專利名稱：：10-位取代高喜樹堿類化合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，是一種新的具有抗腫瘤活性的高喜樹堿類化合物及其作為藥物的用途。
背景技術(shù)：
：喜樹堿(camptothecin,CPT)是一種從喜樹中提取得到的天然生物堿，具有稠合的五環(huán)剛性結(jié)構(gòu)，如下所示OHOCPT喜樹堿是最重要的拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑，對多種人腫瘤細(xì)胞株表現(xiàn)出抗腫瘤活性。多年的構(gòu)效研究得到了一大批具有開發(fā)價(jià)值的衍生物，其中伊立替康(Irinotecan，CPT-ll)和拓?fù)涮婵?Topotecan，TPT)先后由FDA批準(zhǔn)上市，貝諾替康于2004年被韓國批準(zhǔn)上市。喜樹堿的六元內(nèi)酯環(huán)E環(huán)在體內(nèi)易水解開環(huán)成無活性的羧酸鹽形式，使其體內(nèi)活性顯著降低，并且導(dǎo)致了其明顯的毒性。為提高喜樹堿類化合物在體內(nèi)的穩(wěn)定性從而增強(qiáng)活性，研究者最初將20-位羥基酯化成前藥，這樣可以有效的阻止分子內(nèi)氫鍵的形成從而抑制內(nèi)酯環(huán)水解。OlivierLavergne等人在WO97/00876提出了一類全新的具有七元p-羥基內(nèi)酯環(huán)的喜樹堿類似物，又稱高喜樹堿(homocamptothecin,hCPT)，顯示了增強(qiáng)的抗腫瘤活性，并具有代謝穩(wěn)定性增強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。MULLER等在WO2006082053中提出了在SN38的10位磷酸酯取代的喜樹堿，使得此類化合物水溶性大大增強(qiáng)。另外，LIQINGYONG等合成了18個10位取代的喜樹堿類衍生物。大部分化合物的細(xì)胞毒性均低于CPT，5個化合物顯示了和CPT相當(dāng)?shù)耐負(fù)洚悩?gòu)酶I抑制活性。然而目前喜樹堿類藥物仍然存在水溶性差、毒副作用大的缺點(diǎn)，需要繼續(xù)對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，以達(dá)到增強(qiáng)水溶性，降低毒性的目的。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，利用高喜樹堿的IO位羥基引入磷酸酯、氨基酸等水溶性親水片段提高水溶性，并且成酯后形成前藥降低毒性，以提供水溶性較強(qiáng)、毒性較低的一類高喜樹堿化合物及其用途。本發(fā)明提供了新的抗腫瘤活性的10-位取代高喜樹堿化合物，包括外消旋體、對映異構(gòu)體形式以及其這些形式的任意混合物或其藥用鹽，結(jié)構(gòu)如通式(I):(I)其中R3表示-OC(0)C(NR6R7)R8，其中&和117獨(dú)立地表示氫、叔丁氧羰基、芐氧羰基、鄰苯二甲酰亞胺基、對甲苯磺酰基、三苯甲基，Rs表示氫、低級烷基、R9R1()N(CH2)m、R9R1QNCO(CH2)m、取代或未取代的低級芳烷基，其中取代基是羥基、鹵素、COR、低級烷基、低級烷氧基、苯基、氰基、硝基；或R3表示-0-(CH2)k-PO(ORu)(OR^)，其中R。和Rn獨(dú)立地表示氫、含1至16個碳原子的直鏈或支鏈垸基、含1至3個鹵素取代的低級垸基、取代或未取代的低級芳烷基，其中取代基是羥基、鹵素、COR、低級垸基、低級烷氧基、苯基、氰基、硝基。優(yōu)選地，R3表示-OC(0)C(NR6R7)Rs，其中Re和R7獨(dú)立地表示氫、叔丁氧羰基、芐氧羰基、鄰苯二甲酰亞胺基、對甲苯磺?；?、三苯甲基，Rs表示氫、低級垸基、R9R1QN(CH2)m、R9R1()NCO(CH2)m、取代或未取代的低級芳垸基，其中取代基是羥基、鹵素、COR、低級烷基、低級垸氧基、苯基、氰基、硝基，R9、R1Q、Ru獨(dú)立地表示氫或低級垸基；或R3表示-0-(CH2)k-PO(ORu)(OR,3)，其中Ru和1113獨(dú)立地表示氫、含1至16個碳原子的直鏈或支鏈烷基、含1至3個鹵素取代的低級烷基、取代或未取代的低級芳烷基，其中取代基是羥基、鹵素、COR、低級烷基、低級烷氧基、苯基、氰基、硝基。RnR2、R4獨(dú)立地表示下列基團(tuán)氫、羥基、鹵素、CORu、低級烷基、低級鹵代烷基、低級鏈烯基、氰基、低級氰基垸基、硝基、低級硝基垸基、酰氨基、低級酰氨基垸基、肼基、低級肼基垸基、疊氮基、低級疊氮基烷基、(CH2)mNR16R17、(CH2)mOR16、(CH2)mSR16、(CH2)raC02R16、(CH2)mNR16C(0)R18、(CH2)mC(0)R18、(CH2)mOC(0)R18、0(CH2)mOR16R17、OC(0)NR16R17、未取代或被取代的(即在芳基或雜環(huán)上取代一至四次)芳基或低級芳基烷基，其中取代基是低級垸基、鹵素、硝基、氨基、低級烷基氨基、低級鹵代烷基、低級羥基烷基。優(yōu)選地，R,、R2、R4表示下列基團(tuán)氫、羥基、鹵素、低級烷基、含1-3個鹵素取代的低級烷基、低級烷氧基、硝基、氨基、取代或未取代的低級芳烷基，其中取代基是羥基、鹵素、CORu、低級烷基、低級烷氧基、苯基、氰基、硝基。R5表示低級烷基。優(yōu)選地，Rs表示甲基、乙基、丙基；特別優(yōu)選乙基；R9、R1Q、Ru獨(dú)立地表示氫或低級烷基；Rw和R^獨(dú)立地表示氫、鹵素；1116和Rn獨(dú)立地表示氫、低級烷基、低級羥基烷基、低級氨基烷基、環(huán)垸基、環(huán)垸基低級烷基、低級鏈烯基、低級烷氧基、低級鹵代烷基、取代或被取代的(即在芳基或雜環(huán)上取代一至四次)芳基或低級芳基烷基，其中取代基是低級垸基、鹵素、硝基、氨基、低級烷基氨基、低級鹵代烷基、低級羥基烷基；Rw表示氫、低級烷基、低級羥基烷基、低級氨基垸基、環(huán)烷基、環(huán)烷基低級垸基、低級鏈烯基、低級烷氧基、低級鹵代垸基、取代或被取代的(即在芳基或雜環(huán)上取代一至四次)芳基或低級芳基烷基，其中取代基是低級垸基、鹵素、硝基、氨基、低級烷基氨基、低級鹵代垸基、低級羥基垸基；m和k表示06的整數(shù)；所述的低級烷基為含1至6個碳原子直鏈或支鏈垸基；低級垸氧基為含1至6個碳原子直鏈或支鏈烷氧基；低級芳垸基為含6至11個碳原子連接有芳基的低級烷基。上述鹵素是指氟、氯、溴、碘。本發(fā)明還提供X"如式(I)所示的優(yōu)選化合物，它們是一7_甲基_10-叔丁氧羰基苯丙氨酸酯基高喜樹堿；一7-甲基-10-叔丁氧羰基谷氨酸酯基高喜樹堿；一7_甲基_iO-叔丁氧羰基纈氨酸酯基高喜樹堿；一7-甲基-10-叔丁氧羰基亮氨酸酯基高喜樹堿；一7-甲基-iO-叔丁氧羰基賴氨酸酯基高喜樹堿；一7_甲基_iO-叔丁氧羰基谷氨酰氨酸酯基高喜樹堿；一7-甲基_10_叔丁氧羰基蛋氨酸酯基高喜樹堿；—7-甲基-10_苯丙氨酸酯基高喜樹堿；一7-甲基-10-纈氨酸酯基高喜樹堿；一7_甲基_i0-雙乙基磷酸酯基高喜樹堿；一7_甲基_10_乙基磷酸酯基高喜樹堿；一7_甲基_iO-雙異丙基磷酸酯基高喜樹堿；一7_甲基_10_雙正丁基磷酸酯基高喜樹堿；一7_甲基_10_雙正戊基磷酸酯基高喜樹堿；一7—甲基_i0-苯甲基磷酸酯基高喜樹堿；一7_甲基_iO-雙十六垸基磷酸酯基高喜樹堿；一7_甲基_]0_三氟乙基磷酸酯基高喜樹堿；-7_甲基_10_乙基磷酸酯基-21-二氟高喜樹堿；或一7-甲基-10_叔丁氧羰基亮氨酸酯基_21_二氟高喜樹堿。本發(fā)明化合物的(3-羥基內(nèi)酯環(huán)中含一個非對稱碳原子，有R和S兩種構(gòu)型。其外消旋體可通過拆分的方法[如OlivierLavergne等的方法J.Med.Chem.41:5410(1998)]得到光學(xué)純的對映體。本發(fā)明還提供了上述高喜樹堿類化合物的制備方法。合成路線如下結(jié)合以上合成路線，用下面描述的并且對于本發(fā)明優(yōu)選化合物舉例的方法能制備式oo化合物。起始三環(huán)關(guān)鍵中間體9-乙基-9-羥基-2，3，4,8-四氫-511-6-氧雜-3&-氮雜環(huán)庚茚-1,4,7-三酮或9-乙基-9-羥基-8-二氟-2,3,4,8-四氫-5H-6-氧雜-3a-氮雜環(huán)庚茚-1，4,7-三酮(VH)可以參照專利CN1557814A得到，不同取代的5-羥基-2-氨基酮可參照文獻(xiàn)方法[如Osborn等J.Chem.Soc,1955，2100-2103]得到。然后將它們進(jìn)行經(jīng)典的Frielander縮合反應(yīng)可得到在AB環(huán)上具有不同取代基的高喜樹堿衍生物。下面以7-甲基-10-羥基高喜樹堿為例，詳細(xì)說明具體合成步驟1、對于式(I)化合物，R,為甲基，R2、R4、Rl4、Rl5都是氫，R3為羥基時(shí)，將三環(huán)關(guān)鍵中間體(W)與5-羥基-2-氨基-苯乙酮進(jìn)行Fridander縮合反應(yīng)得到的是7-甲基-10-羥基高喜樹堿。通常采用極性或非極性溶劑如苯、甲苯、乙醇、乙酸等，優(yōu)選苯、甲苯等非極性溶劑。Fridander縮合所用的催化劑為酸性催化劑，包括有機(jī)酸和無機(jī)酸，優(yōu)選的是有機(jī)酸如對甲苯磺酸、乙酸、甲酸等，特別優(yōu)選對甲苯磺酸。2、將7-甲基-10-羥基高喜樹堿在極性或非極性溶劑如二氯甲烷、吡啶等溶劑和對二甲氨基吡徒/N、N環(huán)己基碳酰亞胺系統(tǒng)中與各種氨基保護(hù)的氨基酸反應(yīng)得到7-甲基io-氨基保護(hù)的氨基酸酯基高喜樹堿(m)。3、將7-甲基-io-氨基保護(hù)的氨基酸酯基取代高喜樹堿(m)用三氟乙酸脫保護(hù)就可得到7-甲基-10-氨基酸酯基取代高喜樹堿(Ia)。4、將7-甲基-10-羥基高喜樹堿在在極性或非極性溶劑如二氯甲垸、吡啶等溶劑中和三氯氧磷反應(yīng)可得到7-甲基-10-磷酸酯取代高喜樹堿(V)。5、將7-甲基-10-磷酸酯基取代高喜樹堿(V)和各種醇如甲醇、乙醇、丙醇、苯甲醇等反應(yīng)，再水解就可得到單取代或雙取代的7-甲基-10-磷酸酯基取代高喜樹堿(Ib)。應(yīng)當(dāng)明確的是，當(dāng)R,為其他垸基，R2、R4、Rl4、Rl5分別有取代時(shí)，采用同樣的方法也可得到類似的化合物。本發(fā)明的某些化合物可按照常規(guī)方法制備藥用鹽的形式。包括其有機(jī)酸鹽及無機(jī)酸鹽無機(jī)酸包括(但不限于)鹽酸、硫酸、磷酸、二磷酸、氫溴酸、硝酸等，有機(jī)酸包括(但不限于)乙酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、琥珀酸、乳酸、對甲苯磺酸、水楊酸、草酸等。本發(fā)明的式(I)化合物具有抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶的作用，并具有抗腫瘤活性，可用于治療腫瘤，包括食道、胃、腸、直腸、口腔、咽、喉、肺、結(jié)腸、乳腺、子宮、子宮內(nèi)膜、卵巢、前列腺、睪丸、膀胱、腎、肝、胰腺、骨、結(jié)締組織、皮膚、目艮、腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等部位發(fā)生的癌癥，以及甲狀腺癌、白血病、霍金氏病、淋巴瘤和骨髓瘤等。本發(fā)明具體實(shí)施例得到的化合物經(jīng)腫瘤細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)，細(xì)胞株選用A549(人肺癌細(xì)胞)、LOVO(人腸癌細(xì)胞)、MDA-MB-435(人乳腺癌細(xì)胞)，實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明的化合物具有良好的抗腫瘤活性，多個化合物效果優(yōu)于上市藥物伊立替康。本發(fā)明的化合物還可以用于治療病毒感染[Chiang丄Li等，TheJournalofBiologicalChemistry,269:7051(1994)]及抗真菌活性[FostelJ.等，F(xiàn)EMSMicrobiologyLetters,138:105(1996)]，因此本發(fā)明的化合物可用于制備相應(yīng)的治療藥物。本發(fā)明化合物的藥理活性使其可以用于制備抗腫瘤、抗真菌及抗病毒藥物，因此本發(fā)明還包括以這些化合物及其藥用鹽作為活性成分的藥物組合物。該藥物組合物可以是固體形式或是液體形式。本發(fā)明還包括式(I)化合物及其外消旋體、對映異構(gòu)體形式以及這些形式的任意混合物或其藥用鹽在制備下列藥物方面的用途抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶的藥物、抗腫瘤藥物，抗真菌藥物和抗病毒藥物方面。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作詳細(xì)描述，但本發(fā)明的實(shí)施不僅限于此。實(shí)施例l7-甲基-10-羥基高喜樹堿的合成將0.50g9-乙基-9-羥基-2,3，8,9-四氫-5H-6-氧雜-3a-氮雜-環(huán)庚茚-l,4,7-三酮和0.50g5-羥基-2-氨基酮于500mL甲苯中，回流分水，30分鐘后，加入0.10g對甲苯磺酸，繼續(xù)回流4h，蒸干溶劑，以丙酮及甲醇洗滌，得0.5g黃色固體7-甲基-10-羥基高喜樹堿(70.7%)。iHNMR(DMSO)，5:0.87(t,3H),1.86(q，2H),2.76(s,3H),3.06(d,lH)，3.49(d,lH)，5.28(s,2H),5.39(d,lH),5.53(d,lH),6.03(s,lH),7.42(s，lH),7.72(t，lH),7.87(t,lH),8.15(q,2H),8.69(s，lH)，10.32(s,lH)。實(shí)施例27-甲基-10-叔丁氧羰基苯丙氨酸酯基高喜樹堿的合成將50mg叔丁氧羰基苯丙氨酸和50mgN、N環(huán)己基碳酰亞胺溶于10ml二氯甲烷中，常溫?cái)嚢?0min后加入50mg對二甲氨基吡啶，繼續(xù)攪拌10min后加入50mg7-甲基-10-羥基高喜樹堿，反應(yīng)6小時(shí)后蒸干溶劑，加入10ml乙醚，過濾，濾餅在硅膠色譜柱上純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH100:5)，得21mg黃色固體7-甲基-10-叔丁氧羰基苯丙氨酸酯基高喜樹堿(25.8%)。iHNMR(DMSO),5:0.87(t，3H),1.40(s，9H),1.86(q，2H),2.73(s,3H),3.14(d,2H)，3.27(d,2H),4.50(q,lH),5.30(s,2H),5.47(d，2H)，6.04(s,lH)，7.29(s，lH),7.37-7.40(m,5H),7.51(d,1H),7.69(d,lH)，7.72(s,lH)，8.20(d，1H)。實(shí)施例37-甲基-10-叔丁氧羰基甘氨酸酯基高喜樹堿的合成按照實(shí)施例2的方法，以叔丁氧羰基甘氨酸代替叔丁氧羰基苯丙氨酸，得到22mg黃色固體7-甲基-10-叔丁氧羰基甘氨酸酯基高喜樹堿(31.4%)。'HNMR(DMSO),S:0.87(t,3H),1.42(s,9H),1.87(q,2H)，2.75(s,3H),3.27(d,2H),4.08(d,2H),5.30(s,2H),5.47(d,2H),6.04(s，lH),7.40(s，lH),7.49(t,lH),7.65(d,lH),7.97(s,lH),8.2O(d,lH)。實(shí)施例47-甲基-10-叔丁氧羰基纈氨酸酯基高喜樹堿的合成按照實(shí)施例2的方法，以叔丁氧羰基纈氨酸代替叔丁氧羰基苯丙氨酸，得到20mg黃色固體7-甲基-10-叔丁氧羰基纈氨酸酯基高喜樹堿(26.5%)。iHNMR(DMSO)，S:0.87(t,3H),1.06(d,6H)，1.46(s，9H)，1.87(q,2H)，2.18(q,lH),2.75(s，3H)，3.28(d,2H),4.17(t,lH),5.31(s,2H),5.47(d,2H),6.04(s,lH),7.41(s,lH),7.55(d,lH),7.61(d,lH),7.90(s,lH),8.22(d，lH)。實(shí)施例57-甲基-10-叔丁氧羰基賴氨酸酯基高喜樹堿的合成按照實(shí)施例2的方法，以叔丁氧羰基賴氨酸代替叔丁氧羰基苯丙氨酸，得到25mg黃色固體7-甲基-10-叔丁氧羰基賴氨酸酯基高喜樹堿(27.2%)。!HNMR(DMSO),S:0.87(t,3H),1.38(s,9H),1.44(s,9H),.23-1.72(m，6H)，1.84(q,2H)，1.87(q,2H),2.75(s,3H),3.27(d，2H),4.22(s，lH)，5.30(s，2H),5.47(d,2H),6.03(s,lH),6.83(s,1H),7.40(s，lH),7.56(d,lH),7.60(d,lH),7.91(s,lH),8.20(d，lH)。實(shí)施例67-甲基-10-叔丁氧羰基亮氨酸酯基高喜樹堿的合成按照實(shí)施例2的方法，以叔丁氧羰基亮氨酸代替叔丁氧羰基苯丙氨酸，得到23mg黃色固體7-甲基-10-叔丁氧羰基亮氨酸酯基高喜樹堿(29.8%)。!HNMR(DMSO)，S:0.87(t,3H)，0.96(d，6H)，1.43(s，9H),1.71-l,73(m，2H),1.79-1.81(m，1H),1.87(q,2H),2.75(s,3H)，3.28(d,2H),4.29(t,lH),5.30(s,2H),5.47(d,2H)，6.03(s,lH)，7.39(s,lH)，7.58(d，lH),7.60(d,lH),7.91(s,lH)，8.21(d，lH)。實(shí)施例77-甲基-10-叔丁氧羰基蛋氨酸酯基高喜樹堿的合成按照實(shí)施例2的方法，以叔丁氧羰基蛋氨酸代替叔丁氧羰基苯丙氨酸，得到21mg黃色固體7-甲基-10-叔丁氧羰基蛋氨酸酯基高喜樹堿(26.4%)。iHNMR(DMSO)，S:0.87(t，3H)，1.44(s，9H),1.87(q,2H),2.11(s,3H),2.19(t,2H),2.61(t,2H),2.75(s,3H),3.28(d,2H),4.42(s，lH),5.30(s,2H),5.47(d，2H)，6.04(s,lH),7.40(s，lH),7.62(d,lH),7.66(d,lH),7.94(s,lH)，8.21(d，lH)。實(shí)施例87-甲基-10-苯丙氨酸酯基高喜樹堿的合成將15mg7-甲基-10-叔丁氧羰基苯丙氨酸酯基高喜樹堿溶于lml二氯甲烷中，滴加0.5mlTFA，室溫?cái)嚢?小時(shí)后立即減壓蒸干溶劑，加入5ml乙醚，過濾，乙醚沖洗，得到10mg淡黃色固體7-甲基-10-苯丙氨酸酯基高喜樹堿(79.0°/。)。iHNMR(DMSO),S:0.87(t,3H)，1.86(q,2H)，2.72(s，3H),3.21(d，2H)，3.34(d，2H)，4.65-4.70(m,lH),5.31(s,2H),5.47(d,2H),6.04(s,lH),7.39-7.65(m,7H),7.65(s,lH)，8.25(d，lH)，8.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>65(s,2H)。實(shí)施例97-甲基-10-纈氨酸酯基高喜樹堿的合成按照實(shí)施例8的方法，以7-甲基-10-叔丁氧羰基纈氨酸酯基高喜樹堿代替7-甲基-10-叔丁氧羰基苯丙氨酸酯基高喜樹堿，得到12mg淡黃色固體7-甲基-10-纈氨酸酯基高喜樹堿(96.3%)。iHNMR(DMSO),S:0.87(t，3H),1.16-1,19(m，6H),1.86(q，2H)，2.42(q,lH),2.77(s，3H),3.20(d,2H),4.31(d,1H),5.36(s，2H)，5.47(d，2H),6.04(s，lH),7,40(s，1H)，7.71(d,1H),8.00(s,1H),8.27(d,lH),8.51(s,2H)。實(shí)施例IO7-甲基-10-雙乙基磷酸酯基高喜樹堿的合成將100mg7-甲基-10-羥基-高喜樹堿溶于16ml干燥的吡啶中，冷卻至0。C后滴加0.1ml三氯氧磷和6滴三乙胺，攪拌1.5小時(shí)后加入0.2ml絕對乙醇，繼續(xù)反應(yīng)1.5小時(shí)后加入O.lml蒸餾水，攪拌1小時(shí)后蒸干溶劑，在硅膠色譜柱上純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH100:5)，得到19mg淡黃色固體7-甲基-10-雙乙基磷酸酯基高喜樹堿(14.1%)。丄HNMR(DMSO),S:0.87(t，3H),1.29隱1.32(m，6H),1.87(q，2H)，2.75(s,3H),3.27(d，2H),4.2l-4.27(m,4H),5.30(s，2H)，5.47(d,2H)，6.02(s,lH),7.40(s，lH),7.75(d,lH)，7.80(s，lH),8.2l(d,lH)。實(shí)施例ll7-甲基-10-乙基磷酸酯基高喜樹堿的合成將100mg7-甲基-10-羥基-高喜樹堿溶于16ml干燥的吡啶中，冷卻至0。C后滴加0.1ml三氯氧磷和6滴三乙胺，攪拌1.5小時(shí)后加入0.21!11絕對乙醇，繼續(xù)反應(yīng)1.5小時(shí)后加入0.1ml蒸餾水，攪拌l小時(shí)后蒸干溶劑，在硅膠色譜柱上純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH100:5)，得到24mg淡黃色固體7-甲基-10-乙基磷酸酯基高喜樹堿(18.8%)。iHNMR(DMSO),S:0.87(t,3H)，l.ll(m,3H),1.84(q,2H)，2.67(s,3H),3.27(d,2H)，3.85(m，4H),5.20(s,2H),5.47(d,2H),6.08(s，1H),7.32(s,1H),7.72(d,lH),7.86(s,1H),8.03(d,1H)。實(shí)施例127-甲基-10-雙異丙基磷酸酯基高喜樹堿的合成按照實(shí)施例10的方法，以異丙醇代替乙醇，得到19mg淡黃色固體7-甲基-lO-雙異丙基磷酸酯基高喜樹堿(13.4%)。'HNMR(DMSO),S:0.87(t,3H),1.21陽1.34(m,12H),1.86(q,2H),2.74(s,3H),3.27(d，2H),4.73-4.77(m，2H),5.30(s，2H)，5.47(d，2H)，6.03(s,lH),7.38(s,lH),7,75(d，lH),7.97(s,lH),8.20(d,lH)。實(shí)施例137-甲基-10-雙丁基磷酸酯基高喜樹堿的合成按照實(shí)施例10的方法，以正丁醇代替乙醇，得到30mg淡黃色固體7-甲基-lO-雙丁基磷酸酯基高喜樹堿(20.1%)。iHNMR(DMSO),S:0.85-0.89(m，9H),1.34-1.38(m,4H),1.62-1.65(m,4H),1.87(q，2H),2.75(s,3H),3.27(d,2H)，4.16-4.20(m，4H),5.30(s,2H)，5.47(d,2H),6.03(s,lH)，7.39(s,lH),7.75(d,lH)，7,80(s,lH),8.20(d,lH)。實(shí)施例147-甲基-10-雙戊基磷酸酯基高喜樹堿的合成按照實(shí)施例10的方法，以正戊醇代替乙醇，得到19mg淡黃色固體7-甲基-lO-雙戊基磷酸酯基高喜樹堿(12.2%)。'HNMR(DMSO),&0.84-0.89(m，9H)，1.29-1.32(m,4H)，1.58-1.61(m,4H),l,62-1.65(m,4H)，1.87(q，2H),2.75(s,3H)，3.27(d,2H),4.15-4.19(m，4H),5.30(s,2H),5.47(d，2H),6.03(s,1H),7.39(s，lH),7.75(d，lH)，7.97(s，lH),8.20(d，lH)。實(shí)施例157-甲基-10-苯甲基磷酸酯基高喜樹堿的合成按照實(shí)施例ll的方法，以苯甲醇代替乙醇，得到18mg淡黃色固體7-甲基-lO-苯甲基磷酸酯基-高喜樹堿(12.6%)。'HNMR(DMSO),S:0.87(t，3H)，1.30(s,2H)，1.84(q，2H)，2.61(s，3H),3.06(d,lH)，3.49(d,1H),5.20(s，2H),5.40(d,1H),5.51(d,lH),6.06(s，1H)，7.12-7.46(m,7H),7.73(s,1H)，7.84(s，1H),8,02(s，lH)。實(shí)施例167-甲基-10-雙十六烷基磷酸酯基高喜樹堿的合成按照實(shí)施例10的方法，以十六醇代替乙醇，得到15mg淡黃色固體7-甲基-lO-雙十六烷基磷酸酯基高喜樹堿(6.4%)。iHNMR(DMSO)，5:0.83-0.88(m，9H),1.15-1.27(m，52H)，1.62-1.63(m，4H),1.85(q,2H)，2.75(s,3H),3.27(d，2H)，4.16-4.18(m，4H),5.29(s,2H),5.46(d,2H)，6.03(s,lH),7.39(s,lH),7.74(d,1H)，7.97(s，1H),8.20(d,1H)。實(shí)施例177-甲基-10-雙三氟乙基磷酸酯基高喜樹堿的合成按照實(shí)施例10的方法，以三氟乙醇代替乙醇，得到20mg淡黃色固體7-甲基-10-二三氟乙基磷酸酯基高喜樹堿(12.3%)。iHNMR(DMSO),5:0.86(t,3H),1.86(q,2H),2.75(s,3H),3.27(d，2H),4.97-5.04(m,4H)，5.31(s,2H)，5.46(d,2H),6.04(s，1H)，7.40(s,lH),7.79(d，1H)，8.07(s，1H),8.25(d,1H)。實(shí)施例187-甲基-10-乙基磷酸酯基-21-二氟高喜樹堿的合成按照實(shí)施例1的方法，以9-乙基-9-羥基-8-二氟-2，3,4,8-四氫-511-6-氧雜-3&-氮雜環(huán)庚茚-l,4,7-三酮代替9-乙基-9-羥基-2,3,8,9-四氫-5H-6-氧雜-3a-氮雜-環(huán)庚茚-l，4，7-三酮，合成得到7-甲基-10-羥基-21-二氟高喜樹堿。按照實(shí)施例IO的方法，以7-甲基-10-羥基-21-二氟高喜樹堿代替7-甲基-10-羥基高喜樹堿，得到19mg淡黃色固體7-甲基-10-乙基磷酸酯基-21-二氟高喜樹堿(10.8%)。'HNMR(DMSO),S:1.18(t,3H),1.12(m,3H),1.47(q,2H),2.65(s,3H)，2.99(q,2H)，3.87(m,4H),5.21(s,2H),6.04(s，lH),7.10(s,lH)，7.71(d，lH),7.87(s,lH),8.05(d,lH)。實(shí)施例197-甲基-10-叔丁氧羰基亮氨酸酯基-21-二氟高喜樹堿的合成按照實(shí)施例1的方法，以9-乙基-9-羥基-8-二氟-2，3，4，8-四氫-511-6-氧雜-3&氮雜環(huán)庚茚-l,4,7-三酮代替9-乙基-9-羥基-2,3,8,9-四氫-5H-6-氧雜-3a-氮雜-環(huán)庚茚-l,4,7-三酮，合成得到7-甲基-10-羥基-21-二氟高喜樹堿。按照實(shí)施例2的方法，以叔丁氧羰基亮氨酸和7-甲基-10-羥基-21-二氟高喜樹堿分別代替叔丁氧羰基苯丙氨酸和7-甲基-10-羥基高喜樹堿，得到24mg黃色固體7-甲基-10-叔丁氧羰基亮氨酸酯基高喜樹堿(28.8%)。丄HNMR(DMSO),S:0鄰(d，6H)，1.17(t,3H),1.45(s,9H),1.48(q,2H),1.72-1.74(m，2H),1.79-1.80(m，lH)，2.74(s，3H)，2.98(q，2H)，4.27(t,lH)，5.33(s，2H),6.05(s,lH)，7.11(s,1H),7.59(d,IH),7.60(d,1H),7.93(s,1H),8.20(d,1H)。實(shí)施例20本發(fā)明化合物的抗腫瘤活性試驗(yàn)對本發(fā)明的化合物進(jìn)行了腫瘤細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)，試驗(yàn)方法采用常規(guī)的MTT法(如呂秋軍主編《新藥藥理學(xué)研究方法》，2007:242-243)。細(xì)胞株選用A549(人肺癌細(xì)胞)、LOVO(人腸癌細(xì)胞)、MDA-MB-435(人乳腺癌細(xì)胞)，購自中科院上海分院細(xì)胞室。培養(yǎng)液為RPMI1640+15。/。NBS+雙抗。MTT溶液配制稱取MTT0.5克，溶于100ml的磷酸緩沖液(PBS)或無酚紅的培養(yǎng)基中，用0.22tim濾膜過濾以除去溶液里的細(xì)菌，放4。C避光保存。樣品液配制用DMSO(Merck)溶解后，加入PBS(-)配成1000ug/ml的溶液或均勻的混懸液，然后用含DMSO的PBS(-)稀釋。將上市的抗腫瘤藥物拓?fù)涮婵?、伊立替康以同樣的條件配成對照品溶液。96孔板每孔加入濃度為4-6x104個/ml的細(xì)胞懸液100)al，置37°C，5%C02培養(yǎng)箱內(nèi)。24h后，加入樣品液，10ul/孔，設(shè)雙復(fù)孔，37°C，5。/。C02作用72h。每孔加入5mg/ml的MTT溶液20lxl，作用4h后加入溶解液，100ul/孔，置培養(yǎng)箱內(nèi)，溶解后用MK-2全自動酶標(biāo)儀測570nmOD值。計(jì)算半數(shù)抑制濃度IC50。試驗(yàn)結(jié)果見表1，其中，樣品是指相應(yīng)實(shí)施例中制備的高喜樹堿類化合物(例如實(shí)施例1即7-甲基-10-羥基高喜樹堿)。表l測試化合物對腫瘤細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC5o(單位pg/mL)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的化合物具有良好的抗腫瘤活性，多個化合物高于上市的喜樹堿類前藥伊立替康，因此本發(fā)明化合物及其鹽類可以用于制備抗腫瘤藥物。權(quán)利要求1、10位取代高喜樹堿類化合物，包括外消旋體、對映異構(gòu)體形式和這些形式的任意混合物或其藥用鹽，結(jié)構(gòu)如通式(I)其中R3表示-OC(O)C(NR6R7)R8，其中R6和R7獨(dú)立地表示氫、叔丁氧羰基、芐氧羰基、鄰苯二甲酰亞胺基、對甲苯磺?；?、三苯甲基，R8表示氫、低級烷基、R9R10N(CH2)m、R9R10NCO(CH2)m、取代或未取代的低級芳烷基，其中取代基是羥基、鹵素、COR11、低級烷基、低級烷氧基、苯基、氰基、硝基，R9、R10、R11獨(dú)立地表示氫或低級烷基；或R3表示-O-(CH2)k-PO(OR12)(OR13)，其中R12和R13獨(dú)立地表示氫、含1至16個碳原子的直鏈或支鏈烷基、含1至3個鹵素取代的低級烷基、取代或未取代的低級芳烷基，其中取代基是羥基、鹵素、COR11、低級烷基、低級烷氧基、苯基、氰基、硝基；m和k表示0～6的整數(shù)；R14和R15獨(dú)立地表示氫、鹵素；R1、R2、R4獨(dú)立地表示下列基團(tuán)氫、羥基、鹵素、低級烷基、含1-3個鹵素取代的低級烷基、低級烷氧基、硝基、氨基、取代或未取代的低級芳烷基，其中取代基是羥基、鹵素、COR11、低級烷基、低級烷氧基、苯基、氰基、硝基；R5表示低級烷基；所謂低級烷基為含1至6個碳原子直鏈或支鏈烷基；低級烷氧基為含1至6個碳原子直鏈或支鏈烷氧基；低級芳烷基為含6至11個碳原子連接有芳基的低級烷基。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于其中的R5是甲基、乙基或丙基。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于其中的鹵素是指氟、氯、溴或碘。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于所述化合物選自一7_甲基_!0-叔丁氧羰基苯丙氨酸酯基高喜樹堿；_7-甲基_10_叔丁氧羰基谷氨酸酯基高喜樹堿；一7_甲基_10_叔丁氧羰基纈氨酸酯基高喜樹堿；一7_甲基_10_叔丁氧羰基亮氨酸酯基高喜樹堿；—7-甲基_10-叔丁氧羰基賴氨酸酯基高喜樹堿；—7_甲基_10_叔丁氧羰基谷氨酰氨酸酯基高喜樹堿；_7-甲基-10-叔丁氧羰基蛋氨酸酯基高喜樹堿；一7_甲基—10-苯丙氨酸酯基高喜樹堿；一7-甲基-10-纈氨酸酯基高喜樹堿；一7-甲基-10-雙乙基磷酸酯基高喜樹堿；—7-甲基40-乙基磷酸酯基高喜樹堿；一7-甲基-10-雙異丙基磷酸酯基高喜樹堿；一7-甲基-10-雙正丁基磷酸酯基高喜樹堿；一7_甲基-10_雙正戊基磷酸酯基高喜樹堿；一7-甲基-10-苯甲基磷酸酯基高喜樹堿；一7_甲基-10-雙十六烷基磷酸酯基高喜樹堿；_7-甲基-10-三氟乙基磷酸酯基高喜樹堿；—7-甲基-10-乙基磷酸酯基_21_二氟高喜樹堿；—7_甲基_10_叔丁氧羰基亮氨酸酯基_21_二氟高喜樹堿。5、權(quán)利要求l、2、3或4中的任一化合物，包括其外消旋體、對映異構(gòu)體形式或者這些形式的任意混合物或其藥用鹽在制備拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、抗腫瘤藥物、抗真菌藥物或抗病毒藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，是一種新的具有抗腫瘤活性的10-位取代高喜樹堿類化合物及作為藥物的用途。本發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)如通式(I)所示，包括它們的外消旋混合物以及各自的對映異構(gòu)體。本發(fā)明的化合物具有抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶的作用，并具有抗腫瘤活性、抗真菌活性和抗病毒活性，可用作拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，以及用于制備抗腫瘤藥物、抗真菌藥物和抗病毒藥物。文檔編號C07D491/00GK101220037SQ200810033310公開日2008年7月16日申請日期2008年1月31日優(yōu)先權(quán)日2008年1月31日發(fā)明者姚建忠,晶張,張萬年,亮游,王文雅,盛春泉,繆震元,車曉穎,巍郭申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)