋白，是如下(a)或(b)的蛋白質(zhì)(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列表中序列2的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與抗重金屬相關(guān)的由(a)衍生的蛋白質(zhì)。本發(fā)明的抗砷相關(guān)蛋白及其編碼基因?qū)?duì)改善水生生物抗砷以及抗重金屬等表現(xiàn)特征具有重要意義，在魚(yú)的育種中有巨大的應(yīng)用前景。文檔編號(hào)C07K14/46GK101186642SQ20071017842公開(kāi)日2008年5月28日申請(qǐng)日期2007年11月30日優(yōu)先權(quán)日2007年11月30日發(fā)明者侯士聰,侯玉霞,吳旭東,奇張,王青華,趙紅雪申請(qǐng)人:寧夏回族自治區(qū)水產(chǎn)研究所;中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)