專利名稱：作為芳香化酶抑制劑的含氨基磺酸酯基的1,2,4-三唑衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化合物。
具體講，本發(fā)明涉及化合物以及包含該化合物的藥物組合物。本發(fā)明還涉及該化合物或組合物在治療中的用途。

背景技術(shù)：
有證據(jù)表明雌激素是主要的促細(xì)胞分裂劑，其參與促進(jìn)內(nèi)分泌依賴性組織如乳腺和子宮內(nèi)膜中腫瘤的生長。雖然乳腺癌婦女或非乳腺癌婦女體中的血漿雌激素濃度相近，但乳腺腫瘤雌酮和雌二醇水平明顯高于正常乳腺組織或血液中的水平。據(jù)認(rèn)為雌激素的就地合成是腫瘤中雌激素水平高的重要原因，因此雌激素生物合成的抑制劑，特別是特異性抑制劑對內(nèi)分泌依賴性腫瘤的治療具有潛在價值。
過去二十多年中，人們對芳香化酶途徑的抑制劑的研制極為關(guān)注，該途徑將雄激素前體雄二酮轉(zhuǎn)變?yōu)榇仆?。然而，現(xiàn)在有證據(jù)表明雌酮硫酸酯酶(E1-STS)途徑，即將硫酸雌酮水解為雌酮(E1S-E1)，和芳香化酶(即將雄二酮轉(zhuǎn)化為雌酮)一起對乳腺瘤中雌激素的產(chǎn)生負(fù)責(zé)。


圖1和2是簡圖，示出了一些參與雌酮就地合成過程的酶(以硫酸雌酮、雌二醇和雄二酮為原料)。
在圖2中，用示意圖示出絕經(jīng)后婦女雌甾激素的來源，“ER”表示雌激素受體，“DHA-S”表示硫酸脫氫表雄酮，“Adiol”表示雄烯二醇，“E1-STS”表示雌酮硫酸酯酶，“DHA-STS”表示DHA-硫酸酯酶，“Adiol-STS”表示二醇(Adiol)-硫酸酯酶，和“17B-HSD”表示雌二醇17B-羥基甾類脫氫酶。
正如可以看到的那樣，參與雌激素外圍合成的主要兩種酶為芳香化酶和雌酮硫酸酯酶。
簡言之，芳香化酶將腎上腺皮質(zhì)大量分泌的雄二酮轉(zhuǎn)化成雌酮。近來的報道已經(jīng)揭示一些黃酮可以抑制芳香化酶活性。
然而，許多如此形成的雌酮被轉(zhuǎn)化成硫酸雌酮(E1S)，并且現(xiàn)在有相當(dāng)多的證據(jù)表明E1S在血漿和組織中起著貯庫的作用，通過雌酮硫雜酯酶的作用再形成雌酮。
關(guān)于這一點，現(xiàn)在認(rèn)為雌酮硫酸酯酶(E1-STS)途徑-即將硫酸雌酮水解成雌酮(E1S至E1)，是乳腺瘤中雌激素的主要來源。這一理論得到了下面的事實支持用芳香化酶抑制劑，例如氨魯米特和4-羥基雄二酮治療的絕經(jīng)后婦女乳腺癌患者的血漿雌激素濃度適度降低，以及接受這些芳香化酶抑制劑治療的患者中血漿E1S濃度保持較高水平的這一事實。與非共軛雌激素(半衰期20分鐘)相比，E1S在血液中的半衰期長(10-12小時)，和在肝臟中高水平的甾體硫酸酯酶活性，以及正常和惡性乳腺組織，也支持這一理論。
因此，在惡性乳腺和子宮內(nèi)膜組織中通過硫酸酯酶途徑形成雌激素是這些腫瘤中存在高濃度雌激素的主要原因。但同時對芳香化酶和硫酸酯酶途徑的抑制能提供相當(dāng)好的治療效果。
PCT/GB92/01587教導(dǎo)新型甾體硫酸酯酶抑制劑，及包含它們的藥物組合物在治療雌激素依賴性腫瘤，特別是乳腺癌方面的應(yīng)用。這些甾體硫酸酯酶抑制劑為氨基磺酸酯類，例如N，N-二甲基雌酮-3-氨基磺酸酯，優(yōu)選雌酮-3-氨基磺酸酯(或稱為“EMATE”)。EMATE具有如下結(jié)構(gòu)
已知EMATE是強有效的E1-STS抑制劑，因為在完整MCF-7細(xì)胞中在0.1nM濃度下對E1-STS活性的抑制大于99％。EMATE也以時間-和濃度-依賴性方式抑制E1-STS酶，這表明它起著活性位點定向失活劑的作用。雖然EMATE最初是為抑制E1-STS而設(shè)計的，但是它也抑制脫氫表雄酮硫酸酯酶(DHA-STS)，該酶被認(rèn)為具有調(diào)節(jié)雌激素甾類雄甾二醇生物合成的重要作用。另外，現(xiàn)在有證據(jù)表明雄甾二醇作為乳腺瘤生長的促進(jìn)劑可能更重要。EMATE在體內(nèi)也有活性，當(dāng)口服或皮下給藥時，它幾乎能完全抑制大鼠肝臟E1-STS(99％)和DHA-STS(99％)活性。此外，EMATE已經(jīng)顯示具有增強大鼠記憶的作用。小鼠研究已經(jīng)表明在DHA-STS活性和部分免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)之間存在關(guān)聯(lián)性。據(jù)認(rèn)為這種情形也可以發(fā)生在人類之間。EMATE中氨基磺酸酯部分的橋接氧原子對于抑制活性是重要的。因此，當(dāng)雌酮-3-N-氨基磺酸酯和雌酮-3-S-氨基磺酸酯中的3-O-原子被其它雜原子置換時，這些類似物便稱為較弱的非時間依賴性滅活劑。
除雌酮外，絕經(jīng)后婦女產(chǎn)生的其它具有雌激素性質(zhì)的甾類是雄二醇(參見圖2)。
雄二醇，雖然是一種雄激素，但可以與雌激素受體(ER)結(jié)合，并且可以刺激大鼠ER陽性乳腺癌細(xì)胞的生長和致癌物誘導(dǎo)的乳腺腫瘤的生長。重要的是，在絕經(jīng)后婦女中，所產(chǎn)生的雄二醇中90％來源于雄激素硫酸脫氫表雄酮(DHA-S)，后者由腎上腺皮質(zhì)大量分泌。DHA-S通過DHA硫酸酯酶轉(zhuǎn)化成DHA，而DHA硫酸酯酶可以是與雌酮硫酸酯酶相同或者不同的酶，并引起E1S水解。
在過去10-15年中，有相當(dāng)多的研究是用于研發(fā)強有效的芳香化酶抑制劑，其中一些現(xiàn)已上市。但在接受芳香化酶抑制劑治療的絕經(jīng)后乳腺癌婦女患者的最近三篇報道中，血漿E1S濃度仍保持在400-1000pg/ml之間。
因此，總的來講，雌激素的就地合成被認(rèn)為是腫瘤中雌激素水平高的重要原因，因而特異性的雌激素生物合成抑制劑對于內(nèi)分泌依賴性腫瘤具有潛在價值。
此外，即使惡性乳腺和子宮內(nèi)膜組織中通過硫酸酯酶途徑形成雌激素是高濃度雌激素存在的主要原因，但仍然存在對雌激素體內(nèi)合成起影響的其它酶促途徑。
本發(fā)明尋找提供適于抑制甾體硫酸酯酶活性和芳香化酶活性的新化合物。
發(fā)明概述 本發(fā)明基于這種令人驚奇的發(fā)現(xiàn)，即某些多環(huán)化合物可用作有效的甾體硫酸酯酶抑制劑和/或芳香化酶抑制劑和/或用作能影響細(xì)胞周期性變化的藥劑和/或用作能影響編程性細(xì)胞死亡的藥劑。
在本發(fā)明的一個方面中，本發(fā)明基于這種令人驚奇的發(fā)現(xiàn)，即某些多環(huán)化合物能用作有效的甾體硫酸酯酶抑制劑和/或芳香化酶抑制劑和/或用作細(xì)胞周期性變化調(diào)節(jié)劑和/或用作編程性細(xì)胞死亡的調(diào)節(jié)劑。
多環(huán)化合物包括至少一個中心三價原子，其直接或通過連接基間接地與至少兩個或三個環(huán)狀系統(tǒng)連接。環(huán)狀系統(tǒng)中至少一個包括氨基磺酸酯基作為環(huán)狀系統(tǒng)上的進(jìn)一步取代基。
本發(fā)明化合物可以包含其它取代基。這些其它取代基例如可以進(jìn)一步提高本發(fā)明化合物的活性和/或提高穩(wěn)定性(回體法(ex vivo)和/或體內(nèi)法(in vivo))。
發(fā)明祥述 根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了式I化合物

式I 其中每個T獨立選自H，烴基，-F-R，和與D、E、P或Q之一形成的鍵，或者與P和Q之一一起形成環(huán)；Z為適當(dāng)原子，其化合價為m；D，E和F各自獨立為任選的連接基，其中當(dāng)Z為氮時，E不能為CH2和C＝O；P、Q和R各自獨立為環(huán)狀系統(tǒng)；并且至少Q(mào)包含氨基磺酸酯基。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了一種方法，其包括(a)用一種或多種本文所定義的候選化合物進(jìn)行甾體硫酸酯酶(STS)測定和/或芳香化酶測定；(b)測定一種或多種所述候選化合物能否調(diào)控STS活性和/或芳香化酶活性和/或細(xì)胞周期性變化和/或細(xì)胞生長和/或編程性細(xì)胞死亡；和(c)篩選能調(diào)控STS活性和/或芳香化酶活性和/或細(xì)胞周期性變化和/或細(xì)胞生長和/或編程性細(xì)胞死亡的一種或多種所述候選化合物。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了一種方法，該包括(a)用一種或多種本文所定義的候選化合物進(jìn)行甾體硫酸酯酶測定和/或芳香化酶測定；(b)測定一種或多種所述候選化合物能否抑制STS和/或芳香化酶活性；和(c)篩選能抑制STS活性和/或芳香化酶活性和/或細(xì)胞周期性變化和/或細(xì)胞生長和/或編程性細(xì)胞死亡的一種或多種所述候選化合物。
在本發(fā)明的任一種方法中，可能存在一步或多步附加步驟。例如，所述方法還可以包括修飾所鑒定的候選化合物(例如用化學(xué)和/或酶技術(shù))，以及任選的測試修飾化合物的STS抑制作用(如果其作用更高或不同將是可以理解的)和/或芳香化酶抑制作用(如果其作用更高或不同將是可以理解的)的附加步驟。作為進(jìn)一步的實例，該方法還包括測定已鑒定候選化合物的結(jié)構(gòu)(例如用結(jié)晶學(xué)技術(shù))，然后進(jìn)行計算機模型制作研究的步驟-例如用于進(jìn)一步提高其STS和/或芳香化酶抑制作用。因此，本發(fā)明也包括具有用于所述已鑒定候選化合物的數(shù)據(jù)集(如結(jié)晶坐標(biāo))的計算機。本發(fā)明也包括在計算機篩選其分析結(jié)果的試驗-例如酶和/或蛋白質(zhì)結(jié)合試驗中提交的已鑒定候選化合物。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了用本發(fā)明方法鑒定的化合物。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了用于藥物中的本發(fā)明化合物。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了藥物組合物，其包括任選與可藥用載體、稀釋劑、賦形劑或輔助劑混合的本發(fā)明化合物。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了本發(fā)明化合物在制備用于治療與STS和/或芳香化酶和/或細(xì)胞周期性變化和/或編程性細(xì)胞死亡和/或細(xì)胞生長有關(guān)的病癥或疾病的藥物中的應(yīng)用。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了本發(fā)明化合物在制備用于治療與有害STS水平和/或有害芳香化酶水平和/或細(xì)胞周期性變化和/或編程性細(xì)胞死亡和/或細(xì)胞生長有關(guān)的病癥或疾病的藥物中應(yīng)用。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了本發(fā)明化合物在制備用于抑制STS活性和/或抑制芳香化酶活性的藥物中的應(yīng)用。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了本發(fā)明化合物在制備用于抑制STS活性和抑制芳香化酶活性的藥物中的應(yīng)用。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了化合物在制備用于治療與芳香化酶有關(guān)的并且任選與STS有關(guān)的病癥或疾病的藥物中的應(yīng)用，其中所述化合物為式I化合物

式I 其中各T獨立選自H，烴基，-F-R，和與D、E、P或Q之一形成的鍵，或者與P和Q之一一起形成環(huán)；Z為適當(dāng)原子，其化合價為m；D，E和F各自獨立為任選的連接基，P、Q和R各自獨立為環(huán)狀系統(tǒng)；并且至少在P、Q和R上包含氨基磺酸酯基。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了化合物在制備用于治療與有害芳香化酶水平有關(guān)的以及任選與有害STS水平有關(guān)的病癥或疾病的藥物中的應(yīng)用，其中所述化合物為式I化合物

式I 其中各T獨立選自H，烴基，-F-R，和與D、E、P或Q之一形成的鍵，或者與P和Q之一一起形成環(huán)；Z為適當(dāng)原子，其化合價為m；D，E和F各自獨立為任選的連接基，P、Q和R各自獨立為環(huán)狀系統(tǒng)；并且至少在P、Q和R上包含氨基磺酸酯基。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了化合物在制備用于抑制芳香化酶活性以及任選用于抑制STS活性的藥物中的應(yīng)用，其中所述化合物為式I化合物

式I 其中各T獨立選自H，烴基，-F-R，和與D、E、P或Q之一形成的鍵，或者與P和Q之一一起形成環(huán)；Z為適當(dāng)原子，其化合價為m；D，E和F各自獨立為任選的連接基，P、Q和R各自獨立為環(huán)狀系統(tǒng)；并且至少在P、Q和R上包含氨基磺酸酯基。
本發(fā)明還包括本發(fā)明的新化合物(譬如本文所介紹的那些化合物)，以及制備它們的方法(例如本文所介紹的方法)以及這些方法中使用的新中間體(例如本文所介紹的那些)。
為了便于引證，本發(fā)明的這些及其它方面現(xiàn)在在適當(dāng)小標(biāo)題下進(jìn)行討論。但各部分中的教導(dǎo)不一定局限于各特定部分。
一些優(yōu)點 本發(fā)明的一種基本優(yōu)點是本發(fā)明的化合物可以用作STS抑制劑。
本發(fā)明的一種基本優(yōu)點是本發(fā)明的化合物可以用作芳香化酶抑制劑。
本發(fā)明的一種基本優(yōu)點是本發(fā)明的化合物可以用作STS抑制劑和芳香化酶抑制劑。
本發(fā)明化合物的另一優(yōu)點是它們在體內(nèi)是強有效的。
一些本發(fā)明化合物可能是非雌激素性化合物。這里，術(shù)語“非雌激素性化合物”是指不顯示或基本上不顯示雌激素活性的化合物。在本文中，術(shù)語“非雌激素性化合物”是指不顯示或基本上不顯示如按照方案4所測定的全身性雌激素活性。
另一優(yōu)點是本發(fā)明化合物中的一些不能代謝為顯示或誘發(fā)激素活性的化合物。
本發(fā)明化合物中的一些還具有它們可以具口服活性的優(yōu)點。
一些本發(fā)明化合物可用于預(yù)防和/或治療癌癥，譬如乳腺癌，以及(或者)非惡性病癥，譬如用于預(yù)防和/或治療炎癥-如與任一種或多種下列疾病有關(guān)的癥狀自身免疫性疾病，包括例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，I型和II型糖尿病，全身性紅斑狼瘡，多發(fā)性硬化，重癥肌無力，甲狀腺炎，結(jié)節(jié)性脈管炎，胃潰瘍和Crohn病，皮膚病例如粉刺、牛皮癬和接觸性皮炎；移植物抗宿主病；濕疹；哮喘和移植術(shù)后的器官排斥。當(dāng)從年輕起就需要給用藥物時，本發(fā)明的化合物特別適用。
因此，據(jù)信本發(fā)明的一些化合物除用于內(nèi)分泌依賴性癌癥的治療外，還具有一些治療用途，譬如用于治療自身免疫病。
本發(fā)明的化合物也可用作編程性細(xì)胞死亡的誘導(dǎo)劑。
本發(fā)明的化合物也可用作細(xì)胞生長抑制劑。
優(yōu)選方面 Z 正如式I清楚所示，Z可以是能與任選連接基D和/或E或環(huán)狀系統(tǒng)P和/或Q形成價鍵或鍵并能與所述T或各個T形成價鍵或鍵的任何原子。Z的化合價表示為m。
在一個方面中，Z為三價，即m＝3。
在優(yōu)選的方面中，Z(T)m-2選自Z(-F-R)，ZH和Z-烴基。
適宜并且優(yōu)選的三價原子包括氮(N)，磷(P)和硼(B)。優(yōu)選Z為氮。
在優(yōu)選的方面中，Z(T)m-2選自N(-F-R)，NH和N-烴基。
在一個方面中，Z為四價，即m＝4。
在優(yōu)選的方面中，Z(T)m-2選自ZH(-F-R)，Z(-F-R)(-F-R)，Z(-F-R)(烴基)，ZH2，ZH-烴基和Z(烴基)(烴基)。
在優(yōu)選的方面中，Z(T)m-2選自ZH(-F-R)，ZH2和ZH-烴基。
適宜并且優(yōu)選的四價原子包括碳(C)和硅(Si)。優(yōu)選Z為C。因此優(yōu)選的Z(T)m-2選自CH(-F-R)，CH2和CH-烴基。
T Z(T)m-2中的每個T獨立選自H，烴基，與D、E、P或Q之一成的鍵，和-F-R，或者與P和Q之一一起形形成環(huán)。
在一個方面中，Z(T)m-2中的每個T獨立選自H，烴基和-F-R。
當(dāng)T為烴基時，它可以選自 ·C1-C10烴基， ·C1-C5烴基， ·C1-C3烴基， ·烴類(hydrocarbon groups)， ·C1-C10烴， ·C1-C5烴， ·C1-C3烴， ·烷基類 ·C1-C10烷基 ·C1-C5烷基， ·C1-C3烷基。
烴基/烴/烷基T可以是直鏈或支鏈的，并且/或可以是飽和或不飽和的。
烴基/烴/烷基T可以是基團中包含至少一個雜原子的直鏈或支鏈烴基。
任選連接基-D，E和F 連接基D，E和F各自獨立地存在或不存在。如果存在的話，D，E或F可選自C＝O和烴基。
本文使用的術(shù)語“烴基”是指至少包含C和H并且任選包含一個或多個其它適宜的取代基的基團。這類取代基的實例可以包括鹵素、烷氧基、硝基、烷基、環(huán)狀基團等。除取代基是環(huán)狀基團的可能性之外，取代基相互結(jié)合可以形形成環(huán)狀基團。如果烴基含有一個以上的C，則這些碳不一定是彼此連接的。例如，至少兩個碳原子可以通過適宜的元素或基團連接。因此，烴基可包含雜原子。適宜的雜原子對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的，并且包括，例如，硫、氮和氧。烴基的非限制性實例是?；?。
典型的烴基是烴基團。這里，術(shù)語“烴(hydrocarbon)”是指烷基、鏈烯基、炔基中的任何一種，這些基團可以是直鏈、支鏈或環(huán)狀的，或者是芳基。術(shù)語烴還包括其中被任選取代的這些基團。如果該烴為其上具有(一個或多個)取代基的支鏈結(jié)構(gòu)，則取代可以發(fā)生在烴骨架或側(cè)鏈上；或者取代可以發(fā)生在烴骨架和側(cè)鏈上。
優(yōu)選D，E和F獨立地選自C1-C10烴基，C1-C5烴基或C1-C3烴基。
優(yōu)選D，E和F獨立地選自烴基團，優(yōu)選C1-C10烴，C1-C5烴或C1-C3烴。
優(yōu)選D，E和F獨立地選自烷基類，C1-C10烷基，C1-C5烷基或C1-C3烷基。
D，E和F的烴基/烴/烷基可以是直鏈或支鏈的，和/或可以是飽和或不飽和的。
在一個優(yōu)選方面中，D，E和F獨立地選自基團中含至少一個雜原子的直鏈或支鏈的烴基團。
在優(yōu)選的方面中，D，E和F獨立地選自烴基團和下式基團
其中為1-6，且Y＝O，S或CH2。
在優(yōu)選的方面中，D，E和F獨立地選自具有1-6個碳原子碳鏈的直鏈或支鏈烴基團和下式基團
其中n為1-6，且Y＝O，S或CH2。
在一個優(yōu)選方面中，任選連接基D，E和F中僅有一個存在。應(yīng)當(dāng)理解，僅有一個是指這些連接基中有一個存在，而其它任選連接基不存在。
在一個優(yōu)選方面中，E(優(yōu)選D和/或F)選自含至少兩個碳原子或其中碳原子與雜原子的總數(shù)至少為2的烴基。
在一個優(yōu)選方面中，E(優(yōu)選D和/或F)選自其中含至少一個雜原子的烴基。優(yōu)選雜原子選自硫、氮和氧。
在一個優(yōu)選方面中，E(優(yōu)選D和/或F)選自其中含至少一個雜原子的直鏈或支鏈烴基團。優(yōu)選雜原子選自硫、氮和氧。
在一個優(yōu)選方面中，E(優(yōu)選D和/或F)選自包含至少2個碳原子的烴基團和下式基團
其中n為1-6，且Y＝氧，硫或CH2。
在一個優(yōu)選方面中，E(優(yōu)選D和/或F)選自具有2-6個碳原子之碳鏈的直鏈或支鏈烴基團和下式基團
其中n為1-6，且Y＝氧，硫或CH2。
在一個優(yōu)選方面中，E(優(yōu)選D和/或F)選自其中含至少一個雜原子的直鏈或支鏈烷基，優(yōu)選C1-10烷基，更優(yōu)選C1-5烷基。優(yōu)選雜原子選自硫、氮和氧。
在一個優(yōu)選方面中，E(優(yōu)選D和/或F)選自其中含至少一個雜原子的直鏈烷基，優(yōu)選C1-10烷基，更優(yōu)選C1-5烷基。優(yōu)選雜原子選自硫、氮和氧。
當(dāng)E(或D和/或F)包含雜原子時，優(yōu)選所述雜原子連接在環(huán)Q上(在D和F的情形下連接在D或R上)。
在高度優(yōu)選的方面中，本發(fā)明化合物為下式化合物
在高度優(yōu)選的方面中，本發(fā)明化合物為下式化合物
環(huán)-P，Q和R 本發(fā)明化合物包括兩個或三個環(huán)狀系統(tǒng)，它們各自直接或通過連接基D，E或F與Z連接。對于P、Q和R中的每一個，所述環(huán)狀系統(tǒng)不必是環(huán)狀結(jié)構(gòu)。關(guān)于這一點，所述環(huán)狀系統(tǒng)可以是具有在體內(nèi)形形成環(huán)樣結(jié)構(gòu)之能力的直線型結(jié)構(gòu)。但在優(yōu)選的方面中，各環(huán)狀系統(tǒng)為環(huán)狀結(jié)構(gòu)。
在優(yōu)選的方面中，P，Q和R獨立地選自環(huán)狀基團。
環(huán)狀基團P、Q和R中至少一個可以是雜環(huán)基(雜環(huán))或非雜環(huán)基。雜環(huán)基的適宜雜原子包括N，S和Q。
環(huán)狀基團P，Q和R中至少一個可以是包含碳和任選一個或多個雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)。
在優(yōu)選的方面中，P、Q和R中至少一個，或者P、Q和R獨立地選自包括碳和任選一個、兩個或三個雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)。優(yōu)選P、Q和R中至少一個，或者P、Q和R獨立地選自包括碳和一個或多個雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)。
當(dāng)環(huán)狀系統(tǒng)中存在雜原子形成雜環(huán)基時，所存在的雜原子可以是任何數(shù)量。在一個優(yōu)選方面中，P、Q和R至少一個，或者P、Q和R獨立地選自包含碳和一個或多個選自N、S和O雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)。
當(dāng)P、Q和R之一為雜環(huán)基時，P、Q和R中的其它兩個可以是雜環(huán)基或非雜環(huán)基。在優(yōu)選方面中，P、Q和R之一為包含碳和一個或多個雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)，且P、Q和R中的其它兩個獨立地為碳環(huán)環(huán)系。應(yīng)當(dāng)理解，“碳環(huán)”是指這種環(huán)狀系統(tǒng)，其中所述環(huán)僅包含碳原子以及環(huán)上的任選取代基。在該方面中，優(yōu)選P、Q和R之一為包含碳和一個或多個選自N、S和O雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)，且P、Q和R中的其它兩個獨立地為碳環(huán)環(huán)系。
在本發(fā)明的一個方面中，P、Q和R中至少一個，或者P、Q和R獨立地選自飽和環(huán)狀結(jié)構(gòu)或不飽和環(huán)狀結(jié)構(gòu)(例如芳基)。
在本發(fā)明的一個方面中，P、Q和R中至少一個，或者P、Q和R獨立地選自飽和環(huán)狀結(jié)構(gòu)，例如環(huán)烷基。
優(yōu)選P、Q和R中至少一個為芳環(huán)。
在本發(fā)明的一個方面中，P、Q和R中至少一個，或者P、Q和R獨立地選自取代或未取代的芳環(huán)。
在本發(fā)明的一個方面中，P、Q和R中至少一個是或包括取代或未取代的芳環(huán)。
在一個方面中，P、Q和R中至少一個可以是多環(huán)基團，但不是必須為稠合多環(huán)。術(shù)語“多環(huán)”包括稠合和非稠合環(huán)狀結(jié)構(gòu)(包括其結(jié)合在內(nèi))。如果P、Q和R的環(huán)狀系統(tǒng)為多環(huán)，該環(huán)狀系統(tǒng)環(huán)組成中的一些或全部可以一起稠合，或者經(jīng)一個或多個適當(dāng)間隔基連接。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以選擇P、Q和R的環(huán)大小可以獲得具有需要活性的化合物。典型的P、Q和R獨立地為含3-10個環(huán)原子的環(huán)狀系統(tǒng)，例如含5、6或7個環(huán)原子的環(huán)狀系統(tǒng)。
本發(fā)明使用的雜環(huán)環(huán)系包括咪唑，四唑，吡唑，三唑，譬如1H-1，2，3-三唑，1H-1，2，4-三唑，4H-1，2，4-三唑；任選取代的含1-3個各自選自N、O和S的雜原子的5-或6-元雜環(huán)基，任選取代的芳基(單環(huán)或多環(huán)芳基)，噠嗪，嘧啶，三嗪如1，3，5-三嗪以及任選取代的二環(huán)稠合雜環(huán)基，這種雜環(huán)基由與苯稠合的上述雜環(huán)基組成。
在高度優(yōu)選的方面中，P、Q和R中至少一個，或者P、Q和R獨立選自三唑，特別是1H-1，2，3-三唑，1H-1，2，4-三唑，4H-1，2，4-三唑。
在高度優(yōu)選的方面中，P、Q和R中至少一個為4H-1，2，4-三唑。
在高度優(yōu)選的方面中，P、Q和R中至少一個為三唑，特別是1H-1，2，3-三唑，1H-1，2，4-三唑，4H-1，2，4-三唑，且其它的P、Q和R為取代或未取代的芐基環(huán)。
在高度優(yōu)選的方面中，P、Q和R中至少一個為4H-1，2，4-三唑，且其它的P、Q和R為取代或未取代的芐基環(huán)。
在上述各方面中，所述三唑可經(jīng)由三唑環(huán)中的C或三唑環(huán)中的N與X連接。在一個方面中，三唑經(jīng)由三唑環(huán)中C與X連接。
在優(yōu)選的方面中，P為包含碳和一個或多個雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)，且Q和R(如果存在的話)獨立為碳環(huán)環(huán)系。
在優(yōu)選的方面中，P為包含碳和一個或多個選自N、S和O的雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)，且Q和R(如果存在的話)獨立地為碳環(huán)環(huán)系。
在優(yōu)選的方面中，Q和R，如果存在的話，獨立地為碳環(huán)環(huán)系，且P為選自以下的環(huán)狀系統(tǒng)咪唑，四唑，吡唑，三唑，例如1H-1，2，3-三唑、1H-1，2，4-三唑、4H-1，2，4-三唑；任選取代的含1-3個各自選自N、O和S的雜原子的5-或6-元雜環(huán)基，任選取代的芳基(單環(huán)或多環(huán)芳基)，噠嗪，嘧啶，三嗪如1，3，5-三嗪，以及任選取代的由上述雜環(huán)基與苯稠合組成的二環(huán)稠合雜環(huán)基。
在優(yōu)選的方面中，Q和R，如果存在的話，獨立地為碳環(huán)環(huán)系，且P為選自三唑，特別是1H-1，2，3-三唑，1H-1，2，4-三唑，4H-1，2，4-三唑的環(huán)狀系統(tǒng)。
在優(yōu)選的方面中，Q和R，如果存在的話，獨立地為碳環(huán)環(huán)系，且P為4H-1，2，4-三唑。
在優(yōu)選的方面中，P為包含碳和一個或多個雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)，且Q和R，如果存在的話，獨立地為任選取代的芐基環(huán)。
在優(yōu)選的方面中，P為包含碳和一個或多個選自N、S和O的雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)，且Q和R(如果存在的話)獨立地為任選取代的芐基環(huán)。
在優(yōu)選的方面中，Q和R，如果存在的話，獨立地為任選取代的芐基環(huán)，且P為選自以下的環(huán)狀系統(tǒng)咪唑，四唑，吡唑，三唑，例如1H-1，2，3-三唑、1H-1，2，4-三唑、4H-1，2，4-三唑；任選取代的含1-3個各自選自N、O和S的雜原子的5-或6-元雜環(huán)基，任選取代的芳基(單環(huán)或多環(huán)芳基)，噠嗪，嘧啶，三嗪如1，3，5-三嗪，以及任選取代的由上述雜環(huán)基與苯稠合組成的二環(huán)稠合雜環(huán)基。
在優(yōu)選的方面中，Q和R，如果存在的話，獨立地為任選取代的芐基環(huán)，且P為選自三唑，特別是1H-1，2，3-三唑，1H-1，2，4-三唑，4H-1，2，4-三唑的環(huán)狀系統(tǒng)。
在優(yōu)選的方面中，Q和R，如果存在的話，獨立地為任選取代的芐基環(huán)，且P為4H-1，2，4-三唑。
環(huán)狀系統(tǒng)P、Q和R可以被一個或多個取代基所取代。優(yōu)選的取代基(所需氨基磺酸酯基除外)包括烴基，氧烴基(oxyhydrocarbyl)，鹵素和氰基(-C≡N)基團。環(huán)狀系統(tǒng)P、Q和R也可以被一個或多個選自膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基和磺酰胺基的取代基取代。
這里使用的術(shù)語“氧烴基”是指至少含有C、H和O并任選包含一個或多個其它適宜取代基的基團。此類取代基的實例可以包括鹵素、烷氧基、硝基、烷基、環(huán)狀基團等。除取代基是環(huán)狀基團的情形之外，取代基相互結(jié)合可以形形成環(huán)狀基團。如果氧烴基含有一個以上的C，則這些碳不一定是彼此連接的。例如，至少兩個碳原子可以通過適宜的元素或基團連接。因此，氧烴基可包含雜原子。適宜的雜原子對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的，并且包括例如硫和氮和氧。
在本發(fā)明的一個實施方案中，氧烴基可以是氧烴(oxyhydrocarbongroup)基團。
這里，術(shù)語“氧烴”是指烷氧基、鏈烯氧基、炔氧基中的任何一種，這些基團可以是直鏈、支鏈或環(huán)狀的，或者是芳氧基。術(shù)語氧烴還包括任選被取代的這些基團。如果所述氧烴為其上具有(一個或多個)取代基的支鏈結(jié)構(gòu)，則取代可以發(fā)生在烴骨架或側(cè)鏈上；或者取代可以發(fā)生在烴骨架和側(cè)鏈上。
一般來講，氧烴基具有式C1-6O(如C1-3O)。
優(yōu)選Q被一個或多個鹵原子取代。優(yōu)選鹵原子位于氨基磺酸酯基的鄰位上。
優(yōu)選R(特別是當(dāng)其為碳環(huán)基的情形下)被氰基(-C≡N)取代。
進(jìn)一步優(yōu)選的化合物 在一個優(yōu)選方面中，本發(fā)明化合物為式II化合物

式II 其中各T獨立選自H，烴基，-F-R’，和與D、E、P或Q之一形成的鍵，或者與P和Q之一一起形成環(huán)；Z為適當(dāng)原子，其化合價為m；當(dāng)Z為氮時，E為非CH2和C＝O的任選連接基；P、Q、R和R’各自獨立為環(huán)狀系統(tǒng)；且Q包含氨基磺酸酯基。
在一個優(yōu)選方面中，本發(fā)明的化合物為式III化合物

式III 其中D、E和F各自獨立地為任選連接基，其中E不能為CH2和C＝O；P、Q和R各自獨立地為環(huán)狀系統(tǒng)；并且至少Q(mào)包含氨基磺酸酯基。
在一個優(yōu)選方面中，本發(fā)明的化合物為式IIIa化合物

式IIIa 其中E和F各自獨立地為任選連接基，其中E不能為CH2和C＝O；P、Q和R彼此獨立地為環(huán)狀系統(tǒng)；并且至少Q(mào)包含氨基磺酸酯基。
在一個優(yōu)選方面中，本發(fā)明化合物為式IIIb化合物

式IIIb 其中E為任選連接基，但其中E不能為CH2和C＝O；P、Q和R彼此獨立地為環(huán)狀系統(tǒng)；并且至少Q(mào)包含氨基磺酸酯基。
在一個優(yōu)選方面中，本發(fā)明化合物為式IIIc化合物

式IIIc 其中E為連接基，但其中E不能為CH2和C＝O；P、Q和R彼此獨立地為環(huán)狀系統(tǒng)；并且至少Q(mào)包含氨基磺酸酯基。
在一個優(yōu)選方面中，本發(fā)明化合物為式IIId化合物

式IIId 其中E為直鏈或支鏈含至少兩個碳原子或至少一個雜原子的烴基團(優(yōu)選C1-C10烴基團)，P、Q和R彼此獨立地為環(huán)狀系統(tǒng)；并且至少Q(mào)包含氨基磺酸酯基。
在一個優(yōu)選方面中，本發(fā)明化合物為式IV化合物

式IV 其中D、E和F各自獨立為任選連接基，P、Q和R彼此獨立地為環(huán)狀系統(tǒng)；并且至少Q(mào)包含氨基磺酸酯基。
在一個優(yōu)選方面中，本發(fā)明化合物為式IVa化合物

式IVa 其中E和F各自獨立為任選連接基，P、Q和R彼此獨立地為環(huán)狀系統(tǒng)；并且至少Q(mào)包含氨基磺酸酯基。
在一個優(yōu)選方面中，本發(fā)明化合物為式IVb化合物

式IVb 其中E為任選連接基，P、Q和R彼此獨立地為環(huán)狀系統(tǒng)；并且至少Q(mào)包含氨基磺酸酯基。
在一個優(yōu)選方面中，本發(fā)明化合物為式IVc化合物

式IVc 其中P、Q和R彼此獨立地為環(huán)狀系統(tǒng)；并且至少Q(mào)包含氨基磺酸酯基。
在式II、III、IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IV、IVa、IVb、IVc中，優(yōu)選P、Q和R之一為包含碳和一個或多個雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)，且P、Q和R中的其余兩個獨立選自碳環(huán)環(huán)系。
在式II、III、IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IV、IVa、IVb、IVc中，優(yōu)選P、Q和R之一為包含碳和一個或多個選自氮、硫和氧之雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)，且P、Q和R中的其余兩個獨立選自碳環(huán)環(huán)系。
在式II、III、IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IV、IVa、Ivb和IVc中，優(yōu)選P、Q和R之一為4H-1，2，4-三唑，且P、Q和R中的其余兩個獨立選自取代或未取代的芐基環(huán)。
在一個優(yōu)選方面中，本發(fā)明化合物為式V化合物

式V 其中D和E各自獨立地為任選連接基，P和Q各自獨立為環(huán)狀系統(tǒng)；且至少Q(mào)包含氨基磺酸酯基。
在一個優(yōu)選方面中，本發(fā)明化合物為式Va化合物

式Va 其中E各自獨立地為任選連接基，P和Q各自獨立為環(huán)狀系統(tǒng)；且至少Q(mào)包含氨基磺酸酯基。
在一個優(yōu)選方面中，本發(fā)明化合物為式Vb化合物

式Vb 其中P和Q各自獨立為環(huán)狀系統(tǒng)；且至少Q(mào)包含氨基磺酸酯基。
在式V、Va和Vb中，優(yōu)選P和Q之一為包含碳和一個或多個雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)，且P和Q中的另一個為碳環(huán)環(huán)系。
在式V、Va和Vb中，優(yōu)選P和Q之一為包含碳和一個或多個選自氮、硫和氧的雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)，且P和Q中的另一個為碳環(huán)環(huán)系。
在式V、Va和Vb中，優(yōu)選P和Q之一為4H-1，2，4-三唑，且P和Q中的另一個為取代或未取代芐基環(huán)。
在特別優(yōu)選的方面中，本發(fā)明化合物為式VI化合物

式VI 其中每個T獨立選自H，烴基，與D、E、P或Q之一形成的鍵以及-R，或者與P和Q之一一起形成環(huán)，并且其中m為Z的化合價；E為任選連接基；其中P、Q和R各自獨立為環(huán)狀系統(tǒng)；并且Q包含氨基磺酸酯基。
本發(fā)明高度優(yōu)選的化合物為選自以下各式的化合物
4-[1，2，4]三唑-1-基甲基苯酚(LWO02015A，STX269)STX269
氨基磺酸4-[1，2，4]三唑-1-基甲基苯基酯(LWO02017A，STX270)STX270
4-[(4-羥基芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]芐腈(LWO02030，STX265) STX265
氨基磺酸4-{[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]甲基}苯基酯(LWO02031，STX258) STX258
4-{[2-(4-羥基苯基)乙基]-[1，2，4]三唑-4-基-氨基}苯腈(LWO02063，STX290) STX290
氨基磺酸4-{2-[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]乙基}苯基酯(LWO02066，STX273) STX273
4-{[2-(4-羥基苯氧基)乙基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈(LWO02076，STX291) STX291
氨基磺酸4-{2-[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]乙氧基}苯基酯(LWO02077，STX292) STX292
4-{[4-(4-羥基苯氧基)丁基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈(LWO02067，STX287)
氨基磺酸4-{4-[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]丁氧基}苯基酯
4-{[2-(3-溴-4-羥基苯氧基)乙基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈(STX300)
氨基磺酸2-溴-4-{2-[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]乙氧基}苯基酯(STX301)
4-[(6-羥基-萘-2-基甲基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]芐腈(JRL01012，STX335)
氨基磺酸6-{[(4-氰基-苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]-甲基}萘-2-基酯(JRL01014，STX336)
4-[(3-羥基芐基)(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(OBS01022，STX333)
4-[(3-O-氨基磺?；S基)(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(OBS01030，STX334)
4-[(3，4-雙(羥基芐基)(4-氰基芐基)氨基)-4H-[1，2，4]三唑(OBS01067，STX355)
4-[(3-羥基-4-甲氧基芐基)(4-氰基苯基)氨基-4H-[1，2，4]三唑(OBS01076，STX362)
4-[(4-甲氧基-3-O-氨基磺?；S基)(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(OBS01135，STX660)
4-[(3-羥基-4-甲氧基芐基)(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(OBS01080，STX363)
4-[(4-甲氧基-3-O-氨基磺?；S基)(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(OBS01137，STX661)
4-[(3-溴-4-羥基芐基)(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(OBS01132，STX405)
4-[(3-溴-4-O-氨基磺?；S基)(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(OBS01141，STX681)
4-{[2-(4-羥基-苯硫基)-乙基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}-芐腈(CAB02137，STX456)
4-{[2-(3-羥基-苯硫基)-乙基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}-芐腈(CAB02149，STX512)
4-{[3-(4-羥基苯硫基)-丙基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈(CAB0182，STX596)
氨基磺酸4-{3-[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]-丙硫基}-苯基酯(CAB02184，STX597)
4-{[5-(4-羥基苯硫基)-戊基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈(CAB03104，STX698)
氨基磺酸4-{5-[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]-戊硫基}-苯基酯(CAB03025，STX699)
4-{[10-(4-羥基苯硫基)-癸基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈(CAB03011，STX625)
氨基磺酸-4-{10-[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]-癸硫基}-苯基酯(CAB03012，STX655)
4-[(3，5-二氯-4-羥基芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]芐腈(CAB02120，STX435)
4-[(3-氯-4-羥基-芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]-芐腈(CAB02130，STX447)
氨基磺酸-2-氯-4-{[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]-甲基}-苯基酯
4-[(4-氯-3-羥基芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]芐腈(CAB02141，STX483)
氨基磺酸-2-氯-5-{[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]-甲基}-苯基酯(CAB02176，STX559)
4-[(3-氯-4-羥基-5-甲氧基-芐基)-芐基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈(CAB02179，STX600)
氨基磺酸-2-氯-4-{[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]-甲基}-6-甲氧基-苯基酯(CAB02181，STX601)
4-[(3-氟-4-羥基芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]芐腈(CAB03020，STX696)
氨基磺-4-{[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]-甲基}-2-氟-苯基酯(CAB03021，STX700)
4-[(4-氟-3-羥基芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]芐腈(CAB02154，STX488)
4-[(4-羥基-3-三氟甲基-芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]芐腈(CAB03059，STX781)

1-[雙-(4-羥基苯基)甲基]-1H-[1，2，4]三唑(LWO02020，STX267)
1-[雙-(4-氨基磺酰氧基苯基)]-1H-[1，2，4]三唑(LWO02021，STX268)
1-[雙-(3-溴-4-羥基苯基)甲基]-1H-[1，2，4]三唑(JEL01105，STX356)
1-[雙-(3-溴-4-氨基磺酰氧基苯基)甲基]-1H-[1，2，4]三唑(JRL01109，STX566)
X＝H，F(xiàn)，Cl，Br，I，CNA＝二環(huán)環(huán)或二二環(huán)雜環(huán)
進(jìn)一步的方面 在本發(fā)明的進(jìn)一步方面中，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)可以提供下面的式I化合物

式I 其中每個T獨立選自H，烴基，-F-R，和與D、E、P或Q之一形成的鍵，或者與P和Q之一一起形成環(huán)；Z為適當(dāng)原子，其化合價為m；D，E和F各自獨立為任選連接基，P、Q和R各自獨立為環(huán)狀系統(tǒng)；并且至少在P、Q和Q上包含氨基磺酸酯基，其中當(dāng)Z為N時(當(dāng)Z不為N時，這種情況任選)，氨基磺酸酯基具有下式 (R4)(R5)N-S(O)(O)-O- 其中R4和R5獨立選自烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、?；头蓟?，或其組合，或一起表示亞烷基，其中所有或各烷基或環(huán)烷基或鏈烯基或芳基任選含有一個或多個雜原子或基團。優(yōu)選R4和R5獨立選自烷基，例如C1-10烷基，C1-5烷基，甲基和乙基。優(yōu)選R4和R5均為乙基。
在本發(fā)明的進(jìn)一步方面中，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)可以提供下面的式I化合物

式I 其中每個T獨立選自H，烴基，-F-R，和與D、E、P或Q之一形成的鍵，或者與P和Q之一一起形成環(huán)；Z為適當(dāng)原子，其化合價為m；D，E和F各自獨立為任選連接基，P、Q和R各自獨立為環(huán)狀系統(tǒng)；并且至少在P、Q和Q上包含氨基磺酸酯基，其中當(dāng)Z為N時(當(dāng)Z不為N時，這種情況任選)，R被鹵素取代。
氨基磺酸酯基 本發(fā)明化合物中至少Q(mào)包含氨基磺酸酯基。
對于本發(fā)明一些化合物，高度優(yōu)選所述化合物包含至少兩個或多個氨基磺酸酯基。
對于本發(fā)明一些化合物，高度優(yōu)選這些化合物包含至少兩個氨基磺酸酯基，其中所述氨基磺酸酯基不在同一環(huán)上。
對于一些應(yīng)用，優(yōu)選這些化合物沒有或具有最低的雌激素作用。
對于一些應(yīng)用，優(yōu)選這些化合物具有雌激素作用。
對于一些應(yīng)用，優(yōu)選這些化合物具有可逆作用。
對于一些應(yīng)用，優(yōu)選這些化合物具有不可逆作用。
在一個實施方案中，本發(fā)明化合物可用于治療乳腺癌。
本發(fā)明還包括用于制備本發(fā)明化合物的新中間體。例如，本發(fā)明包括這些化合物的新穎醇前體。作為進(jìn)一步的實例，本發(fā)明包括這些化合物的雙保護前體。本文介紹了這些前體的每一種實例。本發(fā)明還包括用于合成本發(fā)明化合物的方法(其中包括每一種或這兩種這些前體)。
甾體硫酸酯酶 甾體硫酸酯酶，有時稱為甾類硫酸酯酶或甾基硫酸酯酶(sterylsulphatase)或簡稱“STS”，能水解一些硫酸化的甾類化合物，例如硫酸雌酮，硫酸脫氫表雄酮和硫酸膽甾醇酯。已經(jīng)指定STS的酶編號為EC3.1.6.2。
STS已被克隆和表達(dá)。例如參見Stein等(J.Biol.Chem.26413865-13872(1989))和Yen等(Cell 49443-454(1987))。
STS是一種與大量疾患有關(guān)的酶。
例如，研究人員已經(jīng)發(fā)現(xiàn)STS的完全缺乏將導(dǎo)致鱗癬。根據(jù)一些研究人員報道，STS的缺乏在日本相當(dāng)普遍。這些研究人員(Sakura等，J Inherit Metab Dis 1997 Nov；20(6)807-10)還報道過敏性疾病-譬如支氣管哮喘、過敏性鼻炎、或特應(yīng)性皮炎-可能與甾體硫酸酯酶缺乏有關(guān)。
除了由STS活性的完全缺乏導(dǎo)致的疾病外，STS活性水平升高也可能帶來疾病。例如并且如上所述，有強有力的證據(jù)支持STS在乳腺癌生長和轉(zhuǎn)移中的作用。
STS還累及其它疾病。例如，Le Roy等(Behav Genet 1999 Mar；29(2)131-6)已經(jīng)確定甾體硫酸酯酶濃度與小鼠攻擊性行為發(fā)作之間可能存在遺傳關(guān)系。這些作者推斷甾類的硫酸酯化可能是復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)(包括在誘變攻擊中涉及的基因)的主要原動力。
STS抑制作用 據(jù)信與STS活性有關(guān)的一些疾病是由于無活性的硫酸化雌酮向有活性的非硫酸化雌酮的轉(zhuǎn)變所致。在與STS活性有關(guān)的疾病中，需要抑制STS活性。
這里，術(shù)語“抑制”包括降低和/或消除和/或掩蔽和/或防止STS的有害作用。
STS抑制劑 按照本發(fā)明，本發(fā)明化合物能夠用作STS抑制劑。
這里，就本發(fā)明化合物而言，所用術(shù)語“抑制劑”是指能抑制STS活性的化合物，例如能降低和/或消除和/或掩蔽和/或防止STS的有害作用的化合物。STS抑制劑可起拮抗劑的作用。
化合物抑制雌酮硫酸酯酶活性的能力可以用完整JEG3絨毛膜癌細(xì)胞或胎盤微粒體評價。此外，也可以使用動物模型。適宜評價方案的詳細(xì)內(nèi)容在后面章節(jié)中給出。應(yīng)當(dāng)指出的是，也可以使用其它檢測方法來測定STS的活性和這樣的STS抑制作用。例如，也可以參考WO-A-99/50453的教導(dǎo)。
在一個方面中，對于一些應(yīng)用，本發(fā)明化合物進(jìn)一步用這種特征表征，即如果氨基磺酸酯基被硫酸基取代生成硫酸酯衍生物，則當(dāng)用甾體硫酸酯酶EC 3.1.6.2在pH7.4和37℃孵育時，該硫酸酯衍生物將會被具有甾體硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)活性的酶水解。
在一個優(yōu)選實施方案中，如果本發(fā)明化合物的氨基磺酸基被硫酸基取代以形成硫酸酯化合物，則當(dāng)與甾體硫酸酯酶EC 3.1.6.2在pH7.4和37℃一起孵育時，該硫酸酯化合物會被具有甾體硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)活性的酶水解，產(chǎn)生低于200毫摩爾，優(yōu)選低于150毫摩爾，優(yōu)選低于100毫摩爾，優(yōu)選低于75毫摩爾，優(yōu)選低于50毫摩爾的Km值。
在優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明化合物不會被具有甾體硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)活性的酶水解。
對于一些應(yīng)用，優(yōu)選的是，本發(fā)明化合物對需要靶(例如STS和/或芳香化酶)具有至少約100倍的選擇性，優(yōu)選對需要靶具有至少約150倍的選擇性，優(yōu)選對需要靶具有至少約200倍的選擇性，優(yōu)選對需要靶具有至少約250倍的選擇性，優(yōu)選對需要靶具有至少約300倍的選擇性，優(yōu)選對需要靶具有至少約350倍的選擇性。
應(yīng)當(dāng)指出的是，本發(fā)明的化合物除了或者代替其抑制STS和/或芳香化酶活性的能力外還可能具有其它有利性質(zhì)。
氨基磺酸基 本文使用的術(shù)語“氨基磺酸基”包括氨基磺酸的酯，或氨基磺酸的N-取代衍生物的酯，或其鹽。
如果R3為氨基磺酸基，則本發(fā)明化合物稱為氨基磺酸酯化合物。
典型地，氨基磺酸基具有下式 (R4)(R5)N-S(O)(O)-O- 其中優(yōu)選R4和R5獨立選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、酰基和芳基，或其組合，或一起表示亞烷基，其中所有或各烷基或環(huán)烷基或鏈烯基或芳基任選含有一個或多個雜原子或基團。
當(dāng)被取代時，本發(fā)明的N-取代化合物可以包含一個或兩個N-烷基、N-鏈烯基、N-環(huán)烷基或N-芳基的取代基，優(yōu)選含有或各自含有最多10個碳原子。當(dāng)R4和/或R5為烷基時，優(yōu)選其中R4和R5各自獨立地選自含有1-6個碳原子的低級烷基基團，即甲基、乙基、丙基等。R4和R5可以都是甲基。當(dāng)R4和/或R5為芳基時，典型地為苯基和甲苯基(PhCH3；o)。當(dāng)R4和R5代表環(huán)烷基時，典型地為環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基等、當(dāng)R4和R5結(jié)合到一起時，典型地代表鏈長4-6個碳原子的亞烷基，其中任選被一個或多個雜原子或基團間隔，例如用于提供5元雜環(huán)，譬如嗎啉代、1-吡咯烷基或哌啶子基。
在烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、酰基和芳基的含義內(nèi)，包括其中包含一個或多個不干擾所述化合物的硫酸酯酶抑制活性的基團作為取代基的被取代基團。代表性的非干擾性取代基包括羥基、氨基、鹵素、烷氧基、烷基和芳基。
在一些實施方案中，氨基磺酸基可以通過與基團X中或上的一個或多個原子稠合(或相結(jié)合)形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)。
在一些實施方案中，可以存在多于一個的氨基磺酸基。例如，可以存在兩個氨基磺酸基(即雙-氨基磺酸酯化合物)。
在一些優(yōu)選實施方案中，R4和R5中至少一個是H。
在一些進(jìn)一步優(yōu)選實施方案中，R4和R5各自為H。
膦酸基 如果本發(fā)明化合物包含膦酸基，則本發(fā)明化合物稱為膦酸酯化合物。
一般來講，膦酸基具有下式 (R6)-P(O)(OH)-O- 其中優(yōu)選R6為H，烷基，環(huán)烷基，鏈烯基，?；蚍蓟?，或其組合，其中所有或各烷基或環(huán)烷基或鏈烯基或芳基任選含有一個或多個雜原子或基團。
當(dāng)被取代時，本發(fā)明的N-取代化合物可以包含一個或兩個N-烷基、N-鏈烯基、N-環(huán)烷基或N-芳基取代基，優(yōu)選含有或各自含有最多10個碳原子。當(dāng)R6為烷基時，R6可以是含有1-6個碳原子的低級烷基，即甲基、乙基、丙基等。例如，R6可以是甲基。當(dāng)R6為芳基時，典型地為苯基和甲苯基(PhCH3；o)。當(dāng)R6代表環(huán)烷基時，典型地為環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。R6甚至可以包括能提供4-6個碳原子鏈的亞烷基，其中任選被一個或多個雜原子或基團間隔，例如用于提供5元雜環(huán)，譬如嗎啉代、1-吡咯烷基或哌啶子基。
在烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、?；头蓟暮x內(nèi)，包括其中包含一個或多個不干擾所述化合物的硫酸酯酶抑制活性的基團作為取代基的被取代基團。代表性的非干擾性取代基包括羥基、氨基、鹵素、烷氧基、烷基和芳基。
在一些實施方案中，膦酸基可以通過與基團X中或上的一個或多個原子稠合(或相結(jié)合)形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)。
在一些實施方案中，可以存在多于一個的膦酸基。例如，可以存在兩個膦酸基(即雙-膦酸酯化合物)。如果這些化合物以甾核為基礎(chǔ)，優(yōu)選第二個(或其余中的至少一個)膦酸基位于該甾核的17位上。這些基團不一定相同。
硫代膦酸基 如果本發(fā)明化合物包含硫代膦酸基，則本發(fā)明化合物稱為硫代膦酸酯化合物。
一般來講，硫代膦酸基具有下式 (R7)-P(S)(OH)-O- 其中優(yōu)選R7為H，烷基，環(huán)烷基，鏈烯基，?；蚍蓟?，或其組合，其中所有或各烷基或環(huán)烷基或鏈烯基或芳基任選含有一個或多個雜原子或基團。
當(dāng)被取代時，本發(fā)明的N-取代化合物可以包含一個或兩個N-烷基、N-鏈烯基、N-環(huán)烷基或N-芳基取代基，優(yōu)選含有或各自含有最多10個碳原子。當(dāng)R7為烷基時，R7可以是含有1-6個碳原子的低級烷基，即甲基、乙基、丙基等。例如，R7可以是甲基。當(dāng)R7為芳基時，典型地為苯基和甲苯基(PhCH3；o)。當(dāng)R7代表環(huán)烷基時，典型地為環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。R7甚至可以包括能提供4-6個碳原子鏈的亞烷基，其中任選被一個或多個雜原子或基團間隔，例如用于提供5元雜環(huán)，譬如嗎啉代、1-吡咯烷基或哌啶子基。
在烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、?；头蓟暮x內(nèi)，包括其中包含一個或多個不干擾所述化合物的硫酸酯酶抑制活性的基團作為取代基的被取代基團。代表性的非干擾性取代基包括羥基、氨基、鹵素、烷氧基、烷基和芳基。
在一些實施方案中，硫代膦酸基可以通過與基團X中或上的一個或多個原子稠合(或相結(jié)合)形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)。
在一些實施方案中，可以存在多于一個的硫代膦酸基。例如，可以存在兩個硫代膦酸基(即雙-硫代膦酸酯化合物)。如果這些化合物以甾核為基礎(chǔ)，優(yōu)選第二個(或其余中的至少一個)硫代膦酸基位于該甾核的17位上。這些基團不一定相同。
磺酸基 如果本發(fā)明化合物包含磺酸基，則本發(fā)明化合物稱為磺酸酯化合物。
一般來講，磺酸基具有下式 (R8)-S(O)(O)-O- 其中優(yōu)選R8為H，烷基，環(huán)烷基，鏈烯基，?；蚍蓟?，或其組合，其中所有或各烷基或環(huán)烷基或鏈烯基或芳基任選含有一個或多個雜原子或基團。
當(dāng)被取代時，本發(fā)明的N-取代化合物可以包含一個或兩個N-烷基、N-鏈烯基、N-環(huán)烷基或N-芳基的取代基，優(yōu)選含有或各自含有最多10個碳原子。當(dāng)R8為烷基時，R8可以是含有1-6個碳原子的低級烷基，即甲基、乙基、丙基等。例如，R8可以是甲基。當(dāng)R8為芳基時，典型地為苯基和甲苯基(PhCH3；o)。當(dāng)R8代表環(huán)烷基時，典型地為環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。R8甚至可以包括能提供4-6個碳原子鏈的亞烷基，其中任選被一個或多個雜原子或基團間隔，例如用于提供5元雜環(huán)，譬如嗎啉代、1-吡咯烷基或哌啶子基。
在烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、?；头蓟暮x內(nèi)，包括其中包含一個或多個不干擾所述化合物的硫酸酯酶抑制活性的基團作為取代基的被取代基團。代表性的非干擾性取代基包括羥基、氨基、鹵素、烷氧基、烷基和芳基。
在一些實施方案中，磺酸基可以通過與基團X中或上的一個或多個原子稠合(或相結(jié)合)形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)。
在一些實施方案中，可以存在多于一個的磺酸基。例如，可以存在兩個磺酸基(即雙-磺酸酯化合物)。如果這些化合物以甾核為基礎(chǔ)，優(yōu)選第二個(或其余中的至少一個)磺酸基位于該甾核的17位上。這些基團不一定相同。
其它取代基 本發(fā)明的化合物可以具有除式I那些取代基以外的取代基。例如，這些其它取代基可以是一個或多個以下基團一個或多個氨基磺酸基，一個或多個膦酸基，一個或多個硫代膦酸基，一個或多個磺酸基，一個或多個氨磺酰基，一個或多個鹵素，一個或多個O基團，一個或多個羥基，一個或多個氨基，一個或多個含硫的基團，一個或多個烴基-例如氧烴基。
采用癌細(xì)胞測定STS活性的試驗 (方案1) 抑制JEG3細(xì)胞中甾體硫酸酯酶活性 甾體硫酸酯酶活性在體外使用完整JEG3絨毛膜癌細(xì)胞測定。使用該細(xì)胞系來研究對人乳腺癌細(xì)胞生長的控制。它具有顯著的甾體硫酸酯酶活性(Boivin等，J.Med.Chem.，2000，434465-4478)，并且由美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)提供。
將細(xì)胞保存在極限必需培養(yǎng)基(MEM)(Flow Laboratories，Irvine，Scotland)中，其中含有20mM HEPES，5％胎牛血清，2mM谷酰胺，非必需氨基酸和0.075％碳酸氫鈉。用上述培養(yǎng)基以大約1x105細(xì)胞/燒瓶接種多至30個平行測定的25cm2組織培養(yǎng)瓶。細(xì)胞生長至80％融合，每3天換培養(yǎng)基1次。
完整的單層JEG3細(xì)胞一式三份在25cm2組織培養(yǎng)瓶中用Earle’s平衡鹽溶液(EBSS，購自ICN Flow，High Wycombe，U.K.)洗滌，37℃與5pmol(7x105dpm)在無血清MEM(2.5ml)中的[6，7-3H]雌酮-3-硫酸酯(比活性60Ci/mmol，購自New England Nuclear，Boston，Mass.，U.S.A.)以及雌酮-3-氨基磺酸酯((11種濃度0；1fM；0.01pM；0.1pM；1pM；0.01nM；0.1nM；1nM；0.01mM；0.1mM；1mM)一起溫育3-4小鼠。溫育后，冷卻各燒瓶，將培養(yǎng)基(1ml)用移液管吸入到另一試管中，其中含有[14C]雌酮(7x103dpm)(比活性97Ci/mmol，得自Amersham International Radiochemical Centre，Amersham，U.K.)。將此混合物與甲苯(5ml)一起充分搖動30秒鐘。試驗顯示通過這種處理＞90％的[14C]雌酮和＜0.1％的[3H]雌酮-3-硫酸酯從水相中除去。移出部分(2ml)有機相，蒸發(fā)，用閃爍光譜法測定殘留物中3H和14C的含量。根據(jù)所得3H的量(校正所用培養(yǎng)基和有機相的體積，并校正加入的[14C]雌酮的回收率)和底物的比活性計算發(fā)生水解的雌酮-3-硫酸酯的量。每批試驗包括培養(yǎng)由硫酸酯酶陽性人胎盤制備的微粒體(陽性對照)和不含細(xì)胞的燒瓶(用于評價底物的表觀非酶促水解)。在用Zaponin處理細(xì)胞單層后用Coulter計數(shù)器測定每燒瓶中的細(xì)胞核數(shù)量。每批中選一個燒瓶用胎盤蘭排除法(Phillips，H.J.(1973)，組織培養(yǎng)與應(yīng)用(Tissure culture and applications)[Kruse，D.F.& Patterson，M.K.編輯]；pp.406-408；AcademicPress，New York)來評價細(xì)胞膜情況和生存力。
甾體硫酸酯酶活性的結(jié)果以106個細(xì)胞在溫育期間(3-4小時)形成的總產(chǎn)物(雌酮+雌二醇)的平均值±1S.D.表示，并且對于顯示統(tǒng)計學(xué)顯著性的數(shù)值，以相對于不加雌酮-3-氨基磺酸酯培養(yǎng)物的百分降低(抑制)率表示。用不成對Student’s t-檢驗分析結(jié)果的統(tǒng)計學(xué)顯著性。
用胎盤微粒體測定STS活性的試驗 (方案2) 抑制胎盤微粒體中甾體硫酸酯酶活性 將來源于正常足月妊娠者的硫酸酯酶陽性人胎盤用剪刀徹底切碎，用冷磷酸鹽緩沖液(pH7.4，50mM)洗滌一次，然后再懸浮于冷磷酸鹽緩沖液(5ml/g組織)中。在冰中利用間隔2分鐘冷卻期的3次10秒鐘暴發(fā)集落，用Ultra-Turrax勻漿器勻漿。以2000g離心(4℃)30分鐘除去細(xì)胞核和細(xì)胞碎片，取部分(2ml)上清液貯存在20℃下。上清液的蛋白質(zhì)濃度用Bradford(Anal.Biochem.，72，248-254(1976))檢測。
用蛋白濃度為100mg/ml、底物濃度為20mM[6，7-3H]雌酮-3-硫酸酯(比活性60Ci/mmol，購自New England Nuclear，Boston，Mass.，U.S.A.)進(jìn)行培養(yǎng)(1ml)，在37℃培養(yǎng)20分鐘。如果需要，使用8種濃度的化合物0(即對照)；0.05mM；0.1mM；0.2mM；0.4mM；0.6mM；0.8mM；1.0mM.培養(yǎng)后冷卻每份樣品，用移液管將培養(yǎng)基(1ml)移到含有[14C]雌酮(7x103dpm)(比活性97Ci/mmol，購自AmershamInternational Radiochemical Centre，Amersham，U.K.)的另一管內(nèi)?；衔锱c甲苯(5ml)一起充分搖動30秒鐘。試驗顯示通過這種處理＞90％的[14C]雌酮和＜0.1％的[3H]雌酮-3-硫酸酯從水相中除去。移出部分(2ml)有機相，蒸發(fā)，通過閃爍光譜法測定殘留物中3H和14C的含量。根據(jù)獲得的3H計數(shù)(校正所用培養(yǎng)基和有機相的體積，并校正加入的[14C]雌酮的回收量)和底物的比活性計算水解的雌酮-3-硫酸酯的量。
測定STS活性的動物試驗?zāi)Ｐ? (方案3) 體內(nèi)對雌酮硫酸酯酶活性的抑制 本發(fā)明的化合物可以用動物模型研究，特別是采用卵巢切除的大鼠。在該模型中，雌激素性化合物刺激子宮的生長。
給大鼠口服本發(fā)明化合物(0.1mg/Kg/天，連續(xù)5天)，另一組動物只接受賦形劑(丙二醇)。研究結(jié)束時，采集肝臟組織樣本，如上所述(參見PCT/GB95/02638)采用3H雌酮硫酸酯作為底物評價雌酮硫酸酯酶的活性。
測定雌激素活性的動物試驗?zāi)Ｐ? (方案4) 可以采用動物模型，特別是卵巢切除的大鼠來研究本發(fā)明化合物。在該模型中，雌激素性化合物刺激子宮的生長。
給大鼠口服本發(fā)明化合物(0.1mg/Kg/天，連續(xù)5天)，另一組動物只接受賦形劑(丙二醇)。研究結(jié)束時，采集子宮并稱重，結(jié)果以子宮重量/全部體重x100表示。
對子宮生長沒有顯著作用的化合物不是雌激素性化合物。
測定STS活性的生物工程試驗 (方案5) 化合物抑制雌酮硫酸酯酶活性的能力也可以在例如高通流量篩選法中用氨基酸序列和核苷酸序列編碼STS，或其活性片斷、衍生物、同源物或變體檢測。
任何一個或多個適當(dāng)?shù)陌?，例如氨基酸序列?或核苷酸序列，可以用多種藥物篩選技術(shù)的任一種用于鑒定能夠調(diào)節(jié)STS的試劑。在這種試驗中使用的靶可以游離地存在于溶液中，固定在固體載體上，負(fù)載在細(xì)胞表面或者位于細(xì)胞內(nèi)。可以測量靶活性的消失或靶與受試試劑之間結(jié)合復(fù)合物的形成。
本發(fā)明的試驗可以是篩選試驗，其中測試大量試劑。在一個實施方案中，試驗方法可以是高流通亮篩選法。
藥物篩選技術(shù)可以是基于Geysen在歐洲專利申請84/03564(
公開日1984年9月13日)中描述的方法。概括的說，是在固體底物例如塑料針或其它一些表面上合成大量不同的小肽試驗化合物。這些肽試驗化合物與適當(dāng)靶或其片斷反應(yīng)，進(jìn)而洗滌。然后檢測結(jié)合體(例如采用本領(lǐng)域熟知的適當(dāng)改進(jìn)方法)。純化靶也可以直接包被在藥物篩選技術(shù)用的板上?；蛘?，可以使用非中和抗體來捕獲肽并將其固定在固體載體上。
本發(fā)明還會考慮使用競爭性藥物篩選試驗，其中能特異性結(jié)合靶的中和抗體與受試化合物競爭與靶結(jié)合。
對于對一些物質(zhì)具有適當(dāng)結(jié)合親和性的藥劑的高流通量篩選(HTS)提供了另一種篩選技術(shù)，其基于WO 84/03564中詳細(xì)描述的方法。
預(yù)計本發(fā)明的試驗方法適合于受試化合物的小規(guī)模和大規(guī)模篩選試驗以及定量試驗。
在一個優(yōu)選方面中，本發(fā)明涉及鑒定顯著性調(diào)節(jié)STS的試劑(即具有式(I)的化合物)的方法。
采用JEG3細(xì)胞測定芳香化酶活性的試驗 (方案6) 芳香化酶活性在JEG3絨毛膜癌細(xì)胞中測定，細(xì)胞來源于ATCC。該細(xì)胞系具有顯著的芳香化酶活性，廣泛用于研究對人芳香化酶活性的控制(Bhatnager等，J.Steroid Biochem.Molec.Biol.2001，76199-202)。將細(xì)胞保存在極限必需培養(yǎng)基(MEM，F(xiàn)lowLaboratories，Irvine，Scotland)中，其中含有20mM HEPES，10％胎牛血清，2mM谷酰胺，非必需氨基酸和0.075％碳酸氫鈉。完整單層JEG3細(xì)胞(2.5x106細(xì)胞)一式三份在25cm2組織培養(yǎng)瓶中用Earle’s平衡鹽溶液(EBSS，購自ICN Flow，High Wycombe，UK)洗滌，與[1β-3H]雄烯二酮(2-5nM，26Ci/mmol，New England Nuclear，Boston，Mass.，U.S.A.)以及10pm-10μM濃度的抑制劑一起溫育30分鐘。在芳香化酶反應(yīng)期間，釋出3H2O，后者可以用液體閃爍光譜儀(Beckman-Coulter，High Wycombe，Bucks，UK)定量。這種3H2O釋放方法已經(jīng)廣泛用于測定芳香化酶活性(Newton等，J.SteroidBiochem.1986，241033-1039)。在用Zaponin處理細(xì)胞單層后用Coulter計數(shù)器測定每燒瓶中的細(xì)胞核數(shù)量。
芳香化酶活性的結(jié)果以根據(jù)106個細(xì)胞計算的溫育期間(3-4小時)形成產(chǎn)物的平均值±1S.D.表示，并且對于顯示統(tǒng)計學(xué)顯著性的數(shù)值，以相對于不加芳香化酶抑制劑的培養(yǎng)物的百分降低(抑制)率表示。用不成對Student’s t-檢驗分析結(jié)果的統(tǒng)計學(xué)顯著性。IC50值計算為獲得50％芳香化酶活性抑制需要的抑制劑濃度 測定芳香化酶活性的動物試驗 (方案7) (i)抑制PMSG誘導(dǎo)的雌激素合成 采用妊娠母馬血清促性腺激素(PMSG)誘導(dǎo)的雌激素合成試驗體內(nèi)測試本發(fā)明化合物抑制芳香化酶活性的能力。為此，對雌性大鼠(250g)注射PMSG(200IU，s.c.)。72小時后給大鼠口服賦形劑(丙二醇)或不同劑量的試驗化合物。給用后2小時利用心臟穿刺術(shù)(麻醉下)采集血樣。測量對照組和給藥組的血漿雌二醇濃度。通過用放射免疫測定檢測血漿雌二醇濃度來測定對芳香化酶的抑制效力。該方法已廣泛用于體內(nèi)測定芳香化酶抑制劑的效力(Wouters等，J.Steroid Biochem.，1989，32781-788)。
(ii)抑制卵巢切除大鼠中雄烯二酮刺激的子宮生長 摘除雌性大鼠(250g)的卵巢，用來測定抑制芳香化酶對雄烯二酮刺激的子宮生長的影響。給藥雄烯二酮(30mg/kg/d)，連續(xù)兩周，導(dǎo)致卵巢摘除動物的子宮生長明顯增快。這種子宮生長的增快受雌激素刺激，后者是通過芳香化酶的作用由所給用的雄烯二酮轉(zhuǎn)化生成。通過共同給藥本發(fā)明化合物與雄烯二酮，稱重處理與未處理動物的子宮重量，可以測定對芳香化酶的抑制程度。
報道分子 在本發(fā)明的試驗方法(以及篩選方法)中可以使用多種報道基因，其中優(yōu)選能方便提供檢測信號(例如提供光譜法)的報道基因。例如，報道基因可以編碼能催化改變光吸收性的反應(yīng)的酶。
其它方案包括酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、放射免疫測定(RIA)和熒光激活細(xì)胞分選(FACS)。還可以使用雙位點、單克隆免疫測定法，其中使用對兩個非干擾性表位具有反應(yīng)性的單克隆抗體。例如，這些及其它測定法見Hampton R等(1990，Serological Methods，ALaboratory Manual.APS Press，St Paul MN)和Maddox DE等(1983J Exp Med 1581211)所述。
報道分子的實例包括但不限于(β-半乳糖苷酶，轉(zhuǎn)化酶，綠熒光蛋白，熒蟲素酶，氯霉素，乙?；D(zhuǎn)移酶，(-葡萄糖醛酸酶，外切葡聚糖酶和葡糖淀粉酶?；蛘撸梢詫?biāo)記的或熒光標(biāo)記物標(biāo)記的核苷酸摻入初生轉(zhuǎn)錄物中，然后當(dāng)與寡聚核苷酸探針結(jié)合時再進(jìn)行鑒定。
再如，一些公司如Pharmacia Biotech(Piscataway，NJ))，Promega(Madison，WI)，和US Biochemical Corp(Cleveland，OH)都提供商用試劑盒和檢測方法的說明書。適宜的報道分子或標(biāo)記物包括這些放射性核素，酶，熒光物質(zhì)，化學(xué)發(fā)光物質(zhì)，或發(fā)色劑，以及底物、輔因子、抑制劑、磁性顆粒等。教導(dǎo)此類標(biāo)記物的用法的專利包括US-A-3817837；US-A-3850752；US-A-3939350；US-A-3996345；US-A-4277437；US-A-4275149和US-A-4366241。
宿主細(xì)胞 術(shù)語“宿主細(xì)胞”在本發(fā)明中包括任何細(xì)胞，可以包括用于本發(fā)明試劑的靶。
因此，本發(fā)明的另一個實施方案提供了使用作為或其表達(dá)本發(fā)明的靶的多核苷酸轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞。優(yōu)選所述多核苷酸攜帶在載體上進(jìn)行多核苷酸的復(fù)制和表達(dá)，它們是靶或者表達(dá)該靶。選擇與所述載體相容的細(xì)胞，并且可以是例如原核生物(如細(xì)菌)、真菌、酵母或植物細(xì)胞。
革蘭氏陰性細(xì)菌大腸桿菌(E.coli)廣泛用作異源基因表達(dá)的宿主。但是，大量異源蛋白易于儲積在細(xì)胞內(nèi)。有時，隨后從大量大腸桿菌(E.coli)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)純化所需蛋白質(zhì)可能會很困難。
與大腸桿菌(E.coli)不同，桿菌屬(Bacillus)細(xì)菌適于作為異源宿主，這是由于它們能將蛋白質(zhì)分泌到培養(yǎng)基中。適于作為宿主的其它細(xì)菌為鏈霉均屬和假單胞菌屬的細(xì)菌。
根據(jù)編碼本發(fā)明多肽的多核苷酸的性質(zhì)，和/或進(jìn)一步加工表達(dá)蛋白的適宜性，真核生物宿主如酵母或其它真菌可能是優(yōu)選的。一般來講，酵母細(xì)胞比真菌細(xì)胞更優(yōu)選，因為它們更易處理。但是，一些蛋白質(zhì)從酵母細(xì)胞中分泌很差，或者有時不能適當(dāng)加工(例如酵母中的過度糖基化)。在這些情形下，應(yīng)選擇不同的真菌宿主生物體。
本發(fā)明范圍內(nèi)的適宜表達(dá)宿主的實例為真菌如曲霉屬種(譬如EP-A-0184438和EP-A-0284603中描述的那些)和木霉種；細(xì)菌如桿菌種(例如EP-A-0134048和EP-A-0253455中記載的那些)，鏈霉菌種和假單胞菌種；以及酵母例如克魯維氏酵母種(例如EP-A-0096430和EP-A-0301670中記載的那些)和酵母種(Saccharomyces species)。例如，典型的表達(dá)宿主可以選自黑曲霉(Aspergillus niger)，黑色曲霉(Aspergillus niger var.tubigenis)，黑色曲霉(Aspergillusniger var.awamori)，棘孢曲霉(Aspergillus aculeatis)，構(gòu)巢曲霉(Aspergillus nidulans)，米曲霉(Aspergillus orvzae)，Trichoderma reesei，枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)，地衣型芽胞桿菌(Bacillus licheniformis)，解頂風(fēng)芽胞桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)，乳克魯維氏酵母(Kluyveromyces lactis)和釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。
適宜的宿主細(xì)胞(例如酵母、真菌和植物宿主細(xì)胞)的使用，可以提供翻譯后的修飾(例如肉豆蔻?；?、糖基化、截短、投石(lapidation)和酪氨酸、絲氨酸或蘇氨酸的磷酸化)，而這可能需要它們賦予本發(fā)明重組表達(dá)產(chǎn)物最佳的生物活性。
生物體 術(shù)語“生物體”在本發(fā)明中包括任何生物體，其可以包括本發(fā)明的靶和/或由其獲得的產(chǎn)物。生物體的實例包括真菌、酵母或植物。
術(shù)語“轉(zhuǎn)基因生物體”在本發(fā)明中包括任何生物體，其包括本發(fā)明的靶和/或所獲得的產(chǎn)物。
宿主細(xì)胞/宿主生物體的轉(zhuǎn)化 如前面所述，宿主生物體可以是原核或真核生物體。適宜的原核宿主的實例包括大腸桿菌(E.Coli)和枯草芽胞桿菌(Bacillussubtilis)。有關(guān)原核宿主轉(zhuǎn)化的教導(dǎo)在本領(lǐng)域中已經(jīng)充分記載，例如參見Sambrook等(Molecular CloningA Laboratory Manual，第二版，1989，Cold Spring Harbor Laboratory Press)和Ausubel等，Current Protocols in Molecular Biology(1995)，John Wiley& Sons，Inc. 如果使用原核宿主，則轉(zhuǎn)化之前可能需要對核苷酸序列進(jìn)行適當(dāng)?shù)男揎?，如除去?nèi)含子。
在另一實施方案中，轉(zhuǎn)基因生物體可以是酵母。關(guān)于這一點，酵母也已被廣泛用作異源基因表達(dá)的載體。釀酒酵母具有悠久的工業(yè)使用歷史，包括其用于異源基因表達(dá)。Goodey等(1987，YeastBiotechnology，D R Berry等編輯，pp 401-429，Allen and Unwin，London)和King等(1989，Molecular and Cell Biology of Yeasts，E F Walton和G T Yarronton編輯，pp 107-133，Blackie，Glasgow)已對在釀酒酵母中的異源基因表達(dá)進(jìn)行了綜述。
釀酒酵母能很好地適合于異源基因表達(dá)，這存在若干原因。第一，其對于人類來說是非病原性的，且不能產(chǎn)生某些內(nèi)毒素。第二，歷經(jīng)出于不同目的的幾個世紀(jì)的商業(yè)開發(fā)后，已經(jīng)具有長久的安全使用歷史。這使其能更廣泛地被公眾接受。第三，對該生物體進(jìn)行的多方面的商業(yè)應(yīng)用和研究，使人們對其遺傳學(xué)和生理學(xué)以及對釀酒酵母的大規(guī)模發(fā)酵特性有了更充分的了解。
有關(guān)釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中異源基因表達(dá)和基因產(chǎn)物分泌的原則的綜述，見E Hinchcliffe E Kenny(1993，“作為載體用于異源基因表達(dá)的酵母”，Yeasts，Vol 5，Anthony H Rose和J Stuart Harrison編輯，第二版，Academic Press Ltd.)。
一些類型的酵母載體能夠購得，包括整合載體(考慮到它們的保存，需要與宿主基因組重組)，和自主復(fù)制質(zhì)粒載體。
為了制備轉(zhuǎn)基因釀酒酵母，通過將核苷酸序列插入到酵母中設(shè)計用于表達(dá)的構(gòu)件中來制備表達(dá)構(gòu)件。已經(jīng)開發(fā)出若干類型用于異源表達(dá)的構(gòu)件。這些構(gòu)件包含在酵母中有活性的，與核苷酸序列稠合的啟動子，通常使用酵母源起端的啟動子，如GAL1啟動子。通常使用酵母起端的信號序列，例如編碼SUC2信號肽的序列。在酵母中有活性的終止子終止表達(dá)系統(tǒng)。
對于酵母的轉(zhuǎn)化，已經(jīng)開發(fā)出若干種轉(zhuǎn)化方法。例如，本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因了解酵母可以按照下面的教導(dǎo)制備Hinnen等(1978，Proceeding of the National Academy of Science of the USA 75，1929)；Beggs，J D(1978，Nature，London，275，104)；和Ito，H等(1983，J Bacteriology 153，163-168). 使用多種選擇性標(biāo)記物來選擇轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞。其中，用于轉(zhuǎn)化的標(biāo)記物是一些營養(yǎng)缺陷的標(biāo)記物，例如LEU2，HIS4和TRP1，以及抗生素抗性標(biāo)記物，譬如氨基苷類抗生素標(biāo)記物，例如G418。
另一種宿主微生物是植物。在基因修飾植物的構(gòu)建中，其基本原則是在植物基因組中插入遺傳信息，以便獲得插入遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定保存性。已有若干技術(shù)用來插入遺傳信息，兩種主要原理是直接引入遺傳信息和利用載體系統(tǒng)引入遺傳信息。有關(guān)常規(guī)技術(shù)的綜述可見Potrykus(Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol[1991]42205-225)和Christou(Agro-Food-Industry Hi-TechMarch/April 199417-27)的論文。有關(guān)植物轉(zhuǎn)化的進(jìn)一步教導(dǎo)可參見EP-A-0449375。
因此，本發(fā)明還提供了轉(zhuǎn)化帶有作為靶或表達(dá)靶的核苷酸序列的宿主細(xì)胞的方法。用核苷酸序列轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞可以在適合于編碼蛋白表達(dá)的條件下培養(yǎng)。重組細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)可以顯現(xiàn)在細(xì)胞的表面上。如果需要，并且也是本領(lǐng)域技術(shù)人員所能理解的，包含編碼序列的表達(dá)載體可以用通過特定的原核或真核細(xì)胞膜直接分泌的信號序列進(jìn)行設(shè)計。其它重組構(gòu)件可以將此編碼序列結(jié)合到編碼多肽功能域的核苷酸序列上，該功能域有利于可溶性蛋白質(zhì)的純化(Kroll DJ等(1993)DNA Cell Biol 12441-53)。
變體/同源物/衍生物 除了本文中提及的特異性氨基酸序列和核苷酸序列外，本發(fā)明還包括其變體、同源物和衍生物。這里，術(shù)語“同源性”可以視為“相同”。
在本文中，同源序列包括至少75，85或90％相同的氨基酸序列，優(yōu)選至少95或98％相同的氨基酸序列。雖然同源性也可以認(rèn)為是相似性(即具有類似化學(xué)性質(zhì)/功能的氨基酸殘基)，但在本文中優(yōu)選以序列的一致性來表示同源性。
通過肉眼，更常見的是借助于易獲得的序列比較程序來進(jìn)行同源性比較。這些市售計算機程序可以計算兩個或多個序列之間的％同源性。
％同源性可以用相鄰的序列來計算，即一個序列與另一個序列平行排列，并且一個序列中每個氨基酸與另一個序列中的相應(yīng)氨基酸直接對比，每次一個殘基。這稱為“無縫”排列。一般來講，這種無縫排列只在相對小數(shù)目的殘基上進(jìn)行。
雖然這是一種非常簡單且一致的方法，但是其無法顧及例如序列中另外相同的對，一個插入或缺失會引起后面的氨基酸殘基超出此排列，因此，當(dāng)進(jìn)行總體排列時可能導(dǎo)致％同源性大幅度降低。因此，設(shè)計多數(shù)序列比較方法用于產(chǎn)生最佳的排列，其中考慮到了可能的插入或缺失，不會不適當(dāng)?shù)赜绊懣傮w同源性評分。通過在序列排列中插入“縫隙”以試圖將局部同源性最大化，可以達(dá)到此目的。
然而，這些更復(fù)雜的方法給在此排列中發(fā)生的各縫隙分配了“縫隙伐分”(gap penalties)，致使對于相同數(shù)目的相同氨基酸，具有盡可能少的縫隙的序列排列(在兩個對比序列之間反應(yīng)了較高的相關(guān)性)將比具有很多縫隙的序列排列具有更高的評分。通常使用“類源縫隙成本”，即對于存在縫隙賦予相對高的成本，而對于該縫隙中的各序列殘基賦予較小的罰分。這是最常用的縫隙評分體系。高的縫隙罰分當(dāng)然產(chǎn)生具有較小縫隙的最佳排列。大多數(shù)排列程序允許修改縫隙罰分。但是，當(dāng)用這樣的軟件進(jìn)行序列比較時，優(yōu)選使用缺省值。例如，當(dāng)使用GCGWisconsin Bestfit軟件包(見下文)，對于氨基酸序列缺省縫隙罰分是每個縫隙為-12，而每個擴展為-4。
因此，最大％同源性的計算首先需要產(chǎn)生最佳排列，考慮縫隙罰分。進(jìn)行這種排列的適宜計算機程序為GCG Wisconsin Bestfit軟件包(University of Wisconsin，U.S.A.；Devereux等，1984，NucleicAcids Research 12387)。可以進(jìn)行序列比較的其它軟件例如包括但不限于BLASR軟件包(見Ausubel等，1999，同上-第18章)，F(xiàn)ASTA(Atschul等，1990，J.Mol.Biol.，403-410)和比較工具GENEWORKS軟件套裝。BLASR和FASTA都提供了單機和在線檢索(殘基Ausubel等，1999，同上，第7-58至7-60頁)。但優(yōu)選使用GCG Bestfit程序。
其它可利用的參考資料見FEMS Microbiol Lett 1999年5月15日；174(2)247-50(及在FEMS Microbiol Lett 1999年8月1日；177(1)187-8刊發(fā)的勘誤表)。
雖然最終的％同源性是根據(jù)原則性檢測的，但是此排列方法本身一般不是基于全部-或-絕無成對比較(all-or-nothing paircomparison)。相反，一般使用順序相似性評分矩陣，給基于化學(xué)相似性或展開距離給每個成對比較打分。常用的這種矩陣的實例為BLOSUM62矩陣BLAST程序套裝的的缺省矩陣，GCG Wisconsin程序一般使用公共缺省值或通用符號比較表(如果給出的話)，詳見使用手冊。優(yōu)選使用GCG軟件包的公共缺省值，或者在使用其它軟件時，使用缺省矩陣，譬如BLOSUM62。
一旦軟件給出了最佳排列，就可以計算％同源性，優(yōu)選％序列一致性。這種軟件一般將此作為序列比較的一部分內(nèi)容并產(chǎn)生數(shù)字化結(jié)果。
序列還可以具有氨基酸殘基的缺失、插入或替換，這樣產(chǎn)生沉默變化并產(chǎn)生功能等同物質(zhì)。審慎的氨基酸替換可以基于這些殘基的極性、電荷、溶解性、疏水性、親水性和/或兩親性，只要該物質(zhì)的次級結(jié)合活性得以保持。例如，帶負(fù)電荷的氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸；帶正電荷的氨基酸包括賴氨酸和精氨酸；以及具有相似親水值的無電荷極性端基的氨基酸，包括亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、和酪氨酸。
例如，可以按照下表進(jìn)行保守替換。在第二欄相同組中的氨基酸，和優(yōu)選在第三欄同一行中的氨基酸可以彼此替換
表達(dá)載體 用作靶或用于表達(dá)靶的核苷酸序列可以摻入重組可復(fù)制載體內(nèi)。該載體可以用來復(fù)制和表達(dá)相容性宿主細(xì)胞中和/或來自該宿主細(xì)胞的核苷酸序列?？梢杂每刂菩蛄衼砜刂票磉_(dá)，該控制序列包括啟動子/增強子和其它表達(dá)調(diào)節(jié)信號?？梢允褂迷藛幼雍驮谠思?xì)胞中具有功能的啟動子?？梢允褂媒M織特異性或刺激特異性的啟動子。也可以使用嵌合啟動子，其中包括來自上述兩個或多個不同啟動子的序列元件。
通過核苷酸序列的表達(dá)由宿主重組細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，根據(jù)所用的序列和/或載體，可以被分泌出來或可以含于細(xì)胞內(nèi)?？梢杂眯盘栃蛄性O(shè)計編碼序列，其通過特定的原核或真核細(xì)胞膜直接分泌編碼序列的物質(zhì)。
融合蛋白 例如，為了有助于提取和純化，靶氨基酸序列可以以融合蛋白的形式產(chǎn)生。融合蛋白對的實例包括谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)，6xHis，GAL4(DNA結(jié)合和/或轉(zhuǎn)錄激活功能域)和β-半乳糖苷酶。在融合蛋白對和相關(guān)蛋白序列之間還可以適當(dāng)?shù)匕ǖ鞍姿饬呀馕稽c，以允許融合蛋白序列的除去。優(yōu)選此融合蛋白不會阻礙該靶的活性。
融合蛋白可以包括與本發(fā)明物質(zhì)稠合的抗原或抗原決定簇。在該實施方案中，融合蛋白可以是非天然存在的融合蛋白，其中包含可用作輔劑以提供對免疫系統(tǒng)一般性刺激的物質(zhì)?？梢曰蚩梢詻Q定簇可以連接在該物質(zhì)的氨基或羧基末端上。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，氨基酸序列可以與異源序列連接以編碼融合蛋白。例如，為了由肽文庫篩選能影響物質(zhì)活性的試劑，編碼表達(dá)了商購抗體可識別的異源可以表位的嵌合物質(zhì)可能是有用的。
治療 本發(fā)明化合物可用作治療劑，即用于治療應(yīng)用中。
術(shù)語“治療”包括治愈、緩解和預(yù)防作用。
治療可以針對人或動物，優(yōu)選雌性動物。
藥物組合物 在一個方面中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包括本發(fā)明的化合物和任選的可藥用載體、稀釋劑或賦形劑(包括其組合在內(nèi)). 藥物組合物可以存在于人用藥或獸用藥中供人或動物使用，并且一般含有任一種或多種可藥用稀釋劑、載體或賦形劑。治療用的可接受載體或稀釋劑是制藥領(lǐng)域公知的，且在例如Remington’sPharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.(A.R.Gennaro編輯，1985)中有記載。藥用載體、賦形劑或稀釋劑的選擇依據(jù)預(yù)定的給藥途徑和標(biāo)準(zhǔn)制藥實踐而定。作為載體、賦形劑或稀釋劑，或除此以外，藥物組合物可以含有任何適宜的一種或多種粘合劑、一種或多種潤滑劑、一種或多種懸浮劑、一種或多種包衣劑、一種或多種增溶劑。
在藥物組合物中還可以包括防腐劑、穩(wěn)定劑、染料以及甚至有矯味劑。防腐劑的實例包括苯甲酸鈉、山梨酸和對-羥基苯甲酸酯。也可以使用抗氧劑和懸浮劑。
根據(jù)不同的給藥系統(tǒng)，對組合物/制劑可能存在不同的要求。例如，本發(fā)明的藥物組合物可以配制成用微泵給藥或者通過粘膜途徑給藥，例如配制成鼻用噴霧劑或吸入性氣霧劑或可攝入溶液，或者是非腸道給藥的形式，其中該組合物配制成可注射形式，通過例如靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下途徑給藥?；蛘?，該制劑可以涉及成能通過這兩種途徑給藥的形式。
當(dāng)該制劑通過胃腸粘膜進(jìn)行粘膜給藥時，在經(jīng)過胃腸道過程中其應(yīng)能夠保持穩(wěn)定；例如，它應(yīng)能抗蛋白水解降解、在酸性pH條件下穩(wěn)定和抗膽汁的去污降解作用。
在適當(dāng)情況下，這些藥物組合物可以通過吸入給藥，以栓劑或陰道栓形式給藥，以洗劑、溶液劑、霜劑、軟膏劑或撲粉的形式局部給藥，通過使用皮膚貼劑給藥，以含有賦形劑如淀粉或乳糖的片劑形式口服給藥，或者單獨或與賦形劑混合以膠囊劑或膠丸的形式給藥，或者以含有矯味劑或著色劑的酏劑、溶液或混懸劑的形式給藥，或者它們可以通過非腸道，例如靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下途徑注射。對于非腸道給藥，組合物最后以無菌水溶液形式使用，其中可以含有其它物質(zhì)，例如使溶液與血液等滲需要的足夠量的鹽或單糖。對于經(jīng)頰或舌下給藥，這些組合物可以以片劑或錠劑的形式給藥，它們以常規(guī)方式配制。
聯(lián)用藥物 本發(fā)明的化合物可以與一種或多種活性物質(zhì)聯(lián)合使用，例如一種或多種其它藥物活性物質(zhì)。
例如，本發(fā)明化合物可以與其它STS抑制劑和/或其它抑制劑如芳香化酶抑制劑(譬如4-羥基雄烯二酮(4-OHA))和/或甾體-如天然存在的神經(jīng)甾體脫氫表雄酮硫酸酯(DHEAS)和孕烯醇酮硫酸酯(PS)和/或其它結(jié)果類似的有機化合物聯(lián)合使用。其它STS抑制劑的實例可見于上述參考文獻(xiàn)。例如，用于本發(fā)明的STS抑制劑包括EMATE，以及2-乙基和2-甲氧基17-脫氧化合物中的任一個或它們二者，這些化合物是本文所述化合物5的類似物。
此外，或者可選擇的是，本發(fā)明的化合物可以與生物反應(yīng)修飾劑聯(lián)合使用。
術(shù)語生物反應(yīng)修飾劑(“BRM”)包括細(xì)胞因子，免疫調(diào)節(jié)劑，生長因子，血細(xì)胞生成調(diào)節(jié)劑，集落刺激因子，趨化、溶血和溶解血栓因子，細(xì)胞表面受體，配體，白細(xì)胞粘附分子，單克隆抗體，預(yù)防性和治療性疫苗，激素，胞外基質(zhì)組分，纖連蛋白等。對于一些應(yīng)用，優(yōu)選的是，生物反應(yīng)修飾劑是細(xì)胞因子。細(xì)胞因子的實例包括白介素(IL)-譬如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-19；腫瘤壞死因子(TNF)，如TNF-α；α、β和γ-干擾素；TGF-β。對于一些應(yīng)用，優(yōu)選細(xì)胞因子為腫瘤壞死因子(TNF)。對于一些應(yīng)用，TNF可以是任何類型的TNF，如TNF-α，TNF-β，包括其衍生物或混合物在內(nèi)。更優(yōu)選細(xì)胞因子是TNF-α。有關(guān)TNF的教導(dǎo)可參見例如WO-A-98/08870和WO-A-98/133487。
給藥 一般來講，主治醫(yī)生會確定最適于患者個體的實際劑量，并且該劑量將隨特定患者的年齡、體重和反應(yīng)而變化。下面的劑量是平均情況下的實例。當(dāng)然，可以存在應(yīng)接受較高或更低劑量范圍的個例。
本發(fā)明的組合物可以通過直接注射給藥。這些組合物可以配制成經(jīng)非腸道、內(nèi)膜、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、眼內(nèi)或透皮給藥的形式。根據(jù)需要，藥劑可以以0.01-30mg/kg體重，例如0.1-10mg/kg、更優(yōu)選0.1-1mg/kg體重的劑量給藥。
再如，本發(fā)明的藥劑可按照每天1-4次的給藥制度給藥，優(yōu)選每天給藥一次或兩次。對于任何特定患者，具體的劑量水平和給藥頻率是可變的，這取決于多種因素，包括所用具體化合物的活性、該化合物的代謝穩(wěn)定性和作用時間的長度、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥方式與時間、排泄率、聯(lián)用藥物、特定病癥的嚴(yán)重程度以及宿主接受的療法。
除了上述典型的給藥方式外，術(shù)語“給藥”還包括通過諸如脂質(zhì)介導(dǎo)轉(zhuǎn)染、脂質(zhì)體、免疫脂質(zhì)體、脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑、陽離子表面兩親物(CFAs)及其聯(lián)合形式的技術(shù)給藥。這類轉(zhuǎn)運機制的途徑包括但不限于內(nèi)膜、鼻內(nèi)、口服、非腸道、胃腸道、局部或舌下途徑。
術(shù)語“給藥”包括但不限于通過內(nèi)膜途徑，例如，以鼻內(nèi)噴霧劑或吸入氣霧劑或者可攝入溶液的形式轉(zhuǎn)運藥物，通過注射形式給藥的非腸道途徑，例如靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下途徑轉(zhuǎn)運藥物。
因此，為了藥物給藥，本發(fā)明的STS抑制劑可以用常規(guī)藥物配制加工技術(shù)以任何適宜的方式與藥用載體、輔劑、賦形劑、修飾劑等一起配制，并且常用于非腸道給藥。根據(jù)所用化合物的活性，對于平均體重(70Kg)的患者而言，適當(dāng)?shù)挠行┝靠梢詾?-1000mg/日，例如10-900mg/日，或者甚至為100-800mg/日。對于優(yōu)選和更高活性的化合物，更常見的劑量為200-800mg/日，更優(yōu)選200-500mg/日，最優(yōu)選200-250mg/日。它們可以以單劑量方式、均分劑量方式和/或多劑量方式在持續(xù)的若干天內(nèi)給藥。對于口服給藥，它們可以配制成每單位劑量含100-500mg化合物的片劑、膠囊劑、溶液劑或混懸劑形式?；蛘?，并且也優(yōu)選將這些化合物在適宜的非腸道給藥載體中配制成能提供200-800mg，優(yōu)選200-500mg，更優(yōu)選200-250mg的單日劑量的非腸道給藥制劑。然而，這種有效日劑量隨活性成分的固有活性和患者的體重而變化，這種變化在本領(lǐng)域技術(shù)人員的知識范圍內(nèi)，并且可以由醫(yī)生加以判斷。
細(xì)胞周期化 本發(fā)明化合物可以用于治療細(xì)胞周期紊亂的方法中。
正如在“Molecular Cell Biology”，第三版，Lodish等，第177-181頁討論的那樣，不同的真核細(xì)胞可以以差別很大的速度生長與分裂。例如，酵母細(xì)胞可以每隔120分鐘分裂一次，而在海膽和昆蟲的胚細(xì)胞中受精卵的第一次分裂只需要1530分鐘，這是因為一個大的原始細(xì)胞被再分裂。但是，大多數(shù)生長植物和動物的細(xì)胞需要10-20小時使數(shù)量加倍，而一些以更慢的速度復(fù)制。成人中的很多細(xì)胞，如神經(jīng)細(xì)胞和紋狀肌細(xì)胞根本不分裂；其它細(xì)胞，如促進(jìn)傷口愈合過程中成纖維細(xì)胞按照需要生長，或者處于靜止?fàn)顟B(tài)。
再者，每個分裂的真核細(xì)胞必須準(zhǔn)備將相等的遺傳物質(zhì)賦予兩個子代細(xì)胞。真核細(xì)胞中的DNA合成不是發(fā)生于整個細(xì)胞分裂周期中，而是在細(xì)胞分裂前限于部分階段。
人們已經(jīng)在能夠生長和分裂的哺乳動物細(xì)胞的培養(yǎng)物中，徹底分析了真核細(xì)胞DNA合成與細(xì)胞分裂之間的關(guān)系。與細(xì)菌相反，人們發(fā)現(xiàn)真核細(xì)胞在DNA合成中僅用了其時間的一部分，而在細(xì)胞分裂(有絲分裂)數(shù)小時前已經(jīng)完成。因此，DNA合成后和細(xì)胞分裂前產(chǎn)生了時間間期；在分裂后與DNA合成的下個循環(huán)前發(fā)現(xiàn)了其它間期。該分析得到了以下結(jié)論真核細(xì)胞周期包括M(有絲分裂)期、G1期(第一個間期)、S(DNA合成)期、G2期(第二個間期)、并回到M。有絲分裂之間的各期(G1、S和G2期)總稱為分裂間期。
組織中許多不分裂的細(xì)胞(例如，所有的靜止成纖維細(xì)胞)在有絲分裂后、剛好進(jìn)行DNA合成前終止這種這種周期；據(jù)說這種“靜止”細(xì)胞已經(jīng)從細(xì)胞周期中退出并處于G0期。
當(dāng)它們處于細(xì)胞周期的三個分裂間期階段時，通過用熒光激活細(xì)胞分選儀檢測其相對DNA含量可以對細(xì)胞進(jìn)行鑒定處于G1(DNA合成前)的細(xì)胞具有確定量x的DNA；在S期(DNA復(fù)制)，其含量為x至2x；而當(dāng)處于G2期(或M期)時，其具有2x的DNA。
動物細(xì)胞中有絲分裂和胞質(zhì)分裂的階段如下 (a)分裂間期。分裂間期的G2期處于有絲分裂開始的臨前。染色體DNA已經(jīng)復(fù)制并在S期與蛋白質(zhì)結(jié)合，但還不能看到染色體的明顯結(jié)構(gòu)。細(xì)胞核僅為在光學(xué)顯微鏡下可看見的核亞結(jié)構(gòu)。DNA復(fù)制前在二倍體細(xì)胞中，每種類型存在兩種形態(tài)的染色體，并且該細(xì)胞被稱為2n。在G2期，在DNA復(fù)制后，細(xì)胞是4n。每個染色體DNA存在4個拷貝。由于姐妹染色體還沒有彼此分離，它們被稱為姐妹染色單體。
(b)前期的早期。中心粒，各具有新形成的子中心粒，開始向細(xì)胞相反的極移動；可以看到染色體為長絲狀。核膜開始解聚成小泡。
(c)前期的中期和晚期。完成了染色體的縮合；各個可見染色體的結(jié)構(gòu)由在其著絲點結(jié)合在一起的兩個染色單體組成。各染色單體含有兩個新復(fù)制子代DNA分子之一。微管紡錘體開始從與中心粒剛好相鄰的區(qū)域向外輻射，中心粒移動接近它們的兩極。一些紡錘絲從一個極到達(dá)另一個極；大部分移向染色單體并到達(dá)著絲點。
(d)中期。染色體移向細(xì)胞的赤道，它們在赤道面排列成行。姐妹染色單體仍未分離。
(e)后期。兩個姐妹染色單體分離為獨立的染色體。各含有一個著絲點，其通過紡錘絲與一個極相連，移向該極。因此，各染色體的一個拷貝獻(xiàn)給每個子細(xì)胞。同時，該細(xì)胞延伸，正如極與極紡錘體所為。當(dāng)分裂溝開始形成時，胞質(zhì)分裂便開始了。
(f)末期。在子核周圍形成新的膜；染色體展開并變得不太明顯，核再次變得可見，且在各子核周圍形成核膜。胞質(zhì)分裂接近完成，隨著微管和其它纖維解聚，紡錘體消失。在整個有絲分裂過程中，每個極上的“子”中心粒生長到其全長度。在末期，完成各原始中心粒的復(fù)制，而在下個分裂間期中會產(chǎn)生新的子中心粒。
(g)分裂間期.胞質(zhì)分裂完成時，細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期的G1期，并再進(jìn)行下個周期。
應(yīng)當(dāng)理解，細(xì)胞周期化是一種極其重要的細(xì)胞過程。正常細(xì)胞周期的偏差可能會引起多種疾病。增強和/或無限制的細(xì)胞周期化可能會導(dǎo)致癌癥。降低的細(xì)胞周期化可能會導(dǎo)致變應(yīng)性病癥。本發(fā)明化合物的使用可以為治療這類疾病或病癥提供一種方法。
因此，本發(fā)明化合物適用于治療細(xì)胞周期化紊亂，例如癌癥，包括激素依賴性和激素非依賴性癌癥。
此外，本發(fā)明的化合物還適用于治療癌癥如乳腺癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、肉瘤、黑瘤、前列腺癌、胰腺癌等，以及其它實體瘤。
對于一些應(yīng)用，細(xì)胞周期化受到抑制和/或阻止和/或停滯，優(yōu)選其中細(xì)胞周期化受到阻止和/或停滯。在一個方面中，細(xì)胞周期化可能會在G2/M期受到抑制和/或阻止和/或停滯。在一個方面中，細(xì)胞周期化不可逆地被阻止和/或抑制和/或停滯，優(yōu)選其中細(xì)胞周期化不可逆地被阻止和/或停滯。
術(shù)語“不可逆地阻止和/或抑制和/或停滯”是指在本發(fā)明化合物應(yīng)用后，當(dāng)除去本發(fā)明化合物時仍然能觀測到化合物的作用，即阻止和/或抑制和/或停滯細(xì)胞周期化。更具體講，術(shù)語“不可逆地阻止和/或抑制和/或停滯”是指當(dāng)按照本文給出的細(xì)胞周期化測定方案進(jìn)行檢測時，較之對照細(xì)胞，接受目的化合物處理的細(xì)胞在方案I的階段2之后生長不理想。有關(guān)該方案的細(xì)節(jié)見下文。
因此，本發(fā)明提供了化合物，它們通過阻止和/或抑制和/或停滯細(xì)胞周期化而能體外抑制雌激素受體陽性(ER+)和ER陰性(ER-)乳腺癌細(xì)胞的生長；和/或在完整動物(即非卵巢切除動物)中消退亞硝基-甲基脲(NMU)誘發(fā)的乳腺腫瘤，和/或阻止和/或抑制和/或停滯癌細(xì)胞的細(xì)胞周期化進(jìn)程；和/或通過阻止和/或抑制和/或停滯細(xì)胞周期化而在體內(nèi)起作用，和/或用作細(xì)胞周期化激動劑。
細(xì)胞周期化試驗 (方案7) 方法 階段1 以105細(xì)胞/孔的密度將MCF-7乳腺癌細(xì)胞接種到多孔培養(yǎng)板內(nèi)。使細(xì)胞吸附并生長到約30％的融合，然后按下所述進(jìn)行處理 對照組不處理 目的化合物(COI)20μM 細(xì)胞在含COI的生長培養(yǎng)基中生長6天，其中每3天更換培養(yǎng)基/COI。在該過程結(jié)束時，用Coulter細(xì)胞計數(shù)器計數(shù)細(xì)胞數(shù)量。
階段2 用COI處理細(xì)胞6天后，再以104細(xì)胞/孔的密度接種細(xì)胞。不再加入處理物。在生長培養(yǎng)基的存在下使細(xì)胞再生長6天。在該過程結(jié)束時再次計數(shù)細(xì)胞數(shù)量。
癌癥 如上所述，本發(fā)明化合物可以用于治療細(xì)胞周期紊亂癥。一種具體的細(xì)胞周期紊亂癥是癌癥。
在大多數(shù)西方國家，癌癥一直是死亡的主要原因。至今，研發(fā)的癌癥療法包括阻斷激素的作用或合成，以抑制激素依賴性腫瘤的生長。但目前采用攻擊性更強的化療來治療激素依賴性腫瘤。
因此，能用于激素依賴性和/或激素非依賴性腫瘤的抗癌治療、同時沒有與化療有關(guān)的一些或全部副作用的藥物的研發(fā)，將代表主要的治療進(jìn)展。
已知雌激素在其合成后進(jìn)行一些羥基化和軛合反應(yīng)。直到最近，人們才想到這些反應(yīng)是代謝過程的一部分，它們最終賦予雌激素水溶性并促進(jìn)它們從體內(nèi)清除?，F(xiàn)在，人們清楚地認(rèn)識到一些羥基代謝物(如2-羥基和16α-羥基)及軛合物(例如硫酸雌酮，E1S)在測定雌激素的一些體內(nèi)復(fù)雜作用中是重要的。
研究人員已對2-和16-羥基化刺激物的形成與改變?nèi)橄侔┪ｋU性的條件之間的關(guān)系進(jìn)行了研究。現(xiàn)已清楚增強2-羥基化酶活性的因素與癌癥危險性的降低有關(guān)，而提升16α-羥基化的因素會加大乳腺癌的危險性。雌激素代謝物的生物作用中的其它益處受到不斷增加的證據(jù)鼓舞，即2-甲氧基雌二醇是具有抗有絲分裂性質(zhì)的內(nèi)源性代謝物。2-MeOE2通過兒茶酚雌激素甲基轉(zhuǎn)移酶的作用由2-羥基雌二醇(2-OHE2)生成，該酶廣泛分布在體內(nèi)。
研究人員已經(jīng)證明，2-MeOE2能夠體內(nèi)抑制皮下注射Meth A肉瘤、B16黑素瘤或MDA-MB-435雌激素受體陰性(ER-)乳腺癌細(xì)胞產(chǎn)生的腫瘤的生長。它還抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移，以及體外的血管生成。這暗示2-MeOE2體內(nèi)抑制腫瘤生長的能力可能是由于其抑制腫瘤誘發(fā)的血管生成的能力，而不是對腫瘤細(xì)胞增殖的直接作用。
2-MeOE2發(fā)揮其有力的抗有絲分裂和抗血管生成作用的機理仍正在研究。有證據(jù)說明在高濃度時其可以抑制微管的聚合，并用作結(jié)合于秋水仙堿的微管蛋白的弱抑制劑。但最近發(fā)現(xiàn)在能阻斷有絲分裂的濃度下，細(xì)胞中的微管蛋白細(xì)絲不發(fā)生解聚，而具有與紫杉醇處理后觀察到的相同形態(tài)。因此，可能象用于乳腺癌和卵巢癌治療的藥物紫杉醇一樣，2-MeOE2通過穩(wěn)定的微管動力學(xué)起作用。
雖然將2-MeOEt2確定為治療癌癥的新方法代表了重要的進(jìn)步，但口服雌激素的生物利用度差。而且，它們在其首次通過肝臟期間進(jìn)行深度代謝。作為開發(fā)用于乳腺癌治療的甾體硫酸酯酶抑制劑的研究過程的一部分，雌酮-3-O-氨基磺酸酯(EMATE)被確定為強有效的活性位點定向性抑制劑。出人意料的是，已證明EMATE具有強有效的雌激素性質(zhì)，在大鼠中的口服親子宮活性是雌二醇的100倍。據(jù)認(rèn)為其增強的動情性能由其對紅血細(xì)胞(rbcs)的吸收所致，這種吸收在通過肝臟過程中能防止其滅活，并且用作貯庫在長時間內(nèi)緩慢釋放。人們已合成并測試了一些A環(huán)修飾的類似物，包括2-甲氧基雌酮-3-O-氨基磺酸酯。雖然該化合物作為甾體硫酸酯酶抑制劑與EMATE具有等價活性，但不具動情能力。
我們相信本發(fā)明化合物為治療癌癥，尤其是乳腺癌的治療提供了一種方法。
此外或者可供選擇的是，本發(fā)明化合物可以用于阻斷癌癥的生長，包括白細(xì)病和實體瘤如乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌、卵巢癌和胰腺癌。
治療相關(guān)性雌激素 我們相信，本發(fā)明的一些化合物可以用于控制體內(nèi)，特別是雌性體內(nèi)的雌激素水平。因此，一些本發(fā)明化合物可以用于提供控制生育的手段，例如口服避孕片劑、丸劑、溶液劑或錠劑。或者，這些化合物可以是埋植劑或貼劑的形式。
因此，本發(fā)明的化合物可以用于治療與雌激素有關(guān)的激素病癥。
此外或可供選擇的是，本發(fā)明的化合物可以用于治療除與雌激素有關(guān)的激素病癥。因此，本發(fā)明的化合物還能影響激素活性并也能影響免疫反應(yīng)。
神經(jīng)變性疾病 我們相信，本發(fā)明的一些化合物可以用于治療神經(jīng)變性疾病及相似病癥。
例如，據(jù)認(rèn)為STS抑制劑可以用于增強以下疾病患者或其它需要提高記憶力的個體的記憶功能例如健忘癥、頭部損傷、阿爾茨海默氏病、癲癇性癡呆、早老性癡呆、外傷后癡呆、老年性癡呆、血管性癡呆和中風(fēng)后癡呆。
TH1 我們相信本發(fā)明的一些化合物在TH1交織(TH1 implications)中是有用的。
例如，據(jù)信在巨噬細(xì)胞或其它存在抗原的細(xì)胞內(nèi)，STS抑制劑的存在可能會導(dǎo)致致敏T細(xì)胞增加TH1(高IL-2，IFNY低IL-4)反應(yīng)的能力減弱。其它甾類如糖皮質(zhì)激素的正常調(diào)節(jié)影響將因此占主導(dǎo)地位。炎癥 我們相信，本發(fā)明的一些化合物可以用于治療炎癥，例如與下列任一種或多種疾病有關(guān)的病癥自身免疫性疾病，包括例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，I型和II型糖尿病，全身性紅斑狼瘡，多發(fā)性硬化，重癥肌無力，甲狀腺炎，結(jié)節(jié)性脈管炎，胃潰瘍和Crohn病，皮膚病例如粉刺、牛皮癬和接觸性皮炎；移植物抗宿主?。粷裾?；哮喘和移植后器官排斥反應(yīng)。
例如，據(jù)信STS抑制劑可以防止DHEA或相關(guān)甾類對免疫和/或炎性反應(yīng)的正常生理作用。
本發(fā)明的化合物可以用于制備用于提供內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素樣作用的藥物。
其它治療 還應(yīng)理解，本發(fā)明的化合物/組合物具有其它重要的醫(yī)學(xué)用途。
例如，本發(fā)明的化合物或組合物可以用于治療WO-A-99/52890中列出的疾病，即 此外或供選擇的是，本發(fā)明的化合物或組合物可用于治療WO-A-98/05635中列出的疾病。為了便于參考，現(xiàn)給出其中所列的部分疾病癌癥，炎癥或炎性疾病，皮膚病，放熱，心血管病，溶血病，凝血病和急相反應(yīng)，惡病質(zhì)，厭食，急性感染，HIV感染，休克，移植物抗宿主反應(yīng)，自身免疫病，再灌注損傷，腦膜炎，偏頭痛和阿司匹林依賴性抗血栓生成；腫瘤生長、侵入和擴散，血管生成，腫瘤轉(zhuǎn)移，惡性腫瘤，腹水和惡性胸膜滲漏；大腦局部缺血，局部缺血性心臟病，骨關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，骨質(zhì)疏松，哮喘，多發(fā)性硬化，神經(jīng)變性疾病，阿爾茨海默氏病，動脈硬化，中風(fēng)，結(jié)節(jié)性脈管炎，Crohn病和潰瘍性結(jié)腸炎；牙周炎，齒齦炎，牛皮癬，特應(yīng)性皮炎，慢性潰瘍，表皮松解大皰；角膜潰瘍，視網(wǎng)膜病和外科創(chuàng)傷愈合；鼻炎，變應(yīng)性結(jié)膜炎，濕疹，過敏反應(yīng)；再狹窄，充血性心力衰竭，子宮內(nèi)膜異位，動脈粥樣硬化或內(nèi)硬化(endosclerosis)。
此外或供選擇的是，本發(fā)明的化合物或組合物可以用于治療WO-A-98/07859中列出的疾病。為了便于參考，現(xiàn)給出其中所列的部分疾病細(xì)胞因子和細(xì)胞增殖/分化活性；免疫抑制或免疫刺激活性(例如，用于治療免疫缺陷癥，包括人免疫缺陷病毒感染；調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞生長；治療癌癥和許多自身免疫病，以及用于預(yù)防移植物排斥反應(yīng)或誘導(dǎo)腫瘤免疫性)；調(diào)節(jié)造血，譬如治療骨髓或淋巴樣疾??；促進(jìn)骨、軟骨、腱、韌帶和神經(jīng)組織的生長，例如用于愈合傷口，治療燒傷、潰瘍和牙周病以及神經(jīng)變性疾病；抑制或激活卵泡刺激激素(調(diào)控生育力)；趨化性/活性促活活性(例如用于調(diào)動特異細(xì)胞類型到損傷或感染的部位)；止血和溶栓活性(例如用于治療血友病和中風(fēng))；抗炎活性(用于治療如濃毒性休克或Crohn病)；在人用或獸用藥物中作為抗菌劑；調(diào)節(jié)劑如代謝或行為調(diào)節(jié)劑；作為止痛劑；治療特異性缺陷疾病；治療例如牛皮癬。
此外或供選擇的是，本發(fā)明的化合物或組合物可以用于治療WO-A-98/09985中列出的疾病。為了便于參考，現(xiàn)給出其中所列的部分疾病巨噬細(xì)胞抑制和/或T細(xì)胞抑制活性，并因此具有抗炎活性；抗免疫活性，即對細(xì)胞和/或體液免疫反應(yīng)的抑制活性，包括與炎癥無關(guān)的反應(yīng)；抑制巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞粘附胞外基質(zhì)組分和纖連蛋白的能力，以及上調(diào)T細(xì)胞中fas受體的表達(dá)；抑制不需要的免疫反應(yīng)和炎癥，包括關(guān)節(jié)炎(包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎在內(nèi))，與超敏反應(yīng)、變態(tài)反應(yīng)、哮喘、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、膠原病及其它自身免疫病有關(guān)的炎癥，與動脈粥樣硬化、動脈硬化、動脈粥樣硬化性心臟病、再灌注損傷、心動停止、心肌梗塞、脈管炎性疾病、呼吸窘迫綜合癥或其它心肺疾病有關(guān)的炎癥，與消化性潰瘍、潰瘍性結(jié)腸炎及其它胃腸道疾病有關(guān)的炎癥，肝纖維化，肝壞死或其它肝病，甲狀腺炎或其它腺體疾病，腎小球性腎炎或其它腎臟和泌尿系統(tǒng)疾病，耳炎或其它耳鼻喉科疾病，皮炎或其它皮膚病，牙周病或其它牙科疾病，睪丸炎或附睪炎，不育癥，睪丸創(chuàng)傷或其它免疫相關(guān)性睪丸病，胎盤機能障礙，胎盤機能不全，習(xí)慣性流產(chǎn)，驚厥，驚厥前期和其它免疫和/或炎癥相關(guān)的婦科疾病，后色素層炎，中色素層炎，前眼色素層炎，結(jié)膜炎，脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎，色素層視網(wǎng)膜炎，眼神經(jīng)炎，眼內(nèi)炎癥，例如視網(wǎng)膜炎或囊性斑水腫，交感神經(jīng)眼炎，鞏膜炎，視網(wǎng)膜炎性色素沉著，變性蛋白乳酪酥疾病(degenerative fondus disease)的免疫和炎性組分，眼外傷的炎癥組分，感染引起的眼炎，增殖性玻璃體-視網(wǎng)膜病，急性局部缺血性視神經(jīng)病，疤痕形成過度如在青光眼濾光手術(shù)后的這種情況，對眼移植的免疫和/或炎癥反應(yīng)，以及其它免疫和/或炎癥相關(guān)性眼病，與自身免疫病有關(guān)的炎癥，其中無論是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)還是在任何其它器官中，免疫和/或炎癥抑制都是有益的，帕金森氏病，治療帕金森氏病產(chǎn)生的并發(fā)癥和/或副作用，AIDS相關(guān)的癡呆性復(fù)癥，HIV相關(guān)性腦病，德維克氏病，舞蹈病，阿爾茨海默氏病和其它神經(jīng)變性疾病，CNS疾病或紊亂，中風(fēng)的炎癥反應(yīng)部分，脊髓灰質(zhì)炎后綜合癥，神經(jīng)病的免疫和炎癥部分，脊髓炎，腦炎，亞急性硬化盤腦炎，腦脊髓炎，急性神經(jīng)病，亞急性神經(jīng)病，慢性神經(jīng)病，格巴二氏綜合癥，Sydenham舞蹈病，重癥肌無力，假腦瘤(pseudo-tumour)，Down氏綜合癥，Huntington病，肌萎縮性側(cè)索硬化，CNS壓迫或CNS外傷或CNS感染的炎癥部分，肌萎縮和營養(yǎng)不良的炎癥部分，以及免疫和炎癥相關(guān)性疾病，腦和外周神經(jīng)系統(tǒng)的疾病或紊亂，創(chuàng)傷后炎癥，膿毒性休克，傳染病，外科手術(shù)的炎癥并發(fā)癥或不良反應(yīng)，骨髓移植或其它移植并發(fā)癥和/或不良反應(yīng)，基因療法的炎性和/或免疫性并發(fā)癥和/或不良反應(yīng)，例如由于受病毒載體感染，或者與AIDS有關(guān)的炎癥，阻滯或抑制體液和/或細(xì)胞免疫反應(yīng)，治療或緩解單核細(xì)胞或白細(xì)胞增殖性疾病，例如白血病，提供降低單核細(xì)胞或淋巴細(xì)胞的量來預(yù)防和/或治療天然或人造細(xì)胞、組織和器官(如角膜、骨髓、器官、晶狀體、起搏器、自然或人造皮膚組織)移植情形中的移植排斥反應(yīng)。
化合物制備 本發(fā)明的化合物可以通過適當(dāng)?shù)拇寂c核素的氯化物反應(yīng)制備。例如，本發(fā)明的氨基磺酸酯化合物可以通過適當(dāng)?shù)拇寂c式R4R5NSO2Cl的適宜氨基磺酰氯反應(yīng)制備。
進(jìn)行該反應(yīng)的典型條件如下 在0℃下，向醇在無水二甲基甲酰胺中的攪拌溶液內(nèi)加入氫化鈉和氨基磺酰氯。接著，使反應(yīng)物溫?zé)岬绞覝?，繼續(xù)攪拌24小時。將反應(yīng)混合物倒入碳酸氫鈉的飽和冷溶液中，水相用二氯甲烷萃取。將合并的有機萃取物用無水MgSO4肝臟。過濾，繼而真空蒸發(fā)溶劑，并與甲苯共蒸發(fā)，得到粗品殘留物，進(jìn)一步通過快速色譜純化。
優(yōu)選的是，在與氨基磺酰氯反應(yīng)之前，將醇適當(dāng)衍生化。如果需要，醇中的官能團可以用已知方法加以保護，并在反應(yīng)結(jié)束時除去一個或多個保護基。
優(yōu)選的是，氨基磺酸酯化合物按照Page等人的教導(dǎo)制備(1990Tetrahedron 462059-2068)。
膦酸酯化合物可通過適當(dāng)結(jié)合Page等(1990 Tetrahedron462059-2068)和PCT/GB92/01586的教導(dǎo)制備。
硫代膦酸酯化合物可通過適當(dāng)結(jié)合Page等(1990 Tetrahedron 462059-2068)和PCT/GB91/00270的教導(dǎo)制備。
下文中也給出了優(yōu)選制備例。
概括 總之，本發(fā)明提供了可用作甾體硫酸酯酶抑制劑和/或芳香化酶抑制劑和/或細(xì)胞編程性死亡的調(diào)節(jié)劑和/或細(xì)胞周期化和/或細(xì)胞生長的調(diào)節(jié)劑的新化合物，以及包含它們的藥物組合物。
實施例 現(xiàn)僅參照附圖進(jìn)一步詳細(xì)舉例說明本發(fā)明，其中- 附圖1表示總流程圖； 附圖2表示總流程圖； 附圖3表示曲線圖；和 附圖4表示曲線圖。
現(xiàn)通過舉例對本發(fā)明進(jìn)行說明。但應(yīng)當(dāng)理解，這些實施例也提供了本發(fā)明的優(yōu)選化合物，以及制備它們用的優(yōu)選路線和制備它們用的有用中間體。
合成路線 本發(fā)明的化合物按照所述合成路線與流程合成。
式III化合物 4-([1.2.4]三唑-4-基氨基)芐腈(LWO02023)
在10-15℃下，向叔丁醇鉀(6.7g，59.47mmol)在無水二甲亞砜(DMSO，20mL)中的混合物內(nèi)分批加入4-氨基-4H-1，2，4-三唑(5.0g，59.47mmol)的無水DMSO(10mL)溶液。室溫、氮氣氛圍中攪拌產(chǎn)生的亮黃色粘稠懸浮液60分鐘后，冷卻到病/水溫度，在5分鐘內(nèi)逐滴加入4-氟芐腈(3.60g，29.74mmol)的無水DMSO(10mL)溶液。在氮氣氛圍中室溫攪拌形成的橙色懸浮液1小時，之后傾入水中(500mL)。采用5M HCl(如果需要繼而使用碳酸氫鈉飽和水溶液)將所形成的清亮黃色混合物的pH調(diào)節(jié)至中性。在室溫下不加遮蓋放置該混合物7天，有黃色結(jié)晶析出。過濾、用水徹底洗滌并風(fēng)干過夜，收集到4-([1，2，4]三唑-4-基氨基)芐腈(2.08g，11.23mmol，37.8％)；m.p.200-204℃δH(400MHz，DMSO-d6)6.55(2H，AA′BB′)，7.69(2H，AA′BB′)，8.85(2H，s，C3′-H和C5′-H)和10.23(1H，br s，與D2O發(fā)生交換，NH)。
4-[(4-芐氧基芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]芐腈(LWO02029)
攪拌下，于冰/水溫度向LWO02023(700mg，3.780mmol)的DMF(10mL)溶液中加入氫化鈉(60％，在礦物油中，151mg，3.780mmol)。在氮氣氛圍中室溫攪拌30分鐘之后，單批加入芐氧基芐基氯(968mg，4.158mmol)，所形成的橙/棕色混合物在80-90℃下加熱3小時。將由此形成的黃色混懸液在室溫下用水(200mL)稀釋，收集所產(chǎn)生的白色沉淀物，用水徹底洗滌，風(fēng)干得到4-[(4-芐氧基芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]芐基(1.35g，3.539mmol，94％)，為白色粉末；m.p.206-211℃；Rf 0.37(純乙酸乙酯)，c.f.0.83(4-芐氧基芐基氯)；δH(400MHz，DMSO-d6)4.98(2H，s，CH2N)，5.06(2H，s，CH2O)，6.77(2H，AA′BB′)，6.95(2H，AA′BB′)，7.21(2H，AA′BB′)，7.30-7.46(5H，m，Bn)，7.76(2H，AA′BB′)和8.75(2H，s，C3′-H和C5′-H)；LRMS(FAB+)763.3[7，(2M+H)+]，382.2[100，(M+H)+]，313.1[48，(M+H-三唑)+]；(FAB-)687.3[28，(M+2NBA)-]，534.2[100，(M+NBA)-]；HRMS(FAB+)382.16648 C23H20N5O計算值382.16679. 4-[(4-羥基芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]芐腈(LWO02030，STX265)
攪拌下，向4-[(4-芐氧基芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]芐基(750mg，1.848mmol)在蒸餾THF(120mL)中的溶液內(nèi)順序加入無水乙醇(30mL)和PD/C(10％，40mg)。然后在氫氣氛(氣囊)中攪拌該黑色混懸液3天。在濾除并用蒸餾過的THF徹底洗滌負(fù)載催化劑之后，蒸發(fā)濾液得到亮黃色微濕殘留物(529mg)。該粗品用DMF/乙酸乙酯(1∶10，33mL)重結(jié)晶，得白色結(jié)晶4-[(4-羥基芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]芐基(138mg，473.7μmol，25.6％)；m.p.228-230℃；Rf0.24(純乙酸乙酯)，c.f.0.40(S.M.)；δH(400MHz，DMSO-d6)4.91(2H，s CH2N)，6.67(2H，AA′BB′)，6.77(2H，AA′BB′)，7.06(2H，AA′BB′)，7.76(2H，AA′BB′)，8.71(2H，s，C3′-H和C5′-H)和9.49(1H，s，與D2O交換，OH)；LRMS(FAB+)583.3[9，(2M+H)+]，445.2[13，(M+H+NBA)+]，292.2[100，(M+H)+]，223.1[50，(M-三唑)+]；(FAB-)444.2[36，(M+NBA)-]，184.1[100，(M-C7H7O)-]；HRMS(FAB+)292.11871C16H14N5O計算值292.11984. 氨基磺酸4-{[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]甲基}苯基酯(LWO02031，STX258)
攪拌下，在室溫向4-[(4-羥基芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]芐基(265mg，715.4μmol)的無水N，N-二甲基乙酰胺(DMA，20mL)溶液中加入氨基磺酰氯的甲苯溶液(約0.68M，3.6mL)，在氮氣氛圍中攪拌所得混合物過夜。向反應(yīng)混合物中加入乙酸乙酯(100mL)，分出的有機層用鹽水(100mL，4x50mL)洗滌，干燥(MgSO4)，蒸發(fā)得到亮棕色糖漿/殘留物(約400mg)。將此粗品通過快速層析分離(氯仿/甲醇，7∶1-3.5∶1，梯度)，分離第三餾分，得到氨基磺酸4-{[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]甲基}苯基酯，為淺米色殘留物(150mg，405.0μmol，57％)；m.p.80-95℃；Rf 0.57(氯仿/甲醇，5∶1)，c.f.0.67(S.M.)；δH(400MHz，DMSO-d6)5.10(2H，s CH2N)，6.74(2H，AA′BB′)，7.23(2H，AA′BB′)，7.42(2H，AA′BB′)，7.77(2H，AA′BB′)，8.03(2H，br s，與D2O交換，H2NSO2)和8.85(2H，s，C3′-H和C5′-H)；LRMS(FAB+)371.1[100，(M+H)+]，302.1[30，(M-三唑)+]；(FAB-)523.2[30，(M+NBA)-]，369.1[100，(M-H)-]，184.1[34，(M-Bn-OSO2NH2)-]；HRMS(FAB+)371.09116 C16H15N6O3S計算值371.09264. 2-(4-芐氧基苯基)乙醇(LWO02057)
在冰/水溫度下，向攪拌著的4-羥基苯乙醇(3.0g，22.16mmol)/無水DMF(50mL)溶液中加入氫化鈉(60％，在礦物油中，886mg，22.16mmol)。室溫攪拌10分鐘后，加入芐基溴(3.86g，22.16mmol)，50℃加熱反應(yīng)混合物30分鐘。待冷卻到室溫后，加入乙酸乙酯(250mL)，分出有機層，用鹽水(500mL，4x100mL)洗滌，干燥(MgSO4)，蒸發(fā)得到一白色殘留物(6.05g)。將該粗品先溶于熱異丙醇(10mL)，然后逐滴加入己烷(10mL)。冷卻后分離出軟白色結(jié)晶2-(4-芐氧基苯基)乙醇(2.45g，10.73mmol)。通過用熱己烷(約150mL)重結(jié)晶，由母液殘留物得到第二批產(chǎn)物(2.04g，8.936mmol，總收率89％)；Rf 0.71(純乙酸乙酯)，0.63(S.M.)，δH(400MHz，DMSO-d6)2.64(2H，t，J7.2Hz，CH2CH2OH)，3.54(2H，m，在與D2O交換后簡化為三重峰，CH2CH2OH)，4.59(1H，t，J5.2Hz，與D2O發(fā)生交換，OH)，5.06(2H，S，CH2O)，6.90(2H，AA’BB’)，7.11(2H，AA’BB’)和7.28-7.46(5H，m，Bn)；LRMS(FAB+)228.0[94，M+]，91.0[100，Bn+]. 1-溴-2-(4-芐氧基苯基)乙烷(LWO02060)
在冰/水溫度和氮氣氛下，向2-(4-芐氧基苯基)乙醇(2.02g，8.848mmol)在無水蒸餾THF(30mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入三溴化磷(2.47g，8.848mmol)。室溫攪拌30分鐘后，蒸發(fā)反應(yīng)混合物，所得淺黃色液體用乙酸乙酯(100mL)稀釋。分出的有機相用鹽水(100mL，4x50mL)洗滌，干燥(MgSO4)，蒸發(fā)得到亮橙棕色糖漿(3.21g)，放置過夜變?yōu)榱咙S色。將該粗產(chǎn)物通過快速層析(氯仿/乙酸乙酯，1∶2-1∶1，梯度)分離，分離第一餾分，得到1-溴-2-(4-芐氧基苯基)乙烷，為黃色固體(990mg，3.40mmol，38.4)；；Rf 0.82(純乙酸乙酯)，0.68(S.M.)，δH(400MHz，DMSO-d6)3.04(2H，t，J7.2Hz，CH2CH2Br)，3.67(2H，t，J 7.4Hz，CH2CH2Br)，5.08(2H，S，CH2O)，6.95(2H，AA’BB’)，7.20(2H，AA’BB’)和7.30-7.48(5H，m，Bn)；LRMS(FAB+)289.9(9)，73.0(100)，(FAB-)233.9(100). 4-{[2-(4-芐氧基苯基)乙基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈(LWO02061)
在冰/水溫度下，向4-([1，2，4]三唑-4-基氨基)芐腈(549mg，2.966mmol)在DMF(10mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入氫化鈉(60％，在礦物油中，137mg，3.426mmol)。在氮氣氛圍中室溫攪拌30分鐘后，單批加入1-溴-2-(4-芐氧基苯基)乙烷(950mg，0.263mmol)，70℃加熱形成的深棕色混合物3小時。所形成的紅棕色混合物用冰水(200mL)稀釋，收集產(chǎn)生的沉淀物，用水徹底洗滌，風(fēng)干得到亮橙黃色殘留物(1.21g)。將此粗品通過快速色譜(干法填充，乙酸乙酯為洗脫劑)分離，分離第二餾分，得到4-{[2-(4-芐氧基苯基)乙基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈，為黃色糖漿體，室溫放置過夜發(fā)生固化，得到亮黃色蠟狀物(590mg，1.492mmol，50.3％)；Rf 0.40(純乙酸乙酯)，參比物0.85(1-溴-2-(4-芐氧基苯基)乙烷)；δH(400MHz，DMSO-d6)2.74(2H，t，J～7.6Hz，CH2CH2N)，4.04(2H，t，J～7.4Hz，CH2CH2N)，5.08(2H，s，CH2O)，6.59(2H，AA’BB’)，6.94(2H，AA’BB’)，7.20(2H，AA’BB’)，7.28-7.46(5H，m，Bn)，7.70(2H，AA’BB’)和8.83(2H，s，C3′-H和C5′-H)；LRMS(FAB+)396.1[100，(M+H)+]，369.3[5，(M-CN)+]，91.0[82，Bn+]；(FAB-)701.4[25，(M+2NBA)-]，548.3[100，(M+NBA)-]，441.2[35，(M+NBA-OBn)-]；HRMS(FAB+)396.18192 C24H22N5O計算值396.18244. 4-{[2-(4-羥基苯基)乙基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈(LWO02063，STX290)
攪拌下，向4-{[2-(4-芐氧基苯基)乙基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈(536mg，1.355mmol)在蒸餾THF(15mL)中的溶液內(nèi)順序加入無水乙醇(30mL)和Pd/C(10％，54mg)。然后在氫氣氛(氣囊)中攪拌該黑色混懸液3天。在濾除并用蒸餾過的THF徹底洗滌負(fù)載催化劑之后，蒸發(fā)濾液得到淺黃色糖漿體，室溫放置固化形成亮黃色蠟狀物(192mg)。將此粗品通過快速色譜(乙酸乙酯)分離，分離第二餾分，得到4-{[2-(4-羥基苯基)乙基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈，為淺黃色蠟狀物(115mg，376.6μmol，28％)；Rf 0.46(純乙酸乙酯)，參比物0.59(S.M.)；δH(400MHz，DMSO-d6)2.70(2H，t，J7.4Hz，CH2CH2N)，4.01(2H，t，J～7.6Hz，CH2N)，6.59(2H，AA’BB’)，6.69(2H，AA’BB’)，7.06(2H，AA’BB’)，7.71(2H，AA’BB’)，8.78(2H，s，C3′-H和C5′-H)和9.29(1H，s，與D2O發(fā)生交換，OH)；LRMS(FAB+)611.2[12，(2M+H)+]，459.1[8，(M+H+NBA)+]，306.0[100，(M+H)+]；(FAB-)763.5[18，(2M+NBA)-]，609.4[45，(2M-H)-]，184.0[100，(HOPhCH2CH2)-]；HRMS(FAB+)306.13477 C17H16N5O計算值306.13549. 氨基磺酸4-{2-[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]乙基}苯基酯(LWO02066，STX273)
室溫下，向4-{[2-(4-羥基苯基)乙基]-[1，2，4]三唑-4-基-氨基}芐腈(81mg，265.2μmol)在無水N，N-二甲基乙酰胺(DMA，5mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入氨基磺酰氯的甲苯溶液(約0.68M，1.2mL)，在氮氣氛圍中攪拌所得混合物過夜。然后向反應(yīng)混合物中加入乙酸乙酯(50mL)，分出的有機層用鹽水(100mL，4x50mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并蒸發(fā)，得到亮棕色漿體/殘留物(約100mg)。將該粗產(chǎn)物溶于丙酮(20mL)，然后濃縮到大約3mL。逐滴加入己烷(1.5mL)，放置得到白色結(jié)晶氨基磺酸4-{2-[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]乙基}苯基酯(52mg，135.3μmol，51％)；Rf 0.33(乙酸乙酯)，參比物0.41(S.M.)；δH(400MHz，DMSO-d6)2.84(2H，t，J7Hz，CH2CH2N)，4.09(2H，t，J～7Hz，CH2N)，6.63(2H，AA′BB′)，7.20(2H，AA′BB′)，7.38(2H，AA′BB′)，7.72(2H，AA′BB′)，7.97(2H，br s，與D2O發(fā)生交換，OSO2NH2)和8.87(2H，s，C3′-H和C5′-H)；LRMS(FAB+)385.0[100，(M+H)+]；(FAB-)537.2[40，(M+NBA)-]，383.1[100，(M-H)-]；HRMS(FAB+)385.10752 C17H17N6O3S計算值385.10829. 1-芐氧基-4-(2-溴乙氧基)苯(LWO02068)
該化合物按Zhou等[(1999)J.Med.Chem.422993-3000]描述的相同方法由4-(芐氧基)苯酚和1，2-二溴乙烷制備。
4-{[2-(4-芐氧基苯氧基)乙基]-[1，2，4]三唑-4-基-氨基}芐腈(LWO02075)
在冰/水溫度下，向4-([1，2，4]三唑-4-基氨基)芐腈(1.0g，5.40mmol)在DMF(15mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入氫化鈉(60％，在礦物油中，238mg，5.94mmol)。在氮氣氛圍中室溫攪拌10分鐘后，單批加入1-芐氧基-4-(2-溴乙氧基)苯(1.82g，5.94mmol)，50℃加熱形成的深棕色混合物18小時。然后將反應(yīng)混合物通過硅膠短柱，濾餅用乙酸乙酯(10x20mL)洗滌。合并的濾液用鹽水(200mL，4x50mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)得到亮黃棕色殘留物(2.28g)。將此粗品用熱乙酸乙酯重結(jié)晶，得到4-{[2-(4-芐氧基苯氧基)乙基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈(690mg，1.677mmol)，為乳白色蓬松固體。通過用熱乙酸乙酯和己烷重結(jié)晶，從母液的殘留物中得到第二批產(chǎn)物(915mg，2.224mmol，總收率，72％)；m.p.160-162℃；Rf 0.45(純乙酸乙酯)，參比物0.89(1-芐氧基-4-(2-溴乙氧基)苯)；δH(400MHz，DMSO-d6)4.08(2H，m，CH2)，4.23(2H，m，CH2)，5.03(2H，s，CH2O)，6.67(2H，AA′BB′)，6.82(2H，AA′BB′)，6.93(2H，AA′BB′)，7.28-7.46(5H，m，Bn)，7.74(2H，AA′BB′)和8.91(2H，s，C3′-H和C5′-H).實測值C 69.7，H 5.16，N 16.7；C24H21N5O2的計算值C 70.06，H 5.14，N 17.02％. 4-{[2-(4-羥基苯氧基)乙基]-[1，2，4]三唑-4-基-氨基}芐腈(LWO02076，STX291)
向4-{[2-(4-芐氧基苯氧基)乙基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈(670mg，1.628mmol)在蒸餾THF(70mL)中的攪拌溶液內(nèi)順序加入無水乙醇(30mL)和Pd/C(10％，67mg)。然后在氫氣氛(氣囊)中攪拌該黑色混懸液3天。在濾除并用蒸餾過的THF徹底洗滌負(fù)載催化劑之后，蒸發(fā)濾液得到亮黃色殘留物(491mg)。將此粗品溶于熱丙酮(25mL)，然后逐滴加入己烷(15mL)。冷卻，分離出亮綠黃色結(jié)晶4-{[2-(4-羥基苯氧基)乙基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈(310mg，964.1μmol，59％)；m.p.184-195℃；Rf 0.31(純乙酸乙酯)，參比物0.45(S.M.)；δH(400MHz，DMSO-d6)4.03(2H，t，J 4.6-5.1Hz，CH2)，4.21(2H，t，J 5.1Hz，CH2)，6.62-6.73(6H，m，Ar)，7.73(2H，AA′BB′)，8.89(2H，s，C3′-H和C5′-H)和8.95(1H，s，D2O發(fā)生交換，OH)；LRMS(FAB+)643.2[12，(2M-H)+]，475.1[100，(M+H+NBA)+]，322.1[100，(M+H)+]，253.1[20，(M-三唑)+]；(FAB-)795.1[10，(2M+NBA)-]，641.2[30，(2M-H)-]，474.2[90，(M+NBA)-]，320.1[100，(M-H)-]，HRMS(FAB+)322.12984 C17H16N5O2計算值322.13040. 氨基磺酸4-{2-[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]乙氧基}苯基酯(LWO02077，STX292)
室溫下，向4-{[2-(4-羥基苯氧基)乙基]-[1，2，4]三唑-4-基-氨基}芐腈(212mg，659.7μmol)在無水N，N-二甲基乙酰胺(DMA，5mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入氨基磺酰氯的甲苯溶液(約0.68M，2mL)，在氮氣氛圍中攪拌所得混合物1.5h。然后向反應(yīng)混合物中加入乙酸乙酯(100mL)，分出的有機層用鹽水(100mL，4x50mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并蒸發(fā)，得到白色蓬松固體(299mg)。將該粗品通過快速色譜分離(乙酸乙酯，在洗脫出第二餾分后換成乙酸乙酯/丙酮2∶1)，蒸發(fā)分離出的第三餾分，得白色蓬松狀殘留物氨基磺酸4-{2-[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]乙氧基}苯基酯(218mg，544.4μmol，83％)；Rf 0.21(乙酸乙酯)，參比物0.30(S.M.)；δH(400MHz，DMSO-d6)4.14(2H，m，CH2)，4.28(2H，m，CH2)，6.68(2H，AA′BB′)，6.94(2H，AA′BB′)，7.18(2H，AA′BB′)，7.75(2H，AA′BB′)，7.89(2H，br s，與D2O發(fā)生交換，OSO2NH2)和8.93(2H，s，C3′-H和C5′-H)；LRMS(FAB+)401.0[100，(M+H)+]；(FAB-)799.1[8，(2M-H)-]，553.2[35，(M+NBA)-]，399.1[100，(M-H)-]；HRMS(FAB+)401.10471 C17H17N6O4S計算值401.10320. 1-芐氧基-4-(4-溴丁氧基)苯(LWO2064)
向4-(芐氧基)苯酚(3.0g，15.13mmol)和1，4-二溴丁烷(16.34g，75.65mmol)的乙腈(25mL)溶液中加入無水碳酸鉀(5.23g，37.83mmol)。然后該混懸液18小時。待冷卻到室溫后，混懸液通過硅膠短柱過濾，濾餅用乙酸乙酯徹底洗滌。蒸發(fā)濾液得到黃色液體(17.63g)，放置后得到大塊白色結(jié)晶。這些結(jié)晶然后用己烷研制，過濾收集。通過在空氣中干燥，得到乳白色結(jié)晶1-芐氧基-4-(4-溴丁氧基)苯(2.87g，8.561mmol，57％)；m.p.73-75℃；Rf 0.84(氯仿)，參比物0.16(S.M.)；δH(400MHz，DMSO-d6)1.80(2H，m，CH2)，1.95(2H，m，CH2)，3.60(2H，t，J 6.6Hz，CH2Br)，3.92(2H，t，J 6.2Hz，OCH2CH2)，5.03(2H，s，CH2O)，6.86(2H，AA′BB′)，6.92(2H，AA′BB′)和7.28-7.46(5H，m，Bn).實測值C 60.8，H 5.71；C17H19BrO2計算值C 60.91，H 5.71 4-{[4-(4-芐氧基苯氧基)丁基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈(LWO02065)
在冰/水溫度下，向4-([1，2，4]三唑-4-基氨基)芐腈(1.0g，5.40mmol)在DMF(15mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入氫化鈉(60％，在礦物油中，238mg，5.94mmol)。在氮氣氛圍中室溫攪拌10分鐘后，單批加入1-芐氧基-4-(4-溴丁氧基)苯(1.99g，5.94mmol)，50℃加熱所形成的深棕色混合物18小時。然后將冷卻的反應(yīng)混合物通過硅膠短柱，濾餅用乙酸乙酯(10x20mL)洗滌。合并的濾液用鹽水(200mL，4x50mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)得到黃橙色殘留物(2.50g)。將此粗品溶于熱乙酸乙酯(10mL)，然后逐滴加入己烷(2mL)。冷卻到室溫，得到4-{[4-(4-芐氧基苯氧基)丁基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈，為乳白色/淺黃色結(jié)晶(1.42g，3.231mmol)。通過用熱乙酸乙酯重結(jié)晶，由母液的殘留物中得到第二批產(chǎn)物(363mg，825.9μmol，總收率，75％)；m.p.124.5-126.5℃；Rf 0.45(純乙酸乙酯)，參比物0.88(1-芐氧基-4-(4-溴丁氧基)苯)；δH(400MHz，DMSO-d6)1.58(2H，準(zhǔn)五重峰，CH2)，1.78(2H，準(zhǔn)五重峰，CH2)，3.90(4H，quasi q，OCH2CH2CH2CH2N)，5.03(2H，s，CH2O)，6.65(2H，AA′BB′)，6.84(2H，AA′BB′)，6.92(2H，AA′BB′)，7.28-7.45(5H，m，Bn)，7.72(2H，AA′BB′)和8.98(2H，s，C3′-H和C5′-H).實測值C 71.05，H 5.74，N 15.8；C26H25N5O2計算值C 71.05，H 5.73，N 15.93％. 4-{[4-(4-羥基苯氧基)丁基]-[1，2，4]三唑-4-基-氨基}芐腈(LWO02067，STX287)
向4-{[4-(4-芐氧基苯氧基)丁基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈(800mg，1.820mmol)在蒸餾THF(10mL)中的攪拌溶液內(nèi)順序加入無水乙醇(30mL)和Pd/C(10％，80mg)。然后在氫氣氛(氣囊)中攪拌該黑色混懸液2天。在濾除并用蒸餾過的THF徹底洗滌負(fù)載催化劑之后，蒸發(fā)濾液得到亮黃色泡沫狀殘留物/漿體(481mg)。將此粗品通過快速色譜分離(乙酸乙酯-丙酮，梯度)，通過蒸發(fā)分離出的第二餾分，得到淺黃色松軟殘留物(323mg)，進(jìn)一步用丙酮/己烷重結(jié)晶純化，得淺黃色細(xì)碎結(jié)晶4-{[4-(4-羥基苯氧基)丁基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈(280mg，801.4μmol，44％)；m.p.156-159℃；Rf 0.42(純乙酸乙酯)，參比物0.51(S.M.)；δH(400MHz，DMSO-d6)1.58(2H，m)，1.76(2H，m)，3.87(4H，m，OCH2CH2CH2CH2N)，6.61-6.75(6H，m，Ar)，7.73(2H，AA′BB′)，8.91(1H，s，與D2O發(fā)生交換，OH)和8.99(2H，s，C3′-H和C5′-H).實測值C 65.4，H 5.54，N 19.6；C19H19N5O2計算值C 65.32，H 5.48，N 20.04％. 氨基磺酸4-{4-[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]丁氧基}苯基酯(LWO02069，STX288)
室溫下，向4-{[4-(4-羥基苯氧基)丁基]-[1，2，4]三唑-4-基-氨基}芐腈(210mg，601μmol)在無水N，N-二甲基乙酰胺(DMA，5mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入氨基磺酰氯的甲苯溶液(約0.68M，1.8mL)，在氮氣氛圍中攪拌所得混合物1.5h。然后向反應(yīng)混合物中加入乙酸乙酯(100mL)，分出的有機層用鹽水(50mL，4x50mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并蒸發(fā)，得到乳白色殘留物(291mg)。進(jìn)而通過丙酮/己烷重結(jié)晶進(jìn)行純化，得淺黃色結(jié)晶氨基磺酸4-{4-[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]丁氧基}苯基酯(218mg，508.8μmol，85％)；m.p.164-172℃；Rf 0.43(乙酸乙酯)，參比物0.48(S.M.)；δH(400MHz，DMSO-d6)1.60(2H，m，CH2)，1.82(2H，m，CH2)，3.90(2H，t，J 7.4Hz，CH2)，3.98(2H，t，J 6.2Hz，CH2)，6.66(2H，AA′BB′)，6.97(2H，AA′BB′)，7.18(2H，AA′BB′)，7.73(2H，AA′BB′)，8.91(2H，br s，與D2O發(fā)生交換，OSO2NH2)和8.99(2H，s，C3′-H和C5′-H)；LRMS(FAB+)429.0[100，(M+H)+]；(FAB-)427.1[100，(M-H)-]；HRMS(FAB+)429.13567 C19H21N6O4S計算值429.13450. 3-溴-4-羥基苯甲醛(LWO02081)
40℃下，向4-羥基苯甲醛(8.0g，64.20mmol)在氯仿(400mL)中的攪拌溶液內(nèi)分批加入溴(3.3mL)的氯仿(10mL)溶液。40℃攪拌所產(chǎn)生的紅棕色混合物2小時，冷卻，蒸發(fā)得到紫色殘留物，進(jìn)而溶于乙酸乙酯(200mL)。分出有機層，用鹽水(4x100mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并且蒸發(fā)，得到亮粉色/棕色殘留物(12.95g)。該粗品用熱甲苯結(jié)晶兩次進(jìn)行純化，得3-溴-4-羥基苯甲醛，為亮橙色/棕色結(jié)晶(8.88g，44.17mmol，69％)；m.p.115-128℃；Rf 0.42(氯仿/乙酸乙酯，4∶1)，參比物0.36(S.M.)；δH(400MHz，DMSO-d6)7.11(1H，d，J8.2Hz，C5-H)，7.76(1H，dd，J 1.95和8.2Hz，C6-H)，8.04(1H，d，J2 Hz，C2-H)，9.78(1H，s，CHO)和11.53(1H，s，與D2O發(fā)生交換，OH)。該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化而直接用于下步反應(yīng)。
4-芐氧基-3-溴苯甲醛(LWO02082)
在冰/水溫度下，向3-溴-4-羥基苯甲醛(8.0g，39.80mmol)在無水DMF(50mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入氫化鈉(60％，在礦物油中，1.67gg，41.79mmol)。室溫攪拌10分鐘后，加入芐基溴(7.64g，43.78mmol)，80℃加熱反應(yīng)混合物2小時。冷卻到室溫時，加入乙酸乙酯(300mL)，分出的有機層用鹽水(500mL，4x50mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)得到亮米色殘留物(13.09g)。將此粗品用異丙醇/己烷重結(jié)晶，得到4-芐氧基-3-溴苯甲醛，為亮黃色細(xì)小結(jié)晶(9.52g，32.70mmol，82％)。m.p.95-96.5℃[文獻(xiàn)1(乙醇)，m.p.95℃]；Rf 0.75(純乙酸乙酯/己烷，1∶1)，0.52(S.M.)；δH(400MHz，DMSO-d6)5.35(2H，s，CH2O)，7.33-7.53(6H，m，Bn和C5-H)，7.93(1H，dd，J2和8.4Hz，C6-H)，8.13(1H，d，J 1.9Hz，C2-H和9.87(1H，s，CHO). 1Buu-Hoi等.(1953)J.Org.Chem.18121-125. 4-芐氧基-3-溴苯酚(LWO02085)
室溫、攪拌下，向4-芐氧基-3-溴苯甲醛(4.5g，15.46mmol)的氯仿(30mL)溶液中加入間-氯過苯甲酸(57-86％，5.62g)，并攪拌所形成的懸浮液4小時。然后加入乙酸乙酯，分出的有機層用碳酸氫鈉飽和水溶液(1x100mL，3x50mL)、鹽水(2x50mL)順序洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)得到清亮棕色油體，室溫放置過夜，得亮黃色沉淀物(6.05g)。室溫下，向此粗品/甲醇(45mL)中加入1M NaOH(水溶液)(30mL)。攪拌2小時后，產(chǎn)生的棕色混合物用5M HCl酸化，繼而以乙酸乙酯(200mL)稀釋。分出的有機層用鹽水(100mL，4x50mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)，得到棕色油體(5.33g)。用快速色譜分離(乙酸乙酯/己烷，1∶2-1∶1梯度)，分離第四餾分，得到亮金黃色油體4-芐氧基-3-溴苯酚，室溫放置發(fā)生固化，形成亮棕色蠟狀物(3.92g，14.04mmol，91％)；Rf 0.48(乙酸乙酯/己烷，1∶2)，0.61(4-芐氧基-3-溴苯甲醛)；δH(400MHz，DMSO-d6)5.07(2H，s，CH2O)，6.72(1H，dd，J 2.7和8.9Hz，C6-H)，6.98(1H，d，J 3.1Hz，C2-H)，7.02(1H，d，J 8.9Hz，C5-H)，7.28-7.50(5H，m，Bn)和9.39(1H，brs，與D2O發(fā)生交換，OH)；LRMS(FAB+)278.0[35，(79M)+]，91.0[100，Bn+]；(FAB-)433.1[83，(81M+NBA)1，276.9[84，(79M-H)-]，187.9[100，(81M-H-Bn)-]；HRMS(FAB+)277.99390 C13H1179BrO2計算值277.99424，(FAB+)279.99213 C13H1181BrO2計算值279.99219.該產(chǎn)物使用前無需進(jìn)一步純化。
2-(4-芐氧基-3-溴苯氧基)乙醇(LWO02086)
室溫下，向4-芐氧基-3-溴苯酚(2.0g，7.165mmol)的無水DMF(10mL)溶液中順序加入無水碳酸鉀(1.04g)、2-溴乙醇(990mg，7.523mmol)。在氮氣氛圍中80℃攪拌所產(chǎn)生的懸浮液過夜。冷卻后，加入乙酸乙酯(100mL)，加入乙酸乙酯(100mL)，分出的有機層用鹽水(150mL，4x50mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)，得到一棕色糖漿體(2.51g)。將此粗品通過快速色譜分離(氯仿/乙酸乙酯，6∶1-2∶1梯度)，蒸發(fā)分離的第三餾分，得到2-(4-芐氧基-3-溴苯氧基)乙醇(1.58g，4.880mmol，68％)；Rf 0.49(氯仿/乙酸乙酯，4∶1)，參比物0.68(S.M.)；δH(400MHz，DMSO-d6)3.67(2H，～q，J～5Hz，CH2OH)，3.94(2H，t，J 5.1Hz，CH2CH2OH)，4.86(1H，t，J 5.5Hz，與D2O發(fā)生交換，OH)，5.13(2H，s，CH2O)，6.92(1H，dd，J 3.1和8.9Hz，C 6-H)，7.12(1H，d，J9 Hz，C5-H)，7.19(1H，d，J 3.1Hz，C2-H)和7.30-7.50(5H，m，Bn)；LRMS(FAB+)322.0[45，(79M)+]，91.0[100，Bn+]；(FAB-)475.2[24，(79M+NBA)-]，323.1[100，(81M-H)-]，231.9(100)；HRMS(FAB+)324.01846 C15H1581BrO3計算值324.01841. 2-溴-1-(4-芐氧基-3-溴苯氧基)乙烷(LWO02087)
在冰/水溫度下，向2-(4-芐氧基-3-溴苯氧基)乙醇(1.44g，4.456mmol)的無水二氯甲烷(15mL)溶液中加入四溴化碳(1.88g，5.570mmol)，接著在5分鐘內(nèi)分批加入三苯膦(1.77g，6.684mmol)。在氮氣氛圍中于冰/水溫度下攪拌15分鐘后，蒸發(fā)反應(yīng)混合物，得到淺橙色漿體(5.22g)。將此粗品通過快速色譜分離(氯仿/乙酸乙酯，4∶1)，蒸發(fā)分離出的第一餾分，得到2-溴-1-(4-芐氧基-3-溴苯氧基)乙烷，為淺黃色液體(1.81g，4.688mmol)；Rf 0.79(氯仿/乙酸乙酯，4∶1)，參比物0.32(S.M.)δH(400MHz，DMSO-d6)3.76(2H，t，J 5.5Hz，CH2Br)，4.28(2H，～t，J 4-5Hz，OCH2CH2)，5.14(2H，s，CH2O)，6.96(1H，dd，J 3.1和8.9Hz，C6-H)，7.13(1H，d，J 8.9Hz，C5-H)，7.24(1H，d，J2 7Hz，C2-H)和7.30-7.50(5H，m，Bn)；LRMS(FAB+)385.9[36，M+]，91.0[100，Bn+]；(FAB-)385.0[29，(M-H)-]，231.9(100)；HRMS(FAB+)385.93362 C15H14O279Br81Br計算值385.93401. 4-{[2-(4-芐氧基-3-溴苯氧基)乙基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈(LWO02088)
在冰/水溫度下，向4-([1，2，4]三唑-4-基氨基)芐腈(741mg，4.001mmol)在無水DMF(10mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入氫化鈉(60％，在礦物油中，176mg，4.401mmol)。室溫下，在氮氣氛圍中攪拌10分鐘后，加入2-溴-1-(4-芐氧基-3-溴苯氧基)乙烷(1.70g，4.401mmol)的DMF(5mL)溶液。60℃加熱所得混合物2小時，然后冷卻，加乙酸乙酯(500mL)稀釋。分出的有機層用鹽水(200mL，4x100mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并且蒸發(fā)，得到亮棕色殘留物(2.04g)。該粗品用熱乙酸乙酯重結(jié)晶精制，冷卻得到4-{[2-(4-芐氧基-3-溴苯氧基)乙基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈，為淺米色蓬松粉末(1.20g，2.447mmol，61％)；Rf 0.30(乙酸乙酯)，參比物0.75[2-溴-1-(4-芐氧基-3-溴苯氧基)乙烷]；δH(400MHz，DMSO-d6)4.11(2H，t，J 4-5Hz，CH2N)，4.23(2H，t，J 4-5Hz，CH2O)，5.13(2H，s，CH2O)，6.66(2H，AA′BB′)，6.86(1H，dd，J 2.7和8.9Hz，C6′-H)，7.12(1H，d，J 8.9Hz，C5′-H)，7.16 (1H，d，J 2.7Hz，C2′-H)，7.30-7.48(5H，m，Bn)，7.74(2H，AA′BB′)和8.94(2H，s，C3″-H和C5″-H).實測值C 58.6，H 4.17，N 14.38；C24H20BrN5O2計算值C 58.79，H 4.11，N 14.28％. 4-{[2-(3-溴-4-羥基苯氧基)乙基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈(STX300)和4-{[2-(4-羥基-苯氧基)乙基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈(STX291)(LWO02089)
向4-{[2-(4-芐氧基-3-溴苯氧基)乙基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}芐腈(902mg，1.839mmol)在蒸餾THF(45mL)中的攪拌溶液內(nèi)連續(xù)加入無水乙醇(45mL)和Pd/C(10％，90mg)。然后在氫氣氛(氣囊)下攪拌該黑色混懸液2天。在濾除并用蒸餾過的THF徹底洗滌負(fù)載催化劑之后，蒸發(fā)濾液得到米色殘留物(860mg)。將此粗品在DMF(10mL)中通過快速色譜分離(乙酸乙酯/丙酮，4∶1-丙酮，梯度)，蒸發(fā)分離出的第三餾分，得到乳白色潮濕殘留物，進(jìn)而用乙醚(50mL)研制。過濾所產(chǎn)生的沉淀物，用水徹底洗滌，風(fēng)干過夜，得到灰白色粉末LWO02090(453mg)；Rf 0.40(乙酸乙酯)，參比物0.50(S.M.)；δH(400MHz，DMSO-d6)4.03(～0.4H，t，J 4.6-5.1Hz，STX291的CH2N)，4.06(1.6H，t，J 4.6-5.1Hz，STX300的CH2N)，4.21(2H，t，J4.6-5.1Hz，STX291和STX300的OCH2CH2N)，6.65(～2H，STX291和STX300的AA′BB′of)，6.71(～0.4H，S TX291的AA′BB′)，6.74(～0.8H，dd，J 2.8-3.1和8.8Hz，STX300的C6′～H)，6.85(～0.8H，d，J 8.9Hz，STX300的C5′-H)，7.04(0.8H，d，J 3.1Hz，STX300的C2′-H)，7.74(2H，STX291和STX300的AA′BB′)，8.91(～0.4H，s，STX291的C3″-H和C5″-Hof)，8.93(～1.6H，s，STX300的C3″-H和C5″-H)，8.98(～0.2H，br s，與D2O發(fā)生交換，STX291的OH)和～9.74(-0.8H，br s，與D2O發(fā)生，STX300的OH)。這表明產(chǎn)物含大約20％的STX291；LRMS(FAB+)553.0[18，(79M+H+NBA)+]，475.1[12，(STX291+H+NBA)+]，400.0[100，(79M+H)+]，322.1[85，(STX291+H)+]，252.1[50，(79M-79Br-三唑)+]；(FAB-)552.0[60，(79M+NBA)-]，475.3[32，(STX291+H+NBA)-]，398.1[100，(79M-H)]；HRMS(FAB+)400.04045 C17H1579BrN5O2計算值400.04091，(FAB+)322.12936 C17H16N5O2計算值322.13040. 氨基磺酸2-溴-4-{2-[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]乙氧基}苯基酯(STX301)和氨基磺酸4-{2-[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]乙氧基}苯基酯(STX292)(LWO02090)
室溫下，向LWO02090(289mg，699.5μmol)在無水N，N-二甲基乙酰胺(DMA，10mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入氨基磺酰氯甲苯溶液(約0.59M，4.7mL)，在氮氣氛圍中攪拌所得混合物過夜。然后向反應(yīng)混合物中加入乙酸乙酯(100mL)，分出的有機層用鹽水(100mL，4x50mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)得到白色蓬松殘渣(347mg)。將此粗品在乙酸乙酯中通過硅膠短柱過夜，蒸發(fā)合并的濾液，得到白色蓬松狀LWO02090(310mg，646.8μmol，92.5％)；Rf 0.29(乙酸乙酯)，參比物0.35(S.M.)；δH(400MHz，DMSO-d6)4.14(～0.4H，t，J4.6-5.1Hz，STX292的CH2N)，4.17(～1.6H，t，J 4.7Hz，STX301的CH2N)，4.27(2H，t，J 3.9-4.6Hz，STX292和STX3010的CH2CH2N)，6.68(2H，STX292和STX301AA′BB′)，6.91-6.99(～1.2H，STX292得到AA′BB′and dd以及STX301的C6′-H的混合峰)，7.18(～0.4H，STX292的AA′BB′)，7.25(0.8H，d，J3.1 Hz，STX301的C2′-H)，7.37(～0.8H，d，J8.9Hz，STX301的C5′-H)，7.75(2H，STX292和STX301的AA′BB′)，7.91(～0.4H，br s，與D2O發(fā)生交換，STX292的SO2NH2)，8.16(～1.6H，br s，與D2O發(fā)生交換，STX301的SO2NH2)，8.94(～0.4H，s，STX292的C3″-H和C5″-H)和8.99(～1.6H，s，STX301的C3″-H和C5″-H)這表明產(chǎn)物含大約20％的STX292；LRMS(FAB+)481.0[100，(81M+H)+]，401.1[73，(STX292+H)+]，(FAB-)631.1[35，(79M+NBA)-]，477.1[100，(79M-H)-]，399.1[64，(STX292-H)-]；HRMS(FAB+)479.01430 C17H1579BrN6O4S計算值479.01371，(FAB+)401.10349 C17H17N6O4S計算值401.10320. 6-芐氧基-萘-2-羧酸芐酯(JRL01001)
0℃、氮氣氛下，向NaH(60％，1.37g，34.3mmol)在DMF(40mL)中的攪拌懸浮液內(nèi)加入6-羥基-2-萘甲酸(3.0g，15.6mmol)。攪拌所得到的棕色混合物30分鐘，然后加入芐基溴(5.99g，34.3mmol)。攪拌過夜，然后將反應(yīng)混合物傾入水中，水層用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。合并的有機萃取物用鹽水(4x100mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，蒸發(fā)得粗產(chǎn)物，經(jīng)快速色譜分離(己烷/乙酸乙酯，10∶1)，得到白色固體(4.3g，75％)JRL01001；Rf(己烷/乙酸乙酯，10∶1)0.41；δH(400MHz，CDCl3)5.19(2H，s)，5.41(2H，s)，7.20-7.60(12H，m)，7.74(1H，d，J 8.6Hz)，7.85(1H，d，J 9.0Hz)，8.06(1H，dd，J 1.9和8.6Hz)和8.57(1H，s)；δC(100MHz，CDCl3)67.1(t)，70.5(t)，107.2(d)，120.2(d)，125.5(s)，126.3(d)，127.2(d)，127.5(d)，128.2(s)，128.4(d)，128.5(d)，128.6(d)，128.9(d)，131.2(d)，136.5(s)，136.7(s)，137.4(s)，158.6(s)，166.8(s). (6-芐氧基-萘-2-基)-甲醇(JRL01003)
室溫、氮氣氛下，向LiAlH4(240mg，6.0mmol)的THF(100mL)攪拌懸浮液中加入JRL01001(1.99g，5.4mmol)的THF溶液。攪拌2小時，TLC檢測無起始原料存在，然后蒸發(fā)反應(yīng)混合物。所得殘留物用乙酸乙酯(100mL)處理，有機層用氯化銨稀溶液(50mL)和鹽水(3x50mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，蒸發(fā)。如此得到的粗產(chǎn)物用熱乙醇重結(jié)晶，得白色固體JRL01003(1.16g，81％)；m.p.138.0-138.5℃；Rf 0.26(己烷/乙酸乙酯，2∶1)；δH(400MHz，CDCl3)1.82(1H，t，J 5.9Hz)，4.79(2H，d，J 5.9Hz)，5.16(2H，s)和7.20-7.80(11H，m)；δC(100MHz，CDCl3)65.8(t)，70.3(t)，107.3(d)，119.5(d)，125.7(d)，126.0(d)，127.4(d)，127.7(d)，128.2(d)，128.8(d)，129.1(s)，129.6(d)，134.2(s)，136.2(s)，137.0(s)，157.0(s).實測值C 81.77，H 6.11；C18H16O2計算值C 81.79，H 6.10％.2-芐氧基-6-溴甲基-萘(JRL01006)
0℃、氮氣氛下，向JRL01003(1.29g，4.9mmol)在無水CH2Cl2(60mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入PBr3(1.33g，4.9mmol)。首先形成白色懸浮液，但隨后變成淺黃色混合物。0℃攪拌反應(yīng)混合物2小時，然后在室溫下攪拌1小時，傾入冰/水中。分出有機層，水層用二氯甲烷(3x50mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有機萃取物，蒸發(fā)得到白色固體JRL01006(1.51g，94％)；Rf 0.28(己烷/乙酸乙酯，10∶1)；δH(400MHz，CDCl3)4.65(2H，s)，5.17(2H，s)，7.10-7.30(2H，m)，7.30-7.50(6H，m)和7.68-7.78(3H，m)；LRMS(FAB+)327.9[25，(M+H)+]，247(45)，91.0[100，(Bn+)]. 4-[(6-芐氧基-萘-2-基甲基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(JRL01010)
0℃、氮氣氛下，向NaH(60％，144mg，3.6mmol)的DMF(10mL)攪拌溶液內(nèi)加入4-([1，2，4]三唑-4-基氨基)芐腈(LWO02023，667mg，3.6mmol)/DMF(10mL)。首先產(chǎn)生白色懸浮液/混合物，但隨后變成橙色。在40-50℃、氮氣氛下攪拌1小時后，冷卻反應(yīng)混合物到室溫，加入JRL01006(1.21g，3.7mmol)。溶液在在氮氣氛圍中室溫攪拌過夜，然后用二氯甲烷(100mL)稀釋。有機層用鹽水(4x50mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，蒸發(fā)得到淺黃色固體JRL01010(994mg，64％)；Rf 0.42(乙酸乙酯)；δH(400MHz，CDCl3)5.00(2H，s)，5.20(2H，s)，6.72(2H，AA′BB′)，7.20-7.80(13H，m)和8.10(2H，s)；LRMS(FAB+)432.1[70，(M+H)+]，363.1[50，(M-三唑)+]，247.1(35)，91.0[100，(Bn)+]. 4-[(6-羥基-萘-2-基甲基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]-芐腈(JRL01012，STX335)
攪拌下，向JRL01010(906mg，2.1mmol)的THF/MeOH(1∶1，180mL)溶液內(nèi)加入Pd-C(10％，250mg)。在氫氣氛(氣囊)中攪拌懸浮液過夜，然后通過硅藻土過濾，蒸發(fā)濾液得到灰色粗產(chǎn)物。在熱乙酸乙酯研制，產(chǎn)生淺灰色固體，過濾，干燥得JRL01012(STX335，444mg，62％)；m.p.281-284℃；Rf 0.26(乙酸乙酯)；δH(400MHz，DMSO-d6)5.18(2H，s)，6.80(2H，AA′BB′)，7.07(2H，m)，7.34(1H，d，J 8.2Hz)，7.60-7.70(3H，m)，7.76(2H AA′BB′)，8.80(2H，s)和9.79(1H，s)；LRMS(FAB)342.1[100，(M+H)+]，274.1[37，(M+H-三唑)+]，158.0(25)；HRMS(FAB+)342.13594，C20H16NO計算值342.13549. 氨基磺酸6-{[(4-氰基-苯基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-甲基}-萘-2-基酯(JRL01014，STX336)
氮氣氛下，向JRL01012(181mg，530μmol)的DMA(2mL)攪拌溶液內(nèi)加入氨基磺酰氯(1.2mmol)。室溫攪拌過夜后，將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(30mL)稀釋。有機層然后用鹽水(4x30mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，蒸發(fā)得到JRL01014(STX336，189mg，85％)，為白色固體。取70mg量該固體用丙酮/己烷重結(jié)晶，得到白色結(jié)晶(40mg)；m.p.125-127℃；Rf 0.23(乙酸乙酯)；δH(400MHz，DMSO-d6)5.23(2H，s)，6.80(2H，AA′BB′)，7.42(1H，dd，J 2.3和9.0Hz)，7.55(1H，br dd，J 8.6Hz)，；7.74-7.82(3H，m)，7.85(1H，s)，7.94(2H，m)，8.04(2H，br s，H2NS020)和8.84(2H，s)；LRMS(FAB+)421.1[100，(M+H)+]，352.0[58，(M-三唑)+]，341.1(10)，236.0(25)，158.0(10)；HRMS(FAB+)421.10766，C20H17N6O3S計算值421.10829. 3-芐氧基芐基溴(OBS01018)
采用K.Thakkar等人報道的方法(J.Med.Chem.，1993，36(20)，2950). 0℃下，向3-芐氧基芐醇(4.29g，20mmol)的無水二氯甲烷(90mL)溶液中加入三溴化磷(1.96mL，20.6mmol)。混合物于0℃攪拌2小時，然后室溫攪拌1小時。將反應(yīng)物傾入冰水(400mL)中，任其溫?zé)岬绞覝?。水溶液用Et2O(5x100mL)萃取，并干燥(MgSO4)合并的醚溶液。真空濃縮得到亮黃色油體，放置發(fā)生結(jié)晶，得到無色針狀體OBS01018(4.93g，89％).TLC[SiO2，EtoAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.9；m.p.55-56℃[文獻(xiàn)(石油醚)55℃]；1H-NMR(400MHz，CDCl3)4.44(2H，s)，5.05(2H，s)；6.78(1H，d，J＝2)，6.93(1H，m)，7.22(1H，t，J＝8)，7.40(5H，m). 4-[(3-芐氧基芐基)(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(OBS01019，STX675)
室溫下，向NaH(60％油分散體，0.22g，5.4mmol)的無水DMF(20mL)懸浮液中加入4-[(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(參見LWO02023)(1.0g，5.4mmol)的無水DMF(4mL)溶液，混合物在正向干燥氮氣流下攪拌1小時。橙黃色懸浮液然后用OBS01018(1.57g，5.66mmol)的無水DMF(5mL)溶液處理，室溫攪拌混合物過夜。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，用EtOAc(100mL)稀釋。有機層用水(4x100mL)、鹽水(100mL)洗滌，干燥(MgSO4)。真空濃縮得到一殘留物，進(jìn)而用i-PrOH重結(jié)晶，得白色固體OBS01019(0.58g，28％)。TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.15(藍(lán)色熒光，254nm)；1H-NMR(400MHz，CDCl3)4.85(2H，s)，5.03(2H，s)；6.62(2H，AA′BB′)，6.77(1H，d，J＝7.8)，6.79(1H，d，J＝2.4)，6.96(1H，dd，J＝7.8，2.4)，7.26(1H，t，J＝7.8)，7.34-7.37(5H，m)，7.57(2H，AA′BB′)，8.04(2H，s)；LC-MStR＝6.81min，M+H＝382(Waters 2790Alliance HPLC/ZQ MicroMass光譜儀，帶有采用APCI的PDA檢測器，梯度洗脫5∶95MeCN/H2O-95∶5MeCN/H2O，10mins，然后95∶5MeCN/H2O-5∶95MeCN/H2O，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5，um)，100mm柱)；HPLC(Waters 717+具有PDA檢測器的自動進(jìn)樣器，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5，um)，4.6x150mm柱，90∶10MeOH/H2O)tR＝2.27min(98％純度). 4-[(3-羥基芐基)(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(OBS01022，STX333)
向OBS01019(0.4g，1.05mmol)在THF-MeOH(1∶1)(20mL)中的溶液內(nèi)加入Pd-C(10％，0.24g，2.26mmol)的THF(2mL)漿液，在氫氣氛(氣囊)中攪拌所得懸浮液21小時。懸浮液通過硅藻土過濾，真空濃縮合并的濾液，得棕色殘留物，放置發(fā)生固化。以EtOH重結(jié)晶，得到白色固體OBS01022(STX333)(0.27g，88％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.6；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)4.97(2H，s)，6.68(2H，d，AA′BB′)，6.72-6.75(3H，m)，7.11(1H，m)，7.76(2H，AA′BB′)，8.77(2H，s)，9.49(1H，bs).MS(FAB+)＝292(M+H，100％)，223(M+H-三唑，42)；C16H13N5O的精確質(zhì)譜(計算值，292.1192；實測值，292.1198)；HPLC(Waters 717+帶有PDA檢測器的自動進(jìn)樣器，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5m)，4.6x150mm柱，70∶30MeOH/H2O)tR＝2.22min(92％純度). 4-[(3-O-氨基磺?；S基)(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(OBS01030，STX334)
向OBS01022(100mg，340μmol)的DMA(2mL)冰冷溶液內(nèi)加入氨基磺酰氯(0.59M甲苯溶液，1.2mL，0.69mmol)在DMA(2mL)中的溶液，在氮氣氛圍中攪拌混合物過夜?；旌衔锶缓笥肊tOAc(30mL)稀釋，繼用鹽水(3x100mL)洗滌。干燥(Na2SO4)有機溶液，真空濃縮，得到無色殘留物，放置發(fā)生固化。以丙酮-石油醚(40-60)重結(jié)晶，得到無色固體OBS01030(STX334)(0.06g，47％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.55；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)5.11(2H，s)，6.74(2H，d，J＝8.6)，7.20-7.27(3H，m)，7.40(1H，t，J＝7.8)，7.77(2H，d，J＝8.6)，7.98(2H，br s)，8.81(2H，s).MS(FAB+)＝371(M+H，100％)，302(M+H-三唑，28)；C16H15N6O3S的精確質(zhì)譜(計算值，371.0946；實測值，371.0926)；HPLC(Waters 717+帶有PDA檢測器的自動進(jìn)樣器，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5m)，4.6x150mm柱，70∶30MeOH/H2O)tR＝2.13min(99％純度). 3，4-雙(芐氧基)苯甲醛(OBS01058)
采用A.F.Barrero等人報道的方法(Tetrahedron，1998，54，5635). 向3，4-二羥基苯甲醛(6.9g，50mmol)和碳酸鉀(14.5g)在丙酮(150mL)中的懸浮液內(nèi)加入芐基溴(11.96mL，101mmol)，加熱回流混合物15小時。冷卻反應(yīng)物，真空除去溶劑，得到亮棕色殘留物。將該殘留物再溶于Et2O(200mL)，水洗(3x200mL)，干燥(Na2SO4)。真空濃縮，得到淺黃色固體，進(jìn)而以EtOH重結(jié)晶，得白色粉末OBS01058(13.84g，87％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.7；m.p.93-94℃[文獻(xiàn)(EtOH)93-94℃]；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)5.22(2H，s)，5.28(2H，s)，7.29(1H，d，J＝8.4)，7.30-7.48(10H，m)，7.51(1H，d，J＝2)，7.55(1H，dd，J＝2，8.4)，9.81(1H，s). 3，4-雙(芐氧基)芐醇(OBS01060)
參考文獻(xiàn)L.Lisowski等，Bioorg.Med.Chem.Lett.，200111(16)，2205. 向OBS01058(3.18g，10mmol)的無水THF(50mL)溶液中加入硼氫化鈉(378mg，10mmol)，室溫攪拌混合物4小時。小心加水(小心??！)終止反應(yīng)，通過硅藻土過濾，真空濃縮得到黃色油體。將該油體用MeOH重結(jié)晶，得到無色針狀體OBS01060(2.97g，93％)。TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.45；m.p.65-67℃[文獻(xiàn)(MeOH)65-66℃]；1H-NMR(400MHz，CDCl3)4.58(2H，d，J＝5)，5.16(2H，s)，5.17(2H，s)，6.86(1H，dd，J＝2，8.2)，6.91(1H，d，J＝8.2)，7.00(1H，d，J＝2)，7.29-7.39和7.43-7.47(10H，m)，OH信號太寬，觀測不到。
3，4-雙(芐氧基)芐基溴(OBS01061)
參考文獻(xiàn)K.Thakkar等，J.Med.Chem.，1993，36(20)，2950. 0℃下，向OBS01060(3.20g，10mmol)的無水DCM(45mL)溶液中加入三溴化磷(0.98mL，10.3mmol)?；旌衔镉?℃攪拌2小時，繼而室溫攪拌1小時。將反應(yīng)物傾入冰水(200mL)中，溫?zé)岬绞覝?。水溶液用Et2O(5x50mL)萃取，干燥(MgSO4)合并的乙醚溶液。真空濃縮，得無色油體，放置發(fā)生固化，得到白色固體OBS01061(3.10g，78％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.89；m.p.72-75℃[文獻(xiàn)72-75℃]；1H-NMR(400MHz，CDCl3)4.53(2H，s)，5.15(2H，s)，5.17(2H，s)，6.83(1H，dd，J＝2，8.2)，6.90(1H，d，J＝8.2)，6.99(1H，d，J＝2)，7.52(10H，m). 4-[(3，4-雙(芐氧基)芐基)(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(OBS01066，STX676)
室溫下，向NaH(60％油分散體，0.22g，5.4mmol)的無水DMF(20mL)懸浮液中加入4-[(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(1.0g，5.4mmol)的無水DMF(4mL)溶液，并在氮氣氛圍中攪拌混合物1小時。橙黃色懸浮液然后用OBS01061(2.07g，5.67mmol)的無水DMF(5mL)溶液處理，室溫攪拌混合物過夜。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，用EtOAc(100mL)稀釋。有機層用水(4x100mL)、水(100mL)洗滌，干燥(MgSO4)。真空濃縮所得殘留物用EtOH重結(jié)晶，，得到灰白色固體OBS01066(STX676)(1.66g，63％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.1(藍(lán)色熒光，254nm)；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)4.92(2H，s)，5.06(2H，s)，5.07(2H，s)，6.72-6.76(3H，m)；6.94(1H，d，J＝8.2)，7.01(1H，d，J＝2.2)，7.28-7.42(10H，m)，7.74(2H，AA’BB’)，8.65(2H，s).MS(FAB+)488(M+H，45％)，419(M+H-三唑，21)，91(Bn，100％)；C30H26N5O2的精確質(zhì)譜(計算值488.2096；實測值，488.2087)；LC-MS(Waters 2790 AllianceHPLC/ZQ MicroMass質(zhì)譜儀，帶有PDA檢測器，使用APCI)，tR(梯度洗脫5∶95MeCN/H2O-95∶5MeCN/H2O，10mins，然后95∶5MeCN/H2O-5∶95MeCN/H2O，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5μm)，100mm柱)＝7.68min(M+H＝488)；HPLC(Waters 717+帶有PDA檢測器的自動進(jìn)樣器，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5μm)，4.6x150mm柱，90∶10MeOH/H2O)tR＝2.43min(98％純度)。
4-[(3，4-雙(羥基芐基)(4-氰基苯基)氨基)-4H-[1，2，4]三唑(OBS01067，STX355)
向OBS01066(0.98g，2.01mmol)的THF-MeOH(1∶1)(20mL)溶液中加入Pd-C(10％，0.10g)在THF(2mL)中的漿液，并將混合物在氫氣氛(氣囊)中攪拌24小時。懸浮液通過硅藻土過濾，真空濃縮合并的濾液，得一棕色殘留物。以MeOH重結(jié)晶，得到白色固體OBS01067(STX355)(0.14g，21％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.6；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)4.84(2H，s)，6.50(1H，d，J＝8.2)，6.62(2H，m)，6.75(2H，AA′BB′)，7.75(2H，AA′BB′)，8.68(2H，s)；LC-MS(Waters 2790 Alliance HPLC/ZQ MicroMass光譜儀，帶有PDA檢測器，使用APCI)，tR(梯度洗脫5∶95MeCN/H2O-95∶5MeCN/H2O，10mins，然后95∶5MeCN/H2O-5∶95MeCN/H2O，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5μm)，100mm柱)＝7.68min(M+H＝488)；HPLC(Waters 717+帶有PDA檢測器的自動進(jìn)樣器，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5μm)，4.6x150mm柱，70∶30MeOH/H2O)tR＝3.02min(99％純度). 3-甲氧基-4-芐氧基苯甲醛(OBS01056)
采用A.I.Meyers等人報道的方法(Heterocycles，1989，295). 向香草醛(7.7g，50.67mmol)的EtOH(40mL)溶液中加入碳酸鉀(7.9g，57.35mmol)和芐基溴(6.0mL，50.67mmol)，室溫攪拌混合物過夜。反應(yīng)物通過硅藻土過濾，真空濃縮濾液。將殘留物再溶于DCM(250mL)，用NaOH水溶液(5％w/v，2x100mL)洗滌，并干燥(Na2SO4)有機層。真空濃縮，用EtOH重結(jié)晶所得殘留物，得到白色粉末OBS01056(11.16g，91％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.8；m.p.63-64℃[文獻(xiàn)(MeOH)63-64℃]；1H-NMR(400MHz，CDCl3)3.95(3H，s)，5.25(2H，s)，6.99(1H，m)，7.33-7.45(7H，m)，9.84(1H，s). 3-甲氧基-4-芐氧基芐醇(OBS01063)
采用A.van Oeveran等人報道的方法(J.Org.Chem.，1994，59(20)，5999). 向OBS01056(5.0g，20.64mmol)的無水DCM(25mL)溶液中加入硼氫化鈉(0.97g，25.59mmol)在MeOH(12mL)中的懸浮液，并且室溫攪拌該混合物18小時。將反應(yīng)物傾入水中(50mL)(小心！！)，用DCM(3x50mL)萃取，干燥(MgSO4)。真空濃縮得到白色殘留物。以Et2O-石油醚重結(jié)晶，得到無色針狀OBS01063(4.91g，97％)。TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.49；m.p.72-74℃[文獻(xiàn)(Et2O-石油醚)72-73℃]；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)3.74(3H，s)，4.39(2H，d，J＝5.7)，5.05(2H，s)，5.08(1H，t，J＝5.7，OH)，6.84(1H，dd，J＝2，8.2)，6.91(1H，d，J＝8.2)，7.01(1H，d，J＝2)，7.31-7.46(5H，m). 3-甲氧基-4-芐氧基芐基溴()BS01070)
改進(jìn)A.vanOeveran等(J.Org.Chem.，1994，59(20)，5999)報道的方法。
0℃下，向OBS01063(2.44g，10mmol)的無水DCM(20mL)溶液中加入三溴化磷(0.98mL，10.3mmol)?；旌衔镉?℃攪拌2小時，然后室溫攪拌1小時。將反應(yīng)物傾入冰水(400mL)中，溫?zé)岬绞覝?。水溶液用DCM(5x100mL)萃取，干燥(MgSO4)合并的有機萃取物。真空濃縮得到灰白色殘留物，繼用正己烷重結(jié)晶，得到無色針狀體OBS01070(2.52g，82％)。TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.92；m.p.73-74℃[文獻(xiàn)(石油醚)73℃]；1H-NMR(400MHz，CDCl3)3.91(3H，s)，4.49(2H，s)，5.16(2H，s)，6.81(1H，d，J＝8.2)，6.88(1H，dd，J＝8.2，2)，6.94(1H，d，J＝2)，7.28-7.44(5H，m). 4-[(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(OBS01071，STX677)
室溫下，向NaH(60％油分散體，0.22g，5.4mmol)的無水DMF(20mL)懸浮液中加入4-[(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(1.0g，5.68mmol)的無水DMF(4mL)溶液，在氮氣氛圍中攪拌混合物1小時。橙黃色懸浮液然后用OBS01071(1.66g，5.4mmol)的無水DMF(5mL)溶液處理，室溫攪拌混合物過夜。然后將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，用EtOAc(200mL)稀釋。有機層用水(4x200mL)、鹽水(200mL)洗滌，干燥(MgSO4)。真空濃縮，所得殘留物用i-PrOH重結(jié)晶，得到OBS01071(STX677)，為灰白色粉末(769mg，35％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.15(藍(lán)色熒光，254nm)；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)3.80(3H，s)，4.79(2H，s)，6.64(1H，d，J＝2)，6.66(1H，dd，J＝8.2，2)，6.70(2H，AA′BB′)，6.81(1H，d，J＝8.2)，7.29-7.42(5H，m)，7.59(2H，AA′BB′)，8.06(2H，s)；MS(FAB+)＝412(M+H，100％)，343(40)，275(20)，227(20)；C24H22N5O2的精確質(zhì)譜(計算值412.1779；實測值，412.1773)；LC-MS(Waters2790 Alliance HPLC/ZQ MicroMass光譜儀，帶有PDA檢測器，使用APCI)，tR(梯度洗脫5∶95MeCN/H2O-95∶5MeCN/H2O，10mins，然后95∶5MeCN/H2O-5∶95MeCN/H2O，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5μm)，100mm柱)＝6.61min(M+H＝412)；HPLC(Waters717+帶有PDA檢測器的自動進(jìn)樣器，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5μm)，4.6x150mm柱，90∶10MeOH/H2O)tR＝2.19min(95％純度). 4-[(3-羥基-4-甲氧基芐基)(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(OBS01076，STX362)
向OBS01071(411mg，999μmol)的THF-MeOH(1∶1)(20mL)溶液中加入Pd-C(10％，42mg)在THF(2mL)中的漿液，在氫氣氛(氣囊)中攪拌混合物48小時?；旌衔锿ㄟ^硅藻土過濾，真空濃縮合并的濾液，得到棕色殘留物，放置發(fā)生固化。以i-PrOH重結(jié)晶，得到無色粉末OBS01076(STX362)(232mg，72％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.52；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)3.70(3H，s)，4.90(2H，s)，6.61(1H，dd，J＝7.8，2)，6.65(1H，d，J＝7.8)，6.79(2H，AA′BB′)，6.80(1H，d，J＝2)，7.76(2H，AA′BB′)，8.72(2H，s)，9.06(1H，br s，OH)；MS(FAB+)＝322(M+H，100％)，253(64)；C17H16N5O2的精確質(zhì)譜(計算值322.1303；實測值，322.1304)；HPLC(Waters 717+帶有PDA檢測器的自動進(jìn)樣器，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5μm)，4.6x150mm柱，80∶20MeOH/H2O)tR＝2.59min(95％純度). 4-[(4-甲氧基-3-O-氨基磺?；S基)(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(OBS01135，STX660)
向OBSO1076(100mg，310μmol)的DMA(10mL)冰冷溶液中加入氨基磺酰氯(0.69M甲苯溶液，2.71mL-加入之前真空除去甲苯(水浴溫度不許超過30℃)，8.1mmol)，混合物在氮氣氛圍中攪拌過夜?；旌衔镉肊tOAc(100mL)稀釋，用水(3x100mL)和鹽水(100mL)洗滌。干燥(MgSO4)有機溶液，真空濃縮得到白色殘留物OBS01135(STX660)，后者通過加入正己烷從其EtOAc溶液中析出(40mg，32％)。TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.52；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)3.77(3H，s)，5.06(2H，s)，6.76(2H，AA′BB′)，6.89和6.91(1H，dd，J＝8.2，2.3)，7.08(1H，d，J＝2.3)，7.23(1H，d，J＝8.2)，7.78(2H，AA’BB’)，7.95(2H，s)，8.87(2H，s)；LC-MS(Waters 2790 Alliance HPLC/ZQ MicroMass光譜儀，帶有PDA檢測器，使用APCI)，tR(梯度洗脫5∶95MeCN/H2O-95∶5MeCN/H2O，10mins，然后95∶5MeCN/H2O-5∶95MeCN/H2O，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5μm)，100mm柱)＝4.29min(M+H＝401)；HPLC(Waters 717+帶有PDA檢測器的自動進(jìn)樣器，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5μm)，4.6x150mm柱，80∶20MeOH/H2O)tR＝3.95min(88％純度). 4-甲氧基-3-芐氧基苯甲醛(OBS01054)
采用A.I.Meyer等人報道的方法(Heterocycles，1989，295). 向3-羥基-4-甲氧基苯甲醛(7.7g，50.67mmol)的水(50mL)懸浮液中加入氫氧化鉀(3.4g，60mmol)，攪拌混合物0.25h。然后將這種均相溶液用芐基溴(6.0mL，50.67mmol)處理，加熱回流混合物5小時。反應(yīng)物用DCM(200mL)稀釋，用水(2x100mL)和鹽水(100mL)洗滌，并且干燥(MgSO4)。真空濃縮，繼用EtOH重結(jié)晶所得黃色殘留物，得到OBS01054，為無色粉末(11.28g，92％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.8；m.p.62-63℃[文獻(xiàn)(EtOH)62℃]；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)3.88(3H，s)，5.17(2H，s)，7.21(1H，d，J＝8.2)，7.33-7.49(6H，m)，7.58(1H，d，J＝8.2)，9.83(1H，s). 4-甲氧基-3-芐氧基芐醇()BS01062)
采用A.I.Meyers等人報道的方法(Heterocycles，1989，295). 向OBS01054(5.0g，20.64mmol)的EtOH(60mL)溶液中加入硼氫化鈉(1.23g，32.40mmol)，室溫攪拌混合物18小時。加熱回流反應(yīng)1小時，冷卻，潷析到氯化銨水溶液(50％w/v，250mL)中(小心！！)。水溶液用Et2O(3x100mL)萃取，鹽水(100mL)洗滌，干燥(Na2SO4)。真空濃縮得到白色殘留物。以EtOAc-石油醚重結(jié)晶，得到無色針狀OBS01062(4.91g，97％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.48；m.p.73-74℃[文獻(xiàn)(EtOAc-石油醚)73℃]；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)3.74(3H，s)，4.39(2H，d，J＝5.7)，5.05(2H，s)，5.08(1H，t，J＝5.7，OH)，6.84(1H，dd，J＝2，8.2)，6.91(1H，d，J＝8.2)，7.01(1H，d，J＝2)，7.33-7.49(5H，m). 4-甲氧基-3-芐氧基芐基溴(OBS01068)
采用A.I.Meyers等人報道的方法(Heterocycles，1989，295). 0℃下，向OBS01062(2.44g，10mmol)的無水THF(20mL)溶液中加入三溴化磷(0.98mL，10.3mmol)。0℃攪拌混合物2小時，然后室溫攪拌1小時。真空濃縮得灰白色殘留物，繼用DCM-正己烷重結(jié)晶，得到白色粉末OBS01068(2.95g，96％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.9；m.p.86-88℃[文獻(xiàn)(DCM-己烷)86-87℃]；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)3.74(3H，s)，4.39(2H，s)，5.05(2H，s)，6.83(1H，dd，J＝2，8.2)，6.90(1H，d，J＝8.2)，7.01(1H，d，J＝2)，7.30-7.47(5H，m). 4-[(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(OBS01069)
室溫下，向NaH(60％油分散體，220mg，5.4mmol)的無水DMF(20mL)懸浮液中加入4-[(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(1.0g，5.68mmol)的無水DMF(4mL)溶液，并在氮氣氛圍中攪拌混合物1小時。橙黃色懸浮液然后用OBS01068(1.66g，5.4mmol)的無水DMF(5mL)溶液處理，室溫攪拌混合物過夜。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，用EtOAc(200mL)稀釋。有機層用水(4x200mL)、鹽水(200mL)洗滌，干燥(MgSO4)。真空濃縮，所得殘留物用EtOH重結(jié)晶，得到灰白色粉末OBS01069(970mg，44％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.12(藍(lán)色熒光，254nm)；1H-NMR(400MHz，CDCl3)3.89(3H，s)，4.72(2H，s)，5.12(2H，s)，6.59(2H，AA′BB′)，6.62(1H，d，J＝2)，6.64(1H，dd，J＝7.8，2)，6.79(1H，d，J＝7.8)，7.28-7.34(5H，m)，7.57(2H，AA′BB′)，7.74(2H，s)；MS(FAB+)412(M+H，100％)，343(51)，227(72)；C24H22N5O2的精確質(zhì)譜(計算值，412.1776；實測值，412.1774). 4-[(3-羥基-4-甲氧基芐基)(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(OBS01080，STX363)
向OBS01069(411mg，999μmol)在THF-MeOH(1∶1)(20mL)中的溶液內(nèi)加入Pd-C(10％，42mg)的THF(2mL)漿液，懸浮液在氫氣氛(氣囊)中攪拌48小時。將懸浮液通過硅藻土過濾，真空濃縮合并的濾液，得到棕色殘留物。以i-PrOH重結(jié)晶，得到白色粉末OBS01080(STX363)(164mg，51％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.52；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)3.71(3H，s)；4.88(2H，s)，6.62(1H，dd，J＝8.2，1.95)，6.68(1H，d，J＝1.95)，6.74(2H，AA′BB′)，6.80(1H，d，J＝8.2)，7.74(2H，AA′BB′)，8.70(2H，s)，9.00(1H，s，OH)；MS(FAB+)322(M+H，100％)，253(61)；C17H16N5O2(計算值，322.1304；實測值，322.1304)；HPLC(Waters717+帶有PDA檢測器的自動進(jìn)樣器，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5μm)，4.6x150mm柱，90∶10MeOH/H2O)tR＝2.03min(99％純度)。
4-[(4-甲氧基-3-O-氨基磺?；S基)(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(OBS01137，STX661)
向OBS01080(100mg，310μmol)的DMA(10mL)冰冷溶液中加入氨基磺酰氯(0.69M甲苯溶液，2.71mL-在加料之前先真空除去甲苯(水浴溫度不許超過30℃)，8.1mmol)，在氮氣氛圍中攪拌混合物過夜?；旌衔镉肊tOAc(100mL)稀釋，繼用水(3x100mL)和鹽水(100mL)洗滌。干燥(MgSO4)有機層，真空濃縮，得無色殘留物OBS01137(STX661)，進(jìn)而通過加正己烷從其EtOAc溶液中沉淀析出(40mg，32％)。TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.53；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)3.77(3H，s)；5.00(2H，s)，6.79(2H，AA′BB′)，7.06(1H，d，J＝8.6)，7.12和7.14(1H，dd，J＝8.2，2.3)，7.27(1H，d，J＝2)，7.77(2H，AA’BB’)，7.94(2H，s)，8.75(2H，s)；LC-MS(Waters 2790 Alliance HPLC/ZQ MicroMass光譜儀，帶有PDA檢測器，使用APCI)，tR(梯度洗脫5∶95MeCN/H2O-95∶5MeCN/H2O，10mins，然后95∶5 MeCN/H2O-5∶95 MeCN/H2O，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5μm)，100mm柱)＝4.70min(M+H＝401)；HPLC(Waters 717+帶有PDA檢測器的自動進(jìn)樣器，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5μm)，4.6x150mm柱，80∶20MeOH/H2O)tR＝2.04min(88％純度). 3-溴-4-羥基苯甲醛(OBS01057)
改進(jìn)S.Kelly等人報道的方法(Helv.Chem.Acta.，1989，72，594). 向4-羥基苯甲醛(30.0g，245.67mmol)在冰醋酸(120mL)中的冰冷溶液內(nèi)加入溴(12.6mL，257.61mmol)。室溫攪拌混合物過夜，加水(600mL)稀釋，繼用DCM(3x120mL)萃取。合并的有機餾分用水(600mL)、碳酸氫鈉稀溶液(2x600mL)和鹽水(600mL)洗滌。干燥(Na2SO4)有機層，真空濃縮得到棕色殘留物。以甲苯重結(jié)晶，得到粉棕色結(jié)晶固體OBS01057(26.3g，53％)。TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.6；m.p.124-126℃[文獻(xiàn)(CHCl3)125-126℃]；1H-NMR(400MHz，CDCl3)6.31(1H，s，OH)，7.15(1H，d，J＝8.8)，7.77(1H，dd，J＝8.8，2)，8.04(1H，d，J＝2)，9.83(1H，s，CHO). 3-溴-4-苯甲酰氧基苯甲醛(OBS01072)
向OBS01057(8.0g，40.0mmol)的EtOAc(100mL)溶液中加入NEt3(5.58mL，40.0mmol)，在室溫下攪拌混合物0.5h。然后加入苯甲酰氯(4.64mL，40.0mmol)，室溫攪拌反應(yīng)5h。濾除沉淀物Net3.HCl，干燥(Na2SO4)有機溶液。真空濃縮得到灰色殘留物。以EtOAc-石油醚重結(jié)晶，得到黃色固體OBS01072(10.9g，89％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.82；1H-NMR(400MHz，CDCl3)7.50(1H，d，J＝8.2)，7.54，7.56和7.58(2H，tt，J＝7.4，1.4)，7.68，7.70和7.71(1H，tt，J＝7.4，1.4)，7.91和7.93(1H，dd，J＝8.2，1.8)，8.20(1H，d，J＝1.8)，8.24和8.27(2H，dt，J＝8.2，1.4)，9.98(1H，s，CHO). 3-溴-4-苯甲酰氧基芐醇(OBS01074)
向OBS01072(6.10g，19.99mmol)的無水THF(25mL)溶液中加入硼氫化鈉(1.13g，29.99mmol)，室溫攪拌混合物4小時。小心加入水終止反應(yīng)(小心！！)，通過硅藻土過濾，干燥(MgSO4)。真空濃縮，所得淡黃色油體放置發(fā)生結(jié)晶。以Et2O重結(jié)晶，得到無色針狀3-溴-4-苯甲酰氧基芐醇(5.89g，96％)。TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.5；1H-NMR(400MHz，CDCl3)＝4.71(2H，s)，7.26(1H，d，J＝8.2)，7.36(1H，dd，J＝8.2，1.95)，7.51，7.53和7.55(2H，tt，J＝8.2，1.6)，7.64-7.68(2H，m)，8.24(1H，t，J＝1.95)，8.26(1H，t，J＝1.95). 3-溴-4-苯甲酰氧基芐基溴(OBS01089)
0℃下，向OBS01074(3.07g，10.0mmol)的無水二氯甲烷(45mL)溶液中加入三溴化磷(0.98mL，10.3mmol)?；旌衔镉?℃攪拌2小時，然后室溫攪拌1小時。將反應(yīng)物傾入冰水(400mL)中，自然溫?zé)岬绞覝?。水溶液用乙?5x100mL)萃取，干燥(MgSO4)合并的乙醚溶液。真空濃縮得到黃色油體。通過重力柱層析純化[SiO2，EtOAc-石油醚(1∶7)]，得到無色針狀OBS01089(3.22g，87％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.87；1H-NMR(400MHz，CDCl3)4.47(2H，s)，7.27(1H，d，J＝8.6)，7.41(1H，dd，J＝8.6，2.3)，7.52，7.54和7.56(2H，tt，J＝8.2，1.56)，7.66，7.67和7.69(1H，tt，J＝8.2，1.56)，7.70(1H，d，J＝2.3)，8.24(1H，t，J＝1.2)，8.26(1H，t，J＝1.2). 4-[(4-苯甲酰氧基-3-溴芐基)(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(OBS01131)
室溫下，向NaH(60％油分散體，220mg，5.4mmol)在無水DMF(20mL)中的懸浮液內(nèi)加入4-[(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(1.0g，5.68mmol)的無水DMF(4mL)溶液，并在氮氣氛圍中攪拌混合物1小時。橙黃色懸浮液然后用OBS01089(2.00g，5.4mmol)的無水DMF(5mL)溶液處理，室溫攪拌混合物過夜。然后將混合物移到分液漏斗內(nèi)，用EtOAc(200mL)稀釋。有機層用水(4x200mL)、鹽水(200mL)洗滌，干燥(MgSO4)。真空濃縮，所得殘留物用i-PrOH重結(jié)晶，得到無色固體OBS01131(1.99g，78％).TLC[SiO2，EtOAc(100％)]Rf＝0.5(藍(lán)色熒光，254nm)；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)5.14(2H，s)，6.75(1H，t，J＝2.7)，6.78(1H，t，J＝2.7)，7.44(2H，d，J＝8.2)，7.61-7.66(2H，m)，7.76-7.80(4H，m)，8.14(1H，t，J＝2.7)，8.16(1H，t，J＝2.7)，8.92(2H，s)；MS(FAB+)474(M，100％)，405(38)；C23H16N5O2Br的精確質(zhì)譜(計算值，474.0569；實測值，474.0566). 4-[(3-溴-4-羥基芐基)(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(OBS01132，STX405)
向OBS01131(2.0g，4.22mmol)的MeOH(10mL)懸浮液中加入氫氧化鉀(1.42g，25.3mmol)，室溫攪拌混合物2小時。真空除去溶劑，堿性漿液的pH通過用飽和碳酸氫鈉溶液處理調(diào)節(jié)到～pH6-7。濾出無色沉淀物，用少量冷水洗滌，在異丙醇中煮沸，得到無色粉末OBS01091(STX405)(1.20g，77％)。TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.43；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)4.93(2H，s)，6.77(2H，AA′BB′)，6.85(1H，d，J＝8.2)，7.06(1H，dd，J＝8.2，1.95)，7.41(1H，d，J1.95)，7.76(2H，AA′BB′)，8.76(2H，s)，10.35(1H，br s，OH)；MS(FAB+)370(M，100％)，301(55)，260(67)，242(64)；C16H12N5OBr(計算值，370.0314；實測值，370.0304)；HPLC(Waters 717+帶有PDA檢測器的自動進(jìn)樣器，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5um)，4.6x150mm柱，94∶6MeOH/H2O)tR＝2.73min(96％純度). 4-[(3-溴-4-O-氨基磺?；S基)(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(OBS01141，STX681)
向OBS01132(500mg，1.35mmol)的DMA(10mL)冰冷溶液中加入氨基磺酰氯(69M甲苯溶液，11.7mL-在加料之前先真空除去甲苯(水浴溫度不許超過30℃)，8.1mmol)，在氮氣氛圍中攪拌混合物過夜?；旌衔镉肊tOAc(100mL)稀釋，繼用水(3x100mL)和鹽水(100mL)洗滌。干燥(MgSO4)有機層，真空濃縮，得到無色殘留物，進(jìn)而通過加正己烷從其EtOAc溶液中沉淀析出(463mg)。然后取白色固體(200mg)通過梯度洗脫重力柱色譜純化[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶4)-EtOAc(100％)]，得到OBS01141(STX)，為白色固體(107mg，層析后44％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.42；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)5.17(2H，s)，6.80(2H，AA′BB′)，7.50(2H，s)，7.78(1H，s)，7.84(2H，AA′BB′)，8.38(2H，s)，8.96(2H，s)；MS(FAB+)412(M+H，100％)，343(40)，275(20)，227(20)；C24H22N5O2(計算值，412.1779；實測值，412.1773)；LC-MS(Waters 2790AllianceHPLC/ZQ MicroMass光譜儀，帶有PDA檢測器，使用APCI)，tR(梯度洗脫5∶95MeCN/H2O-95∶5MeCN/H2O，10mins，然后95∶5 MeCN/H2O-5∶95 MeCN/H2O，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5μm)，100mm柱)＝5.52min(M+H＝448)；HPLC(Waters717+帶有PDA檢測器的自動進(jìn)樣器，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5μm)，4.6x150mm柱，90∶10MeOH/H2O)tR＝1.89min(99％純度).HPLC不能區(qū)別OBS01091(STX405)與OBS01141(STX681).LC-MS/1H-NMR表明OBS01141(STX681)[M+H]＝450的樣品含大約6.66％的起始原料OBS01091(STX 405)[M+H]＝371. 4-[(2-溴-乙基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]-芐腈(CAB03031)
室溫下，向4-([1，2，4]三唑-4-基氨基)-芐腈(926mg，5.0mmol)的DMSO(25mL)溶液中加入氫化鈉(60％，240mg，6.0mmol)?；旌衔镌谠摐囟认聰嚢?小時，加入1，2-二溴乙烷(5mL)。攪拌反應(yīng)混合物過夜，加入乙酸乙酯(100mL)。然后將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，用水(兩次，100mL)和鹽水(20mL)萃取。有機層用硫酸鈉干燥，減壓濃縮(水浴溫度＜30℃)。將所得橙色油體與乙醚(100mL)混合，通過硅膠層(約5cm)過濾。硅膠再用乙醚(約100mL)洗滌以除去過量的1，2-二溴乙烷；粗產(chǎn)物用丙酮(120mL)從硅膠上洗滌下來。減壓濃縮丙酮溶液，殘留物通過柱層析純化(洗脫劑乙酸乙酯)，得到白色固體標(biāo)題化合物。收率628mg(43％).1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝3.61(t，J＝6.2Hz，2H)，4.30(t，J＝6.4Hz，2H)，6.64(d，J＝9.0Hz)，7.74(d，9.0Hz，2H)，8.97(s，2H).LRMS(FAB+)292.0(100，[M+H]+). 4-{[2-(4-羥基-苯硫基)-乙基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}-芐腈(CAB02137，STX456)
室溫攪拌由4-[(2-溴-乙基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(CAB03031，146mg，0.50mmol)、4-羥基苯硫酚(126mg，1.0mmol)和碳酸鉀(138mg，1.0mmol)以及DMF(10mL)組成的混合物過夜。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，加入乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)。分出有機層，用鹽水(30mL)洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮。殘留物用甲醇重結(jié)晶。收率116mg(69％)，無色結(jié)晶。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝2.99(t，J＝7.0Hz，2H)，3.93(t，J＝7.0Hz，2H)，6.48(d，J＝9.0Hz，2H)，6.73(d，J＝8.6Hz，2H)，7.21(d，J＝8.6Hz，2H)，7.68(d，J＝9.0Hz，2H)，8.89(s，2H)，9.66(s，1H，-OH).13C-NMR(100MHz，d6-DMSO)δ＝30.62，53.07，102.92，113.36，116.86，119.59，122.71，134.07，134.49，144.07，151.17，157.83.LRMS(FAB+)338.2(100，[M+H]+).實測值C 60.6，H 4.57，N 20.6％；C17H15N5OS(337.4)計算值C 60.52，H 4.48，N 20.76％. 4-{[2-(3-羥基-苯硫基)-乙基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}-芐腈(CAB02149，STX512)
將4-[(2-溴-乙基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(CAB02148＝CAB03031，146mg，0.50mmol)、3-(叔丁基-二甲基甲硅烷氧基)苯硫酚(240mg，1.0mmol)和碳酸鉀(276mg，2.0mmol)以及DMF(10mL)組成的混合物在室溫下攪拌48小時。然后將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，加入乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)。分出有機層，用鹽水(30mL)洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮。殘留物用甲醇重結(jié)晶。收率93mg(55％)，無色結(jié)晶。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝3.14(t，J＝7.0Hz，2H)，4.02(t，J＝7.0Hz，2H)，6.53(d，J＝9.0Hz，2H)，6.62(ddd，J＝7.8，2.0，0.8Hz，1H)，6.70-6.72(m，2H)，7.10(dd，J＝7.8，7.8，1H)，7.70(d，J＝9.0Hz，2H)，8.94(s，2H)，9.60(s，1H，-OH).13C-NMR(100MHz，d6-DMSO)δ＝29.53，52.46，102.38，113.57，115.36，119.00，130.11，133.94，135.82，143.50，150.71，157.90，169.59.LRMS(FAB+)338.2(100，[M+H]+).實測值C 60.6，H 4.53，N 20.6％；C17H15N5OS(337.4)計算值C 60.52，H 4.48，N 20.76％. 4-[(3-溴-丙基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]-芐腈(CAB02180，STX595)
室溫下，向4-([1，2，4]三唑-4-基氨基)-芐腈(926mg，5.0mmol)的DMSO(25mL)溶液中加入氫化鈉(60％，240mg，6.0mmol)。在該溫度下攪拌混合物1小時，加入1，3-二溴丙烷(5mL)。攪拌反應(yīng)混合物過夜，加入乙酸乙酯(100mL)。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，用水(兩次，100mL)和鹽水(20mL)萃取。有機層用硫酸鈉干燥，減壓濃縮(水浴溫度＜30℃)。將得到的橙色油體與乙醚(100mL)混合，通過硅膠層(約5cm)過濾。硅膠用更多量的乙醚(約100mL)洗滌以除去過量的1，3-二溴丙烷，粗產(chǎn)物用丙酮(120mL)從硅膠上洗滌下來。減壓濃縮丙酮溶液，殘留物用柱色譜純化(洗脫劑乙酸乙酯)，得白色固體標(biāo)題化合物。收率792mg(52％).1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝2.01(tt，J＝7.0，6.6Hz，2H)，3.64(t，J＝6.6Hz，2H)，3.95(t，J＝7.0Hz，2H)，6.62(d，J＝9.0Hz，2H)，7.74(d，J＝9.0Hz，2H)，9.02(s，2H).13C-NMR(100MHz，d6-DMSO)δ＝30.38，32.13，52.72，103.17，113.83，119.74，134.63，144.14，151.65.LRMS(FAB+)306.0(100，[M+H]+). 4-{[3-(4-羥基-苯硫基)-丙基]-[1，2，4]三唑-4-基-氨基}-芐腈(CAB0182，STX596)
室溫攪拌由4-[(2-溴-丙基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(CAB02180，146mg，0.50mmol)、4-羥基苯硫酚(240mg，1.0mmol)和碳酸鉀(276mg，2.0mmol)以及DMF(10mL)組成的混合物共計48小時。然后將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，加入乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)。分出有機層，用鹽水(30mL)洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮。殘留物通過柱層析純化(洗脫劑乙酸乙酯，Rf0.31)，得到黃色油體，進(jìn)而用甲醇結(jié)晶。收率211mg(60％)，無色結(jié)晶。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.64(tt，J＝7.0，7.0Hz，2H)，2.89(t，J＝7.0Hz，2H)，3.92(t，J＝7.0Hz，2H)，6.57(d，J＝9.0Hz，2H)，6.72(d，J＝9.0Hz，2H)，7.20(d，J＝9.0Hz，2H)，7.71(d，J＝9.0Hz，2H)，8.96(s，2H)，9.59(s，1H，-OH).LRMS(FAB+)352.1(100，[M+H]+). 氨基磺酸4-{3-[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]-丙硫基}-苯基酯(CAB02184，STX597)
減壓濃縮(30℃水浴溫度)氨基磺酰氯的甲苯溶液(3mL，0.7M，2.1mmol)到大約0.5mL體積。冷卻殘留物到0℃(冰浴)，加入N，N-二甲基乙酰胺(5mL)。向所形成的無色溶液中加入4-{[3-(4-羥基-苯硫基)-丙基]-[1，2，4]三唑-4-基-氨基}-芐腈(CAB02182，140mg，0.40mmol)，室溫攪拌混合物18小時。向溶液中加入乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)，分出有機層，用水(2x30mL)和鹽水(20mL)洗滌，硫酸鈉干燥，并減壓濃縮。將殘留物溶于少量丙酮中，加己烷進(jìn)行沉淀。濾出沉淀物，在高真空下干燥。收率139mg(81％)，亮黃色粉末。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.74(tt，J＝7.0，7.0Hz，2H)，3.97(t，J＝7.0Hz，2H)，6.62(d，J＝9.0Hz，2H)，7.22(d，J＝8.6Hz，2H)，7.43(d，J＝8.6Hz，2H)，7.74(d，J＝9.0Hz，2H)，8.03(s，2H，-NH2)，9.00(s，2H).LRMS(FAB+)431.1(100，[M+H]+). 4-[(4-溴-丁基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]芐腈(CAB03001，STX602)
室溫下，向4-([1，2，4]三唑-4-基氨基)-芐腈(926mg，5.0mmol)的DMSO(25mL)溶液中加入氫化鈉(60％，240mg，6.0mmol)。在該溫度下攪拌混合物1小時，加入1，4-二溴丁烷(5mL，約42mmol)。攪拌反應(yīng)混合物過夜，加入乙酸乙酯(100mL)。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，用水(兩次，100mL)和鹽水(20mL)萃取。有機層用硫酸鈉干燥，減壓濃縮(水浴溫度＜30℃)。將得到的橙色油體與乙醚(100mL)混合，通過硅膠層(約5cm)過濾。硅膠用更多量的乙醚(約100mL)洗滌以除去過量的1，4-二溴丁烷，粗產(chǎn)物用丙酮(120mL)從硅膠上洗滌下來。減壓濃縮丙酮溶液，殘留物用柱色譜純化(洗脫劑乙酸乙酯)，得白色固體標(biāo)題化合物。收率984mg(61％).1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.53-1.60(m，2H)，1.87-1.94(m，2H)，3.56(t，J＝6.6Hz，2H)，3.87(t，J＝7.4Hz，2H)，6.64(d，J＝9.0Hz，2H)，7.73(d，J＝9.0Hz，2H)，8.99(s，2H).LRMS(FAB+)320.0(100，[M+H]+). 4-{[4-(4-羥基苯硫基)-丁基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}-芐腈(CAB03007)
向4-[(2-溴-丁基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(CAB03001，384mg，1.2mmol)和4-羥基苯硫酚(227mg，1.8mmol)在DMF(20mL)中的溶液內(nèi)加入碳酸鉀(500mg)。室溫攪拌混合物18小時，加乙酸乙酯(100mL)稀釋，用水(兩次，30mL)和鹽水(30mL)萃取，有機層用硫酸鈉干燥，減壓濃縮。殘留物通過柱色譜純化(洗脫劑乙酸乙酯，Rf0.30)。將所得油體溶在少量乙酸乙酯中，產(chǎn)物通過加入己烷沉淀。收率289mg(66％)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.48-1.64(m，4H)2.81(t，J＝6.6Hz，2H)，3.81(t，J＝6.8Hz，2H)，6.62(d，J＝9.0Hz，2H)，6.72(d，J＝8.6Hz，2H)，7.19(d，J＝9.0Hz，2H)，7.72(d，J＝9.0，2H)，8.94(s，2H)，9.56(s，1H，-OH).LRMS(FAB+)366.1(100，[M+H]+). 4-[(5-溴-戊基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(CAB03005)
室溫下，向4-([1，2，4]三唑-4-基氨基)-芐腈(926mg，5.0mmol)的DMSO(25mL)溶液中加入氫化鈉(60％，240mg，6.0mmol)。在該溫度下攪拌混合物1小時，加入1，5-二溴戊烷(5mL)。攪拌反應(yīng)混合物過夜，加入乙酸乙酯(100mL)。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，用水(兩次，100mL)和鹽水(20mL)萃取。有機層用硫酸鈉干燥，減壓濃縮(水浴溫度＜30℃)。將得到的橙色油體與乙醚(100mL)混合，通過硅膠層(約5cm)過濾。硅膠用更多量的乙醚(約100mL)洗滌以除去過量的1，5-二溴戊烷，粗產(chǎn)物用丙酮(120mL)從硅膠上洗滌下來。減壓濃縮丙酮溶液，殘留物用柱色譜純化(洗脫劑乙酸乙酯)，得白色固體標(biāo)題化合物。收率1.01g(60％).1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.40-1.52(m，2H)，1.75-1.85(m，2H)，3.52(t，J＝6.6Hz，2H)，3.78-3.89(m，2H)，6.64(d，J＝9.0Hz，2H)，7.72(d，J＝9.0Hz，2H)，8.97(s，2H).LRMS(FAB+)334.1(100，[M+H]+). 4-{[5-(4-羥基苯硫基)-戊基]-[1，2，4]三唑-4-基-氨基}-芐腈(CAB03014，STX698)
室溫攪拌由4-[(2-溴-戊基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(CAB03005，500mg，1.5mmol)、4-羥基苯硫酚(378mg，3.0mmol)和碳酸鉀(414mg，3.0mmol)以及DMF(10mL)組成的混合物共計12小時。然后將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，加入乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)。分出有機層，用鹽水(30mL)洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮。殘留物通過柱色譜純化(洗脫劑乙酸乙酯，Rf0.43)。將所得黃色油體溶解在乙酸乙酯中，加己烷進(jìn)行沉淀，得亮黃色粉末。收率338mg(59％)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.40-1.54(m，6H)，2.77(t，J＝6.8Hz，2H)，3.79(t，J＝6.6Hz，2H)，6.61(d，J＝9.0Hz，2H)，6.72(d，J＝9.0Hz，2H)，7.20(d，J＝9.0Hz，2H)，7.72(d，J＝9.0Hz，2H)，8.96(s，2H)，9.55(s，1H.-OH).13C-NMR(100MHz，d6-DMSO)δ＝25.66，26.67，29.35，35.56，53.86，103.06，113.89，116.80，119.84，124.54，133.39，134.47，144.09，151.89，157.26.LRMS(FAB+)380.0(100，[M+H]+).HRMS(FAB+)380.15355 C20H22N5OS計算值380.154507. 氨基磺酸4-{5-[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-戊硫基}苯基酯(CAB03025，STX699)
減壓濃縮(30℃水浴溫度)氨基磺酰氯的甲苯溶液(3mL，0.7M，2.1mmol)到大約0.5mL體積。冷卻殘留物到0℃(冰浴)，加入N，N-二甲基乙酰胺(5mL)。向所形成的無色溶液中加入4-{[3-(4-羥基-苯硫基)-戊基]-[1，2，4]三唑-4-基-氨基}-芐腈(CAB03104，95mg，0.25mmol)，室溫攪拌混合物18小時。向溶液中加入乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)，分出有機層，用水(2x30mL)和鹽水(20mL)洗滌，硫酸鈉干燥，并減壓濃縮。將殘留物溶于少量丙酮中，加己烷進(jìn)行沉淀。濾出沉淀物，在高真空下干燥。收率103mg(90％)，亮黃色粉末。1H-NMR(270MHz，d6-DMSO)δ＝1.35-1.63(m，6H)，2.95(t，J＝7.0Hz，2H)，3.75-3.85(m，2H)，6.62(d，J＝9.0Hz，2H)，7.20(d，J＝9.0Hz，2H)，7.37(d，J＝9.0Hz，2H)，7.71(d，J＝9.0Hz，2H)，7.99(s，2H，-NH2)，8.96(s，2H).LRMS(FAB+)459.1(100，[M+H]+). 4-[(10-溴-癸基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(CAB03008)
室溫下，向4-([1，2，4]三唑-4-基氨基)-芐腈(926mg，5.0mmol)的DMSO(25mL)溶液中加入氫化鈉(60％，240mg，6.0mmol)。在該溫度下攪拌混合物1小時，加入1，10-二溴癸烷(5mL)。攪拌反應(yīng)混合物過夜，加入乙酸乙酯(100mL)。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，用水(兩次，100mL)和鹽水(20mL)萃取。有機層用硫酸鈉干燥，減壓濃縮(水浴溫度＜30℃)。將得到的橙色油體與乙醚(100mL)混合，通過硅膠層(約5cm)過濾。硅膠用更多量的乙醚(約100mL)洗滌以除去過量的1，10-二溴癸烷，粗產(chǎn)物用丙酮(120mL)從硅膠上洗滌下來。減壓濃縮丙酮溶液，殘留物通過柱色譜純化(洗脫劑乙酸乙酯)，得淺黃色固體標(biāo)題化合物。收率1.32g(65％).1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.16-1.40(m，14H)，1.76(tt，J＝7.0，7.0Hz，2H)，3.50(t，J＝6.6Hz，2H)，3.79(t，J＝7.0Hz，2H)，6.61(d，J＝9.0Hz，2H)，7.70(d，J＝9.0Hz，2H)，8.95(s，2H). 4-{[10-(4-羥基苯硫基)-癸基]-[1，2，4]三唑-4-基-氨基}-芐腈(CAB03011，STX625)
室溫攪拌由4-[(2-溴-癸基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(CAB03008，607mg，1.5mmol)、4-羥基苯硫酚(378mg，3.0mmol)和碳酸鉀(414mg，3.0mmol)以及DMF(10mL)組成的混合物共計12小時。然后將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，加入乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)。分出有機層，用鹽水(30mL)洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮。殘留物通過柱色譜純化(洗脫劑乙酸乙酯，Rf0.71)。將所得黃色油體溶解在丙酮中，加己烷進(jìn)行沉淀，得亮黃色粉末。收率401mg(59％)。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.16-1.52(m，16H)，2.76(t，J＝7.2Hz，2H)，3.80(t，J＝7.2Hz，2H)，6.62(d，J＝9.0Hz，2H)，6.72(d，J＝8.6Hz，2H)，7.19(d，J＝8.6Hz，2H)，7.72(d，J＝9.0Hz，2H)，8.97(s，2H)，9.53(s，1H，OH).LRMS(FAB+)450.2(100，[M+H]+).HRMS(FAB+)450.23208 C25H32N5OS計算值450.232758. 氨基磺酸4-{10-[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-癸硫基}苯基酯(CAB03012，STX655)
減壓濃縮(30℃水浴溫度)氨基磺酰氯的甲苯溶液(3mL，0.7M，2.1mmol)到大約0.5mL體積。冷卻殘留物到0℃(冰浴)，加入N，N-二甲基乙酰胺(5mL)。向所形成的無色溶液中加入4-{[3-(4-羥基-苯硫基)-癸基]-[1，2，4]三唑-4-基-氨基}-芐腈(CAB03011，100mg，0.22mmol)，室溫攪拌混合物18小時。向溶液中加入乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)，分出有機層，用水(2x30mL)和鹽水(20mL)洗滌，硫酸鈉干燥，并減壓濃縮。將殘留物溶于少量丙酮中，加己烷進(jìn)行沉淀。濾出沉淀物，在高真空下干燥。收率104mg(88％)，亮黃色粉末。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.20-1.41(m，14H)，1.56(tt，J＝7.0Hz，2H)，2.96(t，J＝7.0Hz，2H)，3.80(t，J＝7.0Hz，2H)，6.62(d，J＝9.0Hz，2H)，7.21(d，J＝9.0Hz，2H)，7.37(d，J＝9.0Hz，2H)，7.71(d，J＝9.0Hz，2H)，7.99(s，2H，-NH2)，8.95(s，2H).LRMS(FAB+)529.2(100，[M+H]+).HRMS(FAB+)529.20425 C25H33N6O3S2計算值529.205558. 4-芐氧基-3，5-二氯-苯甲酸甲酯(CAB02115)
室溫攪拌3，5-二氯-4-羥基苯甲酸甲酯(5.525g，25mmol)、芐基溴(5.13g，30mmol)和碳酸鉀(6.91g，50mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(100mL)中的混合物過夜。將反應(yīng)混合物倒入碎冰(約300g)中，產(chǎn)物用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。合并的有機層用硫酸鈉干燥，減壓濃縮。固體殘渣用乙酸乙酯和己烷重結(jié)晶。收率7.47g(96％)，白色細(xì)小針狀體。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝3.93(s，3H，-OCH3)，5.12(s，2H，-CH2Ph)，7.35-7.44(m，3H)，7.54-7.58(m，2H)，8.01(s，2H).13C-NMR(100MHz，CDCl3)δ＝52.66，75.12，127.18，128.41，128.48，129.79，130.13，135.57，154.57，164.39. (4-芐氧基-3，5-二氯-苯基)-甲醇(CAB02117)
利用注射器將4-芐氧基-3，5-二氯苯甲酸甲酯(CAB02115，7.20g，23.14mmol)的THF(20mL)溶液緩慢加到氫化鋁鋰(1.50g，39.5mmol)在THF(40mL)中的懸浮液內(nèi)。在室溫下攪拌混合物30分鐘，然后小心加2N氫氧化鈉水溶液終止反應(yīng)。攪拌20分鐘后，混合物的顏色由灰色變?yōu)榘咨V出白色沉淀物，濾液用硫酸鈉干燥，繼而減壓濃縮。殘留物用二氯甲烷/己烷重結(jié)晶。收率5.83g(89％)，白色粉末.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝1.85(t，J＝5.9Hz，1H，-OH)，4.63(d，J＝5.9Hz，2H)，5.04(s，2H)，7.33(s，2H)，7.35-7.44(m，3H)，7.55-7.59(m，2H).13C-NMR(100MHz，CDCl3)δ＝64.05，75.03，127.36，128.70，128.75，129.91，136.39，138.64，150.32. 2-芐氧基-5-溴甲基-1，3-二氯-苯(CAB02118)
0℃下，向(4-芐氧基-3，5-二氯苯基)-甲醇(CAB02117，5.50g，19.4mmol)的二氯甲烷(80mL)溶液中加入三溴化磷(2mL)?；旌衔镌诖藴囟认聰嚢?小時，加乙醚(150mL)稀釋，然后轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，用水(2x50mL)和鹽水(50mL)洗滌。有機層用硫酸鎂干燥，進(jìn)而減壓濃縮。殘留物用二氯甲烷/己烷重結(jié)晶。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝4.39(s，2H，-CH2Br)，5.05(s，2H，-CH2Ph)，7.37(s，2H)，7.38-7.44(m，3H)，7.54-7.58(m，2H).13C-NMR(100MHz，CDCl3)8＝31.48，75.39，128.73，129.68，129.70，129.72，130.06，135.46，136.27，151.23. 4-[(4-芐氧基-3，5-二氯芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]芐腈(CAB02119，STX434)
在室溫下，向4-([1，2，4]三唑-4-基氨基)-芐腈(926mg，5.0mmol)的DMF(20mL)溶液中加入氫化鈉(60％，200mg，5.0mmol)。在該溫度下攪拌混合物1小時，加入2-芐氧基-5-溴甲基-1，3-二氯-苯(CAB02118，1.73g，5.0mmol)。攪拌反應(yīng)混合物過夜，加入乙酸乙酯(75mL)。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，用水(2x100mL)和鹽水(20mL)洗滌。有機層用硫酸鈉干燥，減壓濃縮。將殘留物懸浮在2-丙醇(20mL)中，加熱回流5分鐘。冷卻到室溫后濾出白色固體，在高真空下干燥。收率1.76g(78％). 1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝5.00(s，2H)，5.07(s，2H)，6.74(d，J＝9.0Hz，2H)，7.36-7.44(m，3H)，7.47-7.50(m，2H)，7.50(s，2H)，7.77(d，J＝9.0Hz，2H)，8.92(s，2H).13C-NMR(100MHz，CDCl3)δ＝55.94，74.59，102.96，113.61，118.80，128.21，128.27，128.63，128.81，133.29，133.75，135.69，143.13，149.62，150.88.LRMS(FAB+)450.1(100，[M+H]+). 4-[(3，5-二氯-4-羥基-芐基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(CAB02120，STX435)
向4-[(4-芐氧基-3，5-二氯-芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]-芐腈(CAB02119，1.13g，2.50mmol)在MeOH/THF/EtoAc(30mL/30mL/40mL)中的溶液內(nèi)加入鈀-碳(100mg，10％Pd)?；旌衔镌跉錃?氣囊)氛圍中室溫攪拌18小時。反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，并減壓濃縮所得清亮無色濾液。將殘留物懸浮在2-丙醇(20mL)中，加熱回流5分鐘。冷卻到室溫后濾出白色固體，在高真空下干燥。收率306g(34％).1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝4.97(s，2H，-CH2Ar)，6.76(d，J＝9.0Hz，2H)，7.31(s，2H)，7.77(d，J＝9.0Hz，2H)，8.85(s，2H)，10.29(s，1H，-OH).13C-NMR(100MHz，CDCl3)δ＝56.57，103.76，114.55，119.69，122.89，128.14，129.46，134.58，144.03，149.46，151.85.LRMS(FAB+)360.0(100，[M+H]+). 4-芐氧基-3-氯-苯甲酸甲酯(CAB02121)
室溫攪拌3-氯-4-羥基苯甲酸甲酯(4.665g，25mmol)、芐基溴(5.13g，30mmol)和碳酸鉀(6.91g，50mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(50mL)中的混合物過夜。將反應(yīng)混合物倒入碎冰(約300g)中，產(chǎn)物用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。合并的有機層用硫酸鈉干燥，并減壓濃縮。將殘留物溶于二氯甲烷，加己烷進(jìn)行沉淀。收率6.47g(94％)，白色粉末。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝3.90(s，3H，-OCH3)，5.23(s，2H，-CH2Ar)，6.99(d，J＝9.0Hz，1H)，7.31-7.48(m，5H)，7.89(dd，J＝9.0，2.3Hz，1H)，8.08(d，J＝2.3Hz，1H). (4-芐氧基-3-氯-苯基)-甲醇(CAB02127)
利用注射器將4-芐氧基-3-氯苯甲酸甲酯(CAB02121，4.15g，15.0mmol)的THF(30mL)溶液緩慢加到氫化鋁鋰(1.0g，26.3mmol)在THF(30mL)中的懸浮液內(nèi)。在室溫下攪拌混合物30分鐘，然后小心加2N氫氧化鈉水溶液終止反應(yīng)。攪拌20分鐘后，混合物的顏色由灰色變?yōu)榘咨V出白色沉淀物，濾液用硫酸鈉干燥，繼而減壓濃縮，得無色油體，其無需進(jìn)一步純化而直接使用。收率3.61g(97％)，1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝2.12(s，1H，-OH)，4.56(s，2H)，5.16(s，2H)，6.93(d，J＝8.6Hz，1H)，7.14(dd，J＝8.6，2.3Hz，1H)，7.31-7.48(m，6H). 1-芐氧基-4-溴甲基-2-氯-苯(CAB02128)
0℃下，向(4-芐氧基-3-氯苯基)-甲醇(CAB02127，3.40g，13.7mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中加入三溴化磷(2mL)。在此溫度下攪拌混合物2小時，加乙醚(100mL)稀釋，然后轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，用水(50mL)和鹽水(50mL)洗滌。有機層用硫酸鎂干燥，進(jìn)而減壓濃縮，得到分析純白色固體。收率4.27g(100％).1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝4.44(s，2H，-CH2Br)，5.17(s，2H)，6.92(d，J＝8.6Hz，1H)，7.21(dd，J＝8.6，2.3Hz，1H)，7.31-7.48(m，6H). 4-[(4-芐氧基-3-氯芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]芐腈(CAB02129，STX446)
在室溫下，向4-([1，2，4]三唑-4-基氨基)-芐腈(926mg，5.0mmol)的DMF(20mL)溶液中加入氫化鈉(60％，200mg，5.0mmol)。在該溫度下攪拌混合物1小時，加入1-芐氧基-4-溴甲基-2-氯-苯(CAB02128，1.56g，5.0mmol)。攪拌反應(yīng)混合物過夜，加入乙酸乙酯(75mL)。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，用水(2x100mL)和鹽水(20mL)洗滌。有機層用硫酸鈉干燥，然后減壓濃縮。將殘留物懸浮在2-丙醇(20mL)中，加熱回流5分鐘。冷卻到室溫后濾出白色固體，在高真空下干燥。收率1.38g(66％).1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝4.99(s，2H)，5.17(s，2H)，6.76(d，J＝9.0Hz，2H)，7.16(d，J＝8.6Hz，1H)，7.20(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.32-7.47(m，6H)，7.76(d，J＝9.0Hz，2H)，8.81(s，2H).LRMS(FAB+)416.1(100，[M+H]+). 4-[(3-氯-4-羥基-芐基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(CAB02130，STX447)
向4-[(4-芐氧基-3-氯-芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]-芐腈(CAB02129，1.04g，2.50mmol)在MeOH/THF/EtoAc(25mL/25mL/25mL)中的溶液內(nèi)加入鈀-碳(50mg，10％Pd)。混合物在氫氣(氣囊)氛圍中室溫攪拌18小時。然后通過硅藻土過濾反應(yīng)混合物，并減壓濃縮清亮無色濾液。將殘留物懸浮在2-丙醇(20mL)中，加熱回流5分鐘。冷卻到室溫后濾出白色固體，在高真空下干燥。收率484mg(59％).1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝4.93(s，2H)，6.76(d，J＝9.0Hz，2H)，6.86(d，J＝8.6Hz，1H)，7.02(dd，J＝8.2，2.0Hz，1H)，7.27(d，J＝2.0Hz，1H)，7.76(d，J＝9.0Hz，2H)，8.77(s，2H)，10.29(s，1H，-OH).13C-NMR(100MHz，d6-DMSO)δ＝56.87，103.55，114.48，117.28，119.73，120.25，126.72，129.19，130.91，134.56，144.02，152.03，153.50.LRMS(FAB+)325.0(100，[M+H]+). 氨基磺酸2-氯-4-{[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-甲基}苯基酯(CAB03015，STX694)
減壓濃縮(30℃水浴溫度)氨基磺酰氯的甲苯溶液(3mL，0.7M，2.1mmol)到大約0.5mL體積。冷卻殘留物到0℃(冰浴)，加入N，N-二甲基乙酰胺(5mL)。向所形成的無色溶液中加入4-[(3-氯-4-羥基-芐基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(CAB02130，163mg，0.50mmol)，室溫攪拌混合物18小時。向溶液中加入乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)，分出有機層，用水(2x30mL)和鹽水(20mL)洗滌，硫酸鈉干燥，并減壓濃縮。將殘留物溶于少量丙酮中，加己烷進(jìn)行沉淀。濾出沉淀物，在高真空下干燥。收率59mg(29％)，白色粉末。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝5.11(s，2H)，6.72(d，J＝9.0Hz，2H)，7.38(dd，J＝8.2，2.0Hz，1H)，7.44(d，J＝8.2Hz，1H)，7.59(d，J＝2.0Hz，1H)，7.77(d，J＝9.0Hz，2H)，8.31(s，2H，-NH2)，8.91(s，2H).LRMS(FAB+)405.0(100，[M+H]+).HRMS(FAB+)405.05349 C16H14N6O3SCl計算值405.053663 苯甲酸2-氯-5-甲基-苯基酯(CAB02124)
向2-氯-5-甲基苯酚(3.92g，27.5mmol)和三乙胺(5mL)在二氯甲烷(100mL)中的溶液內(nèi)逐滴加入苯甲酰氯(3.51g，25mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?8小時，然后減壓濃縮。加入乙醚(200mL)和水(100mL)。分出有機層，用2N NaOH(2x100mL)和鹽水(50mL)萃取，硫酸鈉干燥并減壓濃縮。然后在冰箱中固化得到的無色油體。收率5.82g(94％).1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝2.38(s，3H，-CH3)，7.05(d，J＝8.2Hz，1H)，7.11(s，1H)，7.36(d，J＝8.2Hz，1H)，7.51-7.56(m，2H)，7.64-7.70(m，1H)，8.22-8.28(m，2H).13C-NMR(100MHz，CDCl3)δ＝21.41，123.97，124.58，128.07，128.85，129.15，130.07，130.55，134.01，138.38，146.98，164.51. 苯甲酸5-溴甲基-2-氯-苯基酯(CAB02138)
將苯甲酸2-氯-5-甲基-苯基酯(CAB02124，2.47g，10.0mmol)、N-溴-琥珀酰亞胺(1.96g，11.0mmol)和過氧化二苯甲酰(10mg)在四氯化碳(25mL)中組成的混合物加熱回流1小時(TLC-控制)。冷卻到室溫后加入水(50mL)和乙醚(100mL)。分出有機層，用鹽水(20mL)洗滌，硫酸鈉干燥并減壓濃縮。殘留物通過柱色譜純化(EtOAc∶己烷，1∶40，Rf0.21).收率2.012g(62％)，無色油體，數(shù)小時后發(fā)生固化(含大約10％苯甲酸5-二溴甲基-2-氯-苯基酯)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝4.48(s，2H，-CH2Br)，7.27(dd，J＝8.2，2.0Hz，1H)，7.36(d，J＝2.0Hz，1H)，7.46(d，J＝8.2Hz，1H)，7.50-7.58(m，2H)，7.64-7.71(m，1H)，8.22-8.28(m，2H).LRMS(FAB+)325.0(81，[M+H]+)，327.0(100，[M+H]+). 苯甲酸2-氯-5-{[(4-氰基-苯基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]甲基}苯基酯(CAB02139)
在室溫下，向4-([1，2，4]三唑-4-基氨基)-芐腈(926mg，5.0mmol)的DMF(20mL)溶液中加入氫化鈉(60％，200mg，5.0mmol)。在該溫度下攪拌混合物1小時，加入苯甲酸5-溴甲基-2-氯-苯基酯(CAB02138，1.63g，5.0mmol)。攪拌反應(yīng)混合物過夜，加入乙酸乙酯(75mL)。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，用水(2x50mL)和鹽水(20mL)洗滌。有機層用硫酸鈉干燥，然后減壓濃縮。殘留物通過柱色譜純化(EtOAc，Rf0.31)，得到白色固體。收率1.773g(82％).1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝4.93(s，2H)，6.66(d，9.0Hz，2H)，7.06(dd，J＝8.2，2.0Hz，1H)，7.27(d，J＝2.0Hz，1H)，7.45(d，J＝8.2Hz，1H)，7.47-7.58(m，4H)，7.60-7.69(m，1H)，8.16-8.21(m，2H)，8.24(s，2H).LRMS(FAB+)430.1(100，[M+H]+). 4-[(4-氯-3-羥基-芐基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(CAB02141，STX483)
加熱回流苯甲酸2-氯-5-{[(4-氰基-苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]甲基}苯基酯(CAB02139，1.13g，2.63mmol)和甲醇鈉(500mg)在甲醇(20mL)與水(5mL)中的溶液共計30分鐘。冷卻到室溫后，減壓除去大部分溶劑，加入碳酸氫鈉濃溶液(20mL)和乙酸乙酯(50mL)。分出有機層，用硫酸鈉干燥，并在減壓下除去溶劑。將得到白色粉末在乙酸乙酯(10mL，產(chǎn)物不能完全溶解)中再進(jìn)行回流。冷卻到室溫后，濾出產(chǎn)物，在高真空下干燥。收率412mg(48％)，白色粉末.1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝4.97(s，2H)，6.71-6.75(m，3H)，6.84(d，J＝2.0Hz，1H)，7.25(d，J＝8.2Hz，1H)，7.75(d，J＝9.0Hz，2H)，8.76(s，2H)，10.21(s，1H，-OH).LRMS(FAB+)326.1(100，[M+H]+). 氨基磺酸2-氯-5-{[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-甲基}苯基酯(CAB02176，STX559)
減壓濃縮(30℃水浴溫度)氨基磺酰氯的甲苯溶液(3mL，0.7M，2.1mmol)到大約0.5mL體積。冷卻殘留物到0℃(冰浴)，加入N，N-二甲基乙酰胺(5mL)。向所形成的無色溶液中加入4-[(4-氯-3-羥基-芐基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(CAB02141，200mg，0.614mmol)，室溫攪拌混合物18小時。向溶液中加入乙酸乙酯(50mL)和水(30mL)，分出有機層，用水(2x30mL)和鹽水(20mL)洗滌，硫酸鈉干燥，并減壓濃縮。將殘留物溶于少量丙酮中，加乙醚和己烷進(jìn)行沉淀。濾出沉淀物，在高真空下干燥。收率136mg(55％)，白色粉末。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝5.11(s，2H)，6.75(d，J＝9.0Hz，2H)，7.25(dd，J＝8.2，2.0Hz，1H)，7.46(d，J＝2.0Hz，1H)，7.54(d，J＝8.2Hz，1H)，7.77(d，J＝9.0Hz，2H)，8.32(s，2H，-NH2)，8.82(s，2H).LRMS(FAB+)87.0(100)，404.9(40，[M+H]+).HRMS(FAB+)405.05338 C16H14N6O3SCl計算值405.053663 4-芐氧基-3-氯-5-甲氧基-苯甲酸芐基酯(CAB02162)
室溫攪拌5-氯-香草酸(4.05g，20mmol)、芐基溴(8.55g，50mmol)和碳酸鉀(6.90g，50mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(60mL)中的混合物過夜。將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，加入乙酸乙酯(100ml)和水(100mL)，分出有機層，用水(2x50mL)和鹽水(50mL)洗滌，硫酸鈉干燥并減壓濃縮。殘留物用二氯甲烷/己烷結(jié)晶。收率7.34g(96％)，無色針狀體。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝3.92(s，3H，-OCH3)，5.13(s，2H)，5.36(s，2H)，7.31-7.51(m，10H)，7.53(d，J＝2.0Hz，1H)，7.73(d，J＝2.0Hz，1H).LRMS(FAB+)91.0(100)，382.1(15，[M+H]+). (4-芐氧基-3-氯-5-甲氧基-苯基)-甲醇(CAB02170)
利用注射器將4-芐氧基-3-氯-5-甲氧基苯甲酸芐酯(CAB02162，3.83g，10.0mmol)的THF(20mL)溶液緩慢加到氫化鋁鋰(500mg，13.15mmol)在THF(30mL)中的懸浮液內(nèi)。在室溫下攪拌混合物30分鐘，然后加入2N NaOH(5mL)。再攪拌混合物1小時，濾出鋁鹽，濾液用硫酸鈉干燥，進(jìn)而減壓濃縮。在高真空下在kugelrohr-蒸餾裝置中加熱所得油體到120℃持續(xù)10小時用以除去芐醇。得到亮黃色油狀產(chǎn)物，它無需進(jìn)一步純化直接使用。收率2.70g(97％)，1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝2.09(s，1H，-OH)，3.86(s，3H，-OCH3)，4.56(s，2H)，5.02(s，2H)，6.83(d，J＝2.0Hz，1H)，6.95(d，J＝2.0Hz，1H)，7.31-7.41(m，3H)，7.52-7.55(m，2H). 2-芐氧基-1-氯-5-氯甲基-3-甲氧基-苯(CAB02174)
0℃下，向(4-芐氧基-3-氯-5-甲氧基-苯基)-甲醇(CAB02170，2.703g，9.7mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入亞硫酰氯(2mL)。在室溫下攪拌溶液1小時，然后加入乙醚(50mL)和水(20mL)。分出有機層，用碳酸氫鈉濃溶液(10mL)洗滌，硫酸鈉干燥并減壓濃縮。將殘留物再溶于二氯甲烷(5mL)，加己烷(約50mL)進(jìn)行沉淀。收率2.730g(95％).1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝3.89(s，3H，-OCH3)，4.52(s，2H)，5.07(s，2H)，6.87(d，J＝2.0Hz，1H)，7.03(d，J＝2.0Hz，-1H)，7.33-7.43(m，3H)，7.53-7.58(m，2H).LRMS(FAB+)91.0(100)，296.0(17，[M+H]+). 4-[(4-芐氧基-3-氯-5-甲氧基-芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]芐腈(CAB02177，STX599)
在室溫下，向4-([1，2，4]三唑-4-基氨基)-芐腈(926mg，5.0mmol)的DMF(20mL)溶液中加入氫化鈉(60％，200mg，5.0mmol)。在該溫度下攪拌混合物1小時，加入2-芐氧基-1-氯-5-氯甲基-3-甲氧基-苯(CAB02174，1.49g，5.0mmol)。攪拌反應(yīng)混合物過夜，加入乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)。分出有機層，用水(2x50mL)和鹽水(30mL)洗滌。有機層用硫酸鈉干燥，然后減壓濃縮。將殘留物懸浮在2-丙醇(20mL)中，加熱回流5分鐘。冷卻到室溫后濾出白色固體，在高真空下干燥。收率1.76g(79％).1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝3.78(s，3H，-OCH3)，4.80(s，2H)，5.05(s，2H)，6.52(d，J＝2.0Hz，1H)，6.67(d，J 9.0Hz，2H)，6.89(d，J＝2.0Hz，1H)，7.32-7.40(m，3H)，7.46-7.50(m，2H)，7.61(d，J＝9.0，2H)，8.75(s，2H).LRMS(FAB+)91.0(100)，446.0(65，[M+H]+).HRMS(FAB+)446.13840 C24H21N5O2Cl計算值446.138378. 4-[(3-氯-4-羥基-5-甲氧基-芐基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(CAB02179，STX600)
向4-[(4-芐氧基-3-氯-5-甲氧基-芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]-芐腈(CAB02177，1.34g，3.0mmol)在乙醇(60mL)與THF(40mL)中的溶液內(nèi)加入鈀-碳(100mg，5％Pd)?；旌衔镌跉錃?氣囊)氛圍中攪拌24小時(TLC監(jiān)測)，然后通過硅藻土過濾，并減壓濃縮。將殘留物在高真空下干燥。收率1.06g(99％).1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝3.77(s，3H，-OCH3)，4.92(s，2H)，6.79(d，J＝9.0Hz，2H)，6.81(d，J＝1.8Hz，1H)，6.85(d，J＝1.8Hz，1H)，7.77(d，J＝9.0Hz，2H)，8.79(s，2H)，9.49(s，1H，-OH).LRMS(FAB+)356.0(100，[M+H]+).HRMS(FAB+)356.09234 C17H15N5O2Cl計算值356.091428. 氨基磺酸2-氯-4-{[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-甲基}-6-甲氧基-苯基酯(CAB02181，STX601)
減壓濃縮(30℃水浴溫度)氨基磺酰氯的甲苯溶液(3mL，0.7M，2.1mmol)到大約0.5mL體積。冷卻殘留物到0℃(冰浴)，加入N，N-二甲基乙酰胺(5mL)。向所形成的無色溶液中加入4-[(3-氯-4-羥基-5-甲氧基-芐基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(CAB02179，212mg，0.596mmol)，室溫攪拌混合物18小時。向溶液中加入乙酸乙酯(50mL)和水(30mL)，分出有機層，用水(2x30mL)和鹽水(20mL)洗滌，硫酸鈉干燥，并減壓濃縮。將殘留物溶于少量丙酮中，加己烷進(jìn)行沉淀。濾出沉淀物，在高真空下干燥。收率219mg(84％)，白色粉末。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝3.78(s，3H，-OCH3)，6.74(d，J＝9.0Hz，2H)，7.04(d，J＝2.0Hz，1H)，7.07(d，J＝2.0Hz，1H)，7.77(d，J＝9.0Hz，2H)，7.98(s，2H，-NH2)，8.91(s，2H).LRMS(FAB+)435.0(100，[M+H]+).HRMS(FAB+)435.06476 C17H16N6O4SCl計算值435.064228. 4-芐氧基-3-氟-苯甲醛(CAB03016)
室溫攪拌3-氟-4-羥基苯甲醛(4.90g，35.0mmol)、芐基溴(6.84g，40.0mmol，4.80mL)和碳酸鉀(9.66g，70.0mmol)在DMF(50mL)中的混合物18小時。將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，加入乙酸乙酯(100ml)和水(50mL)，分出有機層，用水(2x50mL)和鹽水(30mL)洗滌，硫酸鈉干燥并減壓濃縮。白色固體殘留物用二氯甲烷/己烷重結(jié)晶。收率7.65g(95％)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝5.24(s，2H)，7.12(dd，J＝8.2，8.2Hz，1H)，7.34-7.48(m，5H)，7.59-7.66(m，2H)，9.85(d，J＝2.0Hz，1H，-CHO).LRMS(FAB+)91(100)，231.1(100，[M+H]+). (4-芐氧基-3-氟-苯基)-甲醇(CAB03017)
0℃下，向4-芐氧基-3-氟-苯甲醛(CAB03106，7.32g，31.8mmol)在乙醇(40mL)與THF(40mL)中的溶液內(nèi)加入硼氫化鈉(500mg，13.2mmol)。溫?zé)崴纬傻臒o色清亮溶液到室溫，在該溫度下攪拌12小時。向溶液中加入乙酸乙酯(150mL)和水(50mL)，分出有機層，用水(2x50mL)和鹽水(50mL)洗滌，硫酸鈉干燥并減壓濃縮。將白色固體殘留物溶于二氯甲烷，加己烷進(jìn)行沉淀。濾出白色粉末，在高真空下干燥。收率7.16g(97％)，1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝1.71(s，1H，-OH)，4.61(s，2H，-CH2OH)，5.15(s，2H)，6.97(dd，J＝8.6，8.6Hz，1H)，7.02(dd，J＝8.6，1.9Hz，1H)，7.13(dd，J＝11.7，1.9Hz，1H)，7.30-7.46(m，5H).LRMS(FAB+)91(100)，215.1(40)，232.1(100，[M+H]+). 1-芐氧基-4-氯甲基-2-氟-苯(CAB03108)
向(4-芐氧基-3-氟-苯基)-甲醇(CAB03017，6.80g，29.28mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中加入亞硫酰氯(5mL)。在室溫下攪拌溶液1小時，繼而減壓濃縮。隨后加入乙醚(100mL)和水(20mL)。分出有機層，用碳酸氫鈉濃溶液(10mL)洗滌，硫酸鈉干燥并減壓濃縮。將殘留物再溶于二氯甲烷(5mL)，加己烷(約50mL)進(jìn)行沉淀。濾出沉淀物，在高真空下干燥。收率7.01g(95％)，白色粉末.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝4.52(s，2H，-CH2Cl)，5.15(s，2H)，6.96(dd，J＝8.2，8.2Hz，1H)，7.04-7.06(m，1H)，7.15(dd，J＝11.7，2.4Hz，1H)，7.31-7.45(m.5H).LRMS(FAB+)91(100)，215.0(10)，250.0(16，[M]+). 4-[(4-芐氧基-3-氟-芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]芐腈(CAB03019，STX695)
在室溫下，向4-([1，2，4]三唑-4-基氨基)-芐腈(1.852g，10.0mmol)的DMF(50mL)溶液中加入氫化鈉(60％，400mg，10.0mmol)。在該溫度下攪拌混合物1小時，加入1-芐氧基-4-氯甲基-2-氟-苯(CAB03108，2.51g，10.0mmol)。攪拌反應(yīng)混合物過夜，加入乙酸乙酯(200mL)和水(50mL)。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，用水(2x50mL)和鹽水(30mL)洗滌。有機層用硫酸鈉干燥，然后減壓濃縮。將殘留物懸浮在2-丙醇(40mL)中，加熱回流5分鐘。冷卻到室溫后濾出白色固體，在高真空下干燥。收率3.12g(78％).1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝4.97(s，2H)，5.12(s，2H)，6.73(d，J＝9.0Hz，2H)，7.01(dd，J＝8.2，1.2Hz，1H)，7.16(dd，J＝8.6，8.6Hz1H)，7.21(dd，J＝8.6，2.4Hz，1H)，7.30-7.44(m，5H)，7.75(d，J＝9.0Hz，2H)，8.80(s，2H).LRMS(FAB+)400.1(100，[M+H]+).HRMS(FAB+)400.15800 C23H19N5OF計算值400.157364. 4-[(3-氟-4-羥基-芐基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(CAB03020，STX695)
加熱下，將4-[(4-芐氧基-3-氟-芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]-芐腈(CAB03109，2.83g，7.09mmol)溶解在乙醇(50mL)、THF(50mL)與乙酸乙酯(50mL)的混合物中，加入鈀-碳(150mg，5％Pd)?；旌衔镌跉錃?氣囊)氛圍中攪拌18小時，然后通過3cm高的硅藻土層過濾，并減壓濃縮。將殘留物懸浮在2-丙醇(30mL)中，加熱回流混合物5分鐘。冷卻到室溫后濾出白色沉淀物，在高真空下干燥。收率2.13g(97％).1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝4.93(s，2H)，6.75(d，J＝9.0Hz，2H)，6.82-6.89(m，2H)，7.07-7.12(m，1H)，7.76(d，J＝9.0Hz，2H)，8.77(s，2H)，9.95(s，1H，-OH). 氨基磺酸4-{[(4-氰基苯基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-甲基}-2-氟-苯基酯(CAB03021，STX700)
減壓濃縮(30℃水浴溫度)氨基磺酰氯的甲苯溶液(3mL，0.7M，2.1mmol)到大約0.5mL體積。冷卻殘留物到0℃(冰浴)，加入N，N-二甲基乙酰胺(5mL)。向所形成的無色溶液中加入4-[(3-氟-4-羥基-芐基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(CAB03020，220mg，0.71mmol)，室溫攪拌混合物4小時。向溶液中加入乙酸乙酯(50mL)和水(30mL)，分出有機層，用水(2x25mL)和鹽水(25mL)洗滌，硫酸鈉干燥，并減壓濃縮。將殘留物溶于丙酮(5mL)中，加乙醚進(jìn)行沉淀。濾出沉淀物，在高真空下干燥。收率228mg(83％)，白色粉末。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝5.11(s，2H)，6.71(d，J＝9.0Hz，2H)，7.23(dd，8.2，1.2Hz，1H)，7.39(dd，J＝8.2，8.2Hz，1H)，7.43(dd，J＝11.1，2.1Hz，1H)，7.77(d，J＝9.0Hz，2H)，8.28(s，2H，-NH2)，8.92(s，2H).LRMS(FAB+)389.1(100，[M+H]+).HRMS(FAB+)389.08298 C16H14N6O3SF計算值389.083214. 苯甲酸2-氟-5-甲基-苯基酯(CAB02145)
利用注射器，向2-氟-5-甲基苯酚(3.784g，30mmol)和三乙胺(5mL)在二氯甲烷(50mL)中的溶液內(nèi)加入苯甲酰氯(4.22g，30mmol)。在室溫下攪拌混合物18小時，然后減壓濃縮。加入乙醚(200mL)和水(100mL)。分出有機層，用2N NaOH(2x30mL)和鹽水(20mL)萃取，硫酸鈉干燥并減壓濃縮，得到白色固體。收率6.601g(96％).1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝2.36(s，3H，-CH3)，7.01-7.12(m，3H)，7.49-7.55(m，2H)，7.63-7.68(m，1H)，8.19-8.23(m，2H).LRMS(FAB+)231.1(100，[M+H]+). 苯甲酸5-溴甲基-2-氟-苯基酯(CAB02146)
將苯甲酸2-氟-5-甲基-苯基酯(CAB02145，2.47g，10.0mmol)、N-溴-琥珀酰亞胺(1.96g，11.0mmol)和過氧化二苯甲酰(10mg)在四氯化碳(25mL)中組成的混合物加熱回流2小時(TLC-監(jiān)測)。冷卻到室溫后加入水(50mL)和乙醚(100mL)。分出有機層，用鹽水(20mL)洗滌，硫酸鈉干燥并減壓濃縮。殘留物通過柱色譜純化(EtOAc∶己烷，1∶25，Rf0.28).收率1.80g(58％)，白色固體.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝4.48(s，2H，-CH2Br)，7.18(dd，J＝dd，J＝9.8，8.6Hz，1H)，7.28(ddd，J＝8.6，4.3，2.3Hz，1H)，7.34(dd，J＝7.0，2.3Hz，1H)，7.50-7.55(m，2H)，7.64-7.69(m，1H)，8.18-8.23(m，2H).LRMS(FAB+)229.1(95)，309.0(100，[M+H]+).實測值C54.1，H 3.22％；C14H10BrFO2(309.13)計算值C 54.39，H 3.26％. 苯甲酸5-{[(4-氰基-苯基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]甲基}-2-氟苯基酯(CAB02147)
在室溫下，向4-([1，2，4]三唑-4-基氨基)-芐腈(926mg，5.0mmol)的DMF(20mL)溶液中加入氫化鈉(60％，200mg，5.0mmol)。在該溫度下攪拌混合物1小時，加入苯甲酸5-溴甲基-2-氟-苯基酯(CAB02146，1.55g，5.0mmol)。攪拌反應(yīng)混合物過夜，加入乙酸乙酯(75mL)和水(50mL)。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，用水(2x50mL)和鹽水(20mL)洗滌。有機層用硫酸鈉干燥，然后減壓濃縮。殘留物通過柱色譜純化(EtOAc，Rf0.32)，得到白色固體。收率1.16g(56％).1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝4.91(s，2H)，6.67(d，J＝9.0Hz，2H)，7.07(ddd，J＝8.2，4.3，2.0Hz，1H)，7.18(dd，J＝9.4，8.6Hz，1H)，7.24(dd，J＝7.0，2.3Hz，1H)，7.49-7.56(m，2H)，7.58(d，J＝9.0Hz，2H)，7.62-7.70(m，1H)，8.15-8.20(m，2H)，8.21(s，2H).LRMS(FAB+)414.2(100，[M+H]+). 4-[(4-氟-3-羥基-芐基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(CAB02154，STX488)
向苯甲酸5-{[(4-氰基-苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]甲基}-2-氟-苯基酯(CAB02147，958mg，2.32mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入氫氧化鈉(250mg，6.25mmol)的水(5mL)溶液。加熱回流溶液5分鐘，然后減壓濃縮。加入水(10mL)，乳狀懸浮液用2N鹽酸中和(pH7-8)。濾出白色沉淀，用少量水(5mL)洗滌，并在高真空下干燥。收率476mg(66％).1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝4.95(s，2H)，6.70(ddd，J＝11.4，8.4，2.4Hz，1H)，6.75(d，J＝9.0Hz，2H)，6.84(dd，J＝8.4，2.4Hz，1H)，7.06(dd，J＝11.3，8.4Hz，1H)，7.76(d，J＝9.0Hz，2H)，8.75(s，2H)，9.90(s，1H，-OH).LRMS(FAB+)310.1(100，[M+H]+). 4-芐氧基-3-三氟甲基-苯甲酸(CAB03046)
向4-氟-3-三氟甲基苯甲酸(4.162g，20mmol)和芐醇(3.25g，30mmol)在DMSO(50mL)中的溶液內(nèi)加入氫化鈉(60％，1.80g，45mmol)。在室溫下攪拌混合物過夜，然后倒入水(50mL)中，用濃鹽酸酸化。濾出白色沉淀物，進(jìn)而溶于乙酸乙酯(約50mL)，以硫酸鈉干燥并減壓濃縮。殘留物用乙酸乙酯/己烷重結(jié)晶。收率4.252g(72％).1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝5.37(s，2H)，7.32-7.48(m，6H)，8.12(d，J＝2.0Hz，1H)，8.18(dd，J＝8.6，2.0Hz，1H)，13.16(brs，1H，-COOH).LRMS(FAB+)91.1(100)，297.1(18，[M+H]+). (4-芐氧基-3-三氟甲基-苯基)-甲醇(CAB03047)
將4-芐氧基-3-三氟甲基-苯甲酸(CAB03046，3.555g，12mmol)的THF(20mL)溶液逐滴加到氫化鋁鋰(1.0g，26.3mmol)的THF(20mL)懸浮液中?；旌衔镌谑覝叵略贁嚢?0分鐘，然后加入2N NaOH(5mL)猝滅。濾出白色沉淀物并用二氯甲烷(100mL)洗滌，濾液用硫酸鈉干燥，進(jìn)而減壓濃縮。所得油體用乙醚/己烷結(jié)晶。收率3.31g(98％)，1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝1.72(t，J＝5.9Hz，1H，-OH)，4.66(d，J＝5.9Hz，2H，-CH2OH)，5.21(s，2H，-CH2Ph)，7.02(d，J＝8.2Hz，1H)，7.30-7.48(m，6H)，7.61(d，J＝2.3Hz，1H).LRMS(FAB+)91.1(100)，265.2(45)，282.2(40，[M+H]+). 1-芐氧基-4-氯甲基-2-三氟甲基-苯(CAB03050)
向(4-芐氧基-3-三氟甲基-苯基)-甲醇(CAB03047，3.10g，11.0mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入亞硫酰氯(2.0mL)。在室溫下攪拌溶液1小時，減壓濃縮。然后加入乙醚(100mL)和水(20mL)。分出有機層，用碳酸氫鈉濃溶液(10mL)洗滌，硫酸鈉干燥并減壓濃縮。數(shù)分鐘后所得油體發(fā)生固化，然后在高真空下干燥。收率3.25g(98％).1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝4.57(s，2H，-CH2Cl)，5.22(s，2H，-OCH2Ph)，7.02(d，J＝8.5Hz，1H)，7.31-7.52(m，6H)，7.63(d，J＝2.0Hz，1H).LRMS(FAB+)91.1(100)，265.2(8)，300.1(10，[M]+). 4-[(4-芐氧基-3-三氟甲基-芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]芐腈(CAB03054，STX719)
在室溫下，向4-([1，2，4]三唑-4-基氨基)-芐腈(926mg，5.0mmol)的DMF(50mL)溶液中加入氫化鈉(60％，200mg，5.0mmol)。在該溫度下攪拌混合物1小時，加入1-芐氧基-4-氯甲基-2-三氟甲基-苯(CAB03050，1.50g，5.0mmol)。攪拌反應(yīng)混合物過夜，加入乙酸乙酯(100mL)和水(30mL)。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，用水(2x30mL)和鹽水(20mL)洗滌。有機層用硫酸鈉干燥，然后減壓濃縮。將殘留物懸浮在2-丙醇(40mL)中，加熱回流5分鐘。冷卻到室溫后濾出白色固體，在高真空下干燥。收率1.87g(83％).1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝5.05(s，2H)，5.23(s，2H)，6.78(d，J＝9.0Hz，2H)，7.26(d，J＝8.6Hz，1H)，7.30-7.44(m，5H)，7.51(dd，J＝8.6，2.0Hz，1H)，7.56(d，J＝2.0Hz，1H)，7.77(d，J＝9.0Hz，2H)，8.79(s，2H).LRMS(FAB+)450.2(100，[M+H]+).HRMS(FAB+)450.15404C24H19N5OF3計算值450.154170. 4-[(4-羥基-3-三氟甲基-芐基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(CAB03059，STX781)
向4-[(4-芐氧基-3-三氟甲基-芐基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]-芐腈(CAB03054，1.75g，3.89mmol)在EtOH/THF/MeCN(50mL/50mL/30mL)中的溶液內(nèi)加入鈀-碳(100mg，10％Pd)?；旌衔镌跉錃?氣囊)氛圍中室溫攪拌18小時。然后通過硅藻土過濾反應(yīng)混合物，減壓濃縮無色透明濾液。將殘留物懸浮在2-丙醇(20mL)中，加熱回流5分鐘。冷卻到室溫后濾出白色固體，在高真空下干燥。收率1.31g(94％).1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝4.98(s，2H)，6.78(d，J＝9.0Hz，2H)，6.91(d，J＝8.6Hz，1H)，7.31(dd，J＝8.6，2.0Hz，1H)，7.39(d，J＝2.0Hz，1H)，7.76(d，J＝9.0Hz，2H)，8.74(s，2H)，10.66(s，1H，-OH).LRMS(FAB+)360.2(100，[M+H]+). 3-芐氧基-苯酚(JRL01015)
0℃、氮氣氛下，向間苯二酚(7.05g，63.4mmol)在DMF(100mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入NaH(60％，2.54g，63.4mmol)。攪拌30分鐘后，加入芐基溴(7.72mL，63.4mmol)，并在室溫下攪拌所得混合物4小時。反應(yīng)混合物加乙酸乙酯(300mL)稀釋，分出有機層，用鹽水(300mL，4x100mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并蒸發(fā)，所得粗產(chǎn)物通過快速色譜分離(己烷/EtOAc 3∶1)，得淺黃色固體JRL01015(4.06g，32％)；Rf 0.50(己烷/EtOAc 3∶1)；1H(400MHz CDCl3)4.97(1H，s OH)，5.01(2H，s，CH2)，6.42(1H，dd，J2.3和8.0Hz)，6.47(1H，t，J2.3Hz)，6.56(1H，dd，J2.3和8.0Hz)，7.12(1H，t，J8.0Hz)和7.28-7.46(5H，m). 5-芐氧基-2-硝基-苯酚(JRL01017A)
在5-10℃下，向JRL01015(4.0g，20.0mmol)在AcOH(40mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入HNO3(69％，2.74g，30.0mmol)/AcOH(1.80g，30.0mmol)。在室溫下攪拌4小時后，加EtOAc(150mL)稀釋反應(yīng)混合物，分出的有機層用鹽水(200mL，4x100mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并且蒸發(fā)，所得粗產(chǎn)物進(jìn)而通過快速色譜分離(己烷/EtOAc3∶1)，得到黃色固體JRL01017(1.88g，38.5％)；Rf 0.65(己烷/EtOAc3∶1)；1H(400MHz，CDCl3)5.13(2H，s，CH2)，6.59(1H，dd，J2.4和9.0Hz)，6.62(1H，d，J2.4 Hz)，7.34-7.45(5H，m)，8.04(1H，d，J9.0 Hz)和11.00(1H，s，OH). 2-氨基-5-芐氧基-苯酚(JRL01022)
向JRL01017(500mg，2.04mmol)在EtOH/H2O(1∶1，50mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入連二硫酸鈉(Na2S2O4，～85％，1.67g，8.16mmol)，并在75℃下加熱所得黃色懸浮液。在該溫度下加熱1小時后，反應(yīng)混合物的顏色變?yōu)闊o色，隨后冷卻到室溫。反應(yīng)混合物加EtOAc(100mL)稀釋，分出的有機層用鹽水(4x50mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并且蒸發(fā)，所得粗產(chǎn)物進(jìn)而通過快速色譜(己烷/EtOAc 3∶1)純化，得到JRL01022，為深紅色固體(418mg，95％)；Rf 0.50(己烷/EtOAc 3∶1)；1H(400MHz，DMSO-d6)～4.0(2H，v br s)，4.90(2H，s)，6.24(1H，dd，J 2.7和8.4Hz)，6.37(1H，d，J 2.7Hz)，6.49(1H，d，J 8.4Hz)，7.28-7.46(5H，m)和～11.0(1H，v br s). 6-芐氧基-2-溴甲基-苯并惡唑(JRL01026)
攪拌下，在氮氣氛圍中向JRL01022(773mg，3.60mmol)在三甲基甲硅烷基聚磷酸酯(PPSE)/1，2-二氯苯(1∶5，60mL)中的混合物內(nèi)加入溴乙酸(400mg，2.88mmol)，并將形成的紫色混合物在150℃下加熱1小時。冷卻到室溫后，加EtOAc(100mL)稀釋反應(yīng)混合物，分出有機層，用鹽水(4x50mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾、蒸發(fā)，并將所得油進(jìn)而通過快速色譜(己烷/EtOAc 5∶1)分離，得到JRL01026，為白色固體(369mg，40％)；Rf 0.28(己烷/EtOAc 5∶1)；1H(400MHz，CDCl3)4.55(2H，s)，5.10(2H，s)，7.03(1H，dd，J2.2和8.6Hz)，7.10(1H，d，J2.2 Hz)，7.30-7.46(5H，m)和7.59(1H，d，J 8.6Hz). 4-[(6-芐氧基-苯并惡唑-2-基甲基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(JRL01029)
0℃、氮氣氛下，向NaH(60％，12mg，300μmol)在DMF(10mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入在DMF(10mL)中的4-[(1，2，4)三唑-4-氨基]芐腈(55mg，300μmol)。在氮氣氛圍中于40-50℃下攪拌1小時后，冷卻橙色反應(yīng)混合物到室溫，加入JRL01026(100mg，310μmol)。在氮氣氛圍中室溫攪拌所得混合物過夜。在加CH2Cl2(50mL)稀釋反應(yīng)混合物之后，有機層用鹽水(100mL，3x50mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾、蒸發(fā)，并將粗產(chǎn)物通過快速色譜(EtOAc)分離，得到JRL01029，為白色固體(80mg，63％)；Rf 0.24(EtOAc)；1H(400MHz，CDCl3)5.11(2H，s)，5.19(2H，s)，6.59(2H AA′BB′；7.05(1H，dd，J2.2和8.8Hz)，7.11(1H，d，J2.2Hz)，7.30-7.60(8H，m)和8.65(2H，s). 4-[(6-羥基-苯并惡唑-2-基甲基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(JRL01035，STX357)
向JRL01029(235mg，5.56mmol)在THF/MeOH 1∶1(60mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入Pd-C 10％(65mg)，并在H2(氣囊)氛圍中室溫攪拌所得懸浮液過夜。通過硅藻土過濾之后收集濾液，蒸發(fā)得到灰色固體，進(jìn)而在熱EtOAc中研制，得到白色固體JRL01035(128mg，69％)；Rf0.38(丙酮/EtOAc，1∶2)；1H(400MHz，DMSO-d，400MHz)5.47(2H，s)，6.70(2H，d，J9 Hz)，6.80(1H，dd，J2.1和8.6Hz)，7.02(1H，d，J2.1 Hz)，7.48(1H，d，J8.6 Hz)，7.74(2H，d，J9 Hz)，8.95(2H，s)和9.86(1H，br s). 4-芐氧基-苯酚(JRL01016)
0℃、氮氣氛下，向?qū)Ρ蕉?7.00g，63.4mmol)在DMF(100mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入NaH(60％，2.54g，63.4mmol)。攪拌30分鐘后，加入芐基溴(7.72mL，63.4mmol)，并在室溫下攪拌所得混合物4小時。反應(yīng)混合物加乙酸乙酯(300mL)稀釋，分出有機層，用鹽水(300mL，4x100mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并蒸發(fā)，粗產(chǎn)物通過快速色譜分離(己烷/EtOAc 3∶1)，得白色固體JRL01016(3.11g，25％)；Rf 0.35(己烷/EtOAc 3∶1)；1H(400MHz CDCl3)4.61(1H，s OH)，5.01(2H，s，CH2)，6.74(2H，AA′BB′)，6.85(2H，AA′BB′)，和7.28-7.44(5H，m). 4-芐氧基-2-硝基-苯酚(JRL01023)
-50℃、氮氣氛下，向JRL01016(500mg，2.50mmol)在乙二醇二甲醚(10mL)中的攪拌溶液內(nèi)單批四氟硼酸硝翁鹽的環(huán)丁砜溶液(0.5M，5.1mL，2.55mmol)。在-50℃下攪拌1小時后，反應(yīng)混合物在室溫下通過硅膠短柱過濾。收集洗脫物，蒸發(fā)得到粗產(chǎn)物，進(jìn)而通過快速色譜分離(己烷/EtOAc 10∶1)。第一個餾分得到一些純JRL01023，為黃色固體。從第1根柱回收的餾分混合物再次進(jìn)行分離，得到更多的JRL01023(總分離量186mg，合并收率30％)；Rf 0.33(己烷/EtOAc 10∶1)；1H(400MHz，CDCl3)5.05(2H，s)，7.09(1H，d，J9.0Hz)，7.28(1H，dd，J 3.0和9.0Hz)，7.32-7.44(5H，m)，7.59(1H，d，J 3.0Hz)和10.34(1H，s，OH). 2-氨基-4-芐氧基-苯酚(JRL01028)
向JRL01023(1.33g，5.44mmol)在EtOH/H2O(1∶1，150mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入連二硫酸鈉(Na2S2O4，～85％，4.45g，21.74mmol)，并在75℃下加熱所得黃色懸浮液。在該溫度下加熱1小時后，反應(yīng)混合物的顏色變?yōu)闊o色，隨后冷卻到室溫。反應(yīng)混合物加EtOAc(150mL)稀釋，分出的有機層用鹽水(4x100mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并蒸發(fā)，所得粗產(chǎn)物進(jìn)而通過快速色譜(己烷/EtOAc 2∶1)純化，得到JRL01022，為棕色固體(700mg，62％)；Rf 0.20(己烷/EtOAc2∶1)；1H(400MHz，DMSO-d6)4.54(2H，s)，4.90(2H，s)，6.02(1H，dd，J 2.8和8.6Hz)，6.28(1H，d，J 2.8Hz)，6.52(1H，d，J 8.6Hz)，7.25-7.45(5H，m)和8.50(1H，s). 5-芐氧基-2-溴甲基-苯并惡唑(JRL01030)
攪拌下，在氮氣氛圍中向JRL01028(663mg，3.08mmol)在三甲基甲硅烷基聚磷酸酯(PPSE)/1，2-二氯苯(1∶5，60mL)中的混合物內(nèi)加入溴乙酸(333mg，2.40mmol)，并將形成的紫色混合物在150℃下加熱1小時。冷卻到室溫后，加EtOAc(100mL)稀釋反應(yīng)混合物，分出有機層，用鹽水(4x50mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾、蒸發(fā)，并將所得油進(jìn)而通過快速色譜(己烷/EtOAc 7∶1)分離，得到JRL01026，為紅色固體(228mg，30％)；Rf 0.21(己烷/EtOAc 7∶1)；1H(400MHz，CDCl3)4.65(2H，s)，5.10(2H，s)，7.06(1H，dd，J2.4和8.8Hz)，7.25(1H，d，J2.4 Hz)和7.30-7.46(6H，m). 2-甲基-苯并噻唑-6-醇(JRL01040)
0℃、氮氣氛下，向6-甲氧基苯并噻唑(950mg，5.14mmol)在二氯甲烷(30mL)中的攪拌溶液內(nèi)緩慢加入BBr3(1M的CH2Cl2也，7.7mL，7.7mmol)，反應(yīng)混合物變?yōu)樯钭厣珣腋∫?。在室溫攪拌過夜后，加冰/鹽水終止反應(yīng)，繼用EtOAc(100mL)稀釋。分出的有機層用鹽水(4x50mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾，蒸發(fā)得到一亮棕色殘留物，進(jìn)而通過快速色譜分離(己烷/EtOAc 3∶1)，得到JRL01040，為白色粉末(600mg，71％)；Rf 0.16(己烷/EtOAc 3∶1)；1H(400MHz，丙酮-d)2.72(3H，s)，6.99(1H，dd，J2.4和8.6Hz)，7.35(1H，d，J2.4 Hz)，7.70(1H，d，J8.6 Hz)和8.70(1H，br s). 6-芐氧基-2-甲基-苯并噻唑(JRL01053)
0℃、氮氣氛下，向JRL01040(1.47g，8.93mmol)在DMF(30mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入NaH(60％，393mg，9.83mmol)。攪拌30分鐘后，加入芐基溴(1.2mL，9.83mmol)，并在室溫下攪拌所得混合物4小時。反應(yīng)混合物加乙酸乙酯(100mL)稀釋，分出有機層，用鹽水(100mL，4x50mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并蒸發(fā)，粗產(chǎn)物通過快速色譜分離(己烷/EtOAc 6∶1)，得淺黃色固體JRL01053(2.20g，96％)；Rf 0.15(己烷/EtOAc 6∶1)；1H(400MHz CDCl3)2.75(3H，s)，5.06(2H，s)，7.10(1H，dd，J 2.2和8.8Hz)7.28-7.45(6H，m)和7.82(1H，d，J9 Hz). 6-芐氧基-2-溴甲基-苯并噻唑(JRL01071)
向JRL01053(2.1g，8.22mmol)在CCl4(50mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入NBS(1.55g，8.64mmol)和過氧化二苯甲酰(32mg)?；亓魉脺\黃色懸浮液2小時，冷卻到室溫后過濾。濾液用EtOAc(100mL)稀釋，繼用NaOH(5％，1x100mL)、鹽水(3x50mL)順序洗滌，干燥(硫酸鈉)，過濾并蒸發(fā)，所得粗產(chǎn)物進(jìn)而通過快速色譜(己烷/EtoAc 7∶1)分離，得到JRL01071，為白色固體(1.05g，39％)；m.p.93-96℃；Rf0.23(己烷/EtOAc 7∶1)，1H(400MHz CDCl3)4.76(2H，s)，5.10(2H，s)，7.15(1H，dd，J 2.7和9.0Hz)，7.30-7.46(6H，m)7.89(1H，d，J9.0 Hz)；LRMS(FAB+)333.9[55，(M+H)+]，255.0[17，(M+H-79Br)+]，91.0{100，Bn+}；HRMS(FAB+)333.98873，C15H23BrNOS計算值333.99012. 4-[(6-芐氧基-苯并噻唑-2-基甲基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(JRL01074)
0℃、氮氣氛下，向NaH(60％，57mg，1.42mol)在DMF(5mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入在DMF(5mL)中的4-[(1，2，4)三唑-4-氨基]芐腈(264mg，1.42mol)。在氮氣氛圍中于40-50℃下攪拌1小時后，冷卻橙色反應(yīng)混合物到室溫，加入JRL01071(500mg，1.50mol)。在氮氣氛圍中室溫攪拌所得混合物過夜。在反應(yīng)混合物加CH2Cl2(50mL)稀釋之后，有機層用鹽水(100mL，3x50mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾、蒸發(fā)，并將得到的粗產(chǎn)物通過快速色譜(EtOAc)分離，得到JRL01071，為淺黃色固體(320mg，51％)；Rf 0.26(EtOAc)；1H(400MHz，CDCl3)5.12(2H，s)，5.30(2H，s)，6.60(2HAA′BB′)，7.18(1H，dd，J 2.6和9.0Hz)，7.30-7.50(6H，m)，7.54(2HAA′BB′)，7.85(1H，d，J 9.0Hz)和8.57(2H，s). 5-芐氧基-2-甲基-苯并噻唑(JRL01052)
0℃、氮氣氛下，向2-甲基苯并噻唑-5-醇(4.0g，23.48mmol)在DMF(40mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入NaH(60％，1.03g，25.75mmol)。攪拌30分鐘后，加入芐基溴(3.2mL，25.83mmol)，并在室溫下攪拌所得混合物4小時。反應(yīng)混合物然后加乙酸乙酯(300mL)稀釋，分出有機層，用鹽水(300mL，4x50mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并蒸發(fā)，所得粗產(chǎn)物通過快速色譜分離(己烷/EtOAc 6∶1)，得淺黃色固體JRL01052(5.63g，94％)；Rf 0.15(己烷/EtOAc 6∶1)；1H(400MHzCDCl3)2.80(3H，s)，5.14(2H，s)，7.00-7.70(8H，m). 5-芐氧基-2-溴甲基-苯并噻唑(JRL01064)
向JRL01052(3.6g，14.10mmo)在CCl4(100mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入NBS(2.66g，14.80mmol)和過氧化二苯甲酰(55mg)。回流所得淺黃色懸浮液2小時，冷卻到室溫后過濾。濾液用EtOAc(200mL)稀釋，繼用NaOH(5％，1x200mL)、鹽水(3x100mL)順序洗滌，干燥(硫酸鈉)，過濾并蒸發(fā)，所得粗產(chǎn)物進(jìn)而通過快速色譜(己烷/EtoAc 7∶1)分離，得到JRL01064，為白色固體(1.81g，38％)；m.p.87-89℃；Rf 0.25(己烷/EtOAc 7∶1)，1H(400MHz CDCl3)4.77(2H，s)，5.13(2H，s)，7.14(1H，dd，J 2.5和8.6Hz)，7.30-7.48(5H，m)，7.55(1H，d，J 2.5Hz)和7.71(1H，d，J 8.6Hz)；LRMS(FAB+)333.9[50，(M+H)+]，255.0[17，(M+H-79Br)+]，91.0{100，Bn+}；HRMS(FAB+)333.98946，C15H13BrNOS計算值333.99012. 4-[(5-芐氧基-苯并噻唑-2-基甲基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-芐腈(JRL01078)
室溫下，在氮氣氛中攪拌由JRL01064(500mg，1.5mmol)、4-[(1，2，4)三唑-4-氨基]芐腈(277mg，1.5mmol)和無水碳酸鉀(207mg，1.5mmol)在乙腈(10mL)中形成的懸浮液過夜。加EtOAc(50mL)稀釋所得反應(yīng)混合物，有機層用鹽水(4x50mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾、蒸發(fā)，并將得到的粗產(chǎn)物通過快速色譜(EtOAc/丙酮，4∶1)分離，得到JRL01078，為黃色固體(98mg，15％)；Rf 0.24(EtOAc)；1H(400MHz，CDCl3)5.12(2H，s)，5.33(2H，s)，6.58(2HAA′BB′)，7.13(1H，dd，J 2.6和9.0Hz)，7.30-7.48(5H，m)，7.50-7.56(3H，m)，7.71(1H，d，J 9.0Hz)和8.61(2H，s). 4-(3-羥基-丙硫基)-苯酚(CAB02029)
將4-羥基苯硫酚(6.31g，50mmol)溶于乙醇(100mL)，加入叔丁醇鉀(6.72g，60mmol)。攪拌該混合物直至獲得黃色清亮溶液。然后利用注射器加入3-氯-1-丙醇(4.20mL，50mmol)。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物過夜，濾出氯化鉀沉淀，減壓濃縮濾液。將殘留物溶于乙酸乙酯(150mL)，有機層用水(2x100mL)和鹽水(100mL)萃取，硫酸鈉干燥并減壓濃縮。將所得油體溶于二氯甲烷(50mL)和己烷(100mL)中，開口放置過夜。濾出固體產(chǎn)物，在高真空下干燥。收率5.34g(58％)，淺黃色固體。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ＝1.71-1.77(m，2H)，2.82-2.86(m，2H)，3.60-3.64(m，2H)，6.73(d，J＝8.6Hz，2H)，7.24(d，J＝8.6Hz，2H). 3-(4-芐氧基-苯硫基)-丙-1-醇(CAB02032)
將4-(3-羥基-丙硫基)-苯酚(CAB02029，3.686g，20mmol)溶于乙醇(50mL)，加入叔丁醇鉀(2.80g，25mmol)和芐基溴(3.0mL，約25mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^夜，濾出析出的溴化鉀，減壓濃縮濾液。將所得黃色固體溶于乙酸乙酯(100mL)，溶液用水(100mL)和鹽水(100mL)洗滌，硫酸鈉干燥并減壓濃縮。將殘留物溶于二氯甲烷(約10mL)，通過加己烷(約200mL)沉淀產(chǎn)物。收集結(jié)晶產(chǎn)物，在高真空下干燥。收率4.481g(82％)，無色小片晶.1H-NMR(400MHz，CDCl3δ＝1.45(br s，1H，-OH)，1.82-1.87(m，2H)，2.84(t，J＝7.4Hz，2H)，3.74-3.78(m，2H)，5.05(s，2H，-OCH2Ph)，6.90-6.93(m，2H)，7.31-7.44(m，7H). 1-溴-3-(4-芐氧基-苯硫基)-丙烷(CAB02037)
在0℃(冰/水浴)下，向3-(4-芐氧基苯硫基)-丙-1-醇(CAB02032，4.12g，15.0mmol)和四溴化碳(4.98g，18.0mmol)在二氯甲烷(120mL)中的溶液內(nèi)加入三苯膦(7.90g，30.0mmol)。溫?zé)岱磻?yīng)混合物到室溫，再攪拌1小時。然后將溶液轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，加入NaHCO3濃溶液(50mL)。分離有機層，用硫酸鈉干燥，減壓濃縮。然后將殘留物溶于乙酸乙酯(25mL)中，在攪拌下加入己烷(100mL)。濾出沉淀出的三苯氧化磷，再用EtOAc/己烷混合物(1∶4，100mL)洗滌。濃縮有機溶液，殘留物通過柱色譜純化(乙酸乙酯/己烷，1∶10，Rf0.48)。收率4.96g(98％)，為無色油體，兩天之后變?yōu)楣腆w。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝2.07(tt，J＝7.0，7.0Hz，2H)，2.95(t，J＝7.0Hz，2H)，3.50(t，J＝7.0Hz，2H)，5.04(s，2H，-OCH2Ph)，6.92(d，J＝9.0Hz，2H)，7.27-7.44(m，7H).13C-NMR(100.5MHz，CDCl3)δ＝32.30，32.50，34.41，70.44，115.84，126.15，127.72，128.31，128.86，133.65，136.89，158.43. 4-{[3-(4-芐氧基-苯硫基)-丙基]-[1，2，4]三唑-4-基-氨基}-芐腈(CAB02038)
在0℃下，向4-([1，2，4]三唑-4-基氨基)芐腈(926mg，5.0mmol)的DMF(10mL)溶液中加入NaH(60％，200mg，5.0mmol)?；旌衔镌?0℃下攪拌30分鐘，冷卻到室溫，加入1-溴-3-(4-芐氧基苯硫基)-丙烷(CAB02037，1.686g，5.0mmol)。攪拌反應(yīng)混合物15小時，加入乙酸乙酯(100mL)。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，用水(2x50mL)和鹽水(20mL)萃取。有機層用硫酸鈉干燥，并減壓濃縮。殘留物通過柱色譜(洗脫劑乙酸乙酯，Rf0.41)純化。收率1.724g(78％)，為無色油體。將該油體用少量甲醇結(jié)晶。收率1.517g(68％).1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝1.84(tt，J＝6.4，6.4Hz，2H)，2.90(t，J＝6.4Hz，2H)，3.90(t，J＝6.4Hz，2H)，5.06(s，2H，-OCH2Ph)，6.52(d，J＝9.0Hz，2H)，6.93(d，J＝9.0Hz，2H)，7.31(d，J＝9.0Hz，2H)，7.33-7.44(m，5H)，7.52(d，J＝9.0Hz，2H)，8.26(s，2H).LRMS(FAB+)442.2(100，[M+H]+). 4-{[3-(4-芐氧基-苯磺?；?-丙基]-[1，2，4]三唑-4-基-氨基}-芐腈(CAB02168)
在室溫下，向4-{[3-(4-芐氧基-苯硫基)-丙基]-[1，2，4]三唑-4-基-氨基}-芐腈(CAB02038，221mg，0.50mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入間氯過苯甲酸(259mg，1.50mmol)。攪拌混合物1小時，然后加入乙酸乙酯(50mL)和NaHCO3濃溶液(20mL)。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，分出有機層，用鹽水(20mL)洗滌，硫酸鈉干燥并減壓濃縮。殘留物通過柱色譜純化(乙酸乙酯，Rf 0.22).收率186mg(78％)，淺黃色泡沫體.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝208(tt，J＝7.0，7.0Hz，2H)，3.15(t，J＝7.0Hz，2H)，4.04(t，J＝7.0Hz，2H)，5.16(s，2H，-OCH2Ph)，6.61(d，J＝9.0Hz，2H)，7.11(d，J＝9.0Hz，2H)，7.34-7.44(m，5H)，7.58(d，J＝9.0Hz，2H)，7.81(d，J＝9.0Hz，2H)，8.30(s，2H).LRMS(FAB+)474.1(100，[M+H]+). HRMS(FAB+)474.16010 C25H24N5O3S計算值474.1599874-{[3-(4-羥基-苯磺酰基)-丙基]-[1，2，4]三唑-4-基-氨基}-芐腈(CAB02169，STX541)
向4-{[3-(4-芐氧基-苯磺酰基)丙基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}-芐腈(CAB02168，118mg，0.25mmol)在THF(10mL)和乙醇(10mL)中的溶液內(nèi)加入鈀-碳(50mg，10％Pd)?；旌衔镌跉錃?氣囊)氛圍中室溫攪拌18小時。然后通過硅藻土過濾反應(yīng)混合物，并減壓濃縮清亮無色濾液。殘留物用丙酮/水重結(jié)晶。收率68mg(71％)，無色結(jié)晶.1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.68-1.76(m，2H)，3.38(t，J＝7.6Hz，2H)，3.92(t，J＝7.2Hz，2H)，6.57(d，J＝9.0Hz，2H)，6.95(d，J＝9.0Hz，2H)，7.68(d，J＝9.0Hz，2H)，7.73(d，J＝9.0Hz，2H)，8.97(s，2H)，10.64(s，1H，-OH).LRMS(FAB+)384.0(100，[M+H]+).HRMS (FAB+)384.11248 C18H18N5O3S計算值384.11304. 雙-(4，4’-芐氧基)苯基-氯甲烷(CAB02062)
向雙-(4-芐氧基-苯基)-甲醇(1.982g，5.0mmol)中加入亞硫酰氯(3.0mL)。室溫攪拌形成的粉紅色溶液直至不再產(chǎn)生二氧化硫和氯化氫為止(約1.5h)。減壓除去過量的亞硫酰氯，粗產(chǎn)物無需任何進(jìn)一步純化直接使用。收率2.075g(100％).1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝5.06(s，4H，2x-OCH2Ph)，6.11(s，1H，Ar2CHCl)，6.94(d，J＝8.6Hz，4H)，7.30-7.46(m，14H). 4-{[雙-(4-芐氧基-苯基)-甲基]-[1，2，4]三唑-4-基-氨基}-芐腈(CAB02068)
在0℃下，向4-([1，2，4]三唑-4-基氨基)芐腈(926mg，5.0mmol)的DMF(10mL)溶液中加入NaH(60％，200mg，5.0mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時，加入雙-(4，4’-芐氧基)苯基-氯甲烷(CAB02062，2.075g，5.0mmol)。攪拌反應(yīng)混合物15小時，加入乙酸乙酯(100mL)。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，用水(2x50mL)和鹽水(20mL)萃取。有機層用硫酸鈉干燥，并減壓濃縮。殘留物通過柱色譜(洗脫劑乙酸乙酯，Rf0.41)純化。收率1.319g(47％)，為白色固體。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝5.02(s，4H，2x-OCH2Ph)，6.28(s，1H)，6.54(d，J＝9.0Hz，2H)，6.90(d，J＝8.6Hz，4H)，7.06(d，J＝8.6Hz，4H)，7.30-7.44(m，10H)，7.51(d，J＝9.0Hz，2H)，7.88(s，2H).13C-NMR(100.5MHz，CDCl3)＝69.89，70.44，104.68，113.48，115.63，118.93，127.76，128.39，128.86，129.31，129.76，134.19，136.56，143.92，150.39，159.19.LRMS(FAB+)564.2(100，[M+H]+). 4-{[雙-(4-羥基-苯基)-甲基]-[1，2，4]三唑-4-基-氨基}-芐腈(CAB02070，STX340)
將4-{[雙-(4-芐氧基-苯基)甲基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}-芐腈(CAB02068，564mg，1.0mmol)溶于乙醇(50mL)，加入鈀-碳(50mg，10％Pd)?；旌衔镌跉錃?氣囊)氛圍中攪拌48小時(TLC檢測)，直至起始原料完全消耗。濾出(硅藻土)Pd/C，減壓濃縮所得溶液。得到黃色固體，進(jìn)而通過加熱溶于乙酸乙酯(10mL)，冷卻到室溫后，濾出白色沉淀物，在高真空下干燥。收率312mg(81％).1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝5.74(s，2H，2x-OH)，6.28(s，1H)，6.53(d，J＝9.0Hz，2H)，6.61(d，J＝8.6Hz，4H)，7.10(d，J＝8.6Hz，4H)，7.65(d，J＝9.0Hz，2H)，8.83(s，2H).LRMS(FAB+)199.1(100)，384.1(50，[M+H]+).LRMS(FAB-)184.1(100)，382.1(41，[M-H]-). 4-{[雙-(4-氨基磺酰氧基-苯基)甲基]-[1，2，4]三唑-4-基氨基}-芐腈(CAB02075)
減壓濃縮(30℃水浴溫度)氨基磺酰氯的甲苯溶液(5mL，0.7M，3.5mmol)到大約1mL體積。冷卻殘留物到0℃(冰浴)，加入N，N-二甲基乙酰胺(5mL)。向所形成的無色溶液中加入4-{[雙-(4-羥基苯基)-甲基]-[1，2，4]三唑-4-基-氨基}-芐腈(CAB02070，250mg，0.65mmol)，室溫攪拌混合物18小時。向溶液中加入乙酸乙酯(50mL)和水(30mL)，分出有機層，用水(2x30mL)和鹽水(20mL)洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮得到白色固體。將該固體溶于乙酸乙酯中，加己烷進(jìn)行沉淀。濾出白色粉末，在高真空下干燥。收率299mg(85％).1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝6.67(s，1H)，6.67(d，J＝8.6Hz，2H)，7.17(d，J＝8.6Hz，4H)，7.47(d，J＝8.6Hz，4H)，7.70(d，J＝8.6Hz，2H)，8.02(s，4H，2x-NH2)，8.77(s，2H).LRMS(FAB+)542.1(50，[M+H]+).LRMS(FAB-)184.1(100)，540.0(85，[M-H]-). 二甲基氨基磺酸4-甲?；交?JRL01114)(我們按照1957年的德國專利1016256所述方法合成)
攪拌下，加熱4-羥基苯甲醛(1.0g，8.02mmol)的N，N-二甲基環(huán)己胺(7mL)溶液到90-95℃，并在此溫度下逐滴加入ClSO2Nme2(0.87mL，8.02mL)。反應(yīng)混合物然后在90-95℃下加熱3小時。冷卻到室溫后，加入EtOAc(100mL)，將有機層用1M鹽酸(2x100mL)和鹽水(3x50mL)順序洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾，蒸發(fā)得到黃色油體，通過在冰箱中貯藏固化成黃色蠟狀物(1.82g，99％)；1H(270MHz，CDCl3)3.08(6H，s)，7.46(2H AA′BB′)，7.94(2H AA′BB′)和10.0(1H，s). 二甲基氨基磺酸4-羥甲基-苯基酯(JRL01115)
在0℃下，向JRL01114(1.81g，7.90mmol)在THF(50mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入NaBH4(305mg，7.90mmol)。攪拌2小時后，起始的黃色混合物變?yōu)榘咨鞈乙?，然后將反?yīng)混合物倒入冰/水(～100mL)中。水層用氯仿(4x50mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有機萃取物，過濾，蒸發(fā)得到黃色油體(1.0g)，進(jìn)而通過快速色譜(乙酸乙酯)純化，得到JRL01115，為淺黃色透明油體(820mg，45％)；1H(400MHz，CDCl3)1.76(～1H，br s，與D2O發(fā)生交換)，2.98(6H，s)，4.70(2H，s)，7.27(2H AA′BB′)和7.39(2H AA′BB′)；LRMS(FAB+)385.1[7，(M+H+NBA)+]，231.0(50，M+)，214.0[100，(M+H-H2O)+]，202.0(10)；HRMS(FAB+)231.05557，C9H13NO4S計算值231.05653. 二甲基-氨基磺酸4-氯甲基-苯基酯(LWO02144)
在冰/水溫度下，向JRL01115(725mg，3.315mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入亞硫酰氯(0.35mL＜4.703mmol)。在室溫攪拌1小時后，從反應(yīng)混合物中除去揮發(fā)物，所得油體與氯仿(3x30mL)一起共蒸發(fā)三次，得到LWO02144，黃色油體(767mg，98％)；Rf 0.52(EtOAc/己烷，1∶1)，參比物0.19(JRL01115)；1H(400MHz，CDCl3)2.99(6H，s，NMe2)，4.58(2H，s)，7.28(2H AA′BB′)和7.42(2H，AA′BB′)；LRMS(FAB+)403.0[18，(M+H+NBA)+]，391.2(21)，249.9[100，(M+H)+]，214.0[45，(M+H-Cl)+]，113.0(17)；HRMS(FAB+)249.02239，C9H12ClNO3S計算值249.02264.LWO02144非常純凈，因此無需進(jìn)一步純化便可使用。
二甲基氨基磺酸4-{[(4-氰基-苯基)-[1，2，4]三唑-4-基-氨基]-甲基}苯基酯(LWO02145，STX636)
在冰/水溫度下，向4-[(1，2，4)三唑-4-氨基]芐腈(538mg，2.903mol)在無水DMF(10mL)中的攪拌溶液內(nèi)加入NaH(60％，128mg，3.193mmol)。在50℃下于氮氣氛圍中攪拌形成的淺橙棕色混合物10分鐘。冷卻到室溫后，向反應(yīng)混合物中加入在DMF(共5mL)中的LWO02144(725mg，2.903mmol)。在50-60℃加熱攪拌所得橙/棕色懸浮液4小時。冷卻后的反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(100mL)稀釋，分出有機層，用鹽水(100mL，4x50mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)得到橙/棕色漿體(1.15g)。將此粗產(chǎn)物在硅膠上通過快速色譜分離(先用純乙酸乙酯，接著在收集第一餾分后改用純丙酮洗脫)，蒸發(fā)收集到的第二餾分，得到LWO02145，為亮黃色透明漿體，室溫放置過夜發(fā)生固化，得淡黃色蠟狀物(803mg，69％)；m.p.結(jié)晶在等于大于大約150℃的溫度下發(fā)生強烈的分解與消散。結(jié)晶在195-202℃下熔化；Rf 0.36(EtOAc)，參比物0.13(LWO02144)；1H(400MHz，CDCl3)2.98(6H，s，NMe2)，4.90(2H，s)，6.68(2H AA′BB′)，7.27(4H，m)，7.60(2H，AA′BB′)和8.13(2H，s，三唑-H)；LRMS(FAB+)399.2[100，(M+H)+]，330.1[43，(M-三唑)+]；HRMS(FAB+)399.12458，C18H19N6O3S計算值399.12394.實測值C 53.9，H 4.62，N 22.7％；C18H18N6O3S計算值C 54.26，H 4.55，N 21.09％。
3-溴-4-(N，N-二甲基氨基磺?；?苯甲醛(OBS02001)
在80-90℃下，向OBS01057(6.0g，30mmol)的N，N-二甲基環(huán)己胺(30mL)溶液中加入N，N-二甲基氨基磺酰氯(3.79mL，35.27mmol)。混合物在該溫度下攪拌4小時，轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，加EtOAc(100mL)稀釋。有機層用水(2x200mL)、6M HCl(aq.)(200mL)、鹽水(2x200mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾。真空濃縮濾液，得到橙色油體，放置發(fā)生固化。將該產(chǎn)物在正己烷中攪拌，過濾，風(fēng)干得到OBS02001，為淺黃色固體(8.21g，89％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.9；1H-NMR(270MHz，CDCl3)＝3.09(6H，s)，7.68(1H，d，J＝8.4)，7.84(1H，dd，J＝1.8，8.4)，8.12(1H，d，J＝1.8)，9.93(1H，s). 3-溴-4-(N，N-二甲基氨基磺酰基)芐醇(OBS02002)
向OBS02001(6.0g，19.47mmol)的無水THF(50mL)溶液中加入硼氫化鈉(0.81g，21.42mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時，加水猝滅(小心?。?，并通過硅藻土墊過濾。真空濃縮濾液，進(jìn)而再溶于DCM(200mL)。有機層用鹽水(2x200mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，并且過濾。真空濃縮濾液，得到OBS02002，為淺黃色油體(5.54g，92％)。TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.47；1H-NMR(270MHz，CDCl3)＝2.97(6H，s)，3.14(1H，bs，OH)，4.51(2H，s)，7.19(1H，dd，J＝1.5，8.1)，7.37(1H，d，J＝8.4)，7.52(1H，d，J＝1.8). 3-溴-4-(N，N-二甲基氨基磺?；?芐基氯(OBS02003)
向OBS02002(5.0g，16.12mmol)的無水DCM(50mL)溶液中加入亞硫酰氯(1.76mL，24.18mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時，真空除去揮發(fā)物。將殘留物再溶解，并與DCM(3x20mL)共蒸發(fā)三次，得到黃色油體，放置發(fā)生固化。將該固體在正己烷中攪拌，過濾，風(fēng)干得到OBS02003，為灰白色固體(5.01g，95％)；TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.79；1H-NMR(270MHz，CDCl3)＝3.05(6H，s)，4.51(2H，s)，7.32(1H，dd，J＝2.2，8.4)，7.48(1H，d，J＝8.4)，7.62(1H，d，J＝2.2). 二甲基氨基磺酸2-溴-4-{[(4-氰基-苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]甲基}苯基酯(OBS02005，STX732)
在室溫下，向NaH(60％油分散體，0.44g，11.36mmol)在無水DMF(30mL)中的懸浮液內(nèi)加入4-[(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(2.0g，10.8mmol)的無水DMF(10mL)溶液，混合物在氮氣氛圍中攪拌1小時。所得橙黃色懸浮液然后用OBS02003(3.73g，11.36mmol)的無水DMF(5mL)溶液處理，混合物在80-90℃下攪拌過夜。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，加EtOAc(200mL)稀釋。有機層用水(4x200mL)、鹽水(200mL)洗滌，干燥(MgSO4)，并過濾。真空濃縮合并濾液，所得殘留物用i-PrOH重結(jié)晶，得到OBS02005，為無色固體(3.34g，65％)；TLC[SiO2，EtOAc(100％)]Rf＝0.32(藍(lán)色熒光，254nm)；元素分析C18H17N6SO3BrC，45.3；H，17.6；N，3.6％；實測值C.45.4；H，17.5；N，3.6％；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)＝2.98(6H，s)，5.11(2H，s)，6.75(2H，AA′BB′)，7.43(2H，s)，7.74(1H，s)，7.78(2H，AA′BB′)，8.88(2H，s)；13C-NMR(400MHz，d6-DMSO)＝39.4(2xCH3)，56.9(CH2)，103.8，114.5(2xCH)，116.1，119.7，123.9(CH)，129.9(CH)，134.3(CH)，134.6(2xCH)，136.0，144.0(2xCH)，146.9，151.7；MS(FAB+)＝477(100％)，410(30)，274(22)，113(32)；C18H17N6SO3Br的精確質(zhì)譜(計算值，477.03445；實測值，477.03282)；LC-MS(Waters 2790Alliance HPLC/ZQ MicroMass光譜儀，帶有PDA檢測器，使用APCI)，tR(梯度洗脫5∶95MeCN/H2O-95∶5MeCN/H2O，10min，然后95∶5MeCN/H2O-5∶95MeCN/H2O，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5um)，100mm柱)＝6.24min(M+2H＝478.19)；HPLC(Waters717+帶有PDA檢測器的Autosampler，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5m)，4.6x150mm柱，90∶10MeOH/H2O)tR＝1.98min(99.8％純度). 3，5-二溴-4-(N，N-二甲基氨基磺?；?苯甲醛(OBS02013)
在80-90℃下，向3，5-二溴-4-羥基苯甲醛(5.0g，17.86mmol)的N，N-二甲基環(huán)己胺(30mL)溶液中加入N，N-二甲基氨基磺酰氯(30mL)?；旌衔镌谠摐囟认聰嚢?小時，轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，加EtOAc(100mL)稀釋。有機層用水(2x200mL)、6M HCl(aq.)(200mL)、鹽水(2x200mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾。真空濃縮合并的濾液，得到深琥珀色油體，放置發(fā)生固化。將該產(chǎn)物在正己烷中攪拌，過濾，風(fēng)干得到OBS02013，為淺乳白色固體(6.09g，88％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.73；1H-NMR(270MHz，CDCl3)＝3.14(6H，s)，8.06(2H，s)，9.88(1H，s). 3，5-二溴-4-(N，N-二甲基氨基磺酰基)芐醇(OBS02015)
向OBS02013(5.5g，14.21mmol)的無水THF(50mL)溶液中加入硼氫化鈉(0.59g，15.63mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時，加水猝滅(小心??！)，并通過硅藻土墊過濾。真空濃縮濾液，進(jìn)而再溶于DCM(200mL)。有機層用鹽水(2x200mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，并且過濾。真空濃縮合并的濾液，得到OBS02015，為淺黃色油體(5.21g，94％)。TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.55；1H-NMR(270MHz，CDCl3)＝1.97(1H，bs，OH)，3.11(6H，s)，4.63(2H，s)，7.55(2H，t，J＝1.5). 3，5-二溴-4-(N，N-二甲基氨基磺?；?芐基氯(OBS02018)
向OBS02015(5.0g，10.10mmol)的無水DCM(50mL)溶液中加入亞硫酰氯(1.11mL，15.15mmol)。混合物在室溫下攪拌2小時，真空除去揮發(fā)物。將殘留物再溶解，并與DCM(3x20mL)一起共蒸發(fā)三次，得到OBS02018，為棕色油體，放置發(fā)生固化(3.93g，96％)；TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.83；1H-NMR(270MHz，CDCl3)＝3.11(6H，s)，4.46(2H，s)，7.59(2H，s). 二甲基氨基磺酸2，6-二溴-4-{[(4-氰基-苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]甲基}苯基酯(OBS02019，STX740)
在室溫下，向NaH(60％油分散體，0.22g，5.67mmol)在無水DMF(20mL)中的懸浮液內(nèi)加入4-[(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(1.0g，5.4mmol)的無水DMF(5mL)溶液，混合物在氮氣氛圍中攪拌1小時。所得橙黃色懸浮液然后用OBS02018(2.31g，5.67mmol)的無水DMF(5mL)溶液處理，混合物在80-90℃下攪拌過夜。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，加EtOAc(200mL)稀釋。有機層用水(4x200mL)、鹽水(200mL)洗滌，干燥(MgSO4)。真空濃縮，所得殘留物用i-PrOH重結(jié)晶，得到OBS02019，為白色固體(2.06g，69％)；TLC[SiO2，EtOAc(100％)]Rf＝0.53(藍(lán)色熒光，254nm)；元素分析C18H16N6SO3Br2C，53.3；H，4.7；N，19.6％；實測值C.53.1；H，4.7；N，19.3％；1H-NMR(270MHz，d6-DMSO)＝3.02(6H，s)，5.09(2H，s)，6.81(2H，AA′BB′)，7.73(2H，s)，7.76(2H，AA′BB′)，8.93(2H，s)；13C-NMR(400MHz，d6-DMSO)＝39.3(2xCH3)，56.7(CH2)，103.9，114.5(2xCH)，118.7，119.7，133.6(2xCH)，134.6(2xCH)，137.6，144.0，145.1(2xCH)，151.7；MS(FAB)＝557(M+H，100％)，488(20)，113(28)；C18H16N6SO3Br2(計算值，556.9442；實測值，556.9429)；LC-MS(Waters 2790 Alliance HPLC/ZQMicroMass光譜儀，帶有PDA檢測器，使用APCI)，tR(梯度洗脫5∶95MeCN/H2O-95∶5MeCN/H2O，10min，然后95∶5MeCN/H2O-5∶95MeCN/H2O，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5um)，100mm柱)＝6.46min(M+2H＝558.17)；HPLC(Waters 717+帶有PDA檢測器的Autosampler，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5m)，4.6x150mm柱，90∶10MeOH/H2O)tR＝2.01min(98.7％純度). 3-溴-4-(N，N-二甲基氨基磺?；?-5-甲氧基苯甲醛(OBS02022)
在80-90℃下，向5-溴香草醛(3.0g，12.98mmol)的N，N-二甲基環(huán)己胺(30mL)溶液中加入N，N-二甲基氨基磺酰氯(1.64mL，15.26mmol)。混合物在該溫度下攪拌4小時，轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，加EtOAc(100mL)稀釋。有機層用水(2x200mL)、6M HCl(aq.)(200mL)、鹽水(2x200mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾。真空濃縮合并濾液，得到金棕色油體，放置發(fā)生固化。將該產(chǎn)物在正己烷中攪拌，過濾，風(fēng)干得到OBS02022，為乳白色固體(3.22g，73％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.88；1H-NMR(270MHz，CDCl3)＝3.07(6H，s)，3.96(3H，s)，7.43(1H，d，J＝1.8)，7.68(1H，d，J＝1.8)，9.87(1H，s). 3-溴-4-(N，N-二甲基氨基磺酰基)-5-甲氧基芐醇(OBS02023)
向OBS02022(3.0g，8.87mmol)的無水THF(50mL)溶液中加入硼氫化鈉(0.37g，9.76mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時，加水猝滅(小心??！)，并通過硅藻土墊過濾。真空濃縮濾液，進(jìn)而再溶于DCM(200mL)。有機層用鹽水(2x200mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，并且過濾。真空濃縮合并的濾液，得到OBS02023，為淺黃色油體(1.71g，57％)。TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.68；1H-NMR(270MHz，CDCl3)＝1.94(1H，bs，OH)，3.07(6H，s)，3.91(3H，s)，4.65(2H，s)，6.96(1H，d，J＝2)，7.17(1H，d，J＝2). 3-溴-4-(N，N-二甲基氨基磺酰基)-5-甲氧基芐基氯(OBS02026)
向OBS02023(1.56g，4.59mmol)的無水DCM(50mL)溶液中加入亞硫酰氯(0.5mL，6.88mmol)。混合物在室溫下攪拌2小時，真空除去揮發(fā)物。將殘留物再溶解，并與DCM(3x20mL)一起共蒸發(fā)三次，得到OBS02026，為棕色油體(0.79g，48％)；TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.89；1H-NMR(270MHz，CDCl3)＝3.00(6H，s)，3.85(3H，s)，4.46(2H，s)，6.92(1H，d，J＝1.8)，7.16(1H，d，J＝1.8). 二甲基氨基磺酸2-溴-4-{[(4-氰基-苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]甲基}-6-甲氧基苯基酯(OBS02028，STX747)
在室溫下，向NaH(60％油分散體，0.07g，1.73mmol)在無水DMF(20mL)中的懸浮液內(nèi)加入4-[(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(0.31g，1.65mmol)的無水DMF(5mL)溶液，混合物在氮氣氛圍中攪拌1小時。所得橙黃色懸浮液然后用OBS02026(0.62g，1.73mmol)的無水DMF(5mL)溶液處理，混合物在80-90℃下攪拌過夜。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，加EtOAc(200mL)稀釋。有機層用水(4x200mL)、鹽水(200mL)洗滌，干燥(MgSO4)，并過濾。真空濃縮合并濾液，所得殘留物用i-PrOH重結(jié)晶，得到OBS02028，為灰白色固體(0.50g，59％)；TLC[SiO2，EtOAc(100％)]Rf＝0.63(藍(lán)色熒光，254nm)；元素分析C19H19N6SO4BrC，45.0；H，3.8；N，16.6％；實測值C.44.9；H，3.8；N，15.8％；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)＝2.93(6H，s)，3.86(3H，s)，5.07(2H，s)，6.77(2H，AA′BB′)，7.11(1H，d，J＝1.6)，7.24(1H，d，J＝1.6)，7.79(2H，AA′BB′)，8.9(2H，s)；13C-NMR(400MHz，d6-DMSO)＝39.0(2xCH3)，57.31(CH2)，57.31(CH3)，103.9，113.3(CH)，114.5(CH)，118.3，119.7，125.1(CH)，134.6(CH)，136.3，137.3，144.0(CH)，152.0，153.4；MS(FAB+)＝509(M+2H，100％)，440(31)，215(19)，113(19)；C19H19N6SO4Br(計算值，507.04323；實測值，507.04501)；LC-MS(Waters 2790 Alliance HPLC/ZQ MicroMass光譜儀，帶有PDA檢測器，使用APCI)，tR(梯度洗脫5∶95MeCN/H2O-95∶5MeCN/H2O，10min，然后95∶5MeCN/H2O-5∶95MeCN/H2O，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5um)，100mm柱)＝6.16min(M+H＝508.29)；HPLC(Waters 717+帶有PDA檢測器的Autosampler，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5m)，4.6x150mm柱，90∶10MeOH/H2O)tR＝1.96min(97.5％純度). 3-氯-4-(N，N-二甲基氨基磺酰基)苯甲醛(OBS02043)
在80-90℃下，向3-氯-4-羥基苯甲醛(6.0g，38.32mmol)的N，N-二甲基環(huán)己胺(30mL)溶液中加入N，N-二甲基氨基磺酰氯(4.84mL，45.05mmol)。混合物在該溫度下攪拌4小時，轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，加EtOAc(100mL)稀釋。有機層用水(2x200mL)、6M HCl(aq.)(200mL)、鹽水(2x200mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾。真空濃縮合并濾液，得到棕色油體，放置發(fā)生固化。將該產(chǎn)物在正己烷中攪拌，過濾，風(fēng)干得到OBS02043，為米色固體(5.36g，53％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.92；1H-NMR(270MHz，CDCl3)＝3.06(6H，s)，7.67(1H，d，J＝8.4)，7.79(1H，dd，J＝2.2，8.4)，7.95(1H，d，J＝1.8)，9.93(1H，s). 3-氯-4-(N，N-二甲基氨基磺?；?芐醇(OBS02046)
向OBS02043(5.0g，18.96mmol)的無水THF(50mL)溶液中加入硼氫化鈉(0.79g，20.86mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時，加水猝滅(小心??！)，并通過硅藻土墊過濾。真空濃縮濾液，進(jìn)而再溶于DCM(200mL)。有機層用鹽水(2x200mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，并且過濾。真空濃縮合并的濾液，得到OBS02046，為金棕色油體(3.81g，76％)。TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.64；1H-NMR(270MHz，CDCl3)＝2.04(1H，bs，OH)，3.05(6H，s)，4.66(2H，s)，7.25(1H，dd，J＝2.2，8.4)，7.46(1H，d，J＝2.2)，7.47(1H，d，J＝8.1). 3-氯-4-(N，N-二甲基氨基磺酰基)芐基氯(OBS02052)
向OBS02046(3.02g，11.37mmol)的無水DCM(50mL)溶液中加入亞硫酰氯(1.24mL，17.05mmol)。混合物在室溫下攪拌2小時，真空除去揮發(fā)物。將殘留物再溶解，并與DCM(3x20mL)共蒸發(fā)三次，得到OBS02052，為琥珀色油體(2.68g，83％)；TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.91；1H-NMR(270MHz，CDCl3)＝3.04(6H，s)，4.52(2H，s)，7.28(1H，dd，J＝2.2，8.4)，7.47(1H，d，J＝8.5)，7.47(1H，d，J＝2.2). 二甲基氨基磺酸2-氯-4-{[(4-氰基-苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]甲基}苯基酯(OBS02054，STX787)
在室溫下，向NaH(60％油分散體，0.34g，8.95mmol)在無水DMF(20mL)中的懸浮液內(nèi)加入4-[(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(1.66g，8.95mmol)的無水DMF(5mL)溶液，混合物在氮氣氛圍中攪拌1小時。所得橙黃色懸浮液然后用OBS02052(2.67g，9.4mmol)的無水DMF(5mL)溶液處理，混合物在80-90℃下攪拌過夜。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，加EtOAc(200mL)稀釋。有機層用水(4x200mL)、鹽水(200mL)洗滌，干燥(MgSO4)，并過濾。真空濃縮合并濾液，所得殘留物用i-PrOH重結(jié)晶，得到OBS02054，為淺乳色固體(2.03g，52％)；TLC[SiO2，EtOAc(100％)]Rf＝0.53(藍(lán)色熒光，254nm)；元素分析C18H17N6SO3ClC，49.9；H，4.0；N，19.4％；實測值C，49.7；H，4.0；N，19.2％；1H-NMR(270MHz，CDCl3)＝3.01(6H，s)，4.87(2H，s)，6.62(2H，AA′BB′)，7.15(1H，dd，J＝2.2，8.4)，7.32(1H，d，J＝2.2)，7.46(1H，d，J＝8.4)，7.55(2H，AA′BB′)，8.18(2H，s)；13C-NMR(400MHz，d6-DMSO)＝38.3(2xCH3)，56.0(CH2)，102.9，113.5(2x CH)，118.7，123.4(CH)，125.8，128.3(CH)，130.3(CH)，133.7(2x CH)，134.9，143.0(2x CH)，144.7，150.9；MS(FAB)＝433(M+H，100％)，364(37)；C18H17N6SO3Cl的精確質(zhì)譜(計算值M+H，433.08476；實測值M+H，433.08496)；LC-MS(Waters 2790 Alliance HPLC/ZQ MicroMass光譜儀，帶有PDA檢測器，使用APCI)，tR(梯度洗脫5∶95MeCN/H2O-95∶5MeCN/H2O，10min然后95∶5MeCN/H2O-5∶95MeCN/H2O，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5um)，100mm柱)＝6.18min(M+2H＝434.18)；HPLC(Waters 717+帶有PDA檢測器的Autosampler，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5m)，4.6x150mm柱，90∶10MeOH/H2O)tR＝1.98min(99.9％純度). 4-(N，N-二甲基氨基磺?；?-3-甲氧基苯甲醛(OBS02011)
在80-90℃下，向香草醛(4.56g，30mmol)的N，N-二甲基環(huán)己胺(30mL)溶液中加入N，N-二甲基氨基磺酰氯(3.79mL，35.27mmol)。混合物在該溫度下攪拌4小時，轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，加EtOAc(100mL)稀釋。有機層用水(2x200mL)、6M HCl(aq.)(200mL)、鹽水(2x200mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾。真空濃縮合并濾液，得到金黃色油體，放置發(fā)生固化。將該產(chǎn)物在正己烷中攪拌，過濾，風(fēng)干得到OBS02011，為黃色片狀物(6.92g，89％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.65；1H-NMR(270MHz，CDCl3)＝2.98(6H，s)，3.93(3H，s)，7.44(1H，d，J＝1.6)，7.48(1H，dd，J＝1.6，8.1)，7.53(1H，d，J＝8.1)，9.92(1H，s). 4-(N，N-二甲基氨基磺酰基)-3-甲氧基芐醇(OBS02014)
向OBS02011(5.5g，21.21mmol)的無水THF(50mL)溶液中加入硼氫化鈉(0.88g，23.33mmol)。混合物在室溫下攪拌4小時，加水猝滅(小心??！)，并通過硅藻土墊過濾。真空濃縮濾液，進(jìn)而再溶于DCM(200mL)。有機層用鹽水(2x200mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，并且過濾。真空濃縮合并的濾液，得到OBS02014，為淺黃色油體(5.12g，92％)。TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.18；1H-NMR(270MHz，CDCl3)＝2.44(1H，bs，OH)，，2.92(6H，s)，3.84(3H，s)，4.60(2H，s)，6.85(1H，dd，J＝2.2，8.4)，6.97(1H，d，J＝1.8)，7.25(1H，d，J＝8.1). 4-(N，N-二甲基氨基磺?；?-3-甲氧基芐基氯(OBS02016)
向OBS02014(2.76g，10.55mmol)的無水DCM(50mL)溶液中加入亞硫酰氯(1.15mL，15.82mmol)。混合物在室溫下攪拌2小時，真空除去揮發(fā)物。將殘留物再溶解，并與DCM(3x20mL)一起共蒸發(fā)三次，得到OBS02016，為棕色油體(2.91g，99％)；TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.84；1H-NMR(270MHz，CDCl3)＝2.96(6H，s)，3.90(3H，s)，4.55(2H，s)，6.95(1H，dd，J＝1.8，8.0)，7.01(1H，d，J＝1.8)，7.32(1H，d，J＝8.0). 二甲基氨基磺酸4-{[(4-氰基-苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]甲基}-2-甲氧基苯基酯(OBS02017，STX739)
在室溫下，向NaH(60％油分散體，0.22g，5.67mmol)在無水DMF(20mL)中的懸浮液內(nèi)加入4-[(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(1.0g，5.4mmol)的無水DMF(5mL)溶液，混合物在氮氣氛圍中攪拌1小時。所得橙黃色懸浮液然后用OBS02016(1.59g，5.67mmol)的無水DMF(5mL)溶液處理，混合物在80-90℃下攪拌過夜。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，加EtOAc(200mL)稀釋。有機層用水(4x200mL)、鹽水(200mL)洗滌，干燥(MgSO4)，并過濾。真空濃縮合并濾液，所得殘留物用i-PrOH重結(jié)晶，得到OBS02017，為乳白色固體(1.07g，46％)；TLC[SiO2，EtOAc(100％)]Rf＝0.26(藍(lán)色熒光，254nm)；元素分析C19H20N6SO4C，38.9；H，2.9；N，15.1％；實測值C，38.9；H，3.0；N，14.8％；1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)＝2.83(6H，s)，3.84(3H，s)，5.07(2H，s)，6.80(2H，AA′BB′)，6.90(1H，dd，J＝2，8)，7.12(1H，d，J＝2)，7.23(1H，d，J＝8)，7.79(2H，AA′BB′)，8.83(2H，s)；13C-NMR(400MHz，d6-DMSO)＝39.1(2xCH3)，56.8(CH3)，57.6(CH2)，103.7，114.1(2x CH)，114.5(CH)，119.7，121.5(CH)，124.1(CH)，134.6(2x CH)，135.2，138.8，144.0(2x CH)，151.8，152.0；MS(FAB+)＝429(M+H，100％)，360(36)，321(6)，244(15)，113(5)；C19H20N6SO4的精確質(zhì)譜(計算值，429.1341；實測值，429.1345)；LC-MS(Waters 2790 AllianceHPLC/ZQ MicroMass光譜儀，帶有PDA檢測器，使用APCI)，tR(梯度洗脫5∶95MeCN/H2O-95∶5MeCN/H2O，10min，然后95∶5MeCN/H2O-5∶95MeCN/H2O，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5um)，100mm柱)＝5.83min(M+2H＝430.27)；HPLC(Waters717+帶有PDA檢測器的Autosampler，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5m)，4.6x150mm柱，90∶10MeOH/H2O)tR＝1.94min(99.5％純度). 3-(N，N-二甲基氨基磺?；?-4-甲氧基苯甲醛(OBS02049)
在80-90℃下，向異香草醛(4.56g，30mmol)的N，N-二甲基環(huán)己胺(30mL)溶液中加入N，N-二甲基氨基磺酰氯(3.79g，35.27mmol)?；旌衔镌谠摐囟认聰嚢?小時，轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，加EtOAc(100mL)稀釋。有機層用水(2x200mL)、6M HCl(aq.)(200mL)、鹽水(2x200mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾。真空濃縮合并濾液，得到棕色油體，放置發(fā)生固化。將該產(chǎn)物在正己烷中攪拌，過濾，風(fēng)干得到OBS02049，為淺黃色固體(6.91g，89％).TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.57；1H-NMR(270MHz，CDCl3)＝2.98(6H，s)，3.95(3H，s)，7.07(1H，d，J＝8.4)，7.77(1H，dd，J＝1.8，8.4)，7.83(1H，d，J＝2.2)，9.84(1H，s). 3-(N，N-二甲基氨基磺?；?-4-甲氧基芐醇(OBS02053)
向OBS02049(5.5g，21.21mmol)的無水THF(50mL)溶液中加入硼氫化鈉(0.88g，23.33mmol)。混合物在室溫下攪拌4小時，加水猝滅(小心！！)，通過硅藻土墊過濾。真空濃縮濾液，進(jìn)而再溶于DCM(200mL)。有機層用鹽水(2x200mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，并且過濾。真空濃縮合并的濾液，得到OBS02053，為金黃色油體(3.26g，59％)。TLC[SiO2，EtOAc-正己烷(1∶1)]Rf＝0.36；1H-NMR(270MHz，CDCl3)＝1.73(1H，bs，OH)，2.97(6H，s)，3.88(3H，s)，4.62(2H，s)，6.95(1H，d，J＝8.4)，7.23(1H，dd，J＝2.2，8.4)，7.36(1H，d，J＝2.2). 3-(N，N-二甲基氨基磺?；?-4-甲氧基芐基氯(OBS02058)
向OBS02053(2.33g，8.89mmol)的無水DCM(50mL)溶液中加入亞硫酰氯(0.97mL，13.34mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時，真空除去揮發(fā)物。將殘留物再溶解，并與DCM(3x20mL)共蒸發(fā)三次，得到OBS02058，為光敏感棕色油體(2.07g，83％)；1H-NMR(270MHz，CDCl3)＝2.98(6H，s)，3.89(3H，s)，4.54(2H，s)，6.94(1H，d，J＝8.4)，7.25(1H，dd，J＝2.2，8.4)，7.40(1H，d，J＝2.2). 二甲基氨基磺酸5-{[(4-氰基-苯基)-[1，2，4]三唑-4-基氨基]甲基}-2-甲氧基苯基酯(OBS02060，STX796)
在室溫下，向NaH(60％油分散體，0.28g，6.91mmol)在無水DMF(20mL)中的懸浮液內(nèi)加入4-[(4-氰基苯基)氨基]-4H-[1，2，4]三唑(1.28g，6.91mmol)的無水DMF(5mL)溶液，混合物在氮氣氛圍中攪拌1小時。所得橙黃色懸浮液然后用OBS02058(2.03g，7.26mmol)的無水DMF(5mL)溶液處理，混合物在80-90℃下攪拌過夜。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，加EtOAc(200mL)稀釋。有機層用水(4x200mL)、鹽水(200mL)洗滌，干燥(MgSO4)，并過濾。真空濃縮合并濾液，所得殘留物用EtOAc-正己烷重結(jié)晶，得到OBS02060，為淺乳色固體(2.24g，76％)；1H-NMR(270MHz，CHCl3)＝2.88(6H，s)，3.82(3H，s)，4.79(2H，s)，6.66(2H，AA′BB′)，6.83(1H，d，J＝8.4)，6.94(1H，dd，J＝2.2，8.4)，7.30(1H，d，J＝1.8)，7.53(2H，AA′BB′)，8.12(2H，s)；13C-NMR(270MHz，CHCl3)＝38.7(2x CH3)，56.1(CH3)，57.2(CH2)，105.1，112.9(CH)，113.6(2x CH)，118.5，123.9(CH)，125.7(CH)，127.6(CH)，133.9(2x CH)，139.4，142.6(2x CH)，150.4，151.8；MS(FAB+)＝429(M+H，100％)，360(50)，321(6)，244(43)；C19H20N6SO4的精確質(zhì)譜(計算值，429.1343；實測值，429.1345)；LC-MS(Waters 2790 Alliance HPLC/ZQMicroMass光譜儀，帶有PDA檢測器，使用APCI)，tR(梯度洗脫5∶95MeCN/H2O-95∶5MeCN/H2O，10min然后95∶5MeCN/H2O-5∶95MeCN/H2O，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5um)，100mm柱)＝5.80min(M+2H＝430.27)；HPLC(Waters 717+帶有PDA檢測器的Autosampler，使用Waters″Symmetry″C18(填料3.5m)，4.6x150mm柱，90∶10MeOH/H2O)tR＝1.96min(99.8％純度). 合成STX258，265，273，287，288，290，291，292
合成STX300和STX301
式IV化合物 雙-(4-芐氧基苯基)甲酮(LWO02007A)
在0℃下，向4，4’-二羥基二苯酮(5.0g，23.34mmol)的無水DMF(150mL)溶液中分兩批加入氫化鈉(60％，在礦物油中，2.1g，51.35mmol)。攪拌30分鐘，此時不再有氫氣逸出，加入芐基溴(8.96g，51.35mmol)。所得黃色懸浮液隨后在氮氣氛圍中于100℃攪拌1小時。待冷卻到室溫時向懸浮液中加入水(500mL)，過濾生成的沉淀物，用水徹底洗滌。在室溫下風(fēng)干過夜后，將收集到的白色共同(10.1g)用熱甲苯重結(jié)晶，得到LWO02007A，為白色蓬松狀板晶(8.92g，22.61mmol，96.9％)；m.p.188-190℃。
雙-(4-芐氧基苯基)甲醇(LWO02018)
在0℃下，向LWO02007A(3.50g，8.873mmol)的無水THF(250mL)溶液中加入氫化鋁鋰(95％，425mg，10.65mmol)的無水THF(20mL)懸浮液。室溫攪拌30分鐘后，濃縮灰色懸浮液/混合物，向得到的濕殘留物中加入乙酸乙酯(200mL)。有機層用1M HCl(200mL)，鹽水(4x100mL)依次洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并蒸發(fā)，得到LWO02018，為白色/淺黃色殘留物(3.65g)；m.p.113-1201℃；δH(400MHz，DMSO-d6)5.06(4H，s，OCH2)，5.58(1H，d，J4.3Hz，CH)，5.67(1H，d，J4.3Hz，與D2O發(fā)生交換，OH)，6.93(4H，AA′BB′)，7.23(4H，AA′BB′)和7.38(10H，m，Bn). 1-[雙-(4-芐氧基苯基)甲基]-1H-[1，2，4]三唑(LWO02019)
在對甲苯磺酸(650mg)存在下，在Dean Stark條件下加熱LWO02018(3.26g，8.222mmol)與1H-1，2，4-三唑(695mg，9.866mmol)在甲苯(350mL)中的混合物過夜。冷卻到室溫后，蒸發(fā)溶劑，將得到亮黃色殘留物溶于乙酸乙酯(300mL)。有機層用1M NaOH(2x100mL)、鹽水(3x50mL)順序洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)得到亮黃色/棕色殘留物(3.36g)。將此粗品溶于熱乙酸乙酯(30mL)中，分批加入己烷(15mL)。冷卻到室溫，得到黃色結(jié)晶LWO02019A(2.50g，5.586mmol，68％)；m.p.134-137℃；δH(400MHz，DMSO-d6)5.09(4H，s，2xOCH2)，6.94(1H，s，CH)，7.01(4H，AA′BB′)，7.14(4H，AA′BB′)，7.29-7.47(10H，m，Bn)，8.03(～1H，s，C3′-H)和8.53(1H，s，C5′-H)；LRMS(FAB+)447.3[17，M+]，379.3[100，(M-三唑)+]，288，2[8，(M-三唑-Bn)+]，91.1[75，Bn+]；LRMS(FAB-)未觀測到峰存在；HRMS(FAB+)447.19588 C29H25N3O2計算值447.19468.實測值C 77.6，H 5.63，N 9.26；C29H25N3O2計算值C 77.83，H 5.63，N 9.37. 1-[雙-(4-羥基苯基)甲基]-1H[1，2，4]三唑(LWO02020，STX267)
向LWO02019(1.50g，3.356mmol)在蒸餾THF(50mL)中的溶液內(nèi)加入甲醇(30mL)和Pd/C(10％，75mg)。該黑色懸浮液在氫氣(氣囊)氛圍中室溫攪拌過周末。濾除并將負(fù)載催化劑用蒸餾過的THF徹底洗滌之后，蒸發(fā)濾液得到亮黃色泡沫狀殘留物(839mg，3.319mmol，93.5％)。將此粗品溶于熱THF(15mL)中，分批加入己烷(10mL)。冷卻得到白色結(jié)晶LWO 02020A(483mg)；m.p.230℃；δH(400MHz，DMSO-d6)6.73(4H，AA′BB′)，6.79(1H，s，CH)，6.99(4H，AA′BB′)，8.01(～1H，s，C3′-H)，8.45(1H，s，C5′-H)和9.52(～2H，s，與D2O發(fā)生交換，2x OH)；δC(100.4MHz，DMSO-d6)65.2(d，CH)，115.3(d，Ar)，129.3(d，Ar)，129.9(s，Ar)，144.0(d，C5′)，151.8(d，C3′)，157.1(s，Ar-OH).實測值C 67.2，H 5.08，N15.4；C15H13N3O2計算值C 67.4，H 4.90，N 15.72. 1-[雙-(4-氨基磺酰氧基苯基)甲基]-1H-[1，2，4]三唑(LWO02021，STX268)
室溫、氮氣氛下，向LWO02020(257mg，1.336mmol)的N，N-二甲基乙酰胺(20mL)溶液中加入在氨基磺酰氯的甲苯溶液(約0.68M，7.8mL)。攪拌反應(yīng)混合物過夜后加乙酸乙酯(100mL)稀釋。分出的有機層用鹽水(100mL，4x50mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)得到亮棕色漿體/殘留物(612mg)。將此粗品通過快速色譜純化(乙酸乙酯)，收集第二餾分，得到LWO02021A，為白色殘留物(310mg，728.7μmol，54.5％)；m.p.70-85℃；δH(400MHz，DMSO-d6)7.19(1H，s，CH)，7.30(4H，AA′BB′)，7.36(4H，AA′BB′)，8.03(-4H，br s，與D2O發(fā)生交換，H2NSO2)，8.10(～1H，s，C3′-H)和8.63(1H，s，C5′-H)；LRMS(FAB+)851.2[6，(2M+H)+]，579.2[10，(M+H+NBA)+]，426.2[60，(M+H)+]，357.2[100，(M-三唑)+]；(FAB-)849.1[16，(2M-H)-]，578.1[35，(M+NBA)-1，424.1[100，(M-H)-]，345.2[25，(M-H2NSO2)-]；HRMS(FAB+)426.05452 C15H16N5O6S2計算值426.05420. 1-[雙-(3-溴-4-羥基苯基)甲基]-1H-[1，2，4]三唑(JRL01105，STX356)
-78℃、氮氣氛下，向1-[雙-(4-羥基苯基)甲基]-1H-[1，2，4]三唑(STX267，500mg，1.87mmol)在CH2Cl2/MeOH 1∶1(40mL)中的攪拌溶液內(nèi)逐滴加入三溴化芐基三甲基銨(1.49g，3.74mmol)在CH2Cl2/MeOH 1∶1(10ml)中的溶液，歷時45分鐘。所得橙色混合物在0℃下保持7小時，然后在室溫下保持過夜，此時溶液變?yōu)闊o色。蒸發(fā)反應(yīng)混合物，將所得殘留物溶于水(100mL)與EtOAc(100mL)的混合液中。分出水層，進(jìn)一步用EtOAc(2x50mL)萃取。合并有機萃取物，用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)，蒸發(fā)。粗產(chǎn)物通過快速色譜(己烷/乙酸乙酯，1∶3)分離，收集第二餾分，得到白色固體JRL01105(STX356)(485mg)，純度大約97％；δH(400MHz，DMSO-d6)6.90(1H，s，CH)，6.93(2H，d，J 8.6Hz)，7.03(2H，dd，J 2.1和8.6Hz)，7.30(2H，d，J 2.1Hz)，8.06(1H，s)，8.56(1H，s)和10.45(2H，brs，與D2O發(fā)生交換，2xOH).主要雜質(zhì)為STX356的單溴化衍生物。取少量該餾分進(jìn)一步通過半制備HPLC(Waters PrepLC RP 18，25x10mm，流速10mL/min，流動相MeOH/H2O，60∶40)。收集保留時間為5.5分鐘的餾分，通過蒸發(fā)得到白色固體；m.p.198-205℃(分解).實測值C 42.2，H 2.65，N 9.79；C15H11Br2N3O2計算值C 42.38，H 2.61，N 9.89. 1-[雙-(3-溴-4-氨基磺酰氧基)甲基]-1H[1，2，4]三唑(JRL01109，STX566)
室溫、氮氣氛下，向JRL01105(175mg，412μmol)的N，N-二甲基乙酰胺(15mL)溶液中加入氨基磺酰氯(4.4eq.)。攪拌反應(yīng)混合物過夜，然后加乙酸乙酯(30mL)稀釋，并將所得混合物用鹽水(50mL，4x20mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)得到JRL01109，為淺黃色殘留物(210mg)；m.p.98-102℃；δH(270MHz，DMSO-d6)7.21(1H，s，CH)，7.38(2H，dd，J2.1和8.4Hz)，7.55(2H，d，J 8.4Hz)，7.66(2H，d，J 2.1Hz)，8.15(1H，s)，8.32(4H，br s)和8.69(1H，s)；LRMS(FAB+)584.0[10，(M+H)+]，515.0(10)，391.0[100，(M-2H2NSO2O)+]；HRMS(FAB+)583.87219 C15H14Br2N5O6S2計算值583.87318. 1-[雙-(3，5-二溴-4-氨基磺酰氧基)甲基]-1H-[1，2，4]三唑(LWO02128A，STX414)
將1-[雙-(4-羥基苯基)甲基]-1H-[1，2，4]三唑(450mg，1.684mmol)溶于熱乙酸(100mL)中。當(dāng)冷卻到冰/水溫度時，向黃色混合物中加入乙酸鉀(3.3g，33.67mmol)，接著在30分鐘內(nèi)逐滴加入溴的乙酸溶液(1.1g/10mL乙酸，7.5mL，5.061mmol)。另攪拌30分鐘后，向所生成的淺黃色凝聚/固體中加入水(20mL)，蒸發(fā)此混合物得到淺黃色/米色含水殘留物。將此粗品加乙酸乙酯(150mL)稀釋，蘭綠色有機層用鹽水(4x100mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)得到黃色微濕殘留物(1.2g)。在未加塞的圓底燒瓶中室溫放置過夜，得到黃色/棕色殘留物(850mg)，進(jìn)一步用丙酮(10mL)研制，得到黃色沉淀物。過濾，再用丙酮洗滌，風(fēng)干收集到的淺黃色粉末，得到LWO02128A(205mg，21％)；m.p.223-235℃(分解)；′H(400MHz，CDCl3)6.97(1H，s，CH)，7.40(4H，s，Ar)，8.11(1H，s，三唑-H)，8.64(1H，s，三唑-H)和10.23(2H，br s，與D2O發(fā)生交換，2x OH)；LRMS(FAB+)584.0[48，(M+H)+]，513.0[68，(M-三唑)+]，427.4(95)，260.1(88)，193.2[100，((M-4Br-三唑)+]；LRMS(FAB-)579.8(100，M-)，455.1(40)，276.1(70)，195.1(60)；HRMS(FAB-)579.73119，C15H879Br381BrN3O2計算值579.73295. 合成STX267和STX268
式V化合物 4-芐氧基芐基氯(LWO02011)
在冰/水溫度下，向4-芐氧基芐醇(5.0g，22.64mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中逐滴加入亞硫酰氯(2.5mL，33.96mmol)。再于0℃攪拌所得粉紅/紅色透明溶液40分鐘，然后蒸發(fā)，得到亮綠色/黃色殘留物。在該粗品與二氯甲烷共蒸發(fā)三次后，得到乳脂狀殘留物(5.77g)，進(jìn)而將其溶于熱甲苯(3mL)中，用己烷(60mL)分批處理。在室溫下放置后得到白色結(jié)晶LWO02011A(2.89g，12.42mmol)。以第一批產(chǎn)物經(jīng)熱己烷(20mL)重結(jié)晶后的母液殘留物為原料，又獲得第二批產(chǎn)物(LWO02011B，1.41g，6.06mmol，總收率81.6％)；m.p.74-80℃；δH(400MHz，DMSO-d6)4.72(2H，s，CH2Cl)，5.11(2H，s，OCH2)，7.01(2H，m，Ar)和7.39(7H，m，Ar). 1-(4-芐氧基芐基)-1H-[1，2，4]三唑(A)和4-(4-芐氧基芐基)-4H[1，2，4]三唑(B)(LWO02013)
在氮氣氛圍中，將(1H)-1，2，4-三唑(890mg，12.89mmol)、4-芐氧基芐基氯(2.0g，8.594mmol)、無水碳酸鉀(1.19g)在N，N-二甲基甲酰胺(20mL)中的混合物于90-95℃下攪拌4小時。冷卻到室溫后，反應(yīng)混合物加乙酸乙酯(100mL)稀釋，并用1M氫氧化鈉(150mL)、鹽水(4x50mL)洗滌。然后干燥(MgSO4)有機層，過濾，蒸發(fā)得到白色殘留物(2.16g)。將此粗品溶于熱乙酸乙酯(15mL)中，向所得溶液中分批加入己烷。冷卻得到白色結(jié)晶LWO02013(1.34g，5.051mmol)。1H NMR已經(jīng)表明LWO02013包含上述異構(gòu)體(A和B)的1∶1混合物。
4-[1，2，4]三唑-1-基甲基苯酚(LWO02015A，STX269)
向LWO02013(1.25g，4.711mmol)在蒸餾過的THF(50mL)中的溶液內(nèi)加入無水乙醇(10mL)和Pd/C(10％，70mg)。在氫氣(氣囊)氛圍中于室溫攪拌所得黑色懸浮液72小時。在濾除并用蒸餾過的THF徹底洗滌負(fù)載催化劑之后，蒸發(fā)濾液，得到白色殘留物(580mg)，進(jìn)而以丙酮/己烷重結(jié)晶，得到白色結(jié)晶LWO02015A(298mg，1.701mmol)。當(dāng)母液殘留物按照上述相同方式重結(jié)晶時，獲得第二批產(chǎn)物(LWO02015B，77mg，439.5μmol，總收率45.4％)；m.p.145-148℃[文獻(xiàn)1143-146℃(氯仿/石油醚)]，δH(400MHz，DMSO-d6)5.26(2H，s，CH2)，6.73(2H，m，Ar)，7.13(2H，m，Ar)，7.94(1H，s，C3′-H)，8.58(1H，s，C5′-H)和9.50(1H，s，與D2O發(fā)生交換，OH)；LRMS(FAB+)351.2[10，(2M+H)+]，176.2[100，(M+H)+]，107.1[47，(M-三唑)+]，(FAB-)481.3[30，(M+2NBA)-]，349.2[27，(2M-H)-]，328.2[100，(M+NBA)-]，221.2(23)，174.2[100，(M-H)-]；HRMS(FAB+)176.08183 C9H10N3O計算值176.08239.實測值C 61.6，H5.11，N 23.6；C9H9N3O計算值C 61.70，H 5.18，N 23.99. 1Abdreubu等.(1989)Farmaco 44(9)831-842. 氨基磺酸4-[1，2，4]三唑-1-基甲基苯基酯(LWO02017A，STX270)
0℃下，向LWO02105A(150mg，856.2μmol)在蒸餾過的THF(10mL)中的溶液內(nèi)加入氫化鈉(60％礦物油分散體，36mg，899μmol)。攪拌10分鐘，此時不再有氫氣逸出，然后在氮氣氛圍中加入氨基磺酰氯的甲苯溶液(約0.68M，2.5mL)，在室溫下攪拌所形成的淡白色懸浮液3小時。反應(yīng)混合物隨后加乙酸乙酯(70mL)稀釋，繼用鹽水(100mL，3x50mL)洗滌。干燥(MgSO4)分出的有機層，過濾，蒸發(fā)得到白色殘留物(144mg，)，進(jìn)而以丙酮/己烷重結(jié)晶，得白色結(jié)晶LWO02017A(71mg，279.2μmol，32.6％)；vmax(KBr)3352，3127，2880，2646，1509，1369，1183，1158cm-1；δH(400MHz，DMSO-d6)5.44(2H，s，CH2)，7.27(2H，AA’BB’)，7.38(2H，AA’BB’)，8.0(～2.7H，m，在與D2O交換后減少為一部分，單峰，C3’-H和H2NSO2)和8.68(1H，s，C5’-H)；實測值C42.6，H4.01，N21.7；C9H10N4O3S計算值C42.51，H3.96，N22.03. STX269和STX270的合成
生物數(shù)據(jù) 按照上述方法測試化合物對芳香化酶和硫酸酯酶的抑制作用。發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的每一化合物都能抑制甾體硫酸酯酶和芳香化酶。
下面給出體外數(shù)據(jù)。





使用芳香化酶和STS動物試驗記錄了體內(nèi)數(shù)據(jù)。給藥相關(guān)化合物，對于每個動物均測定芳香化酶和STS的活性。數(shù)據(jù)見圖3和4所示。
上述說明書中提及的所有出版物和專利及專利申請在此引入作為參考。在不背離本發(fā)明的范圍與精神的前提下，本發(fā)明的各種改進(jìn)與變化對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。雖然已結(jié)合具體優(yōu)選的實施方案對本發(fā)明進(jìn)行了描述，但應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明所請求保護的不應(yīng)只限于這些具體實施方案。實際上，對化學(xué)、生物和相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員來說顯而易見的實施本發(fā)明所述方式的各種改進(jìn)形式，都將包括在隨后的權(quán)利要求的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.式I化合物
式I
其中
每個T獨立選自H，烴基，-F-R，和與D、E、P或Q之一形成的鍵，或者與P和Q之一一起形成環(huán)；
Z為適當(dāng)原子，其化合價為m；
D，E和F各自獨立為任選連接基，其中當(dāng)Z為氮時，E不能為CH2和C＝O；
P、Q和R各自獨立為環(huán)狀系統(tǒng)；并且
至少Q(mào)包含氨基磺酸酯基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中Z為三價。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其中Z(T)m-2選自Z(-F-R)，ZH和Z-烴基。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3的化合物，其中Z選自氮和硼。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中Z為氮。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中Z為四價。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物，其中Z(T)m-2選自ZH(-F-R)，ZH2和ZH-烴基。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的化合物，其中Z為碳。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項的化合物，其中存在至少一個任選連接基。
10.根據(jù)上述任一項權(quán)利要求的化合物，其中只存在一個任選連接基。
11.根據(jù)上述任一項權(quán)利要求的化合物，其中所述任選連接基獨立選自C＝O和烴基。
12.根據(jù)上述任一項權(quán)利要求的化合物，其中所述任選連接基獨立選自C＝O和基團中含至少一個雜原子的直鏈或支鏈烴基。
13.根據(jù)上述任一項權(quán)利要求的化合物，其中所述任選連接基獨立選自C＝O和烴基團和下式基團
其中為1-6，且Y＝氧，硫或CH2。
14.根據(jù)上述任一項權(quán)利要求的化合物，其中所述任選連接基獨立選自C＝O和具有1-6個碳原子碳鏈的直鏈或支鏈烴基團以及下式基團
其中n為1-6，且Y＝氧，硫或CH2。
15.根據(jù)上述任一項權(quán)利要求的化合物，其中E選自基團中含至少一個雜原子的直鏈或支鏈烴基團。
16.根據(jù)上述任一項權(quán)利要求的化合物，其中E選自包含至少兩個碳原子的烴基團和下式基團
其中n為1-6，且Y＝氧，硫或CH2。
17.根據(jù)上述任一項權(quán)利要求的化合物，其中E選自具有2-6個碳原子碳鏈的直鏈或支鏈烴基團以及下式基團
其中n為1-6，且Y＝氧，硫或CH2。
18.根據(jù)上述任一項權(quán)利要求的化合物，其中P、Q和R獨立地選自或包含芳環(huán)。
19.根據(jù)上述任一項權(quán)利要求的化合物，其中P、Q和R獨立地選自取代或未取代的芳環(huán)。
20.根據(jù)上述任一項權(quán)利要求的化合物，其中P、Q和R獨立選自包含3-10個環(huán)原子的環(huán)狀系統(tǒng)。
21.根據(jù)上述任一項權(quán)利要求的化合物，其中P、Q和R獨立選自包含5、6或7個環(huán)原子的環(huán)狀系統(tǒng)。
22.根據(jù)上述任一項權(quán)利要求的化合物，其中P、Q和R獨立選自包含碳和任選一個或多個雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)。
23.根據(jù)上述任一項權(quán)利要求的化合物，其中P、Q和R獨立選自包含碳和任選一個、兩個或三個雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)。
24.根據(jù)上述任一項權(quán)利要求的化合物，其中P、Q和R獨立選自包含碳和一個或多個雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)。
25.根據(jù)上述任一項權(quán)利要求的化合物，其中P、Q和R中至少一個獨立選自包含碳和一個或多個選自氮、硫和氧的雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)。
26.根據(jù)上述任一項權(quán)利要求的式II化合物
式II
其中
每個T獨立選自H，烴基，-F-R’，和與E、P或Q之一形成的鍵，或者與P和Q之一一起形成環(huán)；
Z為適當(dāng)原子，其化合價為m；
當(dāng)Z為氮時，E為除CH2和C＝O之外的任選連接基；
P、Q、R和R’各自獨立為環(huán)狀系統(tǒng)；并且
Q包含氨基磺酸酯基。
27.根據(jù)上述任一項權(quán)利要求的式III化合物
式III
其中
D、E和F各自獨立地為任選連接基，其中E不能為CH2和C＝O；
P、Q和R各自獨立地為環(huán)狀系統(tǒng)；并且
至少Q(mào)包含氨基磺酸酯基。
28.根據(jù)上述任一項權(quán)利要求的式IV化合物
式IV
其中
D、E和F各自獨立為任選連接基，
P、Q和R彼此獨立地為環(huán)狀系統(tǒng)；并且
至少Q(mào)包含氨基磺酸酯基。
29.根據(jù)權(quán)利要求26、27或28的化合物，其中P、Q和R之一為包含碳和一個或多個雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)，且P、Q和R中的其余兩個獨立選自碳環(huán)環(huán)系。
30.根據(jù)權(quán)利要求26、27或28的化合物，其中P、Q和R之一為包含碳和一個或多個選自氮、硫和氧的雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)，且P、Q和R中的其余兩個獨立選自碳環(huán)環(huán)系。
31.根據(jù)權(quán)利要求26、27或28的化合物，其中P、Q和R之一為4H-1，2，4-三唑，且P、Q和R中的其余兩個獨立選自取代或未取代的芐基環(huán)。
32.根據(jù)上述任一項權(quán)利要求的式V化合物
式V
其中
D和E各自獨立地為任選連接基，
P和Q各自獨立為環(huán)狀系統(tǒng)；并且
至少Q(mào)包含氨基磺酸酯基。
33.根據(jù)權(quán)利要求32的化合物，其中P和Q之一為包含碳和一個或多個雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)，且P和Q中的另一個為碳環(huán)環(huán)系。
34.根據(jù)權(quán)利要求32的化合物，其中P和Q之一為包含碳和一個或多個選自氮、硫和氧的雜原子的環(huán)狀系統(tǒng)，且P和Q中的另一個為碳環(huán)環(huán)系。
35.根據(jù)權(quán)利要求32的化合物，其中P和Q之一為4H-1，2，4-三唑，且P和Q中的另一個為取代或未取代芐基環(huán)。
36.根據(jù)權(quán)利要求32的化合物，其中P為4H-1，2，4-三唑，且Q為取代或未取代的芐基環(huán)。
37.一種方法，包括(a)用一種或多種具有上述任一項權(quán)利要求所定義結(jié)構(gòu)式的候選化合物進(jìn)行甾體硫酸酯酶(STS)測定和/或芳香化酶測定；(b)測定一種或多種所述候選化合物能否調(diào)控STS活性和/或芳香化酶的活性和/或細(xì)胞周期性變化和/或細(xì)胞生長和/或編程性細(xì)胞死亡；和(c)篩選能調(diào)控STS活性和/或芳香化酶活性和/或細(xì)胞周期性變化和/或細(xì)胞生長和/或編程性細(xì)胞死亡的一種或多種所述候選化合物。
38.一種方法，包括(a)用一種或多種具有上述權(quán)利要求1-36中任一項所述結(jié)構(gòu)式的候選化合物進(jìn)行甾體硫酸酯酶測定和/或芳香化酶測定；(b)測定一種或多種所述候選化合物能否抑制STS和/或芳香化酶的活性；和(c)篩選能抑制STS活性和/或芳香化酶活性和/或細(xì)胞周期性變化和/或細(xì)胞生長和/或編程性細(xì)胞死亡的一種或多種所述候選化合物。
39.用權(quán)利要求37或權(quán)利要求38鑒定的化合物。
40.用于藥物中的權(quán)利要求1-36或39中任一項的化合物。
41.一種藥物組合物，其包括任選與可藥用甾體、稀釋劑、賦形劑或助劑混合的權(quán)利要求1-36或39中任一項的化合物。
42.權(quán)利要求1-36或39中任一項的化合物在制備用于治療與STS和/或芳香化酶和/或細(xì)胞周期性變化和/或編程性細(xì)胞死亡和/或細(xì)胞生長有關(guān)的病癥或疾病的藥物中的應(yīng)用。
43.權(quán)利要求1-36或39中任一項的化合物在制備用于治療與STS和芳香化酶有關(guān)的病癥或疾病的藥物中的應(yīng)用。
44.權(quán)利要求1-36或39中任一項的化合物在制備用于治療與有害STS水平和/或有害芳香化酶水平和/或細(xì)胞周期性變化和/或編程性細(xì)胞死亡和/或細(xì)胞生長有關(guān)的病癥或疾病的藥物中應(yīng)用。
45.權(quán)利要求1-36或39中任一項的化合物在制備用于治療與有害STS水平和有害芳香化酶水平有關(guān)的病癥或疾病的藥物中的應(yīng)用。
46.權(quán)利要求1-36或39中任一項的化合物在制備用于抑制STS活性和/或抑制芳香化酶活性的藥物中的應(yīng)用。
47.權(quán)利要求1-36或39中任一項的化合物在制備用于抑制STS活性和抑制芳香化酶活性的藥物中的應(yīng)用。
48.化合物在制備用于治療與芳香化酶有關(guān)的病癥或疾病的藥物中的應(yīng)用，其中所述化合物為式I化合物
式I
其中
每個T獨立選自H，烴基，-F-R，和與D、E、P或Q之一形成的鍵，或者與P和Q之一一起形成環(huán)；
Z為適當(dāng)原子，其化合價為m；
D，E和F各自獨立為任選連接基，
P、Q和R各自獨立為環(huán)狀系統(tǒng)；并且
至少在P、Q和R上包含氨基磺酸酯基。
49.根據(jù)權(quán)利要求48的用途，其中所述病癥或疾病與STS和芳香化酶有關(guān)。
50.化合物在制備用于治療與有害芳香化酶水平有關(guān)的病癥或疾病的藥物中的應(yīng)用，其中所述化合物為式I化合物
式I
其中
每個T獨立選自H，烴基，-F-R，和與D、E、P或Q之一形成的鍵，或者與P和Q之一一起形成環(huán)；
Z為適當(dāng)原子，其化合價為m；
D，E和F各自獨立為任選連接基，
P、Q和R各自獨立為環(huán)狀系統(tǒng)；并且
至少在P、Q和R上包含氨基磺酸酯基。
51.根據(jù)權(quán)利要求50的用途，其中所述病癥或疾病與有害STS水平和有害芳香化酶水平有關(guān)。
52.化合物在制備用于抑制芳香化酶活性的藥物中的應(yīng)用，其中所述化合物為式I化合物
式I
其中
每個T獨立選自H，烴基，-F-R，和與D、E、P或Q之一形成的鍵，或者與P和Q之一一起形成環(huán)；
Z為適當(dāng)原子，其化合價為m；
D，E和F各自獨立為任選連接基，
P、Q和R各自獨立為環(huán)狀系統(tǒng)；并且
至少在P、Q和R上包含氨基磺酸酯基。
53.根據(jù)權(quán)利要求52的用途，其用于抑制STS活性和抑制芳香化酶活性。
54.基本上所前面實施例所述的化合物。
55.基本上如前面實施例所述的組合物。
56.基本上如前面實施例所述的方法或用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了式(I)化合物，其中每個T獨立選自H，烴基，-F-R，和與D、E、P或Q中之一形成的鍵，或與P和Q之一一起形成環(huán)；Z為適當(dāng)原子，其化合價為m；D、E和F各自獨立為任選的連接基，其中當(dāng)Z為氮時，E不能為CH2和C＝O；P、Q和R各自獨立為環(huán)狀系統(tǒng)；并且至少Q(mào)包含氨基磺酸酯基。本發(fā)明涉及一種作為芳香化酶抑制劑的含氨基磺酸酯基的1，2，4-三唑衍生物。
文檔編號C07D249/14GK101333196SQ200810131668
公開日2008年12月31日 申請日期2002年11月20日 優(yōu)先權(quán)日2001年11月21日
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