專利名稱：從長春花中提取長春堿類提取物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從長春花中提取長春質(zhì)堿、文朵靈、長春堿、長 春新堿的新工藝，長春質(zhì)堿和文朵靈是合成抗腫瘤藥物長春瑞濱、長 春堿和長春新堿的重要原料，長春堿、長春新堿可直接作藥用。
技術(shù)背景長春堿類抗腫瘤藥系由夾竹桃科植物長春花分離得到的具有抗 癌活性的雙吲哚生物堿及其結(jié)構(gòu)修飾的衍生物。天然的為長春堿、長 春新堿。長春堿用于治療各種實體瘤，長春新堿主要用于治療兒童急 性白血病。長春質(zhì)堿、文朵靈可用于合成長春堿，進(jìn)一步合成用于治 療非小細(xì)胞肺癌和晚期乳腺癌的長春瑞濱。雙B引哚生物堿長春堿在長春花中的含量大約為十萬分之一，長 春新堿大約為百萬分之一，而植物體內(nèi)合成長春堿、長春新堿的前體 單吲哚生物堿文朵靈和長春質(zhì)堿的含量是它們的數(shù)倍之多，大約在萬 分之一(Uniyal， G， G. et al. Phytochemical Analysis, 12， 206)。雙吲 哚生物堿長春堿、長春新堿、脫水長春堿、長春瑞濱可由單吲哚生物 堿文朵靈和長春質(zhì)堿通過偶合制備，但國內(nèi)臨床使用的長春新堿、長 春瑞濱主要是從長春堿半合成過來。國內(nèi)的長春花總堿生產(chǎn)從長春花 植物中僅提取含量較低的長春堿，而把大量的單吲哚生物堿文朵靈和 長春質(zhì)堿作為廢料遺棄，造成資源沒有得到很好的綜合利用
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于綜合利用長春花，從中能夠提取出多種長春堿 類提取物。本發(fā)明釆用如下技術(shù)方案 一種從長春花中提取長春堿類提取物 的方法，其特征在于該方法包括如下過程(1) 長春花經(jīng)酸性水拌濕后攪碎，然后用酸性水浸泡，過濾后 濾液用堿調(diào)節(jié)至堿性，再用氯仿萃取堿水相，收集氯仿相、回收氯仿 后得固體回收物；(2) 將步驟(1)中的固體回收物用酸性水溶解，加乙酸乙酯萃 取，回收酸性水相；(3) 將步驟(2)中回收的酸性水相調(diào)節(jié)至堿性，用氯仿萃取， 萃取相回收氯仿后得粗制生物堿；(4) 將步驟(3)中獲得的粗制生物堿用酸性水溶解，調(diào)pH至 堿性，離心收集下層沉淀，沉淀物經(jīng)干燥后得長春花生堿，長春花生 堿經(jīng)過溶解后再經(jīng)氧化鋁柱層析分離得長春堿和長春新堿；(5) 步驟(4)中離心所得濾液，用氯仿萃取，萃取相經(jīng)減壓濃 縮，以大孔樹脂分離得長春質(zhì)堿和文朵靈。本發(fā)明的提取方法，經(jīng)過多次萃取、分離，能夠從長春花中分別 提取出長春堿、長春新堿、長春質(zhì)堿和文朵靈，提高了長春花的利用 率，減少了廢棄物的排放。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，以助于理解本發(fā)明 的內(nèi)容。下面的酸水采用2%的H2S04。1、 總堿的提取稱取長春花干草約4kg，加少量酸水拌濕后勻漿機(jī)攪碎。將攪碎 后的草渣加8升酸水浸泡24小時，此時酸水浸泡液pH二1 1.5。此 后，過濾收集酸水液，Na0H調(diào)堿至pH二7. 5 9.0，氯仿萃取堿水相， 收集氯仿相并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在30 5(TC條件下蒸干并回收固體回收 物。以上操作重復(fù)三次后，基本可將長春花中的生物堿全部提出。然 后，將回收物用酸水溶解，加乙酸乙酯萃取，其目的是去除脂溶性雜 質(zhì)及葉綠素等雜質(zhì)。回收酸水相調(diào)節(jié)pH至7.5 9.0呈堿性，再用氯 仿萃取、蒸干，得粗制生物堿IO. 166克。將粗制生物堿用酸水2L溶 解后，再用堿如NaOH調(diào)pH至7.5 9.0呈堿性，離心收集下層沉淀，沉淀物用冷凍干燥機(jī)干燥，干燥條件為-38i:預(yù)凍3小時，ox:升華20小時，25'C干燥4小時，得精制長春花生堿，為淡黃色的粉末， 稱重為1.981克。離心后的濾液用氯仿萃取，減壓濃縮得生物堿6. 5g，以大孔樹 脂AB-8分離，乙醇水梯度洗脫，收集乙醇濃度為45%的洗脫成分， 減壓濃縮得長春質(zhì)堿。收集乙醇濃度為65%的洗脫成分，減壓濃縮得 文朵靈。2、 長春堿與長春新堿的分離純化(1)氧化鋁的預(yù)處理取一定量已過120目篩的氧化鋁，加60 'C以上的蒸餾水浸泡攪拌約IO分鐘，如此反復(fù)數(shù)次，直至洗滌液近
中性為止。于10(TC-14(TC的溫度下烘干(一般要6-12時)。用板層 進(jìn)行定級，使其對蘇丹紅的Rf值控制在0. 2-0. 1之間，然后加入10% 醋酸水溶液降活性，使對蘇丹紅的Rf值在0.3土0. l范圍內(nèi)(每400 克氧化鋁約加10%醋酸溶液4. 5ml)，盛于瓶中密閉保存?zhèn)溆谩?br> (2) 上柱取一端帶有活塞的內(nèi)徑為80mm、高度為lm的玻璃 層析管，先加入少量苯，再放入脫脂棉于底部。然后稱取已處理過的 氧化鋁120克，放入燒杯內(nèi)，同時加入苯，并用玻棒攪拌，慢慢加入 層析管中，使其自然沉降。打開活塞放出多余的苯，使苯液面與氧化 鋁平面相近，靜置過夜后再將多余的苯放出。
(3) 加樣將長春花生堿加入適量苯溶解后，用吸管沿層析管 壁四周慢慢加入(為了不使氧化鋁平面被沖動，可在氧化鋁平面上放 一圓形濾紙)。盛長春花生堿的容器用少量苯洗滌3次，用吸管移入 層析管中。打開活塞，以每分鐘6ml的流速放出，直至液面與氧化鋁 平面相近為止。
(4) 洗脫洗脫流份的體積， 一般視氧化鋁活性、層析管的大 小、流速快慢而定。先以苯100毫升洗脫，每分鐘6-8ml的流速收集 流份1-7 (每份30ml)。并點少量流份于干凈濾紙上，用硫酸鈰銨檢 査和板層鑒定，前l(fā)-6份無生物堿反應(yīng)，從7份開始有顏色反應(yīng)。
再以苯和氯仿比例為l: 2 (V/V)的混合液150ml的洗脫，收集 流份16-18，經(jīng)板層檢查，16-17仍為交叉流份。
最后用1: 2 (V/V)苯和氯仿中，加入0.2%無水乙醇的混合液 200ml洗脫，再用1: 2苯和氯仿中加0. 8%無水乙醇的混合液300ml
洗脫，收集19-26流份，經(jīng)板層檢査，顯VCR顏色反應(yīng)(蘭灰色)， 27-29流份顯其他顏色反應(yīng)。每收集一個流份，要在80°C-IO(TC的水浴上減壓濃縮，并回收 洗滌劑，用吸管移入編號的小瓶內(nèi)，并用少量氯仿多次洗滌容器，洗 滌液倒入編號小瓶中。濃縮后可以再行板層檢査定性，將顯蘭灰色的 流份合并在一起，顯其它顏色的流分合并在一起，經(jīng)真空干燥，蘭灰 色流分得長春堿，其它顏色流份為長春新堿。所述的板層檢查條件為吸附劑氧化鋁粒度過200目，對蘇丹紅的Rf值應(yīng)在0. 35-0. 4之間。顯色劑 1%硫酸鈰銨磷酸液。展開劑 氯仿乙醚石油醚(沸程3(TC-6(TC) =10: 10: 1(V/V)。
權(quán)利要求
1、一種從長春花中提取長春堿類提取物的方法，其特征在于該方法包括如下過程(1)長春花經(jīng)酸性水拌濕后攪碎，然后用酸性水浸泡，過濾后濾液用堿調(diào)節(jié)至堿性，再用氯仿萃取堿水相，收集氯仿相回收氯仿后得固體回收物；(2)將步驟(1)中的固體回收物用酸性水溶解，加乙酸乙酯萃取，回收酸性水相；(3)將步驟(2)中回收的酸性水相調(diào)節(jié)至堿性，用氯仿萃取，萃取相回收氯仿后得粗制生物堿；(4)將步驟(3)中獲得的粗制生物堿用酸性水溶解，調(diào)pH至堿性，離心收集下層沉淀，沉淀物經(jīng)干燥后得長春花生堿，長春花生堿經(jīng)過溶解后再經(jīng)氧化鋁柱層析分離得長春堿和長春新堿；(5)步驟(4)中離心所得濾液，用氯仿萃取，萃取相經(jīng)減壓濃縮，以大孔樹脂分離得長春質(zhì)堿和文朵靈。
2、 如權(quán)利要求1所述的從長春花中提取長春堿類提取物的方法， 其特征在于所述的酸性水是指PH值為1 1. 5的水溶液。
3、 如權(quán)利要求1所述的從長春花中提取長春堿類提取物的方法， 其特征在于所述步驟(l)、 (3)和(4)中的堿性是指PH值為7.5 9.0。
4、 如權(quán)利要求1所述的從長春花中提取長春堿類提取物的方法， 其特征在于將所述的步驟(1)中的浸泡至步驟(3)的提取過程重復(fù)進(jìn)行三次以充分提取出粗制生物堿。
5、 如權(quán)利要求1至4中之一所述的從長春花中提取長春堿類提 取物的方法，其特征在于所述的步驟(4)中沉淀物的干燥是冷凍 干燥。
6、 如權(quán)利要求5所述的從長春花中提取長春堿類提取物的方法， 其特征在于所述的冷凍干燥條件為-38 -45'C預(yù)凍2 4小時， -10 5°(3升華至冰晶消失，25。C干燥3 5小時。
7、 如權(quán)利要求1至4中之一所述的從長春花中提取長春堿類提 取物的方法，其特征在于所述的步驟(4)中用氧化鋁柱層析分離的 過程為(1) 氧化鋁的預(yù)處理取氧化鋁加蒸餾水浸泡攪拌，直至洗滌 液近中性為止；于100°C-140。C的溫度下烘干6-12小時；用板層進(jìn) 行定級，使其對蘇丹紅的Rf值控制在0.2-0. l之間，然后加入100/。 醋酸水溶液降活性，使對蘇丹紅的Rf值在0.3士0. l范圍內(nèi)，盛于容 器中密閉保存?zhèn)溆茫?2) 上柱取一端帶有活塞的玻璃層析管，裝預(yù)處理好的氧化 鋁裝柱；(3) 加樣將長春花生堿加入適量苯溶解后，沿層析管壁四周 慢慢加入，盛長春花生堿的容器用少量苯洗滌，移入層析管中，打開 活塞，放出直至液面與氧化鋁平面相近為止；(4) 洗脫先以苯100毫升洗脫，每分鐘6-8ml的流速收集流 份，并點少量流份于濾紙上，用硫酸鈰銨檢査和板層鑒定，至有顏色 反應(yīng)后，再以苯和氯仿的體積比例為1: 2的混合液150ml的洗脫， 收集流份；最后用l: 2體積比的苯和氯仿，加入0.2%無水乙醇的混 合液200ml洗脫，再用l: 2體積比的苯和氯仿中加0.8。/。無水乙醇的 混合液300ml洗脫，收集流份，經(jīng)板層檢查，顯VCR顏色反應(yīng)為蘭灰 色，以后的流份顯其他顏色反應(yīng)；將顯蘭灰色的流份合并在一起，顯 其它顏色的流分合并在一起，要在80°C-IO(TC的水浴上減壓濃縮， 經(jīng)真空干燥，蘭灰色流分得長春堿，其它顏色流份為長春新堿。
8、如權(quán)利要求1至4中之一所述的從長春花中提取長春堿類提 取物的方法，其特征在于所述的大孔樹脂為AB-8。
全文摘要
一種從長春花中提取長春堿類提取物的方法，包括如下過程(1)長春花經(jīng)酸性水拌濕后攪碎，然后用酸性水浸泡，過濾后濾液用堿調(diào)節(jié)至堿性，用氯仿萃取堿水相，收集氯仿相，回收氯仿后得固體回收物；(2)回收物用酸性水溶解，加乙酸乙酯萃取，回收酸性水相；(3)將步驟(2)中回收的酸性水相調(diào)節(jié)至堿性，用氯仿萃取，萃取相回收氯仿得粗制生物堿；(4)將步驟(3)中獲得的粗制生物堿用酸性水溶解，調(diào)pH至堿性，離心收集下層沉淀，沉淀物經(jīng)干燥后得精制長春花生堿，經(jīng)氧化鋁柱層析分離得長春堿、長春新堿；(5)將步驟(4)中離心所得濾液，用氯仿萃取，減壓濃縮，以大孔樹脂分離得長春質(zhì)堿、文朵靈。這種方法可以提高長春花的利用率。
文檔編號C07D519/00GK101157699SQ20071018781
公開日2008年4月9日 申請日期2007年11月13日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月13日
發(fā)明者劉全勝 申請人:劉全勝