專利名稱：：一種海藻倍半萜類化合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及拒食殺蟲劑領(lǐng)域，具體地說是一種海藻倍半萜類化合物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：拒食殺蟲劑是一種間接殺蟲劑，是指能使昆蟲接觸后喪失伺食能力，直至餓死，而非直接將其毒殺的化合物。近年來，由于人們對環(huán)境質(zhì)量的要求越來越高，而且一些常用殺蟲劑因殘留問題而出現(xiàn)副作用，以及不斷產(chǎn)生的昆蟲抗藥性等等，環(huán)境友好的殺蟲劑越來越受到人們的重視，其中，植物源昆蟲拒食殺蟲劑具有高效、低毒和易降解等優(yōu)點(diǎn)，其研究與開發(fā)尤其引人注目，顯示出良好的生態(tài)效益、經(jīng)濟(jì)效益和社會效益，展現(xiàn)出廣闊的發(fā)展前景。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種天然的海藻倍半萜類化合物及其制備方法和應(yīng)用。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明釆用的技術(shù)方案為-.海藻倍半萜類化合物結(jié)構(gòu)式如(I)所示，分子式為C15H21Br2C10(I)海藻倍半薛類化合物的制備方法包括如下步驟1)將海洋紅藻岡村凹頂藻aaure/7ciaoiraMirai)沖洗、陰干、粉碎60-80目，然后用有機(jī)溶液提取2-5次，合并提取液進(jìn)行濃縮，得到粗提物；2)取步驟1)中的粗提物進(jìn)行硅膠柱層析，用有機(jī)溶劑進(jìn)行梯度洗脫,收集洗脫液，洗脫液經(jīng)薄層層析檢測；所述機(jī)溶劑為100:0-0:100梯度的石油醚-丙酮或石油醚-乙酸乙酯；3)將步驟2)中20-30:1梯度下的洗脫組分進(jìn)行硅膠柱層析和薄層層析分離純化得目標(biāo)化合物I。3.按權(quán)利要求2所述的海藻倍半萜類化合物的制備方法，其特征在于:所述步驟3)中硅膠柱層析時(shí)用梯度在100:0到50:1的石油醚-乙酸乙酯或石油醚-丙酮進(jìn)行洗脫，收集梯度為50:l的組分，再經(jīng)薄層層析收集Rf值為0.6-0.7的化合物即為純化后的目標(biāo)化合物I。步驟l)中的有機(jī)溶液提取液可為氯仿、丙酮、乙酸乙酯或甲醇中一種或幾種。所述步驟2)經(jīng)薄層層析檢測時(shí)展開劑為體積比15-30:1的石油醚-乙酸乙酯或石油醚-丙酮；步驟3)薄層層析分離純化時(shí)展開劑為20-30:1的石油醚-乙酸乙酯或石油醚-丙酮。海藻倍半萜類化合物的應(yīng)用所述化合物可作為植物拒食殺蟲劑。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明涉及的化合物屬于小分子天然有機(jī)化合物，容易制備獲得；具有顯著的拒食殺蟲活性，可作為一種新型植物拒食殺蟲劑。本發(fā)明涉及的海洋紅藻岡村凹頂藻aaure刀ciaoh咖raiYamada)屬于紅藻門、松節(jié)藻科、凹頂藻屬海藻，主要分布于中國、日本和朝鮮半島等太平洋西部沿海地區(qū)，一般生長在潮間帶的巖石上。本發(fā)明通過海洋紅藻岡村凹頂藻經(jīng)提取、分離獲得的倍半萜類天然化合物，經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明，此化合物具有顯著的拒食殺蟲活性，可作為一種新型植物拒食殺蟲劑。其操作簡便、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施實(shí)例對本發(fā)明做進(jìn)一步闡述。實(shí)施例1倍半萜類化合物的制備方法釆集新鮮的岡村凹頂藻經(jīng)海水清洗，除去表面附著的沙礫及雜藻，陰涼處涼干備用。取涼干后的樣品60克，粉碎60目后用300亳升氯仿洄流提取三次，每次三小時(shí)，合并氯仿提取液，在溫度40。C左右減壓濃縮、回收氯仿，獲得氯仿粗提物。將粗提物(0.8克)進(jìn)行硅膠柱(200-300目)層析，用石油醚-丙酮以100:0、50:1、20:1、10:1,5:1至ij0:100的梯度進(jìn)行洗脫，分別收集洗脫液，再用薄層層析(TLC)檢測，根據(jù)Rf值來判斷、合并相同或類似部分，獲得八個(gè)組分(i-vni)，其中薄層層析(TLC)檢測時(shí)用茴香醛-硫酸作為顯色劑，展開劑為體積比為20:1的石油醚-乙酸乙酯。將組分1(0.2克)Rf=0.5-0.9，即以石油醚-丙酮20:1梯度洗脫下的組分再進(jìn)行硅膠柱和薄層層析分離，硅膠柱層析時(shí)用梯度在100:0到50:1的石油醚-乙酸乙酯進(jìn)行洗脫，收集50:1的石油醚-乙酸乙酯洗脫下的組分，薄層層析用30:1的石油醚-乙酸乙酯為展開劑，Rf=0.6-0.7即為純化后的化合物I(12.8亳克)，經(jīng)TLC檢測，呈單個(gè)、均勻粉紅色斑點(diǎn)，確定為純化合物。經(jīng)波譜分析，其結(jié)構(gòu)鑒定為2，10-二溴-3-氯-7oc,8-環(huán)氧-9-恰米烯，英文名2，10-dibromo-3-chloro-7ct，8a-epoxy-9-chamigrene,英文俗名deoxyprepacifenol,結(jié)構(gòu)式如(I)所示。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(I)該化合物具有以下理化和波譜特性無色晶體，核磁共振氫譜NMR,CDC13，500MHz)51.17(3H，s,H-13),1.19(3H，s，H-12)，1.62(3H，s，H-14),1.68(3H，s,H-15)，1.33(1H，m，H-5),1.75(1H，m，H-5)，2.14(1H,m，H-l),2.42(1H，m，H-1)，2.21(1H，m，H-4)，2.28(1H,m,H-4)，2.93(1H,d，J=2.9，H-8)，4.67(1H，dd,/=13.0，4.5,H—2),6,23(1H,d,J=2.9,H-9);核磁共振碳譜("C麗R，CDCh，125MHz)539.0(t，C-1)，63.1(d，C-2)，71.1(s，C-3),39.5(t,C-4),25.8(t,C-5)，49.1(s，C-6)，58.2(s,C-7)，56.2(d,C-8)，124.1(d，C-9),143.6(s，C-10),45.8(s，C-ll),24.3(q,C-12)，24.7(q，C-13),23.5(q，C-14),23.8(q，C-15)。實(shí)施例2與實(shí)施例l不同之處釆集新鮮的岡村凹頂藻經(jīng)海水清洗，除去表面附著的沙礫及雜藻，陰涼處涼干備用。取涼干后的樣品，粉碎80目后用丙酮洄流提取二次，每次三小時(shí)，合并丙酮提取液，在溫度40°C左右減壓濃縮、回收丙酮，獲得丙酮粗提物。將粗提物進(jìn)行硅膠柱(200-300目)層析，用石油醚-乙酸乙酯以100:0、50:1、20:1、10:1，5:1到0:100的梯度進(jìn)行洗脫，分別收集洗脫液，再用薄層層析(TLC)檢測(薄層層析(TLC)檢測時(shí)用茴香醛-硫酸作為顯色劑)，根據(jù)Rf值來判斷、合并相同或類似部分，獲得八個(gè)組分(I-VIII)。將組分I(Rf=0.5-0.9，石油醚-丙酮15:1展開)，即以石油醚-乙酸乙酯30:1梯度洗脫下的組分再進(jìn)行硅膠柱和薄層層析分離，硅膠柱層析時(shí)用梯度在100:0到50:1的石油醚-丙酮進(jìn)行洗脫，收集50:1的石油醚-丙酮洗脫下的組分，薄層層析用20:1的石油醚-丙酮為展開劑，得化合物I,經(jīng)TLC檢測為單個(gè)、均勻的粉紅色斑點(diǎn)，確定為純化合物，結(jié)構(gòu)式如(I)所示。實(shí)施例3與實(shí)施例l不同之處在于粉碎后的新鮮的岡村凹頂藻釆用體積比為3-5:1乙酸乙酯和甲醇的混合液進(jìn)行提取。實(shí)施例4與實(shí)施例l不同之處在于粉碎后的新鮮的岡村凹頂藻釆用體積比為1:1:l或2:1:2丙酮、氯仿和乙酸乙酯的混合液進(jìn)行提取。實(shí)施例5拒食殺蟲活性實(shí)驗(yàn)Spodopkra""orah's(灰翅夜蛾)是一種破壞力極大的植物害蟲，對44科112種植物具有嚴(yán)重侵害作用，而且具有繁殖力強(qiáng)、生長周期短等特點(diǎn)。釆用控制條件下實(shí)驗(yàn)室培育的該昆蟲，借其來評價(jià)化合物拒食殺蟲活性的強(qiáng)弱.具體為取Spoc叩"rah'"ora2i's—日齡幼蟲10只，以含有一定濃度(O.5%-2的拒食殺蟲劑(本發(fā)明倍半路類化合物2,10-二溴-3-氯-7oc，8『環(huán)氧-9-恰米烯)的傅料進(jìn)行喂食，6天后計(jì)數(shù)存活的幼蟲的數(shù)量和重量，并計(jì)算存活率和生長率，以不含拒食殺蟲劑的餌料作為空白對照，以此來評價(jià)該測試化合物的拒食殺蟲活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果.i見l1,數(shù)據(jù)表明上述獲得的倍半萜類化合物具有顯著的抑制Sixxfopterah'tZ:oraiis幼蟲的生長和殺蟲活性。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>權(quán)利要求1.一種海藻倍半萜類化合物，其特征在于結(jié)構(gòu)式如(I)所示全文摘要本發(fā)明涉及拒食殺蟲劑領(lǐng)域，具體地說是一種海藻倍半萜類化合物及其制備方法和應(yīng)用。具體結(jié)構(gòu)式如(I)所示，其制備方法為將海洋紅藻岡村凹頂藻沖洗、陰干、粉碎，然后用有機(jī)溶液提取2-5次，合并提取液進(jìn)行濃縮，得到粗提物；粗提物進(jìn)行硅膠柱層析，用有機(jī)溶劑進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫液，洗脫液經(jīng)薄層層析檢測；將以洗脫液體積比20-30∶1梯度，洗脫下的組分進(jìn)行硅膠柱層析和薄層層析分離純化得目標(biāo)化合物I。本發(fā)明所得倍半萜類化合物具有顯著的拒食、殺蟲活性，可進(jìn)一步利用岡村凹頂藻作為無公害海洋生物源農(nóng)藥，其操作簡便、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)。文檔編號C07D303/08GK101225078SQ20081001402公開日2008年7月23日申請日期2008年1月18日優(yōu)先權(quán)日2008年1月18日發(fā)明者季乃云,李曉明,王斌貴申請人:中國科學(xué)院海洋研究所