專利名稱：一種疏水性電荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張吸附床介質(zhì)及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種疏水性電荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)及其制備方法，屬 于層析分離中擴(kuò)張床吸附分離蛋白質(zhì)技術(shù)。
背景技術(shù)：
隨著基因工程、蛋白質(zhì)工程、發(fā)酵工程和細(xì)胞工程的迅速發(fā)展，越來越多 的生物產(chǎn)品需要高效的生物下游技術(shù)進(jìn)行分離和純化，對生物分離方法也提出 了新的要求。
抗體是一種重要的生物技術(shù)產(chǎn)品，廣泛用于免疫治療、疾病預(yù)防和醫(yī)學(xué)診 斷。通過細(xì)胞工程和免疫方法制備多克隆抗體和單克隆抗體的技術(shù)已經(jīng)越來越 成熟，抗體種類不斷增多，制備規(guī)模也不斷擴(kuò)大，這就要求有高效的抗體分離 技術(shù)與之相適應(yīng)。抗體產(chǎn)品往往純度要求較高，同時還要盡可能保持生物活性， 因此傳統(tǒng)的分離過程難以滿足要求。常規(guī)的離子交換層析和疏水相互作用層析 能夠結(jié)合抗體，但是特異性和選擇性較差，分離步驟多，影響抗體的活性收率。
Protein A親和層析介質(zhì)能夠選擇性吸附抗體，但是介質(zhì)價格昂貴，且配基易被 料液中蛋白酶降解，重復(fù)使用次數(shù)低，操作成本極高，限制其大規(guī)模應(yīng)用。
1985年P(guān)omth等提出了含有砜基和巰基乙醇的親硫色譜(Pomth et al. F五^S /e能 1985, 185: 306)用于抗體的分離，但是需要在一定的鹽濃度下進(jìn)行吸附。 1998年Burton和Harding提出了疏水性電荷誘導(dǎo)層析(Hydrophobic charge induction chromatography, HCIC)( Burton SC and Harding DRK. /CTmjwatogrJ, 1998, 814: 71)，利用雜環(huán)配基與抗體的疏水作用進(jìn)行吸附，結(jié)合靜電排斥進(jìn)行 洗脫，其專利(US Patent 5,652,348)描述了 HCIC介質(zhì)的制備方法。專利(US Patent 5，719，269; US Patent 7,144,743)也報(bào)導(dǎo)了HCIC介質(zhì)的制備工藝。但是 這些HCIC介質(zhì)均沒有明確結(jié)合親硫作用，是一種密度接近l的介質(zhì)，只能用 于常規(guī)的填充式層析，不能用于新近出現(xiàn)的擴(kuò)張床吸附過程。因此，結(jié)合疏水 性電荷誘導(dǎo)層析的高吸附容量和溫和的洗脫條件，以及親硫?qū)游龅目贵w選擇性， 并引入擴(kuò)張床吸附的初分離功能，將形成抗體分離的新方法。
擴(kuò)張床吸附(Expanded Bed Adsorption, EBA)技術(shù)形成于20世紀(jì)90年代，是 一種集固液分離、濃縮和初期純化于一個操作單元之中的新型蛋白質(zhì)分離純化 技術(shù)。EBA能直接從發(fā)酵液、細(xì)胞勻漿或者組織提取液中捕獲目標(biāo)產(chǎn)物，減少 了操作單元數(shù)，縮短了處理時間，節(jié)約了生產(chǎn)成本，被譽(yù)為近十幾年來出現(xiàn)的一個新的單元操作。
本發(fā)明以巰基甲基咪唑作為疏水性電荷誘導(dǎo)配基，砜基為親硫基團(tuán)，偶聯(lián) 到擴(kuò)張床吸附基質(zhì)上，制備新型的疏水性電荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)，可 以充分地把疏水性電荷誘導(dǎo)層析、親硫?qū)游龊蛿U(kuò)張床吸附三種蛋白質(zhì)分離原理 結(jié)合在一起，形成一種高效集成化的新型生物活性物質(zhì)分離方法，有效促進(jìn)抗 體等蛋白質(zhì)分離工藝的改進(jìn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種疏水性電荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張吸附床介質(zhì)及其制備 方法。
疏水性電荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)介質(zhì)的組成中基質(zhì)為纖維素/無機(jī) 增重劑復(fù)合微球，延長臂為二乙烯基砜活化后引入的親硫性二乙基砜基，配基 為偶聯(lián)后的巰基甲基咪唑，其結(jié)構(gòu)組成為-
<formula>formula see original document page 4</formula>，
所述的纖維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球的骨架為纖維素，增重劑為鈦白粉、不
銹鋼粉、鎳粉或碳化鎢粉，增重劑占濕球的質(zhì)量百分比含量為16% 61%;纖維 素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球的粒徑為50 250^im。配基為巰基甲基咪唑，巰基甲基 咪唑包括2-巰基-l-甲基咪唑、4-巰基-l-甲基咪唑或5-巰基-l-甲基咪唑。配基密 度為30 65|imol/ml介質(zhì)。
疏水性電荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)的制備方法首先將纖維素粘膠和
無機(jī)增重劑充分混合，無機(jī)增重劑在混合物中的質(zhì)量百分含量為16% 61%，加 入5倍纖維素粘膠質(zhì)量的泵油，控制轉(zhuǎn)速500 800rpm，反相懸浮熱再生制成球， 沸水洗滌，篩選50 250pm粒徑的纖維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球作為基質(zhì)；其次 將纖維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球、二乙烯基砜、0.1 0.4MpH12的碳酸鈉緩沖液 和二甲基亞砜混合，二乙烯基砜添加的體積量為纖維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球體 積的18% 36%， 25'C下180rpm搖床中活化4小時，抽濾，用去離子水洗滌得到活化基質(zhì);然后將活化后的基質(zhì)、3倍雙鍵摩爾量的巰基甲基咪唑和含25mg/ml 過硫酸銨的0.4 0.6M氫氧化鈉溶液混合，6(TC下180rpm搖床中偶聯(lián)8小時， 抽濾，用去離子水洗滌，加入到含有1% &02和1%甘油的溶液中浸泡2小時， 去離子水洗滌，得到疏水性電荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)。反應(yīng)過程示意圖為
<formula>formula see original document page 5</formula>
本發(fā)明充分結(jié)合了疏水性電荷誘導(dǎo)層析、親硫?qū)游龊蛿U(kuò)張床吸附等三種蛋 白質(zhì)分離原理，將親硫基團(tuán)、疏水性電荷誘導(dǎo)配基巰基甲基咪唑偶聯(lián)到了以纖 維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球?yàn)楣羌艿臄U(kuò)張床基質(zhì)上，形成了新型疏水性電荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)。制備工藝的關(guān)鍵在于首先，制成的纖維素/無機(jī)增重 劑復(fù)合微球作為擴(kuò)張床基質(zhì)，具有合理的密度和粒徑分布，適合于高流速、大 規(guī)模的初級分離處理過程；其次，選用的活化試劑二乙烯基砜，提供了缺電子 的親硫基團(tuán)，可以在弱堿性的環(huán)境中進(jìn)行活化，加入了親水性有機(jī)溶劑二甲亞 砜，可顯著提高活化效率；其三，優(yōu)化了巰基甲基咪唑的偶聯(lián)反應(yīng)，減少了反 應(yīng)步驟，確保了偶聯(lián)效率，使配基密度達(dá)到65pmol/ml，保證了介質(zhì)具有較高的 蛋白質(zhì)吸附容量。


附圖是本發(fā)明的介質(zhì)(配基密度為65nmol/ml)吸附卵黃抗體和牛血清白蛋 白的靜態(tài)吸附等溫線。
實(shí)施方式
以下通過實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的描述
實(shí)施例1
將50g纖維素粘膠和40g碳化鎢粉末在500ml圓底燒瓶中300rpm攪拌混合， 加入300g泵油，700rpm轉(zhuǎn)速，反相懸浮熱再生制成球，沸水洗滌，去離子水洗 滌3 5次，篩選50 250pm粒徑大小的纖維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球作為基質(zhì)； 將10ml抽干的復(fù)合微球、3.6ml二乙烯基砜、9ml 0.25MpH12的碳酸鈉緩沖液和1.5ml 二甲基亞砜加入到錐形瓶中，25。C下180rpm搖床中活化4小時，抽濾 除去混合液，用去離子水洗滌，抽干。加入3倍雙鍵摩爾量的2-巰基-l-甲基咪 唑和10ml含有25mg/ml過硫酸銨的0.5M氫氧化鈉溶液，60'C下180rpm搖床中 偶聯(lián)反應(yīng)8小時，抽濾除去混合液，用去離子水洗滌，抽干。介質(zhì)加入到100ml 含有1% 11202和1%甘油的溶液中浸泡2小時，去離子水洗漆，得到疏水性電 荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)，介質(zhì)濕真密度為1.81g/ml，配基密度為 65(imol/ml。 實(shí)施例2
將50g纖維素粘膠和40g碳化鎢粉末在500ml圓底燒瓶中300rpm攪拌混合， 加入300g泵油，700rpm轉(zhuǎn)速，反相懸浮熱再生制成球，沸水洗滌，去離子水洗 滌3 5次，篩選50 250(im粒徑大小的纖維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球作為基質(zhì)； 將10ml抽干的復(fù)合微球、0.9ml二乙烯基砜、9ml O.IM pH12的碳酸鈉緩沖液 和1.5ml 二甲基亞砜加入到錐形瓶中，25。C下180rpm搖床中活化4小時，抽濾 除去混合液，用去離子水洗滌，抽干。加入3倍雙鍵摩爾量的2-巰基-l-甲基咪 唑和10ml含有25mg/ml過硫酸銨的0.4M氫氧化鈉溶液，6(TC下180rpm搖床中 偶聯(lián)反應(yīng)8小時，抽濾除去混合液，用去離子水洗滌，抽干。介質(zhì)加入到100ml 含有1% &02和1%甘油的溶液中浸泡2小時，去離子水洗滌，得到疏水性電 荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)，介質(zhì)濕真密度為1.81g/ml，配基密度為 30jjmol/ml。 實(shí)施例3
將50g纖維素粘膠和80g碳化鉤粉末在500ml圓底燒瓶中300rpm攪拌混合， 加入310g泵油，800rpm轉(zhuǎn)速，反相懸浮熱再生制成球，沸水洗滌，去離子水洗 滌3 5次，篩選50 250pm粒徑大小的纖維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球作為基質(zhì)； 將10ml抽干的復(fù)合微球、1.8ml二乙烯基砜、9ml 0.4M pH12的碳酸鈉緩沖液 和1.5ml二甲基亞砜加入到錐形瓶中，25。C下180rpm搖床中活化4小時，抽濾 除去混合液，用去離子水洗滌，抽干。加入3倍雙鍵摩爾量的2-巰基-l-甲基咪 唑和10ml含有25mg/ml過硫酸銨的0.6M氫氧化鈉溶液，6(TC下180rpm搖床中 偶聯(lián)反應(yīng)8小時，抽濾除去混合液，用去離子水洗滌，抽千。介質(zhì)加入到100ml 含有1% 11202和1%甘油的溶液中浸泡2小時，去離子水洗滌，得到疏水性電 荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)，介質(zhì)濕真密度為2.40g/ml，配基密度為 48(xmol/ml。 實(shí)施例4將50g纖維素粘膠和60g碳化鎢粉末在500ml圓底燒瓶中300rpm攪拌混合， 加入300g泵油，800rpm轉(zhuǎn)速，反相懸浮熱再生制成球，沸水洗滌，去離子水洗 滌3 5次，篩選50 25(Him粒徑大小的纖維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球作為基質(zhì)； 將10ml抽干的復(fù)合微球、3.6 ml 二乙烯基砜、9ml 0.25M pH12的碳酸鈉緩沖液 和1.5ml二甲基亞砜加入到錐形瓶中，25'C下180rpm搖床中活化4小時，抽濾 除去混合液，用去離子水洗滌，抽干。加入3倍雙鍵摩爾量的2-巰基-l-甲基咪 唑和10ml含有25mg/ml過硫酸銨的0.5M氫氧化鈉溶液，6(TC下180rpm搖床中 偶聯(lián)反應(yīng)8小時，抽濾除去混合液，用去離子水洗滌，抽干。介質(zhì)加入到100ml 含有1% &02和1%甘油的溶液中浸泡2小時，去離子水洗滌，得到疏水性電 荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)，介質(zhì)濕真密度為2.11g/ml，配基密度為 56|umol/ml。 實(shí)施例5
將50g纖維素粘膠和12g鎳粉在500ml圓底燒瓶中300rpm攪拌混合，加入 300g泵油，700rpm轉(zhuǎn)速，反相懸浮熱再生制成球，沸水洗滌，去離子水洗滌3 5次，篩選50 250pm粒徑大小的纖維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球作為基質(zhì);將10ml 抽干的復(fù)合微球、3.6ml二乙烯基砜、9ml0.25MpH12的碳酸鈉緩沖液和L5ml 二甲基亞砜加入到錐形瓶中，25'C下180rpm搖床中活化4小時，抽濾除去混合 液，用去離子水洗滌，抽干。加入3倍雙鍵摩爾量的2-巰基-l-甲基咪唑和10ml 含有25mg/ml過硫酸銨的0.5M氫氧化鈉溶液，6(TC下180rpm搖床中偶聯(lián)反應(yīng) 8小時，抽濾除去混合液，用去離子水洗滌，抽干。介質(zhì)加入到100ml含有l(wèi)X 11202和1%甘油的溶液中浸泡2小時，去離子水洗滌，得到疏水性電荷誘導(dǎo)型 親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)，介質(zhì)濕真密度為1.42g/ml，配基密度為63pmol/ml。 實(shí)施例6
將50g纖維素粘膠和20g不銹鋼粉在500ml圓底燒瓶中300rpm攪拌混合， 加入300g泵油，700rpm轉(zhuǎn)速，反相懸浮熱再生制成球，沸水洗滌，去離子水洗 滌3 5次，篩選50 250|Lim粒徑大小的纖維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球作為基質(zhì); 將10ml抽干的復(fù)合微球、3.6ml 二乙烯基砜、9 ml 0.25M pH12的碳酸鈉緩沖液 和1.5ml二甲基亞砜加入到錐形瓶中，25。C下180rpm搖床中活化4小時，抽濾 除去混合液，用去離子水洗滌，抽干。加入3倍雙鍵摩爾量的2-巰基-l-甲基咪 唑和10ml含有25mg/ml過硫酸銨的0.5M氫氧化鈉溶液，6(TC下180rpm搖床中 偶聯(lián)反應(yīng)8小時，抽濾除去混合液，用去離子水洗滌，抽干。介質(zhì)加入到100ml 含有1。Z 11202和1%甘油的溶液中浸泡2小時，去離子水洗滌，得到疏水性電荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)，介質(zhì)濕真密度為L71g/ml，配基密度為
61|imol/ml。
實(shí)施例7
將50g纖維素粘膠和15g鈦白粉在500ml圓底燒瓶中300rpm攪拌混合，加 入300g泵油，700rpm轉(zhuǎn)速，反相懸浮熱再生制成球，沸水洗滌，去離子水洗滌 3 5次，篩選50 250pm粒徑大小的纖維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球作為基質(zhì)；將 10ml抽干的復(fù)合微球、3.6ml 二乙烯基砜、9 ml 0.25M pH12的碳酸鈉緩沖液和 L5ml二甲基亞砜加入到錐形瓶中，25'C下180rpm搖床中活化4小時，抽濾除 去混合液，用去離子水洗滌，抽干。加入3倍雙鍵摩爾量的2-巰基-l-甲基咪唑 和10ml含有25mg/ml過硫酸銨的0.5M氫氧化鈉溶液，60'C下180rpm搖床中偶 聯(lián)反應(yīng)8小時，抽濾除去混合液，用去離子水洗滌，抽干。介質(zhì)加入到100ml 含有1% 11202和1%甘油的溶液中浸泡2小時，去離子水洗滌，得到疏水性電 荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)，介質(zhì)濕真密度為1.39g/ml，配基密度為 57|umol/ml。 實(shí)施例8
將50g纖維素粘膠和40g碳化鉤粉末在500ml圓底燒瓶中300rpm攪拌混合， 加入300g泵油，700rpm轉(zhuǎn)速，反相懸浮熱再生制成球，沸水洗滌，去離子水洗 滌3 5次，篩選50 250pm粒徑大小的纖維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球作為基質(zhì)； 將10ml抽干的復(fù)合微球、3.6ml 二乙烯基砜、9ml 0.25M pH12的碳酸鈉緩沖液 和1.5ml二甲基亞砜加入到錐形瓶中，25'C下180ipm搖床中活化4小時，抽濾 除去混合液，用去離子水洗滌，抽干。加入3倍雙鍵摩爾量的4-巰基-l-甲基咪 唑和10ml含有25mg/ml過硫酸銨的0.5M氫氧化鈉溶液，6(TC下180rpm搖床中 偶聯(lián)反應(yīng)8小時，抽濾除去混合液，用去離子水洗滌，抽干。介質(zhì)加入到100ml 含有1% H202和1%甘油的溶液中浸泡2小時，去離子水洗滌，得到疏水性電 荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)，介質(zhì)濕真密度為1.81g/ml，配基密度為 61(imol/ml。 實(shí)施例9
將50g纖維素粘膠和40g碳化鎢粉末在500ml圓底燒瓶中300rpm攪拌混合， 加入300g泵油，700rpm轉(zhuǎn)速，反相懸浮熱再生制成球，沸水洗滌，去離子水洗 滌3 5次，篩選50 250^im粒徑大小的纖維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球作為基質(zhì)； 將10ml抽干的復(fù)合微球、3.6ml 二乙烯基砜、9ml 0.25M pH12的碳酸鈉緩沖液 和1.5ml二甲基亞砜加入到錐形瓶中，25。C下180rpm搖床中活化4小時，抽濾除去混合液，用去離子水洗滌，抽干。加入3倍雙鍵摩爾量的5-巰基-l-甲基咪 唑和10ml含有25mg/ml過硫酸銨的0.5M氫氧化鈉溶液，6(TC下180rpm搖床中 偶聯(lián)反應(yīng)8小時，抽濾除去混合液，用去離子水洗滌，抽干。介質(zhì)加入到100ml 含有1% 11202和1%甘油的溶液中浸泡2小時，去離子水洗滌，得到疏水性電 荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)，介質(zhì)濕真密度為1.81g/ml，配基密度為 54|_imol/ml。 實(shí)施例10
疏水性電荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)(配基密度為65fxmol/ml)吸附卵黃 抗體的靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)，首先將介質(zhì)用pH7的檸檬酸緩沖液進(jìn)行平衡；抽濾后分 別準(zhǔn)確稱取0.4g介質(zhì)于25ml帶塞錐形瓶中，加入8ml不同IgY濃度的緩沖溶 液；將錐形瓶置于水浴搖床中，25'C下180rpm振蕩8h;平衡后取出上清液測定 IgY的濃度；根據(jù)物料橫算求得吸附蛋白的量和平衡溶液IgY濃度，繪制靜態(tài)吸 附等溫線，并根據(jù)Langmuir吸附方程擬合得到介質(zhì)的飽和吸附量為137.6mg/ml。
權(quán)利要求
1. 一種疏水性電荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)，其特征在于介質(zhì)的組成中基質(zhì)為纖維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球，延長臂為二乙烯基砜活化后引入的親硫性二乙基砜基，配基為偶聯(lián)后的巰基甲基咪唑，其結(jié)構(gòu)組成為id="icf0001" file="S200810061816XC00011.gif" wi="107" he="63" top= "67" left = "72" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種疏水性電荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)，其 特征在于所述纖維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球的骨架為纖維素，增重劑為鈦白粉、不銹鋼粉、鎳粉或碳化鉤粉，增重劑占濕球的質(zhì)量百分比含量為16% 61%;纖維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球的粒徑為50 250pm。
3. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種疏水性電荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)，其 特征在于配基為巰基甲基咪唑，巰基甲基咪唑包括2-巰基-1-甲基咪唑、4-巰基-1-甲基咪唑或5-巰基-l-甲基咪哇。
4. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種疏水性電荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)，其 特征在于配基密度為30 65|Limol/ml介質(zhì)。
5. —種如權(quán)利要求1所述的疏水性電荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)的制備 方法，其特征在于首先將纖維素粘膠和無機(jī)增重劑充分混合，無機(jī)增重劑在 混合物中的質(zhì)量百分含量為16% 61%，加入5倍纖維素粘膠質(zhì)量的泵油，控制 轉(zhuǎn)速500 800ipm，反相懸浮熱再生制成球，沸水洗滌，篩選50 250|im粒徑 的纖維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球作為基質(zhì)；其次將纖維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球、 二乙烯基砜、0.1 0.4M pH12的碳酸鈉緩沖液和二甲基亞砜混合，二乙烯基砜 添加的體積量為纖維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球體積的18% 36%， 25'C下180rpm 搖床中活化4小時，抽濾，用去離子水洗滌得到活化基質(zhì)；然后將活化后的基 質(zhì)、3倍雙鍵摩爾量的巰基甲基咪唑和含25mg/ml過硫酸銨的0.4 0.6M氫氧化 鈉溶液混合，6(TC下180rpm搖床中偶聯(lián)8小時，抽濾，用去離子水洗滌，加入 到含有1% &02和1%甘油的溶液中浸泡2小時，去離子水洗滌，得到疏水性 電荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種疏水性電荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張吸附床介質(zhì)及其制備方法。介質(zhì)組成中基質(zhì)為纖維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球，配基為砜基和巰基甲基咪唑。采用反相懸浮熱再生法，得到纖維素/無機(jī)增重劑復(fù)合微球作為基質(zhì)；混合二乙烯基砜、碳酸鈉緩沖液和二甲基亞砜進(jìn)行活化；混合抽干的活化基質(zhì)、巰基甲基咪唑和含有過硫酸銨的氫氧化鈉進(jìn)行偶聯(lián)，得到疏水性電荷誘導(dǎo)型親硫擴(kuò)張床吸附介質(zhì)。本發(fā)明所研制的擴(kuò)張床吸附介質(zhì)，結(jié)合了疏水性電荷誘導(dǎo)層析、親硫?qū)游龊蛿U(kuò)張床吸附等三種蛋白質(zhì)分離原理，具有配基密度高、蛋白吸附量大、特異性強(qiáng)、吸附洗脫條件溫和等優(yōu)點(diǎn)，并顯示出技術(shù)和過程集成化的特點(diǎn)，可以用于抗體等蛋白質(zhì)的高效分離純化。
文檔編號C07K1/22GK101279244SQ20081006181
公開日2008年10月8日 申請日期2008年5月14日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月14日
發(fā)明者夏海鋒, 姚善涇, 林東強(qiáng), 王立平 申請人:浙江大學(xué)