專利名稱：：黑乳海參中新的抗腫瘤化合物NobilisideE的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術領域：
，是一種從海洋動物黑乳海參中分離到的新的抗腫瘤化合物NobilisideE。
背景技術：
：黑乳海參(77ie/ewotoammasJ.)，又名"鳳梨參"，屬海洋棘皮動物門海參綱刺參科。其體形很大，長一般為700mm,寬約100mm，高約80mm，廣泛分布于我國西沙群島和臺灣南端。其體內含有豐富的蛋白質、多糖、維生素、皂苷類物質，具有補肝腎，益精，養(yǎng)血的功效。有關其所含的皂苷類成分的化學結構及抗腫瘤活性迄今尚未見有過報道。
發(fā)明內容本發(fā)明是從生長于中國福建海域的黑乳海參中提取分離一種新的皂苷類化合物，命名為NobilisideE，其化學結構如下OHNobilisideE為無色結晶性粉末，熔點208-210°C(MeOH-H2O)，[a]D-25.3°(c=0.52，MeOH)，Liebermann-Burchard反應和Molish反應均呈陽性。電噴霧-正離子質譜信號/n/z1239[M+Na]+和電噴霧-負離子質譜信號附/z1193[M-Na]、IR(KBr)cm":max-3419強寬峰(羥基)，1739(羰基)，1637(雙鍵)，1256，1071(m，磺酸基)。&-和13(:核磁共振數據見表1。表1NobilisideE的的&和13C核磁共振數據<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>Xyl:木糖，Qui:奎諾糖，3-OMeGlc:3-氧甲基葡萄糖，J值偶合常數本發(fā)明還提供了從黑乳海參提取分離NobilisideE的方法，其步驟如下(1)提取將黑乳海參洗凈，切碎，用5倍量(重量)95%乙醇浸泡7天，濾出提取液，再用85%乙醇浸泡提取2次，每次7天，合并3次提取液，減壓回收乙醇，得流浸膏。將流浸膏溶于水中，通過大孔樹脂柱，依次用水和50%乙醇洗脫。收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得總皂苷提取物。(2)分離將上述總皂苷提取物應用硅膠柱層析，以二氯甲垸甲醇水為8~5:1~4:1混合溶劑洗脫，薄層層析檢測，收集含NobilisideE的流份，再經ZorbaxSBC18高效液相柱層析，以甲醇水為50:50為流動相洗脫，得NobilisideE純品。本發(fā)明對黑乳海參皂苷NobilisideE進行了體外抗腫瘤試驗，表明其具有明顯的抑制腫瘤的效果。試驗所用細胞株為國際通用的腫瘤細胞株，即A-549(肺癌)，IA-9(卵巢癌)腫瘤細胞株。試驗方法為國際通用的SRB法根據細胞生長速率，將處于對數生長期的腫瘤細胞以9(Hd/孔接種于96孔培養(yǎng)板，貼壁生長24小時再加藥l(Hd/孔。每個濃度設三復孔。并設相應濃度的生理鹽水溶媒對照及無細胞調零孔。腫瘤細胞在37°C、5%0)2條件下培養(yǎng)72小時，然后傾去培養(yǎng)液，用10X冷TCA固定細胞，4'C放置1小時后用蒸餾水洗滌5次，空氣干燥。最后加入Tris溶液，酶標儀520nm波長下測定OD值。試驗結果見表2。表2NobilisideE對腫瘤細胞的抑制作用腫瘤細胞株A-549IA-9IC50(ng/ml)2.80.2ic5():表示本發(fā)明化合物的半數有效抑制濃度上述實驗結果表明，NobilisideE對以上2種腫瘤細胞株均顯示明顯的抑制作用。5本發(fā)明為研制新的抗腫瘤藥物提供了新的先導化合物，為開發(fā)利用中國的海洋藥用生物資源具有重要意義。具體實施例方式以下結合實施例進一步描述NobilisideE的分離制備。將黑乳海參1000克洗凈，切碎，分別用5倍量(重量)的95%、85%、85%乙醇依次浸泡，每次浸泡7天，合并乙醇浸出液，減壓回收乙醇，得流浸膏。將流浸膏溶于3倍量水中，過濾，濾液通過DA201-B大孔樹脂柱，依次用水和50%乙醇洗脫，收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至干，得總皂苷5.6克。將總皂苷進行硅膠柱層析，以二氯甲垸甲醇水為7.2:2.8:l的溶劑洗脫，收集含NobilisideE的流份。再經ZorbaxSBC18高效液相柱層析，以甲醇水為50:50為流動相洗脫，得NobilisideE純品15毫克。權利要求1.一種抑制腫瘤的化合物，其特征在于化學結構式如下2.權利要求l所述抑制腫瘤的化合物的制備方法，其具體步驟如下(1)提取將原料黑乳海參洗凈，切碎，用95%乙醇浸泡7天，濾出提取液，再用85%乙醇浸泡2次，每次7天；合并3次提取液，減壓回收乙醇，得流浸膏；將流浸膏溶于水中，通過大孔樹脂柱，依次用水和50%乙醇洗脫；收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得總皂苷提取物；(2)分離將上述總皂苷提取物應用硅膠柱層析，以二氯甲烷甲醇水為8~5:1~4:i混合溶劑和正丁醇甲醇為20:i兩相溶劑洗脫，薄層層析檢測，收集含權利要求1所述化合物的流份，再經ZorbaxSBC18高效液相柱層析，以甲醇水為48:52為流動相洗脫，得權利要求1所述化合物純品。3.權利要求1所述抑制腫瘤的化合物用于制備抗腫瘤藥物的用途。全文摘要本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術領域：
，具體為一種從黑乳海參中分離的抗癌化合物NobilisideE，分子式C₅₅H₈₅O₂₆SNa。經多種現代光譜分析，特別是應用先進的二維核磁共振譜和高分辨質譜的綜合解析，確定了該化合物的化學結構及立體構型。體外抗腫瘤試驗表明，該化合物對A-549肺癌和IA-9卵巢癌2種腫瘤細胞株有明顯的抑制作用。本發(fā)明可為研制新的抗腫瘤藥物提供先導化合物，對開發(fā)利用中國的海洋藥用生物資源具有重要價值。文檔編號C07J71/00GK101463066SQ20081016337公開日2009年6月24日申請日期2008年12月18日優(yōu)先權日2008年12月18日發(fā)明者丁萍月,軍巫,張佳佳,朱可奇,王忠華申請人:寧波保稅區(qū)欣諾生物技術有限公司