專利名稱：：聯(lián)苯類化合物及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種聯(lián)苯類化合物，尤其是涉及一種來源于紅樹林內生真菌——矮棒曲霉BYY-1(^^wg!7/^c/avato"am'CM;yBYY-l)真菌代謝產物聯(lián)苯類化合物及其制備方法，以及該化合物在制備抗腫瘤藥物及其作為抗氧化劑在醫(yī)藥品、化妝品及食品領域的應用。
背景技術：
：海洋真菌是海洋微生物的重要組成類型，與細菌相比，真菌相對高等，代謝能力強，生命活動復雜，并且與海洋中動植物有著非常復雜的生態(tài)關系，因此能夠產生許多結構新穎、活性獨特的次級代謝產物，海洋真菌已成為尋找高活性先導化合物的新資源([l]范國濤，朱天驕，崔承彬，等.海洋真菌KLEB-07培養(yǎng)條件的研究[J].中國海洋藥物雜志，2005,24(5):11-14)。紅樹林內生真菌作為一類重要的海洋真菌，越來越引起國內外天然產物化學家的關注，目前己從中分離到一些具有良好生物活性的新化合物。2001年，Lin等([2]LinYC，WuXY,FengS,Wa/,.FiveUniqueCompounds:XyloketalsfromMangroveFungussp.fromtheSouthChinaSeaCoast[J].J.Org.Chem.,2001,66:6252-6256)從紅樹林真菌Xy/an'asp.(no.2508)的代謝產物中得到5個結構獨特的新聚酮類化合物xyloketalsA-E。2004年，羅景慧等([3]羅景慧,楊迎暴，林永成，等.中國南海海岸紅樹真菌Xy/flWflsp.代謝產物在體外對乙酰膽堿酯酶活性的影響[J].中藥材，2004，27(4):261-264)采用改良Ellmen法對化合物xyloketalsA-D的活性進行研究。結果表明，xyloketalsA-D在體外對AchE活性均有不同程度的抑制作用，并呈一定劑量依賴關系，ICso值分別為29.9、137.4、109.3和425.6pmol/L。通過對AchE酶抑制動力學曲線進行分析發(fā)現(xiàn)，xyloketals對AchE的抑制表現(xiàn)為可逆非競爭性抑制。Isaka等對紅樹林真菌Ag/a/Mp"rvwBCC5311進行了研究，從中得到5個新間二羥苯基大環(huán)內酯AigialomycinsA陽E禾卩——個已知4t合物hypothemycin，其中hypothemycin禾卩aigialomycinD表現(xiàn)出體外抗瘧疾活性，對P/flWJOc^m/fl/";pnw2Kl的ICso分別為2.2嗎/mL和6.6pg/mL([4]IsakaM，SuyarnsestakornC,TanticharoenM.AigialomycinsA-E,NewResorcylicMacrolidesfromtheMarineM肌groveFungus爿/gZa/ttf/arvMs[J].J.Org.Chem.，2002,67:1561-1566)。]t匕后，Vongvilai等延長了該菌株(Agz'a/^;an^^BCC5311)的發(fā)酵時間，從其代謝產物中得到2個結構獨特的新化合物Aigialone和aigialospirol([5]VongvilaiP,IsakaM,KittakoopP，"a/..KeteneAcetalandSpiroacetalConstituentsoftheMarineFungus爿/g/a/MSparvw51BCC5311[J].J.Nat.Prod.,2004,67:457-460)。2007年，Xu等([6]XuMJ，GessnerG，GrothI,"a/..ShearininesD—K，newindoletriterpenoidsfromanendophytic戶ew/"7/Zw附sp.(strainHKI0459)withblockingactivityonlarge-conductancecalcium-activatedpotassiumchannels[J].Tetrahedron,2007,63:435444)從桐花樹真菌戶ew'c!'/"MJKsp.的代謝產物中分離到8個新卩引哚三砲shearininesD-K，其中ShearininesD，E禾nG表現(xiàn)出明顯的阻斷BKca通道的活性。ShearininesD和E可能穿過血腦屏障，從而在治療某種癲癇病中發(fā)揮作用。本發(fā)明的目的在于提供一種具有良好生物活性、抗氧化性和抑制癌細胞能力的聯(lián)苯類化合物及其制備方法和應用。所述的聯(lián)苯類化合物來源于紅樹林內生真菌次級代謝產物，紅樹林內生真菌為矮棒曲霉BYY-1c/avato"am'owBYY-1)，已于2006年7月3日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC中國武漢大學校內)，保藏號為CCTCCNO:M206063。(參見本申請人的中國專利申i青200710008928.4;200710008929.9;200710008930.1):所述的聯(lián)苯類化合物的結構式為所述的聯(lián)苯類化合物為無色針狀晶體，'H-NMR(CD3OD,400MHz):6.73(J,/=2.7Hz)，6.66(d,/=2.8Hz),4.61(s,2H);13C-NMR(CD3OD,400MHz):144.3,121.9,115.4，151.7，114.5,132.1,6U.HRESI-Q-TOFm/z279.1915[M+H]+,301.9705[M+Na]+,317.0409[M+K]+.經綜合分析核磁共振和質譜數(shù)據(jù)證實該化合物為聯(lián)苯類化合物。它具有良好的生物活性及良好的抗氧化性和抑癌細胞能力。所述的聯(lián)苯類化合物的制備方法包括以下步驟(1)制備矮棒曲霉BYY-1(Js/erg說船c/flvatowflm'o/sBYY-1)的種子液a.菌株的斜面培養(yǎng)馬鈴薯去皮、切成小塊，加水煮沸，紗布過濾，濾液中加葡萄糖和瓊脂，海水定容，滅菌，制成試管斜面，得斜面培養(yǎng)基，挑取菌種接入斜面，培養(yǎng)，得培養(yǎng)的斜面菌種；
發(fā)明內容b.菌株的種子培養(yǎng)在馬鈴薯汁中添加葡萄糖，海水定容，滅菌，得種子培養(yǎng)基，將上述培養(yǎng)的斜面菌種轉接到分裝后的種子培養(yǎng)基中，搖瓶培養(yǎng)，得種子液；(2)制備矮棒曲霉BYY-1c/ov"to咖m'owBYY-1)的發(fā)酵液馬鈴薯去皮、切成小塊，加水煮沸，紗布過濾，濾液中加葡萄糖，海水定容，滅菌，得發(fā)酵培養(yǎng)基，將種子液轉接入發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵后得發(fā)酵液；(3)聯(lián)苯類化合物的提取將發(fā)酵液過濾得發(fā)酵液上清和菌體，發(fā)酵液上清用有機溶劑萃取，合并有機相減壓濃縮得浸膏；(4)聯(lián)苯類化合物的精制將浸膏用石油醚和甲醇分相，分別得到石油醚相和甲醇相，將甲醇相減壓濃縮，用凝膠柱層析，有機溶劑洗脫，所得組分用正相硅膠柱層析，以石油醚和/或乙酸乙酯梯度洗脫，收集石油醚/乙酸乙酯的體積比例為(1001):1洗脫液得到組分A;組分A用正相硅膠柱純化，以氯仿和/或甲醇梯度洗脫，收集當氯仿/甲醇的體積比例為(10010):1時的洗脫液，合并洗脫液，減壓濃縮得聯(lián)苯類化合物。在步驟(l)a中，所述的加水煮沸的時間最好為30min;所述的海水定容中的海水為10%100%海水(即按體積百分比，海水占海水與自來水總體積的10%100%)，海水定容后的每升斜面培養(yǎng)基含瓊脂1520g;海水定容后的每升斜面培養(yǎng)基含葡萄糖1520g;培養(yǎng)的溫度最好為2532'C，培養(yǎng)的時間最好為28d;海水定容后所述的滅菌可采用121'C滅菌。在步驟(l)b中，所述的在馬鈴薯汁中添加葡萄糖的比例是每升馬鈴薯濾液中加1030g葡萄糖；所述的海水定容中的海水為10%100%海水(即按體積百分比，海水占海水與自來水總體積的10%100%);海水定容后所述的滅菌可采用12rc滅菌。在步驟(2)中，所述的加水煮沸的時間最好為30min;所述的在馬鈴薯汁中添加葡萄糖的比例是每升馬鈴薯濾液中加1520g葡萄糖；所述的海水定容中的海水為10%100%海水(即按體積百分比，海水占海水與自來水總體積的10%100%);所述的將種子液轉接入發(fā)酵培養(yǎng)基是將種子液按接種量5%10%轉接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，在2333t)下靜置培養(yǎng)1318d;海水定容后所述的滅菌可采用12rc滅菌。在步驟(3)中，所述的發(fā)酵液上清用有機溶劑萃取至少3次，有機溶劑選自石油醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯化碳等中的一種。在步驟(4)中，所述的有機溶劑選自乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇等中的一種。經綜合分析，本發(fā)明所述的聯(lián)苯類化合物具有良好的生物活性及良好的抗氧化性和抑癌細胞能力，可用于制備抗腫瘤藥物，也可作為抗氧化劑應用于醫(yī)藥品、化妝品及食品的制備中。本發(fā)明所述的聯(lián)苯類化合物來源于紅樹林內生真菌次級代謝產物，該化合物不僅結構新穎，而且對其研究不會破壞紅樹林生態(tài)系統(tǒng)，具有較高的理論和實際意義。圖l為聯(lián)苯類化合物的抗氧化活性數(shù)據(jù)圖。在圖1中，橫坐標為濃度(嗎/mL)，縱坐標為清除率(％)。圖2為聯(lián)苯類化合物對Hela細胞形態(tài)的影響(x40)。在圖2中，a對照；b.2pg/mL;c.4pg/mL。圖3為流式細胞儀分析聯(lián)苯類化合物對Hda細胞的存活率。在圖3中，橫坐標為濃度(pg/mL)，縱坐標為存活率(％)。圖4為流式細胞儀分析聯(lián)苯類化合物對Hela細胞周期分布的影響。在圖4中，a.對照；b.2嗎/mL;橫坐標為PI(表示熒光信號或散射光信號相對強度，單位是道數(shù))，縱坐標為Count(表示細胞相對數(shù)量，無具體單位)。圖中的各字母表示E、U:凋亡峰(AP峰)；F、V:DNA合成休止以及準備期(G0/G1期)細胞峰；G、W:DNA合成期(S期)細胞峰；H、X:細胞分裂(G2/M期)細胞峰。具體實施方式以下給出本發(fā)明制備方法的實施例，對本發(fā)明作進一步說明。實施例1(1)制備矮棒曲霉BYY-1(Ay;ergz7/iwc/flVflto"a"iawBYY-l)的種子液a.菌株的斜面培養(yǎng)取200g馬鈴薯去皮、切成小塊，加水煮沸30min，4層紗布過濾，濾液中加20g葡萄糖和20g瓊脂，50%海水(按海水與自來水按體積比)定容1000mL。然后分裝試管，滅菌(12rC，20min)，制成試管斜面，得斜面培養(yǎng)基。挑取菌種接入斜面培養(yǎng)基進行培養(yǎng)；b.菌株的種子培養(yǎng)在每升馬鈴薯濾液(制備方法同上)中加20g葡萄糖，用50%海水(海水與自來水按體積比混合)定容至1000mL。然后分裝到500mL三角瓶中(200mL/瓶)，滅菌(12rC，30min)，得種子培養(yǎng)基。將上述培養(yǎng)的斜面菌種轉接到分裝后的種子培養(yǎng)基中，搖瓶培養(yǎng)(28'C，120r/min，培養(yǎng)4d)，得種子液；(2)制備矮棒曲霉BYY-1(J5^ergz7/^c/avatoramcwBYY-1)的發(fā)酵液先配制好發(fā)酵培養(yǎng)基，與前述配制種子培養(yǎng)基相同。將前述所得的種子液按接種量10%轉接入發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵(3(TC靜置培養(yǎng)15d)，得發(fā)酵液；(3)聯(lián)苯類化合物的提取將發(fā)酵液4層紗布過濾得發(fā)酵液上清和菌體，發(fā)酵液上清用等體積乙酸乙酯萃取4次，合并有機相減壓(50°C)濃縮得浸膏；(4)聯(lián)苯類化合物的精制浸膏用石油醚和甲醇分相，分別得到石油醚相和甲醇相，將甲醇相減壓濃縮，用凝膠柱(SephadexLH-20)層析，用甲醇洗脫，所得組分用正相硅膠柱層析，以石油醚/乙酸乙酯(石油醚/乙酸乙酯=100/1至7/3，v/v)梯度洗脫，收集石油醚/乙酸乙酯的體積比例為7:3洗脫液得到組分A;組分A用正相硅膠柱純化，以氯仿/甲醇(氯仿/甲醇=100/0至40/1,v/v)梯度洗脫，收集當氯仿/甲醇的體積比例為40:1時的洗脫液，合并洗脫液，減壓濃縮得聯(lián)苯類化合物。實施例2(1)制備矮棒曲霉BYY-1(^perg說zwc/arato"""/cw;yBYY-l)的種子液a.菌株的斜面培養(yǎng)取300g馬鈴薯去皮、切成小塊，加水煮沸30min，4層紗布過濾，濾液中加30g葡萄糖和30g瓊脂，100%海水(按海水與自來水按體積比)定容1000mL。然后分裝試管，滅菌(12rC，20min)，制成試管斜面，得斜面培養(yǎng)基。挑取菌種接入斜面培養(yǎng)基進行培養(yǎng)；b.菌株的種子培養(yǎng)取300g馬鈴薯去皮、切成小塊，加水煮沸30min，4層紗布過濾，按每升濾液中加30g葡萄糖的比例加入葡萄糖，用50%海水(海水與自來水按體積比混合)定容至1000mL。然后分裝到500mL三角瓶中(200mL/瓶)，滅菌(121°C，30min)，得種子培養(yǎng)基。將上述培養(yǎng)的斜面菌種轉接到分裝后的種子培養(yǎng)基中，搖瓶培養(yǎng)(25°C，140r/min，培養(yǎng)3d)，得種子液；(2)制備矮棒曲霉BYY-1(^;erg///ic/flvatowa"icwsBYY-1)的發(fā)酵液先配制好發(fā)酵培養(yǎng)基(與前述配制種子培養(yǎng)基相同)。將前述所得的種子液按接種量8%轉接入發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵(28'C靜置培養(yǎng)13d)。得發(fā)酵液；(3)聯(lián)苯類化合物的提取將發(fā)酵液4層紗布過濾得發(fā)酵液上清和菌體，發(fā)酵液上清用等體積氯仿萃取3次，合并有機相減壓(50°C)濃縮得到浸膏。(4)聯(lián)苯類化合物的精制浸膏用石油醚和甲醇分相，分別得到石油醚相和甲醇相，將甲醇相減壓濃縮，用凝膠柱(SephadexLH-20)層析，用甲醇洗脫，所得組分用正相硅膠柱層析，以石油醚/乙酸乙酯(石油醚/乙酸乙酯=15/1至1/1，v/v)梯度洗脫，收集石油醚/乙酸乙酯的體積比例為4:1洗脫液得到組分A;組分A用正相硅膠柱純化，以氯仿/甲醇(氯仿/甲醇=100/0至20/1，v/v)梯度洗脫，收集當氯仿/甲醇的體積比例為20:1時的洗脫液，合并洗脫液，減壓濃縮得聯(lián)苯類化合物。實施例3(1)制備矮棒曲霉BYY-1(^p"g///usc/aratowflm'awBYY-l)的種子液a.菌株的斜面培養(yǎng)取150g馬鈴薯去皮、切成小塊，加水煮沸30min，4層紗布過濾，濾液中加15g葡萄糖和15g瓊脂，30%海水(按海水與自來水按體積比)定容1000mL。然后分裝試管，滅菌(121°C，20min)，制成試管斜面，得斜面培養(yǎng)基。挑取菌種接入斜面培養(yǎng)基進行培養(yǎng)；b.菌株的種子培養(yǎng)取150g馬鈴薯去皮、切成小塊，加水煮沸30min，4層紗布過濾，按每升濾液中加15g葡萄糖的比例加入葡萄糖，用30%海水(海水與自來水按體積比混合)定容至1000mL。然后分裝到500mL三角瓶中(200mL/瓶)，滅菌(121°C，20min)，得種子培養(yǎng)基。將上述培養(yǎng)的斜面菌種轉接到分裝后的種子培養(yǎng)基中，搖瓶培養(yǎng)(27°C,180r/min培養(yǎng)4d)，得種子液；(2)制備矮棒曲霉BYY-1(A;wg/〃M;fc/aratona"kwBYY-1)的發(fā)酵液先配制好發(fā)酵培養(yǎng)基(與前述配制種子培養(yǎng)基相同)。將前述所得的種子液按接種量8%轉接入發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵(27'C靜置培養(yǎng)18d)。得發(fā)酵液；(3)聯(lián)苯類化合物的提取將發(fā)酵液4層紗布過濾得發(fā)酵液上清和菌體，發(fā)酵液上清用等體積二氯甲烷萃取3次，合并有機相減壓(50°C)濃縮得到浸膏。(4)聯(lián)苯類化合物的精制浸膏用石油ii和甲醇分相，分別得到石油醚相和甲醇相，將甲醇相減壓濃縮，用凝膠柱(SephadexLH-20)層析，用甲醇洗脫，所得組分用正相硅膠柱層析，以石油醚/乙酸乙酯(石油醚/乙酸乙酯=50/1至1/1，v/v)梯度洗脫，收集石油醚/乙酸乙酯的體積比例為4:1洗脫液得到組分A;組分A用正相硅膠柱純化，以氯仿/甲醇(氯仿/甲醇=100/0至20/1，v/v)梯度洗脫，收集當氯仿/甲醇的體積比例為10:l時的洗脫液，合并洗脫液，減壓濃縮得聯(lián)苯類化合物。實施例4采用有機自由基DPPH體系，測定聯(lián)苯類化合物對有機自由基DPPH的清除作用來檢測聯(lián)苯類化合物的抗氧化作用。在96孔板孔內依次分別加入不同濃度的待測樣品溶液(甲醇配制)或甲醇(空白)50nL，50pmol/L的DPPH(甲醇配制)150pL,在黑暗環(huán)境下反應30min后用分光光度計測定吸光度(OD517)。按下式計算樣品對DPPH自由基的清除率-清除率=l_[(A-Ao)/(B-BQ)]xlO0%式中AQ，A為加樣反應前后的吸光度，Bo，B為空白孔反應前后的吸光度。圖l為本發(fā)明的聯(lián)苯類化合物的抗氧化活性數(shù)據(jù)圖。圖1結果表明，當聯(lián)苯類化合物的濃度為3.125pg/mL、6.25ng/mL、12.5pg/mL、25ng/mL時，對有機自由基DPPH的清除率分別為44.65%、66.75%、90.4%、90.07%。由此可見，本發(fā)明的聯(lián)苯類化合物具有良好的抗氧化活性。實施例5以人宮頸癌Hela細胞為指示瘤株，采用MTT法測定聯(lián)苯類化合物的抗腫瘤活性。Hela細胞用完全培養(yǎng)基(RMPI1640基本培養(yǎng)液，加10%的胎牛血清，1%的三抗)制成單細胞懸液，血球計數(shù)板計數(shù)，Hela按80009000個/孔接種于96孔細胞培養(yǎng)板中，每孔加80nL，空白加80nL培養(yǎng)液，置C02培養(yǎng)箱中，37'C培養(yǎng)24h后，加入完全培養(yǎng)基稀釋的樣品20pL;陽性對照加入順鉑20pL;陰性對照加入20pL培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)72h后取出，加入5mg/tnL的MTT溶液(溶于PBS中)10[iL，37。C反應3h，加入100pL的10%SDS—0.01NHC1，37'C過夜。用酶標儀測量吸光度(測量波長570nm，參考波長655nm)，依照下式計算抑制率，抑制率為50%時樣品的濃度為1(:5()。抑制率=(對照組OD值一實驗組OD值)/對照組OD值><100%結果表明，聯(lián)苯類化合物對Hela細胞具有很強的抑制作用，ICso為3.2ng/mL。實施例6用不同濃度的聯(lián)苯類化合物分別處理Hela細胞，24h后觀察細胞形態(tài)的變化，結果如圖2。從圖2可以看出在經過藥物處理后，Hela細胞的形態(tài)發(fā)生了明顯的變化陰性對照的Hela細胞呈不規(guī)則形，貼壁生長(參見圖2a);當聯(lián)苯類化合物濃度為2嗎/mL時，大部分細胞貼壁生長，少數(shù)細胞變圓，形成膜泡，懸浮于液體中(參見圖2b);當聯(lián)苯類化合物濃度為4pg/mL時，大部分細胞變圓，形成膜泡，懸浮于液體中，只有極少數(shù)細胞存活(參見圖2c)。實施例7用流式細胞儀分析細胞存活率及測定細胞周期分布細胞接種于六孔板中，藥物處理后，消化收集，用4'C預冷的PBS洗滌3次(1000r/min，5min)，棄上清，用70%的4。C預冷乙醇于4。C固定細胞。測定時離心去乙醇，PBS洗滌兩次，加入500jiLPBS后再加3pL無DNA酶的RNA酶A(10mg/mL)重懸細胞(反復吹打細胞，避免細胞結塊)37。C下反應30min，避光下直接加入100pL0.05mg/mL的碘化丙啶PI4'C下染色30min。400目的尼龍網(wǎng)過濾后，用流式細胞儀分析細胞存活率(如圖3所示)及測定細胞周期分布(如圖4和表1所示)。從圖3可以看出，聯(lián)苯類化合物對Hela細胞有很強的抑制作用，且呈濃度依賴性，即隨著藥物濃度的增大，化合物對Hela細胞的抑制作用增強，Hela細胞的存活率明顯下降；當濃度達到6pg/mL以上時，24h后Hela細胞的存活率接近0。圖4表明，聯(lián)苯類化合物(濃度為2ng/mL)作用Hela細胞24h后，在DNA直方圖上出現(xiàn)一個位于Go/Gi峰左側的細胞凋亡峰(AP峰)或稱亞二倍體(sub-Go/G!)。從表1可以看出，用濃度為2tig/mL的聯(lián)苯類化合物處理Hela細胞24h后，Hela細胞的周期分布發(fā)生了明顯的變化。Go/Gi期細胞的比例明顯增加，而S期和G2/M期細胞比例則降低。以上實驗結果說明聯(lián)苯類化合物作用Hela細胞能引起細胞發(fā)生明顯的凋亡。表l聯(lián)苯類化合物對Hela細胞周期分布的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>權利要求1.聯(lián)苯類化合物，其特征在于來源于紅樹林內生真菌次級代謝產物，紅樹林內生真菌為矮棒曲霉BYY-1(AspergillusclavatonanicusBYY-1)，所述的聯(lián)苯類化合物的結構式為為無色針狀晶體，1H-NMR(CD3OD，400MHz)6.73(d，J＝2.7Hz)，6.66(d，J＝2.8Hz)，4.61(s，2H)；13C-NMR(CD3OD，400MHz)144.3，121.9，115.4，151.7，114.5，132.1，61.1.HRESI-Q-TOFm/z279.1915[M+H]+，301.9705[M+Na]+，317.0409[M+K]+，具有生物活性、抗氧化性和抑癌細胞能力。2.如權利要求l所述的聯(lián)苯類化合物的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)制備矮棒曲霉BYY-1(^s，rgz7/zwc/av加o"a"/cwBYY-l)的種子液a.菌株的斜面培養(yǎng)馬鈴薯去皮、切成小塊，加水煮沸，紗布過濾，濾液中加葡萄糖和瓊脂，海水定容，滅菌，制成試管斜面，得斜面培養(yǎng)基，挑取菌種接入斜面，培養(yǎng)，得培養(yǎng)的斜面菌種；b.菌株的種子培養(yǎng)在馬鈴薯汁中添加葡萄糖，海水定容，滅菌，得種子培養(yǎng)基，將上述培養(yǎng)的斜面菌種轉接到分裝后的種子培養(yǎng)基中，搖瓶培養(yǎng)，得種子液；(2)制備矮棒曲霉BYY-104^ergz7/wc/avato"a"&船BYY-l)的發(fā)酵液馬鈴薯去皮、切成小塊，加水煮沸，紗布過濾，濾液中加葡萄糖，海水定容，滅菌，得發(fā)酵培養(yǎng)基，將種子液轉接入發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵后得發(fā)酵液；(3)聯(lián)苯類化合物的提取將發(fā)酵液過濾得發(fā)酵液上清和菌體，發(fā)酵液上清用有機溶劑萃取，合并有機相減壓濃縮得浸膏；(4)聯(lián)苯類化合物的精制將浸膏用石油醚和甲醇分相，分別得到石油醚相和甲醇相，將甲醇相減壓濃縮，用凝膠柱層析，有機溶劑洗脫，所得組分用正相硅膠柱層析，以石油醚和/或乙酸乙酯梯度洗脫，收集石油醚/乙酸乙酯的體積比例為(1001):1洗脫液得到組分A;組分A用正相硅膠柱純化，以氯仿和/或甲醇梯度洗脫，收集當氯仿/甲醇的體積比例為(10010):1時的洗脫液，合并洗脫液，減壓濃縮得聯(lián)苯類化合物。3.如權利要求2所述的聯(lián)苯類化合物的制備方法，其特征在于在步驟(l)a中，所述的加水煮沸的時間為30min;所述的海水定容中的海水為10%100%海水，海水定容后的每升斜面培養(yǎng)基含瓊脂1520g;海水定容后的每升斜面培養(yǎng)基含葡萄糖1520g;培養(yǎng)的溫度為2532'C，培養(yǎng)的時間為28d。4.如權利要求2所述的聯(lián)苯類化合物的制備方法，其特征在于在步驟(l)b中，所述的在馬鈴薯汁中添加葡萄糖的比例是每升馬鈴薯濾液中加1030g葡萄糖；所述的海水定容中的海水為10%100%海水。5.如權利要求2所述的聯(lián)苯類化合物的制備方法，其特征在于在步驟(2)中，所述的加水煮沸的時間為30miii;所述的在馬鈴薯汁中添加葡萄糖的比例是每升馬鈴薯濾液中加1520g葡萄糖；所述的海水定容中的海水為10%100%海水。6.如權利要求2所述的聯(lián)苯類化合物的制備方法，其特征在于在步驟(2)中，所述的將種子液轉接入發(fā)酵培養(yǎng)基是將種子液按接種量5%10%轉接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，在2333。C下靜置培養(yǎng)1318d。7.如權利要求2所述的聯(lián)苯類化合物的制備方法，其特征在于在歩驟(3)中，所述的發(fā)酵液上清用有機溶劑萃取至少3次，有機溶劑選自石油醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯化碳中的一種。8.如權利要求2所述的聯(lián)苯類化合物的制備方法，其特征在于在步驟(4)中，所述的有機溶劑選自乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇中的一種。9.如權利要求1所述的聯(lián)苯類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應用。10.如權利要求1所述的聯(lián)苯類化合物在制備用于醫(yī)藥品、化妝品及食品的抗氧化劑中的應用。全文摘要聯(lián)苯類化合物及其制備方法和應用，涉及一種聯(lián)苯類化合物。提供一種具有良好生物活性、抗氧化性和抑制癌細胞能力的聯(lián)苯類化合物及其制備方法和應用。聯(lián)苯類化合物來源于紅樹林內生真菌次級代謝產物，為無色針狀晶體，具有生物活性、抗氧化性和抑癌細胞能力。制備矮棒曲霉BYY-1(AspergillusclavatonanicusBYY-1)的種子液和發(fā)酵液，聯(lián)苯類化合物的提取，聯(lián)苯類化合物的精制。聯(lián)苯類化合物具有很強得抗腫瘤和抗氧化作用，可用于制備抗腫瘤藥物和作為抗氧化劑應用于醫(yī)藥品、化妝品及食品領域。文檔編號C07C39/00GK101234951SQ20081007062公開日2008年8月6日申請日期2008年2月4日優(yōu)先權日2008年2月4日發(fā)明者杜希萍,沈月毛,蘇文金,鄭忠輝,魯春華,黃耀堅申請人:廈門大學