專利名稱：新的雜環(huán)化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及雜環(huán)化合物以及它們?cè)诨熤械挠猛尽８唧w地，本發(fā)明涉及具體的4-吡啶酮(4-pyridinone)衍生物，它們的制備方法，其藥物制劑以及它們?cè)谀承┘纳x感染如瘧疾，特別是在鐮狀瘧原蟲(Plasmodium falciparum)感染的化療中的用途。

背景技術(shù)：
寄生性原蟲感染是大量醫(yī)療和獸醫(yī)重大疾病的原因，其包括在人中的瘧疾以及在禽類、魚類和哺乳動(dòng)物中的多種球蟲病。許多疾病對(duì)宿主構(gòu)成了生命危險(xiǎn)，并在畜牧業(yè)中造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，如艾美球蟲屬(Eimeria)、泰勒蟲屬(Theileria)、巴貝蟲屬(Babesia)、隱孢子蟲屬(Cryptosporidium)、弓形體屬(Toxoplasma)(如Toxoplasma brucei，非洲昏睡病和Toxoplasma cruzi，查加斯病)和瘧原蟲屬(Plasmodium)(如鐮狀瘧原蟲)，和鞭毛綱(Mastigophora)如利什曼原蟲屬(Leishmania)(如杜氏利什曼原蟲(Leishmania donovani))。逐漸受到關(guān)注的其它的寄生性生物為卡氏肺囊蟲(Pneumocytis carinii)，其可能在免疫缺陷或免疫妥協(xié)的宿主中經(jīng)常引起致命性的肺炎，包括那些受到HIV感染的宿主。
瘧疾為在發(fā)展中國(guó)家的主要疾病問題之一。人中最致命的引起瘧疾的寄生蟲為寄生蟲鐮狀瘧原蟲，其為每年無數(shù)瘧疾病例的原因，并且認(rèn)為每年會(huì)造成超過1百萬(wàn)人死亡，Breman，J.G.，等人(2001)Am.Trop.Med.Hyg.64，1-11。在治療瘧疾中面臨的一個(gè)問題就是寄生蟲對(duì)已有藥物產(chǎn)生抗藥性。因此，需要開發(fā)新的抗瘧疾藥物。
US專利No.3,206,358公開了一組具有抗球蟲活性的3，5-二鹵代-2，6-二烷基-4-吡啶醇衍生物(4-吡啶酮的互變異構(gòu)體形式)。
歐洲專利申請(qǐng)No.123239公開了上述的4-吡啶醇衍生物與抗原蟲萘醌(例如抗瘧疾藥萘醌)以有效比例的組合。
PCT專利申請(qǐng)No.WO 91/13873A1公開了一類4-吡啶酮衍生物，其顯示出了抗原蟲，特別是抗瘧疾寄生蟲鐮狀瘧原蟲，和艾美球蟲屬以及寄生性生物卡氏肺囊蟲(Pneumocytis carinii)的活性。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的化合物，其是WO 91/13873A1中公開的且具有某些具體的取代模式的化合物，顯示出比WO 91/13873A1中所具體公開的那些化合物具有改善的性質(zhì)。
發(fā)明概述 本發(fā)明涉及某些4-吡啶酮衍生物，它們的制備方法，包含此類化合物的藥物組合物，以及該化合物在某些寄生蟲感染如瘧疾，特別是在被鐮狀瘧原蟲感染的化療中的用途。
發(fā)明詳述 本發(fā)明提供式I化合物或其可藥用衍生物
其中 R1表示鹵素、CF3或OCF3； R4表示鹵素； R2和R3中的一個(gè)表示甲基，且另一個(gè)表示-(CH2)nOH或-HC＝N-OR5； R5表示H或-C1-C4烷基； n表示1-4。
術(shù)語(yǔ)和定義 在此使用的作為基團(tuán)或基團(tuán)的一部分的術(shù)語(yǔ)“烷基”是指直連或支鏈飽和烴基，其含有如所限定數(shù)目的碳原子；此類基團(tuán)的實(shí)例包括甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基和叔丁基等。
在此使用的“鹵素”是指氟、氯、溴或碘基團(tuán)。
除非另有說明，在此描述的本發(fā)明的所有方面和實(shí)施方案均涉及式I化合物。
R1表示在苯環(huán)的任一位置上的取代基。在本發(fā)明的一方面，R1表示在苯環(huán)的間位或?qū)ξ簧系娜〈Ｔ诒景l(fā)明的另一方面，R1表示在苯環(huán)的對(duì)位上的取代基。
在本發(fā)明的一方面，R1表示Br、Cl、F、CF3或OCF3。在本發(fā)明的另一方面，R1表示Cl、F、CF3或OCF3。在本發(fā)明的另一方面，R1表示CF3或OCF3。在本發(fā)明的另一方面，R1表示OCF3。
在本發(fā)明的一方面，R4表示Br或Cl。在本發(fā)明的另一方面，R4表示Cl。
在本發(fā)明的一方面，R2和R3中的一個(gè)表示甲基，且另一個(gè)表示-(CH2)nOH；在另一方面，R2和R3中的一個(gè)表示甲基，且另一個(gè)表示-HC＝N-OR5。
在本發(fā)明的一方面，R2表示甲基，且R3表示-(CH2)nOH或-HC＝N-OR5。在本發(fā)明的另一方面，R2表示甲基，且R3表示-(CH2)nOH。
在本發(fā)明的一方面，R3表示甲基，且R2表示-(CH2)nOH或-HC＝N-OR5。在本發(fā)明的另一方面，R3表示甲基，且R2表示-(CH2)nOH。
在本發(fā)明的一方面，R5表示H或甲基。
在本發(fā)明的一方面，n表示1或3。在本發(fā)明的另一方面，n表示1。
除非另有說明，在任何一種情況下式I或其任何子式上的任何官能團(tuán)或取代基的意義，與其意義或任何其它情況下的任何官能團(tuán)或取代基的意義是相互獨(dú)立的。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明包括如上所述的本發(fā)明的不同方面的基團(tuán)的所有組合。
在本發(fā)明的一方面，提供化合物或其可藥用衍生物，其中所述化合物選自 3-氯-6-(羥基甲基)-2-甲基-5-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-4(1H)-吡啶酮； 3-氯-6-(羥基甲基)-2-甲基-5-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-4(1H)-吡啶酮； 3-氯-2-(羥基甲基)-6-甲基-5-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-4(1H)-吡啶酮； 3-氯-2-(羥基甲基)-6-甲基-5-(4-{[3-(三氟甲基)苯基]氧基}苯基)-4(1H)-吡啶酮； 5-氯-6-甲基-4-氧代-3-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-1，4-二氫-2-吡啶甲醛肟(carbaldehyde oxime)； 5-氯-6-甲基-4-氧代-3-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-1，4-二氫-2-吡啶甲醛-O-甲基肟； 3-氯-6-甲基-4-氧代-5-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-1，4-二氫-2-吡啶甲醛肟；和 3-氯-6-(3-羥基丙基)-2-甲基-5-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-4(1H)-吡啶酮。
在此使用的術(shù)語(yǔ)“可藥用衍生物”是指式I化合物的任何可藥用鹽、溶劑合物或前藥如酯或氨基甲酸酯，其通過向接受者給藥能夠提供(直接或間接)式I化合物，或其活性代謝物或殘余物。此類衍生物對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員是已知的，而不需要過多的實(shí)驗(yàn)。不過，仍然推薦參考Burger’s MedicinalChemistry and Drug Discovery，第5版，Vol 1Principles and Practice，在此將其教導(dǎo)此類衍生物的內(nèi)容引入作為參考。在本發(fā)明的一方面，可藥用衍生物為鹽、溶劑合物、酯和氨基甲酸酯。在本發(fā)明的另一方面，可藥用衍生物為鹽、溶劑合物和酯。在另一方面，可藥用衍生物為鹽和溶劑合物。在另一方面，可藥用衍生物為鹽。在一方面，在吡啶酮環(huán)的氮上的可藥用衍生物包括-OC1-6烷基和-O(CO)C1-6烷基。在另一方面，當(dāng)R2或R3為-(CH2)nOH時(shí)，R2或R3的OH基團(tuán)的可藥用衍生物包括-O(CO)C1-6烷基(例如-O(CO)CH3)和-O(CO)N(C1-4烷基)-C1-2烷基-N+H2(C1-6烷基)。在另一方面，在4-吡啶醇互變異構(gòu)體形式的羥基基團(tuán)的可藥用衍生物包括-O(CO)C1-6烷基(例如-O(CO)CH3)和-O(CO)N(C1-4烷基)-C1-2烷基-N+H2(C1-6烷基)。
式I化合物的酯在人身體內(nèi)的體內(nèi)條件下為可水解的。合適的可藥用的體內(nèi)可水解的酯基團(tuán)包括那些在人體內(nèi)容易斷裂從而留下母體酸或其鹽的基團(tuán)。酯可在式I化合物的羥基基團(tuán)(OH)上，使用本領(lǐng)域中熟知的方法與相應(yīng)的酸反應(yīng)來形成。例如，酯可為C1-6烷基酯，其中烷基如此處所定義，例如甲基酯、乙基酯等。
可以理解的是，可以制備根據(jù)式I化合物的具體的可藥用鹽，這是因?yàn)楸景l(fā)明的化合物為弱的兩性化合物。事實(shí)上，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，根據(jù)式I化合物的可藥用鹽可優(yōu)選從相應(yīng)的游離堿或游離酸而來，因?yàn)榇祟慃}賦予了該分子較大的穩(wěn)定性或溶解度，從而有利于配制為特定的劑型。本發(fā)明的化合物也可作為可藥用鹽給藥。因此，本發(fā)明還涉及根據(jù)式I化合物的可藥用鹽。
在此使用的術(shù)語(yǔ)“可藥用鹽”是指保留目標(biāo)化合物所需的生物活性并且顯示出最小的不需要的毒理學(xué)作用的鹽。對(duì)于合適的鹽的綜述，可參考Berge等人，J.Pharm.Sci.，1977，66，1-19。術(shù)語(yǔ)“可藥用鹽”既包括可藥用酸加成鹽也包括可藥用堿加成鹽。這些可藥用鹽在化合物的最終分離和純化期間原位制備，或通過單獨(dú)地將以其游離酸或游離堿形式的純化的化合物分別與合適的堿或酸反應(yīng)來制備。該鹽可從溶液中沉淀出來，并通過過濾收集，或通過蒸發(fā)溶劑來回收。
在一些實(shí)施方案中，根據(jù)式I的化合物可含有酸性官能團(tuán)，并因此通過用合適的堿處理能形成可藥用堿加成鹽?？伤幱脡A加成鹽可通過式I化合物與合適的強(qiáng)無機(jī)堿，任選在合適的溶劑如有機(jī)溶劑中反應(yīng)來制備堿加成鹽，其可以例如通過結(jié)晶或過濾來分離得到?？伤幱脡A加成鹽包括可藥用金屬鹽，例如可藥用堿金屬或堿土金屬鹽如氫氧化物、鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽。
在一些實(shí)施方案中，根據(jù)式I的化合物可含有堿性官能團(tuán)，并因此可通過用合適的酸處理來形成可藥用酸加成鹽?？伤幱盟峒映甥}可通過式I化合物與合適的強(qiáng)無機(jī)或有機(jī)酸(如氫溴酸、鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸、高氯酸、對(duì)甲苯磺酸、苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、2-羥基乙磺酸、萘磺酸(例如2-萘磺酸)，任選在合適的溶劑如有機(jī)溶劑中反應(yīng)來制備，其可以通常例如通過結(jié)晶或過濾來分離得到鹽?？伤幱盟峒映甥}包括氫溴酸鹽、鹽酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、高氯酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽或萘磺酸鹽(例如2-萘磺酸鹽)。在一個(gè)實(shí)施方案中，式I化合物的可藥用酸加成鹽為強(qiáng)酸的鹽，例如氫溴酸鹽、鹽酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、高氯酸鹽、磷酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、苯磺酸鹽、甲磺酸鹽。
本發(fā)明在其范圍內(nèi)包括式I化合物所有可能的化學(xué)計(jì)量的和非化學(xué)計(jì)量的形式的鹽。
在此使用的術(shù)語(yǔ)“本發(fā)明的一種或多種化合物”是指根據(jù)式I的化合物和其可藥用衍生物。術(shù)語(yǔ)“本發(fā)明的化合物”是指如上所定義的任意一種本發(fā)明的一種或多種化合物。
本發(fā)明的化合物可以以固體或液體存在，其均包括在本發(fā)明內(nèi)。在固體狀態(tài)時(shí)，本發(fā)明的化合物既可以以無定形物質(zhì)存在，也可以結(jié)晶形式存在，或以其混合物存在。應(yīng)理解的是，可以形成其中溶劑分子在結(jié)晶期間嵌至結(jié)晶晶格中的本發(fā)明化合物的可藥用溶劑合物。溶劑合物可包括非水性溶劑如乙醇、異丙醇、二甲亞砜(DMSO)、乙酸、乙醇胺，和乙酸乙酯，或它們可包括嵌至結(jié)晶晶格中的作為溶劑的水。其中水作為溶劑嵌至結(jié)晶晶格中的溶劑合物通常稱為“水合物”。本發(fā)明包括所有的此類溶劑合物。
應(yīng)理解的是，本發(fā)明的化合物可以以不同的互變異構(gòu)體形式存在。具體地，式I化合物可以如下的4-吡啶醇互變異構(gòu)體形式存在
式I化合物的所有可能的互變異構(gòu)體形式均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。在本發(fā)明的一方面，提供了以4-吡啶酮互變異構(gòu)體形式的式I化合物。在本發(fā)明的另一方面，提供了以4-吡啶醇互變異構(gòu)體形式的式I化合物。在本發(fā)明的另一方面，提供了以4-吡啶酮和4-吡啶醇互變異構(gòu)體混合物形式的式I化合物。在本發(fā)明的另一方面，式I化合物的4-吡啶酮和4-吡啶醇互變異構(gòu)體混合物形式為兩者之間保持平衡的混合物。
還應(yīng)理解的是，含有雙鍵(例如肟雙鍵)的本發(fā)明的化合物就雙鍵的幾何構(gòu)型而言可以E和Z異構(gòu)體的混合物形式存在。該混合物可以包含相等量的E和Z異構(gòu)體，或該混合物可含有Z或E過量的異構(gòu)體?；蛘弑景l(fā)明的化合物可以對(duì)各個(gè)雙鍵來說相對(duì)純的E和Z幾何異構(gòu)體形式存在。
還應(yīng)理解的是，以多晶型、對(duì)映異構(gòu)體和其混合物形式存在的本發(fā)明的化合物均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本發(fā)明的具體化合物具有改良的藥物代謝動(dòng)力學(xué)特性(profile)(例如它們具有更好的口服生物利用度，或它們可顯示改良的口服接觸(oralexposure))。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了式I化合物或其可藥用衍生物，其用于人或動(dòng)物(veteinary)的藥物治療。
本發(fā)明的化合物可用于治療某些寄生蟲感染如寄生性原蟲感染，其由瘧疾寄生蟲鐮狀瘧原蟲，艾美球蟲屬(Eimeria)、卡氏肺囊蟲(Pneumocytiscarinii)、Trypanosoma cruzi、Trypanosoma brucei或杜氏利什曼原蟲(Leishmania donovani)所引起。具體地，本發(fā)明的化合物可用于治療由鐮狀瘧原蟲引起的感染。因此，本發(fā)明涉及治療此類病癥的方法。
在本發(fā)明的一方面，提供了式I化合物或其可藥用衍生物，其用于治療，例如治療寄生性原蟲感染如瘧疾，例如由鐮狀瘧原蟲引起的感染。
在本發(fā)明的另一方面，提供了式I化合物或其可藥用衍生物在制備用于治療寄生性原蟲感染如瘧疾，例如由鐮狀瘧原蟲引起的感染所引起的病癥的藥物中用途。
在本發(fā)明的另一方面，提供了一種治療患有寄生性原蟲感染如瘧疾，例如由鐮狀瘧原蟲引起的感染的人或動(dòng)物患者的方法，其包括向所述人或動(dòng)物患者給藥有效量的式I化合物或其可藥用衍生物，或包含式I化合物或其可藥用衍生物的藥物組合物。
本發(fā)明的治療方法包括向有此需要的患者給藥安全且有效量的根據(jù)式I的化合物或其可藥用衍生物。
在此使用的“治療”是指(1)減輕或預(yù)防正在治療的病癥或正在治療的病癥的一種或多種生物學(xué)體征，(2)干擾(a)導(dǎo)致或造成正在治療的病癥的生物學(xué)級(jí)聯(lián)中的一個(gè)或多個(gè)點(diǎn)或(b)正在治療的病癥的一種或多種生物學(xué)體征，或(3)減輕與正在治療的病癥相關(guān)的一種或多種癥狀或作用。技術(shù)人員會(huì)理解“預(yù)防”并不是絕對(duì)的術(shù)語(yǔ)。在醫(yī)學(xué)上，“預(yù)防”應(yīng)理解為預(yù)防性給藥藥物以基本上減輕病癥或其生物學(xué)體征的可能性或嚴(yán)重度，或延遲此類病癥或其生物學(xué)體征的發(fā)生。
在此使用的“安全且有效量”是指在合理的醫(yī)學(xué)判斷內(nèi)的足以顯著地降低要治療的病癥的陽(yáng)性效應(yīng)(positive modification)并且足夠低以避免副作用(以合理的效益/風(fēng)險(xiǎn)比)的該化合物的量。本發(fā)明的化合物的安全且有效量會(huì)隨著下列因素而變化具體選擇的化合物(例如取決于該化合物的效力、效率和半衰期)；所選擇的給藥途徑；感染的性質(zhì)和/或要治療的病癥；要治療的感染和/或病癥的嚴(yán)重程度；要治療的患者的年齡、身高、體重和身體狀況；要治療的患者的病史；治療的持續(xù)時(shí)間；共同治療的性質(zhì)；所需的療效等因素，但是通過技術(shù)人員按照常規(guī)來確定。
在此使用的“患者”是指人或其它動(dòng)物。
本發(fā)明的化合物可以通過任何合適的給藥途徑給藥，包括系統(tǒng)給藥。系統(tǒng)給藥包括口服給藥、腸胃外給藥、透皮給藥、直腸給藥和吸入給藥。腸胃外給藥是指除腸、透皮或吸入給藥外的給藥途徑，且通常通過注射或輸液給藥。腸胃外給藥包括靜脈內(nèi)、肌內(nèi)和皮下注射或輸液。吸入是指吸入至患者的肺中，無論是通過嘴吸入還是通過鼻吸入。局部給藥包括向皮膚應(yīng)用敷用以及眼內(nèi)、口含(例如舌下)、直腸、陰道內(nèi)和鼻內(nèi)給藥。
本發(fā)明的化合物可以僅一次給藥，或根據(jù)其中對(duì)于給定的一段時(shí)間內(nèi)以變化的時(shí)間間隔給藥多個(gè)劑量的劑量方案給藥。例如，劑量可以每天給藥一次、兩次、三次或四次?？梢越o藥劑量直到達(dá)到所需的治療效果或者長(zhǎng)期維持所需的治療效果。該劑量也會(huì)隨著所需的治療性質(zhì)而變化，其中“治療”如下所定義，例如與預(yù)防所要治療的病癥相比，可以給予較大劑量的化合物以減輕該病癥。對(duì)于本發(fā)明的化合物的合適的劑量方案取決于該化合物的藥物代謝動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，如吸收、分布和半衰期，其可由技術(shù)人員來確定。此外，對(duì)于本發(fā)明的化合物的合適的劑量方案，包括此類方案給藥的持續(xù)時(shí)間，取決與該化合物的給藥途徑、正在治療的病癥、正在治療的病癥的嚴(yán)重程度、正在治療的患者的年齡和身體狀況、要治療的患者的病史、任何共同治療的性質(zhì)、所需的治療效果等在本領(lǐng)域技術(shù)人員知識(shí)和經(jīng)驗(yàn)的范圍內(nèi)的因素。技術(shù)人員還應(yīng)理解的是，如果患者個(gè)體對(duì)該劑量方案的響應(yīng)或者隨著時(shí)間患者個(gè)體需要變化時(shí)，可能需要調(diào)節(jié)該合適的劑量方案。也可以理解的是，如果本發(fā)明的化合物與如下面進(jìn)一步討論的一種或多種其它活性治療劑組合使用時(shí)，本發(fā)明的化合物的劑量方案也可根據(jù)所需的一種或多種其它活性治療劑的性質(zhì)和量而變化。
典型的日劑量可隨著所選擇的具體給藥途徑而變化。對(duì)于口服給藥來說，典型的日劑量范圍為約0.01至約25mg/kg，在一個(gè)實(shí)施方案中，為約0.1至約14mg/kg。對(duì)于腸胃外給藥來說，典型的日劑量范圍為約0.001至約10mg/kg；在一個(gè)實(shí)施方案中為約0.01至約6mg/kg。在一個(gè)實(shí)施方案中，該化合物的日劑量范圍為100-1000mg。
式I化合物也可與其它活性治療劑組合使用。因此在另一方面，本發(fā)明提供組合(combination)，其包含式I化合物或其可藥用衍生物與其它活性治療劑。當(dāng)式I化合物或其可藥用衍生物與具有抗相同疾病狀態(tài)活性的第二活性治療劑組合使用時(shí)，各個(gè)化合物的劑量可能不同于該化合物單獨(dú)使用時(shí)的劑量。合適的劑量對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來是容易理解的。應(yīng)理解的是，用于治療中所需的本發(fā)明的化合物的量會(huì)隨著所要治療的病癥和患者的年齡和情況變化，并最終由主治醫(yī)師或獸醫(yī)師決定。
本發(fā)明的化合物可以單獨(dú)使用或與一種或多種其它活性治療劑，如其它的抗寄生藥，例如抗瘧疾藥組合使用。
此類其它的活性治療劑包括抗瘧疾藥，如葉酸(例如氯喹、甲氟喹、伯氨喹、乙胺嘧啶、奎寧、青蒿素、鹵泛群、多西環(huán)素、阿莫地喹、阿托伐醌、他非諾喹)和抗葉酸劑(例如氨苯砜、氯胍、磺胺多辛、乙胺嘧啶、氯環(huán)胍(chlorcycloguanil)、環(huán)氯胍(cycloguanil)。
上述組合可方便地以藥物制劑的形式存在使用，因此藥物制劑包含如上所定義的組合以及可藥用載體和/或賦形劑，其構(gòu)成了本發(fā)明的一個(gè)方面。此類組合的各個(gè)成分可以依次或同時(shí)以分開或組合的藥物制劑通過任何適宜的途徑給藥。
當(dāng)依次給藥時(shí)，可以首先給藥本發(fā)明的化合物或一種或多種其它活性治療劑。當(dāng)同時(shí)給藥時(shí)，可以以同一或不同的藥物組合物給藥給該組合。當(dāng)在同一制劑中組合時(shí)，應(yīng)理解的是，本發(fā)明的化合物和一種或多種其它活性治療劑必須是穩(wěn)定的且彼此和與制劑的其它成分相容。當(dāng)分開配制時(shí)，本發(fā)明的化合物和一種或多種其它活性治療劑可以以任何方便的本領(lǐng)域中對(duì)于此類化合物常規(guī)的方式的制劑提供。
組合物 本發(fā)明的化合物會(huì)通常，但不是必須的，在向患者給藥前配制成藥物組合物。在一方面，本發(fā)明涉及藥物組合物，其包含本發(fā)明的化合物。在另一方面，本發(fā)明涉及藥物組合物，其包含本發(fā)明的化合物以及一種或多種可藥用載體和/或賦形劑。
該載體和/或賦形劑必須在與制劑的其它成分相容的意義上來說是“可接受的”并且對(duì)其接受者無害。
本發(fā)明的藥物組合物可以以大量形式制備并包裝，其中安全且有效量的本發(fā)明的化合物可以提出來(extract)，然后遞送至患者，如使用粉劑或糖漿?；蛘?，本發(fā)明的藥物組合物可以以單位劑型制備并包裝，其中各個(gè)物理分離的單位含有安全且有效量的本發(fā)明的化合物。當(dāng)以單位劑型制備時(shí)，本發(fā)明的藥物組合物通常含有約0.1至100mg，另一方面0.1mg至約50mg的本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明的藥物組合物通常含有一種本發(fā)明的化合物。然而，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物含有多于一種本發(fā)明的化合物。例如，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物含有兩種本發(fā)明的化合物。此外，本發(fā)明的藥物組合物還可任選地包含一種或多種其它的活性治療化合物。本發(fā)明的藥物組合物通常含有多于一種可藥用賦形劑。然而，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物含有一種可藥用賦形劑。
在此使用的術(shù)語(yǔ)“可藥用”是指適于藥物用途。
通常將本發(fā)明的化合物和可藥用賦形劑配制為適于通過所需給藥途徑向患者給藥的劑型。例如，劑型包括適于下述的劑型(1)口服給藥如片劑、膠囊、囊片、丸劑、糖錠、粉劑、糖漿、酏劑、懸浮液、溶液、乳劑、囊劑和扁囊劑；(2)腸胃外給藥如無菌溶液、懸浮液和重構(gòu)粉劑；(3)透皮給藥如透皮貼片；(4)直腸給藥如栓劑；(5)吸入給藥如氣霧劑和溶液；和(6)局部給藥如霜?jiǎng)?、軟膏劑、洗劑、溶液、糊劑、噴霧劑、泡沫劑和凝膠劑。
合適的可藥用賦形劑會(huì)根據(jù)具體所選擇的劑型而變化。此外，可以選擇合適的可藥用賦形劑以用于在組合物中起到特定的作用。例如，可以選擇某些具有有利于制備均勻劑型能力的可藥用賦形劑?？梢赃x擇某些具有有利于制備穩(wěn)定劑型能力的可藥用賦形劑?？梢赃x擇某些具有一旦給藥至患者有利于將本發(fā)明的一種或多種化合物從一個(gè)器官或身體的一部分運(yùn)輸或遞送至另一個(gè)器官或身體的另一部分的能力的可藥用賦形劑?？梢赃x擇某些具有增加患者相容性能力的可藥用賦形劑。
合適的可藥用賦形劑包括下列類型的賦形劑粘結(jié)劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、助流劑、制粒劑、包衣劑、潤(rùn)濕劑、溶劑、共溶劑、助懸劑、乳化劑、甜味劑、調(diào)味劑、味道掩蔽劑、著色劑、抗結(jié)塊劑、保濕劑、絡(luò)合劑、增塑劑、增粘劑、抗氧化劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑和緩沖劑。技術(shù)人員會(huì)理解某些可藥用賦形劑可起到多于一種的作用，并且根據(jù)在制劑中存在的賦形劑的量以及制劑中存在的其它成分起到可選擇的其它功能。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員具有選擇在本發(fā)明中以合適的量使用的合適的可藥用賦形劑的知識(shí)和技能。此外，對(duì)于技術(shù)人員存在大量的可用的描述可藥用賦形劑且可用于選擇合適的可藥用賦形劑的資源。實(shí)例包括Remington′sPharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company)，The Handbook ofPharmaceutical Additives(Gower Publishing Limited)，和The Handbook ofPharmaceutical Excipients(the American Pharmaceutical Association and thePharmaceutical Press)。
本發(fā)明的藥物組合物使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)和方法來制備。在本領(lǐng)域中通常使用的一些方法描述于Remington′s Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company)。
在一方面，本發(fā)明涉及固體或液體口服劑型如液體、片劑、錠劑或膠囊，其包含安全且有效量的本發(fā)明的化合物和載體。該載體可以為稀釋劑或填料的形式。合適的稀釋劑和填料通常包括乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖、山梨糖醇、淀粉(例如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉和預(yù)膠化淀粉)、纖維素及其衍生物(例如微晶纖維素)、硫酸鈣和磷酸氫鈣(dibasic calcium phosphate)。液體劑型通常由化合物或可藥用衍生物在液體載體例如乙醇、橄欖油、甘油、葡萄糖(糖漿)或水(例如含有加入的調(diào)味劑、懸浮劑或著色劑)中的懸浮液或溶液所構(gòu)成。當(dāng)組合物為片劑或錠劑的形式時(shí)，可以使用任何常規(guī)用于制備固體制劑的藥學(xué)載體。此類載體的實(shí)例包括硬脂酸鎂、石膏粉、滑石、明膠、阿拉伯膠、硬脂酸、淀粉、乳糖和蔗糖。當(dāng)組合物為膠囊的形式時(shí)，任何常規(guī)的膠囊化是合適的，例如使用上述載體或半固體例如單羊蠟酸甘油二酯(monodi-glycerides of capric acid)、GelucireTM和LabrasolTM，或硬膠囊殼如明膠。當(dāng)組合物為軟膠囊如明膠時(shí)，任何常規(guī)用于制備分散液或懸浮液的藥物載體都可以考慮，例如含水膠或油，并且可以混入軟膠囊殼中。
口服固體劑型還可包括以粘結(jié)劑形式的賦形劑。合適的粘結(jié)劑包括淀粉(例如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉和與預(yù)膠化淀粉)、明膠、阿拉伯膠、藻酸鈉、藻酸、黃芪膠、瓜爾膠、聚維酮和纖維素及其衍生物(例如微晶纖維素)?？诜腆w劑型還可包含以崩解劑形式的賦形劑。合適的崩解劑包括交聯(lián)聚維酮、乙醇酸淀粉鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素、藻酸和羧甲基纖維素鈉。該口服固體劑型還可包含以潤(rùn)滑劑形式的賦形劑。合適的潤(rùn)滑劑包括硬脂酸、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣和滑石。
本發(fā)明還提供一種制備藥物組合物的方法，該方法包括將至少一種式I化合物或其可藥用衍生物與可藥用載體和/或賦形劑一起混合。
用于口服給藥的制劑可以合適地配制為可以控制地/延遲釋放活性化合物。
縮寫 在描述本發(fā)明時(shí)，化學(xué)元素的命名根據(jù)元素周期表。在此使用的縮寫和符號(hào)與化學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員常用的此類縮寫和符號(hào)相一致。在此使用下列縮寫 AcOEt，EtOAc 乙酸乙酯 approx.大約 bar1×105Pa(帕斯卡) brine 飽和氯化鈉水溶液 n-BuLi 正丁基鋰 t-BuOMe叔丁基-甲基-醚 cat.ref目錄號(hào) CDCl3 氘代氯仿 CD3OD 氘代甲醇 conc. 濃的 cpm每分鐘計(jì)數(shù)(放射性單位) DCM二氯甲烷 DIBAH 二異丁基氫化鋁 DMFN，N-二甲基甲酰胺 DMSO 二甲亞砜 DMSO-d6氘代二甲亞砜 ES MS 電噴霧質(zhì)譜 EtOH 乙醇 h 小時(shí) human sera AB 從AB血型的人中得到的血清 HEPES 4-(2-羥基乙基)哌嗪-1-乙磺酸 HPLC 高效液相色譜 HT 次黃嘌呤 HT supplement0.15mM次黃嘌呤和24μM胸腺嘧啶脫氧核苷(GIBCOTM目錄號(hào)41065) Incomplete blood donation用于研究的小于450ml體積的血液 L升 LDA 二異丙基胺基鋰 MeOH 甲醇 min. 分鐘(s) NaTaurochol. ?；悄懰徕c NBS N-溴代琥珀酰亞胺 NCS N-氯代琥珀酰亞胺 NMP N-甲基-吡咯烷酮 NMR 核磁共振波譜 Pa 帕斯卡(壓力的SI單位m-1.kg.s-2) PRBCs寄生感染的(parasitized)紅細(xì)胞 pH -Log10氫離子濃度 RBCs 紅細(xì)胞 TBDMS叔丁基二甲基甲硅烷基 TBDPS叔丁基二苯基甲硅烷基 TCCA 三氯異氰尿酸 TMHD 2，2，6，6-四甲基-庚烷-3，5-二酮 RPMI Roswell Park Memorial Institute medium* THF 四氫呋喃 v/v 體積比率 w/w 重量比率，例如重量百分比 *(對(duì)于此培養(yǎng)基的詳細(xì)信息，參見Divo，A.A.等人Nutritionalrequirements of Plasmodium falciparum in culture.I.Exogenously supplieddialyzable components necessary for continuous growth.J Protozool，1985.32(1)p.59-64)。
化合物制備 合成式I化合物使用的通用方法描述在反應(yīng)方案1-24中并在實(shí)施例中說明。

在本說明書中，通式由羅馬數(shù)字I、II、III、IV等表示。式I化合物的子類定義為Ia、Ib、Ic、Id和Ie；其它式的子類以類似的方式表示。
式Ia化合物，其為其中R1表示鹵素、CF3或OCF3；R4表示鹵素；R2表示-CH2OH；且R3表示甲基的式I化合物，可從式II化合物，其中R1表示鹵素、CF3或OCF3，根據(jù)方案1，通過II與合適的鹵化試劑(如鹵代琥珀酰亞胺(NBS、NCS)、三氯異氰尿酸(TCCA)或溴)于合適的溶劑(如二氯甲烷和甲醇的混合物)中反應(yīng)來制備。

方案1 式II化合物可以從式III化合物，其中R1表示氟、氯、CF3或OCF3和PG為立體位阻的羥基保護(hù)基團(tuán)，例如TBDMS或TBDPS，根據(jù)方案2，通過氨解，并同時(shí)使保護(hù)基團(tuán)PG脫保護(hù)，例如在氨水的存在下，適宜地在壓力和高溫下(如在120℃和160℃之間)，于合適的溶劑(如EtOH或MeOH)中來制備。

方案2 根據(jù)方案3，式III化合物可以在式IV化合物和式V硼酸化合物之間使用Suzuki偶聯(lián)反應(yīng)來制備，其中PG如對(duì)于式III所定義，其中R1表示氟、氯、CF3或OCF3。可將式IV化合物與V，以及合適的鈀催化劑，于合適的溶劑(如甲苯、乙醇、DMF或其混合物)中，在堿(如碳酸鈉或碳酸鉀)的存在下，如在50℃和100℃之間的溫度下加熱。在一方面，該鈀催化劑為氯化雙(三苯基膦)合鈀(II)。

方案3 根據(jù)方案4，式IV化合物可以從式VI化合物，其中PG如對(duì)于式III所定義，通過用溫和的三氟甲磺?；噭┯诤线m的溶劑(如二甲基甲酰胺)中，在合適的堿(如碳酸鈉或碳酸鉀)的存在下，對(duì)VI進(jìn)行處理來制備。在一方面，該三氟甲磺?；噭镹-苯基-三氟甲磺酰亞胺(N-phenyl-trifluoromethanesulfonimide)。

方案4 根據(jù)方案5，式VI化合物可從式VII化合物，其中PG如對(duì)于式III所定義，且PG1為不同于PG的羥基保護(hù)基團(tuán)，通過VII的選擇性脫保護(hù)反應(yīng)以脫去PG1來制備。例如，當(dāng)PG1為芐基時(shí)，可在合適的催化劑(如鈀/碳)存在下，于合適的溶劑如乙酸乙酯中氫化來進(jìn)行脫保護(hù)。

方案5 根據(jù)方案6，式VII化合物可從式VIII化合物，其中PG1如對(duì)于式VII的定義，通過使用合適的保護(hù)基團(tuán)PG保護(hù)式VIII的羥基的反應(yīng)來制備。例如，當(dāng)保護(hù)基團(tuán)PG為TBDMS時(shí)，式VIII化合物可以用TBDMSC1在堿(如咪唑)的存在下，于合適的溶劑(如DMF)中處理。

方案6 根據(jù)方案7，式VIII化合物可從式IX化合物來制備?；衔颕X可以在合適的堿(如氫氧化鈉水溶液)的存在下用甲醛處理，然后將得到的中間體產(chǎn)物進(jìn)行保護(hù)反應(yīng)以引入PG1。例如，當(dāng)PG1為芐基時(shí)，該中間體產(chǎn)物可以在合適的催化劑(如四-正丁基溴化銨)的存在下，用氯芐或溴芐處理。

方案7 根據(jù)方案8，式IX化合物可以從式X化合物，通過在濃HCl的存在下，于合適的溶劑(如水)中，在高溫(如50℃和90℃之間)下，IX與鋅的反應(yīng)來制備。

方案8 根據(jù)方案9，式X化合物可通過式XI化合物與氯化試劑(如亞硫酰氯(SOCl2)或磷酰氯(POCl3))的反應(yīng)來制備。

方案9 根據(jù)方案10，式V的硼酸可從式XII化合物，其中R1表示氟、氯、CF3或OCF3，通過在硼酸三-異丙基酯的存在下，于合適的溶劑(如THF)中，在-60℃和-78℃之間的溫度下，用合適的堿(如n-BuLi)處理XII，然后通過酸(如用6N HCl)水解來制備。

方案10 根據(jù)方案11，式XI化合物可以通過可商購(gòu)的式XIII的4-溴苯酚化合物與同樣可商購(gòu)的式XIV的碘苯基化合物之間的Ullman偶聯(lián)反應(yīng)來制備，其中R1表示氟、氯、CF3或OCF3。在銅(I)鹽(如氯化銅(I))和堿(如碳酸銫)和添加劑(如2，2，6，6-四甲基-庚烷-3，5-二酮(TMHD))的存在下，于合適的溶劑(如N-甲基-吡咯烷酮(NMP))中，在高溫(如80℃和110℃之間)下，例如根據(jù)LeyV.S.和Thomas A.W.，(2003)Angew.Chem.Int.Ed.42，5400-5449中描述的方法，化合物XIII與XIV反應(yīng)。

方案11 根據(jù)方案12，式Ib化合物，其為其中R1表示氟、氯、CF3或OCF3；R4表示鹵素；R2表示甲基；且R3表示-CH2OH的式I化合物，可從式XV化合物，其中R1表示氟、氯、CF3或OCF3，通過XV與合適的鹵化試劑(如鹵代琥珀酰亞胺(NBS，NCS)、三氯異氰尿酸(TCCA)或溴)，于合適的溶劑(如二氯甲烷和甲醇的混合物)中反應(yīng)來制備。

方案12 根據(jù)方案13，式XV化合物可從式XVI化合物，其中R1表示氟、氯、CF3或OCF3；通過于合適的溶劑(如乙醇或甲醇)中，適宜地在壓力下加熱，任選在微波輻射存在下，用氨水溶液處理化合物XV來制備。在一方面，該反應(yīng)在鋼反應(yīng)器中在高溫下進(jìn)行1小時(shí)至8小時(shí)。另一方面，該反應(yīng)在高溫下，于微波爐中進(jìn)行如30-90分鐘的時(shí)間。

方案13 根據(jù)方案14，式XV化合物可以在式XVII化合物和式V的硼酸化合物之間使用Suzuki偶聯(lián)反應(yīng)來制備，其中R1表示氟、氯、CF3或OCF3。于合適的溶劑(如甲苯、乙醇、DMF或其混合物)中，在堿(如碳酸鈉或碳酸鉀)以及合適的鈀催化劑的存在下，可將式IV化合物與V，例如在50℃和100℃之間加熱。在一方面，該鈀催化劑為氯化雙(三苯基膦)合鈀(II)。

方案14 根據(jù)方案15，式XVII化合物可從式XVIII化合物，通過于合適的溶劑(如二甲基甲酰胺)中，在合適的堿(如碳酸鈉或碳酸鉀)的存在下，用溫和的三氟甲磺?；噭┨幚鞽VII來制備。在一方面，該三氟甲磺?；噭镹-苯基-三氟甲磺酰亞胺。

方案15 根據(jù)方案16，式XVIII化合物可從式XIX化合物，通過XVIII與鋅在濃HCl的存在下，于合適的溶劑(如水)中，在高溫下(例如50℃和90℃之間)的反應(yīng)來制備。

方案16 根據(jù)方案17，式XIX化合物可從式X化合物制備?；衔颴IX可在合適的堿(如氫氧化鈉水溶液)存在下用甲醛處理。

方案17 根據(jù)方案18，式Ic化合物，其為其中R1表示鹵素、CF3或OCF3；R4表示鹵素，R2表示-HC＝N-OR5；和R3表示甲基；和R5表示H或C1-3烷基的式I化合物；可從式XX化合物，其中R1表示鹵素、CF3或OCF3；和R4表示鹵素；通過XX與NH2OR5.HCl，其中R5表示H或C1-3烷基；在合適的堿(如吡啶)的存在下，于合適的溶劑(如EtOH)中，在高溫(例如50℃至回流溫度之間)的反應(yīng)來制備。

方案18 根據(jù)方案19，式XX化合物可從式Ia化合物通過氧化反應(yīng)來制備，通過在堿(如三乙胺)的存在下，于合適的溶劑(如DMSO和DCM的混合物)中，用合適的氧化劑(如三氧化硫-吡啶絡(luò)合物)處理Ia。

方案19 根據(jù)方案20，式Id化合物，其為其中R1表示鹵素、CF3或OCF3；R4表示鹵素；R2表示甲基；R3表示-HC＝N-OR5；和R5表示H或C1-3烷基的式I化合物；可從式XXI化合物，其中R1表示鹵素、CF3或OCF3；和R4表示鹵素；通過XXI與NH2OR5.HCl，其中R5表示H或C1-3烷基；在合適的堿(如吡啶)的存在下，于合適的溶劑(如EtOH)中，在高溫(如50℃至回流溫度之間)的反應(yīng)來制備。

方案20 根據(jù)方案21，式XXI化合物可從式Ib化合物通過氧化反應(yīng)，例如通過在堿(如三乙胺)的存在下，于合適的溶劑(如DMSO和DCM的混合物)中，用合適的氧化劑(如三氧化硫-吡啶絡(luò)合物)處理Ia來制備。

方案21 根據(jù)方案22，式Ie化合物，其為其中R1表示氟、氯、CF3或OCF3；R4表示鹵素；R2表示-(CH2)nOH，其中n表示3；和R3表示甲基；和R5表示H或C1-3烷基的式I化合物；可從式XXII化合物，其中R1表示氟、氯、CF3或OCF3；和R4表示鹵素；通過在合適的催化劑(如鈀/碳)的存在下，于合適的溶劑(如EtOAc)中氫化XXII來制備。

方案22 根據(jù)方案23，式XXII化合物可從式XXIII化合物，其中R1表示氟、CF3或OCF3；R4表示鹵素；和RY表示烷基，例如甲基、乙基或叔丁基，通過XXIII與DIBAH于合適的溶劑(如THF)中，并在冷卻(如20℃和-20℃之間)下的反應(yīng)來制備。該反應(yīng)可產(chǎn)生式XXII化合物和式Ie化合物的混合物，其在轉(zhuǎn)化為式Ie化合物之前不需要分離或純化。

方案23 根據(jù)方案24，式XXIII化合物可從如上所定義的式XX化合物，通過XX的Wittig反應(yīng)，例如通過與(烷氧基羰基亞甲基)-三苯基膦Ph3P＝CHCO2RY，其中RY表示烷基，例如甲基、乙基或叔丁基，于合適的溶劑(如DCM)中反應(yīng)來制備。

方案24 式I化合物，其中R1表示氟、氯、CF3或OCF3；R4表示鹵素；R2表示-(CH2)nOH，其中n表示2或4；和R3表示甲基；和R5表示H或C1-3烷基，可用類似于對(duì)于式Ie在方案22-24中描述的方法來制備，亦即，通過化合物XX的Wittig反應(yīng)，然后還原由此得到的烯烴，例如通過氫化。
或者，根據(jù)方案25，式II化合物可從式XXIV化合物，其中R1表示鹵素、CF3或OCF3，通過XXIV的還原開環(huán)以及隨后中間體烯胺的環(huán)化來制備，其由下列促進(jìn)，例如i)在合適的催化劑(如鈀/活性碳)的存在下氫化，或ii)通過于合適的溶劑(如EtOH)中使用六羰基合鉬(hexacarbonylmolybdenum)。

方案25 根據(jù)方案26，式XXIV化合物可從式XXV化合物，其中R1表示鹵素、CF3或OCF3，通過?；磻?yīng)來制備?；衔颴XV可用合適的堿(如n-BuLi或LDA，或n-BuLi和LDA的混合物)，任選在N，N-二異丙基胺和合適的鋰鹽(如氯化鋰)的存在下處理，然后用?；噭?如N-甲氧基-N-甲基-乙酰胺或乙酸乙酯)，在低溫下(如-60℃至-78℃)下，于合適的溶劑(如THF)中處理。

方案26 式II化合物可從式XXV化合物得到，而不需要分離和純化式XXIV中間體化合物。
根據(jù)方案27，式XXV化合物可通過式XXVI化合物和式V化合物之間的偶聯(lián)反應(yīng)來制備，其中R1表示鹵素、CF3或OCF3?；衔颴XVI和V可以在合適的催化劑(如鈀/活性碳或氯化雙(三苯基膦)合鈀(II))的存在下，在合適的堿(如碳酸氫鈉或碳酸鈉)的存在下，于合適的溶劑(如EtOH或EtOH和甲苯的混合物)中，在高溫(如70℃至90℃)下一起反應(yīng)。

方案27 根據(jù)方案28，式XXVI的化合物可通過式XXVII的化合物的碘化反應(yīng)來制備。在合適的催化劑如三氟乙酸銀的存在下，在合適的溶劑如DCM中，在高溫例如30℃至60℃下用碘處理化合物XXVII，或者在合適的溶劑如水中，在強(qiáng)有機(jī)酸如三氟乙酸的存在下，在高溫例如60-70℃下用一氯化碘處理化合物XXVII。

方案28 根據(jù)方案29，化合物XXVII可通過還原商業(yè)可購(gòu)得的化合物XXVIII來制備。化合物XXVIII可用合適的還原試劑，如硼氫化鈉，在合適的溶劑如EtOH中處理。

方案29 對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員顯而易見的是，其它的式I化合物可以使用類似于上述方法制備，或者參考本文提供的實(shí)施例中詳細(xì)描述的實(shí)驗(yàn)方法來制備，或這通過使用類似于以前PCT專利申請(qǐng)No.WO 91/13873A1中所報(bào)道的那些方法來制備。
本領(lǐng)域中的技術(shù)人員會(huì)理解，在制備式I化合物或其可藥用衍生物中，有時(shí)必須和/或需要在分子或合適的中間體中保護(hù)一種或多種敏感性的基團(tuán)以防止不需要的副反應(yīng)。用于本發(fā)明的合適的保護(hù)基團(tuán)對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說是熟知的，并且可以以常規(guī)方式使用。參見例如，“Protective groups inorganic synthesis”by T.W.Greene and P.G.M.Wuts(John Wiley & sons 1991)或“Protecting Groups”by P.J.Kocienski(Georg Thieme Verlag 1994)。合適的氨基保護(hù)基團(tuán)的實(shí)例包括酰基類型的保護(hù)基團(tuán)(例如甲?；?、三氟乙?；?、乙酰基)、芳香脲類型的保護(hù)基團(tuán)(例如芐氧羰基(Cbz)和取代的Cbz)、脂肪族脲保護(hù)基團(tuán)(例如9-芴甲氧羰基(Fmoc)、叔丁氧羰基(Boc)、異丙氧羰基、環(huán)己氧基羰基)和烷基或烷基芳烷基類型的保護(hù)基團(tuán)(例如芐基、三苯甲基、氯三苯甲基)。合適的氧保護(hù)基團(tuán)的實(shí)例可包括例如烷基硅烷基，如三甲基硅烷基或叔丁基二甲基硅烷基；烷基醚如四氫吡喃基或叔丁基；或酯如乙酸酯。
實(shí)施例 下列的實(shí)施例示例性地說明本發(fā)明。這些實(shí)施例并不用來限制本發(fā)明的范圍，而是向技術(shù)人員提供制備和使用化合物，組合物，以及本發(fā)明方法的指導(dǎo)。而對(duì)于描述的本發(fā)明的具體實(shí)施方案，技術(shù)人員可理解在不背離本發(fā)明的精神和范圍下可以進(jìn)行各種變化和改良。
實(shí)驗(yàn)部分 中間體1(Bioorganic & Medicinal Chemistry 9，2001，563-573)
2-(氯甲基)-5-羥基-4H-吡喃-4-酮 向曲酸(Kojic acid)(FLUKA，1g)中加入亞硫酰氯(ALDRICH，1.027mL)。將該黃色混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。過濾沉淀，然后用己烷洗滌，并真空干燥，得到1.08g的標(biāo)題化合物，為淺黃色固體。
1H-NMR(δ，ppm，DMSO-d6)9.28(bd，1H)；8.12(s，1H)；6.56(s，1H)；4.65(s，2H)。
中間體2(Bioorganic & Medicinal Chemistry 9，2001，563-573)
5-羥基-2-甲基-4H-吡喃-4-酮 在50℃下，向中間體1(1.07g)于水(30mL)中的懸浮液中加入鋅粉(PANREAC，871mg)。將該混合物在70℃下加熱1小時(shí)。然后滴加濃HCl(5mL)，并將該混合物在70-80℃下加熱5小時(shí)。趁熱過濾除去過量的鋅，將淺黃色濾液傾倒在冰/水混合物中。水層用二氯甲烷(3×30mL)萃取，合并的有機(jī)萃取液經(jīng)Na2SO4干燥。真空下除去溶劑，得到0.53g的標(biāo)題化合物，為淺黃色固體。
1H-NMR(δ，ppm，CDCl3)7.76(s，1H)；6.24(s，1H)；2.28(s，3H)。
中間體3(Bioorganic & Medicinal Chemistry 9，2001，563-573；US6,426,418B1)
2-(羥基甲基)-6-甲基-3-[(苯基甲基)氧基]-4H-吡喃-4-酮 為1L 3-頸圓底燒瓶配置機(jī)械攪拌器和滴液漏斗。向該燒瓶中加入1NNaOH(498mL)，接著滴加中間體2(57.15g)。將該微紅色混合物在冰浴中冷卻(大約30分鐘)，滴加37％的甲醛水溶液(ALDRICH，37.36mL)(經(jīng)30分鐘)，將該溶液在室溫下攪拌18小時(shí)。將混合物在0℃下冷卻，并加入四-正丁基溴化銨(ALDRICH，365mg)，接著加入溴芐(ALDRICH，59.2mL)。將該溶液在60℃下加入2小時(shí)，然后冷卻至室溫并攪拌過夜，用二氯甲烷(3×500mL)萃取。合并的有機(jī)萃取液用飽和NaCl水溶液(1×500ml)洗滌，并用Na2SO4干燥，過濾并在真空下濃縮，得到117g的淺黃色固體。此固體用80∶20EtOAc/己烷(250mL)研制，然后過濾。用70∶30EtOAc/己烷(250mL)重復(fù)該步驟，真空干燥后得到84.15g的標(biāo)題化合物，為白色固體。
1H-NMR δ，ppm，DMSO-d6)7.38(m，5H)；6.25(s，1H)；5.43(t，1H)；5.00(s，2H)；4.25(d，2H)；2.25(s，3H) 中間體4
2-({[(1，1-二甲基乙基)(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-6-甲基-3-[(苯基甲基)氧基]-4H-吡喃-4-酮 在2L反應(yīng)器中加入中間體3(66.65g)和無水N，N-二甲基甲酰胺(500mL)。將該混合物在氮?dú)庀聰嚢?，得到溶液，然后加入咪?55.28g)和叔丁基二甲基氯硅烷(48.94g)，接著加入無水N，N-二甲基甲酰胺(50mL)。攪拌3小時(shí)后，加入乙酸乙酯(900mL)和1N NH4Cl(700mL)。分配兩層，有機(jī)層用1N NH4Cl(2×900mL)和鹽水(900mL)洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并真空下濃縮至干，得到103.68g的標(biāo)題化合物，為淺黃色油狀物。
1H-NMR(δ，ppm，CDCl3)7.35(m，5H)；6.20(s，1H)；5.16(s，2H)；4.39(s，2H)；2.26(s，3H)；0.87(s，9H)；0.04(s，6H)。
中間體5
2-({[(1，1-二甲基乙基)(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-3-羥基-6-甲基-4H-吡喃-4-酮 在N2下，向中間體4(23.71g)于乙酸乙酯(600mL)中的溶液中加入10％w/w鈀/活性炭(FLUKA，700.9mg)。將該混合物在1.8×105Pa(1.8巴)氫化3小時(shí)。過濾除去催化劑，真空下蒸發(fā)溶劑至干，得到16.72g的標(biāo)題化合物。
1H-NMR(δ，ppm，CDCl3)6.43(bd，1H)；6.23(s，1H)；4.70(s，2H)；2.32(s，3H)；0.91(s，9H)；0.12(s，6H)。
中間體6
三氟甲磺酸2-({[(1，1-二甲基乙基)(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-6-甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基酯 在500mL圓底燒瓶中加入于無水N，N-二甲基甲酰胺(170mL)中的中間體5(16.72g)，并將該溶液在N2下攪拌10分鐘。然后分批加入N-苯基三氟甲磺酰亞胺(FLUKA，23.85g)和粉末碳酸鉀(ALDRICH，10.68g)。攪拌1.5小時(shí)后，通過過濾除去碳酸鉀，并用叔丁基-甲基-醚(300mL)洗滌。濾液用100mL的叔丁基-甲基-醚稀釋，并用1N NH4Cl(2×400mL)洗滌。水層用叔丁基-甲基-醚(200mL)萃取。合并的有機(jī)萃取液用Na2CO3(3×400mL)和鹽水(400mL)洗滌，用MgSO4干燥，過濾并真空下濃縮，得到24.7g的標(biāo)題化合物，為淺橙色固體。
1H-NMR(δ，ppm，CDCl3)6.29(s，1H)；4.6624(s，2H)；2.34(s，3H)；0.92(s，9H)；0.13(s，6H)。
中間體7a
2-({[(1，1-二甲基乙基)(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-6-甲基-3-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-4H-吡喃-4-酮 在1L圓底燒瓶中加入中間體6(11.8g)和無水甲苯(90mL)，并且將得到的溶液通過在其中鼓泡氬氣15分鐘來除氧。加入氯化雙(三苯基膦)合鈀(II)(ALDRICH，1.03g)，且將該混合物再通過在其中鼓泡氬氣30分鐘來除氧。然后加入中間體19(10.5g)于無水乙醇(200mL)中的溶液。最后，加入碳酸鈉(12.45g)。加熱2小時(shí)45分鐘后，在80℃和氬氣下，將該混合物室溫下攪拌過夜，然后過濾，并真空下濃縮至干。將粗產(chǎn)物溶于叔丁基甲基醚(700mL)，并用1N NaOH(2×500mL)，H2O(500mL)和鹽水(450mL)洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并濃縮，得到黑色溶液，將其通過硅藻土墊過濾。得到的溶液濃縮至干，得到黑色油狀殘余物，其通過硅膠柱層析純化，用乙酸乙酯/己烷(0-50％)混合物洗脫。得到10.3g的標(biāo)題化合物，為棕色固體。
1H-NMR(δ，ppm，CDCl3)7.28(d，2H)；7.20(d，2H)；7.07-7.02(m，4H)；6.25(s，1H)；4.39(s，2H)；2.33(s，3H)；0.89(s，9H)；0.05(s，6H)。
中間體7b
2-({[(1，1-二甲基乙基)(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-6-甲基-3-(4-{[3-(三氟甲基)苯基]氧基}苯基)-4H-吡喃-4-酮 在25mL 2-頸圓底燒瓶中加入中間體6(500mg)和無水甲苯(4mL)，并將得到的溶液通過鼓泡氬氣15分鐘來除氧。加入氯化雙(三苯基膦)合鈀(II)(ALDRICH，43.5mg)和中間體20(420mg)于無水乙醇(9mL)中的溶液，且將得到的混合物再通過在其中鼓泡氬氣15分鐘來除氧，然后加入碳酸鈉(525mg)。在80℃和氬氣下加熱3小時(shí)15分鐘后，將該混合物冷卻至室溫，過濾，用甲苯/甲醇洗滌，并濃縮至干。將該粗產(chǎn)物溶于叔丁基-甲基醚，并用1N NaOH(2x)，H2O和NaOH洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并濃縮至干。醬色油狀殘余物通過硅膠柱層析純化，用乙酸乙酯/己烷(0-70％)混合物洗脫。得到460mg的標(biāo)題化合物，為醬色油狀物。
1H-NMR(δ，ppm，CDCl3)7.46(m，1H)；7.36(m，1H)；7.32-7.29(m，3H)；7.24-7.20(m，1H)；7.05(d，2H)；6.25(s，1H)；4.39(s，2H)；2.33(s，3H)；0.89(s，9H)；0.04(s，6H)。
中間體8a
2-(羥基甲基)-6-甲基-3-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-4(1H)-吡啶酮 方法A 向中間體7a(10.1g)于乙醇(60mL)中的溶液中加入30％氨水(200mL)。將得到的懸浮液置于鋼反應(yīng)器中，并在140℃和20巴(300psi)壓力下加熱8.5小時(shí)，然后冷卻至室溫過夜。過濾沉淀，并用H2O(700mL)和乙酸乙酯(20mL)洗滌，真空下干燥，真空干燥后，得到5.39g的標(biāo)題化合物，為灰色粉末。
1H-NMR(δ，ppm，DMSO-d6)10.84(bd，1H)；7.39(d，2H)；7.21(d，2H)；7.12(d，2H)；7.02(d，2H)；5.98(s，1H)；5.49(bd，1H)；4.22(s，2H)；2.24(s，3H)。
方法B 在氬氣下，將中間體23(0.365g)于無水THF(10ml)中的溶液冷卻至-75℃。加入n-BuLi的溶液(1.4ml，1.78M的己烷溶液)，并將該混合物在Ar下攪拌40分鐘，然后加入0.16ml的N-甲氧基-N-甲基-乙酰胺。將該混合物在-75℃下攪拌3小時(shí)。HPLC分子顯示仍有起始原料。連續(xù)地加入一定量的n-BuLi(1.4ml，1.78M的己烷溶液)和N-甲氧基-N-甲基-乙酰胺(0.050ml)，并將該混合物在Ar氣和-75℃下攪拌1小時(shí)。加入2N HCl(5ml)，并將該混合物在室溫小攪拌1小時(shí)，然后加入水(50ml)和t-BuOMe(50ml)，將混合物分配。有機(jī)層用水(50ml)，10％NaHCO3(50ml)和鹽水(50ml)洗滌。將其用Na2SO4干燥，然后濃縮至干，得到0.425g的橙色油狀物。將其溶于t-BuOMe(20ml)，并加入活性炭(0.3g)。將該混合物在室溫下攪拌3小時(shí)，過濾，并蒸發(fā)至干。用此方式得到0.38g的粗產(chǎn)物，其不用進(jìn)一步純化，直接用于下一步。將如上述得到的粗產(chǎn)物(0.38g)溶于EtOH(20ml)中，并向溶液中加入10％鈀/活性炭(50mg)。由此得到的混合物氫化6小時(shí)(2巴的氫氣壓力)。加入另一份Pd(C)(50mg)，并將該混合物在相同條件下氫化18小時(shí)。過濾催化劑，將溶劑蒸發(fā)至干，得到0.375g的粗產(chǎn)物，將其溶于EtOAc(3ml)中，并在室溫下過夜然后放置在冰箱中結(jié)晶6小時(shí)。將產(chǎn)物過濾，并用EtOAc洗滌，真空下干燥。得到0.17g的標(biāo)題化合物，為白色固體。
1H-NMR(δ，ppm，DMSO-d6)10.84(bd，1H)；7.39(d，2H)；7.21(d，2H)；7.12(d，2H)；7.02(d，2H)；5.98(s，1H)；5.49(bd，1H)；4.22(s，2H)；2.24(s，3H)。
方法C 在氬氣下，向中間體23(0.548g)和無水氯化鋰(0.572g)于無水四氫呋喃(15ml)中的混合物加入重蒸的二異丙基胺(0.63ml)，并將該混合物冷卻至-75℃。分批加入n-BuLi(2ml，1.7M的己烷溶液)，并將該混合物在氬氣和-75℃下攪拌1小時(shí)，然后滴加N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(0.225ml)，并將該混合物在-75℃下攪拌4小時(shí)。加入2N HCl(10ml)，并將該混合物在室溫下攪拌0.5小時(shí)，然后加入1N HCl(75ml)和t-BuOMe(75ml)，并將該混合物分配。有機(jī)層用1N HCl(2×75ml)，10％NaHCO3(75ml)，水(75ml)和鹽水(75ml)洗滌。將其用Na2SO4干燥，過濾并蒸發(fā)至干，得到0.62g的淺棕色油狀粗產(chǎn)物，其不用進(jìn)一步純化，直接用于下一步。
將粗產(chǎn)物(0.62g)溶于EtOH(25ml)中，并在氮?dú)庀孪蛟撊芤褐屑尤?0％鈀/活性炭(60mg)。將由此得到的混合物在Parr反應(yīng)釜中氫化8小時(shí)(2巴H2壓力)。加入另一份10％鈀/活性炭(60mg)，并將該混合物在相同條件下氫化14小時(shí)。
將該混合物通過尼龍0.45μm膜過濾，并用2∶1CH2Cl2/MeOH(3×5ml)洗滌。將溶劑除去至干，得到0.61g的粗產(chǎn)物，將其溶于EtOAc(5ml)中。向此溶液中加入1ml己烷，然后將其在室溫下結(jié)晶并在冰箱中放置過夜來結(jié)晶。將得到的固體過濾，并用3∶2己烷/乙酸乙酯混合物(2×4ml)洗滌，真空下干燥，得到0.42g的標(biāo)題化合物，為白色固體。
1H-NMR(δ，ppm，DMSO-d6)10.84(bd，1H)；7.39(d，2H)；7.21(d，2H)；7.12(d，2H)；7.02(d，2H)；5.98(s，1H)；5.49(bd，1H)；4.22(s，2H)；2.24(s，3H)。
方法D 在氬氣下，將中間體23(160mg)于無水四氫呋喃(2ml)中的溶液冷卻至-78℃。滴加n-BuLi(0.44ml，2.5M的己烷溶液)的溶液，并將該混合物在氬氣和-78℃下攪拌30分鐘，然后加入N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(0.056ml)，并攪拌混合物。大約30分鐘后，混合物變?yōu)槌淼哪z，將該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂粮哌_(dá)-50℃，持續(xù)2小時(shí)，以使得該混合物變得流動(dòng)性較好。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?5℃，加入6N HCl(10ml)。將該混合物攪拌2小時(shí)，然后用10％NaHCO3中和(至大約pH 7-8)，并用t-BuOMe萃取3次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無水Na2SO4干燥，過濾并真空下濃縮。殘余物通過硅膠層析純化，使用EtOAc-己烷10∶90至50∶50洗脫，得到45mg(28％)的起始中間體23和121mg(67％)的1-{3-(羥基甲基)-4-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-5-異噁唑基}-2-丙酮，為黃色油狀物。
1H-NMR(δppm，DMSO-d6)7.34(d，2H)；7.22(d，2H)；7.06(d，2H)；7.05(d，2H)；4.72(d，2H)；3.88(s，2H)；2.45(bs，2H)；2.26(s，3H)。
將上述產(chǎn)物(0.114g)溶于EtOH(20ml)中，并向該溶液中加入10％鈀/活性炭(15mg)。將由此得到的混合物在Parr反應(yīng)釜中氫化6小時(shí)(2巴H2壓力)。加入另一份的10％鈀/活性炭(15mg)，并將該混合物在相同條件下氫化16小時(shí)。
將該混合物通過尼龍0.45μm膜過濾。將溶劑除去至干，得到0.1g的粗產(chǎn)物，將其用EtOAc(1ml)研制。過濾得到的固體，真空下干燥，得到0.061g的標(biāo)題化合物，為淺黃色固體(中間體8a)。
1H-NMR(δ，ppm，DMSO-d6)10.97(bd，1H)；7.39(d，2H)；7.21(d，2H)；7.12(d，2H)；7.02(d，2H)；5.98(s，1H)；5.49(bd，1H)；4.22(s，2H)；2.24(s，3H)。
中間體8b
2-(羥基甲基)-6-甲基-3-{4-[3-(三氟甲基)苯基}氧基)苯基]-4(1H)-吡啶酮 向中間體7b(455mg)于乙醇(13mL)中的溶液加入30％氨水溶液(60mL)。將得到的懸浮液置于鋼反應(yīng)器中，并在140℃下加熱。加熱8.5小時(shí)后，將該反應(yīng)器冷卻至室溫過夜。真空下除去有機(jī)溶劑，并將得到水溶液冷凍干燥，得到316mg的棕色固體。將此固體用乙酸乙酯(12mL)洗滌，過濾并真空下濃縮，得到161mg的純化合物，為白色固體。
1H-NMR(δ，ppm，DMSO-d6)10.97(bd，1H)；7.63(t，1H)；7.48(d，1H)；7.33-7.30(m，2H)；7.24(d，2H)；7.06(d，2H)；5.96(s，1H)；5.52(t，1H)；4.22(s，2H)；2.24(s，3H)。
中間體9(J.Am.Chem.Soc.；EN；121；30；1999；7020-7025.)
3-羥基-2，6-雙(羥基甲基)-4H-吡喃-4-酮 在100mL圓底燒瓶中加入曲酸(FLUKA，5g)，1N NaOH(39mL)和H2O(10mL)。將該混合物冷卻(冰/水浴)，并滴加37％甲醛水溶液(ALDRICH，2.9mL)。在室溫下34小時(shí)后，滴加另一份37％甲醛水溶液(ALDRICH，0.5mL)，將該溶液攪拌18小時(shí)。該混合物通過加入濃HCl來酸化，并在真空下將溶劑除去至干，得到粗產(chǎn)物，將其用冷水處理，得到沉淀的固體，將其過濾，并真空干燥。得到3.056g的標(biāo)題化合物，為白色固體。濾液在真空下濃縮，分離第二批固體。得到另一份1.154g的標(biāo)題化合物。
1H-NMR(δ，ppm，CD3OD)6.46(s，1H)；4.61(s，2H)；4.43(s，2H)。
中間體10
3-羥基-6-(羥基甲基)-2-甲基-4H-吡喃-4-酮 在50℃下，向中間體9(6.56g)于水(22.8mL)中的懸浮液中加入鋅粉(PANREAC，4.98g)，并滴加濃HCl(11.43mL)，將該混合物在70-80℃下加熱5小時(shí)。通過趁熱過濾用硅藻土除去過量的鋅，濾餅用冷水洗滌。向該水溶液中加入固體NaCl直到固體分離出來。將濾出的固體真空下干燥，得到3.16g的標(biāo)題化合物。
1H-NMR(δ，ppm，DMSO-d6)8.69(s，1H)；6.26(s，1H)；5.63(t，1H)；4.26(d，2H)；2.26(s，3H)。
中間體11
三氟甲磺酸6-(羥基甲基)-2-甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基酯 向中間體10(180mg)于無水N，N-二甲基甲酰胺(9mL)中的溶液在N2下加入碳酸鉀(ALDRICH，478mg)和N-苯基三氟甲磺酰亞胺(FLUKA，412mg)。在室溫下攪拌0.5小時(shí)后，加入1N NH4Cl，并將該混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用1N NH4Cl(4x)，0.5N NaOH和鹽水洗滌，經(jīng)Mg2SO4干燥，過濾并真空干燥。殘余物通過層析(96％CH2Cl2/MeOH)純化，得到166mg的標(biāo)題化合物，為白色固體。
1H-NMR(δ，ppm，CDCl3)6.57(s，1H)；4.51(d，2H)；2.83(t，1H)；2.42(s，3H)。
中間體12a
6-(羥基甲基)-2-甲基-3-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-4H-吡喃-4-酮 在2-頸圓底燒瓶中加入中間體11(160mg)，無水甲苯(1.7mL)和無水乙醇(0.5mL)。將該得到的溶液通過鼓泡N2來除氧。加入四(三苯基膦)合鈀(0)(ALDRICH，38mg)，接著加入中間體19(215mg)于無水乙醇(4mL)中的溶液和碳酸鈉(235mg)。將該混合物在N2下除氧，并在80℃下加熱4小時(shí)。將該混合物濃縮至干，加入1N NH4Cl和乙酸乙酯，并攪拌10分鐘。水層用乙酸乙酯萃取，合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并真空下濃縮。粗產(chǎn)物通過柱層析(1％，2％甲醇/二氯甲烷)純化，得到202mg的標(biāo)題化合物，為橙色油狀物。
1H-NMR(δ，ppm，CDCl3)7.23-7.19(m，4H)；7.08-7.02(m，4H)；6.49(s，1H)；5.30(s，1H)；4.50(d，2H)；2.46(t，1H)；2.24(s，3H)。
中間體12b
6-(羥基甲基)-2-甲基-3-(4-{[3(三氟甲基)苯基]氧基}苯基)-4H-吡喃-4-酮 中間體12b通過類似于對(duì)于中間體12a所述的方法，使用于甲苯(24mL)中的中間體11(2.3g)，氯化雙(三苯基膦)合鈀(II)(ALDRICH，280mg)作為催化劑，于EtOH(55.86mL)中的中間體20(2.7g)和碳酸鈉(3.38g)來制備。將該混合物在85℃下加熱40分鐘，冷卻，通過硅藻土墊過濾，其用乙酸乙酯洗滌，并蒸發(fā)溶劑。將該粗產(chǎn)物溶于EtOAc中，用1N NH4Cl(1x)，H2O(1x)，飽和NaHCO3(1x)和NaCl(1x)洗滌，干燥(MgSO4)，并在真空下濃縮。通過柱層析(EtOAc-己烷0-100％)純化，得到第一級(jí)分931mg的標(biāo)題化合物，以及不純的樣品，其通過柱層析再純化，得到另一份510mg的標(biāo)題化合物，為黃色固體。
1H-NMR(δ，ppm，CDCl3)7.49-7.33(m，3H)；7.23(m，3H)；7.05(d，2H)；6.53(s，1H)；4.51(s，2H)；2.25(s，3H)。
中間體13a
6-(羥基甲基)-2-甲基-3-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-4(1H)-吡啶酮 將195mg的中間體12a于甲醇(2mL)中的懸浮液倒入配有磁力攪拌的微波管中。加入30％的氨水溶液(3mL)，并將得到的懸浮液在140℃下和微波輻射下加熱30分鐘。冷卻后，粗產(chǎn)物用水稀釋并在真空下過濾。固體用乙腈洗滌，得到92mg的標(biāo)題化合物，為灰白色固體。
1H-NMR(δ，ppm，DMSO-d6)11.09(bd，1H)；7.39(d，2H)；7.19(d，2H)；7.12(d，2H)；7.02(d，2H)；6.07(s，1H)；5.51(bd，1H)；4.33(bd，2H)；2.10(s，3H)。
中間體13b
6-(羥基甲基)-2-甲基-3-(4-{[3-(三氟甲基)苯基]氧基}苯基)-4(1H)-吡啶酮 在攪拌下，向中間體12b(200mg)于甲醇(1.5mL)中的溶液中加入商業(yè)的30％氨水溶液(3.5mL)。將該反應(yīng)在140℃和微波輻射下進(jìn)行30分鐘。冷卻后，粗產(chǎn)物用水稀釋并在真空下過濾。固體用乙腈洗滌，得到104mg的標(biāo)題化合物，為灰白色固體。
1H-NMR(δppm，DMSO-d6)11.08(bs，1H)；7.62(m，1H)；7.48(d，1H)；7.32(m，2H)；7.21(d，2H)；7.06(d，2H)；6.07(m，1H)；5.5(m，1H)；4.32(s，2H)；2.09(s，3H)。
中間體14
5-氯-6-甲基-4-氧代-3-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-1，4-二氫-2-吡啶甲醛 向?qū)嵤├?(0.506g)于二氯甲烷(5mL)中的溶液中滴加DMSO(3.49mL)和三乙胺(1.26mL)。將該混合物冷卻至0℃，并向其中少量分批加入三氧化硫-吡啶絡(luò)合物(0.947g)。將反應(yīng)溫度溫?zé)嶂潦覝?，混合物攪?1小時(shí)。將該混合物用二氯甲烷稀釋，并用水(3×40mL)洗滌。有機(jī)相用無水Na2SO4干燥，并在真空下濃縮，得到棕色油狀物，將其通過硅膠柱層析純化，用二氯甲烷作為第一洗脫液，然后用混合物甲醇/二氯甲烷v/v 1∶600，1∶500，1∶400和1∶200洗脫。蒸發(fā)相應(yīng)級(jí)分的溶劑得到總量為424mg的標(biāo)題化合物。
1H NMR(δ，ppm，CDCl3)9.66(s，1H)，9.03(bs，1H)，7.41(d，2H)，7.23(d，2H)，7.12-7.06(m，4H)，2.60(s，3H)；[ES MS]m/z 424(MH+)。
中間體15
3-氯-6-甲基-4-氧代-5-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-1，4-二氫-2-吡啶甲醛 向?qū)嵤├?(0.422g)于二氯甲烷(4.25mL)中的溶液中在氬氣下加入無水DMSO(3mL)。將得到的溶液在冰-水浴中冷卻，加入三乙胺(1mL)，接著加入三氧化硫-吡啶絡(luò)合物(0.788g)。將該混合物溫?zé)嶂潦覝剡^夜。攪拌20小時(shí)后，混合物用水(5x)洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，并濃縮至干。得到380mg的標(biāo)題化合物，為黃色粉末。
1H-NMR(δ，ppm，CDCl3)10.33(s，1H)；7.22(m，4H)；7.06(m，4H)；2.30(s，3H)。
中間體16
(2E)-3-{5-氯-6-甲基-4-氧代-3-[4-({4-[三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-1，4-二氫-2-吡啶基}-2-丙烯酸乙基酯 向中間體14(0.154g)于二氯甲烷(7.20mL)中的溶液在氬氣下加入(乙氧羰基亞甲基)-三苯基膦((carbethoxymethlene)-triphenylphosphorane)(0.190g)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，然后用水(3×5mL)洗滌。有機(jī)層用無水Na2SO4干燥，并在真空下濃縮，得到反/順α，β-不飽和酯混合物。粗產(chǎn)物通過硅膠柱層析(洗脫液CH3OH/CH2Cl2 0-5％)純化。得到0.058g的標(biāo)題產(chǎn)物，為黃色固體。
1H NMR(δ，ppm，CDCl3)13.41(s，1H)，7.26(d，2H)，7.20(d，2H)，7.08(d，2H)，7.03(d，2H)，6.72(d，1H)，6.00(d，1H)，4.23(q，2H)，2.56(s，3H)，1.37(t，3H)。
中間體17
1-溴-4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯 將4-溴苯酚(0.173g)于4mL的1-甲基-2-吡咯烷酮中的溶液在氬氣下用4-(三氟甲氧基)碘苯(0.313mL)，2，2，6，6-四甲基庚烷-3，5-二酮(0.046mL)和碳酸銫(0.652g)處理。將得到的漿液通過鼓泡氬氣15分鐘來除氣，并加入氯化銅(I)(0.099g)。將該反應(yīng)混合物通過鼓泡氬氣15分鐘來除氣，然后在氬氣下加熱至100℃，持續(xù)5小時(shí)。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并滴加30mL的叔丁基-甲基-醚。過濾該漿液，固體用叔丁基-甲基-醚(3×20mL)洗滌。合并的濾液依次用1N NaOH(50mL)，水(50mL)，2N HCl(50mL)，1N HCl(50mL)，水(50mL)和鹽水(50mL)洗滌。將得到的有機(jī)層用Na2SO4干燥，并濃縮，得到粗產(chǎn)物，其通過硅膠柱層析純化，使用己烷洗脫，得到0.15g的標(biāo)題化合物，為無色液體。
1H-NMR(δ，ppm，CDCl3)7.45(m，2H)；7.20(m，2H)；6.99(m，2H)；6.90(m，2H) 中間體18
1-[(4-溴苯基)氧基]-3-(三氟甲基)苯 在氬氣下，在2-頸圓底燒瓶中加入4-溴苯酚(ALDRICH，500mg)和1-甲基-2-吡咯烷酮(ALDRICH，12mL)。然后加入3-碘三氟甲基苯(3-dodobenzyltrifluoride)(ALDRICH，1.18g)，2，2，6，6-四甲基-3，5-庚烷二酮(ALDRICH，0.133mL)和粉末碳酸銫(ALDRICH，1.88g)，并將該混合物在氬氣下攪拌15分鐘。最后，加入氯化銅(I)(ALDRICH，143mg)，并將該混合物在氬氣下攪拌20分鐘。將得到的混合物在105℃下加熱3.5小時(shí)，并在室溫下冷卻。加入叔丁基-甲基醚(60mL)，攪拌該混合物15分鐘，過濾除去固體(銅鹽)，并用叔丁基-甲基-醚洗滌。濾液用2N HCl(70mL)，1N HCl(70mL)，2N NaOH(2×60mL)和鹽水(70mL)洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過濾，并在真空下蒸發(fā)，得到964mg的標(biāo)題化合物。
1H-NMR(δ，ppm，CDCl3)7.48(d，2H)；7.44(d，1H)；7.36(d，1H)；7.24(s，1H)；7.15(m，2H)；6.91(d，2H)。
中間體19
[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]硼酸 在-75℃下，向中間體17(4.53g)于無水四氫呋喃(100mL)中的溶液中加入硼酸三異丙基酯(4.1mL)。將該混合物冷卻至-78℃，向其中滴加1.47M正丁基鋰的己烷溶液(11.1mL)。將該混合物在-75℃下攪拌3小時(shí)，然后通過加入6N HCl(12mL)猝滅，并在丙酮和固體二氧化碳浴中攪拌過夜，期間反應(yīng)溫?zé)嶂潦覝?。將混合物在乙酸乙?200mL)和水(200mL)之間分配，分離各層，有機(jī)層用水(2×200mL)和鹽水(200mL)洗滌，然后經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并濃縮至干。得到的固體用2N NaOH(60mL)處理，并攪拌幾分鐘，用水(250mL)稀釋，以溶解得到的白色固體沉淀，溶液通過0.45μm尼龍濾膜過濾。濾液用戊烷(2×200mL)洗滌，水層用6N HCl酸化至pH 1.5，濾除沉淀，用水洗滌，真空干燥，得到3.23g的標(biāo)題化合物，為淺黃色固體。
1H-NMR(δ，ppm，CDCl3)8.01(bs，2H)；7.85-7.78(m，2H)；7.43-7.33(m，2H)；7.15-7.07(m，2H)；7.02-6.94(m，2H)。
中間體20
(4-{[3-(三氟甲基)苯基]氧基}苯基)硼酸 在氬氣下，在500mL圓底燒瓶中加入中間體18(17.576g)于無水四氫呋喃(100mL)中的溶液，另外100mL的四氫呋喃和硼酸三異丙基酯(ALDRICH，16.63mL)。將混合物在-78℃下冷卻，并滴加1.65M正丁基鋰(ALDRICH，40.3mL)。將該溶液在-78℃下攪拌4小時(shí)45分鐘，然后滴加6N HCl(55mL)，并將該混合物在室溫下攪拌過夜。在減壓下除去四氫呋喃，并加入叔丁基-甲基-醚(500mL)和水(400mL)。有機(jī)層用Na2S2O5(400mL)，H2O(400mL)和鹽水(400mL)洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并真空蒸發(fā)。向該得到的粗產(chǎn)物加入2N NaOH(325mL)以形成鈉鹽，并加入水(600mL)以將其溶解。該水溶液用戊烷(2×500mL)萃取以除去一些雜質(zhì)，通過加入2N HCl(325mL，pH＝1)將其酸化。過濾白色沉淀，用水洗滌，并真空干燥，得到11.0483g的標(biāo)題化合物，為白色固體。
1H-NMR(δ，ppm，DMSO-d6)8.04(s，2H)；7.83(d，2H)；7.62(m，1H)；7.49(d，1H)；7.30(m，2H)；7.02(d，2H)。
中間體21
(5-甲基-3-異噁唑基)甲醇 在冰浴和氮?dú)庀?，?-甲基-3-異噁唑羧酸甲基酯(9g，從ABCR得到)于無水乙醇(90ml)中的懸浮液中分批加入硼氫化鈉(3.6g)，并將混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。將該混合物用冰浴冷卻，并通過加入1N HCl(120ml)小心地水解，直到pH＜7?；旌衔镌谡婵障聺饪s以除去乙醇，并將得到水溶液用NaOH水溶液(首先5N，然后1N)中和，直到pH 6-7。該水溶液用DCM(6×50ml)萃取，合并的有機(jī)層用鹽水(50ml)洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮至干，得到標(biāo)題化合物(6g)，為淺黃色油狀物。將水層再用DCM(3×50ml)重新萃取，將新合并的有機(jī)層再經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，溶劑蒸發(fā)至干。得到另一份標(biāo)題化合物(1g)，為淺黃色油狀物。將兩份產(chǎn)物(7g，總共)一起用于下一步。
1H-NMR(δ，ppm，CDCl3)6.03(s，1H)；4.70(s，2H)；2.42(s，3H)。
中間體22
(4-碘-5-甲基-3-異噁唑基)甲醇 方法A 在室溫下，向三氟乙酸銀(13.25g)于無水DCM(175ml)中的懸浮液中加入中間體21(6.25g)于無水DCM(25ml)中的溶液。攪拌30分鐘后，分批加入碘(15.25g)，并將該混合物在室溫下攪拌30分鐘，然后在氮?dú)庀录訜嶂?8℃，持續(xù)3小時(shí)。再加入一定量的三氟乙酸銀(1.3g)和碘(1.5g)，并繼續(xù)加熱2小時(shí)，然后在室溫下攪拌過夜。將該混合物用DCM(60ml)稀釋，并過濾，用DCM(3×30ml)洗滌。得到的濾液和洗滌液依次用水(200ml)，10％Na2S2O5(200ml)，10％NaHCO3(200ml)，水(200ml)和鹽水(200ml)洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，并濃縮至干，得到14.55g的油狀物質(zhì)，其變?yōu)楣腆w。將其用庚烷(8ml)研制，并過濾得到的固體，真空干燥。以此方法得到第一批所需化合物(6.2g)，為白色固體。將合并的有機(jī)洗滌液蒸發(fā)至干，得到7.5g的油狀殘余物，將其通過短硅膠柱，用己烷和己烷/EtOAc 4∶1洗脫。蒸發(fā)合適級(jí)分的溶劑，得到油狀物質(zhì)，將其溶于MeOH(15ml)中，并用1N HCl(10ml)和10％Na2S2O5(10ml)處理30分鐘。將溶劑除去至干，殘余物在EtOAc(150ml)和1N HCl(100ml)之間分配。將有機(jī)層依次用10％Na2S2O5(100ml)，飽和NaHCO3(100ml)和鹽水(100ml)洗滌，然后經(jīng)Na2SO4干燥，并濃縮至干，得到4.75g的淺黃色固體，其用庚烷(6ml)研制，過濾，用庚烷(4ml)洗滌，真空干燥，得到第二批所需化合物(4.5g)，為白色固體。
方法B 向ICl(6.3g)于水(75ml)中的懸浮液中加入羥基甲基-甲基異噁唑(3.4g)，接著加入TFA(11.1ml)。將該混合物在氮?dú)夂?5℃下加熱。加熱2小時(shí)后，再加入ICl(1g)，并將該混合物加熱2.5小時(shí)。將該混合物冷卻至室溫，然后用水(150ml)稀釋，并用10％Na2S2O5(25ml)處理。將該混合物通過分批加入固體Na2CO3(15g)調(diào)節(jié)為堿性(pH＝7.5-8.0)，然后用二氯甲烷(1×100ml+2×75ml)萃取。合并的有機(jī)層用水(50ml)和鹽水(50ml)洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，并濃縮至干，得到6.58g的標(biāo)題化合物，為淺白色固體(產(chǎn)率91％)。
1H-NMR(δ，ppm，CDCl3)4.68(d，2H)；2.47(s，3H)；2.12(t，1H)。
中間體23
{5-甲基-4-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-3-異噁唑基}甲醇 將中間體22(5.976g)，中間體19(7.97g)和10％鈀/活性炭(1.25g)于乙醇(150ml)中的混合物通過鼓泡氮?dú)?0分鐘來除氧，然后向其中滴加10％NaHCO3溶液(75ml)。將該混合物在氮?dú)庀录訜嶂?5℃持續(xù)5小時(shí)，然后冷卻至室溫并攪拌過夜。將該混合物通過尼龍濾膜(0.45um)過濾，且濾餅用DCM/MeOH 2∶1(3×75ml)洗滌。加入1N NaOH(15ml)，并在減壓下除去有機(jī)溶劑。出現(xiàn)黑色固體，其通過過濾除去。濾餅用一些DCM/MeOH 2∶1混合物洗滌。加入水(60ml)，并持續(xù)除去有機(jī)溶劑，得到含有固體沉淀的含水懸浮液。將固體過濾，然后用1N NaOH(3×50ml)和水(4×50ml)洗滌。一旦將其在真空下蒸干后，將該固體用庚烷(3×50ml)洗滌，并最終干燥。得到8.828g的標(biāo)題化合物，為白色固體。
1H-NMR(δ，ppm，CDCl3)7.37(m，2H)；7.25(m，2H)；7.06(m，4H)；4.72(d，2H)；2.46(s，3H)；2.11(t，1H)。
實(shí)施例1
3-氯-6-(羥基甲基)-2-甲基-5-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-4(1H)-吡啶酮 在500mL圓底燒瓶中溶解中間體8a(5.25g)于二氯甲烷/甲醇v/v 2∶1(135mL)中。將該混合物在0℃和氬氣下攪拌并冷卻，30分鐘后，加入三氯異氰尿酸(ALDRICH，1.26g)。將該溶液在氮?dú)庀聰嚢?0分鐘，過濾并用二氯甲烷/甲醇v/v 2∶1(60mL)洗滌。將濾液蒸發(fā)至干，加入10％碳酸鈉(30mL)，并攪拌混合物。過濾固體，并用H2O(100mL)，10％Na2CO3(2×30mL)，H2O(2×50mL)和乙腈(2×15mL和1×20mL)洗滌，真空干燥，得到4.66g的標(biāo)題化合物，為灰白色粉末。
1H-NMR δppm，DMSO-d611.50(bd，1H)；7.40(d，2H)；7.24(d，2H)；7.14(d，2H)；7.04(d，2H)；5.58(bd，1H)；4.23(s，2H)；2.44(s，3H)。[ES MS]m/z 426(MH+)。
實(shí)施例2
3-氯-6-(羥基甲基)-2-甲基-5-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-4(1H)-吡啶酮 在25mL圓底燒瓶中溶解中間體8b(155mg)于二氯甲烷/甲醇v/v 2∶1(9mL)中。將該混合物在0℃和氬氣下冷卻，并加入三氯異氰尿酸(ALDRICH，40mg)。將該溶液在氮?dú)夂?℃下攪拌55分鐘，過濾并用二氯甲烷/甲醇v/v 2∶1(13mL)洗滌。將濾液蒸發(fā)至干，加入10％碳酸鈉，并攪拌混合物。過濾固體，并用10％Na2CO3(2x)和乙腈(6mL)洗滌，真空干燥，得到130mg的標(biāo)題化合物，為白色固體。
1H-NMR(δ，ppm，DMSO-d6)11.50(bd，1H)；7.64(t，1H)；7.50(d，1H)；7.34-7.32(m，2H)；7.26(d，2H)；7.08(d，2H)；5.59(bd，1H)；4.243(s，2H)；2.45(s，3H)。
實(shí)施例3
3-氯-2-(羥基甲基)-6-甲基-5-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-4(1H)-吡啶酮 在0℃和氮?dú)庀?，向中間體13a(80mg)于二氯甲烷/甲醇v/v 2∶1(5mL)中的溶液中加入三氯異氰尿酸(ALDRICH，19.5mg)。將該溶液在氮?dú)夂?℃下攪拌2小時(shí)，過濾并用二氯甲烷/甲醇v/v 2∶1(60mL)洗滌。將濾液蒸發(fā)至干，并通過層析純化(3，5和10％MeOH/CH2Cl2)，得到55.1mg的標(biāo)題化合物，為白色固體。
1H-NMR(δ，ppm，DMSO-d6)11.30(bd，1H)；7.40(d，2H)；7.21(d，2H)；7.14(d，2H)；7.04(d，2H)；5.89(bd，1H)；4.58(s，2H)；2.16(s，3H)。
實(shí)施例4
3-氯-2-(羥基甲基)-6-甲基-5-(4-{[3-(三氟甲基)苯基]氧基}苯基)-4(1H)-吡啶酮 在0℃下，向中間體13b(214mg)于二氯甲烷/甲醇v/v 2∶1中的溶液中加入三氯異氰尿酸(trichloroisocyanuric acid)(53mg)。將該混合物在此溫度下攪拌40分鐘。過濾粗產(chǎn)物，濃縮，并將得到的混合物通過柱層析(二氯甲烷/甲醇5％)純化。蒸發(fā)合適級(jí)分的溶劑，得到固體，其用乙腈研制，過濾，然后真空干燥，得到標(biāo)題化合物(85mg)，為白色固體。
1H-NMR(δ，ppm，DMSO-d6)11.31(bs，1H)；7.64(m，1H)；7.50(d，1H)；7.34(m，2H)；7.21(d，2H)；7.08(d，2H)；5.89(m，1H)；4.58(m，2H)；2.16(s，3H)。ES MS m/z 410(MH+)。
實(shí)施例5
5-氯-6-甲基-4-氧代-3-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-1，4-二氫-2-吡啶甲醛肟 在氬氣下，將中間體14(0.204g)和羥胺鹽酸鹽(0.167g)在乙醇(3.37mL)中混合，然后加入吡啶(0.167mL)，并加熱回流(75-80℃)1小時(shí)。將該反應(yīng)混合物在真空下濃縮，得到米色粉末，其用水研制并過濾。將得到的固體用水洗滌，然后真空下干燥，得到0.166g的標(biāo)題化合物，為白色粉末。
1H NMR(δ，ppm，CD3OD)7.66(s，1H)，7.31-7.25(m，4H)，7.15(d，2H)，7.10(d，2H)，2.57(s，3H)。[ES MS]m/z 439(MH+)。
實(shí)施例6
5-氯-6-甲基-4-氧代-3-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-1，4-二氫-2-吡啶甲醛-O-甲基肟(立體化學(xué)未知) 在氬氣下，將中間體14(0.100g)和甲氧基胺鹽酸鹽(0.079g)在乙醇(1.65mL)中混合，然后加入吡啶(0.079mL)，并在75℃下加熱2小時(shí)。將該反應(yīng)混合物在真空下濃縮，得到糖漿狀物，將其溶于甲醇。向此溶液中加入二氯甲烷/己烷的2∶1混合物。粗產(chǎn)物在真空下濃縮，得到黃色固體，將其過濾，并用水洗滌，然后真空下干燥，得到0.088g的標(biāo)題化合物，為白色粉末。
1H NMR(δ，ppm，CD3OD)7.67(s，1H)，7.31-7.24(m，4H)，7.15-7.07(m，4H)，4.02(s，3H)，2.60(s，3H)。[ES MS]m/z 453(MH+) 實(shí)施例7
3-氯-6-甲基-4-氧代-5-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-1，4-二氫-2-吡啶甲醛肟(立體化學(xué)未知) 在惰性氣氛下，將中間體15溶于EtOH(2.8mL)中。然后加入羥胺鹽酸鹽(139mg)和吡啶(0.139mL)，并將該混合物加熱回流大約2小時(shí)。將混合物冷卻，并濃縮至干。將得到的粗產(chǎn)物用水稀釋，并用水洗滌幾次。然后將得到的固體用乙腈研制2小時(shí)，然后過濾，用乙腈洗滌，真空干燥，得到標(biāo)題化合物(50mg)，為灰白色固體。
1H-NMR(δ，ppm，DMSO-d6)12.35(s，1H)；11.52(s，1H)；8.32(s，1H)；7.40(d，2H)；7.20(d，2H)；7.15(d，2H)；7.05(d，2H)；2.17(s，3H)。ES MS m/z 439(MH+)。
實(shí)施例8
3-氯-6-(3-羥基丙基)-2-甲基-5-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-4(1H)-吡啶酮 在0℃和氬氣下，向中間體16(0.113g)于THF(1.50mL)中的溶液中緩慢加入1.5M二異丁基氫化鋁的己烷溶液(DIBAH，0.89mL)。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢柽^夜。22小時(shí)后，將混合物用水猝滅，并用乙酸乙酯萃取(3×20mL)。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無水Na2SO4干燥，并在減壓下濃縮，得到棕色油狀粗產(chǎn)物，其通過硅膠柱層析純化(洗脫液二氯甲烷/甲醇，0-5％)。得到0.032g的標(biāo)題產(chǎn)物和部分氫化的3-羥基-1-丙烯基衍生物。為了將反應(yīng)完全，在N2下，向此混合物于乙酸乙酯(2.5mL)中的溶液中加入10％w/w鈀/活性炭(0.008g)，并將該溶液與1.38×105Pa(20psi)的氫氣反應(yīng)21小時(shí)。過濾除去催化劑，隨后用乙酸乙酯(2×5mL)和甲醇(1×5mL)洗滌，將溶劑在真空下蒸發(fā)至干，得到黑色油狀物，其通過硅膠柱層析純化(洗脫液甲醇/二氯甲烷0-5％和甲醇/乙醚0-5％)。得到0.013g的純標(biāo)題產(chǎn)物，為黃色固體。
1H NMR δ，ppm，DMSO)7.40(d，2H)，7.17(d，2H)，7.14(d，2H)，7.05(d，2H)，3.26-3.24(m，2H)，2.38(s，5H)，1.63-1.53(m，2H)。[ES MS]m/z 454(MH+)。
生物測(cè)試 本發(fā)明的化合物可以用幾種生物學(xué)測(cè)試中的一種來測(cè)試，從而來確定具有給定藥理學(xué)作用所需的本發(fā)明的化合物的濃度。
體外抗鐮狀瘧原蟲的抗-瘧疾活性 IC50測(cè)試/[3H]-次黃嘌呤測(cè)試 I.材料 寄生蟲 鐮狀瘧原蟲(Plasmodium falciparum)菌株 培養(yǎng)基 該培養(yǎng)基包含RPMI 1640，其含有25mM HEPES，碳酸氫鈉和谷氨酰胺(GIBCOTM目錄號(hào)52400)，補(bǔ)充有10％的混合的人血清AB(Irvine Scientific，目錄號(hào)5009)和HT補(bǔ)充物(0.15mM次黃嘌呤和24μM胸腺嘧啶脫氧核苷)，(GIBCOTM目錄號(hào)41065)。將人血清在56℃下去補(bǔ)體(decomplemented)30分鐘，等分并在-20℃下冰凍儲(chǔ)存，直到使用該培養(yǎng)基。
該培養(yǎng)基(“完全培養(yǎng)基”)通常在使用前現(xiàn)制并預(yù)熱至37℃。
紅細(xì)胞 紅細(xì)胞O+儲(chǔ)備懸浮液從由不完全血供體(donation)中得到的全血袋制備，其由Spanish Red Cross提供(采樣后＜25天)。將此“全血”等分并在4℃下儲(chǔ)存。
為了制備用于測(cè)試的紅細(xì)胞，將此全血離心并用不含血清的RPMI洗滌3次。除去上面含有白細(xì)胞的相。將經(jīng)洗滌的紅細(xì)胞以于完全培養(yǎng)基中的50％懸浮液保存。將該制備的細(xì)胞在4℃下儲(chǔ)存，并在制備后至多4天內(nèi)的任意時(shí)間在測(cè)試中使用。
II.化合物 化合物制備 在測(cè)試當(dāng)天，將測(cè)試化合物以2mg/ml溶于100％DMSO中。如果需要，通過輕微加熱(將該混合物在＜37℃的溫度下加熱)和超聲處理(超聲浴)使得完全溶解。
在將測(cè)試化合物加至寄生蟲前，將化合物溶液中的DMSO的百分比通過進(jìn)一步用如上對(duì)于完全培養(yǎng)基描述的相同的方法制備的培養(yǎng)基稀釋來降低，只不過該培養(yǎng)基不含次黃嘌呤。在測(cè)試板中的DMSO的終濃度不允許超過0.2％，從而其不會(huì)對(duì)寄生蟲的發(fā)育產(chǎn)生任何可檢測(cè)出的不需要的作用。為了確定IC50，在恒量DMSO的存在下，在完全培養(yǎng)基中制備10個(gè)系列的2-倍稀釋的稀釋液。對(duì)于在100％DMSO儲(chǔ)備溶液中的任何明顯的不溶或在測(cè)試培養(yǎng)基中這些溶液稀釋時(shí)的沉淀現(xiàn)象進(jìn)行記錄。
III.鐮狀瘧原蟲(Plasmodium falciparum)培養(yǎng)物(寄生蟲) 使用自Trager和Jensen(1)和Traeger(2)方法的改進(jìn)方法，以在連續(xù)培養(yǎng)物中的5％的血細(xì)胞比容，將鐮狀瘧原蟲菌株保存在完全培養(yǎng)基中。
該寄生蟲血癥通過用光學(xué)顯微鏡來計(jì)數(shù)寄生的紅細(xì)胞的百分比來計(jì)算。每天制備來自各個(gè)培養(yǎng)瓶的血液的薄膜，與甲醇混合并在于緩沖的水(pH 7.2)中的10％的Giemsa(Merck，目錄號(hào)1.09204)中染色10分鐘。使用配有100X浸油物鏡(immersion oil objective)的光學(xué)顯微鏡(Nikon，Eclipse E200)觀察并計(jì)數(shù)該玻璃載玻片。
使該培養(yǎng)物保持在5％的血細(xì)胞比容，并每天更換培養(yǎng)基，當(dāng)寄生蟲血癥已經(jīng)到達(dá)約5％時(shí)，將其稀釋。該寄生蟲種群是不同步的(asynchronous)，由穩(wěn)定比例

的幼原蟲(環(huán)狀)所組成，并顯示每天3至3.5倍于初始寄生蟲數(shù)量的有規(guī)律的生長(zhǎng)速率。
在37℃于低氧氣氛(5％CO2，5％O2，95％N2)中于培養(yǎng)瓶(斜頸，Corning)中完成生長(zhǎng)。
IV.IC50測(cè)試 [3H]次黃嘌呤摻入測(cè)試使用Desjardins等人(3)方法的改進(jìn)方法來進(jìn)行。該測(cè)試在96孔平底微量板中進(jìn)行。
1.測(cè)試化合物的系列稀釋液(50μl，5X溶液/孔)以一式兩份存放。在此測(cè)試中測(cè)試本發(fā)明的化合物。對(duì)于各個(gè)測(cè)試，使用氯喹和阿托伐醌作為對(duì)照化合物。
2.制備接種物，其為以2.5％的血細(xì)胞比容和0.5％的寄生蟲血癥的寄生感染的紅細(xì)胞(PRBC)在培養(yǎng)基中的懸浮液，該培養(yǎng)基以上述對(duì)于完全培養(yǎng)基描述的相同的方法制備，但其不含次黃嘌呤。
3.以1μCi/ml的濃度(等于0.25μCi/孔)，將[3H]-次黃嘌呤(AmershamBiosciences，目錄號(hào)TRK74)當(dāng)場(chǎng)(extemporaneously)加入至接種物懸浮液中。將200μl得到的懸浮液分配至每個(gè)孔中(除了下述的對(duì)照孔H12)，使得最終體積250μl/孔，2％的血細(xì)胞比容和0.5％的寄生蟲血癥/孔。
4.在各個(gè)板中，保留2行作為對(duì)照孔 ·行11陽(yáng)性對(duì)照孔PRBCs含有0.2％DMSO-(i)為了確定DMSO溶劑對(duì)寄生蟲生長(zhǎng)的作用(在0.2％的終濃度下)和(ii)為了與用測(cè)試化合物處理的培養(yǎng)物進(jìn)行比較。
·行12(包括孔A12-H12) A12-D12-背景值孔未感染的RBCs-空白對(duì)照以從沒有寄生蟲的RBCs中獲得背景讀數(shù)。
E12-G12-溶劑作用孔PRBCs不含DMSO-通過比較這些孔與欄11行孔，以確定DMSO溶劑對(duì)PRBCs的作用。
H12-無放射性孔PRBCs含有冷的次黃嘌呤-(i)為了制備薄的血膜來通過顯微鏡確定培育后的寄生蟲血癥值，和(ii)為了在測(cè)試期間確保寄生蟲已經(jīng)完全生長(zhǎng)。(如上所述制備200μl的接種物懸浮液(2和3項(xiàng))但含有非-氘代的次黃嘌呤，而不是[3H]-次黃嘌呤，然后加入此孔以使終體積為250μl)。
5.將板在37℃下在低氧氛中培育48小時(shí)。在測(cè)試的終點(diǎn)，用無-放射性樣品(孔H12)制備薄膜，用于寄生蟲的發(fā)育的目視對(duì)照。通過在-80℃下將板冷凍過夜來終止結(jié)合(incorporation)。
6.生長(zhǎng)通過測(cè)量[3H]-次黃嘌呤向寄生蟲的核酸的結(jié)合水平來定量。將板解凍后，孔的內(nèi)容物在玻璃纖維過濾器(Wallac，目錄號(hào)1450-421)上使用半自動(dòng)細(xì)胞收獲儀(Harvester 96，TOMTEC)來收獲。干燥過濾器并用Melt-on閃爍器(

A，PerkinElmer目錄號(hào)1450-441)處理。放射性的結(jié)合使用β-計(jì)數(shù)器(Wallac Microbeta，PerkinElmer)來測(cè)量。
將該測(cè)試獨(dú)立地重復(fù)至少3次。
V.數(shù)據(jù)分析 各個(gè)孔的值通過從絕對(duì)值中減去背景值來校正。對(duì)于各個(gè)板的背景值以未感染的對(duì)照孔cpm的平均值來計(jì)算。
對(duì)于給定的測(cè)試化合物的各個(gè)濃度，計(jì)算一式兩份樣品的平均值。
對(duì)于各個(gè)測(cè)試化合物的各個(gè)濃度，通過與從含有PRBCs的對(duì)照孔得到的值比較，其用DMSO稀釋以達(dá)到相同的孔體積但是不存在測(cè)試化合物，然后計(jì)算抑制的百分比。在此使用的對(duì)照孔為上述的11行孔(取所有的11行孔的平均值)。
使用Excel和GraphPad Prism 3.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
結(jié)果表示為在不同天進(jìn)行的至少3個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差。
VI.參考文獻(xiàn) 1.Trager W，Jensen JB.Human malaria parasite in continuous culture.Science.1976Aug 20；193(4254)673-5。
2.Trager W.Cultivation of malaria parasites.Methods Cell Biol.1994；457-26。
3.Desjardins RE，Canfield CJ，Haynes JD，Chulay JD.Quantitativeassessment of antimalarial activity in vitro by a semiautomated microdilutiontechnique.Antimicrob Agents Chemother 1979Dec；16(6)710-8。
化合物溶解度測(cè)定 I.材料 化合物 需要3mg固體化合物，LC-MS純度≥95％。將此量的化合物分在3個(gè)不同的玻璃瓶(每個(gè)體積為1.8ml)中，每個(gè)瓶中放置1mg化合物。
溶劑和緩沖液 使用HPLC級(jí)的有機(jī)溶劑。使用超純水(Milli-Q級(jí))。緩沖液使用超純水并使用0.45μ的尼龍過濾器過濾來制備。在此測(cè)試中使用的各個(gè)溶劑的組成在下面(部分III)描述。
II.方法 1.對(duì)于總(gross)溶解度測(cè)定的方法 a)使用數(shù)字移液管(Eppendorf Research pro)向各個(gè)小瓶中加入100μl的溶劑。
b)隨后將該混合物渦旋1分鐘并超聲5分鐘。
c)重復(fù)步驟a)和b)直到在每個(gè)小瓶中體積達(dá)到終體積1ml為止。
d)使用顯微鏡檢測(cè)各個(gè)小瓶中的樣品。
e)以<所有的樣品都已溶解后的最終濃度并>最后一次添加溶劑前的濃度，來計(jì)算化合物在各個(gè)樣品中的溶解度。
f)計(jì)算化合物的溶解度為3小瓶樣品的平均值。
2.測(cè)定平衡溶解度(假定不用考慮在所需溶劑中的化學(xué)穩(wěn)定性問題)。
對(duì)于如上所述制備的3小瓶樣品的每一個(gè)，其中該量的化合物完全溶解，隨后進(jìn)行如下步驟 a)向小瓶中加入少量(大約0.1mg)的另外的固體化合物，以在以不溶固體形式的混合物中維持化合物的過量。
b)將該樣品磁力攪拌24小時(shí)。如果需要，再加入另外的固體化合物(0.1mg)以保持其過量，然后再攪拌該樣品。
c)然后將該樣品過濾(Millipore Milex filters nylon 0.2um)，并取出三等份(從3小瓶中各自取出1份)，并通過LC-MS分析。
d)使用pH-計(jì)(WTW pH330i和pH-electrode Sentix 41)測(cè)量各個(gè)樣品最終溶液的pH。
3.用于定量分析的LC-MS測(cè)試 所有的過濾的等分樣品通過LC-MS分析。分析使用Luna 5μC18(2)柱4.6×150mm，使用HP1100HPLC儀結(jié)合Waters ZMD-2000MS光譜儀來進(jìn)行。如上所制備的最終樣品的濃度由參比校正曲線的濃度來計(jì)算，該校正曲線是從研究化合物在DMSO(Aldrich目錄號(hào)27685-5)儲(chǔ)備溶液中的2mM溶液的系列稀釋得到的。
4.數(shù)據(jù)分析 所有的LC-MS數(shù)據(jù)分析是使用MassLynx 3.4軟件來進(jìn)行的。使用Microsoft Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)和圖解分析。各個(gè)化合物的濃度(μM)和溶解度(μg/ml)使用樣品的峰面積和校正曲線的峰面積來計(jì)算。
III.在這些測(cè)試中使用的溶劑的組成 A)FaSSIF為模擬腸液禁食狀態(tài)(Fasted State of the Intestinal Fluid)的溶劑。
(FaSSIFFasted State Simulated Intestinal Fluid)。其組成列于下表。
FaSSIF的組成和在FaSSIF中使用的pH 6.8緩沖液的組成
FaSSIF制備方法 1.制備1L pH 6.8的緩沖溶液 1.a.將3.947g磷酸鉀和16.401g氯化鉀溶于大約900ml水中。
1.b.在磁力攪拌下，通過緩慢添加0.1N氫氧化鈉(Scharlau SO0441010C)，將pH調(diào)節(jié)至6.8。
1.c 將該混合物用水稀釋至體積為1000ml。
2.制備100ml FaSSIF 2.a.將269mg NaTaurochol.(Aldrich T-4009)溶于大約80ml pH 6.8的緩沖液中。
2.b.將114mg卵磷脂(Sigma P-7318)溶于該NaTaurochol/緩沖溶液中(其在充滿氮?dú)獾氖痔紫?golve bag)中進(jìn)行)。
2.c.將得到的混合物再用pH 6.8的緩沖液稀釋至體積為100ml。
2.d.將最終的溶液用氮?dú)饣蛄硗獾亩栊詺怏w層覆蓋。燒瓶用封口膜密封并在4℃下儲(chǔ)存。
B)FeSSIF為模擬腸液的供給狀態(tài)(Fed State of the Intestinal Fluid)的溶劑。
(FeS SIFFed State Simulated Intestinal Fluid)。其組成列于下表。
FeSSIF的組成和在FeSSIF中使用的pH 5.0緩沖液的組成
參考Galia，Nicolaides，Horter，Lobenberg，Reppas，和Dressman-PharmaceuticalResearch，Vol.15，No.5，1998 FeSSIF制備方法 1.制備1L pH 5的緩沖溶液 1.a.將15.2g氯化鉀和8.25ml冰乙酸溶于大約900ml水中。
1.b.在磁力攪拌下，通過緩慢添加0.1N NaOH(Scharlau SO0441010C)，將pH調(diào)節(jié)至5。
1.c 將混合物用水稀釋至體積為1000ml。
2.制備100mL FeSSIF 2.a.將806.5mg NaTaurochol(Aldrich T-4009)溶于80ml的pH 5緩沖液中。
2.b.將288mg卵磷脂(Sigma P-7318)溶于該NaTaurochol/緩沖液(在充滿氮?dú)獾氖痔紫渲羞M(jìn)行)中。
2.c.將得到的溶液用pH 5的緩沖液稀釋至體積為100ml。
2.d.將最終的溶液用氮?dú)饣蚱渌亩栊詺怏w層覆蓋。燒瓶用封口膜密封并在4℃下儲(chǔ)存。
C)測(cè)定于磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)(Fluka目錄號(hào)79383)中pH 7.4下的溶解度 D)測(cè)定于0.1N HCl溶液(Scharlau AL0744010C)中pH 1.0下的溶解度 E)測(cè)定于0.5M的檸檬酸鈉溶液(Aldrich 25，127-5)中pH 4.5下的溶解度 體外活性試驗(yàn)和溶解度確定試驗(yàn)的結(jié)果 體外試驗(yàn) 發(fā)現(xiàn)上文描述的所有本發(fā)明的實(shí)施例(實(shí)施例1-8)具有小于75ng/ml的IC50值。
溶解度確定試驗(yàn) 測(cè)試在FaSSIF和FeSSIF每種溶劑中本發(fā)明所有的實(shí)施例(實(shí)施例1-8)的溶解度。數(shù)據(jù)顯示于下表中。
溶解度表
表格注釋 S＝溶解度，μg/ml S＜1 * 1＜S＜5 ** 5＜S＜10 *** 10＜S＜50****
權(quán)利要求
1.式I化合物或其可藥用衍生物
其中
R1表示鹵素、CF3或OCF3；
R4表示鹵素；
R2和R3中的一個(gè)表示甲基，且另一個(gè)表示-(CH2)nOH或-HC＝N-OR5；
R5表示H或C1-3烷基；
n表示4。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其可藥用衍生物，其中R1表示Br、Cl、F、CF3或OCF3。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的化合物或其可藥用衍生物，其中R4表示Br或Cl。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用衍生物，其中R2和R3中的一個(gè)表示甲基，且另一個(gè)表示-(CH2)nOH，其中n表示1-4。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用衍生物，其中R3表示甲基，且R2表示-(CH2)nOH，其中n表示1-4。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用衍生物，其中R5表示H或甲基。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用衍生物，其中n表示1或3。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其可藥用衍生物，其中該化合物選自
3-氯-6-(羥基甲基)-2-甲基-5-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-4(1H)-吡啶酮；
3-氯-6-(羥基甲基)-2-甲基-5-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-4(1H)-吡啶酮；
3-氯-2-(羥基甲基)-6-甲基-5-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-4(1H)-吡啶酮；
3-氯-2-(羥基甲基)-6-甲基-5-(4-{[3-(三氟甲基)苯基]氧基}苯基)-4(1H)-吡啶酮；
5-氯-6-甲基-4-氧代-3-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-1，4-二氫-2-吡啶甲醛肟；
5-氯-6-甲基-4-氧代-3-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-1，4-二氫-2-吡啶甲醛-O-甲基肟；
3-氯-6-甲基-4-氧代-5-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-1，4-二氫-2-吡啶甲醛肟；和
3-氯-6-(3-羥基丙基)-2-甲基-5-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-4(1H)-吡啶酮。
9.化合物，其為
3-氯-6-(羥基甲基)-2-甲基-5-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-4(1H)-吡啶酮。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用衍生物，其用于藥物治療。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用衍生物在制備用于治療瘧疾的藥物中的用途。
12.權(quán)利要求11的用途，其中所述瘧疾是由鐮狀瘧原蟲感染所引起的。
13.治療患有瘧疾的人或動(dòng)物患者的方法，其包括向所述人或動(dòng)物患者給藥有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用衍生物。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中所述瘧疾是由鐮狀瘧原蟲感染所引起的。
15.藥物組合物，其包括根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用衍生物，以及一種或多種可藥用載體和/或賦形劑。
16.制備如權(quán)利要求1所述的式I化合物的方法，其包括
(A)將式II化合物，其中R1表示鹵素、CF3或OCF3，與鹵素供體反應(yīng)；
或
(B)將式XV化合物，其中R1表示氟、氯、CF3或OCF3，與鹵素供體反應(yīng)；
或
(C)在合適的堿的存在下，將式XX化合物，其中R1表示鹵素、CF3或OCF3，且R4表示鹵素，與NH2OR5.HCl反應(yīng)，其中R5表示H或C1-3烷基；
或
(D)在合適的堿的存在下，將式XXI化合物，其中R1表示鹵素、CF3或OCF3，且R4表示鹵素，與NH2OR5.HCl反應(yīng)，其中R5表示H或C1-3烷基；
或
(E)在合適的催化劑的存在下，將式XXII化合物進(jìn)行氫化反應(yīng)，其中R1表示氟、氯、CF3或OCF3，且R4表示鹵素；
17.制備式II化合物的方法，其中R1表示鹵素、CF3或OCF3，其包括在合適的條件下，將式XXIV化合物的還原開環(huán)，然后環(huán)化中間體烯胺
18.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中式XXIV化合物通過酰化式XXV化合物來制備
全文摘要
本發(fā)明提供了式I的4-吡啶酮(4-吡啶酮)衍生物及其可藥用衍生物，它們的制備方法，其藥物制劑以及它們?cè)谀承┘纳x感染如瘧疾的化療中的用途。
文檔編號(hào)C07D213/68GK101495455SQ200780028261
公開日2009年7月29日 申請(qǐng)日期2007年5月29日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月31日
發(fā)明者喬斯·M·比諾考爾德倫, 杰瑟斯·奇查羅岡扎洛, 米拉格羅斯·洛倫佐加西亞, M·P·曼扎諾欽喬恩 申請(qǐng)人:葛蘭素集團(tuán)有限公司