專利名稱：香鱗毛蕨苷e及其分離方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種從香鱗毛蕨中提取的新的醫(yī)用化合物及其分離提取方法。
背景技術：
香鱗毛蕨D/^/^/7's資份ag/wis(L.)Sc/^T為鱗毛蕨科鱗毛蕨屬植物，落葉
多年生草本，生于高寒地區(qū)的滑石坡、森林中的碎石坡上和火山周圍的巖漿縫 隙中(Fig.l-1)。香鱗毛蕨在我國分布廣泛，黑龍江、遼寧、吉林、內蒙古和河 北地區(qū)均有分布，在黑龍江省香鱗毛蕨主要分布于五大連池、塔河縣白卡獸山、 呼中大白山的高山地帶及小興安嶺北部地區(qū)。原植物香鱗毛蕨為鱗毛蕨科 (Dryopterideceae)植物，香鱗毛蕨D/yo/^Ws教紛flg/ww^JSc/iW/植株高20 30cm，根狀莖粗短，直立或斜生，上部密被褐色三角狀披針形鱗片。鱗片邊緣疏生 不整齊的齒，葉簇生。葉柄長5 8cm，連同葉軸或羽軸密被卵形至披針形淡黃色 鱗片，有光澤。葉片長12 18cm，寬2 4cm，長披針形或倒披針形，中部以上漸尖 或短縮為鈍尖，向下漸狹至葉柄頂部，草質，二回羽狀裂。羽片25 35對，互生或少 數近對生，寬披針型，長1.5 2cm，寬0.8 lcm，先端鈍，基部楔形，小羽片5 7對, 矩圓形，生于側脈中下部或基部，囊群蓋圓腎形，邊緣嚙蝕狀，被多數腺體，膜質， 灰白色，宿存。孢子橢圓形，具不規(guī)則的小瘤。植物略具香味，故有香鱗毛蕨之稱。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種有多種醫(yī)療用途的新化合物及其分離方法。
上述的目的通過以下的技術方案實現
香鱗毛蕨苷E，外觀為白色粉末，溶于甲醇，分子式為C17H2409,分子結 構式為<formula>formula see original document page 5</formula>所述的香鱗毛蕨苷E的分離方法:
取香鱗毛蕨干粉，經水提，減壓濃縮至膏狀，將浸膏溶解，經大孔吸 附樹脂柱色譜后，依次分別用水和30%乙醇洗脫，將30%乙醇組分回收，干 燥成干粉；
用溶劑溶解至膏狀，濕法上硅膠色譜柱，以氯仿甲醇梯度洗脫，經 回收，點薄層色譜板合并，其中將氯仿甲醇重量比為3: 1,洗脫部分組分 X (33-35)回收濃縮，干燥成干粉；
濕法裝入硅膠色譜柱，用洗脫液CHCI3-MeOH-H20洗脫，洗脫液中 CHCI3-MeOH-H20的體積比為5: 1: 0.1,洗脫得到組分Xl、組分X2、 組分X3;
將其中組分X3部分回收，干燥成干粉，裝入ODS色譜柱，用洗脫 劑30%甲醇洗脫，得到組分X3-2和組分X3-5部分，將其中組分X3-5 部分經HPLC，洗脫液為35%甲醇，得到香鱗毛蕨苷E。
上述的香鱗毛蕨苷E的分離方法，所述的以氯仿甲醇梯度洗脫過程 中，氯仿與甲醇比例為12: 1、 9: 1、 6: 1、 3: l以及l(fā): 1。 這個技術方案有以下有益效果
1.經臨床檢驗，本發(fā)明提取的化合物香鱗毛蕨苷E具有顯著的抗腫瘤活性，對多種人癌細胞具有直接殺傷作用并對細胞增殖有抑制作用。
并可以通過促進T、 B淋巴細胞的增殖活化，達到對免疫紊亂的調節(jié)。
2. 其他功能正在實驗中，前景看好。
3. 經臨床檢驗，香鱗毛蕨還能治療各種皮膚病和關節(jié)炎，如牛皮癬、 皮疹、皮炎、腳氣和干癬等。特別對關節(jié)炎和牛皮癬的治療效果非常 顯著。試用該產品的黑龍江省北部的居民把香鱗毛蕨視為"皮膚病的 克星"，用香鱗毛蕨的水煎液涂擦患處以治療上述疾病。由此攻克了世 界上治療這些疑難皮膚病的難題。
4. 經檢測，用本發(fā)明產品水煎液洗頭，能夠達到去頭屑止癢的目的，有治
病和美容的雙重功效，且無任何毒副作用。


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圖1本發(fā)明提取與分離具體技術路線。
圖2為本發(fā)明中的細胞增殖抑制活性測試方法流程圖。
本發(fā)明的
具體實施例方式
實施例l:
香鱗毛蕨苷E,白色粉末，可溶于甲醇，分子式為C17H2409。<formula>formula see original document page 6</formula>
實施例2:
香鱗毛蕨苷E的分離方法，取香鱗毛蕨干粉，經水提，減壓濃縮至膏狀。 將浸膏溶解至適當濃度，進行AB-8大孔吸附樹脂柱色譜，依次分別用水、30°/。乙醇、60°/。乙醇和95%乙醇溶液洗脫，得到水組分，30°/。乙醇組分，60% 乙醇組分和95%乙醇組分。將其中30"/。乙醇組分回收，濃縮干燥成至干粉。 經實踐證明，其中30%乙醇洗脫的組分效果最好。
用溶劑溶解至膏狀，濕法上硅膠色譜柱，分別用氯仿甲醇洗脫，氯仿 甲醇的體積比例可為12: 1、 9: 1、 6: 1、 3: 1、 1: 1經回收，點薄層色譜 板合并，其中用3: l洗脫部分為組分VI (3-7)、組分VII (10-1)、組分 VIII (21-24)、組分IX (25-32)、組分X (33-35)共5部分。將組分X (33-35)部分回收濃縮，干燥成干粉。濕法裝入硅膠色譜柱，用體積比例為 5: 1: 0.1的CHCIrMeOH-H20洗脫液洗脫，得到組分XI、組分X2、 組分X3。將其中組分X3部分回收，干燥成干粉。
裝入ODS色譜柱，用30%甲醇作為洗脫液洗脫，得到組分X3-2和 組分X3-5部分。組分X3-5部分經HPLC，洗脫液為35%甲醇，得到香 鱗毛蕨苷E。 免疫活性測試方法如下
無菌分離小鼠脾臟,制備脾淋巴細胞,與待測藥物預孵1小時，刺激劑繼續(xù)培
養(yǎng),總計培養(yǎng)72小時后收獲細胞，進行MTT染色，以酶標儀進行測定。
無菌摘取小鼠脾臟,除去血液和脂肪在細胞篩網上碾磨，并用RPMI1640完全 培養(yǎng)基沖洗，沖洗液并入試管中，離心10min( 1500r/min，)，吸去上清液，調 整細胞密度2. 4. 6. 8. 10. 20和30x107 mL。調整細胞密度為6xl07mL，經臺盼 藍染色確定活細胞數大于95%后，分別加入100L的細胞懸液和10pL的待測藥 物于96孔細胞培養(yǎng)板中，混勻后放入5%C02、 37。C培養(yǎng)箱中預孵60min，再加入 10jiL的ConA(終濃度為10照/mL),繼續(xù)培養(yǎng)72h，培養(yǎng)結束后，每孔加入20pL 的MTT染色液，反應4h后去上清，加入150jiL的DM50，震蕩溶解并在酶標儀 上570nm處檢測。
權利要求
1.一種香鱗毛蕨苷E，其特征是外觀為白色粉末，溶于甲醇，分子式為C17H24O9，分子結構式為
2. —種權利要求1所述的香鱗毛蕨苷E的分離方法，其特征是取香鱗毛蕨干粉，經水提，減壓濃縮至膏狀，將浸膏溶解，經大孔吸 附樹脂柱色譜后，依次分別用水和30%乙醇洗脫，將30%乙醇組分回收，干 燥成干粉；用溶劑溶解至膏狀，濕法上硅膠色譜柱，以氯仿甲醇梯度洗脫，經 回收，點薄層色譜板合并，其中將氯仿甲醇重量比為3: 1，洗脫部分組分: X (33-35)回收濃縮，干燥成干粉；濕法裝入硅膠色譜柱，用洗脫液CHCI3-MeOH-H20洗脫，洗脫液中 CHCl3-MeOH-H20的體積比為5: 1: 0.1，洗脫得到組分Xl、組分X2、 組分X3;將其中組分X3部分回收，干燥成干粉，裝入ODS色譜柱，用洗 脫劑30%甲醇洗脫，得到組分X3-2和組分X3-5部分，將其中組分X 3-5部分經HPLC，洗脫液為35%甲醇，得到香鱗毛蕨苷E。
3.根據權利要求2所述的香鱗毛蕨苷E的分離方法，其特征是:所述的以氯仿:甲醇梯度洗脫過程中，氯仿與甲醇比例為12: 1、 9: 1、 6: 1、 3: 1以及1:
全文摘要
香鱗毛蕨苷E及其分離方法，香鱗毛蕨Dryopteris組份agrans(L.)Schott為鱗毛蕨科鱗毛蕨屬植物，香鱗毛蕨苷E外觀為白色粉末，溶于甲醇，分子式為C₁₇H₂₄O₉，分子結構式如圖本產品有多種醫(yī)療用途。
文檔編號C07H15/00GK101302238SQ20081006410
公開日2008年11月12日 申請日期2008年3月12日 優(yōu)先權日2008年3月12日
發(fā)明者匡海學, 宋慶宇, 張彥龍 申請人:黑龍江大學