專利名稱：：雙取代-l-酒石酸二甲酯類化合物及其醫(yī)藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及有機(jī)化學(xué)、藥物化學(xué)和藥理學(xué)領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及雙取代-L-酒石酸二甲酯類化合物及其可藥用鹽以及它們的制備方法和醫(yī)藥用途，該類化合物被發(fā)現(xiàn)有抑制乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的功能；同時(shí)対五株人體腫瘤細(xì)胞顯示出一定的細(xì)胞毒性。該類化合物可以預(yù)期用于制備治療相關(guān)的乙型肝炎病毒感染性疾病以及腫瘤疾病的藥物。
背景技術(shù)：
：乙型病毒型肝炎(HepatitisB)是中國多發(fā)和常見重型傳染性疾病，其病原體是乙型肝炎病毒(HBV)。全國約1.2億HBV攜帶者，每年死于原發(fā)性肝癌的15萬人中，絕大多數(shù)與乙型肝炎感染有關(guān)。目前，臨床上對(duì)HBV病患的治療方案只能達(dá)到抑制HBV復(fù)制和繼發(fā)感染，最主要藥物仍是核苷類藥物如拉米呋啶(3-TC)、恩替卡韋、阿德福韋(ADV)等，它們雖然能有效地控制病情，但一則售價(jià)昂貴，二則長(zhǎng)期使用均可出現(xiàn)耐藥性，以及不同程度的反跳，三是長(zhǎng)期使用核苷類藥物出現(xiàn)的較為明顯的眾所周知的不良作用。所以從民族民間長(zhǎng)期使用的藥物中發(fā)現(xiàn)新的非核苷類乙肝病毒抑制劑有著很大的意義，選擇先導(dǎo)化合物主要的判斷指標(biāo)在于該類新穎的非核苷類物質(zhì)必須具有對(duì)乙肝病毒脫氧核糖核酸(HBVDNA)和/或乙肝表面抗原(HBsAg)的抑制活性。天然產(chǎn)物中的綠原酸(chlorogenicacid)是由咖啡酸(caffeicacid)與奎尼酸(雞納酸，quinkacid)組成的一取代的縮酚酸，為眾多藥材(如金銀花、茵陳、杜仲)以及中成藥(如復(fù)肝寧、雙花注射液、粉刺口服液)中抗菌解毒、消炎利膽的主要有效成分，同時(shí)是某些中藥制劑質(zhì)量控制的重要指標(biāo)。綠原酸是一種重要的生物活性物質(zhì)，具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利膽、抗腫瘤、降血壓、降血脂、清除自由基和興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)等作用，尤其是在病毒防治領(lǐng)域有重要用途[趙昱等"咖啡?？崴犷惢衔镅芯窟M(jìn)展"，中國中藥雜志，2006，31(11)，869-874]。近期，科學(xué)家從菊科植物菊苣中發(fā)現(xiàn)了新的抗病毒咖啡酰有機(jī)酸酯類化合物L(fēng)-菊苣酸(二咖啡酰酒石酸)[Robinson，W,E,Jr./"/e"A/k/.1998,15，129-137]。此先導(dǎo)化合物對(duì)HIV病毒整合酶(IN)具有強(qiáng)效抑制活性，同時(shí)無毒范圍較大，有利于發(fā)展成為抗HIV型藥物。相關(guān)的構(gòu)效關(guān)系研究跟隨開展，并制備出多種L-菊苣酸衍生物，其中活性化合物抑制fflV-l整合酶活性的IC5Q值約為0.8l.liLiM[King,P丄，Robinson,W.E.Jr.等，《/臉d1999,42,497—509;Lin，Z.，Bruke,T.R,Jr.,JMW.C/^m.1999,42,1401—1414]。上述研究報(bào)道結(jié)果指出咖啡酰結(jié)構(gòu)中的鄰苯二酚部分在整個(gè)分子的抑制活性中起著相當(dāng)重要的作用，然而過多的酚羥基也會(huì)帶來較大的毒性。因此為了尋找高效低毒的新的先導(dǎo)化合物，我們的設(shè)計(jì)中將L-菊苣酸中的咖啡酰部分進(jìn)行改造將其改造成為不同取代的芳基烯丙?；Y(jié)構(gòu)，并用烷氧基取代的苯甲酰基做嘗試。另外，上述研究報(bào)道中還指出，將酒石酸的羧基甲酯化并同時(shí)將羥基瑪行?；磻?yīng)后所得到的分子仍然有抗HIV-1整合酶的活性。因此，我們?cè)O(shè)計(jì)合成了一系列不同取代的苯丙烯酰-L-酒石酸二甲酯。在本說明書中描述的系列化合物中，化合物I~d(2,3-二-氧-[3-苯烯丙酰]—L-酒石酸二甲酯)雖然己有報(bào)道[Utley,JamesH.P.等，Jowma/o/1995，15,1961-1970]，但該文報(bào)道的是化合物I~d參與在電解液中進(jìn)行非對(duì)映立體選擇性合成，并未披露任何關(guān)于化合物的生理活性方面的信息。由于抗HIV藥物和HBV藥物的高同源性，本發(fā)明對(duì)合成出的雙取代-L-酒石酸二甲酯類測(cè)試了其對(duì)乙肝表面抗原HBsAg的抑制活性，以期尋找更多樣的能對(duì)乙肝病毒復(fù)制產(chǎn)生抑制作用的L-菊苣酸類似物。為了探索本發(fā)明制備得到的雙取代-L-酒石酸二甲酯類化合物的其他生理活性，我們還采用了MTT[3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽]法對(duì)此類化合物針對(duì)五種人體腫瘤體外培養(yǎng)細(xì)胞株[人子宮頸癌細(xì)胞(Hela)、人慢性髓原細(xì)胞白血病細(xì)胞(K562)、人肺癌細(xì)胞(A549)、人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞(HL-60)、人結(jié)腸腺癌(LS174T)]進(jìn)行了生長(zhǎng)抑制活性測(cè)試，^1而完成本發(fā)明。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一類用于制備新的抗乙肝病毒和細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物，具體而言，本發(fā)明提供了一類式(I)所示結(jié)構(gòu)的雙取代-L-酒石酸二甲用鹽H貝CjC02CKR,~"0"5——&式(I)其中取代基Rt和R2可以相同或不同，分別選自2-呋喃環(huán)-3-烯丙酰基，2位或4位甲氧基取代的苯甲?；徫换蜷g位或?qū)ξ欢籽趸〈谋郊柞；蜞徫换蜷g位或?qū)ξ畸u素二取代的3-苯烯丙?；?；其條件是&和112不能同時(shí)為3-(3,4-二甲氧基苯)-烯丙酰基，也不能同時(shí)為3-(3,4-二氯苯)-烯丙酰基。本發(fā)明的另一目的是提供了所述之雙取代-L-酒石酸二甲酯類化合物及其可藥用鹽用于制備抑制乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的藥物用途。本發(fā)明的又一目的是提供了式(I)化合物及其可藥用鹽用于制備細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物的用途。本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供了一種含有式(I)化合物的用于抗乙肝病毒疾病的藥物組合物和/或細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物。根據(jù)本發(fā)明，該藥物組合物中可加入各種藥用賦形劑，添加劑及載體。本發(fā)明優(yōu)選的式(I)化合物列舉如下I-a.2，3-二-氧-(4-甲氧基苯甲酰)-L-酒石酸二甲酯；I-b.2，3-二-氧-[3-(2,4-二氯苯)-烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯；I-c.2，3-二-氧-[3-(2-呋喃基)-烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯。H3COOC,恥O,COOCH3I—aHcoc=oooc=o6本發(fā)明還提供了化合物2，3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯(14)的制備方法以及其用于制備抑制乙肝病毒表面抗原(HBsAg)藥物和細(xì)胞毒贈(zèng)抗腫瘤藥物的用途。oo具體實(shí)施例方式本發(fā)明的式(I)化合物以及化合物(I-d)或其可藥用鹽對(duì)乙型肝炎表面抗原(HBsAg)有一定的抑制作用，其還對(duì)五種人體腫瘤體外培養(yǎng)細(xì)胞株[人子宮頸癌細(xì)胞(Hela)、人慢性髓原細(xì)胞白血病細(xì)胞(K562)、人肺癌細(xì)胞(A549)、人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞(HL-60)、人結(jié)腸腺癌(LS174T)]的生長(zhǎng)有一定的抑制作用。根據(jù)本發(fā)明，該類化合物或其可藥用鹽可以與藥學(xué)上常用的輔料或載體結(jié)合，制備得到可以用于治療病毒性乙肝疾病相關(guān)的藥物組合物和/或細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物。下面通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。實(shí)施例給出了代表性化合物的合成及相關(guān)結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)。必須說明，下述實(shí)施例是用于說明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的簡(jiǎn)單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。實(shí)施例1:化合物I-a即2,3-二-氧-(4-甲氧基苯甲酰)-L-酒石酸二甲酯的制備向反應(yīng)瓶中加入對(duì)甲氧基苯甲酸(43毫克，0.28毫摩爾)，二環(huán)己基碳二亞胺(58毫克，0.28毫摩爾)，無水二氯甲烷8毫升，在室溫下攪拌20分鐘，出現(xiàn)白色混濁后，加入L-酒石酸二甲酯(20毫克，0.11毫摩爾)，4-J甲氨基吡啶(3.6毫克，0.03毫摩爾)，整個(gè)溶液在室溫下反應(yīng)過夜，抽濾除去不溶物，蒸去溶劑，脫溶得到白色固體，柱層析純化(石油醚/乙酸乙酯=10:1),分離得到白色固體35毫克，產(chǎn)率為71%。H3COOCCOOCH3^一乂？^I~c,8s〕7<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>化合物(I一a):無色油狀物；A(石油醚/乙酸乙酯-3/l):0.36;核磁共振氫譜(400MHz，氘代甲醇)33.75(6H，單峰，COOC//3)，3.91(6H,單峰，OO/s),5.94(2H,單峰，H-2，3),7.08(4H,雙峰，《/=8.8Hz,H-4'，6',4〃，6")，8.03(4H，雙峰，Hz，H-3'，7'，3"，7");電噴霧質(zhì)譜ESI-MSw々463.93([M+H20〗+)。實(shí)施例2:化合物I—b即2，3-二-氧-[3-(2，4-二氯苯)烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯的制備反應(yīng)瓶中加入L-酒石酸(500毫克，3.3毫摩爾)，無水硫酸鈉(1.5克，10.6毫摩爾)，IO毫升無水甲醇，攪拌數(shù)分鐘，再向反應(yīng)瓶中滴加3微升濃硫酸，加熱回流10小時(shí)。冷卻到室溫，加入碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH約為7，抽濾除去不溶物，濾液濃縮。脫溶所得固體分散在3毫升氯仿和3毫升蒸餾水中，水層再用氯仿萃取3次(5毫升x3)，合并所有有機(jī)相，用水洗，飽和食鹽水洗滌數(shù)次，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸餾除去溶劑得L-酒石酸二甲酯，白色闊體，390毫克，產(chǎn)率66%。向反應(yīng)瓶中加入2,4-二氯苯丙烯酸(61毫克，0.28毫摩爾)，二環(huán)己基碳二亞胺(58毫克，0.28毫摩爾)，無水二氯甲垸8毫升，在室溫下攪拌20分鐘，出現(xiàn)白色混濁后，加入L-酒石酸二甲酯(20毫克，0.11毫摩爾)，4-二甲氨基吡啶(3.6毫克，0.03毫摩爾)，整個(gè)溶液在室溫下反應(yīng)過夜，抽濾除去不溶物，蒸去溶劑，脫溶得到白色固體，柱層析純化(石油醚/乙酸乙酯=10:1)，分離得到白色固體49毫克，產(chǎn)率為77%?；衔?I-b):白色固體，熔點(diǎn)66~67。C(氯仿)；及y(石油醚/乙酸乙酯=3/1):0.4;核磁共振氫譜(400MHz，氘代甲醇)<53.82(6H,單峰，5.88(2H,單峰，H曙2，3)，6.54(2H，雙峰，J-16.0Hz，H-2'，2")，7.29(2H，雙峰，聲2.0Hz,H畫8',8"),7.46(2H,雙峰，>2.0Hz,H國9'，9")，7.60(2R5單峰，H-6',6"),8.14(2H，雙峰，7=16.0Hz,H-3',3");電噴霧質(zhì)譜ESI-MSm/z:449.21([M+H20]+)0根據(jù)與以上實(shí)施例1-2相似的的方法，分別制備得到I"C和I~d化合物。下面列出它們的部分物化和核磁共振氫譜數(shù)據(jù)化合物(I-c):黃色油狀物，&(石油醚/乙酸乙酯=3/1):0.22;(400MH:;氘代甲醇)(53.83(6H,單峰，COOC//》，5.55(2H,單峰，H-2，3),6.36(1H,雙峰，J=16.0Hz,H-2')，6.49(1H，單峰，H-6'),6.68(1H，單峰，H-5'),7.48(1H，雙峰，J=16.0Hz，H-3'),7.51(1H，單峰，H-7')?；衔?I-d):無色油狀物，Rf(石油醚/乙酸乙酯=6/1):0.2;(400MHz,氖代甲醇)33.81(6H，單峰，CO(9a/》，5,91(2H，單峰，H-2,3)，6.58(2H，雙峰,7=16.0Hz,H-2'，2〃)，7.42(6H,多重峰，H-6'，7'，8'，6"，7"，8"),7.58(4H，多重峰,H國5',9'，5",9"),7.80(2H,雙峰，J-16.0Hz,H-3',3〃)；電噴霧質(zhì)譜ESI-MSm/z:456.05([M+H20]+)。本發(fā)明的式(I)化合物或其可藥用鹽，以及化合物2，3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯(14)或其可藥用鹽具有抑制乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的功能，可以用于治療相關(guān)的乙肝病毒感染性疾病。該藥物可以與藥學(xué)上常用的輔料或載體結(jié)合，用制藥領(lǐng)域中的常規(guī)技術(shù)制備得到具有抗病毒活性從而可以用于防治病毒引起的疾病的藥物組合物。上述各類藥物組合物可以采用注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑等劑型藥物，還可以利用現(xiàn)有公知技術(shù)制備成其控釋、緩釋劑型或納米制劑，還可以應(yīng)用靶向藥物制劑技術(shù)制備成相應(yīng)藥物劑型和給藥方式。本發(fā)明的式(I)化合物或其可藥用鹽，以及化合物2,3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-酒石酸二甲酯(I-d)或其可藥用鹽可以與現(xiàn)已上市的治療乙型病毒性肝炎藥物如拉米呋啶(lamivuding)、阿德福韋及其二匹伏酯(adevovir/adevovirdipivoxil)、恩替卡韋(entecavir)、恩曲他濱(emtricitabine)、克來福定(clevudine)、泛昔絡(luò)韋(famciclovir)、洛布卡韋(lobucavir)、干擾素(IFN)等聯(lián)合使用，制備得到具有治療乙型病毒性肝炎的藥物。上述各類藥物組合物均可以采用注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用9搽劑等劑型藥物，還可以利用現(xiàn)有公知技術(shù)制備成其控釋、緩釋劑型或納米制劑，還可以應(yīng)用靶向藥物制劑技術(shù)制備成相應(yīng)藥物劑型和給藥方式。此外，本發(fā)明所制備的式(I)化合物或其可藥用鹽，以及化合物2,3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-酒石酸二甲酯(I~d)或其可藥用鹽對(duì)于五株人體腫瘤體外譜養(yǎng)細(xì)胞株[人子宮頸癌細(xì)胞(Hela)、人慢性髓原細(xì)胞白血病細(xì)胞(K562)、人肺癌細(xì)胞(A549)、人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞(HL-60)、人結(jié)腸腺癌(LS174T)均具有一定的生長(zhǎng)抑制活性，可期待作為防治相關(guān)腫瘤性疾病藥物用途。本發(fā)明所制備的式(I)化合物或其可藥用鹽，以及化合物2，3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-酒石酸二甲酯(I"d)或其可藥用鹽可以與藥學(xué)上常用的輔料或載體結(jié)合，制備得到具有抗腫瘤用途的藥物組合物。上述藥物組合物可以采用注射劑、片劑、膠囊、貼片、皮下植埋劑等劑型，或其他采用公知理論和抜術(shù)制備的控釋、緩釋劑型以及納米制劑。本發(fā)明的式(I)化合物或其可藥用鹽，以及化合物2,3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-酒石酸二甲酯(I~d)或其可藥用鹽可以與現(xiàn)己上市的抗腫瘤藥物如鉑類藥物順鉑(DDP)、喜樹堿類藥物伊立替康(Irinatecan，CPT-ll)、長(zhǎng)春花堿類藥物失碳長(zhǎng)春花堿(Vinorebine，NVB諾維本)、脫氧胞昔類藥物吉西他濱(Gemcitabine,Gemzar，健擇)、足葉乙式(Etoposide)、紫杉醇(Paclitaxel)等聯(lián)合使用，制備得到具有腫瘤生長(zhǎng)抑制活性的細(xì)胞毒性的藥物組合物，可用于制備治療多種腫瘤疾病的藥物。為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面分別用藥理實(shí)施例的形式簡(jiǎn)述式(I)化合物或其可藥用鹽，以及化合物2，3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯(I-d)或其可藥用鹽對(duì)乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)抑制試驗(yàn)以及它們對(duì)五株人體體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制之藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果，說明其在抗病毒藥物和/或抗腫瘤藥物開發(fā)領(lǐng)域中的用途。藥理實(shí)施例給出了式(I)化合物或其可藥用鹽，以及化合物2,3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯(I~d)或其可藥用鹽的部分活性數(shù)據(jù)。同樣必須說明，本發(fā)明的藥理實(shí)施例仍是用于說明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的簡(jiǎn)單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。藥理實(shí)施例1:化合物I-a對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞分泌的乙型肝炎病毒表面抗原的抑制作用1.1細(xì)胞培養(yǎng)將HepG2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清，100U/毫升青霉素和100微克/毫升鏈霉素，100微克/毫升G418的DMEM培養(yǎng)基中，置37。C，5%二氧化碳C02，100%相對(duì)濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。1.2采用MTT法測(cè)定化合物I-a對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HepG2.2.15細(xì)胞，用培養(yǎng)基將細(xì)胞稀釋成1乂105個(gè)/毫升，接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔100微升，在37-C，5%C02，100%相對(duì)濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后加入用培養(yǎng)基稀釋的化合物I-a，濃度分別為100微克/毫升，20微克/毫升，和4微克/毫升，每孔200微升，每個(gè)濃度設(shè)三個(gè)復(fù)孔，置于37i:，5%C02，100%相對(duì)濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)72小時(shí)后，每孔加入5毫克/毫升MTT[3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽]試劑10微升，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，棄去培養(yǎng)基，每孔加入二甲基亞砜DMSO200微升，用振蕩器振蕩20分鐘，在570nm波長(zhǎng)下用酶標(biāo)儀測(cè)定OD值。以只加培養(yǎng)基的培養(yǎng)孔為對(duì)照孔。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。抑制率(%)=(對(duì)照孔OD值-實(shí)驗(yàn)組OD值)/對(duì)照孔OD值X1000/。。1.3測(cè)定化合物I-a對(duì)乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的抑制作用取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HepG2.2.15細(xì)胞，用培養(yǎng)基將細(xì)胞稀釋成1乂105個(gè)/毫升，接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔100微升，在100%相對(duì)濕度的5。％C02培養(yǎng)箱中37"C培養(yǎng)24小時(shí)后加入用培養(yǎng)基稀釋的化合物I-a，濃度分別為100微克/毫升，20微克/毫升和4微克/毫升，每孔200微升，每個(gè)濃度設(shè)三個(gè)復(fù)孔，置于37'C，5%C02，100%相對(duì)濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每4天換含相閫濃度樣品的培養(yǎng)基，將同一樣品同一濃度的換出的培養(yǎng)基等體積混勻，作為待測(cè)樣品。用酶聯(lián)反應(yīng)ELISA試劑盒測(cè)定培養(yǎng)基中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)濃度，以P/N表示；以拉米呋啶(3-TC)為陽性對(duì)照。1.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表一所示，化合物I-a有顯著的抑制乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的作用。其對(duì)H印G2.2.15細(xì)胞的生長(zhǎng)無明顯抑制作用，但對(duì)11卬02.2.15細(xì)胞分泌的乙型肝炎表面抗原13八§在高、中、低劑量下抑制活性都高于拉米呋啶。1.5結(jié)果說明乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抑制率是判斷乙型肝炎病毒感染重要標(biāo)志，有效抑制HBsAg分泌并使HBsAg反應(yīng)轉(zhuǎn)陰是治療乙型肝炎的目標(biāo)之一?；衔?-3在第八天對(duì)11叩02.2.15細(xì)胞分泌的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)具有顯著的抑制作用，說明此類雙取代-L-酒石酸二甲酯類化合物可預(yù)期發(fā)展為降低乙型肝炎表面抗原、控制病毒性乙型肝炎癥狀的藥物。表一化合物I-a對(duì)HepG2.2.15分泌的乙型肝炎表面抗原抑制率(％)樣品編號(hào)濃度(微克/毫升)4天8天I一a10025.6142.332012.7621.5945.5513.373-TC(拉米呋啶)10012.1211.3720rr4/a/a表示無抑制活性。藥理實(shí)施例2:化合物I-b對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞分泌的乙型肝炎病毒表面抗原的抑制作用2.1細(xì)胞培養(yǎng)同藥理實(shí)施例l。2.2采用MTT法測(cè)定化合物I-b對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HepG2.2.15細(xì)胞，方法同藥理實(shí)施例1。2.3測(cè)定化合物I-b對(duì)乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的抑制作用以拉米呋啶(3-TC)為陽性對(duì)照。具體方法同藥理實(shí)施例l。2.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表二所示，化合物I-b有顯著的抑制乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的作用。其對(duì)11印02.2.15細(xì)胞的生長(zhǎng)無明顯抑制作用，但對(duì)12HepG2.2.15細(xì)胞分泌的乙型肝炎表面抗原HBsAg在高、中、低劑量下抑制活性都高于拉米呋啶。表二化合物I-b對(duì)HepG2,2.15分泌的乙型肝炎表面抗原抑制率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>a表示無抑制活性。2.5結(jié)果說明乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抑制率是判斷乙型肝炎病毒感染重要標(biāo)志，有效抑制HBsAg分泌并使HBsAg反應(yīng)轉(zhuǎn)陰是治療乙型肝炎的目標(biāo)之一?；衔颕-b在第八天對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞分泌的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)具有顯著的抑制作用，說明該類雙取代-L-酒石酸酯類化合物可預(yù)期發(fā)展為降低乙型肝炎表面抗原、控制病毒性乙型肝炎癥狀的藥物。藥理實(shí)施例3:化合物對(duì)人子宮頸癌細(xì)胞的細(xì)胞毒活性3.1細(xì)胞培養(yǎng)人子宮頸癌(Hela)細(xì)胞用RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含10%小牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升鏈霉素。細(xì)胞以每孔1乂104個(gè)密度接種到96孔板中，在37-C,5%(:02潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。3.2細(xì)胞存活率的測(cè)定方法用改良MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽]法。細(xì)胞經(jīng)24小時(shí)的孵育后，分別將新配的化合物的二甲亞砜溶液以濃度梯度加入到各孔中，使孔中化合物的最終濃度分別為100微克/毫升、50微克/毫升、25微克/毫升、5微克/毫升。72小時(shí)后，加入10微升MTT(5毫克/毫升)的生理鹽水溶液，再繼續(xù)在37-C，5%0)2潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3小時(shí)，每孔中加入150微升二甲亞砜，振蕩溶解生成的MTT晶體甲臜(formazan)，所形成的甲臜用酶標(biāo)儀在570nrn波長(zhǎng)下比色，細(xì)胞存活率由樣品OD值對(duì)于對(duì)照Od值的比值計(jì)算。其中化合物對(duì)Hda細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC5())由劑量效應(yīng)曲線得到。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各測(cè)試化合物的ICs()如表三所示。本試驗(yàn)以抗腫瘤一線用藥順鉑(DDP)作為陽性對(duì)照，陽性對(duì)照藥物順鉑對(duì)Hela細(xì)胞的IC50為19.6^M。表三各測(cè)試化合物對(duì)Hela細(xì)胞的與一數(shù)抑制濃度(IC5())(微克/毫升)化合物I-aI一bI~d抑制活性IC5o/111.8213.0/表示半數(shù)抑制濃度(IC5。)值>100微克/毫升。3.3結(jié)果說明化合物I-b和I~d對(duì)Hda細(xì)胞的生長(zhǎng)具有一定的抑制作用，說明該類雙取代酒石酸二甲酯類化合物有望發(fā)展為細(xì)胞毒類治療人子宮頸癌的藥物。藥理實(shí)施例4:化合物對(duì)人慢性髓原細(xì)胞白血病細(xì)胞的細(xì)胞毒活性4.1細(xì)胞培養(yǎng)人慢性髓原細(xì)胞白血病(K562)細(xì)胞用RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含10%小牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升鏈霉素。細(xì)胞以每孔1XW個(gè)密度接種到96孔板中，在37-C，5^C(V潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。4.2細(xì)胞存活率的測(cè)定方法用改良MTT法細(xì)胞經(jīng)24小時(shí)的孵育后，分別將新配的化合物的二甲亞砜溶液以濃度梯度加入到各孔中，使孔中化合物的最終濃度分別為100微克/毫升、50微克/毫升、25微克/毫升、5微克/毫升。72小時(shí)后，加入10微升MTT(5毫克/毫升)的生理鹽水溶液，再繼續(xù)在37"C,5%0)2潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3小時(shí)，每孔中加入150微升二甲亞砜，振蕩溶解生成的MTT晶體甲臜(formazan)，所形成的甲臜用酶標(biāo)儀在570nm波長(zhǎng)下比色，細(xì)胞存活率由樣品OD值對(duì)于對(duì)照OD值的比值計(jì)算。其中化合物對(duì)K562細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC5())由劑量效應(yīng)曲線得到。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各測(cè)試化合物的IC50如表四所本試驗(yàn)以抗腫瘤一線用藥順鉑(DDP)作為陽性對(duì)照，陽性對(duì)照藥物順鉑對(duì)K562細(xì)胞的IC5G為12.9|iM。表四各測(cè)試化合物對(duì)K562細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC5o)(微克/毫升)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>/表示半數(shù)抑制濃度(IC5Q)值>100微克/毫升。4.3結(jié)果說明化合物I-a和I-b對(duì)K562細(xì)胞的生長(zhǎng)具有較為明確的抑制作用，說明該類雙取代酒石酸二甲酯類化合物有望發(fā)展為細(xì)胞毒類治療人慢性髓原細(xì)胞白血病的藥物。藥理實(shí)施例5:化合物對(duì)人肺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒活性5.1細(xì)胞培養(yǎng)人肺癌(A549)細(xì)胞用RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含10%的胎牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升的鏈霉素。細(xì)胞以每孔5乂103的濃度加入到96孔板中，在37"C含5%(:02潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。5.2細(xì)胞存活率的測(cè)定用改良MTT法，具體方法如藥理實(shí)施例3。其中化合物對(duì)A549細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)由劑量效應(yīng)曲線得到。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各測(cè)試化合物的IC50如表五所示。而陽性對(duì)照藥物順鉑對(duì)A549細(xì)胞的IC5o為17.8nM。表五各測(cè)試化合物對(duì)A549細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC5Q)(微克/毫升)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>/表示半數(shù)抑制濃度(IC5。)值>100微克/毫升。5.3結(jié)果說明化合物I-a和14對(duì)A549細(xì)胞的生長(zhǎng)具有一定的抑制作用，說明該類雙取代酒石酸二甲酯類化合物有望發(fā)展為細(xì)胞毒類治療人肺癌的藥物。藥理實(shí)施例6.-化合物對(duì)HL-60的細(xì)胞毒活性6.1細(xì)胞培養(yǎng)人原髓細(xì)胞白血病(HL-60)細(xì)胞用RPM1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含10%的胎牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升的鏈霉素。細(xì)胞以每孔5X103的濃度加入到96孔板中，在37t:含5%(:02潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。6.2細(xì)胞存活率的測(cè)定用改良MTT法，具體方法如藥理實(shí)施例3。其中化合物對(duì)HL-60細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)由劑量效應(yīng)曲線得到。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各測(cè)試化合物的IC50如表六所示。陽性對(duì)照藥物DDP對(duì)HL-60細(xì)胞的半抑制濃度IC5Q為7.6^M。表六各測(cè)試化合物對(duì)HL-60細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC5())(微克/毫升)化合物I-aI一bI-d抑制活性IC5。34.852.6//表示無抑制活性或半數(shù)抑制濃度(IC5Q)值>100微克/毫升。6.3結(jié)果說明化合物I-a和I-b對(duì)HL-60細(xì)胞的生長(zhǎng)具有明確的抑制作用，說明該類雙取代酒石酸二甲酯類化合物有望發(fā)展為細(xì)胞毒類治療人原髓細(xì)胞白血病的藥物。藥理實(shí)施例7:化合物對(duì)人結(jié)腸腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒活性7.1細(xì)胞培養(yǎng)人結(jié)腸腺癌(LS174T)細(xì)胞用RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含10%的胎牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升的鏈霉素。細(xì)胞以每孔5X103的濃度加入到96孔板中，在37"C含5%(302潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。7.2細(xì)胞存活率的測(cè)定用改良MTT法,具體方法如藥理實(shí)施例3。其中化合物對(duì)LS174T細(xì)胞半16抑制濃度(IC5())由劑量效應(yīng)曲線得到。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各測(cè)試化合物的IC:如表七所示。陽性對(duì)照藥物順鉑對(duì)LS174T細(xì)胞的IC5。為4.43^iM。表七各測(cè)試化合物對(duì)LS174T細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC5o)(微克/毫升)化合物I—aI-bI~d抑制活性IC5o/151.4//表示半數(shù)抑制濃度(IC5Q)值〉100微克/毫升。7.3結(jié)果說明化合物I-b對(duì)LS174T細(xì)胞的生長(zhǎng)具有一定的抑制作用，說明該類雙取代酒石酸二甲酯類化合物有望發(fā)展為細(xì)胞毒類治療人結(jié)腸腺癌的藥物。在上述說明書闡述本發(fā)明時(shí)，同時(shí)提供了實(shí)施例和藥理實(shí)施例的目的是舉例說明本發(fā)明的實(shí)際操作過程和本發(fā)明的意義。在進(jìn)入本發(fā)明權(quán)利要求和其等同物范圍內(nèi)時(shí)，本發(fā)明的實(shí)際應(yīng)用包括所有一般變化、配合，或改進(jìn)。權(quán)利要求1.一種具有式(I)所示結(jié)構(gòu)的雙取代-L-酒石酸二甲酯類化合物及其可藥用鹽式(I)其中取代基R1和R2可以相同或不同，分別選自2-呋喃環(huán)-3-烯丙酰基，2位或4位甲氧基取代的苯甲?；?，鄰位或間位或?qū)ξ欢籽趸〈谋郊柞；?，或鄰位或間位或?qū)ξ畸u素二取代的3-苯烯丙?；?；其條件是R1和R2不能同時(shí)為3-(3，4-二甲氧基苯)-烯丙?；?，也不能同時(shí)為3-(3，4-二氯苯)-烯丙?；?.根據(jù)權(quán)利要求l，式(I)化合物選自I-a.2，3-二-氧-(4-甲氧基苯甲酰)-L-酒石酸二甲酯；I-b.2,3-二-氧-[3-(2,4-二氯苯)-烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯；I-c.2，3-二-氧-[3-(2-呋喃基)-烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯。3.根據(jù)權(quán)利要求1~2任一所述之雙取代-L-酒石酸二甲酯類化合物及其可藥用鹽用于制備抑制乙型肝炎病毒表面抗原藥物的用途。4.根據(jù)權(quán)利要求1~2任一所述之雙取代-L-酒石酸二甲酯類化合物及其可藥用鹽用于制備細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物的用途。5.2，3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯及其可藥用鹽用于制備抑制乙型肝炎病毒表面抗原藥物的用途。6.2，3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯及其可藥用鹽用于制備細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物的用途。7.—種用于抑制乙型肝炎表面抗原的藥物組合物，其含有治療有效量的作為活性成分的根據(jù)權(quán)利要求1、2之一的化合物、2，3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯、或它們的混合物以及它們的可藥用鹽和可藥用輔料。8.—種用于治療腫瘤疾病的細(xì)胞毒類藥物組合物，其含有治療有效量的作為活性成分的根據(jù)權(quán)利要求l、2之一的化合物、2，3-二-氧-[3-苯烯丙酰]-L-酒石酸二甲酯、或它們的混合物以及它們的可藥用鹽和可藥用輔料。9.根據(jù)權(quán)利要求38任一所述的藥物或藥物組合物，其劑型是注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑，或控釋或緩釋劑型或納米制劑。全文摘要本發(fā)明涉及一類雙取代-L-酒石酸二甲酯類化合物及其醫(yī)藥用途，本發(fā)明還涉及這些化合物的制備方法和含有該類化合物的藥物組合物。本發(fā)明涉及的雙取代酒石酸二甲酯類化合物及其可藥用鹽具有抑制乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的功能；其還對(duì)五株人體腫瘤細(xì)胞顯示出一定的細(xì)胞毒性。該類化合物可以預(yù)期用于制備治療乙肝病毒感染性疾病以及腫瘤性疾病的藥物。文檔編號(hào)C07C69/00GK101492374SQ200810062549公開日2009年7月29日申請(qǐng)日期2008年6月24日優(yōu)先權(quán)日2008年6月24日發(fā)明者馮治國,巫秀美,張麗娟,李校堃,佳瞿,胡利紅,昱趙,鄭群雄,郝小江,黃可新申請(qǐng)人:溫州醫(yī)學(xué)院