專利名稱：：包含fyn激酶的修飾的sh3結(jié)構(gòu)域的特異性的且高親和力的結(jié)合蛋白的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及包含F(xiàn)YN激酶的Src同源性3結(jié)構(gòu)域(SH3)的至少一種衍生物的重組結(jié)合蛋白，其中在src環(huán)中或位于src環(huán)附近最高達(dá)2個(gè)氨基酸的至少一個(gè)氨基酸和/或在RT環(huán)中或位于RT環(huán)附近最高達(dá)2個(gè)氨基酸的至少一個(gè)氨基酸被置換、缺失或添加。此外，本發(fā)明涉及融合蛋白，其包含與藥學(xué)上和/或診斷上的活性組分融合的根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合蛋白。另外，本發(fā)明涉及編碼這些結(jié)合蛋白和/或融合蛋白的核苷酸以及對(duì)應(yīng)的載體和宿主細(xì)胞。最后、但不是最少，本發(fā)明涉及本發(fā)明的結(jié)合蛋白和/或融合蛋白用于制備藥物或診斷工具的用途，以及包含所述結(jié)合蛋白和/或融合蛋白的藥物或診斷組合物。
背景技術(shù)：
：特異性的且高親和力的粘合劑是生物和醫(yī)學(xué)研究必不可少的工具，且也具有用于醫(yī)學(xué)診斷、預(yù)防和治療的效用。目前，單克隆抗體是可以就與事實(shí)上任意靶的高親和力和特異性快速分離的主要結(jié)合分子種類。但是，免疫球蛋白具有主要基于它們的一般生物物理學(xué)性質(zhì)和它們的相當(dāng)復(fù)雜的分子結(jié)構(gòu)的限制。因此，在二十世紀(jì)九十年代幾個(gè)研究組已經(jīng)采用小球形蛋白作為抗體的替代品。該概念的要旨是，通用結(jié)合位點(diǎn)從抗體結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)移到替代蛋白構(gòu)架，即所謂的支架。到目前為止已經(jīng)描述了超過40種支架，其中有2種SH3結(jié)構(gòu)域，即Abl和Src激酶的SH3結(jié)構(gòu)域(參見Binz等人，NatureBiotechnology,Vol.23,No.10,1257-1268,2005)。在許多參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)和細(xì)胞骨架組構(gòu)的不同蛋白中發(fā)現(xiàn)了SH3結(jié)構(gòu)域(Cohen等人，"Modularbindingdomainsinsignaltransductionproteins."Cell80(2):237-48,1995)。盡管它們的一級(jí)結(jié)構(gòu)存在可變性，但這些SH3結(jié)構(gòu)域共有非常類似的總體結(jié)構(gòu)和結(jié)合共有作為天然SH3結(jié)合的關(guān)鍵決定子的最小共有序列PxxP的蛋白的模式。SH3結(jié)構(gòu)域的重要功能是參與高選擇性的蛋白-蛋白相互作用。Erpel等人("MutationalanalysisoftheSrcSH3domain:thesameresiduesoftheligandbindingsurfaceareimportantforintra-andintermolecularinteractions."EmboJ.14(5):963-75,1995)研究了SrcSH3結(jié)構(gòu)域的RT和n-Src環(huán)中突變的影響，并證實(shí)鄰近疏水表面的2個(gè)環(huán)中的突變會(huì)影響該結(jié)構(gòu)域參與分子間和分子內(nèi)結(jié)合的能力。Hiipakka等人("SH3domainswithhighaffinityandengineeredligandspecificitiestargetedtoHIV-1Nef."J,Mol.Biol.293(5):1097-106,1999)研究了HckSH3結(jié)構(gòu)域的RT-環(huán)起通用的特異性和親和力決定子作用的能力。這些作者構(gòu)建了Hck結(jié)構(gòu)域的噬菌體文庫，其中隨機(jī)化RT-環(huán)的6個(gè)氨基酸(稱作RRT-SH3)。使用該策略，他們鑒別出可以為Hck-Sh3的最高達(dá)40倍地結(jié)合HIV-1Nef的個(gè)別RRT-SH3結(jié)構(gòu)域。這些作者指出RT環(huán)在SH3配體選擇中的重要性作為生成具有所需的結(jié)合性質(zhì)的SH3結(jié)構(gòu)域的一般策略。Lee等人("AsingleaminoacidintheSH3domainofHckdeterminesitshighaffinityandspecificityinbindingtoHIV畫lNefprotein."Embo.丄14(20):5006-15,1995)研究了對(duì)HIV-1Nef蛋白的Hck的不同SH3結(jié)合親和力和特異性的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，且能通過FynSH3結(jié)構(gòu)域的RT環(huán)中的單突變(R96I)將HckSH3對(duì)Nef的結(jié)合性質(zhì)轉(zhuǎn)移至FynSH3結(jié)構(gòu)域。Hosse等人("Anewgenerationofproteindisplayscaffoldsformolecularrecognition",ProteinScience,15:14-27,2006)特別解決了對(duì)適合治療應(yīng)用的結(jié)合蛋白的需求。作者注意到治療上有用的結(jié)合蛋白的一些特征(例如血清穩(wěn)定性，組織穿透，血液清除率，耙滯留和免疫應(yīng)答)的重要性。在后一方面，指出應(yīng)當(dāng)與它們的人配對(duì)物盡可能相似地制備非人治療蛋白，且人支架可能從開始就是更低免疫原性的。這些作者的結(jié)論是"但是，甚至完全的人支架也不能保證蛋白不引起人免疫應(yīng)答，特別是如果它是細(xì)胞內(nèi)蛋白。在文庫構(gòu)建過程中氨基酸的隨機(jī)化可以潛在地導(dǎo)入新的T-細(xì)胞表位。甚至單點(diǎn)突變也可以使人蛋白是免疫原性的。此外，大多數(shù)人支架造成一些自身免疫應(yīng)答。"現(xiàn)今，Abl和Hck激酶的SH3結(jié)構(gòu)域被公認(rèn)為生成具有建議的特異性的蛋白結(jié)合劑的蛋白支架，盡管到目前為止僅已鑒別出與已知配體如Nef蛋白或合成肽的結(jié)合劑(參見上面Binz等人)。Fyn激酶的SH3結(jié)構(gòu)域(FynSH3)包含63個(gè)殘基(Semba等人("yes-relatedprotooncogene,syn,belongstotheprotein-tyrosinekinasefamily."Proc.Natl.Acad.Sci.USA83(15):5459-63,1986)和Kawakami等人("Isolationandoncogenicpotentialofanovelhumansrc-likegene."MolCellBiol.6(12):4195-201,1986)報(bào)道的序列的氨基酸83-145)。Fyn是酪氨酸激酶Src家族的59kDa成員。作為可變剪接的結(jié)果，F(xiàn)yn蛋白存在兩種差異在于它們的激酶結(jié)構(gòu)域的不同同工型；一種形式在胸腺細(xì)胞、脾細(xì)胞和一些血淋巴(hematolymphoid)細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn)，而第二種形式主要在腦中積累(Cooke和Perlmutter,"ExpressionofanovelformoftheFynproto-oncogeneinhematopoieticcells."NewBiol.1(1):66-74,1989)。Fyn的生物學(xué)功能是多樣的，且包括通過T細(xì)胞受體的信號(hào)傳導(dǎo)，腦功能的調(diào)節(jié)以及粘連介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)(Resh,M.D."Fyn,aSrcfamilytyrosinekinase."Int.J.Biochem.CellBiol.30(11):1159-62,1998)。它是細(xì)胞內(nèi)蛋白。SEQIDNO:1顯示了FynSH3序列(Kawakami等人和Semba等人在1986報(bào)道的Fyn激酶的氨基酸83-145，參見上面)GVTLFVALYDYEARTEDDLSFHKGEKFQILNSSEGD麗EARSITTGFTGYIPSMYVAPVDSIQ(SEQIDNO:1)RT-Src和n-Src環(huán)的序列分別標(biāo)有下劃線和雙下劃線。FynSH3的氨基酸序列在人、小鼠、大鼠和猴(長(zhǎng)臂猿)中是完全保守的。與對(duì)應(yīng)的人結(jié)構(gòu)域相比，雞FynSH3相差一個(gè)，非洲爪蟾(A"eo/my/aev&)之一相差2個(gè)氨基酸位置。正如其他SH3結(jié)構(gòu)域，F(xiàn)ynSH3由2個(gè)反向平行的(3-折疊組成，且含有2個(gè)柔性環(huán)(稱作RT-Src和n-Src-環(huán))，以與其它蛋白相互作用?？傊F(xiàn)有技術(shù)教導(dǎo)蛋白構(gòu)架(即所謂的支架)作為確立的抗體結(jié)構(gòu)的替代物。Src同源性3結(jié)構(gòu)域(SH3)是這些約40個(gè)或更多個(gè)支架之一。在許多不同的SH3結(jié)構(gòu)域(在人基因組中約300個(gè)，且到目前為止描述了自然界中的幾千個(gè))中，F(xiàn)ynSH3是一個(gè)，它以前已使用過一次以總體上解釋SH3結(jié)合特異性和親和力。技術(shù)人員也知道，細(xì)胞內(nèi)蛋白特別傾向于生成免疫應(yīng)答，且因此通常對(duì)于體內(nèi)應(yīng)用(如治療和診斷)的有用性更低或甚至無用。本發(fā)明的目的是提供適合用作研究試劑、且具體地用作診斷和醫(yī)學(xué)試劑的改良的耙特異性的且高親和力的結(jié)合蛋白。此外，這些結(jié)合蛋白應(yīng)當(dāng)在生理?xiàng)l件下是穩(wěn)定的和可溶的，在接受它們的人中引起很少的或不引起免疫效應(yīng)，并提供大靶結(jié)構(gòu)也易接近的結(jié)合結(jié)構(gòu)，即沒有被位阻掩蔽。
發(fā)明內(nèi)容令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，Src家族的Fyn激酶的SH3結(jié)構(gòu)域?yàn)樵O(shè)計(jì)對(duì)選才奪的靶具有特異性和高親和力的重組結(jié)合結(jié)構(gòu)域提供了優(yōu)良性質(zhì)。具體地，發(fā)現(xiàn)通過突變RT環(huán)和/或src環(huán)，從而導(dǎo)致更高的可變性和對(duì)許多靶的提高的結(jié)合性質(zhì)，可以設(shè)計(jì)靶特異性。此外，意外地發(fā)現(xiàn)，不僅天然的FynSH3結(jié)合蛋白、而且突變的FynSH3-衍生的結(jié)合蛋白在體內(nèi)都不是免疫原性的。因此，重組突變FynSH3結(jié)合蛋白特別適用于開發(fā)非免疫原性的蛋白治療劑和/或診斷劑。作為上述內(nèi)容的結(jié)果，本發(fā)明的第一方面涉及包含F(xiàn)yn激酶的Src同源性3結(jié)構(gòu)域(SH3)的至少一種衍生物的重組結(jié)合蛋白，其中(a)在src環(huán)中或位于src環(huán)附近最高達(dá)2個(gè)氨基酸的至少一個(gè)氨基酸，和/或(b)在RT環(huán)中或位于RT環(huán)附近最高達(dá)2個(gè)氨基酸的至少一個(gè)氨基酸被置換、缺失或添加，其中所述SH3結(jié)構(gòu)域衍生物的氨基酸序列與SEQIDNO:1的氨基酸序列具有至少70、優(yōu)選至少80、更優(yōu)選至少90和最優(yōu)選至少95%序列同一性，優(yōu)選地條件是，該重組結(jié)合蛋白不包含SEQIDNO:2的氨基酸序列，且優(yōu)選地，該重組蛋白不是在自然界中存在的含有天然SH3結(jié)構(gòu)域的蛋白。下面提供了SEQIDNO:2的氨基酸序列(Lee等人的FynSH3變體R961,參見上面)。GVTLFVALYDYEAITEDDLSFHKGEKFQILNSSEGD麗EARSLTTGETGYIPSNWAPVDSIQ(SEQIDNO:2)在本發(fā)明的上下文中，F(xiàn)yn激酶的RT環(huán)(有時(shí)也稱作RT-Src-環(huán))由位于SEQIDNO:1中的位置12至17的氨基酸EARTED組成。在RT環(huán)中或在RT環(huán)附近的要置換、缺失和/或添加的，即要突變的位置是氨基酸10至19、優(yōu)選11至18、更優(yōu)選12至17。在本發(fā)明的上下文中，F(xiàn)YN激酶的src環(huán)(有時(shí)也稱作n-Src-環(huán))由位于SEQIDNO:1中的位置31至34的氨基酸NSSE組成。在src環(huán)中或在src環(huán)附近的要置換、缺失和/或添加的，即要突變的位置是氨基酸29至36、優(yōu)選30至35、更優(yōu)選31至34。本發(fā)明的重組蛋白優(yōu)選不是在自然界中存在的或從自然界分離的含有天然SH3結(jié)構(gòu)域的蛋白。換而言之，本發(fā)明的范圍優(yōu)選排除含有野生型SH3結(jié)構(gòu)域的蛋白。在自然界中存在豐富的含有SH3結(jié)構(gòu)域的蛋白。這些天然SH3蛋白對(duì)它們的天然配體具有結(jié)合親和力。大部分(如果不是所有的話)這些天然SH3配體都具有PxxP基序。但是，本發(fā)明的重組蛋白是設(shè)計(jì)成對(duì)非天然靶具有親和力的工程化蛋白，即非天然輩巴作為任意靶，例如在自然界中，優(yōu)選在哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選在人類中，排除天然(野生型)SH3配體。更優(yōu)選地，本發(fā)明的重組蛋白對(duì)任意天然SH3結(jié)合配體、最優(yōu)選對(duì)具有PxxP基序的任意天然SH3結(jié)合配體基本上不具有結(jié)合親和力。優(yōu)選地，要加入一個(gè)和/或兩個(gè)環(huán)中的氨基酸的數(shù)目是1至20個(gè)、更優(yōu)選1至10個(gè)或1至5個(gè)氨基酸，且最優(yōu)選向環(huán)中不加入氨基酸。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，位于RT和src環(huán)外的SH3結(jié)構(gòu)域衍生物部分盡可能多地保守，以不引入免疫原性的基序。優(yōu)選地，本發(fā)明的重組蛋白在哺乳動(dòng)物中、優(yōu)選在小鼠、大鼠和/或人中、最優(yōu)選在人中基本上不引起免疫原性反應(yīng)。當(dāng)然，本發(fā)明的完整重組蛋白的免疫原性不僅依賴于SH3結(jié)構(gòu)域衍生物部分，而且受完整蛋白的其它部分的影響。在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方案中，至少重組蛋白的SH3結(jié)構(gòu)域衍生物部分在哺乳動(dòng)物中、優(yōu)選在小鼠、大鼠和/或人中、最優(yōu)選在人中基本上是非免疫原性的。例如，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以通過標(biāo)準(zhǔn)的和常規(guī)的技術(shù)測(cè)定重組蛋白或它的SH3結(jié)構(gòu)域衍生物部分的免疫原性反應(yīng)，例如通過給哺乳動(dòng)物例如小鼠施用(例如靜脈內(nèi)(i.v.)注射)目標(biāo)重組蛋白或它的SH3結(jié)構(gòu)域衍生(例如白細(xì)胞介素)的響應(yīng)。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合蛋白是這樣的，其中所述SH3結(jié)構(gòu)域衍生物在src和RT環(huán)外與FYN激酶的Src同源性3結(jié)構(gòu)域(SH3)具有至少70或至少85、優(yōu)選至少90、更優(yōu)選至少95、最優(yōu)選至少98至100%同一性。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，將突變引入RT和src環(huán)中。在另一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的結(jié)合蛋白包含在SH3結(jié)構(gòu)域衍生物的位置37和/或50的一個(gè)或優(yōu)選兩個(gè)改變的殘基、優(yōu)選兩個(gè)疏水的改變的殘基、更優(yōu)選Trp37和/或Tyr50,Trp37和Tyr50是最優(yōu)選的。如下面圖3b所證實(shí)的，它們的隨^/L化可以增加親和力。本文使用的術(shù)語"FYN激酶的Src同源性3結(jié)構(gòu)域(SH3)的衍生物"意在包括與SEQIDNO:1的氨基酸序列具有至少70、優(yōu)選至少80、更優(yōu)選至少90和最優(yōu)選至少95%序列同一性的氨基酸序列。相同的含義適用于在src和RT環(huán)外與FYN激酶的Src同源性3結(jié)構(gòu)域(SH3)具有至少70或至少85、優(yōu)選至少90、更優(yōu)選至少95、最優(yōu)選至少98%同一性的SH3結(jié)構(gòu)域衍生物，例外是，當(dāng)測(cè)定序列同一性時(shí)，排除形成所述環(huán)的氨基酸。為了測(cè)定FynSH3結(jié)構(gòu)域的衍生物與SEQIDNO:1的氨基酸序列的序列同一性程度，可以采用例如SIM局部相似性程序(XiaoquinHuang和WebbMiller,"ATime-Efficient,Linear-SpaceLocalSimilarityAlgorithm."AdvancesinAppliedMathematics,vol.12:337-357,1991.),它可以從作者和他們的研究所自由得到(也參見環(huán)球網(wǎng)http:〃www.expasy.org/tools/sim-prothtml);對(duì)于多重比對(duì)分析，可以使用ClustalW(Thompson等人，，，CLUSTALW:improvingthesensitivityofprogressivemultiplesequencealignmentthroughsequence,weighting,position-specificgappenaltiesandweightmatrixchoice.",NucleicAcidsRes.,22(22):4673—4680,1994.)。優(yōu)選地，相對(duì)于SEQIDNO:1的完整序列，測(cè)定衍生物與SEQIDNO:l的序列同一性程度。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的結(jié)合蛋白包含F(xiàn)ynSH3結(jié)構(gòu)域的至少兩種衍生物。更優(yōu)選地，它是二價(jià)結(jié)合蛋白。SH3結(jié)構(gòu)域的至少兩種衍生物可以相同或不同。優(yōu)選地，它們是相同的。本發(fā)明的結(jié)合蛋白可以設(shè)計(jì)成對(duì)給定靶具有任意特定的結(jié)合親和力。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述靶是基于氨基酸的靶例如肽或蛋白、更優(yōu)選包含PxxP基序的。當(dāng)然，僅少數(shù)天然的和生理上有關(guān)的耙蛋白含有PxxP基序。下面的實(shí)施例證實(shí)，可以得到對(duì)于具有除了PxxP以外的基序的靶(例如纖連蛋白的ED-B結(jié)構(gòu)域)的根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合蛋白。因此，本發(fā)明的結(jié)合蛋白絕不限于PxxP基序，且可以對(duì)任意給定的耙(例如糖、多肽等)具有特定的結(jié)合親和力。更優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合蛋白對(duì)耙具有10_7至10-12M、優(yōu)選10—8至10"M的特定的結(jié)合親和力，優(yōu)選治療上和/或診斷上有關(guān)的耙、更優(yōu)選包含PxxP基序的基于氨基酸的耙。在最優(yōu)選的方面，根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合蛋白對(duì)癌胚纖連蛋白的胞外域(ED-B)具有10-7至10"M、優(yōu)選10—8至10"M的特定的(體內(nèi)和/或體外)結(jié)合親和力。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及重組結(jié)合蛋白，其包含F(xiàn)YN激酶的Src同源性3結(jié)構(gòu)域(SH3)的至少一種衍生物，其中(a)在src環(huán)中或位于src環(huán)附近最高達(dá)2個(gè)氨基酸的至少一個(gè)氨基酸，和/或(b)在RT環(huán)中或位于RT環(huán)附近最高達(dá)2個(gè)氨基酸的至少一個(gè)氨基酸被置換、缺失或添加，其中SH3結(jié)構(gòu)域衍生物的氨基酸序列與SEQIDNO:1的氨基酸序列具有至少70、優(yōu)選至少80、更優(yōu)選至少90和最優(yōu)選至少95%序列同一性，優(yōu)選地條件是，該重組結(jié)合蛋白不包含SEQIDNO:2的氨基酸序列，且優(yōu)選地條件是，所述重組蛋白不是在自然界中存在的含有天然SH3結(jié)構(gòu)域的蛋白，其中所述結(jié)合蛋白對(duì)癌胚纖連蛋白的胞外域(ED-B)具有優(yōu)選10—7至10"至10"M的特定的(體內(nèi)和/或體外)結(jié)合親和力。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述SH3結(jié)構(gòu)域衍生物在src和RT環(huán)外與FYN激酶的Src同源性3結(jié)構(gòu)域(SH3)具有至少85、優(yōu)選至少卯、更優(yōu)選至少95、最優(yōu)選至少98至100%同一性。在另一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，上面的ED-B-特異性的結(jié)合蛋白包含SH3結(jié)構(gòu)域的至少兩種衍生物，優(yōu)選它是二價(jià)結(jié)合蛋白。優(yōu)選地，所述ED-B-特異性的結(jié)合蛋白具有一個(gè)或多個(gè)、優(yōu)選2個(gè)在SH3結(jié)構(gòu)域衍生物的位置37和/或50處的改變的、優(yōu)選疏水的殘基，尤其Trp37和/或Tyr50,Trp37和Tyr50是最優(yōu)選的。次于對(duì)多肽和蛋白靶的特定的結(jié)合親和力，本發(fā)明的結(jié)合蛋白也可以對(duì)小的有機(jī)的或非基于氨基酸的化合物(例如糖、寡糖或多糖、脂肪酸等)具有特定的結(jié)合親和力。已經(jīng)研究了許多抗體-細(xì)胞因子融合蛋白用于例如關(guān)節(jié)炎或癌癥治療中的應(yīng)用，經(jīng)常具有令人印象深刻的結(jié)果。例如，對(duì)纖連蛋白的ED-B結(jié)構(gòu)域(血管發(fā)生的標(biāo)記)特異性的人抗體L19已經(jīng)用于向?qū)嶓w瘤遞送促炎細(xì)胞因子(例如IL-2、IL-12或TNF),有時(shí)具有顯著的治療益處[關(guān)于綜述和對(duì)應(yīng)的參考文獻(xiàn)，參見Neri&Bicknell,Nat.Rev.Cancer(2005)5:436國(guó)446,和WO01/62298]。本發(fā)明的結(jié)合蛋白現(xiàn)在允許替換在現(xiàn)有技術(shù)融合蛋白中的抗體，和設(shè)計(jì)用于體內(nèi)和體外藥物和診斷應(yīng)用的新的和更低免疫原性的融合蛋白。在第二方面，本發(fā)明涉及融合蛋白，其包含與藥學(xué)上和/或診斷上的活性組分相融合的本發(fā)明的結(jié)合蛋白。本發(fā)明的融合蛋白可以包含非多肽組分，例如非肽接頭，非肽配體，例如用于治療上或診斷上有關(guān)的放射性核素。優(yōu)選地，所述活性組分是細(xì)胞因子、優(yōu)選選自下述的細(xì)胞因子IL-2、IL-12、TNF-a、IFNa、IFN卩、IFN丫、IL-IO、IL-15、IL-24、GM-CSF、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-9、IL-ll、IL-13、LIF、CD80、B70、TNF卩、LT-卩、CD-40配體、Fas-配體、TGF-卩、IL-la和IL-lp。更優(yōu)選地，所迷活性組分是毒性化合物，優(yōu)選小有機(jī)化合物或多肽，優(yōu)選選自下述的毒性化合物加利車霉素、新抑癌蛋白、埃斯波霉素(esperamicin)、達(dá)內(nèi)霉素(dynemicin)、可達(dá)菌素(kedarcidin)、12maduropeptin、阿霉素、柔紅霉素、auristatin、蓖麻毒蛋白-A鏈、蒴蓮根毒素、截短的假單胞菌外毒素A、白喉毒素和重組多花白樹毒蛋白。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的融合蛋白是這樣的，其中所述活性組分是趨化因子、優(yōu)選選自下述的趨化因子IL-8、GROa、GRO卩、GROy、ENA-78、LDGF-PBP、GCP-2、PF4、Mig、IP畫IO、SDF國(guó)la/卩、BUNZO/STRC33、I-TAC、BLC/BCA-1、MIP-la、MIP-1卩、MDC、TECK、TARC、RANTES、HCC-1、HCC-4、DC-CK1、MIP-3a、MIP陽3卩、MCP-l-5、嗜伊紅粒細(xì)胞趨化蛋白、嗜^尹紅粒細(xì)胞趨化蛋白-2、1-309、MPIF-1、6Ckine、CTACK、MEC、淋巴細(xì)胞趨化蛋白和CX3C趨化因子(Fmctalkine)。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合蛋白含有人工氨基酸。在本發(fā)明的融合蛋白的進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述活性組分是熒光染料、優(yōu)選選自下述的組分AlexaFluor或Cy染料(Berlier等人，"QuantitativeComparisonofLong-wavelengthAlexaFluorDyestoCyDyes:FluorescenceoftheDyesandTheirBioconjugates",JHistochemCytochem.51(12):1699-1712,2003.);光敏劑，優(yōu)選雙(三乙醇胺)Sn(IV)二氫卟酚e6(SnChe6);促凝血因子，優(yōu)選組織因子；前體藥物激活酶，優(yōu)選選自羧肽酶、葡糖酪酸糖苷酶和葡糖苦酶的酶；來自？輻射同位素的放射性核素，優(yōu)選99mTc、123I、mIn,或來自陽電子發(fā)射體的放射性核素，優(yōu)選"F、64Cu、68Ga、86Y、124I,或來自|3-發(fā)射體的放射性核素，優(yōu)選1311、9QY、177Lu、67Cu,或來自oi-發(fā)射體的放射性核素，優(yōu)選^Bi、211At;和/或功能性Fc結(jié)構(gòu)域，優(yōu)選人功能性Fc結(jié)構(gòu)域。上述功能性Fc結(jié)構(gòu)域?qū)⒃试S指導(dǎo)哺乳動(dòng)物對(duì)融合蛋白的結(jié)合蛋白組分的特異性耙結(jié)合位點(diǎn)的免疫應(yīng)答，例如在治療、預(yù)防和/或診斷應(yīng)用中。另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案涉及如上所迷的根據(jù)本發(fā)明的融合蛋白，其另外包含調(diào)節(jié)血清半衰期的組分，優(yōu)選選自聚乙二醇(PEG)、免疫球蛋白和清蛋白結(jié)合肽的組分。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，如上所述的本發(fā)明的融合蛋白包含與癌胚纖連蛋白的外結(jié)構(gòu)域(ED-B)具有10-7至l(T12M、優(yōu)選10-8至l(T12M的特定(體內(nèi)和/或體外)結(jié)合親和力的本發(fā)明的結(jié)合蛋白。優(yōu)選地，所述ED-B-特異性的結(jié)合蛋白具有在SH3結(jié)構(gòu)域衍生物的位置37和/或50的一個(gè)或多個(gè)、優(yōu)選2個(gè)疏水殘基，尤其Trp37和/或Tyr50，Trp37和Tyr50是最優(yōu)選的。根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合和融合蛋白可以通過許多常規(guī)的且眾所周知的技術(shù)中的任一種來制備，例如通常的有機(jī)合成策略、固相-輔助的合成技術(shù)或通過可商業(yè)上得到的自動(dòng)化合成儀。另一方面，它們也可以通過單獨(dú)的或與常規(guī)合成技術(shù)相組合的常規(guī)重組技術(shù)來制備。本發(fā)明的其它方面涉及(i)編碼根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合蛋白或融合蛋白的多核普酸，(ii)包含所述多核普酸的載體，(iii)包含所述多核苷酸和/或所述載體的宿主細(xì)胞。多核普酸可以是DNA、RNA、PNA和其任意其它類似物。載體和宿主細(xì)胞可以是適合下述目的的任意常規(guī)類型例如，生產(chǎn)本發(fā)明的結(jié)合和融合蛋白、治療上有用的載體和宿主細(xì)胞，例如用于基因治療。技術(shù)人員將能從豐富的現(xiàn)有技術(shù)中選擇那些多核苷酸、載體和宿主細(xì)胞，并通過常規(guī)方法證實(shí)它們用于所需目的的特殊適合性，且無需過度負(fù)擔(dān)。本發(fā)明的結(jié)合和融合蛋白在哺乳動(dòng)物中、尤其在人和小鼠中不引起強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答且優(yōu)選基本上不具有免疫應(yīng)答，如關(guān)于小鼠所證實(shí)的，且類似地預(yù)見到這也適用于人，因?yàn)镕ynSH3在兩種哺乳動(dòng)物物種中是相同的。令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，天然的FynSH3和突變的FynSH3都不在靜脈內(nèi)注射任一種的小鼠中造成免疫應(yīng)答。這是令人意外的，因?yàn)镕yn激酶是細(xì)胞內(nèi)蛋白，且不參與新生的B細(xì)胞選擇。因此，具有設(shè)計(jì)的耙特異性和親和力的FynSH3-衍生的結(jié)合和融合蛋白特別適用于治療、預(yù)防和/或體內(nèi)"^斷應(yīng)用。因此，本發(fā)明的非常相關(guān)的方面涉及根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合或融合蛋白用于制備藥物的用途。在另一個(gè)方面，本發(fā)明的結(jié)合或融合蛋白用于制備診斷工具、尤其用于體內(nèi)應(yīng)用。優(yōu)選地，如上所述的ED-B特異性的結(jié)合或融合蛋白用于制備用于治療或斷癌癥的藥物或_珍斷工具。本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及藥物組合物，其包含本發(fā)明的結(jié)合或融合蛋白和任選地藥學(xué)上可接受的賦形劑。本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及診斷組合物、優(yōu)選用于體內(nèi)應(yīng)用，其包含本發(fā)明的結(jié)合或融合蛋白和任選地藥學(xué)上可接受的賦形劑。優(yōu)選地，藥物或診斷組合物包含ED-B特異性的本發(fā)明的結(jié)合或融合蛋白和任選地藥學(xué)上可接受的賦形劑。用于本發(fā)明體內(nèi)應(yīng)用的藥物組合物和診斷工具通常包含治療上或診斷上有效量的根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合蛋白和/或融合蛋白和任選的輔助物質(zhì)，例如藥學(xué)上可接受的賦形劑。所述藥物組合物以制藥領(lǐng)域眾所周知的方式來制備。載體或賦形劑可以是可以用作活性成分的媒介物或介質(zhì)的液體材料。合適的載體或賦形劑是本領(lǐng)域眾所周知的，且包括例如，穩(wěn)定劑、抗氧化劑、pH-調(diào)節(jié)物質(zhì)、控釋賦形劑。本發(fā)明的藥物制劑可以適用于，例如，腸胃外用途，且可以以溶液等形式施用給患者。最后，本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及治療或診斷方法，其中將有效量的上面的藥物或診斷組合物施用給需要的患者、優(yōu)選遭受或被懷疑遭受癌癥和/或炎性疾病的患者。在實(shí)施治療或診斷患病受試者時(shí)，本發(fā)明的結(jié)合或融合蛋白可以以使治療或診斷化合物生物可利用的任意形式或模式以有效量施用，包括經(jīng)口或腸胃外途徑。例如，本發(fā)明的組合物可以皮下地、肌內(nèi)地、靜脈內(nèi)地等施用。制備制劑領(lǐng)域的技術(shù)人員可以容易地選擇正確的形式和施用模式，這取決于選擇的產(chǎn)品的具體特征、待治療或診斷的疾病或狀況、疾病或狀況的病期和其它有關(guān)情況(參見例如Remington'sPharmaceuticalSciences,MackPublishingCo.(1990))。本發(fā)明的組合物可以單獨(dú)地或以與藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑相組合的藥物或診斷制劑的形式施用，其比例和性質(zhì)由選擇的產(chǎn)品的溶解度和化學(xué)性質(zhì)、選擇的施用途徑和標(biāo)準(zhǔn)的藥物和診斷實(shí)踐決定。本發(fā)明的產(chǎn)品盡管本身是有效的，但為了穩(wěn)定性、結(jié)晶方便、增加的溶解度等目的，可以以它們的藥學(xué)上可接受的鹽的形式配制和施用，例如酸加成鹽或石咸加成鹽。圖1闡明了斑點(diǎn)印跡分析。使用抗-HIS-HRP抗體綴合物(Sigma)作為檢測(cè)試劑，通過細(xì)菌細(xì)胞裂解物的斑點(diǎn)印跡分析，測(cè)定表達(dá)可檢測(cè)量的可溶FynSH3突變體的克隆的百分比。使用ECLplus蛋白印跡檢測(cè)系統(tǒng)(Amersham)，檢測(cè)過氧化物酶活性。A)具有隨機(jī)化的RT-Src-環(huán)的Fy11SH3突變體。B)具有延伸的(4-〉6)和隨機(jī)化的n-Src-環(huán)的FynSH3突變體。C)具有RT-和n-Src隨機(jī)化的環(huán)的FynSH3。圖2闡明了單克隆噬菌體-ELISA。針對(duì)MSA第三輪淘選后，使用包被有MSA(100卞g/ml過夜,100pl/孔)的MaxiSorp板(Nunc)，通過ELISA測(cè)試含有展示FynSH3突變體的噬菌體的單克隆細(xì)菌上清液。使用抗M-13-HRP抗體綴合物(Amersham),檢測(cè)結(jié)合的噬菌體。圖3闡明了使用包被有MSA(100|Lig/ml過夜，100pl/孔)的MaxiSorp板(Nunc)進(jìn)行一輪親和力成熟選擇后的單克隆噬菌體-ELISA(針對(duì)MSA)。A)G4的第一個(gè)子文庫(隨機(jī)化的n-Src環(huán)和Trp37和Tyr50)的噬菌體ELISA。親本克隆G4用箭標(biāo)指示。B)G4的第二個(gè)子文庫(隨機(jī)化的和延伸的n-Src環(huán))的噬菌體ELISA。親本克隆G4用箭標(biāo)指示。C)在有利于具有長(zhǎng)k。ff的結(jié)合劑的條件下進(jìn)行的一輪淘選后，第一個(gè)和第二個(gè)子文庫的噬菌體ELISA。親本克隆G4用箭標(biāo)指示。圖4顯示了根據(jù)生產(chǎn)商的說明書(Qiagen,天然條件)克隆(pQE-12載體)、表達(dá)和純化可溶蛋白后，幾個(gè)MSA結(jié)合克隆的可溶的ELISA(使用包被有MSA(100pg/ml過夜，100pl/孔)的MaxiSorp板(Nunc))。使用抗-HIS-HRP抗體綴合物作為檢測(cè)劑。向僅用4。/。MPBS封閉的孔中加入相同的結(jié)合蛋白作為對(duì)照。圖5可溶蛋白的特異性ELISA。使用包被有不同清蛋白(各100pg/ml過夜，100pl/孔)的MaxiSorp板(Nunc),測(cè)試選擇的MSA結(jié)合FynSH3突變體對(duì)人血清清蛋白(HSA)、大鼠血清清蛋白(RSA)、牛血清清蛋白(BSA)和卵清蛋白的結(jié)合。圖6D3的BIACore分析。使用的濃度4、2、1和0,5(從上面起)。圖7關(guān)于鼠抗體存在的血液樣品的ELISA分析。A)給MaxiSorp板(Nunc)包被FynSH3(20^g/ml過夜，100jli1/孔)。以稀釋系列(從1:4至1:IOO)應(yīng)用5只小鼠中的每一只的血液樣品(從75至200pl)。使用抗-小鼠-IgG-HRP抗體綴合物(Sigma)，進(jìn)行抗體的檢測(cè)。使用抗-HIS-HRP-綴合物(Sigma)作為包#:效率的對(duì)照。B)給MaxiSorp板(Nunc)包被FynSH3D3(20|iig/ml過夜，100p1/孔)。以稀釋系歹'J(從1:4至1:1OO)應(yīng)用5只小鼠中的每一只的血液樣品(從75至200pl)。使用抗-小鼠-IgG-HRP抗體綴合物(Sigma)，進(jìn)行抗體的檢測(cè)。使用抗-HIS-HRP-綴合物(Sigma)作為包被效率的對(duì)照。C)給MaxiSorp板(Nunc)包被scFv(60pg/ml過夜，100inl/孔)。以稀釋系歹ij(從l:4至1:100)應(yīng)用4只小鼠中的每一只的血液樣品(從75至200pl)。使用抗-小鼠-IgG-HRP抗體綴合物(Sigma)，進(jìn)行抗體的檢測(cè)。使用抗-myc-HRP-綴合物(Roche)作為包被效率的對(duì)照。圖8顯示了F9鼠畸胎癌組織切片上的D3(圖8a)、對(duì)應(yīng)的陰性對(duì)照(8.b)、抗-CD31染色(圖8.c)和對(duì)應(yīng)的陰性對(duì)照(8.d)的免疫熒光。圖9顯示了FynSH3-D3的腫瘤滯留(圖9.a))，而不可觀察到FynSH3wt的積累(圖9.b))。將靶向結(jié)果表達(dá)為每g組織保留的1251-標(biāo)記的蛋白的o/o注射劑量(o/oID/g)。在下面，將參考具體實(shí)施方案更詳細(xì)地描述本發(fā)明的主題，這些實(shí)施方案不應(yīng)解釋為對(duì)本發(fā)明范圍的限制。實(shí)施例實(shí)施例1:FvnSH3突變體的表達(dá)為了評(píng)價(jià)FynSH3的突變體的表達(dá)，進(jìn)行了3種不同的FynSH3子文庫的斑點(diǎn)印跡分析(圖1):在第一個(gè)文庫中，僅RT-環(huán)被隨機(jī)化，在第二個(gè)中，Src環(huán)被隨機(jī)化，并延伸至6個(gè)殘基，且在第三個(gè)文庫中，RT-和Src環(huán)被同時(shí)隨機(jī)化，后一個(gè)環(huán)從4個(gè)延伸至6個(gè)殘基。表達(dá)的FynSH3突變體的百分比范圍是59-90%。表1.<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>實(shí)施例2:針對(duì)小鼠血清清蛋白的噬菌體展示選擇生成107個(gè)不同的FynSH3的文庫(僅RT-環(huán)被隨機(jī)化)，并克隆進(jìn)噬菌粒載體pHENl(Hoogenboom等人"Multi-subunitproteinsonthesurfaceoffilamentousphage:methodologiesfordisplayingantibody(Fab)heavyandlightchains",NucleicAcidsRes,19(15):4133-7,1991)。在噬菌體上展示文庫，且針對(duì)小鼠血清清蛋白(MSA)進(jìn)行3輪淘選。第三輪后，通過單克隆噬菌體-ELISA篩選結(jié)合蛋白；檢測(cè)到13個(gè)陽性克隆(圖2)。13個(gè)克隆的測(cè)序揭示，富含2個(gè)不同的序列，命名為G4和C4。但是，在pQE-12載體(Qiagen,在天然條件下根據(jù)生產(chǎn)商的手冊(cè)進(jìn)行表達(dá)和純化)中亞克隆和表達(dá)G4后，由于低親和力(噬菌體ELISA比可溶蛋白的ELISA更靈敏)，通過ELISA不能檢測(cè)到蛋白與MSA的結(jié)合(圖4)。因此，將G4的序列用于2個(gè)不同的親和力成熟文庫(大小每個(gè)文庫107個(gè)克隆)。在第一個(gè)中，n-Src環(huán)的4個(gè)殘基和殘基Trp37(SEQIDNO:l)和Tyr50(SEQIDNO:l)被隨機(jī)化，在第二個(gè)中，將n-Src環(huán)從4個(gè)延伸到6個(gè)隨機(jī)化的殘基。一輪淘選后，兩個(gè)子文庫的幾個(gè)克隆在噬菌體ELISA中給出比親本克隆G4更強(qiáng)的信號(hào)(圖3)。在亞克隆和表達(dá)幾個(gè)克隆后，通過ELISA證實(shí)可溶蛋白的結(jié)合(圖4)。表觀解離常數(shù)在100nM范圍內(nèi)(通過BIAcore測(cè)定)。一些克隆與其它血清清蛋白交叉反應(yīng)(測(cè)試了人血清清蛋白(HSA)、大鼠血清清蛋白(RSA)、牛血清清蛋白(BSA)和卵清蛋白)，而其它克隆對(duì)MSA是高度特異性的，表明可能分離高特異性的結(jié)合蛋白(圖5)。實(shí)施例3:針對(duì)纖連蛋白的外結(jié)構(gòu)域b(ED-B)的噬菌體展示選擇將ED-B選擇為靶蛋白，以證實(shí)針對(duì)藥學(xué)上有關(guān)的蛋白選擇FynSH3衍生的結(jié)合劑的能力。ED-B是91氨基酸III型同源性結(jié)構(gòu)域，它通過在初級(jí)轉(zhuǎn)錄物水平可變剪接的機(jī)理插入纖連蛋白分子，不論何時(shí)發(fā)生組織重建(Zardi等人，"Transformedhumancellsproduceanewfibronectinisoformbypreferentialalternativesplicingofapreviouslyunobservedexon."EmboJ.6(8):2337-42,1987)。它是在多種實(shí)體瘤(例如腎細(xì)胞癌、結(jié)腸直腸癌、肝細(xì)胞癌、高級(jí)星形細(xì)胞瘤、頭和頸腫瘤、膀胱癌等)中超表達(dá)的血管發(fā)生的高質(zhì)量標(biāo)記，但是在正常成體組織中事實(shí)上不可檢出(例外是在增殖期的子宮內(nèi)膜和卵巢中的一些血管)(關(guān)于ED-B作為輩巴的更多細(xì)節(jié)，參見Menrad和Menssen,"ED-Bfibronectinasatargetforantibody-basedcancertreatments."ExpertOpin.Ther.Targets9(3):491-500,2005)。制備了超過10億FynSH3突變體的文庫，并在噬菌體上展示(RT-Src和n-Src環(huán)的同時(shí)隨機(jī)化)。針對(duì)ED-B淘選3輪后，通過噬菌體ELISA鑒別出3個(gè)結(jié)合克隆。測(cè)序揭示出2個(gè)不同的序列(克隆命名為B11和D3)。使用BIAcore3000儀器，通過表面等離振子共振實(shí)時(shí)相互作用分析，測(cè)定D3的解離常數(shù)，且顯示出8.5x1(T8M的值(圖6)。D3(SEQIDNO:3)GVTLFVALYDYHAQSGADLSFHKGEKFQILKFGRGKGD麗EARSLTTGETGYIPSNYVAPVDSIQ實(shí)施例4:免疫原性蛋白的免疫原性是蛋白相關(guān)的療法的主要缺點(diǎn)，尤其對(duì)于包含重復(fù)施用藥物的治療而言。由于FynSH3序列在小鼠和人中的保守性，通過給5只小鼠重復(fù)注射2種蛋白，在體內(nèi)研究了FynSH3野生型蛋白(FynSH3wt)和FynSH3突變體(FynSH3D3,針對(duì)ED-B的結(jié)合劑)的免疫原性潛力。給小鼠注射20pg蛋白4次(每3天)。在第4次注射后一天，處死小鼠，采取血液樣品用于纟全查是否存在鼠抗-FynSH3wt和抗-FynSH3D3抗體。作為陽性對(duì)照，給4只小鼠注射單鏈Fv形式(scFv)的人抗體(相同的注射時(shí)間點(diǎn)和相同的劑量(=60pg))。但是，scFv組的一只小鼠在第3次注射后20分鐘死亡，且另外3只接近死亡，所以在第3次注射后已經(jīng)采取血液樣品。圖7a和b表明，不存在針對(duì)FynSH3wt和FynSH3D3的可檢測(cè)的抗體，而在對(duì)照組觀察到強(qiáng)信號(hào)(圖7c)。實(shí)施例5:免疫組織熒光(immunohistofluorescence)為了研究FynSH3-D3(D3,針對(duì)ED-B的結(jié)合劑)是否會(huì)識(shí)別它的組織中天然構(gòu)象的靶，在F9畸胎癌切片上進(jìn)行免疫熒光。圖8闡明了D3結(jié)合血管周圍的腫瘤基質(zhì)(圖8.a)。用抗-His-Alexa488抗體綴合物進(jìn)行檢測(cè)。在陰性對(duì)照中，沒有加入D3蛋白(圖8b)。為了使血管顯影，用大鼠抗-小鼠-CD31抗體共染色相同的切片，且使用驢抗-大鼠Alexa594綴合物作為第二抗體(圖8.c)。使用不含笫一抗體的第二抗體作為陰性對(duì)照(圖8.d)。實(shí)施例6:體內(nèi)定量生物分布在攜帶皮下(s.c.)移植的F9鼠畸胎癌的小鼠中，通過生物分布實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)FynSH3-D3(針對(duì)ED-B的結(jié)合劑)和FynSH3野生型(ED-B的非結(jié)合劑)的體內(nèi)靶向性能。由于ED-B在小鼠和人中是相同的，所以腫瘤靶向研究的結(jié)果應(yīng)當(dāng)能預(yù)測(cè)在人中的D3性能。靜脈內(nèi)(i.v.)注射1251-標(biāo)記的D3和SH3wt,且24h后，處死動(dòng)物，切除器官，稱重，并計(jì)數(shù)放射性。圖9.a表明，D3選擇性地積累在腫瘤中(肺瘤器官比范圍是3:1至10:1),而對(duì)于FynSH3野生型蛋白沒有觀察到富集(圖9.b)。權(quán)利要求1.重組結(jié)合蛋白，其包含F(xiàn)YN激酶的Src同源性3結(jié)構(gòu)域(SH3)的至少一種衍生物，其中(a)在src環(huán)中或位于src環(huán)附近最高達(dá)2個(gè)氨基酸的至少一個(gè)氨基酸，和/或(b)在RT環(huán)中或位于RT環(huán)附近最高達(dá)2個(gè)氨基酸的至少一個(gè)氨基酸，被置換、缺失或添加，其中所述SH3結(jié)構(gòu)域衍生物的氨基酸序列與SEQIDNO1的氨基酸序列具有至少70、優(yōu)選至少80、更優(yōu)選至少90和最優(yōu)選至少95％序列同一性，優(yōu)選地條件是，該重組結(jié)合蛋白不包含SEQIDNO2的氨基酸序列，且優(yōu)選地條件是，所述重組蛋白不是在自然界中存在的含有天然SH3結(jié)構(gòu)域的蛋白。2.根據(jù)權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白，其中所述SH3結(jié)構(gòu)域衍生物在src和RT環(huán)外與FYN激酶的Src同源性3結(jié)構(gòu)域(SH3)具有至少85、優(yōu)選至少90、更優(yōu)選至少95、最優(yōu)選至少98至100%同一性。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的結(jié)合蛋白，其中(a)在src環(huán)中的至少一個(gè)氨基酸和(b)在RT環(huán)中的至少一個(gè)氨基酸，被置換、缺失或添加。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白，其包含SH3結(jié)構(gòu)域的至少兩種衍生物，優(yōu)選二價(jià)結(jié)合蛋白。5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白，其包含在SH3結(jié)構(gòu)域衍生物的位置37和/或50的一個(gè)或優(yōu)選兩個(gè)改變的殘基，優(yōu)選兩個(gè)疏水的改變的殘基，更優(yōu)選Trp37和/或Tyr50,Trp37和Tyr50是最優(yōu)選的。6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白，其對(duì)粑具有10-7至10-12M、優(yōu)選10"至l(T12M的特定的結(jié)合親和力，優(yōu)選治療上和/或診斷上有關(guān)的靶，更優(yōu)選包含PxxP基序的基于氨基酸的靶。7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白，其對(duì)癌胚纖連蛋白的胞外域(ED-B)具有IO-7至l(T12M、優(yōu)選IO-8至l(T12M的特定的結(jié)合親和力。8.根據(jù)權(quán)利要求7的結(jié)合蛋白，其具有一個(gè)或多個(gè)、優(yōu)選2個(gè)在SH3結(jié)構(gòu)域衍生物的位置37和/或50處的改變的、優(yōu)選疏水的殘基，更優(yōu)選Trp37和/或Tyr50,且最優(yōu)選TYp37和Tyr50。9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白，其包含SEQIDNO:3的氨基酸序列。10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白對(duì)蛋白或小有機(jī)化合物具有結(jié)合特異性。11.融合蛋白，其包含與藥學(xué)上和/或診斷上的活性組分相融合的根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白。12.根據(jù)權(quán)利要求11的融合蛋白，其中所迷組分是細(xì)胞因子，優(yōu)選選自下述的細(xì)胞因子IL-2、IL-12、TNF-a、IFNa、IFN卩、IFNy、IL-IO、IL-15、IL-24、GM-CSF、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-9、IL-ll、IL畫13、LIF、CD80、B70、TNF)3、LT-p、CD-40配體、Fas-閨己體、TGF隱J3、IL-la和IL-1卩。13.根據(jù)權(quán)利要求11的融合蛋白，其中所述組分是毒性化合物，優(yōu)選小有機(jī)化合物或多肽，優(yōu)選選自下述的毒性化合物加利車霉素、新抑癌蛋白、埃斯波霉素、達(dá)內(nèi)霉素、可達(dá)菌素、maduropeptin、阿霉素、柔紅霉素、auristatin、蓖麻毒蛋白-A鏈、蒴蓮根毒素、截短的假單胞菌外毒素A、白喉毒素和重組多花白樹毒蛋白。14.根據(jù)權(quán)利要求11的融合蛋白，其中所述組分是趨化因子，優(yōu)選選自下迷的趨化因子IL-8、GROa、GRO卩、GROy、ENA-78、LDGF-PBP、GCP陽2、PF4、Mig、IP-IO、SDF陽la/卩、BUNZO/STRC33、I-TAC、BLC/BCA-1、MIP-la、MIP-1p、MDC、TECK、TARC、RANTES、HCC-1、HCC-4、DC國(guó)CK1、MIP-3a、MIP-3卩、MCP-l-5、嗜伊紅粒細(xì)胞趨化蛋白、嗜伊紅粒細(xì)胞趨化蛋白-2、1-309、MPIF-1、6Ckine、CTACK、MEC、淋巴細(xì)胞趨化蛋白和CX3C趨化因子。15.根據(jù)權(quán)利要求11的融合蛋白，其中所述組分是熒光染料，優(yōu)選選自AlexaFluor或Cy染料的組分。16.根據(jù)權(quán)利要求11的融合蛋白，其中所述組分是光敏劑，優(yōu)選雙(三乙醇胺)Sn(IV)二氫卟酚e6(SnChe6)。17.根據(jù)權(quán)利要求11的融合蛋白，其中所述組分是促凝血因子，優(yōu)選組織因子。18.根據(jù)權(quán)利要求11的融合蛋白，其中所述組分是前體藥物激活酶，優(yōu)選選自羧肽酶、葡糖醛酸糖苦酶和葡糖普酶的酶。19.根據(jù)權(quán)利要求11的融合蛋白，其中所述組分是來自Y-輻射同位素的放射性核素，優(yōu)選99mTc、123I、mIn,或來自陽電子發(fā)射體的放射性核素，優(yōu)選"F、64Cu、68Ga、86Y、124I，或來自卩-發(fā)射體的放射性核素，優(yōu)選1311、9GY、177Lu、67Cu,或來自a-發(fā)射體的放射性核素，優(yōu)選2"Bi、211At。20.根據(jù)權(quán)利要求11的融合蛋白，其中所述組分是功能性Fc結(jié)構(gòu)域，優(yōu)選人功能性Fc結(jié)構(gòu)域。21.根據(jù)權(quán)利要求11-20中任一項(xiàng)的融合蛋白，其另外包含調(diào)節(jié)血清半衰期的組分，優(yōu)選選自聚乙二醇(PEG)、免疫球蛋白和清蛋白結(jié)合肽的組分。22.根據(jù)權(quán)利要求11-21中任一項(xiàng)的融合蛋白，其包含根據(jù)權(quán)利要求7、8或9的結(jié)合蛋白。23.編碼根據(jù)權(quán)利要求1-22中任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白或融合蛋白的多核苷酸。24.包含根據(jù)權(quán)利要求23的多核苷酸的載體。25.宿主細(xì)胞，其包含根據(jù)權(quán)利要求23的多核苷酸和/或根據(jù)權(quán)利要求24的載體。26.根據(jù)權(quán)利要求1-14、16-18和20-22中任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白或融合蛋白用于制備藥物的用途。27.根據(jù)權(quán)利要求7、8或9的結(jié)合蛋白和/或根據(jù)權(quán)利要求22的融合蛋白用于制備用于治療癌癥的藥物的用途。28.根據(jù)權(quán)利要求1-10、15、19、21和22中任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白或融合蛋白用于制備診斷工具的用途。29.根據(jù)權(quán)利要求7、8或9的結(jié)合蛋白和/或根據(jù)權(quán)利要求22的融合蛋白用于制備用于診斷癌癥的診斷工具的用途。30.藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-14、16-18和20-22中任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白或融合蛋白和任選地藥學(xué)上可接受的賦形劑。31.診斷組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-11、15、19、21和22中任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白或融合蛋白和任選地藥學(xué)上可接受的賦形劑。全文摘要本發(fā)明涉及包含F(xiàn)YN激酶的Src同源性3結(jié)構(gòu)域(SH3)的至少一種衍生物的重組結(jié)合蛋白，其中在src環(huán)中或位于src環(huán)附近最高達(dá)2個(gè)氨基酸的至少一個(gè)氨基酸和/或在RT環(huán)中或位于RT環(huán)附近最高達(dá)2個(gè)氨基酸的至少一個(gè)氨基酸被置換、缺失或添加。此外，本發(fā)明涉及融合蛋白，其包含與藥學(xué)上和/或診斷上的活性組分融合的根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合蛋白。另外，本發(fā)明涉及編碼這些結(jié)合蛋白和/或融合蛋白的核苷酸以及對(duì)應(yīng)的載體和宿主細(xì)胞。最后、但不是最少，本發(fā)明涉及本發(fā)明的結(jié)合蛋白和/或融合蛋白用于制備藥物或診斷工具的用途，以及包含所述結(jié)合蛋白和/或融合蛋白的藥物或診斷組合物。文檔編號(hào)C07K14/435GK101506230SQ200780030974公開日2009年8月12日申請(qǐng)日期2007年8月20日優(yōu)先權(quán)日2006年8月21日發(fā)明者D·內(nèi)里,D·格拉布洛夫斯基申請(qǐng)人:瑞士聯(lián)邦蘇黎世技術(shù)大學(xué)