專利名稱：大環(huán)肽作為丙型肝炎病毒抑制劑的制作方法
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本申請(qǐng)要求美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)60/866,120(2006年11月16日申請(qǐng))的權(quán)益。
本公開(kāi)通常涉及抗病毒化合物，且更具體涉及可抑制由丙型肝炎病毒(HCV)編碼的NS3蛋白酶(本文還指的是“絲氨酸蛋白酶”)功能的化合物，包含這種化合物的組合物和抑制NS3蛋白酶的功能的方法。
HCV是主要人類病原體，在世界范圍內(nèi)，估計(jì)感染1.7億人，是1型艾滋病毒所感染數(shù)目的大致5倍。大部分這些HCV感染的個(gè)體形成嚴(yán)重的漸進(jìn)性肝病，包括肝硬化和肝細(xì)胞癌。
目前，最有效的HCV治療使用α干擾素和利巴韋林的組合，可在40％的患者中引起持續(xù)效果。最新的臨床結(jié)果表明，作為單療法，PEG化的α干擾素優(yōu)于未修飾的α干擾素。然而，對(duì)于包括PEG化的α干擾素和利巴韋林的聯(lián)用藥的實(shí)驗(yàn)性治療方案，大部分患者的病毒載量不會(huì)持續(xù)降低。由此，對(duì)于治療HCV感染的有效療法，還有明顯和未滿足的需要。
HCV是正鏈RNA病毒。基于推斷的氨基酸序列和在5′非翻譯區(qū)的廣泛相似性的對(duì)比，已經(jīng)將HCV分類為黃病毒科中的獨(dú)立種類。黃病毒科的所有成員具有包膜的病毒體，該病毒體含有正鏈RNA基因組，通過(guò)單個(gè)連續(xù)的開(kāi)放讀框的轉(zhuǎn)譯，該基因組編碼所有已知的病毒特異性蛋白。
在核苷酸內(nèi)和整個(gè)HCV基因組的編碼氨基酸序列中，發(fā)現(xiàn)了相當(dāng)多的異質(zhì)性。已經(jīng)表征了六個(gè)主要基因型，并且已經(jīng)描述了50個(gè)以上的亞型。HCV的主要基因型在世界范圍內(nèi)的分布是不同的，HCV的遺傳異質(zhì)性的臨床意義仍然是難以捉摸的，盡管對(duì)于基因型在致病性和治療方面的可能效果進(jìn)行了許多研究。
單鏈HCV RNA基因組的長(zhǎng)度大約為9500個(gè)核苷酸，并且具有單個(gè)開(kāi)放讀框(ORF)，其編碼大約3000個(gè)氨基酸的單個(gè)大的多蛋白。在受感染細(xì)胞中，這種多蛋白在許多位點(diǎn)被細(xì)胞和病毒蛋白酶裂解，產(chǎn)生結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)(NS)性蛋白。就HCV來(lái)說(shuō)，成熟型非結(jié)構(gòu)蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)的產(chǎn)生受到兩種病毒蛋白酶的影響。第一個(gè)在NS2-NS3接合點(diǎn)裂解；第二個(gè)是包含在NS3的N-末端區(qū)域內(nèi)的絲氨酸蛋白酶，并且介導(dǎo)在NS3下游的所有隨后的裂解，在NS3-NS4A裂解位點(diǎn)兩者是以順式形式，對(duì)于剩余的NS4A-NS4B NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位點(diǎn)，是以反式形式。NS4A蛋白似乎可提供許多功能，充當(dāng)NS3蛋白酶的輔因子，并且可能幫助NS3及其它病毒復(fù)制酶組分的膜定位。NS3蛋白與NS4A形成復(fù)合物對(duì)于有效的多蛋白加工是必不可少的，可以在所有位點(diǎn)提高分解蛋白的裂解。NS3蛋白還顯示出核苷三磷酸酶和RNA解旋酶活性。NS5B是依賴于RNA的RNA聚合酶，其涉及在HCV的復(fù)制中。
本公開(kāi)提供了例如在與NS4A蛋白酶的組合中可抑制NS3蛋白酶的功能的肽化合物。進(jìn)一步的，本公開(kāi)描述了給予患者組合治療，使得按照本公開(kāi)的化合物(其可有效抑制HCV NS3蛋白酶)可以與一或兩種具有抗HCV活性的其它化合物一起給予。
在第一個(gè)方面，本公開(kāi)提供了式(I)的化合物
或其可藥用鹽，其中 R1選自烷氧基、羥基和-NHSO2R7； R2a和R2b獨(dú)立地選自氫和甲基； R3選自烯基，烷基，芳基，芳烷基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；條件是，當(dāng)R4是氫時(shí)，則R3不是雜環(huán)基； R4選自氫和羥基； R5選自氫、烷基和環(huán)烷基； R6選自氫，烷基，烷氧羰基，烷胺基羰基，烷基羰基，氨基羰基，芳氧羰基，環(huán)烷基氧基羰基，二烷胺基羰基，鹵代烷氧基羰基，鹵代烷基，鹵代烷基羰基，雜環(huán)基氧基羰基和(NRaRb)磺?；?； R7選自烷基，芳基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，雜環(huán)基和-NRaRb；其中環(huán)烷基和(環(huán)烷基)烷基的環(huán)烷基部分任選被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)獨(dú)立選自下列的基團(tuán)取代烯基，烷氧基，烷氧基烷基，烷基，芳烷基，芳基羰基，氰基，環(huán)烯基，(環(huán)烷基)烷基，鹵素，鹵代烷氧基，鹵代烷基和(NReRf)羰基；和其中Ra和Rb獨(dú)立地選自氫，烷氧基，烷基，芳基，芳烷基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，鹵代烷基，雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；和其中Re和Rf獨(dú)立地選自氫，烷基，芳基，芳烷基和雜環(huán)基；其中芳基、芳烷基的芳基部分和雜環(huán)基任選被一或兩個(gè)獨(dú)立地選自烷氧基、烷基和鹵素的取代基取代；和 Q是C3-9飽和或不飽和鏈，任選包含一個(gè)至三個(gè)獨(dú)立地選自O(shè)、S(O)m和NR9的雜原子，其中m是0、1或2，和R9選自氫，烷氧基，烷氧羰基，烷基，烷基羰基，烷基磺?；?，氨基羰基，芳基磺酰基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，環(huán)烷基氧基，二烷胺基羰基，二烷胺基羰基烷基，鹵代烷基和雜環(huán)基羰基。
在第一個(gè)方面的第一個(gè)實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供了式(I)的化合物或其可藥用鹽，其中R4是羥基。
在第一個(gè)方面的第二個(gè)實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供了式(I)的化合物或其可藥用鹽，其中R1是-NHSO2R7。在第一個(gè)方面的第三個(gè)實(shí)施方案中，R7是環(huán)烷基。
在第一個(gè)方面的第四個(gè)實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供了式(I)的化合物或其可藥用鹽，其中R2a和R2b是氫。
在第一個(gè)方面的第五個(gè)實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供了式(I)的化合物或其可藥用鹽，其中Q是包含零個(gè)雜原子的C5-7不飽和鏈。在第一個(gè)方面的第六個(gè)實(shí)施方案中，Q是包含零個(gè)雜原子的C6不飽和鏈。
在第二個(gè)方面，本公開(kāi)提供了式(II)的化合物
或其可藥用鹽，其中 R1是-NHSO2R7； R2a和R2b是氫； R3選自烯基，烷基，芳基，芳烷基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；條件是，當(dāng)R4是氫時(shí)，則R3不是雜環(huán)基； R4選自氫和羥基； R5是氫； R6是烷氧羰基； R7選自烷基，芳基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，雜環(huán)基和-NRaRb；其中Ra和Rb獨(dú)立地選自氫，烷氧基，烷基，芳基，芳烷基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，鹵代烷基，雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；和 Q是C3-9飽和或不飽和鏈，任選包含一個(gè)至三個(gè)獨(dú)立地選自O(shè)、S(O)m和NR9的雜原子，其中m是0、1或2，和R9選自氫，烷氧基，烷氧羰基，烷基，烷基羰基，烷基磺?；?，氨基羰基，芳基磺?；?，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，環(huán)烷基氧基，二烷胺基羰基，二烷胺基羰基烷基，鹵代烷基和雜環(huán)基羰基。
在第二個(gè)方面的第一個(gè)實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供了式(II)的化合物或其可藥用鹽，其中R4是羥基。
在第二個(gè)方面的第二個(gè)實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供了式(II)的化合物或其可藥用鹽，其中R7是環(huán)烷基。
在第二個(gè)方面的第三個(gè)實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供了式(II)的化合物或其可藥用鹽，其中Q是包含零個(gè)雜原子的C6不飽和鏈。
在第三個(gè)方面，本公開(kāi)提供了選自下列的化合物
或其可藥用鹽。
在第四個(gè)方面，本公開(kāi)提供了包含式(I)化合物或其可藥用鹽和可藥用載體的組合物。在第四方面的第一個(gè)實(shí)施方案中，組合物進(jìn)一步包含至少一種具有抗HCV活性的其它化合物。在第四個(gè)方面的第二個(gè)實(shí)施方案中，其它化合物的至少一種是干擾素或利巴韋林。在第四個(gè)方面的第三個(gè)實(shí)施方案中，干擾素選自干擾素α2B、PEG化的干擾素α、復(fù)合(consensus)干擾素、干擾素α2A和淋巴樣干擾素tau。
在第四個(gè)方面的第四個(gè)實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供了組合物，該組合物包含式(I)的化合物或其可藥用鹽、可藥用載體和至少一種具有抗HCV活性的其它化合物，其中其它化合物的至少一種選自白細(xì)胞間介素2、白細(xì)胞間介素6、白細(xì)胞間介素12、可增加1型輔助性T細(xì)胞響應(yīng)形成的化合物、干擾性的RNA、反義RNA、咪奎莫特、利巴韋林、次黃嘌呤核苷5′-一磷酸脫氫酶抑制劑、金剛烷胺和金剛烷乙胺。
在第四個(gè)方面的第五個(gè)實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供了組合物，該組合物包含式(I)的化合物或其可藥用鹽、可藥用載體和至少一種具有抗HCV活性的其它化合物，其中其它化合物的至少一種可有效抑制靶向的功能，用于治療HCV感染，靶向選自HCV金屬蛋白酶、HCV絲氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV入口、HCV組裝、HCV出口、HCV NS5A蛋白和IMPDH。
在第五個(gè)方面，本公開(kāi)提供了治療患者HCV感染的方法，該方法包括給予患者治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽。在第五個(gè)方面的第一個(gè)實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括給予至少一種具有抗HCV活性的其它化合物，其它化合物在給予式(I)化合物或其可藥用鹽之前、之后或與其同時(shí)給予。在第二個(gè)實(shí)施方案中，其它化合物中的至少一種是干擾素或利巴韋林。在第三個(gè)實(shí)施方案中，干擾素選自干擾素α2B、PEG化的干擾素α、復(fù)合干擾素、干擾素α2A和成淋巴細(xì)胞干擾素tau。
在第五個(gè)方面的第四個(gè)實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供了治療患者HCV感染的方法，該方法包括給予患者治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽和至少一種具有抗HCV活性的其它化合物，其中其它化合物的至少一種在給予式(I)化合物或其可藥用鹽之前、之后或與其同時(shí)給予，至少一種其它化合物選自白細(xì)胞間介素2、白細(xì)胞間介素6、白細(xì)胞間介素12、可增加1型輔助性T細(xì)胞響應(yīng)形成的化合物、干擾性的RNA、反義RNA、咪奎莫特、利巴韋林、次黃嘌呤核苷5′-一磷酸脫氫酶抑制劑、金剛烷胺和金剛烷乙胺。
在第五個(gè)方面的第五個(gè)實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供了治療患者HCV感染的方法，該方法包括給予患者治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽和至少一種具有抗HCV活性的其它化合物，其中至少一種其它化合物在給予式(I)化合物或其可藥用鹽之前、之后或與其同時(shí)給予，其中至少一種其它化合物可有效抑制靶向的功能，對(duì)于治療HCV感染，靶向選自HCV金屬蛋白酶、HCV絲氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV入口、HCV組裝、HCV出口、HCV NS5A蛋白和IMPDH。
在第六個(gè)方面，本公開(kāi)提供了組合物，其包含式(I)的化合物或其可藥用鹽、具有抗HCV活性的一種、兩種、三種、四種或五種其它化合物和可藥用載體。在第六個(gè)方面的第一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物包含三或四種具有抗HCV活性的其它化合物。在第六個(gè)方面的第二個(gè)實(shí)施方案中，該組合物包含一或兩種具有抗HCV活性的其它化合物。
在第七個(gè)方面，本公開(kāi)提供了治療患者HCV感染的方法，該方法包括給予患者治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽和具有抗HCV活性的一種、兩種、三種、四種或五種其它化合物，其它化合物在給予式(I)化合物或其可藥用鹽之前、之后或與其同時(shí)給予。在第七個(gè)方面的第一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括給予三或四種具有抗HCV活性的其它化合物。在第七個(gè)方面的第二個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括給予一或兩種具有抗HCV活性的其它化合物。
本公開(kāi)的其它方面可以包括本文所公開(kāi)實(shí)施方案的合適組合。
其它方面和實(shí)施方案可以在本文提供的說(shuō)明書(shū)中得到。
應(yīng)該將本公開(kāi)的說(shuō)明書(shū)視為與法律和化學(xué)鍵合原理相一致。在有些情況下，可能需要除去氫原子，以便在任何給定位置容納取代基。
應(yīng)該理解，本公開(kāi)所涵蓋的化合物是可合適穩(wěn)定地用作藥物試劑的那些化合物。
說(shuō)明書(shū)中引用的所有專利、專利申請(qǐng)和參考文獻(xiàn)在本文中以其整體引入作為參考。在不一致的情況下，以本公開(kāi)(包括定義)為準(zhǔn)。
在本說(shuō)明書(shū)中使用的下列術(shù)語(yǔ)具有指明的含義 本文使用的術(shù)語(yǔ)“烯基”是指含有至少一個(gè)碳-碳雙鍵的2至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“烷氧基”是指通過(guò)氧原子與母體分子部分連接的烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“烷氧基烷基”是指被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)烷氧基取代的烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“烷氧羰基”是指通過(guò)羰基與母體分子部分連接的烷氧基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“烷基”是指衍生自含有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈飽和烴的基團(tuán)。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“烷基氨基”是指-NHR，其中R是烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“烷胺基羰基”是指通過(guò)羰基與母體分子部分連接的烷基氨基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“烷基羰基”是指通過(guò)羰基與母體分子部分連接的烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“烷基磺酰基”是指通過(guò)磺?；c母體分子部分連接的烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“氨基”是指-NH2。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“氨基羰基”是指通過(guò)羰基與母體分子部分連接的氨基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“芳基”是指苯基或其中一個(gè)或兩個(gè)環(huán)是苯基的雙環(huán)稠環(huán)系統(tǒng)。雙環(huán)稠環(huán)系統(tǒng)由與4至6元芳香或非芳香碳環(huán)稠合的苯基組成。本公開(kāi)的芳基可以通過(guò)基團(tuán)中的任何可取代的碳原子與母體分子部分相連接。芳基的代表性例子包括但不局限于茚滿基、茚基、萘基、苯基和四氫萘基。本公開(kāi)的芳基可以任選被一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或五個(gè)獨(dú)立選自下列的取代基取代烯基，烷氧基，烷氧羰基，烷基，第二個(gè)芳基，芳烷基，芳氧基，氰基，氰基烷基，鹵素，鹵代烷氧基，鹵代烷基，雜環(huán)基，雜環(huán)基烷基，硝基和氧代；其中第二個(gè)芳基、芳烷基和芳氧基的芳基部分、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基的雜環(huán)基部分可以進(jìn)一步任選被一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或五個(gè)獨(dú)立選自下列的取代基取代烯基，烷氧基，烷基，氰基，鹵素，鹵代烷氧基，鹵代烷基，硝基和氧代。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“芳烷基”是指被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)芳基取代的烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“芳基羰基”是指通過(guò)羰基與母體分子部分連接的芳基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“芳氧基”是指通過(guò)氧原子與母體分子部分連接的芳基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“芳氧羰基”是指通過(guò)羰基與母體分子部分連接的芳氧基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“芳基磺?；笔侵竿ㄟ^(guò)磺酰基與母體分子部分連接的芳基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“羰基”是指-C(O)-。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“氰基”是指-CN。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“氰基烷基”是指被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氰基取代的烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“環(huán)烯基”是指具有三個(gè)至十四個(gè)碳原子和零個(gè)雜原子的非芳香化的、部分不飽和單環(huán)的、雙環(huán)的或三環(huán)系統(tǒng)。環(huán)烯基的代表性的例子包括但不局限于環(huán)己烯基、八氫萘基和降冰片烯基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”是指具有三個(gè)至十四個(gè)碳原子和零個(gè)雜原子的飽和單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)烴環(huán)系統(tǒng)。環(huán)烷基的代表性的例子包括但不局限于環(huán)丙基、環(huán)戊基、二環(huán)[3.1.1]庚基和金剛烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基氧基”是指通過(guò)氧原子與母體分子部分連接的環(huán)烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基氧基羰基”是指通過(guò)羰基與母體分子部分連接的環(huán)烷基氧基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“(環(huán)烷基)烷基”是指被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)環(huán)烷基取代的烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“二烷基氨基”是指-NR2，其中每個(gè)R是烷基。兩個(gè)R基團(tuán)可以相同或不同。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“二烷胺基羰基”是指通過(guò)羰基與母體分子部分連接的二烷基氨基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“二烷胺基羰基烷基”是指被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)二烷胺基羰基取代的烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“鹵素”和“鹵代”是指F、Cl、Br或I。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“鹵代烷氧基”是指通過(guò)氧原子與母體分子部分連接的鹵代烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“鹵代烷氧基烷基”是指被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)鹵代烷氧基取代的烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“鹵代烷氧基羰基”是指通過(guò)羰基與母體分子部分連接的鹵代烷氧基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“鹵代烷基”是指被一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)或四個(gè)鹵素原子取代的烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“鹵代烷基羰基”是指通過(guò)羰基與母體分子部分連接的鹵代烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基”是指含有一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)獨(dú)立地選自氮、氧和硫雜原子的5、6或7元環(huán)。五員環(huán)具有零至兩個(gè)雙鍵，六和七元環(huán)具有零至三個(gè)雙鍵。術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基”還包括雙環(huán)基團(tuán)，其中雜環(huán)基環(huán)與4至7元(優(yōu)選4至6元)芳香或非芳香化碳環(huán)或另一個(gè)單環(huán)雜環(huán)基稠合。本公開(kāi)的雜環(huán)基可以通過(guò)基團(tuán)中的碳原子或氮原子與母體分子部分相連接。雜環(huán)基的例子包括但不局限于苯并噻吩基，呋喃基，咪唑基，二氫吲哚基，吲哚基，異噻唑基，異噁唑基，嗎啉基，噁唑基，哌嗪基，哌啶基，吡唑基，吡啶基，吡咯烷基，吡咯并吡啶基，吡咯基，噻唑基，噻吩基和硫嗎啉基。本公開(kāi)的雜環(huán)基可以任選被一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或五個(gè)獨(dú)立選自下列的取代基取代烯基，烷氧基，烷氧羰基，烷基，芳基，芳烷基，芳氧基，氰基，氰基烷基，鹵素，鹵代烷氧基，鹵代烷基，第二個(gè)雜環(huán)基，雜環(huán)基烷基，硝基和氧代；其中芳基、芳烷基和芳氧基的芳基部分、第二個(gè)雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基的雜環(huán)基部分可以進(jìn)一步任選被一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或五個(gè)獨(dú)立選自下列的取代基取代烯基，烷氧基，烷基，氰基，鹵素，鹵代烷氧基，鹵代烷基，硝基和氧代。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基烷基”是指被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)雜環(huán)基取代的烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基羰基”是指通過(guò)羰基與母體分子部分連接的雜環(huán)基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基氧基”是指通過(guò)氧原子與母體分子部分連接的雜環(huán)基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基氧基羰基”是指通過(guò)羰基與母體分子部分連接的雜環(huán)基氧基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“羥基”是指-OH。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“硝基”是指-NO2。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“-NRaRb”是指通過(guò)氮原子與母體分子部分連接的兩個(gè)基團(tuán)Ra和Rb。Ra和Rb獨(dú)立地選自氫，烷氧基，烷基，芳基，芳烷基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，鹵代烷基，雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“(NRaRb)磺酰基”是指通過(guò)磺?；c母體分子部分連接的-NRaRb。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“-NReRf”是指通過(guò)氮原子與母體分子部分連接的兩個(gè)基團(tuán)Re和Rf。Re和Rf獨(dú)立地選自氫、烷基、芳基、芳烷基和雜環(huán)基；其中芳基、芳烷基的芳基部分和雜環(huán)基任選被一或兩個(gè)獨(dú)立地選自烷氧基、烷基和鹵素的取代基取代。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“(NReRf)羰基”是指通過(guò)羰基與母體分子部分連接的-NReRf。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“氧代”是指＝O。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“磺酰基”是指SO2。
本公開(kāi)的化合物可以以前體藥物形式存在。本文使用的術(shù)語(yǔ)“前體藥物”表示可通過(guò)在血液中水解而快速體內(nèi)轉(zhuǎn)化為母體化合物的化合物。本公開(kāi)的前體藥物包括母體分子上的羥基的酯、母體分子上的羧基的酯和母體分子上的胺的酰胺。
本公開(kāi)的化合物可以以可藥用鹽形式存在。本文使用的術(shù)語(yǔ)“可藥用鹽”表示本公開(kāi)化合物的鹽或兩性離子形式，其是水或油溶的或可分散的，在可靠的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)，其適合于接觸患者的組織，沒(méi)有過(guò)量的毒性、刺激性、變態(tài)反應(yīng)或其它問(wèn)題或并發(fā)癥，與合理的益處/危險(xiǎn)比例相稱，并且對(duì)于它們的預(yù)定用途是有效的。鹽可以在化合物的最終分離和純化期間制備，或通過(guò)合適堿性官能團(tuán)與合適酸的反應(yīng)來(lái)單獨(dú)制備。代表性的酸加成鹽包括乙酸鹽，己二酸鹽，海藻酸鹽，檸檬酸鹽，天冬氨酸鹽，苯甲酸鹽，苯磺酸鹽，硫酸氫鹽，丁酸鹽，樟腦酸鹽，樟腦磺酸鹽；二葡糖酸鹽，甘油磷酸鹽，半硫酸鹽，庚酸鹽，己酸鹽，甲酸鹽，富馬酸鹽，鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，2-羥基乙磺酸鹽，乳酸鹽，馬來(lái)酸鹽，均三甲苯磺酸鹽，甲磺酸鹽，亞萘基磺酸鹽，煙酸鹽，2-萘磺酸鹽，草酸鹽，棕櫚酸鹽，果膠酯酸鹽，過(guò)硫酸鹽，3-苯基丙酸鹽，苦味酸鹽，特戊酸鹽，丙酸鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽，三氯乙酸鹽，三氟乙酸鹽，磷酸鹽，谷氨酸鹽，碳酸氫鹽，對(duì)甲苯磺酸鹽和十一烷酸鹽?？梢杂糜谛纬煽伤幱眉映甥}的酸的例子包括無(wú)機(jī)酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸和磷酸，和有機(jī)酸例如草酸、馬來(lái)酸、琥珀酸和檸檬酸。
堿加成鹽可以在化合物的最終分離和純化期間制備，通過(guò)酸性基團(tuán)與合適堿例如氫氧化物、金屬陽(yáng)離子的碳酸鹽或碳酸氫鹽進(jìn)行反應(yīng)，或與氨或有機(jī)伯、仲或叔胺反應(yīng)?？伤幱名}的陽(yáng)離子包括鋰、鈉、鉀、鈣、鎂和鋁陽(yáng)離子，以及非毒性的季胺陽(yáng)離子，例如銨，四甲銨，四乙銨，甲胺，二甲胺，三甲胺，三乙胺，二乙胺，乙胺，三丁基胺，吡啶，N，N-二甲苯胺，N-甲基哌啶，N-甲基嗎啉，二環(huán)己基胺，普魯卡因，二芐胺，N，N-二芐基苯乙胺和N，N′-二芐基乙二胺?？捎糜谛纬蓧A加成鹽的其它代表性的有機(jī)胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶和哌嗪。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“抗HCV活性”是指化合物可有效治療HCV病毒。
術(shù)語(yǔ)“本公開(kāi)的化合物”和等效表達(dá)是指式(I)的化合物和其可藥用對(duì)映體、非對(duì)映體和鹽。同樣，對(duì)于中間體，在上下文中容許的情況下其含義包括它們的鹽。
術(shù)語(yǔ)“患者”包括人及其它哺乳動(dòng)物。
術(shù)語(yǔ)“藥物組合物”是指一種組合物，其包含本公開(kāi)的化合物與至少一種其它藥物載體的組合，載體即助劑、賦形劑或載體，例如稀釋劑，防腐劑，填料，流動(dòng)調(diào)節(jié)劑，崩解劑，濕潤(rùn)劑，乳化劑，懸浮劑，甜味劑，調(diào)味劑，香料，抗菌劑，抗真菌劑，潤(rùn)滑劑和分配劑，這取決于給藥模式和劑型。可以使用例如列于Remington′s Pharmaceutical Sciences，18th ed.，Mack Publishing Company，Easton，PA(1999)中的組分。
本文使用的短語(yǔ)“藥學(xué)可接受的”指的是那些化合物、物質(zhì)、組合物和/或劑型，在可靠的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)，其適合與患者的組織接觸，沒(méi)有過(guò)分的毒性、刺激性、變態(tài)反應(yīng)或其它問(wèn)題或并發(fā)癥，與合理的危險(xiǎn)/益處比例相稱。
術(shù)語(yǔ)“治療有效量”是指足以顯示有意義的患者益處例如病毒載量持續(xù)減少的各個(gè)活性組分的總量。當(dāng)單獨(dú)給予應(yīng)用于單一活性組分時(shí)，該術(shù)語(yǔ)是指單獨(dú)的組分。當(dāng)應(yīng)用于組合中時(shí)，該術(shù)語(yǔ)是指可引起治療效果的活性組分的組合數(shù)量，不論組合給予、連續(xù)給予或同時(shí)給予。
術(shù)語(yǔ)“治療”是指(i)防止疾病、障礙或病癥在患者中出現(xiàn)，其可能被預(yù)示患該疾病、障礙和/或病癥，但還沒(méi)有確診；(ii)抑制疾病、障礙或病癥，即延滯其發(fā)展；和/或(iii)減輕疾病、障礙或病癥，即引起疾病、障礙和/或病癥的衰退。
在用于命名本公開(kāi)化合物的情況下，本文使用的符號(hào)P1′、P1、P2、P2*、P3和P4標(biāo)記蛋白酶抑制劑結(jié)合的氨基酸殘基的相對(duì)位置(相對(duì)于天然肽裂解基質(zhì)的結(jié)合位置)。裂解發(fā)生在天然基質(zhì)的P1和P1′之間，其中非主要位置表示從肽天然裂解位點(diǎn)的C-末端起始向N-末端延伸的氨基酸；而主要位置從裂解位點(diǎn)標(biāo)識(shí)的N-末端發(fā)出向C-末端延伸。例如，P1′是指離開(kāi)裂解位點(diǎn)的C-末端的右手端的第一個(gè)位置(即N-末端第一個(gè)位置)；而P1從C-末端裂解位點(diǎn)的左側(cè)開(kāi)始編號(hào)，P2從C-末端起始的第二個(gè)位置，等等)。(參見(jiàn)Berger A.& Schechter I.，Transactions ofthe Royal Society London series(1970)，B257，249-264]。
不對(duì)稱中心存在于本公開(kāi)的化合物中。例如，化合物可以包括下式的P1環(huán)丙基單元
其中C1和C2各自表示環(huán)丙基環(huán)的1和2位置處的不對(duì)稱碳原子。

R2與羰基同側(cè)R2與羰基同側(cè)
R2與酰胺基同側(cè) R2與酰胺基同側(cè) 應(yīng)該理解，本公開(kāi)包括具有抑制HCV蛋白酶能力的所有立體化學(xué)形式或其混合物。
本公開(kāi)的某些化合物還可以存在不同的穩(wěn)定構(gòu)造形式，這種形式是可以分離的。扭轉(zhuǎn)不對(duì)稱性是由于非對(duì)稱單鍵周圍的阻旋作用，例如由于空間位阻或環(huán)張力，可以分離不同的構(gòu)象異構(gòu)體。本公開(kāi)包括這些化合物的每個(gè)構(gòu)象異構(gòu)體和其混合物。
本公開(kāi)的某些化合物可以存在兩性離子形式，并且本公開(kāi)包括這些化合物的每種兩性離子形式和其混合物。
當(dāng)用于治療時(shí)，可以以原始化學(xué)制劑形式給予治療有效量的式(I)化合物以及其可藥用鹽，這可以提供藥物組合物的活性組分。相應(yīng)地，本公開(kāi)進(jìn)一步提供了藥物組合物，其包含治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽和一或多種可藥用載體、稀釋劑或賦形劑。式(I)的化合物和其可藥用鹽如上所述。載體、稀釋劑或賦形劑必須是可接受的，與制劑的其它組分不矛盾，并且對(duì)其接受者無(wú)害。按照本公開(kāi)的另一個(gè)方面，提供了制備藥物制劑的方法，該方法包括將式(I)的化合物或其可藥用鹽與一或多種可藥用載體、稀釋劑或賦形劑混合。
藥物制劑可以以單位劑量形式提供，每單位劑量含有預(yù)先確定數(shù)量的活性組分。對(duì)于預(yù)防和治療HCV介導(dǎo)的疾病，典型的單療法是每天給予大約0.01和大約250毫克每千克(“mg/kg”)體重之間的劑量水平的本公開(kāi)化合物，優(yōu)選在每天大約0.05和大約100mg/kg體重之間。典型地，本公開(kāi)的藥物組合物每天可以給予大約1至大約5次，或者連續(xù)輸液。這種給藥形式可以用作慢性或急性治療?？梢耘c載體物質(zhì)組合來(lái)制備單一劑型的活性組分量可以變化，這取決于所治療病癥、病癥的嚴(yán)重程度、給藥時(shí)間、給藥途徑、所使用化合物的排泄速度、治療持續(xù)時(shí)間和患者的年齡、性別、重量和病癥。優(yōu)選的單位劑量制劑是含有本文上面列舉的活性組分的日劑量或亞劑量、或其合適部分的那些制劑。通常，用基本上小于化合物的最佳劑量的小劑量來(lái)開(kāi)始治療。而后，少量地增加劑量，直到在這種情況下達(dá)到最佳效果為止。通常，最優(yōu)選，以通常得到抗病毒有效結(jié)果而不引起任何不良或有害副作用的濃度水平給予化合物。
當(dāng)本公開(kāi)的組合物包含本公開(kāi)化合物與一或多種其它治療或預(yù)防性藥劑的組合時(shí)，化合物和其它藥劑兩者通常以單療法方案中通常劑量的大約10至150％之間的劑量水平存在，且更優(yōu)選在大約10和80％之間。
藥物制劑可以適合于任何合適途徑給藥，例如口服(包括口腔或舌下)、直腸、鼻部、局部(包括面頰、舌下、或透皮)、陰道或腸胃外(包括皮下、皮內(nèi)、肌注、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸骨內(nèi)、鞘內(nèi)、病灶內(nèi)、靜脈內(nèi)或皮內(nèi)注射或輸液)途徑。這種制劑可以通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域已知的任何方法制備，例如使活性組分與載體或賦形劑組合。
適合于口服的藥物制劑可以以離散單元形式提供，例如膠囊或片劑；粉末或顆粒；在水或非水液體中的溶液或懸浮液；食用泡沫或whips；或水包油型液體乳膠或油包水乳化液。
例如，對(duì)于片劑或膠囊形式的口服給藥，可以將活性藥物組份與口服、無(wú)毒的可藥用惰性載體例如乙醇、丙三醇、水等等結(jié)合。粉末是如下制備的將化合物磨碎至合適大小的粉末，與類似磨碎的藥學(xué)載體例如食用碳水化合物例如淀粉或甘露糖醇混合。還可以存在調(diào)味劑、防腐劑、分散和著色劑。
膠囊可以如下制備制備如上所述的粉末混合物，并填充到成形的凝膠殼中。可以將助流劑和潤(rùn)滑劑例如膠態(tài)硅石、滑石粉、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或固體聚乙二醇加入到粉末混合物中，而后進(jìn)行填充。當(dāng)攝取膠囊時(shí)，還可以加入崩解或增溶劑例如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉，以提高藥物的利用率。
此外，當(dāng)要求或需要時(shí)，還可以將合適結(jié)合劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑和著色劑結(jié)合進(jìn)混合物中。合適的結(jié)合劑包括淀粉，凝膠，天然糖例如葡糖或β-乳糖，玉米甜味劑，天然和合成樹(shù)膠例如阿拉伯膠、黃芪膠或海藻酸鈉，羧甲纖維素，聚乙二醇等等。用于這些劑型中的潤(rùn)滑劑包括油酸鈉、氯化鈉等等。崩解劑包括但不限于淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤(rùn)土、黃原膠等等。如下配制片劑例如制備粉末混合物，造?；蛑瞥砂魲l，加入潤(rùn)滑劑和崩解劑，并擠壓成為片劑。如下制備粉末混合物將合適粉碎的化合物與如上所述的稀釋劑或基質(zhì)混合，任選與下列混合結(jié)合劑例如羧甲纖維素、藻酸、凝膠或聚乙烯吡咯烷酮，溶液阻滯劑例如石蠟烴、再吸收促進(jìn)劑例如季鹽和/或吸收劑例如膨潤(rùn)土、高嶺土或磷酸氫鈣?？梢詫⒎勰┗旌衔锶缦逻M(jìn)行造粒用結(jié)合劑例如糖漿、淀粉糊、acadia膠漿或纖維素或聚合物質(zhì)的溶液濕潤(rùn)，并迫使其通過(guò)篩。作為造粒的替代性方法，可以使粉末混合物流過(guò)壓片機(jī)，結(jié)果是，不完全成形的棒條被分裂成顆粒。借助于加入硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石粉或礦物油，可以將顆粒潤(rùn)滑，以防止粘住片劑胎模。然后將潤(rùn)滑的混合物壓縮成片劑。還可以將本公開(kāi)的化合物與易流動(dòng)的惰性載體結(jié)合，并直接壓縮成片劑，不用經(jīng)歷造?；蛐纬砂魲l步驟。可以提供清潔的或不透明防護(hù)涂層(由密封的片膠層、糖涂層或聚合材料涂層和石蠟的拋光涂層組成)?？梢詫⑷玖霞尤氲竭@些涂層中，以區(qū)別不同的單位劑量。
可以制備劑量單位形式的口服液體例如溶液、糖漿和酏劑，以使給定數(shù)量包含預(yù)定數(shù)量的化合物?？梢酝ㄟ^(guò)將化合物溶解在合適調(diào)味的水溶液中來(lái)制備糖漿，而酏劑是通過(guò)使用無(wú)毒的賦形劑來(lái)制備的。還可以加入增溶劑和乳化劑(例如乙氧基化異十八烷醇和聚氧乙烯山梨糖醇醚)、防腐劑、調(diào)味添加劑(例如薄荷油或天然甜味料或糖精或其它人工甜味料)，等等。
如果合適的話，口服劑量單位制劑可以是微囊密封的。還可以制備延長(zhǎng)或持續(xù)釋放的制劑，例如，通過(guò)在聚合物、石蠟等等中涂漬或嵌入顆粒性物質(zhì)。
還可以以脂質(zhì)體遞送系統(tǒng)的形式給予式(I)的化合物和其可藥用鹽，例如小單層脂質(zhì)體、大單層脂質(zhì)體和多層氣泡。脂質(zhì)體可以由各種磷脂例如膽固醇、十八烷胺硬脂胺或磷脂酰膽堿形成。
式(I)的化合物和其可藥用鹽也可以利用化合物分子結(jié)合的單一載體形式的單克隆抗體來(lái)遞送。本化合物也可以與作為目標(biāo)藥物載體的可溶性聚合物結(jié)合。這種聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥基丙基甲基丙烯?；０贩?、聚羥基乙基天冬酰胺酚或被棕櫚酰殘基取代的聚環(huán)氧乙烷聚賴氨酸。此外，本化合物可以與可生物降解的聚合物結(jié)合，用于實(shí)現(xiàn)藥物的控制釋放，例如聚乳酸、聚ε己內(nèi)酯(polepsilon caprolactone)、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚乙縮醛、聚二氫吡喃、聚氰基丙烯酸酯和交聯(lián)的或兩親性的水凝膠的嵌段共聚物。
可以以離散貼片形式(預(yù)定保持與接受者的表皮密切接觸延長(zhǎng)的一段時(shí)間)提供適合于透皮給藥的藥物制劑。例如，利用通常在Pharmaceutical Research，3(6)，318(1986)中描述的離子電滲療法，活性組分可以從貼片中遞送。
可以將適合于局部給藥的藥物制劑配制為油膏、乳膏、懸浮液、洗劑、粉末、溶液、軟膏、凝膠劑、噴霧劑、氣霧劑或油。
對(duì)于治療眼睛或其它外部組織，例如口腔和皮膚，優(yōu)選，以局部油膏或乳膏的形式施用制劑。當(dāng)配制油膏時(shí)，活性組分可以與石蠟或水可互溶的軟膏基質(zhì)一起使用?；蛘撸梢詫⒒钚越M分與水包油型膏用底物或油包水型基質(zhì)一起配制為乳膏。
適合于局部給予眼睛的藥物制劑包括滴眼劑，其中活性組分溶解或懸浮在合適載體中，尤其是水溶劑。
適合于局部給予口腔的藥物制劑包括糖錠、軟錠劑和漱口劑。
適合于直腸給予的藥物制劑可以以栓劑或灌腸劑形式提供。
適合于鼻部給藥的藥物制劑(其中載體是固體)包括具有例如20至500微米范圍粒徑的粗粉，其是采用鼻吸的方式給予，即從接近鼻子的粉末容器中快速吸入通過(guò)鼻腔。對(duì)于鼻噴入或滴鼻劑形式的合適制劑(其中載體是液體)，包括活性組分的水或油溶液。
適合于吸入給藥的藥物制劑包括細(xì)粒或霧劑，其可以利用各種型式的可計(jì)量的、劑量加壓的噴霧器、霧化器或吹入器來(lái)產(chǎn)生。
適合于陰道給藥的藥物制劑可以以陰道栓、塞、乳膏、凝膠劑、軟膏、泡沫或噴霧劑的形式提供。
適于腸胃外給藥的藥物制劑包括含水和無(wú)水無(wú)菌注射液，其可以含有抗氧化劑、緩沖液、抑菌劑和溶質(zhì)，使制劑與預(yù)定接受者的血液等滲壓；和可以包含懸浮劑和增稠劑的含水和非水無(wú)菌的懸浮液。制劑還可以提供在單位劑量或多劑量容器中，例如密封的安瓿和管瓶，并且可以保存在冷凍干燥(凍干)條件下，在使用之前，只需要加入無(wú)菌的液體載體，例如水，用于立刻注射。臨時(shí)的注射液和懸浮液可以用無(wú)菌粉末、顆粒和片劑制備。
應(yīng)該理解，除了上面特別提及的組分之外，制劑可以包含本領(lǐng)域?qū)τ谒鲋苿╊愋蛻T用的其它藥劑，例如適合于口服的那些制劑可以包含調(diào)味劑。
下面表1列出了可以與本公開(kāi)化合物一起給予的化合物的一些說(shuō)明性例子。在組合治療中，本公開(kāi)的化合物可以與其它抗HCV活性化合物一起給予，可以聯(lián)合或單獨(dú)給予，或通過(guò)將化合物組合為組合物來(lái)給予。
表1 本公開(kāi)的化合物還可以用作實(shí)驗(yàn)室試劑。對(duì)于病毒復(fù)制試驗(yàn)的設(shè)計(jì)、動(dòng)物試驗(yàn)系統(tǒng)的驗(yàn)證和結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究，該化合物可以有助于提供研究工具，從而增加對(duì)HCV疾病機(jī)理的認(rèn)識(shí)。進(jìn)一步的，本公開(kāi)的化合物可有效用于建立或確定其它抗病毒化合物的結(jié)合位點(diǎn)，例如，利用競(jìng)爭(zhēng)性抑制。
本公開(kāi)的化合物還可以用于治療或預(yù)防物質(zhì)的病毒污染，因此可降低接觸到這種物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室或醫(yī)務(wù)人員或患者的病毒感染危險(xiǎn)，這種物質(zhì)例如血液、組織、手術(shù)器械和服裝、實(shí)驗(yàn)儀器和服裝、和血液收集或輸液裝置和材料。
當(dāng)通過(guò)合成方法或通過(guò)代謝過(guò)程(包括存在于人或動(dòng)物體中的那些(體內(nèi))或體外存在的過(guò)程)制備時(shí)，本公開(kāi)包括具有式(I)的化合物。
通常用于鑒別本文所公開(kāi)化合物的化學(xué)縮寫包括Bn芐基；Boc叔丁氧羰基{Me3COC(O)}；BSA牛血清白蛋白；CDI羰二咪唑；DBU1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]-十一-7-烯；CH2Cl2＝DCM二氯甲烷；TBME叔丁基甲醚；DEAD偶氮二羧酸二乙酯；DIAD二異丙基偶氮基二羧酸酯；DIEA二異丙基乙胺；DIPEA二異丙基乙胺；4-DMAP4-二甲基氨基吡啶；DCC1，3-二環(huán)己基碳二亞胺；DMF二甲基甲酰胺；DMSO二甲亞砜；DPPA二苯基膦酰基疊氮化物；Et乙基；EtOH乙醇；EtOAc乙酸乙酯；Et2O二乙醚；Grubb′s催化劑雙(三環(huán)己基膦)亞芐基二氯化釕(IV)；Grubb′s二代催化劑三環(huán)己基膦[1，3-雙(2，4，6-三甲基苯基)-4，5-二氫咪唑-2-亞基][亞芐基]二氯化釕(IV)；HATU[O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸鹽；HBTU[O-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸鹽；HOBT，1-羥基苯并三唑；HOAT1-羥基-7-氮雜苯并三唑；HPLC高效液相色譜；MS質(zhì)譜；Me甲基；MeOH甲醇；NMMN-甲基嗎啉；NMPN-甲基吡咯烷；Pr丙基；PPA多磷酸；TBAF四-正丁基銨氟化物；1，2-DCE或DCE1，2-二氯乙烷；TFA三氟乙酸；THF四氫呋喃。
用于合成本公開(kāi)化合物的起始原料為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，并且可以容易地制備或可商購(gòu)。
下面列出的下列方法為說(shuō)明性目的而提供，不是用來(lái)限制權(quán)利要求的范圍。應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，在制備這種化合物時(shí)，必需使用慣用的保護(hù)基來(lái)保護(hù)官能團(tuán)，然后除去保護(hù)基，提供本公開(kāi)的化合物。有關(guān)按照本公開(kāi)的使用保護(hù)基的細(xì)節(jié)為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知。
如反應(yīng)路線1所示，可以使用本公開(kāi)的中間體例如二肽(1)，制備式(I)的化合物。在該方法的第一步中，使用酸例如HCl，在溶劑例如醚中，將(1)的Boc保護(hù)的氮脫保護(hù)，提供相應(yīng)的游離胺2。隨后使用偶合劑例如HATU，在溶劑例如二氯甲烷中，胺(2)可以與氨基酸(3)偶合，提供三肽中間體(4)。應(yīng)注意，在某些情況下，中間體例如(3)是可商購(gòu)的，或者這種化合物可以容易地通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法、以外消旋或手性方式制備。在式(I)化合物的結(jié)構(gòu)中，關(guān)鍵轉(zhuǎn)化是大環(huán)化過(guò)程，其中通用結(jié)構(gòu)(4)的中間體轉(zhuǎn)變?yōu)橥ㄓ媒Y(jié)構(gòu)(5)的中間體。在引用的常規(guī)實(shí)施例中，中間體(4)轉(zhuǎn)化為(5)可能受分子內(nèi)部的烯烴易位反應(yīng)的影響。這種類別的反應(yīng)在本領(lǐng)域已被充分確立，因此，已經(jīng)開(kāi)發(fā)了許多烯烴易位催化劑，并且可商購(gòu)。例如，二烯(4)轉(zhuǎn)化為大環(huán)(5)可能受到用足夠數(shù)量Grubb′s第一代烯烴易位催化劑的處理的影響(在溶劑例如二氯甲烷或二氯乙烷中)。在(4)至(5)的轉(zhuǎn)化的某些例子中，可能需要加熱反應(yīng)混合物，以便實(shí)現(xiàn)這種環(huán)化過(guò)程。然后，通過(guò)兩步方法，中間體(5)轉(zhuǎn)變?yōu)槭?I)的化合物例如(7)。在這種方法的第一步中，中間體(5)的酯官能團(tuán)水解為相應(yīng)的羧酸(6)。這種轉(zhuǎn)化可以通過(guò)皂化反應(yīng)實(shí)現(xiàn)，其中在THF、甲醇和水的混合物中用堿例如氫氧化鋰處理(5)。通過(guò)所示的與磺酰胺的簡(jiǎn)單偶合反應(yīng)，得到的酸(6)可以轉(zhuǎn)變?yōu)槭?I)的化合物。例如，本領(lǐng)域沿用已久的是，在溶劑例如二氯甲烷中，用CDI處理羧酸例如(6)，原位產(chǎn)生活性中間體，當(dāng)用磺酰胺處理該活性中間體時(shí)，提供(7)，即式(I)的化合物。
反應(yīng)路線1
如果在上述最后的偶合過(guò)程即在(6)至(7)的轉(zhuǎn)化中，R7SO2NH2本體是磺酰胺衍生物，例如RaRbNSO2NH2，那么可以使用其它偶合方法。在其中，使用堿例如雙六甲基乙硅烷鋰(在溶劑例如THF中)，磺酰胺中間體(1)(反應(yīng)路線2)首先去質(zhì)子化。然后將得到的磺酰胺陰離子(2)的THF溶液加入到含有活化羧酸的上述反應(yīng)混合物中。然后將該反應(yīng)混合物攪拌幾小時(shí)，提供需要的?；酋０?7)。
反應(yīng)路線2
式(I)的化合物還可以轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌氖絀化合物，如本文所描述。這種方法的例子示于反應(yīng)路線3中，其中式I的化合物(1)(其在P4位置攜帶Boc基團(tuán))轉(zhuǎn)變?yōu)槭絀的化合物(3)(其中所述化合物在P4位置攜帶脲基團(tuán))。(1)至(3)的轉(zhuǎn)化可以用兩步方法進(jìn)行，首先，在溶劑例如二氯甲烷中，用酸例如TFA處理(1)，(1)轉(zhuǎn)化為胺(2)。在一當(dāng)量堿的存在下，可以用異氰酸酯處理得到的胺TFA鹽，提供式I的化合物(3)，其中P3部分用脲封端。如先前所注釋，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以認(rèn)識(shí)到，中間體(2)可以用作制備式(I)化合物的起始原料，其中P3基團(tuán)用酰胺或氨基甲酸酯封端。使用由胺形成所述P4官能團(tuán)的標(biāo)準(zhǔn)條件，可以獲得所述式(I)化合物的結(jié)構(gòu)。
反應(yīng)路線3
制備P2中間體和式(I)化合物的非限制性方法示于下面反應(yīng)路線中。在具體實(shí)施例中給出的所述中間體、反應(yīng)條件和方法廣泛地適用于其它取代型式的化合物。例如，在反應(yīng)路線4的式(I)化合物中找到的P2單元的合成，可以按照所定義的合成路徑來(lái)制備。在其中，用有機(jī)金屬試劑例如格氏試劑(或者烷基或芳基鋰物種，或者烷基或芳基鋅物種)處理可商購(gòu)的N-Boc-4-氧代-L-脯氨酸，提供中間體(2)，其中脯氨酸的C4位置攜帶R3取代基和游離的三級(jí)羥基。然后中間體(2)轉(zhuǎn)變?yōu)槭?I)的化合物。
反應(yīng)路線4
式(I)的化合物(其中R4是氫)可以由相應(yīng)的式(I)化合物(其中R4是羥基)合成。或者，式(I)的化合物(其中R4是氫)可以由用于制備式(I)化合物(其中R4是羥基)的任何中間體合成。例如，其中R4是氫的式(I)化合物可以如反應(yīng)路線5所示來(lái)制備。所述化合物(3)可以由相應(yīng)的羥基類似物(1)制備。由化合物例如(1)形成化合物例如(3)的方法要求脯氨酸C4羥基的還原或脫氧。對(duì)于醇的還原和/或脫氧，特別是叔醇，有相當(dāng)多的確定技術(shù)可以提供由化合物例如(1)形成化合物例如(3)。例如，在下列參考文獻(xiàn)中，已經(jīng)報(bào)道了醇直接還原為相應(yīng)的烷烴(反應(yīng)路線5的方法1)J.Org.Chem.2001，66，7741。在其中描述了醇還原為烷烴，其中在溶劑例如二氯乙烷中用氯代二苯基硅烷和催化數(shù)量的三氯化銦處理所述醇，提供相應(yīng)的烷烴。所述反應(yīng)可以在室溫下進(jìn)行，但在某些情況下可能要求加熱。由式(I)化合物(其中R4是羥基)形成式(I)化合物(其中R4是氫)的其它方法如反應(yīng)路線5的方法2所顯示。在其中，化合物例如(1)首先轉(zhuǎn)變?yōu)榛罨?2)，和這些中間體還原為相應(yīng)的烷烴(例如使用Barton脫氧方法)?；蛘?，如(2)所示的活化醇可以還原成相應(yīng)的烷烴，例如使用還原劑。在反應(yīng)路線5中的(1)至(3)的轉(zhuǎn)化的這些方法對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是眾所周知的。
反應(yīng)路線5
應(yīng)注意，有機(jī)金屬試劑對(duì)脯氨酸衍生物1的酮部分進(jìn)行加成(反應(yīng)路線6)在本領(lǐng)域是充分確立的。例如，Hruby和同事(J.Org.Chem.2001，66，3593)描述了苯基溴化鎂對(duì)反應(yīng)路線6的通用結(jié)構(gòu)(1)的中間體進(jìn)行加成。這些發(fā)現(xiàn)提供了下列證據(jù)當(dāng)使用叔丁基酯基作為C2羧基部分的保護(hù)基時(shí)，獲得所需要的1，2加成物((2)，反應(yīng)路線6)的最佳產(chǎn)率。此外，在關(guān)于加成反應(yīng)的立體化學(xué)結(jié)果的X-射線晶體衍射形式中，該工作提供了明顯的證據(jù)。具體地說(shuō)，由于上述格氏試劑對(duì)酮(1)加成，獲得單一產(chǎn)物，其中C4羥基和C2羧基假定為五元環(huán)周圍的順式相對(duì)取向。由此結(jié)構(gòu)測(cè)定可推斷，在反應(yīng)路線6的結(jié)構(gòu)(1)的條件下，R3M對(duì)(1)的酮進(jìn)行加成的表面選擇性是α。即，有機(jī)金屬對(duì)(1)中羰基的反面(底面)有選擇地加成，可以提供具有所顯示立體化學(xué)的相應(yīng)叔醇(2)。
反應(yīng)路線6
Hruby的上述工作描述了具體格氏試劑對(duì)(1)的衍生物的加成(反應(yīng)路線6)。然而，各種格氏試劑對(duì)脯氨酸(1)的加成包括在本公開(kāi)中。在本領(lǐng)域，描述有機(jī)金屬試劑(包括格氏試劑)對(duì)酮進(jìn)行加成的文獻(xiàn)是相當(dāng)多的，并且概括在綜述中，例如Comprehensive Organic FunctionalGroup Transformations.2卷SynthesisCarbon with one heteroatomattached by a single bond.Alan.R.Katritzky等人主編，1995年，2.02章，37頁(yè)。這種類別的反應(yīng)還描述在Comprehensive Organic Synthesis中。Barry M Trost主編，1卷Additions to C-X pi-bonds(1部分)，1991年。
本領(lǐng)域最新的研究提供了進(jìn)一步優(yōu)化格氏試劑在對(duì)酮的加成反應(yīng)中的條件，并且這些工作可以在本公開(kāi)中使用。例如，Ishihara和同事(Org.Lett.2005，7卷，No.4,573)最近描述了鎂鹽Ate型復(fù)合物的形成和應(yīng)用性。鎂鹽Ate型復(fù)合物R3MgLi源自于格氏試劑和烷基鋰。如Ishihara所描述，在對(duì)酮的反應(yīng)中，這些復(fù)合物提供了1，2加成物的出色產(chǎn)率。在一個(gè)單獨(dú)研究中，Knochel和同事(Angew.Chem Int.Ed.2006，45，497)描述了在與有機(jī)鎂試劑的結(jié)合中使用可溶性鑭系鹽例如LnCl3。這些鑭系鹽的存在可導(dǎo)致對(duì)于羰基化合物的1，2加成反應(yīng)的效率提高。在對(duì)羰基化合物的簡(jiǎn)單加成中，這些工作和在其中引用的參考文獻(xiàn)形成了優(yōu)化格氏反應(yīng)的現(xiàn)有技術(shù)，并且在本公開(kāi)中充當(dāng)重要的資料來(lái)源。
也應(yīng)注意，大量有機(jī)金屬化合物可參與對(duì)酮的加成反應(yīng)。包括在該工作中的是試劑例如芳基鋰、烷基鋰和雜芳基鋰試劑，其在對(duì)羰基部分進(jìn)行1，2方式加成是眾所周知的。例如，在Dondoni和同事的最近研究(J.Org.Chem.2005，70，9257)中，使用BuLi將苯并噻唑鋰化，并且將得到的C2-鋰物種以1，2方式對(duì)內(nèi)酯進(jìn)行加成。利用類似鋰化的苯并噻唑，可以預(yù)料以1，2方式對(duì)反應(yīng)路線6的酮(1)進(jìn)行加成，提供中間體例如(2a)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以認(rèn)識(shí)到，衍生自雜環(huán)例如噁唑和噻唑和咪唑的有機(jī)金屬化合物也可以參與對(duì)酮(1)的1，2加成反應(yīng)。有相當(dāng)多的文獻(xiàn)定義了對(duì)于這些雜環(huán)系統(tǒng)中的每一個(gè)所使用的獨(dú)特條件，并且這種信息本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地得到。例如，在對(duì)酮的加成反應(yīng)中，使用衍生自苯并噁唑或噁唑的有機(jī)金屬試劑，要求使用鋰鎂鹽。Bayh和同事的這些最新研究的具體內(nèi)容描述在J.Org.Chem.，2005，70，5190中。苯并噁唑?qū)Ψ磻?yīng)路線6的酮(1)的加成可以提供中間體例如(2b)。
有大量文獻(xiàn)描述了使用各類衍生自雜環(huán)的有機(jī)金屬試劑對(duì)酮進(jìn)行加成。例如，Behinda和同事的工作(Tet.Lett.42，2001，647)描述了鋰化苯并咪唑的形成和其對(duì)簡(jiǎn)單內(nèi)酯的加成。同樣，在對(duì)反應(yīng)路線6的酮(1)的加成反應(yīng)中，使用這種鋰化的苯并咪唑可以提供中間體例如(2c)。此外，Kawasaki和同事的最近研究(Bioorganic and Medicinal Chem.Lett.13，2003，87)描述了一系列鋰化的芳香雜環(huán)化合物的形成和它們對(duì)于活化酰胺的加成反應(yīng)。同樣，在對(duì)反應(yīng)路線6的酮(1)的加成反應(yīng)中，使用這些鋰化的雜芳環(huán)中間體可以提供中間體(2d-2k)。
在對(duì)酮(1)的1，2加成反應(yīng)中，使用衍生自聯(lián)芳或雜芳基-芳基系統(tǒng)的有機(jī)金屬化合物也與本公開(kāi)有關(guān)。這種類別的有機(jī)金屬試劑對(duì)酮(1)的加成可以提供中間體例如(2l)和(2m)。應(yīng)注意，在本公開(kāi)的范例中，可能需要合成聯(lián)芳或雜芳基有機(jī)金屬化合物，隨后在對(duì)反應(yīng)路線6的酮(1)的加成反應(yīng)中使用。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以了解描述這種類型的有機(jī)金屬化合物和其前體物制備的大量文獻(xiàn)。例如，Chinchilla和同事的最新綜述(Chem.Rev.2004，104，2667)描述了金屬化雜環(huán)的制備和它們的應(yīng)用性。制備聯(lián)芳或雜芳基-芳基系統(tǒng)的基礎(chǔ)化學(xué)常常使用Suzuki類偶合反應(yīng)。Gregory Fu發(fā)表的一系列文獻(xiàn)描述了這種偶合反應(yīng)的目前工藝水平，這些參考文獻(xiàn)進(jìn)一步參考文獻(xiàn)如下JACS 2004，126，1340；JACS，2002，124，13662；Angew.Chem.Int.Ed.2002，41，No.11,1945；Angew.Chem.Int.Ed.2002，41，No.20,3910；JACS 2002，122，4020；JACS2001，123，10099；Org.Lett.2001，Vol.3，No.26,4295；Angew.Chem.Int.Ed.1998，37，No.24,3387。除了這一系列著作之外，該領(lǐng)域的關(guān)鍵性綜述是容易獲得的，例如Rossi在Synthesis 2004，No.15,2419中的綜述。
實(shí)施例 現(xiàn)在與一些實(shí)施方案結(jié)合來(lái)描述本公開(kāi)，這些實(shí)施方案不限制本公開(kāi)的范圍。相反，本公開(kāi)包括可以包含在權(quán)利要求書(shū)范圍內(nèi)的所有的替換、改進(jìn)和等效內(nèi)容。由此，包括具體實(shí)施方案的下列實(shí)施例可以舉例說(shuō)明本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)踐，當(dāng)然，這些實(shí)施例是為了舉例說(shuō)明某些實(shí)施方案的目的，并且提供其過(guò)程和概念方面的最有用和容易理解的說(shuō)明。
溶液百分?jǐn)?shù)表達(dá)重量與體積關(guān)系，溶液比例表達(dá)體積與體積關(guān)系，除非另有說(shuō)明。在Bruker 300、400或500MHz波譜儀上記錄核磁共振(NMR)譜；以百萬(wàn)分之一報(bào)道化學(xué)位移(δ)。按照Still′s快速色譜技術(shù)(J.Org.Chem.1978，43，2923)，在硅膠(SiO2)上進(jìn)行快速色譜。
實(shí)施例1 磺酰胺的制備
向氯代異氰酸磺酰酯(1當(dāng)量)的THF冷(-20℃)攪拌溶液中加入水(1當(dāng)量)(在THF中)，并將得到的溶液升溫至0℃，制備中間體氨磺?；取Ｏ虼巳芤褐屑尤霟o(wú)水Et3N(1當(dāng)量)，而后加入必要的仲胺(1當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物加熱至室溫，然后過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濾液，得到所需要的磺酰胺。然后使所述磺酰胺與羧酸偶合，提供所需要的?；酋０贰?br> 實(shí)施例2 制備?；酋０分虚g體的具體方法
向(1R，2S)1-叔丁氧羰基氨基-2-乙烯基-環(huán)丙烷羧酸(217mg，1.194mmol)的THF(5mL)溶液中加入CDI(290mg，1.791mmol)，并將反應(yīng)混合物回流加熱45分鐘。在另一個(gè)圓底燒瓶中，將LiHMDS(1.0M溶液，在己烷中，2.4mL，2.4mmol)加入到N-乙基甲基磺酰胺(330mg，2.388mmol)的THF(5mL)溶液中，在室溫下攪拌反應(yīng)混合物1小時(shí)。將兩個(gè)反應(yīng)混合物合在一起，在室溫下攪拌2小時(shí)。加入水，以猝滅反應(yīng)，用EtOAc提取反應(yīng)溶液。分離有機(jī)相，用MgSO4干燥。蒸發(fā)溶劑，得到粗品，將其用制備HPLC純化，得到所需要的N-?；酋０?。然后將N-酰基磺酰胺溶于4N HCl的二噁烷(2mL)溶液中，在室溫?cái)嚢?小時(shí)。蒸發(fā)溶液，得到淡褐色的油形式的HCl鹽。(112mg，33％產(chǎn)率)。1HNMR(400Mz，CD3OD)δ1.16(t，J＝7.21Hz，3H)，1.68(dd，J＝10.03，7.83Hz，1H)，2.15(m，1H)，2.37(m，1H)，2.89(s，3H)，3.30(m，2H)，5.31(d，J＝10.27Hz，1H)，5.42(d，J＝17.12Hz，3H)，5.68(m，1H)..LC-MS(保留時(shí)間0.883min.)，MS m/z 270(M+Na+)。
實(shí)施例3 外消旋(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽的制備(方法A和方法B)
利用下列的方法A和B中的每一個(gè)制備外消旋的所命名化合物。
方法A 甘氨酸乙酯的N-芐基亞胺的制備
將甘氨酸乙酯鹽酸鹽(303.8g，2.16mole)懸浮在叔丁基甲基醚(1.6L)中。加入苯甲醛(231g，2.16mole)和無(wú)水硫酸鈉(154.6g，1.09mole)，使用冰水浴將混合物冷卻至0℃。用30分鐘逐滴加入三乙胺(455mL，3.26mole)，在室溫?cái)嚢杌旌衔?8小時(shí)。然后通過(guò)加入冰凍水(1L)來(lái)猝滅反應(yīng)，分離有機(jī)層。用叔丁基甲基醚(0.5L)提取水相，用飽和NaHCO3水溶液(1L)和鹽水(1L)的混合物洗滌合并的有機(jī)相。用MgSO4干燥溶液，真空濃縮，得到392.4g N-芐基亞胺產(chǎn)物濃黃色油，其可直接在下一步使用。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.32(t，J＝7.1Hz，3H)，4.24(q，J＝7.1Hz，2H)，4.41(d，J＝1.1Hz，2H)，7.39-7.47(m，3H)，7.78-7.81(m，2H)，8.31(s，1H)。
外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯的制備
用60分鐘向叔丁醇鋰(84.06g，1.05mol)的無(wú)水甲苯(1.2L)懸浮液中逐滴加入甘氨酸乙酯的N-芐基亞胺(100.4g，0.526mol)和反式-1，4-二溴-2-丁烯(107.0g，0.500mol)的無(wú)水甲苯(0.6L)的混合物。加入完畢后，通過(guò)加入水(1L)和叔丁基甲基醚(TBME，1L)來(lái)猝滅深紅混合物。分離水相，再次用TBME(1L)提取。合并有機(jī)相，加入1N HCl(1L)，在室溫下攪拌混合物2小時(shí)。分離有機(jī)相，用水(0.8L)提取。然后合并水相，用鹽(700g)飽和，加入TBME(1L)，將混合物冷卻至0℃。然后通過(guò)逐滴加入10N NaOH，將攪拌混合物堿化至pH值14，分離有機(jī)層，用TBME(2x500mL)提取水相。將合并的有機(jī)提取物干燥(MgSO4)，濃縮至1L體積。向此游離胺溶液中加入BOC2O或二碳酸二叔丁基酯(131.0g，0.6mol)，在室溫?cái)嚢杌旌衔?天。將額外的二碳酸二叔丁基酯(50g，0.23mol)加入到反應(yīng)中，回流混合物3小時(shí)，然后冷卻至室溫過(guò)夜。將反應(yīng)混合物用MgSO4干燥，真空濃縮，得到80g粗品。通過(guò)快速色譜(2.5Kg SiO2，用1％至2％MeOH/CH2Cl2洗脫)純化殘余物，得到57g(53％)外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯黃色油，當(dāng)在冰箱中靜置時(shí)，其凝固1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.26(t，J＝7.1Hz，3H)，1.46(s，9H)，1.43-1.49(m，1H)，1.76-1.82(br m，1H)，2.14(q，J＝8.6Hz，1H)，4.18(q，J＝7.2Hz，2H)，5.12(dd J＝10.3，1.7Hz，1H)，5.25(br s，1H)，5.29(dd，J＝17.6，1.7Hz，1H)，5.77(ddd，J＝17.6，10.3，8.9Hz，1H)；MS m/z254.16(M-1)。
外消旋(1R，2S)/(1S，2R)1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽的制備
將N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(9.39g，36.8mmol)溶于4N HCl/二噁烷(90mL，360mmol)中，在室溫?cái)嚢?小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物，提供(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽，定量產(chǎn)率(7g，100％)。1H NMR(甲醇-d4)δ1.32(t，J＝7.1，3H)，1.72(dd，J＝10.2，6.6Hz，1H)，1.81(dd，J＝8.3，6.6Hz，1H)，2.38(q，J＝8.3Hz，1H)，4.26-4.34(m，2H)，5.24(dd，10.3，1.3Hz，1H)5.40(d，J＝17.2，1H)，5.69-5.81(m，1H)。
方法B 外消旋N-Boc-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽的制備
在-78℃，向叔丁醇鉀(11.55g，102.9mmol)的THF(450mL)溶液中加入商購(gòu)的甘氨酸乙酯的N，N-二芐基亞胺(25.0g，93.53mmol)的THF(112mL)溶液中。將反應(yīng)混合物加熱至0℃，攪拌40分鐘，然后冷卻到-78℃。向此溶液中加入反式-1，4-二溴-2-丁烯(20.0g，93.50mmol)，在0℃攪拌混合物1小時(shí)，冷卻到-78℃。加入叔丁醇鉀(11.55g，102.9mmol)，將混合物立即加熱至0℃，再攪拌一小時(shí)，而后真空濃縮。將粗品接納在Et2O(530mL)中，加入1N HCl水溶液(106mL，106mmol)，在室溫將得到的雙相混合物攪拌3.5小時(shí)。分離各層，用Et2O(2x)洗滌水層，用飽和NaHCO3水溶液堿化。用Et2O(3x)提取所需要的胺，將合并的有機(jī)提取物用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，真空濃縮，獲得游離胺。將該物質(zhì)用4N HCl的二噁烷溶液(100mL，400mmol)處理，濃縮，得到(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽褐色半固體(5.3g，34％產(chǎn)率)，其與方法A獲得的物質(zhì)相同，只不過(guò)存在少量未鑒別的芳香雜質(zhì)(8％)。
實(shí)施例4 N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯的拆分
拆分A 向磷酸鈉緩沖液的水溶液(0.1M，4.25升(“L”)，pH值8)(放在12升夾套反應(yīng)器中，在39℃保持，以300rpm進(jìn)行攪拌)中加入511克Alcalase 2.4L(大約425mL)(Novozymes North America Inc.)。當(dāng)混合物的溫度達(dá)到39℃時(shí)，通過(guò)加入50％NaOH/水，將pH值調(diào)節(jié)至8.0。然后在40分鐘期間內(nèi)加入外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(85g)的850mL DMSO溶液。然后將反應(yīng)溫度在40℃保持24.5小時(shí)，在此期間，使用50％NaOH/水，在1.5小時(shí)和19.5小時(shí)的時(shí)點(diǎn)將混合物的pH值調(diào)節(jié)至8.0。24.5小時(shí)之后，測(cè)定酯的對(duì)映過(guò)量是97.2％，將反應(yīng)冷卻至室溫(26℃)，攪拌過(guò)夜(16小時(shí))，而后測(cè)定酯的對(duì)映過(guò)量是100％。然后用50％NaOH將反應(yīng)混合物的pH值調(diào)節(jié)至8.5，并將得到的混合物用MTBE(2x2L)提取。然后將合并的MTBE提取物用5％NaHCO3(3x100mL)、水(3x100mL)洗滌，真空蒸發(fā)，得到對(duì)映體純的N-Boc-(1R，2S)/-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯淺黃色固體(42.55g；純度97％@210納摩爾(“nM”)，不包含酸；100％對(duì)映體過(guò)量(“ee”)。
然后用50％H2SO4將得自于提取過(guò)程的水層酸化至pH值2，用MTBE(2x2L)提取。用水(3x100mL)洗滌MTBE提取物，蒸發(fā)，得到酸淺黃色固體(42.74g；純度99％@210nM，不包含酯)。


拆分B 在24孔平皿的孔(容積10ml/孔)中，向0.5mL 100毫摩爾(“mM”)Heps·Na緩沖液(pH值8.5)中加入0.1mL Savinase 16.0L(蛋白酶，得自于Bacillus clausii)(Novozymes North America Inc.)和外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(10mg)的0.1mL DMSO溶液。將平皿密封，在40℃、在250rpm下培養(yǎng)。18小時(shí)之后，如下測(cè)定酯的對(duì)映過(guò)量是44.3％除去0.1mL反應(yīng)混合物，并與1mL乙醇較好地混合；離心之后，用手性HPLC分析10微升(“μl”)上清液。向剩余的反應(yīng)混合物中加入0.1mL DMSO，在40℃、在250rpm下額外培養(yǎng)平皿3天，而后將4mL乙醇加入到孔中。離心之后，用手性HPLC分析10μl上清液，測(cè)定酯的對(duì)映過(guò)量是100％。
拆分C 在24孔平皿的孔(容積10ml/孔)中，向0.5mL 100mM Heps·Na緩沖液(pH值8.5)中加入0.1mL Esperase 8.0L(蛋白酶，得自于Bacillushalodurans(Novozymes North America Inc.)和外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(10mg)的0.1mL DMSO溶液。將平皿密封，在40℃、在250rpm下培養(yǎng)。18小時(shí)之后，如下測(cè)定酯的對(duì)映過(guò)量是39.6％除去0.1mL反應(yīng)混合物，并與1mL乙醇較好地混合；離心之后，用手性HPLC分析10微升上清液。向剩余的反應(yīng)混合物中加入0.1mL DMSO，在40℃、在250rpm下額外培養(yǎng)平皿3天，而后將4mL乙醇加入到孔中。離心之后，用手性HPLC分析10μl上清液，測(cè)定酯的對(duì)映過(guò)量是100％。
用下面的方式進(jìn)行樣品分析 1)樣品制備大約0.5mL反應(yīng)混合物與10體積的EtOH較好地混合。離心之后，將10μl上清液注射到HPLC柱上。
2)轉(zhuǎn)化測(cè)定 柱YMC ODS A，4.6x50毫米(“mm”)，S-5μm 溶劑A，1mM HCl/水；B，MeCN 梯度30％B，1min；30％至45％B，0.5min；45％B，1.5min；45％至30％B，0.5min。
流速2ml/min UV檢測(cè)210nM 保留時(shí)間酸，1.2min；酯，2.8min。
3)酯的對(duì)映過(guò)量測(cè)定 柱CHIRACEL OD-RH，4.6x150mm，S-5μm 流動(dòng)相MeCN/50mM HClO4/水(67/33) 流速0.75ml/min。
UV檢測(cè)210nM。
保留時(shí)間 (1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸，5.2min； 消旋體(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯，18.5min和20.0min； (1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯，18.5min。
拆分D 在20升夾套反應(yīng)器中，將5L 0.3M磷酸鈉緩沖液(pH值8)保持在38℃，在130rpm下攪拌。將4升Alcalase 2.4L(Novozymes North AmericaInc.)和1升DI水加入到反應(yīng)器中。當(dāng)混合物的溫度接近38℃時(shí)，用10NNaOH將pH值調(diào)節(jié)至7.8。在1小時(shí)期間內(nèi)，通過(guò)加入漏斗將外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(500克)的5升DMSO溶液加入到反應(yīng)器中。然后將反應(yīng)溫度調(diào)節(jié)至48℃。21小時(shí)之后，酯的對(duì)映過(guò)量達(dá)到99.3％。在24小時(shí)處停止加熱，將反應(yīng)慢慢地冷卻至室溫(大約25℃)，攪拌過(guò)夜。然后用10N NaOH將反應(yīng)混合物的pH值調(diào)節(jié)至8.5，并將混合物用MTBE(2x4L)提取。用5％NaHCO3(3x400mL)和水(3x400mL)洗滌合并的MTBE提取物，蒸發(fā)，得到對(duì)映體純的N-Boc-(1R，2S)/-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯淺黃色結(jié)晶(259g；純度96.9％@210nM，不包含酸；100％ee)。
拆分E 在20升夾套反應(yīng)器中，將10L 0.1M磷酸鈉緩沖液(pH值8)保持在40℃，在360rpm下攪拌。將1.5升Alcalase 2.4L(Novozymes NorthAmerica Inc.)加入到反應(yīng)器中。當(dāng)混合物的溫度接近38℃時(shí)，用10NNaOH將pH值調(diào)節(jié)至8.0。在1小時(shí)期間內(nèi)，通過(guò)加入漏斗將外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(200克)的2升DMSO溶液加入到反應(yīng)器中。然后將反應(yīng)溫度調(diào)節(jié)至40℃。3小時(shí)之后，用10N NaOH將pH值調(diào)節(jié)至8.0。21小時(shí)之后，將反應(yīng)冷卻至25℃。用10N NaOH將反應(yīng)混合物的pH值調(diào)節(jié)至8.5，并將混合物用MTBE(2x5L)提取。用5％NaHCO3(3x500mL)和水(3x200mL)洗滌合并的MTBE提取物，得到110克黃色油。將油在真空條件下、在室溫下放置，得到對(duì)映體純N-Boc-(1R，2S)/-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯無(wú)色長(zhǎng)棒結(jié)晶(101g；純度97.9％@210nM，不包含酸；100％ee)。
晶體結(jié)構(gòu)對(duì)映體純的N-Boc-(1R，2S)/-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯以單晶分析為特征(X射線NB#52795-093，編號(hào)634592N1)。沒(méi)有形成絕對(duì)構(gòu)型，因缺乏已知的手性中心或較重原子。通過(guò)酰胺基和羰基氧原子之間的分子間氫鍵，沿著結(jié)晶的a-軸心形成鏈結(jié)構(gòu)(N...O 3.159

)。
N-Boc-(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯的結(jié)構(gòu)
N-Boc-(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯的結(jié)構(gòu)
結(jié)晶數(shù)據(jù)實(shí)驗(yàn)性的 化學(xué)式C13H21N1O4結(jié)晶 晶系正交晶 結(jié)晶來(lái)源MTBE 空間群P212121 結(jié)晶說(shuō)明無(wú)色棒狀 a＝5.2902(1)

α＝90° 晶體大小(mm)0.12X 0.26X 0.30 b＝13.8946(2)

β＝90° 數(shù)據(jù)收集 c＝19.9768(3)

γ＝90° 溫度(K)293 V＝1468.40(4)

θmax(°)65.2(Cu Kα) Z＝4dx＝1.155g cm-3 所測(cè)定的反射值7518 晶胞參數(shù)的反射值6817獨(dú)立反射的值2390(Rint＝0.0776) 晶胞參數(shù)的范圍(°)2.2-65.2 觀測(cè)的反射值(I≥22284 吸收系數(shù)(mm-1)0.700 吸收修正(Tmin-Tmax)0.688-1.000 拆分F 在20升夾套反應(yīng)器中，將5L 0.2M硼酸鈉緩沖液(pH值8)保持在45℃，在400rpm下攪拌。將3升DI水和4升Savinase 16L(EX類型)(Novozymes North America Inc.)加入到反應(yīng)器中。當(dāng)混合物的溫度接近45℃時(shí)，用10N NaOH將pH值調(diào)節(jié)至8.5。在40分鐘期間內(nèi)，通過(guò)加入漏斗將外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(200克)的2升DMSO溶液加入到反應(yīng)器中。然后將反應(yīng)溫度調(diào)節(jié)至48℃。2小時(shí)之后，用10N NaOH將pH值調(diào)節(jié)至9.0。在18小時(shí)，酯的對(duì)映過(guò)量達(dá)到72％，用10N NaOH將pH值調(diào)節(jié)至9.0。在24小時(shí)，將溫度降低至35℃。在42小時(shí)，將溫度升至48℃，用10N NaOH將pH值調(diào)節(jié)至9.0。在48小時(shí)處停止加熱，將反應(yīng)慢慢地冷卻至室溫(大約25℃)，攪拌過(guò)夜。在66小時(shí)，反應(yīng)混合物的pH值是8.6。用MTBE(2x4L)提取混合物。用5％NaHCO3(3x300mL)和水(3x300mL)洗滌合并的MTBE提取物，蒸發(fā)，得到對(duì)映體純的N-Boc-(1R，2S)/-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯淺黃色結(jié)晶(101A g；純度95.9％@210nM，不包含酸；98.6％ee)。
實(shí)施例5 步驟11(R)-氨基-2(S)-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽的制備
在N2氛圍中，在室溫，將1(R)-叔丁氧羰基氨基-2(S)-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(8.5g，33.3mmol)與200mL 4N HCl/二噁烷(Aldrich)一起攪拌3小時(shí)。減壓除去溶劑，保持溫度低于40℃。得到6.57g(～100％)1(R)-氨基-2(S)-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽淡褐色的固體。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.31(t，J＝7.0Hz，3H)，1.69-1.82(m，2H)，2.38(q，J＝8.8Hz，1H)，4.29(q，J＝7.0Hz，2H)，5.22(d，J＝10.3Hz，1H)，5.40(d，J＝17.2Hz，1H)，5.69-5.81(m，1H)..MS m/z 156(M++1)。
步驟21(R)-[1-叔丁氧羰基-4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧酰胺]-2(S)-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯的制備
將Boc-L-4-羥脯氨酸(N-Boc(2S，4R)-羥脯氨酸)(10g，43.3mmol)的400mL二氯甲烷攪拌漿液用N-甲基嗎啉(9.3mL，84.7mmol)、HATU(19.5g，51.3mmol)和1(R)-氨基-2(S)-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽(9.1g，47.5mmol)順序處理。將該金黃色均勻溶液在室溫、在N2氛圍中攪拌18小時(shí)，而后真空濃縮，得到棕色油。將其在乙酸乙酯和飽和NaHCO3水溶液之間分配。用鹽水洗滌有機(jī)相，干燥(MgSO4)，真空濃縮，得到15g(94％)1(R)-[1-叔丁氧羰基-4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧酰胺]-2(S)-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯類白色固體LC-MS(Xterra HPLC柱3.0x50mm長(zhǎng)度。梯度100％溶劑A/0％溶劑B至0％溶劑A/100％溶劑B。梯度時(shí)間3min。停留時(shí)間(Hold time)1min。流速5mL/min。檢測(cè)器波長(zhǎng)220nM。溶劑A10％MeOH/90％H2O/0.1％TFA。溶劑B10％H2O/90％MeOH/0.1％TFA)(保留時(shí)間2.09min)，MS m/z369(M++1)。
步驟31(R)-[4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧酰胺]-2(S)-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽的制備。

將1(R)-[1-叔丁氧羰基-4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧酰胺]-2(S)-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(5.0g，13.6mmol)的攪拌漿液用4N HCl/二噁烷(20mL)處理3小時(shí)。真空濃縮反應(yīng)混合物，得到4.5g(97％)1(R)-[4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧酰胺]-2(S)-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽白色固體1HNMR(300MHz，CD3OD)δ1.26(t，J＝7.14Hz，3H)，1.46(dd，J＝9.70，5.31Hz，1H)，1.80(dd，J＝8.23，5.31Hz，1H)，2.00-2.15(m，1H)，2.18-2.30(m，1H)，2.45(dd，J＝13.36，7.50Hz，1H)，3.36-3.48(m，1H)，4.11-4.24(m，2H)，4.44(dd，J＝10.25，7.68Hz，1H)，4.58-4.65(m，1H)，4.84-4.94(m，1H)，5.17(d，J＝1.83Hz，1H)，5.27-5.42(m，1H)，5.67-5.89(m，1H)。
實(shí)施例6 環(huán)丙基磺酰胺的制備，方法A和B 方法A
向100mL冷卻至0℃的THF溶液中鼓入氣態(tài)氨，直到達(dá)到飽和為止。向此溶液中加入5g(28.45mmol)環(huán)丙基磺?；?從Array Biopharma購(gòu)買)的50mL THF溶液，將溶液加熱至室溫過(guò)夜，額外攪拌一天。濃縮混合物，直到溶劑剩余1-2mL為止，施加到30g SiO2塞上(用30％至60％EtOAc/己烷洗脫)，得到3.45g(100％)環(huán)丙基磺酰胺白色固體。1HNMR(甲醇-d4)δ0.94-1.07(m，4H)，2.52-2.60(m，1H)；13C NMR(甲醇-d4)δ5.92，33.01。
方法B 步驟1N-叔丁基-(3-氯代)丙基磺酰胺的制備
將叔丁胺(3.0mol，315.3mL)溶于THF(2.5L)中。將溶液冷卻至-20℃。慢慢地加入3-氯丙烷磺酰氯(1.5mol，182.4mL)。將反應(yīng)混合物升溫至室溫，攪拌24小時(shí)。過(guò)濾混合物，真空濃縮濾液。將殘余物溶于CH2Cl2(2.0L)中。將得到的溶液用1N HCl(1.0L)、水(1.0L)、鹽水(1.0L)洗滌，用Na2SO4干燥。過(guò)濾，真空濃縮，得到淡黃色固體，將其用己烷結(jié)晶，得到產(chǎn)物白色固體(316.0g，99％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.38(s，9H)，2.30-2.27(m，2H)，3.22(t，J＝7.35Hz，2H)，3.68(t，J＝6.2Hz，2H)，4.35(b，1H)。
步驟2環(huán)丙烷磺酸叔丁基酰胺的制備
在-78℃，向N-叔丁基-(3-氯代)丙基磺酰胺(2.14g，10.0mmol)的THF(100mL)溶液中加入n-BuLi(2.5M，在己烷中，8.0mL，20.0mmol)。用1小時(shí)使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?。真空除去揮發(fā)物。將殘余物在EtOAC和水(200mL，200mL)之間分配。分離有機(jī)相，用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，過(guò)濾，真空濃縮。用己烷將殘余物重結(jié)晶，得到所需要的產(chǎn)物白色固體(1.0g，56％)。
1H NMR(CDCl3)δ0.98-1.00(m，2H)，1.18-1.19(m，2H)，1.39(s，9H)，2.48-2.51(m，1H)，4.19(b，1H)。
步驟3環(huán)丙基磺酰胺的制備
將環(huán)丙烷磺酸叔丁基酰胺(110.0g，0.62mol)的TFA(500mL)溶液在室溫下攪拌16小時(shí)。真空除去揮發(fā)物。用EtOAC/己烷(60mL/240mL)將殘余物重結(jié)晶，得到所需要的產(chǎn)物白色固體(68.5g，91％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.84-0.88(m，2H)，0.95-0.98(m，2H)，2.41-2.58(m，1H)，6.56(b，2H)。
實(shí)施例7 N-叔丁基-(1-甲基)環(huán)丙基磺酰胺的制備。

步驟1aN-叔丁基-(3-氯代)丙基磺酰胺的制備。

如上所述。
步驟1bN-叔丁基-(1-甲基)環(huán)丙基磺酰胺的制備。

將N-叔丁基-(3-氯代)丙基磺酰胺(4.3g，20mmol)溶于無(wú)水THF(100mL)中，并冷卻至-78℃。向此溶液中慢慢地加入n-BuLi(17.6mL，44mmol，2.5M，在己烷中)。除去干冰浴，在1.5小時(shí)期間內(nèi)將反應(yīng)混合物升溫至室溫。然后將混合物冷卻至-78℃，加入n-BuLi溶液(20mmol，8mL，2.5M，在己烷中)。將反應(yīng)混合物加熱至室溫，在2小時(shí)期間內(nèi)再冷卻至-78℃，加入純的甲基碘(5.68g，40mmol)溶液。使反應(yīng)混合物升溫至室溫過(guò)夜，在室溫用飽和NH4Cl(100mL)淬滅。用EtOAc(100mL)提取。用鹽水(100mL)洗滌有機(jī)相，干燥(MgSO4)，真空濃縮，得到黃色油，將其用己烷結(jié)晶，得到產(chǎn)物淡黃色固體(3.1g，81％)1HNMR(CDCl3)δ0.79(m，2H)，1.36(s，9H)，1.52(m，2H)，1.62(s，3H)，4.10(bs，1H)。
步驟1c1-甲基環(huán)丙基磺酰胺的制備
將N-叔丁基-(1-甲基)環(huán)丙基磺酰胺(1.91g，10mmol)溶液溶于TFA(30mL)中，在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物16小時(shí)。真空除去溶劑，得到黃色油，將其用EtOAc/己烷(1∶4，40mL)結(jié)晶，得到實(shí)施例3，1-甲基環(huán)丙基磺酰胺白色固體(1.25g，96％)1H NMR(CDCl3)δ0.84(m，2H)，1.41(m，2H)，1.58(s，3H)，4.65(bs，2H).C4H9NO2S的分析計(jì)算值C，35.54；H，6.71；N，10.36。實(shí)測(cè)值C，35.67；H，6.80；N，10.40。
實(shí)施例9 1-丙基環(huán)丙基磺酰胺的制備
步驟1bN-叔丁基-(1-芐基)環(huán)丙基-磺酰胺的制備。

使用制備1-甲基環(huán)丙基磺酰胺所描述的方法，制備該化合物，只是在該方法的第二步中使用丙基鹵來(lái)代替甲基碘。
實(shí)施例10 N-叔丁基-(1-烯丙基)環(huán)丙基磺酰胺的制備。

按照合成N-叔丁基-(1-甲基)環(huán)丙基磺酰胺中所描述的方法，只是用1.25當(dāng)量的烯丙基溴作親電試劑，以97％產(chǎn)率獲得該化合物N-叔丁基-(1-烯丙基)環(huán)丙基磺酰胺。該化合物不用純化就可以直接在下一個(gè)反應(yīng)中采用1H NMR(CDCl3)δ0.83(m，2H)，1.34(s，9H)，1.37(m，2H)，2.64(d，J＝7.3Hz，2H)，4.25(bs，1H)，5.07-5.10(m，2H)，6.70-6.85(m，1H)。
1-烯丙基環(huán)丙基磺酰胺的制備。

按照1-甲基環(huán)丙基磺酰胺的合成中所描述的方法，由N-叔丁基-(1-烯丙基)環(huán)丙基磺酰胺獲得該化合物1-烯丙基環(huán)丙基磺酰胺，產(chǎn)率40％。用SiO2柱色譜純化化合物，使用2％MeOH/CH2Cl2作為洗脫液1HNMR(CDCl3)δ0.88(m，2H)，1.37(m，2H)，2.66(d，J＝7.0Hz，2H)，4.80(s，2H)，5.16(m，2H)，5.82(m，1H)；13C NMR(CDCl3)δ11.2，35.6，40.7，119.0，133.6。
實(shí)施例15 環(huán)丙基磺酰基胺叔丁基氨基甲酸酯(制備C1-取代的環(huán)丙基磺酰胺中的關(guān)鍵中間體)的制備
步驟13-氯丙基磺酰胺的制備
將3-氯丙烷磺酰氯(55g，310.7mmol)溶液溶于THF(200mL)中，并用30分鐘逐滴加入到冷卻至0℃的NH4OH溶液(200mL)中。將反應(yīng)混合物加熱到室溫，攪拌1小時(shí)，用二氯甲烷(4x500mL)多次分配水層。用1N HCl(150mL)、水(150mL)洗滌合并的二氯甲烷層，用MgSO4干燥，過(guò)濾，真空濃縮。用最低量的二氯甲烷/己烷重結(jié)晶粗品固體，得到3-氯丙基磺酰胺白色固體(45.3g，93％)。1H NMR(CDCl3)δ2.34(m，2H)，3.32(t，J＝7.3Hz，2H)，3.70(t，J＝6.2Hz，2H)，4.83(s，2H)；13CNMR(CDCl3)δ27.10，42.63，52.57。
步驟23-氯丙基磺?；被姿崾宥』サ闹苽?
用30分鐘向冷卻到0℃的3-氯丙基磺酰胺(30.2g，191.5mmol)、三乙胺(30.2mL，217.0mmol)和4-DMAP(2.40g，19.6mmol)的二氯甲烷(350mL)溶液中慢慢地逐滴加入二碳酸二叔丁基酯(47.2g，216.9mmol)的二氯甲烷(250mL)溶液。使反應(yīng)混合物升溫至室溫，額外攪拌3小時(shí)，用1N HCl(300mL)、水(300mL)、鹽水(300mL)分配，用MgSO4干燥，過(guò)濾，真空濃縮，得到粗品。用70mL 5％二氯甲烷/己烷研磨該物質(zhì)，得到3-氯丙基磺?；被姿崾宥』セ野咨腆w(47.2g，96％)1HNMR(CDCl3)δ1.51(s，9H)，2.33(m，2H)，3.60(t，J＝7.3Hz，2H)，3.68(t，J＝6.21Hz，2H)；13C NMR(CDCl3)δ26.50，27.95，42.37，50.40，84.76，149.53。
步驟3環(huán)丙基磺?；被姿崾宥』サ闹苽?
在氬氣氛中，將正丁基鋰(74.7mL，119.5mmol，1.6M，在己烷中)溶液溶于無(wú)水THF(105mL)中，并冷卻至-78℃。用20-30分鐘，向此溶液中逐滴加入3-氯丙基磺?；被姿崾宥』?14g，54.3mmol)的無(wú)水THF溶液(105mL)。除去干冰浴，在2小時(shí)期間內(nèi)將反應(yīng)混合物升溫至室溫。用冰醋酸(3.4mL)淬滅反應(yīng)混合物，真空濃縮，在二氯甲烷(100mL)和水(100mL)之間分配。用鹽水(100mL)洗滌有機(jī)相，干燥(MgSO4)，過(guò)濾，真空濃縮，得到環(huán)丙基磺?；被姿崾宥』ハ灎畹念惏咨腆w(12.08g，100％)1H NMR(CDCl3)δ1.10(m，2H)，1.34(m，2H)，1.50(s，9H)，2.88(m，1H)，7.43(s，1H)..13C NMR(CDCl3)δ6.21，28.00，31.13，84.07，149.82。
實(shí)施例16 1-甲氧基-甲基環(huán)丙基磺酰胺的制備
步驟11-甲氧基甲基環(huán)丙基磺酰基氨基甲酸叔丁基酯的制備
向冷卻至-78℃、溶于THF(30mL)的環(huán)丙基磺酰基氨基甲酸叔丁基酯(1.0g，4.5mmol)溶液中加入正丁基鋰(6.4mL，10.2mmol，1.6M，在己烷中)，并攪拌反應(yīng)混合物1小時(shí)。向此溶液中加入氯甲甲醚的純?nèi)芤?0.40mL，5.24mmol)，慢慢地使混合物升溫至室溫過(guò)夜。使用1N HCl水溶液將溶液pH值調(diào)節(jié)至3，然后用乙酸乙酯(4x50mL份額)提取。將合并的提取物干燥(MgSO4)，過(guò)濾，濃縮，得到1-甲氧基甲基環(huán)丙基磺酰基氨基甲酸叔丁基酯蠟狀的固體(1.20g，100％)，其不用進(jìn)一步純化就可以在下一個(gè)反應(yīng)中直接采用1H NMR(CDCl3)δ1.03(m，2H)，1.52(s，9H)，1.66(m，2H)，3.38(s，3H)，3.68(s，2H)，7.54(s，1H)；13CNMR(CDCl3)δ11.37，28.29，40.38，58.94，73.43，83.61，149.57。
步驟21-甲氧基甲基環(huán)丙基磺酰胺的制備
將1-甲氧基甲基環(huán)丙基磺?；被姿崾宥』?1.14g，4.30mmol)溶液溶于50％TFA/二氯甲烷(30mL)溶液中，在室溫下攪拌16小時(shí)。真空除去溶劑，將殘余物用80g SiO2色譜分離(用0％至60％乙酸乙酯/己烷洗脫)，得到1-甲氧基甲基環(huán)丙基磺酰胺白色固體(0.55g，77％，兩步)1H NMR(CDCl3)δ0.95(m，2H)，1.44(m，2H)，3.36(s，3H)，3.65(s，2H)，4.85(s，2H)；13C NMR(CDCl3)δ11.17，40.87，59.23，74.80；LRMS m/z183(M++NH4)。
實(shí)施例17 1-環(huán)丙基甲基環(huán)丙基磺酰胺的制備
步驟11-環(huán)丙基甲基環(huán)丙基磺?；被姿崾宥』サ闹苽?
按照合成1-甲氧基甲基環(huán)丙基磺?；被姿崾宥』ブ兴枋龅姆椒?，只是用1.10當(dāng)量的環(huán)丙基甲基溴作親電試劑，以92％產(chǎn)率獲得1-環(huán)丙基甲基環(huán)丙基磺?；被姿崾宥』?。該化合物不用純化就可以直接在下一個(gè)反應(yīng)中采用1H NMR(CDCl3)δ0.10(m，2H)，0.51(m，2H)，0.67(m，1H)，1.10(m，2H)，1.49(s，9H)，1.62(m，2H)，1.87(d，J＝7.0Hz，2H)。
步驟21-環(huán)丙基甲基環(huán)丙基磺酰胺的制備
按照1-甲氧基甲基環(huán)丙基磺酰胺的合成中所描述的方法，由1-環(huán)丙基甲基環(huán)丙基磺?；被姿崾宥』カ@得該化合物，產(chǎn)率65％。用SiO2柱色譜純化化合物，使用0％至60％乙酸乙酯/己烷作為洗脫液1HNMR(CDCl3)δ0.15(m，2H)，0.51(m，2H)，1.01(m，2H)，1.34(m，3H)，1.86(d，J＝7.0Hz，2H)，4.83(s，2H)；13C NMR(CDCl3)δ4.65，7.74，11.26，35.62，41.21；LRMS m/z 193(M++NH4)。
實(shí)施例19 1-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)氨基甲酰基環(huán)丙烷磺酰胺的制備
步驟11-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)氨基甲?；h(huán)丙烷磺?；被姿崾宥』サ闹苽?
按照合成1-甲氧基甲基環(huán)丙基磺?；被姿崾宥』ブ兴枋龅姆椒?，只不過(guò)用1.20當(dāng)量的3，5-二甲基異噁唑-4-異氰酸酯作親電試劑，以100％產(chǎn)率獲得粗品化合物。該化合物不用純化就可以直接在下一個(gè)反應(yīng)中采用。
步驟21-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)氨基甲酰基環(huán)丙烷磺酰胺的制備
由1.62g(4.52mmol)1-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)氨基甲?；h(huán)丙烷磺酰胺叔丁基氨基甲酸酯，使用30mL(120mmol)的4N HCl/二噁烷，攪拌過(guò)夜，濃縮，用Biotage 40M柱色層分離(用0％至5％甲醇/二氯甲烷洗脫)，以50％產(chǎn)率(580mg)獲得該化合物1H NMR(甲醇-d4)δ1.57(m，2H)，1.61(m 2H)，2.15(s，3H)，2.30(s，3H)，4.84(s，3H)；13C NMR(甲醇-d4)δ9.65，10.94，15.01，46.11，114.82，159.45，165.55，168.15；LRMS m/z260(M++H)。
實(shí)施例20 由環(huán)丁基溴制備環(huán)丁基磺酰胺
向冷卻至-78℃的5.0g(37.0mmol)環(huán)丁基溴的30mL無(wú)水二乙醚(Et2O)溶液中加入44mL(74.8mmol)1.7M叔丁基鋰的戊烷溶液，將溶液用1.5小時(shí)慢慢地加熱至-35℃。將該混合物通過(guò)導(dǎo)管慢慢地加入到5.0g(37.0mmol)新蒸餾的磺酰氯的100mL己烷溶液(冷卻至-40℃)中，用1小時(shí)加熱至0℃，小心地真空濃縮。將該混合物再溶解在Et2O中，用一些冰凍水洗滌一次，干燥(MgSO4)，小心地濃縮。將該混合物再溶解在20mL THF中，逐滴加入到500mL飽和NH3/THF中，攪拌過(guò)夜。真空濃縮混合物，得到粗品黃色固體，用最低量的CH2Cl2/己烷(含有1-2滴MeOH)重結(jié)晶，得到1.90g(38％)環(huán)丁基磺酰胺白色固體。1HNMR(CDCl3)δ1.95-2.06(m，2H)，2.30-2.54(m，4H)，3.86(p，J＝8Hz，1H)，4.75(brs，2H)；13C NMR(CDCl3)δ16.43，23.93，56.29.HRMSm/z(M-H)-C4H8NSO2的計(jì)算值134.0276，實(shí)測(cè)值134.0282。
實(shí)施例21 環(huán)戊基磺酰胺的制備
將18.5mL(37.0mmol)2M環(huán)戊基-氯化鎂的醚溶液逐滴加入到3.0mL(37.0mmol)新蒸餾的磺酰氯(得自于Aldrich)的100mL己烷溶液(冷卻到-78℃)中。用1小時(shí)將混合物加熱到0℃，然后小心地真空濃縮。將該混合物再溶解在Et2O(200mL)中，用一些冰凍水(200mL)洗滌一次，干燥(MgSO4)，小心地濃縮。將該混合物再溶解在35mL THF中，逐滴加入到500mL飽和NH3/THF中，攪拌過(guò)夜。真空濃縮混合物，得到粗品黃色固體，通過(guò)50g硅膠過(guò)濾殘余物，使用70％EtOAc-己烷作為洗脫液，然后濃縮溶液。用最低量的CH2Cl2/己烷(含有1-2滴MeOH)將殘余物重結(jié)晶，得到2.49g(41％)環(huán)戊基磺酰胺白色固體。1H NMR(CDCl3)δ1.58-1.72(m，2H)，1.74-1.88(m，2H)，1.94-2.14(m，4H)，3.48-3.59(m，1H)，4.80(bs，2H)；13C NMR(CDCl3)δ25.90，28.33，63.54；MS m/e148(M-H)-。
實(shí)施例22 環(huán)己基磺酰胺的制備
將18.5mL(37.0mmol)2M環(huán)己基氯化鎂(TCI Americas)的醚溶液逐滴加入到3.0mL(37.0mmol)新蒸餾的磺酰氯的100mL己烷溶液(冷卻到-78℃)中。用1小時(shí)將混合物加熱到0℃，然后小心地真空濃縮。將該混合物再溶解在Et2O(200mL)中，用一些冰凍水(200mL)洗滌一次，干燥(MgSO4)，小心地濃縮。將該混合物再溶解在35mL THF中，逐滴加入到500mL飽和NH3/THF中，攪拌過(guò)夜。真空濃縮混合物，得到粗品黃色固體，通過(guò)50g硅膠過(guò)濾殘余物，使用70％EtOAc-己烷作為洗脫液，然后濃縮。用最低量的CH2Cl2/己烷(含有1-2滴MeOH)將殘余物重結(jié)晶，得到1.66g(30％)環(huán)己基磺酰胺白色固體1H NMR(CDCl3)δ1.11-1.37(m，3H)，1.43-1.56(m，2H)，1.67-1.76(m，1H)，1.86-1.96(m，2H)，2.18-2.28(m，2H)，2.91(tt，J＝12，3.5Hz，1H)，4.70(bs，2H)；13CNMR(CDCl3)δ25.04，25.04，26.56，62.74；MS m/e 162(M-1)-。
實(shí)施例23 新戊基磺酰胺的制備
按照制備環(huán)己基磺酰胺的方法，將49mL(37mmol)0.75M新戊基氯化鎂(Alfa)(在二乙醚中)轉(zhuǎn)變?yōu)?.52g(27％)的新戊基磺酰胺白色固體。1H NMR(CDCl3)δ1.17(s，9H)，3.12(s，2H)，4.74(brs，2H)；13CNMR(CDCl3)δ29.46，31.51，67.38；MS m/e 150(M-1)-。
實(shí)施例24 環(huán)丁基甲磺酰胺的制備
將12.3g(83mmol)環(huán)丁基甲基溴(Aldrich)和13.7g(91mmol)碘化鈉的150mL丙酮溶液回流過(guò)夜，而后冷卻至室溫。濾出無(wú)機(jī)固體，分別在環(huán)境溫度和150torr、在80℃蒸餾出丙酮和環(huán)丙基甲基碘(8.41g，46％)。
將冷卻至-78℃的4.0g(21.98mmol)環(huán)丁基甲基碘的30mL無(wú)水二乙醚(二乙醚)溶液通過(guò)導(dǎo)管加入到17mL(21.98mmol)1.3M仲丁基鋰的環(huán)己烷溶液中，攪拌該溶液5分鐘。向該混合物中通過(guò)導(dǎo)管加入冷卻至-78℃的3.0g(21.98mmol)新蒸餾的磺酰氯的110mL己烷溶液，用1小時(shí)將該混合物加熱至室溫，然后小心地真空濃縮。將該混合物再溶解在二乙醚中，用一些冰凍水洗滌一次，干燥(MgSO4)，過(guò)濾，小心地濃縮。將該混合物再溶解在30mL THF中，逐滴加入到500mL飽和NH3/THF中，攪拌過(guò)夜。真空濃縮混合物，得到粗品黃色固體，用最低量的二氯甲烷/己烷(含有1-2滴甲醇)重結(jié)晶，得到1.39g(42％)環(huán)丁基甲基磺酰胺白色固體。1H NMR(CDCl3)δ1.81-2.03(m，4H)，2.14-2.28(m，2H)，2.81-2.92(m，1H)，3.22(d，J＝7Hz，2H)，4.74(brs，2H)；13C NMR(CDCl3)δ19.10，28.21，30.64，60.93；MS m/e 148(M-1)-。
實(shí)施例25 環(huán)丙基代甲基磺酰胺的制備
使用制備環(huán)丁基甲基磺酰胺的方法，由環(huán)丙基代甲基溴(Aldrich)制備環(huán)丙基代甲基磺酰胺(參見(jiàn)JACS 1981，p.442-445)。1H NMR(CDCl3)δ0.39-0.44(m，2H)，0.67-0.76(m，2H)，1.13-1.27(m，1H)，3.03(d，J＝7.3Hz，2H)，4.74(brs，2H)；13C NMR(CDCl3)δ4.33，5.61，59.93；MS m/e134(M-1)。
實(shí)施例26 2-噻吩基磺酰胺的制備
使用Justus Liebigs Ann.Chem.，501，1933，p.174-182的方法，由2-噻吩基磺酰氯(從Aldrich購(gòu)買)制備。
實(shí)施例27 4-溴苯磺酰胺的制備
用飽和氨/THF處理商購(gòu)的4-溴磺酰氯，制備4-溴苯基磺酰胺。
實(shí)施例28 環(huán)丙烷磺酸(1-(R)-氨基-2-(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)酰胺HCl鹽的制備
步驟11(R)-叔丁氧羰基氨基-2(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羧酸的制備
向1(R)-叔丁氧羰基氨基-2(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羧酸乙酯(3.28g，13.2mmol)的THF(7mL)和甲醇(7mL)溶液中加入LiOH(1.27g，53.0mmol)的水(14mL)懸浮液。在室溫下攪拌混合物過(guò)夜，用1N NaOH(15mL)和水(20mL)淬滅。用乙酸乙酯(20mL)洗滌得到的混合物，用20mL 0.5NNaOH提取有機(jī)相。用1N HCl酸化合并的水溶液相，直到pH值4為止，用乙酸乙酯(3x40mL)提取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)提取物，干燥(MgSO4)，過(guò)濾，濃縮，得到標(biāo)題化合物白色固體(2.62g，87％)。1HNMR(DMSO-d6)δ1.22-1.26(m，1H)，1.37(s，9H)，1.50-1.52(m，1H)，2.05(q，J＝9Hz，1H)，5.04(d，J＝10Hz，1H)，5.22(d，J＝17Hz，1H)，5.64-5.71(m，1H)，7.18，7.53(s，NH(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，12.4(br s，1H))；MS m/z228(M++H)。
步驟2環(huán)丙烷磺酸(1-(R)-叔丁氧羰基氨基-2-(S)-乙烯基環(huán)丙烷羰基)-酰胺的制備
在氮?dú)夥諊校瑢⒉襟E1產(chǎn)物(2.62g，11.5mmol)和CDI(2.43g，15.0mmol)的THF(40mL)溶液回流加熱50分鐘。將該溶液冷卻至室溫，通過(guò)套管轉(zhuǎn)移到環(huán)丙基磺酰胺(1.82g，15.0mmol)的THF(10mL)溶液中。向得到的溶液中加入DBU(2.40mL，16.1mmol)，繼續(xù)攪拌20小時(shí)。用1N HCl淬滅混合物，至pH值1，真空濃縮THF。用乙酸乙酯(2x50mL)提取懸浮液，干燥(Na2SO4)合并的有機(jī)提取物，過(guò)濾，濃縮。通過(guò)用己烷-乙酸乙酯(1∶1)再結(jié)晶來(lái)進(jìn)行純化，得到標(biāo)題化合物(2.4g)白色固體。通過(guò)Biotage 40S柱純化母液(9％丙酮/二氯甲烷洗脫)，得到第二批標(biāo)題化合物(1.1g)。合并兩個(gè)批料(總收率92％)。1H NMR(DMSO-d6)δ0.96-1.10(m，4H)，1.22(dd，J＝5.5，9.5Hz，1H)，1.39(s，9H)，1.70(t，J＝5.5Hz，1H)，2.19-2.24(m，1H)，2.90(m，1H)，5.08(d，J＝10Hz，1H)，5.23(d，J＝17Hz，1H)，5.45(m，1H)，6.85，7.22(s，NH(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；MS m/z 331(M++H)。
步驟3環(huán)丙烷磺酸(1-(R)-氨基-2-(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)酰胺HCl鹽的制備
將步驟2產(chǎn)物(3.5g，10.6mmol)的二氯甲烷(35mL)和TFA(32mL)溶液在室溫下攪拌1.5小時(shí)。真空除去揮發(fā)物，將殘余物懸浮在1N HCl/二乙醚(20mL)中，真空濃縮。這種方法重復(fù)一次。用戊烷研磨得到的混合物，過(guò)濾，得到標(biāo)題化合物吸濕性的類白色固體(2.60g，92％)。1HNMR(DMSO-d6)δ1.01-1.15(m，4H)，1.69-1.73(m，1H)，1.99-2.02(m，1H)，2.38(q，J＝9Hz，1H)，2.92-2.97(m，1H)，5.20(d，J＝11Hz，1H)，5.33(d，J＝17Hz，1H)，5.52-5.59(m，1H)，9.17(br s，3H)；MS m/z 231(M++H)。
實(shí)施例29 (1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸的制備，實(shí)施例29
步驟11-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯酰)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)-羧酸甲基酯的制備
將2(S)-叔丁氧羰基氨基-8-壬烯酸(從RSP Amino Acids購(gòu)買)(3.5g，12.9mmol)的200mL DCM溶液用4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧酸甲基酯鹽酸鹽(2.15g，11.8mmol)、N-甲基嗎啉(4.25mL，38.6mmol)和HATU(5.37g，14.1mmol)順序處理。在室溫、在N2氛圍中攪拌反應(yīng)混合物3天，而后真空濃縮。將殘余物在乙酸乙酯和pH值4的緩沖液(苯二甲酸氫鹽)之間分配。用飽和NaHCO3水溶液洗滌有機(jī)相，干燥(MgSO4)，真空濃縮，得到粗品。進(jìn)行快速色譜(50％乙酸乙酯/己烷至100％乙酸乙酯)，得到4.7g(～100％)的1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯酰)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)-羧酸甲基酯無(wú)色油1H NMR(500MHz，CD3OD)δ1.33-1.50(m，8H)，1.46(s，9H)，1.57(m，1H)，1.72(m，1H)2.08(m，2H)，2.28(m，1H)，3.72(s，3H，)3.75-3.87(m，2H)，4.36(m，1H)，4.51(bs，1H)，4.57(t，J＝8.2Hz，1H)，4.95(d，J＝10.4Hz，1H)，5.01(m，1H)，5.83(m，1H)；MS m/z399(M++1)。
步驟21-{[1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯酰)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)羰基]-(1R)-氨基}-2(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羧酸乙酯的制備
將1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯酰)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)-羧酸甲基酯(4.7g，11.8mmol)溶于THF(80mL)、甲醇(20mL)和水(40mL)中。加入粉末氫氧化鋰(5.6g，233mmol)。在室溫、在N2氛圍中攪拌淺黃色漿液16小時(shí)，而后真空濃縮。將殘余物在醚和水之間分配。除去乙醚相，用1N HCl處理水相，直到pH值4為止。用EtOAc(3x)提取該酸性溶液。將合并的EtOAc提取物干燥(MgSO4)，真空濃縮，得到4.36g(96％)1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-8-壬烯?；?-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)-羧酸白色固體。然后將該酸溶于150mL的DMF中，加入(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽(2.61g，13.6mmol)、N-甲基嗎啉(2.5mL，22.6mmol)和HATU(5.2g，13.7mmol)。在室溫、在N2氛圍中攪拌反應(yīng)混合物16小時(shí)，而后真空濃縮。將殘余物在乙酸乙酯和pH值4的緩沖液(苯二甲酸氫鹽)之間分配。用飽和NaHCO3水溶液洗滌有機(jī)相，干燥(MgSO4)，真空濃縮，得到粗品。進(jìn)行快速色譜(60％-80％乙酸乙酯/己烷)，得到6.0g(98％)1-{[1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯酰)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)羰基]-(1R)-氨基}-2(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羧酸乙酯白色固體1HNMR(500MHz，CD3OD)δ1.25(t，J＝7.2Hz，3H)，1.33-1.80(m，10H)，1.46(s，9H)，2.09(m，3H)，2.25(m，2H)，3.76(m，2H)，4.14(m，2H)，4.27(dd，J＝8.5，5.2Hz，1H)，4.50(m，2H)，4.94(d，J＝10.1Hz，1H)，5.01(dd，J＝17.1，1.8Hz，1H)，5.11(dd，J＝10.4，1.8Hz，1H)，5.30(d，J＝15.6Hz，1H)，5.80(m，2H)，8.57(s，1H)；MS m/z 522(M++1)。
步驟3(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯的制備
將1-{[1-(2(S)-叔丁氧羰基-氨基-壬-8-烯酰)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)羰基]-(1R)-氨基}-2(S)-乙烯基環(huán)丙烷-羧酸乙酯(800mg，1.53mmol)的2L二氯甲烷溶液用N2吹掃0.5小時(shí)。然后加入三環(huán)己基膦[1，3-雙(2，4，6-三甲基-苯基)-4，5-二氫咪唑-2-亞基][亞芐基]-二氯化釕(IV)(Strem)(64mg，0.075mmol)，用N2再吹掃混合物10分鐘。將該淡橙色均勻溶液回流2小時(shí)，得到暗橙色溶液。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，真空濃縮，得到橙色油。進(jìn)行快速色譜(乙酸乙酯)，得到460mg(61％)(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜三環(huán)[14.3.0.04，6]-十九-7-烯-4-羧酸乙酯灰色固體。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ1.19(t，J＝7.2Hz，3H)，1.42(s，9H)，1.22-1.8(m，8H)，1.87(m，2H)，2.03-2.22(m，4H)，2.63(m，1H)，3.65(m，1H)，4.09(m，3H)，4.45(m，1H)，4.56(s，1H)，4.82(m，1H)，5.23(m，1H)，5.51(s，1H)，7.16(s，1H)；MS m/z 494(M++1)。
步驟4(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜三環(huán)[14.3.0.04，6]-十九-7-烯-4-羧酸
向(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜三環(huán)[14.3.0.04，6]-十九-7-烯-4-羧酸乙酯(493mg，1.0mmol)的THF(4mL)、甲醇(1mL)和水(2mL)溶液中加入粉末氫氧化鋰(480mg，20mmol)，并在室溫、在N2氛圍中攪拌該淺黃色漿液16小時(shí)。然后真空濃縮混合物，并將殘余物在醚和水之間分配。除去乙醚相，用1N HCl處理水相，直到pH值4為止。用EtOAc提取該酸性溶液三次。將合并的EtOAc提取物干燥(MgSO4)，真空濃縮，得到460mg(98％)實(shí)施例18，(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜三環(huán)[14.3.0.04，6]-十九-7-烯-4-羧酸灰色固體。1HNMR(500MHz，CD3OD)δppm 1.26(t，J＝7.2Hz，3H)，1.35-1.52(m，15H)，1.57-1.68(m，3H)，1.79(m，1H)，2.04(m，1H)，2.16-2.41(m，3H)，3.80(dd，J＝10.7，4.3Hz，1H)，3.88(m，1H)，4.38(dd，J＝8.9，3.1Hz，1H)，4.55(m，2H)，5.39(t，J＝9.8Hz，1H)，5.58(m，1H)；MS m/z 466(M++1)。
實(shí)施例30 (4-環(huán)丙烷磺?；被驶?18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基)-氨基甲酸叔丁基酯的制備
步驟11-{[1-(2-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯酰)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯的制備
向1-{[1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯酰)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)羰基]-(1R)-氨基}-2(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羧酸乙酯(1.5g，2.87mmol)的10mLDMF混合物中加入咪唑(0.25g，3.67mmol)和叔丁基-二甲基甲硅烷基氯(516mg，3.44mmol)。將混合物在室溫?cái)嚢鑳商?。然后真空濃縮反應(yīng)混合物，將殘余物溶于乙酸乙酯中。用水洗滌此溶液，用硫酸鎂干燥，真空濃縮，獲得粗品固體。用快速色譜純化(用20％乙酸乙酯/己烷洗脫)，得到1.43g(78％)1-{[1-(2-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯酰)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯白色固體。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ0.10(s，6H)，0.89(s，9H)，1.22(m，3H)，1.31-1.48(m，16H)，1.50-1.75(m，3H)，2.06(m，3H)，2.11-2.33(m，2H)，3.70(m，2H)，4.03-4.19(m，2H)，4.21(m，1H)，4.45(t，J＝7.87Hz，1H)，4.59(m，1H)，4.91(d，J＝9.15Hz，1H)，4.98(d，J＝17.20Hz，1H)，5.08(dd，J＝10.25，1.83Hz，1H)，5.27(dd，J＝17.38，1.65Hz，1H)，5.65-5.87(m，2H)；MS m/z 636(M++1)。
步驟214-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯的制備
向1-{[1-(2-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯酰)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-2-乙烯基-環(huán)丙烷羧酸乙酯(1.63g，2.56mmol)的640mL二氯甲烷溶液中加入215mg(0.26mmol)三環(huán)己基膦[1，3-二(2，4，6-三[亞芐基]二氯化釕(IV)。將混合物回流加熱15分鐘。真空濃縮殘余物，而后用快速色譜純化，用30％乙酸乙酯/己烷洗脫。為了將樣品進(jìn)一步脫色，再次將粗品色譜分離，用50％醚/己烷洗脫，得到1.5g(96％)14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯白色固體。1HNMR(500MHz，CD3Cl)δ0.06(s，3H)，0.07(s，3H)，0.86(s，9H)，1.18-1.24(m，6H)，1.34-1.64(m，14H)，1.86-1.96(m，3H)，2.02-2.09(m，1H)，2.11-2.17(m，1H)，2.19-2.28(m，1H)，2.57-2.63(m，1H)，3.50-3.54(m，1H)，3.71(dd，J＝10.22，6.26Hz，1H)，4.06-4.17(m，2H)，4.52-4.58(m，2H)，4.75(d，J＝8.55Hz，1H)，5.21(t，J＝9.92Hz，1H)，5.35(d，J＝7.63Hz，1H)，5.45-5.50(m，1H)，6.94(s，1H)；MS m/z 608(M++1)。
步驟314-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸的制備
向14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯(1.5g，2.47mmol)的THF(4mL)、甲醇(1mL)和水(2mL)混合溶劑系統(tǒng)的溶液中加入粉末氫氧化鋰一水合物(1.0g，50mmol)。在室溫、在N2氛圍中攪拌淺黃色漿液4小時(shí)。然后真空濃縮混合物，并將殘余物在醚和水之間分配。除去乙醚相，用1N HCl處理水相，直到pH值4為止。用EtOAc提取該酸性溶液(三次)。將合并的EtOAc提取物干燥(MgSO4)，真空濃縮，得到1.2g(84％)14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸類白色固體。1H NMR(300MHz，CD3OD)0.12(s，6H)，0.89(s，9H)，1.23-1.64(m，17H)，1.70-1.87(m，1H)，1.90-2.49(m，6H)，3.70-3.80(m，1H)，3.83-3.90(m，1H)，4.28-4.36(m，1H)，4.47-4.55(m，1H)，4.65(s，1H)，5.30-5.39(m，1H)，5.53-5.62(m，1H)；MS m/z 580(M++1)。
步驟4[18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-4-環(huán)丙烷磺?；被驶?2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]-氨基甲酸叔丁基酯的制備
將14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸(500mg，0.86mmol)溶于25mL THF中，并用CDI(180mg，1.12mmol)處理。(必須小心，使用烘干的玻璃器皿，避免濕潤(rùn)，保持干燥N2氛圍)。將反應(yīng)混合物回流2小時(shí)之后，將其冷卻至室溫，用環(huán)丙基磺酰胺(135mg，1.12mmol)和DBU(170mg，1.12mmol)順序處理。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去THF。將殘余物在乙酸乙酯和pH值4的緩沖液之間分配。干燥(MgSO4)有機(jī)相，真空濃縮，得到粗品。然后用快速色譜純化(用33％乙酸乙酯/己烷洗脫)，得到300mg(51％)[18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-4-環(huán)丙烷磺酰基氨基羰基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]-氨基甲酸叔丁基酯白色固體。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1H 0.07(s，3H)，0.08(s，3H)，0.85(s，9H)，0.87-1.49(m，21H)，1.73-1.95(m，3H)，2.08-2.16(m，1H)，2.25-2.36(m，2H)，2.42-2.56(m，1H)，2.85-2.93(m，1H)，3.65-3.74(dd，J＝10.61，3.66Hz，1H)，3.89(d，J＝10.25Hz，1H)，4.34(m，J＝9.70，9.70Hz，1H)，4.43(t，J＝7.87Hz，1H)，4.57(s，1H)，4.94-5.01(m，1H)，5.10(d，J＝8.78Hz，1H)，5.66-5.75(m，1H)，6.55(s，1H)，10.13(s，1H)；MS m/z 683(M++1)。
步驟5實(shí)施例19，(4-環(huán)丙烷磺?；被驶?18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基)-氨基甲酸叔丁基酯的制備
向[18-(叔丁基-二甲基硅烷基氧基)-4-環(huán)丙烷磺?；被驶?2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]-氨基甲酸叔丁基酯(330mg，0.48mmol)的25mL THF混合物中加入氟化四丁銨(150mg，0.54mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?8小時(shí)，而后通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去THF。將殘余物在乙酸乙酯和水之間分配。干燥(MgSO4)有機(jī)相，真空濃縮，得到粗品。然后通過(guò)用己烷研磨來(lái)純化，得到200mg(73％)(4-環(huán)丙烷磺?；被驶?18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基)-氨基甲酸叔丁基酯，實(shí)施例19，白色固體。1H NMR(500MHz，CD3Cl)δ1.87-1.64(m，21H)，1.70-1.98(m，3H)，2.15-2.56(m，5H)，2.85-2.94(m，1H)，3.71(d，J＝13.91Hz，1H)，4.10-4.26(m，2H)，4.51(t，J＝7.87Hz，1H)，4.62(s，1H)，4.98(m，1H)，5.06(d，J＝8.78Hz，1H)，5.64-5.71(m，1H)，6.72(s，1H)，10.24(s，1H)；MS m/z 569(M++1)。
使用實(shí)施例29和30中所描述的方法，制備下列大環(huán)的醇中間體
使用實(shí)施例29和30中所描述的方法，可以制備下列大環(huán)的醇中間體
實(shí)施例31 實(shí)施例31，2(S)-叔丁氧羰基氨基-3-戊-4-烯基硫基丙酸的制備
步驟1二在室溫，向N-Boc-半胱氨酸甲基酯(3.36g，0.014mol)的甲醇(166mL)溶液中加入三乙胺(10.8mL)和1-溴戊-4-烯(3.19g，21mmol，1.5當(dāng)量)，在室溫下將得到的溶液攪拌過(guò)夜。然后真空濃縮混合物，將得到的殘余混合物用快速色譜純化(己烷、乙酸乙酯梯度)，提供1.76g(41％)所需要的硫醚。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ1.43(s，9H)，1.64(m，2H)，2.11(m，2H)，2.51(m，2H)，2.95(m，2H)，3.75(s，3H)，4.51(m，1H)，4.95-5.03(m，2H)，5.34(m，1H)，5.80(1H，m)；MS m/z 304(M++1)。
步驟2將步驟1的硫醚產(chǎn)物(9.51g，31.4mmol)加入到1M LiOH/水(200mL)和THF(200mL)的混合物中，在室溫下將得到的混合物攪拌過(guò)夜。然后使用1N鹽酸將反應(yīng)混合物酸化，用乙酸乙酯將得到的混合物提取若干次。合并提取物，用硫酸鎂干燥，真空濃縮，提供所需要的酸，實(shí)施例20，其可以在下一個(gè)反應(yīng)中原態(tài)使用。
實(shí)施例32 實(shí)施例32，N-叔丁氧羰基-3-(4-戊烯基硫基)-L-纈氨酸的制備
步驟1N-叔丁氧羰基-3-(4-戊烯基硫基)-L-纈氨酸甲基酯的制備
在室溫下，向7.12g(48mmol，1.0eq)L-3-巰基纈氨酸的100mL 1，4-二噁烷和25mL水的溶液中加入9.60ml(96mmol，2.0eq)10N氫氧化鈉水溶液，而后用幾分鐘逐滴加入12.00mL(101mmol，2.1eq)5-溴-1-戊烯。在室溫下將得到的混合物攪拌68小時(shí)。此時(shí)，加入12.50g(57mmol，1.2eq)二碳酸二叔丁基酯，在室溫下另外攪拌混合物6小時(shí)。真空濃縮混合物，將殘余物溶于水中。用二乙醚洗滌含水混合物，使用1N鹽酸調(diào)節(jié)至pH值3，而后用乙酸乙酯提取。用鹽水洗滌合并的提取物，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，真空濃縮。
將粗品(12.20g)溶于120mL無(wú)水二甲亞砜中。向此溶液中加入10.50g(76mmol)碳酸鉀和4.70mL(76mmol)碘甲烷，在室溫下將得到的混合物攪拌24小時(shí)。用水稀釋反應(yīng)混合物，用乙酸乙酯提取。用水(2X)和鹽水洗滌合并的提取物，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。進(jìn)行硅膠柱色譜(洗脫2-10％乙酸乙酯/己烷)，提供8.54g N-叔丁氧羰基-3-(4-戊烯基硫基)-L-纈氨酸甲基酯無(wú)色油。NMR(300MHz，CDCl3)δ5.76(d of d of t，1H，J＝17.2，10.3，6.6Hz)，5.35(br d，1H，J＝9.0Hz)，5.05-4.94(m，2H)，4.27(br d，1H，J＝9.0Hz)，3.73(s，3H)，2.52(m，2H)，2.13(四重峰，2H，J＝7.3Hz)，1.61(五重峰，2H，J＝7.3Hz)，1.43(s，9H)，1.35(s，3H)，1.33(s，3H)。
步驟2實(shí)施例32，N-叔丁氧羰基-3-(4-戊烯基硫基)-L-纈氨酸的制備
在室溫下，向8.52g(25.7mmol)N-叔丁氧羰基-3-(4-戊烯基硫基)-L-纈氨酸甲基酯的200mL四氫呋喃溶液中加入1.10g(26.2mmol)氫氧化鋰一水合物的50mL水溶液。在室溫下將得到的混合物攪拌65小時(shí)。然后向反應(yīng)混合物中加入28mL 1.00N鹽酸。用二乙醚稀釋混合物，用水(3X)和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮，得到8.10gN-叔丁氧羰基-3-(4-戊烯基硫基)-L-纈氨酸無(wú)色油。NMR(300MHz，CDCl3)δ5.75(d of d of t，1H，J＝17.2，10.3，6.6Hz)，5.40(br s，1H)，5.05-4.94(m，2H)，4.28(br s，1H)，2.56(m，2H)，2.13(四重峰，2H，J＝7.3Hz)，1.63(五重峰，2H，J＝7.3Hz)，1.44(s，9H)，1.39(s，3H)，1.37(s，3H)。
實(shí)施例33 實(shí)施例33，5-烯丙氧基-2(S)-(叔丁氧羰基氨基)戊酸的制備
步驟1吡咯烷-5-酮-2(S)-羧酸異丙基酯的制備
使用改變的迪安-斯達(dá)克榻分離器(通過(guò)充滿4

分子篩的索氏抽提器進(jìn)行冷凝物回流)，在氮?dú)夥諊校瑢-焦谷氨酸(Aldrich，25.0g，195mmol)和對(duì)甲苯磺酸單水合物(3.71g，19.5mmol)的溶液在異丙醇(40mL)中回流6小時(shí)。冷卻至室溫后，用醚稀釋反應(yīng)，用飽和碳酸氫鈉水溶液、而后飽和NaCl水溶液洗滌，干燥(MgSO4)，蒸發(fā)，得到無(wú)色漿液。放置后結(jié)晶。在己烷中研磨晶體殘余物，提供31.9g(96％)吡咯烷-5-酮-2(S)-羧酸異丙基酯白色棱晶1H NMR(300MHz，氯仿-D)δ6.35(br s，1H)，5.04(sept..1H，J＝6.2Hz)，4.18(dd，1H，J＝8.4，5.3Hz)，2.51-2.28(m，3H)，2.27-2.12(m，1H)，1.24(d，6H，J＝6.2Hz)..LCMS m/z 172(M+H)+。
步驟21-(叔丁氧羰基)-吡咯烷-5-酮-2(S)-羧酸異丙基酯的制備
在室溫下，在N2氛圍中，將吡咯烷-5-酮-2(S)-羧酸異丙基酯(步驟26A的產(chǎn)物，31.9g，188mmol)、二碳酸二叔丁基酯(48.6g，225mmol)和DMAP(2.30g，8.8mmol)的乙腈(300mL)溶液攪拌30分鐘。將反應(yīng)蒸發(fā)至大約100mL，用醚稀釋，用1N HCl、然后飽和NaCl水溶液洗滌，干燥(MgSO4)，蒸發(fā)，得到1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-5-酮-2(S)羧酸異丙基酯淺黃色油，50.1g(99％)1H NMR(300MHz，氯仿-D)δ5.06(sept.1H，J＝6.2Hz)，4.53(dd，1H，J＝9.5，2.9Hz)，2.66-2.40(m，2H)，2.36-2.22(m，1H)，2.03-1.93(m，1H)，1.47(s，9H)，1.26(d，3H，J＝6.2Hz)，1.24(d，3H，J＝6.2Hz)..LCMS m/z 272(M+H)+。
步驟32(S)-(叔丁氧羰基氨基)-5-羥基戊酸異丙基酯的制備
用1.5小時(shí)向1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-5-酮-2(S)-羧酸異丙基酯(步驟26B的產(chǎn)物，49.5g，183mmol)的甲醇(300mL)溶液中加入～1g份額的硼氫化鈉(10.0g，263mmol)。在氮?dú)夥諊辛硗鈹嚢璺磻?yīng)10分鐘。用水稀釋，用醚提取，用飽和NaCl水溶液洗滌合并的有機(jī)餾份，干燥(MgSO4)，蒸發(fā)，得到淺黃色油。進(jìn)行快速色譜(硅膠，20-30％乙酸乙酯/己烷)，得到31.8g(64％)2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-5-羥基戊酸異丙基酯無(wú)色漿液1H NMR(300MHz，氯仿-D)δ5.16(br d，1H，J＝7.3Hz)，5.03(sept.，1H，J＝6.2Hz)，4.28(br d，1H，J＝6.2Hz)，3.67(br dd，J＝10.2，5.5Hz)，1.94-1.79(m，2H)，1.76-1.67(m，1H)，1.66-1.56(m，2H)，1.43(s，9H)，1.25(d，3H，J＝6.2Hz)，1.23(d，3H，J＝6.2Hz).LCMS m/z276(M+H)+。
步驟4異丙基-5-烯丙氧基-2(S)-(叔丁氧羰基氨基)戊酸酯的制備
在氮?dú)夥諊?，?(S)-(叔丁氧羰基氨基)-5-羥基戊酸異丙基酯(步驟26C的產(chǎn)物，17.6g，63.9mmol)、烯丙基甲基碳酸酯(24.0mL，213mmol)、Pd2(dba)3(1.62g，1.78mmol)和BINAP(4.42g，7.10mmol)的THF(150mL)脫氣混合物回流3小時(shí)。冷卻至室溫后，用醚稀釋反應(yīng)，通過(guò)硅藻土過(guò)濾，蒸發(fā)，得到暗褐色漿液。對(duì)殘余物進(jìn)行快速色譜(硅膠，30％醚/己烷)，得到5-烯丙氧基-2(S)-(叔丁氧羰基氨基)戊酸異丙基酯粘稠的無(wú)色油，16.3g(81％)1H NMR(300MHz，氯仿-D)δ5.88(ddt，1H，17.4，10.4，5.5)，5.28(m，1H)，5.22-5.11(m，1H)，5.02(sept.，1H，J＝6.2Hz)，4.21(br t，1H，J＝6.7Hz)，3.94(dt，2H，J＝5.9，1.5Hz)，3.42(t，2H，J＝5.9Hz)，1.90 1.82(m，1H)，1.751.57(m，3H)，1.42(s，9H)，1.21(d，3H，J＝6.2Hz)，1.19(d，3H，J＝6.2Hz)..LCMS m/z 316(M+H)+。
步驟5實(shí)施例33，5-烯丙氧基-2(S)-(叔丁氧羰基氨基)戊酸的制備
在室溫下，在氮?dú)夥諊校瑢?-烯丙氧基-2(S)-(叔丁氧羰基氨基)戊酸異丙基酯(步驟26D的產(chǎn)物，16.1g，51.1mmol)和氫氧化鋰水合物(4.19g，102mmol)的混合物在THF/水(100mL/20mL)中攪拌16小時(shí)。用水稀釋反應(yīng)，用醚洗滌，將水溶液餾份的pH值調(diào)節(jié)至～4，用醚提取，用飽和NaCl洗滌合并的有機(jī)餾份，干燥(MgSO4)，蒸發(fā)，得到5-烯丙氧基-2(S)-(叔丁氧羰基氨基)戊酸淺黃色漿液1H NMR(300MHz，氯仿-D)δ5.89(ddt，1H，J＝17.4，10.4，5.5)，5.25(dd，1H，J＝17.4，1.6Hz)，5.17(dd，1H，J＝10.4，1.6Hz)，4.30(br d，1H，J＝6.2)，3.96(dt，2H，J＝5.9，1.5Hz)，3.46(t，2H，J＝5.9Hz)，1.961.86(m，1H)，1.851.77(m，1H)，1.751.64(m，2H)，1.43(s，9H)..LCMS m/z 274(M+H)+。
實(shí)施例34 制備實(shí)施例34的一般方法
如下制備實(shí)施例23將N-三苯甲基保護(hù)的蘇氨酸的DMF溶液加入到氫化鈉的DMF溶液(冷卻至-15℃)中。在-15℃攪拌反應(yīng)混合物30分鐘，而后加入5-溴-1-戊烯，將得到的混合物加熱至-5℃。在-5℃保持反應(yīng)混合物3天，而后通過(guò)加入1N HCl水溶液來(lái)猝滅反應(yīng)，使用如上所述的標(biāo)準(zhǔn)提取方法進(jìn)行后處理。利用標(biāo)準(zhǔn)色譜方法，獲得純式的實(shí)施例23。
實(shí)施例35 實(shí)施例35，N-叔丁氧羰基-O-(4-戊烯基)-L-絲氨酸的制備
步驟1N-叔丁氧羰基-O-(4-戊烯基)-L-絲氨酸甲基酯的制備
在室溫下，向10.26g(50mmol，1.0eq)N-叔丁氧羰基-L-絲氨酸的500mL無(wú)水二甲亞砜溶液中加入2.00g(50mmol，1.0eq)60％氫化鈉/礦物油。在室溫下攪拌該混合物0.5小時(shí)，直到停止放出氣體為止。向得到的溶液中加入6.00mL(50mmol，1.0eq)5-溴-1-戊烯，接著立即加入另外2.00g(50mmol，1.0eq)60％氫化鈉/礦物油。然后將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。用2000mL水稀釋混合物，通過(guò)加入50mL 1.00N鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至3-4，用乙酸乙酯提取。用水(2X)和鹽水洗滌有機(jī)相，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。除去殘余礦物油，將得到的物質(zhì)溶于稀氫氧化鈉水溶液中。用己烷洗滌水溶液，而后使用鹽酸調(diào)節(jié)至pH值4，用乙酸乙酯提取。用水(2X)和鹽水洗滌提取物，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。
將粗品(7.70g)溶于100mL無(wú)水二甲亞砜中。向此溶液中加入7.80g(56mmol)碳酸鉀和3.50mL(56mmol)碘甲烷，在室溫下將得到的混合物攪拌24小時(shí)。用水稀釋反應(yīng)混合物，用乙酸乙酯提取。用水(2X)和鹽水洗滌合并的提取物，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。進(jìn)行硅膠柱色譜(洗脫2-10％乙酸乙酯/己烷)，提供6.70g N-叔丁氧羰基-O-(4-戊烯基)-L-絲氨酸甲基酯無(wú)色油。NMR(300MHz，CDCl3)δ5.78(dof d oft，1H，J＝17.2，10.2，6.6Hz)，5.34(br d，1H，J＝8.0Hz)，5.03-4.92(m，2H)，4.40(m，1H)，3.81(d of d，1H，J＝9.5，2.9Hz)，3.74(s，3H)，3.61(d ofd，1H，J＝9.5，3.5Hz)，3.42(m，2H)，2.06(四重峰，2H，J＝7.3Hz)，1.61(五重峰.，2H，J＝7.3Hz)，1.44(s，9H)。
步驟2實(shí)施例35，N-叔丁氧羰基-O-(4-戊烯基)-L-絲氨酸的制備
在室溫下，向6.65g(23mmol)N-叔丁氧羰基-O-(4-戊烯基)-L-絲氨酸甲基酯的500mL四氫呋喃溶液中加入1.95g(46mmol)氫氧化鋰一水合物的100mL水溶液。在室溫下將得到的混合物攪拌40小時(shí)。然后向反應(yīng)混合物中加入46mL 1.00N鹽酸。用乙酸乙酯稀釋混合物，用水(3X)和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮，得到6.30g N-叔丁氧羰基-O-(4-戊烯基)-L-絲氨酸無(wú)色油。..NMR(300MHz，CDCl3)δ5.77(dof d oft，1H，J＝17.2，10.2，6.6Hz)，5.37(br d，1H，J＝8.0Hz)，5.03-4.92(m，2H)，4.42(m，1H)，3.87(d of d，1H，J＝9.5，2.6Hz)，3.63(d of d，1H，J＝9.5，4.0Hz)，3.45(t，2H，J＝6.6Hz)，2.07(四重峰，2H，J＝7.3Hz)，1.64(五重峰，2H，J＝7.3Hz)，1.44(s，9H)。
實(shí)施例36 實(shí)施例36，(S)-4-烯丙氧基-2-(叔丁氧羰基氨基)丁酸的制備
在0℃，向氫化鈉(913mg，22.8mmol)的DMF混合物中加入N-t-Boc-L-高絲氨酸(2g，9.13mmol)。在0℃攪拌該反應(yīng)混合物15分鐘，而后加入烯丙基溴(1.38g，11.4mmol)。將混合物升溫至室溫，攪拌2小時(shí)。然后將其真空濃縮。用水稀釋殘余物，用己烷和醚順序洗滌。除去有機(jī)層，用1N HCl將水層小心地調(diào)節(jié)至pH值3。用乙酸乙酯提取該酸性水溶液。干燥(MgSO4)有機(jī)相，真空濃縮，得到2.2g(93％)(S)-4-烯丙氧基-2-(叔丁氧羰基氨基)丁酸無(wú)色油。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.42(s，9H)，1.80-1.90(m，1H)，2.04-2.16(m，1H)，3.50-3.54(m，2H)，3.97(d，J＝4.39Hz，2H)，4.23(dd，J＝8.78，4.39Hz，1H)，5.15(d，J＝10.25Hz，1H)，5.26(dd，J＝17.38，1.65Hz，1H)，5.84-5.97(m，1H)。
實(shí)施例37 實(shí)施例37，(S)-2-(叔丁氧羰基)-3-(2-硝基-N-(戊-4-烯基)苯基磺酰氨基)丙酸的制備
步驟13-氨基-2(S)-(叔丁氧羰基氨基)丙酸甲酯的制備
向i(Boc-DAP-OH)(3.0g 14.7mmol)的50mL二氯甲烷混合物中加入5mL甲醇。向此溶液中慢慢地加入(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷(2M，在醚中，7.9mL，15.8mmol)。在室溫?cái)嚢杌旌衔?小時(shí)，直到所有固體溶解為止，該溶液變成淺黃色。然后將其濃縮，得到3.2g(99％)3-氨基-2(S)-(叔丁氧羰基氨基)丙酸甲酯ii無(wú)色油。1H NMR(CD3OD，300MHz)δ1.46(s，9H)，2.82-3.00(m，2H)，3.71(s，3H)，4.14(brs，1H)。
2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-(2-硝基苯基磺酰氨基)丙酸甲酯iii的制備
向3-氨基-2(S)-(叔丁氧羰基氨基)丙酸甲酯ii(1.6g，7.3mmol)的DCM(50mL)混合物中加入DIPEA(1.64mL，9.4mmol)和2-硝基苯磺酰氯(1.62g，7.3mmol)。將混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。然后將其濃縮，溶于乙酸乙酯中，然后將其用飽和碳酸氫鈉、鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥。然后將其過(guò)濾，濃縮，得到2.9g(98％)2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-(2-硝基苯基磺酰氨基)丙酸甲酯iii黃色泡沫。1H NMR(CD3OD，300MHz)δ1.41(s，9H)，3.36-3.51(m，2H)，3.71(s，3H)，4.22(m，1H)，7.80-7.90(m，3H)，8.07-8.10(m，1H)。
2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-(2-硝基-N-(戊-4-烯基)苯基磺酰氨基)丙酸甲酯iv的制備
向2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-(2-硝基苯基磺酰氨基)丙酸甲酯iii(150mg，0.37mmol)的3mL DMF的混合物中加入碳酸鉀(102mg，0.74mmol)。在室溫?cái)嚢柙摶旌衔?0分鐘，而后加入5-溴-1-戊烯(65μL，0.55mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2天。然后過(guò)濾，濃縮，通過(guò)硅膠色譜純化(用25％乙酸乙酯/己烷洗脫)，得到75mg(43％)2(S)-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(2-硝基-N-(戊-4-烯基)苯基磺酰氨基)丙酸甲酯iv黃色固體。1H NMR(CD3OD，300MHz)δ1.42(s，9H)，1.54-1.64(m，2H)，1.97(q，J＝7.20Hz，2H)，3.37(m，2H)，3.57-3.80(m，2H)，3.72(s，3H)，4.42(dd，J＝8.60，5.31Hz，1H)，4.91-5.01(m，2H)，5.69-5.79(m，1H)，7.75-7.85(m，3H)，8.04(m，1H)；MS m/z 372(M++1-Boc)。
實(shí)施例37，2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-(2-硝基-N-(戊-4-烯基)苯基磺酰氨基)丙酸v的制備
將(S)-2-(叔丁氧羰基)-3-(2-硝基-N-(戊-4-烯基)苯基磺酰氨基)-丙酸甲基酯iv(500mg，1.06mmol)溶于下列混合溶劑系統(tǒng)中THF(4ml)、甲醇(1mL)和水(2mL)。加入粉末氫氧化鋰(250mg，10.4mmol)。在室溫?cái)嚢柙摐\黃色漿液15小時(shí)，而后真空濃縮。將殘余物在醚和水之間分配。除去乙醚相，用1N HCl處理水相，直到pH值4為止。用乙酸乙酯提取該酸性溶液四次。將合并的乙酸乙酯提取物干燥(MgSO4)，真空濃縮，得到430mg(89％)2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(2-硝基-N-(戊-4-烯基)苯基磺酰氨基)丙酸(實(shí)施例26)黃色油。1H NMR(CD3OD，300MHz)δ1.38(s，9H)，1.51-1.60(m，2H)，1.89-1.98(m，2H)，3.28-3.32(m，2H)，3.59-3.64(dd，J＝14.95，9.46Hz，1H)，3.71-3.74(m，1H)，4.33(dd，J＝9.61，4.43Hz，1H)，4.87-4.94(m，2H)，5.63-5.72(m，1H)，7.71-7.77(m，3H)，8.01(dd，J＝7.48，1.37Hz，1H)；MS m/z 358(M++1-Boc)。
實(shí)施例86 (1S，4R，6S，14S，18R)-[7-順式-4-環(huán)丙烷磺?；被驶?12-環(huán)丙基-18-羥基-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]氨基甲酸叔丁基酯(實(shí)施例86)的制備
步驟1N-(戊-4-烯基)環(huán)丙胺的合成。
使用加入漏斗，用5分鐘的時(shí)間，將5-溴戊烯(15.75g，106mmol)的50mL甲醇溶液加入到環(huán)丙胺(20.6g，361mmol)的200mL甲醇溶液中。在室溫?cái)嚢璐巳芤?2小時(shí)，此時(shí)回流1小時(shí)。蒸餾除去甲醇和過(guò)量環(huán)丙胺。將殘余物(產(chǎn)物的氫溴酸鹽)在醚和4N NaOH之間分配。用醚(2x)洗滌水相。將合并的乙醚提取物干燥(MgSO4)，過(guò)濾，濃縮，得到8g(60％)N-(戊-4-烯基)環(huán)丙胺黃色油1H NMR(500MHz，CDCl3)δ0.31-0.36(m，2H)0.40-0.46(m，2H)1.53-1.63(m，2H)1.87(brs，1H)2.05-2.10(m，2H)2.10-2.14(m，1H)2.69(t，J＝7.32Hz，2H)4.91-5.07(m，2H)5.72-5.88(m，1H)。
步驟22(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-[N-環(huán)丙基-N-(戊-4-烯基)氨基]丙酸的合成
將N-(戊-4-烯基)環(huán)丙胺(668mg，5.30mmol)的20mL乙腈混合物加入到N-叔丁氧羰基-L-絲氨酸β-內(nèi)酯(1.0g，5.30mmol)的40mL乙腈漿液中。在N2氛圍中、在室溫?cái)嚢柙摶旌衔?天，而后真空濃縮，得到粗品2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-[N-環(huán)丙基-N-(戊-4-烯基)氨基]丙酸。該物質(zhì)不用純化就可以在步驟3中使用。LC-MS(Phenomenex 10微摩爾(“μm”)C 18HPLC柱3.0x50mm長(zhǎng)度。梯度100％溶劑A/0％溶劑B至0％溶劑A/100％溶劑B。梯度時(shí)間3min。停留時(shí)間1min。流速4mL/min。檢測(cè)器波長(zhǎng)220nM。溶劑A10％MeOH/90％ H2O/0.1％TFA。溶劑B10％H2O/90％ MeOH/0.1％TFA。(保留時(shí)間2.50min)，MS m/z 313(M++1)。
步驟31(R)-[1-[2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-[N-環(huán)丙基-N-(戊-4-烯基)氨基]丙酰基]-4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧酰胺]-2(S)-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯的合成。

將2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-[N-環(huán)丙基-N-(戊-4-烯基)氨基]丙酸(1.47g，4.71mmol)的20mL DCM溶液用1(R)-[4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧酰胺]-2(S)-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽(在實(shí)施例5中制備)(1.44g，4.71mmol)、N-甲基嗎啉(1.80mL，16.34mmol)和HATU(2.14g，5.53mmol)順序處理。在室溫、在N2氛圍中攪拌反應(yīng)混合物3小時(shí)，而后真空濃縮。將殘余物溶于水中，加入1N HCl，直到pH值＝5為止。用EtOAc(3x)提取水溶液。用飽和NaHCO3水溶液洗滌有機(jī)相，干燥(MgSO4)，真空濃縮，得到粗品。進(jìn)行快速色譜(50％乙酸乙酯/己烷至100％乙酸乙酯)，得到1.55g(58％)1(R)-[1-[2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-[N-環(huán)丙基-N-(戊-4-烯基)氨基]丙酰基]-4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧酰胺]-2(S)-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯白色泡沫 LC-MS(Phenomenex-Luna S10 HPLC柱3.0x50mm長(zhǎng)度。梯度100％溶劑A/0％溶劑B至0％溶劑A/100％溶劑B。梯度時(shí)間2min。停留時(shí)間1min。流速4mL/min。檢測(cè)器波長(zhǎng)220nM。溶劑A10％MeOH/90％H2O/0.1％TFA。溶劑B10％H2O/90％MeOH/0.1％TFA)。(保留時(shí)間1.38min)，MS m/z 564(M+61)。
步驟41(R)-[1-[2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-[N-環(huán)丙基-N-(戊-4-烯基)氨基]丙?；鵠-4(R)-(叔丁基二甲基硅基氧基)吡咯烷-2(S)-羧酰胺]-2(S)-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯的合成。

向1(R)-[1-[2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-[N-環(huán)丙基-N-(戊-4-烯基)氨基]丙?；鵠-4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧酰胺]-2(S)-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(1.55g，2.75mmol)的10mL DMF的混合物中加入咪唑(0.47g，6.88mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(826mg，5.50mmol)。在室溫?cái)嚢柙摶旌衔?8小時(shí)，真空濃縮，并在乙酸乙酯和水之間分配。用硫酸鎂干燥有機(jī)相，真空濃縮，獲得類白色固體。進(jìn)行快速色譜(用二氯甲烷而后乙酸乙酯洗脫)，得到1(R)-[1-[2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-[N-環(huán)丙基-N-(戊-4-烯基)氨基]丙?；鵠-4(R)-(叔丁基二甲基硅基氧基)吡咯烷-2(S)-羧酰胺基]-2(S)-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯白色固體(1.75g，94％) LC-MS(Phenomenex 10μm C18HPLC柱3.0x50mm長(zhǎng)度。梯度100％溶劑A/0％溶劑B至0％溶劑A/100％溶劑B。梯度時(shí)間2min。停留時(shí)間1min。流速5mL/min。檢測(cè)器波長(zhǎng)220nM。溶劑A10％MeOH/90％H2O/0.1％TFA。溶劑B10％H2O/90％MeOH/0.1％TFA)。(保留時(shí)間2.51min)，MS m/z 677(M++1)。
步驟5(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基二甲基硅基氧基)-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯的合成。

向1(R)-[1-[2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3-[N-環(huán)丙基-N-(戊-4-烯基)氨基]丙酰基]-4(R)-(叔丁基二甲基硅基氧基)吡咯烷-2(S)-羧酰胺基]-2(S)-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯(1.45g，2.14mmol)的1L二氯甲烷溶液中加入181mg(0.21mmol)Grubb′s第二代催化劑[(1，3-二-(2，4，6-三甲基苯基)-2-咪唑烷亞基)二氯(苯基亞甲基)(三環(huán)己基膦)釕]。將混合物回流加熱1小時(shí)。加入第二部分的催化劑(50mg，0.058mmol)，在室溫?cái)嚢杌旌衔镞^(guò)夜。真空濃縮殘余物，而后通過(guò)快速色譜純化，用50％醚/己烷洗脫，得到0.84g(62％)(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基二甲基硅基氧基)-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯白色固體LC-MS(Phenomenex 10μm C18 HPLC柱3.0x50mm長(zhǎng)度。梯度100％溶劑A/0％溶劑B至0％溶劑A/100％溶劑B。梯度時(shí)間2min。停留時(shí)間1min。流速5mL/min。檢測(cè)器波長(zhǎng)220nM。溶劑A10％ MeOH/90％ H2O/0.1％TFA。溶劑B10％H2O/90％ MeOH/0.1％TFA)。(保留時(shí)間2.43min)，MS m/z 649(M++1)。
步驟6(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基二甲基硅基氧基)-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸的合成。

向(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基二甲基硅基氧基)-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯(0.84g，1.30mmol)的THF(30mL)、甲醇(15mL)和水(4mL)溶液中加入粉末氫氧化鋰水合物(0.31g，12.90mmol)。在室溫、在N2氛圍中將得到的淺黃色漿液攪拌過(guò)夜。然后真空濃縮混合物，并在己烷/醚(1∶1)和水之間分配。除去有機(jī)相，用1N HCl處理水相，直到pH值5為止。用EtOAc提取該酸性溶液(三次)。干燥(MgSO4)合并的EtOAc提取物，真空濃縮，得到0.495g(61％)(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基二甲基硅基氧基)-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸類白色固體LC-MS(Phenomenex 10μmC18 HPLC柱3.0x50mm長(zhǎng)度。梯度100％溶劑 A/0％溶劑 B至0％溶劑 A/100％溶劑 B。梯度時(shí)間2min。停留時(shí)間1min。流速5mL/min。檢測(cè)器波長(zhǎng)220nM。溶劑A10％MeOH/90％ H2O/0.1％TFA。溶劑B10％H2O/90％ MeOH/0.1％ TFA)。(保留時(shí)間2.36min)，MS m/z621(M++1)。
步驟7(1S，4R，6S，14S，18R)-[7-順式-4-環(huán)丙烷磺酰基氨基羰基-12-環(huán)丙基-18-(叔丁基二甲基硅基氧基)-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]氨基甲酸叔丁基酯的合成。

將(1S，4R，6S，14S，18R)-7-順式-14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基二甲基硅基氧基)-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸(490mg，0.79mmol)溶于15mL THF中，并用CDI(179mg，1.10mmol)處理。(必須小心，使用烘干的玻璃器皿，避免濕潤(rùn)，保持干燥N2氛圍)。將反應(yīng)混合物回流兩小時(shí)之后，將其冷卻至室溫，用環(huán)丙基磺酰胺(134mg，1.10mmol)和DBU(168mg，1.10mmol)順序處理。在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜之后，通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去THF。將殘余物溶于水中，加入1N HCl，直到pH值＝5為止。用EtOAc(3x)提取水溶液。將合并的EtOAc提取物干燥(MgSO4)，真空濃縮，得到粗品。通過(guò)快速柱純化，用3％甲醇/二氯甲烷洗脫，得到300mg(53％)(1S，4R，6S，14S，18R)-[7-順式-4-環(huán)丙烷磺?；被驶?12-環(huán)丙基-18-(叔丁基二甲基硅基氧基)-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]氨基甲酸叔丁基酯白色固體LC-MS(Phenomenex 10μm C18HPLC柱3.0x50mm長(zhǎng)度。梯度100％溶劑A/0％溶劑B至0％溶劑A/100％溶劑B。梯度時(shí)間2min。停留時(shí)間1min。流速5mL/min。檢測(cè)器波長(zhǎng)220nM。溶劑A10％MeOH/90％H2O/0.1％TFA。溶劑B10％H2O/90％MeOH/0.1％TFA)。(保留時(shí)間2.40min)，MS m/z 724(M++1)。
步驟8(1S，4R，6S，14S，18R)-[7-順式-4-環(huán)丙烷磺?；被驶?12-環(huán)丙基-18-羥基-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]氨基甲酸叔丁基酯(實(shí)施例86)的合成。

向化合物(1S，4R，6S，14S，18R)-[7-順式-4-環(huán)丙烷磺?；被驶?12-環(huán)丙基-18-(叔丁基二甲基硅基氧基)-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]氨基甲酸叔丁基酯(250mg，0.35mmol)的15mL THF的混合物中加入四丁基氟化銨(129mg，0.46mmol)。將混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去THF，在乙酸乙酯和水之間分配殘余物。干燥(MgSO4)有機(jī)相，真空濃縮，得到粗品。用己烷研磨進(jìn)行純化，提供200mg(94％)(1S，4R，6S，14S，18R)-[7-順式-4-環(huán)丙烷磺?；被驶?12-環(huán)丙基-18-羥基-2，15-二氧代-3，12，16-三氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]氨基甲酸叔丁基酯白色固體LC-MS(保留時(shí)間2.32min)，MS m/z 610(M++1)。
(Phenomenex 10μm C18 HPLC柱3.0x50mm長(zhǎng)度。梯度100％溶劑A/0％溶劑B至0％溶劑A/100％溶劑B。梯度時(shí)間3min。停留時(shí)間1min。流速4mL/min。檢測(cè)器波長(zhǎng)220nM。溶劑A10％ MeOH/90％H2O/0.1％ TFA。溶劑B10％ H2O/90％ MeOH/0.1％TFA)。(保留時(shí)間2.32min)，MS m/z 610(M++1)。
實(shí)施例87化合物1的制備
方案1
步驟12-((1R，2S)-1-(環(huán)丙基磺酰基氨基甲?；?-2-乙烯基環(huán)丙基氨基甲酰基)-4-苯基吡咯烷-1-羧酸(2S，4S)-叔丁基酯的制備 向(2S，4S)-Boc-4-苯基吡咯烷-2-羧酸(0.711g 2，44mmol)(從Chem-Impex International，Inc購(gòu)買)、二異丙基乙胺(0.948g，7.33mmol)和環(huán)丙烷磺酸(1-(R)-氨基-2-(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羰基)酰胺HCl鹽(0.561g，2.44mmol)的二氯甲烷(24ml)混合物中加入HATU(1.21g，3.18mmol)。攪拌反應(yīng)混合物14小時(shí)之后，將其用5％NaHCO3水溶液(50mL)和5％枸櫞酸水溶液(50mL)洗滌。用2x25mL二氯甲烷順序提取每個(gè)水層。用MgSO4干燥合并的有機(jī)層，過(guò)濾，濃縮。將得到的褐色粘性油通過(guò)快速柱色譜純化(SiO2，97∶3，二氯甲烷∶甲醇)，得到2-((1R，2S)-1-(環(huán)丙基磺?；被柞；?-2-乙烯基環(huán)丙基氨基甲酰基)-4-苯基吡咯烷-1-羧酸(2S，4S)-叔丁基酯褐色泡沫狀的固體(0.973g，79％產(chǎn)率)。1H NMR(CD3OD，500MHz)δ0.91(br s，1H)，1.03(d，J＝6.4Hz，1H)，1.16-1.23(m，1H)，1.31-1.38(m，1H)，1.44(dd，J＝9.6，5.6Hz，1H)，1.48(s，4H)，1.52(s，5H)，1.89(t，J＝6.4Hz)，2.09(q，J＝8.4Hz，0.4H)，2.19(q，J＝8.6Hz，0.6H)，2.85-2.90(m，0.4H)，2.92-2.97(m，0.6H)，3.44(t，J＝9.6Hz，1H)，3.65(p，J＝8.0Hz，1H)，3.93-4.01(m，1H)，4.29(dd，J＝10.1，6.7Hz，1H)，5.12(d，J＝10.1Hz，1H)，5.30(d，J＝18.0Hz，1H)，5.75-5.82(m，1H)，7.24(t，J＝6.9Hz，1H)，7.29-7.33(m，5H)；MS m/z 504(M+Na)。
步驟2(2S，4S)-N-((1R，2S)-1-(環(huán)丙基磺酰基氨基甲?；?-2-乙烯基環(huán)丙基)-4-苯基吡咯烷-2-羧酰胺的制備 向?qū)嵤├?的步驟1的產(chǎn)物(0.900g，1.79mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入TFA(5mL)。在室溫下攪拌30分鐘之后，濃縮反應(yīng)混合物，略略地真空干燥。將得到的褐色粘性油再溶解在二氯甲烷(10mL)中，并逐滴加入到1N HCl/二乙醚(10mL)溶液中。形成白色固體沉淀，通過(guò)真空抽濾進(jìn)行收集。用二乙醚洗滌濾餅，得到0.720mg(91％產(chǎn)率)(2S，4S)-N-((1R，2S)-1-(環(huán)丙基磺?；被柞；?-2-乙烯基環(huán)丙基)-4-苯基吡咯烷-2-羧酰胺。MS m/z 404(MH+)。
步驟3(S)-1-((2S，4S)-2-((1R，2S)-1-(環(huán)丙基磺?；被柞；?-2-乙烯基環(huán)丙基氨基甲?；?-4-苯基吡咯烷-1-基)-1-氧代壬-8-烯-2-基氨基甲酸叔丁基酯的制備 向(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)壬-8-烯酸(從RSP Amino Acids購(gòu)買)(140mg，0.516mmol)的20mL DMF溶液中加入實(shí)施例1的步驟2的產(chǎn)物(227mg，0.516mmol)。向此溶液中加入HATU(236mg，0.620mmol)，而后加入N-甲基嗎啉(182mg，1.80mmol)。在室溫?cái)嚢柙摶旌衔?小時(shí)，而后真空濃縮，除去DMF。將殘余物在0.1N HCl和乙酸乙酯之間分配(保持水相在pH值3至pH值5之間)。干燥(MgSO4)有機(jī)相，過(guò)濾，濃縮，得到300mg粗品褐色油?？焖偕V，用1-5％甲醇/CH2Cl2洗脫，得到230mg(68％)(S)-1-((2S，4S)-2-((1R，2S)-1-(環(huán)丙基磺酰基氨基甲?；?-2-乙烯基環(huán)丙基氨基甲?；?-4-苯基吡咯烷-1-基)-1-氧代壬-8-烯-2-基氨基甲酸叔丁基酯無(wú)色油。MS m/z 657(MH+)。
步驟4化合物1的制備 將步驟3的產(chǎn)物(124mg，0.189mmol)溶于CH2Cl2中，放置在N2氛圍中，用Grubb′s第二代RCM催化劑(三環(huán)己基膦[1，3-二(2，4，6-三甲基-苯基)-4，5-二氫咪唑-2-亞基][亞芐基]-二氯化釕(IV))(16mg，0.019mmol)處理?；亓?8小時(shí)之后，將橙色/紅色溶液冷卻至室溫，真空濃縮，得到125mg棕色油?？焖偕V，用1-5％甲醇/CH2Cl2洗脫，得到60mg粗品大環(huán)產(chǎn)物(～60％純度，利用1H NMR和LC/MS評(píng)估)。利用制備HPLC，得到22mg純產(chǎn)物類白色固體。1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm0.90-1.00(m，1H)，1.05-1.14(m，1H)，1.14-1.22(m，1H)，1.23-1.84(m，10H)，1.41(s，9H)，1.88-2.00(m，2H)，2.14-2.29(m，2H)，2.39-2.49(m，1H)，2.50-2.60(m，1H)，2.86-2.96(m，1H)，3.91-4.01(m，2H)，4.05-4.14(m，1H)，4.39-4.48(m，1H)，4.48-4.56(m，1H)，4.97-5.04(m，1H)，5.13(d，J＝8.24Hz，1H)，5.70(q，J＝8.95Hz，1H)，6.72(s，1H)，7.36-7.24(m，5H)，10.14(s，1H)..MS m/z 629(MH+)。
實(shí)施例88化合物2的制備
步驟11-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯酰)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)-羧酸甲基酯的制備
將2(S)-叔丁氧羰基氨基-8-壬烯酸(從RSP Amino Acids購(gòu)買)(3.5g，12.9mmol)的200mL二氯甲烷溶液用4(R)-羥基吡咯烷-2(S)-羧酸甲基酯鹽酸鹽(2.15g，11.8mmol)、N-甲基嗎啉(4.25mL，38.6mmol)和HATU(5.37g，14.1mmol)順序處理。在室溫下、在N2氛圍中攪拌反應(yīng)混合物3天，而后真空濃縮。將殘余物在乙酸乙酯和pH值4的緩沖液(苯二甲酸氫鹽)之間分配。用飽和NaHCO3水溶液洗滌有機(jī)相，干燥(MgSO4)，過(guò)濾，真空濃縮，得到粗品。進(jìn)行快速色譜(50％乙酸乙酯/己烷至100％乙酸乙酯)，得到4.7g(～100％)的1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯酰)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)-羧酸甲基酯無(wú)色油。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ1.33-1.50(m，8H)，1.46(s，9H)，1.57(m，1H)，1.72(m，1H)2.08(m，2H)，2.28(m，1H)，3.72(s，3H，)3.75-3.87(m，2H)，4.36(m，1H)，4.51(bs，1H)，4.57(t，J＝8.2Hz，1H)，4.95(d，J＝10.4Hz，1H)，5.01(m，1H)，5.83(m，1H)；LC-MS(方法A，保留時(shí)間3.01min)，MS m/z 399(M++1)。
步驟21-{[1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯酰)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)羰基]-(1R)-氨基}-2(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羧酸乙酯的制備。

將1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯酰)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)-羧酸甲基酯(4.7g，11.8mmol)溶于THF(80mL)、甲醇(20mL)和水(40mL)中。加入粉末氫氧化鋰(5.6g，233mmol)。在室溫下、在N2氛圍中攪拌淺黃色漿液16小時(shí)，而后真空濃縮。將殘余物在醚和水之間分配。除去乙醚相，用1N HCl處理水相，直到pH值4為止。用乙酸乙酯提取該酸性溶液(三次)。將合并的乙酸乙酯提取物干燥(MgSO4)，過(guò)濾，真空濃縮，得到4.36g(96％)的1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-8-壬烯?；?-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)-羧酸白色固體。然后將該酸溶于150mL的DMF中，加入(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽(2.61g，13.6mmol)、N-甲基嗎啉(2.5mL，22.6mmol)和HATU(5.2g，13.7mmol)。在室溫下、在N2氛圍中攪拌反應(yīng)混合物16小時(shí)，而后真空濃縮。將殘余物在乙酸乙酯和pH值4的緩沖液(苯二甲酸氫鹽)之間分配。用飽和NaHCO3水溶液洗滌有機(jī)相，干燥(MgSO4)，過(guò)濾，真空濃縮，得到粗品。進(jìn)行快速色譜(60％-80％乙酸乙酯/己烷)，得到6.0g(98％)1-{[1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯酰)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)羰基]-(1R)-氨基}-2(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羧酸乙酯白色固體。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ1.25(t，J＝7.2Hz，3H)，1.33-1.80(m，10H)，1.46(s，9H)，2.09(m，3H)，2.25(m，2H)，3.76(m，2H)，4.14(m，2H)，4.27(dd，J＝8.5，5.2Hz，1H)，4.50(m，2H)，4.94(d，J＝10.1Hz，1H)，5.01(dd，J＝17.1，1.8Hz，1H)，5.11(dd，J＝10.4，1.8Hz，1H)，5.30(d，J＝15.6Hz，1H)，5.80(m，2H)，8.57(s，1H)；LC-MS(方法A，保留時(shí)間3.21min)，MS m/z 522(M++1)。
步驟31-{[1-(2-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯酰)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯的制備。

向1-{[1-(2(S)-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯酰)-4(R)-羥基-吡咯烷-2(S)羰基]-(1R)-氨基}-2(S)-乙烯基-環(huán)丙烷羧酸乙酯(1.5g，2.87mmol)的10mLDMF混合物中加入咪唑(0.25g，3.67mmol)和叔丁基-二甲基甲硅烷基氯(516mg，3.44mmol)。將混合物在室溫下攪拌兩天。然后真空濃縮反應(yīng)混合物，將殘余物溶于乙酸乙酯中。用水洗滌此溶液，用硫酸鎂干燥，過(guò)濾，真空濃縮，獲得粗品固體。用快速色譜純化(用20％乙酸乙酯/己烷洗脫)，得到1.43g(78％)1-{[1-(2-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯酰)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-2-乙烯基環(huán)丙烷羧酸乙酯白色固體。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ0.10(s，6H)，0.89(s，9H)，1.22(m，3H)，1.31-1.48(m，16H)，1.50-1.75(m，3H)，2.06(m，3H)，2.11-2.33(m，2H)，3.70(m，2H)，4.03-4.19(m，2H)，4.21(m，1H)，4.45(t，J＝7.87Hz，1H)，4.59(m，1H)，4.91(d，J＝9.15Hz，1H)，4.98(d，J＝17.20Hz，1H)，5.08(dd，J＝10.25，1.83Hz，1H)，5.27(dd，J＝17.38，1.65Hz，1H)，5.65-5.87(m，2H).LC-MS(方法A，保留時(shí)間4.00min)；MS m/z 636(M++1)。
步驟414-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯的制備
向1-{[1-(2-叔丁氧羰基氨基-壬-8-烯酰)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-2-乙烯基-環(huán)丙烷羧酸乙酯(1.63g，2.56mmol)的640mL二氯甲烷溶液中加入215mg(0.26mmol)三環(huán)己基膦[1，3-二(2，4，6-三[亞芐基]二氯化釕(IV)。將混合物回流加熱15分鐘。真空濃縮殘余物，而后用快速柱色譜純化，用30％乙酸乙酯/己烷洗脫。為了將樣品進(jìn)一步脫色，再次將粗品色譜分離，用50％醚/己烷洗脫，得到1.5g(96％)14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯白色固體。1HNMR(500MHz，CD3Cl)δ0.06(s，3H)，0.07(s，3H)，0.86(s，9H)，1.18-1.24(m，6H)，1.34-1.64(m，14H)，1.86-1.96(m，3H)，2.02-2.09(m，1H)，2.11-2.17(m，1H)，2.19-2.28(m，1H)，2.57-2.63(m，1H)，3.50-3.54(m，1H)，3.71(dd，J＝10.22，6.26Hz，1H)，4.06-4.17(m，2H)，4.52-4.58(m，2H)，4.75(d，J＝8.55Hz，1H)，5.21(t，J＝9.92Hz，1H)，5.35(d，J＝7.63Hz，1H)，5.45-5.50(m，1H)，6.94(s，1H)； LC-MS(方法A，保留時(shí)間3.88min)，MS m/z 608(M++1)。
步驟514-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸的制備
向14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯(1.5g，2.47mmol)的THF(4mL)、甲醇(1mL)和水(2mL)混合溶劑系統(tǒng)的溶液中加入粉末氫氧化鋰一水合物(1.0g，50mmol)。在室溫、在N2氛圍中攪拌淺黃色漿液4小時(shí)。然后真空濃縮混合物，并將殘余物在醚和水之間分配。除去乙醚相，用1N HCl處理水相，直到pH值4為止。用乙酸乙酯提取該酸性溶液(三次)。將合并的乙酸乙酯提取物干燥(MgSO4)，過(guò)濾，真空濃縮，得到1.2g(84％)14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸類白色固體。1H NMR(300MHz，CD3OD)0.12(s，6H)，0.89(s，9H)，1.23-1.64(m，17H)，1.70-1.87(m，1H)，1.90-2.49(m，6H)，3.70-3.80(m，1H)，3.83-3.90(m，1H)，4.28-4.36(m，1H)，4.47-4.55(m，1H)，4.65(s，1H)，5.30-5.39(m，1H)，5.53-5.62(m，1H)；LC-MS(方法A，保留時(shí)間3.69min)，MS m/z580(M++1)。
步驟6[18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-4-環(huán)丙烷磺?；被驶?2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]-氨基甲酸叔丁基酯的制備。

將14-叔丁氧羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸(500mg，0.86mmol)溶于25mL THF中，并用CDI(180mg，1.12mmol)處理。(必須小心，使用烘干的玻璃器皿，避免濕潤(rùn)，保持干燥N2氛圍)。將反應(yīng)混合物回流2小時(shí)之后，將其冷卻至室溫，用環(huán)丙基磺酰胺(135mg，1.12mmol)和DBU(170mg，1.12mmol)順序處理。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌4小時(shí)，通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去THF。將殘余物在乙酸乙酯和pH值4的緩沖液之間分配。干燥(MgSO4)有機(jī)相，過(guò)濾，真空濃縮，得到粗品。然后用快速色譜純化(用33％乙酸乙酯/己烷洗脫)，得到300mg(51％)[18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-4-環(huán)丙烷磺?；被驶?2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]-氨基甲酸叔丁基酯白色固體。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ0.07(s，3H)，0.08(s，3H)，0.85(s，9H)，0.87-1.49(m，21H)，1.73-1.95(m，3H)，2.08-2.16(m，1H)，2.25-2.36(m，2H)，2.42-2.56(m，1H)，2.85-2.93(m，1H)，3.65-3.74(dd，J＝10.61，3.66Hz，1H)，3.89(d，J＝10.25Hz，1H)，4.34(m，J＝9.70，9.70Hz，1H)，4.43(t，J＝7.87Hz，1H)，4.57(s，1H)，4.94-5.01(m，1H)，5.10(d，J＝8.78Hz，1H)，5.66-5.75(m，1H)，6.55(s，1H)，10.13(s，1H)；LC-MS(方法A，保留時(shí)間3.81min)，MSm/z 683(M++1)。
步驟7(4-環(huán)丙烷磺?；被驶?18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基)-氨基甲酸叔丁基酯的制備。

向[18-(叔丁基-二甲基硅烷基氧基)-4-環(huán)丙烷磺酰基氨基羰基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]-氨基甲酸叔丁基酯(330mg，0.48mmol)的25mL THF混合物中加入氟化四丁銨(150mg，0.54mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌18小時(shí)，而后通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去THF。將殘余物在乙酸乙酯和水之間分配。干燥(MgSO4)有機(jī)相，過(guò)濾，真空濃縮，得到粗品。然后通過(guò)用己烷研磨將其純化，得到200mg(73％)(4-環(huán)丙烷磺?；被驶?18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基)-氨基甲酸叔丁基酯白色固體。1HNMR(500MHz，CD3Cl)δ1.87-1.64(m，21H)，1.70-1.98(m，3H)，2.15-2.56(m，5H)，2.85-2.94(m，1H)，3.71(d，J＝13.91Hz，1H)，4.10-4.26(m，2H)，4.51(t，J＝7.87Hz，1H)，4.62(s，1H)，4.98(m，1H)，5.06(d，J＝8.78Hz，1H)，5.64-5.71(m，1H)，6.72(s，1H)，10.24(s，1H)；LC-MS(方法A，保留時(shí)間2.85min)，MS m/z 569(M++1)。

步驟8 在0℃，向(4-環(huán)丙烷磺酰基氨基羰基-18-羥基-2，15-二氧代-3，16-二氮雜-三環(huán)[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基)-氨基甲酸叔丁基酯(1.00g，1.76mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中加入一個(gè)份額的固體Dess-Martin試劑(1.64g，3.87mmol)。除去冰浴之后，在室溫下攪拌混合物3小時(shí)，用2-丙醇(2mL)淬滅，額外攪拌1小時(shí)，真空濃縮。用乙酸乙酯研磨殘余物，過(guò)濾，濃縮濾液。用二氯甲烷研磨殘余物，過(guò)濾。將濾液濃縮至干。通過(guò)快速柱純化殘余物，首先用2∶1、然后1∶1的己烷-丙酮洗脫，得到所需要的產(chǎn)物白色固體(670mg，67％)。LC-MS(保留時(shí)間2.42min，方法B)，MS m/z 567(M++H)。
步驟9 在70℃油浴中，在高真空條件下，將含有溴化鎂乙醚配合物(183mg，0.71mmol)的2頸燒瓶加熱4小時(shí)。冷卻至室溫后，加入叔丁基(6S，13aS，14aR，16aS，Z)-14a-(環(huán)丙基磺?；被柞；?-2，5，16-三氧代-1，2，3，5，6，7，8，9，10，11，13a，14，14a，15，16，16a-十六氫環(huán)丙基[e]吡咯并[1，2-a][1，4]二氮雜環(huán)十五烯-6-基氨基甲酸酯(40mg，0.071mmol)。用冰冷卻燒瓶。通過(guò)注射器加入無(wú)水THF(2mL)。將形成的淡黃色漿液在室溫下大力攪拌過(guò)夜。向用干冰-丙酮冷卻的該燒瓶中逐滴加入苯基鋰(1.8M，在THF中，0.39mL，0.71mmol)。在此溫度下攪拌混合物2小時(shí)，而后將浴替換為冰浴，另外攪拌1小時(shí)。用飽和NH4Cl淬滅混合物，用乙酸乙酯提取。用鹽水洗滌分離的有機(jī)層，用MgSO4干燥，過(guò)濾，濃縮。用己烷(5mL)研磨殘余物，過(guò)濾。濃縮濾液，通過(guò)制備HPLC純化，得到9.5mg(21％)所需要的產(chǎn)物白色固體。1H NMR(CD3OD)δ1.01-1.21(m，4H)，1.28-1.39(m，2H)，1.45(s，9H)，1.49-1.52(m，4H)，1.63-1.72(m，2H)，1.80-1.91(m，2H)，1.98-2.04(m，1H)，2.30-2.35(m，1H)，2.44-2.55(m，2H)，2.70-2.74(m，1H)，2.94-2.97(m，1H)，4.06-4.08(m，1H)，4.31-4.39(m，2H)，4.60-4.63(m，1H)，5.21-5.29(m，1H)，5.65-5.71(m，1H)，7.31-7.34(m，1H)，7.38-7.42(m，2H)，7.63-7.65(m，2H)；LC-MS(保留時(shí)間2.74min，方法B)，MS m/z 627(M++H-H2O)，571(M++H-H2O-t-丁基)。
實(shí)施例89化合物3的制備
使用與化合物2相同的方法制備化合物3。在70℃油浴中，在高真空條件下，將含有溴化鎂乙醚配合物(183mg，0.71mmol)的2頸燒瓶加熱4小時(shí)。冷卻至室溫后，加入叔丁基(6S，13aS，14aR，16aS，Z)-14a-(環(huán)丙基磺?；被柞；?-2，5，16-三氧代-1，2，3，5，6，7，8，9，10，11，13a，14，14a，15，16，16a-十六氫環(huán)丙基[e]吡咯并[1，2-a][1，4]二氮雜環(huán)十五烯-6-基氨基甲酸酯(40mg，0.071mmol)。用冰冷卻燒瓶。通過(guò)注射器加入無(wú)水THF(2mL)。將形成的淡黃色漿液在室溫下大力攪拌過(guò)夜。
在-78℃，向含有4-溴聯(lián)苯(165mg，0.71mmol)的THF(4mL)溶液的另一個(gè)2頸燒瓶(燒瓶B)中逐滴加入正丁基鋰(2.5M，在己烷中，0.28mL，0.71mmol)，在此溫度下將形成的溶液攪拌1小時(shí)。
在-78℃，通過(guò)套管將燒瓶B的內(nèi)含物轉(zhuǎn)入冷卻至-78℃的燒瓶A中。在此溫度下將形成的微黃溶液攪拌2小時(shí)，而后用冰浴替換干-丙酮浴，另外攪拌1小時(shí)。用飽和NH4Cl淬滅混合物，用乙酸乙酯提取。用鹽水洗滌分離的有機(jī)層，用MgSO4干燥，過(guò)濾，濃縮。用己烷(5mL)研磨殘余物，過(guò)濾。濃縮濾液，通過(guò)制備HPLC純化，得到4.1mg(8％)所需要的產(chǎn)物白色固體。1H NMR(CD3OD)δ0.87-1.10(m，4H)，1.24-1.38(m，2H)，1.45(s，9H)，1.49-1.52(m，4H)，1.70-1.84(m，4H)，1.99-2.10(m，1H)，2.22-2.35(m，1H)，2.40-2.60(m，2H)，2.70-2.80(m，1H)，2.90-2.99(m，1H)，4.08-4.11(m，1H)，4.31-4.41(m，2H)，4.61-4.69(m，1H)，5.23-5.32(m，1H)，5.61-5.70(m，1H)，7.35-7.38(m，1H)，7.43-7.48(m，2H)，7.62-7.70(m，6H)；LC-MS(保留時(shí)間2.74min，方法B)，MS m/z 703(M++H-H2O)，647(M++H-H2O-t-丁基)。
生物學(xué)研究 在本公開(kāi)中，使用HCV NS3/4A蛋白酶復(fù)合酶試驗(yàn)和基于細(xì)胞的HCV復(fù)制子試驗(yàn)，并且如下進(jìn)行制備、操作和驗(yàn)證 重組體HCV NS3/4A蛋白酶復(fù)合物的產(chǎn)生 如下所述，形成衍生自BMS株、H77株或J4L6S株的HCV NS3蛋白酶復(fù)合物。形成這些純化的重組體蛋白，用于同源試驗(yàn)(見(jiàn)下文)，從而提供本公開(kāi)的有效化合物如何抑制HCV NS3蛋白質(zhì)分解活性的指示。
從Dr.T.Wright，San Francisco Hospital獲得HCV感染患者的血清。由DNA片段(由血清RNA(核糖核酸)的逆轉(zhuǎn)錄-PCR(RT-PCR)獲得)創(chuàng)立經(jīng)過(guò)設(shè)計(jì)的HCV基因組(BMS株)的全長(zhǎng)cDNA(補(bǔ)體脫氧核糖核酸)模板，使用基于其它基因型1a株之間的同源性所選擇的引物。由整個(gè)基因組序列的測(cè)定，按照Simmonds等人的分類，將基因型1a分配給HCV獨(dú)立型(參見(jiàn)P Simmonds，KA Rose，S Graham，SW Chan，F(xiàn) McOmish，BCDow，EA Follett，PL Yap and H Marsden，J.Clin.Microbiol.，31(6)，1493-1503(1993))。非結(jié)構(gòu)區(qū)域的氨基酸序列，NS2-5B，顯示了與HCV基因型1a(H77)＞97％的相同性，和與基因型1b(J4L6S)87％的相同性。由R.Purcell(NIH)獲得感染性的克隆體H77(1a基因型)和J4L6S(1b基因型)，并且序列公開(kāi)在Genbank中(AAB67036，參見(jiàn)Yanagi，M.，Purcell，R.H.，Emerson，S.U.和Bukh，J.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.94(16)，8738-8743(1997)；AF054247，參見(jiàn)Yanagi，M.，St Claire，M.，Shapiro，M.，Emerson，S.U.，Purcell，R.H.和Bukh，J，Virology 244(1)，161-172(1998))。
H77和J4L6S株用于重組體NS3/4A蛋白酶復(fù)合物的制備。將這些株的重組體HCV NS3/4A蛋白酶復(fù)合物(氨基酸1027至1711)進(jìn)行DNA編碼，是按照P.Gallinari等人所描述的方法進(jìn)行的(參見(jiàn)Gallinari P，Paolini C，Brennan D，Nardi C，Steinkuhler C，De Francesco R.Biochemistry.38(17)5620-32，(1999))。簡(jiǎn)要地說(shuō)，在NS4A編碼區(qū)的3′端添加三個(gè)賴氨酸增溶尾部。將NS4A-NS4B裂解位點(diǎn)(氨基酸1711)的P1位置上的半胱氨酸轉(zhuǎn)換為甘氨酸，以避免賴氨酸標(biāo)記物的解朊裂解。此外，在氨基酸位置1454，利用PCR引起半胱氨酸至絲氨酸的突變，以防止在NS3解螺旋酶區(qū)域中的自溶裂解。在pET21b細(xì)菌表達(dá)載體(Novagen)中克隆變體DNA片段，并且按照P.Gallinari等人所描述方案(參見(jiàn)Gallinari P，Brennan D，Nardi C，Brunetti M，Tomei L，Steinkuhler C，De Francesco R.，J Virol.72(8)6758-69(1998))的改型，用大腸桿菌株BL21(DE3)(Invitrogen)表達(dá)NS3/4A復(fù)合物。簡(jiǎn)要地說(shuō)，在20℃，用0.5毫摩爾(mM)的異丙基β-D-1-硫代半乳糖苷(IPTG)將NS3/4A蛋白酶復(fù)合物表達(dá)誘導(dǎo)22小時(shí)。典型的發(fā)酵(1升(L))得到大約10克(g)濕潤(rùn)細(xì)胞軟膏。將細(xì)胞再懸浮在溶解緩沖液(10mL/g)中(溶解緩沖液由下列組成25mM N-(2-羥乙基)哌嗪-N′-(2-乙烷磺酸)(HEPES)，pH值7.5，20％丙三醇，500mM氯化鈉(NaCl)，0.5％Triton X-100，1微克/毫升(“μg/mL”)溶菌酶，5mM氯化鎂(MgCl2)，1μg/ml DnaseI，5mM β-巰基乙醇(βME)，蛋白酶抑制劑-不含乙二胺四乙酸(EDTA)(Roche))，在4℃均化并培養(yǎng)20分鐘。在4℃，將勻漿超聲處理，并通過(guò)在235000g下超離心1小時(shí)來(lái)進(jìn)行澄清。將咪唑加入到上清液中，至15mM的最后濃度，將pH值調(diào)節(jié)至8.0。將粗蛋白提取物裝填到氮川三乙酸鎳(Ni-NTA)柱上，該柱用緩沖液B(25mM HEPES，pH 8.0，20％丙三醇，500mM NaCl，0.5％Triton X-100，15mM咪唑，5mMβME)預(yù)平衡。以1mL/min的流速裝填樣品。用15柱體積的緩沖液C(與緩沖液B相同，只是含有0.2％TritonX-100)洗滌該柱。用5柱體積的緩沖液D(與緩沖液C相同，只是含有200mM咪唑)洗脫蛋白。
收集含有NS3/4A蛋白酶復(fù)合物的部分，并裝填到脫鹽柱Superdex-S200上，該柱用緩沖液D(25mM HEPES，pH 7.5，20％丙三醇，300mM NaCl，0.2％Triton X-100，10mM βME)預(yù)平衡。以1mL/min的流速裝填樣品。收集含有NS3/4A蛋白酶復(fù)合物的餾分，并濃縮至大約0.5mg/ml。通過(guò)SDS-PAGE和質(zhì)譜分析斷定，NS3/4A蛋白酶復(fù)合物(衍生自BMS、H77和J4L6S株)的純度大于90％。將酶在-80℃存儲(chǔ)，在冰上解凍，在試驗(yàn)緩沖液中使用之前進(jìn)行稀釋。
監(jiān)控HCV NS3/4A蛋白質(zhì)分解活性的FRET肽試驗(yàn) 該體外試驗(yàn)的目的是測(cè)定本公開(kāi)化合物對(duì)HCV NS3蛋白酶復(fù)合物(衍生自BMS株、H77株或J4L6S株，如上所述)的抑制。該試驗(yàn)提供了本公開(kāi)的有效化合物如何抑制HCV NS3蛋白質(zhì)分解活性的指標(biāo)。
為了監(jiān)控HCV NS3/4A蛋白酶活性，使用NS3/4A肽基質(zhì)。該基質(zhì)是RET S1(共振能量轉(zhuǎn)移縮酚酸肽基質(zhì)(Resonance Energy TransferDepsipeptide Substrate)；AnaSpec，Inc.cat#22991)(FRET肽)，由Taliani等人在Anal.Biochem.240(2)60-67(1996)中進(jìn)行了描述。對(duì)于HCV NS3蛋白酶，該肽的序列泛泛地基于NS4A/NS4B天然裂解位點(diǎn)，只是在裂解位點(diǎn)有酯鍵而不是酰胺鍵。該肽還含有接近肽的一端的熒光供體EDANS，和接近另一個(gè)端部的受體DABCYL。通過(guò)在供體和受體之間的分子間共振能量轉(zhuǎn)移(RET)，可以猝滅肽的熒光，但當(dāng)NS3蛋白酶裂解肽時(shí)，產(chǎn)物從RET猝滅階段釋放，并且供體的熒光變得清晰可見(jiàn)。
在不存在或存在本公開(kāi)化合物的條件下，用三個(gè)重組體NS3/4A蛋白酶復(fù)合物中的一個(gè)來(lái)培養(yǎng)肽基質(zhì)。通過(guò)使用Cytofluor Series 4000來(lái)實(shí)時(shí)監(jiān)控?zé)晒夥磻?yīng)產(chǎn)物的形成，測(cè)定化合物的抑制效果。
試劑如下從GIBCO-BRL獲得HEPES和丙三醇(超純)。從Sigma獲得二甲亞砜(DMSO)。從Bio Rad獲得β-巰基乙醇。
試驗(yàn)緩沖液50mM HEPES，pH值7.5；0.15M NaCl；0.1％Triton；15％丙三醇；10mM βME。基質(zhì)2μM最后濃度(得自于2mM儲(chǔ)備溶液，在DMSO中，在-20℃存儲(chǔ))。HCV NS3/4A蛋白酶類型1a(1b)，2-3nM最后濃度(得自于5μM儲(chǔ)備溶液，在25mM HEPES(pH值7.5)、20％丙三醇、300mM NaCl、0.2％ Triton-X100、10mM βME中)。對(duì)于具有接近試驗(yàn)極限的潛力的化合物，通過(guò)向試驗(yàn)緩沖液中添加50μg/ml牛血清白蛋白(Sigma)，并且將最終蛋白酶濃度降低至300pM，可以使試驗(yàn)更靈敏。
在96孔聚苯乙烯黑色平皿(得自于Falcon)中進(jìn)行試驗(yàn)。每個(gè)孔含有25μl NS3/4A蛋白酶復(fù)合物(在試驗(yàn)緩沖液中)、50μl本公開(kāi)的化合物(在10％DMSO/試驗(yàn)緩沖液中)和25μl基質(zhì)(在試驗(yàn)緩沖液中)。在相同試驗(yàn)平皿上制備對(duì)照物(不含化合物)。將酶復(fù)合物與化合物或?qū)φ瘴锶芤夯旌?分鐘，而后通過(guò)加入基質(zhì)來(lái)引發(fā)酶促反應(yīng)。使用CytofluorSeries 4000(Perspective Biosystems)立即將試驗(yàn)平皿讀數(shù)。設(shè)置儀器，從而在25℃讀出340nm的發(fā)射和490nm的激發(fā)。反應(yīng)通常進(jìn)行大約15分鐘。
用下列方程式計(jì)算百分比抑制 100-[(δFinh/δFcon)x100] 其中δF是在曲線的線性范圍內(nèi)的熒光變化。將非線性的曲線擬合用于抑制-濃度數(shù)據(jù)，通過(guò)利用Excel XLfit軟件，使用方程式y(tǒng)＝A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))來(lái)計(jì)算50％有效濃度(IC50值)。
特異性試驗(yàn) 進(jìn)行特異性試驗(yàn)，以說(shuō)明本公開(kāi)化合物在抑制HCV NS3/4A蛋白酶(與其它絲氨酸或半胱氨酸蛋白酶類相比)時(shí)的體外選擇性。
相對(duì)于各種絲氨酸蛋白酶類，測(cè)定本公開(kāi)化合物的特異性人類嗜中性白細(xì)胞彈性酶(HNE)、豬胰腺?gòu)椥悦?PPE)和人類胰腺糜蛋白酶，和一種巰基蛋白酶人類肝組織蛋白酶B。在所有情況下，使用先前描述的96孔平皿程式方案(使用對(duì)于每種酶具有熒光的氨基-甲基-香豆素(AMC)特定基質(zhì))(PCT專利申請(qǐng)No.WO 00/09543)，對(duì)于絲氨酸蛋白酶試驗(yàn)進(jìn)行一些改進(jìn)。所有的酶是從Sigma，EMDbiosciences購(gòu)買的，而基質(zhì)得自于Bachem，Sigma和EMDbiosciences。
根據(jù)化合物的勢(shì)能，化合物濃度在100至0.4μM之間變化。通過(guò)將基質(zhì)加入到酶抑制劑(在室溫下預(yù)先培養(yǎng)10分鐘，并且在cytofluor上測(cè)定，水解至15％轉(zhuǎn)化率)中來(lái)引發(fā)每個(gè)酶試驗(yàn)。
每個(gè)試驗(yàn)的最終條件如下 50mM三(羥基甲基)氨基甲烷鹽酸鹽(Tris-HCl)pH值8，0.5M硫酸鈉(Na2SO4)，50mM NaCl，0.1mM EDTA，3％DMSO，0.01％Tween-20(含有5μM LLVY-AMC)和1nM糜蛋白酶。
50mM Tris-HCl(pH值8.0)，50mM NaCl，0.1mM EDTA，3％DMSO，0.02％Tween-20，5μM succ-AAPV-AMC和20nM HNE或8nM PPE； 100mM NaOAC(乙酸鈉)pH值5.5，3％DMSO，1mM TCEP(三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽)，5nM組織蛋白酶B(在使用之前，在含有20mM TCEP的緩沖液中活化的酶原料)和2μM Z-FR-AMC(在水中稀釋)。
使用下式計(jì)算抑制的百分比 [1-((UVinh-UVblank)/(UVctl-UVblank))]x100 非線性的曲線擬合用于抑制-濃度數(shù)據(jù)，通過(guò)利用Excel XLfit軟件計(jì)算50％有效濃度(IC50值)。
HCV復(fù)制子的產(chǎn)生 利用下列中所描述的方法建立HCV復(fù)制子完整的細(xì)胞系統(tǒng)Lohmann V，Korner F，Koch J，Herian U，Theilmann L，Bartenschlager R.，Science 285(5424)110-3(1999)。該系統(tǒng)能夠使我們?cè)u(píng)價(jià)HCV蛋白酶化合物對(duì)HCV RNA復(fù)制的效果。簡(jiǎn)要地說(shuō)，使用Lohmann文章(登錄號(hào)AJ238799)中所描述的HCV株1b序列，通過(guò)Operon Technologies，Inc.(Alameda，CA)合成HCV cDNA，然后使用標(biāo)準(zhǔn)分子生物學(xué)技術(shù)，在質(zhì)粒pGem9zf(+)(Promega，Madison，WI)中組裝全長(zhǎng)復(fù)制子。復(fù)制子由下列組成(i)HCV 5′UTR，其與衣殼蛋白的頭12個(gè)氨基酸稠合，(ii)新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因(neo)，(iii)得自于腦心肌炎病毒(EMCV)的IRES，和(iv)HCV NS3至NS5B基因和HCV 3′UTR。用ScaI將質(zhì)粒DNAs線性化，按照制造商的說(shuō)明，使用T7MegaScript轉(zhuǎn)錄試劑盒(Ambion，Austin，TX)體外合成RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。將cDNA的體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物轉(zhuǎn)染到人類肝癌細(xì)胞系HUH-7中。在選擇性標(biāo)記物新霉素(G418)的存在下，獲得對(duì)可結(jié)構(gòu)性表達(dá)HCV復(fù)制子的細(xì)胞的選擇。隨著時(shí)間推移所得到細(xì)胞系被賦予正和負(fù)鏈RNA產(chǎn)物和蛋白產(chǎn)物的特性。
HCV復(fù)制子FRET試驗(yàn) 進(jìn)行HCV復(fù)制子FRET試驗(yàn)，以監(jiān)控本公開(kāi)所描述化合物對(duì)HCV病毒復(fù)制的抑制效果。使結(jié)構(gòu)性表達(dá)HCV復(fù)制子的HUH-7細(xì)胞生長(zhǎng)在Dulbecco改進(jìn)的Eagle培養(yǎng)基(DMEM)(Gibco-BRL)中，該培養(yǎng)基含有10％胎牛血清(FCS)(Sigma)和1mg/ml G418(Gibco-BRL)。在96孔組織培養(yǎng)無(wú)菌平皿中，天黑以前將細(xì)胞播種(1.5x104個(gè)細(xì)胞/孔)。在稀釋平皿(在試驗(yàn)中，0.5％DMSO最后濃度)中，在含有4％FCS、1∶100青霉素/鏈霉素(Gibco-BRL)、1∶100L-谷酰胺和5％DMSO的DMEM中制備化合物和沒(méi)有化合物的對(duì)照物。將化合物/DMSO混合物加入到細(xì)胞中，在37℃培養(yǎng)4天。4天之后，首先使用阿爾瑪藍(lán)(Trek Diagnotstic Systems)評(píng)價(jià)細(xì)胞的細(xì)胞毒性，以CC50示數(shù)。通過(guò)向培養(yǎng)細(xì)胞的介質(zhì)中加入1/10th體積的阿爾瑪藍(lán)，測(cè)定化合物的毒性(CC50)。4小時(shí)之后，讀出每個(gè)孔的熒光信號(hào)，用530nm的激發(fā)波長(zhǎng)和580nm的發(fā)射波長(zhǎng)，使用CytofluorSeries 4000(Perspective Biosystems)。然后用磷酸緩沖鹽水(PBS)(3次，150μl)徹底沖洗平皿。將細(xì)胞用25μl的溶解試驗(yàn)試劑溶解，該試劑含有HCV蛋白酶基質(zhì)(5X細(xì)胞熒光素酶細(xì)胞培養(yǎng)物溶解試劑(Promega#E153A))，用蒸餾水稀釋至1X，NaCl加入到150mM最終濃度，F(xiàn)RET肽基質(zhì)(上面酶試驗(yàn)所描述)稀釋至10μM最終濃度(用2mM原料，在100％DMSO中)。然后將平皿放入Cytofluor 4000儀器中，將該儀器定到340nM激發(fā)/490nm發(fā)射，21個(gè)循環(huán)的自動(dòng)化模式，以動(dòng)力學(xué)模式進(jìn)行平皿讀數(shù)。按照IC50值測(cè)定所描述的方法，進(jìn)行EC50值測(cè)定。
HCV復(fù)制子熒光素酶指示試驗(yàn) 作為其次的試驗(yàn)，在復(fù)制子熒光素酶指示試驗(yàn)中，證明了由復(fù)制子FRET試驗(yàn)得到的EC50值測(cè)定數(shù)據(jù)。復(fù)制子熒光素酶指示試驗(yàn)的使用，首先由Krieger等人進(jìn)行了描述(Krieger N，Lohmann V，和BartenschlagerR，J.Virol.75(10)4614-4624(2001))。利用嵌入cDNA編碼Renilla熒光素酶基因的人源化形式和直接與熒光素酶基因的3′端稠合的連接序列，改進(jìn)了FRET試驗(yàn)所描述的復(fù)制子結(jié)構(gòu)。使用位于核中的Asc1限制位點(diǎn)(新霉素標(biāo)志基因的直接上游)，將這種嵌入引入復(fù)制子結(jié)構(gòu)中。還可在位置1179(絲氨酸至異亮氨酸)引起適應(yīng)性突變(Blight KJ，Kolykhalov，AA，Rice，CM，Science 290(5498)1972-1974)。形成結(jié)構(gòu)性表達(dá)這種HCV復(fù)制子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定細(xì)胞系，如上所述。按照具有下列改進(jìn)的HCV復(fù)制子FRET試驗(yàn)所描述的方法，建立熒光素酶指示試驗(yàn)。在37℃/5％CO2培養(yǎng)箱中4天之后，使用Promega Dual-Glo熒光素酶試驗(yàn)系統(tǒng)，分析細(xì)胞的Renilla熒光素酶活性。從含有細(xì)胞的每個(gè)孔中除去介質(zhì)(100μl)。向剩余的50μl介質(zhì)中加入50μl Dual-Glo熒光素酶試劑，在室溫下將平皿搖動(dòng)10分鐘至2小時(shí)。然后將Dual-Glo Stop & Glo試劑(50μl)加入到每個(gè)孔中，在室溫下再次搖動(dòng)平皿10分鐘至2小時(shí)。使用熒光程序，在Packard TopCount NXT上將平皿讀數(shù)。
使用下式計(jì)算抑制的百分比
將該值制成圖形，使用XLfit進(jìn)行分析，獲得EC50值。
注意，通過(guò)使用示于表2中的專利實(shí)施例編號(hào)和專利化合物編號(hào)，可以在本文中找到化合物的結(jié)構(gòu)。
表2 對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員其是明顯的，本公開(kāi)不局限于前述的說(shuō)明例證性的實(shí)施例，在不背離本公開(kāi)的必要特性的條件下，其可以用其它特定形式來(lái)加以涵蓋。因此期望，實(shí)施例在各個(gè)方面被認(rèn)為是說(shuō)明例證性的，而不是限制性的，應(yīng)參考附加的權(quán)利要求、而不是前述實(shí)施例，因此意欲包括落入權(quán)利要求的等效內(nèi)容的含義和范圍內(nèi)的所有變化。
權(quán)利要求
1.式(I)的化合物
或其可藥用鹽，其中
R1選自烷氧基、羥基和-NHSO2R7；
R2a和R2b獨(dú)立地選自氫和甲基；
R3選自烯基、烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；條件是，當(dāng)R4是氫時(shí)，則R3不是雜環(huán)基；
R4選自氫和羥基；
R5選自氫、烷基和環(huán)烷基；
R6選自氫、烷基、烷氧羰基、烷胺基羰基、烷基羰基、氨基羰基、芳氧羰基、環(huán)烷基氧基羰基、二烷胺基羰基、鹵代烷氧基羰基、鹵代烷基、鹵代烷基羰基、雜環(huán)基氧基羰基和(NRaRb)磺?；?br> R7選自烷基、芳基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和-NRaRb；其中環(huán)烷基和(環(huán)烷基)烷基的環(huán)烷基部分任選被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)獨(dú)立地選自下列的基團(tuán)取代烯基，烷氧基，烷氧基烷基，烷基，芳烷基，芳基羰基，氰基，環(huán)烯基，(環(huán)烷基)烷基，鹵素，鹵代烷氧基，鹵代烷基和(NReRf)羰基；且其中Ra和Rb獨(dú)立地選自氫、烷氧基、烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、鹵代烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；且其中Re和Rf獨(dú)立地選自氫、烷基、芳基、芳烷基和雜環(huán)基；其中芳基、芳烷基的芳基部分和雜環(huán)基任選被一或兩個(gè)獨(dú)立地選自烷氧基、烷基和鹵素的取代基取代；和
Q是C3-9飽和或不飽和鏈，任選含有一個(gè)至三個(gè)獨(dú)立地選自O(shè)、S(O)m和NR9的雜原子，其中m是0、1或2，和R9選自氫、烷氧基、烷氧羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺酰基、氨基羰基、芳基磺?；?、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、環(huán)烷基氧基、二烷胺基羰基、二烷胺基羰基烷基、鹵代烷基和雜環(huán)基羰基。
2.權(quán)利要求1的化合物或其可藥用鹽，其中
R4是羥基；和
R2a和R2b各自是氫。
3.權(quán)利要求1的化合物或其可藥用鹽，其中R1是-NHSO2R7。
4.權(quán)利要求3的化合物或其可藥用鹽，其中R7是環(huán)烷基。
5.權(quán)利要求1的化合物或其可藥用鹽，其中Q是含有零個(gè)雜原子的C6不飽和鏈。
6.式(II)的化合物
或其可藥用鹽，其中
R1是-NHSO2R7；
R2a和R2b是氫；
R3選自烯基、烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；條件是，當(dāng)R4是氫時(shí)，則R3不是雜環(huán)基；
R4選自氫和羥基；
R5是氫；
R6是烷氧羰基；
R7選自烷基、芳基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)基和-NRaRb；其中Ra和Rb獨(dú)立地選自氫、烷氧基、烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、鹵代烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基；和
Q是C3-9飽和或不飽和鏈，任選含有一個(gè)至三個(gè)獨(dú)立地選自O(shè)、S(O)m和NR9的雜原子，其中m是0、1或2，和R9選自氫、烷氧基、烷氧羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺?；被驶?、芳基磺酰基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、環(huán)烷基氧基、二烷胺基羰基、二烷胺基羰基烷基、鹵代烷基和雜環(huán)基羰基。
7.權(quán)利要求6的化合物或其可藥用鹽，其中
R4是羥基；
R7是環(huán)烷基；和
Q是含有零個(gè)雜原子的C6不飽和鏈。
8.選自下列的化合物
或其可藥用鹽。
9.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1的化合物或其可藥用鹽和可藥用載體。
10.權(quán)利要求9的組合物，進(jìn)一步包含至少一種具有抗HCV活性的其它化合物。
11.權(quán)利要求10的組合物，其中至少一種其它化合物是干擾素或利巴韋林。
12.權(quán)利要求10的組合物，其中至少一種其它化合物選自白細(xì)胞間介素2、白細(xì)胞間介素6、白細(xì)胞間介素12、可增加1型輔助性T細(xì)胞響應(yīng)形成的化合物、干擾性的RNA、反義RNA、咪奎莫特、利巴韋林、次黃嘌呤核苷5′-一磷酸脫氫酶抑制劑、金剛烷胺和金剛烷乙胺。
13.治療患者HCV感染的方法，該方法包括給予患者治療有效量的權(quán)利要求1的化合物或其可藥用鹽。
14.權(quán)利要求13的方法，進(jìn)一步包括給予至少一種具有抗HCV活性的其它化合物，該化合物在給予權(quán)利要求1的化合物或其可藥用鹽之前、之后或與其同時(shí)給予。
15.權(quán)利要求14的方法，其中至少一種其它化合物是干擾素或利巴韋林。
全文摘要
公開(kāi)了具有如右通式的大環(huán)肽，還公開(kāi)了包含該化合物的組合物和使用該化合物來(lái)抑制HCV的方法。
文檔編號(hào)C07D498/04GK101568336SQ200780048062
公開(kāi)日2009年10月28日 申請(qǐng)日期2007年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2006年11月16日
發(fā)明者A·X·王, B·Z·鄭, S·丹德里, N·A·米恩威爾, P·M·斯科拉 申請(qǐng)人:百時(shí)美施貴寶公司