專利名稱：用于治療變性和炎性疾病的三唑并吡嗪化合物的制作方法
專利說明用于治療變性和炎性疾病的三唑并吡嗪化合物 發(fā)明領(lǐng)域 本發(fā)明涉及一類能夠結(jié)合絲氨酸/蘇氨酸激酶活性位點(diǎn)的三唑并吡嗪化合物，該激酶的表達(dá)涉及引起胞外基質(zhì)(ECM)降解、關(guān)節(jié)變性和涉及此類降解和/或炎癥的疾病的途徑。
涉及胞外基質(zhì)降解的疾病包括但不限于銀屑病關(guān)節(jié)炎、幼年關(guān)節(jié)炎、早期關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、骨質(zhì)疏松、肌肉骨骼疾病(例如肌腱炎和牙周疾病)、癌癥轉(zhuǎn)移、氣道疾病(COPD、哮喘)、腎和肝纖維化、心血管疾病(例如動(dòng)脈粥樣硬化和心力衰竭)和神經(jīng)疾病(例如神經(jīng)炎和多發(fā)性硬化)。涉及原發(fā)性關(guān)節(jié)變性的疾病包括但不限于銀屑病關(guān)節(jié)炎、幼年關(guān)節(jié)炎、早期關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎和強(qiáng)直性脊柱炎。
類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是慢性關(guān)節(jié)變性疾病，其特征在于關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)的炎癥和破壞。當(dāng)疾病未被檢出時(shí)，由于關(guān)節(jié)功能的喪失和甚至過早死亡而引起實(shí)質(zhì)上的殘疾和疼痛。因此，RA治療的目標(biāo)不是減慢疾病，而是獲得緩解，以便阻止關(guān)節(jié)破壞。除了疾病結(jié)果的嚴(yán)重性，RA的高患病率(全球約0.8％的成人受影響)意味著高的社會(huì)經(jīng)濟(jì)影響。(對(duì)于RA的綜述，參考了Smolen和Steiner(2003)；Lee和Weinblatt(2001)；Choy和Panayi(2001)；O’Dell(2004)和Firestein(2003))。
盡管廣泛接受的是RA是自身免疫疾病，但是關(guān)于引起疾病“起始階段”的準(zhǔn)確機(jī)制沒有一致意見。已知的是在易感宿主中起始觸發(fā)劑介導(dǎo)事件的級(jí)聯(lián)，這引起多種細(xì)胞類型(B細(xì)胞、T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、樹突細(xì)胞和其它細(xì)胞)活化。隨之而來的是在關(guān)節(jié)和關(guān)節(jié)周圍的組織中觀察到多種細(xì)胞因子的產(chǎn)量增加(例如TNF-α、IL-6、IL-1、IL-15、IL-18和其它細(xì)胞因子)。當(dāng)疾病發(fā)展時(shí)，細(xì)胞活化和細(xì)胞因子生成級(jí)聯(lián)變成自身延續(xù)。在此早期階段，關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)的破壞已經(jīng)非常明顯。30％的患者在診斷時(shí)具有骨侵蝕的X線照片證據(jù)并且兩年后該比例上升至60％。
RA患者關(guān)節(jié)的組織學(xué)分析清楚地證明了涉及RA相關(guān)降解過程的機(jī)制。該分析顯示對(duì)RA相關(guān)關(guān)節(jié)降解有響應(yīng)的主要效應(yīng)器是關(guān)節(jié)翳，其中滑液成纖維細(xì)胞(通過產(chǎn)生多種蛋白水解酶)是軟骨和骨侵蝕的主要驅(qū)動(dòng)。關(guān)節(jié)典型地包含兩塊鄰近的骨，其連接在由滑液和關(guān)節(jié)囊包圍的軟骨層上。在晚期RA患者中，關(guān)節(jié)滑膜大小增加以形成關(guān)節(jié)翳，這是由于滑液成纖維細(xì)胞的增殖和單核細(xì)胞(例如T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞)的浸潤(rùn)引起的。關(guān)節(jié)翳介導(dǎo)鄰近軟骨的降解，引起關(guān)節(jié)腔的狹窄，并且具有侵入鄰近的骨和軟骨的潛力。由于骨和軟骨組織分別主要由膠原I型或II型組成，關(guān)節(jié)翳的破壞和侵入特征是由溶膠原蛋白酶(主要是基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs))的分泌介導(dǎo)的。位于軟骨下面和鄰近的骨的侵蝕也是RA過程的一部分，并且主要由骨和關(guān)節(jié)翳界面的破骨細(xì)胞的存在引起。破骨細(xì)胞是多核細(xì)胞，其粘附骨組織，形成閉合的區(qū)室，在其中破骨細(xì)胞分泌降解骨組織的蛋白酶(組織蛋白酶K，MMP9)。關(guān)節(jié)中的破骨細(xì)胞群由破骨細(xì)胞形成而異常增加，而破骨細(xì)胞是由SF和T細(xì)胞活化的NFκB配體的受體活化劑(RANKL)的分泌誘導(dǎo)的前體細(xì)胞形成的。
多種膠原類型在定義胞外基質(zhì)(ECM)的穩(wěn)定性中具有重要作用。例如膠原I型和膠原II型分別是骨和軟骨的主要成分。膠原蛋白通常組成多基因結(jié)構(gòu)，其被稱為膠原原纖維。天然的膠原原纖維對(duì)蛋白酶剪切具有很強(qiáng)的抵抗力。已報(bào)道僅少數(shù)類型的ECM降解蛋白具有降解天然膠原的能力MMP和組織蛋白酶。在組織蛋白酶中，組織蛋白酶K(其主要在破骨細(xì)胞中具有活性)最具特征。在MMP中已知MMP1、MMP2、MMP8、MMP13和MMP14具有溶膠原特性?；撼衫w維細(xì)胞(SF)表達(dá)的MMP1增加和關(guān)節(jié)炎疾病的進(jìn)程之間的相關(guān)性已經(jīng)明確并且是關(guān)節(jié)侵蝕過程的前兆(Cunnane等人，2001)。因此，在RA的上下文中，MMP1代表高度相關(guān)的膠原降解蛋白。在體外，用RA病理學(xué)相關(guān)的細(xì)胞因子(例如TNF-α和IL1β)治療培養(yǎng)的SF將增加這些細(xì)胞表達(dá)的MMP1(Andreakos等人，2003)。因此，監(jiān)控SF表達(dá)的MMP1在RA領(lǐng)域是相關(guān)讀數(shù)，因?yàn)槠渲甘維F對(duì)侵蝕表型的活化，所述的侵蝕表型在體內(nèi)對(duì)軟骨降解具有響應(yīng)。對(duì)于RA的治療，抑制SF表達(dá)的MMP1代表有價(jià)值的治療方法。
ECM-降解蛋白質(zhì)的活性還可以是多種不同于RA的疾病(例如其它涉及關(guān)節(jié)降解的疾病)的原因或與之相關(guān)。這些疾病包括但不限于銀屑病關(guān)節(jié)炎、幼年關(guān)節(jié)炎、早期關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎和強(qiáng)直性脊柱炎?？梢杂帽景l(fā)明確定的化合物治療并且應(yīng)用涉及本文描述的MMP表達(dá)的靶標(biāo)的其它疾病是骨質(zhì)疏松、肌肉骨骼疾病(例如肌腱炎和牙周疾病(Gapski等人，2004))、癌癥轉(zhuǎn)移(Coussens等人，2002)、氣道疾病(COPD、哮喘)(Suzuki等人，2004)、肺、腎纖維化(Schanstra等人，2002)、與慢性丙型肝炎相關(guān)的肝纖維化(Reiff等人，2005)、心血管疾病(例如動(dòng)脈粥樣硬化和心力衰竭(Creemers等人，2001))和神經(jīng)疾病(例如神經(jīng)炎和多發(fā)性硬化(Rosenberg等人，2002))?；加写祟惣膊〉幕颊呖梢詮姆€(wěn)定ECM(通過保護(hù)其免受降解)中受益。
471個(gè)氨基酸的絲氨酸/蘇氨酸激酶(鑒定為促分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶5(MAPKAPK5或PRAK))在廣泛的一系列組織中表達(dá)。該蛋白包含N-末端的催化域以及C-末端的核定位信號(hào)(NLS)和核輸出信號(hào)(NES)。內(nèi)源性MAPKAPK5主要存在于細(xì)胞質(zhì)中，但是細(xì)胞的應(yīng)激或細(xì)胞因子活化介導(dǎo)其易位至核內(nèi)(New等人，2003)。該事件取決于MAPKAPK5的磷酸化。Thr182是MAPKAPK5的調(diào)節(jié)磷酸化位點(diǎn)。盡管p38α激酶能夠在過表達(dá)環(huán)境下磷酸化MAPKAPK5，但是關(guān)于內(nèi)源性MAPKAPK5的試驗(yàn)不支持這種假設(shè)(Shi等人，2003)。已經(jīng)生產(chǎn)出MAPKAPK5敲除小鼠，其是可生存的并且是可繁殖的。這些小鼠的表型完全不同于MAPKAPK2(其是由p38α調(diào)節(jié)的MAPKAPK5相關(guān)激酶)缺陷小鼠的表型(Shi等人，2003)。這表明每種蛋白質(zhì)的功能是不同的并且沒有一種激酶能補(bǔ)償其它激酶的活性。一并而言，MAPKAPK5和MAPKAPK2代表不同的沒有多余作用的靶標(biāo)。最近，MAPK6(也稱為ERK3)被鑒定為MAPKAPK5的生理學(xué)相關(guān)底物，其定義了新的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑(Seternes等人，2004)。

背景技術(shù)：
NSAIDS(非甾體抗炎藥)用于減輕與RA有關(guān)的疼痛并且改善患者的生活質(zhì)量。但是這些藥物將對(duì)RA相關(guān)的關(guān)節(jié)破壞沒有作用。
發(fā)現(xiàn)糖皮質(zhì)激素降低RA的進(jìn)程(如X線照片檢測(cè)的)并且以低劑量應(yīng)用于治療部分RA患者(30至60％)。但是嚴(yán)重的副作用與長(zhǎng)期應(yīng)用糖皮質(zhì)激素有關(guān)(皮膚變薄、骨質(zhì)疏松、白內(nèi)障、高血壓、高脂血癥)。
合成的DMARD(減輕疾病的抗風(fēng)濕藥物)(例如甲氨蝶呤、來氟米特、柳氮磺吡啶)主要處理RA的免疫炎性組分。作為主要缺點(diǎn)，這些藥物僅具有有限的功效(關(guān)節(jié)破壞僅被DMARD減緩而沒有阻止，因此疾病進(jìn)程長(zhǎng)期持續(xù))。功效的缺乏由這樣一個(gè)事實(shí)表明的平均僅30％的患者用甲氨蝶呤治療24個(gè)月后獲得ACR40分。這意味著根據(jù)美國風(fēng)濕學(xué)院(AmericanCollege of Rheumatology)，僅30％的患者獲得50％的癥狀改善(O’Dell等人，1996)。另外，DMARD作用的準(zhǔn)確機(jī)制通常是不清楚的。
生物學(xué)DMARD(英夫利昔單抗、依那西普、阿達(dá)木單抗、利妥昔單抗、CTLA4-Ig)是滅活細(xì)胞因子(例如TNF-α)或細(xì)胞(例如T細(xì)胞或B細(xì)胞)(其在RA病理生理學(xué)中具有重要作用)的治療性蛋白質(zhì)(Kremer等人，2003；Edwards等人，2004)。盡管TNF-α阻斷劑(英夫利昔單抗、依那西普、阿達(dá)木單抗)和甲氨蝶呤組合治療是目前可應(yīng)用的最有效的RA治療，引人注目的是12個(gè)月治療后該治療僅在50-60％患者的疾病癥狀中獲得50％的改善(ACR40)(St Clair等人，2004)。對(duì)于抗TNF-α藥物存在一些有害的事件警告，這清楚地顯示出與此類藥物相關(guān)的副作用。對(duì)于TNF-α阻斷劑已經(jīng)描述了感染風(fēng)險(xiǎn)的增加(結(jié)核病)、血液學(xué)事件和脫髓鞘障礙(還參見Gomez-Reino等人，2003)。除了嚴(yán)重的副作用，TNF-α阻斷劑還具有生物學(xué)類治療的一般缺點(diǎn)，它們是不愉快的施用途徑(伴隨輸液部位反應(yīng)的頻繁注射)和高的生產(chǎn)耗費(fèi)。處于最近開發(fā)期的新藥靶向T細(xì)胞共刺激分子和B細(xì)胞。這些藥物的功效預(yù)期與TNF-α阻斷劑類似。多種靶向治療的事實(shí)具有相似但有限的功效，這表明對(duì)于RA存在多個(gè)致病因素。在對(duì)與RA相關(guān)的致病事件的理解方面的不足也是有指出的。
由于有限的功效，目前對(duì)于RA的治療是不能令人滿意的(對(duì)于30％的患者沒有足夠的治療)。這就需要另外的策略來獲得緩解。緩解是需要的，因?yàn)闅埩舻募膊【哂羞M(jìn)行性關(guān)節(jié)損傷的風(fēng)險(xiǎn)，并且因此具有進(jìn)行性殘疾的風(fēng)險(xiǎn)。抑制RA疾病的免疫炎性組分(其代表目前RA治療中所用的藥物的主要靶標(biāo))不會(huì)引起關(guān)節(jié)降解的阻斷(疾病的主要標(biāo)志)。
US 2005/0009832描述了作為蛋白激酶(包括MAPKAPK5)調(diào)節(jié)劑的取代的咪唑并[1，2-a]吡嗪-8-基-胺。WO02/056888描述了作為能夠調(diào)節(jié)某些細(xì)胞因子表達(dá)的TNF調(diào)節(jié)劑的MAPKAPK5抑制劑。這些在先技術(shù)文獻(xiàn)沒有公開在下文描述的一類化合物的范圍內(nèi)的任何化合物。
發(fā)明概述 本發(fā)明基于以下發(fā)現(xiàn)引起MMP1的表達(dá)的途徑中的MAPKAPK5功能以及MAPKAPK5活性抑制劑(例如本發(fā)明化合物)用于治療涉及MMP活性異常高表達(dá)的疾病。
本發(fā)明化合物通?？梢悦枋鰹?位被芳基和雜芳基取代并且8位被芳基氨基或雜芳基氨基取代的[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基-胺。
更特別的是，本發(fā)明涉及在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中具有基質(zhì)金屬蛋白酶抑制特性的式(I)化合物或其可藥用鹽、水合物、溶劑化物或前藥
其中 A和B獨(dú)立地是CR2R”、NR”、氧或硫； AA是CR2或N； D是C＝O、CR2R”或NR”； 當(dāng)k是0時(shí)，E是NH或CR”R6，并且當(dāng)k是1時(shí)，E是NH或CR”R6a； F是硫、氧或NH； T是氧或NR； U、V、W和X獨(dú)立地是CR”R7或NR”； Y是CR”或N； Z是氫、氨基、羥基、低級(jí)烷氧基、氨基甲?；Ⅳ然?、SO2Rz、SO2NRRz、-NR(CO)(CH2)d-Rz、-NRRz、-(CO)-ORz、-(CO)-NR(CH2)d-Rz或
R獨(dú)立地是氫或低級(jí)烷基； R”是H或與相鄰的原子形成雙鍵； R1是H；R2；或低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基和低級(jí)烷基-低級(jí)環(huán)烷基，任選被一個(gè)或多個(gè)R2取代； R3是H或與鄰近的R”形成雙鍵； R2是H、F、Cl、CN、COOR4、OR4、C(O)N(R4R5)、S(O)2N(R4R5)、低級(jí)烷基、O-低級(jí)烷基、NH-低級(jí)烷基、S-低級(jí)烷基、COO-低級(jí)烷基、OC(O)-低級(jí)烷基、C(O)N(R4)-低級(jí)烷基、S(O)2N(R4)-低級(jí)烷基、S(O)N(R4)-低級(jí)烷基、S(O)2-低級(jí)烷基、S(O)-低級(jí)烷基、N(R4)S(O)2-低級(jí)烷基和N(R4)S(O)-低級(jí)烷基，其中每個(gè)低級(jí)烷基任選被一個(gè)或多個(gè)F和Cl取代。
R4和R5獨(dú)立地是H；F、Cl；或低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基或低級(jí)烷基-低級(jí)環(huán)烷基，任選被一個(gè)或多個(gè)F和Cl取代； R6是氫、氨基、羥基、氨基甲?；?、羧基、SO2R、NRR’、-(CO)-OR或-(CO)-NRR’； R6a是R6、Cl、F、低級(jí)烷氧基、氰基、三氟甲氧基；或與鄰近的一起是-(CHR”)n-NR-(CHR”)p-，并且形成與其鍵合的環(huán)稠合的5或6元雜環(huán)； R7獨(dú)立地是氫、鹵素、低級(jí)烷基或低級(jí)烷氧基； Rz是氫、低級(jí)烷基、低級(jí)烷?；?、苯基、1-低級(jí)烷基吡咯烷-3-基、吡唑-4-基、吡唑-2-基或低級(jí)烷基、低級(jí)烷酰基、苯基、1-低級(jí)烷基吡咯烷-3-基、吡唑-4-基、吡唑-2-基或吡啶-3-基，被一個(gè)或多個(gè)下列基團(tuán)取代羥基、氨基、一或二低級(jí)烷基氨基、乙酰氨基、低級(jí)烷?；?、低級(jí)烷基、4-羥基-苯基、3-氨基甲基苯基、低級(jí)烷基磺?；?、4-二低級(jí)烷基氨基苯基、吡啶-3-基、1H-吲哚-3-基、嗎啉-4-基； R和Rz一起可以是-(CHR)q-T-(CHR)r-并且與它們鍵合的氮形成5或6元雜環(huán)； Rz和R7一起可以是-(CHR”)n-NR-(CHR”)p-，并且形成與其鍵合的環(huán)稠合的5或6元雜環(huán)； b和d獨(dú)立地是0或1；條件是b或d中至少一個(gè)是1； k是0或1； m是0或1； n和p獨(dú)立地是0、1或2； q和r是1或2； x是0或1； 條件是R7或Rz中至少一個(gè)不是氫； 本發(fā)明的另一方面是式III化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或前藥以及其立體異構(gòu)體、同位素變體和互變異構(gòu)體
其中 R1是H或者取代的或未取代的烷基；并且每個(gè)R8和R9獨(dú)立地選自取代的或未取代的環(huán)烷基、取代的或未取代的雜環(huán)烷基、取代的或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8選自取代的或未取代的環(huán)戊基、環(huán)己基、取代的或未取代的苯基、取代的或未取代的吡啶基、取代或未取代的嘧啶和取代的或未取代的吡嗪、取代的或未取代的吡咯、取代的或未取代的吡唑以及取代的或未取代的咪唑。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R1是H、Me、Et、i-Pr或CF3。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R1是H。
本發(fā)明的另一方面涉及式IVa、IVb、IVc或IVd化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或前藥以及其立體異構(gòu)體、同位素變體和互變異構(gòu)體
并且其中L是鍵、-CO-、-O(CH2)m1-、-CON(H)(CH2)m1-或-NHCO-；下標(biāo)m1選自1-4；環(huán)P是取代的或未取代的雜環(huán)烷基；下標(biāo)n選自1-4；每個(gè)R8a獨(dú)立地選自氫、取代的或未取代的烷基、烷氧基、氰基、氨基甲?；HO和鹵素；并且R9獨(dú)立地選自取代的或未取代的芳基和雜芳基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III-IVd化合物，R9是取代的或未取代的芳基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R9是取代的或未取代的苯基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III-IVd化合物，R9是取代的或未取代的雜芳基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R9是取代的或未取代的吡啶基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III-IVd化合物，R9選自取代的或未取代的苯基、吲哚基、異吲哚基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、噁唑基和噻唑基。
在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了藥物組合物，該藥物組合物包含本發(fā)明的三唑并吡嗪化合物和藥用載體、賦形劑或稀釋劑。在本發(fā)明的這個(gè)方面，藥物組合物可以包含一種或多種本文描述的化合物。另外，藥物組合物和本文公開的治療方法中應(yīng)用的本發(fā)明化合物作為制備的和應(yīng)用的都是可藥用的。
本發(fā)明的另一方面涉及本發(fā)明化合物在治療方法、藥物組合物以及制備此類組合物中的用途，其用于治療的疾病包括炎癥、膠原降解以及特別是具有異常基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP1)和/或促分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶5(MAPKAPK5)活性特征的疾病，其中類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是此類疾病的特別實(shí)例。本發(fā)明還涉及制備本發(fā)明化合物的方法。
通過考慮隨后詳細(xì)的描述(其參考以下說明性附圖進(jìn)行)，其它目標(biāo)和優(yōu)勢(shì)對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員將變得顯而易見。
附圖概述

圖1.該圖顯示健康關(guān)節(jié)和RA患者關(guān)節(jié)之間顯著的組織學(xué)差異。
圖2.該圖顯示由涉及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病理學(xué)的細(xì)胞因子觸發(fā)的滑液成纖維細(xì)胞中MMP1的表達(dá)增加。
圖3.該圖顯示通過已知的抗炎化合物劑量依賴抑制“基于TNF-α觸發(fā)劑”誘導(dǎo)的由SF表達(dá)的MMPI。
圖4.該膠顯示通過用靶向MAPKAPK5的Ad-siRNA病毒感染細(xì)胞引起的SF中MAPKAPK5在蛋白質(zhì)水平表達(dá)的降低。
圖5.該圖顯示通過靶向MAPKAPK5的Ad-siRNA病毒引起的‘復(fù)合體觸發(fā)劑(complex trigger)’誘導(dǎo)的由SF表達(dá)的MMP1水平的降低。
發(fā)明詳述 定義 當(dāng)描述化合物、包含此類化合物的藥物組合物以及應(yīng)用此類化合物和組合物的方法時(shí)，除非另外說明，否則下列術(shù)語具有以下含義。還應(yīng)當(dāng)理解的是上下文中定義的任何基團(tuán)可以被多種取代基取代，并且各自的定義旨在包括在其范圍內(nèi)的取代基團(tuán)。以非限制性實(shí)例的方式，此類取代基可以包括例如鹵素(例如氟、氯、溴)、-CN、CF3、-OH、-OCF3、C2-C6鏈烯基、C3-C6炔基、C1-C6烷氧基、芳基和二-C1-C6烷基氨基。應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步理解的是術(shù)語“基團(tuán)”和“基”當(dāng)在本文應(yīng)用時(shí)可以考慮互換。
“烷氧基”指的是烷基-O-。烷氧基的實(shí)例包括甲氧基、乙氧基、正-丙氧基、異-丙氧基、正-丁氧基和庚氧基。優(yōu)選的烷氧基是低級(jí)烷氧基。
“烷基”指的是具有1至約20個(gè)碳原子的直鏈或支鏈脂肪族烴。優(yōu)選的烷基具有1至約12個(gè)碳原子。更優(yōu)選的是低級(jí)烷基。支鏈指的是一個(gè)或多個(gè)低級(jí)烷基(例如甲基、乙基或丙基)連接在線性烷基鏈上。
“烷基氨基”指的是烷基-NH-。優(yōu)選的烷基氨基是(C1-C6)-烷基氨基。烷基氨基的實(shí)例包括甲基氨基和乙基氨基。
“氨基低級(jí)烷酰基”指的是NH2-R-CO-，其中R是低級(jí)亞烷基。優(yōu)選的基團(tuán)包括氨基乙?；?ethanoyl)和氨基乙?；?acetyl)。
“氨基甲酰基低級(jí)烷基”指的是基團(tuán)NH2CO-低級(jí)烷基-。優(yōu)選基團(tuán)包括氨基甲?；一桶被柞；谆?br> “羧基低級(jí)烷基酯”指的是羧基(-COO-基團(tuán))的低級(jí)烷基酯。
“本發(fā)明化合物”和等同的表達(dá)指的是包括上文描述的式(I、II或III)化合物，該表達(dá)包括前藥、可藥用鹽和溶劑化物(例如水合物)，其中上下文是這樣許可的。類似地，參考中間體，不管其自身是否被要求，指的是包括它們的鹽和溶劑化物，其中上下文是這樣許可的。
“表達(dá)”指的是內(nèi)源性表達(dá)。
“鹵代”或“鹵素”指的是氟、氯、溴或碘。
“氫”在上下文中指的是在化合物位存在的-H并且還包括其同位素(氘)的取代基。
“低級(jí)烷?；被敝傅氖蔷哂杏袡C(jī)功能團(tuán)R-CO-的氨基，其中R代表低級(jí)烷基。
“低級(jí)烷基”指的是在可以是直鏈或支鏈的線性烷基鏈上的1至約6個(gè)碳原子。
“低級(jí)烷氧基”在可以是直鏈或支鏈的線性烷基鏈上的1至約6個(gè)碳原子，并且其通過氧原子鍵合。
“低級(jí)烷基磺酰胺”指的是式-SO2NR＊R＊的磺酰胺的低級(jí)烷基酰胺，其中R＊是氫或低級(jí)烷基，并且至少一個(gè)R＊是低級(jí)烷基。
“預(yù)防”指的是用于預(yù)防疾病而采取的方法。
“溶劑化物”指的是用于本發(fā)明的化合物與一種或多種溶劑分子的物理聯(lián)合。該物理聯(lián)合包括氫鍵。在某些情況下，溶劑化物能夠分離，例如當(dāng)一個(gè)或多個(gè)溶劑分子被摻入晶狀固體的晶格中時(shí)?！叭軇┗铩卑ㄈ芤合嗪涂煞蛛x溶劑化物。本發(fā)明化合物可以例如以晶形制備并且可以是溶劑化的或水合的。適合的溶劑化物包括可藥用溶劑化物，例如水合物，并且進(jìn)一步包括化學(xué)計(jì)量的溶劑化物和非化學(xué)計(jì)量的溶劑化物。常規(guī)的溶劑包括水、乙醇、乙酸等，因此，代表性的溶劑化物包括水合物、乙醇化物和甲醇化物。
“取代的”指的是分子中一個(gè)原子或原子基團(tuán)被另外的原子或基團(tuán)代替。
“磺酰胺”指的是包含化學(xué)基團(tuán)-SO2NH2的化合物組。
“治療有效量”指的是能夠引起個(gè)體的生物學(xué)或醫(yī)學(xué)響應(yīng)(其是醫(yī)學(xué)醫(yī)生或其它臨床醫(yī)師探索的)的藥物或藥劑的量?！爸委熡行Я俊笨梢匀Q于化合物、疾病及其嚴(yán)重程度以及所治療的個(gè)體的年齡、體重等而不同。特別的是，關(guān)于治療具有胞外基質(zhì)降解特征的疾病病癥，術(shù)語“有效的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制量”旨在指的是引起個(gè)體的疾病侵襲組織中MMP1產(chǎn)生的生物學(xué)有意義的降低以便胞外基質(zhì)降解有意義地降低的本發(fā)明化合物的量。具有基質(zhì)金屬蛋白酶抑制特性的化合物或“基質(zhì)金屬蛋白酶抑制化合物”指的是給細(xì)胞提供有效量的能引起此類細(xì)胞中MMP1產(chǎn)生的生物學(xué)有意義的降低的本發(fā)明化合物。
“芳基”指的是單價(jià)芳族烴基團(tuán)，其是從母芳族環(huán)系的單個(gè)碳原子上除去一個(gè)氫原子而衍生的。典型的芳基包括但不限于衍生自以下的基團(tuán)醋蒽烯、苊、醋菲烯(acephenanthrylene)、蒽、薁、苯、

、蒄、熒蒽、芴、并六苯、己芬、己搭烯(hexalene)、不對(duì)稱-引達(dá)省(as-indacene)、對(duì)稱-引達(dá)省(s-indacene)、1，2-二氫化茚、茚、萘、并八苯(octacene)、辛芬(octaphene)、辛搭烯(octalene)、卵苯、戊-2，4-二烯、并五苯、戊搭烯(pentalene)、戊芬、苝、非那烯(phenalene)、菲、苉、七曜烯(pleiadene)、芘、皮蒽、玉紅省、苯并[9，10]菲、聯(lián)三萘(trinaphthalene)等。特別的是，芳基包含6至14個(gè)碳原子。
“取代的芳基”包括本文“取代的”定義中描述的那些基團(tuán)，并且特別指的是可以任選被一個(gè)或多個(gè)取代基、例如1至5個(gè)取代基、特別是1至3個(gè)取代基取代的芳基，所述的取代基選自酰基、?；被?、?；趸?、鏈烯基、取代的鏈烯基、烷氧基、取代的烷氧基、烷氧基羰基、烷基、取代的烷基、炔基、取代的炔基、氨基、取代的氨基、氨基羰基、氨基羰基氨基、氨基羰基氧基、芳基、芳基氧基、疊氮基、羧基、氰基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、鹵素、羥基、硝基、硫代烷氧基、取代的硫代烷氧基、硫代芳基氧基、巰基、烷基-S-(O)-、芳基-S-(O)-、烷基-S-(O)2-和芳基-S-(O)2-。
“二環(huán)芳基”指的是通過將母體二環(huán)芳族環(huán)系的單個(gè)碳原子上的一個(gè)氫原子除去而衍生的單價(jià)芳族烴基團(tuán)。典型的二環(huán)芳基包括但不限于衍生自以下的基團(tuán)1，2-二氫化茚、茚、萘、四氫化萘等。特別的是，芳基包含8至11個(gè)碳原子。
“二環(huán)雜芳基”指的是通過將母體二環(huán)雜芳族環(huán)系的單個(gè)原子上的一個(gè)氫原子除去而衍生的單價(jià)二環(huán)雜芳族基團(tuán)。典型的二環(huán)雜芳基包括但不限于衍生自以下的基團(tuán)苯并呋喃、苯并咪唑、苯并吲唑、苯并二噁烷、色烯、色烷、噌啉、酞嗪、吲哚、二氫吲哚、吲嗪、異苯并呋喃、異色烯、異吲哚、異二氫吲哚、異喹啉、苯并噻唑、苯并噁唑、1，5-二氮雜萘、苯并噁二唑、蝶啶、嘌呤、苯并吡喃、苯并吡嗪、吡啶并嘧啶、喹唑啉、喹啉、喹嗪、喹喔啉、苯并嗎吩烷、四氫異喹啉、四氫喹啉等。優(yōu)選的是，二環(huán)雜芳基是9-11元之間的二環(huán)雜芳基，特別優(yōu)選5-10元雜芳基。特別的二環(huán)雜芳基衍生自苯并噻吩、苯并呋喃、苯并噻唑、吲哚、喹啉、異喹啉、苯并咪唑、苯并噁唑和苯并二噁烷。
“氨基甲?；敝傅氖腔鶊F(tuán)-C(O)N(R42)2，其中每個(gè)R42基團(tuán)獨(dú)立地是本文定義的氫、烷基、環(huán)烷基或芳基，其可以任選如本文定義的被取代。在特別的實(shí)施方案中，術(shù)語“氨基甲酰基”指的是-C(O)-NH2。
“環(huán)烷基”指的是具有3至約10個(gè)碳原子并且具有單環(huán)或多個(gè)稠環(huán)(包括稠合的和橋連的環(huán)系)的環(huán)烴基，其可以任選被1至3個(gè)烷基取代。此類環(huán)烷基以實(shí)例的方式包括單環(huán)結(jié)構(gòu)例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)辛基、1-甲基環(huán)丙基、2-甲基環(huán)戊基、2-甲基環(huán)辛基等，并且多環(huán)結(jié)構(gòu)例如金剛烷基等。
“取代的環(huán)烷基”包括本文“取代的”定義中描述的那些基團(tuán)，并且特別指的是具有1個(gè)或多個(gè)取代基、例如1至5個(gè)取代基并且特別是1至3個(gè)取代基的環(huán)烷基，所述的取代基選自?；?、?；被Ⅴ；趸?、烷氧基、取代的烷氧基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、氨基、取代的氨基、氨基羰基、氨基羰基氨基、氨基羰基氧基、芳基、芳基氧基、疊氮基、羧基、氰基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、鹵素、羥基、酮基、硝基、硫代烷氧基、取代的硫代烷氧基、硫代芳基氧基、硫代酮基、巰基、烷基-S-(O)-、芳基-S(O)-、烷基-S(O)2-和芳基-S(O)2-。
“取代的”指的是其中一個(gè)或多個(gè)氫原子各自獨(dú)立地被相同或不同的取代基取代的基團(tuán)。典型的取代基包括但不限于-X、-R46、-O-、＝O、-OR46、-SR46、-S-、＝S、-NR46R47、＝NR46、-CX3、-CF3、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)2O-、-S(O)2OH、-S(O)2R46、-OS(O2)O-、-OS(O)2R46、-P(O)(O-)2、-P(O)(OR46)(O-)、-OP(O)(OR46)(OR47)、-C(O)R46、-C(S)R46、-C(O)OR46、-C(O)NR46R47、-C(O)O-、-C(S)OR46、-NR48C(O)NR46R47、-NR48C(S)NR46R47、-NR49C(NR48)NR46R47和-C(NR48)NR46R47，其中每個(gè)X獨(dú)立地是鹵素；每個(gè)R46、R47、R48和R49獨(dú)立地是氫、烷基、取代的烷基、芳基、取代的烷基、芳基烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的烷基、環(huán)雜烷基、取代的環(huán)雜烷基、雜烷基、取代的雜烷基、雜芳基、取代的雜芳基、雜芳基烷基、取代的雜芳基烷基、-NR50R51、-C(O)R50或-S(O)2R50或者任選R50和R51與它們都連接的原子一起形成環(huán)雜烷基或取代的環(huán)雜烷基環(huán)；并且R50和R51獨(dú)立地是氫、烷基、取代的烷基、芳基、取代的烷基、芳基烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的烷基、環(huán)雜烷基、取代的環(huán)雜烷基、雜烷基、取代的雜烷基、雜芳基、取代的雜芳基、雜芳基烷基或取代的雜芳基烷基。
代表性的取代的芳基的實(shí)例包括下列

和
在這些式中，R52和R53之一可以是氫并且R52和R53中至少一個(gè)各自獨(dú)立地選自烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)雜烷基、烷?；⑼檠趸?、芳基氧基、雜芳基氧基、烷基氨基、芳基氨基、雜芳基氨基、NR54COR55、NR54SOR55、NR54SO2R57、COO烷基、COO芳基、CONR54R55、CONR54OR55、NR54R55、SO2NR54R55、S-烷基、S-烷基、SO烷基、SO2烷基、S芳基、SO芳基、SO2芳基；或者可以將R52和R53連接形成5至8個(gè)原子的環(huán)(飽和的或不飽和的)，任選包含一個(gè)或多個(gè)選自N、O或S的雜原子。R54、R55和R56獨(dú)立地是氫、烷基、鏈烯基、炔基、全氟烷基、環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的或雜烷基等。
當(dāng)用于描述化合物上存在的化合物或基團(tuán)時(shí)，“雜”指的是化合物或基團(tuán)中的一個(gè)或多個(gè)碳原子被氮、氧或硫雜原子取代。雜可以用于任何上述的烴基，例如烷基例如雜烷基，環(huán)烷基例如環(huán)雜烷基，芳基例如雜芳基，環(huán)烯基、環(huán)雜烯基等，其具有1至5個(gè)并且特別是1至3個(gè)雜原子。
“雜芳基”指的是從母體雜芳族環(huán)系的單個(gè)原子上除去一個(gè)氫原子而衍生的單價(jià)雜芳族基團(tuán)。典型的雜芳基包括但不限于衍生自以下的基團(tuán)吖啶、砷雜茚、咔唑、β-咔啉、色烷、色烯、噌啉、呋喃、咪唑、吲唑、吲哚、二氫吲哚、吲嗪、異苯并呋喃、異色烯、異吲哚、異二氫吲哚、異喹啉、異噻唑、異噁烷、1，5-二氮雜萘、噁二唑、噁唑、

啶、菲啶、菲咯啉、吩嗪、酞嗪、蝶啶、嘌呤、吡喃、吡嗪、吡唑、噠嗪、吡啶、嘧啶、吡咯、吡咯嗪(pyrrolizine)、喹唑啉、喹啉、喹嗪、喹喔啉、四唑、噻二唑、噻唑、噻吩、三唑、呫噸等。優(yōu)選的是，雜芳基是5-15元之間的雜芳基，特別優(yōu)選5-10元雜芳基。特別的雜芳基衍生自噻吩、吡咯、苯并噻吩、苯并呋喃、吲哚、吡啶、喹啉、咪唑、噁唑和吡嗪。
代表性的雜芳基的實(shí)例包括下列
其中每個(gè)Y選自羰基、N、NR58、O和S；并且R58獨(dú)立地是氫、烷基、環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、芳基、雜芳基、雜烷基等。
本文所用的術(shù)語“環(huán)雜烷基”指的是包含一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自N、O和S的雜原子的穩(wěn)定的雜環(huán)非芳族環(huán)和稠環(huán)。稠合的雜環(huán)系可以包括碳環(huán)并且僅需要包括一個(gè)雜環(huán)。雜環(huán)的實(shí)例包括但不限于哌嗪基、高哌嗪基、哌啶基和嗎啉基，并且在以下說明性實(shí)例中顯示
其中每個(gè)X選自CR582、NR58、O和S；并且每個(gè)Y選自NR58、O和S；并且R58獨(dú)立地是氫、烷基、環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、芳基、雜芳基、雜烷基等。這些環(huán)雜烷基環(huán)可以任選被一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)取代?；?、?；被Ⅴ；趸?、烷氧基、取代的烷氧基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、氨基、取代的氨基、氨基羰基、氨基羰基氨基、氨基羰基氧基、芳基、芳基氧基、疊氮基、羧基、氰基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、鹵素、羥基、酮基、硝基、硫代烷氧基、取代的硫代烷氧基、硫代芳基氧基、硫代酮基、巰基、烷基-S(O)-、芳基-S(O)-、烷基-S(O)2-和芳基-S(O)2-。取代基包括羰基或硫代羰基，其例如提供內(nèi)酰胺和脲衍生物。
代表性的環(huán)雜烯基的實(shí)例包括下列
其中每個(gè)X選自CR582、NR58、O和S；并且每個(gè)Y選自羰基、N、NR58、O和S；并且R58獨(dú)立地是氫、烷基、環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、芳基、雜芳基、雜烷基等。
代表性的具有雜原子(包含取代)的芳基的實(shí)例包括下列

和
其中每個(gè)X選自CR582、NR58、O和S；并且每個(gè)Y選自羰基、NR58、O和S；并且R58獨(dú)立地是氫、烷基、環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、芳基、雜芳基、雜烷基等。
在有機(jī)合成領(lǐng)域中的具有普通技術(shù)的人員公認(rèn)在穩(wěn)定的、化學(xué)上可行的雜環(huán)(無論它是芳族的還是非芳族的)中的雜原子的最大數(shù)目是由環(huán)的大小、不飽和度和雜原子的原子價(jià)來決定的。通常，雜環(huán)可以具有一個(gè)至四個(gè)雜原子，只要雜芳族環(huán)是化學(xué)上可行的并且穩(wěn)定的。
“可藥用的”指的是由聯(lián)邦或洲政府管理局批準(zhǔn)的或美國藥典或其它普遍認(rèn)同的藥典中列出的用于動(dòng)物并且更特別的是用于人。
“可藥用鹽”指的是本發(fā)明化合物的無毒、無機(jī)和有機(jī)酸加成鹽和堿加成鹽，特別的是，它們是可藥用的并且具有母體化合物預(yù)期的藥理學(xué)活性。這些鹽可以在本發(fā)明中所用的化合物的最后分離和純化的過程中原位制備。此類鹽包括(1)酸加成鹽，用無機(jī)酸形成，所述的無機(jī)酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；或者用有機(jī)酸形式，所述的有機(jī)酸例如乙酸、丙酸、己酸、環(huán)戊烷丙酸、羥基乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、蘋果酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、3-(4-羥基苯甲?；?苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1，2-乙二磺酸、2-羥基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟腦磺酸、4-甲基二環(huán)并[2.2.2]-辛-2-烯-1-甲酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、十二烷基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羥基萘甲酸、水楊酸、硬脂酸、粘康酸等；或者(2)當(dāng)母體化合物中存在的酸性質(zhì)子被金屬離子取代時(shí)形成的鹽，所述的金屬離子例如堿金屬離子、堿土金屬離子或鋁離子；或與有機(jī)堿的配位，所述的有機(jī)堿例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基葡糖胺等。鹽僅以實(shí)例的方式進(jìn)一步包括鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、銨鹽、四烷基銨鹽等；并且當(dāng)化合物包含堿性官能度時(shí)，無毒的有機(jī)或無機(jī)酸的鹽，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、乙酸鹽、馬來酸鹽、草酸鹽等。術(shù)語“可藥用陽離子”指的是無毒、可接受的酸性官能團(tuán)的陽離子的相反離子。此類陽離子的實(shí)例是鈉、鉀、鈣、鎂、銨、四烷基銨陽離子等。
“可藥用載體”指的是與本發(fā)明化合物一起施用的稀釋劑、佐劑、賦形劑或載體。
“預(yù)防”指的是降低獲得疾病或障礙的風(fēng)險(xiǎn)(即引起至少一種疾病的臨床癥狀沒有在個(gè)體中發(fā)展，該個(gè)體可能暴露于或易感染疾病，但是還沒有經(jīng)歷或表現(xiàn)出疾病的癥狀)。
“前藥”指的是具有可裂解基團(tuán)并且通過溶劑解或在生理?xiàng)l件下轉(zhuǎn)化為本發(fā)明化合物(其在體內(nèi)具有藥物活性)的化合物，包括本發(fā)明化合物的衍生物。此類實(shí)例包括但不限于膽堿酯衍生物等、N-烷基嗎啉酯等。
“個(gè)體”包括人。術(shù)語“人”、“患者”和“個(gè)體”在本文中可互換應(yīng)用。
任何疾病或障礙的“治療”在一個(gè)實(shí)施方案中指的是改善疾病或障礙(即阻止或降低疾病的發(fā)展或至少其一種臨床癥狀)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，“治療”指的是改善至少一種身體參數(shù)，其可能不被個(gè)體辨別出。在另一個(gè)實(shí)施方案中，“治療”指的是調(diào)節(jié)疾病或障礙，或是身體的(例如穩(wěn)定可辨別的癥狀)、生理學(xué)的(例如穩(wěn)定身體參數(shù))或兩者。在另一個(gè)實(shí)施方案中，“治療”指的是延遲疾病或障礙的發(fā)作。
本發(fā)明化合物的其它衍生物在它們的酸和酸衍生形式中都具有活性，但是在酸敏感形式中在哺乳動(dòng)物機(jī)體中通常提供了溶解度、組織相容性或緩釋的優(yōu)勢(shì)(參見Bundgard，H.，Design of Prodrugs(前藥的設(shè)計(jì))，第7-9頁，第21-24頁，Elsevier，Amsterdam 1985)。前藥包括本領(lǐng)域從業(yè)者眾所周知的酸衍生物，例如，例如由母體酸與適合的醇反應(yīng)制備的酯或者由母體酸化合物與取代的或未取代的胺反應(yīng)制備的酰胺，或者酸酐或混合酸酐。衍生自本發(fā)明化合物上的酸性基團(tuán)的簡(jiǎn)單的脂族或芳族酯、酰胺和酸酐是優(yōu)選的前藥。在某些情況下，希望制備雙酯類型的前藥，例如(?；趸?烷基酯或((烷氧基羰基)氧基)烷基酯。優(yōu)選的是本發(fā)明化合物的C1至C8烷基、C2-C8鏈烯基、芳基、C7-C12取代的芳基和C7-C12芳基烷基酯。
本文所用的術(shù)語“同位素變體”指的是在組成此類化合物的一個(gè)或多個(gè)原子上包含非天然比例的同位素的化合物。例如，化合物的“同位素變體”可以包含一個(gè)或多個(gè)非放射性同位素，例如氘(2H或D)、碳-13(13C)、氮-15(15N)等。應(yīng)當(dāng)理解的是，在制備同位素取代的化合物中，以下原子(存在時(shí))可以改變，以便例如任何氫可以是2H/D、任何碳可以是13C或者任何氮可以是15N，并且此類原子的存在和布局在本領(lǐng)域技術(shù)內(nèi)確定。同樣，本發(fā)明可以包括在下列情況下用放射性同位素制備同位素變體例如產(chǎn)生的化合物可以用于藥物和/或底物組織分布研究。放射性同位素氚(即3H)和碳-14(即14C)特別用于該目的，因?yàn)槠湟子谝氩⑶乙子跈z測(cè)。另外，化合物可以用正電子發(fā)射同位素(例如11C、18F、15O和13N)取代來制備，并且將用于正電子發(fā)射斷層掃描(PET)研究用于檢查底物受體占有。
本文提供的化合物的所有同位素變體，不管其是否具有放射性，都旨在包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
還應(yīng)當(dāng)理解的是，將具有相同分子式但是其原子的成鍵的性質(zhì)或順序或者其原子在空間的排列不同的化合物稱為“異構(gòu)體”。將其原子在空間的排列不同的異構(gòu)體稱為“立體異構(gòu)體”。
將不是互相鏡像的立體異構(gòu)體稱為“非對(duì)映異構(gòu)體”，并且將互相不可重疊的鏡像的那些立體異構(gòu)體稱為“對(duì)映異構(gòu)體”。當(dāng)化合物具有不對(duì)稱中心、例如與四個(gè)不同基團(tuán)鍵合時(shí)，成對(duì)對(duì)映異構(gòu)體是可能的。對(duì)映異構(gòu)體的特征在于其不對(duì)稱中心的絕對(duì)構(gòu)型，并且通過Cahn和Prelog的R-和S-順位規(guī)則或通過分子旋轉(zhuǎn)偏光平面的方法來描述，并且命名為右旋或左旋(即分別為(+)或(-)異構(gòu)體)。手性化合物可以以其單一的對(duì)映異構(gòu)體或其混合物存在。將包含等比例的對(duì)映異構(gòu)體的混合物稱為“外消旋混合物”。
“互變異構(gòu)體”指的是具有特別化合物結(jié)構(gòu)的互變形式并且在氫原子和電子置換中不同的化合物。因此，兩種結(jié)構(gòu)可以通過移動(dòng)π電子和原子(通常是H)的移動(dòng)而是平衡的。例如，烯醇和酮是互變異構(gòu)體，因?yàn)橥ㄟ^用酸或堿處理，它們快速互變?；プ儺悩?gòu)的另一個(gè)實(shí)例是苯基硝基甲烷的酸-和硝基-形式，它們同樣是通過用酸或堿處理而形式的。
互變異構(gòu)形式是與達(dá)到感興趣化合物的最佳化學(xué)反應(yīng)性和生物學(xué)活性相關(guān)的。
本發(fā)明化合物可以具有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱中心；因此此類化合物可以制備成單一的(R)-或(S)-立體異構(gòu)體或其混合物。除非另外說明，本說明書和權(quán)利要求中的特別化合物的描述或命名旨在包括單一的對(duì)映異構(gòu)體和其混合物、外消旋體或其它。立體化學(xué)的確定和立體異構(gòu)體的分離的方法是本領(lǐng)域眾所周知的。
化合物 本發(fā)明基于以下發(fā)現(xiàn)引起MMP1的表達(dá)的途徑中的MAPKAPK5功能以及MAPKAPK5活性抑制劑(例如本發(fā)明化合物)用于治療涉及MMP活性異常高表達(dá)的疾病。
本發(fā)明化合物通?？梢员幻枋鰹?位被芳基和雜芳基取代并且8位被芳基氨基或雜芳基氨基取代的[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基-胺。
更特別的是，本發(fā)明涉及在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中具有基質(zhì)金屬蛋白酶抑制特性的式(I)化合物或其可藥用鹽、水合物、溶劑化物或前藥
其中 A和B獨(dú)立地是CR2R”、NR”、氧或硫； AA是CR2或N； D是C＝O、CR2R”或NR”； 當(dāng)k是0時(shí)，E是NH或CR”R6，并且當(dāng)k是1時(shí)，E是NH或CR”R6a； F是硫、氧或NH； T是氧或NR； U、V、W和X獨(dú)立地是CR”R7或NR”； Y是CR”或N； Z是氫、氨基、羥基、低級(jí)烷氧基、氨基甲?；?、羧基、SO2Rz、SO2NRRz、-NR(CO)(CH2)d-Rz、-NRRz、-(CO)-ORz、-(CO)-NR(CH2)d-Rz或
R獨(dú)立地是氫或低級(jí)烷基； R”是H或與相鄰的原子形成雙鍵； R1是H；R2；或低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基和低級(jí)烷基-低級(jí)環(huán)烷基，任選被一個(gè)或多個(gè)R2取代； R3是H或與相鄰的R”形成雙鍵； R2是H、F、Cl、CN、COOR4、OR4、C(O)N(R4R5)、S(O)2N(R4R5)、低級(jí)烷基、O-低級(jí)烷基、NH-低級(jí)烷基、S-低級(jí)烷基、COO-低級(jí)烷基、OC(O)-低級(jí)烷基、C(O)N(R4)-低級(jí)烷基、S(O)2N(R4)-低級(jí)烷基、S(O)N(R4)-低級(jí)烷基、S(O)2-低級(jí)烷基、S(O)-低級(jí)烷基、N(R4)S(O)2-低級(jí)烷基和N(R4)S(O)-低級(jí)烷基，其中每個(gè)低級(jí)烷基任選被一個(gè)或多個(gè)F和Cl取代。
R4和R5獨(dú)立地是H；F、Cl；或低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基或低級(jí)烷基-低級(jí)環(huán)烷基，任選被一個(gè)或多個(gè)F和Cl取代； R6是氫、氨基、羥基、氨基甲?；?、羧基、SO2R、NRR’、-(CO)-OR或-(CO)-NRR’； R6a是R6、Cl、F、低級(jí)烷氧基、氰基、三氟甲氧基；或與鄰近的一起是-(CHR”)n-NR-(CHR”)p-，并且形成與其鍵合的環(huán)稠合的5或6元雜環(huán)； R7獨(dú)立地是氫、鹵素、低級(jí)烷基或低級(jí)烷氧基； Rz是氫、低級(jí)烷基、低級(jí)烷?；?、苯基、1-低級(jí)烷基吡咯烷-3-基、吡唑-4-基、吡唑-2-基或低級(jí)烷基、低級(jí)烷酰基、苯基、1-低級(jí)烷基吡咯烷-3-基、吡唑-4-基、吡唑-2-基或吡啶-3-基，被一個(gè)或多個(gè)下列基團(tuán)取代羥基、氨基、一或二低級(jí)烷基氨基、乙酰氨基、低級(jí)烷酰基、低級(jí)烷基、4-羥基-苯基、3-氨基甲基苯基、低級(jí)烷基磺?；?、4-二低級(jí)烷基氨基苯基、吡啶-3-基、1H-吲哚-3-基、嗎啉-4-基； R和Rz一起可以是-(CHR)q-T-(CHR)r-并且與它們鍵合的氮形成5或6元雜環(huán)； Rz和R7一起可以是-(CHR”)n-NR-(CHR”)p-，并且形成與其鍵合的環(huán)稠合的5或6元雜環(huán)； b和d獨(dú)立地是0或1；條件是b或d中至少一個(gè)是1； k是0或1； m是0或1； n和p獨(dú)立地是0、1或2； q和r是1或2； x是0或1； 條件是R7或Rz中至少一個(gè)不是氫。
本發(fā)明的優(yōu)選方面是式II化合物亞類或其可藥用鹽、水合物、溶劑化物或前藥，
其中 A和B獨(dú)立地是CR2R”、NR”、氧或硫； AA是CR2或N； D是C＝O、CR2R”或NR”； 當(dāng)k是0時(shí)，E是NH或CR”R6，并且當(dāng)k是1時(shí)，E是NH或CR”R6a； F是硫、氧或NH； T是氧或NR； R”是H或與相鄰的原子形成雙鍵； R獨(dú)立地是氫或低級(jí)烷基； R1是H；R2；或低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基和低級(jí)烷基-低級(jí)環(huán)烷基，任選被一個(gè)或多個(gè)R2取代； R2是H、F、CI、CN、COOR4、OR4、C(O)N(R4R5)、S(O)2N(R4R5)、低級(jí)烷基、O-低級(jí)烷基、NH-低級(jí)烷基、S-低級(jí)烷基、COO-低級(jí)烷基、OC(O)-低級(jí)烷基、C(O)N(R4)-低級(jí)烷基、S(O)2N(R4)-低級(jí)烷基、S(O)N(R4)-低級(jí)烷基、S(O)2-低級(jí)烷基、S(O)-低級(jí)烷基、N(R4)S(O)2-低級(jí)烷基和N(R4)S(O)-低級(jí)烷基，其中每個(gè)低級(jí)烷基任選被一個(gè)或多個(gè)F和Cl取代。
R4和R5獨(dú)立地是H；F、Cl；或低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基或低級(jí)烷基-低級(jí)環(huán)烷基，任選被一個(gè)或多個(gè)F和Cl取代； R6是氫、氨基、羥基、氨基甲酰基、羧基、SO2R、NRR’、-(CO)-OR、或-(CO)-NRR’； R6a是R6、Cl、F、低級(jí)烷氧基、氰基、三氟甲氧基；或與鄰近的一起是-(CHR”)n-NR-(CHR”)p-，并且形成與其鍵合的環(huán)稠合的5或6元雜環(huán)； R8是苯基，其獨(dú)立地在鄰位被Ra、在間位被Rb并且在對(duì)位被Rc取代；吡啶-3-基；在5位被Rc取代的吡啶-3-基；或環(huán)己基，其獨(dú)立地在2位被Ra并且在4位被Rd取代； Ra是氫、鹵素、低級(jí)烷基、三氟甲基或低級(jí)烷氧基； Rb是氫、三氟甲基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷基磺酰胺、羧基、-NReRf、-(CO)-OR或-(CO)-NReRf； Rc是氫、氨基、羥基、低級(jí)烷氧基、氨基甲酰基、羧基、SO2R、SO2NReRf、NReRf、-(CO)-OR或-(CO)-NReRf；或 Rb和Rc可以一起形成吲唑或在3位被R’取代的吲哚； Rd是羥基、鹵素、氨基、低級(jí)烷氧基或NReRf； Re和Rf獨(dú)立地是氫、1-低級(jí)烷基吡咯烷-3-基、1-R-吡唑-4-基、低級(jí)烷?；?、苯基或任選被一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)取代的低級(jí)烷基4-羥基苯基、3-氨基甲基苯基、低級(jí)烷基磺?；?、4-二低級(jí)烷基氨基苯基、吡啶-3-基、1H-吲哚-3-基、嗎啉-4-基、羥基、氨基、一或二低級(jí)烷基氨基或低級(jí)烷?；?；或者R’和R”一起是-(CHR)n-T-(CHR)n-并且與它們鍵合的氮形成五或六元雜環(huán)； m是0、1或2； n是1或2； 條件是Ra、Rb和Rc中至少一個(gè)不是氫。
本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方案涉及式III化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或前藥以及其立體異構(gòu)體、同位素變體和互變異構(gòu)體
其中R1是H或者取代的或未取代的烷基；并且每個(gè)R8和R9獨(dú)立地選自取代的或未取代的環(huán)烷基、取代的或未取代的雜環(huán)烷基、取代的或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8選自取代的或未取代的環(huán)戊基、環(huán)己基、取代的或未取代的苯基、取代的或未取代的吡啶基、取代或未取代的嘧啶和取代的或未取代的吡嗪、取代的或未取代的吡咯、取代的或未取代的吡唑以及取代的或未取代的咪唑。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R1是H、Me、Et、i-Pr或CF3。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R1是H。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8選自取代的或未取代的環(huán)烷基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8選自取代的或未取代的環(huán)己基或環(huán)戊基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8選自取代的或未取代的雜環(huán)烷基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8選自取代的或未取代的哌啶基、嗎啉基或吡咯烷基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8選自取代的或未取代的苯基、吡啶基或嘧啶。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8選自取代的苯基、取代的吡啶基和取代的嘧啶；并且取代基是-L-R8d；并且其中 L選自鍵、亞烷基、雜亞烷基、-O-、-N(R8e)-、-CO-、-CO2-、-SO-、-SO2-、-CON(R8e)-、-SO2N(R8e)-、-N(R8e)CO-、-N(R8e)SO2-、-N(R8e)CON(R8e)-、-N(R8e)SO2N(R8e)-；并且 R8d選自取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的環(huán)烷基、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的雜環(huán)烷基、取代的或未取代的雜芳基、取代的或未取代的氨基、取代的或未取代的芳烷基、取代的或未取代的雜芳基烷基和取代的或未取代的氨基烷基；并且 R8e選自H、取代的或未取代的烷基和取代的或未取代的環(huán)烷基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8是
其中L和R8d如前段中描述的；下標(biāo)n選自1-4；并且每個(gè)R8a獨(dú)立地選自氫、取代的或未取代的烷基、烷氧基、氰基和鹵素。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述并且下標(biāo)n是1，R8a是Me、Et、Pr、異-Pr、Cl、F、CN、OMe或CF3。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R8a在2-(-L的鄰)位。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R8a是2-Cl、2-F、2-Me或2-CF3。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述并且 L是鍵、-O-、-CO-、-CON(R8e)-或-N(R8e)CO-； R8d選自取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的環(huán)烷基、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的雜環(huán)烷基、取代的或未取代的雜芳基、取代的或未取代的芳烷基、取代的或未取代的雜芳基烷基和取代的或未取代的氨基烷基；并且 R8e選自H、取代的或未取代的烷基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述并且 L是鍵、-O-、-CO-、-CON(R8e)-或-N(R8e)CO-；并且 R8d選自H、烷基氨基乙基、二烷基氨基乙基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基烷基和雜芳基烷基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述并且 L是鍵、-O-、-CO-、-CON(R8e)-或-N(R8e)CO-；并且 R8d選自甲基氨基乙基、乙基氨基乙基、二甲基氨基乙基、二乙基氨基乙基、取代的或未取代的吡咯烷基、芐基和吡啶基甲基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述并且 L是鍵、-CO-、SO2、-(CH2)m1-、-O(CH2)m1-、-NH(CH2)m1-、-CON(H)(CH2)m1-或-SO2NH(CH2)m1-；下標(biāo)m1選自1-4；并且R8d是
并且其中環(huán)P是取代的或未取代的雜環(huán)烷基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，L是鍵、-CO-、-O(CH2)m1-、-CON(H)(CH2)m1-或-NHCO-； 在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述；L是鍵；并且環(huán)P是取代的或未取代的雜環(huán)烷基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述；L是鍵；并且環(huán)P是取代的或未取代的哌啶、取代的或未取代的哌嗪和取代的或未取代的哌啶、嗎啉。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述；L是CO；并且環(huán)P是取代的或未取代的雜環(huán)烷基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述；L是CO；并且環(huán)P是取代的或未取代的哌啶、取代的或未取代的哌嗪和取代的或未取代的哌啶、嗎啉。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述；L是-(CH2)m1-、-O(CH2)m1-或-NH(CH2)m1-；下標(biāo)m1選自1-4；并且環(huán)P是取代的或未取代的雜環(huán)烷基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述；L是-(CH2)m1-、-O(CH2)m1-或-NH(CH2)m1-；下標(biāo)m1是2或3；并且環(huán)P是取代的或未取代的哌啶、取代的或未取代的哌嗪和取代的或未取代的哌啶、嗎啉。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述；L是-CON(H)(CH2)m1-或-NHCO(CH2)m1-；下標(biāo)m1選自1-4；并且環(huán)P是取代的或未取代的雜環(huán)烷基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述；L是-CON(H)(CH2)m1-；下標(biāo)m1是2或3；并且環(huán)P是取代的或未取代的哌啶、取代的或未取代的哌嗪和取代的或未取代的哌啶、嗎啉。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，化合物是式IVa、IVb、IVc或IVd或其可藥用鹽、溶劑化物或前藥以及其立體異構(gòu)體、同位素變體和互變異構(gòu)體
并且其中L和環(huán)P如上述；下標(biāo)n選自1-4；每個(gè)R8a獨(dú)立地選自氫、取代的或未取代的烷基、烷氧基、氰基和鹵素；并且R9獨(dú)立地選自取代的或未取代的芳基和雜芳基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式IVa-IVd化合物，L是鍵。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式IVa-IVd化合物，L是亞甲基、亞乙基、亞丙基和亞丁基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式IVa-IVd化合物，L是-CO-。
權(quán)利要求9的化合物，其中L是-CO-。
權(quán)利要求9的化合物，其中L是-NHCO-或-CONH-。
權(quán)利要求9的化合物，其中L是-CON(H)-CH2-CH2-或-N(H)-CO-CH2-CH2-。
權(quán)利要求9的化合物，其中L是-OCH2-CH2-或-NHCH2-CH2-。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式IVa-IVd化合物，L是-SO2-。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式IVa-IVd化合物，L是-CON(H)-CH2-CH2-或-SO2NH-CH2-CH2-。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式IVa-IVd化合物，L是-OCH2-CH2-或-NHCH2-CH2-。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，L是鍵。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式IVa-IVd化合物，環(huán)P是取代的或未取代的哌啶、嗎啉或哌嗪。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式IVa-IVd化合物，L和環(huán)P如上述；下標(biāo)n是4并且每個(gè)R8a是H。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式IVa-IVd化合物，L和環(huán)P如上述；下標(biāo)n是1并且R8a是Me、Et、Pr、異-Pr、Cl、F、CN、OMe或CF3。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R8a在2-(-L的鄰)位。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R8a是2-Cl、2-F、2-Me或2-CF3。
在進(jìn)一步實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8是
并且其中環(huán)P是取代的或未取代的雜環(huán)烷基；下標(biāo)n選自1-4并且每個(gè)R8a獨(dú)立地選自氫、取代的或未取代的烷基、烷氧基、氰基和鹵素。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述并且環(huán)P是取代的或未取代的哌啶、嗎啉或哌嗪。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述并且下標(biāo)n是4并且每個(gè)R8a是H。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述并且下標(biāo)n是1并且R8a是Me、Et、Pr、異-Pr、Cl、F、CN、OMe或CF3。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R8a在2-(N-環(huán)P的鄰)位。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R8a是2-Cl、2-F、2-Me或2-CF3。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8是
并且其中下標(biāo)n選自1-4；每個(gè)R8a獨(dú)立地選自氫、取代的或未取代的烷基、烷氧基、氰基和鹵素；R8b是氫、取代的或未取代的烷基或者取代的或未取代的環(huán)烷基；R8c是氫、取代的或未取代的烷基并且下標(biāo)x選自1-8。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8是
并且其中下標(biāo)n選自1-4；每個(gè)R8a獨(dú)立地選自氫、取代的或未取代的烷基、烷氧基、氰基和鹵素；R8b是氫、取代的或未取代的烷基或者取代的或未取代的環(huán)烷基；R8c是氫或Me。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8是
并且其中下標(biāo)n選自1-4；每個(gè)R8a獨(dú)立地選自氫、取代的或未取代的烷基、烷氧基、氰基和鹵素。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8是
并且其中下標(biāo)n選自1-4；每個(gè)R8a獨(dú)立地選自氫、取代的或未取代的烷基、烷氧基、氰基和鹵素；并且R8b是氫、取代的或未取代的烷基或者取代的或未取代的環(huán)烷基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述并且下標(biāo)n是4并且每個(gè)R8a是H。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述并且下標(biāo)n是1并且R8a是Me、Et、Pr、異-Pr、Cl、F、CN、OMe或CF3。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R8a在2-(N-環(huán)P的鄰)位。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R8a是2-Cl、2-F、2-Me或2-CF3。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述并且R8b是H。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述并且R8b是取代的或未取代的烷基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述并且R8b是取代的或未取代的環(huán)烷基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述并且R8b是Me、Et、Pr、i-Pr、t-Bu、i-Bu、CH2CF3、CF3、CH2CONH2、環(huán)丙基或環(huán)丙基甲基。
在一個(gè)特別的實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，R8如上述并且R8b是i-Pr。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式IVa-IVd化合物，R8a獨(dú)立地選自氫、取代的或未取代的烷基、烷氧基、氰基、氨基甲?；?、CHO和鹵素。在一個(gè)實(shí)施方案中，R8a是H、Me、F或Cl。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R8a是H。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式IVa-IVd化合物，化合物是式Va、Vb、Vc、Vd、Ve或Vf
并且其中R9如式III中描述的并且R8b是氫、取代的或未取代的烷基或者取代的或未取代的環(huán)烷基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式Va-Vf化合物，R8b是H。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式Va-Vf化合物，R8b是取代的或未取代的烷基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式Va-Vf化合物，R8b是取代的或未取代的環(huán)烷基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式Va-Vf化合物，R8b是Me、Et、Pr、i-Pr、t-Bu、i-Bu、CH2CF3、CF3、CH2CONH2、環(huán)丙基或環(huán)丙基甲基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式Va-Vf化合物，R8b是i-Pr。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III-Vf化合物，R9是取代的或未取代的芳基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R9是取代的或未取代的苯基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III-Vf化合物，R9是取代的或未取代的雜芳基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R9是取代的或未取代的吡啶基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III-Vf化合物，R9選自取代的或未取代的苯基、吲哚基、異吲哚基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、噁唑基和噻唑基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III-Vf化合物，R9是

或
并且每個(gè)A1、A2和A3獨(dú)立地選自S、O、N、NR9a和CR9a；每個(gè)R9a獨(dú)立地是H或者取代的或未取代的烷基；并且R9b是CONH2、CONHMe或CN。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式III-Vf化合物，R9是

或
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式III-Vf化合物，R9是


或
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式III-Vf化合物，R9是
并且其中下標(biāo)m選自1-4并且每個(gè)R9d獨(dú)立地是H、取代的或未取代的烷基或鹵素。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式III-Vf化合物，R9是
并且其中下標(biāo)m選自1-4并且每個(gè)R9d獨(dú)立地是H、取代的或未取代的烷基或鹵素。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式III-Vf化合物，R9是

或
并且其中下標(biāo)m選自1-3并且每個(gè)R9d獨(dú)立地是H、取代的或未取代的烷基或鹵素。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式III-Vf化合物，R9如上述；并且每個(gè)R9d是H。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式III-Vf化合物，R9如上述；m是1或2并且每個(gè)R9d獨(dú)立地是Me、Cl或F。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，化合物是式VIa、VIb、VIc、VId、VIe或VIf
并且R8b是氫、取代的或未取代的烷基或者取代的或未取代的環(huán)烷基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式VIa-VIf化合物，R8b是H。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式VIa-VIf化合物，R8b是環(huán)烷基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式VIa-VIf化合物，R8b是環(huán)丙基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式VIa-VIf化合物，R8b是取代的或未取代的烷基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式VIa-VIf化合物，R8b是Me、Et、Pr、i-Pr、t-Bu、i-Bu、CF3、CH2CF3、CH2CONH2或環(huán)丙基甲基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，化合物是式VIIa、VIIb、VIIc、VIId、VIIe或VIIf
并且R8b是氫、取代的或未取代的烷基或者取代的或未取代的環(huán)烷基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式VIIa-VIId化合物，R8b是H。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式VIIa-VIIf化合物，R8b是環(huán)烷基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式VIIa-VIIf化合物，R8b是環(huán)丙基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式VIIa-VIIf化合物，R8b是取代的或未取代的烷基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式VIIa-VIIf化合物，R8b是Me、Et、Pr、i-Pr、t-Bu、i-Bu、CF3、CH2CF3、CH2CONH2或環(huán)丙基甲基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，化合物是式VIIIa、VIIIb、VIIIc、VIIId、VIIIe或VIIIf
并且R8b是氫、取代的或未取代的烷基或者取代的或未取代的環(huán)烷基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式VIIIa-VIIIf化合物，R8b是H。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式VIIIa-VIIIf化合物，R8b是環(huán)烷基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式VIIIa-VIIIf化合物，R8b是環(huán)丙基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式VIIIa-VIIIf化合物，R8b是取代的或未取代的烷基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式VIIIa-VIIIf化合物，R8b是Me、Et、Pr、i-Pr、t-Bu、i-Bu、CF3、CH2CF3、CH2CONH2或環(huán)丙基甲基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，化合物是式IXa、IXb、IXc、IXd、IXe或IXf
并且R8b是氫、取代的或未取代的烷基或者取代的或未取代的環(huán)烷基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式IXa-IXf化合物，R8b是H。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式IXa-IXf化合物，R8b是環(huán)烷基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式IXa-IXf化合物，R8b是環(huán)丙基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式IXa-IXf化合物，R8b是取代的或未取代的烷基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式IXa-IXf化合物，R8b是Me、Et、Pr、i-Pr、t-Bu、i-Bu、CF3、CH2CF3、CH2CONH2或環(huán)丙基甲基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，化合物是式Xa、Xb、Xc、Xd、Xe或Xf
并且R8b是氫、取代的或未取代的烷基或者取代的或未取代的環(huán)烷基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式Xa-Xf化合物，R8b是H。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式Xa-Xf化合物，R8b是環(huán)烷基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式Xa-Xf化合物，R8b是環(huán)丙基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式Xa-Xf化合物，R8b是取代的或未取代的烷基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式Xa-Xf化合物，R8b是Me、Et、Pr、i-Pr、t-Bu、i-Bu、CF3、CH2CF3、CH2CONH2或環(huán)丙基甲基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，化合物是式XIa、XIb、XIc、XId、XIe或XIf
并且R8b是氫、取代的或未取代的烷基或者取代的或未取代的環(huán)烷基；并且R9e是氫、Me或CN。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式XIa-XIf化合物，R9e是H。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式XIa-XIf化合物，R9e是Me。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式XIa-XIf化合物，R9e是CN。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式XIa-XIf化合物，R8b是H。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式XIa-XIf化合物，R8b是環(huán)烷基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式XIa-XIf化合物，R8b是環(huán)丙基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式XIa-XIf化合物，R8b是取代的或未取代的烷基。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，關(guān)于式XIa-XIf化合物，R8b是Me、Et、Pr、i-Pr、t-Bu、i-Bu、CF3、CH2CF3、CH2CONH2或環(huán)丙基甲基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，化合物是式XIIa、XIIb、XIIc或XIId
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，化合物是式XIIIa、XIIIb、XIIIc或XIIId
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，化合物是式XIVa、XIVb、XIVc或XIVd
在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，化合物是式XVa、XVb或XVc
并且L是鍵或-O-CH2-CH2-；環(huán)P是

或
并且R8b是H、Me、i-Pr、t-Bu、CH2CONH2、環(huán)丙基甲基或CH2CF3。
在一個(gè)特別的實(shí)施方案中，關(guān)于式XVa-XVc化合物，L是鍵。在另一個(gè)特別的實(shí)施方案中，L是-O-CH2-CH2-。
在一個(gè)特別的實(shí)施方案中，關(guān)于式XVa-XVc化合物，環(huán)P是
在更特別的實(shí)施方案中，關(guān)于式XVa-XVc化合物，環(huán)P是
在另一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，化合物選自表1。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于式III化合物，化合物選自表2。
在某些方面，本發(fā)明提供上式化合物的前藥和衍生物。前藥是本發(fā)明化合物的衍生物，其具有代謝可裂解基團(tuán)并且通過溶劑解或在生理?xiàng)l件下轉(zhuǎn)化為本發(fā)明化合物，其在體內(nèi)是有藥理學(xué)活性的。前藥可以在施用于個(gè)體時(shí)是無活性的，但是在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為本發(fā)明活性化合物。本文所用的“可藥用前藥”指的是用于本發(fā)明的化合物的前藥，其在健康體檢判斷的范圍內(nèi)適合用于與合理利益/風(fēng)險(xiǎn)比例相稱的異常毒性、刺激、過敏反應(yīng)的患者組織中接觸，并且對(duì)于本發(fā)明化合物的預(yù)期用途是有效的。術(shù)語“前藥”指的是在體內(nèi)轉(zhuǎn)化以獲得用于本發(fā)明的有效化合物或其可藥用鹽、水合物或溶劑化物的化合物。轉(zhuǎn)化可以通過多種機(jī)制來發(fā)生，例如通過在血液中水解。含有代謝可裂解基團(tuán)的化合物具有以下優(yōu)勢(shì)與母體化合物相比，由于代謝可裂解基團(tuán)的存在，作為提高溶解度和/或吸收速率的結(jié)果，其可表現(xiàn)出改善的生物利用度，因此此類化合物用作前藥。徹底的討論由下面文獻(xiàn)提供Design of Prodrugs(前藥的設(shè)計(jì))，H.Bundgaard編，Elsevier(1985)；Methods in Enzymology(酶學(xué)中的方法)；K.Widder等人編，Academic Press，42，309-396(1985)；A Textbook of Drug Design andDevelopment(藥物設(shè)計(jì)和開發(fā)課本)，Krogsgaard-Larsen和H.Bandaged編，第5章；“Design and Applications of Prodrugs(前藥的設(shè)計(jì)和應(yīng)用)”113-191(1991)；Advanced Drug Delivery Reviews(高等藥物釋放綜述)，H.Bundgard，8，1-38，(1992)；J.Pharm.Sci.，77，285(1988)；Chem.Pharm.Bull.，N.Nakeya等人，32，692(1984)；Pro-drugs as Novel DeliverySystems(作為新釋放系統(tǒng)的前藥)，T.Higuchi和V.Stella，14 A.C.S.Symposium Series以及Bioreversible Carriers in Drug Design(藥物設(shè)計(jì)中的生物可逆性載體)，E.B.Roche編，American Pharmaceutical Associationand Pergamon Press，1987，將其并入本文作為參考。此類實(shí)例包括但不限于膽堿酯衍生物等、N-烷基嗎啉酯等。
本發(fā)明化合物的其它衍生物在它們的酸和酸衍生物形式中都具有活性，但是在酸敏感形式中在哺乳動(dòng)物機(jī)體中通常提供了溶解度、組織相容性或緩釋的優(yōu)勢(shì)(參見Bundgard，H.，Design of Prodrugs(前藥的設(shè)計(jì))，第7-9頁，第21-24頁，Elsevier，Amsterdam 1985)。前藥包括本領(lǐng)域從業(yè)者眾所周知的酸衍生物，例如，例如由母體酸與適合的醇反應(yīng)制備的酯或者由母體酸化合物與取代的或未取代的胺反應(yīng)制備的酰胺，或者酸酐或混合酸酐。衍生自本發(fā)明化合物上的酸性基團(tuán)的簡(jiǎn)單的脂族或芳族酯、酰胺和酸酐是優(yōu)選的前藥。在某些情況下，希望制備雙酯類型的前藥，例如(?；趸?烷基酯或((烷氧基羰基)氧基)烷基酯。優(yōu)選的是本發(fā)明化合物的C1至C8烷基、C2-C8鏈烯基、芳基、C7-C12取代的芳基和C7-C12芳基烷基酯。
藥物組合物 當(dāng)用作藥物時(shí)，本發(fā)明化合物通常以藥物組合物的形式施用。此類組合物可以以制藥領(lǐng)域眾所周知的方法制備并且包括至少一種活性化合物。
通常，本發(fā)明化合物以藥用有效量施用?；衔飳?shí)際施用的量通常將由醫(yī)師根據(jù)有關(guān)情況來確定，所述的情況包括所治療的病癥、所選的施用途徑、施用的實(shí)際化合物、單一患者的年齡、體重和響應(yīng)、患者癥狀的嚴(yán)重程度等。
本發(fā)明藥物組合物可以通過多種途徑施用，所述的途徑包括口服、直腸、透皮、皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)和鼻內(nèi)。取決于預(yù)期釋放途徑，本發(fā)明化合物優(yōu)選配制為可注射或口服組合物或者軟膏劑、洗劑或貼劑用于透皮施用。
用于口服施用的組合物可以采用散裝(bulk)液體溶液劑或混懸劑或散裝散劑的形式。但是更普遍的是組合物以單位劑型存在以便于精確給藥。術(shù)語“單位劑型”指的是適合作為用于人個(gè)體和其它哺乳動(dòng)物的單位劑量的物理上完全分離的單位，每個(gè)單位包含計(jì)算產(chǎn)生預(yù)期治療作用的預(yù)定量的活性物質(zhì)以及適合的藥用賦形劑。典型的單位劑型包括液體組合物的預(yù)填充的、預(yù)測(cè)量的安瓿或注射器或者在固體組合物的情況中的丸劑、片劑、膠囊劑等。在此類組合物中，呋喃磺酸化合物通常是較小組分(約0.1至約50％重量或優(yōu)選從約1至約40％重量)，剩余部分是多種介質(zhì)或載體和有助于形成預(yù)期劑型的操作助劑。
適于口服施用的液體形式可以包括適合的含水或不含水的介質(zhì)以及緩沖劑、混懸劑和分散劑、著色劑、矯味劑等。固體形式可以包括例如任何以下成分或類似性質(zhì)的化合物粘合劑，例如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑，例如淀粉或乳糖；崩解劑，例如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；潤(rùn)滑劑，例如硬脂酸鎂；助流劑，例如膠體二氧化硅；甜味劑，例如蔗糖或糖精；或矯味劑，例如薄荷、水楊酸甲酯或橙味調(diào)味劑。
可注射組合物通常是基于可注射無菌鹽水或磷酸鹽緩沖鹽水或本領(lǐng)域已知的其它可注射載體。如上述，在此類組合物中的活性化合物通常是較小組分，通常為約0.05至10％重量，剩余部分是可注射載體等。
透皮組合物通常配制為局部軟膏劑或乳膏劑，其通常包含量為約0.01至約20％重量、優(yōu)選約0.1至約20％重量、優(yōu)選約0.1至約10％重量并且更優(yōu)選約0.5至約15％重量的活性成分。當(dāng)配制為軟膏劑時(shí)，活性成分通常與石蠟或水-可混溶的軟膏基質(zhì)組合?？蛇x擇的是，活性成分可以與例如水包油軟膏基質(zhì)配制為乳膏劑。此類透皮制劑是本領(lǐng)域眾所周知的并且通常包括另外的成分以增強(qiáng)皮膚穿透的活性成分或制劑的穩(wěn)定性。所有此類已知的透皮制劑和成分包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
本發(fā)明化合物還可以通過透皮裝置施用。因此，透皮施用可以應(yīng)用容器或多孔膜型或是固體基質(zhì)種類的貼劑來完成。
用于口服可施用、可注射或局部可施用的上述組分僅是代表性。其它物質(zhì)和處理技術(shù)等在Remington’s Pharmaceutical Sciences，第17版，1985，Mack Publishing Company，Easton，Pennsylvania的第八部分提出，將其并入本文作為參考。
本發(fā)明化合物還可以以緩釋形式或從緩釋藥物釋放系統(tǒng)施用。代表性的緩釋物質(zhì)的描述可以在Remington’s Pharmaceutical Sciences中查找。
以下制劑實(shí)例說明代表性的本發(fā)明藥物組合物。但是本發(fā)明不局限于以下藥物組合物。
制劑1-片劑 將本發(fā)明化合物作為干燥粉末與干燥的明膠粘合劑以約1:2重量比混合。加入少量硬脂酸鎂作為潤(rùn)滑劑。將混合物在壓片機(jī)中制成240-270mg片劑(每片含80-90mg的活性酰胺化合物)。
制劑2-膠囊劑 將本發(fā)明化合物作為干燥粉末與淀粉稀釋劑以約1:1重量比混合。將混合物填充到250mg膠囊中(每個(gè)膠囊含125mg的活性酰胺化合物)。
制劑3-液體 將本發(fā)明化合物(125mg)、蔗糖(1.75g)和黃原膠(4mg)混合，通過No.10目美國篩，然后與預(yù)先制備的微晶纖維素和羧甲基纖維素鈉(11:89，50mg)的水溶液混合。將苯甲酸鈉(10mg)、矯味劑和著色劑用水稀釋并且在攪拌下加入。然后加入足夠的水以制成5mL的總體積。
制劑4-片劑 將本發(fā)明化合物作為干燥粉末與干燥的明膠粘合劑以約1:2重量比混合。加入少量硬脂酸鎂作為潤(rùn)滑劑。將混合物在壓片機(jī)中制成450-900mg片劑(150-300mg的活性酰胺化合物)。
制劑5-注射劑 將本發(fā)明化合物溶于或懸浮于緩沖的無菌鹽水可注射含水介質(zhì)中，使?jié)舛燃s為5mg/mL。
制劑6-局部 將硬脂醇(250g)和白凡士林(250g)在約75℃下熔融，加入溶于水(約370g)的本發(fā)明化合物(50g)、對(duì)羥基苯甲酸甲酯(0.25g)、對(duì)羥基苯甲酸丙酯(0.15g)、十二烷基硫酸鈉(10g)和丙二醇(120g)的混合物，將產(chǎn)生的混合物攪拌直至其凝固。
治療方法 本發(fā)明化合物作為治療劑用于治療哺乳動(dòng)物病癥，該病癥源于或可歸因于MMP1和/或MAPKAPK5的異常活性。因此，本發(fā)明化合物和藥物組合物作為藥物用于預(yù)防和/或治療哺乳動(dòng)物(包括人)的炎性疾病。
在治療方法方面，本發(fā)明提供了治療易感或患有與胞外基質(zhì)(ECM)降解有關(guān)的病癥、特別是關(guān)節(jié)炎并且更特別的是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的哺乳動(dòng)物的方法，該方法包括施用有效量的一種或多種本發(fā)明化合物或上述藥物組合物。
在另一個(gè)治療方法方面，本發(fā)明提供了治療易感或患有與MMP1異常細(xì)胞表達(dá)有關(guān)的病癥的哺乳動(dòng)物的方法，該方法包括施用治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥物組合物。
在另一個(gè)治療方法方面，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防具有異?；|(zhì)金屬蛋白酶活性特征的病癥的方法，該方法包括施用治療有效的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制量的一種或多種本發(fā)明化合物或其藥物組合物。
在另一個(gè)治療方法方面，本發(fā)明提供了治療易感或患有疾病和障礙的哺乳動(dòng)物的方法，所述的疾病和障礙由炎癥介導(dǎo)或引起炎癥，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎、心肌梗塞、多種自身免疫疾病和障礙、眼色素層炎和動(dòng)脈粥樣硬化；癢/瘙癢例如，例如銀屑病；和腎障礙，該方法包括施用有效病癥治療或病癥預(yù)防量的一種或多種上述藥物組合物。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明化合物在制備用于治療或預(yù)防通過施用促分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶5的抑制劑來預(yù)防、改善或消除的病癥，或具有異常膠原酶活性的病癥，或與ECM降解有關(guān)的病癥或選自涉及炎癥的疾病的病癥，最優(yōu)選用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途。
作為本發(fā)明的進(jìn)一步的方面，提供了特別在治療或預(yù)防上述病癥和疾病中用作藥物的本發(fā)明化合物。本文還提供了本發(fā)明化合物在制備用于治療或預(yù)防上述病癥和疾病之一的藥物中的用途。
本發(fā)明方法的優(yōu)選方案包括給患有具有炎性特征的疾病病癥的個(gè)體施用有效的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制量的本發(fā)明化合物足夠時(shí)間以降低患者胞外基質(zhì)降解的異常水平，并且優(yōu)選終止對(duì)所述的降解響應(yīng)的自身延續(xù)性進(jìn)程。該方法的特別實(shí)施方案包括給患有或易感發(fā)生類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的個(gè)體患者施用有效的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制量的本發(fā)明化合物足夠時(shí)間以分別降低或預(yù)防所述患者關(guān)節(jié)中膠原和骨降解，并且優(yōu)選終止對(duì)所述的降解響應(yīng)的自身延續(xù)性進(jìn)程。
注射劑量水平范圍為約0.1mg/kg/小時(shí)至至少10mg/kg/小時(shí)，總時(shí)間約1至約120小時(shí)并且特別是24至96小時(shí)。約0.1mg/kg至約10mg/kg或更多的預(yù)裝入大丸劑也可以施用以獲得足夠的穩(wěn)態(tài)水平。對(duì)于40至80kg人類患者，最大總劑量不希望超過約2g/天。
對(duì)于預(yù)防和/或治療長(zhǎng)期病癥，例如炎性和自身免疫病癥，治療方案通常延長(zhǎng)歷經(jīng)數(shù)月或數(shù)年，并且因此對(duì)于患者的方便和耐受而言優(yōu)選口服給藥。對(duì)于口服給藥，每天1至5個(gè)并且特別是2至4個(gè)并且典型地是3個(gè)口服劑量是代表性的方案。應(yīng)用這些給藥模式，每個(gè)劑量提供了約0.01至約20mg/kg的本發(fā)明化合物，優(yōu)選劑量是每個(gè)提供了約0.1至約10mg/kg并且特別是約1至約5mg/kg。
透皮劑量通常被選擇提供與應(yīng)用注射劑量所獲得的血中水平相比類似或更低的血中水平。
當(dāng)用于預(yù)防炎性病癥的發(fā)作時(shí)，本發(fā)明化合物以上述劑量水平施用于通常在醫(yī)師告知和監(jiān)控下存在發(fā)生病癥風(fēng)險(xiǎn)的患者。存在發(fā)生特別病癥風(fēng)險(xiǎn)的患者通常包括具有病癥家族史的那些患者，或通過遺傳試驗(yàn)或篩查被鑒定為特別易于發(fā)生病癥的那些患者。
本發(fā)明化合物可以作為單獨(dú)的活性劑施用或者它們可以與其它藥物組合施用，所述的其它藥物包括證明具有相同或類似治療活性并且被確定對(duì)于此類組合施用是安全和有效的其它化合物。
常規(guī)合成方法 本發(fā)明的三唑并[1，5-a]吡啶基化合物可以由易于獲得的原料應(yīng)用下列常規(guī)方法和操作來制備。應(yīng)當(dāng)理解的是給出了典型的或優(yōu)選的方法條件(即反應(yīng)溫度、時(shí)間、反應(yīng)物的摩爾比、溶劑、壓力等)；除非另外說明，也可以應(yīng)用其它方法條件。最優(yōu)的反應(yīng)條件可以取決于所用的特別反應(yīng)物或溶劑而不同，但是此類條件可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過常規(guī)優(yōu)化操作確定。
另外，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是常規(guī)保護(hù)基是必需的以防止某些功能團(tuán)參與不希望的反應(yīng)。用于特別官能團(tuán)的適合的保護(hù)基的選擇以及適合用于保護(hù)和脫保護(hù)的條件是本領(lǐng)域眾所周知的。例如，多種保護(hù)基以及它們的引入和除去在T.W.Greene和P.G.M.Wuts，ProtectingGroups in Organic Synthesis(有機(jī)合成中的保護(hù)基)，第二版，Wiley，NewYork，1991及其引用的文獻(xiàn)中描述。
以下方法詳細(xì)地呈現(xiàn)了制備代表性的上文列出的二環(huán)雜芳基。本發(fā)明化合物可以由已知的或可商購的原料和試劑通過有機(jī)合成領(lǐng)域中的技術(shù)人員來制備。
常規(guī)合成路線
通用 除非另外說明，所有試劑是商品級(jí)并且如收到的應(yīng)用而無需進(jìn)一步純化。將可商購的無水溶劑用于在惰性氣氛下進(jìn)行的反應(yīng)。除非另外說明，試劑級(jí)溶劑用于所有其它情況。柱色譜法是在硅膠60(35-70μm)上進(jìn)行的。薄層色譜法是應(yīng)用預(yù)涂層的硅膠F-254板(厚度0.25mm)進(jìn)行的。1H NMR光譜是在Bruker DPX 400 NMR光譜儀(400MHz)上記錄的。1H NMR光譜的化學(xué)位移(δ)是相對(duì)于四甲基硅烷(δ 0.00)或適當(dāng)?shù)臍埩羧軇┓?，即CHCl3(δ 7.27)作為內(nèi)標(biāo)以百萬分之(ppm)報(bào)道的。峰裂數(shù)以單峰(s)、雙峰(d)、三重峰(t)、四重峰(q)、多重峰(m)和寬峰(br)給出。偶合常數(shù)(J)以Hz給出。電噴霧質(zhì)譜是在Micromass平臺(tái)LC/MS光譜儀上獲得的。所有LCMS分析所用的柱Waters Acquity UPLC BEH C18 1.7μm，2.1mm內(nèi)徑×50mm長(zhǎng)(Part No.186002350))。制備HPLCWaters XBridge Prep C185μm ODB 19mm內(nèi)徑×100mm長(zhǎng)(Part No.186002978)。所有方法應(yīng)用MeCN/H2O梯度。H2O包含0.1％TFA或0.1％NH3。
本發(fā)明化合物的代表性合成 化合物1(4-嗎啉-4-基苯基)-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]胺 步驟1N’-(3，6-二溴-吡嗪-2-基)-N，N-二甲基甲脒
將懸浮于乙醇(150mL)中的3，6-二溴-吡嗪-2-基胺(15.37g，60.80mmol)和N，N-二甲基甲酰胺二甲基縮醛(10.1mL，76.00mmol)的混合物回流2小時(shí)。將反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)，獲得標(biāo)題化合物(18.6g)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)3.20(s，3H)，3.21(s，3H)，7.93(s，1H)，8.48(s，1H)。LCMSRt 3.81分鐘(99.1％)，m/z(APCI)307(M+H)+。
步驟2N-(3，6-二溴-吡嗪-2-基)-N’-羥基甲脒
在N’-(3，6-二溴-吡嗪-2-基)-N，N-二甲基甲脒(18.6g，60.80mmol)的甲醇(200mL)溶液中一次性加入鹽酸羥胺(5.91g，85.12mmol)。將反應(yīng)在室溫下攪拌16小時(shí)。將溶劑蒸發(fā)并且將固體殘留物用冷卻(冰冷卻的)水處理并且通過過濾收集。將沉淀用水和石油醚洗滌兩次并且真空干燥，得到標(biāo)題化合物(17.45g)，為白色固體。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)7.82(1H，br s)，8.21(1H，s)，8.34(1H，m)，11.17(1H，br s)。LCMSRt 3.17分鐘(98.7％)，m/z(APCI)295(M+H)+。
步驟35，8-二溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪
將N-(3，6-二溴-吡嗪-2-基)-N’-羥基甲脒(17.4mg，58.80mmol)用多磷酸(150g)在50℃下處理1小時(shí)，然后在70℃下處理1.75小時(shí)。在冷卻至室溫后，在反應(yīng)混合物中加入水。將產(chǎn)生的懸浮液通過以小部分小心加入固體NaHCO3調(diào)至pH 8。將形成的沉淀通過過濾收集，用1N NaOH洗滌一次，用水洗滌三次并且真空干燥。將殘留物在乙酸乙酯和1N NaOH之間分配，并且將有機(jī)相用1N NaOH再洗滌一次并且用鹽水洗滌一次。將有機(jī)相經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物(10.15g)，為白色固體。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)8.43(s，1H)，8.92(s，1H)。LCMSRt 2.73分鐘(94.2％)，m/z(APCI)277(M+H)+。
步驟4(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(4-嗎啉-4-基苯基)胺
將5，8-二溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪(123mg，443μmol)、4-(4-嗎啉代)苯胺(118mg，0.664mmol)和N-乙基二異丙基胺(116mL，0.664mmol)的混合物在2-丙醇(3mL)中加熱回流4.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干燥并且將殘留物在二氯甲烷和檸檬酸(10％)之間分配。將有機(jī)相用水和鹽水洗滌一次，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物(156mg，94％)，為黃色固體。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)3.11(m，4H)，3.78(m，4H)，6.97(d，2H)，7.82(d，2H)，7.87(s，1H)，8.71(s，1H)，9.93(br s，1H)。LCMSRt 3.32分鐘(96.8％)，m/z(APCI)375(M+H)+。
步驟5(4-嗎啉-4-基苯基)-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]胺
將(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(4-嗎啉-4-基苯基)胺(220mg，0.586mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷(dioxaborolan)-2-基)-1H-吡唑(171mg，0.879mmol)、Pd(PPh3)4(68mg，59μmol)和NaOtBu(225mg，2.34mmol)的4mL DMF/水(3:1)懸浮液在密封管中脫氣5分鐘。將反應(yīng)混合物在密封試管中、在90℃下加熱過夜。將溶劑蒸發(fā)后，將殘留物通過過濾收集，用水(3×)和醚(2×)洗滌并且真空干燥。將粗產(chǎn)物通過柱色譜法(硅膠，96:4 DCM/MeOH)純化，得到標(biāo)題化合物(76mg，36％)，為黃色固體。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)3.11(4H，m)，3.79(4H，m)，6.98(2H，d)，7.90(2H，d)，8.17(1H，s)，8.35(1H，br s)，8.64(1H，br s)，8.75(1H，s)，9.73(1H，br s)。LCMSRt 2.68分鐘(97.7％)，m/z(APCI)363(M+H)+。
化合物44-(8-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5a]吡嗪-5-基]吡啶-2(1H)-酮 步驟1[5-(2-甲氧基-吡啶-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在2:1 DMF/二噁烷(2.2mL)中的(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-胺(80mg，0.206mmol)、2-甲氧基吡啶-4-硼酸(63mg，0.412mmol)、Pd(PPh3)4(0.052mmol)和1.5N Na2CO3(1.1mL，1.65mmol)制備。將粗產(chǎn)物通過硅膠柱色譜法純化，應(yīng)用96:4 DCM:NH3(7M在MeOH中)并且將包含預(yù)期產(chǎn)物的級(jí)分合并且蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物(40mg，47％)。HPLC(254nm)Rt 2.26分鐘(65％)。
步驟24-(8-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5a]吡嗪-5-基]吡啶-2(1H)-酮
將[5-(2-甲氧基-吡啶-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-胺(40mg，0.096mmol)和鹽酸吡啶(55mg，0.48mmol)的水(1mL)溶液在室溫下攪拌1小時(shí)。將溶劑真空除去并且將殘留物通過硅膠柱色譜法純化，用96:4 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫。將標(biāo)題化合物分離(23mg，60％)。
將11mg(0.0273mmol)的游離堿化合物溶于最小量的MeOH/DCM中，(回流至溶解)并且加入在MeOH中的0.1M甲磺酸(0.273mL)。蒸發(fā)溶劑后將殘留物用1:1乙酸乙酯-乙醚和DCM-乙醚的混合物研磨數(shù)次，過濾并且真空干燥，得到標(biāo)題化合物，為甲磺酸鹽(13mg，99％)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)2.21(3H，s)，2.91(3H，s，MsOH)，3.00(2H，t)，3.18-3.26(2H，m)，3.58(2H，d)，3.90(2H，d)，6.83(1H，s)，7.07(2H，d)，7.25(1H，s)，7.53(1H，d)，7.93(2H，d)，8.14(1H，s)，8.76(1H，s)，9.69(1H，br s)，10.21(1H，s)，13.3(1H，br s)。LCMSRt 1.71分鐘(97.5％)，m/z(APCI)403(M+H)+。
化合物64-{8-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺 步驟1(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-胺
將5，8-二溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪(2g，7.20mmol)、4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基胺(1.65g，8.64mmol)和N-乙基二異丙基胺(1.5mL，8.64mmol)的混合物在80℃下、在2-丙醇(50mL)中加熱8小時(shí)。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干燥并且將殘留物在二氯甲烷和水之間分配。將水相用二氯甲烷萃取兩次。將有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且蒸發(fā)，獲得標(biāo)題化合物(1.41g)，為灰色固體。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)2.27(3H，s)，2.54(4H，m)，3.14(4H，m)，6.97(2H，d)，7.80(2H，d)，7.87(1H，s)，8.72(1H，s)，9.92(1H，br s)。LCMSRt 2.07分鐘(77.4％)，m/z(APCI)388(M+H)+。
步驟24-溴-噻吩-2-甲酰胺
將4-溴-噻吩-2-甲酸(2.0g，9.66mmol)、1-乙基-3-(3’-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(2.04g，10.63mmol)和1-羥基苯并三唑水合物(1.44g，10.63mmol)的DMF(20mL)溶液在室溫下攪拌2小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物冷卻至0℃并且加入NH3水溶液(1mL，17.3mmol)。將混合物在室溫下再攪拌5小時(shí)，然后在反應(yīng)混合物中加入水并且將產(chǎn)生的沉淀通過過濾收集并且用1M NaOH、H2O和石油醚洗滌。將標(biāo)題化合物分離，為白色固體(1.56g，78％)。
步驟34-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-噻吩-2-甲酰胺
將4-溴-噻吩-2-甲酰胺(1.3g，6.34mmol)、雙(頻哪醇(pinacolato))二硼(3.22g，12.7mmol)、PdCl2dppf(0.26g，0.318mol)和KOAc(1.87g，19.10mmol)懸浮于二噁烷(20mL)中，鼓入氮?dú)?分鐘，然后在90℃下加熱過夜。將溶劑真空除去并且將殘留物在乙酸乙酯和水之間分配。將水層用乙酸乙酯萃取3次并且將合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4過濾并且蒸發(fā)。將標(biāo)題產(chǎn)物從EtOAc-石油醚中結(jié)晶(2.135g，經(jīng)LCMS檢測(cè)純度77％)。
步驟44-{8-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺
將5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-胺(100mg，258mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-噻吩-2-甲酰胺(130mg，516mmol)和Pd(PPh3)4(74mg，64.5mmol)在Na2CO3水溶液(1.37mL，1.5M，2.06mmol)和DMF/二噁烷2/1(2.75mL)中的懸浮液在反應(yīng)管中脫氣5分鐘。將試管密封并且將反應(yīng)混合物在90℃下加熱過夜。冷卻至室溫后將反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和水之間分配。將沉淀通過過濾收集并且用水(1×)和醚(2×)洗滌并且真空干燥。將粗產(chǎn)物通過柱色譜法純化(硅膠，DCM/MeOH/NH3 96:4)，得到標(biāo)題化合物(43mg)，為黃色固體。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)2.26(3H，s)，2.50(4H，m)，3.15(4H，m)，6.99(2H，d)，7.60(1H，br s)，7.88(2H，d)，8.10(2H，m)，8.48(1H，s)，8.66(1H，s)，8.79(1H，s)，9.97(1H，br s)。LCMSRt 1.99分鐘(97.6％)，m/z(APCI)435(M+H)+。
化合物95-{8-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺 步驟15-溴-噻吩-2-甲酰胺
將5-溴-噻吩-2-甲酸(4.51g，21.78mmol)、3-羥基苯并三唑水合物(3.24g，23.96mmol)、1-乙基-3-(3’-二甲基氨基丙基)碳二亞胺(4.6g，23.9mmol)的DMF(70mL)溶液在室溫下攪拌2小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物冷卻至0℃并且加入35％NH3水溶液(2.2mL)。將混合物在室溫下攪拌過夜。將溶劑真空除去并且將殘留物溶于EtOAc中，用1N NaHCO3，和鹽水洗滌。將有機(jī)層合并，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且濃縮，得到標(biāo)題化合物(3.78g，84％)。HPLC(254nm)Rt 2.46分鐘(96.5％)。
步驟25-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-噻吩-2-甲酰胺
將5-溴-噻吩-2-甲酰胺(0.5g，2.426mmol)、雙(頻哪醇)二硼(678mg，2.669mmol)、PdCl2dppf(59mg，0.072mmol)和KOAc(0.714g，7.28mmol)懸浮于二噁烷(5mL)中，鼓入氮?dú)?分鐘，然后在85℃下加熱過夜。將溶劑真空除去并且將殘留物在乙酸乙酯和水之間分配。將水層再用乙酸乙酯萃取并且將合并的有機(jī)相用鹽水洗滌、經(jīng)MgSO4過濾并且真空蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物(417mg，68％)。
步驟35-{8-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MNa2CO3水溶液(1.37mL，2.06mmol)和二噁烷(2.75mL)中的5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-胺(100mg，0.258mmol)、5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-噻吩-2-甲酰胺(130mg，0.516mmol)和Pd(PPh3)4(74mg，0.0645mmol)制備。蒸發(fā)溶劑后，將殘留物通過硅膠柱色譜法純化，用96:6 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫，得到標(biāo)題化合物(23mg，21％)。LCMSRt 1.94分鐘(97.9％)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)2.26(3H，s)，2.49(4H，m)，3.14(4H，m)，6.98(2H，d)，7.51(1H，br s)，7.85-7.89(2H，m)，8.03(2H，d)，8.10(1H，br s)，8.38(1H，s)，8.82(1H，s)，10.10(1H，s)。LCMSRt 1.94分鐘，(97.9％)，m/z(APCI)435(M+H)+。
化合物125-(5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N-(4-嗎啉代苯基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MNa2CO3(水溶液)(2.84mL，4.26mmol)和二噁烷(8.5mL)中的(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺(0.2g，0.53mmol)、5-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1H-吡唑(222mg，1.06mmol)和Pd(PPh3)4(0.154mg，0.134mmol)制備。將反應(yīng)混合物通過硅膠柱色譜法純化，應(yīng)用98:2和97:3 DCM:NH3(7M在MeOH中)，得到標(biāo)題化合物(15mg，7.5％)。應(yīng)用在MeOH(0.398mL)中的0.1M甲磺酸將其轉(zhuǎn)化為甲磺酸鹽，得到標(biāo)題化合物(15mg)，為淡綠色固體。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)2.41(3H，s，MsOH)，2.46(3H，s)，3.20(4H，m)，3.71(4H，m)，7.11(2H，d)，7.74(1H，s)，7.97(2H，d)，8.15(1H，s)，8.69(1H，s)，9.88(1H，s)。LCMSRt 2.41分鐘(98.3％)，m/z(APCI)377(M+H)+。
化合物154-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-噻吩-2-甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MNa2CO3(水溶液)(2.84mL，4.26mmol)和二噁烷(10mL)中的(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺(0.2g，0.53mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-噻吩-2-甲酰胺(0.27mg，1.06mmol)和Pd(PPh3)4(0.15mg，0.133mmol)制備。將反應(yīng)混合物在水和乙酸乙酯之間分配。形成沉淀，通過過濾收集并且通過硅膠柱色譜法純化，應(yīng)用95:5 DCM:MeOH，得到標(biāo)題化合物(84.1mg，37.4％)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)3.13(4H，m)，3.79(4H，m)，7.01(2H，d)，7.60(1H，br s)，7.91(2H，d)，8.10(2H，s)，8.48(1H，s)，8.66(1H，s)，8.79(1H，s)，9.96(1H，s)。LCMSRt 2.61分鐘(97.1％)，m/z(APCI)422(M+H)+。
化合物165-(5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-胺 步驟15-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1H-吡唑
該化合物可以應(yīng)用化合物86步驟2中描述的方法，應(yīng)用在二甲亞砜(30mL)中的4-溴-5-甲基-1H-吡唑(3g，18.6mmol)、雙(頻哪醇)二硼(8.52g，33.5mmol)、PdCl2dppf(913mg，1.118mmol)和KOAc(5.49mg，55.9mmol)制備。將反應(yīng)混合物通過硅膠柱色譜法純化，用7:3隨后用1:1石油醚:乙酸乙酯洗脫，得到5-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1H-吡唑(3.87g，100％)。
步驟25-(5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在二噁烷(5.4mL)中的(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-胺(132mg，0.340mmol)、5-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1H-吡唑(141mg，0.68mmol)和Pd(PPh3)4(98mg，0.085mmol)和1.5N Na2CO3(1.81mL，2.72mmol)制備。將粗產(chǎn)物通過硅膠柱色譜法純化，用95:5 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫，隨后用乙醚和石油醚研磨，得到標(biāo)題化合物(9mg，7％)，為淡綠色固體。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)2.27(3H，s)，2.38-2.49(7H，m)，3.14(4H，m)，6.97(2H，d)，7.70(1H，s)，7.88(2H，d)，7.99和8.43(1H，br s)，8.68(1H，s)，9.71(1H，s)，12.92和12.98(1H，br s)。
應(yīng)用0.1M甲磺酸(0.231mL)將其轉(zhuǎn)化為甲磺酸鹽，得到目標(biāo)化合物(11mg)。LCMSRt 1.78分鐘(86％)，m/z(APCI)390(M+H)+。
化合物17N-(3-氟-4-嗎啉代苯基)-5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-胺 步驟1(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(3-氟-4-嗎啉-4-基-苯基)-胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟1中描述的方法，應(yīng)用在2-丙醇(6mL)中的5，8-二溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪(0.5g，1.799mmol)、3-氟-4-嗎啉-4-基-苯基胺(0.53g，2.70mmol)和DIPEA(0.470mL，2.70mmol)制備。將反應(yīng)混合物在10％檸檬酸水溶液和DCM之間分配。將有機(jī)相分離并且用水和鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且真空濃縮，得到標(biāo)題化合物(697mg，98％)，將其應(yīng)用于下一步而無需進(jìn)一步純化。LCMSRt 3.52分鐘(98.2％)。
步驟2N-(3-氟-4-嗎啉代苯基)-5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MNa2CO3(1.36mL，2.03mmol)和二噁烷(4mL)中的(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(3-氟-4-嗎啉-4-基-苯基)-胺(100mg，0.254mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1H-吡唑(99mg，0.51mmol)和Pd(PPh3)4(73mg，0.063mmol)制備。將粗物質(zhì)通過硅膠柱色譜法純化，用98:2 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫并且用乙醚和石油醚研磨，得到目標(biāo)化合物(43mg，44％)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)3.01(4H，m)，3.79(4H，m)，7.08(1H，t)，7.79(1H，d)，8.06(1H，d)，8.26(1H，s)，8.38(1H，s)，8.67(1H，s)，8.79(1H，s)，10.03(1H，s)，13.3(1H，br s)。LCMSRt 2.83分鐘(99％)，m/z(APCI)381(M+H)+。
化合物195-(5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-2-嗎啉代苯甲酰胺 步驟15-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-2-嗎啉-4-基-苯甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟1中描述的方法，應(yīng)用在2-丙醇(7mL)中的5，8-二溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪(250mg，0.90mmol)、5-氨基-2-嗎啉-4-基-苯甲酰胺(299mg，1.35mmol)和N，N-二異丙基乙基胺(0.24mL，1.35mmol)制備。用iPrOH和Et2O研磨，得到標(biāo)題化合物(273mg，73％)。
步驟25-(5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-2-嗎啉代苯甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MK2CO3(水溶液)(1.93mL)和二噁烷(3.44mL)中的5-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-2-嗎啉-4-基-苯甲酰胺(140mg，0.33mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1H-吡唑(130mg，0.67mmol)和Pd(PPh3)4(96mg，0.083mmol)制備。將粗物質(zhì)通過硅膠柱色譜法純化，用DCM隨后用99:1、然后97:3、然后95:5 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫，得到標(biāo)題化合物，為白色固體(40.5mg，30％)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)2.96(4H，m)，3.79(4H，m)，7.28(2H，d)，7.45(1H，m)，7.54(1H，br s)，8.01-8.09(1H，dd)，8.25(1H，s)，8.50(1H，d)，8.69(1H，br s)，8.78(1H，s)，9.98(1H，s)，13.3(1H，br s)。LCMSRt 2.23分鐘(96.9％)，m/z(APCI)406(M+H)+。
化合物214-(8-(4-(2-嗎啉代乙氧基)苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)噻吩-2-甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MNa2CO3(1.44mL，2.16mmol)和二噁烷(4.3mL)中的(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基]-胺(113mg，0.27mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-噻吩-2-甲酰胺(136mg，0.537mmol)和Pd(PPh3)4(78mg，0.067mmol)制備。將反應(yīng)混合物通過硅膠柱色譜法純化，用97:3 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫，得到標(biāo)題化合物(65mg，52％)。LCMSRt 1.98分鐘(98.9％)。應(yīng)用在MeOH(1.1385mL)中的0.1M甲磺酸將其轉(zhuǎn)化為甲磺酸鹽，得到標(biāo)題化合物(50mg，95％)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)2.37(3H，s，MsOH)，3.21-3.64(6H，m)，3.76(2H，t)，4.05(2H，d)，4.40(2H，m)，7.09(2H，d)，7.61(1H，br s)，8.02(2H，d)，8.11(2H，s)，8.48(1H，s)，8.67(1H，s)，8.82(1H，s)，9.91(1H，br s)，10.09(1H，s)。LCMSRt 1.98分鐘(97.7％)，m/z(APCI)466(M+H)+。
化合物225-(8-(4-(2-嗎啉代乙氧基)苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)噻吩-2-甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MNa2CO3(1.5mL，2.24mmol)和二噁烷(4.5mL)中的(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基]-胺(118mg，0.28mmol)、5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-噻吩-2-甲酰胺(142mg，0.56mmol)和Pd(PPh3)4(81mg，0.07mmol)制備。將反應(yīng)混合物經(jīng)硅膠柱色譜法純化，用97:3 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫，得到標(biāo)題化合物(33mg，25％)。LCMSRt 2.66分鐘(99％)。應(yīng)用在MeOH(0.569mL)中的0.1M甲磺酸將其轉(zhuǎn)化為甲磺酸鹽，得到標(biāo)題化合物(24mg，86％)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)2.37(3H，s，MsOH)，3.25(2H，m)，3.50-3.64(4H，m)，3.76(2H，t)，4.05(2H，d)，4.40(2H，m)，7.09(2H，d)，7.51(1H，br s)，7.87(1H，d)，7.99-8.05(3H，m)，8.11(1H，br s)，8.37(1H，s)，8.84(1H，s)，9.92(1H，br s)，10.21(1H，s)。LCMSRt 1.95分鐘(98.8％)，m/z(APCI)466(M+H)+。
化合物23(4-嗎啉-4-基-苯基)-[5-(2H-吡唑-3-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺 步驟11-(四氫-吡喃-2-基)-1H-吡唑
在催化劑量的TFA(0.1mL，1.3mmol)的存在下，將1H-吡唑(14.3g，0.21mol)溶于3，4-二氫-2H-吡喃(26.74g，0.32mol)中。將反應(yīng)混合物在95℃下攪拌5小時(shí)，冷卻，然后用NaH(0.2g，5mmol)猝滅。將溶劑除去，得到標(biāo)題化合物，為棕色油狀物(33.3g，99％)，將其應(yīng)用于下一步而無需進(jìn)一步純化。
步驟21H-吡唑-2-硼酸
在1-(四氫-吡喃-2-基)-1H-吡唑(7.6g，52mmol)在THF(50mL)的冷卻溶液(-78℃)中滴加nBuLi(33mL，2.5M在己烷中，82.5mmol)和三異丙基硼烷(12.7mL，55mmol)，將溫度維持在-70℃。將反應(yīng)混合物在-70℃下攪拌1小時(shí)，然后歷經(jīng)4小時(shí)使其達(dá)到室溫。用2M HCl猝滅反應(yīng)后，將溶劑真空除去并且用1M NaOH將pH調(diào)至pH 6。形成沉淀，通過過濾收集并且用甲苯和石油醚洗滌。用乙酸乙酯研磨，得到目標(biāo)化合物，為白色固體(2.7g，48％)，將其應(yīng)用于下一步而無需進(jìn)一步純化。
步驟3(4-嗎啉-4-基-苯基)-[5-(2H-吡唑-3-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在DMF(2mL)中的(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(嗎啉-4-基)-苯基]-胺(100mg，0.267mmol)、1H-吡唑-2-硼酸(60mg，0.535mmol)、Pd(PPh3)4(93mg，0.08mmol)和Na2CO3(88mg，0.80mmol)制備。將反應(yīng)混合物放入試管(stem-tube)中并且在100℃下攪拌18小時(shí)。冷卻后，將混合物用NaHCO3溶液稀釋并且用EtOAc(4×)萃取。將有機(jī)層用水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物，其通過硅膠柱色譜法純化，用DCM、隨后96:4DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫。用乙醚研磨后將標(biāo)題化合物分離(12.4mg，13％)。應(yīng)用0.1M甲磺酸(0.342mL，0.0342mmol)將其轉(zhuǎn)化為甲磺酸鹽，得到目標(biāo)化合物(10mg，81％)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)2.34(3H，s，MsOH)，3.14(4H，m)，3.81(4H，m)，7.04(2H，d)，7.27(1H，m)，7.92(3H，m)，8.24(1H，s)，8.76(1H，s)，9.92(1H，s)。LCMSRt 2.45分鐘(97.6％)，m/z(APCI)363(M+H)+。
化合物284-(8-(4-(4-異丙基哌嗪-1-基)苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)噻吩-2-甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MNa2CO3(1.28mL，1.92mmol)和二噁烷(3.84mL)中的5-溴-N-(6-(4-異丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-胺(100mg，0.24mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-噻吩-2-甲酰胺(121mg，0.48mmol)和Pd(PPh3)4(69mg，0.059mmol)制備。將粗產(chǎn)物通過硅膠柱色譜法純化，用DCM和97:3 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫，得到標(biāo)題化合物(68mg，61％)，為淡綠色固體。應(yīng)用在MeOH(1.47mL，0.147mmol)中的0.1M甲磺酸將其轉(zhuǎn)化為甲磺酸鹽，隨后用DCM和乙醚研磨，得到標(biāo)題化合物(67mg，98.5％)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)1.35(6H，d)，2.34(3H，s，MsOH)，3.00(2H，t)，3.22-3.25(2H，m)，3.56-3.61(3H，m)，3.89(2H，d)，7.09(2H，d)，7.60(1H，br s)，7.97(2H，d)，8.10(2H，s)，8.48(1H，s)，8.67(1H，s)，8.81(1H，s)，9.23(1H，br s)，10.03(1H，s)。LCMSRt2.13分鐘(98.4％)，m/z(APCI)463(M+H)+。
化合物295-(8-(4-嗎啉代苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)呋喃-3-甲酰胺 步驟1[5-(4-氨基甲?；?呋喃-2-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-(4-嗎啉-4-基-苯基)-氨基甲酸叔丁酯
該化合物可以應(yīng)用化合物35步驟3中描述的方法，應(yīng)用在DMF(1mL)中的(4-嗎啉-4-基-苯基)-(5-三丁基錫烷基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-氨基甲酸叔丁酯(137mg，0.199mmol)、5-溴-呋喃-3-甲酰胺(76mg，0.4mmol)和Pd(PPh3)4(23mg，0.020mmol)制備。純化反應(yīng)混合物，用98:2DCM:MeOH和96:4 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫，得到標(biāo)題化合物(33mg，33％)。
步驟25-(8-(4-嗎啉代苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)呋喃-3-甲酰胺
將[5-(4-氨基甲酰基-呋喃-2-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-(4-嗎啉-4-基-苯基)-氨基甲酸叔丁酯(33mg，0.065mmol)在1:1 DCM:TFA(2mL)(2滴水)混合物中的溶液在室溫下攪拌2小時(shí)。加入飽和的Na2CO3后，形成沉淀，通過過濾收集并且用水、乙醚和石油醚洗滌。真空干燥后，將標(biāo)題化合物分離(20mg，76％)。應(yīng)用在MeOH(0.444mL)中的0.1M甲磺酸將其轉(zhuǎn)化為甲磺酸鹽，得到目標(biāo)化合物(19mg，100％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)2.36(3H，s，MsOH)，3.22(4H，m)，3.82-3.89(4H，m)，7.13(2H，d)，7.36(1H，br s)，7.86(1H，s)，7.95(3H，m)，8.17(1H，s)，8.40(1H，s)，8.84(1H，s)，10.17(1H，s)。LCMSRt 2.60分鐘(96.9％)，m/z(APCI)406(M+H)+。
化合物335-(8-(4-嗎啉代苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)異二氫吲哚-1-酮
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MNa2CO3(14.3mL)和二噁烷(40mL)中的(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺(1.0g，2.67mmol)、5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-2，3-二氫-異吲哚-1-酮(參見化合物79中的描述)(1.03g，4.01mmol)和Pd(PPh3)4(0.77g，0.67mmol)制備。通過硅膠柱色譜法純化，用DCM、隨后96:4 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫，得到標(biāo)題化合物(0.895g，79％)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)3.12(4H，m)，3.79(4H，m)，4.51(2H，s)，7.01(2H，d)，7.84(1H，d)，7.92(2H，d)，8.01(1H，s)，8.09(1H，d)，8.23(1H，s)，8.72(1H，s)，8.73(1H，s)，10.02(1H，s)。LCMSRt 2.51分鐘(97.8％)，m/z(APCI)428(M+H)+。
化合物344-(8-(4-嗎啉代苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)呋喃-2-甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MNa2CO3(水溶液)(1.1mL，1.68mmol)和二噁烷(3mL)中的(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺(78mg，0.16mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-呋喃-2-甲酰胺(100mg，0.34mmol)和Pd(PPh3)4(60mg，0.052mmol)制備。將反應(yīng)混合物在水和乙酸乙酯之間分配，將標(biāo)題化合物沉淀并且通過過濾收集。通過硅膠柱色譜法純化，用DCM和95:5 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫，得到標(biāo)題化合物(42mg，65％)。應(yīng)用0.1M甲磺酸(0.82mL)將其轉(zhuǎn)化為甲磺酸鹽，得到固體，將其用乙醚研磨，得到標(biāo)題化合物(30.5mg)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)2.19(3H，s，MsOH)，3.03-3.07(4H，m)，3.67(4H，m)，6.99(2H，br s)，7.43(1H，d)，7.74-7.82(4H，m)，8.06(1H，br s)，8.59(1H，br s)，8.64(1H，s)，9.91(1H，br s)。LCMSRt 2.64分鐘(98.1％)，m/z(APCI)406(M+H)+。
化合物356-(8-(4-嗎啉代苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)-3，4-二氫異喹啉-1(2H)-酮 步驟1(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(4-嗎啉-4-基-苯基)-氨基甲酸叔丁酯
將(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(嗎啉-4-基)-苯基]-胺(300mg，0.800mmol)、二甲基氨基吡啶(10mg，0.08mmol)和二碳酸二叔丁酯(523mg，2.4mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液在50℃下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物在DCM和水之間分配并且將有機(jī)層用1N NaOH和鹽水洗滌。將有機(jī)層經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且真空濃縮，得到粗化合物，將其通過硅膠柱色譜法純化。用98:2 DCM:MeOH洗脫，得到標(biāo)題化合物(352mg，93％)。LCMSRt 3.45分鐘(97.8％)。
步驟2(4-嗎啉-4-基-苯基)-(5-三丁基錫烷基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-氨基甲酸叔丁酯
在(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(4-嗎啉-4-基-苯基)-氨基甲酸叔丁酯(370mg，0.78mmol)的THF(12mL)冷卻(-78℃)溶液中加入在THF(0.78mL，1.56mmol)中的2M異丙基氯化鎂，并且攪拌5分鐘后，加入三丁基氯化錫(0.42，1.56mmol)。將反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌15分鐘并且在室溫下再攪拌15分鐘。除去溶劑后，將殘留物通過硅膠柱色譜法純化，用5:1石油醚:乙酸乙酯、隨后1:1石油醚:乙酸乙酯洗脫。將標(biāo)題化合物分離(105mg，20％)。
步驟3(4-嗎啉-4-基-苯基)-[5-(1-氧代-1，2，3，4-四氫-異喹啉-6-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-氨基甲酸叔丁酯
在脫氣的(4-嗎啉-4-基-苯基)-(5-三丁基錫烷基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.15mmol)和6-溴-3，4-二氫-2H-異喹啉-1-酮的DMF(1mL)溶液中加入四(三苯膦)鈀(O)(17mg，0.015mmol)并且將反應(yīng)混合物在90℃下攪拌過夜。真空除去溶劑后，將殘留物通過硅膠柱色譜法純化。用1:1石油醚:乙酸乙酯和乙酸乙酯洗脫，得到目標(biāo)化合物，為黃色固體(30mg，37％)。
步驟46-(8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)-3，4-二氫-2H-異喹啉-1-酮
將(4-嗎啉-4-基-苯基)-[5-(1-氧代-1，2，3，4-四氫-異喹啉-6-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.055mmol)在TFA:DCM(1滴水)的1:1混合物中的溶液在室溫下攪拌2小時(shí)。將溶劑真空除去并且將殘留物在乙酸乙酯和飽和的NaHCO3(水溶液)之間分配。將水層用乙酸乙酯萃取(2×)。將有機(jī)層合并并且蒸發(fā)，得到殘留物，將其通過硅膠柱色譜法純化，用乙酸乙酯洗脫。將標(biāo)題化合物分離(18mg，75％)并且應(yīng)用在MeOH中的0.1M甲磺酸(0.317mL)將其轉(zhuǎn)化為甲磺酸鹽(16.6mg，97％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)2.36(3H，s MsOH)，3.04(2H，t)，3.21(4H，m)，3.47(2H，t)，3.83(4H，m)，7.11(2H，d)，7.95-8.02(6H，m)，8.05(1H，s)，8.74(1H，s)，10.09(1H，br s)。LCMSRt 2.81分鐘(97.9％)，m/z(APCI)442(M+H)+。
化合物365-(8-(4-(4-異丙基哌嗪-1-基)苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)異二氫吲哚-1-酮
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MNa2CO3(7.7mL)和二噁烷(23mL)中的5-溴-N-(6-(4-異丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-胺(0.6g，1.44mmol)、5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-2，3-二氫-異吲哚-1-酮(0.56g，2.16mmol)和Pd(PPh3)4(0.416g，0.36mmol)制備。通過硅膠柱色譜法純化，用DCM、隨后98:2 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫，得到標(biāo)題化合物(0.36g，53％)，應(yīng)用在MeOH(0.77mL)中的1M甲磺酸將其轉(zhuǎn)化為甲磺酸鹽。用乙醚和DCM研磨后，將標(biāo)題化合物分離，為固體(0.410g)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)1.35(6H，d)，2.35(3H，s，MsOH)，3.04(2H，t)，3.20-3.27(2H，m)，3.56-3.63(3H，m)，3.89(2H，d)，4.52(2H，s)，7.09(2H，d)，7.85(1H，d)，7.95-8.01(3H，m)，8.10(1H，d)，8.24(1H，s)，8.72(1H，s)，8.74(1H，s)，9.27(1H，br s)，10.07(1H，s)。LCMSRt 2.93分鐘(97.9％)，m/z(ES+)469(M+H)+。
化合物37{5-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-2-嗎啉代苯基}甲醇 步驟1(2-嗎啉-4-基-5-硝基-苯基)-甲醇
在2-嗎啉-4-基-5-硝基-苯甲醛(0.8g，3.39mmol)的MeOH(5mL)的冷卻(0℃)溶液中加入NaBH4(0.125g，3.39mmol)并且將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。用水猝滅反應(yīng)后，將溶劑真空除去并且將殘留物溶于乙酸乙酯中并且用鹽水洗滌。將有機(jī)層經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且濃縮，得到標(biāo)題化合物(870mg)，將其應(yīng)用于下一步而無需進(jìn)一步純化。
步驟2(5-氨基-2-嗎啉-4-基-苯基)-甲醇
在(2-嗎啉-4-基-5-硝基-苯基)-甲醇(870mg)的乙醇(40mL)溶液中加入氫氧化鈀(87mg)并且將混合物在Parr-裝置中、在氫氣壓力(10巴)下攪拌4小時(shí)。將反應(yīng)混合物經(jīng)硅藻土521過濾，用乙醇洗滌并且真空濃縮，得到標(biāo)題化合物(640mg，83％)。
步驟33-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-4-嗎啉-4-基-苯基胺
將(5-氨基-2-嗎啉-4-基-苯基)-甲醇(640mg，3.07mmol)、叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(509mg，3.38mmol)和咪唑(250mg，3.68mmol)的二甲基甲酰胺(20mL)溶液在室溫下攪拌過夜。將溶劑真空除去并且將殘留物在水和乙酸乙酯之間分配。將有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且濃縮，得到粗產(chǎn)物。應(yīng)用硅膠柱色譜法純化，用DCM、隨后95:5DCM:MeOH混合物洗脫，得到標(biāo)題化合物，為淡紅色固體(390mg，27％)。
步驟4(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-4-嗎啉-4-基-苯基]-胺
將5，8-二溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪(0.391g，1.41mmol)、3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-4-嗎啉-4-基-苯基胺(0.5g，1.55mmol)和N-乙基二異丙基-胺(0.27mL，1.55mmol)的混合物在90℃下、在2-丙醇(10mL)中加熱8小時(shí)。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干燥并且將殘留物在二氯甲烷和水之間分配。將水相用二氯甲烷萃取兩次。將有機(jī)層合并，用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且真空濃縮，得到標(biāo)題化合物(335mg，46％)。
步驟5[5-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-2-嗎啉-4-基-苯基]-甲醇
將在1M四丁基氟化銨溶液中的(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-4-嗎啉-4-基-苯基]-胺(285mg，0.549mmol)的THF(0.63mL)溶液在室溫下攪拌1小時(shí)。將反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和水之間分配。將有機(jī)層用10％檸檬酸溶液和鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且濃縮，得到標(biāo)題化合物，為膏狀固體(100mg，45％)。
步驟6{5-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-2-嗎啉代苯基}甲醇
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MNa2CO3(1.12mL)和二噁烷(2.0mL)中的[5-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-2-嗎啉-4-基-苯基]-甲醇(85mg，0.21mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1H-吡唑(81mg，0.42mmol)和Pd(PPh3)4(60mg，0.052mmol)制備。將反應(yīng)混合物通過硅膠柱色譜法純化，用95:3 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫，隨后用反相制備HPLC純化。得到標(biāo)題化合物，為淡棕色固體(10mg，12％)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)2.87(4H，m)，3.77(4H，m)，4.63(2H，d)，5.12(1H，t)，7.11(1H，d)，7.84(1H，d)，8.12(1H，s)，8.21(1H，s)，8.39(1H，s)，8.69(1H，s)，8.77(1H，s)，9.78(1H，s)，13.29(1H，br s)。LCMSRt 2.45分鐘(96.3％)，m/z(APCI)393(M+H)+。
化合物41(6-[嗎啉-4-基]吡啶-3-基)-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]胺
該化合物可以應(yīng)用化合物120中描述的方法，在步驟4中應(yīng)用(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(6-嗎啉-4-基-吡啶-3-基)胺制備。LCMSRt＝0.80分鐘(95％)，m/z(ESI)364(M+H)+。
化合物42[6-(4-[環(huán)丙基甲基]哌嗪-1-基)吡啶-3-基]-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]胺
該化合物可以應(yīng)用化合物120中描述的方法，在步驟4中應(yīng)用(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[6-(4-[環(huán)丙基甲基]哌嗪-1-基)吡啶-3-基]胺制備。LCMSRt＝0.80分鐘(95％)，m/z(ESI)417(M+H)+。
化合物43[6-(4-異丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基]-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]胺
該化合物可以應(yīng)用化合物120中描述的方法，在步驟4中應(yīng)用(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[6-(4-異丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基]胺制備。LCMSRt＝0.77分鐘(95％)，m/z(ESI)405(M+H)+。
化合物44[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-{6-[4-(2，2，2-三氟乙基)哌嗪-1-基]吡啶-3-基}胺
該化合物可以應(yīng)用化合物120中描述的方法，在步驟4中應(yīng)用(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-{6-[4-(2，2，2-三氟乙基)哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}胺制備。LCMSRt＝0.95分鐘(95％)，m/z(ESI)445(M+H)+。
化合物46{4-[4-(環(huán)丙基甲基)哌嗪-1-基]苯基}-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]胺
該化合物可以應(yīng)用化合物120步驟4中描述的方法，應(yīng)用(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-{4-[4-環(huán)丙基甲基)哌嗪-1-基]苯基}胺制備。LCMSRt＝1.02(95％)，m/z(ESI)＝444(M+H)+。
化合物474-[8-(6-[嗎啉-4-基]吡啶-3-基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]噻吩-2-甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物167中描述的方法，在步驟4中應(yīng)用(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(6-嗎啉-4-基-吡啶-3-基)胺制備。LCMSRt＝0.85分鐘(95％)，m/z(ESI)423(M+H)+。
化合物48(5-苯并[b]噻吩-3-基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(4-嗎啉-4-基苯基)胺
該化合物可以應(yīng)用化合物120中描述的方法，在步驟4中應(yīng)用(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(4-嗎啉-4-基苯基)胺和4，4，5，5-四甲基-2-苯并[b]噻吩-3-基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷制備。LCMSRt 0.84分鐘(95％)，m/z(ESI)402(M+H)+。
化合物50(4-嗎啉-4-基苯基)-(5-噻吩-3-基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)胺
該化合物可以應(yīng)用化合物120中描述的方法，在步驟4中應(yīng)用(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(4-嗎啉-4-基苯基)胺和4，4，5，5-四甲基-2-噻吩-3-基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷制備。LCMSRt 1.19分鐘(95％)，m/z(ESI)379(M+H)+。
化合物51[4-(4-異丙基哌嗪-1-基)苯基]-(5-噻吩-3-基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)胺
該化合物可以應(yīng)用化合物50中描述的方法，在最后一步中應(yīng)用(5-溴[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(4-異丙基哌嗪-1-基)-苯基]胺制備。LCMSrt＝1.11分鐘(95％)，m/z(ESI)420(M+H)+。
化合物525-(5-乙基-1H-吡唑-4-基)-N-(4-嗎啉代苯基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-胺 步驟13-乙基-1H-吡唑
在攪拌的1-三甲基硅烷基-戊-1-炔-3-酮(0.5g，3.25mmol)和肼硫酸鹽(0.56g，4.33mmol)的乙醇(15mL)溶液中加入飽和的Na2CO3(0.52g，4.87mmol)并且將混合物在90℃下回流5小時(shí)。將反應(yīng)混合物用水和鹽水稀釋并且用乙醚萃取(3x)。將有機(jī)層合并，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過硅膠柱色譜法純化。用90:10石油醚:乙酸乙酯洗脫，得到標(biāo)題化合物(0.1196g，36％)。
步驟24-溴-5-乙基-1H-吡唑
在攪拌的3-乙基-1H-吡唑(0.114g，1.186mmol)的乙酸(2mL)溶液中加入溴(0.061mL，1.186mmol)并且將混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物用飽和的NaHCO3堿化，并且用乙酸乙酯萃取(3×)。將有機(jī)層合并，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且濃縮，得到標(biāo)題化合物(0.180g，87％)。將化合物應(yīng)用于下一步而無需進(jìn)一步純化。
步驟34-溴-5-乙基-1-(四氫-吡喃-2-基)-1H-吡唑和4-溴-3-乙基-1-(四氫-吡喃-2-基)-1H-吡唑
在催化量的TFA(0.001mL，0.00103mmol)的存在下，將4-溴-5-乙基-1H-吡唑(0.179g，1.032mmol)溶于3，4-二氫-2H-吡喃(0.28mL，3.098mmol)。將反應(yīng)混合物在90℃下攪拌3小時(shí)，冷卻，然后用NaH(1.5mg，0.0061mmol)猝滅。除去溶劑后，將殘留物通過硅膠柱色譜法純化，用90:10石油醚-乙酸乙酯混合物洗脫。將含有預(yù)期化合物的級(jí)分收集并且真空濃縮，得到標(biāo)題化合物(175mg，66％)。
步驟45-乙基-1-(四氫-吡喃-2-基)-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1H-吡唑和3-乙基-1-(四氫-吡喃-2-基)-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1H-吡唑
該化合物可以應(yīng)用化合物86步驟2中描述的方法，應(yīng)用在二甲亞砜(2mL)中的4-溴-5-乙基-1-(四氫-吡喃-2-基)-1H-吡唑和4-溴-3-乙基-1-(四氫-吡喃-2-基)-1H-吡唑(168mg，0.65mmol)、雙(頻哪醇)二硼(331mg，1.3mmol)、PdCl2dppf(53mg，65μmol)和KOAc(190mg，1.95mmol)制備。將反應(yīng)混合物通過硅膠柱色譜法純化，用90:10石油醚:乙酸乙酯洗脫，得到標(biāo)題化合物(61.1mg，31％)。
步驟5{5-[5-乙基-1-(四氫-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基}-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺和{5-[3-乙基-1-(四氫-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基}-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MNa2CO3(水溶液)(0.45mL，0.6mmol)和二噁烷(2.0mL)中的(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺(0.032g，0.085mmol)、5-乙基-1-(四氫-吡喃-2-基)-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-IH-吡唑和3-乙基-1-(四氫-吡喃-2-基)-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1H-吡唑(0.52mg，0.17mmol)和Pd(PPh3)4(0.025mg，0.021mmol)制備。將反應(yīng)混合物通過硅膠柱色譜法純化，用1:1石油醚:乙酸乙酯、隨后用1:4石油醚:乙酸乙酯洗脫，得到標(biāo)題化合物(45mg)。
步驟65-(5-乙基-1H-吡唑-4-基)-N-(4-嗎啉代苯基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-胺
將{5-[5-乙基-1-(四氫-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基}-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺和{5-[3-乙基-1-(四氫-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基}-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺(40mg，0.077mmol)和濃HCl(0.3mL)的甲醇(10mL)溶液在室溫下攪拌5小時(shí)。除去溶劑后，將固體殘留物在乙酸乙酯和飽和的NaHCO3之間分配。將未溶解的固體通過過濾收集，用水、乙醚和石油醚洗滌并且干燥，得到標(biāo)題化合物(5mg，17％)。應(yīng)用0.1M甲磺酸(0.128mL)將其轉(zhuǎn)化為甲磺酸鹽，得到標(biāo)題化合物(5.6mg，89％)，為固體。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)1.13(3H，m)，2.29(3H，s，MsOH)，2.74(2H，m)，3.29(4H，m)，3.77(4H，m)，7.06(2H，m)，7.62(1H，s)，7.89(2H，d)，8.00(1H，s)，8.61(1H，s)，9.83(1H，s)。LCMSRt 2.69分鐘(98.4％)，m/z(APCI)391(M+H)+。
化合物536-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-1，1-二氧代-1，2-二氫-1λ6-苯并[d]異噻唑-3-酮 步驟11，1-二氧代-6-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1，2-二氫-1λ6-苯并[d]異噻唑-3-酮
該化合物可以應(yīng)用化合物86步驟2中描述的方法，應(yīng)用在二噁烷(10mL)中的6-溴-1，1-二氧代-1，2-二氫-1λ6-苯并[d]異噻唑-3-酮(0.5，1.9mmol)、雙(頻哪醇)二硼(0.53g，2.1mmol)、PdCl2dppf(0.047g，0.058mmol)和KOAc(0.56g，5.7mmol)制備。將溶劑真空除去并且將殘留物在DCM和水之間分配。將有機(jī)層用飽和的NaHCO3和2M HCl洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物(990mg，169％)，將其應(yīng)用于下一步而無需進(jìn)一步純化。
步驟2(4-嗎啉-4-基-苯基)-[5-(1，1，3-三氧代-2，3-二氫-1H-1λ6-苯并[d]異噻唑-6-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-氨基甲酸叔丁酯
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MNa2CO3(2mL，3mmol)和二噁烷(6mL)中的(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(4-嗎啉-4-基-苯基)-氨基甲酸叔丁酯(170mg，0.36mmol)、1，1-二氧代-6-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1，2-二氫-1λ6-苯并[d]異噻唑-3-酮(374mg，0.72mmol)和Pd(PPh3)4(100mg，0.082mmol)制備。反應(yīng)混合物通過硅膠柱色譜法純化，用1:1石油醚:乙酸乙酯，得到仍然不純的化合物。第二個(gè)硅膠柱色譜法，用10:1DCM:MeOH洗脫，得到標(biāo)題化合物(91mg，44％)。
步驟36-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-1，1-二氧代-1，2-二氫-1λ6-苯并[d]異噻唑-3-酮
將在4M HCl(2.5mL)中的(4-嗎啉-4-基-苯基)-[5-(1，1，3-三氧代-2，3-二氫-1H-1λ6-苯并[d]異噻唑-6-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.173mmol)的二噁烷懸浮液在室溫下攪拌2小時(shí)。將溶劑真空除去并且將殘留物用DCM、乙醚和石油醚研磨，得到標(biāo)題化合物(84mg，100％)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)3.25(4H，m)，3.85(4H，m)，7.20(2H，d)，7.88(2H，d)，8.16(1H，d)，8.24(1H，s)，8.58(1H，d)，8.82(2H，s)，8.96(1H，s)，10.31(1H，s)。LCMSRt 2.31分鐘(95.7％)，m/z(APCI)478(M+H)+。
化合物544-{8-[6-(4-[環(huán)丙基甲基]哌嗪-1-基)-吡啶-3-基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}噻吩-2-甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物120中描述的方法，在步驟4中應(yīng)用(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[6-(4-[環(huán)丙基甲基]哌嗪-1-基)吡啶-3-基]胺制備。LCMSRt＝0.85分鐘(95％)，m/z(ESI)476(M+H)+。
化合物554-{8-[6-(4-異丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}噻吩-2-甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物167中描述的方法，在步驟4中應(yīng)用(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[6-(4-異丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基]胺制備。LCMSRt＝0.82分鐘(95％)，m/z(ESI)464(M+H)+。
化合物564-(8-{6-[4-(2，2，2-三氟乙基)哌嗪-1-基]-吡啶-3-基氨基}-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)噻吩-2-甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物167中描述的方法，在步驟4中應(yīng)用(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-{6-[4-(2，2，2-三氟乙基)哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}胺制備。LCMSRt＝0.99分鐘(95％)，m/z(ESI)504(M+H)+。
化合物574-(8-{4-[4-(2，2，2-三氟乙基)哌嗪-1-基]-苯基氨基}-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)噻吩-2-甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物58中描述的方法，應(yīng)用(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-{4-[4-(2，2，2-三氟乙基)哌嗪-1-基]苯基}胺制備。LCMSRt＝1.07分鐘(95％)，m/z(ESI)503(M+H)+。
化合物584-{8-[4-(4-(環(huán)丙基甲基)哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}噻吩-2-甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物46中描述的方法，應(yīng)用2-(氨基羰基)噻吩-4-硼酸制備。LCMSRt＝0.93(95％)，m/z(ESI)475(M+H)+。
化合物59[4-(4-環(huán)丙基哌嗪-1-基)苯基]-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]胺
該化合物可以應(yīng)用化合物46中描述的方法，應(yīng)用(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(4-環(huán)丙基哌嗪-1-基)-苯基]胺制備。LCMSRt＝0.84(95％)，m/z(ESI)402(M+H)+。
化合物60[6-(4-環(huán)丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基]-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]胺
該化合物可以應(yīng)用化合物120中描述的方法，在步驟4中應(yīng)用(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[6-(4-環(huán)丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基]胺制備。LCMSRt＝0.76分鐘(95％)，m/z(ESI)403(M+H)+。
化合物614-[8-(4-嗎啉-4-基苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]噻唑-2-甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物73中描述的方法，在步驟3中應(yīng)用氨(7M在MeOH中)制備。LCMSRt＝1.00分鐘(95％)，m/z(ESI)423(M+H)+。
化合物624-{8-[4-(4-異丙基哌嗪-1-基)苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}噻唑-2-甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物61中描述的方法，在最后一步中應(yīng)用(5-溴[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(4-異丙基哌嗪-1-基)-苯基]胺制備。LCMSrt＝0.96分鐘(95％)，m/z(ESI)464(M+H)+。
化合物634-(8-{4-[1-(2，2，2-三氟乙基)哌啶-4-基]苯基氨基}-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)噻吩-2-甲酰胺 步驟11-三氟乙?；?4-(4-硝基苯基)哌啶
將三乙胺(1.0mL，7.3mmol)和4-(4-硝基苯基)哌啶(1.0g，4.8mmol)在DCM(25mL)中、在0℃、N2下攪拌并且加入三氟乙酸酐(0.81mL，5.8mmol)。將混合物攪拌3天，將溫度溫至室溫。然后將溶液用DCM(50mL)稀釋并且用水(2×15mL)、NaHCO3(50％飽和水溶液，2×15mL)和鹽水(15mL)洗滌。將溶劑經(jīng)MgSO4干燥并且蒸發(fā)，得到預(yù)期化合物(1.46g，4.66mmol)。
步驟21-(2，2，2-三氟乙基)-4-(4-硝基苯基)哌啶
將1-三氟乙?；?4-(4-硝基苯基)哌啶(1.42g，4.7mmol)的THF(15mL)溶液在裝有冷凝器和恒壓加料漏斗的25mL2-頸燒瓶中攪拌。將系統(tǒng)用N2沖洗，加入NaBH4(210mg，5.6mmol)并且將燒瓶冷卻至0℃。然后歷經(jīng)20分鐘滴加碘(600mg，2.3mmol)的THF(5mL)溶液，之后將加樣漏斗移去并且將混合物在回流下加熱過夜。將產(chǎn)生的淡黃色懸浮液冷卻至室溫并且小心加入MeOH(1.5mL)，引起氣體劇烈釋放。蒸發(fā)溶劑，得到標(biāo)題化合物，將其應(yīng)用而無需進(jìn)一步純化。
步驟34-[1-(2，2，2-三氟乙基)哌啶-4-基]苯基胺
將甲酸銨(1.38g，22mmol)和10％Pd/C(230mg，0.2mmol)加入到1-(2，2，2-三氟乙基)-4-(4-硝基苯基)哌啶(1.26g，4.4mmol)的EtOH(10mL)和EtOAc(10mL)溶液中。將懸浮液在回流下加熱24小時(shí)，4小時(shí)和8小時(shí)后進(jìn)一步加入部分甲酸胺(2g)。將混合物通過硅藻土過濾并且蒸發(fā)，得到橙色固體。將其在DCM(40mL)和水(20mL)之間分配并且將各層分離。將水相用DCM(2×20mL)萃取并且將合并的有機(jī)層經(jīng)MgSO4干燥并且減壓蒸發(fā)，得到N-{4-[1-(2，2，2-三氟乙基)哌啶-4-基]苯基}甲酰胺，為淡橙色固體(980mg)。
將甲酰胺的MeOH(20mL)溶液在室溫下攪拌并且加入HCl(濃的，1mL)。將深紫色溶液在回流下加熱1小時(shí)，冷卻并且將MeOH蒸發(fā)。將殘留物用水(20mL)攪拌并且加入NaHCO3(飽和的水溶液)直到鼓泡停止。將混合物用DCM(20mL，2×10mL)萃取并且將合并的萃取物經(jīng)MgSO4干燥并且減壓蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物，為橙色固體(870mg)。
應(yīng)用類似于化合物89中所用的方法，將該物質(zhì)用于制備4-(8-{4-[1-(2，2，2-三氟乙基)哌啶-4-基]苯基氨基}-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)噻吩-2-甲酰胺。

LCMSRt＝2.11分鐘(100％)，m/z(ESI)502(M+H)+。
化合物655-(8-(4-(2-嗎啉代乙氧基)苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)異二氫吲哚-1-酮 步驟1(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基]-胺
根據(jù)化合物6步驟1中描述的方法，將在2-丙醇(6mL)中的5，8-二溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪(0.5g，1.799mmol)、4-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基胺(0.6g，4.5mmol)和N，N-二異丙基乙基胺(0.47mL，2.7mmol)在95℃下攪拌過夜。蒸發(fā)溶劑后，將殘留物溶于DCM中并且用水(2×)和鹽水洗滌。將有機(jī)層經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且真空濃縮，得到油狀物，將其通過硅膠柱色譜法純化。用97:3 DCM:MeOH混合物洗脫，得到標(biāo)題化合物(650mg，86％)，為淡黃色固體。LCMSRt 2.06分鐘(97.7％)。
步驟25-(8-(4-(2-嗎啉代乙氧基)苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)異二氫吲哚-1-酮
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MNa2CO3(1.02mL，1.53mmol)和二噁烷(3mL)中的(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基]-胺(80mg，0.19mmol)、5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-2，3-二氫-異吲哚-1-酮(74mg，0.29mmol)和Pd(PPh3)4(55mg，0.047mmol)制備。將反應(yīng)混合物通過硅膠柱色譜法純化，用DCM和97:3 DCM:NH3(7M在MeOH中)混合物洗脫。應(yīng)用乙醚研磨后，將標(biāo)題化合物分離，為固體(61.9mg，69％)。應(yīng)用在MeOH中的1M甲磺酸(0.134mL)將物質(zhì)轉(zhuǎn)化為甲磺酸鹽，得到標(biāo)題化合物(57.1mg)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)2.40(3H，s，MsOH)，3.25-3.38(2H，m)，3.60-3.78(4H，m)，3.84(2H，t)，4.09(2H，d)，4.45(2H，m)，4.56(2H，s)，7.14(2H，d)，7.90(1H，d)，8.05-8.19(4H，m)，8.28(1H，s)，8.76(1H，br s)，8.79(1H，s)，10.00(1H，br s)，10.16(1H，s)。LCMSRt1.98分鐘(99.1％)，m/z(APCI)472(M+H)+。
化合物67N-(2-氟-4-嗎啉代苯基)-5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-胺 步驟1(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(2-氟-4-嗎啉-4-基-苯基)-胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟1中描述的方法，應(yīng)用在2-丙醇(2mL)中的5，8-二溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪(0.105g，0.89mmol)、2-氟-4-嗎啉-4-基-苯基胺(93mg，0.474mmol)、DIPEA(0.123mL，0.706mmol)和1，4-二氮雜二環(huán)并[2.2.2]辛烷(53mg，0.472mmol)制備。將反應(yīng)混合物在DCM和10％檸檬酸水溶液之間分配，將有機(jī)層分離并且用10％檸檬酸溶液、水和鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且真空濃縮。將標(biāo)題化合物分離，為淡紅色固體(77mg，42％)并且將其應(yīng)用于下一步而無需進(jìn)一步純化。LCMSRt 3.48分鐘(89％)。
步驟2N-(2-氟-4-嗎啉代苯基)-5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5NNa2CO3(1.09mL，1.62mmol)和二噁烷(3.25mL)中的(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(2-氟-4-嗎啉-4-基-苯基)-胺(80mg，0.203mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1H-吡唑(79mg，0.406mmol)和Pd(PPh3)4(59mg，0.051mmol)制備。將反應(yīng)混合物通過硅膠柱色譜法純化，用97:3 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫。將含有產(chǎn)物的級(jí)分合并并且真空蒸發(fā)，得到固體，將其用乙醚和石油醚研磨，得到標(biāo)題化合物(29mg，38％)。LCMSRt 2.90分鐘(96％)。
應(yīng)用0.1M甲磺酸的MeOH(0.762mL，0.076mmol)溶液將其轉(zhuǎn)化為甲磺酸鹽，得到標(biāo)題化合物(35mg)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)2.36(3H，s，MsOH)，3.19(4H，m)，3.79(4H，m)，6.84-6.94(2H，m)，7.54(1H，t)，8.08(1H，s)，8.48(2H，s)，8.76(1H，s)，9.31(1H，s)。LCMSRt 2.91分鐘(95.4％)，m/z(APCI)381(M+H)+。
化合物70(4-(8-(4-嗎啉代苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)-1H-吡唑-5-基)甲醇 步驟14-溴-5-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-1H-吡唑
將(4-溴-2H-吡唑-3-基)-甲醇(0.64mg，3.63mmol)、叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(0.82g，5.45mmol)和咪唑(0.42g，6.18mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物用50:50乙醚:乙酸乙酯混合物稀釋并且用水(3×)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且濃縮。將殘留物通過硅膠柱色譜法純化，用80:20石油醚:乙酸乙酯洗脫，得到標(biāo)題化合物(1.035g，98％)。
步驟24-溴-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-1-(四氫-吡喃-2-基)-1H-吡唑和4-溴-5-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-1-(四氫-吡喃-2-基)-1H-吡唑
在催化量的TFA(0.0026mL，0.035mmol)的存在下，將4-溴-5-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-1H-吡唑(1g，3.45mmol)溶于3，4-二氫-2H-吡喃(0.944mL，10.34mmol)中。將反應(yīng)混合物在90℃下攪拌18小時(shí)，冷卻，然后用NaH(4.69mg，0.206mmol)猝滅。除去溶劑后，將殘留物通過硅膠柱色譜法純化，用95:5石油醚-乙酸乙酯、隨后用90:10石油醚-乙酸乙酯混合物洗脫。將含有預(yù)期化合物的級(jí)分收集并且真空濃縮，得到4-溴-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-1-(四氫-吡喃-2-基)-1H-吡唑和4-溴-5-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-1-(四氫-吡喃-2-基)-1H-吡唑(724mg，56％)。
步驟3{5-[5-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-1-(四氫-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基}-(4-嗎啉-4-基-苯基)-氨基甲酸叔丁酯和{5-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-1-(四氫-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基}-(4-嗎啉-4-基-苯基)-氨基甲酸叔丁酯
該化合物可以應(yīng)用化合物35步驟3中描述的方法，應(yīng)用在DMF(4mL)中的(4-嗎啉-4-基-苯基)-(5-三丁基錫烷基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-氨基甲酸叔丁酯(210mg，0.30mmol)、4-溴-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-1-(四氫-吡喃-2-基)-1H-吡唑和4-溴-5-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-1-(四氫-吡喃-2-基)-1H-吡唑(170mg，0.45mmol)和四(三苯膦)鈀(0)(35mg，0.030mmol)制備。將粗化合物通過硅膠柱色譜法純化，用7:3然后用3:7 石油醚:乙酸乙酯洗脫，得到標(biāo)題化合物(62.5mg)。
步驟4(4-(8-(4-嗎啉代苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)-1H-吡唑-5-基)甲醇
將{5-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-1-(四氫-吡喃-3-基)-1H-吡唑-4-基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基}-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺和{5-[5-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-1-(四氫-吡喃-3-基)-1H-吡唑-4-基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基}-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺(53.6mg，0.077mmol)和濃HCl(0.27mL)的MeOH(5mL)溶液在室溫下攪拌2小時(shí)。除去溶劑后，將殘留物在乙酸乙酯和水之間分配。將水層用乙酸乙酯(3×)洗滌并且將合并的有機(jī)層經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且濃縮。將殘留物溶于在二噁烷中的4MHCI中，真空濃縮，然后在乙酸乙酯和飽和的NaHCO3之間分配。將有機(jī)層經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且真空濃縮，得到粗化合物，將其通過硅膠柱色譜法純化。用EtOAc和95:5 DCM:MeOH混合物洗脫，將標(biāo)題化合物分離(5.4mg，18％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)3.11(4H，m)，3.79(4H，m)，4.65(2H，d)，5.25和5.53(1H，br s)，6.99(2H，m)，7.84和8.51(1H，br s)，7.92(2H，d)，8.12(1H，d)，8.70(1H，s)，9.74(1H，s)，13.12和13.23(1H，br s)。LCMSRt 2.26分鐘(96.2％)，m/z(APCI)393(M+H)+。
化合物734-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-噻唑-2-甲基甲酰胺 步驟12，4-二溴噻唑
將噻唑烷酮(3.43g，29.32mmol)和POBr3(25g，87.96mmol，3當(dāng)量)在氮?dú)庀伦鳛楣腆w混合。然后在攪拌下將反應(yīng)混合物加熱至110℃達(dá)3小時(shí)，引起深色漿液形成。然后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并且非常小心地加入水/冰(200mL)混合物，將產(chǎn)生的灰色懸浮液用乙醚(3×50mL)萃取，將有機(jī)層合并，通過硅膠填料過濾并且蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物，為橙色油狀物(4g，57％)，將其應(yīng)用于下一步而無需進(jìn)一步純化。
步驟24-溴噻唑-2-甲酸乙酯
在0℃下，在二溴噻唑(1g，4.15mmol)的THF(15mL)溶液中滴加iPrMgCl的THF(2M，2.3mL，4.57mmol，1.10當(dāng)量)溶液。將反應(yīng)在0℃下攪拌0.25小時(shí)。在產(chǎn)生的橙色溶液中通過套管加入在THF(5mL)中的碳酸二乙酯(3mL)。將產(chǎn)生的綠色溶液在室溫下進(jìn)一步攪拌0.5小時(shí)，將反應(yīng)通過加入飽和的NH4Cl猝滅。將標(biāo)題化合物通過LC純化，用6/4環(huán)己烷/DCM作為洗脫液，得到514.2mg(52％)標(biāo)題化合物，為淡黃色粉末狀固體。
步驟34-溴噻唑-2-甲基甲酰胺
將4-溴噻唑-2-甲酸乙酯(500mg，2.13mmol)溶于甲醇(1mL)中并且加入在甲醇(10mL)中的甲基胺。將混合物在室溫下攪拌過夜。在減壓下蒸發(fā)溶劑，得到標(biāo)題化合物，為黃色固體。LCMSRt 0.92分鐘(100％)m/z(ESI)219/221(M+H)+。
步驟44-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-噻唑-2-甲基甲酰胺
以類似于化合物6步驟3中描述的方法，將4-溴噻唑-2-甲基甲酰胺轉(zhuǎn)化為硼化物(boronate)。然后應(yīng)用化合物120步驟4中描述的方法制備標(biāo)題化合物。LCMSRt＝1.06分鐘(95％)，m/z(ESI)437(M+H)+。
化合物795-(8-(6-(4-異丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)異二氫吲哚-1-酮 步驟14-溴-2-溴甲基-苯甲酸甲酯
將4-溴-2-甲基-苯甲酸(4.6g，21.39mmol)溶于在MeOH中的2 M HCl中并且回流3小時(shí)。將溶劑蒸發(fā)，得到4-溴-2-甲基-苯甲酸甲酯(4.24g，86％)將該中間體(18.51mmol)溶于四氯化碳(100mL)中并且加入N-溴琥珀酰亞胺(NBS)(5.57g，24.06mmol)。然后加入AIBN(122mg，740μmol)并且將混合物用氮?dú)獯祾?分鐘。然后將反應(yīng)混合物回流4小時(shí)。冷卻至室溫后，將反應(yīng)混合物過濾并且將濾液蒸發(fā)。將殘留物通過快速色譜法純化(硅膠，2:1石油醚/乙酸乙酯)，得到標(biāo)題化合物(3.42g，60％)。
步驟25-溴-2，3-二氫-異吲哚-1-酮
將4-溴-2-溴甲基-苯甲酸甲酯(0.5g，16.2mmol)用甲醇氨(10mL，在MeOH中的7N NH3)在90℃下處理5分鐘。冷卻至室溫后形成沉淀，通過過濾收集并且用少量甲醇洗滌，得到標(biāo)題化合物，為無色固體(224mg，65％)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)4.41(2H，s)，7.64(1H，d)，7.70(1H，d)，7.87(1H，s)，8.67(1H，br s)。LCMSRt 2.49分鐘(99.6％)，m/z(APCI)212(M+H)+。
步驟35-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-2，3-二氫-異吲哚-1-酮
將5-溴-2，3-二氫-異吲哚-1-酮(230mg，1.08mmol)、雙(頻哪醇)二硼(300mg，1.18mmol)、PdCl2dppf(25mg，31μmol)和KOAc(320mg，3.26mmol)懸浮于二噁烷(4mL)中，用氮?dú)獯祾?分鐘，然后在85℃下加熱過夜。將溶劑真空除去并且將殘留物在乙酸乙酯和水之間分配。將水層用乙酸乙酯(3×)萃取并且將合并的有機(jī)相用鹽水洗滌一次，通過MgSO4過濾并且蒸發(fā)。將固體殘留物用己烷研磨并且真空干燥，得到標(biāo)題化合物(185mg，66％)，為灰色固體。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)1.37(12H，s)，4.45(2H，s)，6.38(1H，br s)，7.87(1H，d)，7.93(2H，m)。
步驟41-異丙基-4-(5-硝基-吡啶-2-基)-哌嗪
在2-氯-5-硝基吡啶(2.5g，15.7mmol)的THF(25mL)溶液中加入1-異丙基哌嗪(2.01g，15.7mmol)和K2CO3(3.25g，23.6mmol)。將反應(yīng)混合物在50℃下攪拌4小時(shí)，然后在70℃下攪拌過夜。將溶劑真空除去并且將產(chǎn)生的橙色固體用10:1石油醚-乙酸乙酯研磨。將分離的化合物(3.7g，94％)用于下一步而無需進(jìn)一步純化。
步驟56-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基-胺
將1-異丙基-4-(5-硝基-吡啶-2-基)-哌嗪(0.9g，3.6mmol)溶于MeOH(20mL)中并且加入二氯化錫(II)二水合物(4g，18mmol)。應(yīng)用水浴將混合物冷卻并且加入濃HCl(4mL)。將反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。除去甲醇后，將產(chǎn)生的淡黃色溶液用濃NaOH(pH 11)堿化并且形成白色沉淀物。將固體通過過濾收集并且用乙醚(5×)萃取。將有機(jī)層合并，經(jīng)MgSO4干燥，過濾，真空濃縮，得到橙色油狀物，其放置后結(jié)晶，得到橙色固體(0.68g，86％)。
步驟65-溴-8-(6-(4-異丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟1中描述的方法，應(yīng)用在2-丙醇(2mL)中的5，8-二溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪(0.188g，0.68mmol)、6-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基胺(0.180g，0.816mmol)和N-乙基二異丙基-胺(0.20mL，1.02mmol)制備。將粗物質(zhì)通過硅膠柱色譜法純化，用DCM、隨后用95:5 DCM:MeOH，得到標(biāo)題化合物，為淡棕色固體(260mg，92％)。
步驟55-(8-(6-(4-異丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)異二氫吲哚-1-酮
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MNa2CO3(0.64mL)和二噁烷(2mL)中的5-溴-N-(6-(4-異丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-胺(50mg，0.12mmol)、5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-2，3-二氫-異吲哚-1-酮(56mg，0.216mmol)和Pd(PPh3)4(35mg，0.03mmol)制備。將粗產(chǎn)物通過硅膠柱色譜法純化，用95:5 DCM:MeOH、隨后用90:10 DCM:MeOH洗脫。用10:1正己烷:DCM混合物研磨后獲得標(biāo)題化合物(19mg，34％)。應(yīng)用0.1M甲磺酸(0.35mL)將其轉(zhuǎn)化為甲磺酸鹽，得到標(biāo)題化合物，為黃色固體(20mg，69％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)1.34(6H，d)，2.36(6H，s，2×MsOH)，3.16-3.21(5H，m)，3.57(2H，m)，4.45(2H，d)，4.52(2H，s)，7.11(1H，d)，7.86(1H，d)，8.01(1H，s)，8.10(1H，d)，8.24-8.29(2H，m)，8.72(1H，s)，8.76(1H，s)，8.82(1H，d)，9.39(1H，br s)，10.21(1H，s)。LCMSRt 1.92分鐘(98.5％)，m/z(APCI)470(M+H)+。
化合物803-[8-(4-嗎啉-4-基苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-苯并[b]噻吩-7-甲酰胺 步驟11-溴-2-(2-乙氧基乙烯基硫烷基)苯
在氮?dú)庀?，?-溴苯硫酚(10.50g，55.87mmol)的干燥的DMF(50mL)溶液中小心地加入碳酸鉀(9.2mL，61.46mmol，1.10當(dāng)量)。一旦鼓泡減少，在混合物中加入2-溴-1，1-二乙氧基乙烷(8.46g，61.46mmol，1.10當(dāng)量)并且在室溫下攪拌2小時(shí)。將產(chǎn)生的懸浮液傾倒入200mL的冰水中并且用乙醚(3×50mL)萃取。將有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，溶劑除去后得到標(biāo)題化合物，為粘稠的橙色油狀物，將其應(yīng)用而無需進(jìn)一步純化。
步驟27-溴苯并[b]噻吩
將1-溴-2-(2-乙氧基乙烯基硫烷基)苯溶于氯苯(50mL)中并且將溶液加熱至70℃。然后小心地加入PPA(10.5mL)并且將兩相混合物在150℃下加熱過夜。將產(chǎn)生的深色漿液冷卻并且將上層溶劑用移液管除去。在殘留物中加入氯苯(15mL)并且加熱至150℃達(dá)30分鐘。將溶劑再次除去并且將殘留物用少量二氯甲烷洗滌直到洗滌液澄清。將有機(jī)級(jí)分合并并且經(jīng)硅藻土過濾，得到澄清黃色溶液。真空濃縮，隨后進(jìn)行LC，用環(huán)己烷作為洗脫液，產(chǎn)生標(biāo)題化合物，為粘稠的無色油狀物(1.21g，35％)。
步驟3苯并[b]噻吩-7-甲酸乙酯
在氮?dú)庀拢瑢?-溴苯并[b]噻吩(500mg，2.36mmol)溶于干燥的THF(5.0mL)中。加入鎂屑(530mg，2.83mmol，1.20當(dāng)量)并且將產(chǎn)生的混合物在回流下加熱直到鎂溶解出現(xiàn)。將產(chǎn)生的混濁黃色溶液冷卻至室溫并且加入碳酸二乙酯(2mL，過量)并且繼續(xù)攪拌1小時(shí)，加入氯化銨(10％水溶液)。將產(chǎn)生的混合物在DCM和水之間分配并且將水層用DCM萃取。將有機(jī)級(jí)分合并，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥并且吸附到二氧化硅上。通過LC純化，用8/2環(huán)己烷/二氯甲烷作為洗脫液，得到標(biāo)題化合物，為淡橙色油狀物(346.2mg，71％)。
步驟4苯并[b]噻吩-7-甲酸
在苯并[b]噻吩-7-甲酸乙酯(1.0g，48mmol)的甲醇(10mL)和水(10mL)溶液中加入氫氧化鈉(5g，過量)。將溶液在室溫下攪拌30分鐘，所用的酯被消耗。將反應(yīng)混合物通過加入6M HCl溶液調(diào)節(jié)至pH 1，并且用DCM萃取。將合并的有機(jī)層通過硅膠填料過濾，得到標(biāo)題化合物，為黃色固體(505.2mg，59％)。
步驟5苯并[b]噻吩-7-甲酰胺
將苯并[b]噻吩-7-甲酸(505mg，2.84mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液在室溫下攪拌并且加入亞硫酰氯(669mg，5.68mmol，2.0當(dāng)量)，隨后加入DMF(0.06mL)，引起氣體放出。將產(chǎn)生的溶液在室溫下攪拌1小時(shí)。然后在混合物中小心地加入氨水(10mL)，引起劇烈的氣體放出。然后將產(chǎn)生的混合物用水(50mL)稀釋，并且通過加入飽和的NaHCO3(水溶液)將pH調(diào)節(jié)至中性。將水層用DCM萃取，并且將有機(jī)層合并并且經(jīng)Na2SO4干燥。在減壓下蒸發(fā)溶劑，得到標(biāo)題化合物(純度81％)，為黃色固體(500mg，98％)，將其應(yīng)用而無需進(jìn)一步純化。
步驟63-溴苯并[b]噻吩-7-甲酰胺
將苯并[b]噻吩-7-甲酰胺(500mg，2.82mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液在室溫下攪拌并且加入乙酸(5mL)，隨后加入NBS(750mg，4.23mmol，1.5當(dāng)量)。將反應(yīng)在室溫下攪拌1小時(shí)，LC-MS分析顯示原料全部轉(zhuǎn)化為預(yù)期化合物(79％)和二溴化物(21％)。將反應(yīng)用水(50mL)稀釋，用含水亞硫酸氫鉀、隨后用碳酸氫鈉中和。然后將水層用二氯甲烷萃取并且將產(chǎn)生的有機(jī)層合并，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥并且蒸發(fā)。將粗物質(zhì)通過LC純化，用DCM作為洗脫液，得到標(biāo)題化合物，為白色固體(300mg，41％)。
步驟73-(4，4，5，5-四甲基[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯并[b]噻吩-7-甲酰胺
將3-溴苯并[b]噻吩-7-甲酰胺(300mg，1.18mmol)的二噁烷(5mL)溶液在氮?dú)庀聰嚢?。加入Pd(dppf)Cl2(29mg，3mol％)、乙酸鉀(230mg，2.35mmol，2.0當(dāng)量)和雙頻哪醇二硼(450mg，1.77mmol，1.5當(dāng)量)，并且將反應(yīng)加熱至80℃并且攪拌過夜。將產(chǎn)生的橙色懸浮液用DCM稀釋，經(jīng)硅藻土過濾并且真空濃縮，得到油狀物，將其應(yīng)用于下一步而無需進(jìn)一步純化。
步驟83-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-苯并[b]噻吩-7-甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物120步驟4中描述的方法制備。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)3.19(4H，br s)，3.76(4H，br s)，5.70(1H，d)，7.12(2H，m)，7.43(1H，t)，7.63(1H，br s)，7.76-7.80(2H，m)，7.92(1H，d)，8.03(1H，d)，8.21(1H，s)，8.28(1H，s)，8.6(1H，s)，10.09(1H，s)。LCMSRt＝1.01分鐘(95％)，m/z(ESI)472(M+H)+。
化合物813-{8-[4-(4-異丙基哌嗪-1-基)苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}苯并[b]噻吩-7-甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物80中描述的方法，在最后一步中應(yīng)用(5-溴[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(4-異丙基哌嗪-1-基)-苯基]胺制備。LCMSrt＝0.94分鐘(95％)，m/z(ESI)513(M+H)+。
化合物83(4-{8-[4-(4-異丙基哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}吡啶-2-基)甲醇 步驟14-溴-2-甲基吡啶-1-氧化物
將4-溴-2-甲基吡啶(5g，29mmol)的DCM(20mL)溶液冷卻至0℃并且歷經(jīng)30分鐘滴加m-CPBA(7.55g，43.87mmol，1.5當(dāng)量)。然后移去冰浴并且將混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。將產(chǎn)生的溶液用碳酸氫鈉(飽和的水溶液)稀釋并且用DCM萃取。將有機(jī)層合并，用碳酸氫鈉(飽和的水溶液)洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥并且真空濃縮，得到標(biāo)題化合物，為淡橙色油狀物，其無需進(jìn)一步純化。
步驟2乙酸4-溴吡啶-2-基甲酯
在4-溴-2-甲基吡啶-1-氧化物(4.00g，21.40mmol)的DCM(20mL)溶液中加入乙酸酐(6mL)。將混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，然后在回流下加熱過夜。將溶劑真空除去并且將粗產(chǎn)物通過硅膠填料過濾，用DCM洗脫，得到標(biāo)題化合物，為橙色油狀物(815mg)。
步驟3乙酸4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)吡啶-2-基甲酯
將乙酸4-溴吡啶-2-基甲酯(800mg，3.49mmol)的二噁烷(5mL)溶液在氮?dú)庀聰嚢?。加入Pd(dppf)Cl2(85mg，3mol％)、乙酸鉀(1.03g，10.5mmol，3.0當(dāng)量)和雙頻哪醇二硼(1.33g，5.24mmol，1.5當(dāng)量)，并且將反應(yīng)在80℃下加熱過夜。將產(chǎn)生的橙色懸浮液用DCM稀釋，經(jīng)硅藻土過濾并且真空濃縮，得到油狀物，將其應(yīng)用于下一步而無需進(jìn)一步純化。
步驟4乙酸4-{8-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-吡啶-2-基甲酯
將(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)苯基]胺(300mg，0.723mmol)和Pd(dppf)Cl2(59mg，10mol％)的4/1二噁烷/水(5mL)懸浮液在室溫下攪拌并且加入碳酸鉀(200mg，1.45mmol，2.0當(dāng)量)和乙酸4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)吡啶-2-基甲酯(300mg，1.08mmol，1.5當(dāng)量)。將產(chǎn)生的混合物在85℃下加熱過夜。將產(chǎn)生的溶液在二氯甲烷和水之間分配，并且將有機(jī)層濃縮到硅膠上并且通過柱色譜法純化(98/2 DCM/MeOH)，得到標(biāo)題化合物，為黃色固體。LCMSRt＝0.78分鐘(100％)，m/z 445(M+H)+。
步驟5(4-{8-[4-(4-異丙基哌嗪-1-基)苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}吡啶-2-基)甲醇
將乙酸4-{8-[4-(4-異丙基哌嗪-1-基)苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}吡啶-2-基甲酯在室溫下、在10mL的1.5M碳酸鉀的甲醇溶液中攪拌過夜。然后通過加入10％檸檬酸水溶液將pH調(diào)節(jié)至中性并且將混合物用DCM萃取。通過LC純化，用在MeOH中的98/2 DCM/2M NH3作為洗脫液，得到標(biāo)題化合物，為黃色粉末(40.3mg，12.5％歷經(jīng)兩步)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)1.02(6H，m)，2.33(1H，m)，2.60(4H，br m)，3.10(4H，br m)，4.65(2H，d)，5.51(1H，t)，6.96(2H，d)，7.84-7.89(3H，m)，8.11(1H，s)，8.17(1H，m)，8.61(1H，d)，8.73(1H，m)，10.08(1H，s)。LCMSRt＝0.78分鐘(100％)，m/z(ESI)445(M+H)+。
化合物84[4-(1-異丙基哌啶-4-基)苯基]-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]胺
該化合物可以應(yīng)用化合物92中描述的方法，在步驟4中應(yīng)用吡唑-4-硼酸制備。LCMSRt 0.89分鐘(100％)m/z(ESI)403(M+H)+。
化合物864-(8-(6-(4-異丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)呋喃-2-甲酰胺 步驟14-溴-呋喃-2-甲酰胺
在4，5-二溴-呋喃-2-甲酸(7.79g，28.85mmol)的NH4OH(100mL)溶液中分小部分加入鋅粉(2.29g，34.62mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌7分鐘，然后經(jīng)硅藻土過濾并且用水和2 M HCI洗滌。應(yīng)用濃HCl將濾液酸化至pH1并且用乙酸乙酯(3×)萃取。將有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且真空濃縮，得到油狀物(4.96g)，其放置后固化，得到白色固體，將其應(yīng)用而無需進(jìn)一步純化。
將固體(4.93g，25.81mmol)溶于亞硫酰氯(44.2mL)中并且回流1小時(shí)。真空除去溶劑后將殘留物溶于二氯甲烷(75mL)并且加入0.5 M NH3的二噁烷(52mL)溶液。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，然后加入33％氨水(5mL)，并且將反應(yīng)再攪拌2小時(shí)。將溶劑真空除去并且將殘留物溶于飽和的NaHCO3溶液中。將堿溶液用乙酸乙酯(3×)萃取，將合并的有機(jī)層經(jīng)MgSO4干燥并且真空濃縮。通過硅膠柱色譜法純化，用(50:49:1)乙酸乙酯:石油醚:乙酸的混合物洗脫，得到標(biāo)題化合物(1.2g，22％)。
步驟24-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-呋喃-2-甲酰胺
將4-溴-呋喃-2-甲酰胺(1.2g，6.32mmol)、雙(頻哪醇)二硼(1.76g，6.94mmol)、PdCl2dppf(0.154g，189mol)和KOAc(1.85g，18.94mmol)懸浮于二噁烷(20mL)中，用氮?dú)獯祾?分鐘，然后在90℃下加熱過夜。將溶劑真空除去并且將殘留物在乙酸乙酯和水之間分配。將水層用乙酸乙酯萃取三次并且將合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4過濾并且蒸發(fā)。將固體殘留物用己烷研磨并且真空干燥，得到標(biāo)題化合物，為固體(0.984g，66％)。
步驟34-(8-(6-(4-異丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)呋喃-2-甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MNa2CO3(0.8mL，1.15mmol)和二噁烷(2mL)中的5-溴-8-(6-(4-異丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-胺(60mg，0.144mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-呋喃-2-甲酰胺(59mg，0.26mmol)和Pd(PPh3)4(42mg，0.036mmol)制備。蒸發(fā)溶劑后，將粗物質(zhì)通過硅膠柱色譜法純化，用DCM、隨后用97.5:2.5和95:5 DCM:NH3(7M在MeOH中)。獲得標(biāo)題化合物，為黃色固體(30mg，47％)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)1.05(6H，d)，2.54-2.59(4H，m)，2.70-2.74(1H，m)，3.47(4H，m)，6.90(1H，d)，7.60(1H，br s)，7.91(1H，s)，7.99(1H，br s)，8.12(1H，dd)，8.19(1H，s)，8.68(1H，s)，8.75(1H，s)，8.81(1H，s)，10.03(1H，s)。LCMSRt 2.64分鐘(98.1％)，m/z(APCI)406(M+H)+。LCMSRt 2.74分鐘(93％)，m/z(ES+)448(M+H)+。
化合物884-(8-(4-(4-異丙基哌嗪-1-基)苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)呋喃-2-甲酰胺 步驟11-異丙基-4-(4-硝基-苯基)-哌嗪
在4-氟硝基苯(5g，35.4mmol)的THF(50mL)溶液中加入1-異丙基哌嗪(4.54g，35.4mmol)和K2CO3(7.35g，53.2mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。將溶劑真空除去并且將殘留物在EtOAc和水之間分配。將有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且濃縮。將粗化合物通過硅膠柱色譜法純化，用99:1和98:2 DCM:NH3(7M在MeOH中)，得到標(biāo)題化合物(8.2g，94％)。
步驟24-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基胺
將1-異丙基-4-(4-硝基-苯基)-哌嗪(8.3g，33.2mmol)溶于MeOH(120mL)中并且加入二氯化錫(II)二水合物(37.4g，0.165mol)。將混合物用水浴冷卻并且加入濃HCl(36mL)。將反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。除去甲醇后，將產(chǎn)生的溶液用濃NaOH(pH 11)堿化。將水相用乙醚萃取(3×)并且將有機(jī)層合并，經(jīng)MgSO4干燥，過濾，真空濃縮，得到標(biāo)題化合物(6.4g，88％)。
步驟3(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基]-胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟1中描述的方法，應(yīng)用在2-丙醇(30mL)的5，8-二溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪(2g，7.20mmol)、4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基胺(1.89g，8.62mmol)和N，N-二異丙基乙基胺(1.88mL，10.8mmol)在95℃下攪拌過夜制備。用乙醚和石油醚研磨后將標(biāo)題化合物分離，為灰色固體(2.59g，87％)。
步驟44-(8-(4-(4-異丙基哌嗪-1-基)苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)呋喃-2-甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MNa2CO3(水溶液)(1.143mL，1.71mmol)和二噁烷(4mL)中的5-溴-N-(6-(4-異丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-胺(80mg，0.21mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-呋喃-2-甲酰胺(101mg，0.42mmol)和Pd(PPh3)4(62mg，0.053mmol)制備。將粗產(chǎn)物通過硅膠柱色譜法純化，用DCM和97:3 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫。用乙醚研磨后將標(biāo)題化合物分離(35.4mg，42％)。應(yīng)用在MeOH(0.0793mL)中的1M甲磺酸將其轉(zhuǎn)化為甲磺酸鹽，獲得標(biāo)題化合物，為固體(35mg)。
H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)1.35(6H，d)，2.35(3H，s，MsOH)，3.01(2H，t)，3.22-3.35(2H，m)，3.58(3H，m)，3.88(2H，d)，7.09(2H，d)，7.61(1H，br s)，7.94(2H，m)，8.00(1H，br s)，8.22(1H，s)，8.76(1H，s)，8.82(1H，s)，9.27(1H，br s)，10.02(1H，s)。LCMSRt 2.02分鐘(98.9％)，m/z(APCI)447(M+H)+。
化合物894-{8-[4-(1-異丙基哌啶-4-基)苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物92中描述的方法，在步驟4中應(yīng)用2-(氨基羰基)噻吩-4-硼酸制備。LCMSRt 0.94分鐘(100％)m/z(ESI)462(M+H)+。
化合物90(4-{8-[6-(4-異丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}吡啶-2-基)甲醇
該化合物可以應(yīng)用化合物83中描述的方法，在步驟4中應(yīng)用(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[6-(4-異丙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基]胺制備。LCMSRt＝0.71分鐘(95％)，m/z(ESI)446(M+H)+。
化合物925-{8-[4-(1-異丙基哌啶-4-基)苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫異吲哚-1-酮 步驟11-異丙基-4-(4-硝基苯基)哌啶
將4-(4-硝基苯基)哌啶(250mg，1.21mmol)、K2CO3(170mg，1.21mmol)和2-碘丙烷(240μL，2.4mmol)在乙腈(3mL)中，在密封的試管中，在120℃下攪拌45分鐘。將混合物冷卻并且將溶劑在減壓下除去。將殘留物在DCM(20mL)和水(5mL)之間分配，將各層分離并且用水(5mL)和鹽水(5mL)洗滌DCM，并且經(jīng)MgSO4干燥。將溶劑蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物(300mg)，將其應(yīng)用而無需進(jìn)一步純化。
步驟24-(1-異丙基哌啶-4-基)苯基胺
將肼(35％重量在水中，0.67mL，7.2mmol)和10％Pd/C(38mg，0.03mmol)加入到1-異丙基-4-(4-硝基苯基)哌啶(180mg，0.72mmol)的EtOH(10mL)溶液中并且將混合物在回流下加熱3小時(shí)。冷卻后，將混合物通過硅藻土過濾并且將溶劑蒸發(fā)。將殘留物重新溶于DCM(25mL)中，經(jīng)MgSO4干燥并且將溶劑蒸發(fā)，得到預(yù)期化合物，為淡黃色固體(113mg，0.52mmol)，將其應(yīng)用而無需進(jìn)一步純化。
步驟3(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(1-異丙基哌啶-4-基)苯基]胺
將N，N-二異丙基乙基胺(200μL，1.2mmol)加入到4-(1-異丙基哌啶-4-基)苯基胺(220mg，1.0mmol)和5，8-二溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪(280mg，1.0mmol)在iPrOH(5mL)中的混合物中并且在回流下加熱48小時(shí)。將混合物冷卻并且將溶劑在減壓下蒸發(fā)，得到橙-棕色固體。將其在DCM(50mL)和水(20mL)之間分配并且將各層分離。將有機(jī)相用檸檬酸(10％水溶液，3×25mL)洗滌。將合并的洗滌液用DCM(25mL)萃取，然后通過加入NaHCO3(固體)將其堿化。將混合物用DCM(3×25mL)萃取，將合并的萃取液經(jīng)MgSO4干燥并且蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物通過硅膠色譜法純化，用在DCM中的5％-10％MeOH洗脫，得到預(yù)期化合物，混有原料苯胺。將其從MeOH重結(jié)晶，得到純標(biāo)題化合物(110mg)。
以類似于化合物79步驟4中描述的方法，該物質(zhì)可以用于制備5-{8-[4-(1-異丙基哌啶-4-基)苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫異吲哚-1-酮。

LCMSRt 0.91分鐘(100％)m/z(ESI)468(M+H)+。
化合物1001-(4-(5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)苯基)哌嗪-2-酮 步驟14-(4-氨基-苯基)-3-氧代-哌嗪-1-甲酸叔丁酯
將對(duì)-碘-苯胺(918mg，4.8mmol)、3-氧代-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(960mg，4.2mmol)、(1R，2R)-環(huán)己烷-1，2-二胺(0.05mL，0.42mmol)、碘化銅(I)(14.9mg，0.0042mmol)和K2CO3(1.19g，2.04mmol)的二噁烷(4mL)懸浮液在反應(yīng)管中用氮?dú)獯祾?分鐘。將試管密封并且將反應(yīng)混合物在119℃下加熱15小時(shí)。冷卻至室溫后，將反應(yīng)混合物經(jīng)硅膠柱過濾，用乙酸乙酯(40mL)洗滌。將濾液真空濃縮，得到標(biāo)題化合物，為棕色液體(1.06g，87％)。LCMSRt 0.88分鐘(91％)。
步驟21-[4-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-苯基]-哌嗪-2-酮
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟1中描述的方法，應(yīng)用在2-丙醇(1mL)中的5，8-二溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪(0.283g，1.00mmol)、4-(4-氨基-苯基)-3-氧代-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.300g，1.00mmol)和N-乙基二異丙基-胺(0.20mL，1.02mmol)制備。將粗物質(zhì)通過硅膠柱色譜法純化，用DCM、隨后用98:2 DCM:MeOH洗脫，得到4-[4-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-苯基]-3-氧代-哌嗪-1-甲酸叔丁酯，為白色固體(0.252g，51％)。
將4-[4-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-苯基]-3-氧代-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.252mg，0.6mmol)的2:1 DCM:TFA(4.8mL)溶液在室溫下攪拌1小時(shí)。然后將混合物用DCM稀釋并且用飽和的NaHCO3堿化。將水層用DCM(3×)萃取并且將有機(jī)層合并，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且濃縮，得到標(biāo)題化合物，為固體(180mg，78％)。
步驟31-(4-(5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)苯基)哌嗪-2-酮
該化合物可以應(yīng)用化合物1步驟5中描述的方法，應(yīng)用在2mL的3:1DMF/水中的1-[4-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-苯基]-哌嗪-2-酮(70mg，0.18mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1H-吡唑(64mg，0.33mmol)、Pd(PPh3)4(21mg，18μmol)和NaOtBu(70mg，0.72mmol)制備。將反應(yīng)混合物在真空下濃縮并且將殘留物通過硅膠柱色譜法純化，用梯度99:1至90:10 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫。將標(biāo)題化合物分離，為淡綠色固體(13mg，19％)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)3.05(2H，m)，3.42(2H，s)，3.62(2H，m)，7.32(2H，d)，8.07(2H，d)，8.26(1H，s)，8.39(1H，br s)，8.67(1H，br s)，8.81(1H，s)，10.05(1H，s)，13.32(1H，br s)。LCMSRt 6.98分鐘(92.4％)，m/z(APCI)376(M+H)+。
化合物1025-{8-[4-(4-叔丁基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫-異吲哚-1-酮 步驟11-叔丁基-4-(4-硝基-苯基)-哌嗪
在1-氟-4-硝基-苯(314mg，2.23mmol)和4-叔丁基-哌嗪(1g，3.34mmol)的二噁烷(15mL)溶液中加入K2CO3(1.65mg，11.9mmol)并且將反應(yīng)在130℃下攪拌過夜。將溶劑真空蒸發(fā)并且將殘留物在乙酸乙酯和水之間分配。將有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且濃縮，得到粗化合物。通過硅膠柱色譜法純化，用DCM、隨后用99:1 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫，得到標(biāo)題化合物(348mg，55.4％)。LCMSRt 3.87分鐘(99％)。
步驟24-(4-叔丁基-哌嗪-1-基)-苯基胺
將1-叔丁基-4-(4-硝基-苯基)-哌嗪(348mg，1.32mmol)溶于MeOH(10mL)中并且加入二氯化錫(II)二水合物(1.08g，4.79mmol)。應(yīng)用水浴將混合物冷卻并且加入濃HCI(3mL)。將反應(yīng)在40℃下攪拌過夜。除去甲醇后，將產(chǎn)生的溶液用濃NaOH(pH 11)堿化。將水相用乙醚(3×)萃取并且將有機(jī)層合并，經(jīng)MgSO4干燥，過濾，真空濃縮，得到標(biāo)題化合物(308mg，99％)，將其應(yīng)用于下一步而無需進(jìn)一步純化。LCMSRt 2.16分鐘(87％)。
步驟3(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(4-叔丁基-哌嗪-1-基)-苯基]-胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟1中描述的方法，應(yīng)用在2-丙醇(5mL)中的5，8-二溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪(0.308g，1.107mmol)、4-(4-叔丁基-哌嗪-1-基)-苯基胺(0.310g，1.33mmol)和N-乙基二異丙基-胺(0.289mL，1.66mmol)制備。將反應(yīng)混合物在DCM和1N NaOH之間分配，將有機(jī)層分離并且用水和鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且真空濃縮。用乙醚和石油醚研磨殘留物，得到標(biāo)題化合物(440mg，92％)，為膏狀固體。LCMSRt 2.25分鐘(96％)。
步驟45-{8-[4-(4-叔丁基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫-異吲哚-1-酮
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MNa2CO3(水溶液)(1.24mL)和二噁烷(3.7mL)中的(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(4-叔丁基-哌嗪-1-基)-苯基]-胺(100mg，0.232mmol)、5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-2，3-二氫-異吲哚-1-酮(90mg，0.32mmol)和Pd(PPh3)4(67mg，0.058mmol)制備。將反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和鹽水之間分配，將有機(jī)層分離，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且真空蒸發(fā)。將殘留物通過硅膠柱色譜法純化，用98:2 DCM:NH3(7M在MeOH中)、隨后用95:5 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫，得到固體，將其用乙醚和石油醚研磨，得到標(biāo)題化合物(71mg，63％)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)1.43(9H，s)，2.36(3H，s，MsOH)，3.02(2H，m)，3.19-3.26(2H，m)，3.67(2H，d)，3.90(2H，d)，4.52(2H，s)，7.10(2H，d)，7.86(1H，d)，7.96-8.01(3H，m)，8.10(1H，d)，8.24(1H，s)，8.72(1H，s)，8.75(1H，s)，9.09(1H，br s)，10.09(1H，s)。LCMSRt 2.07分鐘(99％)，m/z(APCI)483(M+H)+。
化合物1055-{8-[4-(2-氧代-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫-異吲哚-1-酮 步驟13-氧代-4-{4-[5-(1-氧代-2，3-二氫-1H-異吲哚-5-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MNa2CO3(水溶液)(1.3mL，1.92mmol)和二噁烷(2.5mL)中的4-[4-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-苯基]-3-氧代-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(115mg，0.24mmol)、5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-2，3-二氫-異吲哚-1-酮(92mg，0.35mmol)和Pd(PPh3)4(83mg，0.072mmol)制備。將反應(yīng)混合物用鹽水稀釋，然后加入甲苯并且形成沉淀并且通過過濾收集。將產(chǎn)生的固體溶于DCM中并且經(jīng)硅膠柱過濾，得到標(biāo)題化合物，為黃色固體(60mg，47％)。
步驟25-{8-[4-(2-氧代-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫-異吲哚-1-酮
將3-氧代-4-{4-[5-(1-氧代-2，3-二氫-1H-異吲哚-5-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(59mg，0.1mmol)的3:1DCM:TFA(1.2mL)溶液在室溫下攪拌1小時(shí)。將反應(yīng)混合物用DCM稀釋并且用飽和的NaHCO3堿化。將水層用DCM(3×)萃取并且將有機(jī)層合并，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并且真空濃縮，得到標(biāo)題化合物，為黃色固體(38mg，86％)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)3.07(2H，m)，3.44(2H，s)，3.64(2H，m)，4.50(2H，s)，7.32(2H，d)，7.83(1H，d)，8.04-8.10(4H，m)，8.22(1H，s)，8.70(1H，br s)，8.74(1H，s)，10.25(1H，s)。LCMSRt 7.17分鐘(93.7％)，m/z(APCI)441(M+H)+。
化合物1087-氟-5-{8-[4-(4-異丙基哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫異吲哚-1-酮 步驟14-溴-2，6-二氟苯甲酸甲酯
在4-溴-2，6-二氟-苯甲酸(5g，21mmol)的DCM(10mL)懸浮液中加入亞硫酰氯(15mL)和DMF(0.5mL)。將混合物在室溫下攪拌2.5小時(shí)。然后將其冷卻至0℃并且小心地加入MeOH(20mL)，引起劇烈的HCl放出。再攪拌0.5小時(shí)后，將澄清的溶液在DCM(50mL)和水(50mL)之間分配。將有機(jī)層用飽和的NaHCO3、鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥并且將溶劑真空除去，得到標(biāo)題化合物，為淡黃色油狀物，將其應(yīng)用而無需進(jìn)一步純化。
步驟24-溴-2-氟-6-(硝基甲基)苯甲酸甲酯
在室溫下，將硝基甲烷(10mL，169mmol，8當(dāng)量)小心地加入到氫化鈉(4.05g，169mmol，8當(dāng)量)和MgSO4(40g)的DMSO(100mL)懸浮液中并且將產(chǎn)生的漿液攪拌0.25小時(shí)。在產(chǎn)生的黃色漿液中加入4-溴-2，6-二氟苯甲酸甲酯(5.3g，21mmol)并且將混合物在室溫下攪拌3天，所有原料被消耗。加入水(200mL)和6 M HCl(50mL)，隨后加入DCM(200mL)。加入更多的水(500mL)以產(chǎn)生澄清的兩相體系。將水層用DCM(3×100mL)萃取，然后將DCM層合并，用飽和的NaHCO3和鹽水洗滌并且經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)溶劑，得到橙色固體，其含有64％的預(yù)期物質(zhì)，將其應(yīng)用而無需進(jìn)一步純化。LCMSRt＝1.27分鐘(64％)。
步驟35-溴-7-氟-2，3-二氫-異吲哚-1-酮
將上一步制備的粗4-溴-2-氟-6-(硝基甲基)苯甲酸甲酯溶于MeOH(100mL)中。在該澄清溶液中加入鋅粉(3.35g，51.3mmol，3當(dāng)量)，隨后加入甲酸銨(3.23g，51.3mmol，3當(dāng)量)，其引起放熱反應(yīng)。0.3小時(shí)后，加入在MeOH(50mL)中的7M NH3并且將混合物在室溫下攪拌過夜。將產(chǎn)生的混合物經(jīng)硅藻土過濾，并且將黃色濾液吸附到二氧化硅上并且通過LC粗略純化，用94/6D CM/MeOH 7M NH3。除去溶劑，得到棕褐色固體，將其重新溶于DCM中，用10％NaOH洗滌，并且在減壓下濃縮，得到白色固體，將其進(jìn)一步用少量DCM研磨，得到標(biāo)題化合物。LCMSRt 0.96分鐘(100％)m/z 230/232(M+H)+。
步驟47-氟-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-2，3-二氫異吲哚-1-酮
將5-溴-7-氟-2，3-二氫異吲哚-1-酮(531mg，2.31mmol)的二噁烷(5mL)溶液在氮?dú)庀聰嚢琛＜尤隤d(dppf)Cl2(94mg，5mol％)、乙酸鉀(453mg，4.62mmol，2.0當(dāng)量)和雙頻哪醇二硼(1.17g，4.62mmol，2當(dāng)量)，并且將反應(yīng)在80℃下加熱3小時(shí)。將產(chǎn)生的橙色懸浮液用DCM稀釋，經(jīng)硅藻土過濾并且真空濃縮，得到油狀物，將其重新溶于少量DCM中。緩慢加入乙醚，得到標(biāo)題化合物，為棕褐色固體。LCMSRt 1.18分鐘(100％)m/z277/279(M+H)+。
步驟57-氟-5-{8-[4-(4-異丙基哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫異吲哚-1-酮
該化合物可以應(yīng)用化合物91中描述的方法，應(yīng)用上述硼化物制備。LCMSRt＝0.90分鐘(95％)，m/z 487(M+H)+。
化合物1125-(8-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)異二氫吲哚-1-酮 步驟11-[4-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-苯基]-4-異丙基-哌嗪-2-酮
在1-[4-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-苯基]-哌嗪-2-酮(實(shí)施例31，步驟2)(180mg，0.47mmol)的MeOH(4mL)溶液中加入乙酸(0.03mL，0.47mmol)、NaOAc(38mg，0.47mmol)和丙酮(0.2mL，1.18mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，然后加入NaCNBH3(60mg，0.94mmol)并且將混合物在40℃下攪拌過夜。冷卻至室溫后，將反應(yīng)混合物用濃HCl(pH1)酸化并且真空濃縮。將殘留物在6N NaOH和DCM之間分配。將水層用DCM(3×)萃取并且將合并的有機(jī)層經(jīng)MgSO4干燥并且真空濃縮，得到粗化合物，將其通過硅膠柱色譜法純化。用DCM和98:2 DCM:MeOH洗脫，得到標(biāo)題化合物，為黃色固體(45mg，25％)。
步驟25-(8-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)異二氫吲哚-1-酮
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MNa2CO3(水溶液)(0.5mL，0.75mmol)二噁烷(1.2mL)中的1-[4-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-苯基]-4-異丙基-哌嗪-2-酮(40mg，0.09mmol)、5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-2，3-二氫-異吲哚-1-酮(37mg，0.14mmol)和Pd(PPh3)4(31mg，0.027mmol)制備。將反應(yīng)混合物用鹽水稀釋，然后加入甲苯并且形成沉淀并且通過過濾收集。將濾液用乙醚、石油醚和MeOH洗滌，然后通過硅膠柱色譜法純化。用99:1DCM:NH3(7M在MeOH中)、隨后用98:2和95:5 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫，得到標(biāo)題化合物，為黃色固體(24mg，55％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)1.08(6H，d)，2.73-2.87(3H，m)，3.27(2H，s)，3.62-3.68(2H，m)，4.52(2H，s)，7.36(2H，d)，7.84(1H，d)，8.07-8.10(4H，m)，8.25(1H，s)，8.70(1H，br s)，8.77(1H，s)，10.28(1H，s)。LCMSRt 1.94分鐘(95.2％)，m/z(APCI)483(M+H)+。
化合物1145-{8-[4-(4-異丙基哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-3，3-二甲基-2，3-二氫異吲哚-1-酮 步驟15-溴-2-(4-甲氧基芐基)-3，3-二甲基-2，3-二氫異吲哚-1-酮
將氫化鈉(130mg，60％分散于礦物油中，3.2mmol)和四正丁基碘化銨(243mg，0.68mmol)的THF(20mL)懸浮液在室溫下攪拌并且加入5-溴-2，3-二氫異吲哚-1-酮(675mg，3.2mmol)的THF(20mL)和DMF(4mL)溶液。75分鐘后加入4-甲氧基芐基溴(460μL，3.2mmol)并且繼續(xù)攪拌4小時(shí)。然后加入氫化鈉(635mg，60％分散于礦物油中，15.9mmol)并且繼續(xù)攪拌30分鐘，然后加入碘甲烷(1.19mL，19mmol)并且將混合物加熱至70℃達(dá)30分鐘。冷卻后加入NH4Cl(飽和的水溶液)并且將混合物用乙酸乙酯(120mL)稀釋。將各層分離，將有機(jī)相經(jīng)MgSO4干燥并且將溶劑在減壓下除去。將殘留物通過硅膠色譜法純化，用在石油醚中的5％至10％乙酸乙酯洗脫，得到標(biāo)題化合物，為黃色油狀物(640mg，1.78mmol)。
步驟25-溴-3，3-二甲基-2，3-二氫異吲哚-1-酮
將5-溴-2-(4-甲氧基芐基)-3，3-二甲基-2，3-二氫異吲哚-1-酮(640mg，1.78mmol)和硝酸銨高鈰(2.91g，5.33mmol)的乙腈(11mL)和水(5mL)溶液在0℃下攪拌45分鐘。將溶液用乙酸乙酯(100mL)稀釋并且用鹽水(40mL)洗滌。將有機(jī)溶劑經(jīng)MgSO4干燥并且在減壓下蒸發(fā)。將殘留物通過硅膠色譜法純化，用在石油醚中的10％至50％乙酸乙酯洗脫，得到標(biāo)題化合物(367mg，1.53mmol)。
步驟35-{8-[4-(4-異丙基哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-3，3-二甲基-2，3-二氫異吲哚-1-酮
以類似于化合物6步驟3中的方法，將5-溴-3，3-二甲基-2，3-二氫異吲哚-1-酮轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的硼化物。然后將其用于制備標(biāo)題化合物，其是應(yīng)用化合物120步驟4中描述的方法，由(5-溴[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(4-異丙基哌嗪-1-基)-苯基]胺獲得的。LCMSRt＝0.92(100％)，m/z＝497(M+H)+。
化合物1184-(5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-N-(吡啶-3-基甲基)苯甲酰胺 步驟14-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-苯甲酸甲酯
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟1中描述的方法，應(yīng)用在2-丙醇(2.5mL)中的5，8-二溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪(250mg，0.90mmol)、4-氨基苯甲酸甲酯(163mg，1.08mmol)和N-乙基二異丙基-胺(0.19mL，1.08mmol)制備。用2-丙醇研磨后獲得標(biāo)題化合物，為棕色固體(148mg，47％)。
步驟24-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-苯甲酸
將4-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-苯甲酸甲酯(460mg，1.32mmol)懸浮于THF(11mL)中并且加入氫氧化鋰一水合物(554mg，13.2mmol)的水(11mL)溶液。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌4小時(shí)，然后加入甲醇(11mL)并且將混合物在50℃下攪拌24小時(shí)。將混合物在水和DCM之間分配，將水相用2M HCl(pH 2)酸化并且形成黃色沉淀。將沉淀通過過濾收集，用水和乙醚洗滌并且干燥，得到標(biāo)題化合物(215mg，49％)。
步驟34-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-N-吡啶-3-基甲基-苯甲酰胺
將4-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-苯甲酸(0.230g，0.69mmol)、3-羥基苯并三唑(0.103g，0.76mmol)、1-乙基-3-(3’-二甲基氨基丙基)碳二亞胺水合物(0.146g，0.76mmol)的DMF(5mL)和3-吡啶甲基胺(0.077mL，0.76mmol)溶液在室溫下攪拌21小時(shí)。將溶劑真空除去并且將殘留物用乙醚、乙酸乙酯和二氯甲烷研磨。獲得淡黃色固體，用水洗滌并且干燥，得到標(biāo)題化合物(241mg，82％)。
步驟44-(5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-N-(吡啶-3-基甲基)苯甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MK2CO3(水溶液)(1.4mL)和二噁烷(2.5mL)中的4-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-N-吡啶-3-基甲基-苯甲酰胺(100mg，0.24mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1H-吡唑(93mg，0.48mmol)和Pd(PPh3)4(70mg，0.06mmol)制備。將粗物質(zhì)通過硅膠柱色譜法純化，用DCM、隨后用98:2、然后96:4、然后90:10 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫，得到標(biāo)題化合物，為白色固體(19.6mg，20％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)4.52(2H，d)，7.40(1H，m)，7.78(1H，d)，7.93(2H，d)，8.18(2H，d)，8.32(1H，s)，8.48-8.62(4H，m)，8.82(1H，s)，9.01(1H，t)，10.21(1H，br s)，13.3(1H，br s)。LCMSRt 1.86分鐘(93％)，m/z(ES+)412(M+H)+。
化合物1194-(5-(2-氧代-1，2-二氫吡啶-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-N-(吡啶-3-基甲基)苯甲酰胺 步驟14-[5-(2-甲氧基-吡啶-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-N-吡啶-3-基甲基-苯甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物6步驟4中描述的方法，應(yīng)用在1.5MK2CO3(水溶液)(1.6mL)和二噁烷(2.9mL)中的4-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-N-吡啶-3-基甲基-苯甲酰胺(120mg，0.28m mol)、2-甲氧基吡啶-4-硼酸(87mg，0.57mmol)和Pd(PPh3)4(81mg，0.07mmol)制備。將粗物質(zhì)通過硅膠柱色譜法純化，用DCM、隨后用99:1、然后97:3、然后95:5 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫，得到標(biāo)題化合物，為白色固體(92.6mg，73％)。
步驟24-(5-(2-氧代-1，2-二氫吡啶-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-N-(吡啶-3-基甲基)苯甲酰胺
將4-[5-(2-甲氧基-吡啶-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-N-吡啶-3-基甲基-苯甲酰胺(71.5mg，0.16mmol)和鹽酸吡啶鎓(91mg，0.79mmol)在水(0.5mL)中的混合物在密封的試管中、在150℃下加熱25分鐘。然后將溶劑真空除去。將殘留物進(jìn)行硅膠色譜，用DCM、隨后用98:2和90:10 DCM:NH3(7M在MeOH中)洗脫，將包含預(yù)期產(chǎn)物的級(jí)分合并并且蒸發(fā)。將標(biāo)題化合物分離，為黃色固體(34.5mg，49％)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)4.52(2H，d)，6.82(1H，m)，7.22(1H，s)，7.38(1H，m)，7.51(1H，d)，7.78(2H，d)，8.18-8.23(3H，m)，8.51(1H，d)，8.62(1H，s)，8.82(1H，s)，9.01(1H，t)，10.58(1H，br s)，11.8(1H，br s)。LCMSRt 1.72分鐘(97％)，m/z(ES+)439(M+H)+。
化合物1202-甲氧基-N-(6-甲基吡啶-3-基)甲基-4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺 步驟12-甲氧基-N-(6-甲基吡啶-3-基)甲基-4-硝基苯甲酰胺
將2-甲氧基-4-硝基苯甲酸(293mg，1.49mmol)溶于DMF(2mL)和4-甲基嗎啉(220μL，3.0mmol)中并且加入TBTU(1.79g，1.7mmol)。將混合物在室溫下攪拌30分鐘并且加入C-(6-甲基吡啶-3-基)甲基胺(400mg，3.27mmol)。在室溫下繼續(xù)攪拌12小時(shí)。加入DCM(10mL)并且將有機(jī)相用Na2CO3(5％水溶液)、HCl(3％水溶液)和水洗滌，然后經(jīng)Na2SO4干燥。蒸發(fā)溶劑后，將殘留物用醚-己烷研磨，得到標(biāo)題化合物，為白色固體。
步驟24-氨基-2-甲氧基-N-[(6-甲基吡啶-3-基)甲基]苯甲酰胺
將2-甲氧基-N-(6-甲基吡啶-3-基)甲基-4-硝基苯甲酰胺(448mg，1.49mmol)的EtOH和EtOAc(每種8mL)溶液攪拌并且加入甲酸銨(375mg，6mmol)和10％Pd/C(100mg)。將混合物在回流下加熱20分鐘，冷卻，經(jīng)硅藻土過濾，將固體用EtOH洗滌并且將合并的溶劑蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物。
步驟34-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-2-羥基-N-[(6-甲基-吡啶-3-基)甲基]苯甲酰胺
將5，8-二溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪(285mg，1.03mmol)和4-氨基-2-甲氧基-N-[(6-甲基吡啶-3-基)甲基]苯甲酰胺(280mg，1.03mmol)在iPrOH(5mL)中攪拌并且加入HBr(48％水溶液，380μL)。將混合物在回流下加熱24小時(shí)。將冷卻的懸浮液傾倒入NaHCO3(飽和的水溶液，25mL)和水(25mL)中并且用CHCl3(4×30mL)萃取。將萃取物經(jīng)MgSO4干燥并且蒸發(fā)。將殘留物通過柱色譜法純化，用10％CH2Cl2/MeOH洗脫。將含有產(chǎn)物的級(jí)分蒸發(fā)并且將殘留物用MeOH研磨，得到標(biāo)題化合物，為棕色固體。
步驟42-甲氧基-N-(6-甲基吡啶-3-基)甲基-4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺
將吡唑-4-硼酸(19mg，0.17mmol)、4-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-2-羥基-N-[(6-甲基-吡啶-3-基)甲基]苯甲酰胺(40mg，0.085mmol)、K2CO3(24mg，0.17mmol)和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(4mg，0.005mmol)稱重倒入可密封的試管中。將試管用氮?dú)鉀_洗并且加入二噁烷-水(4:1，4mL)。將試管密封，在氮?dú)饬飨路湃氤曉≈?0秒，然后放入85℃的油浴中。將反應(yīng)攪拌28小時(shí)，在2小時(shí)和18小時(shí)后加入另外部分的硼酸(10mg)和催化劑(2mg)。將粗混合物吸附到SiO2上并且通過柱色譜法純化，用1％-10％MeOH/DCM洗脫。將獲得的產(chǎn)物重新溶于MeOH/DCM(4:1，10mL)中并且加入0.1M MsOH/MeOH(2當(dāng)量)，將溶劑蒸發(fā)并且將殘留物溶于水中并且凍干，得到標(biāo)題化合物，為二甲磺酸鹽(38mg)。LCMSRt 0.92分鐘(93.9％)m/z(ESI)455(M+H)+。
化合物122N-芐基-2-甲氧基-4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物120中描述的方法，在步驟1中應(yīng)用芐基胺制備。LCMSRt 1.62分鐘(100％)m/z(ESI)440(M+H)+。
化合物124N-吡啶-2-基甲基3-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]苯甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物129中描述的方法，在步驟5中應(yīng)用2-吡啶基甲基胺制備。LCMSRt＝0.84分鐘(100％)，m/z(ESI)412(M+H)+。
化合物127(4-異丙基哌嗪-1-基)-{3-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]苯基}甲酮
該化合物可以應(yīng)用化合物129中描述的方法，在步驟5中應(yīng)用4-異丙基哌嗪制備。LCMSRt＝0.84分鐘(100％)，m/z(ESI)432(M+H)+。
化合物129N-乙基3-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]苯甲酰胺 步驟13-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)苯甲酸乙酯
將5，8-二溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪(1.39g，5.00mmol)和3-氨基苯甲酸乙酯(0.93g，5.60mmol)在iPrOH(10mL)中攪拌并且加入HBr(48％水溶液，1.14mL，10mmol)。將混合物在85℃下加熱4小時(shí)，然后冷卻至室溫并且用NaHCO3(飽和水溶液，25mL)猝滅。將產(chǎn)生的懸浮液冷卻至0℃并且將白色固體通過抽濾收集并且用水(10mL)洗滌。將粗產(chǎn)物溶于EtOH中并且將溶劑蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物，為類白色固體(1.79g，4.9mmol)，將其應(yīng)用而無需進(jìn)一步純化。
步驟23-[(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-叔丁氧基羰基-氨基]苯甲酸乙酯
將3-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)苯甲酸乙酯(1.79g，4.93mmol)的DCM(20mL)溶液在N2下，在室溫下攪拌并且加入BOC2O(1.34g，6.16mmol)和DMAP(0.30g，2.46mmol)。繼續(xù)攪拌2小時(shí)，直到LCMS指示原料完全轉(zhuǎn)化。將混合物過濾并且將濾液用稀檸檬酸(pH 6，5mL)和鹽水(5mL)洗滌并且經(jīng)Na2SO4干燥。蒸發(fā)溶劑，得到標(biāo)題化合物，為黃色油狀物(1.87g，4.0mmol)，將其應(yīng)用而無需進(jìn)一步純化。
步驟33-{叔丁氧基羰基-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺}苯甲酸乙酯
將氮?dú)夤娜?-[(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-叔丁氧基羰基-氨基]苯甲酸乙酯(0.58g，1.25mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1H-吡唑(0.49g，2.50mmol)、K2CO3(0.35g，2.50mmol)和Pd(dppf)Cl2·DCM(102mg，0.125mmol)在二噁烷(37.5mL)和水(9.6mL)中的混合物中。將冷凝器安裝到燒瓶上，將體系抽真空并且用N2(氣體)吹掃，然后在115℃下加熱25分鐘。將加熱浴移去并且加入CO2(固體)以冷卻并且緩沖體系。將溶劑在減壓下除去并且將殘留物通過硅膠色譜法純化，用在DCM中的10％至50％乙酸乙酯洗脫，得到標(biāo)題化合物，為橙色油狀物(0.61g，>100％)，將其應(yīng)用而無需進(jìn)一步純化。
步驟43-{叔丁氧基羰基-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-氨基}苯甲酸
將不純的3-{叔丁氧基羰基-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-氨基}苯甲酸乙酯(0.61g，1.25mmol)溶于THF(2.5mL)中并且加入KOH(2M水溶液，2.5mL，5mmol)并且將混合物在60℃下加熱過夜。將溶液冷卻并且經(jīng)硅藻土過濾，用水沖洗。將濾液傾倒入檸檬酸(2M水溶液，2.5mL)中并且在0℃下攪拌。將產(chǎn)生的固體通過抽濾收集，用水洗滌并且通過懸浮于EtOH中干燥并且在減壓下蒸發(fā)，得到棕色膠狀物(280mg)。
進(jìn)一步的產(chǎn)物通過用DCM萃取濾液來獲得，得到合并的總量352mg的標(biāo)題化合物。將其應(yīng)用而無需進(jìn)一步純化。
步驟5N-乙基3-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]苯甲酰胺
將3-{叔丁氧基羰基-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-氨基}苯甲酸(42mg，0.10mmol)、乙基胺(12M水溶液，42μL，0.50mmol)和三乙胺(28μL，0.20mmol)在DMF(0.30mL)中攪拌并且加入PyBOP(57mg，0.11mmol)。繼續(xù)攪拌過夜。將反應(yīng)混合物在EtOAc(7mL)和NaHCO3(飽和的水溶液，7mL)之間分配并且將各層分離。將合并的有機(jī)層用鹽水(2×5mL)洗滌并且經(jīng)Na2SO4干燥。蒸發(fā)溶劑，得到油狀物，將其溶于含有HCl(12M水溶液，0.15mL)的MeOH(0.3mL)中并且攪拌過夜。加入三乙胺(0.25mL)和EtOH(0.3mL)并且將溶劑在減壓下除去。將殘留物通過制備HPLC純化，得到標(biāo)題化合物，為白色固體(7mg)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ＝13.29ppm(s，0.8H)；10.01(s，0.9H)；8.77(s，1.0H)；8.65(s，1.0H)；8.52(s，1.1H)；8.41-8.37(m，2.1H)；8.25(s，1.0H)；8.08(d，1.0H)；7.47(d，1.0H)；7.41(t，1.1H)；7.04-7.03(m，0.5H)；3.32(s，29.2H(水))；1.14(t，3.5H)。LCMSRt＝0.95分鐘(100％)，m/z(ESI)349(M+H)+。
化合物131N-(4-羥基芐基)3-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]苯甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物129中描述的方法，在步驟5中應(yīng)用4-羥基芐基胺制備。LCMSRt＝0.98分鐘(100％)，m/z(ESI)427(M+H)+。
化合物134N-芐基-N-甲基3-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]苯甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物129中描述的方法，在步驟5中應(yīng)用N-甲基芐基胺制備。LCMSRt＝1.15分鐘(100％)，m/z(ESI)425(M+H)+。
化合物1674-[8-(6-苯基乙酰基氨基-吡啶-3-基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-噻吩-2-甲酰胺 步驟1N-(5-硝基吡啶-2-基)-2-苯基乙酰胺
將2-氨基-5-硝基吡啶(4.17g，30mmol)的吡啶(30mL)溶液在室溫下攪拌并且滴加苯基乙酰氯(4.64g，30mmol)的THF(30mL)溶液。將混合物攪拌24小時(shí)，然后傾倒入冰-水(250mL)中，得到棕色固體，將其應(yīng)用而無需進(jìn)一步純化。
以類似于化合物120中描述的方法的步驟2和3，將該物質(zhì)用于制備N-[5-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-吡啶-2-基]-2-苯基乙酰胺。
步驟44-[8-(6-苯基乙?；被?吡啶-3-基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-噻吩-2-甲酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物120步驟4中描述的方法，應(yīng)用N-[5-(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基)-吡啶-2-基]-2-苯基乙酰胺和2-(氨基羰基)噻吩-4-硼酸制備。LCMSRt 1.06分鐘(100％)m/z(ESI)471(M+H)+。
化合物1692-(4-{4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]苯基}-哌啶-1-基)乙酰胺
該化合物可以應(yīng)用化合物84中描述的方法，在步驟1中應(yīng)用2-溴乙酰胺制備。LCMSRt＝0.81分鐘(100％)，m/z(ESI)418(M+H)+。
化合物1705-{8-[4-(4-異丙基哌嗪-1-基)-3-三氟甲基苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫異吲哚-1-酮
該化合物可以應(yīng)用化合物GB15中描述的方法，應(yīng)用5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-2，3-二氫異吲哚-1-酮制備。LCMSRt＝0.99分鐘(95％)，m/z(ESI)537(M+H)+。
化合物171[4-(4-異丙基哌嗪-1-基)-3-三氟甲基苯基]-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]胺
該化合物可以應(yīng)用化合物46中描述的方法，應(yīng)用(5-溴-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(4-異丙基哌嗪-1-基)-3-三氟甲基苯基]胺制備。LCMSRt＝0.99(95％)，m/z(ESI)472(M+H)+。
通過以上方法制備的本發(fā)明化合物的其它實(shí)例在上文中描述。
純化條件和表征 通常，合成后的所有化合物可以應(yīng)用反相HPLC純化，應(yīng)用Gilson制備HPLC系統(tǒng)(322泵，155紫外/可見檢測(cè)器，215液體處理機(jī))。Gilson215用作自動(dòng)進(jìn)樣器和級(jí)分收集器?；衔镞€可以通過硅膠快速色譜法純化。
化合物通過質(zhì)譜法表征，應(yīng)用配有電噴霧源的單相四極桿儀器。
生物試驗(yàn)說明化合物的有效性 實(shí)施例1MAPKAP-K5分析 將MAPKAP-K5反應(yīng)在閃板形式中進(jìn)行，應(yīng)用0.1或0.2μCi33P-ATP；0.6μM ATP；1mU MAPKAP-K5；3μM MAPKAP-K5肽底物，在室溫下培養(yǎng)30分鐘。
閃板試驗(yàn) 將MAPKAP-K5激酶反應(yīng)在384孔聚丙烯板(Matrix Technologies)中進(jìn)行，然后轉(zhuǎn)移到鏈霉親和素包被的384孔閃板(Perkin-Elmer)中。
在含有2μL試驗(yàn)化合物或標(biāo)準(zhǔn)抑制劑的孔中，應(yīng)用Hydra(RobbinsScientific)加入13μL酶混合物或稀釋劑。
通過應(yīng)用Multidrop(Thermo-Labsystems)加入10μL[2.5×]底物混合物來啟動(dòng)反應(yīng)，在試驗(yàn)中得到下列物質(zhì)終濃度為 1mU MAPKAP-K5 3μM MAPKAP-K5肽底物 0.6μM ATP 0.004μCi[33P]-γ-ATP/μL 1×反應(yīng)緩沖液 將板在室溫下培養(yǎng)30分鐘。
通過應(yīng)用Micro-fill(Biotek)在每孔中加入25μL EDTA(50mM)來終止反應(yīng)。
應(yīng)用Zymark機(jī)器人系統(tǒng)將反應(yīng)轉(zhuǎn)移到鏈霉親和素包被的閃板中。將板在室溫下培養(yǎng)60分鐘。
應(yīng)用Tecan洗板機(jī)將所有孔用100μL磷酸鹽緩沖鹽水洗滌3次。
放射性通過在Packard TopCount上閃爍計(jì)數(shù)閃板(空孔)來測(cè)定。
酶混合物 酶 50mM Tris HCl(pH 7.5) 0.1mM EGTA 2mM DTT 1mg/mL BSA 反應(yīng)緩沖液 50mM Tris HCl(pH 7.5) 0.1mM EGTA 10mM乙酸鎂 2mM DTT 根據(jù)上述合成方法已經(jīng)制備或可以制備以下化合物。對(duì)于以下表1和表2，可以應(yīng)用實(shí)施例1描述的MAPKAPK5分析方法來測(cè)定的每個(gè)化合物的活性表示如下 ++++化合物顯示的MAPKAPK5 IC50 1-100nM +++ 化合物顯示的MAPKAPK5 IC50 101-500nM ++ 化合物顯示的MAPKAPK5 IC50 501-1000nM + 化合物顯示的MAPKAPK5 IC50>1000nM 表1實(shí)例化合物的結(jié)構(gòu)和活性

































表2實(shí)例苯甲酰胺化合物的結(jié)構(gòu)和活性










實(shí)施例2.用于由活化的原發(fā)滑液成纖維細(xì)胞表達(dá)的MMP1調(diào)節(jié)劑的鑒定的試驗(yàn)的開發(fā) 為了鑒定降低細(xì)胞的ECM降解活性的化合物，細(xì)胞的ECM降解活性可以誘導(dǎo)以使該活性適合檢測(cè)并且獲得更清楚的讀數(shù)。在上下文的RA中，選擇的細(xì)胞是哺乳動(dòng)物滑液成纖維細(xì)胞并且可以用于誘導(dǎo)ECM降解活性的觸發(fā)劑是關(guān)節(jié)炎領(lǐng)域中相關(guān)的細(xì)胞因子例如TNF-α、IL1β、IL6、OSM、IL17和MIF1-α。該列表不是全部的，因?yàn)镽A發(fā)病機(jī)制中潛在涉及過多的細(xì)胞因子(Smolen和Steiner，2003)。為了建立體外的、盡可能接近病理學(xué)的復(fù)雜性的試驗(yàn)方法，所用的觸發(fā)劑應(yīng)該是由關(guān)節(jié)炎領(lǐng)域中相關(guān)的產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞與觸發(fā)劑接觸而產(chǎn)生的因子的混合物，例如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞和B細(xì)胞。產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞通過產(chǎn)生因子的復(fù)合體和無偏的混合物而對(duì)接觸響應(yīng)。如果在關(guān)節(jié)翳中也發(fā)現(xiàn)所用的產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞，并且在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的滑膜液中發(fā)現(xiàn)用于產(chǎn)生該觸發(fā)劑的細(xì)胞因子，那么最終產(chǎn)生的因子混合物將包含關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)中存在的部分因子。
“MMP試驗(yàn)”的原理 基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)具有多種生理學(xué)作用，例如其它蛋白酶、生長(zhǎng)因子的成熟和胞外基質(zhì)成分的降解。MMP1是MMP家族的成員之一，其能夠降解天然膠原(骨和軟骨的主要成分)。由滑液成纖維細(xì)胞(SF)表達(dá)的MMP1增加用于診斷關(guān)節(jié)炎疾病的進(jìn)程并且是關(guān)節(jié)中侵蝕進(jìn)程的預(yù)兆(Cunnane等人，2001)。SF表達(dá)的MMP1可以通過用類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)的觸發(fā)劑活化SF來增強(qiáng)，細(xì)胞因子例如TNF-α或IL1β(Andreakos等人，2003)。綜上所述，測(cè)量由活化的SF產(chǎn)生的MMP1的水平是在上下文RA中具有高度相關(guān)的讀數(shù)，因?yàn)樵撌录从沉薙F對(duì)侵蝕表型(如在關(guān)節(jié)翳中所見的)的活化水平。如果降低候選藥物靶標(biāo)在活化的SF中的表達(dá)引起由這些細(xì)胞表達(dá)的MMP1的降低，那么藥物靶標(biāo)被證實(shí)涉及MMP1表達(dá)的調(diào)節(jié)并且因此被考慮與用于治療RA的治療策略的開發(fā)有關(guān)。
在以下實(shí)施例中，試驗(yàn)的開發(fā)(進(jìn)一步稱為‘MMP試驗(yàn)’)監(jiān)測(cè)由滑液成纖維細(xì)胞(SF)對(duì)多種活化觸發(fā)劑響應(yīng)而產(chǎn)生的MMP1(實(shí)施例2.1)。然后，該試驗(yàn)的用途被描述為用于基因產(chǎn)物的確證，該基因產(chǎn)物被認(rèn)為是開發(fā)RA治療的藥物靶標(biāo)(實(shí)施例2.2)。靶標(biāo)的確證是應(yīng)用重組腺病毒來進(jìn)行的，所述的腺病毒進(jìn)一步被稱為敲除病毒或Ad-siRNA，其介導(dǎo)shRNA在細(xì)胞中的表達(dá)，從而通過基于RNAi(RNA干擾)機(jī)制降低靶基因的表達(dá)水平(參見WO 03/020931)。然后，表3中描述了調(diào)節(jié)確證的藥物靶標(biāo)活性的化合物的鑒定?！甅MP試驗(yàn)’在試驗(yàn)調(diào)節(jié)鑒定的藥物靶標(biāo)的活性的化合物中的用途在下面進(jìn)一步描述。
試驗(yàn)實(shí)施例 所用的對(duì)照病毒 下面列出了在這些研究中應(yīng)用的對(duì)照病毒。dE1/dE2A腺病毒是通過輔助質(zhì)粒pWEAd5AflII-rITR.dE2A在PER.E2A包裝細(xì)胞中的共轉(zhuǎn)染而由這些連接質(zhì)粒產(chǎn)生的，如WO99/64582中描述的。
陰性對(duì)照病毒 Ad5-eGFP_KD靶序列GCTGACCCTGAAGTTCATC(SEQ IDNO1)。應(yīng)用Sap1位點(diǎn)克隆到載體中并且產(chǎn)生病毒，如WO03/020931中描述的。
Ad5-Luc_v13_KD靶序列GGTTACCTAAGGGTGTGGC(SEQ IDNO2)。應(yīng)用Sap1位點(diǎn)克隆到載體中并且產(chǎn)生病毒，如WO03/020931中描述的。
Ad5-M6PR_v1_KD靶序列CTCTGAGTGCAGTGAAATC(SEQ IDNO3)。應(yīng)用Sap1位點(diǎn)克隆到載體中并且產(chǎn)生病毒，如WO03/020931中描述的。
陽性對(duì)照病毒 Ad5-MMP1_v10_KD靶序列ACAAGAGCAAGATGTGGAC(SEQID NO4)。應(yīng)用Sap1位點(diǎn)克隆到載體中并且產(chǎn)生病毒，如WO03/020931中描述的。
用于靶標(biāo)確證的病毒 Ad5-MAPKAPK5_v13_KD靶序列CGGCACTTTACAGAGAAGC(SEQ ID NO5)。應(yīng)用Sap1位點(diǎn)克隆到載體中并且產(chǎn)生病毒，如WO03/020931中描述的。
Ad5-MAPKAPK5_v12_KD靶序列ATGATGTGTGCCACACACC(SEQ ID NO6)。應(yīng)用Sap1位點(diǎn)克隆到載體中并且產(chǎn)生病毒，如WO03/020931中描述的。
實(shí)施例2.1MMP試驗(yàn)的開發(fā) 開發(fā)用于測(cè)量MMP1的384孔形式的ELISA。試驗(yàn)多種一抗和多種ELISA試驗(yàn)方法。開發(fā)以下試驗(yàn)方法并且確證測(cè)量384孔板中SF上清液的MMP1水平將白色Lumitrac 600 384孔板(Greiner)用2μg/mL抗MMP1抗體MAB1346(Chemicon)包被。將抗體在緩沖液40(在1L milliQ水中的1.21g Tris堿(Sigma)、0.58g NaCl(Calbiochem)和5mL10％NaN3(Sigma)并且調(diào)節(jié)至pH 8.5)中稀釋。在4℃下培養(yǎng)過夜后，將板用PBS(在10L milliQ中的80g NaCl、2g KCl(Sigma)、11.5gNa2HPO4·7H2O和2g KH2PO4；pH 7.4)洗滌并且用100μL/孔的酪蛋白緩沖液(在PBS中的2％酪蛋白(VWR International))封閉。第二天，將酪蛋白緩沖液從ELISA板中除去并且用50μL/孔的EC緩沖液(在1L milliQ中的4g酪蛋白、2.13g Na2HPO4(Sigma)、2g牛血清白蛋白(Sigma)、0.69g NaH2PO4·H2O(Sigma)、0.5g CHAPS(Roche)、23.3g NaCl、4mL 0.5MEDTA pH 8(Invitrogen)、5mL 10％NaN3并且調(diào)節(jié)至pH 7.0)代替。在融化的樣品板中加入0.25mM DTT(Sigma)。除去EC緩沖液后，將20μL的樣品轉(zhuǎn)移到ELISA板中。在4℃下培養(yǎng)過夜后，將板用PBS洗滌兩次并且用PBST(含0.05％Tween-20(Sigma)的PBS)洗滌一次并且與35μL/孔的生物素化的抗MMP1抗體溶液(R&D)一起培養(yǎng)。將該二抗以濃度5μg/mL在緩沖液C(在2L milliQ中的0.82g NaH2PO4·H2O、4.82g Na2HPO4、46.6gNaCl、20g牛血清白蛋白和4mL0.5M EDTA pH 8并且調(diào)節(jié)至pH 7.0)中稀釋。在室溫下培養(yǎng)2小時(shí)后，將板如上述洗滌并且與50μL/孔的鏈霉親和素-HRP偶聯(lián)物(Biosource)一起培養(yǎng)。將鏈霉親和素-HRP偶聯(lián)物以濃度0.25μg/mL在緩沖液C中稀釋。45分鐘后，將板如上述洗滌并且與50μL/孔的BM Chem ELISA底物(Roche)一起培養(yǎng)。在Luminoscan AscentLuminometer(Labsystems)上讀數(shù)，積分時(shí)間是200毫秒或用Envision讀數(shù)器(Perkin Elmer)。
圖2中以白色棒顯示了用RA領(lǐng)域中相關(guān)的細(xì)胞因子(TNF-α、IL1β和OSM)或它們的組合處理的SF表達(dá)的MMP1增加。對(duì)于該試驗(yàn)，將SF接種在96孔板中，3,000個(gè)細(xì)胞/孔。24小時(shí)后，將培養(yǎng)基換為添加1％FBS的M199培養(yǎng)基。培養(yǎng)基更換一天后，在培養(yǎng)基中加入細(xì)胞因子或它們的組合，所加的每種細(xì)胞因子的終濃度是25ng/mL。加入細(xì)胞因子72小時(shí)后，將上清液收集并且如以上給出的試驗(yàn)方法中描述的進(jìn)行MMP1ELISA。與該試驗(yàn)平行，應(yīng)用相同的試驗(yàn)方法，在M199培養(yǎng)基+1％FBS中用相同的細(xì)胞因子或細(xì)胞因子的組合處理的THP1細(xì)胞(在M199+1％FBS中2倍稀釋)的上清液觸發(fā)SF。圖2中以灰色棒顯示了對(duì)于這些樣品的MMP1水平。用TNF-α處理的THP1細(xì)胞的上清液觸發(fā)的SF表達(dá)的MMP1的誘導(dǎo)作用強(qiáng)于(>4.5倍誘導(dǎo)作用)單獨(dú)用重組TNF-α觸發(fā)的SF表達(dá)的MMP1的誘導(dǎo)作用(3倍誘導(dǎo)作用)，并且?guī)缀醯扔?倍于3種純化的細(xì)胞因子(TNF-α、IL1βb、OSM)的混合物獲得的誘導(dǎo)作用。該結(jié)果表明TNF-α-誘導(dǎo)的THP1細(xì)胞的上清液除了包含TNF-α之外還包含另外的活化關(guān)于MMP1表達(dá)的SF的促炎因子。由于TNF-α在RA發(fā)病機(jī)制中的作用得到確證(TNF-α-阻斷劑(例如英夫利昔單抗和依那西普)在治療RA患者中顯示出某些功效)并且THP-1細(xì)胞是RA患者關(guān)節(jié)中存在的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的代表，通過將THP-1細(xì)胞與TNF-α接觸而制備的基于TNF-α的觸發(fā)劑混合物將包含RA患者關(guān)節(jié)中存在的因子并且隨后與RA相關(guān)。該基于TNF-α的復(fù)合體觸發(fā)劑(進(jìn)一步稱為‘復(fù)合體觸發(fā)劑’)將進(jìn)一步用作“MMP試驗(yàn)”的主要成分。
應(yīng)用地塞米松(有效的抗炎藥，還能在嚙齒類中大大降低膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎)顯示“復(fù)合體觸發(fā)劑”對(duì)SF活化的抑制(Yang等人，2004)(圖3)。地塞米松顯示了劑量依賴性地降低由復(fù)合體觸發(fā)劑活化的SF產(chǎn)生的MMP1的量。將SF以密度3000個(gè)細(xì)胞/孔接種在96孔板中。接種24小時(shí)后，將增加濃度的地塞米松加入到細(xì)胞中。培養(yǎng)過夜后，將每孔的培養(yǎng)基更新為用TNF-α(在M199+0.5％FBS中50％稀釋)處理的THP-1細(xì)胞的上清液并且如前一天那樣加入相同濃度的地塞米松。處理48小時(shí)后，將上清液收集并且進(jìn)行上述MMP1 ELISA。地塞米松的加入顯著地降低了SF表達(dá)的MMP1，IC50值約1nM(參見圖3)。這些數(shù)據(jù)顯示由活化的SF表達(dá)的MMP1可以通過加入生理學(xué)相關(guān)的抑制劑來降低并且代表“MMP試驗(yàn)”的原理證明。
實(shí)施例2.2MAPKAPK5調(diào)節(jié)SF“復(fù)合體觸發(fā)劑”-誘導(dǎo)的MMP1表達(dá) (A)Ad-siRNA病毒對(duì)敲除MAPKAPK5表達(dá)的功能 根據(jù)WO03/020931描述的方法來產(chǎn)生介導(dǎo)靶向MAPKAPK5和eGFP的siRNA表達(dá)的重組腺病毒。在重組腺病毒中應(yīng)用的靶序列是CGGCACTTTACAGAGAAGC(SEQ ID NO5)和ATGATGTGTGCCACACACC(SEQ ID NO6)。在重組腺病毒中所用的eGFP mRNA內(nèi)的靶序列是GCTGACCCTGAAGTTCATC(SEQ ID NO1)。應(yīng)用Sap1位點(diǎn)將這些序列克隆到連接質(zhì)粒中。dE1/dE2A腺病毒是通過輔助質(zhì)粒pWEAd5AflII-rITR.dE2A在PER.E2A包裝細(xì)胞中的共轉(zhuǎn)染由這些連接質(zhì)粒產(chǎn)生的，如WO99/64582描述的。
靶向MAPKAPK5的腺病毒的功能性試驗(yàn)如下。將這些腺病毒按如下方法用于感染在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)的原代人SF。第一天，按每個(gè)培養(yǎng)皿500,000個(gè)SF接種。一天后，用Ad5-MAPKAPK5-v13_KD(1.6E9VP/mL)或Ad5-eGFP-v5_KD(1.3E10 VP/mL)以MOI為4000(基于由Q-rt-PCR確定的病毒滴定度(每mL病毒顆粒數(shù)))感染細(xì)胞。第七天，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法應(yīng)用胰蛋白酶EDTA溶液將細(xì)胞從培養(yǎng)皿中分離。然后通過加入添加10％FBS的DMEM生長(zhǎng)培養(yǎng)基將胰蛋白酶滅活。然后通過離心步驟(1000rpm，5分鐘)將細(xì)胞收集。將沉淀物在100μL的新制RIPA緩沖液(50mM TrispH7.5、150mM NaCl、1％脫氧膽酸鹽、1％Triton X100、0.1％SDS)中裂解。然后將樣品超聲10秒。然后如供應(yīng)商描述的應(yīng)用BCA試劑盒(Pierce，Cat N°23227)，應(yīng)用BSA作為標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定樣品的蛋白濃度。在30μg稀釋在19.5μL RIPA緩沖液中的細(xì)胞裂解物中加入3.5μL還原劑(NuPage還原劑N°10，Invitrogen NP0004)和7.5μL樣品緩沖液(NuPage LDS樣品緩沖液，Invitrogen NP0007)。然后將30μL樣品煮沸5分鐘并且上樣至10％聚丙烯酰胺凝膠(Invitrogen NP0301)。為了估計(jì)蛋白質(zhì)敲除的水平，將5μg、7.5μg和3.75μg Ad5-eGFP-v5_KD感染細(xì)胞的裂解物也上樣至凝膠。然后將凝膠在1×MOPS/SDS NuPage運(yùn)行緩沖液(Invitrogen NP001)中以100V運(yùn)行2小時(shí)。將10μL Seablue Plus預(yù)染標(biāo)準(zhǔn)(Invitrogen LC5925)用于估計(jì)凝膠上蛋白的大小。然后通過濕法印跡將膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜(Invitrogen LC2002)上，其應(yīng)用通過將100mL Nupage轉(zhuǎn)移緩沖液20＊(NP0006-1)、400mL甲醇和1500mL Milli Q水混合制備的轉(zhuǎn)移緩沖液。在轉(zhuǎn)移前，將膜首先浸泡在甲醇和轉(zhuǎn)移緩沖液中。轉(zhuǎn)移在100V下進(jìn)行90分鐘。然后通過將膜浸泡在配制在PBST(添加0.1％Tween 20(Sigma，P1379)的PBS)中的封閉緩沖液(2％封閉粉末(Amersham，RPN 2109))中30分鐘而封閉。封閉后，應(yīng)用在封閉緩沖液中稀釋250倍的抗MAPKAPK5的鼠單克隆抗體(BD Biosciences，Cat No612080)進(jìn)行免疫檢測(cè)。用該一抗培養(yǎng)過夜后，將膜用PBST洗滌3次并且用在封閉緩沖液中稀釋50000倍的二抗((多克隆羊抗鼠Ig，HRP偶聯(lián)的(DAKO P0447))培養(yǎng)1小時(shí)。然后將印跡在PBST中洗滌3次并且在Kodakimager上根據(jù)廠商說明書用ECLadvance(RPN2109，Amersham)進(jìn)行檢測(cè)。蛋白質(zhì)印跡顯示與用Ad5-eGFP-v5_KD陰性對(duì)照病毒感染的細(xì)胞相比，Ad5-MAPKAPK5-v13_KD感染的細(xì)胞中MAPKAPK5的表達(dá)水平更低。與稀釋的Ad5-eGFP-v5_KD感染的樣品比較用于估計(jì)表達(dá)降低2倍。通過‘剝離操作’(將膜在PBST中煮沸5分鐘)除去MAPKAPK5抗體后，將等量上樣的30μg樣品通過β-肌動(dòng)蛋白的免疫檢測(cè)來說明。β-肌動(dòng)蛋白的免疫檢測(cè)是根據(jù)MAPKAPK5檢測(cè)中描述的方法進(jìn)行的，但是應(yīng)用抗β-肌動(dòng)蛋白的羊多克隆抗體(Santa Cruz，Cat NoSC-1615)(其以1000倍稀釋作為一抗)和兔抗羊抗體(其以50000倍稀釋作為二抗)。圖4給出了該試驗(yàn)的結(jié)果。綜上所述，該試驗(yàn)證明了為了降低原代人SF中MAPKAPK5表達(dá)水平而產(chǎn)生的Ad-siRNA的功能性。
(B)MAPKAPK5敲除Ad-siRNA降低SF-誘導(dǎo)的MMP1表達(dá) Ad5-MAPKAPK5-v13_KD病毒在‘MMP試驗(yàn)’中的功效試驗(yàn)如下。第一天，將SF(傳代9至10)以每孔3000個(gè)細(xì)胞的密度接種在具有完全滑液生長(zhǎng)培養(yǎng)基(Cell Applications)的96孔板中。一天后，將細(xì)胞用遞增量(3、6、9、12或15μL)的下列病毒感染Ad5-eGFP-v5_KD、Ad5-MAPKAPK5-v12_KD、Ad5-MAPKAPK5-v13_KD、Ad5-MMP1-v10_KD。病毒載量是通過加入中性病毒Ad5-Luc-v13_KD來校正以使得細(xì)胞中最終病毒體積是每孔15μL。該校正保證所觀察到的作用不是來自應(yīng)用于細(xì)胞的病毒載量。然后在活化步驟之前將細(xì)胞培養(yǎng)5天。該步驟包括每孔中用添加25μL的‘復(fù)合體觸發(fā)劑’的75μL M199培養(yǎng)基代替生長(zhǎng)培養(yǎng)基。活化步驟48小時(shí)后，將上清液收集并且如實(shí)施例1中描述的進(jìn)行MMP1 ELISA。試驗(yàn)結(jié)果在圖5中顯示。試驗(yàn)的質(zhì)量通過靶向MMP1自身的Ad-siRNA病毒的功效來證實(shí)。該陽性對(duì)照病毒大大降低了SF表達(dá)的MMP1，而陰性對(duì)照病毒(為靶向熒光素酶的表達(dá)而設(shè)計(jì))不影響MMP1表達(dá)水平。用于驗(yàn)證MAPKAPK5靶標(biāo)的兩種病毒(Ad5-MAPKAPK5-v12_KD和Ad5-MAPKAPK5-v13)也導(dǎo)致復(fù)合體觸發(fā)劑誘導(dǎo)的原代人SF表達(dá)的MMP1顯著降低。由該試驗(yàn)可以得出以下結(jié)論MAPKAPK5代表有價(jià)值的藥物靶標(biāo)，其顯示了調(diào)節(jié)SF中MMP1表達(dá)。類似的是，希望通過小分子化合物抑制MAPKAPK5酶活性降低‘MMP試驗(yàn)’中‘復(fù)合體細(xì)胞因子’誘導(dǎo)的MMP1表達(dá)。也希望通過小分子化合物抑制MAPKAPK5酶活性降低與RA有關(guān)的關(guān)節(jié)的降解。
(C)體外‘MMP試驗(yàn)’試驗(yàn)抑制MAPKAPK5的化合物 根據(jù)下面試驗(yàn)方法在‘MMP試驗(yàn)’中試驗(yàn)在生物化學(xué)試驗(yàn)中(即無細(xì)胞，應(yīng)用純化的酶)抑制MAPKAPK5活性的化合物。
將化合物原儲(chǔ)備液(所有的在100％DMSO中，濃度為10mM)以10倍稀釋在水中(蒸餾水，GIBCO，無DNA酶和RNA酶)以獲得在10％DMSO中的1mM中間工作儲(chǔ)備液。將該中間工作儲(chǔ)備液進(jìn)一步以3倍(或10倍)稀釋在10％DMSO中以分別獲得在10％DMSO中的333μM(或100μM)的中間工作儲(chǔ)備液。然后將1mM和333μM(或100μM)中間工作儲(chǔ)備液進(jìn)一步以10倍稀釋在1.1％DMSO中以獲得在2％DMSO中的100μM和33.3μM(或10μM)濃度的10×工作儲(chǔ)備液。然后將10×工作儲(chǔ)備液以10倍稀釋在添加1％FBS的M199培養(yǎng)基中以獲得最終‘1×化合物制劑’，其包含10μM和3.33μM(或1μM)的化合物和0.2％DMSO。這些是在細(xì)胞上試驗(yàn)化合物的最終條件。與此平行，將10×工作儲(chǔ)備液以10倍稀釋在‘復(fù)合體觸發(fā)劑’(即如實(shí)施例1中描述產(chǎn)生的TNF-α處理的THP1的上清液)中，將其以2倍稀釋在添加1％FBS的M199中以產(chǎn)生‘在50％復(fù)合體觸發(fā)劑中的1×化合物制劑’。
第1天，將RASF以3000個(gè)細(xì)胞/孔的密度接種在具有完全滑液生長(zhǎng)培養(yǎng)基(Cell Applications)的96孔板(平底，組織培養(yǎng)基處理的，Greiner)中。第5天，將化合物按如下方法加入到培養(yǎng)的細(xì)胞中。將培養(yǎng)基從細(xì)胞中完全除去并且用75μL的‘1×化合物制劑’代替，所述的‘1×化合物制劑’包含在添加1％FBS和0.2％DMSO的M199培養(yǎng)基中濃度為10μM或3.33μM(或1μM)的化合物。培養(yǎng)2小時(shí)后(使化合物平衡并且進(jìn)入細(xì)胞中)，將25μL的‘在50％復(fù)合體觸發(fā)劑中的1×化合物制劑’加入到孔中，其在‘1×化合物制劑’上面，這些孔中包含相應(yīng)濃度的相應(yīng)化合物。在該方法中，將8被稀釋的復(fù)合體觸發(fā)劑最終應(yīng)用到細(xì)胞中。然后培養(yǎng)48小時(shí)，然后將20μL的細(xì)胞上清液如上述進(jìn)行MMP1 ELISA，獲得原始數(shù)據(jù)(RLU相對(duì)發(fā)光單位)。以下對(duì)照包括在試驗(yàn)中。最高的信號(hào)對(duì)照，其中細(xì)胞由復(fù)合體觸發(fā)劑活化，但是僅加入0.2％DMSO介質(zhì)(并且因此無化合物)。該對(duì)照說明可以在試驗(yàn)中獲得的MMP1的最高水平。最小的信號(hào)對(duì)照也包括在這些試驗(yàn)中。其中細(xì)胞沒有被觸發(fā)。然后在第5天將細(xì)胞的培養(yǎng)基換為100μL添加1％FBS的M199培養(yǎng)基。該對(duì)照恢復(fù)到由RASF產(chǎn)生的基礎(chǔ)MMP1水平。然后基于ELISA返回的RLU數(shù)據(jù)計(jì)算由化合物獲得的MMP1表達(dá)的抑制百分?jǐn)?shù)，應(yīng)用以下公式 [[(最高M(jìn)MP1水平-最低MMP1水平)-(化合物X在濃度Y下的MMP1水平-最低MMP1水平)]/(最高M(jìn)MP1水平-最低MMP1水平)]×100。
化合物的毒性評(píng)價(jià)如下。第1天，將SF以每孔3000個(gè)細(xì)胞的密度接種在具有100μL完全滑液生長(zhǎng)培養(yǎng)基的白色、組織培養(yǎng)基處理的96孔板中。在本實(shí)施例中如上述進(jìn)一步進(jìn)行化合物處理、將化合物加入到細(xì)胞中以及活化細(xì)胞，用于測(cè)定MMPI水平。培養(yǎng)48小時(shí)后，將培養(yǎng)基從孔中除去，并且用50μL添加1％FBS的新制M199培養(yǎng)基代替。然后將50μL的底物(Promega Celltiter Glow細(xì)胞活力試劑盒)加入到孔中。培養(yǎng)10分鐘后，測(cè)定發(fā)光信號(hào)。與最高對(duì)照孔相比發(fā)光信號(hào)降低超過50％被認(rèn)為反映出顯著的毒性。在‘MMP試驗(yàn)’中試驗(yàn)的化合物沒有觀察到毒性。
應(yīng)當(dāng)理解的是，多種因素(例如不同化合物的不同細(xì)胞滲透能力)可以引起體外生物化學(xué)和細(xì)胞MMP試驗(yàn)之間化合物活性的差異。
對(duì)于以下表3和表4，可以應(yīng)用本文描述的試驗(yàn)方法確定的每個(gè)化合物的MMP1 EC50表示如下 ＊＊＊＊化合物顯示的MMP1 EC50 1-100nM ＊＊＊ 化合物顯示的MMP1 EC50 101-500nM ＊＊化合物顯示的MMP1 EC50 501-1000nM ＊ 化合物顯示的MMP1 EC50>1000nM 表3 表4 實(shí)施例3用于評(píng)價(jià)化合物對(duì)人PBMC釋放的細(xì)胞因子的作用的試驗(yàn) 人外周血單核細(xì)胞(PBMC)是由健康志愿者血制備的“血沉棕黃層”分離的，分離基本上根據(jù)

(1984)的方法。簡(jiǎn)而言之，將血沉棕黃層用1×PBS(Gibco)以1:1稀釋并且將30mL小心地置于在50mL Falcon試管中的20mL LymphoprepTM(Lucron Bioproducts)上面。離心(35分鐘，400g，18℃)后，將單核細(xì)胞從白色界間收集并且通過重懸浮和離心(10分鐘，200g)用1×PBS洗滌三次。將分離的PBMC最后重懸浮在添加10％熱滅活的FBS(Hyclone)的RPMI 1640(Cat.No.21875，Gibco)中。
對(duì)于本試驗(yàn)，將PBMC以2.5E6個(gè)細(xì)胞/mL以160μL接種在96孔板(Nunc)中。將逐級(jí)稀釋的試驗(yàn)化合物首先制備在DMSO(Sigma)中，然后在含有1％熱滅活的FBS的M199培養(yǎng)基(Gibco)中稀釋50倍。將化合物在試驗(yàn)板中進(jìn)一步1/10稀釋以獲得最終DMSO濃度為0.2％。將細(xì)胞與化合物在37℃、5％CO2下預(yù)培養(yǎng)1小時(shí)。然后，將細(xì)胞用LPS(大腸桿菌血清型026:B6，Cat.No.L2654，Sigma)(以體積20μL加入至終濃度為1μg/mL)刺激并且將細(xì)胞進(jìn)一步培養(yǎng)24小時(shí)。將板離心并且將上清液收集并且在-80℃下貯存直到分析ELISA中的適當(dāng)?shù)南♂尅?br> 開發(fā)以下384孔化學(xué)發(fā)光ELISA試驗(yàn)方法以測(cè)量上清液中的TNFα水平將白色Lumitrac 600 384孔板(Greiner)用(40μL/孔)抗TNFα捕獲抗體(Cat.No.551220，BD Pharmingen)包被，該抗體在1×PBS(Gibco)中稀釋至1μg/mL。在4℃下培養(yǎng)過夜后，將板用1×PBS(在10L milliQ中的80gNaCl、2g KCl(Sigma)、11.5g Na2HPO4·7H2O和2g KH2PO4；pH 7.4)洗滌并且用100μL/孔緩沖液B(包含1％BSA(Sigma)、5％蔗糖(Sigma)和0.05％NaN3(Sigma)的1×PBS)封閉。在室溫下培養(yǎng)4小時(shí)后，將封閉緩沖液除去并且將板用PBST(含有0.05％Tween-20(Sigma)的1×PBS)洗滌一次。然后，將40μL樣品轉(zhuǎn)移到ELISA板中并且將板在4℃下培養(yǎng)。第二天，將板洗滌3次(用PBST洗滌兩次并且用PBS洗滌一次)并且加入35μL/孔生物素化的抗TNFα抗體(Cat.No.554511，BD Pharmingen)，該抗體首先在緩沖液D(含有1％BSA的1×PBS)中稀釋濃度為250ng/mL。在室溫下培養(yǎng)2小時(shí)后，將板如上述洗滌并且加入35μL/孔的在緩沖液D中1/2000稀釋的鏈霉親和素-HRP偶聯(lián)物(Cat.No.SNN2004，Biosource)。45分鐘后，將板如上述洗滌并且與50μL/孔BM化學(xué)發(fā)光ELISA底物POD(Roche)一起培養(yǎng)5分鐘。讀數(shù)是在Luminoscan Ascent Luminometer(Labsystems)上進(jìn)行的，積分時(shí)間為100毫秒，給出原始數(shù)據(jù)(RLU相對(duì)發(fā)光單位)。以下對(duì)照包括在試驗(yàn)中，最高的信號(hào)對(duì)照，其中細(xì)胞由LPS活化，但是僅加入0.2％DMSO介質(zhì)(并且因此無化合物)。該對(duì)照說明可以在試驗(yàn)中獲得的TNFα的最高水平。最小的信號(hào)對(duì)照也包括在這些試驗(yàn)中。其中細(xì)胞沒有被觸發(fā)。該對(duì)照恢復(fù)到由PBMC產(chǎn)生的基礎(chǔ)TNFα水平。然后基于ELISA返回的RLU數(shù)據(jù)計(jì)算由化合物獲得的TNFα釋放抑制百分?jǐn)?shù)(PIN)，應(yīng)用以下公式100-[((化合物X在濃度Y下的TNFα水平-最低TNFα水平)/(最高TNFα水平-最低TNFα水平))×100]。其中化合物在8個(gè)濃度(1/3逐級(jí)稀釋)下試驗(yàn)，EC50值可以由化合物在每個(gè)試驗(yàn)濃度下獲得的PIN數(shù)據(jù)的平均值的曲線擬合來計(jì)算。
為了試驗(yàn)化合物對(duì)由LPS刺激的PBMC培養(yǎng)引起的IL1和IL6釋放的影響，適當(dāng)稀釋的上清液可以應(yīng)用上述相同的ELISA試驗(yàn)方法來測(cè)量。與IL1和IL6 ELISA(全部購自R&D Systems)配對(duì)的抗體可以應(yīng)用如下抗IL1捕獲抗體(Cat.No.MAB601)以0.5μg/mL應(yīng)用，生物素化的抗IL1檢測(cè)抗體(Cat.No.BAF201)以50ng/mL應(yīng)用；抗IL6捕獲抗體(Cat.No.MAB206)以1μg/mL應(yīng)用，生物素化的抗IL6檢測(cè)抗體(Cat.No.BAF206)以50ng/mL應(yīng)用。
對(duì)于以下表5，可以應(yīng)用本文描述的試驗(yàn)方法確定的每個(gè)化合物的PBMC EC50表示如下 ####化合物顯示的PBMC EC50 1-100nM ### 化合物顯示的PBMC EC50 101-500nM ## 化合物顯示的PBMC EC50 501-1000nM # 化合物顯示的PBMC EC50>1000nM 表5 本發(fā)明還涉及治療或預(yù)防炎性疾病的方法，該方法包括給需要的個(gè)體施用治療有效的抑制劑，該抑制劑是促分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶5抑劑量的式I化合物。
本方法發(fā)明的另一個(gè)方面涉及治療或預(yù)防具有異?；|(zhì)金屬蛋白酶活性特征的病癥的方法，該方法包括施用治療有效量的抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的式I化合物。
本方法發(fā)明的進(jìn)一步的方面是治療或預(yù)防選自涉及胞外基質(zhì)降解的疾病的病癥的方法，該方法包括施用治療有效的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制量的式I化合物。
本方法發(fā)明的進(jìn)一步的方面是治療或預(yù)防選自涉及MMP1異常細(xì)胞表達(dá)的疾病的病癥的方法，該方法包括施用治療有效的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制量的式I化合物。
本方法發(fā)明的特別實(shí)施方案是治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法，該方法包括給需要的個(gè)體施用治療有效量的式I化合物。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明化合物在制備用于治療或預(yù)防通過施用促分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶5抑制劑來預(yù)防、改善或消除的病癥或者具有異常膠原酶活性特征的病癥或者選自涉及炎癥的疾病的病癥，最優(yōu)選用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途。
給個(gè)體患者施用本發(fā)明化合物包括自我施用和通過另一個(gè)人施用。患者可能需要治療存在的疾病或醫(yī)學(xué)病癥，或可能希望預(yù)防治療以防止或降低由骨代謝紊亂引起的疾病和醫(yī)學(xué)病癥的風(fēng)險(xiǎn)。本發(fā)明化合物可以通過口服、透皮、經(jīng)吸入、注射、鼻內(nèi)、直腸或通過緩釋制劑來傳遞至個(gè)體患者。
本方法的優(yōu)選方案包括給患有具有炎性特征的疾病病癥的個(gè)體施用有效的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制量的本發(fā)明化合物足夠時(shí)間以降低患者胞外基質(zhì)降解的異常水平，并且優(yōu)選終止對(duì)所述降解響應(yīng)的自身延續(xù)性進(jìn)程。該方法的特別實(shí)施方案包括給患有或易感發(fā)生類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)展的個(gè)體患者施用有效的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制量的本發(fā)明化合物足夠時(shí)間以分別降低或預(yù)防所述患者關(guān)節(jié)中膠原和骨降解，并且優(yōu)選終止對(duì)所述降解響應(yīng)的自身延續(xù)性進(jìn)程。
此類化合物的毒性和治療功效可以通過標(biāo)準(zhǔn)的藥物方法在細(xì)胞培養(yǎng)或試驗(yàn)動(dòng)物中測(cè)定，例如對(duì)于測(cè)定LD50(50％群體的致死劑量)和ED50(50％群體的治療有效劑量)。毒性和治療效應(yīng)之間的劑量比是治療指數(shù)并且它可以表示為L(zhǎng)D50/ED50。優(yōu)選表現(xiàn)出高治療指數(shù)的化合物。當(dāng)可以應(yīng)用顯示出毒副作用的化合物時(shí)，應(yīng)當(dāng)謹(jǐn)慎設(shè)計(jì)釋放系統(tǒng)，該系統(tǒng)將此類化合物靶向至受影響的組織位點(diǎn)以便將對(duì)未感染細(xì)胞的潛在損傷降到最小，從而降低副作用。
由細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)和動(dòng)物研究獲得的數(shù)據(jù)可以用于配制用于人的劑量范圍。此類化合物的劑量?jī)?yōu)選位于循環(huán)濃度的范圍內(nèi)，其包括具有很小或無毒性的ED50。劑量可以在該范圍內(nèi)取決于所用的劑型和所應(yīng)用的施用途徑而不同。對(duì)于本發(fā)明方法中所用的任何化合物，治療有效劑量最初可以由細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)估算?？梢栽趧?dòng)物模型中配制劑量以獲得循環(huán)血漿濃度范圍，其包括細(xì)胞培養(yǎng)中測(cè)定的IC50(即獲得最大抑制癥狀一半的試驗(yàn)化合物的濃度)。此類信息可以用于更準(zhǔn)確地測(cè)定人的有用劑量。血漿中的水平可以例如通過高效液相色譜法來測(cè)定。
施用于個(gè)體患者的本發(fā)明化合物的優(yōu)選治療有效量是約0.1mg/kg至約10mg/kg，每天施用一次至三次。例如，本方法的有效方案可以施用約5mg至約1000mg所述的本發(fā)明化合物，每天一次至三次。但是應(yīng)當(dāng)理解的是，對(duì)于任何特別的個(gè)體患者的特別劑量水平將取決于多種因素包括年齡、體重、一般健康、性別、飲食、施用次數(shù)、施用途徑、排泄速率、藥物組合和特別炎性病癥的嚴(yán)重程度而不同。這些因素的考慮是在普通熟練臨床醫(yī)師的范圍內(nèi)，用于測(cè)定預(yù)防、消除或阻止病癥進(jìn)程所需的治療有效或預(yù)防有效劑量的目的。
將本發(fā)明化合物可以參入適于施用的藥物組合物中。此類組合物典型地包括至少一種本發(fā)明化合物和至少一種可藥用載體。本文所用的語言“可藥用載體”旨在包括與藥物施用相容的固體載體，例如乳糖、硬脂酸鎂、石膏粉、蔗糖、滑石粉、硬脂酸、明膠、瓊脂、果膠、阿拉伯膠等；以及液體，例如植物油、花生油和無菌水等，任何和所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣劑、抗菌劑和抗真菌劑、等滲和吸收延長(zhǎng)劑等?？伤幱幂d體的列表不解釋為限制。此類介質(zhì)和試劑作為藥用活性物質(zhì)的用途是本領(lǐng)域眾所周知的。除了與活性化合物不相容的任何常規(guī)介質(zhì)或試劑之外，其在組合物中的用途是要仔細(xì)考慮的。還可以將補(bǔ)充的活性化合物摻入到組合物中。
將本發(fā)明藥物組合物配制為與其預(yù)期施用途徑相容。施用途徑的實(shí)例包括非腸道，例如靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、口服(例如吸入)、透皮(局部)、透粘膜和直腸施用。用于非腸道、皮內(nèi)或皮下應(yīng)用的溶液劑或混懸劑可以包括以下組分無菌稀釋劑，例如注射用水、生理鹽水溶液、不揮發(fā)性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑；抗菌劑，例如芐基醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，例如乙二胺四乙酸；緩沖劑，例如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽以及調(diào)節(jié)張力的試劑，例如氯化鈉或右旋糖。pH可以用酸或堿來調(diào)節(jié)，例如鹽酸或氫氧化鈉。非腸道制劑可以密封于安瓿、一次性注射器或用玻璃或塑料制成的多劑量瓶中。
適用于注射的藥物組合物包括無菌水溶液(水溶的)或分散劑以及用于臨時(shí)制備無菌可注射溶液劑或分散劑的無菌粉末。對(duì)于靜脈內(nèi)施用，適合的載體包括生理鹽水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF，Parsippany，NJ)或磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。在所有情況中，組合物必須是無菌的并且在一定程度上應(yīng)該是易于注射的液體。其在制備和儲(chǔ)存的條件下必須是穩(wěn)定的并且必須能防止微生物(例如細(xì)菌和真菌)的污染作用。載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，包括例如，水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)以及它們適合的混合物。適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性可以例如通過應(yīng)用包衣(例如卵磷脂)、在分散的情況下通過維持所需的顆粒大小以及通過應(yīng)用表面活性劑來維持。防止微生物作用可以通過多種抗菌劑和抗真菌劑來實(shí)現(xiàn)，例如對(duì)羥基苯甲酸酯類、三氯叔丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞等。在很多情況中，組合物中優(yōu)選包括等滲劑，例如糖、多元醇(例如甘露醇、山梨醇)、氯化鈉。延長(zhǎng)吸收的可注射組合物可以通過在組合物中包含延長(zhǎng)吸收的試劑，例如單硬脂酸鋁和明膠來實(shí)現(xiàn)。
無菌可注射溶液劑可以通過將所需量的活性化合物(例如本發(fā)明實(shí)施方案的化合物)與上面列舉的一種或成分的組合(如果需要)一起摻入到適合的溶劑中，隨后通過過濾滅菌制備。通常，分散劑是通過將活性化合物摻入到包含基本分散介質(zhì)和所需的其它上面列舉的成分的無菌介質(zhì)中制備的。在用無菌粉末制備無菌可注射溶液劑的情況中，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和凍干，其產(chǎn)生活性成分的粉末加上任何另外的預(yù)期成分(來自先前的無菌過濾溶液)。
口服組合物通常包括惰性稀釋劑或可食用載體。它們可以密封于膠囊中或壓制成片劑。對(duì)于口服治療施用，活性化合物可以與賦形劑混合并且以片劑、含片或膠囊劑形式應(yīng)用。口服組合物還可以應(yīng)用用作漱口劑的液體載體來制備，其中將液體載體中的化合物口服應(yīng)用并且swish并且吐出或吞下。
可藥用的粘合劑和/或佐劑可以包括作為組合物的一部分。片劑、丸劑、膠囊、含片等可以包含任何下列成分或類似性質(zhì)的化合物粘合劑，例如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑，例如淀粉或乳糖；崩解劑，例如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；潤(rùn)滑劑，例如硬脂酸鎂或Sterotes；助流劑，例如膠體二氧化硅；甜味劑，例如蔗糖或糖精；或矯味劑，例如薄荷、水楊酸甲酯或橙類矯味劑。
對(duì)于吸入施用，化合物以氣霧劑形式釋放，其由包含適合的拋射劑(例如氣體，例如二氧化碳)的壓力容器或分配器或霧化器噴出。
全身施用還可以是透粘膜或透皮方式。對(duì)于透粘膜或透皮施用，制劑中應(yīng)用適合穿透屏障的滲透劑。此類滲透劑通常是本領(lǐng)域已知的并且包括例如對(duì)于透粘膜施用的去垢劑、膽酸鹽和夫西地酸衍生物。透粘膜施用可以通過應(yīng)用鼻噴霧劑或栓劑來完成。對(duì)于透皮施用，將活性化合物配制成通常在本領(lǐng)域中已知的軟膏劑、藥膏、凝膠劑或乳膏劑。
化合物還可以以栓劑(例如與常規(guī)栓劑基質(zhì)，例如可可脂和其它甘油酯一起)或滯留型灌腸劑的形式制備，用于直腸釋放。
在一個(gè)實(shí)施方案中，將活性化合物與防止化合物從體內(nèi)快速消除的載體一起制備，例如控釋制劑，包括植入劑和微囊釋放系統(tǒng)?？梢詰?yīng)用生物可降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯類和聚乳酸。制備此類制劑的方法對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。物質(zhì)還可以例如從Alza Corporation和Nova Pharmaceuticals，Inc.商購獲得。脂質(zhì)體混懸劑(包括靶向具有針對(duì)病毒抗原的單克隆抗體的感染細(xì)胞的脂質(zhì)體)還可以用作可藥用載體。這些可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法來制備。
特別有利的是，將口服或非腸道組合物配制成易于施用并且劑量均一的劑量單位形式。本文所用的劑量單位形式指的是物理上分離的單元，其適合作為單獨(dú)劑量用于所治療的個(gè)體；每個(gè)單位包含計(jì)算的預(yù)定量的活性化合物以產(chǎn)生預(yù)期的治療作用以及所需的藥用載體。本發(fā)明的劑量單位形式的說明書由活性化合物的獨(dú)特特性和所獲得的特別治療作用以及在配制用于治療個(gè)體的此類活性化合物中的固有限制描述并且直接取決于它們。
藥物組合物可以與施用說明書一起包含在容器、包裝或分配器中。
本發(fā)明實(shí)施方案的化合物可以以鹽，優(yōu)選以式I化合物的可藥用鹽提供。這些化合物的可藥用鹽的實(shí)例包括衍生自酸的那些鹽，所述的有機(jī)酸例如乙酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、乳酸、草酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、苯甲酸、水楊酸、苯乙酸、扁桃酸、甲磺酸、苯磺酸和對(duì)-甲苯磺酸；無機(jī)酸，例如鹽水和硫酸等，各自得到甲磺酸鹽、苯甲磺酸鹽、對(duì)-甲苯磺酸鹽、鹽酸鹽和硫酸鹽等，或者衍生自堿的那些鹽，所述的堿例如有機(jī)和無機(jī)堿。用于形成本發(fā)明化合物的鹽的適合的無機(jī)堿的實(shí)例包括銨、鋰、鈉、鈣、鉀、鋁、鐵、鎂、鋅等的氫氧化物、碳酸鹽和碳酸氫鹽。鹽還可以用適合的有機(jī)堿形成。適于與本發(fā)明化合物形成可藥用堿加成鹽的此類堿包括無毒并且強(qiáng)度足以形成鹽的有機(jī)堿。此類有機(jī)堿已經(jīng)是本領(lǐng)域眾所周知的并且可以包括氨基酸，例如精氨酸和賴氨酸，一、二或三羥基烷基胺(例如一、二和三乙醇胺)、膽堿、一、二和三烷基胺(例如甲胺、二甲胺和三甲胺)、胍；N-甲基葡糖胺；N-甲基哌嗪；嗎啉；乙二胺；N-芐基苯乙胺；三(羥基甲基)氨基甲烷等。
本發(fā)明實(shí)施方案的化合物的鹽可以以常規(guī)方式應(yīng)用本領(lǐng)域已知的方法制備。所述的堿性化合物的酸加成鹽可以通過將根據(jù)本發(fā)明的第一或第二方面的游離堿化合物溶于包含所需的酸的水或含水醇溶液或其它適合溶劑中制備。當(dāng)本發(fā)明化合物包含酸性官能時(shí)，所述化合物的堿鹽可以通過將所述化合物與適合的堿反應(yīng)制備。酸或堿鹽可以直接分離或可以通過濃縮溶液，例如通過蒸發(fā)來獲得。本發(fā)明化合物還可以以溶劑化或水合形式存在。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解的是，以上描述本質(zhì)上是示例性的和說明性的，并且旨在說明本發(fā)明和其優(yōu)選的實(shí)施方案。通過常規(guī)試驗(yàn)，技術(shù)人員將意識(shí)到顯而易見的修飾和變化而不脫離本發(fā)明的精神。因此，本發(fā)明旨在不是由以上描述定義，而是由下列權(quán)利要求和它們的同等物定義。
參考文獻(xiàn)
Choy EH，Panayi GS.(2001).N Engl J Med.344907-16.
Firestein GS.(2003).Nature.423356-61.
Smolen JS，Steiner G.(2003).Nat Rev Drug Discov.2473-88.
Lee DM，Weinblatt ME(2001).Lancet.358903-11.
Kremer J.M.，Westhovens R.，Leon M.，Di Giorgio E.，Alten R.，Steinfeld S.，Russell A.，Dougados M.，Emery P.，Nuamah I.F.，Williams G.R.，Becker J.-C.，Hagerty D.T.，Moreland L.W.(2003)N Engl J Med.3491907-1915.
Edwards J.C.W.，Szczepanski L.，Szechinski J.，F(xiàn)ilipowicz-SosnowskaA.，Emery P.，Close D.R.，Stevens R.M.，Shaw T.(2004)N Engl J Med.3502572-2581.
O’Dell JR，Leff R，Paulsen G，Haire C，Mallek J，Eckhoff PJ，F(xiàn)ernandez A，Blakely K，Wees S，Stoner J，Hadley S，F(xiàn)elt J，Palmer W，Waytz P，Churchill M，Klassen L，Moore G.(2002)Arthritis Rheum.461164-70.
St Clair EW，van der Heij de DM，Smolen JS，Maini RN，Bathon JM，Emery P，Keystone E，Schiff M，Kalden JR，Wang B，Dewoody K，Weiss R，Baker D；(2004)Combination of infliximab and methotrexate therapy forearly rheumatoid arthritisa randomized，controlled trial(英夫利昔單抗和甲氨蝶呤組合治療早期類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎隨機(jī)、對(duì)照試驗(yàn)).Arthritis Rheum.503432-43.
Gomez-Reino JJ等人(2003).Arthritis Rheum.482122-7.
O’Dell JR.(2004)Therapeutic strategies for rheumatoid arthritis(類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療策略).N Engl J Med.350(25)2591-602.
New L，Jiang Y，Han J.(2003)Regulation of PRAK subcellularlocation by p38 MAP kinases(p38MAP激酶對(duì)PRAK亞細(xì)胞定位的調(diào)節(jié)).Mol Biol Cell.14(6)2603-16.
Shi Y，Kotlyarov A，Laabeta K，Gruber AD，Butt E，Marcus K，MeyerHE，F(xiàn)riedrich A，Volk HD，Gaestel M.(2003)Elimination of protein kinaseMK5/PRAK activity by targeted homologous recombination(靶向同源重組對(duì)蛋白激酶MK5/PRAK活性的消除).Mol Cell Biol.237732-41.
Seternes OM，Mikalsen T，Johansen B，Michaelsen E，ArmstrongCG，Morrice NA，Turgeon B，Meloche S，Moens U，Keyse SM.(2004)Activation of MK5/PRAK by the atypical MAP kinase ERK3 defines anovel signal transduction pathway(非典型MAP激酶ERK3對(duì)MK5/PRAK的活化定義了新的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑).
EMBO J.234780-91.
Andreakos E等人(2003).Arthritis Rheum.481901-12.
Cunnane G等人(2001).Arthritis Rheum 442263-74.
Coussens LM等人(2002).Science 2952387-92.
Creemers EE等人(2001).Circ Res.2001 89201-10
Gapski R等人(2004).J Periodontol.75441-52.
Reif S，Somech R，Brazovski E，Reich R，Belson A，Konikoff FM，Kessler A.(2005)Digestion.71124-130.
Rosenberg GA.(2002).Glia.39279-91.
Schanstra JP等人(2002).J Clin Invest.110371-9.
Suzuki R等人(2004).Treat Respir Med.317-27.
由以上描述可知，本發(fā)明組合物和方法中的多種修飾和改變對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員完成。附屬權(quán)利要求范圍內(nèi)的所有此類修飾旨在包括在其中。
應(yīng)當(dāng)理解的是，多種因素(例如不同化合物的不同細(xì)胞滲透能力)可以引起體外生物化學(xué)和細(xì)胞試驗(yàn)之間化合物活性的差異。
將在本說明書中引用的所有出版物(包括但不限于專利和專利申請(qǐng))并入本文作為參考，猶如將每個(gè)單獨(dú)的出版物特別地并且單獨(dú)地說明并入本文作為參考等同于將全部并入本文作為參考。
本申請(qǐng)書中給出的本發(fā)明化合物的化學(xué)名是由MDL’s ISIS DrawAutonom軟件工具產(chǎn)生的并且是未證實(shí)的。在不一致性的事件中，優(yōu)選應(yīng)用描述的結(jié)構(gòu)。
<110>Galapagos N.V.
Andrews，Martin J I
Edwards，Paul
Chambers，Mark S
Schmidt，Wolfgang
Clase，Juha A
Bar，Gregory
Hirst，Kim L
Angus，MacLeod
<120>用于治療變性和炎性疾病的三唑并吡嗪化合物
<130>GAL-033-WO-PCT
<150>US 60/803,552
<151>2006-05-31
<150>US 60/
<151>2007-05-25
<150>US 60/
<151>2007-05-25
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<151>2007-05-29
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<170>PatentIn版本3.4
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<400>權(quán)利要求
1.式III化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或前藥以及其立體異構(gòu)體、同位素變體和互變異構(gòu)體
其中
R1是H或者取代的或未取代的烷基；并且每個(gè)R8和R9獨(dú)立地選自取代的或未取代的環(huán)烷基、取代的或未取代的雜環(huán)烷基、取代的或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R8選自取代的或未取代的環(huán)戊基、環(huán)己基、取代的或未取代的苯基、取代的或未取代的吡啶基、取代的或未取代的嘧啶和取代的或未取代的吡嗪、取代的或未取代的吡咯、取代的或未取代的吡唑以及取代的或未取代的咪唑。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中R8選自取代的苯基、取代的吡啶基和取代的嘧啶；并且取代基是
-L-R8d；并且其中
L選自鍵、亞烷基、雜亞烷基、-O-、-N(R8e)-、-CO-、-CO2-、-SO-、-SO2-、-CON(R8e)-、-SO2N(R8e)-、-N(R8e)CO-、-N(R8e)SO2-、-N(R8e)CON(R8e)-、-N(R8e)SO2N(R8e)-；并且
R8d選自取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的環(huán)烷基、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的雜環(huán)烷基、取代的或未取代的雜芳基、取代的或未取代的氨基、取代的或未取代的芳烷基、取代的或未取代的雜芳基烷基和取代的或未取代的氨基烷基；并且
R8e選自H、取代的或未取代的烷基和取代的或未取代的環(huán)烷基。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中R8是
其中L和R8d如權(quán)利要求3中描述的；下標(biāo)n選自1-4；并且每個(gè)R8a獨(dú)立地選自氫、取代的或未取代的烷基、烷氧基、氰基和鹵素。
5.權(quán)利要求4的化合物，其中L是鍵、-O-、-CO-、-CON(R8e)-或-N(R8e)CO-；
R8d選自取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的環(huán)烷基、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的雜環(huán)烷基、取代的或未取代的雜芳基、取代的或未取代的芳烷基、取代的或未取代的雜芳基烷基和取代的或未取代的氨基烷基；并且
R8e選自H、取代的或未取代的烷基。
6.權(quán)利要求4的化合物，其中L是鍵、-O-、-CO-、-CON(R8e)-或-N(R8e)CO-；并且
R8d選自H、烷基氨基乙基、二烷基氨基乙基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基烷基和雜芳基烷基。
7.權(quán)利要求4的化合物，其中L是鍵、-O-、-CO-、-CON(R8e)-或-N(R8e)CO-；并且
R8d選自H、甲基氨基乙基、乙基氨基乙基、二甲基氨基乙基、二乙基氨基乙基、取代的或未取代的吡咯烷基、芐基和吡啶基甲基。
8.權(quán)利要求4的化合物，其中L是鍵、-CO-、-O(CH2)m1-、-CON(H)(CH2)m1-或-NHCO-；下標(biāo)m1選自1-4；并且R8d是
并且其中環(huán)P是取代的或未取代的雜環(huán)烷基。
9.式IVa、IVb、IVc或IVd化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或前藥以及其立體異構(gòu)體、同位素變體和互變異構(gòu)體
并且其中L和環(huán)P如權(quán)利要求8中描述的；下標(biāo)n選自1-4；每個(gè)R8a獨(dú)立地選自氫、取代的或未取代的烷基、烷氧基、氰基和鹵素；并且R9獨(dú)立地選自取代的或未取代的芳基和雜芳基。
10.權(quán)利要求9的化合物，其中L是鍵。
11.權(quán)利要求9的化合物，其中L是-CO-。
12.權(quán)利要求9的化合物，其中L是-NHCO-或-CONH-。
13.權(quán)利要求9的化合物，其中L是-CON(H)-CH2-CH2-或-N(H)-CO-CH2-CH2-。
14.權(quán)利要求9的化合物，其中L是-OCH2-CH2-或-NHCH2-CH2-。
15.權(quán)利要求9-14中任意一項(xiàng)的化合物，其中環(huán)P是取代的或未取代的哌啶、嗎啉或哌嗪。
16.權(quán)利要求9的化合物，其中每個(gè)R8a是H。
17.權(quán)利要求9的化合物，其中下標(biāo)n是1并且R8a是Me、Et、Pr、異-Pr、Cl、F、CN、OMe或CF3。
18.權(quán)利要求1的化合物，其中化合物是式Va、Vb、Vc、Vd、Ve或Vf
其中R9如權(quán)利要求1中描述的并且R8b是氫、取代的或未取代的烷基或者取代的或未取代的環(huán)烷基。
19.權(quán)利要求18的化合物，其中R8b是H。
20.權(quán)利要求18的化合物，其中R8b是取代的或未取代的烷基或者取代的或未取代的環(huán)烷基。
21.權(quán)利要求18的化合物，其中R8b是Me、Et、Pr、i-Pr、t-Bu、i-Bu、CH2CONH2、環(huán)丙基或環(huán)丙基甲基。
22.權(quán)利要求1的化合物，其中R9選自取代的或未取代的芳基。
23.權(quán)利要求1的化合物，其中R9選自取代的或未取代的苯基。
24.權(quán)利要求1的化合物，其中R9選自取代的或未取代的雜芳基。
25.權(quán)利要求1的化合物，其中R9選自取代的或未取代的苯基、吡啶基、吲哚基、異吲哚基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、噁唑基和噻唑基。
26.權(quán)利要求1-25中任意一項(xiàng)的化合物，其中R9是
或
并且每個(gè)A1、A2和A3獨(dú)立地選自S、O、N、NR9a和CR9a；每個(gè)R9a獨(dú)立地是H或者取代的或未取代的烷基；并且R9b是CONH2、CONHMe或CN。
27.權(quán)利要求1-25中任意一項(xiàng)的化合物，其中R9是
或
28.權(quán)利要求1-25中任意一項(xiàng)的化合物，其中R9是
或
29.權(quán)利要求1-25中任意一項(xiàng)的化合物，其中R9是
并且其中下標(biāo)m選自1-4并且每個(gè)R9d獨(dú)立地是H、取代的或未取代的烷基或鹵素。
30.權(quán)利要求1-25中任意一項(xiàng)的化合物，其中R9是
并且其中下標(biāo)m選自1-4并且每個(gè)R9d獨(dú)立地是H、取代的或未取代的烷基或鹵素。
31.權(quán)利要求1-25中任意一項(xiàng)的化合物，其中R9是
或
并且其中下標(biāo)m選自1-3并且每個(gè)R9d獨(dú)立地是H、取代的或未取代的烷基或鹵素。
32.權(quán)利要求29-31中任意一項(xiàng)的化合物，其中每個(gè)R9d是H。
33.權(quán)利要求29-31中任意一項(xiàng)的化合物，其中m是1或2并且每個(gè)R9d是Me、Cl或F。
34.權(quán)利要求1的化合物，其中化合物是式VIa、VIb、VIc、VId、VIe或VIf
并且R8b是氫、取代的或未取代的烷基或者取代的或未取代的環(huán)烷基。
35.權(quán)利要求1的化合物，其中化合物是式VIIa、VIIb、VIIc、VIId、VIIe或VIIf
并且R8b是氫、取代的或未取代的烷基或者取代的或未取代的環(huán)烷基。
36.權(quán)利要求1的化合物，其中化合物是式VIIIa、VIIIb、VIIIc、VIIId、VIIIe或VIIIf
并且R8b是氫、取代的或未取代的烷基或者取代的或未取代的環(huán)烷基。
37.權(quán)利要求1的化合物，其中化合物是IXa、IXb、IXc、IXd、IXe或IXf
并且R8b是氫、取代的或未取代的烷基或者取代的或未取代的環(huán)烷基。
38.權(quán)利要求1的化合物，其中化合物是式Xa、Xb、Xc、Xd、Xe或Xf
并且R8b是氫、取代的或未取代的烷基或者取代的或未取代的環(huán)烷基。
39.權(quán)利要求1的化合物，其中化合物是式XIa、XIb、XIc、XId、XIe或XIf
并且R8b是氫、取代的或未取代的烷基或者取代的或未取代的環(huán)烷基；并且R9e是H、Me或CN。
40.權(quán)利要求34-39中任意一項(xiàng)的化合物，其中R8b是H。
41.權(quán)利要求34-39中任意一項(xiàng)的化合物，其中R8b是環(huán)烷基。
42.權(quán)利要求34-39中任意一項(xiàng)的化合物，其中R8b是環(huán)丙基。
43.權(quán)利要求34-39中任意一項(xiàng)的化合物，其中R8b是取代的或未取代的烷基。
44.權(quán)利要求34-39中任意一項(xiàng)的化合物，其中R8b是Me、Et、Pr、i-Pr、t-Bu、i-Bu、CF3、CH2CF3、CH2CONH2或環(huán)丙基甲基。
45.權(quán)利要求1的化合物，其中化合物是式XIIa、XIIb、XIIc或XIId
46.權(quán)利要求1的化合物，其中化合物是式XIIIa、XIIIb、XIIIc或XIIId
47.權(quán)利要求1的化合物，其中化合物是式XIVa、XIVb、XIVc或XIVd
48.權(quán)利要求1的化合物，其中化合物是式XVa、XVb或XVc
并且L是鍵、-CO-或-O-CH2-CH2-；環(huán)P是
并且R8b是H、Me、i-Pr、t-Bu、CH2CONH2、環(huán)丙基甲基或CH2CF3。
49.權(quán)利要求48的化合物，其中L是鍵并且環(huán)P是
50.權(quán)利要求1的化合物，其中化合物選自
(4-嗎啉-4-基-苯基)-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；
[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；
4-{8-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-苯甲酰胺；
4-{8-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-1H-吡啶-2-酮；
4-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-苯甲酰胺；
4-{8-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺；
2-氟-4-{8-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-苯甲酰胺；
3-氟-4-{8-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-苯甲酰胺；
5-{8-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺；
3-氟-4-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-苯甲酰胺；
2-氟-4-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-苯甲酰胺；
[5-(5-甲基-1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；
[5-(5-甲基-1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；
5-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-噻吩-2-甲酰胺；
2，6-二氟-4-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-苯甲酰胺；
4-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-噻吩-2-甲酰胺；
[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-[5-(5-甲基-1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；
(3-氟-4-嗎啉-4-基-苯基)-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；
(3-氯-4-嗎啉-4-基-苯基)-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；
[4-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基]-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；
4-{8-[4-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺；
5-{8-[4-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺；
(4-嗎啉-4-基-苯基)-[5-(2H-吡唑-3-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；
4-{8-[4-((2R，6S)-2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺；
(4-嗎啉-4-基-3-三氟甲基-苯基)-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；
2，6-二氟-4-{8-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-苯甲酰胺；
4-[8-(4-哌嗪-1-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-噻吩-2-甲酰胺；
4-{8-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺；
5-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-呋喃-3-甲酰胺；
5-{8-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-呋喃-3-甲酰胺；
[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-[4-((2S，5R)-2，4，5-三甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-胺；
4-{8-[4-((2S，5R)-2，4，5-三甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺；
5-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
4-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-呋喃-2-甲酰胺；
6-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-3，4-二氫-2H-異喹啉-1-酮；
5-{8-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
{2-嗎啉-4-基-5-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯基}-甲醇；
[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基]-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；
6-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-3，4-二氫-1H-喹啉-2-酮；
(4-哌嗪-1-基-苯基)-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；
(6-嗎啉-4-基-吡啶-3-基)-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；
[6-(4-環(huán)丙基甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；
[6-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；
[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-{6-[4-(2，2，2-三氟-乙基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-胺；
[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-{4-[4-(2，2，2-三氟-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基}-胺；
[4-(4-環(huán)丙基甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；
4-[8-(6-嗎啉-4-基-吡啶-3-基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-噻吩-2-甲酰胺；
(5-苯并[#b！]噻吩-3-基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；
(5-苯并[#b！]噻吩-3-基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基]-胺；
(4-嗎啉-4-基-苯基)-(5-噻吩-3-基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-胺；
[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基]-(5-噻吩-3-基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-胺；
[5-(5-乙基-1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；
6-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-1，1-二氧代-1，2-二氫-1$l％6&-苯并[#d！]異噻唑-3-酮；
4-{8-[6-(4-環(huán)丙基甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺；
4-{8-[6-(4-異丙基-吡嗪-1-基)-吡啶-3-基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺；
4-(8-{6-[4-(2，2，2-三氟-乙基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基氨基}-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)-噻吩-2-甲酰胺；
4-(8-{4-[4-(2，2，2-三氟-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基氨基}-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)-噻吩-2-甲酰胺；
4-{8-[4-(4-環(huán)丙基甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺；
[4-(4-環(huán)丙基-哌嗪-1-基)-苯基]-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；
[6-(4-環(huán)丙基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；
4-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-噻唑-2-甲酰胺；
4-{8-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻唑-2-甲酰胺；
4-(8-{4-[1-(2，2，2-三氟-乙基)-哌啶-4-基]-苯基氨基}-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)-噻吩-2-甲酰胺；
[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-{4-[1-(2，2，2-三氟-乙基)-哌啶-4-基]-苯基}-胺；
5-{8-[4-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
(5-苯并噻唑-6-基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；
(2-氟-4-嗎啉-4-基-苯基)-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；
(2-氯-4-嗎啉-4-基-苯基)-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；
1-{5-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-噻吩-2-基}-乙酮；
{4-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-2H-吡唑-3-基}-甲醇；
6-{4-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-苯基}-4，5-二氫-2H-噠嗪-3-酮；
(5-苯并[1，2，5]噁二唑-5-基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；
4-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-噻唑-2-甲基甲酰胺；
4-{8-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻唑-2-甲基甲酰胺；
5-[8-(2-氟-4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
5-[8-(2-氯-4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
5-{8-[2-氯-4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
[5-(2-氨基-嘧啶-5-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；
5-{8-[6-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
3-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-苯并[#b！]噻吩-7-甲酰胺；
3-{8-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-苯并[#b！]噻吩-7-甲酰胺；
{4-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-吡啶-2-基}-甲醇；
(4-{8-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-吡啶-2-基)-甲醇；
[4-(1-異丙基-哌啶-4-基)-苯基]-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；
{5-[4-(2-氨基-噻唑-4-基)-苯基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基}-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；
4-{8-[6-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-呋喃-2-甲酰胺；
5-[8-(6-嗎啉-4-基-吡啶-3-基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
4-{8-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-呋喃-2-甲酰胺；
4-{8-[4-(1-異丙基-哌啶-4-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺；
(4-{8-[6-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-吡啶-2-基)-甲醇；
[5-(2-氟甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基]-胺；
5-{8-[4-(1-異丙基-哌啶-4-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
[5-(1H-吲唑-6-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；
4-[8-(6-嗎啉-4-基-吡啶-3-基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-呋喃-2-甲酰胺；
4-{8-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-5-甲基-噻吩-2-甲酰胺；
4-{8-[6-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-5-甲基-噻吩-2-甲酰胺；
4-{8-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
4-{8-[6-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
5-[8-(2-嗎啉-4-基-嘧啶-5-基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
1-{4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯基}-哌嗪-2-酮；
5-{8-[2-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-嘧啶-5-基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
5-{8-[4-(4-#叔！-丁基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
[4-(4-#叔！-丁基-哌嗪-1-基)-苯基]-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；
[5-(1H-吲唑-5-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；
5-{8-[4-(2-氧代-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
[5-(1H-吲唑-6-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基]-胺；
[6-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-(5-{(E)-1-[4-亞甲基-2，4-二氫-吡唑-(3E)-亞基甲基]-丙烯基}-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基)-胺；
7-氟-5-{8-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
6-{8-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
(3-甲基氨基甲基-4-嗎啉-4-基-苯基)-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；
2-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-5，6-二氫-呋喃并[2，3-#c！]吡咯-4-酮；
5-{8-[4-(4-異丙基-2-氧代-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
2-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-4，5-二氫-噻吩并[2，3-#c！]吡咯-6-酮；
5-{8-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-3，3-二甲基-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
5-(8-環(huán)己基氨基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
5-[8-(四氫-吡喃-4-基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；和
5-[8-(4-氟-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-2，3-二氫-異吲哚-1-酮。
51.權(quán)利要求1的化合物，其中化合物選自
4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-N-吡啶-3-基甲基-苯甲酰胺；
4-[5-(2-氧代-1，2-二氫-吡啶-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-N-吡啶-3-基甲基-苯甲酰胺；
2-甲氧基-N-(6-甲基-吡啶-3-基甲基)-4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
4-(8-{3-甲氧基-4-[(6-甲基-吡啶-3-基甲基)-氨基甲酰基]-苯基氨基}-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)-噻吩-2-甲酰胺；
N-芐基-2-甲氧基-4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
N-芐基-3-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
3-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-N-吡啶-2-基甲基-苯甲酰胺；
N，N-二乙基-3-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[i，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
{3-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯基}-吡咯烷-1-基-甲酮；
(4-異丙基-哌嗪-1-基)-{3-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯基}-甲酮；
3-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
N-乙基-3-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
N-環(huán)己基甲基-3-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
N-(4-羥基-芐基)-3-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
4-[8-(4-芐基氨基甲?；?3-甲氧基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-噻吩-2-甲酰胺；
4-[8-(6-苯甲?；被?吡啶-3-基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-噻吩-2-甲酰胺；
N-芐基-N-甲基-3-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
N-{5-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-吡啶-2-基}-苯甲酰胺；
1-{4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲?；鶀-哌啶-4-甲基甲酰胺；
4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-N-(2-吡啶-4-基-乙基)-苯甲酰胺；
(4-乙基-哌嗪-1-基)-{4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯基}-甲酮；
N-(1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
(2，5-二氫-吡咯-1-基)-{4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯基}-甲酮；
[4-(2-乙氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-{4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯基}-甲酮；
N-環(huán)丙基甲基-4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
N-甲基-N-(1-{4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰基}-吡咯烷-3-基)-乙酰胺；
[4-(4-氟-芐基)-哌嗪-1-基]-{4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯基}-甲酮；
(4-苯基-哌嗪-1-基)-{4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯基}-甲酮；
((S)-2-甲氧基甲基-吡咯烷-1-基)-{4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯基}-甲酮；
N-((R)-1-芐基-吡咯烷-3-基)-4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
{4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯基}-(4-吡啶-2-基-哌嗪-1-基)-甲酮；
N-(1-甲氧基甲基-丙基)-4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-{4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯基}-甲酮；
N-[2-(4-羥基-苯基)-乙基]-4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
(4-#仲！-丁基-哌嗪-1-基)-{4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯基}-甲酮；
N-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
(芐基-{4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲?；鶀-氨基)-乙酸乙酯；
N-異丙基-2-(4-{4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲?；鶀-哌嗪-1-基)-乙酰胺；
N-(2-甲氧基-乙基)-N-甲基-4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
N-乙基-N-(2-甲氧基-乙基)-4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-N-(四氫-呋喃-2-基甲基)-苯甲酰胺；
(3，6-二氫-2H-吡啶-1-基)-{4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯基}-甲酮；
N-(2-甲基硫烷基-乙基)-4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
N-(2，2-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4-基甲基)-4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
N-(2-二異丙基氨基-乙基)-4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
N-((S)-1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
N-異丁基-4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；
[1，4’]二哌啶基-1’-基-{4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯基}-甲酮；
N-(2-羥基-乙基)-4-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基氨基]-苯甲酰胺；和
4-[8-(6-苯基乙?；被?吡啶-3-基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-噻吩-2-甲酰胺。
52.權(quán)利要求1的化合物，其中化合物選自
4-{8-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺；
5-{8-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺；
[5-(5-甲基-1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；
4-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-噻吩-2-甲酰胺；
4-{8-[4-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺；
4-{8-[4-((2R，6S)-2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺；
4-[8-(4-哌嗪-1-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-噻吩-2-甲酰胺；
4-{8-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺；
4-{8-[4-((2S，5R)-2，4，5-三甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺；
5-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
4-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-呋喃-2-甲酰胺；
5-{8-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
4-[8-(6-嗎啉-4-基-吡啶-3-基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-噻吩-2-甲酰胺；
4-{8-[6-(4-環(huán)丙基甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺；
4-{8-[6-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺；
4-(8-{6-[4-(2，2，2-三氟-乙基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基氨基}-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)-噻吩-2-甲酰胺；
4-(8-{4-[4-(2，2，2-三氟-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基氨基}-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基)-噻吩-2-甲酰胺；
4-{8-[4-(4-環(huán)丙基甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺；
5-{8-[4-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
5-{8-[6-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
5-[8-(6-嗎啉-4-基-吡啶-3-基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
4-{8-[4-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-呋喃-2-甲酰胺；
4-{8-[4-(1-異丙基-哌啶-4-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-噻吩-2-甲酰胺；
5-{8-[4-(1-異丙基-哌啶-4-基)-苯基氨基]-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基}-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
5-[8-(2-嗎啉-4-基-嘧啶-5-基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-2，3-二氫-異吲哚-1-酮；
[4-(4-叔丁基-哌嗪-1-基)-苯基]-[5-(1H-吡唑-4-基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-8-基]-胺；和
2-[8-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡嗪-5-基]-4，5-二氫-噻吩并[2，3-c]吡咯-6-酮。
53.藥物組合物，該藥物組合物包含可藥用載體和藥用有效量的權(quán)利要求1至52中任何一項(xiàng)的化合物。
54.權(quán)利要求53的藥物組合物，其中載體是非腸道載體。
55.權(quán)利要求53的藥物組合物，其中載體是口服載體。
56.權(quán)利要求53的藥物組合物，其中載體是局部用載體。
57.權(quán)利要求1至52中任意一項(xiàng)的化合物在制備用于治療或預(yù)防具有ECM降解特征的病癥的藥物中的用途。
58.權(quán)利要求1至52中任意一項(xiàng)的化合物在制備用于治療或預(yù)防選自涉及炎癥的疾病的病癥的藥物中的用途。
59.權(quán)利要求58化合物的用途，其中所述的疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
60.權(quán)利要求1至52中任意一項(xiàng)的化合物在制備用于治療或預(yù)防通過施用促分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶5抑制劑來預(yù)防、改善或消除的病癥的藥物中的用途。
61.治療具有異?；|(zhì)金屬蛋白酶活性特征的病癥的方法，該方法包括施用治療有效量的權(quán)利要求1至52中任意一項(xiàng)的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制化合物。
62.治療選自涉及胞外基質(zhì)降解的疾病的病癥的方法，該方法包括施用治療有效的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制量的權(quán)利要求1至52中任意一項(xiàng)的化合物。
63.治療選自涉及MMP1異常細(xì)胞表達(dá)的疾病的病癥的方法，該方法包括施用治療有效的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制量的權(quán)利要求1至52中任意一項(xiàng)的化合物。
64.治療或預(yù)防炎性疾病的方法，該方法包括給需要的個(gè)體施用治療有效量的權(quán)利要求1至52中任意一項(xiàng)的化合物。
65.治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法，該方法包括給需要的個(gè)體施用治療有效量的權(quán)利要求1至52中任意一項(xiàng)的化合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了新的[1.2.4]三唑并[1，5-a]吡嗪化合物，其具有以下代表的結(jié)構(gòu)式(式I)。該化合物可以制備成藥物組合物，并且可以用于預(yù)防和治療哺乳動(dòng)物(包括人)的多種病癥，以非限制性實(shí)例的方式包括關(guān)節(jié)炎、炎癥和其它病癥。
文檔編號(hào)C07D487/04GK101454326SQ200780019156
公開日2009年6月10日 申請(qǐng)日期2007年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月31日
發(fā)明者M·J·I·安德魯斯, P·愛德華茲, M·S·錢伯斯, W·施密特, J·A·克拉塞, G·巴爾, K·L·赫斯特, A·麥克勞德 申請(qǐng)人:加拉帕戈斯股份有限公司