專利名稱：：(s)-1-甲基-3-苯基哌嗪的立體選擇性合成的制作方法(S)-1-甲基-3-苯基哌溱的立體選擇性合成本發(fā)明涉及新穎原料和其在通過酶水解外消旋l-曱基-3-苯基哌嗪的酯制備(S)-l-甲基-3-苯基哌噪或(R)-l-甲基-3-苯基哌溱的方法中的用途。為得到用于S-米氮平的立體選擇合成路線的光學(xué)活性原料l-甲基-3-苯基哌溱(參見Wieringa等人，W02005/005410)，需要制備高對映體純度的(S)-1-曱基-3-苯基哌嗪的有效方法。生物催化是制備光學(xué)活性化合物的很好手段。在很溫和的條件下，酶通常顯示化學(xué)選擇性、對映選擇性和區(qū)域選擇性。此外，生物催化使得可以使用在有機(jī)化學(xué)中幾乎沒有等價(jià)手段的方法。這方面的實(shí)例是，在犧牲一些產(chǎn)率的情況下，消耗不希望的對映體以達(dá)到高至99。/。ee(對映體過量)的中等立體選擇性。生物催化并不總是絕對選擇性的。但通過適當(dāng)?shù)倪x擇酶并隨后根據(jù)對潛在機(jī)理的理解進(jìn)行優(yōu)化可以得到良好的結(jié)果。最終結(jié)果可以比標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)方法更簡單。按照流程1的ratl-甲基-3-苯基哌溱的立體選擇性酶?；瘒L試失敗了，因?yàn)槭褂酶呋钚缘亩∷崛一ズ痛罅康母鞣N酶在高至55。C的溫度下沒有可觀察到的反應(yīng)，盡管發(fā)表的實(shí)例(0rsat，等人，/.j邁.1996(118)712.;Morgan等人；/.Org.C力e瓜2000(65)5451;Breen，7b^ra力edro/7..h/邁/i7"/y2004(15)1427)中使用酶和?；w的良平衡組合成功進(jìn)行了對映選擇性的酰化。Hu等人W7^.2005(7)4329)發(fā)現(xiàn)，用草氨酸酯基團(tuán)的酶水解來拆分仲胺是可行的(流程2)。將酯與酸產(chǎn)物分離以及草氨酸基團(tuán)裂解后，可以得到所述胺的兩種對映體。獨(dú)有特征是用于此拆分的遠(yuǎn)端草氨酸酯基團(tuán)的用途，同時(shí)低反應(yīng)性的酰胺鍵不^:轉(zhuǎn)化。其中Ri是曱基、乙基、正丙基、異丙基、芐基或2-鹵代乙基(比如2-氯-乙基和2,2,2-三氟乙基)，該化合物在新穎方法中的用途是獨(dú)特的，所述方法通過這種化合物的酶水解制備分離的(S)-和(R)-1-曱基-3-苯基哌喚。盡管Hu等人觀察到灰色鏈霉菌(Streptomycesgriseus)的蛋白酶對苯基哌啶作用較小，本發(fā)明提供通過酶水解上面定義的化合物隨后分離水解產(chǎn)物并裂解草氨酸基團(tuán)來制備(s)-和(R)-1-甲基-3-苯基哌溱的方法，由此灰色鏈霉菌蛋白酶用作酶水解中的酶。外消旋1-曱基-3-苯基哌溱的(Cl-C3)烷基-、節(jié)基-或2-鹵代乙基-草氨酸酯或者任意程度的光學(xué)活性混合物可以用作起始化合物以得到高光學(xué)活性純度的(S)-或(R)-1-曱基-3-苯基哌溱。(Cl-C3)烷基是指曱基、乙基、正丙基和異丙基。使用優(yōu)化的方案，目前可以以99.8%的ee和約98%的純度得到總產(chǎn)率36%的(5)-1-曱基-3-苯基哌溱。灰色鏈霉菌蛋白酶是很大的水解酶家族中的酶。水解酶可以與水反應(yīng)，但也可以在幾乎無水的有機(jī)溶劑中反應(yīng)。水解酶的一些實(shí)例是脂肪酶(脂肪水解)、蛋白酶(蛋白水解)和酯酶(酯水解)。灰色鏈霉菌蛋白酶作為水解酶的用途具有許多優(yōu)點(diǎn)。它是可以作為濃縮水溶液或凍干粉保存的相對穩(wěn)定的酶。所述酶不需要任何輔助因子，如果需要輔助因子不僅經(jīng)濟(jì)上沒有吸引力，而且很多輔助因子可以比酶本身更脆弱。所述酶具有大活性位點(diǎn)并且可以很好地處理本反應(yīng)所需的底物，盡管事實(shí)上微小的改變可以引起反應(yīng)速率的戲劇性差異。最后，所述酶在水/助溶劑混合物或純有機(jī)溶劑中具有高穩(wěn)定性。在生物催化中，反應(yīng)的選擇性通常表示為對映體比例或E。對映應(yīng)t-0)。如果已知下述三個參數(shù)中的兩個，可以在反應(yīng)任意一點(diǎn)計(jì)算對映體比例轉(zhuǎn)化率、產(chǎn)物ee和底物ee。在理想條件下，E在整個反應(yīng)中是常數(shù)。然而在并不總是有效的公式中有許多假設(shè)。此外，在很高或很低的轉(zhuǎn)化率下，E隨轉(zhuǎn)化率或ee的微小改變劇烈變化。這是指所述值變得對測量的準(zhǔn)確度更敏感。因?yàn)檫x擇性從來不是真正絕對的，在100%轉(zhuǎn)化率又將得到外消旋體。這是指E值在反應(yīng)即將結(jié)束時(shí)常常會變低。所以，E應(yīng)該用作指示值而不是絕對值。通常可以使用下列經(jīng)驗(yàn)規(guī)則E-1沒有選擇性，對兩種對映體速率相等。E=1-5低選擇性。高ee只能在不希望的對映體在反應(yīng)中被消耗后得到，即只在轉(zhuǎn)化率>90%。E=5-25很可能是通過消耗不當(dāng)對映體的方法。只在低轉(zhuǎn)化率得到高產(chǎn)物ee。E=25-100在中等轉(zhuǎn)化率得到高底物以及產(chǎn)物ee。E〉100近絕對選擇性。反應(yīng)通常在50%轉(zhuǎn)化率"停止"(戲劇性的速率降低)。動態(tài)動力學(xué)拆分可能在100%產(chǎn)率得到100%ee。不僅以高ee得到底物，而且產(chǎn)物在理論(50%)產(chǎn)率附近顯示高ee。在本發(fā)明更具體的實(shí)施方式中提供上面定義的方法，由此在無緩沖液媒介中進(jìn)行水解。無需向反應(yīng)媒介中加入緩沖液不僅簡化了方法，而且通過得到更高的對映體比例甚至改善了方法。不受理論限制，認(rèn)為哌溱環(huán)中的l位氮對此有貢獻(xiàn)。本發(fā)明更具體實(shí)施方式是，在如上定義的方法中組合使用l-曱基-3-苯基哌溱的草酸甲酯(methyloxalate)與包含曱苯或甲基-叔丁基醚的媒介。本發(fā)明的另一個具體實(shí)施方式是，在如上定義的方法中組合使用1-曱基-3-苯基哌嗪的草酸乙酯(ethyloxalate)與包含環(huán)己烷的媒介。根據(jù)本說明書中的信息，本領(lǐng)域技術(shù)人員現(xiàn)在可以通過選擇適宜的媒介、濃度和草氨酸酯來進(jìn)一步優(yōu)化本方法的條件或找到本方法的近似替代方法。實(shí)施例草氨酸甲酯或草氨酸乙酯衍生物的酶水解。通過用市售的氯代草酸甲酯?；?-甲基-3-苯基哌溱制備外消旋底物，得到結(jié)晶的草氨酸酯，其可以通過重結(jié)晶純化。測試了一系列市售的蛋白酶(表1)?；谟^察到的對映體之一的富集，只有esperase顯示一些活性。通過與(S)-對映體的確定樣品比較以測定絕對構(gòu)型。對反應(yīng)條件進(jìn)行了簡單的篩選(表2)。基于轉(zhuǎn)化率以及原料和產(chǎn)物的ee計(jì)算E值。通過在原料中使用少量雜質(zhì)(已在起始哌喚中存在)作為內(nèi)標(biāo)估算轉(zhuǎn)化率。表l:在草氨酸乙酯拆分中的蛋白酶的篩選<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>條件將7個管形瓶充滿酶、1ml草氨酸酯溶液(甲基-叔丁基醚(MTBE)中的0.1M1-曱基-3-苯基哌嗪草氨酸乙酯)和2ml0.1M磷酸緩沖液(pH7.3)。在rT攪拌3天，在40匸再攪拌反應(yīng)220h。通過手性GC分析。表2:esperase的簡單條件篩選_<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>條件將8個管形瓶充滿酶、1ml草氨酸酯溶液(MTBE或乙腈(ACN)中的0.1M1-曱基-3-苯基哌溱草氨酸乙酯)和2ml磷酸緩沖液。攪拌18h。通過手性GC分析。使用粗草氨酸曱酯和相對純的草氨酸乙酯進(jìn)行廣泛的蛋白酶篩選(表3)。esperase的CLEA原型未給出更佳結(jié)果。甲苯/碳酸氫鹽緩沖液中的一系列其它酶完全未顯示選擇性(表4)。表3:對草氨酸曱酯或草氨酸乙酯的更廣泛的蛋白酶篩選醉m原料GC(ee草氨酸酯)1胰蛋白酶Novo50mgMe*0%2Europa蛋白酶250mgMe*-3%3Europa蛋白酶750mgMe*04Europa蛋白酵1250ragMe*05Europa酉旨酶250ragMe*-3%6EsperaseCXEA50mgMe*11%7EsperaseCLEA250mgMe*12%8AlcalaseCLEA50mgMe*15%9AlcaUseCLEA250mgMe*43°/。(R)10Microb.蛋白酶Fluka10mgMe*37%(R)11枯草桿菌蛋白酶A10mgMe*11%12EsperaseCLEA250mgEt4%13AlcalaseCLEA250mgEt9%14Microb.蛋白酶Fluka10mgEt6%15枯草桿菌蛋白酶A10mgEt<2%條件將15個管形瓶充滿酶、1ml草氨酸酯溶液(MTBE中的0.1Ml-甲基-3-苯基哌溱草氨酸乙酯或1-甲基-3-苯基哌喚草氨酸曱酉旨)和2ml0.1M磷酸緩沖液(pH9.0)。攪拌18h。通過手性GC分析。9表4:在甲苯碳酸氫鹽緩沖液中的酶的篩選E9/酵終pHee剩余底物1AlcalaseCLEA8.002EsperaseCLEA8.103SavinaseCLEA8.1<34Novo枯草桿菌蛋白酶8.1<25CaL-ACLEA8.106CaL-BCLEA8.137CRCLEA8.308Amano?；D(zhuǎn)移酶8.429酰基轉(zhuǎn)移酶I8.4210AlcalaseCLEA7.61(PH8K-磷酸緩沖液)表4條件將干酶(50mg)與1ml儲備溶液(溶于600ml甲苯的1-甲基-3-苯基哌嗪草氨酸甲酯(16g)作為不純的粗糖漿)和1ml的0.2M碳酸氫鹽緩沖液混合。在rT反應(yīng)22h。用灰色鏈霉菌蛋白酶得到良好的結(jié)果。表5顯示結(jié)果；在正確的條件下對希望的對映體可以得到很好的ee。在無緩沖液媒介中得到最佳結(jié)果，其將底物中的另一個氮用作堿。甚至在pH<<7時(shí)，對此蛋白酶得到很好的結(jié)果。表5:對灰色鏈霉菌蛋白酶和草氨酸乙酯的條件的篩選溶劑終pH66E估算*190%ACN/水7.30—210%ACN/水6.4100%(s)E=60350°/。ACN/水6,731%(S)—450°/。二氧六環(huán)/水6.629%(S)-50%t-BuOH/水5.990%(S)E=27650%MTBE/水5.9ca98%(S)E=500750%MTBE/pH80.1M緩沖液7.150%(S)E=7條件向7個管形瓶加入8mg灰色鏈霹菌蛋白酶、28mg(0.1mmol)油狀草氨酸乙酯和2ml的指示溶劑。在rT攪拌20h。通過手性GC分析。*用3.8m雜質(zhì)估算轉(zhuǎn)化率。使用(此處為純的)草氨酸甲酯和草氨酸乙酯在一系列條件下進(jìn)一步測試所述酶(表6)。使用無助溶劑條件時(shí)，所述草氨酸甲酯固化，得到濃懸浮液，其具有在相對高轉(zhuǎn)化率下妨礙完全光學(xué)純度的明顯擴(kuò)散限制。僅需要少量酶。兩種酯在拆分最佳條件中顯示了差異。表6:灰色鏈霉菌蛋白酶和草氨酸乙酯或草氨酸甲酯的進(jìn)一步條件篩選<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>條件向13個管形瓶中加入灰色鏈霉菌蛋白酶、26/28mg(0.1mmol)油狀草氨酸乙酯或草氨酸甲酯和2ml的指示溶劑。在rT攪拌64h。堿化后通過手性GC分析。*用3.8m雜質(zhì)估算轉(zhuǎn)化率。測試了另外一系列市售的蛋白酶(表7)。對兩種酯使用自表6的最佳條件；二相性MTBE混合物中的甲酯(現(xiàn)在是固體)，在純水中作為懸浮油的乙酯。在此實(shí)驗(yàn)期間，油狀草氨酸乙酯也開始固化，這可能意味著表6(實(shí)驗(yàn)8)的滿意結(jié)果也許是不能重現(xiàn)的。在該酶篩選中只有乙酯給出了兩種可能的候選酶，在更真實(shí)的酶負(fù)載(表8)下進(jìn)一步測試它們，盡管幾乎沒有成功。加入少量乙酸改善固體底物的溶解度沒有成功，不過酶在很低的pH顯得有效。表7:對草氨酸乙酯或草氨酸甲酯的進(jìn)一步蛋白酶篩選<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>條件在18個管形瓶中加入28mg油狀草氨酸乙酯或1ml的MTBE/5y。異丙醇(否則沒有溶解度)中的0.1M草氨酸甲酯溶液。加水至2ml反應(yīng)體積(考慮到酶的體積)。指示量的酶。*實(shí)驗(yàn)1和10包含1ml0.1MpH8tris緩沖液。表8:草氨酸乙酯中的兩種其它候選蛋白酶的篩選酶酸終態(tài)6612.5mgAmano蛋白酵M0懸浮液02(A.melleus)0.1當(dāng)量HOAc懸浮液030.2當(dāng)量HOAc懸浮液040.35當(dāng)量HOAc懸浮液_3%0.5當(dāng)量HOAc澄清+3%610^1A.Oryzae蛋白酶0懸浮液-2%0,1當(dāng)量HOAc懸浮液3%80.2當(dāng)量HOAc懸浮液3%90.35當(dāng)量HOAc懸浮液0100.5當(dāng)量HOAC懸浮液0條件在10個管形瓶中加入28mg油狀草氨酸乙酯。加入1ml水。為改善底物溶解度的指示量的乙酸。經(jīng)灰色鏈霉菌蛋白酶催化的反應(yīng)的放大。主要目的是降低酶負(fù)栽并提高底物的濃度，而不損害產(chǎn)物的最終對映體純度。在未緩沖的水中的反應(yīng)期間，pH顯著地降低到遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出酶的最佳pH。所以第一個測試是pH篩選，使用pH固定計(jì)(pHstar)同時(shí)將它和未緩沖反應(yīng)比較(表9)。在反應(yīng)早期，無pH控制的反應(yīng)顯示更高的ee。分離的草氨酸產(chǎn)物的ee(R-對映體)也更高，意味著更高選擇性的反應(yīng)(更高的E)。對草氨酸乙酯也觀察到相同作用，但底物固化使結(jié)果比較變得有點(diǎn)復(fù)雜(表IO)。13表9:pH-控制對草氨酸曱酯的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>條件10咖ol固體l-甲基-3-苯基哌溱草氨酸曱酯、25ml水、25mlMTBE、50mg灰色鏈霉菌蛋白酶(2wt%)。實(shí)驗(yàn)A在反應(yīng)最初24h期間pH控制。表10:pH-控制對草氨酸乙酯的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>條件10fflmol油狀1-甲基-3-苯基哌溱草氨酸乙酯、50ffll水、50mg灰色鏈霉菌蛋白酶(2wt%)。實(shí)驗(yàn)C在反應(yīng)最初24h期間pH控制。在比之前高很多的濃度下使用已知最佳條件重復(fù)最終溶劑篩選。由于兩種草氨酸酯都已固化，它們都需要助溶劑。令人驚訝地，最佳條件再次不同(表ll)。表ll:對草氨酸乙酯或草氨酸甲酯的最終溶劑篩選<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>條件2.6或2.8g(10mmol)固體草氨酸乙酯或草氨酸甲酯、10ml水、5ml溶劑、50mg(約2wt%)灰色鏈霉菌蛋白酶。在rT攪拌。2、3和6是懸浮液。24h后，用EtOAc使其均勻化，調(diào)整pH至9并通過手性GC分析。由于對草氨酸乙酯的選擇性相當(dāng)高、熔點(diǎn)相當(dāng)?shù)鸵约皩疑溍咕鞍酌傅拿枋鲎罴褱囟认喈?dāng)高，使用環(huán)己烷助溶劑對粗草氨酸乙酯單獨(dú)嘗試一次更高溫度的反應(yīng)。在50t:下，16&的反應(yīng)對達(dá)99.8%ee的完全轉(zhuǎn)化是足夠的，僅使用1Wt。/fl灰色鏈霉菌蛋白酶。這些條件用于制造下述大規(guī)模樣品。最終樣品C5)-l-甲基-3-苯基哌喚的制備在1L容器中，使用1wt%灰色鏈霉菌蛋白酶拆分粗草氨酸乙酯的17Gg樣品。草氨酸乙酯的R-對映體被選擇性地水解。在反應(yīng)停止后，以47%的粗產(chǎn)率得到余下的l-曱基-3-苯基哌嗪的草氨酸乙酯的S-對映體。通過在過量15%的HC1中煮沸，所迷草氨酸乙酯的水解在lh內(nèi)產(chǎn)生向(S)-l-甲基-3-苯基哌嗪的完全轉(zhuǎn)化。進(jìn)一步后處理產(chǎn)生相當(dāng)大量未知組成的不溶沉淀。萃取并且Kugelrohr蒸餾產(chǎn)生的產(chǎn)物得到42g白色固體(36%總產(chǎn)率；99.8%ee)。原料中的0.5%初始雜質(zhì)增加至1.5%。使用重結(jié)晶草氨酸甲酯的規(guī)模小很多的放大提供更純的樣品，因?yàn)樵现械?.5%雜質(zhì)未在最終產(chǎn)物中濃縮。其它實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)材料15氯代草酸曱酯Aldrich氯代草酸乙酯Acros三氟乙酸酐人cros乙酸酐Merck丙酰氯Aldrich丁酰氯Aldrich苯曱酰氯Aldrich灰色鏈霉菌蛋白酶Sigma溶劑p.a-分析在chiralsil-DEXCBGC柱(氦載氣，1:20分流)上分析樣品。溫度程序140°C2分鐘；5。C/min至180。C;180°C10分鐘。哌溱不能在所述GC上拆分，需衍生化為三氟乙酰胺以達(dá)到對映體的良好分離。在CH2Cl2溶解少量哌溱(10-50mg)并用三乙胺和三氟乙酸酐處理。反應(yīng)后用10°/。碳酸鈉堿化。在分析前干燥樣品。用二氧化硅板、CH2Cl2/MeOH混合物(通常90:IO)作洗脫液以及UV熒光和L檢測進(jìn)行TLC。?；庀w的合成l-甲基-3-苯基哌嗪草氨酸曱酯在IOO二氯甲烷中溶解1-甲基-3-苯基哌嗪(17.6g;0.1mol)。加入三乙胺(5ml;約0.03邁ol)。在冷卻下緩慢加入二氯曱烷中的氯代草酸曱酯(IOml;O.lOmol)溶液。全部加入后形成白色懸浮液。TLC顯示完全轉(zhuǎn)化。用10。/。碳酸鈉淬滅混合物。用碳酸鹽再次洗滌有機(jī)層，干燥并蒸發(fā)至油狀物(25.5g;97%)。TLC:相當(dāng)純，有一些次要極性雜質(zhì)。GC:15.7/16.0分鐘，可以手性分離(包含約0.4%可以用作內(nèi)標(biāo)的3.8分鐘雜質(zhì)(存在于起始哌嗪中))。該物質(zhì)經(jīng)放置固化。嘗試從CH2Ch/己烷中重結(jié)晶。這產(chǎn)生20g淡褐色固體(76%)。mp103-5iC。GC:除去3.8分鐘雜質(zhì)。1-曱基-3-苯基哌溱草氨酸乙酯在500二氯曱烷中溶解1-曱基-3-苯基哌溱(123.2g;0.70mol)。加入三乙胺(30ml;約0.2mol)。在冷卻下緩慢加入二氯甲烷中的氯代草酸乙酯(107g;0.78mol)溶液。在全部加入的2/3處形成濃懸浮液。甚至在加入更多溶劑后，攪拌還是困難。用10%碳酸鈉淬滅混合物。用碳酸鹽再次洗滌有機(jī)層，干燥并蒸發(fā)至橙色油狀物(191.2g;O.69mol;99%)。用晶種來結(jié)晶被證明是困難的。深度蒸發(fā)(deepevaporation)并以油狀物保存。TLC:很純，基線上有少量有色極性物質(zhì)。沒有的二草酰胺的痕跡(制備自草酰氯和哌嗪)。GC:18.0/18.2分鐘，0.36面積％的3.8分鐘雜質(zhì)。用水?dāng)嚢枭倭繕悠?20g)引起結(jié)晶。mp約45C。大部分油狀物在放置幾天后固化。在使用前需熔化。乙酰l-甲基-3-苯基哌嗪在100二氯曱烷中溶解1-曱基-3-苯基哌嗪(17.6g;0.1mol)。加入乙酸酐和三乙胺。水處理產(chǎn)生>100%的惡臭油狀物(過量Ac20)。在160匸/0.05毫巴下Kugelrohr蒸餾產(chǎn)生20.6g油狀物(94%)。手性GC:10.3/10.6分鐘丙酰l-甲基-3-苯基哌溱在100二氯甲烷中溶解1-甲基-3-苯基哌嗪(17.6g;0.rmol)。加入三乙胺(15ml;約0.1mol)。在冷卻下，緩慢加入二氯甲烷中的丙酰氯(10g;0.llmol)溶液。全部加入后形成白色懸浮液。用10%碳酸鈉淬滅混合物。用碳酸鹽再次洗滌有機(jī)層，干燥并蒸發(fā)至油狀物(23.34g;100%)。在187"C/0.05毫巴下Kugelrohr蒸餾產(chǎn)生21.6g油狀物(93%)。手性GC:10.25/10.39分鐘丁酰l-甲基-3-苯基哌溱在IOO二氯甲烷中溶解1-甲基-3-苯基哌嗪(17.6g;Q.1mol)。加入三乙胺(5ml;約0.05mol)。在冷卻下緩慢加入二氯曱烷中的丁酰氯(11.6g;0.llmol)溶液。全部加入后形成白色懸浮液。用10%碳酸鈉淬滅混合物。用碳酸鹽再次洗滌有機(jī)層，干燥并蒸發(fā)至油狀物(24g)。22.5g在〉200。C/0.05毫巴下Kugelrohr蒸餾產(chǎn)生22.0g油狀物(95%)。手性GC:12.87/12.98分鐘，嚴(yán)重重疊。苯甲酰l-甲基-3-苯基哌溱在100二氯甲烷中溶解1-曱基-3-苯基哌嗪(17.6g;0.1mol)。加入三乙胺(15ml;約0.1mol)。在冷卻下緩慢加入二氯甲烷中的苯甲酰氯(16g;0.114mol)溶液。全部加入后形成白色懸浮液。用10%碳酸鈉淬滅混合物。用碳酸鹽再次洗滌有機(jī)層，干燥并蒸發(fā)至油狀物(約30g)。用CH2Cl2/MeOH(95:5)通過二氧化硅過濾純化。蒸發(fā)適當(dāng)?shù)募壏之a(chǎn)生26.2g油狀物(94%)手性GC:用各種方法都未分離。三氟乙酰l-甲基-3-苯基哌嗪在50二氯甲烷中溶解1-甲基-3-苯基哌嗪(1.8g;0.01mol)。加入三乙胺(lml;0.07mol)。加入純的三氟乙酸酐(2ml)。用10%碳酸鈉淬滅混合物。用碳酸鹽再次洗滌有機(jī)層，干燥并蒸發(fā)至油狀物(2.5g;92%)。TLC很純。手性GC:5.9/6.2分鐘。篩選反應(yīng)按各表腳注中的描述進(jìn)行篩選反應(yīng)。5ml容器用于1-4ml的反應(yīng)，30ml管形瓶用于規(guī)模更大的優(yōu)化反應(yīng)。將完成時(shí)酸度太高的反應(yīng)中和至pH>8以允許堿性哌溱(-衍生物)的萃取。18(5)-l-甲基-3-苯基哌嗪的樣品制備熔化170g(0.62mol)固體草氨酸乙酯并轉(zhuǎn)移至1L燒瓶。加入180ml環(huán)己烷和700ml水，然后加入1.7g(1wt。/。)灰色鏈霉菌蛋白酶。于50匸在加熱板上攪拌23h。上層的氣相色譜法(GS)顯示〉99.9%的ee。用1MNaOH將5.22的pH調(diào)整至9。用乙酸乙酯萃取反應(yīng)混合物三次。干燥并蒸發(fā)有機(jī)相后得到80g褐色油狀物(47%;E>160)。在400ml15%HC1(約2mol)中回流氷解該(S)-草氨酸乙酯(+之前10g規(guī)模拆分的4.7g產(chǎn)物)lh。通過GC測定水解率為約99.5%。冷卻反應(yīng)混合物并將其pH調(diào)節(jié)至pH〉11。用3x250mlCH2Cl2萃取水相。中和后形成大量不溶沉淀，通過過濾除去。干燥并蒸發(fā)有機(jī)萃取物以油狀物提供41g的(S)-l-曱基-3-苯基哌噪。用乙酸乙酯(IOOml)、甲苯和乙醚進(jìn)一步萃取水相又產(chǎn)生6g的(S)-l-甲基-3-苯基哌嗪(約41°/?？偖a(chǎn)率)。Kugelrohr(140"/0.05毫巴)高真空蒸餾產(chǎn)生41.8g無色油狀物，其在加入晶種后結(jié)晶(238mmol;36%總產(chǎn)率)。蒸餾殘余物稱重0.8g。產(chǎn)物的熔點(diǎn)是52^而ee經(jīng)測定為99.8%GC顯示在起始外消旋體中存在的雜質(zhì)從0.5%增加至1.5%。權(quán)利要求1.式1化合物，式1其中R1是甲基、乙基、正丙基、異丙基、芐基或2-鹵代乙基。2.式2的(R)-l-曱基-3-苯基哌嗪的草氨酰衍生物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>式23.式3的(S)-l-曱基-3-苯基哌嗪的草氨酰衍生物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>式3，其中Ri甲基、乙基、正丙基、異丙基、芐基或2_鹵代乙基<4.制備(S)-l-曱基-3-苯基哌嗪的方法，所述方法通過酶水解權(quán)利要求l化合物、隨后分離并從反應(yīng)產(chǎn)物裂解草氨酸酯基團(tuán)，由此灰色鏈霉菌蛋白酶用作酶水解的酶。5.制備(R)-l-曱基-3-苯基哌嗪的方法，所述方法酶水解權(quán)利要求1化合物、隨后分離并從反應(yīng)產(chǎn)物裂解草氨酸基團(tuán)，由此灰色鏈霹菌蛋白酶用作酶水解的酶。6.權(quán)利要求4或5的方法，其特征在于在無緩沖液媒介中進(jìn)行所述水解。7.權(quán)利要求4-6中任意一項(xiàng)的方法，其特征在于l-曱基-3-苯基哌嗪草酸曱酯進(jìn)行所述水解和水解媒介包含甲苯或甲基-叔丁基醚。8.權(quán)利要求4-6中任意一項(xiàng)的方法，其特征在于l-曱基-3-苯基哌"秦草酸乙酯進(jìn)行水解和水解媒介包含環(huán)己烷。9.S-米氮平的制備方法，包含權(quán)利要求4、6、7或8中任意一項(xiàng)的步驟。全文摘要本發(fā)明提供式1化合物，其中R¹是甲基、乙基、正丙基、異丙基、芐基或2-鹵代乙基，及其在制備(S)-1-甲基-3-苯基哌嗪的方法中的用途，所述方法通過酶水解所述化合物、隨后分離并裂解草氨酸基團(tuán)，由此灰色鏈霉菌蛋白酶用作酶水解的酶。文檔編號C07D241/04GK101472901SQ200780022409公開日2009年7月1日申請日期2007年6月14日優(yōu)先權(quán)日2006年6月16日發(fā)明者G·J·肯佩曼,M·C·A·梵弗利特,M·斯克勒德胡德海韋特申請人:歐加農(nóng)股份有限公司