專利名稱：：頭孢米諾鈉的分離純化方法及頭孢米諾鈉凍干粉針劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體來(lái)說(shuō)涉及的是頭孢米諾鈉的分離純化方法及頭孢米諾鈉凍千粉針劑的制備方法。技術(shù)背景頭孢米諾鈉對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌有廣譜抗菌活性，特別對(duì)大腸桿菌、克雷伯桿菌屬、流感嗜血桿菌、變形桿菌屬及脆弱擬桿菌有很強(qiáng)的抗菌作用。其作用機(jī)理是對(duì)e—內(nèi)酰胺類抗生素通常作用點(diǎn)的青霉素結(jié)合蛋白顯示很強(qiáng)親和性，可抑制細(xì)胞壁合成，并與肽聚糖結(jié)合，抑制肽聚糖與脂蛋白結(jié)合以促進(jìn)溶菌，在短時(shí)間內(nèi)顯示很強(qiáng)殺菌力。本品適用于敏感細(xì)菌引起的呼吸系統(tǒng)感染、泌尿系統(tǒng)感染、腹腔感染、盆腔感染及敗血癥。本品臨床用量大，療效確切，市場(chǎng)前景好。本品和大多數(shù)頭孢菌素類抗生素一樣，其制劑都是由頭孢米諾鈉原料無(wú)菌分裝制得。大多數(shù)頭孢米諾鈉存在純度低，溶解后可見異物多，水溶液極不穩(wěn)定的問(wèn)題，這也是所有抗生素類藥物的共性問(wèn)題。高速逆流色譜(High-SpeedCountercurrentChromatography)是一種連續(xù)高效的液-液分配色譜分離技術(shù)，由于采用液態(tài)固定相而不需要固體支撐物，因而避免了因不可逆吸附引起的樣品損失、失活變性等，在近2030年發(fā)展十分迅速，但未有將高速逆流色譜用于頭孢米諾鈉的分離純化的報(bào)導(dǎo)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供一種頭孢米諾鈉的分離純化方法，這種方法可以提高頭孢米諾鈉的純度。本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種頭孢米諾鈉的分離純化方法，是由三氯甲烷、甲醇和水組成固定相、流動(dòng)相的溶劑體系，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，使高速逆流色譜儀整個(gè)柱體中充滿固定相，再將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)；將頭孢米諾鈉原料溶于下相溶劑中，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，根據(jù)檢測(cè)器的圖譜收集98%以上部分，分離出溶劑后得頭孢米諾鈉精口卩no雖然溶劑分離可以采用蒸餾等方式，但比較理想的是采用冷凍干燥的方式，以減少能源消耗并避免高溫對(duì)頭孢米諾鈉的影響。在冷凍干燥之前可先用活性炭脫色，0.22Pm微孔濾膜過(guò)濾除菌后，以進(jìn)一步純化頭孢米諾鈉。所述的溶劑體系中三氯甲垸、甲醇、水的用量體積比優(yōu)選為0.6~1.2:0.8~1.4:1。溶劑體系中三氯甲垸、甲醇、水的用量體積比最優(yōu)選為1:1.2:1。本發(fā)明還進(jìn)一步提供了一種頭孢米諾鈉凍干粉針劑的制備方法，其方法為由三氯甲烷、甲醇和水組成固定相、流動(dòng)相的溶劑體系，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，使高速逆流色譜儀整個(gè)柱體中充滿固定相，再將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)；將頭孢米諾鈉原料溶于下相溶劑中，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，根據(jù)檢測(cè)器的圖譜收集98%以上部分，經(jīng)過(guò)冷凍干燥得純化的頭孢米諾鈉，再過(guò)60~100目篩粉碎，進(jìn)行無(wú)菌分裝。在冷凍干燥之前可先用活性炭脫色，0.22um微孔濾膜過(guò)濾除菌后，以進(jìn)一步純化頭孢米諾鈉。所述的溶劑體系中三氯甲烷、甲醇、水的用量體積比優(yōu)選為0.6~1.2:0.8~1.4:1。溶劑體系中三氯甲烷、甲醇、水的用量體積比最優(yōu)選為1:1.2:1。本發(fā)明采用高速逆流色譜對(duì)頭孢米諾鈉進(jìn)行分離純化，具有如下優(yōu)點(diǎn)1、本方法采用了高速逆流色譜分離方法，高速逆流色譜技術(shù)避免了因吸附作用引起的樣品損失、樣品組分的化學(xué)變性，分離效能與容量可以與制備HPLC相比，而且一般不存在峰的拖尾現(xiàn)象。2、采用高速逆流色譜純化方法，使原料的純度得到很大的提高，達(dá)到98%以上，而且純化過(guò)程無(wú)污染，便于工業(yè)連續(xù)化生產(chǎn)。3、本方法純化頭孢米諾鈉的有效理論塔板數(shù)為1300~2500，具有分離高效、快速、分離量大、樣品無(wú)損失、回收率高、分離環(huán)境溫和、節(jié)約溶劑等特點(diǎn)。4、采用離速逆流色譜純化制備的凍干粉針劑，除去了很多水不溶性雜質(zhì)，提高了在水中的溶解性和溶液的穩(wěn)定性。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，以助于理解本發(fā)明的內(nèi)容。在下面的實(shí)施例1實(shí)施例4中，所用的頭孢米諾鈉粗品由海南靈康制藥有限公司購(gòu)進(jìn)，其純度為96.2%。使用半制備型高速逆流色譜儀，配有恒流泵，15ml進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱體積為200ml，UV紫外檢測(cè)器。將體積比為l:1.2:l的三氯甲烷甲醇水混溶于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，取其上層溶液(上相)為固定相，下層溶液(下相)為流動(dòng)相，超聲脫氣后，先用固定相充滿整個(gè)柱體，然后開啟高速逆流色譜儀，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為900rpm，以1.3ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，將頭孢米諾鈉原料溶于下相中，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)檢測(cè)器紫外圖譜，收集收集98%以上部分，活性炭脫色，0.22um微孔濾膜過(guò)濾除菌后，冷凍干燥，得純化原料粉。經(jīng)HPLC分析，頭孢米諾鈉的純度為98.6%,有效理論塔板數(shù)為2116。將冷凍干燥后頭孢米諾鈉純品過(guò)60目篩粉碎，在無(wú)菌室內(nèi)100級(jí)條件下分裝，得注射用頭孢米諾鈉無(wú)菌制劑。實(shí)施例2使用半制備型高速逆流色譜儀，配有恒流泵，15ml進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱體積為200ml，UV紫外檢測(cè)器。將體積比為0.8:1.4:l的三氯甲垸甲醇水混溶于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，取其上層溶液(上相)為固定相，下層溶液(下相)為流動(dòng)相，超聲脫氣后，先用固定相充滿整個(gè)柱體，然后開啟高速逆流色譜儀，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為1200rpm，以1.3ml/min的流速將流動(dòng)相泵入住內(nèi)，待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，將頭孢米諾鈉原料溶于下相中，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)檢測(cè)器紫外圖譜，收集收集98%以上部分，活性炭脫色，0.22um微孔濾膜過(guò)濾除菌后，冷凍干燥，得純化原料粉。經(jīng)HPLC分析，頭孢米諾鈉的純度為98.5%，有效理論塔板數(shù)為1524。將冷凍干燥后頭孢米諾鈉純品過(guò)100目篩粉碎，在無(wú)菌室內(nèi)100級(jí)條件下分裝，得注射用頭孢米諾鈉無(wú)菌制劑。實(shí)施例3使用半制備型高速逆流色譜儀，配有恒流泵，15ml進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱體積為200ml，UV紫外檢測(cè)器。將體積比為0.5:1.5:l的三氯甲烷甲醇水混溶于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，取其上層溶液(上相)為固定相，下層溶液(下相)為流動(dòng)相，超聲脫氣后，先用固定相充滿整個(gè)柱體，然后開啟高速逆流色譜儀，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為1000rpm，以1.2ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，將頭孢米諾鈉原料溶于下相中，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)檢測(cè)器紫外圖譜，收集收集96%以上部分，活性炭脫色，0.22lim微孔濾膜過(guò)濾除菌后，冷凍干燥，得純化原料粉。經(jīng)HPLC分析，頭孢米諾鈉的純度為96.8%，有效理論塔板數(shù)為1866。將冷凍干燥后頭孢米諾鈉純品過(guò)80目篩粉碎，在無(wú)菌室內(nèi)100級(jí)條件下分裝，得注射用頭孢米諾鈉無(wú)菌制劑。實(shí)施例4使用半制備型高速逆流色譜儀，配有恒流泵，15ml進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱體積為200ml，UV紫外檢測(cè)器。將體積比為1.3:0.8:l的三氯甲烷甲醇水混溶于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，取其上層溶液(上相)為固定相，下層溶液(下相)為流動(dòng)相，超聲脫氣后，先用固定相充滿整個(gè)柱體，然后開啟高速逆流色譜儀，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為1500rpm，以1.4ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，將頭孢米諾鈉原料溶于下相中，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)檢測(cè)器紫外圖譜，收集收集96%以上部分，活性炭脫色，0.22um微孔濾膜過(guò)濾除菌后，冷凍干燥，得純化原料粉。經(jīng)HPLC分析，頭孢米諾鈉的純度為96.5%，有效理論塔板數(shù)為2155。將冷凍干燥后頭孢米諾鈉純品過(guò)60目篩粉碎，在無(wú)菌室內(nèi)100級(jí)條件下分裝，得注射用頭孢米諾鈉無(wú)菌制劑。實(shí)驗(yàn)例5質(zhì)量研究分別將以上制得的樣品在高溫6(TC、光照4500Lx條件下放置10天進(jìn)行影響因素試驗(yàn)考察，其結(jié)果見表1;在高溫40°C、相對(duì)濕度75%±5%條件下6個(gè)月，進(jìn)行加速試驗(yàn)考察，其結(jié)果見表2;在高溫25°C、相對(duì)濕度60%±10%條件下18個(gè)月，進(jìn)行長(zhǎng)期試驗(yàn)考察，檢測(cè)各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)的變化，其結(jié)果見表3。表1影響因素結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表3長(zhǎng)期試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>由以上數(shù)據(jù)結(jié)果可以看出，本發(fā)明實(shí)施例1、實(shí)施例2制得的樣品純度很好，而且影響因素10天、加速6月和長(zhǎng)期18月后各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)無(wú)明顯變化，均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；實(shí)施例3、實(shí)施例4制備的樣品純度較差，而且影響因素10天、加速6月和長(zhǎng)期18月后各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)變化較大，超出質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。充分說(shuō)明了在本發(fā)明技術(shù)范圍內(nèi)可以很好的純化頭孢米諾鈉原料，制備質(zhì)量合格的注射用頭孢米諾鈉制劑。權(quán)利要求1.一種頭孢米諾鈉的分離純化方法，是由三氯甲烷、甲醇和水組成固定相、流動(dòng)相的溶劑體系，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，使高速逆流色譜儀整個(gè)柱體中充滿固定相，再將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)；將頭孢米諾鈉原料溶于下相溶劑中，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，根據(jù)檢測(cè)器的圖譜收集98％以上部分，分離出溶劑后得頭孢米諾鈉精品。2、如權(quán)利要求1所述的頭孢米諾鈉的分離純化方法，其特征在于所述的溶劑分離采用冷凍干燥。3、如權(quán)利要求2所述的頭孢米諾鈉的分離純化方法，其特征在于在冷凍干燥之前先用活性炭脫色，再0.22ixm微孔濾膜過(guò)濾除菌。4、如權(quán)利要求1至3中之一所述的頭孢米諾鈉的分離純化方法，其特征在于所述的溶劑體系中三氯甲烷、甲醇、水的用量體積比為0.6~1.2:0.8~1,4:1。5、如權(quán)利要求1至3中之一所述的頭孢米諾鈉的分離純化方法，其特征在于所述的溶劑體系中三氯甲烷、甲醇、水的用量體積比最為1:1,2:1。6、一種頭孢米諾鈉凍干粉針劑的制備方法，由三氯甲烷、甲醇和水組成固定相、流動(dòng)相的溶劑體系，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，使高速逆流色譜儀整個(gè)柱體中充滿固定相，再將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)；將頭孢米諾鈉原料溶于下相溶劑中，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，根據(jù)檢測(cè)器的圖譜收集98%以上部分，經(jīng)過(guò)冷凍干燥得純化的頭孢米諾鈉，再過(guò)60~100目篩粉碎，進(jìn)行無(wú)菌分裝。7、如權(quán)利要求6所述的頭孢米諾鈉凍干粉針劑的制備方法，其特征在于在冷凍干燥之前先用活性炭脫色，再0.22um微孔濾膜過(guò)濾除菌。8、如權(quán)利要求6或7所述的頭孢米諾鈉凍干粉針劑的制備方法，其特征在于所述的溶劑體系中三氯甲烷、甲醇、水的用量體積比為0.61.2:0.81.4:1。9、如權(quán)利要求6或7所述的頭孢米諾鈉凍干粉針劑的制備方法，其特征在于所述的溶劑體系中三氯甲烷、甲醇、水的用量體積比最為1:1.2:1。全文摘要本發(fā)明公開了一種頭孢米諾鈉的分離純化方法，是由三氯甲烷、甲醇和水組成固定相、流動(dòng)相的溶劑體系，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，使高速逆流色譜儀整個(gè)柱體中充滿固定相，再將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)；將頭孢米諾鈉原料溶于下相溶劑中，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，根據(jù)檢測(cè)器的圖譜收集98％以上部分，分離出溶劑后得頭孢米諾鈉精品。還可以冷凍干燥制成凍干粉針劑。這種方法分離效果好，產(chǎn)品純度高。文檔編號(hào)C07D501/36GK101279980SQ200810110459公開日2008年10月8日申請(qǐng)日期2008年6月3日優(yōu)先權(quán)日2008年6月3日發(fā)明者朱正兵申請(qǐng)人:海南靈康制藥有限公司