專利名稱：：吲哚衍生物的新的檸檬酸鹽及其藥物應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及2-鞋基-3-[5-(嗎啉-4-基甲基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-甲腈的新的可藥用鹽，2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基曱基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-甲腈檸檬酸鹽，其制備方法，含有所述鹽的藥物制劑以及所述活性鹽在治療中的應用。
背景技術：
：2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基甲基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-甲腈以游離堿及其鹽酸鹽的形式描述于WO03/082853中。該化合物是有用的，因為其具有藥理活性，對于GSK3表現(xiàn)出抑制作用(WO03/082853)。該化合物可用于治療阿爾茨海默病、癡呆、慢性和急性神經(jīng)變性疾病、雙相性精神障礙、精神分裂癥、糖尿病、脫發(fā)、骨相關病癥以及在WO03/082853中描述的所有列出的病癥，該專利引入本文以供參考。糖原合酶激酶3(GSK3)是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，由兩種同種型(a和p)組成，這兩種同種型由不同基因編碼，但它們在催化域內(nèi)是高度同源的。GSK3在中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中高度表達。GSK3將幾種底物石岸酸化，所述底物包括Tau,p-連環(huán)蛋白、#唐原合酶、丙酮酸脫氬酶和延長引發(fā)因子2b(elF2b)。胰島素和生長因子激活蛋白激酶B,蛋白激酶B將絲氨酸9殘基上的GSK3磷酸化，并且讓其失活。阿爾茨海默病(AD)癡呆，和tau疾病(taupathy)AD的特征在于認知能力下降，膽堿能功能障礙和神經(jīng)元死亡，神經(jīng)元纖維纏結以及由淀4分樣蛋白-(3沉積物組成的老年斑。AD中這些事件的順序是不清楚的，但是據(jù)信是有關的。糖原合酶激酶3P(GSK3(3)或Tau磷酸化激酶將AD腦中高磷酸化位點的神經(jīng)元中微管結合蛋白Tau選擇性地磷酸化。高磷酸化tau對于微管具有較低親和力，并且作為成對的螺旋絲聚集，成對的螺旋絲是構成AD腦中神經(jīng)原纖維纏結和神經(jīng)纖維網(wǎng)線的主要成分。這導致微管解聚，使得軸突死亡(dyingback)以及神經(jīng)萎縮。神經(jīng)原纖維纏結始終存在于疾病例如AD、力幾萎縮性側索硬化、Gaum帕金森綜合征-癡呆、皮層基底變性、拳擊家癡呆和頭部創(chuàng)傷、唐氏綜合征、腦炎后帕金森神經(jīng)功能障礙、進行性核上性麻痹、尼曼-皮克病和皮克病中。將淀粉樣蛋白-p加到原始海馬培養(yǎng)物中，通過誘導GSK3(3活性而導致tau的高磷酸化以及成對的螺旋絲樣狀態(tài)，之后是軸突運l俞的打石皮以及神經(jīng)元死亡(Imahori和Uchida.,J.Biochem121:179-188,1997)。GSK3p優(yōu)先標記神經(jīng)原纖維纏結，并且已經(jīng)表明在AD腦的前纏結神經(jīng)元中有活性。在來自AD患者的腦組織中，GSK3蛋白水平也增加了50%。此外，GSK3(3將丙酮酸脫氬酶^糖酵解途徑中的一種關鍵酶磷酸化，并且阻止丙酮酸轉化成乙酰-Co-A(Hoshi等人，PNAS93:2719-2723,1996)。乙酰-Co-A對于乙酰膽堿合成來說是關鍵的，乙酰膽堿是具有認知功能的神經(jīng)遞質。淀粉樣蛋白-(3的積聚是AD中的早期事件。GSKTg小鼠在腦中表現(xiàn)出淀粉樣蛋白-(3水平的增加。喂以鋰的PDAPP小鼠在海馬中表現(xiàn)出降低的淀粉樣蛋白-P水平以及降4氐的淀4分樣蛋白斑面積(Su等人，Biochemistry2004,43:6899-6908)。因此，GSK3p抑制在與阿爾茨海默病以及其他上述疾病有關的進行以及認知功能缺陷中可具有有意作用。十曼性和急性神經(jīng)變性疾病已經(jīng)表明，生長因子介導的PI3K/Akt途徑激活在神經(jīng)元存活中起關鍵作用。該途徑的激活導致GSK3(3抑制。最近的研究(Bhat等人，PNAS97:11074-11079(2000))表明GSK3p活性在神經(jīng)變性例如腦缺血的細胞和動物模型中增強，或者在生長因子缺失后增強。例如，在容易發(fā)生細胞程序死亡的神經(jīng)元中活性位點磷酸化增強，細胞程序死亡是通常據(jù)信在慢性和急性神經(jīng)變性疾病例如認識功能障礙、阿爾茨海默病、帕金森病、力幾萎縮性側索硬化、亨廷頓舞蹈病和HIV癡呆以及創(chuàng)傷性腦損傷中發(fā)生的一種類型細胞死亡；如在缺血性中風中一樣。采用導致GSK3(3抑制的劑量，鋰是抑制細胞和腦中細胞程序死亡的神經(jīng)保護劑。因此，GSK3(3抑制劑可用于減輕神經(jīng)變性疾病的病程。雙相性精神障礙(BD)雙相性精神障礙的特征在于躁狂發(fā)作和抑郁發(fā)作?；谄淝榫w穩(wěn)定作用，4里已經(jīng)用于治療BD。4里的缺點是窄的治療窗口以及導致4里中毒的劑量過度的危險。發(fā)現(xiàn)鋰在治療濃度抑制GSK3已經(jīng)提高了該酶代表腦中鋰作用的關鍵耙點的可能性(Stambolic等人，Curr.Biol.6:1664-1668,1996;Klein和Melton;PNAS93:8455-8459,1996;Gould等人，Neuropsychopharmacology，1:32-8,2004)。已經(jīng)表明GSK3抑制劑在強迫游泳試驗一一種用于評估抑郁行為的模型中能夠降低穩(wěn)定時間(O，Brien等人，JNeurosci2004,24:66791-6798)。已經(jīng)表明GSK3與II型雙相性精神障礙中發(fā)現(xiàn)的多形性有關(Szczepankiewicz等人，Neuropsychobiology.2006;53(1):51隱6)。因此，抑制GSK3卩可以在具有情感病的BD以及AD患者的治療中具有治療相關性。精神分裂癥越來越多的證據(jù)表明在情緒障礙和精神分裂癥中GSK3的異常活性。GSK3參與多個細胞過程的信號傳導級聯(lián)，特別是在神經(jīng)元發(fā)育期間。Kozlovsky等人(AmJPsychiatry2000May;157(5):831-3)發(fā)現(xiàn)，在精神分裂癥患者中，GSK3p水平比對照個體低41。/。。該研究表明，精神分裂癥涉及神經(jīng)發(fā)育病變，并且異常GSK3調(diào)節(jié)可能在精神分裂癥中起作用。此外，據(jù)報道，在表現(xiàn)出精神分裂癥的患者中具有降低的P-連環(huán)蛋白水平(Cotter等人，Neuroreport9:1379-1383(1998))。非典型精神抑制藥物例如奧氮平、氯氮平、喹迪平和齊拉西酮通過提高ser9磷酸化而抑制GSK3,這表明精神抑制藥物可能通過GSK3抑制而施加其有益作用(Rosborough等人,IntJNeuropsychopharmacol,4:1-132006)。糖尿病胰島素通過去磷酸化以及由此激活糖原合酶而刺激骨骼肌中的糖原合成。在休止狀態(tài)下，GSK3通過去磷酸化將糖原合酶磷酸化和失活。GSK3還在II型糖尿病患者的肌肉中過度表達(Nikoulina等人，Diabetes2000Feb;49(2):263-71)。抑制GSK3增強了糖原合酶的活性，并且通過葡萄糖向糖原的轉化而降低了葡萄糖水平。在糖尿病動物模型中，GSK3抑制劑把血漿葡萄糖水平降低了最高達50%(Cline等人，Diabetes,2002,51:2903-2910;Ring等人，Diabetes2003,52:588-595)。GSK3抑制可因此在治療I型和II型糖尿病以及糖尿病性神經(jīng)病的治療中具有治療相關性。脫發(fā)GSK3磷酸化和降解p-連環(huán)蛋白。p-連環(huán)蛋白是keratonm合成途徑的效應器。P-連環(huán)蛋白穩(wěn)定可導致頭發(fā)發(fā)育增加。通過GSK3石舞酸化的位點的突變而表達穩(wěn)定(3-連環(huán)蛋白的小鼠經(jīng)歷了類似于重新毛發(fā)形態(tài)發(fā)生的過程(Gat等人，Cell1998Nov25;95(5):605-14))。新的毛嚢形成皮脂腺和真皮乳頭，其通常僅在胚胎發(fā)生中建立。因此，GSK3抑制可治療脫發(fā)。骨相關疾病和病癥GSK3抑制劑可用于治療涉及需要新的和增加的骨形成的骨相關疾病或其他病癥。骨骼的再造是連續(xù)過程，由全身激素例如曱狀旁腺激素(PTH)、局部因子(例如前列腺素E2)、細胞因子以及其他生物活性物質控制。兩種細胞類型是至關重要的成骨細胞(負責骨形成)和破骨細胞(負責骨吸收)。通過RANK、RANK配體和osteoprotegerin調(diào)節(jié)系統(tǒng)，這兩種類型細胞相互作用以保持正常骨更新(BellNH,CurrentDrugTargets-Immune,Endocrine&MetabolicDisorders,2001，1:93-102)。骨質疏松是一種骨骼病癥，其中低的骨質和骨微結構的退化導致骨易碎性和骨折危險增加。為了治療骨質疏松，有兩種主要方法來抑制骨吸收或刺激骨形成。目前市售的用于治療骨質疏松的大部分藥物所起的作用都是通過抑制破骨細胞骨吸收來增加骨質。應該認識到。能夠提高骨形成的藥物在治療骨質疏松以及具有提高患者骨折愈合可能性方面具有高的價值。GSK3抑制劑的應用在原發(fā)性和繼發(fā)性骨質疏松中的應用，其中原發(fā)性骨質疏松包括絕經(jīng)后骨質疏松以及在男性和女性中的老年骨質疏松，并且繼發(fā)性骨質疏松包括可的松談導的骨質疏松，以及任何其他類型的誘導的繼發(fā)性骨質疏松。除此以外，GSK3抑制劑還可用于治療骨髓瘤。在不同的制劑方案中，GSK3抑制劑可以局部或全身給藥以治療這些病癥。炎4生疾病發(fā)現(xiàn)GSK3抑制劑提供了抗炎作用，已經(jīng)提出了使用GSK3抑制劑來治療干預炎性疾病的可能性(Martm等人，NatImmunol2005,6:777-784;rev.mJope等人，NeurochemRes2006,Aug30)。炎癥是多種病癥，包括阿爾茨海默病和情緒障礙的共同特征。發(fā)明詳述本發(fā)明的目的是提供化合物2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基甲基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-甲腈(化合物(I))的鹽，即2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基甲基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-甲腈檸檬酸鹽，所述鹽具有在GSK3的選擇性抑制作用、良好的生物利用度、良好的溶解度以及低的吸濕性，這使得其適于配制成藥物制劑。已經(jīng)驚奇地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明式(I)化合物的檸檬酸鹽表現(xiàn)出優(yōu)于如在WO03/082853中所述制備的2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基曱基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-甲腈鹽酸鹽的改善的化學穩(wěn)定性，這使得其特別適于配制成藥物制劑。在藥物制劑的配制中，對于可藥用化合物(活性藥物化合物)來說，重要的是呈可以方便地操作和加工的形式。不僅從獲得商業(yè)可用生產(chǎn)方法的角度來看這是重要的，而且從隨后包含該活性藥物化合物的藥物制劑的生產(chǎn)的角度來看也是重要的?；钚猿煞值幕瘜W穩(wěn)定性、固態(tài)穩(wěn)定性以及"儲存期限"也是非常重要的因素。藥物化合物以及含有該藥物化合物的制劑應當能夠有效地貯存適當時間，而不表現(xiàn)出活性成分的物化性質例如其化學組成、密度、吸濕性以及溶解度的顯著改變。術語"化學穩(wěn)定性"是指，化合物可以以分離的形式儲存，或者在制劑形式中儲存，其存在于制劑中與可藥用載體、稀釋劑或輔助劑(例如在口服劑型例如片劑、膠嚢等中)混合，在正常儲存條件下，發(fā)生很小或者沒有化學降解或分解。因此，在商業(yè)可用以及可藥用藥物制劑的生產(chǎn)中，在可能時，提供基本上結晶且穩(wěn)定形式的藥物化合物是重要的。本文所用術語"基本上結晶"是指至少約50%的結晶，并且最高達100%結晶狀態(tài)。本發(fā)明提供了2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基曱基)吡啶-2-基]lH-卩引咮-5-甲腈檸檬酸鹽，所述鹽是至少約50%結晶，至少約60%結晶，至少約70%結晶，至少約80%結晶，至少約90%結晶，至少約95%結晶，至少約98%結晶，或約100%結晶形式。藥物制劑根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了包含化合物(I),2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基曱基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-甲腈的檸檬酸鹽、用于預防和/或治療與糖原合酶激酶-3有關的病癥的藥物制劑。所述制劑可以呈適于口服給藥的形式，例如片劑，作為無菌溶液或懸浮液的胃腸外用注射劑，用于在體腔或骨腔內(nèi)局部給藥的形式，例如無菌注射溶液或懸浮液。通常，上述制劑可以通過常規(guī)方法，使用藥物載體或稀釋劑來制備。在治療哺乳動物，包括人時，當經(jīng)口給藥時，式(I)化合物的鹽的合適的日劑量為大約0.01至250mg/kg體重，在胃腸外給藥時，日劑量為約0.001至250mg/kg體重?；钚越M分的典型日劑量在寬的范圍內(nèi)改變，并且將取決于多種因素例如相關適應癥、給藥途徑、患者的年齡、體重和性別，可以由醫(yī)師確定。對于獸醫(yī)應用，不同成分的量、劑型以及藥物的劑量可以改變，并且取決于多種因素例如所治療動物的個體需求。式(I)化合物的可藥用鹽可以以其自身的形式使用，但是通常以藥物制劑的形式施用，在藥物制劑中，式(I)化合物鹽(活性組分)與可藥用稀釋劑或載體混合。根據(jù)給藥方式，藥物制劑可包含0.05-99%w(重量百分比)，例如0.10-50。/。w的活性組分，所有重量百分比都是基于總ia合物計的。稀釋劑或惰性載體包括水、聚(乙二醇)水溶液、碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石粉、糖(例如乳糖)、果膠、糊精、淀粉、黃蓍膠、微晶纖維素、曱基纖維素、羧甲基纖維素鈉或可可油。本發(fā)明制劑可以呈片劑或注射劑形式。片劑還可以包含崩解劑和/或可以凈皮包衣(例如用腸溶衣包衣或者用包衣劑例如羥丙基曱基纖維素包衣)。本發(fā)明還提供了制備本發(fā)明藥物制劑的方法，所述方法包括將如上文所定義的式(I)化合物的可藥用鹽與可藥用稀釋劑或惰性載體混合。本發(fā)明藥物制劑的實例是注射溶液，其中包含如上所定義的本發(fā)明化合物或可藥用鹽和無菌水，以及如果需要的話氬氧化鈉或鹽酸以將最終制劑的pH調(diào)節(jié)至約pH5，和任選表面活性劑以幫助溶解。合適的制劑的一個實例是液體溶液，其中含有溶解于純水中至100%的2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基曱基)吡啶-2-基]lH-吲咮-5-曱腈檸檬酸鹽5.0%mg/mL。醫(yī)藥應用已經(jīng)驚奇地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明中定義的新的2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基甲基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-曱腈檸檬酸鹽非常適于抑制糖原合酶激酶-3(GSK3)。因此，預期所述本發(fā)明化合物可用于預防和/或治療與糖原合酶激酶-3活性有關的病癥，即所述化合物可用于在需要這種預防和/或治療的哺乳動物，包括人中產(chǎn)生GSK3的抑制作用。GSK3在中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)以及其他組織中高度表達。因此，預期本發(fā)明化合物非常適于預防和/或治療中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中與糖原合酶激酶-3有關的病癥。特別是，預計本發(fā)明化合物適于預防和/或治療與認知功能障礙和前發(fā)狂(predemented)狀態(tài)有關的病癥，尤其是癡呆、阿爾茨海默病(AD)、精神分裂癥中的認知功能缺陷(CDS)、輕度認知功能損害(MCI)、與年齡有關的記憶損害(AAMI)、與年齡有關的認知功能下降(ARCD)和i人知功能損害No癡呆(CIND)、與神經(jīng)原纖維纏結病理有關的疾病、額顳癡呆(FTD)、額顳癡呆帕金森型(FTDP)、進行性核上性麻痹(PSP)、皮克病，尼曼-皮克病，皮層基底變性(CBD),創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)和拳擊家癡呆。本發(fā)明的一個實施方案涉及預防和/或治療阿爾茨海默病，尤其是用于延遲阿爾茨海默病的疾病進展。其他病癥選自唐氏綜合征、血管性癡呆、帕金森病(PD)、腦炎后帕金森神經(jīng)功能障礙、雷維小體癡呆、HIV癡呆、亨廷頓舞蹈病、肌萎縮性側索硬化(ALS)、運動神經(jīng)元疾病(MND)、克羅伊茨費爾特-雅各布疾病和朊病毒疾病。其他病癥選自注意渙散癥(ADD)、注意渙散多動癥(ADHD)和情感障礙，其中所述情感障礙是雙相性精神障礙，包括急性躁狂，雙相性抑郁癥，雙相性保持(bipolarmaintenance),重性抑郁障礙(MDD),包括抑郁癥，重性抑郁癥，情緒穩(wěn)定，精神分裂情感障礙，包括精神分裂癥和精神抑郁癥。其他病癥選自I型糖尿病、II型糖尿病、糖尿病性神經(jīng)病、脫發(fā)和炎寸生疾病。本發(fā)明的一個實施方案涉及預防和/或治療哺乳動物中的骨相關病癥。本發(fā)明的另一個方面涉及2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基甲基)吡啶-2-基]IH-巧I哚-5-甲腈檸檬酸鹽在預防和/或治療哺乳動物中骨質疏松中的應用。本發(fā)明的一個方面涉及2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基甲基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-甲腈檸檬酸鹽在促進和/或提高哺乳動物中骨形成中的應用。本發(fā)明的一個方面涉及2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基甲基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-甲腈檸檬酸鹽在提高哺乳動物中骨礦物質密度中的應用。本發(fā)明的另一個方面涉及2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基甲基)吡啶-2-基]lH-"引咮-5-甲腈檸檬酸鹽在哺乳動物中降低骨折速度和/或提高骨折愈合速度中的應用。本發(fā)明的另一個方面涉及2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基曱基)吡啶-2-基]lH-吲咮-5-甲腈檸檬酸鹽在提高哺乳動物中松質骨形成和/或新骨形成中的應用。治療或預防性治療具體疾病或具體病癥所需的劑量必須根據(jù)所治療宿主、給藥途徑以及正在治療的疾病或損傷的嚴重程度而改變。本發(fā)明還涉及2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基甲基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-甲腈檸檬酸鹽在制備用于預防和/或治療與糖原合酶激酶-3有關的病癥的藥物中的應用。在本申請說明書上下文中，除非另有說明，術語"治療"也包括"預防"。術語"治療的"和"治療地"也應當相應的解釋。本發(fā)明還提供了用于預防和/或治療與糖原合酶激酶-3有關的病癥的方法，所述方法包括給需要這種治療和/或預防的哺乳動物，包括人或動物施用治療有效量的2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基甲基)吡啶-2-基]lH-吲咮-5-甲腈檸檬酸鹽。成鹽方法式(I)化合物的鹽，2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基曱基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-曱腈檸檬酸鹽的形成可以通過將2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基曱基)吡啶-2-基]1H-吲哚-5-甲腈與檸檬酸在溶劑存在下混合而制得。檸檬酸的當量可以為1至3摩爾當量。該反應可以在溶劑中進行，合適的溶劑有醚例如1,4-二氧雜環(huán)己烷、乙醚，或醇例如曱醇、乙醇、丙醇，或酮例如丙酮、異丁基甲基酮，或乙酸酯例如乙酸乙酯、乙酸丁酯，或有^L酸例如乙酸，或其混合物，j壬選使用水作為添加劑。作為乙醇與水或乙酸的混合物的溶劑是合適的。使用的溶劑的總體積可以為1(v/w)至100(v/w)體積份/原料重量，優(yōu)選為10(v/w)至45(v/w)體積+分/原料重量。反應的溫度可以為-30至+150。C,優(yōu)選為-5。C至+100。C。純的式(I)化合物，2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基曱基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-甲腈檸檬酸鹽可以這樣獲得使用或不使用添加劑，在合適的溶劑中結晶，以獲得純度為約95%,優(yōu)選約98%的結晶固體。本發(fā)明的另一個目的是如上所述的成鹽方法。工作實施例下列實施例描述但不限制本發(fā)明。實施例12-羥基-3-「5-(嗎啉-4-基曱基)吡啶-2-基llH-吲哚-5-甲腈檸檬酸鹽在室溫將2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基甲基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-曱腈(5.14kg,15.4mol)懸浮在乙醇(54L)中。將該懸浮液加熱至70。C的內(nèi)溫，力口入檸檬酸(3.424kg,17.82mol)在水(103L)中的溶液，把內(nèi)溫保持在65。C以上。將該混合物加熱至回流。將所得溶液與活性炭(0.412kg)混合后，繼續(xù)回流3.5小時，之后把該反應混合物在83°C過濾，然后用20小時冷卻至室溫。過濾后，將沉淀用冷的乙醇/水混合物(6.9L/13.7L)洗滌兩次。在50。C真空干燥后，以82.2%產(chǎn)率獲得了6.648kg2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基曱基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-曱腈檸檬酸鹽，其純度為至少98%。鈀含量小于lppm,并且鋅含量低于10ppm。丄HN匿(d6-DMSO,400MHz)514.7(brs,1H),11.55(s,1H),10.98(s,1H),8.31(s,1H),8.08(brd,J=1.84Hz,1H),8.02(s,1H),7.90(brd,J=8,92Hz,1H)，7.31(d,J=8.0Hz,1H),7.02(d,J=8.0Hz),4.28(s,2H),3.97(m,2H),3.94(m,2H)，3.35(m,9H),3.32(m,2H)ppm;13CNMR(d6-DMSO,400MHz)S168.9,148.5,142.7,139.8，137.5,126.4,124.9,124.8，120,9，119.4,118.4，113.3,109,0，101.6,85.7,63.1，55,5，50.3,40.1，39.9，39.7,39.2,39.0,38.8ppm;MS(ES)m/z[M++1]335.通過X-射線粉末衍射(XRPD)來分析晶體。晶形A的衍射圖表現(xiàn)出以下以埃纟會出的d-值和相對強度12.7(vs),7.6(w),6.8(vs)，6.3(s),5,9(w)，5.7(m)，5.1(m)，4.87(w),4.57(m)，4.38(s),4.23(s)，4.16(w),4.07(m),3.80(w),3.69(m),3.65(w)，3.41(m),3.37(w),3.32(m),3.17(m),3.12(m),2.88(w),2.86(m),2.78(w),2.65(w),2.50(w),2.45(w).顯著的以埃給出的d-值和相對強度是12.7(vs),6.8(vs),6.3(s),4.38(s),4.23(s)，3.41(m).如下所述，通過X-射線粉末衍射(XRPD)來分析2-羥基-3-[5-(嗎啉_4-基曱基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-甲腈檸檬酸鹽的結晶度已經(jīng)從檸檬酸鹽結晶的衍射圖中提取了用由Bragg公式計算的d-值和強度表征的峰。僅把是最有特征的、顯著的、獨特的和/或可再現(xiàn)的主要峰列在表^f各中，但是另外的峰也可以使用常規(guī)方法從衍射圖中提取出來。在大多數(shù)情況下，這些可再現(xiàn)并且在誤差限度內(nèi)的主要峰的存在足以確定所述結晶鹽的存在。相對強度(rel.int.)較不可靠，使用下列定義來替代數(shù)值vs(非常強)〉60%相對強度s(強)23-60%相對強度m(中等)9-23%相對強度w(弱)4-9%才目，于強度vw(非常弱)<4%相對強度X-射線衍射分析是使用PANalyticalX，PertProMPD衍射儀，從l至40。2e進行64分鐘，使用或不使用內(nèi)標參照物。26角是針對標準值校正的，隨后計算成d-值(間距值)。d-值可以在最后給出的一位小數(shù)位上以±2改變。樣本制備是用標準方法進行的，例如在Giacovazzo,C.等人(1995),FundamentalsofCrystallography,OxfordUniversityPress;Jenkins,R.andSnyder,R.L.(1996)，IntroductiontoX-RayPowderDiffractometry,JohnWiley&Sons,NewYork;Bunn,C.W.(1948),ChemicalCrystallography,ClarendonPress,LondonorKlug,H.P.&Alexander,L.E.(1974),X-rayDiffractionProcedures,JohnWileyandSons,NewYork中描述的方法。藥理學在閃爍親近GSK3(3測定中測定ATP竟爭GSK3p閃爍親近測定在透明底微量滴定板(Wallac,Finland)中，使用10個不同濃度的抑制劑以一式兩份進行竟爭實^r。將生物素化的肽底物，生物素-Ala國Ala-Glu國Glu-Leu-Asp曙Ser畫Arg-Ala-Gly國Ser(P03H2)-Pro-Gin-Leu(AstraZeneca,Lund)在測定緩沖液中以1|uM的最終濃度加入，所述緩沖液含有1mU重組人GSK3(3(DundeeUniversity,UK),12mM嗎啉丙磺酸(MOPS),pH7.0,0.3mMEDTA，0.01%(3國巰基乙醇，0.004%Brij35(—種天然洗滌劑)，0.5%甘油和0.5|iigBSA/25pl。通過加入0.04|uCi[y-33P〗ATP(Amersham,UK)和終濃度為1|aM未標記的ATP來開始反應，測定體積為25)ul。在室溫培養(yǎng)20分鐘后，通過加入25iul停止溶液來終止每一反應，所述停止溶液含有5mMEDTA、50|uMATP、0.1%TritonX-100和0.25mg鏈霉抗生物素蛋白包#皮的閃爍親近測定(SPA)珠(Amersham,UK)。6小時后，在液體閃爍計數(shù)器(1450MicroBetaTnlux,Wallac)中測定放射性。使用GraphPadPrism,USA通過非線性回歸來分析抑制曲線。對于GSK3P,用于計算化合物的抑制常數(shù)(Kt)的ATPKm值為20|LiM。使用下列縮寫MOPS嗎啉丙石黃酸EDTA乙二胺四乙酸BSA牛血清白蛋白ATP三磷酸腺苷SPA閃爍親近測定GSK3糖原合酶激酶3結果本發(fā)明2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基甲基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-甲腈檸檬酸鹽的JQ值為0.001nM至300nM?；瘜W穩(wěn)定性吸濕性動態(tài)蒸汽吸收分析(DVS)實驗采用DynamicVapourSorptionAppararatus(DVS,SurfaceMeasurementSystems,LondonUK)來進4亍。該裝置由》文置于溫度4空制室內(nèi)的Cahn微量天平構成。所有實驗都是在25'C進行。使用DVS來表征在不同相對濕度(RH)下的水分攝取(w/w%)。把樣本(5-10mg)直接稱重到DSV樣本杯中，并且暴露于不同的相對濕度下。結果樣本_相對濕度(RH)80%13.08.0從上面的結果可以清楚地看出，2-鞋基-3-[5-(嗎啉-4-基曱基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-曱腈的檸檬酸鹽表現(xiàn)出比其鹽酸鹽低的吸濕性，因此更適于制備藥物制劑。40%60%HC1鹽8.711,5檸檬酸鹽7.17.6〉容液穩(wěn)定性制備分別含有抗壞血酸(0.5%(w/v)),并且用HC1(2M)和NaOH(2M)調(diào)節(jié)至pH2和4的2-羥基-3-[5-(嗎啉-4國基曱基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-曱腈的檸檬酸鹽和鹽酸鹽的等滲溶液(0.1mg/ml),并且在4-8TM諸存4周。分析方法HPLC:HP1訓柱SymmetryC18,53.9x150mm4亭留時間5min波長361nm注射體積lO)ul流速1ml/min流動相0.05M磷酸鹽緩沖液pH3:乙腈:磷酸鹽緩沖液(80:20)結果分析后，結果表明，2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基甲基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-曱腈的鹽酸鹽降解了大約10%,而2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基曱基)吡啶-2-基]lH-吲咮-5-甲腈的檸檬酸鹽是穩(wěn)定的，并且沒有表現(xiàn)出任何降解產(chǎn)物。大批物質的光穩(wěn)定性在SuntestCPS+室中測定2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基甲基)吡啶-2-基]1H-p引哚-5-甲腈的游離堿以及相應的鹽酸鹽和檸檬酸鹽的光穩(wěn)定性。暴光是250Wh/m2和1.2百萬勒小時，暴光29小時。結果<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>從結果中清楚地看出，2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基甲基)吡啶-2-基]lH-巧|咮-5-曱腈的檸檬酸鹽表現(xiàn)出比其鹽酸鹽和游離堿高很多的光穩(wěn)定性，因此更適于制備藥物制劑。結論通過比較2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基甲基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-曱腈的游離堿、鹽酸鹽和種檬酸鹽可以清楚地看出，其檸檬酸鹽比鹽酸鹽更穩(wěn)定地抗分解，并因此更適于制備藥物制劑。權利要求1.一種鹽，所述鹽是2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基甲基)吡啶-2-基]1H-吲哚-5-甲腈檸檬酸鹽。2.基本上結晶形式的權利要求1的鹽。3.權利要求1-2任一項的鹽，其中所述鹽是晶形A，其特征在于X-射線粉末衍射d-值和相對強度12.7(vs),6.8(vs),6.3(s),4.38(s)，4.23(s)和3.41(m)A。4.制備權利要求1-3的2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基曱基)吡啶-2-基]lH-吲哚-5-甲腈檸檬酸鹽的方法，所述方法包括將2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基曱基)吡啶-2-基]lH-吲咮-5-甲腈與檸檬酸在溶劑中反應。5.權利要求4的方法，其中所述溶劑選自醚、醇、S同、乙酸酯或有機酸或其混合物，任選使用水作為添加劑。6.權利要求5的方法，其中所述溶劑是乙醇與水或乙酸的混合物。7.權利要求4-6任一項的方法，其中所述方法是在-5。C至+100。C溫度下進行的。8.藥物制劑，其中包含治療有效量的權利要求l-3任一項的鹽作為活性組分，并且任選與稀釋劑、賦形劑或惰性載體組合。9.用于治療的權利要求l-3任一項的鹽。10.權利要求l-3任一項的鹽在制備用于預防和/或治療與糖原合酶激酶-3有關的病癥的藥物中的應用。11.權利要求l-3任一項的鹽在制備用于預防和/或治療認知功能障礙的藥物中的應用。12.權利要求11的應用，其中所述認知功能障礙是癡呆、精神分裂癥中的認知功能缺陷(CDS)、輕度認知功能損害(MCI)、與年齡有關的記憶損害(AAMI)、與年齡有關的認知功能下降(ARCD)或認知功能損害NoDementia(CIND)。13.權利要求12的應用，其中所述疾病是精神分裂癥中的認知功能缺陷。14.權利要求12的應用，其中所述癡呆與神經(jīng)原纖維纏結病理有關。15.權利要求12的應用，其中所述癡呆是額顳癡呆(FTD)、額顳癡呆帕金森型(FTDP)、進行性核上性麻痹(PSP)、皮克病、尼曼-皮克病、皮層基底變性、創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)或拳擊家癡呆。16.權利要求12的應用，其中所述癡呆是阿爾茨海默病(AD)、唐氏綜合征、血管性癡呆、帕金森病(PD)、腦炎后帕金森神經(jīng)功能障礙、雷維小體癡呆、HIV癡呆、亨廷頓舞蹈病、肌萎縮性側索硬化(ALS)、運動神經(jīng)元疾病(MND)、克羅伊茨費爾特-雅各布疾病或朊病毒疾病。17.權利要求16的應用，其中所述疾病是阿爾茨海默病。18.權利要求17的應用，其中所述應用是延遲阿爾茨海默病的疾病進展。19.權利要求l-3任一項的鹽在制備用于預防和/或治療注意渙散癥(ADD)、注意渙散多動癥(ADHD)或情感障礙的藥物中的應用。20.權利要求19的應用，其中所述情感障礙是雙相性精神障礙包括急性躁狂，雙相性抑郁癥，雙相性保持，重性抑郁障礙(MDD)，包括抑郁癥，重性抑郁癥，情緒穩(wěn)定，精神分裂情感障礙包括精神分裂癥，或精神抑郁癥。21.權利要求1-3任一項的化合物在制備用于預防和/或治療I型糖尿病、II型糖尿病、糖尿病性神經(jīng)病、脫發(fā)或炎性疾病的藥物中的應用。22.權利要求l-3任一項的化合物在制備用于預防和/或治療哺乳動物骨相關疾病或病癥的藥物中的應用。23.權利要求l-3任一項的化合物在制備用于預防和/或治療哺乳動物骨質疏松的藥物中的應用。24.權利要求1-3任一項的化合物在制備用于提高哺乳動物骨形成的藥物中的應用，25.權利要求1-3任一項的化合物在制備用于提高哺乳動物松質骨形成和/或新骨形成的藥物中的應用。26.權利要求1-3任一項的化合物在制備用于提高哺乳動物骨礦物質密度的藥物中的應用。27.權利要求1-3任一項的化合物在制備用于降低哺乳動物骨折發(fā)生率的藥物中的應用。28.權利要求1-3任一項的化合物在制備用于提高哺乳動物骨折愈合的藥物中的應用。29.權利要求22-28任一項的應用，其中所述哺乳動物是人。30.權利要求22-28任一項的應用，其中所述哺乳動物是動物。31.預防和/或治療與糖原合酶激酶-3有關的病癥的方法，所述方法包括給需要這種預防和/或治療的哺乳動物，包括人施用治療有效量的權利要求l-3任一項的鹽。32.預防和/或治療認知功能障礙的方法，所述方法包括給需要這種預防和/或治療的哺乳動物，包括人施用治療有效量的權利要求1-3任一項的鹽。33.權利要求32的方法，其中所述認知功能障礙是癡呆、精神分裂癥中的認知功能缺陷(CDS)、輕度認知功能損害(MCI)、與年齡有關的記憶損害(AAMI)、與年齡有關的認知功能下降(ARCD)或認知功能損害No癡呆(CIND)。34.權利要求33的方法，其中所述疾病是精神分裂癥中的認知功能缺陷。35.權利要求33的方法，其中所述癡呆與神經(jīng)原纖維纏結病理有關。36.權利要求33的方法，其中所述癡呆是額顳癡呆(FTD)、額顳癡呆帕金森型(FTDP)、進行性核上性麻痹(PSP)、皮克病、尼曼-皮克病、皮層基底變性、創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)或拳擊家癡呆。37.權利要求33的方法，其中所述癡呆是阿爾茨海默病(AD)、唐氏綜合征、血管性癡呆、帕金森病(PD)、腦炎后帕金森神經(jīng)功能障礙、雷維小體癡呆、HIV癡呆、亨廷頓舞蹈病、肌萎縮性側索硬化(ALS)、運動神經(jīng)元疾病(MND)、克羅〗尹茨費爾特-雅各布疾病或朊病毒疾病。38.權利要求37的方法，其中所述疾病是阿爾茨海默病。39.權利要求38的方法，其中所述治療是延遲阿爾茨海默病的疾病進展。40.預防和/或治療注意渙散(ADD)、注意渙散多動癥(ADHD)或情感障礙的方法，所述方法包括給需要這種預防和/或治療的哺乳動物，包括人施用治療有效量的權利要求l-3任一項的鹽。41.權利要求40的方法，其中所述情感障礙是雙相性精神障礙，包括急性躁狂，雙相性抑郁癥，雙相性保持，重性抑郁障礙(MDD),包括抑郁癥，重性抑郁癥，情緒穩(wěn)定，精神分裂情感障礙，包括精神分裂癥或精神抑郁癥。42.預防和/或治療I型糖尿病、II型糖尿病、糖尿病性神經(jīng)病、脫發(fā)或炎性疾病的方法，所述方法包括給需要這種預防和/或治療的哺乳動物，包括人施用治療有效量的權利要求l-3任一項的鹽。43.預防和/或治療骨相關疾病或病癥的方法，所述方法包括給需要這種預防和/或治療的哺乳動物施用治療有效量的權利要求l-3任一項的鹽。44.預防和/或治療骨質疏松的方法，所述方法包括給需要這種預防和/或治療的哺乳動物施用治療有效量的權利要求1-3任一項的化合物。45.提高骨形成的方法，所述方法包括給需要這種預防和/或治療的哺乳動物施用治療有效量的權利要求1-3任一項的化合物。46.提高松質骨形成和/或新骨形成的方法，所述方法包括給需要這種預防和/或治療的哺乳動物施用治療有效量的4又利要求l-3任一項的4匕合物。47.提高骨礦物質密度的方法，所述方法包括給需要這種預防和/或治療的哺乳動物施用治療有效量的權利要求1-3任一項的化合物。48.降低骨折發(fā)生率的方法，所述方法包括給需要這種預防和/或治療的哺乳動物施用治療有效量的權利要求1-3^f壬一項的化合物。49.提高骨折愈合的方法，所述方法包括給需要這種預防和/或治療的哺乳動物施用治療有效量的權利要求1-3任一項的化合物。50.權利要求31-39任一項的方法，其中所述哺乳動物是人。51.權利要求31-39任一項的方法，其中所述哺乳動物是動物。全文摘要本發(fā)明涉及新的可藥用鹽，2-羥基-3-[5-(嗎啉-4-基甲基)吡啶-2-基]1H-吲哚-5-甲腈檸檬酸鹽，其制備方法，含有所述鹽的藥物制劑，以及所述活性鹽在治療，特別是治療GSK3相關病癥和疾病中的應用。文檔編號C07D401/00GK101379053SQ200780004153公開日2009年3月4日申請日期2007年1月31日優(yōu)先權日2006年2月2日發(fā)明者A·-L·伯格,E·斯塔爾,R·巴特,T·塞布哈圖申請人:阿斯利康(瑞典)有限公司